PT95456B

PT95456B - Processo para a preparacao de preparados de combinacao de acido acetilsalicilico e de derivados de carbaciclina com accao antitrombotica

Info

Publication number: PT95456B
Application number: PT95456A
Authority: PT
Inventors: Werner Witt; Berthold Baldus; Bernd Muller; Claus-Steffen Sturzebecher
Original assignee: Schering Ag
Priority date: 1989-09-29
Filing date: 1990-09-28
Publication date: 1997-07-31
Also published as: JP3040463B2; HUT60140A; DE59002185D1; IE903503A1; IL95849A0; NO921223D0; CS277650B6; CA2069296C; HU9201045D0; CS472690A3; ATE92325T1; JPH05500805A; NO921223L; DK0420368T3; DD299153A5; ZA907808B; RU2097039C1; US5093325A; NZ235521A; EP0420368B1

Description

A invenção refere-se a um preparado de combinação para a inibição da função dos trombócitos e pa ra o tratamento de tromboses contendo como ingrediente activo os derivados de carbociclina Cicaprost ou Eptaloprost e ácido acetilsalicílico (ASS).

Na trombogenése arterial e, com algumaslimitações, também na venosa, a activação dos trombócitos com a subsequente agregação desempenha um papel fundamental. Esta activação das plaquetas sanguíneas é desencadeada por estímulos que podem surgir no caso de uma lesão das paredes dos vasos sanguíneos e da activação da coagula.R

ção, como por exemplo por trombina, colagéneo, difosfato de adenosina, adrenalina ou por acção do factor de aetivação das plaquetas (PAF). Estes estímulos, além da agregação, de i sencadeiam também simultaneamente a libertação de substâncias dos trombócitos, que se acumulam nos chamados grânulos dos trombócitos. Algumas destas substâncias como por exemplo j o activador-inibidor de plasminogéneo 1 (PAI-1) ou o factor jí de crescimento derivaddo das plaquetas (platelet-derived Jí growth factor”) (PDGF) são na verdade de importância fundamental para a patogénese das doenças trombótico/ateroscle' róticas.

jj Assim,o PAI-1 é um potente inibidor , de activadores de plasminogénio, tais como a urocinase e t-PA e, devido a estas propriedades, inibe a fibrinólise ne' cessaria para a reconstituição da irrigação sanguínea depois ; de uma obstrução trombótica. 0 PDGF é um mitogéneo que es! timula a proliferação de diversos tipos de células (especial mente células dos músculos chatos). Devido a este mecanisj mo atribui-se ao PDGF um papel essencial na aterogénese. A I inibição, não apenas da agregação dos trombócitos mas também j da libertação de substâncias patogénicas, tais como PAI-1 e j¹ PDGF,poderia originar uma contribuição importante para a pro |! filaxia de doenças tromboembólicas e aterosleróticas. jí 0 ãcido acetilssalicílico, conhejl eido como inibidor da agregação de trombócitos, é apenas um h inibidor fraco para a função dos trombócitos e é também um ;í agente antitrombótico apenas moderado. Como inibidor da ci! clooxigenase, o ãcido acetilsalicílico inibe apenas uma via í de aetivação dos trombócitos, a formação do tromboxano. Adij cionalmente,a presença de ácido acetilsalicílio no endotélio i

j dos vasos sanguíneos inibe a formação de prostaciclina, um í inibidor dos trombócitos. Por conseguinte, a eficácia tera j pêutica do ácido acetilsalicílico para o tratamento de inúr meras formas de doenças tromboembólicas não é suficiente.

ii Os miméticos da prostaciclina natural, tais como os chamados derivados de carbaciclina, estão . à disposição para a utilização clínica na forma oral há rela ’ tivamente pouco tempo. Têm aplicação como inibidores de to2

das as vias essenciais de activação dos trombócitos e são ί pois fortes inibidores de trombócitos e agentes antiι í trombóticos. Adicionalmente possuem ainda outras proprieda í des, como por exemplo a capacidade para a relaxação da musculatura chata dos vasos sanguíneos, que auxiliam a sua

I acção terapêutica em determinadas formas de doenças. No ca so de doses elevadas surge como pano de fundo o perfil de aç íi j ções colaterais que são característicos de classe de substâncias das carbaciclinas, o que limita a utilização de doses elevadas e põem-se assim limites á utilização clínica global da inibição da função de trombócitos e da acção antitrombótica.

Descobriu-se agora, surpreendentemente, que os preparados de combinação formados por Cicaprost e ácido acetilsalicllico, e formados por Eptaloprost e ácido acetilsalicllico,em diversos sistemas biológicos, apre ί sentam uma acção sinergética ou um efeito cooperativo das : substâncias activas individuais.

Ambas as combinações ultrapassam ;l por exemplo a eficácia antitrombótica do ácido acetilsalicíί lico e permitem uma considerável redução da dose para os com j ponentes de carbaciclina inibidores de trombócitos, em comj; paração com doses equipotentes da carbaciclina administrada ί indivídualmente (Cicaprost, Eptaloprost) de um factor com va i lores até 10.

Ι: Consequentemente, estas combinações

J: são inibidores de trombócitos mais fortes e agentes antitrom bóticos mais fortes do que o ácido acetilsalicllico, com uma ; mais alta especificidade e amplitude terapêutica em comparação com Cicaprost/Eptaloprost, por reforço cooperativo ) i : dos seus componentes activos trombocitários. Devido às proII priedades gastroprotectivas das carbaciclinas eliminam-se as |! . ....

acções colaterais gastrointestinais indesejáveis causadas

I pelo ãcido acetilsalicílico.

; A invenção refere-se, por conseguin ?! te, a um processo de combinação formado por ácido acetilJí salicílico e Cicaprost ou Eptaloprost, podendo também utili* zar-se as carbaciclinas na forma dos seus sais de adição com bases fisiologicamente aceitáveis ou os seus clatratos com ciclodextrinas, assim como aos medicamentos com as substân! cias auxiliares e substâncias veiculares correntes para a inibição da função dos trombócitos e para o tratamento de tromboses.

I i 0 Eptaloprost [(5E)-(16S)-13,14-di!, desidro-la, lb-dihomo-16,20-dimetil-3-oxa-18,18,19,19-tetrade

H jj sidro-6a-carbaprostaglandina-I₂] e o seu clatrato de B-ciij clodextrina podem ser preparados de acordo com o seguinte ; processo:

'1 A uma mistura de 6,9 g de 2-[(E)(1S, 5S,6S,7R)-7-(dimetil-t-butilsililoxi) -6-[(3S,4S)-3-(dime i’ til-t-butilsililoxi) -4-metil-nona-l, 6-diinil] -biciclo[3.3. I 0]octano-3-ilideno]etano-l-ol (W. Skuballa, E. Schillinger,

C.-S. Sturzebecher, H. Vorbruggen, J. Medicinal Chemistry

Ij

29. 313 (1986); aqui descrito como composto 15a) e 11,5 g j de orto-4-bromobutirato de trimetilo adicionam-se 17,2 ml de soda caústica a 50% e 337 mg de hidrogenossulfato de tetrabutilamónio e agita-se 16 horas a 22 SC sob atmosfera de ί árgon. Em seguida diluiu-se, mediante arrefecimento por | gelo, com 20 ml de água e acidifica-se com solução a 10% de |j ácido cítrico até pH 5. Extrai-se por três vezes il utilizando-se de cada vez 300 ml de éter, lava-se a fase I orgânica uma vez com 200 ml de soro fisiológico, seca-se com | sulfato de magnésio e evapora-se em vácuo. Depois da I crornatografia do resíduo através de sílica-gel com hej xano/éter (8+2) obtêm-se 7,6 g de éster metílico-11,15-bisj (éter dimetil-t-butílico) de (5E)-(16S)-13,14-didesidrola,lb-dihomo-16,20-dimetil-3-oxa-18,18,19,19-tetra-desidro^f -6a-carbaprostaglandina-I₂ na forma de um óleo incolor.

IR(CHClo): 2953, 2925, 2859, 2230, 1730, 1250 838 cm^-1.

í ...

[ Para a dissociação do eter silílico íl li agita-se 7,25 g do éter bis-silílico descrito acima durante ^!,í ii 48 horas a 242C com 600 ml de uma mistura de ácido acético/ il j /água/tetrahidrofurano (65+35+10). Evapora-se em seguida em I vácuo e cromatografa-se o resíduo em sílica-gel. Com acetaI to de etilo/hexano (3+2) obtêm-se 3,9 g do éster metílico de , (5E)-(16S)-13,14-didesidro-la,lb-dihomo-16,20-dimetil-3-oxa4 j -18,18,19,19-tetradesidro-6a-carbaprostaglandina-I₂ na forma de um óleo incolor.

IR(CHC1₃): 3400(largo), 2935, 2865, 2230, 1735 cm^-1.

! Para a saponificação agita-se uma solução de 3,66 g do éster metílico anteriormente preparado ! em 35 ml de metanol com 35 ml de soda cáustica 0,5 molar j durante 30 minutos a 24sc sob uma atmosfera de árgon. Em ! seguida diluiu-se com 20 ml de água, acidifica-se com uma solução a 20% de ácido cítrico até ph 2, extrai-se 4 vezes utilizando-se de cada vez 100 ml de cloreto de metileno, ; lava-se a fase orgânica uma vez com 50 ml de soro fisiológico, seca-se com sulfato de sódio e evapora-se no vácuo. 0 resíduo é cromatografado com acetato de etilo através de sílica-gel. Obtêm-se neste caso 3,4 g do )^! composto de título na forma de um óleo incolor.

IR(CHC1₃): 3400(largo), 2962, 2940, 2865, 2230, 1722 cm ^x

Clatrato de β-ciclodextrina da ι

(5E) -(16S) -13,14-dideshidro-la, lb-dihomo-16,20-dimetil-3-oxa -18,18,19,19-tetra-deshidro-6a-carba-prostaglandina-I₂.

i Dissolvem-se 41,75 g de β-cicloj dextrina em 298 ml de água a 80^0 e adiciona-se gota a gota ! uma solução de 1,5 g de (5E)-(16S)-13,14-dideshidro-la,lbJl í| -dihomo-16,20-dimetil-3-oxa-18,18,19,19-tetradeshidro-6ai¹ carba-prostaglandina-I₂ em 24 ml de etanol no decurso de 15

H

!. mm. Agita-se 4 h a 602C e em seguida deixa-se arrefecer J, durante uma noite sob agitação. 0 sólido que precipita ê i| removido por filtração, é lavado com 50 ml de uma mistura de |í água-etanol (1:1) e é seco durante 24 h à pressão de 0,1 p Torr e a 252C com pentóxido de fósforo. Obtêm-se 38 g de ! cristais soltos do clatrato de β-ciclodextrina do análogo de carbaciclina mencionado anteriormente. 0 teor de análogo de carbaciclina no clatrato é determinado por titulação e é de

3,3%.

Cicaprost e o seu clatrato de B-ciclodextrina podem ser preparados pelo processo descrito na especificação EP-PS 119949 e na especificação publicada < internacional WO 87/05294.

• ί

Para a formação dos sais são apropriadas bases orgânicas e inorgânicas, como são jã do conhe cimento dos especialistas para a formação de sais fisiológicamente aceitáveis. Como exemplos citam-se hidróxidos alcalinos, tais como hidróxidos de sódio e hidróxido de potássio, hidróxidos alcalinoterrosos como por exemplo hidróxido de cálcio,amónia, arninas tais como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, N-metilglucamina, morfolina, tris-(hidroxi-metil)-metilamina, etc. A ciclodextrina preferida para a formação do clatrato é o β-ciclodextrina.

ácido acetilsalicílico e as carba ciclinas referidas são utilizadas em quantidades que se situam abaixo das quantidades correntes em que seriam utilizadas individualmente as substâncias da combinação. A quan tidade a empregar, de acordo com a presente invenção, depen de do início da trombose.

A combinação de acordo com a invenção é administrada de preferência oralmente. O ácido aeetil salicílico e a carbaciclina estão presentes numa relação ponderai entre si de l:5xl0“⁶ a 1:1 , sendo uma unidade de dosagem da carbaciclina de 1 a 1000 qg e uma unidade de dosagem do ãcido acetilsalicílico de 1 a 500 mg.

EXEMPLO 1

Plasma humano rico em plaquetas san guíneas (PRP) é incubado num agregómetro a 37^QC e para , se provocar a agregação mistura-se com 3 mg/ml de colagénio. O Cicaprost e o ASS,assim como as combinações de ambas as subs tâncias,são pipetadas para o preparado 1 minuto antes da adi ção do activador colagénio. A evolução da agregação é registada no agregómetro. Dez minutos depois da adição do colagénio as amostras são separadas por centrifugação a 3000 rpm e os sobrenadantes são ensaiados com um enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) quanto ao seu teor de activador -inibidor de plasminogénio 1 (PAI-1) e com um radio-immuno-assay (RIA) quanto ao teor em platelet-derived growth (PDGF).

Resultados:

i As concentrações, individualmente i ineficazes, de 10“¹⁰ ou 10^-9M de Cicaprost, em combinação ! com as concentrações, igualmente ineficazes ou fracamente

I eficazes de 3xl0^-5, 10”⁴ e 3xlO^-4M de ácido acetilsalicílico, conduzem à inibição da agregação de trombócitos de 42%, l· í 71% e 91% (quadro 1) . A secreção de PAI-1 para as mesmas ί concentrações de inibidor é de 36%, 54% e 64%,e a libertação de PDGF é inibida de 24%, 42% e 55%. A acção das combinações Cicaprost/ASS é sinergética de harmonia com a definição de

M.C. Berenbaum (Clin. Exp. Immunol. 28: 1 - 18, 1977) ij i

j i

r-·

Quadro 1

Inibição da agregação, assim como libertação de PAI-1 e PDGF em trombócitos humanos estimulados com colagénio, em % da reacção de controle (N=6)

		Agregação	% de	inibição PAI-1	PDGF
Cicaprost	10^_1θΜ	4	+	3	0	+	8	1	+	2
	10 ^yM	0	+	3	0	+	12	3	+	3
	10“⁸M	95	+	4	72	+	3	81	+	3
	10 ⁷M	95	+	3	80	+	5	81	+	1
ASS	3xl0j4i	2	+	1	6		10	8	+	2
	10 ⁴M	9	+	3	10	+	8	26	+	6
	3x10 ⁴M	30	+	6	28	+	4	39	+	2
	io³m	46	+	6	27	+	10	47	+	4
Cicaprost	10“¹⁰M
+ ASS	3X10	42^a	+	17	36	±	14	24	+	10
Cicaprost	ÍO^M
+ ASS	10~⁴M	71^a	+	12	54^a	+	9	42	+	8
Cicaprost	io⁹m
+ ASS	3x10	91^a	+	2	64^a	+	5	55^a	+	6

Significativo em relação à administração individual de ácido acetilsalicílico e Cicaprost (=5%, teste de soma gradual) · ----EXEMPLO 2

I Na cobaia narcotizada produzem-se, por injecção de colagénio (40 g/kg i.v.), trombocitopenias reversíveis. A causa destas trombocitopenias é uma formação de agregados das plaquetas sanguíneas estimuladas pelo colagénio e a embolisação destes agregados de plaquetas no ; pulmão, onde estes ficam então retidos e provocam assim a di i;

; minuição observada do número de plaquetas no sangue (trombocitopenias) . As trombocitopenias constantes em condições de controle (em média 40% de decréscimo do número de plaqueis tas, relativamente ao nível basal) servem como medida da agregação de plaquetas intravasal.

Resultados

I, ιι A dose, individualmente ineficaz, !! de 1 mg/kg/minuto i.v. de Cicaprost,em combinação com a dose , fracamente inibidora de 0,5 mg/kg i.v. de ácido acetilsalicí lico, conduzem a uma inibição das trombocitopenias de 34% significativa em relação aos controles e à administração individual, em cada caso, das duas substâncias activas (quadro

Ί ; 2). Este efeito noutras condições só é alcançado por uma dose tripla de Cicaprost.

il

I!

QUADRO 2:

Inibição da trombocitopenia induzida por colagénio na cobaia (valor médio ± SEM) «a»

		N	% de inibição de trombocitopenias
Controle		8	2 ± 6
Cicaprost	1 ng/kg/min	6	8 ± 5ⁿ-^s·
	3 ng/kg/min	6	36 ± 4^a
ASS	0,5 mg/kg	8	17 ± 3^a
ASS Cicaprost	0,5 mg/kg + 1 ng/kg/min	8	34 ± 5^a'^b

^a significativo relativamente ao controle (teste t, p<0,05)

T_ ^D significativo relativamente a ácido acetilsalicílico/ /Cicaprost (p<0,01)

n.s.não significativo

I ! EXEMPLO 3 í Na cobaia narcotizada isola-se um i troço do mesentério e submete-se a superfusão com solução I de cloreto de sódio tépida. Mediante controle microscópico ; intravital a parede de uma arteríola do mesentério (020 - 50 i| m ) é lesionada por uma série de impulsos eléctricos. Por ' meio de uma subsequente aplicação local de concentrações crescentes de solução de ADP (difosfato de adenosina) determina-se uma concentração trombogénia do ADP à qual se forma um trombo de plaquetas ocludível no ponto da arteríola previamente lesionado. Esta concentração trombogénea de ADP ι produz trombos reproductíveis específicos do vaso na resij pectiva arteríola

N

ί. Resultados:

jí O ácido acetilsalicílico a 10 mg/kg ij i.v. não altera a concentração trombogénea do ADP (quadro ' 3) . 0 Cicaprost a 10 ng/kg/minuto i.v. também não é eficaz íi significativamente a este nível de dosagem. A combinação destas doses ineficazes neste modelo de trombose, do | Cicaprost e do ácido acetilsalicílico conduz a um reforço significativo da concentração trombogénea do ADP de 1,27 + i fj ...

J 0,54 log M ( = 30,9 vezes a concentração inicial) . Esta acção antitrombótica da combinação não pode ser alcançada '' pelo ácido acetilsalicílico isoladamente e só é atingido por í uma administração individual de Cicaprost para uma dose dez ! vezes mais forte (100 ng/kg/minuto i.v. : aumento de 1,32 ± jí 0,2, log M ADP , N = 5) .

i

Quadro 3 :

Acção do Cicaprost, do ácido acetilsalicílico e de uma combinação de Cicaprost + ASS sobre o desenvolvimento de trombos de plaquetas ocludíveis em arteriolas do mesentério da cobaia previarnente lesionado (valor médio ± SEM).

Concentrações trombogéneas de ADP N valor inicial aumento [/xM] [log/xM]

Cicaprost 10 ng/kg/min 5 ng/kg/min 5

100 ng/kg/min 5

ASS 10 mg/kg 5

Cicaprost 10 ng/kg/min + ASS 10 mg/kg 5

84,6±54,9	+	0,36ⁿ·^s*±0,39
79,8±29,6	+	1,02^a ± 0,20
64,6+23,7	+	1,32^a ± 0,20
26,1±13,9	+	0,06ⁿ‘^s*±0,13
13,8±6,7	+	l,27^a'^b±0,54

^a significativo em relação ao controlo (Teste t, p<0,05) ^b significativo em relação a doses individuais de ASS/ /Cicaprost (p < 0,05) n.s. não significativo.

Ts.

CS

EXEMPLO 4:

| Na cobaía narcotizada expôe-se cuij; dadosamente um pedaço, com cerca de 2 cm de comprimento da jj artéria carótida esquerda externa e coloca-se sobre uma '1 pequena placa metálica. Em seguida sobrecarrega-se a parede I do vaso, ao longo de um comprimento de 1 cm e durante 3 minutos, com um estilete de aço de 200 g de peso arrefecido a -15sc. Deste modo consegue-se produzir uma lesão maciça

J localizada da parede do vaso sanguíneo numa grande artéria e '! a formação de um trombo vermelho na parte lesionada, ί Passadas 3 horas depois da lesão os segmentos lesionados e um comprimento igual da artéria contralateral são retirados, ι lavados e colocados num reagente de teste de hemoglobina. Passadas 24 horas determinam-se os teores de hemoglobina de ambos os segmentos. A partir da diferença destes teores de ^! hemoglobina calcula-se então o teor de hemoglobina real do jj trombo vermelho com uma medida da dimensão do trombo.

i Resultados:

ãcido acetilsalicílico a 5 mg/kg i.v. não tem qualquer influência significativa sobre a formação do trombo na artéria carótida da cobaia (Quadro 4). 0 j Cicaprost, numa dose de 0,3 ng/kg/minuto i.v. também não efi ii . . . .

jj caz signif icativamente, conduz em combinação com o ácido ace !j tilsalicílico, a uma acção antitrombótica significativa; o ! i teor de hemoglobina do trombo é reduzido de 85% em relação aos controles, de 8,6 /zmol (mediana) para 1,3 μιηοΐ.

I

Quadro 4:

Acção do Cicaprost, do ácido acetilsalicílico e de uma combinação de Cicaprost + ASS sobre a formação do trom bo na artéria carótida da cobaia previamente lesionada por pressão + frio (mediana e quartos do teor de hemoglobina [Hb] do trombo).

	Teor do Hb no trombo [⁴mmol]
N	Mediana	Q 25	/	q 75
Control			30	9,6	5,7	/	12,1
Cicaprost	0,3	ng/kg/min	10	12,4ⁿ-^s·	8,0	/	25,0
	1,0	ng/kg/min	10	1,9^a	0,2	/	5,8
	3,0	ng/kg/min	11	0^a	0,4	/	0,7
ASS	5	mg/kg/	10	₃,₄n.s.	-0,1	/	13,8
Cicaprost + ASS	0,3 5	ng/kg/min mg/kg/	10	1,3a* k·	-1,2	/	5,1

ji ^a significativo em relação ao controle (=5%, teste da

Claims

Processo para a preparação de prepa rados de combinação para a inibição da função dos trombócitos e para o tratamento de tromboses,caracterizado por se in corporarem ãcido acetilsalicílico e os derivados de carbaciclina Cicaprost ou Eptaloprost,em combinação com substâncias auxiliares e substâncias veiculares correntes, sendo a proporção ponderai do ãcido acetilsalicílico para o derivado de carbaciclina de 1:5x10”® até 1:1.

_
2§ Processo de acordo com a reivindica ção 1 caracterizado por se obterem preparados de combinação nos quais o ãcido acetilsalicílico e o derivado de carbaciclina estão presentes em unidades de dosagem separadas.

- 3a Processo de acordo com a reivindica ção 1 caracterizado por se obterem preparados de combinação nos quais o ãcido acetilsalicílico e o derivado de carbaciclina estão presentes numa unidade de dosagem.

- 4a Processo de acordo com a reivindica ção 1 caracterizado por se obterem preparados de combinação nos quais uma unidade de dosagem do derivado de carbaciclina compreende 1 a 1000 pg, e uma unidade de dosagem do ácido acetilsalicílico compreende 1 a 500 mg.

ι A requerente reivindica a priorida-