PT88924B - Processo para a preparacao de derivados de ginkgolidos - Google Patents

Description

A presente invenção refere-se a um processo para a preparação de derivados de Ginkgolidos.

A presente invenção proporciona derivados 1-alcoxi e 10-alcoxi dos Ginkgolidos A, B, C, J e M. Os grupos alcoxi preferidos são os grupos metoxi e etoxi.

A invenção proporciona um método para a preparação de derivados 1-alcoxi e 10-alcoxi de Ginkgolidos

A, B, C, J e M, consistindo o método em fazer reagir os Ginkgolidos A, B, C, J ou M em solução num solvente não polar com um excesso de diazo-alcano e em fazer a separação da mistura resultante de 1-alcoxi-Ginkgolido e 10-alcoxi-Ginkgolido, .M.

De acordo com um procedimento preferencial dissolve-se em dioxano o Ginkgolido escolhido, adequadamen• te numa concentração de 1 g por 100 ml, e dissolve-se o diazo-

-alcano escolhido em éter dietílico. Adiciona-se lentamente a solução que contém o diazo-alcano à solução que contém o Ginkgolido, na proporção de 10 equivalentes de diazo-alcano por equivalente de Ginkgolido. Deixa-se a solução mista em repouso à temperatura ambiente durante 3 a 8 horas, proporcionando uma mistura de 1-alcoxi-Ginkgolido e de 10-alcoxiGinkgolido. Po de efectuar-se adequadamente a separação dos dois produtos a partir do Ginkgolido remanescente que não reagiu fazendo a evaporação dos solventes e eluindo o resíduo através de uma coluna de gel de silica utilizando como eluente acetato de etilo/hexano 1:1. Evapora-se a solução resultante e trata-se com clorofér mio o qual dissolve o derivado 10-alcoxi. Recupera-se o referido derivado 10-alcoxi a partir desta solução em clorofórmio e trata-se depois a solução remanescente com éter dietílico para proporcionar o derivado 1-alcoxi.

Os alcoxi-Ginkgolidos de acordo com a pre sente invenção possuem interesse para o tratamento de doenças induzidas pelo éter PAF-Ac, pelo que a invenção proporciona também uma composição farmacêutica constituída por um derivado 1-alcoxi de Ginkgolido” A, B, C, J ou M ou por um derivado 10-alcoxi de um dos referidos Ginkgolidos ou por uma mistura de dois ou vários dos referidos derivados 1-alcoxi e/ou 10-alcoxi, em mistura com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

Ilustra-se a invenção com os exemplos seguintes:

Exemplo 1

1-metoxi-Ginkgolido B e 10-metoxi-Ginkgolido B

A uma solução de Ginkgolido B em dioxano (10 g/l) adicionou-se lentamente 10 equivalentes de uma solução de diazo-metano em éter dietílico. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 horas e depois separou-se de acordo com o procedimento preferencial de separação anteriormente descrito. Obteve-se 1-metoxi-Ginkgolido B cuja estrutura se confir mou por HPLC, com um rendimento de 66,1% e obteve-se o 10-meto2

xi-Ginkgolido B com um rendimento de 24,4$.

Procedendo como anteriormente, mas utilizando os Ginkgolidos” A e C obtiveram-se os seguintes rendimentos:

	1-metoxi	10 - metóxi
Ginkgolido A	56,3 $	13,2 $
Ginkgolido C	U9,l $	16,7 $

Exemplo 2

1-etoxi-Ginkgolido B e 10-etoxi-Ginkgolido B

De acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1 mas utilizando diazo-etano em vez de diazo-metano (duração: 6 horas) obteve-se 1-etoxi-Ginkgolido B com um rendimento de 63,2$ e obteve-se 10-etoxi-Ginkgolido B com um rendimento de 25,7$.

Procedendo conforme descrito anteriormente, mas utilizando os Ginkgolidos” A e C, obtêm-se os rendimentos seguintes:

	1- etoxi	10 - etoxi
Ginkgolido À	72,8 $	20,1 $
Ginkgolido C	59,2 $	30,4 $

= 3 =

TOXICIDADE

Mediu-se a toxicidade dos compostos da presente invenção nos ratos, por via oral.

Não se observou mortalidade de ratos para a administração de dose máxima.

FARMACOLOGIA

Demonstrou-se o interesse farmacêutico dos com postos da presente invenção com as seguintes experiências farma cêuticas.

1) - Inibição de agregação de plaquetas em coelhos da Nova Zelândia

Efectuou-se a experiência sobre as plaquetas em plasma de coelhos da Nova Zelandia.

Extrairam-se amostras de sangue da artéria auricular e colocaram-se em tampão citrato (3,8 $; pH 7,4); fez-se a centrifugação do sangue durante 15 minutos a 1200 RPM.

Preparou-se a amostra de ensaio em DMSO, seguidamente verteu-se sobre o plasma rico em plaquetas durante 1 minuto, e depois adicionou-se uma dose de 2,5 nM de PAF.

Efectuou-se a determinação com um aparelho Crç nolog Coultronics o qual determina a percentagem de transmissão correspondente à altura máxima de pico antes da desagregação.

Calcula-se a percentagem de variação da inibição relativamente à percentagem de transmissão (controlos DMSO puro).

Este método foi descrito pormenorizadamente em LABORATORY INVESTIGATIONS, Vol. 4l, No. 3, P· 275, 1979, JEAN-PIERRECCAZENAVE, Dr. MED., JACQUES BENVENISTE, Dr. MED., AND J. FRASER MUSTARD, M.D., Aggregation of Rabbits Platelets by Platelet-Activating Factor is independent of the Release Reaction and the Arachidonate Pathway and inhibited by Membrane-Active Drugs.

Os resultados demonstram que os compostos ini-

bem a agregação induzida por 2,5 nM de PAF. Cinco testes feitos enc cinco coelhos diferentes permitiram calcular os valores

IC__ dos diversos compostos utilizando o ensaio de regressão li 50 near.

Encontraram-se os valores IC seguintes:

Tipo de Ginkgolido” e posição de subs-	- och3	- oc2h5
	tituição
B	1-	6,6	10“ 7	1,1	io“6
B	10-	2,9	io-7	7,2	1o”6
C	1-	4,2	10”6 -6	8,5	1o6 . -6
C	10-	3,0	10	9,3	10
A	1-	4,6	10” 6	8,7	10 6
A	10-	1,3	10” 5	6,2	10”^

2) - Broncoconstrição anafilática de um porco da índia sensibilizado passivamente

Sensibilização heterologa passiva

Fez-se a sensibilização de porcos da índia macho do tipo Hartley” (400-500 g) por injecção intravenosa (IV) de um soro de coelho imune à antiovalbumina (Cooper Biomedical, U.S.A.). Para se obter uma resposta anafilática satisfatória 24 horas mais tarde, estabelecerem-se as condições seguintes: injecção no pénis de um soro diluído (para metade da concentração 0,05 ml/100 g).

íí2ÉÉ222_É2_5£22222222Í£i2B2

Anestesiaram-se porcos da índia com uretano (2 g/kg, IP), depois fez-se uma traqueomia e ventilou-se por meio de uma bomba respiratória (UGO BASILE) : volume por ciclo 1 ml/ = 5 =

/100 g, 6O ciclos/minuto.

Efectuou-se um pneumotórax para abolir a respiração espontânea. Manteve-se constante a resistência inicial à pressão de 10 cm de água, de acordo com o método de Konzett e Rossler e mediu-se o excesso de volume de ar com um transdutor de broncoespasmo (UGO BASILE) ligado a um registador UGO BASILE Gemini. Aplicou-se um catéter à veia jugular para injecções intravenosas. Induziu-se o choque anafilático com uma injecção intravenosa de 0,75 mg/kg de um composto passivo heterologo de ovalbumina. Os produtos foram administrados por via oral 1 hora antes da estimulação antigénica, na forma de uma suspensão gomosa em água, na dose de 25 mg/kg.

Resultados

Exprime-se a broncoconstrição induzida por oval bumina em percentagem da broncoconstrição máxima proporcionada por aperto da traqueia. Os resultados apresentam-se na Tabela seguinte:

Tipo de Ginkgolido e posição de subs-	- och3	~ C02H5
	tituição
B	1-	_ 49,7***	- 38,3**
B	10-	- 54,9***	- 36,2**
C	1-	- 40,1**	- 39,8**
C	10-	- 30,6 *	- 23,1*
A	1-	- 32,0 *	- 15,1 NS
A	10-	- 25,2 *	- 12,2 NS

NS	: Não significativo
X	: Significativo
XX	: Muito significativo
XXX	: Muitíssimo Significativo

= 6 =

Na terapia humana as doses habituais para admi nistração per os estão entre 0,5 e 1 g per diem em pastilhas ou cápsulas de gelatina para um mês.

Na administração I.V. recomenda-se 3 injecções semanalmente de 0,05 até 0,2 em solução isotónica.

Claims (1)

1. - lê Processo para a preparação de derivados de 1-alcoxi ou 10-alcoxi ginkgolidos substituídos, caracterizado por fazer-se reagir uma solução de dioxano do ginkgolido seleccionado numa solução de éter dietílico de diazo-alcano em excesso à temperatura ambiente durante 1 a 10 horas.

   A requerente declara que o primeiro pedido desta patente foi apresentado na Prança em 4 de Novembro de 19θ7,