PT764632E - Agonistas selectivos de adrenergicos beta 3 - Google Patents

Description

i ; "<L DESCRIÇÃO "AGONISTAS SELECTIVOS DE ADRENÉRGICOS BETA 3” Λ presente invenção pertence ao campo da medicina, particular-mente ao tratamento de diabetes do Tipo II e obesidade. Mais especificamente, a presente invenção relaciona-se com agonistas selectivos de receptores adrencrgicos β3 úteis no tratamento de diabetes do Tipo II e obesidade.

Antecedentes da Invenção O tratamento actual preferido para diabetes não dependente de insulina do Tipo II, bem como para a obesidade é dieta e exercício, tendo em vista a redução de peso e sensibilidade melhorada à insulina. A aquiescência do paciente, no entanto, é geralmente insatisfatória. O problema toma-se mais agudo pelo facto de actualmente não haver nenhuma medicação aprovada que trate de forma adequada tanto a diabetes do Tipo II como a obesidade: A invenção descrita aqui está direccionada para um tratamento eficaz e oportuno para estas graves doenças.

Uma oportunidade terapêutica que foi recentemente reconhecida envolve a relação entre a estimulação do receptor adrenérgico e os efeitos anti-hiperglicémicos. Foi demonstrado que compostos que actuam como agonistas de receptores β3 exibem um efeito marcado sobre níveis de lipólise, termogénese e glicose do soro em modelos animais de diabetes do Tipo II (não dependente de insulina). -2- O receptor β3, que é encontrado em vários tipos de tecidos humanos incluindo o tecido adiposo, tem aproximadamente 50% de homologia com os sub-tipos de receptores βι e β2 mas no entanto é consideravelmente menos abundante. A importância do receptor β3 é uma descoberta relativamente recente uma vez que a sequência de amino-ácido do receptor humano só foi elucidada no final da década de 80. Nos últimos anos surgiu um grande número de publicações com a descrição de êxito na descoberta de agentes que estimulam o receptor β3· Apesar destes recentes progressos, permanece a necessidade de desenvolver um agonista selectivo de receptor β3 que tenha uma actividade agonista mínima contra os receptores βι e β2. O EP-A-375 560 descreve certas ariloxipropanolaminas tendo actividade antagonista β. A presente invenção fornece compostos que são agonistas selectivos de receptores β3. Como tais, os compostos levam efectivamente a um aumento da sensibilidade à insulina e são úteis no tratamento de diabetes do Tipo II e outras doenças implicadas pelo receptor β3, sem efeitos secundários cardíacos ou relacionados a tremor.

Sumário da Invenção A presente invenção fornece compostos da Fórmula I:

(I) em que:

Ri é OH, halo, SO2NHR2, CO2R2, CONHR2, NHCOR2, -NH(arilo substituído opcionalmente), CF3, ou CF2H;

Rp é H, halo, alquilo Cj - C4, OH, S02NHR2, C02R2, CONHR2, NHCOR2, CF3 ou CF2H; R2 é H, alquilo.Ci - C4, ou arilo; R3 é H ou alquilo Ci - C4;

R4 é uma unidade seleccionada do grupo consistindo em:

R5 e R^ são independentemente alquilo Q - C4; R7 é um heterociclo substituído opcionalmente ou um grupo seleccionado do grupo consistindo em:

o

0

Rg é independentemente H, halo ou alquilo Cj - C4; R9 é halo, CN, ORi0, alquilo Q - C4, haloalquilo Cj - C4, CO2R2, CONRnR12, CONH (alquilo Ci - C4 ou alcoxi Q - C4), SR2, CSNR2, CSNRnR12, S02R2, S02NRnRi2, SOR2, NRnRi2s arilo, heterociclo, arilo substituído opcionalmente, heterocliclo substituído opcionalmente, ou alquilo Cj - C4, ou alcenilo C2 - C4 substituído opcionalmente por CN;

Rio é independentemente alquilo Q - C4, haloalquilo Ci - C4, cicloalquilo (CH2)nC3 - Cg, arilo (CH2)n, heterociclo (CH2)ns cicloalquilo C3 - Cg substituído opcionalmente por (CH2)n, arilo substituído opcionalmente por (CH2)n, ou heterociclo substituído opcionalmente por (0¼)¾

Rn e R)2 são independentemente H, alquilo Ci - C4, ou são combinados com o azoto ao qual cada um está ligado a fim de formar morfolinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, ou piperazinilo;

Xi c O ou S; X2 é ausente ou um alquileno linear ou ramificado de 1 a 5 carbonos; m é 0 ou 1; n é 0, 1, 2, ou 3; 0 é 1, 2, 3, 4, 5, ou 6; ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável. A presente invenção também fornece um processo novo para fazer compostos de Fórmula I.

Os compostos da presente invenção são agonistas selectivos de receptores β3 e como tal são úteis para tratar diabetes do Tipo II e obesidade, bem como úteis para estimular o receptor β3. Deste modo, a presente invenção também fornece os métodos para tratar diabetes do Tipo II e obesidade, bem como um método para estimular o receptor β3.

Além disso, a presente invenção fornece a utilização de compostos de Fórmula I para o tratamento de diabetes do Tipo II e obesidade bem como a utilização de compostos de Fórmula I para estimular o receptor β3.

Descrição Detalhada

Para os fins da presente invenção como aqui descrito e reivindicado, os seguintes termos são definidos abaixo. Uma vez que estão relacionados com a presente invenção, os termos abaixo não podem ser interpretados, individualmente ou colectivamente, para descrever estruturas químicas que sejam instáveis ou impossíveis de construir. O termo "halo" representa flúor, cloro, bromo, ou iodo. O termo "alquilo Q - C4" representa um grupo ciclo alquilo de cadeia linear ou ramificada, tendo de um a quatro átomos de carbono como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, ciclopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo e outros semelhantes. Um "haloalquilo" é um alquilo substituído com um ou mais átomos de halo, preferencialmente um a três átomos de halo. Um exemplo de haloalquilo é trifluorometilo. Um "alcoxi" é um grupo alquilo ligado de forma co-valente por uma ligação -0-. O termo "alquileno linear ou ramificado de 1 a 5 carbonos" representa uma unidade de alquileno linear ou ramificada de um a cinco carbonos. Um alquileno ramificado pode ter um ou mais pontos de ramificação. Um alquileno linear ou ramificado de 1 a 5 carbonos pode opcionalmente ser insaturado em um ou mais carbonos. Deste modo, um alquileno linear ou ramificado de 1 a 5 carbonos inclui unidades de alquileno de 1 a 5 carbonos, alquenileno e alquilideno. Exemplos incluem metileno, etileno, propileno, butileno, -CH(CH3)CH2- CH(C2H5)CH2-, -CH(CH3)CH(CH3)-, -CH2C(CH3)2-,. -CH2CH(CH3)CH2-, -C(CH3)2CH=, -CH=CHCHr, -CH=CH-, e outros semelhantes. A unidade de "acilo", só ou em combinação, é um derivado de um ácido alcanóico contendo de um a sete átomos de carbono. O termo "acilo" também inclui unidades derivadas de um ácido arilcarboxílico. O termo "arilo" representa um fenilo ou naftilo opcionalmente substituído ou não substituído. O termo (CH2)„arilo é preferencialmente benzilo ou fenilo. O termo "substituído opcionalmente" tal como é usado neste contexto significa uma substituição opcional de um a três, preferencialmente um ou dois grupos independentemente seleccionados de halo, haloalquilo Cj - C4, hidroxi, carboxi, tetrazolilo, acilo, COOR2, CONRnR12, CONH(alcoxi C] - C4), ciano, alcoxi C] - C4, alquilo Ci - C4, fenilo, benzilo, nitro, NRnRi2, NHCO(alquilo C, - C4), NHCO (benzilo), NHCO (fenilo), SR2, S(alquilo C, -C4), OCO(alquilo Q - C4), S02(NRnRi2), S02(alquilo Q - C4), ou S02(fenilo); desde que tal substituição não destrua completaménte a actividade biológica, como definido nesta especificação.

Rn e R12 são independentemente H, alquilo Cj - C4, ou são combinados com o azoto ao qual cada um está ligado a fim de formar morfolinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, ou piperazinilo. O termo "heterociclo" representa um anel de 5 ou 6 membros estável, opcionalmente substituído ou não substituído, saturado ou insaturado, tendo o referido anel de um a quatro heteroátomos que são os mesmos ou -7- -7- a f. t diferentes e que são seleccionados do grupo consistindo em enxofre, oxigénio, e azoto; e quando o heterociclo contém dois átomos de carbono adjacentes, os átomos de carbono adjacentes podem ser estruturados a fim de formar um grupo da fórmula —CH=CH-; contanto que (1) quando o anel heterocíclico contém 5 membros, os heteroátomos compreendam não mais do que dois átomos de enxofre ou dois átomos de oxigénio, mas não ambos; e (2) quando o anel heterocíclico contém 6 membros e é aromático, não estejam presentes enxofre e oxigénio. O heterociclo pode estar ligado a qualquer carbono ou azoto que forneça uma estrutura estável. O heterociclo pode ser substituído opcionalmente. Exemplos de um heterociclo incluem pirazole, pirazolina, imidazole, isoxazole, triazole, tetrazole, oxazole, 1,3-dioxolona, tiazole, oxadiazole, tiadiazole, piridina, pirimidina, piperazina, morfolina, pirazina, pirrolidina, piperidina, oxazolidona, oxazolidinediona, imidazolidinona. O termo "grupo separável" tal como é usado na especificação é compreendido por aqueles especialistas na matéria. Geralmente, um grupo separável é qualquer grupo ou átomo que acentua a electrofilicidade do átomo ao qual está ligado para deslocamento. Grupos separáveis preferidos são p-nitrobenzenossulfonato, triflato, mesilato, tosilato, imidato, cloreto, brometo, e iodeto. O termo "quantidade farmaceuticamente eficaz", tal como é usado neste contexto, representa uma quantidade de um composto da invenção que é capaz de estimular o receptor β3 em mamíferos. A dose específica do composto administrado de acordo com esta invenção será, naturalmente, determinada pelas circunstâncias especiais que circundam o paciente, incluindo o composto administrado, a via de administração, o estado específico a ser tratado, e outras considerações semelhantes. O termo "forma de dosagem unitária" refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para seres humanos e outros mamíferos, contendo cada unidade uma quantidade pré-determinada de material activo calculado para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com um veículo farmaceuticamente adequado. O termo "tratamento", tal como é usado neste contexto, descreve a gestão c cuidados de um paciente com o propósito de combater a doença, estado ou enfermidade c inclui a administração de um composto da presente invenção para evitar a instalação dos sintomas ou complicações, ou para eliminar a doença, estado, ou enfermidade. 0 termo "selectivo" significa o agonismo preferencial do receptor β3 sobre o agonismo do receptor piou $2.

Em termos gerais, os compostos da presente invenção demonstram no mínimo um diferencial de vinte vezes (preferencialmente sobre um diferencial de 50x) na dosagem requerida para se comportar como agonista do receptor P3 e a dosagem requerida para igual agonismo do pl e P2 como medido no Ensaio Funcional de Agonista. Os compostos demonstram este diferencial por toda a variação das doses. Assim, os compostos selectivos p3 comportam-se como agonistas para o receptor p3 a concentrações muito mais baixas com toxicidade mais baixa devido ao seu agonismo mínimo dos outros receptores.

Como observado anteriormente, a presente invenção fornece compostos da Fórmula I.

Os compostos preferidos são aqueles de Fórmula Ia:

(Iâ) em que: R, é F, OH, -S02NR2, -NHCOR2, ou CF2H; R7 é

Re - ~0f R8 é independentemente H, halo ou alquilo Cj - C4;

Rg é OR10, tetrazolilo, CONR11R12, ou S02NRnRi2;

Rio é arilo (CH2)n, heterociclo (CH2)n, sendo a referida arilo ou heterociclo substituídos opcionalmente por tetrazolilo, CN, C02R2, CONRnR12, ou SO2NR11R12;

Rn e R,2 são independentemente H, alquilo Ci - C4, ou sao combinados com o azoto ao qual cada um está ligado a fim de formar morfolinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, ou piperazinilo; X2 é alquileno de 1 a 2 carbonos; n é 0, 1, 2, ou 3; ou um sal farmaceuticamente aceitável.

Outros compostos preferidos são aqueles de Fórmula Ib:

/ ‘"5 -10-

(Xb) em que: R, é F, -S02NR2, -NHCOR2 ou CF2H; R7 é um heterociclo opcionalmente substituído ou

Rg é independentemente H, halo ou alquilo Q — C4; R9 é ORjo, CONRhRi2, ou S02NRnRi2>

Rio é independentemente arilo (CH2)n, heterociclo (CH2)n, sendo a referida arilo ou heterociclo substituídos opcionalmente por tetrazolilo, CN, C02R2, CONRnR12, ou S02NRuR12;

Rn e R]2 são independentemente H, alquilo Q - C4, ou são combinados com o azoto ao qual cada um está ligado a fim de formar morfolinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, ou piperazinilo; X] é O ou S; n é 0,1,2 , ou 3. o é 1,2,3,4, 5, ou 6; ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.

Compostos preferidos adicionais são aqueles da Fórmula Ic:

(ΙΟ em que: R, é F, -S02NR2, -NHCOR2 ou CF2H; R9 é OR10, CONRnRi2, S02NRhR12, SOR2j NRhRi2, arilo substituído opcionalmcnte, ariloxi substituído opcionalmente, ou heterociclo substituído opcionalmente;

Rio é arilo (CH2)n, heterociclo (CH2)„, sendo a referida arilo ou heterociclo substituídos opcionalmente por tetrazolilo, CN, C02R2, CONRnRi2, ou S02NRnRt2;

Ru e R12 são independentemente H, alquilo Q - C4, ou são combinados com o azoto ao qual cada um está ligado a fim de formar morfolinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, ou piperazinilo;

Xi é O ou S; m é 0 ou 1. n é 0,1,2 , ou 3; ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.

Compostos particularmente preferidos são aqueles de Fórmula Ia, Ib ou Ic, em que R9 é CONH2 e OR]0, em que R10 é uma arilo substituído opcionalmente particularmente fenilo, ou heterociclo substituído opcionalmente, particularmente piridina.

Compostos preferidos adicionais incluem os seguintes: (Todos os isómeros de:) 5-{3-[2-hidroxi-3-(2-fluorofeniloxi)-propilamino]-2- metilbutil} -tiofeno-2-sulfonamida (Todos os isómeros de:) 5-(2-fluoro-4-{3-[2-hidroxi-3-(2-fluorofeniloxi)-propilamino]-2-metilbutil}-fenil)-lH-tetrazole (Todos os isómeros de:) 4-{3-[2-hidroxi-3-(3-hidroxifeniloxi)-propilamino]-2-meti lbuti 1} benzamida (Todos os isómeros de:) 4-{3-[2-hidroxi-3-(2-fluorofeniloxi)-propilamino]-2-metilbutil} -3-metilbenzamida (Todos os isómeros de:) 4-{3-[2-hidroxi-3-(3-acetilamino-feniloxi)-propilamino]-2-metilbutil} benzamida

Em virtude das suas unidades ácidas, alguns dos compostos de Fórmula I incluem os seus sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis. Estes sais incluem aqueles derivados de bases inorgânicas tais como hidróxidos, carbonatos, bicarbonatos de amónio e metal alcalino e alcalino-terroso, e outros semelhantes, bem como sais derivados de aminas orgânicas básicas'tais como aminas alifáticas e aromáticas, diaminas alifáticas, hidroxialcaminas, e o outras semelhantes. Estas bases úteis na preparação dos sais desta invenção incluem, desde modo, hidróxido de amónio, carbonato de potássio, bicarbonato de sódio, hidróxido de cálcio, metilamina, dietilamina, etilenodiamina, ciclo-hexilamina, etanolamina e outros semelhantes.

Por causa da unidade básica, alguns dos compostos de Fórmula I também podem existir como sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis. Os ácidos geralmente empregues para formar estes sais incluem ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, bromídrico, iodídrico, sulfurico e fosfórico, bem como ácidos orgânicos tais como ácido paratoluenossulfónico, metanossulfónico, oxálico, parabromofenilssulfónico, carbónico, succínico, cítrico, benzóico, acético, e ácidos inorgânicos e orgânicos relacionados. Tais sais farmaceuticamente aceitáveis incluem deste modo sulfato, pirossulfato, bissulfato, sulfito, bissulfito, fosfato, mono-hidrogenfosfato, di-hidrogenfosfato, metafosfato, pirofosfato, cloreto, brometo, iodeto, acetato, propionato, decanoato, caprilato, acrilato, formato, isobutirato, heptanoato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, 2-butino-l,4 dioato, 3-hexino-2, 5-dioato, benzoato, clorobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, ftalato, xilenossulfonato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, hipurato, β-hidroxibutirato, glicolato, maleato, tartarato, metanos-sulfonato, propanossulfonato, naftaleno-l-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, mandelato e outros sais semelhantes. É reconhecido que podem existir várias formas estereoisómicas dos compostos de Fórmulas I. Os compostos podem ser preparados como racematos e podem ser convenientemente utilizados como tal. Portanto, os racematos, enantiómeros individuais, diastereómeros, ou misturas destes formam parte da presente invenção. A não ser que seja especificado de outra maneira, sempre que um composto for descrito ou referenciado nesta especificação todos os racematos, enantiómeros individuais, diastereómeros, ou misturas destes estão incluídos na dita referência ou descrição.

Os compostos de Fórmula I são preparados como descrito nos Esquemas e exemplos a seguir.

Esquema I

(II) (III)

No Esquema I, Rj, Rt· e R4 têm 0 mesmo significado do que o previamente descrito. A reacção do Esquema I é levada a cabo por condições compreendidas na técnica pela aminação de epóxidos. Por exemplo, o epóxido (II) pode ser combinado com a amina (III) num álcool, preferencialmente, etanol à temperatura ambiente até a temperatura de refluxo da mistura reaccional. Preferencialmente, a reacção é levada a cabo sob condições descritas em termos gerais em Atkins et al., Tetrahedron Lett. 27:2451 (1986). Estas condições incluem misturar os reagentes na presença de trimetilsililacetamida num solvente aprótico polar como acetonitrilo, dimetilformamida (DMF), acetona, dimetilssulfóxido (DMSO), dioxano, éter metílico de dietilenoglicol (diglima), tetra-hidrofurano (THF), ou outros solventes apróticos polares nos quais os reagentes sejam solúveis. Preferencialmente, 0 solvente é DMSO. A reacção é levada a cabo a temperaturas que variam de cerca de 0°C até à temperatura de refluxo.

Os compostos da presente invenção podem ser preparados por uma nova síntese combinatória/paralela. Esta síntese é descrita no Esquema II.

Esquema Π - 15-

νη2 + (IV) Ο—

* Formula I (V)

No Esquema II, Rj, Ri·, R2 e R4 têm o mesmo significado do que o previamcntc descrito. A reacção do Esquema II é preferencialmente levada a cabo adicionando a um frasco de vidro: um solvente não-reactivo como metanol, DMF, cloreto de melileno ou acetonitrilo, amina (IV), e cetona (V). A solução é agitada a fim de permitir a formação de imina e tratada com resina de borohidreto Amberlitc IRA400 (Aldrich). A suspensão é então agitada durante mais 24 horas a fim de cfcctuar a redução até amina secundária. São adicionados ao fiasco cloreto de metileno e resina de benzaldeído ligada a poliestireno (Frechet, J.M. et al., J. Am. Chem. Soe. 93:492 (1971)), a fim de limpar o excesso do material de partida de amina primária. A solução é agitada e depois filtrada através de um tampão de algodão, e os sólidos residuais enxaguados com metanol. Evaporação sob um fluxo de ar, seguido de secagem durante várias horas à temperatura ambiente num forno a vácuo produz o produto desejado de pureza suficiente.

Uma modificação do Esquema II é necessária quando é usado sal de hidrocloreto de amina. A adição de base ligada com resina à mistura reaccional inicial antes da redução ou da limpeza do excesso permite que a reacção desejada prossiga. A formação de imina usando sais de hidrocloreto de amina, um aldeído ou cetona, e uma amina básica ligada com resina pode ser levada a cabo usando duas resinas diferentes: poli(4~vinilpiridina), disponível comercialmente através da Aldrich, e resina (VIII), sintetizada pela reacção de resina Merrifield com piperidina (Esquema lia):

Esquema lia

DMF, K2CO; 80°C (VI) (VII)

(VIII)

No Esquema lia, PS é poliestireno. Tanto a poli(4-vinilpiridina) como a resina (VIII) promovem a formação de imina. O Esquema II também pode ser levado a cabo pela utilização de técnicas tradicionais. As aminações redutivas descritas no Esquema II são bem conhecidas na técnica. Elas são realizadas tipicamente pela mistura dos materiais de partida amina e cetona num solvente e acrescentando um agente redutor. Os solventes tipicamente incluem álcoois inferiores, DMF, e outros semelhantes. Pode ser utilizada uma vasta variedade de agentes redutores, sendo os mais utilizados boro-hidreto de sódio e cianoboro-hidreto de sódio. A reacção é tipicamente realizada à temperatura ambiente até a temperatura de refluxo do solvente. Os produtos são isolados por técnicas bem conhecidas na técnica.

Muitos dos materiais de partida amino e cetona utilizados no

Esquema II podem ser preparados por técnicas reconhecidas e compreendidas por aqueles que são especialistas na matéria. A síntese de materiais de partida adicionais está descrita em termos gerais nos Esquemas III e IV.

Esquema III

(ΧΖ) <ΤΧ> (X)

(XII)

No Esquema III, Χι, Ri> e Ri são o mesmo do que o previamente descrito. Quantidades equimolares do composto aromático (Composto IX) e 3-nitrobenzenossulfonato de (2S)-(+)-glicidilo (Composto X) são dissolvidos num solvente inerte como acetona e tratados com 1,1 equivalentes de um eliminador de ácido não-reactivo, como K2CO3. A suspensão é então aquecida à temperatura de refluxo durante 16-20 horas com agitação. O solvente é removido in vacuo. O resíduo é dividido entre clorofórmio ou outro solvente orgânico e água. A camada orgânica é seca sobre Na2S04 e concentrada in vacuo para dar o epóxido (XI) em pureza suficiente (>95%) e produzir (85-100%). O epóxido (XI) é dissolvido num álcool, preferencialmente metanol, e tratado com um equivalente de dibenzilamina. A solução é preferencialmente agitada à temperatura de refluxo durante três a quatro horas e depois arrefecida até a temperatura ambiente. São adicionados ao frasco aproximadamente 10 equivalentes de formato de amónio, seguidos de 10% de paládio sobre carbono, e a suspensão agitada vigorosamente à temperatura de refluxo durante 30-45 minutos. A mistura reaccional é então filtrada através de Celitc, concentrada in vacuo ate um volume mínimo e tratada com 1,1 - 18-

equivalentes de uma solução anidro de 1,0 M de HC1 em éter. A solução é concentrada até estar seca. O resíduo sólido é triturado com pentano a fim de dar produtos de pureza suficiente (>97%) e produzir (60-100%). Se assim for desejado, pode ser levada a cabo mais purificação pela passagem sobre um curto tampão de sílica, eluindo com CHC13, depois com CHCL3/MeOH na proporção dc 95:5, depois com CHCl3/Me0H/NH40H na proporção de 25:5:1.

Altemativamente, o epóxido (XI) é tratado com uma solução de metanol saturado com gás de amoníaco e agitado à temperatura ambiente num tubo selado durante 16 horas. Esta solução é então evaporada, e o resíduo submetido a purificações padrão tais como cromatografia de coluna ou re-cristalização. O sal de HC1 é então opcionalmente produzido pela adição de gás de HC1 em éter. A reacção do Esquema III está também descrita por Beedle et al., Patente U. S. 5,013,761 e está aqui incorporada a título de referência.

As unidades de cetona utilizadas no Esquema Π que ou são desconhecidas na técnica ou não estão disponíveis comercialmente são preparadas de acordo como o Esquema IV.

Esquema IV

Rs (XIII) (XIV)

(XV)

No Esquema IV, X2, R4 R5, R<j e R7 são o mesmo do que o previamente descrito. Preferencialmente, R4 é um fenilo substituído. A reacção descrita no Esquema IV é referida como a reacção de Heck e está descrita em A.J. Chalk, et al., J. Ore. Chem. 41: 1206 (1976). A reacção é conseguida tratando o composto (XIII) com um reagente arilpaládio. O reagente arilpaládio é gerado in situ tratando o Composto (XIV) com um complexo paládio-triarilfosfina. A reacção é geralmente levada a cabo sob condições compreendidas na técnica.

Outra forma de realização da presente invenção é um processo de preparar um composto de Fórmula I que compreende:

No passo 1, reacção de um epóxido da fórmula: o

(II) com uma amina de fórmula (B): η2ν^ ** (III); e no passo 2, reacção do produto do passo 1 a fim de formar um sal de adição de ácido.

Os materiais de partida para os compostos descritos nos Esquemas I, II, ΙΠ e IV ou estão disponíveis comercialmente, ou são conhecidos na técnica, ou podem ser preparados por métodos conhecidos na técnica ou aqui descritos. -20- ιΤ\ ϊ

Os seguintes exemplos e preparações são fornecidos meramente para melhor ilustrar a invenção. O campo da invenção não se destina a ser interpretado como consistindo meramente nos exemplos a seguir. Nos seguintes exemplos e preparações, ponto de fusão, espectros de ressonância magnética nuclear, espectros de massa, cromatografia líquida de alta pressão sobre gel de sílica, cromatografia gasosa, Ν,Ν-dimetilformamida, paládio sobre carvão, tetra-hidrofurano, acetato de etilo, cromatografia de camada fina e análise elementar φ são abreviados como P.F., RMN, EM, CLAP, CG, DMF, Pd/C, THF, EtOAC, CCF e AE, respectivamente. Os termos "AE", "RMN", e "EM" indicam que dos dados eram consistentes com a estrutura desejada.

Preparação 1

(S)-3-(2-fluorofenil)-1,2-epoxipropano F

O

Uma solução de 2-fluorofenol (865 mg, 7,72 mol) e (2S)-(+)-glicidil-3-nitrobenzenossulfonato (2,0 g, 7,72 mmol) em 50 mL de acetona foi tratada com 1,1 equivalentes de K2CO3 (1,17 g, 8,5 mmol) e agitada à temperatura de refluxo durante 18 horas. A suspensão foi arrefecida até à temperatura ambiente, os sólidos foram filtrados, e 0 filtrado concentrado in vacuo até à secura. Os sólidos resultantes foram divididos entre clorofórmio e água, e a camada aquosa extraída uma vez com clorofórmio. As camadas orgânicas foram combinadas e secas sobre Na2S04 e concentradas in vacuo até se obter um óleo incolor que cristalizou lentamente a 0°C como 1,11 g (86%) de agulhas brancas. A CCF (Rf = 0,5, CHCI3) e a RMN indicaram >95% de pureza, c assim u material foi utilizado sem rnais purificações.

Preparação 2

Cloreto de (S)-3-(2-fluorofeniloxi)-2-hidroxipropilamónio

S-3-(2-flourofenil)-l,2-epoxipropano (1,08 g, 6,4 mmol) foi dissolvido em 50 mL de metanol e tratado com dibenzilamina (1,23 mL, 6,4 mmol, d=l,026). A mistura foi agitada à temperatura de refluxo durante 3 horas e depois arrefecida até à temperatura ambiente. Um vasto excesso de formato de amónio (3,0 g, 47,6 mmol) foi adicionado seguido por 10% de paládio sobre carbono (350 mg), e a suspensão foi agitada à temperatura de refluxo durante 45 minutos. Depois de arrefecer a suspensão, a mistura reaccional foi filtrada através de Celite e o filtrado concentrado in vacuo até se obter um óleo incolor. O óleo foi re-dissolvido em 10 mL de metanol e tratado com uma solução anidra de 1,0 M de HC1 em éter (7,0 mL, 7 mmol) e reduzida in vacuo até à secura. O resíduo foi triturado em pentano e os sólidos filtrados a fim de produzir 1,4 g (99%) de um pó branco e seco. RMN. AE.

Preparação 3 (S)-3-(2-fluorofeniltio)-2-hidroxipropilamina

(2S)-(+)-glicidil-3-nitrobenzenossulfonato (3,0 g, 11,6 mmol) e carbonato dc potássio (1,8 g, 13 mmol) em acetona (50 mL) foi aspergido com azoto durante 5 minutos. 2-fluorotiofenol (1,5 g, 11,6 mmol) foi adicionado e a mistura agitada à temperatura ambiente sob uma cobertura de azoto durante 4 horas. A acetona foi removida in vacuo e o resíduo dividido entre água/acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgS04) e concentrada a fim de dar 1,6 g (75%) dc um cpóxido intermediário na forma de um óleo incolor e foi usado sem mais purificações. O epóxido intermediário (1,2 g, 6,5 mmol) foi dissolvido em metanol (10 mL) e arrefecido até 0°C usando um banho de gelo. A solução foi saturada com gás de amoníaco e o vaso reaccional foi selado e deixado a agitar à temperatura ambiente durante 16 horas. A reacção foi aberta a 0°C e o amoníaco deixado evaporar antes da mistura ser concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia "flash" sobre gel de sílica usando CHClsiMeOHrNLLOH na proporção de 25:5:1 a fim de dar 980 mg de um óleo incolor (75%) que rapidamente cristalizou sob vácuo para dar um sólido branco, pf 50-53 °C. RMN. EM. AE.

Preparação 4 4-[(2-oxociclo-hexil)metil]benzonitrilo

Uma mistura de ciclohexanona-2-carboxilato de metilo (11,0 g, 70 mmol, da Fluka), a-bromo-p-tolunitrilo (12,3 g, 63 mmol), carbonato de potássio (10,5 g, 76 mmol) em THF (200 mL) foi levada ao refluxo durante 24 horas. O progresso da reacção foi seguido por CG. A reacção foi diluída com água e o THF foi removido sob pressão reduzida. A porção aquosa foi extraída com EtOAc, e seca (MgS04) a fim de dar 19,3 g de um sólido branco que era 74% puro por cromatografia gasosa. O sólido foi re-cristalizado com hexano/EtOAc a fim de dar 7,75 g de cristais brancos que eram 100% puros por clg. Uma segunda colheita de 3,65 g foi obtida pela adição de mais hexano ao filtrado. No total, foram obtidos 11,4 g (67%) de carboxilato de l-[(4-cianofenil)metil]-l-metoxicarbonil-2-oxociclohexano; pf 82-84°C. RMN. EM.

Sob uma cobertura de azoto, uma mistura de l-[(4-cianofenil) metil]-l-metoxicarbonil-2-oxociclohexanocarboxilato (7,6 g, 28 mmol), cianeto de sódio (2,1 g, 42 mmol) e DMSO (100 mL) foi aquecida a 115°C durante 1,5 horas. O progresso da reacção foi monitorado por clg. A reacção foi arrefecida e dividida entre água, EtOAc e salmoura. A camada orgânica foi lavada com água e seca (MgS04). Depois da concentração, foi obtido produto bruto na forma de um óleo castanho. A purificação por filtragem com tampão (200 g de gel de sílica, 15% de EtOAc/hexano) deu 3,3 g (55%) de produto na forma de um óleo incolor. RMN. EM. '

Preparação 5 4-[(2-oxociclo-hexil)metil]benzamida

O

Uma solução de DMSO (20 mL) do composto da Preparação 28 -24- (2,5 g, 11,7 mmol) foi arrefecida num banho de gelo. K2CO3 sólido (500 mg) foi adicionado seguido imediatamente por 30% de H2O2 (3 mL). Ao fim de 20 minutos, a CCF (3/7 EtOAc/hexano) demonstrou que permanecia um traço do material de partida. O banho de gelo foi removido e a reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A reacção foi diluída com 500 mL de água e o sólido branco foi recolhido e seco a fim de dar 2,44 g (90%) da amida desejada. O produto foi re-cristalizado a partir de 1/9 de EtOAc/hexano a fim de dar 2,02 g do produto do título na forma de cristais brancos, pf 167-170°C. RMN. EM.

Preparação 6

Acido 2-tetralona-6-carboxílico, cetal etilénico 6-bromo-2-tetralona (2,0 g, 8,89 mmol) foi dissolvida em tolueno (50 mL) e tratada com etilenoglicol em excesso (4,88 mL, 88,9 mmol) e ácido p-toluenossulfónico catalítico (15 mg). A solução foi agitada à temperatura de refluxo durante 16 horas, e a água foi removida da mistura reaccional usando um condensador Dean-Stark. Depois de arrefecer até à temperatura ambiente, a solução de tolueno foi lavada 2 x em NaOH IN, 1 x em água, 1 * em salmoura, seca sobre Na2S04 e concentrada in vacuo para dar 2,23 g (93%) de 6-bromo-2-tetralona, cetal etilénico na forma de um óleo castanho que foi usado sem mais purificações. 6-bromo-2-tetralona cetal etilénico (2,2 g, 8,15 mmol) foi dissolvido em THF anidro (30 mL), arrefecido até -78°C e tratado com terí-butil-lítio (12,05 mL, 20,4 mmol, 1,7 M em pentano) sob uma atmosfera de azoto. Depois de agitar durante 30 minutos, gás de dióxido de carbono anidro foi passado pela mistura reaccional durante 20 minutos a -78°C. A suspensão foi então deixada a aquecer até à temperatura ambiente. A solução foi terminada com -25- η /< S-- água e acidificada com IN HC1, depois extraída 2 x com EtOAc. Os extractos orgânicos foram lavados com salmoura, secos sobre Na2S04 e concentrados in vacuo até se obter um óleo castanho pálido. 0 resíduo oleoso foi aplicado a uma coluna de cromatografia "flash" de sílica e eluído com 30%-50% de EtOAc em hexanos para produzir 1,06 g (55%) de ácido 2-tetralona-6-carboxílico, cetal etilénico, um sólido de cristalização lenta. RMN. EM.

Preparação 7 2-tetralona-6-carboxamida

Ácido 2-tetralona-6-carboxílico, cetal etilénico (395 mg, 2,07 mmol) foi co-dissolvido em CH2CI2 (50 mL) com N-hidroxisucinimida (260 mg, 2,76 mmol) a 0°C e tratado com um ligeiro excesso de 1,3-diciclo-hexilcarbodi-imida (502 mg, 2,50 mmol). A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante 30 minutos, e durante este tempo formou-se um fino precipitado branco. Cloreto de amónio (333 mg, 6,23 mmol) e trietilamina (1,58 mL, 12,5 mmol, d=0,797) foram adicionados e a solução agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. Os sais e ureia suspensos foram retirados por filtragem e a solução concentrada in vacuo até se obter um óleo incolor. O óleo foi aplicado a uma coluna de cromatografia "flash" de sílica e eluído com 50-100% de EtOAc em hexanos para produzir 250 mg (64%) de 2-tetralona-6-carboxamida, cetal etilénico na forma de um sólido branco, puro por RMN, CCF. 2-tetralona-6-carboxamida, cetal etilénico (250 mg, 1,07 mmol) e ácido p-toluenossulfónico catalítico foram agitados em acetona (50 mL) à temperatura ambiente durante 48 horas. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo IriLurado em acetato de ctilo. Os sólidos foram filtrados, lavados e secos a fim de produzir 77,5 mg (38%) de 2-tetralona-6-carboxamida na forma de um pó branco e puro por RMN, CCF. EM.

Preparação 8 2-tetralona-6-morfolinamida

/

Acido 2-tetralona-6-carboxílico, cetal etilénico (395 mg, 2,07 mmol) foi co-dissolvido em CH2C12 (50 mL) ) com N-hidroxisucinimida (260 mg, 2,76 mmol) a 0°C e tratado com um ligeiro excesso de 1,3-diciclo-hexilcarbodi-imida (502 mg, 2,50 mmol). A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante 30 minutos, e durante este tempo formou-se um fino precipitado branco. Morfolina (0,91 mL, 10,4 mmol, d=0,998) foi adicionada e a solução agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A ureia suspensa foi retirada por filtragem e a solução concentrada in vacuo até se obter óleo incolor. O óleo foi aplicado a uma coluna de cromatografia "flash" de sílica e eluído com 50-100% de EtOAc em hexanos para produzir 323 mg (51%) de 2-tetralona-6-morfolinamida, cetal etilénico na forma de um sólido de cristalização lenta, puro por RMN, CCF. 2-tetralona-6-morfolinamida, cetal etilénico (323 mg, 1,06 mmol) e ácido p-toluenossulfónico catalítico foram agitados em acetona (50 mL) à temperatura ambiente durante 48 horas. A CCF indicou uma mistura de 2-tetralona-6-morfolinamida, cetal etilénico e produto desejado, e então a solução foi aquecida até a temperatura de refluxo durante 16 horas. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo aplicado a uma coluna de cromatografia "flash" de sílica e eluído com 50-100% de EtOAc em hexanos a fim de produzir 27 mg (10%) de 2-lelraloiia-C-morfolinamida, um sólido dc cristalização lenta, puro por RMN, CCF. EM.

Preparação 9 5- [2-fluoro-4-(2-metil-3 -oxobutil)-fenil]tetrazol

4-bromo-2-fluorobenzonitrilo (5,3 g, 26,5 mmol) e 3-metil-3-buten-2-ol (3,5 g, 40 mmol) foram dissolvidos em N-metilpirrolidinona (30 mL) e tratados com diacetato de paládio catalítico (115 mg, 0,5 mmol),tris-(o-tolil)-fosfína (300 mg, 1,0 mmol), e NaHC03 (2,7 g, 32 mmol). A mistura foi agitada a 120°C durante uma hora. A solução foi arrefecida até à temperatura ambiente e dividida entre H20/acetato de etilo, seca (MgS04) e concentrada in vacuo. O resíduo foi aplicado a uma coluna de cromatograíia de sílica e eluído com hexano/acetato de etilo na proporção de 4:1 a fim de produzir 2,3 g de um óleo amarelo pálido (43%). O óleo (1,3 g, 6,3 mmol) foi dissolvido em DMF (30 mL) e tratado com azida de sódio (455 mg, 7 mmol) e cloreto de amónio (375 mg, 7 mmol) e agitado a 90°C durante 16 horas. A mistura reaccional foi concentrada in vacuo e dividida entre 3N NaOH/éter dietílico. A camada aquosa foi acidificada com HC1 concentrado e arrefecida, e depois extraída com éter dietílico, seca (MgS04), e concentrada in vacuo até se obter um óleo castanho pálido. O resíduo foi aplicado a uma coluna de cromatografia de sílica e eluído com CHCL/MeOH/NFLOH na proporção de 25:5:1 a fim de produzir 140 mg de nm sólido branco (9%).

Preparação 10 5-(2-metil-3-oxobutil)-tiofeno-2-sulfonamida S02NH2 4-bromotiofeno-2-sulfonamida (5,2 g, 21,5 mmol) e 3-metil-3-buten-2-ol (2,8 g, 32,2 mmol) foram dissolvidos em N-metilpirrolidinona (40 mL) e tratados com diacetato de paládio catalítico (96 mg, 0,43 mmol), tris-(o-tolil)-fosfina (262 mg, 0,86 mmol), e NaHCCb (2,2 g, 25,8 mmol). A mistura foi agitada a 160°C durante 48 horas. A CCF indicou que a reacção estava cerca de 50% completa naquele momento. A solução foi arrefecida até à temperatura ambiente e dividida entre H20/acetato de etilo, seca (MgS04) e concentrada in vacuo até se obter um óleo castanho èscuro. O resíduo foi aplicado a uma coluna de cromatografia de sílica e eluído com hexano/acetato de etilo na proporção de 2:3 a fim de produzir 220 mg de um óleo castanho pálido (4,1%).

Preparação 11 4-(2-metil-3 -oxobutil)benzamida

4-bromobenzonitrilo (9,1 g, 50 mmol) e 3-metil-3-buten-2-ol (6,5 g, 75 mmol) foram dissolvidos em N-metilpirrolidinona (40 mL) e tratados com diacetato de paládio catalítico (225 mg, 1,0 mmol) ), tris-(o-tolil)-fosfina (610 mg, 2,0 mmol), e NaHC03 (5,0 g, 60 mmol). A mistura foi agitada a 120nC durante três horas. A solução foi arrefecida até à temperatura ambiente e dividida entre H20/acetato de etilo, seca (MgS04) e concentrada in vacuo. O resíduo foi aplicado a uma coluna de cromatografia de sílica e eluído com hexano/acetato de etilo na proporção de 3:1 a fim de produzir 6,2 g de um óleo amarelo pálido (66%). O óleo (4,6 g, 24,6 mmol) foi dissolvido em DMSO (20 mL) e tratado com K2COj (1,0 g) e H202 (6 mL, 30% p/p) e agitado a 0°C durante 10 minutos. A mistura rcaccional foi diluída com 500 mL de água e saturada com NaCl, e depois extraída com acetato de etilo. Os extractos orgânicos foram secos (MgS04), c concentrados in vacuo até se obter um sólido branco. O sólido foi re-cristalizado a partir de acetato de etilo/hexano na proporção de 1:1 a fim de produzir 3,22 g de um sólido branco (64%). P.F. 112-115.

Os compostos a seguir foram preparados de uma maneira análoga aos esquemas e/ou preparações descritas aqui ou através de técnicas compreendidas na técnica:

Rendi- Confirmado por Nome Estrutura p.f. mento RMN EM (4-(l-metil-3- oxobutil)fenil) metanonitrilo CN óleo 44% X X Preparação 12 4-(l-metil-3- oxobutil)benzamida Preparação 13 conHj 127-9 95% X X

4-(3 -oxociclo-hexil) benzonitrilo Preparação 14 O 0* O z 66-69 36% X X 4-(2-mctil-3-oxobutil) benzonitrilo Preparação 15 -Vo- CHa óleo 66% X X 4-(l,2-dimetil-3- oxobutil)bcnzamida Preparação 16 O CH, CH, 100-102 90% X X 4-(3-oxociclo-hexil) benzamida Preparação 17 HjNOC 188-91 42% X X 4-(3-oxociclopentil) benzamida Preparação 18 HjNOC— o 203-4 43% X X 4-( 1,1 -dimetil-3-oxobutil)benzamida Preparação 19 106-8 61% X X 4-(2- oxocicloheptilmetil) benzonitrilo Preparação 20 óleo 54% X X 4-(2,2-dimetil-3- oxobutil)benzonitrilo Preparação 21 ò(sO"CM óleo 72% X X -31 - -31 -

4-(2,2-dimetil-3-oxobutil)benzamida Preparação 22 OCO-00™* 127-131 62% X X 5-(2-metil-3- nxnhntil)hen7.amida Preparação 23 o óleo baixo X X 4-((2-oxocicloheptil) metil)bcnzamida Preparação 24 132-4 88% X X 4-((2-oxociclopentil) metil)benzonitrilo Preparação 25 tro. óleo 62% X X 4-((2-oxociclopentil) metil)benzamida Preparação 26 0 % CONH, 138-142 81% X X 4-((2-oxociclo-hexil) metil)benzonitrilo Preparação 27 Ó óleo 55% X X 4-((2-oxociclo-hexil) metil)benzamida Preparação 28 CONH, 167-70 90% X X 2-fluoro-4-(2-melil-3- oxobutil)benzonitrilo Preparação 29 F vtQ-™ 0 óleo 42% X X

-32- f /<*> ¥^·

2-fluoro-4-(2-metil-3- oxobutil)benzamida Preparação 30 F ^10-“™* o 112-15 93% X X 5-(2-metil-3-oxobutil)- 2-(morfolinossolfonil)- tiofeno Preparação 31 óleo 15% X X 3-metil-4-(2-metil-3- oxobutil)benzonitrilo Preparação 32 0 CH, p—f HjC óleo 64% X X (3-metil-4-(2-mctil-3-oxobutil) benzamida Preparação 33 O [ Y CONH, CH^/-' 105-7 71% X X ácido 4-(2-etil-3-oxobutil)benzóico Preparação 34 24% X X (2S)-3-amino-1 -(3- metilfenoxi)-2- propanol Preparação 35 H,C * \ ^ 158-62 baixo X X (2S)-3-amino-1 -(3- fluorotiofenil)-2- propanol Preparação 36 _/f OH Ο'νΛ/** 50-3 75% X X (2S)-3-amino-l-(3- fluorotiofenol)-2- propanol Preparação 37 Fy_ oh Os-a,mh· 115-19 45% X X (2 S)-3 -amino-1 -(4- fluorotiofenol)-2- propanol Preparação 38 OH F"\y"s^v/NHj 67-70 44% X X -33-

(2 S)-3 -amino-1 -(3-hidroxitiofenol)-2-propanol Preparação 39 HO\_ OH HCI óleo 15% X X (2S)-3-amino-l-(3-di fluorometilfenoxi)-2-propanol Preparação 40 OH HCI 79-83 72% X X (2S)-3-amino-l-(3- hidroxi-6-etilfenoxi)-2- propanol Preparação 41 HO>=v °H higroscó pico 60% X

Exemplo 1

Foi preparada uma grade de 5*8 frascos de tampa de rosca de 4 mL. A cada uma das 8 fileiras de frascos da grade foram adicionados 33 pmol de cetona (das preparações 4-34, ou comercialmente disponível), uma cetona por fileira, como solução de reserva em metanol (0,5 M, 65 μΐ). Usou-se acetonitrilo/metanol ou DMF sempre que a solubilidade constituiu um problema. A cada coluna de frascos da grade foram adicionados 50 pmol de hidrocloreto de amina, um hidrocloreto de amina (ou amina) (das preparações 2, 3, 36-41 ou comercialmente disponível) por coluna, como solução de reserva em metanol (0,5 M, 100 μΐ). A cada frasco foi então adicionada resina VIII (18-20 mg), 1,01 meq/g, 70-90 peq de base). Foram então colocadas em cada frasco tampas revestidas de Teflon. As soluções foram então agitadas durante 24 horas, altura em que cada frasco foi tratado com aproximadamente 30 mg (2,5 mmol BH4-/g de resina, 75 pmol) de resina de boro-hidreto Amberlite IRA400 (Aldrich Chemical). As tampas foram recolocadas, e os frascos foram agitados durante mais 24 horas, depois foram adicionados aos frascos 150 μΐ de cloreto de mctilcno c 40 mg (1 mmol/g dc resina, 0,4 mmol) de resina de benzaldeído ligada com poliestireno (Frechet, J.M.; Sehuereh, C.J. Am. Cliem. Soe. 1971, 93, 492) a fim de limpar o excesso de material de partida de amina primária, e a solução foi agitada durante 1 dia. Cada frasco foi então filtrado através de um tampão de algodão. A resina residual foi enxaguada com três pequenas porções de metanol (aproximadamente 200 μΐ). As soluções resultantes foram então tratadas com 20 μΐ de HC1 concentrado (120 μιηοΐ) a fim de assegurar a formação do sal de HC1 do produto amina, depois cada frasco foi diluído até um volume de aproximadamente 4 mL, e 1 mL de cada solução foi transferido para um frasco com tampa de rosca, tarado, de 4 mL. Esta solução foi deixada a evaporar numa redoma sob uma corrente de ar até estar seca, depois colocada num fomo a vácuo durante 24 horas à temperatura ambiente. Os resíduos resultantes foram então pesados e directamente submetido a testes sem mais purificações. A maior parte do material (75%) foi evaporada de forma similar.

As matrizes a seguir listam exemplos adicionais de 2-81. Estes compostos foram preparados usando técnicas combinatórias/paralelas de acordo com a presente invenção. Todas as condições de reacção foram as mesmas de placa para placa e em substancial conformidade com o Esquema 2 e Exemplo 1. A armação para cada placa foi o mesmo e está representado no canto superior da matriz 5x8. Os grupos funcionais variáveis estão ilustrados nas fileiras e colunas. As cetonas e amidas representadas em cada placa foram preparadas de acordo com os esquemas e preparações descritas aqui ou através de técnicas conhecidas na técnica.

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Como observado anteriormente, os compostos da presente invenção são potentes agonistas selectivos de receptores adrenérgicos β3. Esta actividade farmacológica foi determinada no ensaio funcional de agonista β3.

Ensaio Funcional de Agonistas B3

Linhas Celulares O ADN 1ιβ2 foi expresso a partir de um plasmídeo 57537 obtido da American Type Culture Collection. Os receptores adrenérgicos Ιιβΐ e 1ιβ3 foram clonados a partir de bibliotecas genómicas humanas usando o método de reacção em cadeia de polimerase com sondas degeneradas. Foram clonados receptores de comprimento integral, expressos e sequenciados a fim de verificar a identidade de acordo com sequências publicadas (Ιιβΐ: T. Frielle et al. (1993) Molecular Pharmacology 44: 264-270). Estes receptores foram então expressos na variante DXB-11 de células CHO usando um vector que restaura a reductase do tetra-hidrofolato e a resistência da higromicina. O receptor β3 de ratazana que expressa a linha celular CHO é conhecido na técnica. Mol. Pharm.. Vol 40, pp 895-99 (1991). Células CHO foram cultivadas em FBS. dializado a 10%/DMEM de alto teor em glicose/prolina a 0,1%.

Ensaio de cAMP

Membranas celulares foram colhidas a partir das linha celulares anteriores usando Hepes hipotónico 25 mM (pH 7,4), EDTA lmM, 20 pg/mL de leupeptina, tamponizante PMSF lmM com raspagem seguido de centrifugação diferencial. As membranas foram incubadas em Tris 25 mM (pH 7,6), 0,2% de BSA, Mg 2,6 mM, ATP 0,8 mM, GTP 0,1 mM, fosfato de creatina 5 mM, creatina cinase 50 U/mL, IBMX 0,2 mM a 32°C. Foram adicionados agonistas c a incubação prosseguiu durante 15 min. O cAMP produzido foi ensaiado usando um método de imuno-ensaio de detector de fluorescência.

Os ensaios de células intactas foram realizados usando células suspensas removidas de frascos de cultura por tratamento com tripsina. As cclulas foram pré-incubadas com IBMX 0,5 mM a 37°C. Foram adicionados agonistas e a incubação prosseguiu durante 15 min. A incubação foi terminada aquecendo a suspensão em água a ferver. O cAMP e o cGMP nestas incubações e nas incubações da planta da pé foram ensaiados por RIA (Amersham).

Os compostos da invenção são agonistas do receptor β3. O Isoproterenol é aceite na técnica como um agonista não-selectivo β3 e é largamente utilizado como um comparador na avaliação da actividade de compostos. A esse respeito ver Trends in Pharm. Sei. 15: 3 (1994). No ensaio Funcional de Agonista β3, os compostos demonstraram pelo menos 30%, preferencialmente 50% e o mais preferencialmente mais de 85% de resposta do isoproterenol numa única dose de 50 pmol. As titulações de resposta da dose sobre os agonistas descritos revelam valores de EC50 de < 10 μΜ, preferencialmente de < 1 mM. No ensaio funcional, a titulação da dose fornece um EC50 para o isoproterenol de 1,1 ±0,5 mM.

Quando protegidas contra os receptores βΐ e β2 no ensaio funcional, as experiências de titulação da dose indicam que com os compostos da invenção se observa uma estimulação do receptor grandemente reduzida ou nula. Tal é definido através da medição da actividade intrínseca (máxima resposta alcançada) quando em comparação com o isoproterenol. Os compostos de Fórmula I reivindicados são agonistas selectivos do receptor β3 e têm uma actividade intrínseca de < 3% da resposta do isoproterenol.

Deste modo, os compostos da invenção são agonistas selectivos do receptor adrenérgico β3.

Como agonistas de β3, os compostos são úteis no tratamento de estados num mamífero nas quais o receptor β3 tenha demonstrado desempenhar um papel importante. O mamífero preferido para tratamento é um ser humano. A relação entre a modulação do receptor β3 e o tratamento de enfermidades tais como a diabetes do Tipo II e a obesidade, está bem definida na técnica. Outros estados reconhecidos na técnica incluem: asma, depressão e distúrbios gastrointestinais tais como a motilidade gastro-intestinal. Deste modo, os compostos presentes são úteis no tratamento da doença do intestino inflamatório (doença de Crohn ou colite ulcerativa), síndroma do intestino irritável, síndroma de descarga de diarreia não-específica, asma, e depressão.

No tratamento de mamíferos não-humanos, os compostos da presente invenção são úteis para aumentar o ganho de peso e/ou melhorar a eficiência da utilização de alimento e/ou aumentar massa corporal magra e/ou diminuir a taxa de mortalidade de nascimento e aumentar a taxa de sobrevivência pós-natal/natal.

Os compostos de Fórmula I são preferencialmente formulados antes da administração. Portanto, mais outra forma de realização da presente invenção é uma formulação farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, diluentes ou excipientes.

As presente formulações farmacêuticas são preparadas por procedimentos conhecidos usando ingredientes bem conhecidos e prontamente disponíveis. Na confecção das composições da presente invenção, o ingrediente activo de um modo geral será misturado com um veículo, ou diluído por um veículo, ou encerrado dentro de um veículo que pode ser na forma de uma cápsula, saqueta, papel ou outro recipiente. Quando o veículo serve como diluente, este pode ser um material sólido, semi-sólido ou líquido que actua como veículo, excipiente ou meio para o ingrediente activo. Deste modo, as composições podem ser na forma de comprimidos, pílulas, pós, pastilhas, saqueias, hóstias, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, aerossóis (como um sólido ou num meio líquido), cápsulas de gelatina mole ou dura, supositórios, soluções injectáveis estéreis, e pós embalados estéreis.

Alguns exemplos de veículos adequados, excipientes e diluentes incluem lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma de acácia, fosfato de cálcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de cálcio, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, xarope de água, metilcelulose, metilo e propilhidroxibenzoatos, talco, estearato de magnésio e óleo mineral. As formulações podem incluir adicionalmente agentes lubrificantes, agentes molhantes, agentes emulsionantes e de suspensão, agentes conservantes, agentes edulcorantes ou agentes aromatizantes. As composições da invenção podem ser formuladas de modo a fornecer libertação rápida, sustentada ou retardada do ingrediente activo após a administração ao paciente.

As composições são formuladas preferencialmente numa forma de dosagem unitária, cada dosagem contendo de cerca de 0,1 a cerca de 500 mg, preferencialmente de cerca de 5 a cerca de 200 mg, do ingrediente activo. No entanto, será compreendido que a dosagem terapêutica administrada será determinada pelo médico à luz das circunstâncias relevantes incluindo o estado a ser tratado, a escolha do composto a ser administrado e a via de administração -41 - escolhida, e portanto, as variações de dosagens acima não pretendem de modo algum limitar o âmbito da invenção. Os compostos podem ser administrados através de uma variedade de vias incluindo as vias oral, rectal, transdérmica, subcutânea, tópica, intravenosa, intramuscular ou intranasal. Para todas as indicações, uma dose diária típica conterá de cerca de 0,05 mg/kg a cerca de 20 mg/kg do composto activo desta invenção. As doses diárias preferidas serão de cerca de 0,1 a cerca de 10 mg/kg, de forma ideal de cerca de 0,1 a cerca de 5 φ mg/kg. No entanto, para administração tópica uma dosagem típica é de cerca de 1 a cerca de 500 pg de composto por cm2 de um tecido afectado. Preferencialmente, a quantidade de composto aplicado irá variar de cerca de 30 a cerca de 300 pg/cm2, mais preferencialmente, de cerca de 50 a cerca de 200 pg/cm2, e o mais preferencialmente, de cerca de 60 a cerca de 100 pg/cm2. O exemplo de formulação a seguir é apenas ilustrativo, e não pretende, de modo algum, limitar o âmbito da invenção

Formulação 1 Cápsulas de gelatina dura são preparadas usando os ingredientes a seguir:

Quantidade (mg/cápsula) 4-{3-[2-hidroxi-3-(3-hidroxifeniloxi)- propilamino]-2-metilbutil}benzamida 25 amido, seco 425 estearato de magnésio 10

Total 460 mg

Os ingredientes anteriores são misturados e colocados dentro de cápsulas de gelatina dura em quantidades de 460 mg.

Os princípios, formas de realização preferidas e modos de operação da presente invenção foram descritos na especificação anterior. A invenção que pretende ser aqui protegida, no entanto, não se destina a ser interpretada como limitada às formas específicas descritas, uma vez que estas são consideradas como ilustrativas e não restritivas. Variações e alterações podem ser feitas pelos especialistas na matéria sem se afastarem do espírito da invenção.

Lisboa, 12 de Setembro de 2001

1-^ J

ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industria) RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims (10)

1. REIVINDICAÇÕES

   em que: R, é OH, halo, S02NHR2, C02R2, CONHR2, NHCOR2, -NH (arilo substituído opcionalmente), CF3, ou CF2H; Ri- é H, halo, alquilo Ci - C4, OH, S02NHR2, C02R2, CONHR2, NHCOR2, CF3 ou CF2H; R2 é H, alquilo Q - C4, ou arilo; R3 é H ou alquilo Ci - C4; é uma unidade seleccionada do grupo consistindo em:

   R5 e R<> são independentemente alquilo Ci - C4; R7 é um heterociclo substituído opcionalmente ou um grupo seleccionado do grupo consistindo em:

   ο

   ΝΗ ΝΗ ο ^7*·

   Rg é independentemente Η, halo ou alquilo Ci-C4; R9 é halo, CN, ORi0, alquilo Ci - C4> haloalquilo Cj - C4, CO2R2, CONRnR12, CONH (alquilo Ci - C4 ou alcoxi Q - C4), SR2, CSNR2, CSNRnR12, S02R2, S02NRnRi2, SOR2, NR„Ri2, arilo, heterociclo, arilo substituído opcionalmente, heterocliclo substituído opcionalmente, ou alquilo Cj - C4, ou alcenilo C2 - C4 substituído opcionalmente por CN; R10 é independentemente alquilo Ci - C4, haloalquilo Ci - C4, cicloalquilo (CH2)nC3 - Cg, arilo (CH2)n, heterociclo (CH2)„, cicloalquilo C3 - Cg substituído opcionalmente por (CH2)n, arilo substituído opcionalmente por (CH2)n, ou heterociclo substituído opcionalmente por (CH2)n; Rn e Rj2 são independentemente H, alquilo Ci - C4, ou são combinados com o azoto ao qual cada um está ligado a fim de formar morfolinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, ou piperazinilo; X] é O ou S; X2 é ausente ou um alquileno linear ou ramificado de 1 a 5 carbonos; m é 0 ou 1; n é 0, 1, 2, ou 3; o é 1, 2, 3,4, 5, ou 6; ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.
2. 2. Um composto da Reivindicação 1 em que R] é halo, CF3, CONHR2, ou NH (arilo substituído opcionalmente); e R4 é
3. 3. Um composto da Reivindicação 2 em que R7 é

   e Rg é halo, CN, ORjo, CO2R2, CONRuRi2, SR2, S02R2» SO2NR11R12, SOR2 ou NRnR12.
4. 4. Um composto da reivindicação 3 em que R7 é

   Rg é halo, CN, CO2R2, ou ORi0.
5. 5. Um composto de qualquer uma das Reivindicações 1 até 4 para utilização como um fármaco. -4-
6. 6. Um composto como reivindicado na Reivindicação 5 para utilização no tratamento da diabetes do Tipo II.
7. 7. Um composto como reivindicado na Reivindicação 5 para utilização no tratamento da obesidade.
8. 8. Um composto como reivindicado na Reivindicação 5 para utilização da agonização do receptor β3.
9. 9. Uma formulação farmacêutica compreendendo como ingrediente activo um composto de qualquer uma das Reivindicações 1 até 4, associada com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, excipientes ou diluentcs.
10. 10. Um processo de preparação de um composto de Fórmula I que compreende: No passo 1, reacção de um epóxido da fórmula:

    com uma amina de fórmula (B): (II) -5- R< (III); e no passo 2, reacção do produto do passo 1 a fim de formar um sal de adição de ácido. Lisboa, 12 de Setembro de 2001 <—U | ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA