PT1663287E - Utilização de ciclosporinas modificadas para o tratamento de doenças por vhc - Google Patents

Description

ΡΕ1663287 1

DESCRIÇÃO

"UTILIZAÇÃO DE CICLOSPORINAS MODIFICADAS PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS POR VHC" A presente invenção relaciona-se com uma nova utilização para ciclosporinas não imunossupressoras.

As ciclosporinas constituem uma classe de undeca-péptidos poli-N-metilados, cíclicos, estruturalmente carac-terísticos, que normalmente têm actividade farmacológica, em especial imunossupressora ou anti-inflamatória. A primeira das ciclosporinas a ser isolada foi o metabolito fúngico de ocorrência natural Ciclosporina ou Ciclospo-rinae, também conhecido como ciclosporina A.

Está bem estabelecido que a ciclosporina A actua interferindo com o processo de activação das células T por bloqueamento da iniciação da transcrição de IL-2. Demonstrou-se que a ciclosporina A forma um complexo com uma proteína citossólica de 17kD chamada ciclofilina, que ocorre em muitos tipos de células e que se demonstrou ser idêntica a peptidil-prolil cis-trans isomerase, uma enzima envolvida na dobragem de proteínas.

Contudo, verificou-se que a ligação a ciclofilina é um critério necessário mas não suficiente para actividade 2 ΡΕ1663287 imunossupressora. 0 complexo de ciclosporina A/ciclofilina também se pode associar à proteína celular designada calci-neurina (CN) que pertence à superfamília das fosfatases. Esta ligação anula a sua actividade de fosfatase, resultando no silenciamento do factor de transcrição NF-AT. A inibição da via de CN/NF-AT é o mecanismo essencial para a imunossupressão mediada por ciclosporina A.

Foram identificadas ciclosporinas que se ligam fortemente a ciclofilina mas não são imunossupressoras. Uma ciclosporina é considerada como sendo não imunossupressora quando tem uma actividade na reacção linfocitária mista ("Mixed Lymphocyte Reaction", MLR) não superior a 5%, de preferência não superior a 2%, da de ciclosporina A. A reacção linfocitária mista está descrita por T. Meo em "Immunological Methods", L. Lefkovits e B. Peris, Eds.,

Academic Press, N. Y. páginas 227-239 (1979). Células de 6 baço (0,5 x 10 ) de murganhos Balb/c (fêmeas, 8-10 semanas) são co-incubadas durante 5 dias com 0,5 x 106 células de baço de murganhos (fêmeas, 8-10 semanas) irradiadas (2000 rads) ou tratadas com mitomicina C. As células alogénicas irradiadas induzem uma resposta proliferativa nas células de baço de Balb C que pode ser medida por incorporação de precursor marcado no ADN. Uma vez que a células estimuladoras são irradiadas (ou tratadas com mitomicina C) não respondem às células Balb/c com proliferação mas retêm as sua antigenicidade. A IC50 encontrada para o composto de teste na MLR é comparada com a determinada para a ciclosporina A numa experiência em paralelo. Além disso, as 3 ΡΕ1663287 ciclosporinas não imunossupressoras estão desprovidas da capacidade de inibir CN e a via NF-AT a jusante. EP 0 484 281 AI descreve a utilização de ciclosporinas não imunossupressoras no tratamento de SIDA ou de doenças relacionadas com SIDA.

Surpreendentemente verificou-se agora que as ciclosporinas de ligação à ciclofilina não imunossupressoras têm um efeito inibidor no virus da hepatite C (VHC). A infecção persistente por VHC, que foi identificada como o principal agente causal de hepatite não A e não B foi considerada como relacionada de perto com doenças hepáticas tais como hepatite crónica, cirrose hepática ou carcinoma hepatocelular. 0 desenvolvimento destas doenças hepáticas é um dos principais problemas de saúde pública. A terapêutica anti-VHC eficaz está limitada à terapêutica com interferão ou uma associação de interferão e ribavirina. Contudo, uma vez que o vírus não é eliminado de cerca de metade dos doentes com VHC tratados com estes agentes conhecidos, há ainda uma forte necessidade de agentes anti-VHC alternativos.

Consequentemente, a presente invenção proporciona a utilização de uma ciclosporina de ligação à ciclofilina não imunossupressora na prevenção ou tratamento de infecções da hepatite C ou doenças induzidas pelo VHC. 4 ΡΕ1663287

As infecções da hepatite C ou doenças induzidas pelo VHC são e.g. hepatite crónica, cirrose hepática ou cancro do fígado, e.g. carcinoma hepatocelular. As ciclos-porinas de ligação à ciclofilina não imunossupressoras também podem ser utilizadas por exemplo como um tratamento profiláctico de recém-nascidos de mães infectadas por VHC ou de prestadores de cuidados de saúde expostos ao vírus, ou de receptores de transplantes, e.g. receptores de transplantes de orgãos ou tecidos, e.g. transplante de fígado, para eliminar possível infecção recorrente por VHC após a transplantação.

Uma ciclosporina é considerada como sendo de ligação à ciclofilina se se liga a ciclofilina recombinante humana pelo menos um quinto tão bem quanto a ciclosporina A num ensaio ELISA competitivo descrito por Quesniaux em Eur. J. Immunol. 1987 17 1359-1365. Neste ensaio, a ciclosporina a ser testada é adicionada durante a incubação de ciclofilina com ciclosporina A revestida com BSA A e é calculada a concentração necessária para produzir uma inibição de 50% da reacção de controlo sem competidor (IC50). Os resultados são expressos como a Razão de Ligação ("Binding Ratio", BR) , que é o log na base 10 da razão da IC50 do composto de teste e da IC50 num ensaio simultâneo da própria ciclosporina A. Assim uma BR de 1,0 indica que o composto de teste se liga à ciclofilina humana menos bem por um factor de dez do que a ciclosporina A, e um valor negativo indica ligação mais forte do que a da ciclosporina A. As ciclosporinas activas contra VHC têm uma BR inferior a 0,7, de preferência igual ou inferior a zero. 5 ΡΕ1663287

Exemplos de ciclosporinas de ligação à ciclofilina não imunossupressoras incluem e.g. compostos de Fórmula Ia la VF-Xr—- 8!*-—;Y*~—Z—- —— Wa^JAla-MeLetí-MeLett^ílAeVal"-^ 13 3 4 3 6 t 8 * 10 11 em que W' é MeBmt, di-hidro-MeBmt ou 8'-hidroxi-MeBmt; X é aAbu, Vai, Thr, Nva ou O-metil treonina (MeOThr); R' é Sar, (D)-MeSer, (D)-MeAla, ou (D)-MeSer(Oace- til) ; Y' é MeLeu, γ-hidroxi-MeLeu, MeVal, MeThr, MeAla, Mealle ou MeaThr, N-etilVal, N-ethillle, N-etilThr, N-etilPhe, N-etilTyr ou N-etilThr(O-acetil) Z é Vai, Leu, MeVal ou MeLeu; e Q' é MeLeu, γ-hidroxi-MeLeu ou MeAla.

Os grupos W', X, Y', Z, Q' e R' têm, independentemente, os seguintes significados preferidos: W' é de preferência W" em que W" é MeBmt ou di-hidro-MeBmt; X é de preferência X' em que X' é aAbu ou Nva, mais preferencialmente X" em que X" é aAbu; 6 ΡΕ1663287 R' é de preferência R" em que R" é Sar; Y' é de preferência Y" em que Y" é a-hidroxi-MeLeu, MeVal, MeThr, N-etillle ou N-etilVal; Z é de preferência Z' em que Z' é Vai ou MeVal; e Q' é de preferência Q" em que Q" é MeLeu;

Exemplos de compostos preferidos de Fórmula la são e.g. : 4 a) [di-hidro-MeBmt] ' - [γ-hidroxi-MeLeu] -Ciclosporina; BR* = 0,1; IR<1% b) [MeVal]1-Ciclosporina; BR = 0,1; IR<1% 4 c) [Melle] -Ciclosporina; BR = -0,2; IR<1% (exemplo de referência) 1 d) [MeThr] -Ciclosporina; e) [γ-hidroxi-MeLeu]1-Ciclosporina; BR = 0,4; IR<1% f) [Etil-Ile]1-Ciclosporina; BR = 0,1; IR<2% g) [Etil-Val]1-Ciclosporina; BR = 0; IR<2% 7 ΡΕ1663287 2 4 h) [Nva] -[γ -hidroxi-MeLeu] -Ciclosporina; 4 6 i) [γ-hidroxi-MeLeu] -[γ-hidroxi-MeLeu] -Ciclospori-na; j) [MeVal]5-Ciclosporina; BR = 0,4; IR = 5,3% k) [MeOThr]2-[(D)MeAla]3-[MeVal]5-Ciclosporina; j) [8'-hidroxi-MeBmt]'-Ciclosporina; BR = 0,35; IR= 1,8% k) [MeAla]^-Ciclosporina; BR = -0,4; IR = 3,2 9 l) [γ-hidroxi-MeLeu] -Ciclosporina; BR = 0,15; IR = 2,9 (exemplo de referência) IR = Razão Imunossupressora, expressa como uma percentagem da actividade em relação à Ciclosporina A.

Os compostos de fórmula I, Ia ou II podem ser obtidos de diversas maneiras, que podem ser classificadas como: 1) Fermentação 2) Biotransformação 3) Derivatização 4) Sintese parcial 5) Sintese total tal como descrito e.g. no EP 0484281 AI ou WO 00/01715. ΡΕ1663287

Além disso, descreve-se o seguinte: 1.1 Um método para prevenção ou tratamento de infecções de Hepatite C ou doenças induzidas por VHC num indivíduo dele necessitado, compreendendo a administração ao referido indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma ciclosporina de ligação à ciclofilina não imunossupressora, e.g. um composto de fórmula Ia.

De acordo com a invenção, a ciclosporina de ligação à ciclofilina não imunossupressora pode ser administrada numa quantidade eficaz para aliviar ou eliminar um ou mais dos sinais ou sintomas de hepatite C, por exemplo, eficaz para baixar o ARN de VHC medido numa amostra de soro de um indivíduo. 1.2 Um método para inibição da replicação de VHC num meio, compreendendo a aplicação neste meio de uma quantidade eficaz de uma ciclosporina de ligação à ciclofilina não imunossupressora, e.g. um composto de fórmula Ia. 1.3 Um método para inibição da replicação de VHC num doente dele necessitado, compreendendo a administração a este indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma ciclosporina de ligação à ciclofilina não imunossupressora, e.g. um composto de fórmula Ia. 9 ΡΕ1663287 1.4 Um método para prevenção da recorrência de infecção por VHC num receptor de transplante dele necessitado, compreendendo a administração ao referido receptor de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma ciclosporina de ligação à ciclofilina não imunossupressora, e.g. um composto de fórmula Ia. 2. Utilização de uma ciclosporina de ligação à ciclofilina não imunossupressora, e.g. um composto de fórmula Ia, na preparação de uma composição farmacêutica para utilização em qualquer dos método definidos acima. 3. Uma composição farmacêutica para utilização em qualquer dos métodos definidos acima, compreendendo uma ciclosporina de ligação à ciclofilina não imunossupressora, e.g. um composto de fórmula Ia, conjuntamente com um ou mais diluentes ou veículos farmacêuticos aceitáveis. A utilidade de ciclosporinas de ligação à ciclofilina não imunossupressoras (daqui em diante "ciclosporinas da invenção") no tratamento de doenças e patologias tal como aqui especificado acima pode ser demonstrada em ensaios normalizados em animais ou clínicos, e.g. de acordo com os métodos aqui descritos a seguir. 10 ΡΕ1663287 A. In vitro

Cultura de células: células Huh-7 e MH-14, células com replicão de VHC, são cultivadas em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) com soro fetal de bovino a 10% (FBS). Células PH5CH8 são cultivadas numa Mistura 1:1 de DMEM e meio F12 suplementado com 100 ng/mL de factor de crescimento da epiderme, 10 μ/mL de insulina, 0,36 pg/mL de hidrocortisona, 5 pg/mL de transferrina, 5 pg/mL de ácido linoleico, 20 ng/mL de selénio, 4 pg/mL de glucagon, 10 ng/mL de prolactina, 10 pg/mL de gentamicina, 200 pg/mL de kanamicina e FBS a 2%.

Análise por imunotransferência: A análise de imuno-transferência é realizada tal como descrito por K. Watashi et al., Virology 2001, 286, 391-402. Os anticorpos primários utilizados nesta experiência são anticorpos anti-NS5A, anti-NS5B e anti-p-actina (Sigma).

Análise por imunofluorescência indirecta: A análise por imunofluorescência indirecta é realizada tal como descrito por K. Watashi, supra. Os anticorpos primários utilizados nesta experiência são anticorpos anti-NS5A e anti-PDI (StressGen).

Análise por transcrição reversa (RT)-reacção em cadeia de polimerase (PCR) O ARN total de células cultivadas é isolado com Sepasol-RNA I Super (nacalai tesgue) tal como recomendado 11 ΡΕ1663287 pelo fabricante. A análise por RT-PCR é realizada utilizando um estojo ("kit") de ARN PCR (Takara) de acordo com as instruções do fabricante. Os iniciadores utilizados para detecção de mARNs para 2',5'-oligoadenilato sintetase proteína quinase dependente de ARN de cadeia dupla são 5'-ccgtgaagtttgaggtccag-3',5'-gactaattccaagaccgtccg-3' e 5'- TGGCCGCTAAACTTGCATATC-3' , 5 '-GCGAGTGTGCTGGTCACTAAAG-3', respectivamente.

Análise por transferência de Northern: A análise por transferência de Northern é realizada tal como descrito por H. Kishine et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 2002, 47, 119-125. A sonda complementar da sequência NS5B utilizada nesta experiência está descrita por H. Kishine, supra.

Análise por RT-PCR em tempo real: A 5'-UTR do ARN de genoma de VHC é quantificada utilizando o detector de sequências ABI PRISM 7700 (Applied Biosystems) tal como descrito por T. Takeuchi et al., Gastroenterology, 1999, 116, 636-642. Os iniciadores directo e reverso utilizados nesta experiência são 5'-CGGGAGAGCCATAGTGG-3' e 5'-AGTACCA-CAAGGCCTTTCG-3', respectivamente. A sonda fluorogénica é 5'-CTGCGGAACCGGTGAGTACAC-3'. Como controlo interno, o ARN ribossomal também é quantificado utilizando reagentes de controlo de ARN ribossomal TaqMan (Applied Biosystems).

Experiência de infecção com VHC in vítro: A experiência de infecção com VHC in vitro é realizada essencialmente tal como descrito por N. Kato et al., Jpn. 12 ΡΕ1663287 J. Câncer Res. 1996, 87, 787-792 e M. Ikada et al., Virus

Res., 1998, 56,157-167. Células PH5CH8 (1 X 105) são 4 5 infectadas com o plasma 1B-2 (equivalente a 10 a 10 cópias de ARN de VHC), que é preparado a partir de um doador de sangue positivo a VHC. Às 24 h pós-inoculação, as células são lavadas três vezes com soro fisiológico tamponado com fosfato (PBS) e mantidas com meio fresco.

Ensaio de transfecção e repórter: A transfecção para células MH-14 e H9 é realizada utilizando FuGENE 6 (Roche) e reagente de transfecção Lipofectamine 2000 (Invitrogen), respectivamente, de acordo com o protocolo do fabricante. O ensaio repórter é realizado tal como descrito por K. Watashi, supra. Os plasmideos repórteres utilizados neste estudo são pNFAT-Luc, pAPl-Luc, pNFKB-Luc (PathDetect Repórter System; Stratagene), e pRL-TK (estojo ("kit") de ensaio de luciferase "Dual-luciferase repórter assay System"; Promega). O efeito de várias ciclosporinas da invenção na replicação do genoma de VHC utilizando células MH-14, em que o replicão subgenómico de VHC ilustrado na Fig. IA é replicado autonomamente. O tratamento com uma ciclosporina 4 da invenção, e.g. [Melle] -ciclosporina, e.g. a 1 pg/mL, bem como 100 U/mL de IFNa que é utilizada como um controlo positivo durante 7 dias diminui a quantidade de proteínas NS5A e NS5B de VCH a níveis indetectáveis por análise por imunotransferência. A análise por imunofluorescência indirecta mostrou que a produção de proteína NS5A está reduzida em todas as células tratadas com 1 pg/mL de 13 ΡΕ1663287 ciclosporina da invenção, enquanto que o nível de proteína dissulfureto isomerase (PDI), que é um marcador do retículo endoplasmático, como um controlo interno, não é alterado nestas condições. As ciclosporinas da invenção diminuem neste ensaio de expressão de proteínas de VHC em células com replicão de VHC. 0 ARN de replicão é analisado em células MH-14 tratadas com ou sem uma ciclosporina da invenção ou IFNa durante 7 dias por análise por imunotransferência de

Northern. O tratamento com e.g. 1 yg/mL de ciclosporina da 4 invenção, e.g. [Melle] -ciclosporina, diminui a quantidade de ARN de replicação a um nível indetectável. O tratamento com 100 U/mL de IFNa produz um efeito semelhante. Além disso o título é gradualmente diminuído e o nível de ARN de VHC é reduzida para cerca de 1/400 do original ao 7o dia. No caso de um co-tratamento com IFNa, uma redução adicional em qualquer ponto de tempo examinado (3o, 5o e 7o dia) em comparação com o tratamento único com ciclosporina ou IFNa: o nível do RNA de replicação em células MH-14 tratadas com a ciclosporina e IFNa durante 7 dias está significativamente diminuído em relação às células tratadas só com IFNa.

Além disso, células PH5CH8 (linha celular de hepatócitos não neoplásicos) são tratadas com plasma positivo a VHC e subsequentemente o título do genoma do ARN de VHC é quantificado em vários pontos de tempo pós-inoculação por análise por RT-PCR em tempo real. Enquanto que o título do genoma do ARN de VHC RNA ao 5o dia pós- 14 ΡΕ1663287 inoculação nas células está aumentado cerca de 10 vezes em comparação com o do Io dia, não se observou um aumento significativo do titulo do genoma do ARN de VHC nestes pontos de tempo nas células tratadas continuamente com uma 4 ciclosporma da invenção, e.g. [Melle] -ciclosponna, ou IFNa. As ciclosporinas da invenção inibem a replicação de hepatócitos de cultura infectados com VHC.

Os resultados estão apresentados na Fig. 2E, 2F e 2G: análise por imunotransferência (2E), análise por imunofluorescência indirecta (2F) e análise por RT-PCR em tempo real (2G) são realizadas utilizando células MH-14 4 tratadas com [Melle] -Ciclosponna (·) ou uma ciclosporina de não ligação à ciclofilina (), e.g. 6-[ácido [R-(E)]- 6, 7-didesidro-N,4-dimetil-3-oxo-L-2-aminooctanóico]-7-L- valino-ciclosporina A. Controlo em 2E e 2F (15a fila), sem 4 tratamento; CysA em 2E, 1 pg/mL; [Melle] -Ciclosporina em 2E () e 2F (), 1 pg/mL; a ciclosporina de não ligação à ciclofilina em 2E (·) e 2F (·) , 1 pg/mL. B. Ensaio clinico

Um total de 15 doentes com infecçâo de hepatite C crónica são incluídos num estudo de 2 semanas. Cada doente , 4 recebe um composto de formula I, e.g. [Melle] -ciclosporina, numa dose de 7 a 15 mg/kg p.o. Os níveis séricos de antigénios da hepatite C são determinados no dia 0 e no dia 14 em cada doente. 15 ΡΕ1663287

Uma pessoa que sofre de infecção de hepatite C, em particular infecção crónica por VHC, pode apresentar um ou mais dos seguintes sinais ou sintomas: (a) ALT elevada, (b) teste positivo para anticorpos anti-VHC, (c) presença de VHC demonstrada por um teste positivo para ARN de VHC, (d) estigmas clínicos de doença hepática crónica, (e) lesão hepatocelular. Esses critérios podem não só ser utilizados para diagnosticar hepatite C, mas podem também ser utilizados para avaliar a resposta de um doente a tratamento farmacológico.

Sabe-se que níveis séricos elevados de alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST) ocorrem na hepatite C não controlada, e uma resposta completa a tratamento é geralmente definida como a normalização destas enzimas séricas, particularmente ALT (Davis et ai., 1989, New Eng. J. Med. 321: 1501-1506). ALT é uma enzima libertada quando células hepáticas são destruídas e é sintomática de infecção por VHC.

De modo a acompanhar o curso da replicação do VHC em indivíduos em resposta a tratamento farmacológico, o ARN de VHC pode ser determinado em amostras de soro, por exemplo, por ensaio com reacção de polimerase em cadeia interna que utiliza dois conjuntos de iniciadores derivados das regiões de genes não estruturais N53 e N54 do genoma do VHC. Farei et al., 1991, New Eng. J. Med. 325: 98-104. Ulrich et al., 1990, J. Clin. Invest., 86: 1609-1614. 16 ΡΕ1663287 0 exame histológico de amostras de biópsia hepática pode ser utilizado como um segundo critério de avaliação. Ver, e.g., Knodell et al., 1981, Hepatology 1: 431-435, cujo índice de Actividade Histológica (inflamação portal, hepatite de interface ou necrose confluente, lesão lobular e fibrose) proporciona um método de pontuação da actividade da doença.

As dosagens diárias requeridas na prática do método da presente invenção vão variar dependendo, por exemplo, da ciclosporina de ligação à ciclofilina não imunossupressora utilizada, do hospedeiro, do modo de administração, da gravidade da patologia a ser tratada. Uma gama de dosagem diária preferida é de cerca de 1 a 50 mg/kg por dia como uma dose única ou em doses divididas. As dosagens diárias adequadas para doentes são da ordem de e.g. 1 a 20 mg/kg p.o. ou i.v. As formas de dosagem unitárias adequadas para administração oral compreendem de cerca de 0,25 a 10 mg/kg de ingrediente activo, e.g. 4 [Melle] -ciclosporina, conjuntamente com um ou mais diluentes ou veiculos farmaceuticamente aceitáveis.

As ciclosporinas da invenção podem ser administradas por qualquer via convencional, em particular enteri-camente, e.g. oralmente, por exemplo na forma de soluções para beber, comprimidos ou cápsulas ou parentericamente, por exemplo na forma de soluções ou suspensões injectáveis. As composições farmacêuticas preferidas podem ser e.g. as baseadas em microemulsões tal como descrito no UK 2222770 A. 17 ΡΕ1663287

As ciclosporinas da invenção podem ser administradas como o único ingrediente ou conjuntamente com outros fármacos, e.g. um fármaco que tem actividades anti-VHC, e.g. um interferão, e.g. interferão-oc-2a ou interferão-a-2b, e.g. Intron® A, Roferon®, Avonex®, Rebif® ou Beta-feron®, ou um interferão conjugado com um polímero solúvel em água ou com albumina humana, e.g. albuferon, um agente anti-viral, e.g. ribavirina, lamivudina, NV08 ou NM283, um inibidor dos factores codificados em VHC como a NS3/4A protease, a helicase ou ARN polimerase ou um pró-fármaco de um desses inibidores, um agente anti-fibrótico, e.g. um derivado de N-fenil-2-pirimidino-amina, e.g. imatinib, um agente imuno modulador, e.g. ácido micofenólico, um seu sal ou pró-fármaco, e.g. micofenolato de sódio ou micofenolato de mofetil, ou um agonista de receptores S1P, e.g. FTY720 ou um seu análogo opcionalmente fosforilado, e.g. tal como descrito no EP 627406 Al, EP 778263 Al, EP 1002792 Al, WO 02/18395, WO 02/76995, WO 02/06268, JP 2002316985, WO 03/29184, WO 03/29205, WO 03/62252 e WO 03/62248.

Os conjugados de interferão com um polímero solúvel em água pretendem incluir especialmente conjugados com homopolímeros de óxido de polialcileno tais como polietileno glicol (PEG) ou polipropileno glicóis, polióis polioxietilenados, os seus copolímeros e os seus copolí-meros de blocos. Como uma alternativa a base de óxido de polialcileno, podem ser utilizados materiais efectivamente não antigénicos tais como dextrano, polivinilpirrolidonas, 18 ΡΕ1663287 poliacrilamidas, álcoois polivinílicos, polímeros à base de hidratos de carbono e outros semelhantes. Esses conjugados de interferão-polímero estão descritos nas patentes U.S. N°s 4766106, 4917888, pedido de patente europeia N° 0510356 e publicação do pedido internacional N° WO 95/13090. Uma vez que a modificação polimérica reduz suficientemente respostas antigénicas, o interferão estranho não precisa de ser completamente autólogo. O interferão utilizado para preparar conjugados de polímeros pode ser preparado a partir de um extracto de mamífero, como interferão humano, ruminante ou bovino, ou produzido recombinantemente. São preferidos os conjugados de interferão com polietileno glicol, também conhecidos como interferões pegilados.

Os conjugados de interferão especialmente preferidos são interferões alfa pegilados, por exemplo interferão-a-2a pegilado, interferão-a-2b pegilado; interferão de consenso pegilado ou produto de interferão α purificado pegilado. O interferão-a-2a pegilado está descrito e.g. na patente europeia 593868 e disponível comercialmente e.g. com o nome comercial PEGASYS® (Hoffmann-La Roche). O interferão-a-2b pegilado está descrito, e.g. na patente europeia 975369 e disponível comercialmente e.g. com o nome comercial PEG-INTRON A® (Schering Plough). O interferão de consenso pegilado está descrito no WO 96/11953. Os interferões α pegilados preferidos são interferão-a-2a pegilado e interferão-a-2b pegilado. Também é preferido o interferão de consenso pegilado. 19 ΡΕ1663287

As dosagens diárias em relação ao co-agente utilizado vão variar dependendo, por exemplo, do composto utilizado, do hospedeiro, do modo de administração e da gravidade da patologia a ser tratada. Por exemplo, a lamivudina pode ser administrada numa dosagem diária de 100 mg. O interferão pegilado pode ser administrado paren-tericamente uma a três vezes por semana, de preferência uma vez por semana, numa dose semanal total que varia de 2 a 10 milhões de UI, mais preferencialmente 5 a 10 milhões de UI, mais preferencialmente ainda 8 a 10 milhões de UI.

De acordo com o que foi descrito anteriormente a presente invenção descreve ainda: 4. Uma associação farmacêutica compreendendo a) um primeiro agente que é uma ciclosporina de ligação à ciclofilina imunossupressora, e.g. um composto de fórmula Ia, e b) um co-agente, e.g. um segundo agente farmacológico tal como definido acima. 5. Um método como definido acima compreendendo co-administração, e.g. concomitantemente ou em sequência, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma ciclosporina de ligação à ciclofilina não imunossupressora, e.g. um composto de fórmula Ia, e um segundo agente farmacológico tal como definido acima.

Os termos "co-administração" ou "administração combinada" ou outros semelhantes tal como aqui utilizados 20 ΡΕ1663287 pretendem abranger a administração dos agentes terapêuticos seleccionados a um único doente, e pretendem incluir regimes de tratamento em que os agentes não são necessariamente administrados pela mesma via de administração ou ao mesmo tempo. A administração de uma associação farmacêutica da invenção resulta num efeito vantajoso, e.g. um efeito terapêutico sinérgico, em comparação com uma monoterapêu-tica que aplica só um dos seus ingredientes activos farmacêuticos. Uma associação sinérgica preferida e uma associação de uma ciclosporina de ligação à ciclofilina não imunossupressora com um interferão, opcionalmente conjugado com um polimero.

Uma associação preferida adicional é uma associação de uma ciclosporina de ligação à ciclofilina não imunossupressora com ácido micofenólico, um seu sal ou pró-fármaco, ou com um agonista de receptores S1P, e.g. FTY720. 4 4 A [Melle] -ciclosporina ou a [MeVal] -Ciclosporina é uma ciclosporina de ligação à ciclofilina não imunossupressora preferida para utilização de acordo com a invenção.

Lisboa, 27 de Agosto de 2009

Claims (6)

1. ΡΕ1663287 1 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de uma ciclosporina na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção ou tratamento de infecções de hepatite C ou doenças induzidas por VHC, em que a ciclosporina (i) se liga a ciclofilina recombinante humana com uma razão de ligação (BR) inferior a 0,7, sendo BR o log na base 10 da razão da IC50 da ciclosporina e da IC50 num de ciclosporina A determinado num ensaio ELISA competitivo; e (ii) tem uma actividade na reacção linfocitária mista não superior a 5% da da ciclosporina A, em que a ciclosporina é um composto de fórmula Ia

   12 3 4 S a’· 6 f $ 8 10 11 em que W' é MeBmt, di-hidro-MeBmt ou 8'-hidroxi-MeBmt; X é aAbu, Vai, Thr, Nva ou O-metil treonina (MeOThr); R' é Sar, (D)-MeSer, (D)-MeAla, ou (D)-MeSer(Oacetil); Y' é MeLeu, γ-hidroxi-MeLeu, MeVal, MeThr, MeAla, Mealle ou MeaThr, N-etilVal, N-ethillle, N-etilThr, N-etilPhe, N-etilTyr ou N-etilThr(O-acetil) Z é Vai, Leu, MeVal ou MeLeu; e Q' é MeLeu, γ-hidroxi-MeLeu ou MeAla, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
2. 2. Utilização de uma ciclosporina de acordo com a reivindicação 1 na preparação de uma composição farmacêutica para inibição da replicação de VHC. 2 ΡΕ1663287
3. 3. Utilização de uma ciclosporina de acordo com a reivindicação 1 na preparação de uma composição farmacêutica para prevenção da recorrência de infecção por VHC num receptor de um transplante.
4. 4. Utilização de acordo com a reivindicação 1 em que a composição farmacêutica compreende uma ciclosporina de acordo com a reivindicação 1 conjuntamente com um ou mais diluentes ou veiculos farmaceuticamente aceitáveis.
5. 5. Utilização de acordo com a reivindicação 1 em que a composição farmacêutica compreende a) um primeiro agente que é uma ciclosporina de acordo com a reivindicação 1, e b) um co-agente seleccionado de um agente que tem propriedades anti-VHC, um agente anti-fibrótico, um agente imuno modulador ou um agonista de receptores SlP.
6. 6. Utilização de acordo com a reivindicação 5 em que o referido co-agente é um co-agente que tem propriedades anti-VHC. Lisboa, 27 de Agosto de 2009 ΡΕ1663287 1/2 mv 5'ΛΠη

   igg _ . ........................ ............ N€¥mm Figura 1 ΡΕ1663287 2/2

   p-aetinai

   * - CíetospíjriRS • ePotosporir» ie nfa §pfS© à cáe&fljfo* Figura 2 1 ΡΕ1663287 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição WD 0329295 A WO 0382252 A WO036224SÃ «S 4760106 A yS4M7SSSÂ EP 0230967 A £P85133SS A WO SSISfíSS A EP 593368 A E? §75383 A WD §615953 A EP 0484231 At WO 0301715 A GB 2222770 A EPS2740SA1 EF 778263 A? EP 1802732 At WO 0218395 A WO 0270895 A WOG2962SSA 3P 2002310855 B WO 0329184 A Literatura que não é de patentes citada na Descrição * T< i Sífeteás:, Asságresc Ffees. 1á79. 227-239 * Gtíesfst.ua, Etif 2 voÇ·. íf, 1353-1365 * ;K, WísíãsíI! se sl. VM^352SSÍvvai, 2t9S.. 3SS'40;í »: H-Kifehiiséstsí, BfcsAsí» : 2002::: fel. .« Ttitisfssfí? ei ai> 'tâsp^nmafâg?·' wst. t ts;, 036-042 * 71- 'fcat« ei' sf. 'Jpt*. JiCsstiw %m.-M W&, «et '07, 7S7-7S2 * : 1H&CÍS ei ai, vloís Res;-19¾ vSt 56, teí-ii? * Qa^s '&.%..$!# :£?$, <7, Μφν.. 1939, éot, 32i, 1501-5508 * f tósiM, Mméííg, Je.$toà, *sfe325,98-104. * Uificheiai. J: 0;?> .‘rvssi, ·9§0.ν« M. 1600-1814: * «R«SeS ei ai rlepaíp^í.: 1981 #í. 1, 431-435