Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania pochodnych l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuaze- pinonu-2 o ogólnym wzorze 1, w którym Rx ozna¬ cza atom wodoru, grupe karbamylowa, grupe al- kilokarbamylowa o 1—4 atomach wegla w rodniku alkilowym, rodnik alkilowy o 1—4 atomach wegla, rodnik alkenyIowy o 2—5 atomach wegla, rodnik alkinylowy o 3—5 .atomach wegla, albo rodnik alkilowy o 1—4 atomach wegla, alkenylowy o 2—5 atomach wegla lub alkinylowy o 3—5 atomacJ- wegla, zawierajacy 1—3 podstawników takich, ja\ atomy chlorowców, rodniki cykloalkilowe o 3—6 atomach wegla, rodniki arylowe, pierscienie hete¬ rocykliczne, .rodniki aralkilowe, grupy acylowe, grupy karbamylowe, grupy alkilokarbamylowe o 1—4 atomach wegla w rodniku alkilowym, grupy aminowe, grupy alkiloaminowe o 1—4 atomach wegla w rodniku alkilowym, grupy dwualkiloami- nowe o 1—4 atomach wegla w kazdym z rodników alkilowych lub grupy o wzorze —X—R6, w którym X oznacza atom tlenu lub siarki, grupe sulfony- lowa, a R6 oznacza atom wodoru, rodnik alkilowy o 1—4 atomach, wegla, grupe alkoksyalkilowa o 1—4 atomach wegla w kazdym z rodników alkilo¬ wych, grupe chlorowcoalkilowa o 1—4 atomach wegla, rodnik alkenylowy o 2—5 atomach wegla, rodnik alkinylowy o 3—5 atomach wegla, rodnik aryIowy, acylowy lub aralkilowy, pierscien hetero¬ cykliczny, grupe karbamylowa lub grupe alkilokar- bamylowa o 1—4 atomach wegla, R^ oznacza atom 2 wodoru lub chlorowca, albo rodnik alkilowy o 1—4 atomach wegla, R3 oznacza atom wodoru lub chlorowca albo nizszy rodnik alkilowy lub alko- ksylowy o 1—4 atomach wegla, R4 oznacza atom chlorowca, ^ruipC trójfluorometyIowa, rodnik alko- ksylowy lub alkilowy o 1—4 atomach wegla lub grupe nitrowa, R5 oznacza atom wodoru lub chlo¬ rowca, albo rodnik alkilowy lub alkoksylowy o 1—4 atomach wegla, a n oznacza liczbe zero lub 1.Zwiazki te stanowia produkty posrednie do wy¬ twarzania innych pochodnych benzodwuazepiny i/lub srodki uspokajajace.Zwiazki o wzorze ogólnym 1, w którym wszyst¬ kie symbole maja wyzej podane znaczenie, wy- twairza sie wedlug wynalazku w ten sposób, ze zwiazek o ogólnym wzorze .2, w którym Rlt Rg, R3, R4, R5 i n maja wyzej podane znaczenie, poddaje sie procesowi fermentacji w obecnosci szczepu z gatunku Streptomyces, wytwarzajacego enzym hy- droksylujacy, prowadzac ten proces zwlaszcza w ten sposób, ze szczep Streptomyces hoduje sie w odpowiednim srodowisku, korzystnie w warunkach aerobowych i do brzeczki hodowlanej dodaje sie na poczatku procesu hodowli lub po osiagnieciu wzrostu szczepu zwiazek o ogólnym wzorze 2, w którym wszystkie symbole maja wyzej podane zna¬ czenie. Proces wedlug wynalazku mozna równiei prowadzic w ten sposób, ze zwiazek o wzorze o- gólnym 2 poddaje sie dzialaniu komórki Strepto¬ myces, znajdujacych sie w stanie spoczynku, wy- 31 87 01887 018 3 4 hodowanych uprzednio w odpowiednim srodowisku, zawierajacych enzym hydroksylujacy. Otrzymane zwiazki o wzcrze 1, w którym wszystkie symbole maja wyzej podane znaczenie, wyosabnia sie z brzeczki pofermentacyjnej lub cieczy hodowlanej przez ekstrakcje organicznymi rozpuszczalnikami.Zwiazki te sa przewaznie optycznie czynne.Zwiazki o wzorze 2, stosowane jako produkty wyjsciowe, mozna wytwarzac metodami chemicz¬ nymi, np.' opisanymi w japonskim opisie patento¬ wym nr 28 187 170. Zwiazki te mozna tez wytwarzac ze zwiazków o wzorze 2, w którym Rj oznacza atom wodoru, a pozostale symbole maja wyzej po¬ dane znaczenie, poddajac je reakcji ze zdolnymi do reakcji estrami alkoholi o ogólnym wzorze Rx — OH, w którym Ri ma wyzej podane znacze¬ nie, lecz nie oznacza atomu wodoru, W procesie, prowadzonym sposobem wedlug wy¬ nalazku, jako pozywke stosuje sie srodowisko od¬ powiednie do rozwoju komórek, wytwarzajacych enzym, powodujacy wytwarzanie grupy hydroksy¬ lowej. Srodowisko takie powinno zawierac zródla przyswajalnego azotu i wegla, jak równiez zródla fosforu, siarki, potasu i pierwiastków sladowych i innych skladników, wymaganych przez mikroorga¬ nizmy. Jako zródla azotu stosuje sie make sojowa, pdpton, wyciagi miesne, namok kukurydzowy, asparagine,, mocznik i mieszaniny tych produktów.Jako zródla wegla stosuje sie glikoze, skrobie, gli¬ ceryne, dekstryne, melase i ich mieszaniny. Wartosc pH srodowiska hodowlanego i ukladu fermentacyj¬ nego wynosi korzystnie 7,0. Temperatura, w jakiej prowadzi sie proces sposobem wedlug wynalazku, wynosi okolo 20—37°C, korzystnie okolo 28—30°C.Fermentacje prowadzi sie w warunkach aerobo- wych, przy czym mieszanie i napowietrzanie daja korzystne wyniki. Stosuje sie srodowisko wodne o wyzej podanym skladzie i w napowietrzanym na¬ czyniu fermentacyjnym zaszczepia sie i hoduje szczep z rodzaju Streptomyces. Substrat o wzorze ogólnym 2, w którym wszystkie symbole maja wy¬ zej podane znaczenie, dodaje sie na poczatku fazy wzrostu lub po jej zakonczeniu i przemiana w zwiazek o wzorze 1, w którym wszystkie symbole maja wyzej podane znaczenie, nastepuje w ciagu 2—8 dni.Substrat stosuje sie w ilosci do 5 g/litr kultury, a nawet w ilosci wiekszej, ale korzystnie stosuje sie 0,5—5 g substratu/litr kultury. Zwiazek o wzo¬ rze 2 dodaje sie ewentualnie w postaci roztworu w organicznym rozpuszczalniku, korzystnie w posta¬ ci 5—lWo roztworu np. w etanolu. Substrat mozna poddawac zetknieciu z mikroorganizmem i jego enzymami bez oddzielania od srodowiska hodowla¬ nego, albo tez komórki mikroorganizmu i enzymy oddziela sie od srodowiska i poddaje zetknieciu ze zwiazkiem o wzorze 2 w odpowiednim roztwo¬ rze buforowym, rózniacym sie od srodowiska ho¬ dowlanego. Zwiazek o wzorze 2 mozna dodawac "w calosci w jednej porcji lub malymi porcjami w sposób ciagly w miare rozwoju mikroorganizmu i postepu reakcji. Proces stykania sie substratu z mikroorganizmem lub enzymami mozna prowadzic skutecznie, dodajac zawiesine substratu silnie roz¬ drobnionego za pomoca ultradzwieków.Zwiazki o wzorze 1, wytworzone sposobem we¬ dlug wynalazku, wyosabia sie z mieszaniny reak¬ cyjnej znanymi sposobami, wykorzystujac rózne cechy tych zwiazków w porównaniu z cechami za¬ nieczyszczen. Cechami tymi sa: rozpuszczalnosc, zdolnosc adsorbowania, wspólczynnik rozdzialu po¬ miedzy rozpuszczalniki organiczne takie, jak chlo¬ roform, czterochlorek wegla, dwuchloroetylen, dwu- chlorometan, eter itp.Wyosobniony produkt sjfeza sie i ewentualnie oczyszcza, np. na drodze chromatografii kolumno¬ wej lub cienkowarstwowej, stosujac zel krzemion¬ kowy lub sefadeks. Mozna tez stosowac ekstrakcje kwasami%i krystalizacje.W pewnych warunkach proces wedlug wynalaz¬ ku moze przebiegac tak, ze zwiazek o wzorze 2, w którym wszystkie symbole maja wyzej podane znaczenie, ale Ri nie oznacza atomu wodoru, ule¬ gaja odalkilowaniu w podstawniku oznaczonym symbolem Ri 1 równoczesnie hydroksylacji, jak to uwidoczniaja schematy 1 i 2.Proces przemiany sposobem wedlug wynalazku prowadzi sie za pomoca dowolnego szczepu z ro¬ dzaju Streptomyces, wytwarzajacego enzym hy¬ droksylujacy. Przykladami takich szczepów sa: Streptomyces albidoflavus ATCC 15 844, Strepto¬ myces flavus ATCC 3369, Streptomyces griseochro- mogenes ATCC 14 511, Streptomyces roseochromo- genes ATCC 21895, Streptomyces fradiae ATCC 21896, Streptomyces griseus ATCC 21897, Strep¬ tomyces takarazukaensis ATCC 21898, Streptomy¬ ces calvus ATCC 21899, Streptomyces fimicarius ATCC 21 900, Streptomyces chartreusis ATCC 21 901, Streptomyces transformans ATCC 21902, Strepto¬ myces globisporus ATCC 21 903 i Streptomyces ben-, zodiazepinicus ATCC 21 904.Ponizej podano charakterystyke nowych szcze¬ pów, opracowana zgodnie z klasyfikacja podana w ukladzie iWaksman'a w dziele S.A. Waksman, The Actinomycetes, tom 2, 1961.Szczepy te tworza zarodniki i grzybnie po¬ wietrzne, ale nie tworza zarodni. Ich grzybnia we¬ getatywna jest nie podzielona i- nie rozdziela sie na elementy bakteryjne lub kokoidalne. Zarodniki formuja sie w lancuchy. Cechy te swiadcza o tym, ze szczepy te naleza do rodzaju Streptomyces w rodzinie II Streptomycetaceae. Wyniki taksonomicz¬ nych badan tych szczepów podano w tablicach I, ii i m. 45 M l87 018 Tablica I Czesc 1 Cecha Symbol szczepu i jego wlasciwosci Morfologia sporoforów Liczba zarodników Ksztalt zarodników Wzrost na pozywce stalej sacharoza azotan agar skrobia agar iglikoza asparagina agar tyrozyna agar pozywka agarowa ziemniaki glikoza agar pepton glikoza agar pozywka Lófflera ATCC 21.1 ATCC 21899 rozgalezione, w postaci gron, dlugie dlugie wiecej niz 10, uformowane w lancuchy wieloscienne 0,5X0,9 mikrona wzrost umiarkowany, barwa szara do kremo¬ wej, a wytworzona póz¬ niej grzybnia ma barwe biala do szarej wzrost dobry, barwa biala do ciemnozóltawej i brazowej, grzybnia po¬ wietrzna obfita, barwy bialej do szarej wzrost umiarkowany, barwa szara do kremowej, kolista kolonia, grzyb¬ nia powietrzna obfita, barwy bialej wzrost umiarkowany lub slaby, barwa biala do zóltawo-pomaranczowej, kolonia kolista, puszysta, obfita grzybnia powietrz¬ na powstaje predko, barwy bialej wzrost umiarkowany, barwa biala lub zólta, sztywna grzybnia po¬ wietrzna obfita, powstaje wczesnie, barwy bialej wzrost dobry, barwa biala do purpurowo-bra- zowo-czarnej, kolonia kolista sztywna, obfita grzybnia 'powietrzna, powstaje wczesnie, barwy szarej do rózowawo- -bialej wzrost dobry, barwa szara do brazowej, ko¬ lonia wrzecionowato uniesiona, pomarszczona, powietrzna grzybnia uboga, powstaje pózno barwy szarej wzrost umiarkowany barwa biala, bloniasta rozgalezione, nie tworza gron, proste lub lekko po¬ falowane, luzne spirale wiecej niz 10, uformowane w lancuchy walcowate 0,5—0,6 X 0,9—1,4 mikrona wzrost slaby lub umiarko¬ wany, barwa biala do szarej, a wytworzona pózniej grzyb¬ nia ma barwe biala do sza¬ rej wzrost dobry, barwa szara do brazowawo-szarej plaska kolonia, powietrzna grzyb¬ nia obfita, barwy bialej do szarej wzrost umiarkowany, barwa szara do bialej, kolonia ko¬ lista, powietrzna grzybnia dobra, barwy bialej do sza¬ rej wzrost slaby, barwa szara lub brazowa, kolonia plas¬ ka, grzybnia powietrzna u- boga, barwy bialej lub sza¬ rej wzrost umiarkowany, barwa biala lub zólta, kolonia ko¬ lista, plaska, obfita grzyb¬ nia powietrzna barwy foia- lej lub szarej wzrost dobry, barwa biala lub szara, kolonia wyros¬ nieta, grzybnia powietrzna obfita, powstaje wczesnie barwy bialej wzrost dobry, barwa szara lub brazowa, kolonia wrze¬ cionowato uniesiona, po¬ wierzchnia szorstka, po¬ wietrzna grzybnia powsta¬ je wczesnie, jest uboga barwy bialej lub szarej wzrost umiarkowany barwa biala lub szara ATCC 21 900 rozgalezione, krótkie, pro¬ ste wiecej niz 10, uformowane w lancuchy wieloscienne lub walcowate 0,6—0,7X1,1—1,3 mikrona wzrost dobry, barwa biala do matowozóltej, grzybnia powietrzna-jpowstaje wczes¬ nie, jest proszkowata i ma barwe biala do zóltawoszarej wzrost dobry, barwa biala do matowopomaranczowej, powietrzna grzybnia obfita i powstaje wczesnie, barwy bladozóltej do 'brazowej wzrost umiarkowany, bar¬ wa zóltawa do szarej, po¬ wietrzna grzybnia umiarko¬ wana, barwy zóltawej do szarej wzrost dobry, barwa szara do jasnozóitoforazowej, ob¬ fita grzybnia powietrzna po¬ wstaje wczesnie, barwy zól¬ tawej do szarej wzrost dobry, barwa biala do brazowo-zóltej, powie¬ trzna grzybnia powstaje wczesnie, barwy bialej do zóltawoszarej wzrost obfity, barwa biala lub szara do brazowej, ko¬ lonia proszkowata, wyros¬ nieta, .powietrzna grzybnia obfita, barwy zóltawej do szarej, powstaje wczesnie wzrost dobry, barwa biala lub szara, kolonia sztywna, powierzchnia plaska, po¬ wietrzna grzybnia obfita, powstaje wczesnie jest bar¬ wy szarej lufo zóDtawo-sza- rej wzrost dobry, barwa biala lub szara, powietrzna grzyb¬ nia barwy bladozóltej Tablica I Czesc 2 Cecha 1 Morfologia sporoforów Symbol szczepu i jego wlasciwosci ATCC 21 901 2 pojedynczo rozgale¬ ziona ze zwojami srubowymi ATCC i21 902 3 pojedynczo rozgale¬ ziona z krótkimi zwojami ATCC 21 903 4 rozgaleziona w po¬ staci peków, prosta lub lekko wygieta ATCC 21 904 rozgaleziona, baldaszkowata, ksztalt petli87 018 8' dalszy ciag tablicy I, czesc 2 Liczba zarodników Ksztalt zarodników Wzriost na pozywce stalej 1 sacharoza , azotan agar glikoza nsparagina agar | skrobia agar tyrozyna igar pozywka agarowa ziemniaki | glikoza agar pepton I glikoza agar pozywka Loefflera wiecej niz 10, ufor¬ mowane w lancuchy owalne, powierzchnia pokryta kolcami 0,5—0,6X0,8—1,2 mikrona wzrost dobry, barwa zielonawo-szara, po¬ wietrzna grzybnia obfita, powstaje wczes¬ nie, ma barwe nie- bieskawoszara wzrost dobry, bez¬ barwna kolonia wil¬ gotna, grzybnia po¬ wietrzna podobna do drozdzy, powstaje pózno, barwy niebies¬ kawej do szarej wzrost dobry, barwa szara do brazowo- , -szarej, powietrzna grzybnia obfita, po¬ wstaje wczesnie, ma barwe szara lub nie- toiesko-szara wzrost dobry, barwa szaro-czarna, grzyb¬ nia powietrzna obfita, powstaje wczesnie, ma barwe brazowa- wo-szara Wzrost umiarkowany lub ubogi, barwa ja- snobrazowa do szarej lub bezbarwna, po¬ wietrzna grzybnia uboga wzrost dobry, barwa zóltawobiala do ciem¬ noniebiesko-zielonej , kolonia wilgotna, po¬ marszczona, obfita grzybnia powietrzna powstaje pózno, ma barwe szara lub nie- bieskawoszara wzrost umiarkowany, barwa szara do zól- tawoszarej i brazowej, kolonia podobna do drozdzy, wilgotna, pomarszczona wzrost dobry, barwa zóltawo-szara, grzybnia powietrzna zólta wiecej niz 2, ufor¬ mowane w lancuchy wieloscienne, 0,8^0,9X1,0—1,4 mikrona wzrost dobry, barwa szara do zóltawoibra- zowej, grzybnia po¬ wietrzna powstaje pózno, jest obfita, ma barwe niebieskawa do szarej wzrost dobry, barwa brazowa, kolonia wy¬ pukla, obfita grzybnia powietrzna powstaje wczesnie, barwy nie¬ bieskawej do szarej wzrost dobry, barwa biala lub jasnokre- mowa, obfita grzyb¬ nia powietrzna po¬ wstaje wczesnie, ma barwe szara do brazo¬ wo-szarej wzrost ubogi, kolonia barwy szarej, powie¬ trzna grzybnia po¬ wstaje wczesnie i ma barwe szara wzrost umiarkowany lub ubogi, bezbarwna lub szara, plaska ko¬ lonia kolista, nie tworzy grzybni po¬ wietrznej wzrost dobry, bairwa szara lub niebieska- wcszara, kolonia po¬ marszczona, grzybnia powietrzna obfita, barwy niebieskawo- szarej lub szarej wzrost dobry, barwa jasnozóltawa do brazowej, kolonlia wy¬ rosnieta, pomarszczo¬ na, powietrzna grzyb¬ nia powstaje pózno, ma barwe szara wzrost umiarkowany lub ubogi, barwa biala wiecej niz 10, ufor¬ mowane w lancuchy walcowate, 0,6—0,8X1,0—1,5 mikrona wzrost umiarkowany, barwa matowa, po¬ maranczowa lub jak skóra ludzka, po¬ wietrzna grzybnia po¬ wstaje wczesnie, jest dobra, barwy zóltawej do szarej wzrost umiarkowany, wilgotna kolonia ko¬ lista o barwie jasno- zóltej, powietrzna grzybnia uboga,, bar¬ wy bialej lub jasno- zóltej wzrost dobry, barwa biala do jasnozóltawo- -brazowej, powietrzna grzybnia powstaje wczesnie i jest obfita wzrost dobry, plaska kolonia kolista barwy szarej do zóltawo- szarej, grzybnia po¬ wietrzna obfita, barwy szarej lub zóltawot -szarej wzrost dobry, plaska kolonia kolista, barwa biala do jasnobrazo- wej, obfita grzybnia powietrzna powstaje wczesnie, ma barwe biala lub zóltawo- szara wzrost obfity, barwa biala do pomaran¬ czowej i do ciemno- niebieskawoszarej, powietrzna grzybnja obfita, powstaje póz¬ no, ma barwe jasno- zólta do brazowej wzrost dobry, barwa zólta do brazowej, grzybnia powietrzna powstaje wczesnie, ma barwe zóltawa do szarej wzrost dobry, barwa biala, bloniasta ko¬ lonia, grzybnia po¬ wietrzna biala wiecej niz 10, uformowane w lancuchy okragle do owal¬ nych, 0,9—1,3X 1,0—1,5 mikrona wzrost ubogi barwa biala do szaro-brazowej, powietrzna grzyb¬ nia powstaje wczesnie i ma barwe szaro-czer- wona do brazowej wzrost ubogi lub umiarkowany, barwa jasnonie¬ bieska do szarej, obfita grzybnia powietrzna po¬ wstaje wczesnie i ma barwe szarawo- -czerwona do brazowej wzrost dobry, kolonia barwy bialej do szarobra- zowej, puszysta, obfita,, grzybnia powietrzna ma barwe szarawo- -czerwona do brazowej wzrost ubogi, bar¬ wa biala do szaro- -czerwono-brazo- wej, powietrzna grzybnia barwy szaro-czerwonej do brazowej wzrost umiarko¬ wany lub ubogi, barwa szara lub biala do zóltawo- szarej, kolonia wilgotna, podobna do bakterii, nie tworzy grzybni powietrznej wzrost obfity, bar¬ wa biala do zólta- wobi;azowej, ko¬ lonia puszysta, grzybnia po¬ wietrzna powstaje wczesnie i ma barwe szarobra- zowa wzrost dobry, barwa biala do jasnozóltej, grzyb¬ nia powietrzna uboga wzrost ubogi, barwa biala lub szara87 018 Tablica II Cecha Temperatura hodowli Wartosc pH hodowli Dzialanie na mleko Tworzenie melaniny Powpdowanie hydrolizy skrobi Dzialanie 1 na azotan ATCC 21898 —37°C optymalna °C 6—10 optymalna 8 koaguluje slabo, nie peptoni- zuje nie tak wystepuje azotyn Symbol szczepu i ATCC 21 899 —37°C optymalna °C 6—10 optymalna 8 nie koagu¬ luje, pep¬ tonizuje nie tak wystepuje azotyn ATQC 21900 —40°C optymalna 37°C 6—10 optymalna 8 nie koagu¬ luje, pep- tonizuje nie tak azotyn nie wystepuje warunki fizjologiczne ATCC 21901 —40°C optymalna 37°C 6—10 optymalna 8 nie koagu¬ luje, pep- tonizuje tak tak wystepuje azotyn ATCC 21902 —37°C optymalna °C 4^10 optymalna 6 silnie ko¬ aguluje, mrie pepto- irizuje tak tak -azotyn nie wystepuje ATCC 21903 -40°C optymalna °C 6—10 optymalna 8 nie koagu¬ luje, pep¬ tonizuje nie tak wystepuje azotyn ATCC 21 904 —40°C optymalna 37°C 4—10 optymalna i7 . • koaguluje, peptonizuje nie tak . \ azotyn nie wystepuje Tablica III Asymilacja cukrów Rodzaj cukru [ L-arabinoza D-ksyloza D-glikoza D-fruktoza Sacharoza Inozytol L-ramnoza Bafinoza 1 D-mannit ATCC 21898 i+ + + ' + — +1 + — ATCC 21899 — + + + + ± +' — ± Symbol szczepu ATCC 21900 :+ + + !+: '+ + + + + ATCC 21901 + + • + + + + + + + ATCC 21902 -t- + * '+ + + H- !+ + + ATCC 21903 + -l- -h 4- , + + +.+ ATCC 21 904 ¦l- + + + + + + + 1 •H 1 Zgodnie z wynikami badan podanymi w tabli¬ cach I—III, omawiane szczepy zostaly sklasyfiko¬ wane nastepujaco: 1. Szczep ATCC 21898 iZarodnia powstaje z grzybni powietrznej w po¬ staci peków, tworzy spirale, nie wytwarza melani¬ ny. Szczep ten jest podobny do szczepu Streptomy- ces kentuckensis Barr i Carman, 1956, ale rózni sie od niego tym, ze peptonizuje mleko, uplynnia ze¬ latyne i wytwarza owalne hib elipsoidalne za¬ rodniki. Swiadczy to o tym, ze jest to nowy szczep, który nazwano Streptomyces takarazukaensis. 2. Szczep ATCC 21 899 Szczep tai ma wiele cech wspólnych ze znanym Streptomyces calvus Backus i in., 1957, ale rózni sie tym, ze czesciowo uplynnia zelatyne, koaguluje mleko, nie asymiluje rafdnozy i arabinozy. Jest to wiec nowy szczep Streptomyces calvus. 3. Szczep ATCC 21 900 Szczep ten przypomina pod wieloma wzgledami Streptomyces fimicarius Waksman i Henrici, 1948, ale rózni sie od niego tym, ze ma inny ksztalt za- 50 55 60 65 rodników i inaczej rozwija sie na agarze. Jest to wiec nowy szczep Streptomyces fimicarius. 4. Szczep ATCC 21 901 Szczep ten' nie wytwarza rozpuszczalnych pig¬ mentów na skrobi, agarze i pozywce agarowo-ziem- niaczanej. Inne jego cechy upodobniaja go do Strep¬ tomyces chartreusis Calhoun i Johnson, 1956, totez nazwano go nowym szczepem Streptomyces char- teusis.. Szczep ATCC 21 902 Zarodniki powstaja w zarodni, wznoszacej sie z powietrznej grzybni w postaci peków, a na ty¬ rozynowoagarowej pozywce tworzy melanine. Ma barwe brazowa, a jego grzybnia jest biala lub szara. Te cechy upodobniaja go do Streptomyces griseochromogenes Fukunaga i in., 1955, ale rózni sie on od tego szczepu barwa i grzybnia powietrz¬ na na pozywce asparginowo^agarowej i tym, ze na pozywkach agarowych daje barwne pigmenty rozpuszczalne oraz tym, ze uplynnia zelatyne, ko¬ aguluje i peptonizuje mleko i redukuje azotan.Uznano go przeto za nowy szczep Streptomyces transformans.11 6. Szczep ATCC 21 903 Ma wiele cech wspólnych z Streptomyces globi- sporus, Waksman, ale nie tworzy rozpuszczalnych pigmentów na sacharozie i pozywce, zawierajacej glikoze, pepton i agar, gdyz na tych pozywkach jest bezbarwny lub o barwie zielonkawej. Jest to wiec nowy szczep Streptomyces globisporus. 7. Szczep ATCC 21904 Tworzy zarodniki wznoszace sie z grzybni po¬ wietrznej w postaci gron i zwartych petli. Nie wytwarza melaniny, ma barwe zóltawa lub szara, a ijego grzybnia powietrzna jest biala lub rózowa- wa. Cechy te sa podobne do cech Streptomyces hachijoensis, Yamaguchi, 1954 i Streptomyces ma- tensis, Margalith i in., 1959, ale szczep Streptomy¬ ces hachijoensis na pozywce z sacharozy i agaru ma barwe rózowawa, podobna do barwy ludzkiej skóry, tworzy puszysta grzybnie powietrzna na po¬ zywkach agarowych i szybko uplynnia zelatyne, zas Streptomyces matensis tworzy na pozywkach z sacharozy i agaru niebieskie pigmenty rozpusz¬ czalne, a na pozywkach agarowych tworzy biala grzybnie .powietrzna. Swiadczy to o tym, ze jest to odmienny szczep który nazwano Streptomyces benzodiazepinicus.Sposobem wedlug wynalazku wytwarza sie np. nastepujace zwiazki: 3-hydroksy-5-£enylo-7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H- -1,4-benzodwuazepinon- 2, 3-hydroksy-5Hfenylo-7-nitiro-l,3-dwuwodoro-2H- -1,4-benzodwuazepinon-2, 3-hydróksy-5-fenylo-7-trójfluorometylo-l,3-dwu- wodoro-2H-i,4-benzodwuazepinon-2, 3-hydroksy-5-fenylo-7-metoksy-l,3-dw uwodoro- -2H-l,4-;benzodwuazepinon-2, 3-hydroksy-l5-fenylo-7-metylo-l,3-dwuwodoro-2H- -l,4-benzodwuazepanon-2,[ 3-hydroksy-5-fenylo-7,9-dwuchloro-l,3-dwuwodoro- -2H-1,4-benzodwuazepinon-2, 3-hydroksy-5-/o-chlorofenylo/-7-chloro-l,3-dwu- wodóTO-2H-l,4-.benzodwuazepinon-2, 3-hydroksy-5-/o-chlorofenylo/-7-nitro-l,3-dwu- wodoro-2H-l,4^bemzodwuazepinon-2, 3-hydroksy-5-/o-fluorofenylo/-7-chloro-1,3-dwu- wodoro-2H-l,4-benzodwuazepinon-2, 3-hydroksy-5-/o-fluo!rofenylo/-7-nitro-l,3-dwuwo- doro-2H-l,4-benzodwuazepmon-2, ( 3-hydroksyJ5-/o-tolilo/-7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H- -1,4-tbenzodwuazepinon-2, 3-hydroksy-5-/p-hydroksyfenylo/-7-chloro-1,3- -dwuwodóro-2H-l,4-benzodwuazepinon-2, 3-hy!droksy-5-/p-chlorofenylo/-7-chloro-l,3-dwu- wodoro-2H-l,4-benzodwuazepinon-2, 3-hydroksy-6-/o-chloro-p-hydroksyfenylo/-7- -chloro-l,3-dwuwodoiro-2H-l,4-benzodwuazepi¬ non-2, 3-hydroksy-5-/o-metylo-p-chlorofenylo/-7-chloro- 1,3-dwuwodoro-2H-1,4-benzodwuazepinon-2, l-metylo-3-hydroksy-5-fenylo-7-chloro-l,3-dwu- wodoro-2H-1,4-benzodwuazepinon-2, l-metylo-3-hydroksy-5-/o-chloiX)fenylo/-7-chloro- -l,3-dwuwodoro-2H-l,4-tenzodwuazepinon-2, 1-metylo-3-hydroksy-5-/o -fluorofenylo/-7-chloro- -l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuazepinon-2, . l-metylo-3-hydroksy-5-/o-chlorofenylo/-7-nitro- 018 IZ -l,3-dwuwoo:oro-2H-l,4-benzodwuazepinon-2, l-metylo-3-hydiroksy-5-fenylo-7-nitro-l,3-dwu- wodoxo-2H-1,4^benzodwuazepinon-3, l-metylo-3-hydroksy-5-fenylo-7-trójfluorometylo- -l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuazepinon-2, l-cyklopropylometylo-.3-hydroksy-5-fenylo-7- -chloro-1,3-dwuwodoro-2H-1,4-benzodwuazepinan-2, 1-cyklopropylometylo-3-hydroksy-5-/o-chlorofe- nylo/-7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwu- ii azepinon-2, 1 -metylokarbamoilo-3-hydroksy-5-fenylo- 7-chloro- l,3-dwuwodoro-2H-l,4-ibenzodwuazepinon-2, l-metylokarbamoilo-3-hydroksy-5-fenylo-7-nitro- -l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuazepinon-2, 1-metylokarbamoilometylo-3-hydroksy-5-fenylo- -7-chloiro-l,3-dwuwodoro-2H-l4-benzodwuazepi- non-2, l-/(3-etyloaminoetylo/-3-hydroksy-5-/o-fluorofe- nylo/-7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H—1,4-benzodwu- azepinon-2, l-/P-dwuetyloaminoetylo/-3-hydroksy-5-fenylo- -/o-fiuorofe:nylo/-7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H- -l,4-benzodwuazepinon-2, l-/Y-dwumety*oaminopropylo/-3-hydroksy-5-A)- -fluorofenylo/-7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H-l,4- benzodwuazepinon-2, l-/P-piperydynoetylo/-3-hydroksy-5-/o-fluorofe- nylo/-7-chloro^l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwu- azepinon-2, 3« 1 -/P-hydroksyetylo/-3-hydroksy-5-/o-fluorofenylo/- -7-ahloro-l,3-dwuwodoro-i2H-l,4-benzodwuazepi- non-2, l-/(3-etoksyetylo/-3-hydroksy-5-/o-fluoroifenylo/- -7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuazepi- non-2, l-metoksymetylo-3-hydroksy-5-fenylO-7-chloro- -1,3-dwuwodoro-2H-1,4-benzodwuazepinon-2, l-metoksymetylo-3-hydroksy-5-fenylo-7-nitro-l,3- -dwuwodoro-2'H-l,4-benzodwuazepinon-2, 40 l-[/P-chloro-a-metoksy/-etylo]-3-hydroksy-5-fenylo- -7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H-l,4Hbenzodwuazepi- non-2, l-metylotiometylo/-3-hydroksy-5-fenylo-7-chloro- -i;3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuazepinon-2, 45 l-/metylosulfinylometylo/-3-hydroksy-5*/o-chloro- , fenylo/-7-chloro-l ,3-dwuwodoro-2H-1,4-benzo- dwuazepinon-2, l-/P-metylosulfonylometylo/-3-hydroksy-5-/o- -fluorofenylo/-7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H-l,4- w -ibenzodwuazepinon-2, l-[/P-acetoksy-l-metoksy/-etylo]-3-hydroksy-5- -fenylo-7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H-il,4-benzodwu- azepinon-2, l-[/p-hydroksylo-l-metoksy/-etylo]-3-hydroksy-5- 55 -fenylo-7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwu- azepinon-2, l/p-fenoksyetylo/-3-hydroksy-5-fenylo-7-chloro- -1,3-dwuwodoro-2H-1,4-benzodwuazepinon-,2, l-/P-benzyloksyetylo/-3-hyd!roksy-5-feinylo-7-chloro- w -l,3-dwuwodoro-2H-l,4^benzodwuazepinon-2, l-/P-piranyloksyetylo/-3-hydroksy-5-Anfluorofe- nyio/-7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwu- azepinon-2, l/(3-winyloksyetylo/-3-hydroksy-5-fenylo-7-chloro- 65 -l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuazepinon-2,87 018 13 l-/(3-chloroetoksy/-metylo-3-hydro;ksy-5-fenylo-7- -chloro-1,3-dwuwodoro-2H-1,4-benzodwuazepi- non-2 i l-/|3,|3,|3-trójfluoroetylo/-3-hydroksy-5-fenylo-7- -chloro-l,3-dwuwodoro-2H-l,44enzodwuazepinon-2.Przyklad I. Streptomyces transformans ATCC 21 902 przenosi sie ze skosnej hodowli aga¬ rowej do kolby Sakaguchi o pojemnosci 500 ml, zawierajacej 5 g glikozy, 0,5 g wyciagu drozdzo¬ wego, 0,5 maki sojowej, 0,1 g KHjjPO^ 0,2 g K2HP04, 0,1 g FeS04.7H20 i 100 ml wody pitnej.Wartosc pH pozywki wynosi 7,0 i hodowle pro¬ wadzi sie na wstrzasarce w temperaturze 30°C. Po' uplywie 24 godzin 2% grzybni przenosi sie do kazdej z 20 kolb Sakaguchi, zawierajacych po 100 ml pozywki o wyzej podanym skladzie i prowadzi hodowle w ciagu 24 godzin w sposób wyzej poda¬ ny.Nastepnie. do kazdej kolby dodaje sie roztwór 100 mg l-cyklopmpylometylo-5-fenylo-7-chlóro- -l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuazepinonu-2 ' w 2,0 ml etanolu i po dalszych f dniach hodowli ekstrahuje ciecze chloroformem. Wyciagi odparo¬ wuje sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem, otrzymujac 1,93 g pozostalosci. Produkt ten roz¬ puszcza sie w- mieszaninie chloroformu z aceto¬ nem i etanolem /l7:2:1/ i wlewa na wierzcholek kolumny z zelu krzemionkowego, stosujac do roz¬ wijania taki sam rozpuszczalnik.Otrzymuje1 sie l-cyklopiropyiometylo-3-hydroksy- T5-fenylo-7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzo- dwuazepinon-2 o temperaturze topnienia 159—161°C i 3-hydroksy-5-fenyltf-7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H- -l,4-benzodwuazepindn-2 o temperaturze topnienia 203—204°C, [a]D25=,-hl0,4Q /c=0,5 w metanolu/.Widmo w podczerwieni pierwszego z wymienionych produktów jest identyczne z widmem 1-cyklopropy- lometylo-3-hydroksy-5-fenylo-7-chloro-l,3-dwuwo- dóro-2H-l,4^benzodwuazepinonu-2, a widmo dru¬ giego produktu identyczne z widmem 3-hydroksy- -5-fenylo-7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwu- azepinonu-2.Przyklad II. Streptomyces benzodiazepini- cus ATCC 21 904 hoduje sie na pozywce o skladzie, podanym w przykladzie I, w temperaturze 2i8°C i po 24 godzinach po 2% grzybni przenosi' sie do kolb Sakaguchi, zawierajacych po 100 ml po¬ zywki o wyzej podanym skladzie. Po uzyskaniu dobrego wzrostu, do kazdej koliby dodaje sie 100 mg 3-/2,-fluorofenylo/-7-chloro-l,3-dWuwodoro-2H- -l,4-benzodwuazepinonu-'2 w 2,0 ml etanolu i ho¬ duje w ciagu 5 dni. Nastepnie brzeczki ekstrahuje sie chloroformem i, postepujac w sposób opisany w przykladzie I, otrzymuje sie 2,27 g surowego pro¬ duktu krystalicznego. Produkt ten rozpuszcza sie w 20 ml chloroformu i wprowadza na kolumne Sephadex LH—20 o wymiarach 2,5X80 cm. Eluuje sie chloroformem, a nastepnie etanolem, otrzymujac S-hydroksy-S-^-fluorofenylo/-7-chloro-l,3-dwu- wodo:ro-2!H-l,4-benzódwuazepinon-2, który po prze- krystalizowaniu z etanolu topnieje w temperaturze 193—194°C, [a]D24=—31,0 /c= 0,50 w sulfotlenku dwumetylu/.Analiza produktu %C %H %N %C1 obliczono: 59,13 3,31 9,19 11,63 znaleziono: 59,15 3,36 9,09 11,41 14 P rz y k l ad III. Postepujac w sposób analo¬ giczny do opisanego w przykladzie I, prowadzi sie hodowle Streptomyces takarazukaensis ATCC 21 898, po czym do poszczególnych próbek hodowli dodaje l-metylo-5x-fenylo-7-chlorio-l,3-dwuwodoro-2H- -i,4^benzodwuazepinon-2. Produkty1 ekstrahuje sie w sposób opisany w przykladzie I i oczyszcza W sposób opisany w przykladzie II, a po przekrysta- lizowaniu produktów z etanolu otrzymuje sie 1-me- io tylo-3-hydroksy-5-fenylo-7-chloro-1,3-dwuwodoro- -2H-l,4-benzodwuazepin6n-2 o temperaturze top¬ nienia 118—120°C i 3-hydroksy-5-fenylo-7^cnloro- -l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuazepinón-2.Zwiazki te identyfikuje sie na podstawie ich wid- ma w podczerwieni. '¦ Przyklad IV. Streptomyces calvus ATCC 21 899 hoduje sie w sposób, opisany w przykladzie I, po czym przenosi grzybnie do 20 kolb, zawiera¬ jacych po 100 ml pozywki o skladzie, podanym w przykladzie I. Nastepnie próbki hoduje sie w ciagu 48 godzin w temperaturze 28°C i dodaje po 100 mg l-metylo-5-fenylo-7-nitrb-l,3-dwuwodotro-2H-l,4- -benzodwuazepinonu-i2 W 2,0 ml etanolu. Po uply¬ wie dalszych 8 dni brzeczki ekstrahuje'sie w spo- sób, opisany w przykladzie I. Surowe" krysztaly oczyszcza sie w sposób, opisany w przykladzie II, otrzymujac l-metylo-3-hydroksy-5-fenylo-7-nitro- ljS-dwuwodoro-^H-l^-benzodwuazepinón-^ o tem¬ peraturze topnienia 201—2Ó2°C i 3-hydroksy-5-fe- nylo-7-nitro-l,3-dwuwodoro-2fH-l,4-benzodwuaze- pinon-2 o temperaturze topnienia 199—U0ldC. Wid¬ ma tych produktów w podczerwieni sa identycz¬ ne z widmami odpowiednich zwiazków, otrzyma¬ nych znanymi sposobami.Przyklad V.: Hodowle Streptomyces fimi- carius ATCC 21 900 prowadzi sie w sposób, opisany w przykladzie I, po czym do próbek dodaje 1-me- tylo-5-fenylo-7-trójfluorometylo-l,3-dwuwodoro- -2H-l,4-benzodwuazepinon-2. Brzeczki ekstrahuje 40 sie, jak w przykladzie I i surowe produkty roz¬ dziela i oczyszcza, jak w przykladzie II, otrzymujac 1-metylo-3-hydroksy-5-fenylo-7-trÓjfluorometylo- -l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuiazepinon-2 o tem¬ peraturze topnienia 183—185°C i 3-hydroksy-5-fe- 45 nylo-7-trójfluorometylo-l,3-dwuwoddro-2H-i,4- -benzodwuazepinon-2 o temperaturze topnienia 189—191°C. Budowe zwiazków potwierdzaja ich widma w podczerwieni.Przyklad VI. Streptomyces chartreusis ATCC 50 21901 hoduje sie w sposób, opisany w przykladzie I, po czym do poszczególnych próbek dodaje sie po 2 ml mieszaniny, zawierajacej 100 mg 5-fenylo- -7-chloro-l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuazepi- nonu-2. Zawiesine te wytwarza sie za pomoca ultra- 55 dzwieków, stosujac srodowisko o skladzie, poda¬ nym w przykladzie I.Ekstrahujac w sposób opisany w przykladzie I, otrzymuje sie 1,97 g surowych krysztalów, które oczyszcza sie W sposób, opisany w przykladzie II, 60 otrzymujac 3-hydroksy-5-fenylo-7-chloro-l,3-dwu- wodoro-2H-l,4-benzodwuazepinon-i2 o temperaturze topnienia 202—203°C. Widmo tego produktu w pod¬ czerwieni jest identyczne z widmem wymienione¬ go zwiazku, otrzymanego znanym sposobem. 65 Przyklad VII. Streptomyces globisporus870J8 ATGG <21c9Q3 hoduje sie w sposób, opisany w przy¬ kladzie 1^ po czym 6ff mi brzeczki, zawierajacej sil&ie rozwiniety mifcnsorganizm przenosi sie do na¬ czynia fermentacyjnego o pojemnosci 10 litrów, wyposazonego w mieszadlo, i zawierajacego 6 litrów pozywki o skladzie, podanynr w przykladzie I.Fermentacje prowadzi sie w temperaturze 30°C, mieszajac i. napowietrzajac. Po uplywie 24 godzin dodaje sie roztwór 6 g l-metylo-S-^-chlorofenylo/- -7-chloro-1,3-dwuwodoro-2H-4,4-benzodwuazepino ¦- nu^2! w etanolu i postepujac w sposób, opisany w przykladzie 1^ otrzymuje sie 5,84 g surowego pro¬ duktu, z którego po oczyszczeniu 'sposobem, opisa¬ nym w przykladzie II, otrzymuje sie l-metylo-3- -hydroksy-5-/2,-chlorofenylo/-7-chloro-l,3-dwuwo- doro-2H-l,4-benzodwuazepinon-2 o temperaturze topnienia 197—200°C i 3-hydroksy-5-/2'-chlorofe- nylo/-7-chloro-4,3-dwuwodo;ro-2H-1,4^benzodwuaze- pinon^2 o temperaturze topnienia 165—467°C. Bu¬ dowe tych zwiazków potwierdza ich widmo w pod¬ czerwieni.Przyklad VHI. Grzybnie Streptomyces ben- zodiazepinicus ATCC 21:904 przenosi sie do 3 kolb Sakaguchij zawierajacych po 100 ml pozywki, opi¬ sanej w przykladzie I i po 2 dniach hodowli do kazdej kolby dodaje 10 mg '5^fenylo-7-trójf metylo^l,3-dwuwodoro-2H-l,4^benzodwuazepino- nu-fij rozpuszczonego w etanolu, po czym prowadzi sie hodowle w ciagu 30 godzin, odsacza obfita grzybnie, przemywa ja 0,05 m roztworem buforo¬ wego fosforanu o wartosci pH~7,0 i miesza z takim samym roztworem buforowym, zaw^ierajacym dodat¬ kowo 0jl% glikozy* Do otrzymanej zawiesiny do¬ daje sie 2 ml zawiesiny 100 mg 5-fenylo-7-trójflu- orometylo-l3-dwuwodoro-2H-l,4-ibenzodwuazepi<- nonu^2i otrzymanej za pomoca ultradzwieków w roztworze buforowym fosforanu, zawierajacym Oyl°/a glikozy. Mieszanine poddaje sie hodowli w temperaturze 28°C na wstrzasarce, dodajac slado¬ wa ilosc toluenu. Po uplywie 20 godzin mieszanine ekstrahuje sie chloroformem i surowy produkt oczyszcza-w sposób, podany w przykladzie II, otrzy¬ mujac ^hydroksy-5-fenylo-7-trójfluorometylo-l;3- -dwuwodorb-2H-l,4^benzodwuazepinoinr2 o tempe¬ raturze topnienia 189—101°C.Przyklad IX. Streptomyces albidoflavus AXCC 15344 przenosi sie ze skosnej hodowli do kolby Sakaguchi o pojemnosci 500 ml, zawierajacej 106v mi pozywki o skladzie: 1 g gliteozy, 0,2 g poli- peptonu, 04 drozdzowego i 100 ml pitnej wody. Wartosc pH .pozywki wynosi 7,0. Hodowle .prowadzi sie na wstrzasance w temperaturze 30°C i po uplywie 24 godzin dodaje roztwór 100 mg 5-fenylo-7-nitro-l,3- -dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuazepinonu-2 w 2,0 ml etanolu. Hodowle prowadzi sie dalej w ciagu 6 dni, pe czym ekstrahuje chloroformem i wyciagi odparowuje do sucha pod zmniejszonym cisnieniem, otrzymujac 97 mg surowego produktu krystaliczne¬ go^ Produkt ten oczyszcza sie w sposób, opisany w przykladzie II, a nastepnie przefcrystalizowuje z etanolu, otrzymujac 3-hydroksy-5-fenylo-7-nitro- -l^-dwuwodoro-aH-l^benzodwuazepinon^, które¬ go budowe potwierdza widmo w podczerwieni.Przyklad X. W sposób, podany w przykla- 16 dzie IX, hoduje sie Streptomyces flavus AjTCC 3369 i po uplywie 24 godzin przenosi po 2% grzyb¬ ni do 10 kolb, zawierajacych po 100 ml pozywki o skladzie, podanym w przykladzie IX. Gdy nastapi dobry rozwój mikroorganizmu, do kazdej kolby do¬ daje sie 100 ml 5-/2'-fluoxofenylo/-7-chloro-l,3- -dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuazepinonu-2 w 2,0 ml etanolu i prowadzi hodowle dalej. Po uplywie 6 dni brzeczki ekstrahuje sie chloroformem i poste- io pujac w sposób, podany w przykladzie I, otrzymuje 755 mg surowego produktu krystalicznego. Produkt ten oczyszcza sie w sposób, opisany w przykladzie II, otrzymujac S-hydroksy-S-y^-fluoirofenylo/-?- -chlor-1,3 dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuazepinon-2 o temperaturze topnienia 193—194°C. Budowe pro¬ duktu potwierdza jego widmo w podczerwieni.Przyklad XI. Streptomyces fradiae ATCC 21 896 poddaje sie fermentacji w sposób, opisany w przykladzie I, po czym dodaje 5-fenyilo-7-metoksy- -l,3-dwuwodoro-2H-ll4-benzodwuazepinon-2, a na¬ stepnie ekstrahuje, jak w przykladzie I. Surowy produkt oczyszcza sie sposobem, opisanym w przy¬ kladzie II, otrzymujac 3-hydroksy-5-fenylo-7-me- toksy-l,3-dwuwodoro-2H^l,4-benzodwuazepinon-2, którego budowe potwierdza jego widmo w podczer¬ wieni.Przyklad XII. Streptomyces griseus ATCC 21897 poddaje sie fermentacji w sposób, opisany w przykladzie I, po czym dodaje 5-fenylo-7-metylo- -l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzodwuazepinonu-2, a na¬ stepnie ekstrahuje brzeczke, jak w przykladzie I.Surowy produkt oczyszcza sie sposobem, podanym w przykladzie II, otrzymujac 3-hydroksy-5-fenylo- -7-metylo-l,3-dwuwodoro-2H-l,4-,benzodwuazepi- non-2, którego budowe potwierdza- jego widmo w podczerwieni.Przyklad XIII. Streptomyces griseochromo- genes ATCC 14 511 przenosi sie ze skosnej hodowli do kolby Sakaguchi o pojemnosci 500 ml, zawie- 40 rajacej 100 ml pozywki o skladzie: 1 g glikozy, 1,5 g maki sojowej, 0,5 g NaCl i 100 ml wody pit¬ nej. Wartosc pH pozywki wynosi 7,0. Hodowle pro¬ wadzi sie w temperaturze 28°C na wstrzasarce i po 24 godzinach 29/o grzybni przenosi do kazdej z 10 45 kolb Sakaguchi, zawierajacych po 100 ml pozywki o wyzej podanym skladzie. Po 24 godzinach dalszej hodowli dodaje sie do kazdej kolby 100 mg 5-fe- nylo-7,9-dwuchloro-l,3-dwuwodoro-2H-l,4-benzo- dwuazepinonu^2 w 2,0 ml etanolu i prowadzi ho- 50 dowle w ciagu 7 dni. Nastepnie brzeczki ekstrahuje sie chloroformem i wyciagi odparowuje do sucha pod zmniejszonym cisnieniem. Pozostalosc oczyszcza sie w sposób, podany w przykladzie II, otrzymujac 3-hyd!roksy-5-fenylo-7,9-dwuchloro-l,3-dwuwodoro- 55 -2H-l,4-benzodwuazepinon-2, którego budowe po¬ twierdza jego widmo w podczerwieni.Przyklad XIV. Streptomyces benzodiazepi- nicus ATCC 21904 hoduje sie w sposób, opisany w przykladzie XIII i po 24 godzinach przenosi po 60 2% grzybni do 10 kolb, zawierajacych po 100 ml pozywki o skladzie, podanym w przykladzie XIII, a nastepnie dodaje 100 mg jednego ze zwiazków A, B, C, D, E o ogólnym wzorze 3, w którym R2 i R4 maja znaczenie, podane w tablicy IV. Zwiazki M te dodaje sie w roztworze w 2,0 ml etanolu.17 «7W8 Tablica V Symbol Ri R2 R4 A /CH2/2CH— -qp2- H Cl B HOCH2— —CB,2— F Cl C CH*0— —CH2— H Cl D CH.-S— —CH2— H CU Symlbol 1 Ri -tv2 R4 A wzór 6 H Cl H H Cl Tablica B HOCH2— —CH2 F Cl H F a 1 VI C CH3O— —CH2—H H a H H Cl r CH,S— —CH2 H Cl H H Cl i Tablica IV Symbol R2 R4 A Cl Cl B Cl NO2 c F Cl D F NO* E Cl Hodowle prowadzi sie w ciagu 7 dni, po czym brzeczki ekstrahuje sie w sposób, .podany w przy¬ kladzie I i produkt oczyszcza, jak w przykladzie II, otrzymujac pochodne 3-hydroksylowe zwiazków A, B, C, D, E o wyzej podanym wzorze. Budowe tych zwiazków potwierdzaja ich widma w podczer¬ wieni.Przyklad XV. Streptomyces fimicarius ATCC 21 900 hoduje sie na pozywce o skladzie, podanym w przykladzie XIII i po 24 godzinach po 2% grzybni przenosi do 10 kolb, zawierajacych po 100 ml pozywki o takim samym skladzie, jak w ho- flowli macierzystej. Po uzyskaniu dobrego rozwoju mikroorganizmów, do kazdej kolby dodaje sie 100 mg jednego ze zwiazków A, B, C, D o ogólnym wzorze 4, w którym Hu R? i R4 maja znaczenie podane w tablicy V. Zwiazki te dodaje sie w roz¬ tworze w 2,0 ml etanolu.Po dalszych 7 dniach prowadzenia hodowli brzeczki ekstrahuje sie w sposób, .podany w przy¬ kladzie I i produkty oczyszcza sposobem, opisa¬ nym w przykladzie II, otrzymujac zwiazki o wzo¬ rze 5, w którym R1} 1^ i R4 maja znaczenie, podane w tablicy VI. Budowe tych zwiazków potwierdza ich widmo w podczerwieni. i PL