PL399673A1

PL399673A1 - Method of conducting digital analytical and diagnostic determinations

Info

Publication number: PL399673A1
Application number: PL399673A
Authority: PL
Inventors: Pawel Debski; Piotr Garstecki; Adam Warchulski
Original assignee: Scope Fluidics Spólka Z Ograniczona Odpowiedzialnoscia
Priority date: 2012-06-26
Filing date: 2012-06-26
Publication date: 2014-01-07

Abstract

Przedmiotem wynalazku jest sposób wyznaczania nieznanego stezenia Cs czasteczek w próbce o znanej objetosci Vs, obejmujacy nastepujace kroki: a) utworzenie ze wspomnianej próbki N rozdzielnych pod-objetosci, o objetosci vi i rozcienczeniu di kazda, poprzez mieszanie przynajmniej czesci próbki z pewna objetoscia roztworu odczynników wymaganych do przeprowadzenia reakcji wzmocnienia obecnosci przynajmniej jednej poszukiwanej czasteczki do mierzalnego sygnalu, gdzie 0 < di ? 0 oznacza wspólczynnik rozcienczenia, to jest stosunek stezenia Ci czasteczek w danej pod-objetosci do nieznanego stezenia Cs czasteczek w próbce, di = Ci/Cs, zas i jest numerem pod-objetosci, przebiegajacym liczby calkowite od 0 do N - 1; b) przeprowadzenie w kazdej tak uzyskanej pod-objetosci procesu wzmocnienia obecnosci co najmniej jednej wspomnianej czasteczki do mierzalnego sygnalu; c) pomiar wspomnianego sygnalu w kazdej pod-objetosci i przypisanie tej pod-objetosci parametru ki, przy czym parametr ki przyjmuje wartosc 1, jezeli wynik wspomnianego pomiaru wskazuje na to, ze w danej pod-objetosci znajduje sie co najmniej jedna wspomniana czasteczka oraz 0 w przeciwnym wypadku; d) zbudowanie wektora k ? {ki} okreslajacego mikrostan ?, zawierajacego kolejno wartosci parametru ki, zmierzone w kroku c); charakteryzujacy sie tym, ze e) nieznane stezenie Cs czasteczek w próbce oblicza sie jako estymate bedaca funkcja wektora k zbudowanego w kroku c) i okreslajacego mikrostan ?: E(Cs) = f(?), przy czym co najmniej dwie sposród pod-objetosci utworzonych w kroku a) róznia sie od siebie wartoscia wspólczynnika modulacji zi, równemu ilorazowi zi = (vidi)/(v0d0).The subject of the invention is a method for determining an unknown concentration of Cs of particles in a sample of known volume Vs, comprising the following steps: a) creating from said sample N separate sub-volumes of volume vi and dilution di each by mixing at least a part of the sample with a certain volume of the reagent solution required to carry out the amplification reaction of the presence of at least one molecule of interest to a measurable signal, where 0 <di? 0 is the dilution factor, that is, the ratio of the concentration Ci of the molecules in the given sub-volume to the unknown concentration of Cs of the molecules in the sample, di = Ci / Cs, and i is the sub-volume number ranging from 0 to N - 1; b) performing in each sub-volume thus obtained a process of amplification of the presence of at least one said molecule for the measurable signal; c) measuring said signal in each sub-volume and assigning this sub-volume to the parameter ki, where the parameter ki takes the value 1 if the result of said measurement indicates that there is at least one said molecule in a given sub-volume, and 0 otherwise; d) building the vector k? {ki} defining the microstate ??, containing sequentially the values of the parameter ki, measured in step c); characterized by the fact that e) the unknown concentration of Cs of molecules in the sample is calculated as an estimate being a function of the vector k constructed in step c) and determining the microstate?: E (Cs) = f (?), with at least two of the sub-volumes created in step a) differ in the values of the modulation coefficient zi, equal to the quotient zi = (vidi) / (v0d0).