PL246770B1

PL246770B1 - Method for producing 2'-hydroxy-2-hydroxymethyl-3'-O-β-D-(4''-O-methylglucopyranosyl)-dihydrochalcone

Info

Publication number: PL246770B1
Application number: PL438353A
Authority: PL
Inventors: Agnieszka Krawczyk-Łebek; Edyta Kostrzewa-Susłow; Monika Dymarska; Tomasz Janeczko
Original assignee: Uniwersytet Przyrodniczy we Wrocławiu
Priority date: 2021-07-05
Filing date: 2021-07-05
Publication date: 2025-03-03
Also published as: PL438353A1

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest 2'-hydroksy-2-hydroksymetylo-3'-O-β-D-(4"-O-metyloglukopiranozylo)dihydrochalkon o wzorze 2 oraz sposób wytwarzania 2'-hydroksy-2-hydroksymetylo-3'-O-β-D-(4"-O-metyloglukopiranozylo)-dihydrochalkonu polegający na tym, że do podłoża odpowiedniego dla grzybów strzępkowych wprowadza się szczep Beauveria bassiana KCH J1.5, następnie po upływie co najmniej 72 godzin do hodowli wprowadza się substrat, którym jest 2'-hydroksy-2-metylochalkon o wzorze 1, rozpuszczony w rozpuszczalniku organicznym mieszającym się z wodą, transformację prowadzi się w temperaturze od 20 do 30 stopni Celsjusza, przy ciągłym wstrząsaniu, co najmniej 96 godzin, po czym produkt ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą i oczyszcza chromatograficznie, przy czym produkt reakcji jakim jest 2'-hydroksy-2-hydroksymetylo-3'-O-β-D-(4"-O-metyloglukopiranozylo)-dihydrochalkon o wzorze 2 znajduje się we frakcji o pośredniej polarności, w drugim paśmie od linii startu.The subject of the application is 2'-hydroxy-2-hydroxymethyl-3'-O-β-D-(4"-O-methylglucopyranosyl)dihydrochalcone of formula 2 and a method for producing 2'-hydroxy-2-hydroxymethyl-3'-O-β-D-(4"-O-methylglucopyranosyl)dihydrochalcone, which comprises introducing Beauveria bassiana KCH J1.5 strain into a medium suitable for filamentous fungi, then after at least 72 hours a substrate is introduced into the culture, which is 2'-hydroxy-2-methylchalcone of formula 1, dissolved in an organic solvent miscible with water, the transformation is carried out at a temperature of 20 to 30 degrees Celsius, with continuous shaking, for at least 96 hours, after which the product is extracted with an organic solvent immiscible with water and purified chromatographically, wherein the reaction product, which is 2'-Hydroxy-2-hydroxymethyl-3'-O-β-D-(4"-O-methylglucopyranosyl)dihydrochalcone of formula 2 is located in the fraction of intermediate polarity, in the second band from the starting line.

Description

Opis wynalazkuDescription of the invention

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania 2’-hydroksy-2-hydroksymetylo-3’-O-/>-D-(4^::-O -metyloglukopiranozylo)-dihydrochalkonu.The subject of the invention is a method for preparing 2'-hydroxy-2-hydroxymethyl-3'-O-/>-D-(4 ^:: -O-methylglucopyranosyl)dihydrochalcone.

Wynalazek może znaleźć zastosowanie do wytwarzania związku przeciwutleniającego, przeciwdrobnoustrojowego, substancji wzmacniającej smak i potencjalnego słodzika w preparatach farmaceutycznych, produktach spożywczych oraz formulacjach kosmetycznych.The invention may find application in the production of an antioxidant, antimicrobial compound, a flavor enhancer and a potential sweetener in pharmaceutical preparations, food products and cosmetic formulations.

Naturalne flawonoidy z jedną lub kilkoma grupami metylowymi występują w roślinach sporadycznie. Z azjatyckiego drzewa Syzygium nervosum (Cleistocalyx operculatus) izolowano C- i O-metylowane chalkony: (E)-4,2’,4’-trihydroksy-6’-metoksy-3’,5’-dimetylochalkon, (E)-2’,4’-dihydroksy-6’-metoksy-3’,5’-dimetylochalkon, (E)-2’,4’-dihydroksy-6’-metoksy-3’-metylochalkon, (E)-2,2’,4’-trihydroksy-6’-metoksy-3’,5’-dimetylochalkon. Związki te wykazywały silną inhibicję wobec enzymów pochodzących od dwóch szczepów wirusa grypy: H1N1 oraz H9N2. Blokowały one działanie neuraminidaz, umożliwiających wirusom opuszczanie zakażonych komórek poprzez rozkład ich błon komórkowych (Dao T. T., Tung B. T., Nguyen P. H., Thuong P. T., Yoo S. S., Kim E. H., Kim S. K., Oh W. K. C-methylated flavonoids form Cleistocalyx operculatus and their inhibitory effects on novel influenza A (H1N1) neuraminidase. Journal of Natural Products 2010, 73, 1636-1642).Natural flavonoids with one or more methyl groups occur sporadically in plants. From the Asian tree Syzygium nervosum (Cleistocalyx operculatus), C- and O-methylated chalcones were isolated: (E)-4,2',4'-trihydroxy-6'-methoxy-3',5'-dimethylchalcone, (E)-2',4'-dihydroxy-6'-methoxy-3',5'-dimethylchalcone, (E)-2',4'-dihydroxy-6'-methoxy-3'-methylchalcone, (E)-2,2',4'-trihydroxy-6'-methoxy-3',5'-dimethylchalcone. These compounds showed strong inhibition of enzymes derived from two strains of influenza virus: H1N1 and H9N2. They blocked the action of neuraminidases, which enable viruses to leave infected cells by breaking down their cell membranes (Dao T. T., Tung B. T., Nguyen P. H., Thuong P. T., Yoo S. S., Kim E. H., Kim S. K., Oh W. K. C-methylated flavonoids form Cleistocalyx operculatus and their inhibitory effects on novel influenza A (H1N1) neuraminidase. Journal of Natural Products 2010, 73, 1636-1642).

Naturalne dihydrochalkony floretyna i jej glikozyd florydzyna, które występują w skórce i miąższu jabłka, wykazują licznie udokumentowane właściwości prozdrowotne: antyoksydacyjną, przeciwzapalną, przeciwcukrzycową, przeciwnowotworową i kardioprotekcyjną (Choi Y. Biochemical basis of anti-cancer-effects of phloretin - a natural dihydrochalcone. Molecules 2018, 24, 278; Tian L., Cao J., Zhao T., Liu Y., Khan A., Cheng G. The bioavailability, extraction, biosynthesis and distribution of natural dihydrochalcone: phloridzin. International Journal of Molecular Sciences 2021,22, 962).Natural dihydrochalcones phloretin and its glycoside phloridzin, which occur in the skin and flesh of apples, have numerous documented health-promoting properties: antioxidant, anti-inflammatory, antidiabetic, anticancer and cardioprotective (Choi Y. Biochemical basis of anti-cancer-effects of phloretin - a natural dihydrochalcone. Molecules 2018, 24, 278; Tian L., Cao J., Zhao T., Liu Y., Khan A., Cheng G. The bioavailability, extraction, biosynthesis and distribution of natural dihydrochalcone: phloridzin. International Journal of Molecular Sciences 2021,22, 962).

W badaniach nad dihydrochalkonem naringiny z udziałem transgenicznych myszy jako modeli zwierzęcych choroby Alzheimera, zaobserwowano efekt złagodzenia deficytów poznawczych, co stwarza możliwość zastosowania tego związku jako środka leczniczego (Yang W., Zhou K., Zhou Y., An Y., Hu T., Lu J., Huang S., Pei G. Narindin dihydrochalcone ameliorates cognitive deficits and neuropatholody in APP/PS1 Transgenic Mice. Frontiers in Aging Neuroscience 2018, 10, 169).In studies on naringin dihydrochalcone using transgenic mice as animal models of Alzheimer's disease, the effect of alleviating cognitive deficits was observed, which creates the possibility of using this compound as a therapeutic agent (Yang W., Zhou K., Zhou Y., An Y., Hu T., Lu J., Huang S., Pei G. Narindin dihydrochalcone ameliorates cognitive deficits and neuropatholody in APP/PS1 Transgenic Mice. Frontiers in Aging Neuroscience 2018, 10, 169).

Dihydrochalkony wykazują słodki smak i mogą znaleźć zastosowanie jako prozdrowotne słodziki (Janeczko T., Gładkowski W., Kostrzewa-Susłow E. Microbial transformations of chalcones to produce food sweetener derivatives. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 2013, 98, 55-61; Łużny M., Kozłowska E., Kostrzewa-Susłow E., Janeczko T. Highly efective, regiospecific hydrogenation of methoxychalcone by Yarrowia lipolytica enables production of food sweeteners. Catalysts 2020, 10, 1135). Najlepiej poznany i zbadany dihydrochalkon pozyskiwany ze skórek owoców cytrusowych - dihydrochalkon neohesperydyny (E-959) został dopuszczony do stosowania jako słodzik i substancja wzmacniająca smak, a jego zastosowanie reguluje Rozporządzenie Komisji Europejskiej nr 1129/2011 z 11 listopada 2011 r.Dihydrochalcones have a sweet taste and can be used as health-promoting sweeteners (Janeczko T., Gładkowski W., Kostrzewa-Susłow E. Microbial transformations of chalcones to produce food sweetener derivatives. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 2013, 98, 55-61; Łużny M., Kozłowska E., Kostrzewa-Susłow E., Janeczko T. Highly effective, regiospecific hydrogenation of methoxychalcone by Yarrowia lipolytica enables production of food sweeteners. Catalysts 2020, 10, 1135). The best known and studied dihydrochalcone obtained from citrus fruit peels - neohesperidin dihydrochalcone (E-959) has been approved for use as a sweetener and flavour enhancer, and its use is regulated by European Commission Regulation No. 1129/2011 of 11 November 2011.

Większość flawonoidów, poza katechinami, jest obecna w roślinach w połączeniu z cukrami, jako ^-glikozydy. Glikozylacja skutkuje: wzrostem rozpuszczalności w wodzie i stabilności cząsteczki flawonoidu oraz przyswajalności przyjmowanych z pokarmem związków flawonoidowych. Zasadniczo glukozydy są jedynymi glikozydami, które mogą być absorbowane w jelicie cienkim. Natomiast flawonoidy niezaabsorbowane w jelicie cienkim oraz zaabsorbowane flawonoidy wydzielone z żółcią ulegają degradacji wraz z rozerwaniem struktury pierścieniowej przez mikroorganizmy (Hollman, P. C. Absorption, bioavailability, and metabolism of flavonoids. Pharmaceutical Biology, 2004, 42, 74-83; Plaza, M.; Pozzo, T.; Liu, J.; Gulshan Ara, K. Z.; Turner, C.; Nordberg Karlsson, E. Substituent effects on in vitro antioxidizing properties, stability, and solubility in flavonoids. Journal of Agricultural Food Chemistry, 2014, 62, 3321-3333).Most flavonoids, except catechins, are present in plants in combination with sugars, as β-glycosides. Glycosylation results in: increased water solubility and stability of the flavonoid molecule and the absorption of flavonoid compounds taken with food. In general, glucosides are the only glycosides that can be absorbed in the small intestine. In contrast, flavonoids not absorbed in the small intestine and absorbed flavonoids secreted with bile undergo degradation with the disruption of the ring structure by microorganisms (Hollman, P. C. Absorption, bioavailability, and metabolism of flavonoids. Pharmaceutical Biology, 2004, 42, 74-83; Plaza, M.; Pozzo, T.; Liu, J.; Gulshan Ara, K. Z.; Turner, C.; Nordberg Karlsson, E. Substituent effects on in vitro antioxidant properties, stability, and solubility in flavonoids. Journal of Agricultural Food Chemistry, 2014, 62, 3321-3333).

Hollman i in., wykazali, że cząsteczka glukozy przyłączona w pozycji 3 kwercetyny (3,3’,4’,5,7-pentahydroksyflawon) zwiększa absorpcję tego związku w jelicie cienkim do 52%, w porównaniu z 24% absorpcją aglikonu kwercetyny i 17% rutynozydu kwercetyny (Hollman, P. C.; Bijsman, M. N. C. P.; van Gameren, Y.; Cnossen, E. P. J.; de Vries, J. H.; Katan, M. B. The sugar moiety is a major determinant of the absorption of dietary flavonoid glycosides in man. Free Radical Research, 1999, 31,569-573).Hollman et al., showed that a glucose molecule attached at the 3-position of quercetin (3,3',4',5,7-pentahydroxyflavone) increases the absorption of this compound in the small intestine to 52%, compared with 24% absorption for quercetin aglycone and 17% for quercetin rutinoside (Hollman, P. C.; Bijsman, M. N. C. P.; van Gameren, Y.; Cnossen, E. P. J.; de Vries, J. H.; Katan, M. B. The sugar moiety is a major determinant of the absorption of dietary flavonoid glycosides in man. Free Radical Research, 1999, 31, 569-573).

Znany jest szczep Beauveria bassiana KCH J1.5 ujawniony w literaturze (Kozłowska E., Urbaniak M., Hoc N., Grzeszczuk J., Dymarska M., Stępień Ł., Pląskowska E., Kostrzewa-Susłow E., Janeczko T. Cascade biotransformation of dehydroepiandrosterone (DHEA) by Beauveria species. Scientific Reports, 2018, 8: 13449).The Beauveria bassiana KCH J1.5 strain is known and has been disclosed in the literature (Kozłowska E., Urbaniak M., Hoc N., Grzeszczuk J., Dymarska M., Stępień Ł., Pląskowska E., Kostrzewa-Susłow E., Janeczko T. Cascade biotransformation of dehydroepiandrosterone (DHEA) by Beauveria species. Scientific Reports, 2018, 8: 13449).

W ostatnich latach, w leczeniu różnych chorób i ich zapobieganiu, coraz większe znaczenie zyskują związki pochodzenia naturalnego oraz ich odpowiedniki uznawane za naturalne, które uzyskano na drodze przekształceń mikrobiologicznych. Dlatego istotne jest opracowywanie nowych metod wytwarzania związków aktywnych biologicznie na drodze biotransformacji, użytecznych dla przemysłu farmaceutycznego, kosmetycznego i spożywczego.In recent years, in the treatment and prevention of various diseases, compounds of natural origin and their equivalents considered natural, which were obtained through microbiological transformations, have become increasingly important. Therefore, it is important to develop new methods of producing biologically active compounds through biotransformation, useful for the pharmaceutical, cosmetic and food industries.

W dostępnej literaturze brak jest informacji na temat otrzymywania 2’-hydroksy-2-hydroksymetylo-3’-O-/>-D-(4^::-O-metyloglukopiranozylo)-dihydrochalkonu.There is no information in the available literature on the preparation of 2'-hydroxy-2-hydroxymethyl-3'-O-/>-D-(4 ^:: -O-methylglucopyranosyl)-dihydrochalcone.

Istota sposobu według wynalazku polega na tym, że do podłoża odpowiedniego dla grzybów strzępkowych wprowadza się szczep Beauveria bassiana KCH J1.5. Po upływie co najmniej 72 godzin do hodowli wprowadza się substrat, którym jest 2’-hydroksy-2-metylochalkon, rozpuszczony w rozpuszczalniku organicznym mieszającym się z wodą. Transformację prowadzi się w temperaturze od 20 do 30 stopni Celsjusza, przy ciągłym wstrząsaniu, przez co najmniej 96 godzin. Następnie produkt ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą oraz oczyszcza chromatograficznie. 2’-Hydroksy-2-hydroksymetylo-3’-O-^-D-(4”- O- metyloglukopiranozylo)-dihydrochalkon znajduje się we frakcji o pośredniej polarności, w drugim paśmie od linii startu.The essence of the method according to the invention consists in introducing the Beauveria bassiana KCH J1.5 strain into a medium suitable for filamentous fungi. After at least 72 hours, the substrate, which is 2'-hydroxy-2-methylchalcone, dissolved in an organic solvent miscible with water, is introduced into the culture. The transformation is carried out at a temperature of 20 to 30 degrees Celsius, with continuous shaking, for at least 96 hours. Then the product is extracted with an organic solvent immiscible with water and purified chromatographically. 2'-Hydroxy-2-hydroxymethyl-3'-O-^-D-(4"-O-methylglucopyranosyl)-dihydrochalcone is found in the fraction of intermediate polarity, in the second band from the starting line.

Korzystnie jest, gdy stosunek masy dodawanego substratu do objętości hodowli wynosi 0,1 mg : 1 cm³.It is advantageous when the ratio of the mass of the added substrate to the volume of the culture is 0.1 mg : 1 cm ³ .

Korzystnie także jest, gdy proces prowadzi się w temperaturze 25 stopni Celsjusza.It is also advantageous if the process is carried out at a temperature of 25 degrees Celsius.

Dodatkowo, korzystnie jest, gdy transformację prowadzi się przez 9 dni.Additionally, it is beneficial if the transformation is carried out for 9 days.

Korzystnie również jest, gdy oczyszczanie prowadzi się wykorzystując cienkowarstwową chromatografię preparatywną w układzie eluującym z chloroformem i metanolem w stosunku objętościowym 9 : 1.It is also advantageous when the purification is carried out using thin-layer preparative chromatography in an eluting system with chloroform and methanol in a volume ratio of 9:1.

Postępując zgodnie z wynalazkiem, w wyniku działania układu enzymatycznego zawartego w komórkach szczepu Beauveria bassiana KCH J1.5, następuje redukcja wiązania podwójnego oraz hydroksylacja przy C-2-CH3 oraz hydroksylacja i przyłączenie 4-metoksy-^-D-glukozy przy C-3’. Uzyskany w ten sposób produkt wydziela się z wodnej kultury mikroorganizmu, znanym sposobem, przez ekstrakcję rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą (octan etylu).In accordance with the invention, as a result of the action of the enzymatic system contained in the cells of the Beauveria bassiana KCH J1.5 strain, the reduction of the double bond and hydroxylation at C-2-CH3 and hydroxylation and attachment of 4-methoxy-^-D-glucose at C-3' occur. The product obtained in this way is isolated from the aqueous culture of the microorganism in a known manner, by extraction with an organic solvent immiscible with water (ethyl acetate).

Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie 2’-hydroksy-2-hydroksymetylo-3’-O-/>-D-(4^::-O-metyloglukopiranozylo)-dihydrochalkonu w temperaturze pokojowej i przy pH naturalnym dla szczepu oraz wykorzystując mikroorganizm niebędący patogenem ludzkim.The main advantage of the invention is the obtaining of 2'-hydroxy-2-hydroxymethyl-3'-O-/>-D-(4 ^:: -O-methylglucopyranosyl)-dihydrochalcone at room temperature and at a natural pH for the strain and using a microorganism that is not a human pathogen.

Wykorzystanie biotransformacji, zamiast syntezy chemicznej, umożliwia, w sposób przyjazny dla środowiska, uzyskanie związków o większej biodostępności i aktywności biologicznej, niż użyte substraty.The use of biotransformation instead of chemical synthesis makes it possible, in an environmentally friendly manner, to obtain compounds with greater bioavailability and biological activity than the substrates used.

Wynalazek jest bliżej objaśniony na przykładzie wykonania.The invention is explained in more detail with reference to an example embodiment.

PrzykładExample

Do kolby stożkowej o pojemności 2000 cm³, w której znajduje się 500 cm³ sterylnej pożywki zawierającej 10 g aminobaku i 30 g glukozy, wprowadza się szczep Beauveria bassiana KCH J1.5. Po 72 godzinach jego wzrostu dodaje się 50 mg 2’-hydroksy-2-metylochalkonu o wzorze 1, rozpuszczonego w 1 cm³ dimetylosulfotlenku. Transformację prowadzi się w 25 stopniach Celsjusza przy ciągłym wstrząsaniu przez 9 dni. Następnie mieszaninę poreakcyjną ekstrahuje się dwukrotnie octanem etylu, osusza bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Otrzymany ekstrakt oczyszcza się chromatograficznie z zastosowaniem jako eluentu mieszaniny chloroformu i metanolu w stosunku objętościowym 9 : 1. Produkt znajduje się we frakcji o pośredniej polarności, w drugim paśmie od linii startu.Into a 2000 cm ³ conical flask containing 500 cm ³ of sterile medium containing 10 g of aminobac and 30 g of glucose, the Beauveria bassiana KCH J1.5 strain is introduced. After 72 hours of its growth, 50 mg of 2'-hydroxy-2-methylchalcone of formula 1, dissolved in 1 cm ³ of dimethyl sulfoxide, is added. The transformation is carried out at 25 degrees Celsius with continuous shaking for 9 days. Then the reaction mixture is extracted twice with ethyl acetate, dried with anhydrous magnesium sulfate and the solvent is evaporated. The obtained extract is purified by chromatography using a mixture of chloroform and methanol in a volume ratio of 9:1 as eluent. The product is found in the fraction of intermediate polarity, in the second band from the starting line.

Na tej drodze otrzymuje się 4,5 mg 2’-hydroksy-2-hydroksymetylo-3’-O-^-D-(4”-O -metyloglukopiranozylo)-dihydrochalkonu (wydajność 4,8%). Stopień konwersji substratu według HPLC >99%.In this way, 4.5 mg of 2'-hydroxy-2-hydroxymethyl-3'-O-^-D-(4"-O -methylglucopyranosyl)dihydrochalcone is obtained (yield 4.8%). Degree of substrate conversion by HPLC >99%.

Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi.The obtained product is characterized by the following spectral data.

PL 246770 Β1PL 246770 Β1

Opis sygnałów pochodzących z widma ¹H NMR (601 MHz, Aceton-de)Description of signals from the ¹ H NMR spectrum (601 MHz, Acetone-de)

Sygnały pochodzące od szkieletu flawonoidowego Signals from the flavonoid skeleton Sygnały pochodzące od jednostki cukrowej Signals from the sugar unit δ [ppm] δ [ppm] J[Hz] J[Hz] H H δ [ppm] δ [ppm] J [Hz] J [Hz] H H 3,46 (m) 3.46 (m) a and 4,91 (d) 4.91 (d) 7,8 7,8 1” 1” 3,10 (m) 3.10 (m) β β 3,49 (m) 3.49 (m) 2 2 7,40 (td) 7.40 (td) 7,2; 1,0 7.2; 1.0 3 3 3,62 (m) 3.62 (m) 3” 3” 7,20 (m) 7.20 (m) 4 4 3,22 (m) 3.22 (m) 4” 4” 7,20 (m) 7.20 (m) 5 5 3,43 (m) 3.43 (m) 5” 5” 7,28 (m) 7.28 (m) 6 6 3,81 (ddd) 3,68 (ddd) 3.81 (ddd) 3.68 (ddd) 11,6; 5,2; 2,2 11,8; 7,3; 4,8 11.6; 5.2; 2.2 11.8; 7.3; 4.8 6” 6" 7,40 (td) 7.40 (td) 7,2; 1,0 7.2; 1.0 4’ 4’ 3,56 (s) 3.56 (s) C4- OCHa C4- OCha 6,85 (td) 6.85 (td) 8,1; 2,0 8.1; 2.0 5’ 5’ 4,59 (d) 4.59 (d) 3,9 3.9 C2’-OH C2'-OH 7,65 (dd) 7.65 (dd) 8,2; 1,3 8.2; 1.3 6’ 6’ 4,39 (d) 4.39 (d) 4,0 4.0 C3-OH C3-OH 4,73 (d) 4.73 (d) 5,5 5.5 2-CH2-OH 2-CH2-OH 3,74 (dd) 3.74 (dd) 11,1; 5,9 11.1; 5.9 C6”-OH C6”-OH 4,15 (t) 4.15 (t) 5,4 5.4 2-CH₂-OH 2-CH2 _-OH 12,17 (s) 12.17 (s) C2’-OH C2'-OH

Claims

Patent Claims

1. A method for producing 2'-hydroxy-2-hydroxymethyl-3'-O-/?-D-(4"-O-methylglucopyranosyl)-dihydrochalcone, characterized in that the Beauveria bassiana KCH J1.5 strain is introduced into a medium suitable for filamentous fungi, then after at least 72 hours a substrate is introduced into the culture, which is 2'-hydroxy-2-methylchalcone of formula 1, dissolved in an organic solvent miscible with water, the transformation is carried out at a temperature of 20 to 30 degrees Celsius, with continuous shaking, for at least 96 hours, after which the product is extracted with an organic solvent immiscible with water and purified chromatographically, wherein the reaction product, which is 2'-hydroxy-2-hydroxymethyl-3'-O-/?-D-(4"-O-methylglucopyranosyl)-dihydrochalcone of formula 2 is found in the fraction of intermediate polarity, in the second band from the starting line.

2. The method according to claim 1, characterized in that the ratio of the mass of the added substrate to the volume of the culture is 0.1 mg : 1 cm ³ .

3. The method according to claim 1, characterized in that the process is carried out at a temperature of 25 degrees Celsius.

4. The method according to claim 1, characterized in that the transformation is carried out for 9 days.

5. The method according to claim 1, characterized in that the purification is carried out using thin-layer preparative chromatography in an eluting system of chloroform: methanol in a volume ratio of 9:1.