Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowych cefalosporyn o wzorze ogólnym 1 wzglednie ich mozliwych tautomerów, ich fizjolo¬ gicznie dopuszczalnych soli z nieorganicznymi albo organicznymi zasadami.We wzorze ogólnym 1, Y oznacza atom wodoru lub grupe metoksylowa i A o ile Y oznacza gru¬ pe metoksylowa, oznacza grupe fenylowa, 4-hydro- ksyfenylowa, albo 2-tienylowa, albo o ile Y ozna¬ cza atom wodoru albo grupe metoksylowa A ozna¬ cza grupe 2,3-dihydro-2-imino-tiazol-4-ilowa, D oznacza grupe acetoksylowa albo grupe-SHet przy czym Het oznacza grupe 2-metylo-l,3,4-tiadiazol- -5-ilowa, albo 4-metylo-5,6-diokso-l,2,4-triazin-3- -ilowa, lub gruipe o wzorze ogólnym 2, w którym n oznacza liczby 1 lub 2, a Ri oznacza atom wo¬ doru, grupe hydroksylowa, acetyloaminowa lub metylowa, R oznacza grupe o wzorze ogólnym —NHRf, w którym R* oznacza grupe 2-tienylome- tylowa, grupe 3-pirydylowa, 2-pirymidynylomety- lowa, 2-furylometylowa, 2-imidazolilometylowa, 3-pirydylometylowa albo grupe 5^pirymidynylome- tylowa, przy czym grupy te moga byc podstawione grupa metylowa, hydroksylowa lub sulfamylowa, E oznacza atom wodoru.Poniewaz E oznacza atom wodoru, wówczas w mysl wynalazku sposób obejmuje równiez otrzy¬ mywanie farmakologicznie dopuszczalnych soli z nieorganicznymi albo organicznymi zasadami ta¬ kimi jak np. soli metali alkalicznych lub soli me- 10 tali ziem alkalicznych, na przyklad soli sodowych, potasowych, magnezowych albo soli wapniowych, soli amonowych albo soli z aminami organiczny¬ mi takimi jak np. z trietyloamina lub dicyklohek- syloamina.Gwiazdka przy atomie wegla w zwiazkach o wzorze ogólnym 1 oznacza centrum asymetrii.Jezeli D oznacza grupe pirydyniowa albo amino- karbonylopirydyniowa to zwiazki te okresla wzór la.Szczególnie korzystne sa zwiazki o wzorze ogól¬ nym 1, w którym A ma wyzej podane znaczenie, Y i R maja wyzej podane znaczenie, D oznacza grupe acetoksylowa albo grupe SHet, w której 15 Het oznacza grupe 2-metylo-l,3,4-tiadiazol-5-ilowa, grupe 4-metylo-5,6-diokso-l,2,4-triazyn-3-ilowa albo tetrazol-5-ilowa grupe o wzorze 2, w którym pod¬ stawnik Ri i n maja wyzej podane znaczenie.Zwiazki cefalosporynowe o wzorze ogólnym 1 20 i nizej opisane produkty posrednie wystepuja w 2 odmianch tautomerycznych odnosnie pierscienia pirymidyny. Która z przedstawionych odmian 1 albo 1' przewaza, zalezy zwlaszcza od kazdorazo¬ wo stosowanego rozpuszczalnika i. rodzaju pod- 25 stawnika R. Jesli A oznacza aminotiazol, moga równiez odnosnie tego pierscienia, wystepowac od¬ miany tautomeryczne okreslone wzorami 6 i 7.Rozumie sie samo przez sie, ze podane na wstepie zwiazki o wzorze ogólnym 1 obejmuja zawsze 30 wszystkie tautomery. 130 848130 846 3 4 Zwiazki o wzorze ogólnym 1 moga wystepowac odnosnie oznaczonego gwiazdka centrum asymetrii C*, w dwu mozliwych konfiguracjach R i S jak równiez takze w mieszaninie ich.Zwiazki o wzorze ogólnym 1 wytwarza sie przez reakcje kwasu 7-aminocefalosporanowego o wzorze ogólnym 3 albo jego soli z nieorganicznymi albo organicznymi kwasami, przy czym A, D, i Y maja wyzej podane znaczenie, z pochodna pirymidyny o wzorze ogólnym 4, w którym R ma wyzej po¬ dane znaczenie, a B oznacza grupe -NCO albo reaktywna pochodna grupy -NHCOOH jak np. grupe -NHCOC1, -NHCOBr lub grupe o wzorze 8, przy czym grupa -NHCOC1 jest szczególnie ko¬ rzystna.Mozna takze stosowac mieszaniny tych pochod¬ nych pirymidyny o wzorze ogólnym 4, w którym B posiada czesciowo takie i czesciowo inne z wy¬ mienionych poprzednio znaczen, np. grupy -NCO i -NH-COC1 równoczesnie obok siebie.Reakcje korzystnie prowadzi sie w wodzie lub w dowolnych mieszaninach wody z mieszajacymi sie z woda organicznymi rozpuszczalnikami takimi jak ketony, np. aceton; cykliczne etery, np. tetra- hydrofuran lub dioksan; nitryle np. acetonitryl; formamidy np. dimetyloformamid, dimetylosulfo- tlenek albo alkohole np. izopropanol albo w hek- sametanolu. Szczególnie korzystna jest mieszanina tetrahydrofuranu z woda. Utrzymuje sie przy tym wartosc pH mieszaniny reakcyjnej przez dodanie zasady albo stosowanie roztworu buforowego, w zakresie pH 6,5—8,0.Ze zwiazków o wzorze 1, wytworzonych sposo¬ bem wedlug wynalazku, w których E oznacza in¬ ny podstawnik niz atom wodoru usuwa sie grupy ochronne w znany sposób, wytwarzajac zwiazki w których E oznacza atom wodoru, posiadajace ja¬ ko zwiazki koncowe duze znaczenie.Przykladowo, zwiazki o wzorze ogólnym 1, w których E oznacza grupe difenylometylowa trak¬ tuje sie w znany sposób anizolem i kwasem tri- fluorooctowym, w celu usuniecia ochronnej grupy estrowej, albo mozna równiez ochronna grupe si- lilowa usuwac w znany sposób na drodze wodnej hydrolizy.Ze zwiazków o wzorze 1, wytworzonych sposo¬ bem wedlug wynalazku, w których A oznacza gru¬ pe aminotiazolilowa i A' ma inne znaczenie niz wodór, usuwa sie w znany sposób ochronna grupe iminowa, wytwarzajac zwiazki, w których A' ozna¬ cza atom wodoru, posiadajace jako zwiazki kon¬ cowe duze znaczenie.Przykladowo, zwiazki o wzorze ogólnym 1, w którym A oznacza aminotiazolilowa grupe, A' oznacza grupe chloroetylowa i E oznacza grupe difenylometylowa traktuje sie najpierw tiomoczni¬ kiem w celu usuniecia grupy chloroacetylowej i nastepnie traktuje w znany sposób anizolem i kwasem trifluorooctowym w celu usuniecia estrowej grupy ochronnej (opis patentowy RFN DT-OS nr 2924 296), albo mozna najpierw odszcze- pic estrowa grupe ochronna i nastepnie usunac N-metyloditiokarbaminianem sodu ochronna grupe chloroacetylowa (Europejski opis patentowy EP-OS nr 2586).Zwiazki o wzorze 1, w których E oznacza kation sodowy albo potasowy wytwarza sie w reakcji od¬ powiednich wolnych kwasów zwiazków o wzo¬ rze 1, w którym E oznacza atom wodoru z odpo¬ wiednimi jonami tworzacymi sole. Wlasciwa jest tu, na przyklad powszechnie stosowana w chemii penicilin i cefalosporyn, reakcja z etylokapronia- nem sodowym albo reakcja z wodoroweglanem so¬ dowym i nastepnie liofilizacja.Antybiotyki cefalosporynowe o wzorze ogólnym 1, w którym E oznacza atom wodoru mozna w znany sposób przeprowadzac w estry acyloksyal- kilowe w których E oznacza na przyklad grupe piwaloiloksymetylowa o wzorze 9, poddajac reak¬ cji sól metalu alkalicznego kwasu cefalosporyno- karboksylowego np. sól sodowa albo potasowa z halogenkiem piwaloiloksymetylu o wzorze ogólnym 10, w którym Hal oznacza atom chloru, bromu lub jodu. Dalszymi wlasciwymi halogenkami acylo- ksyalkilowymi sa np. octan chlorometylu, propio- nian bromoetylu albo octan 1-bromoetylu.Przy zastosowaniu odpowiednich zwiazków wyjs¬ ciowych mozliwe jest wytwarzanie zwiazków o wzorze ogólnym 1 w postaci racematów albo w postaci poszczególnych izomerów. Jesli produkt koncowy otrzymuje sie w postaci D, L mozliwe jest wytworzenie czystych D- i L-diastereoizome- rów na drodze preparatywnej chromatografii cie¬ czowej (HPLC). Wynalazek obejmuje sposób wy¬ twarzania racematów oraz izomerów.Zwiazki wyjsciowe o wzorze ogólnym 4 moz.ia wytwarzac, na przyklad w reakcji odpowiedniej 5-aminopirymidyny o wzorze ogólnym 5, w któ¬ rym R ma wyzej zdefiniowane znaczenie z fosge- nem. Reakcje prowadzi sie w rozpuszczalniku nie zawierajacym grup hydroksylowych, takim jak tetrahydrofuran, chlorek metylenu, chloroform, di- metoksyetan albo heksametanol w temperaturze —40 — +60°C, zwlaszcza —10° — +20°C. Zaleca sie przy tym wiazanie wytwarzajacego sie chloro¬ wodoru przez równomolowe ilosci obojetnej orga¬ nicznej zasady takiej jak trietyloamina albo piry¬ dyna.Jako rozpuszczalnik mozna takze stosowac nad¬ miar pirydyny. Jezeli- odnosna aminopirymidyna o wzorze ogólnym 5 trudno rozpuszcza sie w jed¬ nym z wymienionych rozpuszczalników mozna fos- genowanie prowadzic takze w fazie heterogennej.W szczególnie korzystnej formie wykonania ami- nopirymidyne o wzorze ogólnym 5 przez trakto¬ wanie srodkiem sililujacym takim jak heksamety- lodisilazan, trimetylochlorosilan w trietyloaminie, trimetylosililodietyloamina albo N,0-bis-trimeitylo- sililoacetamid mozna przeprowadzic w na ogól bar¬ dzo latwo rozpuszczalna w wymienionych rozpusz¬ czalnikach pojedynczo albo odpowiednio do obec¬ nych dajacych sie wymienic atomów wodorów, wielokrotnie sililowana aminopirydyne, która po¬ tem w reakcji z fosgenem daje odpowiedni zwia¬ zek o wzorze ogólnym 4, przy czym korzystnie reakcje prowadzi sie bez dodatku zasady. W zalez¬ nosci od rodzaju rozpuszczalnika, temperatury, ilosci i rodzaju ewentualnie stosowanej zasady, powstaje albo przewazajaca ilosc odpowiedniego izocyjanianu albo halogenku kwasu karbaminowe- 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60130 846 6 go, albo mieszanina tych obydwu zwiazków. Izo¬ cyjanian o wzorze ogólnym 4 w zaleznosci od wa¬ runków wystepuje takze czesciowo albo calkowicie jako izomer izocyjanianu l-(H)-oksazolo(5,4-d)piry- midyn-2-on o wzorze ogólnym 4a, albo w zalez- * nosci od rodzaju podstawnika R, jako jedno lub kilkakrotnie sililowany analog.Powstajace przez fosgenowanie produkty wyjs¬ ciowe o wzorze ogólnym 4, wzglednie ich miesza¬ niny albo ich ^ililowe produkty sa na ogól dobrze io rozpuszczalne w wyzej wymienionych rozpuszczal¬ nikach i moga byc bezposrednio po usunieciu nad¬ miaru fosgenu, bez dalszego oczyszczania, poddane reakcji z odpowiednimi pochodnymi cefalosporyny 0 wzorze ogólnym3. 15 Mozliwe jest równiez izolowanie produktu po¬ sredniego o wzorze ogólnym 4a, ewentualnie usu¬ niecie grup sililowych przy zastosowaniu protono¬ wego rozpuszczalnika takiego jak metanol lub wo¬ da, ewentualnie oczyszczenie na podstawie jego 20 rozpuszczalnosci i poddanie reakcji w wyzej przed¬ stawiony sposób.Synteza 2-podstawionej 5-amino-4-hydroksypiry- midyny o wzorze ogólnym 5 jest zasadniczo znana z literatury. Opisuja ja specjalne przyklady w opi- 25 sie patentowym RFN DT-OS nr 29 28 344. Synteza produktów wyjsciowych o wzorze ogólnym 3 jest znana z literatury.W tym celu wedlug opisu patentowego RFN DT-OS nr 29 24 296, jesli A oznacza grupe amino- 30 tiazolilowa poddaje sie reakcji pochodna cefalo¬ sporyny z aminokwasem zabezpieczonym przy gru¬ pie aminowej, w warunkach powszechnie stoso¬ wanych w chemii cefalosporyn i nastepnie od- szczepia sie jak zwykle grupy ochronne. (DT-OS 35 29 24 296).Stwierdzono, ze zwiazki o wzorze ogólnym 1 po¬ siadaja cenne wlasciwosci farmakologiczne, przy dobrym tolerowaniu ich przez organizm. Substan¬ cje czynne wytwarzane sposobem wedlug wyna- *& lazkUj moga byc dlatego stosowane w profilakty¬ ce i chemoterapii miejscowych i ogólnych infekcji w medycynie ludzkiej i weterynarii.Zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wynalaz¬ ku moga zapobiegac wzglednie leczyc przyklado- 45 wo nastepujace schorzenia dróg oddechowych, ja¬ my gardla i dróg moczowych.Zwiazki sa czynne zwlaszcza wobec Pharymgitis, Pneumonie, Peritonitis, Pyelonephritis, Otitis, Cy- stitis, Endocarditis, Bronchitis, Arthritis i po- w wszechnych ogólnych infekcji. Ponadto zwiazki te moga byc stosowane jako substancje konserwuja¬ ce materialy nieorganiczne albo organiczne, zwla¬ szcza organiczne takie, jak polimery, smary, far¬ by, wlókna, skóra, papier, drewno oraz srodki spo- 55 zywcfce. ^ Jest to mozliwe dlatego, ze zwiazki o wzorze ogólnym 1 wykazuja bardzo silne dzialanie zarów¬ no in vitro jak równiez in vivo, wobec szkodli¬ wych mikroorganizmów, zwlaszcza wobec gram- 60 dodatnich i gramujemnych bakterii i bakteriopo- dobnych mikroorganizmów, przy czym odznaczaja sie one zwlaszcza szerokim spektrum dzialania.Tymi pochodnymi cefalosporynowymi mozna le¬ czyc i/albo zapobiegac przykladowo miejscowymi 65 i/albo ogólnym schorzeniom wywolanym przez po¬ nizsze zarazki albo mieszaniny ponizszych zaraz¬ ków.Microroccaceae, jak Staphylokokki, Lactobacteriaceae, jak Streptokokki, Neisseriaceae, jak Neisserien, Corynebacteriaceae, jak bakterie Coryne, Enterobacteriaceae, jak bakterie Escherichiae gru¬ py Coli, Klabsiella bakterie, np. K. pneumoniae, Bakterie Proteae grupy Proteus, np. Proteua vul- garis, Bakterie Salmonelle, np. S. thyphimurium, Bakterie Shigella, np. Shigella dysenteriae, Bakterie Pseudomonas, np. Pseudomonas aerugi- nosa, Bakterie Aeromonas, np. Aeromonas liaue faciens, Spirillaceae, jak bakterie Vibrio, np. Vibrio cho- lerae, Parvobacteriaceae albo Brucellaceae, jak bakterie Pasteurella, Bakterie Brucella, np. Brucella abortus, Bakterie Haemophilus, np. Haemophilus influ- enzae, Bakterie Bordetella, np. Birdetella pertussis, Bakterie Moraxella, np. Moraxella lacunata, Bacterioidaceae, jak bakterie Bocteroides, Bakterie Fusiforme, np. Fusobacterium fisiforme; Bakterie Sphaerophorus, np. Sphaerophorus nec- rophorus, * Bacillaceae, jak aerobowe tworzace zarodniki, np.Becillus anthracis, anerobowe tworzone zarodniki Chlostridien, np. Chlostridium perfringens, Spirochaetaceae, jak bakterie Borrelia, Bakterie Treponema, np. Treponema pallidum, Bakterie Laptospira, jak Leptospira interrogans, Wyzej wyliczone zarazki nalezy przyjac przykla¬ dowo, a w zadnym przypadku ograniczajaco.W ponizszej tablicy 1 wyliczono niektóre typo¬ we zwlaszcza dobrze dzialajace zwiazki wytwarza¬ ne sposobem wedlug wynalazku.Dane fizyko-chemiczne tych zwiazków znajduja sie w przykladach których numery zamieszczone sa w ostatniej kolumnie tablicy Cefalosporyny, wzglednie ich sole sodowe o wzorze 11, którego podstawniki A, R2, Y, D przedstawiono szczególo¬ wo ponizej.Skutecznosc antybiotyków fJ-laktamowych wy¬ twarzanych sposobem wedlug wynalazku przedsta¬ wiaja przykladowo ponizsze badania. 1. Doswiadczenia in vitro: Do badan zastosowano metode prób kolejnych rozcienczen w ukladzie mikromiareczkowania. Ba¬ danie substancji na bakteriostaze (hamowanie roz¬ woju bakterii) prowadzono w cieklym srodowisku przy nastepujacych stezeniach: 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0,5, 0,25, 0,12, 0,06 \iglml Stosujac podloze o nastepujacym skladzie: 10 g peptonu, 8g eks¬ traktu miesnego-Oxid, 3 g chlorku sodowego, 2 g ortofosforanu dwusodowego uzupelnione woda do 100 ml, pH 7,2—7,4. Wiek kultury wyjsciowej wy¬ nosil okolo 20 godzin.Nastawienie zawiesiny zarazków prowadzono na fotometrze w/g Eppendorf'a (kiuweta o srednicy 14 mm i filtr 546 mm), na podstawie zmetnienia130 S46 Tablica 1 1 1 2 3 4 5 6 7 '¦¦ ' 8 9 " 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 A wzór 12 wzór 12 wzór 12 wzór 12 wzór 12 wzór 12 wzór 12 wzór 12 wzór 12 wzór 21 wzór 21 wzór 21 wzór 21 wzór 21 wzór 21 wzór 21 wzór 23 wzór 23 wzór 23 wzór 23 wzór 23 wzór 24 R2 wzór 13 wzór 15 wzór 16 wzór 16 wzór 16 wzór 16 wzór 16 wzór 19 wzór 16 wzór 16 wzór 16 wzór 16 wzór 13 wzór 15 wzór 22 wzór 13 wzór 16 wzór 16 wzór 16 wzór 13 wzór 15 wzór 16 Y H H H H —OCH3 H H H H —OCH3 —OCH3 —OCH3 —OCH3 -OCH3 —OCH3 —OCH3 —OCH3 —OCH3 —OCH3 -OCH3 —OCH3 —OCH3 D wzór 14 wzór 14 —OCOCH3 wzór 14 wzó: 14 wzór 17 wzór 18 wzór 14 wzór 20 wzór 14 —OCOCH3 wzór 17 wzór 14 wzór 14 wzór 14 wzór 14 wzór 14 wzór 14 —OCOCH3 wzór 14 wzór 14 wzór 14 Przyklad IX [ X | XII [ XI xvii 1 XX XXII XVI [ XIII [ II 1 III 1 IV t V vi 1 VII viii 1 XXIV xxvii 1 xxviii 1 v 1 VI 1 XXXIX porównawczej zawiesiny siarczanu baru, która po¬ wstaje przy dodaniu 3,0 ml 1 procentowego roz¬ tworu chlorku baru do 97 ml 1 procentowego kwa¬ su siarkowego. Po nastawieniu rozciencza sie dalej zarazki testowane roztworem soli kuchennej w stosunku 1:1500. 16 mg kazdorazowej substancji przenosi sie do 10 mililitrowej kolby miarowej i dopelnia rozpuszczalnikiem do kreski. Dalsze ko¬ lejne rozcienczenia prowadzi sie destylowana woda albo kazdorazowo stosowanym rozpuszczalnikiem.Zglebienia plytek do mikromiareczkowania na¬ pelnia sie 0,2 ml podloza, 0,01 ml odpowiednio roz¬ cienczonej substancji i kropla zawiesiny zarazków (0,01 ml) i inkubuje 18—20 godzin w temperatu¬ rze 37°C. Prowadzono zawsze kontrole rozpusz¬ czalnika. Odczytu dokonywano makroskopowo, przy czym kazdorazowo okreslano graniczne ste¬ zenie (=. najnizsze stezenie dzialajace jeszcze bak- teriostatycznie).. Jako organizmy testowane wykorzystano: Staphyiococcus aureus SG 511, Escherichia coli ATCC 11775, Pseudomonas aeruginosa Hambur- gensis und Pseudomonas aeruginosa BC 19, Serra- tia marcescens ATCC 13 880, Klebsiella pneumo- niae, ATCC 10 031 und BC 6, Proteus mirabilis BC 17, Proteus rettgeri, Enterobacter cloacae ATCC 13 047, E. coli R+TEM (nosnik (3-Lactamasy), Klebsiella pneumoniae 1082 E (nosnik (3-Lactama- zy).W ponizszej tablicy 2 przedstawiono minimalne stezenia hamujace (MIC) w ng/ml okreslone dla typowych przedstawicieli zwiazków wytwarzanych sposobem wedlug wynalazku, przy czym ich nu- *5 meracja odpowiada zwiazkom z tablicy 1.Jako substancje porównawcza zastosowano Ce- furoxim.Ostra toksycznosc okreslano przez podanie do¬ ustne i podskórne zwiazków tablicy 2, szczurom, we *o wzrastajacych dawkach.LD50 jest dawka, przy podaniu której 50% zwie¬ rzat pada w czasie 8 dni. Wszystkie substancje wykazuja, przy podaniu doustnym LD50 wynoszaca ponad 4 g/kg, przy podaniu podskórnym LD50 po- [5 nad 2 g/kg, co oznacza, ze sa one praktycznie nie¬ toksyczne.Szereg zwiazków wytwarzanych sposobem we¬ dlug wynalazku badano in vivo przy eksperymen¬ talnym zakazeniu mysz, stosujac jako patbgenne 50 bakterie E. coli ATCC 11775. Wprowadzono zaka¬ zenie sródotrzewnowo 0,2 ml ' zawiesiny bakterii (z 5% Mucyny). To odpowiada 1,4 X106 zarazków E. coli/mysz. Myszy rodzaju zenskiego gatunku NMRI, podzielono na grupy zawierajace kazdora¬ zowo 10 zwierzat. Dwie z tych grup pozostaja bez leczenia, pozostale grupy traktuje sie pdskórnie róznymi dawkami wytwarzanych sposobem wedlug wynalazku penicyliny i cefalosporyny, w celu ozna¬ czenia ED50 (dawki przy której 50% zwierzat prze^ zywa). W godzine po zainfekowaniu podawano substancje czynna. Okres obserwacji wynosil w obydwu przypadkach 7 dni. Wyniki tych badan z reprezentatywnymi przedstawicielami wytwarza¬ nych sposobem wedlug wynalazku, cefalosporyn 65 przedstawiono w tablicy 3. 55 60130 846 Tablica 2 Minimalne stezenia hamujace w fimg/ml 10 Zwiazki I tablicy 1 1 1 1 4 1 6 1 U .14 Cefuro- xim Staph. aureus SG511 1 , 1 1 1 0,5 1 E. coli ATCC 11775 0,03 0,01 <0,03 0,12 0,12 8 Pseud.Hbg. 16 16 16 16 8 128 Pseud.BC19 16 8 8 8 8 128 Serr.Mar- cesc.ATCC 13880 0,06 0,06 0,06 0,25 0,25 8 KI. pne- um.ATC 10031 0,06 0,03 0,06 0,25 0,25 2 KI. pne- um.BC6 0,03 0,03 0,03 0,25 0,25 4 * Prot. mirab.BC17 0,01 0,01 0,03 0,06 0,12 0,5 Prot. rettg. 0,066 0,01 0,06 0,5 1 2 Ent. cloac.Arce 13047 0,25 E. coli R+ TEM 0,5 0,06 | 0,25 0,06 | 0,5 0,5 | 0,25 1 | 0,25 32 4 K. pne- um. 1082 E 16 8 | 16 | 0,25 | 025 | Tablica 3 Aktywnosc u mysz in vivo Infekcja E. coli przy podskórnym podaniu Zwiazek z 1 tablicy 1 1 4 1 6 1 n 1 14 1 Cefuroxim ED50 (mg/kg) 0,8 <0,5 | <0,5 | ~5 | 2,5—5 [ 100 Preparaty farmaceutyczne, zawierajace substan¬ cje czynne wytwarzane sposobem wedlug wyna¬ lazku, wykazuja cenne wlasciwosci w leczeniu schorzen infekcyjnych. Jako korzystne formy far¬ maceutyczne wymienia sie? tabletki, drazetki, ka¬ psulki, granulaty, czopki, roztwory, zawiesiny, emulsje, mascic, zele, kremy, pudry i formy do spryskiwania, , Korzystnie substancje czynna albo mieszanine róznych substancji czynnych o wzorze ogólnym 1, podaje sie w medycynie ludzkiej lub w wetery¬ narii w dawkach wynoszacych 5—500, zwlaszcza 10—200 mg/kg ciezaru ciala na kazde 24 godziny, ewentualnie w postaci kilku dawek jednorazowych, Dawka jednorazowa zawiera substancje lub sub¬ stancje czynne, wytwarzane sposobem wedlug wy¬ nalazku, korzystnie w ilosci 1—250, zwlaszcza 10—60 mg/kg ciezaru ciala. Od wymienionych da¬ wek moga byc jednakze odstepstwa, a mianowicie w zaleznosci od rodzaju i ciezaru ciala leczonego objektu, rodzaju i zaawansowania schorzenia, ro¬ dzaju preparatu farmaceutycznego i podawania le¬ ku oraz momentu wzglednie przedzialu, w czasie którego nastepuje podawanie leku.W niektórych przypadkach ilosci substancji czynnej moga byc mniejsze, a w innych musza byc wieksze niz ilosc substancji czynnej wymienionej wyzej. Wymagana optymalna dawke i rodzaj, po¬ dania substancji czynnej latwo okresla w kazdym, przypadku specjalista na podstawie swojej facho¬ wej wiedzy.Nowe zwiazki *w przypadku stosowania ich jako srodka dodatkowego do paszy, mozna podawac w 20 25 30 35 40 '45 50 55 powszechnie stosowanych stezeniach i formach ra¬ zem z pasza wzglednie przygotowanym preparatem paszowym albo z woda pitna. W ten sposób moz¬ na zapobiegac infekcjom wywolanym przez gram- dodatnie albo gramujemne bakterie, zmniejszyc je Plub leczyc jak równiez osiagac przyspieszenie wzrostu i lepsze wykorzytanie paszy.Zwiazki o wzorze ogólnym lii' mozna przera¬ biac w powszechnie przyjety sposób na preparaty farmaceutyczne takie, jak tabletki, drazetki, kap¬ sulki, albo ampulki. Dawka jednorazowa wynosi dla doroslych na ogól 50—1000 mg, zwlaszcza 100— .500, dawka dzienna wynosi 100—4000 mg, zwlasz¬ cza 250—2000 mg.Nizej podane przyklady wyjasniaja blizej wyna¬ lazek: Przyklad I. 7a-metoksy-70-{D,L-a-[3-{2-)5'- -sulfamoiJo-2'-tienylometyloamino(-4-hydroksy-5- -pirymidynylo)-ureido]-(2,3-diwodoro-2-imino-4- ^ -tiazolilo)-acetamidó}-3[(l-)2'-hydroksyetjLlo<15-te- trazolilo)-tiometylo]-3-cefemo-4-karboksylan sodu 1.0 g {1,5 mmola) trifluorooctanu kwasu 7a-me- toksy-7p{D,L-aHamino)-2,3-{diwodoro-2-imino-4-tla- zolilo)-acetamido}-3-[(l-{2'-hydroksyetylo)-5-tetra- zolilo)-tiometylo]-3-cefemo-4-karboksylowego roz¬ puszcza sie w mieszaninie 60 ml tetrawodorofura- nu i 20 ml wody, ustawiajac wartosc pH = 8,5 przez dodatek 1 n lugu sodowego. 450 mg 5-ami- no-4-hydroksy-2-(5'-sulfamoilotienylometyloamino)- pirimidyny, sililuje sie w sposób powszechnie przy¬ jety i poddaje reakcji ze 150 mg fosgenu.Powstala mieszanine dodaje sie do roztworu ce- falosporyny utrzymujac przy tym lugiem sodowym wartosc pH 7,5—8,0 i miesza calosc jeszcze jedna godzine w temperaturze pokojowej. Potem dodaje sie dalsze 10 ml wody, saczy i oddestylowuje te- • trawodorofuran iod zmniejszonym cisnieniem. Fa¬ ze wodna wytrzasa sie dwukrotnie octanem etylu, a potem przy chlodzeniu, ustawia rozcienczonym kwasem solnym, wartosc pH = 3,5. Odsacza na¬ stepnie osad, suszy i przeprowadza w zwykly spo¬ sób w sól sodowa.Wydajnosc: 655 mg (44,5*/o) Widmo IR: 1765, 17J5 cm"1.Widmo NMR (DMSO + CDiOD) sygnaly przy ppm: 3,43(s,3H), 3,7(m,2H)/ 4,3(m,2+2+2H), 4,65(s,2H), 5,l(s, szeroki,lH), 5,4(s,lH), 6,5(s,lH), 7,05(d,lH), 7,4(d,lH), 8,13(s,lH).Przyklad II. 7 li 12 -sulfamoilo-2'-tienylometyloamino)-4-hydroksy-5- pirymidynylo)-ureido]-fenyloacetamido)-3-[(l-mety- lo-5-tetrazolilo)-tiometylo]-3-cefemo-4-karboksylan sodu 1,9 g (0,004 mola) kwasu 7a-metoksy-7P-(D-a-aimi- nofenyloacetamido)-3-[(l-metylo-5-tetrazolilo)-tiome- tylo]-3-cefemo-4-karboksylowego rozprasza sie w mieszaninie 60 ml tetrawodorofuranu i 20 ml wo¬ dy i nastepnie dodaje przy chlodzeniu 1 n lugu m sodowego, przy czym powstaje roztwór.Do tego roztworu wkrapla sie przy chlodzeniu lodem, wytworzony w sposób analogiczny do opi¬ sanego w przyladzie I z 1,2 g (0,004 mola) 5-ami- no-4-hydroksy-2-(5-sulfamoilotienylometyloamino)- --pirymidyny addukt fosgenowy, utrzymujac przy tym wartosc pH = 8 przez dodatek lugu sodowe¬ go. Dalsze przeksztalcenie i obróbka nastepuja w opisany sposób w przykladzie I.Wydajnosc: 1,53 g soli sodowej (46°/o) Widmo IR: 1760, 1660 cm"1 Widmo NMR (DMSO+CDfOD) sygnaly przy ppm: 3,4^3,6(m,2H), 3,50(s,3H), 3,95(s,3H), 4,2(m2H), 4,6(m,2H), 5,05(s,lH), 5,55(s,lH), 7,05(d,lH), 7,5(m,6H), 8,15(s,lH).W sposób analogiczny do opisanego w przykla¬ dzie II wytwarza sie zwiazki o wzorze ogólnym 1, w którym A = grupa fenylowa, Y = grupa me¬ toksylowa, Ef atom wodoru, a inne podstawniki i dane fizykochemiczne przedstawiono w nastepu¬ jacej tablicy.Analogicznie wytwarza sie cefalosporyny o wzo¬ rze ogólnym 1, w którym A = wodór, E = joii sodu, Y = wodór, a inne podstawniki i dane fi¬ zykochemiczne przedstawiono w tablicy 5.Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania nowych cefalosporyn o io wzorze ogólnym 1, w którym Y oznacza atom wo¬ doru albo grupe metoksylowa i A, o ile Y ozna¬ cza grupe metoksylowa, oznacza grupe fenylowa, 4-hydroksyfenylowa albo grupe 2-tienylowa, a w przypadku, gdy Y jest atomem wodoru albo grupa 15 metoksylowa, oznacza grupe 2,3-dihydro-2-imimo- -tiazol-4-ilowa, D oznacza grupe acetoksylowa lub grupe SHet w której Het oznacza grupe 2-metylo- -1,3,4-tiadiazol-5-ilowa, 4-metylo-5,6-diokso-l,2,4- -triazyn-3-ilowa, lub grupe o wzorze ogólnym 2, 20 w którym n oznacza liczbe 1 lub 2, a Ri oznacza atom wodoru, grupe hydroksylowa, acetyloaminowa lub metylowa, R oznacza grupe o wzorze ogól¬ nym -NHR2, w którym R2 oznacza grupe 2-tieny- lometylowa, 2-furylornetyIowa, 3-pirydylowa, 2-imi- 25 dazolilometylowa, 2-pirymidynylometylowa, 3-piry- dylometylowa albo 5-pirymidynylometylowa, przy czym grupy te moga byc ewentualnie podstawione grupa metylowa, hydroksylowa lub sulfamylowa, E oznacza atom wodoru oraz ich soli z nieorga- 30 nicznymi albo organicznymi zasadami, znamienny Tablica 4 Przyklad 111 IV .V . VI VII VIII R2 wzór 16 wzór 16 wzór 13 wzór 15 wzór 22 wzór 13 D —OCOCH, wzór 17 wzór 14 wzór 14 wzór 14 wzór 17 Wydajnosc % 54,5 38 51 ' 40 34 56 Widmo IR cm-1 1765 1670 1765 1765 1670 1610 1765 1660 1765 1765 1660 1610 Widmo NMR (DMSO +CD3OD) I sygnal przy ppm: 2,05 (s, 3H), 3,5 (s, 3H + m, 2H), 4,7 (m, 2+2H), 5,05 (s, 1H), 5,5 (s, 1H), 7,05 (d, 1H), 7,55 (m, 5H+ 1H), 8,13 (s, 1H). [ 3,48 (s. 3H), 3,6 (m, 2H),4,3 (m, 6H), 4,6 (m, 2H), 5,0 (s, 1H), 5,55 (s,14), 7,05 (d, 1H) 7,5 (m, 6H), 8,15 (s, 1H)| 3,50 (s, 3H), 3,5 (m, 2H), 3,95 (s. 3H), 4,2—4,4 (m. 2H+2H), 5,0 (s. 1H), 5,55 (s. 1H), 6,3 (m. 2H), 7,5 (m. 6H), 8.15 (s. 1H). [ 3.50 (s. 3H + m. 2H), 3.95 (s. 3H) 4.25 (m. 2H), 5.05 (s.lH), 5.55 (s. 1H), 6.35 (d. 1H), 7.5 (. 6H), 7,8 (s. 1H), 8.05 (s. 1H). f 3,50 (s. 3H+m. 2H), 3.95 (s. 3H) 4,25 (m. 2H), 5.05 (s. 1H), 5.55 /s. 1H), 7.5 (m. 5H+1H), 8,05 (s.lH) 8,2 (m. 2H). | 3,48 (s. 3H), 3.4—3,6 (m. 2H), 4,3 (m. 8H), 5,0 (s. 1H), 5.55 (s. 1H), 6,3 (m. 2H), 7,5 (m. 5 + 1H), 8,10 (s. 1H).Analogicznie wytwarza sie cefalosporyny o wzorze ogólnym 1, w którym A = wodór, E podstawniki i dane fizykochemiczne przedstawiono w tablicy 5. jon sodu, Y = wodór, a inne130 846 13 14 Tablica 5 Przyklad IX X XI XII XIII XIV XV R2 wzór 13 wzór 15 wzór 15 wzór 16 wzór 16 wzór 25 wzór 26 D wzór 14 wzór 14 wzór 14 —O—COCH3 wzór 20 wzór 14 wzór 14 Widmo IR cm1 1765 1660 1540 1765 1655 1545 17(35 1660 1540 1160 1765 1655 1530 1155 1765 1700 1760 (szerokie) 1765 1650 1520 1765 1655 1540 Widmo NMR (DMSO + CD3OD) sygnaly przy ppm: 3,50 (m. 2H), 3,95 (s. 3H), 4,4 (m. 4H), 5.05 (m. 1H), 5.40 (s. 1H), 5,65 (m. 1H), 6,3 (m. 2H), 6,45 (d. 1H), 7.5 (s. 1H), 8.05 (s.lH). 3,55 (m. 2H), 3,05 (s. 3H), 4,4 (m. 2H) 5,05 (m. 1H), 5.35 (s. 1H), 5,60 (m. 1H), 6.45 (s. 1H), 6.55(s. 1H, szerokie), 7,55 (q. 1H), 7,8 (d.lH), 8,2 (s. 1H). | 3,55 (m. 2H), 3.95 (s. 3H), 4,4 (m. 2H), 4,7 (s. 2H), 5,0 (m. 1H), 5,35 (s. 1H), 5.6 (m. 1H), 6.45 (d. 1H), 7.05 (d. 1H), 7.45 (d. 1H), 8,15 (s. 1H). | 2,05 (s, 1H), 3,50 (m, 2H), 4,7 (s, 2H), 4,85—5,05 (m, 2 + 1H), 5,40 (s, 1H), 5,65 (m, 1H), 6,45 (szerokie s, 1H), 7,05 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 8,15 (s, 1H). 3,3 (s, 3H), 3,60 (m, 2H), 4,2 (m, 2H), 4,65) s, 2H), 4,65 (s, 2H), 5,0 (d, 1H), 5,40 (s. 1H), 6,56 (m, 1H), 6,45 (s, 1H), 7,0 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 8,15 s, 1H). | 2,1 (s, 3H), 3,50 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,4 (m, 4H), 5,05 (szerokie d, 1H), 5,40 (s, 1H), 5,60 (m, 1H), 6,80 (s, 1H), 7,3 (s, 1H), 8,05 (s, 1H). | 2,45 (s, 3H), 3,45 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,3-4,5 (m, 4H), 5,0 (m, 1H), 5,40 (s, 1H), 5,65 (m, 1H), 6,45 (szerokie s, 1H), 8,10 (s, 1H), 8,55 (s, 2H). tym, ze kwasy 7-aminocefalosporanowe o wzorze ogólnym 3, w którym A, D i Y maja wyzej okres¬ lone znaczenie albo ich sole z nieorganicznymi lub organicznymi zasadami poddaje sie reakcji z pochodna pirymidyny o wzorze ogólnym 4 w któ¬ rym R ma wyzej podane znaczenie, a B oznacza grupe -NCO albo reaktywna pochodna grupy -NHCOOH jak grupe -NHCOC1, -NHCOBr lub grupe o wzorze 8, lub z mieszanina tych pirymi- dyn o wzorze ogólnym 4, w którym B oznacza rózne grupy obok* siebie równoczesnie z wymie¬ nionych poprzednio znaczen lub w zwiazkach tych takze czesciowo albo calkowicie moze wystepowac jako jeden z izomerów izocyjanianu l-(H)-oksa- 60 65 zolo(5,4-d)pirymidyn-2-onu, w rozpuszczalniku i w zakresie pH wynoszacym 2,0—9,0 w temperaturze —20°C +50°C, i ewentualnie nastepnie, tak wy¬ tworzone zwiazki o wzorze ogólnym 1 w którym E oznacza atom wodoru przeprowadza sie w odpo¬ wiednie sole, dzialaniem nieorganicznych albo or¬ ganicznych zasad. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze zwiazek o wzorze ogólnym 3, albo jego sól z nie¬ organiczna albo organiczna zasada poddaje sie re¬ akcji ze zwiazkiem o wzorze ogólnym 4, w wo¬ dzie albo w rozpuszczalniku organicznym miesza¬ jacym sie z woda w obecnosci wody w zakresie pH wynoszacym 6,5—8,0.130 846 15 16 Analogicznie do poprzednich przykladów wytworzono nastepujace zwiazki: Przyklad XVI XVII XVIII XIX XX XXI XXII XXIII XXIV xxv A wzór 12 wzór 12 wzór 12 wzór 12 wzór 12 wzór 12 wzór 12 wzór 124 1 wzór 24 I wzór 24 1 R2 wzór 27 wzór 16 1 wzór 27 wzór 28 wzór 16 wzór 16 wzór 16 wzór 27 wzór 16 1 wzór 16 1 Y H OCH3 OCH3 OCH3 H H H OCH, OCH, OCH, D wzór 14 wzór 14 wzór 14 wzór 14 wzór 17 wzór 29 wzór 18 wzór 14 wzór 17 1 wzór 29 Widmo IR-1 cm 3340 1765 1660 1540 1765 1670 1155 1765 1660 1540 1765 1655 1535 1765 1660 1540 1155 1765 1660 1535 1160 1760 1655 1610 - 1765 1660 1550 1765 1660 1540 1155 1 1765 1655 1610 1540 Widmo NMR/DMSO+ CD3OD sygnaly przy ppm: 3,50 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,4 (m, 4H), 5,0 (m, 1H), 5,4 (s, 1H), 5,6 (m, 1H), 6,45 (d, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,65 (m, 1H), 8,1 (s, 1H), 1 (s, 1H), 8,5 (m, 2H). | 3,40 (s, 3H), 3,55 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,35 (m, 2H), 4,7 (s, 2H), 5,05 (szeroki s, 1H), 5,35 (s, 1H), 6,45 (d, 1H), 7,05 (d, 1H), 7,45, (d, 1H), 8,15 (s, 1H). 3,40 (s, 3H), 3,55 (m, 2H), 3, 95 (s, 3H), 4,4 (m, 4H), 5,0 (s, szero¬ ki, 1H), 5,35 (s. 1H), 6,45 (s, sze¬ roki, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,65 (m, 1H), 8,1 (s, 1H), 8,5 (m, 2H). 2,1 (s, 3H), 3,40 (s, 3H), I 3,50 (m, 2H), 3,95 (s, 1H), 6,85 (d, 1H), 7,3 (s, 1H), 8,05 (s, 1H). | 3,55 (m, 2H), 4,1—4,7 (m, 8H), 5,05 (m, 1H), 5,35 (s, 1H), 5,60 (m, 1,H) 6,45 (szeroki s, 1H), 7,05 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 8,15 (s, 1H). 2,75 (s, 3H), 3,50 (m, 2H), 4,65 (s, 2H), 5,05 (m, 1H), 5,40 (s, 1H), 5,60 (m, 1H), 6,45 (d, 1H), 7,05 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 8,10 (s, 1H), | 1,85 (s, 3H), 3,6 (m, 2+ 2H), 4,2-4,7 (m, 6H), 5,05 (q, 1H), 5,40 (s, szeroki, 1H), 5,70 (q, 1H), 6,50 (s, 1H), 7,05 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 8,15 (s, 1H). | 2,1 (s, 3H), 3,45 (s, 3H), 3,55 (m, 2H), 3,95 (3, 3H), 4,35 (m, 4H), 5,0 (s, 1H), 5,40 (s, 1H), 6,75 (m, 2+1H), 7,30 (d, 2H), 8,05 (s, 1H). | 3,45 (s, 3H), 3,55 (m, 2H) 4,0-4,7) (m, 8H), 5,0 (s, 1H), 5,45 (s, 1H), 6,75 (d, 2H), 7,0 (d, 1H), 7,25 (s, 2H), 7,45 (d, 1H), 8,15 (s, 1H). | 2,75 (s, 3H), 3,45 (s, 3H). 3,50 (m, 2H), 4,25 (m, 2H), 4,65 (s, 2H), 4,95 (s, 1H), 5,45 (s, 1H), 6,75 (d, 2H), '7,05 (d, 1H), 7,25 (d, 2H), 7,45 (d, 1H), 8,15 (s, 1H).130 846 17 18 Analogicznie wytwarza sie zwiazki, w których Y = OCH, Przyklad XXVI XXVII XXVIII XXIX XXX XXXI XXXII XXXIII 1 A wzór 24 wzór 24 wzór 24 wzór 30 wzór 30 wzór 24 wzór 24 wzór 24 R2 wzór 27 wzór 16 wzór 16 wzór 16 wzór 16 wzór 13 wzór 15 wzór 26 D wzór 14 wzór 14 —OCOCH8 wzór 17 wzór 17 wzór 14 wzór 14 wzór 16 Widmo IR-1 cm 1765 1660 1540 1765 1655 1535 1765 1660 1540 1765 1655 1540 1765 1665 1610 1540 1765 1660 1550 1765 1655 1540 1765 1660 1550 Widmo NMR (DMSO+ CD.OD) sygnaly przy ppm: 3,45 (s, 3H), 3,55 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,25-4,45) (m, 4H), 4,95 (s, 1H), 5,35 (s, 1H), 6,75 (d, 2H), 7,25 (m, 3H), 7,7 (m, 1H), 8,1 (s, 1H), 8,5 (m, 2H). 3,45 (s, 3H), 3,55 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,3 On, 2H), 4,65 (s, 2H), 5,0 (s, 1H), 6,75 (d, 2H), 7,05 (d, 1H), 7,3 (d, 2H), 7,45, (d, 1H), 8,15) s, 1H).| 2,05 (s, 3H), 3,45 (s, 3H), 3,45 (m, 2H), 4,7—5,0 (m, 2+ 2+1H), 5,35 (s, 1H), 6,75 (d, 2H), 7,07, 7,45 (m, 1+2 + 1H), 8,10 (s, 1H). | 3,45 (s, 3H), 3,55 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,3 (m, 2H), 4,7 (s, 2H), 5,0 (s, 1H), 5,70 (s, 1H), 7,0 (m, 3H), 7,4 (m, 2H), 8,1 (s, 1H). | 3,45 (s, 3Hrm, 2H), 4,3 (m, 6H), 4,65 (s, 2H), 4,95 s, 1H), 5,70 (s, 1H), 7,0 (m, 3H), 7,4 (m, 2H) 8,1 (s. 1H). 3,45 (s, 3H), 3,50 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,40 (m, 4H), 4,95 (s, 1H), 5,35 (s, 1H), 6,3 (m, 2H), 6,75 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 7,45) s, 1H), 8,1 (s, 1H). | 3,45 (s, 3H), 3,50 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,3 (m, 2H), 4,95 (s, 1H), 5,35 (s, 1H), 6,55 (s, szeroki, 1H) ,6,75 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 7,55 (m, 1H), 78 (d, 1H), 8,15 (s. 1H). | 2,50 (s, 3H), 3,45 (s. 3H), 3,55 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,4 (m, 4H), 4,95 (s, 1H), 5,40 (s, 1H), 6,75 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 8,05 (s, 1H), 8,6 (s, 2H). i'130 846 A-CHCONH\l_/S\ NH 0^"N^f"CH2D CO I NH COOE -OH R WZdR 1 A—CHCONH^_/S CO COO° co I NH .OH NyN R (C0NH2) WZÓR 1a a_CHC0NHO_yS^ NH 0^-N^cH2D co I NH COOE N^NH R WZCiR 1' N-N ^N'N (CH2)nRl WZdR 2 « Y A —CHCOHN^f/S-.NH2 0^Y^CH2D COOH WZdR 3 B R WZdR 4 NH2 NH- ,CH OH N^N R WZÓR 5 NyN R WZdR U a H I N.A'-N^ WZdR 6 —NH—COO—^ \^N02 WZdR 8 — CH9 —OC—CfCHoio 2 II 3J O WZdR 9 Hal— CH2-0—C — C(CH3)3 O Nlf a'-n—e H b WZdR 10 WZdR 7130 846 A — CHCONhKl „s NH I CO I J~K CH2D COOH NH I II NHRo WZÓR 11 N—N -S-V'N CH3 WZÓR U H0-#3- WZdR 15 H2NS02-OLcH2 — WZdR 16 H2N-( S-1 WZdR 12 CLCHr WZdR 13 N—N CH2CH2OH WZdR 17 N — N -S-kN,N ' CH2- CH2NHCOCH3 WZÓR 18 —CH2 — N=/ WZÓR 19 ^~y_ \=/ CH3 WZÓR 20 p- S02NH2 WZdR 21 WZdR 22 HO-^LJ^ WZdR 23 r^N /)-CH2- CH3" -N WZdR 25 P- WZdR 24 N CH3-(' -CH: WZdR 26 WZdR 27130 846 H I CH3-tN-CH2- WZdR 28 N—N WZ0R 29 WZÓR 30 WZGraf. Z-d 2 — 475/85 — 85 + 16 Cena 100 zl PL PL PL PL PL PL PL