NO801474L - Fremgangsmaate for fremstilling av klavulansyrederivater - Google Patents

Description

Oppfinnelsen vedrører fremstilling av nye antibiotika og/3-laktamase-inhibitorer.

Belgiske patentskrifter nr. 850779 og 851821 åpenbarer at tioetere som stammer fra klavulansyre, og oksydasjonsprodukter av slike tioetere har Ø-laktamase-inhiberende egenskaper. Det er nå funnet at en liten klasse av tioetere og deres oksydasjonsprodukter er spesielt effektive med hensyn til å forsterke effektiviteten til penicilliner og cefalosporiner hos pattedyr som er infisert av Ø-laktamase-produserende bakterier.

Ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen tilveiebringes forbindelser av formel (l)s

og farmasøytisk akseptable salter og in vivo-hydrolyserbare estere derav, hvor R er et hydrogenatom eller en alkylgruppe med 1-2 karbonatomer og X er et svovelatom eller en SO- eller S02-gruppe.

X i forbindelsen av formel (I) er passende et svovelatom.

Fortrinnsvis er X en SOg-^ruppe.

En foretrukken betydning av a er hydrogenatomet. R er passende en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer, f.eks. en metyl-, etyl-, n-propyl-, isopropyl-, n-butyl-, t-butyl-, sek.-buty1-eller isobutylgruppe. Blant disse grupper inkluderer foretrukne betydninger av R metyl- og etylgruppene.

I forbindelsene av formel (i) kan dobbeltbindingen mellom -X- og -HH-gruppene være i enten E- eller Z-konfigurasjon, men E-konfigurasjonen foretrekkes.

Av det ovenstående vil man forstå at foretrukne forbindelser som fremstilles i henhold til oppfinnelsen er slike som har formel (II):

og deres farmasøytisk akseptable salter og in vivo-hydrolyserbare estere.

En spesielt foretrukken gruppe av forbindelser som kan fremstilles i henhold til oppfinnelsen, er den som har formel (III):

og dens farmasøytisk akseptable salter og in vivo-hydrolyserbare estere,.

Forbindelsene av formlene (I)-(III) tilveiebringes gjerne

i form av den frie syre.

Forbindelsene av formlene (I)-(III) har som oftest form

av et farmasøytisk akseptabelt salt.

Eksempler på farmasøytisk akseptable salter av forbindelsene av formlene (I)-(III) inkluderer alkalimetallsaltene, f.eks. natrium- eller kaliumsaltene, jordalkalimetallsaltene, f.eks. kalsium- eller magnesiumsaltene, og ammonium- eller substituert -ammoniumsalter, f.eks. sådanne med lavere alkylaminer, f.eks. trietylamin, hydroksy-lavere alkylaminer, f.eks. 2-hydroksy-etylamin, bis-(2-hydroksyetyl)-amin, tris.-(hydroksymetyl)-amin eller tris-(2-hydroksyetyl)-amin, cykloalkylaminer, f.eks. bicykloheksylamin, eller med prokain, dibenzylamin,N,N-di-benzyletylendiamin, 1-efenamin, N-etylpiperidin, N-benzyl-/3-fenetylamin*dehydroabietylamin eller N >N'-bis-dehydroabietyl-etylendiamin.

Således inkluderer egnede salter som fremstilles i henhold til oppfinnelsen natrium-, kalium-, kalsium-, magnesium- og ammoniumsaltene, og av disse er natrium-, kalium-, kalsium-

og magnesiumsaltene foretrukne farmasøytisk akseptable salter.

Forbindelsene av formlene (I)-(lll) kan tilveiebringes

som in vivo-hydrolyserbare estere. Slike estere er sådanne som hydrolyserer i det menneskelige legeme og produserer morsyren. Egnede in vivo-hydrolyserbare estere inkluderer slike estere som er kjent for å gi in vivo-hydrolyse i penicilliner. Således inkluderer egnede estere slike av sub-formel (a):

hvorR^er et hydrogenatom, eller en metyl- eller fenylgruppejR2er en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer, en fenylgruppe, en alkylgruppe med 1-3 karbonatomer substituert med en fenylgruppe, en alkoksygruppe med 1-6 karbonatomer, en fenoksyl-gruppe, eller en alkoksylgruppe med 1-3 karbonatomer substituert med en fenylgruppe; eller R^er knyttet tilR2slik at det dannes en 1,2-difenylen- eller 4,5-dimetoksy-l,2-difenylen-gruppe.

R^er fortrinnsvis hydrogen.

Når R^er hydrogen, er R2gjerne utvalgt blant metyl, etyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, tert.-butyl, fenyl, benzyl;metoksy, etoksy, n-propyloksy og isopropyloksy. Fortrinnsvis er R2 tert.-butyl.

R-^og R2er fortrinnsvis forbundet, slik at esteren er en ftalidyl- eller 3,4-dimetoksyftalidylester.

Av disse estere er de som foretrekkes som in vivo-hydrolyserbare estere acetoksymetyl-, acetoksyetyl-, ftalidyl-, etoksykarbonyloksymetyl-, a-etoksykarbonyloksyetyl- og pivaloyl-oksymetylesterne.

Esterens in vivo-hydrolyserbare natur kan bekreftes ved administrering til et dyr, f.eks. en mus eller rotte, og be-stemmelse av nærværet av en forbindelse av formel (i) eller et salt derav i blodet eller urinen til dyret. Alternativt kan hydrolyse i blod eller serum hos mennesker bestemmes.

Man må være klar over at salter av forbindelsene av formlene (I)-(III) dannet med farmasøytisk uakseptable ioner er anvendelige, da de kan tjene som mellomprodukter ved fremstilling av farmasøytisk akseptable salter ved ionebytting, eller de kan være anvendelige som mellomprodukter ved fremstilling av in vivo-hydrolyserbare estere. Eksempler på slike salter er litium- og tert.-butylammoniumsaltene. Disse er faste, lett-vint fremstilte og holdbare salter som kan omdannes til andre salter, f.eks. natrium-, kalium-, kalsium-, magnesium- eller lignende salter ved ionebytting.

Forbindelsene som fremstilles ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen kan anvendes i et farmasøytisk preparat som omfatter en forbindelse av formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo-hydrolyserbar ester derav og en farmasøytisk akseptabel barer.

Mest passende vil et slikt preparat inneholde et farma-søytisk akseptabelt salt av en forbindelse av formel (I). Et slikt salt er fortrinnsvis av forbindelsen av formel (III).

Preparater som her omtalt vil generelt inneholde fra 25

til 500 mg av forbindelsen, men mer vanlig fra 50 mg til 250 mg av forbindelsen, f.eks. 75, 100, 125, 150, 175, 200eller 225 mg.

Preparatene kan administreres oralt eller ved injeksjon

fra 1 til 6 ganger pr. dag, og mer vanlig fra 2 til 4 ganger pr. dag. Den vanlige daglige dose for et voksent menneske med vekt 70 kg vil være i området 80-000 mg og mer vanlig 125-500 mg.

Siden forbindelsene som fremstilles i henhold til oppfinnelsen har en grad av antibakteriell aktivitet i seg selv,

kan de anvendes for behandling av infeksjoner som skyldes stammer avStaphylococcus aureus,Escherichia coli,Klebsiella aerogenes, Proteus spp. Eksempelvis kan de anvendes for behandling av urinveisinfeksjoner som skyldes slike organismer, eller mastitis hos kveg som skyldes slike organismer.

Imidlertid, som tidligere antydet, menes det at den største nytte av forbindelsene av formel (i) og deres farmasøytisk akseptable salter og in vivo-hydrolyserbare estere ligger i deres evne til å inaktivere bakteriell /J-laktamase og således forbedre in vivo-effektiviteten til penicilliner eller cefalosporiner. Det er mulig å administrere de ovenfor beskrevne preparater til et pattedyr som samtidig eller i rekkefølge også behandles med et penicillin eller cefalosgorin. i denne form for terapi anvendes penicillinet eller cefalosporinet i den konvensjonelle dosering. Imidlertid foretrekkes det for større bekvemhet og bedre kontroll å inkludere penicillinet eller cefalosporinet i det samme enhetsdosepreparat som forbindelsen av formel (I) eller dens farmasøytisk akseptable salt eller in . vivo-hydrolyserbare ester.

Et farmasøytisk preparat som nevnt ovenfor som omfatter

et penicillin eller cefalosporin, vil altså også omfatte en forbindelse av formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo-hydrolyserbar ester:derav og en farma-søytisk akseptabel bærer.

Slik den her anvendes, betyr betegnelsen "penicillin" penicillinet selv og dets farmasøytisk akseptable salter og pro-droger. Likeledes skal betegnelsen "cefalosporin" her menes å dekke cefalosporinet selv og dets farmasøytisk akseptable salter og pro-droger.

Det synergistiske preparat kan tilpasses for oral eller parenteral administrering t med unntagelse av naturligvis at hvis penicillinet eller cefalosporinet som er inkludert ikke er et som er oralt administrerbart, så vil det synergistiske preparat bli tilpasset for parenteral administrering.

Britiske patentskrifter nr. 1508977 og 1508978 åpenbarer egnede former av synergistisk preparat og inkorporeres herved ved referanse. Ved å erstatte klavulansyren eller dens salt eller ester i henhold til nevnte patenter med forbindelsen av formel (I) eller dens farmasøytisk akseptabele salt eller in vivo-hydrolyserbare ester får man som resultat det ønskede preparat som her er beskrevet.

Spesielt foretrukne oralt administrerbare synergistiske preparater som her er beskrevet, er slike som omfatter amoxycillin-trihydrat ekvivalent med lOO-lOOO mg av amoxycillin, forbindelsen av formel (III) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav ekvivalent med 50-500 mg av forbindelsen av formel

(III).

Mest passende vil dette preparat inneholde amoxycillin-trihydrat ek<y>i.val.eatmed 200-600 mg av amoxycillin. Helst vil dette preparat inneholde et farmasøytisk akseptabelt salt av forbindelsen av formel (III) ekvivalent med 100-300 mg av forbindelsen av formel (III). '

Fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen for fremstilling av en forbindelse av formel (I) som definert ovenfor, eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo-hydrolyserbar ester derav, omfatter omsetning av en spaltbar ester av en forbindelse av formel (IV): hvor Y er et forskyvbart atom eller en sådan gruppe, med et tiolat av en tiol av formel (V):

hvor R er som definert med hensyn til formel (I), slik at man får den spaltbare ester av forbindelsen av formel (I) hvor X

er et svovelatom, og deretter eventuelt utføre et eller flere av følgende trinns

(a) oksydere svovelatomet til en SO- eller S02~gruppe,

(b) spalte den spaltbare ester slik at man får forbindelsen

av formel (i) eller et salt derav,

(c) omdanne forbindelsen av formel (I) eller et salt derav

til dens farmasøytisk akseptable salt eller in vivo-hydrolyserbare ester,

(d) omdanne et salt av forbindelsen av formel (I) til dens

frie syre,

(e) isomérisere dobbeltbindingen i sidekjeden.

Slik den her er anvendt, betyr betegnelsen "spaltbar ester" en ester som er spaltbar ved kjemiske metoder, f.eks. hydrogenolyse, oppløsende metallreduksjon eller mild basehydrolyse, eller en ester hydrolyserbar in vivo til en forbindelse av formel (I) eller dens salt.

<p>assende grupper Y som er forskyvbare ved hjelp av tiolatet, inkluderer konvensjonelle forskyvbare grupper, f.eks. sulfonat- eller karboksylatestere, f.eks. OSO-R''", OCOR^" eller 11..

OCOjR hvor R er en mert organisk gruppe, f.eks. en lavere alkylgruppe (f.eks. en metyl-, etyl-, propyl- eller butylgruppe) eventuelt substituert med et eller flere halogenatomer, en fenyl-, benzyl-, metoksyfenyl-, metylfenyl-, halogenfenyl-, nitrofenyl- eller lignende gruppe.

Andre egnede grupper Y som er forskyvbare ved hjelp av tiolatet er halogenatomer, f.eks. et klor- eller bromatom.

Foretrukne betydninger av Y er et klor- eller bromatom, eller en dikloracetoksy-, raesyloksy-, tosyloksy- eller fenyl-sulfonyloksygruppe. Spesielt foretrukne betydninger av Y er klor og dikloracetoksy.

Tioforetringsreaksjonen kan utføres ved en ikke-ekstrem temperatur, f.eks. fra -60 til +60°C, fortrinnsvis fra -30 til +30°C. Tioforetringsreaksjonen kan utføres i et inert ikke- hydroksylisk løsningsmiddel, f.eks. dimetylformamid.

Egnede kjemisk spaltbare estere av forbindelsene av formlene (I) og (IV) inkluderer dem som har sub-formlene (a) og (b)s

hvor A er en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer som eventuelt er substituert med en hydroksygruppe eller en alkoksygruppe med 1-4 karbonatomer%A 2er en alkenylgruppe med opp til 5 karbonatomer eller er en fenylgruppe som eventuelt er substituert med et fluor-, klor- eller bromatom, eller en nitro- eller alkyl-eller alkoksylgruppe med opp til 4 karbonatomerj og A<3>er et hydrogenatom, en alkylgruppe med opp til 4 karbonatomer eller en fenylgruppe som eventuelt er substituert med et fluor-, klor-eller bromatom, eller en nitro- eller alkyl- eller alkoksygruppe med opp til 4 karbonatomer.

Spalting av den spaltbare ester av forbindelsen av formel (I) for dannelse av morsyren eller dens salt kan foretas ved hydrogenolyse, oppløsende metallreduksjon eller hydrolyse. Således kan f.eks. en slik ester som en metyl-, etyl-, metoksy-metyl-, etoksymetyl- eller acetoksymetylester utsettes for mild basehydrolyse slik at man får et salt av en forbindelse av formel (I),<p>assende kan disse estere hydrolyseres ved at mediets pH-verdi holdes på 7,5-10inntil hydrolysen er foretatt. Mest passende anvendes en lett hydrolyserbar ester, f.eks. metoksymetylesteren, i denne prosess. pH-verdien kan holdes i det ønskede område i en pH-stat ved tilsetning av en løsning eller suspensjon av en base, f.eks. LiOH, NaOH, KOH, Ca(0H)2»Mg(0H)2eller lignende, i en hastighet som forhindrer akkumu-. lering av overskudd av base, hvilket ville bevirke at pH-verdien økte uakseptabelt.

Oppløsende metallreduksjon kan utføres under anvendelse av jern/ammoniumklorid-systerner, men foretrekkes ikke for sulf-oksyder.

Egnede metoder for hydrogenolyse av estere av forbindelsene av formel (I) inkluderer hydrogenering i nærvær av en overgangs-metall-katalysator. Egnede hydrogenolyserbare estere av forbindelsen av formel (I) inkluderer slike hvor esterandelen har sub-formel C02CHA 2 A 3som definert tidligere, og av disse er benzyl- og p-metoksybenzylesterne særlig godt egnet, p-nitro-benzylesteren er en foretrukken ester.

Hydrogentrykket som anvendes i reaksjonen, kan være lavt, middels eller høyt, men generelt foretrekkes et tilnærmet atmosfærisk eller lett superatmosfærisk hydrogentrykk. Over-gangsmetall-katalysatoren som anvendes, er fortrinnsvis palladium, f.eks. palladium på trekull, palladium på bariumsulfat, palladium på kalsiumkarbonat eller lignende.Hydrogeneringen kan utføres i hvilket som helst bekvemt løsningsmiddel som esteren er løselig i, f.eks. tetrahydrofuran, etylacetat, etanol, vandig etanol eller lignende. Hvis denne hydrogenering utføres i nærvær av en base, så frembringes et salt av forbindelsen av formel (I).Egnede baser for innlemmelse inkludererNaHC03, Na2C03, K2C03, Cac03 t M<g>C03, LiCQ3o. 1. Hvis ingen base er til stede, så fører hydrogeneringen til fremstilling av en syre av formel (I) som deretter kan bli nøytralisert om så ønskes, slik at man.£år et salt.Egnede baser for slik nøy-tralisering inkluderer. ,Li0H, NaHC03, KOH, Ca(OH)2, Ba(OH)2, Mg(OH)2, NH^OH, N(C2H5)3, Na-etylheksanoat, K-etylheksanoat

og lignende, f.eks. MgO og NH2C (CH3)3.

Litiumsaltene av forbindelsene av formel (I) har tendens til å kunne fremstilles lettere i ren krystallinsk form enn andre salter av forbindelsene av formel (I). Det er derfor ofte bekvemt å først danne litiumsaltet og deretter omdanne dette til et ytterligere salt ved ionebytting, f.eks. ved å lede en løsning av litiumsaltet gjennom et sjikt av kationbytte-harpiks i natrium-, kalium-, kalsium-, ammonium- eller lignende form.Egnede kationbytte-harpikser inkluderer "Amberlite" IR 120og ekvivalente harpikser. Et annet salt som er egnet for anvendelse som mellomprodukt på denne måte er t-butylaminsaltet.

Oksydasjon av en forbindelse av formel (I) eller et salt eller en spaltbar ester derav hvor X er et svovelatom, kan ut-føres ved reaksjon med en organisk persyre, f.eks. pereddiksyre, metaperjodsyre og m-klorperbenzosyre. Normalt anvendes én ekvivalent av syren for oksydasjon til sulfoksydnivået, mens to ekvivalenter eller flere anvendes for oksydasjon til sulfon-nivået. Reaksjonen utføres vanligvis ved nedsatt temperatur, som bekvemt kan være ca. o°. Egnede løsningsmidler er inerte organiske løsningsmidler, f.eks. diklormetan og kloroform.

Sidekjeden til forbindelsene som fremstilles i henhold

til oppfinnelsen kan, om ønskes, være isomerisert, f.eks. ved behandling med merkuriklorid i tetrahydrofuran ved romtemperatur.

Forbindelsene som fremstilles i henhold til oppfinnelsen, kan renses ved konvensjonelle fremgangsmåter, f.eks. krystalli-sasjon, rekrystallisasjon, kromatografi og lignende.

Følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.

Eksempel 1

p-ni trobenzyl-9-Z_- (2 ' -acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat

Natrium-Z^-acetamidovinyltiolat (0,35 g, 1,77 mmol som

en 1:1 blanding med natriumklorid) ble tilsatt til en omrørt, isavkjølt løsning av p-nitrobenzyl-9-klor-9-deoksyklavulanat

(e 1) (0,63 g, 1,78 mmol) i 20 ml tørt DMF, og røringen ble fortsatt i 30 min. 100 ml etylacetat ble tilsatt, og blandingen ble vasket med vann (2 x 100 ml), tørket over MgS04og inndampet. inndampningsresten ble kromatografert på silisiumdioksyd (35 g, MerckKieselgel 60, 230-400 mesh) i en kolonne med diameter 3 cm under svakt lufttrykk, ved eluering med etylacetat/petroleter (45% etylacetat). Tittelforbindelsen ble påvist ved TLC (silisiumdioksyd, elueringsmiddel etylacetat/- petroleter 2:1) ved R^= 0,55 ved observasjon av platene under UV (254 nm) og ved dusjing av platene med fortynnet kalium-permanganatløsning. Aktuelle fraksjoner ble kombinert og inndampet under redusert trykk slik at man fikk p-nitrobenzyl-9-Z-

(2'-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 2) (0,40g, 52%)

i form av et gult skum. [a]<2>° - 19,2°(c. 0,8» CHCl3): Vma^s^

(CHCl3) 3430, 1808, 1760, 1692 og 1627 cm_:L»^maks (dioksan) 266,5 nm (17800)» Å (CDCl3) 2,07 (3H, s, -C0CH3), 3,05 (1H, d,

J 17, Hz, 60-CH), 3,32 (2H, d, J 8 Hz, 9-CH2 )7~3,51 (lH, dd, J

17 og 2,5 Hz, 6a - CH) , 4,72 (lH, dt, J 8~og 1 Hz, 8 - CH), 5,0-5,4 (4H, m, 3-CH, -SCH= og -CH-jAr), 5,68 (lH, d, J 2,5 Hz,

5 - CH), 7,04 (lH, dd, J 11,5 og 8~Hz, -NHCH=), 7,4 - 7,8 (3H,

m, med 2 proton d ved 7,51, NH og 2 Ar - H), 8,21 (2H, d, 2 Ar-H).

Eksempel 2

Litium-9-Z-(2'-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-Z-(2'-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 2) (0,143 g, 0,33 mmol) ble oppløst i 4 ml tetrahydrofuran under røring, isavkjølt og behandlet med Im vandig ammonium-kloridløsning (4 ml) og 0,5 g jernpulver. Etter 20 min. ble ytterligere 0,3 ml av lM vandig ammoniumkloridløsning og 0,5 g jernpulver tilsatt og røringen fortsatt i 45 min. 20 ml etylacetat ble tilsatt ogHjS boblet gjennom blandingen i 10 min. under isavkjøling. Blandingen ble filtrert gjennom "Celite" og filterrestene vasket med 20 ml vann. Det vandige sjikt av filtratet (inklusive vaskevann) ble mettet med Nacl, surgjort med lN vandig saltsyre til pH 2,5 og separert fra det organiske sjikt. Det vandige sjikt ble ekstrahert ytterligere med etylacetat (2 x 20ml) og de kombinerte etylacetatekstrakter tørket over MgSO^. Etter filtreringen ble etylacetatet ekstrahert med fosfatpuffer med pH 7 (3 x 20 ml). De kombinerte vandige ekstrakter ble mettet med Nacl*surgjort til pH 2,5 med lN vandig saltsyre og ekstrahert med etylacetat (3:;x 20 ml). Etylacetatekstraktene ble tørket over MgSO^og inndampet og inndampningsresten hurtig tatt opp i 10 ml tetrahydrofuran og lo ml vann slik at man fikk en løsning av 9-Z-(2-acetaaridovinyltio)-9-deoksyklavulansyre (e 3). Denne løsning ble bragt til pH 7 ved tilsetning av 0,1N vandig litiumkarbonatløsning, vasket med 10 ml eter og frysetørket. Litium-9-Z-(2'-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 4) ble oppnådd i form av et blekgult faststoff (0,054 g, 54%). [a]<2>£ + 49,5° (c. 0,7: ^ 2°UVmaks. (KBr) 1780, 1670(s), 1620 c»"1» (H20) 224 nm (10210) og* 268 nm (9010): 6(D20-H0D = 4,61) 2,10 (3H, s, -C0CH3), 3,06 (lH, d, J 17,5 Hz, 6/3 - CH) , 3,2 - 3,7 (3H, m, 6a - CH og 9 - CH2), 4,5 - 5,1 (2H, m, delvis formørket av HOD, 3 - CH og 8^CH), 5,50 (lH, d, J 8 Hz, -SCH=), 5,68 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 6,86 (lH, d, J 8 Hz, =CHNH-). Eksempel 3 p-nitrobenzyl-9-Z_-(2 *-acetamidovinylsulfinyl-9-deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-Z-(2'-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 2) (0,25 g, 0,577 mmol) ble oppløst i 20 ml diklormetan, isavkjølt under røring og behandlet dråpevis i løpet av 5 min. med en løsning av m-klorperbenzosyre (0,10 g, 0,58 mmol) i 5 ml diklormetan. Etter røring i 30 min. ble løsningen vasket med IN vannfri natriumbikarbonat (2 x 20 ml) og 20 ml vann, tørket over MgSO^og inndampet. Inndampningsresten ble kromatografert på silisiumdioksyd (30g) på lignende måte som i eksempel 1, under eluering med etylacetat slik at man fikk p-ni trobenzyl-9-Z_- (2 ' -acetamidovinylsulfinyl) -9-deoksyklavulanat (e 5) (0>12 g, 46%). [a]20 - 12,2° (c. 0,9: CHCI3)»Vmaks^

(CHCl3) 3300, 1810, 1758, 1705 (s), 1692 og 1630 cm"<1>»^maks (dioksan) 268 nm (19320) t 6 (CDCl3) 2,05 (3H, s, -C0CH3), 3,08 og 3,11 (lH, 2d, J 17 Hz, 6/3-CH) , 3,4 - 4,0 (3H, m, 6a-CH= og 9-CH2), 4,7 - 5,1 (2H, m, 8-CH og -S0CH=), 5,20 (lH, s, 3-CH), 5,27~(2H, s, -CH2Ar), 5,73 (1H, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 7,3 - 7,6 (3H, rn, 2 Ar-H og =CHNH-) , 8,22 (2H, d, 2 Ar-H) , 10,30 (lH.,

d, J 11 Hz, NH).

Eksempel 4

Litium-9-Z-(2'-acetamidovinylsulfinyl)-9-deoksyklavulanat

En løsning av p-nitrobenzyl-9-Z_- (2 ' -acetamidovinylsulf inyl)-9-deoksyklavulanat (e 5) (0,138 g,0,307 mmol) i 50 ml tetrahydrofuran ble tilsatt til en pre-hydrogenert suspensjon av 10% palladium/trekull (0,20 g) i 50ml tetrahydrofuran.Hydrogeneringen ved én atmosfære ble fortsatt i 2 timer, suspensjonen ble filtrert gjennom "Celite" og filtratet inndampet til 5 ml. ved dette punkt inneholdt løsningen 9-z-(2'-acetamidovinylsulfinyl)-9-deoksyklavulansyre (e 6). 20ml vann ble tilsatt, fulgt av en løsning av 0*lM vandig litium-karbonat (1,53 ml).Løsningen ble vasket med eter (3 x 20 ml), justert til pH 7 med0,5N vandig saltsyre og frysetørket slik at man fikk litium-9-Z-(2'-acetamidovinylsulfinyl)-9-deoksyklavulanat (e 7) (0,07 g, 71%) som et gult faststoff. [a]^ + 36,8° (c. 0,8: DMS°)* V maks (KBr) 1783, 1685 og 1620 cm"1; * maks *H2°* 236 nm (10400'&(D20-H0D = 4,61),2,06 (3H, s, -C0CH3), 3,04 (lH, d, J 17,5 Hz, 6/3-CH) , 3,52 (lH, dd, J 17,5 og 275 Hz, 6o-CH), 3,75 (2H, bred d, J 8 Hz, 9-CH2), 5,55 (lH, d, J 8 Hz,-S0CH=), 5,69 (lH, bred s, 5-CH), 7,34~TlH, d, J 8 Hz, =CHNH-), 8-CH og 3-CH formørket av HOD. Eksempel 5 p-nitrobenzyl-9-z-(2'-acetamidovinylsulfonyl-9-deoksyklavulanat

En omrørt, isavkjølt løsning av p-nitrobenzyl-9-z-(2'-acetami'dovinyltio)-9-deoksyklayulanat (e 2) (0,60 g, 1,38 mmol) i 50 ml diklormetan ble behandlet dråpevis i 10min. med en løsning av m-klorperbenzosyre (0,50g, 2,90mmol).Blandingen ble omrørt. ved 0-5°C i 2 timer, vasket med lN vandig natrium-bikarbonatløsning (2 x 50 ml) og vann (50 ml), tørket over MgSO^og inndampet. Inndampningsresten ble kromatografert på silisiumdioksyd (30 g) på lignende måte som angitt i eksempel 1, under eluering med etylacetat/petroleter 1:1. Det således oppnådde p-nitrobenzyl-9-Z_- (2 ' -acetamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 8) krystalliserte ut fra kloroform/petrol-eter (0,39 g, 60%) som et hvitt, mikrokrystallinsk faststoff, smp. 138-140°C. 8,9° (c. 0,9: CHCl-j)» funnet: C, 49,0» H, 4,4» N, 9,0» S, 6,9% C19<H>i<gN>309S krever C, 49,0» H, 4,1» N, 9,0» S, 6,9%^^(CHCl3) 3380, 1810, 1758, 1722, 1698 (s) og 1629 cm"1» ^maks (dioksan) 257 nm (22580)» 6 (DMS0-d6) 2,09 (3H, s, C0CH3), 3,10 (lH, d, J 17Hz, 60-CH), 3,67 (lH, dd, J 17 og 3Hz, 6a-CH), 3,94 (2H, d, J 8Hz, 9-CH2), 4,78 (lH, t, J 8Hz, 8-CH), 5,33 (2H, s, -CH2År), 5,45 (lH, d,/<J 9,5 Hz, -S02CH=)# 5,54 (lH, s, 3-CH), 5,77 (lH, d, J 3Hz 5-CH), 7,45 (lH, dd, J 12 og 9,5Hz, =CHNH-), 7,64 og 8,23 (4H, 2d, Ar-H), 9,67 (lH, d, J 12 Hz, NH). Eksempel 6 Litium- 9- Z-( 2'- acetamidovinylsulfonyl)- 9- deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-Z-(2 *-acetamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 8) (0,30g, 0,645 mmol) ble oppløst i 15 ml tetrahydrofuran under røring, isavkjølt og behandlet med lM vandig ammoniumkloridløsning (15 ml) og jernpulver (l,lg). Etter 20 min. ble ytterligere 5 ml av lM vandig ammoniumklorid-løsning og 1,1 g jernpulver tilsatt og røringen fortsatt i 45 min. 50 ml etylacetat ble tilsatt og H2S boblet gjennom blandingen i 10 min. med isavkjøling.Blandingen ble filtrert

gjennom "celite" og filterrestene vasket med 30ml vann. Det vandige sjikt av filtratet (inklusive vaskevann) ble mettet med Nacl, surgjort med lN vandig saltsyre til pH 2,5 og separert fra det organiske sjikt. Det vandige sjikt ble ytterligere ekstrahert med etylacetat (2: x 30ml) og de kombinerte etylacetatekstrakter tørket overMgSO^. Etter filtrering ble etylacetatet ekstrahert med fosfatpuffer méd pH 7 (3 x 20 ml). De kombinerte vandige ekstrakter ble mettet med Nacl, surgjort til pH 2,5 med lN vandig saltsyre og ekstrahert med etylacetat (3 x 20 ml). Etylacetatekstraktene ble tørket over MgSO^og inndampet og inndampningsresten hurtig tatt opp i 10ml tetrahydrofuran og 10ml vann slik at man fikk en løsning av 9-S5-(2'-acetamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulansyre (e 9). Denne løsning ble bragt til pH 7 ved tilsetning av 0,1N vandig litium-karbonatløsning, vasket med 10 ml eter og frysetørket. Litium-9-Z-(2'-acetamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 10) ble oppnådd som et blekgult faststoff (0,175 g, 80%). 1°^ ° + 78,0°

(c. 1,23; H20);Vmaks (KBr) 1780, 1690, 1635 (s), 1615 cm"<1>;

X maks *H20) 227 ^ ^ (13840) 0<3 249 nm (20160) ; g (D20 - HOD = 4,61) 2,17 (3H, s, -C0CH3), 3,05 (lH, d, J 17 Hz, 6/S-CH) , 3,56 (lH, dd, J 17 og 2,5 Hz, 6a-CH) , 4,Ol (2H, AB av ABX, J 14 og 8 Hz, 9-CH2), 4,78 (lH, dt, J 8 og 1 Hz, 8-CH), 4,93 (lH, br. s, 3-CH), 5,53 (lH, d, J 9,5 Hz, -S02CH=), 5,72 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 7,55 (1H, d, J 9,5 Hz, =CHNH).

Eksempel 7

p-nitrobenzyl-9-E_- (2 ' -acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-rZ;- (2 * -acetamidovinyltio) -9-deoksyklavulanat (e 2) (1,0 g, 2,31 mmol) ble oppløst i 10 ml tetrahydrofuran og behandlet med0,15 g merkuriklorid. Løsningen ble omrørt i 1 time ved romtemperatur, inndampet og inndampnings-

resten kromatografert på 50 g silisiumdioksyd på lignende måte som angitt i eksempel 1, under eluering med etylacetat/petrol-eter 7:3 slik at man fikk p-nitrobenzyl-9-E-(2'-acetamidovinyltio )-9-deoksyklavulanat (e 11) (0,25 g, 25%) som et gult skum. [alp<0->19,2° (c. 1,3:CHCl3)»vmaks(CHCl3) 3460, 1807, 1758, 1695 og 1623 cm"1» ^ maks (ETOH) 240nm (S) (13800) og 269 nm (17400) » $ (CDCl3) 1,97 *(3H, s, -C0CH3) , 3,07 (lH, d,

J 17 Hz, 60-CH) , 3*27 (2H, d, J 8 Hz, 9-ChJF, 3,49 (lH, dd, J 17 og 2,5 Hz, 6a-CH), 4,71 (lH, bred t, jl Hz, 8-CH), 5,11 (lH, bred s, 3-CH), 5,29 (2H, s, -CHjAr), 5,5-5,8 (2H, m, 5-CH og -SCH=), 6,97 (lH, dd, J 14 og~To Hz, =CHNH-), 7,53 og 8,21 (4H, 2d, Ar-H), 8,57 (lH, d, J 10 Hz, NH)» Funnet: 433,0949 (<M*>)<»><C>i<g>HlgN307S krever 433,0958.

Eksempel 8

jjijbxtM-9-E- (2 ' -acetamidovinyltio) -9-deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-E-(2'-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 11) (0,26 g, 0,60mmol) ble fratatt beskyttelse på identisk måte som angitt i eksempel 6, under anvendelse av det samme reagens og de samme løsningsmiddelmengder til at man fikk litium-9-E-(2'-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 13)

(0,12 g, 66%) som et blekgult faststoff. [a]20* 193,4° (c. 1,1 H20),Vmaks.(K&r) 1765'1687'1680 (s) og 1520cm~1} ^maks.

(H20) 224 nm (13650) og 271 nm (10770)»<&>(D20 - HOD = 4,61)

1,97 (3H, s, -COCH3), 2,97 (lH, d, J 17 Hz, 6/3-CH) , 3,1-3,7

(3H, m, 6o;-CH og 9H2H2) , 4,72 (lH, t, J 8 Hz, 8-CH), 4,86 (lH, s, 3-CH), 5,62 (lH, dT J 2,5 Hz, 5-CH), 5,74 (lH, d, J 514 Hz,

-SCH=), 6,79 (lH, d, J 14 Hz, =CHNH-).

Eksempel 9

p-nitrobenzyl-9-E-(2,-acetamidovinylsulfinyl)-9-deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-Z_- (2 * -acetamidovinylsulf inyl) -9-deoksyklavulanat (e 5) (0,25 g,0,556 mmol) ble oppløst i 10 ml tetrahydrofuran ved romtemperatur og merkuriklorid (0,027 g, 0,1 mmol) tilsatt. Løsningen ble omrørt i 2 timer og inndampet ved redusert trykk, inndampningsresten ble kromatografert på 30g silisiumdioksyd på samme måte som i eksempel 1, under eluering med etylacetat/etanol 4:1 slik at man fikk p-nitrobenzyl-9-E-(2'-acetamidovinylsulfinyl)-9-deoksyklavulanat (e 14) (0,18 g, 73%), som et hvitt skum. [ a]^ ° - 5,7° (c. 1,2»CHCl3)»Vmaks (CHCl3) 3450 (s), 3250 (s) , 1810, 1758, 1712 og 1630 cm<1>""» Ama]cs (EtOH) 255 nm (23760) » & (CDCl3) 2,04 (3H, s, -COCH3), 3,11 og 3,14 (1H, 2d, J 17 Hz, 6/3-CH), 3,3-3,8 (3H, m, 6a-CH~og 9-CH2), 4,68 (lH, bred t, J 8 Hz, 8-CH), 5,18 (lH, bred s, 3-CHJ75,26 (2H, s, -CH2Ar), 5,73 (lH, d, J 2 Hz, 5-CH), 6,06 og 6,09 (lH, 2d, J 16 Hz,~S0CH=) , 7,1-7,7 (3H, m, =CHNH-og 2 Ar-H), 8,20 (2H, d, 2 Ar-H), 9,59 (lH, d, J 10,5 Hz, NH). Eksempel lo p-nitrobenzyl-9-E-(2 *-acetamidovinylsulfinyl)-9-deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-E-(2'-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 11) (0,53 g, 1,22 mmol) ble oppløst i 30 ml diklormetan under røring og isavkjøling og behandlet dråpevis i 5 min. med en løsning av m-klorperbenzosyre (0,211 g, 1,22 mmol) i 10ml diklormetan. Etter røring i 30 min. ved 0-5°C ble løsningen vasket med lN vandig natriumbikarbonatløsning (2 x 30 ml) og 30 ml vann, tørket over MgS04og inndampet. Inndampningsresten ble kromatografert på 30 g silisiumdioksyd på en lignende måte som i eksempel 1, under eluering med etylacetat/etanol 4:1 slik at man fikk p-nitrobenzyl-9-E_-(2'-acetamidovinylsul f inyl)-9-deoksyklavulanat (e 14) (0,38 g, 69%), identisk med produktet fra eksempel 9. Eksempel 11 Litium- 9- E-( 2'- acetamidovinylsulfinyl)- 9- deoksyklavulanat

En løsning av p-nitrobenzyl-9-Ep(2'-acetamidovinylsulfinyl)--9-deoksyklavulanat (e 14) (0,38 g,0,845 mmol) i 50 ml tetrahydrofuran ble tilsatt til en prehydrogenert suspensjon av 10% palladium/trekull (0,60 g) i 50 ml tetrahydrofuran, og blandingen ble hydrogenert ved 1 atmosfære i 2 1/2 timer og filtrert gjennom "Celite".Filtratet, som inneholdt 9-E-(2'-acetamidovinylsulf inyl) -9-deoksyklavulansyre (e 15) ble inndampet til 10ml og behandlet dråpevis i 5 min. med en løsning av litium-karbonat (0,031 g, 0,422 mmol) i 30ml vann.Blandingen ble vasket med etylacetat (3 x 30 ml), surgjort til pH 2 med lN vandig saltsyre, mettet med natriumklorid og ekstrahert med etylacetat (3 x 30 ml). De kombinerte ekstrakter ble tørket over MgSO^og inndampet, og inndampningsresten ble øyeblikkelig tatt opp i 5 ml tetrahydrofuran. 10ml vann ble tilsatt og pH-verdien bragt til 7 ved dråpevis tilsetning av 0,lM vandig litiumkarbonatløsning. Den resulterende løsning ble vasket med lo ml eter og frysetørket slik at man fikk litium-9-E-(2'-acetamidovinylsulfinyl)-9-deoksyklavulanat (e 16) (0,05 g, 18%) som et gult faststoff. + 38,9° (c. 0,9» H20);V.maks (KBr) 1780, 1685 og 1620cm""1: X maks (H20) 234 nm (9910) og 245 nm (s) (9720); 6 (D20 - HOD = 4,61), 2,07 (3H, s, -C0CH3), 3,01 (1H, bred d, j 17 Hz, 6/3-CH), 3,3-3,8 (3H, m, 6a-CH og 9-CH2), 4,91 (lH, bred s, 3-CH), 5,67 (lH, bred s, 5-CH), 6,08 (1H, d, J 14 Hz, -S0CH=), 7,33 og 7,38 (lH, 2d, J 14 Hz, =CHNH-);. 8-CH formørket av HOD.

Eksempel 12

p- nitrobenzyl- 9- E-( 2,- acetamidovinylsulfonyl)- 9- deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-Z-(2'-acetamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 8) (0,40 g, 0,86 mmol) ble oppløst i 20 ml tetrahydrofuran ved romtemperatur og merkuriklorid (0,058 g,0,215 mmol) tilsatt. Løsningen ble omrørt i 3 timer og inndampet ved redusert trykk* Inndampningsresten ble kromatografert på 30g silisiumdioksyd på den måte som er angitt i eksempel 1, under eluering med etylacetat slik at man fikk p-nitrobenzyl-9-E_- (2 '-acetamidovinylsul f onyl) -9-deoksyklavulanat (e 17) (0,30 g, 75%) som et hvitt skum. [a.]<20><->6,8° (c. 2,1; CHCl^) ; V maks (CHCl3) 3300, 1810, 1758, 1730 og 1633 cnrl»*raaks (EtOH) 250 nm (22350);©<*>(CDCl3) 2,11 (3H, s, -C0CH3) , 3,07 (lH, d, J 17 Hz, 6/3-CH), 3,52 (1H, dd, J 17 og 2,5 Hz, 6a-CH) , 3,80 (2H, d, J 8 Hz, 9-CH2), 4,78 (lH, t, J 8 Hz, 8-CH), 5,20 (lH, s, 3-CH), 5,30 (2H, s, -CH2Ar), 5,73 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 6,14 (lH, d, J 14 Hz, -S02CH=), 7,4-7,8 (3H, m, =CHNH- og 2 Ar-H), 8,21 (2H, d, 2 Ar-H), 8,61 (lH, d, J 10,5 Hz, NH) . Eksempel 13 Litium- 9- E-( 2'- acetamidovinylsulfonyl)- 9- deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-E_- (2 ' -acetamidovinylsul f onyl) -9-deoksyklavulanat (e 17) (0,28 g,0,60 mmol) ble fratatt beskyttelse på nøyaktig identisk måte som i eksempel 6, under anvendelse av det samme reagens og de samme løsningsmiddelmengder for tilveiebringelse av litium-9-E-(2'-acetamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 19) (0,09 g, 45%) som et blekgult faststoff.[a]2<0>+131,4° (c. 1,1, H20)*Vmaks.(KBr) 1780(s)'1760'1700, 1635 og 1615 cm~ 19*' ngfog <H2°) 247'5 ^ (20630); 6 (D20 - HOD = 4,61),2,14 (3H, s, -C0CH3), 3,01 (lH, d, J 17 Hz, 6/3-CH), 3,58 (1H, dd, J 17 og 2,5 Hz, 6a-CH) , 3,7-4,2 (2H, m, 9-CH2), 4,73 (lH, t, J 8 Hz, 8-CH), 4,96 (lH, s, 3-CH), 5,70 (lH7~d, J 2,5 Hz, 5-CH), 6,11 (lH, d, J 14 Hz, -S02CH), 7,54 (1H, d, J 14 Hz, =CHNH). Eksempel 14 p-nitrobenzyl-9-Z-(2'-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat og p-nitrobenzyl-9-E-(2'-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat

En 1:1 blanding av natrium-Z-2-acetamidovinyltiolat og natrium-E-2-acetamidovinyltiolat (4,15 g, 0,021 mmol) ble tilsatt til en omrørt, isavkjølt løsning av p-nitrobenzyl-9-klor-9-deoksyklavulanat (e 1) (6,78 g,0,019 mol) i 200 ml tørt dimetylformamid og omrøringen fortsatt i 35 min. 400 ml etylacetat ble tilsatt og blandingen vasket med vann (3 x 300 ml), tørket over MgSO^og inndampet. Kromatografi av inndampningsresten på silisiumdioksyd (100g, i en kolonne med diameter 4 cm) på samme måte som angitt i eksempel 1, under eluering med etylacetat/petroleter 6:4, ga p-nitrobenzyl-9-Z-(2'-acetamidovinyltio) -9-deoksyklavulanat (e 2) (mindre polar, 1,33 g, 16%) og p-nitrobenzyl-9-E-(2'-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 11) (mer polar, 1,78 g, 21%). Disse produkter var identiske med produktene fra henholdsvis eksempel 1 og 7.

Eksempel 15

f p-nitrobenzyl-9-E-(2 *-acetamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat

En omrørt, isavkjølt løsning av p-nitrobenzyl-9-E_-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 11) (1,78 g, 4,11 mmol) i 100 ml diklormetan ble behandlet dråpevis i lo min. med en løsning av m-klorperbenzosyre (1,49 g, 8,63 mmol). Løsningen ble omrørt i 2 timer ved 0-5°C, vasket med IKT vandig natrium-bikarbonatløsning (2 x 100 ml) og 100 ml vann, tørket over MgS04og inndampet. Inndampningsresten ble kromatografert på 60 g silisiumdioksyd, under eluering med etylacetat slik at man fikk p-nitrobenzyl-9-E-(2 *-acetamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 17) (1,5 g, 79%), identisk med produktet fra eksempel 12. Eksempel 16 Natrium-9-E-(2'-acetamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-E-(2'-acetamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 17) (0,29 g, 0,624 mmol) ble fratatt beskyttelse på identisk måte som i eksempel 6, under anvendelse av de samme reagens- og løsningsmiddelmengder, slik at man oppnådde en løsning av 9-E-(2'-acetamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulan-syre i 10 ml tetrahydrofuran. Til denne ble tilsatt lo ml vann, og løsningen ble bragt til pH 7 ved dråpevis tilsetning av0,1N vandig natriumbikarbonatløsning. Organisk løsnings-

middel ble inndampet ved redusert trykk, og den gjenværende vandige løsning ble frysetørket slik at man fikk natrium-9-E-(2'-acetamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 20) (0,154 g, 70%).

Eksempel 17

p- nitrobenzyl- 9- Z_- ( 2 ' - propionamidovinyltio) - 9- deoksyklavulanat og p-nitrobenzyl-9-E-(2 ' -propionamidovinyltio )«9-deoksy-> klavulanat

En 1:1 blanding av natrium-Z-2-propionamidovinyltiolat

og natrium E_-2-propionamidovinyltiolat (0,915 g, 4^35 mmol) ble tilsatt til en omrørt, isavkjølt løsning av p-nitrobenzyl-9-klor-9-deoksyklavulanat (e 1) (1,5 g, 4,26 mmol) i 50 ml tørt DMF.Blandingen ble omrørt i 40 min., fortynnet med 200 ml etylacetat og vasket med vann (3 x 150 ml). Etylacetat-ekstrakten ble tørket overMgSO^og inndampet under redusert trykk. Inndampningsresten ble kromatografert på 50g silisiumdioksyd på den måte som er angitt i eksempel 1, under eluering med etylacetat/petroleter (2:3), slik at man fikk p- nitrobenzyl- 9- Z- ( 2 ' - propionamidovinyltio) - 9- deoksyklavulanat fe v (mindre polar,0,57 g, 30%). [ a^ ° - 21,4° (c. 1.1» CHCl3)j<V>maks.(CHCl3> 3400'1810'1755'1695'1630 cm"<1>* Amaks <Et0H> 266 nm (20180)»<£>(CDCl3) 1,17 (3H, t, J 7,5 Hz, -CH2CH3), 2.30 (2H, q, J 7,5 Hz, -CH2CH3), 3,03 (lH, d, J 17 Hz, 6/3-CH), 3.31 (2H, d, J 8 Hz, 9-CH2), 3,50 (lH, dd, J 17 og 2,5 Hz,

6a-CH), 4,71 (1H, dt, J 8 og 1 Ha, 8-CH), 5,09 (lH, bred s. 3-CH), 5,17 (1H, d, J 7,5 Hz, -SCH=), 5,24 (2H, S, -CH2Ar), 5,67 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 7,03 (lH, dd, J 11 og 7,5 Hz, =CHKfH-) , 7,3 - 7,7 (3H, ra, KH og 2 Ar-H) , 8,21 (2H, d, 2 Ar-H) og p- nitrobenzyl- 9- E-( 2'- propionamidovinyltio)- 9- deoksyklavulanat (mer polar,0,39 g, 20%* - 26,4° (c. 1,1?CHCI3)»^maks (CHC13) 3450, 1305, 1755, 1695, 1620 cnr<l>»^mak<s.>

(EtOH) 240 nm (14590), 271 nm (18670)16 (CDCl3) 1,14 (3H, t, -CH2CH3), 2,24 (2H, q, -CH2CH3), 3,06 (lH, d, J 17 Hz, 60-CH), 3,28 (2H, d, J 8 Hz, 9-CH2), 3,48 (lH, dd, J 17 og 2,5 Hz, 6o-CH) t 4,71 (lH, bred t, J 8 Hz, 8-CH), 5,11 (lH, s, 3-CH), 5,27 (2H, s, -CH2Ar), 5,5-5,8 (2H, m, 5-CH og -SCH=), 6,97 (lH, dd, J 14 og 11 Hz, =CHHH-), 7,4-7,8 (3H, a, WH og 2Ar-H), 8,21 (2H, d, 2Ar-H). Funnet: C, 53,7| H, 4,9» ts, 9,4» S, 7,0%. C20H21<N>3°7S krever,:C»53,7» H, 4,7» Ef, 9,4» S 7,2%.Farveløse nåler, smp. 126-128°C.

Eksempel 18

Litium-9-Z-(2 ' -propionaraidovinyltio)-9-deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-z-(2'-propionamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 21) (0,284 g».0,636 mmol) ble fratatt beskyttelse på samme måte som i eksempel 6, under anvendelse av de samme reagens- og løsningsmiddelmengder, slik at man fikk litium-9-Z-(2'-propionamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 24) (0,147 g. 72%) som et blekgult faststoff. [a]<20>+ 74,9° (c. 1,1» H20).<V>maks.(KBr) 1770'1685»1620cm"<1>»^ maks (H20)231 nm (12060), 269 nm (11000)» å (D20-H0D« 4,60), 1,07 (3H, t, -CH2CH3), 2,33 (2H, q, -CH2CH3), 3,01 (lH, d, J 17 Hz, 6/3-CH), 3,2-3,7 (3H, m, 6a-CH og 9-CH_2), 4,6-5,0 (2H, m delvis formørket av HOD, 8-CH og 3-CH), 5,47 (lH, d, J 8 Hz, -SCH=), 5,66 (lH, d, J 2,5 HZ, 5-CH), 6,85 (lH, d, J 8 Hz, =CHNH-). Eksempel 19 Litium-9-E-(2'-propionamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-E_- (2 ' -propionamidovinyltio) -9-deoksyklavulanat (e 22) (0,225 g, 0,504 mmol) ble fratatt beskyttelse på samme måte som i eksempel 6, under anvendelse av de samme reagens- og løsningsmiddelmengder, slik at man fikk litium-9-E-(2'-propionamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 26) (0,116 g, 72%) som et hvitt faststoff. [ a]^ ° + 171,9° (c. 1,0» H20)»

V maks. (KBr) 1770'1685'1620cm" 1*<A>maks.(H20) 232 1101 (lo99°)'272 nm (10550) j 6 (D20-HOD=^4,60) , 1,05 (3H, t, -CH^HØ , 2,23

(2H, q, -CH2CH3), 2,97 (lH, d, J 17 Hz, 6/3-CH) , 3,1-3,7 (3H, m, 6a-CH og 9-CH_2), 4,88 (lH, s, 3-CH), 5,63 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 5,78 (lH, d, J 14 Hz, -SCH=), 6,84 (lH, d, J 14 Hz, =CHNH-), 8-CH formørket av HOD.,

Eksempel 20

p- nitrobenzyl- 9- 25- ( 2 ' - propionamidovinylsulfonyl) -9-deoksyklavulanat

En omrørt, isavkjølt løsning av p-nitrobenzyl-9-Z-(2'-propionamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 21) (0,30g, 0,672 mmol) i 50ml diklormetan ble behandlet dråpevis i lo min. med en løsning av m-klorperbenzosyre (0,255 g, 1,48 mmol) i 5 ml diklormetan.Blandingen ble omrørt ved0-5°C i 2,5 timer,

vasket med lN vandig natriumbikarbonatløsning (2 x 50 ml) og 50 ml vann, tørket overMgSO^og inndampet. inndampningsresten ble kromatografert på 30g silisiumdioksyd som angitt i eksempel 1, under eluering med etylacetat/petroleter (1:1), slik at man fikk p-nitrobenzyl-9-Z-(2'-propionamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 27) (0,25 g, 78%).Hvitt, mikrokrystallinsk (etylacetat/petroleter), smp. l06-l08°C. lot]^ ° 7,7° (c. 1,1; CHCl3) » V* maks (CHCl3) 3380, 1810, 1760, 1725, 1700 (s) , 1630 cm"<*1>; ^maks. (Et0H> 253,5 nm (31080); £ (CDCl3) 1,18 (3H, t, CH2CH3), 2,37 (2H, q, -CH.2CH3) , 3,07 (lH, d, J 17Hz*6/3-CH) , 3,54 (lH,

dd, J 17 og 2,5 Hz, 6æ-CH) , 3,82 (2H, d, J 8 Hz, 9-CH_2),<4>,78

(lH, dt, J 8 og 1 Hz, 8-CH), 5,1-5,4 (4H, m, -CH_2Ar, 3-CH og

-S02CH=), 5,73 (1H, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 7,4-7,7 (3H, m, 2Ar-H

og =CHNH-), 8,22 (2H, d, 2Ar-H), 9,68 (lH, d, J 12 Hz, WH).

Funnet: C, 50,2; H, 4,5; N, 8,8; S, 6,5%. Beregnet for<C>20<H>21N3°9S: C/50'1?H'4'4» w'8'8* s'6»7%-

Eksempel 21

Litium-9-Z- (2 '-propionamidovinylsulfonyl) -9-deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-J2-(2 '-propionamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 27) (0,19 g, 0,397 mmol) ble fratatt beskyttelse som angitt i eksempel 2, under anvendelse av de samme reagens-og løsningsmiddelmengder, slik at man fikk litium-9-z-(2' - propionamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 29) (0,107 g, 77%) som et gult faststoff. [a]<20>+ 73,4° (c. l,ljH20);V makg (KBr) 1782, 1690, 1620C"<1>"1»^^^(H2°> 225 ^ <S) (H580) , 251 nm (17900); S (D20-H0D=4,61) 1,10 (3H, t, -CH2CH3), 2,46 (2H, q, -CH2CH3), 3,06 (lH, d, J 18 Hz, 6/3-CH) , 3,57 (lH, dd, J 18 og 2,5 Hz, 6cv—CH) , 3,92 (lH, dd, J 15 og 8 Hz, 9-CH) , 4,12 (lH, dd, J 15 og 8 Hz, 9-CH), 4,93 (lH, s, 3-CH), 5,58 (lH, d, J

9,5 Hz - S02CH=), 5,78 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 7,60 (lH, d,

J 9,5 Hz, =CHNH-).

Eksempel 22

p- nitrobenzyl- 9- E-( 2'- propionamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat

En omrørt, isavkjølt løsning av p-nitrobenzyl-9-E_-(2 '-propionamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 22) (0,25 g, 0,56 mmol) i 50 ml diklormetan ble behandlet dråpevis i lo min. med en løsning av m-klorperbenzosyre (0,212 g, 1,23 mmol) i 5 ml diklormetan.Blandingen ble omrørt i 2,5 timer, vasket med lN vandig natriumbikarbonatløsning (2 x 50 ml) og 50 ml vann, tørket over MgSO^og inndampet. Inndampningsresten ble kromatografert på 30g silisiumdioksyd, under eluering med etylacetat/petroleter (3:1), slik at man fikk p-nitrobenzyl-9-E-(2'-propionamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 30) (0,24 g, 89%).Hvitt, mikrokrystallinsk, smp. 175-178°C. [a]<20>+ 25V0° (c. 0,9» DMS0)»Vmaks (CHCl3)1810, 1760, 1725, 1700(s), 1630 c<m>""<1»>\akgMEt0H) 251'5nm (36560) ',& (DMSO) 1,02 (3H, t, -CH2CH3), 2,28 (2H, q, -CH2CH3) , 3,10(lH, d, J 17 Hz, 6/3-CH), 3,5-4,0 (3H, m, 6a-CH og 9-CH_2), 4,72 (lH, bred t, j 8 Hz, 8-CH), 5,33 (2H, s, -CH_2Ar) , 5,50 (lH, s, 3-CH), 5,76 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH, 5,97 (lH, d, J 13 Hz, -S02CH=), 7,3-7,8 (3H, m, 2Ar-H og=CHNH), 8,22 (2H, d, 2Ar-H), 10,62 (lH, J 11 Hz, NH).

Funnet: C, 50,3» H, 4,3» W, 8,7» S, 6j<.7%. Beregnet for<C>20<H>21N3°9S: C'5o'ljH'4'4» N'8'8» s'5»7%«

Eksempel 23

Litium- 9- E-( 2'- propionamidovinylsulfonyl)- 9- deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-E_-(2 '-propionamidovinylsulfonyl) -9-deoksyklavulanat (e 30) (0,16 g, 0,334 mmol) ble fratatt beskyttelse som angitt i eksempel 2, under anvendelse av de samme reagens-og løsningsmiddelmengder slik at man fikk litium-9-E-(2'-propionamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 32) (0,097 g, 83%) som et blekgult faststoff. [a]<20>+ 124,7° (c. 1,1»H20)»V maks.(KBr) 1787'1595'1620cm"1; A maks.(H20) 250nm (1948°)* S (<D>20-HOD=4,60), 1,08 (3H, t, -CH2CH3), 2,38 (2H, q, -CH2CH3), 2,97 (lH, d, J 17 Hz, 6^-CH), 3,53 (lH, dd, J 17 og 2,5 Hz, 6o-CH), 3,81 (lH, dd, J 14 og 8 Hz, 9-CH), 4,04 (lH, dd, J 14 og 8 Hz, 9-CH), 4,92 (lH, s, 3-CH), 5,67 (lH- d, J 2,5 Hz, 5-CH), 6,11 (lH, d, J 14 Hz, -S02CH=), 7,54 (lH, d, J 14 Hz, «CHNH-). Eksempel 24 p-nitrobenzyl-9-Z_- (2 ' -formamidovinyltio) -9-deoksyklavulanat

Kfatrium-Z-2-formamidovinyltiolat (0,78 g, 4,25 mmol) ble tilsatt til en omrørt, isavkjølt løsning av p-nitrobenzyl-9-klor-9-deoksyklavulanat (el) (1,50 g, 4,25 mmol) i 50 ml tørt DMF. Blandingen ble omrørt i 35 min. fortynnet med 200 ml etylacetat og vasket med vann (3 x 150 ml). Etylacetatet ble tørket overMgSO^og inndampet under redusert trykk.Inndamp-ningsresten ble kromatografert på 40 g silisiumdioksyd som angitt i eksempel 1, under eluering med etylacetat/petroleter (1:1), slik at man fikk p-nitrobenzyl-9-Z-(2'-formamidovinyltio) -9-deoksyklavulanat (0,495 g, 28%) som en blekgul olje.

[ a)^ ° - 16,4° (c. 1,1; CHCl3)>V maks> (CHCI3) 3390, 1808, 1758, 1700, 1635 cm"1» A (EtOH) 269 nm (19120)»* (CDCl3) 3,04 (lH, d, J 17 Hz, 60-CH), 3,2-3,7 (3H, m, 6a-CH og 9-CH2), 4,72 (lH, t, J 8 Hz, 8-CH), 5,0-5,4 (4H, m, 3-CH, -SCH= og

-CH2Ar), 5,69 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 6,69 (liten) og 7,10Xstor) (lH, 2 dd, J 11,5 og 7,5 Hz, =CHNH-), 7,4-8,0 (lH, bred hump,NH), 7,51 (2H, d, 2Ar-H), 8,1-8,4 (3H, m, 2Ar-H og

CHO) .

Eksempel 25

Natrium-9-^,- ( 2 ' - formamidovinyltio) - 9- deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-Z~(2'-formamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (0,225 g, 0,537 mmol) ble fratatt beskyttelse som angitt i eksempel 6, under anvendelse av de samme reagens- og løsningsmiddelmengder med unntagelse av at vandig natriumbikarbonat ble anvendt istedenfor litiurakarbonat for nøytrali-sering av den frie syre (e 34). Natrium-9-Z-(2'-formamidovinyltio) -9-deoksyklavulanat ble fremstilt som et gult faststoff (0,15 g, 92%). la]<20>+ 32,3° (c. 1,0» B^O);V maks (<K>Br) 1780, 1680, 1620cm" 1»A makg^ (H20) 230 nm (9760), 270nm

(8600)f 6 (D20-HOD=4,61) 3,02 (lH, d, J 17,5 Hz, 6/3-CH) , 3,2-3,7 (3H, m, 6a-CH og 9-CH_2), 4,87 (lH, s, 3-CH), 5,38 (liten, d, J 8Hz) og 5,57 (stor, dd, J 8 og 1,5 Hz) (lH, -SCH=), 5,65^

(lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 6,78 (liten) og 6,92 (stor) (lH, 2d, J 8 Hz, =CHNH) , 8,05 (stor) og 8,29 (liten) (lH, 2s, -«.CHO).

8-CH formørket av HOD.

Eksempel 26

p- nitrobenzyl- 9- Z-( 2'- formamidovinylsulfonyl)- 9- deoksyklavulanat

En omrørt, isavkjølt løsning av p-nitrobenzyl-9-Z<_->(2<*->formamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 33) (0,265 g, 0,632 mmol) i 50ml diklormetan ble behandlet dråpevis i lo min. med en løsning av m-klorperbenzosyre (0,24 g, 1,39 mmol) i 5 ml diklormetan.Blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 2 timer, vasket med lN vandig natriumbikarbonatløsning (2 x 50 ml) og 50 ml vann, tørket over MgSO^og inndampet. inndampningsresten ble kromatografert på 30 g silisiumdioksyd på samme måte som i eksempel 1, under eluering med etylacetat/petroleter (1:1), slik at man fikk p-nitrobenzyl-9-Z-(2'-formamidovinylsulfonyl) -9-deoksyklavulanat (e 36) (0,23 g, 80%) som et hvitt skum. [ a)* ° - 7,0° (c. 1,1; CHCl3)jVmaks (CHC13) 3360, 1812, 1760, 1730, 1700 (s), 1635 cm"<1>, Amakg (EtOH) 253 nm (18250), 6 (CDCl3) 3,08 (lH, d, J 17 Hz, 6/3-CH), 3,56 (lH, dd, J 17 og 2,5 Hz, 6a-CH) , 3,84 (2H, d, J 8 Hz, 9-CH_2), 4,79 (lH, t, J 8 Hz, 8-CH), 5,21 (lH, s, 3-CH), 5,28 (2H, S, -CH_2Ar) , 5,43 (lH, å',- J" r 10 Hz, -S02CH=) , 5,74 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 7,4-7,8 (3H, m, 2Ar-H og =CHHH-), 8,1-8,4 (3H, m, 2Ar-H og CHO), 9,78 (lH, d, J 12 Hz, NH). Eksempel 27 Litium-9-Z_- (2 ' -formamidovinylsulfonyl) -9-deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-Z_- (2 1 -formamidovinylsulf onyl) -9-deoksyklavulanat (e 36) (0,236 g, 0,523 mmol) ble fratatt beskyttelse som angitt i eksempel 6, under anvendelse av de samme reagens-og løsningsmiddelmengder, slik at man fikk litium-9-z-(2'-formamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 38) som et gult faststoff (0,145 g, 86%). [ a]* ° + 39,4° (c. 1,0, H20)^ maks. (KBr) 1785, 1700, 1625 C"1"1?^^]^ (H20) 230nm <s) (H270) , 248 (14330) , 6 (D20-H0D=4,61) 3,03 (lH, d, J 17,5 Hz, 6/3-CH), 3,53 (lH, dd, J 17,5 og 2,5 Hz, 6a-CH), 3,97 (2H, d, j 8 Hz, 9-CH_2), 4,89 (lH, s, 3-CH), 5,3-5,8 (2H, m, -S02CH= og 5-CH), 7,30 (liten) og 7,54 (stor) (lH, 2d, J 9,5 Hz, =CHNH), 8,17 (stor) og 8,28 (liten) (lH, 2s, CHO), 8-CH formørket av HOD. Eksempel 28 p- nitrobenzyl- 9- E-( 2'- formamidovinyltio)- 9- deoksyklavulanat Natrium-E-2-formamidovinyltiolat (0,41 g, 2,23 mmol) ble tilsatt til en omrørt, isavkjølt løsning av p-nitrobenzyl-9-klor-9-deoksyklavulanat (0,788 g, 2,23 mmol) i 25 ml tørtDMP. Blandingen ble omrørt i 45 min. ved 0-5°C, fortynnet med 150 ml etylacetat og vasket med vann (3 x 100 ml). Etylacetatløsningen ble tørket over MgSO^og inndampet. inndampningsresten ble kromatografert på 30g silisiumdioksyd som angitt i eksempel 1, under eluering med etylacetat/petroleter (3:2),,slik at man fikk p-nitrobenzyl-9-E-(2'-formamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 39) som en farveløs olje (0,28 g, 30%). la]^<0><->9,2° (c. 1,2; CHCl3);Vmaks (CHCl^) 3430, 1807, 1755, 1695, 1630 cm"<*1>; ^maks (Et0H) 277^(15530) ; 5 (CDCl3) 2,9-3,7 (4H, m, 6-CH_2og 9-CH2), 4,72 (lH, t, J 8 Hz, 8-CH), 5,13 (lH. s, 3-CH), 5,29 (2H, s, -CH2Ar), 5,4-6,0 (2H, m, 5-CH og SCH=), 6,59 (liten) og 6,89 (stor) (lH, 2dd, J 14 og 10,5 Hz, =CHNH-), 7,51 (2H, d, 2Ar-H), 8,05 (lH, s, -CHO), 8,22 (2H, d, 2 Ar-H), 7-8,5 (lH, , meget bred,NH). Eksempel 29 Litium-9-E-( 2'- formamidovinyitio)- 9- deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-E-(2'-formamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 39) (0,12 g, 0,286 mmol) ble fratatt beskyttelse på samme måte som i eksempel 2, under anvendelse av de samme reagens- og løsningsmiddelmengder, slik at man fikk litium-9-E-(2'-formamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 41) (0,05 g, 60%).[a]20+108,7° (c. 0,9» H20) » vraaksr,(KBr) 1780, 1675, 1625 cia*"1!^ s (h20) 227 nm (11820), 271 nm (9370)» & (D20-H0D=4,61) 2,97 (liten) og 3,00 (stor) (lH, 2d, J 17 Hz, 6/3-CH), 3,1-3,7 (3H, m, 6a-CH og 9-CH2), 4,5-5,1 (2H og HOD, m, 8-CH og 3-CH), 5,64 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 5,68 (liten) og 5,93 (stor) (lH, 2 d, J 14 Hz, -SCH==) , 6,73 (liten) og 6,83 (stor) (lH, 2d, j 14 Hz, =CHNH-), 7,91 (stor) og 8,17 (liten)

(lH, 2s, CHO).

Eksempel 30

p-nit robenzyl- 9- E-( 2'- formamidovinylsulfonyl)- 9- deoksyklavulanat

En omrørt, isavkjølt løsning av p-nitrobenzyl-9-E-(2'-formamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 39) (0,17 g, 0,405 mmol) i 20 ml diklormetan ble behandlet dråpevis i 2 min. med en løsning av m-klorperbenzosyre (0,154 g, 0,89 mmol) i 5 ml diklormetan ved 0-5°C.Blandingen ble omrørt i 1,5 timer, vasket med lN vandig natriumbikarbonatløsning (2 x 20 ml) og 20 ml vann, tørket over MgSO^og inndampet. inndampningsresten ble kromatografert på 25 g silisiumdioksyd på samme måte som i eksempel 1, under eluering med etylacetat/petrol-eter (3:1), slik at man fikk p- nitrobenzyl-9-E-(2'-formamido-vmylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 42) (0,1.3 g, 71%). la]* - 8,4° (c. 1,0, CHCl3),Vmaks>(CHCI3) 1810, 1757, 1728, 1700 (s), 1640 cm*"1, A maks (EtOH) 250 nm (19900), £ (CDCI3) 3,08 (lK, d, J 17 Hz, 6/3-CH), 3,56 (lH, dd, J 17 og 2,5 Hz, 6a-CH) , 3,84 (2H, d, J 8 Hz, 9-CH2) 4,79 (lH, t, J 8 Hz, 8-CH), 5,21 (lH, s, 3-CH), 5,28 (2H, s, -CELjAr), 5,43 (lH, d, J lO Hz, -S02CH=) , 5,74 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 7,4-7,8 (3H, m, 2 Ar-H og =CHNH-), 8,1-8,4 (3H, m, 2 Ar-H og CHO), 9,78 (lH, d, J 12 Hz, NH). Eksempel 31 Litium-9-E-(2'-formamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat

p-nitrobenzyl-9-E->(2 * -formamidovinylsul f onyl)-9-deoksyklavulanat (e 42) (0,115 g, 0,255 mmol) ble fratatt beskyttelse som angitt i eksempel 2, under anvendelse av de samme reagens-og løsningsmiddelmengder, slik at man fikk litium-9-E-(2<*->formamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (e 44) (0,035 g, 43%).[a]2<0>+28,6° (c.0,9» ^ 20)* '^ maks. (KBr) 1785, 1695, 1630cm"1» *maks_ (H20) 242 nm (14870) » ;6 (D20-H0D=4,61) 3,00 (lH, d, J 17,5 Hz, 6/3-CH), 3,54 (lH, dd, J 17,5 og 2,5 Hz, 6o-CH), 3,94 (2H, d, J 8 Hz, 9-CH2), 5,67 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 6,33 (stor) (^1H, d, J 14 Hz, -S02CH=), 7,51 (stor) (^lH, d, J 14 Hz, =CHNH-), 8,26 (stor) og 8,40 (liten) (lH, 2s,CHO).

Eksempel 32

Forskyvning av p- nitrobenzyl- 9- O- dikloracetylklavulanat med natrium- acetamidovinyltiolat

En 1:1 blanding av natrium-Z-2-acetamidovinyltiolat og natrium-E-2-acetamidovinyltiolat (0,49 g, 2,48 mmol) ble opp-løst i lo ml tørt dimetylformamid og tilsatt dråpevis til en omrørt, isavkjølt løsning av p-nitrobenzyl-9-0-dikloracetylklavulanat (e45) (1 gt 2,25 mmol) i tørt dimetylformamid (10 ml).Blandingen ble lagret ved 0-5° i 45 min,.., fortynnet med 100 ml etylacetat, vasket med vann (3 x 100 ml), tørket over vann-fritt magnesiumsulfat og inndampet. Kromatografi av inndampningsresten på 35 g silisiumdioksyd slik som beskrevet i eksempel 1, ga p-nitrobenzyl-9-Z-(2'-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 2) (0,208 g, 21%) som det mindre polare produkt, og p-nitrobenzyl-9-E-(2'-acetamidovinyltio)-9-deoksyklavulanat (e 11) (0,136 g, 14%) som det mer polare produkt. Disse produkter er identiske i alle henseender med produktene fra henholdsvis eksempel 1 og 7.

Preparater

(a)Sterilt natrium-9-E-(2'-acetamidovinylsulfonyl)-9-deoksyklavulanat (100 mg) kan fylles i glassbeholdere og for-segles, innholdet kan oppløses i sterilt vann for injeksjon BP (1,5 ml) for tilveiebringelse av en injiserbar løsning.

ib) En todelt hård gelatinkapsel kan fylles med en blanding av natrium-9-E-(2'-acetamidovinylsulfonyl)- 9-deoksyklavulanat (125 mg) og amoxycillin-trihydrat (250mg).

Tilberedning 1

Natrium- Z_- 2- acetamidovinyltiolat

(a) 2-( 2', 2'- dietoksyetyltio) acetamid

0,878 g natrium ble oppløst i 150 ml absolutt etanol under inert atmosfære. 3,47 g tioglykolamid (fremstilt som beskrevet av Sokol og Ritter,J.A.C.S. 70 3517 (1948)) ble tilsatt og, da praktisk talt alt amid hadde oppløst seg, ble 11,5 ml bromacetaldehyd-dietylacetal tilsatt.Blandingen ble oppvarmet ved 60-65°C i 7 timer, avkjølt og filtrert og filtratet inndampet under redusert trykk.Inndampningsresten ble oppløst i 100 ml etylacetat og 50 ml saltvann, sjiktene ble separert og salt-vannet ekstrahert med 50 ml etylacetat. De kombinerte etylacetatekstrakter ble tørket over Na2S04og inndampet under redusert trykk slik at man fikk en olje. Kromatografi på 50 g silisiumdioksyd, eluering med etylacetat/petroleter ga tittelforbindelsen (6 g) i form av en olje. V maks (CHCl3) 3500, 3400 og 1690cm"1; 6 (CDCl3) 1,20 (6H, t, J 7 Hz, -CH2CH3), 2,80(2H, d, J 5 Hz,>CHCH2<S>-),3,25 (2H, s, -SCH2C0-), 3,58~(4H,

2q J 7 Hz, -0CH2CH3)7~<*>4,62 (lH, t, J 5 Hz, -CHCH2S-) , 7,00 ( 2H, s, -C0<N>H2); Funnet: 207,0951 (M<+>) CgH17N03S krever 207,0929.

(b) 2, 3- dihydro- 4H- l, 4- tiazin- 3- on

4 g 2-(2',2'-dietoksyetyltio)acetamid ble oppløst i 80 ml benzen, 0,01 g p-toluensulfonsyre tilsatt og blandingen opp-^-= varmet under tilbakeløp i inert atmosfære med en Dean and Stark-felle i 3 timer. Løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk og resten kromatografert på 50 g silisiumdioksyd, under eluering med etylacetat/petroleter slik at man fikk tittelforbindelsen (80%). Hvite plater, smp. 74-75°c (etylacetat/-

petroleter). V maks (CHCl3) 3200, 1690, 1635 og 1625 cm"1, 6 (CDC13) 3,28 (2H, s, -CH2~), 5,57 (lH, d, J 7 Hz, =CH.S-), 6,37 (lH, dd, J og 5 Hz, =€H.N-) , 9,13 (lH, bred s, WH). X maks (EtOH) 230 nm (2940) og 302 nm (2690). Funnet: C, 41,4, H, 4,4, N, 12,1%. C4H5NOS krever C, 41,7, H, 4,35, W, 12,2%. (c) watrium-2_-2-acetamidovinyltiolat 2,3~dihydro~4H-l,4-tiazin~3-on (1,61 g,0,014 mol) ble oppløst under omrøring i lOO ml flytende ammoniakk og behandlet med natrium (0,645 g,0,028 mol), tilsatt i små stykker i 20 min.Blandingen ble rørt i ytterligere 15 min. og behandlet med fast ammoniumklorid (0,748 g, 0,014 mol) porsjonsvis i 5 min. Ammoniakken ble fordampet, idet de siste spor ble fjernet ved 40°C under vakuum, slik at man fikk tittelforbindelsen blandet med én ekvivalent natriumklorid (2,66 g, 96%) som et off-white, hygroskopisk faststoff. <S (D20 - HOD ved 4,61), 2,05 (3H, s, -COCH3), 5,94 (lH, d, J 7,5 Hz, -SCH=), 6,62 (lH, d, J 7,5 Hz,

=CHNH-) .

Tilberedning 2

E-Z-blanding av natrium-2-acetamidovinyltiolater

(a) 1, l- dietoksy- 2- etyltioetan

Natrium (10,7 g,0,463 mol) ble oppløst i 500 ml etanol

og isavkjølt. Etantiol (34,4 ml, 0,463 mol) ble tilsatt og etter 15 min. ble bromacetaldehyd-dietylacetal (83,8 g, 0,421 mol) tilsatt.Blandingen ble kokt med tilbakeløp i 3 timer og volumet redusert til 200 ml ved destillasjon av noe av etanolen ved atmosfæretrykk. 500 ml eter ble tilsatt og løsningen vasket med vann (3 x 200 ml), tørket overMgSO^og inndampet ved atmosfæretrykk. inndampningsresten ble destillert slik at man fikk tittelforbindelsen (70,46 g, 99%) kp, 96-l00°C/20 mm Hg.

(b) E_-Z-blanding av (2-acetamidovinyl)etylsulfider

En blanding av l,l-dietoksy-2-etyltioetan (10 g, 0,0595 mol), p-toluensulfonsyre-monohydrat (11,3 g, 0,0595 mol) og acetamid (17,5 g, 0,3 mol) i 250 ml DMF ble omrørt ved 90°C i 3 timer. Løsningsmidlet ble inndampet ved 50°C under redusert trykk, inndampningsresten tatt opp i 600 ml etylacetat og vasket med vann (3 x 100 ml). De kombinerte vaskevann ble re-ekstrahert med 200 ml etylacetat og det kombinerte etylacetat tørket over MgSO^og inndampet under redusert trykk.Inndampningsresten ble kromatografert på 80 g silisiumdioksyd, under eluering med etylacetat/petroleter 2:1 slik at man fikk tittelforbindelsene som en tilnærmet 1:1 blanding (2,9 g, 33%).

V maks (CHCl3) 3420, 1690og 1630 cm""1, $ (CDCl3) 1,25 og 1,28 (3H, 2t, -SCH2CH3), 2,03 og 2,11 (3H, 2s, -COCH-j) , 2,59 og 2,64 (2H, 2q, -S*CH2CH3) , 5,31 (d, J 7,5 Hz, -SCH= av Z-isomer) og 5,74 (d, J 14 Hz, -SCH= av E^isomer), 6,8 - 7,3 (lH, m, =CHNH- begge isomerer), 7,8 og 8,95 (lH, 2 brede topper,NH).

(c) E_-Z-blanding av natrium-2-acetamidovinyltiolater

En E-Z~blanding av (2-acetamidovinyl)etylsulfider (4,5 g, 0,031 mol) ble oppløst i flytende ammoniakk (200ml) og behandlet med natrium (1,43 g, 0,062 mol), tilsatt i små stykker i 20 min. Den resulterende gule løsning ble omrørt i ytterligere 15 min., behandlet med ammoniumklorid (1,66 g, 0,031 mol) porsjonsvis i 5 min. og løsningsmidlet fordampet. De siste spor av ammoniakk ble fjernet ved 40°C under vakuum slik at man fikk tittelforbindelsene, blandet med éh ekvivalent natriumklorid, i form av et lærfarvet, hygroskopisk faststoff (6,13 g, 100%). 6 (D20-H0D ved 4,61) 1,91 og 2,05 (3H>2s, -C0CH3),

5,94 (d, J 7,5 Hz, -SCH= av Z-isomer), 6,25 (d, J 14 Hz, -SCH= av E-isomer), 6,59 (d, J 14 Hz, =CHNH- av E_-isomer), 6,63 (d,

J 7,5 Hz, =CHNH- av Z-isomer).

Tilberedning 3

JS-jZ-blanding av natrium-2-propionamidovinyltiolater

(a) E- Z- blanding av etyl( 2- propionamidovinyl) sulfider

En blanding av l,l-dietoksy-2-etyltioetan (5 g, 0,0298 mol), propionamid (7,31 g, 0,1 mol) og p-toluensulfonsyre-monohydrat (1,37 g, 0,0072 mol) i 130 mlDMFble omrørt ved 90°C i 2 timer. Løsningsmidlet ble fordampet ved 50°C under redusert trykk, inndampningsresten tatt opp i 300ml etylacetat og vasket med vann (3 x 100 ml). De kombinerte vaskevann ble re-ekstrahert med 100ml etylacetat, disse kombinerte etylacetatekstrakter ble tørket over MgSO^og inndampet. inndampnings resten ble kromatografert på 50g silisiumdioksyd, under eluering med etylacetat/petroleter (1:1), slik at man fikk tittelforbindelsene i form av en tilnærmet 1:1 blanding (2,20g, 46%). S (CDCl3) 1,0-1,5 (6H, m, 2 x -CH2CH3), 2,0-2,9 (4H, m,

2 x -CH2CH3), 5,32 (d, J 7,5 Hz, -SCH= av Z-isomer) og 5,77

(d, J 14 Hz, -SCH= av E-isomer), 6,8-7,3 (lH, m, =CHKH- av begge isomerer), 7,7 og 8,6 (1H,2 brede topper, NH).

(b) E-fc-blanding av natrium-2-propionamidovinyltiolater

En E-Z-blanding av etyl(2-propionamidovinyl)tiolater

(3,50 g, 0,022 mol) ble oppløst i 250 ml flytende ammoniakk

og behandlet med natrium (1,01 g,0,044 mol), tilsatt som små

stykker i 15 min. Den resulterende løsning ble omrørt i ytterligere 5 min., behandlet med ammoniumklorid (1,18 g, 0,022 mol) og løsningsmidlet fordampet. Da fordampningen var nesten full-stendig og resten var en halv-fast masse, ble 200 ml tørr eter tilsatt og det resulterende faststoff triturert og filtrert fra. Etter tørking i eksikator ble tittelforbindelsen oppnådd i form av et lærfarvet, hygroskopisk faststoff, blandet med én ekvivalent natriumklorid (4,62 g, 99%) 6 (D20-HOD=4,60) 0,9-1,4 (6H, m, 2 x -CH2CH3), 1,9-2,7 (4H, m, 2 x -CH2CH3), 5,98 (d, J 7,5 Hz, -SCH= av Z-isomer) 6,29 (d, J 14 Hz, -SCH= av E-isomer), 6,4-6,8 (lH-, m, =CHNH- av begge isomerer).

Tilberedning 4

E-Z-natrium-2-formamidovinyltiolater

(a) E- og z-etyl(2-formamidovinyl)sulfider

En blanding av l,l-dietoksy-2-etyltioetan (5 g, 0,0298 mol), formamid (6,7 g,0,149 mol) og p-toluensulfonsyre-monohydrat (5,0 g,0,0263 mol) i 120 ml DMFble omrørt ved 90°C i 4 timer. Løsningsmidlet ble fordampet ved 50°C under redusert trykk og 100 ml mettet saltvann tilsatt til inndampningsresten. Denne blanding ble ekstrahert med etylacetat (3 x 100 ml), de kombinerte ekstrakter tørket over MgSO^og inndampet. inndampningsresten ble kromatografert på 50g silisiumdioksyd, under eluering med etylacetat/petroleter (1:2), slik at man fikk det mindre polare Z-etyl(2-formamidovinyl)sulfid (0,99 g, 25%) og det mer polare E-etyl(2-formamidovinyl)sulfid (0,75 g, 19%).

Z-isomer -%aks> (CHCI3) 3400, 1695, 1635 cm-<1>, ^maks.

(EtOH) 238 nm (7610), 271 nm (13350)» S (CDCl-j) 1,28 (3H, t, -CH2CH3), 2,67 (2H, q, -CH2CH3), 5,2-5,6 (lH, m, -SCH=), 6,74 (liten) og 7,19 (stor) (lH, 2dd, J 7,5 og 11,5 Hz, = CHNH), 7,0-9,0 (lH, bred pukkel, MH), 8,2-8,6 (lH, m, CHO).

E-isomer -^maks (CHCl3) 3450, 1695, 1635 cm*"1» ^ maks (EtOH) 232 nm (8010), 274 nm (13250)» 6 (CDCl3) t 1/27 (3H, t,CH2C<H>3), 2,61 (liten) og 2,63 (stor) (2H, 2q, -CH2CH3), 5,73 (liten) og 5,91 (stor) (lH, 2 d, j 14 Hz, -SCH=)>6,54 (liten) og 6,96 (stor) (lH, 2dd, J 14 og 10,5 Hz, =CHNH-), 7,7-9,0

(2H, m, NH og CHO).

(b) Z_- natrium- 2- formamidovinyltiolat

Z-etyl(2-formamidovinyl)sulfid (0,956 g, 7,3 mmol) ble oppløst i 100 ml flytende ammoniakk og behandlet med små stykker av natrium £>,336 g, 14,6 mmol) i 10min. Etter at alt natrium hadde oppløst seg, ble blandingen behandlet med ammoniumklorid (0,39 g, 7,3 mmol) og løsningsmidlet fordampet til det var igjen en halv-fast masse. 100 ml tørr eter ble tilsatt, faststoffet ble triturert, filtrert fra og tørket i eksikator slik at man fikk tittelforbindelsen i form av et off-white faststoff blandet med én ekvivalent natriumklorid (1,34 g, 100%).

V maks ( KB*) 1675*1620, 1605 cm""1» Å makg (H20)231 nm (5110), 287 nm (9620)»o" (D20-HOD=4,60) , 5,83 (liten, d, J 7,5Hz) og 6,06 (stor, dd, J 7,5 og 1,5 Hz) (lH, -SCH=, 6,5-6,9 (lH, m, =Cmm-), 8,03 (stor) og 8,31 (liten) (lH, 2s, CHO).

(c) E- natrium- 2- formamidovinyltiolat

E-etyl(2-formamidovinyl)sulfid (0,75 g, 5,72 mmol) ble oppløst i 100 ml flytende ammoniakk og behandlet med små stykker av natrium (0,264 g, 11,44 mmol) i 10 min. Etter at alt natrium hadde oppløst seg, ble blandingen behandlet med ammoniumklorid (0,306 g, 5,72 mmol) og løsningsmidlet fordampet til det var igjen en halv-fast masse. 100 ml tørr eter ble tilsatt, faststoffet ble triturert, filtrert fra og tørket i eksikator slik at man fikk tittelforbindelsen i form av et lærfarvet, hygroskopisk faststoff blandet med én ekvivalent natriumklorid (1,0 g, 95%). y maks (KBr) 1660cm""<1>» ^ makg (H20) 230 nm (4510), 286 nm (10240)» <$ (D20-H0D=4,60) 6,3-6,9 (2H, m, -CH=CH), 7,71 (stor) og 8,04 (liten) (lH, 2s, CHO).

Demonstrasjon 1

Farmakologisk effektivitet

Mus ble infisert intraperitonealt med mucin-suspensjon av organismer.Doseringen var ad subkutan vei ved 1 og 5 timer post-infeksjon. varierende doser av amoxycillin ble gitt med 1, 2 eller 5 mg/kg av inhibitor. Alle 3 stammer av infiserende organismer var stammer som produserte en plasmid-mediert 0-laktamase.

Sammenligning av synergistisk aktivitet for forbindelsen fra eksempel 13 og klavulansyre- natriumsalt med amoxycillin i akutte museinfeksjoner

CDgQ(mg/kg) - subkutan dosering etter 1 og 5 timer

Sammenligning av synergistisk aktivitet for forbindelsen fra eksempel 6 og klavulansyre- natriumsalt med amoxycillin i akutte museinfeksjoner

CDg0mg/kg - subkutan dosering etter 1 og 5 timer

Claims (5)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse av formel (i):

eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in<~ vivo-hydrolyserbar ester derav hvor R er et hydrogenatom eller en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer og X er et svovelatom eller en SO-eller S02 -gruppe, karakterisert ved å omsette en spaltbar ester av en forbindelse av formel (iv)s

hvor Y er et forskyvbart atom eller en sådan gruppe, med et tiolat av en tiol av formel (V)s

hvor R er som definert ovenfor, slik at man får den spaltbare ester av forbindelsen av formel (I) hvor X er et svovelatom, og deretter eventuelt å utføre ett eller flere av1følgende_trinn: (a) oksydere svovelatomet til en SO- eller S02 -gruppe, (b) spalte den spaltbare ester slik at man får forbindelsen av formel (I) eller et salt derav, (c) omdanne forbindelsen av formel (I ) eller et salt derav til dens farmasøytisk akseptable salt eller in vivo-hydrolyserbare ester, (d) omdanne et salt av forbindelsen av formel (I) til den frie syre, (e) isomerisere dobbeltbindingen mellom -X- og -NH-gruppene.

2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at det fremstilles en forbindelse av formel (I) hvor svovelatomet oksyderes til en SC^ -gruppe.

3. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at det fremstilles en forbindelse av formel (I) hvor dobbeltbindingen mellom X- og NH-gruppene er i E-konfigurasjon.

4. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at det fremstilles en forbindelse av formel (I) hvor R er en metylgruppe.

5. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at det fremstilles 9-E-(2-acetamidovinylsul-fonyl)-9-deoksyklavulansyre eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo-hydrolyserbar ester derav.