NO167382B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive 4-hydroxy-4-(substituerte alkenyl)cyklohexancarboxylsyrer. - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse angår fremstilling av en gruppe av forbindelser som er 4-hydroxy-4-(substituerte alkenyl)cyklohexancarboxylsyrer og syrederivater derav. Nærmere bestemt angår oppfinnelsen en analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser av formel:

hvori n er et helt tall på fra 0 til 2; R er rettkjedet alkyl inneholdende fra 6 til 15 carbonatomer; Y er hydroxy, -o-(lavere alkyl), -NH^ eller hvor R<1> er hydrogen, alkyl med fra 1 til 4 carbonatomer; og Z er hydroxy eller -0-(lavere alkyl). Y og Z kan være like eller forskjellige selv om de vanligvis er like. De lavere alkylgrupper inneholder 1 til 4 carbonatomer.

Stereqisomeri er mulig med foreliggende forbindelser, og den kjemiske struktur angitt ovenfor betraktes som å omfatte alle de mulige stereoisomerer og også racemiske blandinger av slike stereoisomerer. Når nærmere bestemt substituenten i den ovenfor angitte struktur er bundet til cyklohexanringen med en enkel binding, er to isomerer mulig ved hvert punkt, avhengig av hvorvidt substituenten er over eller under cyklohexanring-planet. I de foreliggende forbindelser med substituenter ved 1- og 4-stilling av cyklohexanringen er imidlertid et symmetri-plan mulig, slik at antall mulige stereoisomerer reduseres.

Når det gjelder dobbeltbindingen, er geometrisk (cis-trans)-isomeri mulig, avhengig av stillingen av R-gruppen i den dob-beltbundne struktur i forhold til resten av molekylet. Gene-reit kan racemiske blandinger erholdes mer lett enn de indi-viduelle optiske isomerer, slik at forbindelsene som beskrevet og erholdt i foreliggende søknad skal betraktes som racemiske blandinger medmindre annet er angitt. Hvor den absolutte kon-figurasjon er spesifisert for en forbindelse, indikerer den den hovedoptiske isomer tilstedeværende i hva som generelt er en blanding inneholdende en liten mengde av enantiomeren.

De lavere alkylgrupper inneholder som ovenfor angitt 1 til 4 carbonatomer, og denne definisjon gjelder enhver anvendelse av uttrykket i det etterfølgende. Eksempler på slike alkylgrupper er methyl, ethyl, propyl og butyl. Eksempler på alkylgruppene for R er octyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl og pentadecyl.

De terapeutisk akseptable salter av de forgående syrer, dvs. hvori Y og/eller Z er -0H, innbefattes også innen oppfinnelsens ramme. Disse basiske salter vil innbefatte natrium, kalium, calsium, magnesium, triethylamin, trometh-amin, dicyklohexylamin og lignende, hvilke er velkjente innen faget. Slike basesalter kan erholdes ved standard prosedyrer under anvendelse av de fri syrer og den egnede base. De foretrukne forbindelser er imidlertid de hvori både Y og Z er hydroxy.

Eksempler på foretrukne forbindelser er følgende: [4 (R) - [ la, 4|3,4(Z)]]-4-[l- [(carboxymethyl) thio ] - 2-hexadeceny1]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre,

[la,4|3,4 (Z) ]-4-[l-[ (2-carboxyethyl)thio]-2-hexa-decenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre,

[4 (R)-[la,4|3,4 (Z) ] ]-4-[l-[ (2-carboxyethyl)thio]-2-hexadeceny1]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre,

[la,43,4(Z)]-4-[l-[(3-carboxypropyl)thio]-2-hexa-decenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre.

Analogifremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er kjenne-tegnet ved at

A) et epoxyd av formel

hvori R er som ovenfor definert og Z' er -0-(lavere alkyl), omsettes med et mercaptoalkansyrederivat av fnrmpi• hvori n er et helt tall fra 0 til 2; X<1> er hydrogen; Y' er -0-(lavere alkyl), -NH2 eller hvori R' er hydrogen eller alkyl med 1 til 4 carbonatomer og Y"' er -0-(lavere alkyl); i et egnet løsningsmiddel i nærvær av en base, eventuelt etterfulgt av behandling med en sterk uorganisk base, etterfulgt av surgjøring med sterk syre under dannelse av forbindelser hvori Y, Y"' eller Z er -0H, eller B) for fremstilling av forbindelser av formelen: hvori n er et helt tall fra 0 til 2; R er rettkjedet alkyl inneholdende fra 6 til 15 carbonatomer; Y er hydroxy, -0- (lavere alkyl), -NH2 eller

hvori R<1> er hydro-

jen, alkyl med 1 til 4 carbonatomer; og Z er hydroxy eller

-0-(lavere alkyl), at et epoxyd av formelen:

hvori R er som ovenfor definert og Z' er -0-(lavere alkyl), omsettes med et mercaptoalkansyrederivat av formelen: hvori n er et helt tall på fra 0 til 2; X<1> er hydrogen; Y<1 >er -0-(lavere alkyl), -NH2 eller hvori R' er hydrogen eller alkyl med. 1 til 4 carbonatomer, og Y"' er -0-(lavere alkyl); i et egnet løsningsmiddel i nærvær av en base, eventuelt etterfulgt av behandling med en sterk uorganisk base, etterfulgt av surgjøring med sterk syre under dannelse av de forbindelser hvori Y, Y"' eller Z er

-0H, eller

C) for fremstilling av forbindelser av formel:

hvori n er et helt tall fra 0 til 2, R er et rettkjedet alkyl inneholdende fra 6 til 15 carbonatomer; Y" er hydroxy, -NH^ eller -NH-CH-COOH hvori R' hydrogen eller alkyl med 1 til 4

R'

carbonatomer, at et epoxyd av formelen:

hvori R er som ovenfor definert, omsettes med et mercaptoalkansyrederivat av formelen: hvori n er et helt tall på fra 0 til 2; Y' er -0-(lavere alkyl), -NH2 eller

hvori Y"' er -0-(i3vere alkyl); i et

egnet løsningsmiddel i nærvær av base, eventuelt etterfulgt av behandling med en sterk uorganisk base, etterfulgt av surgjøring med sterk syre under dannelse av de forbindelser hvori Y" eller Y"' er -0H.

Selv om Y' og Z' mer vanlig er det samme i de ovenfor angitte reaktanter, behøver de ikke være det samme, og dette er et hensiktsmessig punkt for innføring av for-skjeller i syrefunksjonene ved valg av egnede reaktanter. Hvor én av gruppene Y<1> og Z<1> i" produktet er en ester

(dvs. -0-(lavere alkyl)), kan denne gruppe selvsagt hydro-lyseres ved standard prosedyrer under dannelse av den tilsvarende fri carboxylgruppe.

Den anvendte base i epoxyd-åpningsprosessen er for-trinnsvis et tertiært amin slik som triethylamin. Det anvendte løsningsmiddel for reaksjonen vil være et som oppløser reaktantene men som er inert med hensyn til reaksjonen. Lavere alkanoler er foretrukne løsningsmidler, og i særdeleshet lavere alkanoler som vil tilsvare alkoholdelen av enhver ester anvendt ved reaksjonen. Således vil methanol anvendes når det gjelder methylestere, mens ethanol vil anvendes når det gjelder ethylestere.

Den etterfølgende forsåpning av estrene med en sterk base, etterfulgt av surgjøring av den resulterende saltblan-ding under dannelse av den tilsvarende fri syre, er alle standard prosedyrer innen organisk kjemi, slik at det ikke vil være nødvendig å utdype nærmere de anvendte reagenser og reaksjonsbetingeIser.

Epoxydene anvendt som utgangsmaterialer i den gene-relle fremgangsmåte som ovenfor beskrevet, kan erholdes fra tilgjengelige utgangsmaterialer under anvendelse av en egnet serie av reaksjoner. Således hydrogeneres methyl-4-hydroxy-benzoat under anvendelse av 5 % rhodium på alumina som kata-lysator under dannelse av methyl-4-hydroxycyklohexancarboxylat. Dette oxyderes deretter med pyridiniumklorkromat resulterende i methyl-4-oxocyklohexancarboxylat. 2-carbon-homologering av methyl-4-oxocyklohexancarboxylat under dannelse av methyl-4-(oxoethyliden)-cyklohexancarboxylat utføres under anvendelse av metoden utviklet av A.I. Meyers. Acetaldehyd t-butylimin metdlleres med lithium-diisopropylamid og behandles deretter med diethylklorfosfat under dannelse av lithioenaminfosfonat. <T>ilsetning av methyl-4-oxocyklohexancarboxylat og etterfølgen-de syrehydrolyse gir methyl-4-(oxo-ethyliden)cyklohexancarboxylat. Reduksjonen av denne oxoethylidenforbindelse med natriumborhydrid gir methyl-4-(2-hydroxyethyliden)cyclohexan-carboxylat.

Omdannelsen av hydroxyethylidenforbindelsen til det ønskede epoxydmellomprodukt kan illustreres ved følgende serie av reaksjoner:

Nærmere bestemt innføres chiralitet ved dette punkt

i synteseprosedyren ved anvendelse av den kjente Sharpless-asymmetriske epoxyderingsteknikk, hvorved hydroxyethylidenforbindelsen behandles med for eksempel (+)-diethyltetrat, titan (IV) isopropoxyd og t-butylhydroperoxyd, under dannelse av de to diastereomerer, methyl-2-(hydroxymethyl)-[3-(S)-cis eller trans]-l-oxaspiro[2,5]octan-6-carboxylat. Cisformen av den angitte forbindelse oxyderes ved hjelp av den kjente Swern-oxydasjonsteknikk under anvendelse av oxalylklorid, dimethylsulfoxyd og triethylamin, under dannelse av methyl-2-formyl[3(S)-cis]-l-oxaspiro[2,5]octan-6-carboxylat. Wittig-olefinering av denne forbindelse under anvendelse av en alkyl-trifenylfosfoniumbromid og kalium-t-butoxyd i et methyl-2-(1-alkenyl)-[3(S)-[3a,3(Z),6a]]-l-oxaspiro[2,5]octan-6-carboxylat.

Anvendelse av (-)-diethyl-tartrat ved epoxyderingsprosedyren referert til tidligere, gir de andre to isomerer av 2-(hydroxy-methyl)-forbindelsen som deretter omsettes ytterligere som ovenfor beskrevet under dannelse av 3(R)-isomerene.

I de tilfeller hvori det ønskede sluttprodukt er et amid, kan slike forbindelser erholdes under anvendelse av de egnede reagenser i de ovenfor beskrevne prosedyrer. Alterna-tivt kan estrene ifølge oppfinnelsen erholdt som tidligere beskrevet, omdannes til de tilsvarende amider ved omsetning med ammoniakk eller et egnet amin.

De spesifikke betingelser anvendt i de ovenfor angitte fremgangsmåter er beskrevet mer i detalj i de etterføl-gende eksempler.

Forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen, er anvendbare ved behandling av allergiske sykdommer, og i særdeleshet ved behandling av bronchial astma. SRS-A (langsomtvirkende anafy-laksesubstans) er således kjent som en substans som er en meget viktig formidler i allergisk bronchial astma. Spesifikt er SRS-A en substans som syntetiseres og frigis i eller nær mål-vev i en følsom allergisk person, kort etter utfordring ved det egnede antigen, hvor den humane bronchus er særlig følsom overfor SRS-A. En substans som1 vil kunne motvirke effekten av SRS-A vil således være anvendbar ved behandling av bronchial astma.

Mer nylige studier har vist at SRS-A i realiteten er en blanding av substanser som kan beskrives som peptjdo-leuo-triener. LTD^ er en av disse leukotriener og kan betraktes som representativt for disse, slik at antagonisme av den spesifikke substans vil tilveiebringe effekt lik antagonismen av SRS-A generelt. Spesifikt er forbindelsene

anvendbare som antagonister av LTD^, slik at de er anvendbare ved behandling av allergiske sykdommer, og i særdeleshet ved behandling av bronchial astma. Foreliggende forbindelser er selektive i denne antagonistaktivitet ved at de ikke betraktes som konkurrerende overfor histamin eller carbachol.

Aktiviteten av forbindelsene kan

vises ved følgende testprosedyrer:

Langsgående muskel av marsvin ileum

Hartley-Duncan hannmarsvin ble avlivet ved halvvrid-ning. Den terminale del av ileumet ble fjernet, skyllet og anbragt i Burn's modifiserte'Tyrode's løsning. Den langsgående muskel ble deretter forsiktig disikert fra den sirku-lære muskel av ileum. Den langsgående ble kuttet i 1 - 2 cm's segmenter som ble anbragt i et vevebad inneholdende oxygenert Burn's modifiserte Tyrode's løsning oppvarmet til 37° C. Et strekk på 1,0 gram ble deretter anbragt på hvert muskelsegment. Etter ekvilibrering 1 1 time ble 1 iiM indomethacin tilsatt til hvert bad. Etter 5 minutter ble hvert vevsegment deretter eksponert for en konsentrasjon på 60 nM leukotrien D^. Denne respons ble deretter betraktet som å være den maksimale startkontraksjon som hvert segment vil produsere. Etter vasking av vevet flere ganger i løpet av 1 time ble igjen 1 uM indomethacin tilstt til hvert bad. Etter en 5 minutters periode ble testmidlet eller bæreren tilsatt til badet. Etter 15 minutter ble en konsentrasjons-responskurve utviklet under anvendelse av kumulativt økende konsentrasjoner av leukotrien D^. Kon-sentras jon-responsen ble deretter sammenlignet med den maksimale startkontraksjon. En testforbindelse ble betraktet som aktiv hvis den ved konsentrasjoner opp til 100 pM fremkalte en signifikant skiftning til høyre av konsentrasjons-respons-forholdet til leukotrien D4- Antagonistaktiviteten ble kvanti-fisert uttrykt ved en pH2 beregnet i henhold til" metoden beskrevet av Arunlakshana and Schild, (Brit. J. Pharmac. Chemotherap. 14; 48, 1959).

3H-LTD^ - Spesifikk receptorbinding i lungemembraner fra marsin

Hann-marsvin ble avlivet og lungene ble fjernet og anbragt i iskald 50 mM tris-HCl-buffer, pH 7,4. Lungene ble deretter homogenisert med en Polytron-homogenisator, og homogenatet ble sentrifugert ved 1000 g i 10 minutter ved 4° C. Supernatanten ble deretter sentrifugert ved 30 000 g i 15 minutter ved 4° C, under dannelse av membranpelleten. Denne pellet ble resuspendert i 50 mM tris-HCl under dannelse av arbeidssuspensjoner av lungemembraner. Bindingsbestemmelser ble deretter utført i 50 mM tris-HCl ved pH 7,6 og 37 C under anvendelse av inkuberingsperioder på 20 - 40 minutter. Sepa-rering av bundet 3 H-LTD^ fra fritt <3>H-LTD^ ble utført ved hurtig vakuumfiltrering gjennom Whatman GF/B glassfiberfiltere under anvendelse av iskald tris-HCl-buffer og tre 4 ml's vaske-løsninger. Filtrering og vasking ble utført i løpet av mindre enn 8 sekunder. Radioaktiviteten av filtrene ble deretter malt. Spesifikk binding av <3>H-LTD. ble bestemt som bindingen

3 3

av H-LTD^ i fravær av umerket LTD^ minus bindingen av H-LTD4

i nærvær av 2 x 10-7M umerket LTD.. Spesifikk binding av <3>H-LTD4 var 60 - 80 % av totalbinding. Studier med testmidler viste testforbindelsens evne til å inhibere den spesifikke binding av 3H-LTD.. I disse tester anvendes økende konsentra-. 3

sjoner av midlet for a blokkere den H-LTD^ spesifikke binding. Den konsentrasjon som reduserer den spesifikke binding av <3>H-LTD4 med 50 % angis som IC5Q.

Den spesifikke aktivitet observert for enkelte forbindelser ifølge oppfinnelsen når disse ble testet ved de ovenfor angitte prosedyrer er angitt i den etterfølgende tabell. Variasjoner i aktivitet fant imidlertid sted, og det synes som om aktiviteten avtar med en reduksjon i lengden av R-alkylgruppene fra tetradecylidenforbindelsene, angitt i tabellen.

In vivo biologisk aktivitet

Forbindelsene ifølge oppfinerilsen ble også testet for in vivo leukotrien D^ antagonistaktivitet i bedøvede marsvin under anvendelse av et modifisert Konzett-Rossler-preparat. Spesifikt ble marsvinene bedøvet med natriumpento-barbital og kirurgisk preparert for kunstig ventilasjon med en respirator med konstant volum. Utspylingstrykket fremkalt med respiratoren ble målt for hver utspyling av marsvinets lunger. Økninger i utspylingstrykket over en grunnlinje er en indikasjon på bronchokonstriksjon. Etter etablering av et grunnlinje-utspylingstrykk ble bronchokonstriksjon fremkalt ved en intravenøs utfordring med 50 eller 100 ng/kg leukotrien D4- Denne respons ble betraktet som startrespons. Etter at utspylingstrykket vendte tilbake til grunnlinjen, ble marsvinet behandlet med den ønskede dose av testforbindelsen eller bærer, gitt intravenøst (i.v.) eller intraduodenalt (i.d.) og ble på nytt utfordret med leukotrien D4 etter 1 minutt (etter i.v.-administrering) eller 5 og 20 minutter (etter i.d.-administrering). Denne respons ble deretter sammenlignet med startresponsen og den prosentvise inhibering av responsen ble bestemt. Resultatene kan oppsummeres som følger, hvor inhiberingsverdiene gitt for i.d.-administrering er større i de to erholdte resultater.

Forbindelsene kan administreres enten som indi-viduelle terapeutiske midler eller som blandinger med andre terapeutiske midler. De kan administreres alene, men administreres generelt i form av farmasøytiske preparater, dvs. blandinger av de aktive midler med egnede farmasøytiske bærere eller fortynningsmidler.

Forbindelsene eller farmasøytiske preparater derav kan administreres til humane astmatiske pasienter i doser i

området fra 0,1 til 40 mg/kg. Enkle orale doser på ca.

0,1 - 1000 mg aktiv bestanddel, og multiple orale doser totalt opp til 4000 mg/dag av aktiv bestanddel kan anvendes. Når administrert ved inhalering, vises generelt lavere doser, dvs.

i størrelsesorden rundt 0,1 av den normale dose for den bestemte forbindelse. Disse verdier er bare illustrative, og legen vil sluttelig bestemme den mest egnede dose for en bestemt pasient på basis av faktorer slik som alder, vekt, diagnose, strenghet av symptomene og det bestemte middel som skal administreres.

De etterfølgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.

Eksempel 1 (mellomprodukt)

En Parr-kolbe ble fylt med 150 ml methanol og 25 g methyl-4-hydroxybenzoat ble tilsatt, hvorpå kolben ble spylt med nitrogen, 2,5 g 5 % rhodium på alumina ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble komprimert under hydrogen til 3,74 atmosfærer i 18 timer med konstant omrøring. Reaksjonsblandingen ble deretter spylt med nitrogen og filtrert gjennom diatoméjord for å fjerne katalysatoren. Diatoméjorden ble skyllet med methanol idet man var forsiktig for å ikke filtre-re, katalysatoren til tørrhet. Filtratene ble kombinert og methanolen ble fjernet under redusert trykk ved meget forsiktig oppvarming (ca. 40° C). Residuet av produktet og alumina ble tatt opp i 200 ml ether til hvilket ble tilsatt 3 g vannfritt kaliumcarbonat. Det utfelte alumina og kaliumcarbonat ble fjernet ved filtrering gjennom diatoméjord. Denne ble skyllet med ether, filtratene ble kombinert og løsningsmidlet fordam-pet under redusert trykk under dannelse av et urent produkt. Den ble kolbe-til-kolbe-destillert på kulerørapparatur ved 80 - 100° C/ca. 1 mm, under dannelse av 25,0 g (98 %) methyl-4-hydroxycyklohexancarboxylat. 1H NMR (CDC13, 60 MHz) 6 3,85 (s, 1H); 3,65 (s, 3 H); 2,50 - 1,20 (m, 10 H) .

Eksempel 2 (mellomprodukt)

Til 400 ml tørr diklormethan ble tilsatt 24 g ovns-tørket celite, 11,4 g natriumacetat og 90,5 g pyridiniumklorkromat under omrøring. Ytterligere 350 ml methylenklorid ble tilsatt, etterfulgt av tilsetning av 44,5 g methyl-4-hydroxy-cyklohexancarboxylat i 40 ml diklormethan ved hjelp av en sprøyte. Etter 3,5 timer ble 800 ml ether tilsatt under omrøring, og blandingen ble sugfiltrert gjennom 250 ml silicagel, og det faste materiale ble vasket fire ganger med ether. De kombinerte filtrater ble konsentrert til en grønn olje som ble tatt opp i 150 ml ether og igjen sugfiltrert gjennom 50 g silicagel, og silicagelen ble skyllet med ether. De kombinerte filtrater ble konsentrert til en klar olje som ble kulerør-destillert ved 65 - 85° C/ca. 1 mm, under dannelse av 42,6 g (97,5 %) methyl-4-oxocyklohexancarboxylat. <1>H MNR (CDC13, 60 MHz) 6 3,70 (s, 3H); 2,9 - 1,8 (9 H).

Eksempel 3 (mellomprodukt)

En blanding av 729 ml tørr tetrahydrofuran og 76,4

ml tørr diisopropylamin ble avkjølt til 3° C med et is-vannbad. Deretter ble 340,6 ml n-butyllithium i hexan tilsatt dråpevis

i løpet av 45 minutter, etterfulgt av ytterligere 15 minutters omrøring. Løsningen ble deretter avkjølt til -75° C, og 26,9

g acetaldehyd t-butylimin ble dråpevis tilsatt ved hjelp av en sprøyte i løpet av 20 minutter, etterfulgt av ytterligere omøring i 30 minutter. Mens temperaturen fremdeles var ved

-75° C ble 47,0 g diethylklorfosfat tilsatt med en dråpetrakt 1 løpet av 1 time. Reaksjonsblandingen ble omrørt i ytterligere 1 time ved -75° C, ble oppvarmet til -11° C i løpet av 2 timer og ble igjen avkjølt til -75° C. 28,4 g methyl-4-oxo-cyklohexancarboxylat i 50 ml tetrahydrofuran ble deretter tilsatt ved hjelp av en dråpetrakt i løpet av 1 time. Reaksjonsblandingen fikk oppvarmes til romtemperatur over natten. Den ble deretter helt over i en blanding av 49,0 g oxalsyre i 1,8 liter vann og 1,8 liter toluen. Denne ble omrørt kraftig i 24 timer, og det vandige lag ble deretter fraskilt og ekstrahert med 2 x 500 ml ether. De kombinerte toluen- og etherekstrakter ble vasket med vandig 5 % oxalsyre (2 x 500 ml), 500 ml mettet natriumbicarbonat og 500 ml mettet natriumklorid. Det organiske lag ble deretter tørket over vannfritt kaliumcarbonat, ble filtrert og konsentrert under vakuum. Den resulterende olje ble renset på Prep LC (25 % ethylacetat/hexan, 300 ml/min., 2 min./cm, 2 kolonner, R.-7,5 min.) under dannelse av 18,5 g methyl-4-(oxoethyliden)cy z klohexancarboxylat. <i>H NMR (CDCl^, 60 MHz) 6 10,05 (d, 1 H); 5,85 (d, 1 H); 3,70 (s, 3 H); 2,8 - 1,5 (9 H).

Eksempel 4 (mellomprodukt)

En løsning ble fremstilt fra 77 ml methanol og

13,0 g methyl-4-(oxoethylidén) cyklohexancarboxylat og ble avkjølt til 3° C med et is-vannbad. Under kraftig omrøring ble 3,1 g natriumborhydrid tilsatt i porsjoner i løpet av 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble omrørt i ytterligere 1 time ved 3° C før 1 ml iseddik ble tilsatt for å stanse reaksjonen, og methanolen ble fjernet under redusert trykk. Residuet ble tatt opp i 200 ml diklormethan og ble fordelt mellom 400 ml vann. Det organiske lag ble fraskilt og vasket med 200 ml mettet natriumklorid, ble tørket over vannfritt natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. Den resulterende olje ble renset på Prep LC (30 % ethylacetat/hexan, 250 ml/min., 2 min./cm, 2 kolonner, Rfc-13 min.) under dannelse av 11,5 g relativt rent produkt. Kolbe-til-kolbe-destillasjon på kule-rør ved 150 - 160° C/0,8 mm av 9,03 g (69 %) methyl-4-(2-hydroxyethyl iden) cyklohexancarboxylat. 1H NMR (CDC13, -60 MHz) 5 5,40 (t, 1 H); 4,10 (d, 2 H); 3,70 (s, 3 H); 2,9 - 1,3 (10 H) .

Eksempel 5 (mellomprodukt)

Til 300 ml tørr diklormethan avkjølt til -25° C til -30° C med et tørris/acetonbad ble tilsatt under omrøring 12,9 ml titan (IV) isopropoxyd og en løsning av 8,9 ml (+)-diethyltartrat i 10 ml diklormethan suksessivt med en sprøyte. Etter 10 minutter ble 8,0 g methyl-4-(2-hydroxyethyliden) cyklohexancarboxylat i 20 ml diklormethan tilsatt til reaksjonsblandingen, etterfulgt av en 20 ml's diklormethanskylling av kolben og sprøyte. 18,4 ml 4,7 M t-butylhydroperoxyd i toluen ble deretter umiddelbart tilsatt. Reaksjonskolben ble deretter overført til en fryser og fikk stå uforstyrret ved -20° C i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter sugfiltrert gjennom silicagel som ble vasket med 500 ml 25 % ethylacetat/diklormethan. De kombinerte filtrater ble konsentrert under vakuum under dannelse av en gul olje. Tynnsjiktskroma-tografi (20 % ethylacetat/hexan) av den urene blanding indi-kerte at syn og anti diastereomerene var separerbare ved kro-matografi med Rf syn = 0,14 og Rf anti = 0,17. Disse ble

separert på Prep LC (10 % isopropanol/hexan, 250 ml/min.,

2 min./cm, 2 kolonner, R. anti = 16 min., Rfc syn = 23 min.) under dannelse av 2,7 g anti epoxyd og 2,5 g syn epoxyd som oljer. Syn epoxydet ble omkrystallisert to ganger fra 3 % ether/pentan, under dannelse av 0,41 g methyl-2-(hydroxymethyl)-[3 (S)-cis-l-oxaspiro[2,5]-octan-6-carboxylat som lange, flate, hvite krystaller som smelter ved 67 - 68 ° C;

[a]p°-13,3°. (c 1,15, kloroform); %ee = >95%. Antiepoxydet ble omkrystallisert to ganger fra 30 % ether/pentan, under dannelse av 0,57 g lange, flate, hvite krystaller som smelter ved 31 - 33° C; ta^° -10,6° (c 1,22, kloroform); %ee = 80 %. 1H NMR for syn epoxydet (CDCl-j, 300 MHz) 6 3,80 (m, 2 H) ;

3,70 (s, 3 H) ; 3,10 (dd, 1 H); 2,00 - 1,40 (9 H) .

Eksempel 6 (mellomprodukt)

En blanding ble fremstilt fra 27 ml tørr diklormethan og 0,20 ml oxalylklorid. Blandingen ble avkjølt til

-75° C og 0,35 ml dimethylsulfoxyd ble tilsatt dråpevis i løpet av 5 minutter og under omrøring. Etter ytterligere 10 minutter ble 381 mg methyl-2-(hydroxymethyl)-[3(S)-cis)-1-oxaspiro[2,5]octan-6-carboxylat i 3 ml diklormethan dråpevis tilsatt til reaksjonsblandingen. Etter 20 minutters omrøring ble 1,45 ml triethylamin tilsatt dråpevis i løpet av 5 minutter. Reaksjonsblandingen fikk oppvarmes til romtemperatur i løpet av 45 minutter, og løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk. Det hvite, faste residuum ble tatt opp i 50

ml ether og ble filtrert gjennom en sintret glasstrakt. Fil-tratet ble konsentrert under vakuum under dannelse av en gul olje. Dette urene materiale ble renset på Prep LC (20 % ethylacetat/hexan, 250 ml/min., 2 min./cm, 1 kolonne, Rfc = 4,75 min.) under dannelse av 355,5 mg methyl-2-formyl-[3(S)-cis]-1-oxaspiro[2,5]-octan-6-carboxylat som olje. [ot]+ 132,0°

(c 0,71, kloroform). hi NMR (CDC13, 300 MHz) 6 9,50 (d, 1 H); 3,70 (s, 3 H); 3,20 (d, 1H); 2,60 - 1,30 (9 H).

Eksempel 7 (mellomprodukt)

Til 20 ml tørr tetrahydrofuran ble tilsatt 1,80 g n-tetradecyltrifenylfosfoniumbromid under omrøring. 6,4 ml 0,5 M kalium t-butoxyd i tetrahydrofuran ble deretter dråpevis tilsatt, som bevirket at løsningen gikk over i oransje-farve. Etter 5 minutter ble 342 mg methyl-2-formyl-[3(S)-cis]-l-oxaspiro[2,5]octan-6-carboxylat i 3 ml tetrahydrofuran dråpevis tilsatt til reaksjonsblandingen, som derved gikk over i en lys gul farve. Seks ytterligere 0,5 ml's aliquoter av kalium t-butoxydløsning ble tilsatt med 10 minutters inter-valler, hvilket bevirket at reaksjonen ble fullført. 5 ml vann ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble helt over i 200 ml ether. Blandingen ble vasket med 2 x 100 ml mettet natriumklorid og konsentrert under vakuum til 200 ml. 900 ml hexan ble deretter tilsatt, og den blakke løsning ble sugfiltrert gjennom silicagel og silicagelen ble vasket med 500 ml 10 % ether/hexan. De kombinerte filtrater ble konsentrert under vakuum under dannelse av en gul olje som ble renset på Prep LC (5 % ethylacetat/hexan, 250 ml/min., 2 min./cm, 1 kolonne, R = 5 min.) under dannelse av 527 mg methyl-2-(1-pentadecenyl) - [3(S)-[3oc,3(Z) ,6a] ] -l-oxaspiro[ 2 , 5 ] octan-6-carboxylat som en olje. ta]^0 +25,7° (c 0,92, kloroform). <1>H NMR (CDC13, 300 MHz) 6 5,75 (m, 1 H); 5,25 (t, 1 H); 3,70 (s, 3H) ; 3,45 (d, 1H); 2,45 - 1,20 (34 H).

Prosedyren beskrevet i eksempel 5 ble gjentatt under anvendelse av (-)-diethyltartrat under dannelse av de andre to spiroforbindelser, og disse forbindelser sammen med anti-forbindelsen erholdt i eksempel 5 ble hver omsatt i henhold til de prosedyrer som er beskrevet i eksempel 6 og 7. I til-legg ble prosedyren beskrevet i eksempel 7 også gjentatt under anvendelse av octyltrifenylfosfoniumbromid i stedet for tetradecyltrifenylfosfoniumbromid. Produktene erholdt på denne måte var som følger: Methyl-2- (1-pentadecenyl) - [ 3 (S) - [ 313, 3 (Z) , 6a] ] -1-oxa-spiro[2,5]octan-6-carboxylat.

Methyl-2- (1-pentadecenyl) -[3(R)-[3|3,3(Z),6a]]-l-oxa-spiro[2,5]octan-6-carboxylat.

Methyl-2- (1-pentadecenyl) - [ 3 (R) - [ 3|3, 3 (Z) ,6a] ]-l-oxa-spiro[2,5]octan-6-carboxylat.

Methyl-2-(1-nonenyl)-[3(S)-[3a,3(Z),6a]]-1-oxaspiro-[2,5]octan-6-carboxylat.

Eksempel 8 (sluttprodukt)

Til en blanding av 227 mg methyl-2-(1-pentadecenyl)-[ 3 (S)-[ 3<x,3 (Z) , 6a] ]-l-oxaspiro[ 2 , 5 ] octan-6-carboxylat i 2,7 ml methanol ble tilsatt under omrøring 0,28 ml triethylamin, etterfulgt av 0,20 ml methyl-3-mercaptopropionat. Etter 24 timer ble methanolen fjernet under redusert trykk og oljen ble tatt opp i 100 ml ether. Denne ble deretter vasket med 50 ml 0,5 N saltsyre, 50 ml mettet natriumklorid og ble deretter tørket over vannfritt natriumsulfat og filtrert og konsentrert under vakuum under dannelse av en gul olje. Denne ble renset på Prep LC (10 % ethylacetat/hexan, 250 ml/min., 2 min./cm, 1 kolonne, Rt = 22 min.) under dannelse av 278,4 mg methyl-[4(R)-[la,4a,4(Z)]]-4-hydroxy-4-[l-[ (2-carbomethoxy-ethyl)thio]-2-hexadecenyl]cyklohexancarboxylat som en olje.

[a]^° +33,5° (c 0,88, kloroform). -"-H NMR (CDC13 , 300 MHz)

6 5,60 (m, 1H); 5,4 (t, 1H); 3,70 (s, 3H); 3,65 (s, 3H);

3,60 (d, 1H); 2,75 (m, 2H); 2,60 (m, 2H); 2,20 - 1,20 (34 H) ; 0,89 (t, 3H).

Eksempel 9 (sluttprodukt)

En løsning av methyl [4(R)-[la,4a,4(Z)]]-4-hydroxy-4-[l-[ (2-carbomethoxyethyl)thio]-2-hexadecenyl]cyklohexancarboxylat ble oppløst i 4,0 ml absolutt ethanol. 340 mg kaliumhydroxyd-pellets oppløst i 3,3 ml vann ble deretter tilsatt til den blakke løsning under omrøring. Etter 4,5 timer ble den klare løsning fortynnet med 75 ml vann. Den vandige blanding ble vasket med 75 ml ether og ble deretter surgjort med 15 ml 0,5 N saltsyre. Den vandige blanding ble deretter ekstrahert med 3 x 150 ml ethylacetat. De kombinerte organiske ekstrakter ble tørket over vannfritt natriumsulfat, ble filtrert og konsentrert under vakuum under dannelse av et skittent hvitt fast materiale. Dette ble omkrystallisert fra 10 % ether/hexan under dannelse av 157 mg (64 %) l4(R)-[la,4a,4(Z)]]-4—[l-[(2-carboxyethyl)-thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexaricarboxylsyre som et rent hvitt pulver som smelter ved 121 - 123° C; +32,0° (c 0,95, kloroform). <1>H NMR (CDC13 , 300 MHz) 6 5,62 (m, 1 H); 5,40 (t, 1H); 3,62 (d, 1H); 2,74 (m, 2H); 2,62 (m, 2H); 2,25 - 1,20 (34 H);

0,89 (t, 3H). Denne forbindelse har følgende strukturforme1:

Eksempel 10A - 10M (sluttprodukt)

Når de egnede oxaspiro- og mercaptoforbindelser

ble omsatt etter prosedyren beskrevet i eksempel 8, og de resulterende estere ble forsåpet som beskrevet i eksempel 9, ble følgende forbindelser erholdt: A. [4(S)-[la,4a,4(Z)]]-4-[l-[(2-carboxyethyl)thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre som smelter ved 122 - 123° C; [a]£° -38,1° (c 0,89, kloroform).

<1>H NMR (CDC13, 300 MHz) 6 5,61 (m, 1 H); 5,39 (t, 1 H); 3,62 (d, 1 H) ; 2,68 (m, 4 H) ; 2,23 - 1,22 (33 H) ; 0,88 (t, 3 H) .

B. [4 (R)-[loe, 4a, 4 (Z) ]]-4-[l-[ (carboxymethyl)thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, t0^^ +23,9°

(c 0,66, kloroform). -""H NMR (CDC13, 300 MHz) 6 5,69 (m, 1H) ; 5,39 (t, 1H); 3,82 (d, 1H); 3,21 (m 2H); 2,30 - 1,20 (33 H); 0,88 (t, 3H).

C. [4(S)-[la,4a,4(Z)]]-4-[l-[(carboxymethyl)thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, ^ a^ <i>^ -11,5°

(c, 1,42, kloroform). <1>H NMR (CDC13, 300 MHz) <$ 5,66 (m,

1H); 5,37 (m, 1H); 3,82 (d, 1H); 3,22 (m, 2H); 2,10 - 1,12 0,33 H); 0,88 (t, 3H).

D. [4 (R)-[la,4f},4 (Z) ]]-4-[l-[ (carboxymethyl) thio ]-3-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, ^ a^^ +3,3°

(c 0,73, kloroform). <1>H NMR (CDC13, 300 MHz) 6 5,75 (m, 1H); 5,44 (m, 1H); 4,26 (d, 1H); 3,20 (m, 2H); 2,40 - 1,18 (33 H); 0,88 (t, 3 H).

E. [4 (S)-[la,4|3,4 (Z)]]-4-[l-[(carboxymethyl)thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, ta]^ -11,8°

(c 0,97, kloroform). <1>H NMR (CDCl3, 300 MHz) 5 5,72 (m, 1H); 5,49 (m. 1H); 4,26 (d, 1H); 3,16 (m, 2H); 2,50 - 1,17 (33 H); 0,88 (t, 3H).

F. [4(R)-[la,4p,4(Z)]]-4-[l-[(2-carboxyethyl)thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, t^j^ +34,8°

(c, 0,81, kloroform). 1H NMR (CDC13, 300 MHz) <5 5,63 (m, 1H) ; 5.41 (t, 1H); 3,75 (d, 1H); 2,67 (m, 5H); 2,09 - 1,26 (33 H); 0,88 (t, 3H).

G. [4(S)-[la,4|J,4(Z) ]]-4-[l-[ (2-carboxyethyl) thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, ^ a^^ -41,4°

(c, 126, kloroform), <1>H NMR (CDC13, 300 MHz) 6 5,63 (m. 1H); 5.42 (t, 3H); 3,76 (d, 1H); 2,67 (m, 5H); 2,09 - 1,22 (33 H); 0,88 (t, 3 H).

H. [la,4fi,4(Z) ]-4-[l-[ (2-carboxyethyl)thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, smelter ved 77 - 78° C. <1>H NMR (CDC13, 300 MHz) 6 5,63 (m, 1H); 5,41 (t,

1 H) ; 3,76 (d, 1H); 2,68 (m, 5H); 2,11 - 1,26 (33 H); 0,88 T, 3 H). I. [la,4a,4(Z)]-4-[l-[(3-carboxypropyl)thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, smelter ved 71 - 72° C. -"-H NMR (CDC13, 300 MHz) 6 5,61 (m, 1H) ; 5,36 (t, 1H); 3,59 (d, 1H); 2,49 (m, 4H); 2,25 - 1,20 (35 H); 0,88 (t, 3 H). J. [la,4|3,4(Z)]-4-[l-[ (3-carboxypropyl)thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre. ^"H NMR (CDC13, 300 MHz) 6 5,61 (m, 1H); 5,41 (t, 1H); 3,69 (d, 1H); 2,49 (m, 4H); 2,10 - 1,22 (35 H); 0,88 (t, 3 H). K. [la,4a,4(Z)]-4-[l-[(3-[(carboxymethyl)amino]-3-oxopropyl]thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, <1>H NMR (CDC13, 300 MHz) 6 6,85 (m, 1H); 5,57 (m, 1H); 5,39 (t, 1H) ; 4,27 (m, 1H); 4,00 (m, 1H); 3,60 (d, 1H); 2,90 - 1,20 (37 H); 0,89 (t, 3 H). L. [la,4|3,4(Z) ]-4-[l-[ (3[ (carboxymethyl)amino]-3-oxopropyl]thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, smelter ved ca. 81,5 - 82,5° C. <1>H NMR (CDCl3, 300 MHz) 6 6,80 (s, 1H) ; 5,63 (m, 1H); 5,42 (t, 1H); 4,08 (d, 2H); 3,70 (d, 1H) ; 2,85 - 2,40 (m, 4H); 2,10 - 1,20 (33 H); 0,89 (t,

3 H) .

M. [ 4 (R) - [ la, 4|3 , 4 (Z) ] ]-4-[ l-[ (3-amino-3-oxopropyl) - thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, smelter ved 108 - 109° C; +48,3° (c 0,86, kloroform).

1H NMR (CDC13, 300 MHz) <5 6,02 (s, 1H); 5,72 (s, 1H); 5,60

(m, 1H) ; 5,45 (t, 1H); 3,72 (d, 1H); 2,77 (m, 2H); 2,58

(m, 3H); 2,15 - 1,20 (33 H); 0,89 (t, 3 H).

N. [4 (R)-[la,4|3,4 (Z) ]]-4-tl-[ (2-carboxyethyl) thio ]-2-decenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre.

Eksempel 11 (sluttprodukt)

En kolbe ble fylt med 315 ml cyklohexan og spylt med nitrogen. 397 mg methyl-2-(1-pentadecenyl)-[3(S)-[3a,3(Z)>8a]]-l-oxaspiro[2,5]octan-6-carboxylsyre og 241 mg difenyldisulfid ble tilsatt under omrøring, og den omrørte løsning ble avkjølt med et is-vannbad. En sollampe ble foku-sert ned i reaksjonsblandingen som deretter ble belyst i 3,6 timer. Løsningsmidlet ble fjernet under vakuum og residuet filtrert gjennom silicagel med hexan for å fjerne difenyldisulfid. Dette ble etterfulgt av en etherskylling, under dannelse av en løsning av den urene olefinblanding. Etheren ble fjernet under vakuum under dannelse av en gul olje (cis/ trans = 1:4) som ble renset på Prep LC (15 % ether/hexan,'2 kolonner, Rfc = 8 min.) under dannelse av 120 mg methyl-2-t(1-pentadecenyl) -[3a, (E) , 6(3 ] ] -1-oxaspiro [ 2 , 5 ] octan-6-carboxylat som en olje. <1>H NMR (CDC13> 300 MHz) 6 5,90 (m, 1H); 5,33

(m, 1H; J , = 15,1 Hz); 3,68 (s, 3H); 3,18 (d, 1H); 2,43

(m, 1H); 2,10 - 1,20 (32 H); 0,89 (t, 3 H).

Det ovenfor erholdte produkt ble tilsatt til 1 ml methanol i en 5 ml rundbundet kolbe. Under omrøring ble 0,08 ml triethylamin tilsatt, etterfulgt av 0,04 ml methyl-3-mercaptopropionat. Etter 2 dager ble løsningsmidlet fjernet og den urene olje ble flash-kromatografert (5 % ethylacetat/ hexan) under dannelse av 58,3 mg (84 %) methyl-[ la, 4(3, 4 (E) ) ]-4-hydroxy-4-[l-[(3-methoxy-3-oxopropyl)thio-2-hexadecenyl]-cyklohexancarboxylat som en klar olje. H NMR (CDC13, 300 MHz) 6 5,45 (m, 2H); 3,69 (s, 3H); 3,67 (s, 3H); 3,30 (d, 2H) ; 2,80 - 2,20 (m, 5H); 2,05 - 1,20 (33 H); 0,89 (t, 3 H).

Når den ovenfor angitte ester ble hydrolysert med

base etter prosedyren beskrevet i eksempel 9, var det erholdt et produkt [ la, 4[3, 4 (E) ]-4-[ l-[ (2-carboxyethyl) thio-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre. "^H NMR (CDC13,

300 MHz) 6 5,53 (m, 2H, J& fc trans = 15,8 Hz); 3,37 (d, 1H); 2,65 (m, 4H); 2,15 - 1,20 (33 H); 0,88 (t, 2 H).

Claims (5)

1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser av formel: hvori n er et helt tall på fra 0 til 2; R er rettkjedet alkyl inneholdende fra 6 til 15 carbonatomer; Y er hydroxy, -O-(lavere alkyl), -NH eller -NH-CH-COOH hvor R' er hydrogen, R' alkyl med fra 1 til 4 carbonatomer; og Z er hydroxy eller -O-(lavere alkyl), karakterisert ved at A) et epoxyd av formel hvori R er som ovenfor definert og Z<1> er -0-(lavere alkyl), omsettes med et mercaptoalkansyrederivat av formel: hvori n er et helt tall fra 0 til 2; X<1> er hydrogen; Y' er -0-(lavere alkyl), -NH2 eller , hvori R' er hydrogen eller alkyl med 1 til 4 carbonatomer og Y"' er -0-(lavere alkyl); i et egnet løsningsmiddel i nærvær av en base, eventuelt etterfulgt av behandling med en sterk uorganisk base, etterfulgt av surgjøring med sterk syre under dannelse av forbindelser hvori Y, Y"' eller Z er -0H, eller B) for fremstilling av forbindelser av formelen: hvori n er et helt tall fra 0 til 2; R er rettkjedet alkyl inneholdende fra 6 til 15 carbonatomer; Y er hydroxy, -0- (lavere alkyl), -NH., eller hvori R<1> er hydro gen, alkyl med 1 til 4 carbonatomer; og Z er hydroxy eller -0-(lavere alkyl), at et epoxyd av formelen: hvori R er som ovenfor definert og Z<1> er -0-(lavere alkyl), ansettes med et mercaptoalkansyrederivat av formelen: hvori n er et helt tall på fra 0 til 2; X' er hydrogen; Y' er -0-( lavere alkyl)," -NH,, eller hvori R' er hydrogen eller alkyl med 1 til 4 carbonatomer, og Y"<1> er -0-(lavere alkyl); i et egnet løsningsmiddel i nærvær av en base, eventuelt etterfulgt av behandling med en sterk uorganisk base, etterfulgt av surgjøring med sterk syre under dannelse av de forbindelser hvori Y, Y"' eller Z er -0H, eller C) for fremstilling av forbindelser av formel: hvori n er et helt tall fra 0 til 2, R er et rettkjedet alkyl inneholdende fra 6 til 15 carbonatomer; Y" er hydroxy, -NH_ eller hvori R' hydrogen eller alkyl med 1 til 4 carbonatomer, at et epoxyd av formelen: hvori R er som ovenfor definert, omsettes med et mercaptoalkansyrederivat av formelen: hvori n er et helt tall på fra 0 til 2; Y' er -0-(lavere alkyl), -NH2 eller hvori Y"1 er -O-(0avere alkyl); i et egnet løsningsmiddel i nærvær av base, eventuelt etterfulgt av behandling med en sterk uorganisk base, etterfulgt av surgjøring med sterk syre under dannelse av de forbindelser hvori Y" eller Y"<1> er -0H.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, for fremstilling av [4 (R)-[la, 4(3,4 (Z) ] ]-4-[l-[ (carboxymethyl)thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, karakterisert ved at methyl-2-(1-pentadecenyl) - [ 3(S)-[3(3,3(Z) ,6a] ]-l-oxaspirq[ 2 , 5 ]octan-6-carboxylat omsettes med methyl-2-mercaptoacetat, etterfulgt av behandling med kaliumhydroxyd og etterfulgt av surgjøring med saltsyre.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av [la,4(3,4(Z) ]-4-[l-[ (2-carboxyethyl) thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, karakterisert ved at methyl-2-(1-pentadecenyl)-[3|3,3 (Z) , 6a]-l-oxaspiro[ 2 , 5 ]octan-6-carboxylat omsettes med 3-mercaptopropionat, etterfulgt av behandling med kaliumhydroxyd og etterfulgt av surgjøring med saltsyre.

4. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av [4(R)-[la,4|3,4 (Z) ] ]-4-[l-[ (2-carboxyethyl) thio]-2-hexadeceny1]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, karakterisert ved at methyl-2-(1-pentadecenyl)-[3(S)-[3|3,3(Z),6a]] -l-oxaspiro[ 2, 5]octan-6-carboxylat omsettes med methyl-3-mercaptopropionat etterfulgt av behandling med kaliumhydroxyd og etterfulgt av surgjøring med saltsyre.

5. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av [la,4|3,4(Z) ]-4-[l-[ (3-carboxypropyl) thio]-2-hexadecenyl]-4-hydroxycyklohexancarboxylsyre, karakterisert ved at methyl-2-(1-pentadecenyl)-[ 3 (S) -[3(3,3 (Z) ,6a] ]-1-oxaspiro[ 2,5 ]octan-6-carboxylat omsettes med methyl-4-mercaptobutyrat etterfulgt av behandling med kaliumhydroxyd og etterfulgt av surgjøring med saltsyre.