NO138394B - Fremgangsmaate for aa fastslaa naervaer av australia-antigen i en blodproeve - Google Patents
Fremgangsmaate for aa fastslaa naervaer av australia-antigen i en blodproeve Download PDFInfo
- Publication number
- NO138394B NO138394B NO3782/72A NO378272A NO138394B NO 138394 B NO138394 B NO 138394B NO 3782/72 A NO3782/72 A NO 3782/72A NO 378272 A NO378272 A NO 378272A NO 138394 B NO138394 B NO 138394B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- antigen
- serum
- australia
- blood
- sample
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 57
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 56
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 56
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- 238000009534 blood test Methods 0.000 title 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 38
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 36
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 23
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 23
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 22
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 16
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 16
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 11
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 claims description 4
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 claims description 4
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 claims 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 22
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 15
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 11
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 11
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 5
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 4
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000028654 Type IV pili-dependent aggregation Effects 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- AVGQTJUPLKNPQP-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trichloropropane Chemical compound CCC(Cl)(Cl)Cl AVGQTJUPLKNPQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 1
- 229920000178 Acrylic resin Polymers 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003618 borate buffered saline Substances 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000012817 gel-diffusion technique Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Nærværende oppfinnelse vedrorer en fremgangsmåte av den art som
er angitt i krav l's ingress, og fremgangsmåten er særpreget ved det som er angitt i krav l's karakteriserende del.
Australia-antigenet som ble funnet av Blumberg et al., J. Amer. Med.Assoc, 191, 541 (1965) 5 Ann.Int. Med., 66; 924 (1967) er
tilstede i blodet hos en meget liten del av befolkningen, men det å finne det ved hurtige og pålitelige midler er av storste betydning for å unngå bruken for transfusjonsformål av blod som inneholder antigenet, hvilket kan fremkalle såkalt serum-
hepatitis hos mottageren. Slik hepatitis, som kan utvikle seg
etter en lang inkubasjonsperiode, kan være alvorlig og qgså
fatal i noen tilfeller. Det er også viktig å være i stand til å finne antilegemet til Australia-antigen hos personer eller
dyr som kan ha vært infisert eller immunisert med Australia-
antigen.
Det er derfor et behov for diagnostiske prøvemetoder som er
hurtige, folsomme og gir mulighet for rutinegjentagelse,på et
stort antall blodprover, bruk av en minimal mengde diagnostisk
reagens og er pålitelige, dvs. er i stand til å fastslå
nærvær av antigenet i enhver blodprøve hva enten
totalt blod, serum eller plasma, som inneholder det
og samtidig gir et minimalt antall av "falske positive" resul-
tater, dvs. falske angivelser på nærværet av antigenet.
Et diagnostisk reagens for Australia-antigen eller antile-
gemet er beskrevet i norsk utlegningsskrift nr. 135.801 og består
av en vandig suspensjon av findelte, syntetiske harpikspartikler
av i det vesentlige ensartet form og storrelse som er overtrukket
med antilegemet spesifikt for Australia-antigen eller henholds-vis med Australia-antigenet som sådant. Fortrinnsvis er partiklene sfæriske polystyrenpartikler som har en diameter på ca.
160 nm, men partikler av polystyren eller andre syntetiske har-pikser, f.eks. akrylharpikser som har ensartede dimensjoner på fra 60 - 400 nm, kan være egnet, suspensjonen inneholder ytterli-gere normalt serum fra samme dyreart som antilegemet eller antigenet ble fremstilt fra.
Fra U.S. patent nr. 3.551.555 er det kjent å anvende et indifferent protein til stabilisering av partiklene, eksempelvis okseserum-alhumin, imidlertid er det indifferente protein adsorbert på bærepartiklene for partiklene påfores antigenet. Hensikten med å påfore bærepartiklene et belegg av et indifferent protein, for antigenet påfores, er å forhindre forandringer i antigenets struktur, eller å fylle porene i bærepartiklene, som ellers ville bli fylt,med antigenet. Antigen i slike porer vil ikke være tilgjengelige for en agglutineringsreaksjon, hvilket fremgår av patentets kolonne 3, linjene 46 - 62. Partikler som på forhånd er belagt med et inert protein er angitt å være mere f 61somme.
Det fremgår av patentet at med et indifferent protein menes et protein som ikke tar del i den immunokjemiske reaskjon etc.
Det er et vesentlig trekk ved fremgangsmåten ifolge foreliggende oppfinnelse at det tilsettes normalt serum, som således kommer i kontakt med blodproven som skal undersokes. Ifolge det nevnte U.S. patentskrift vil proteinet, som ikke kan betegnes som "normalt serum", foreligge i form av et indre belegg som ikke kommer i kontakt med blodproven, men utgjor kun et mellomlig-gende lag mellom bærepartiklene og laget av det påforte antigen.
Det "normale serum" som anvendes i foreliggende fremgangsmåte
er ikke indifferent, men-tar aktivt del i prosessen og vil fun-gere til å minimalisere antallet av "falske positive" reak-sjonér.
Antilegemet spesifikt for Australia-antigenet er fortrinnsvis
utvunnet fra serum som oppnås fra pattedyr, f.eks. mennesker,
får, geiter eller marsvin som inneholder antilegemet eller er blitt immunisert med sterkt renset Australia-antigen fra men-
neskeblod. Anti-serumet renses for å fjerne fra dette gjen-
værende antilegemer for menneskelige serum-proteiner eller andre stoffer som ville gripe forstyrrende inn ved bruken av den diagnostiske reagens for fastslåelse av nærværet av Australia-antigenet .
Den vandige suspensjon av finfordelte, syntetiske harpikspartikler inneholder fortrinnsvis ca. 0,5 g/100 ml av harpikspartiklene, men kan inneholde fra 0,1 - 3 g/100 ml av harpikspartik-
lene. For. fremstillingen av diagnostisk reagens for Australia- ( antigen inneholder' suspensjonen fortrinnsvis ca. 0,05 g/100 ml \ av antilegemet for dette, adsorbert på harpikspartiklene, men dette kan- også varieres i overensstemmelse med partiklenes- konsentrasjon. Mengden av antilegeme skal være akkurat tilstrek-kelig for å forhindre auto-aggr ega sjon av harpikspartiklene. " j i For sfæriske polystyrenpartikler (160 nm i diameter) er dette ca. 1/10 av vekten av partiklene. En mengde mindre enn 1/20 av f vekten av 160 nm harpikspartikler er blitt funnet å forårsake auto-aggr.egasjon. Mengder over 1/10 forer til. nedsatt fblsom- .\/_ . het av den diagnostiske reagens når det anvendes for å bestemme '{ nærværet av antigen, skjont mengder opp.til det dobbelte av vekten av 160 nm harpikspartikler. kan brukes.
Suspensjonen inneholder fortrinnsvis et inert protein som stabilisering smiddel f.eks. serum-albumin som tilsettes
etter adsorpsjon av antigenet på partiklene i en
konsentrasjon på f.eks. 0,1 g/100 ml. Et konserveringsmiddel,
f.eks. natriumazid, i en konsentrasjon av 0,1 g/100 ml kan også
være tilstede.
Den diagnostiske reagens for Australia-antigen
kan fremstilles ved å tilsette en suspensjon av harpikspartiklene, passende fortynnet og filtrert hvis nodvendig, til en passende fortynnet opplosning eller suspensjon av det rensede antilegeme eller antigen og rbres om ved romtemperatur inntil adsorpsjon av antilegemet eller antigenet på partiklene er fullfort. Det er spesielt viktig å tilsette suspensjonen av harpikspartikler til opplosningen eller suspensjonen av antilegeme eller antigen i stedet for den omvendte måte, da sistnevnte kan forårsake irreversibel auto-aggregasjon av harpikspartiklene.
Når en forsbksprove av serum, plasma eller normalt blod, eventuelt blandet med et vandig fortynningsmiddel, blandes med et egnet (f.eks. likt) volum diagnostisk reagens for Australia-antigen, og blandingen fortsettes i minst 2 minutter, fortrinnsvis fra 5-10 minutter, vil det inn-
treffe agglutinering av harpiks-, f.eks. polystyren, partiklene under dannelse av synlige agglomerater, hvis Australia-antigen eller dettes antilegeme er tilstede i forsbksprbven.
Ifolge oppfinnelsen bringes forsbksprbven i kontakt også med normalt serum (dvs. serum som ikke inneholder verken antilegemet spesifikt for Australia-antigen, eller Australia-antigen som sådant) som oppnås fra de samme arter av pattedyr som de fra hvilket serumet som inneholder antilegemet eller antigenet, ble oppnådd. Nærværet av slikt normalt serum reduserer vesentlig mengden "falske positive" indikasjoner når den diagnostiske reagens brukes for å fastslå nærværet av
Australia-antigen i blodprøver. Fortrinnsvis innføres
ca. 1 del normalt serum pr. 20 - 50, f.eks. 35, volumdeler av den vandige suspensjon av harpikspartikler som er overtrukket med antilegemet eller antigenet. For dette formål kan den diagnostiske reagens på forhånd blandes med normalt serum.
Hvis ingen agglomerater fremkommer innen 5 minutter, angir dette fraværet av Australia-antigenet.
For å oppnå det samme formål kan det normale serum bringes i kontakt med forsøksprøven på annen måte enn ved å innarbeide det i den diagnostiske reagens. F.eks., normalt serum kan blandes med forsøksprøven før den diagnostiske reagens blandes med den sistnevnte, ellér forsøksprøven kan røres om med en omrører som er blitt overtrukket med de faste stoffer fra det normale serum, f.eks. ved å dyppe det ned i det normale serum og fordampe det til tørrhet, eller forsøksprøven kan anbringes på en overflate som på lignende måte er blitt overtrukket med åe faste stoffer fra normalt serum, f.eks. overflaten av en glass- eller plastplate. Det er imidlertid foretrukket enten å blande serumet til det diagnostiske reagens eller til forsøks-prøven.
Som nevnt foran tilsettes normalt serum fra samme pattedyrarter som fra hvilke antilegemet eller antigenet ble avledet til for-søksprøven. Dette er særlig viktig ved utførelse av prøven på antigen for å redusere opptreden av "falske positive" reak-sjoner. F.eks. hvis normalt marsvin-serum ikke innarbeides i det diagnostiske reagens som inneholder antilegeme avledet fra marsvin-antiserum, finner en at ca. 10% av menneskesera, som ikke inneholder Australia-antigen, agglutinerer harpikspartiklene som har antilegemet til Australia-antigen adsorbert på seg.
Dette skyldes muligvis nærvær av stoffer i slike menneskesera som reagerer med andre bestanddeler som stammer fra marsvin-antiserum fra hvilket antilegemet til Australia-antigen ble oppnådd. Når det normale marsvin-serum imidlertid innarbeides finner en at bare 1 - 3 % av menneskesera vil agglutinere har- . pikspartiklene i fravær av Australia-antigen fra sera. Dette kan skyldes bestanddeler i det normale marsvin-serum som er i stand til å reagere med slike bestanddeler i menneskelige sera og således hindrer dem fra å forårsake agglutinering av harpikspartiklene.
Hvis forsøksprøven er normalt blod, må den først behandles for
å oppløse cellene og å forebygge koagulering før det undersøkes på nærvær av et Australia-antigen. For dette formål kan det
behandles med et vandig fortynningsmiddel som inneholder et ikke-ionisk overflateaktivt middel av polyoksyetylert alkylfenol-type, f.eks. iso-oktyl-fenoksy-polyoksy-etyl-etanol ("Triton X-100", Rohm & Haas Co.) og natriumcitrat.
Hvis forsøksprøven er blodplasma, må den inneholde et anti-koaguleringsmiddel, f.eks. ethvert av standard-antikoagulerings-midlene, slik som natriumcitrat, og med fordel behandles det også med det samme vandige f ortynningsmiddel som ..inneholder et ikke-ionisk overflateaktivt middel som normalt blod for å løse opp eventuelt gjenværende celler som er tilstede i prøven.
De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.
A. Fremstilling av diagnostiske reagenser
Eksempel 1
En 40 g/100 ml vandig suspensjon av 160 nm polystyrenkuler
av Styrene Products Limited (Product No. 24016) fortynnes til 5 g/100 ml med borat-pufret saltopplosning og filtreres gjennom en membran med porestorrelse l^^am. Den tilsettes derpå umiddelbart til 9 volumdeler av renset marsvin-antiserum som inneholder antilegemet til Australia-antigen (fortynnet til 0,05 g/100 ml) og rores konstant om i 30 minutter. Et volum av okseserum-albumin (1 g/100 ml) tilsettes derpå og til slutt natriumazid for å gi en konsentrasjon på 0,1% w/v i det endelige produkt. Produktet holdes ved 4°C, ved hvilken temperatur det er stabilt i minst 3 måneder.
Eksempel 2
En 40 g/100 ml suspensjon av de samme.polystyrenkuler som brukt i eksempel 1 fortynnes til 5% med glycin-pufret saltopplosning og steriliseres ved tils etning av {3-propiolakton under pH kon-troll. Det tilsettes derpå til 9 volumdeler av egnet fortynnet, renset marsvin-serum fra dyr som er immunisert med Australia antigen. Polystyrensuspensjonen tilsettes langsomt under omro-ring og omroringen fortsettes i 30 minutter. Polystyrenkulene sentrifugeres, vaskes straks på sentrifugen med pufret saltopplosning og gjen-suspenderes til det opprinnelige volum i pufret saltopplosning. Okseserum-albumin (1 g/lOG ml) tilsettes fe- é stabilisere suspensjonen av polystyrenkuler og omroringen fortsettes i 30 minutter. 1/10 av et volum av fortynnet normalt serum fra ikke-immuniserte marsvin (fortynet 1:3,5 med glycin-pufret saltopplosning) tilsettes og blandingen rores igjen om i 30 minutter. Til slutt rystes blandingen kraftig for å dispergere enhver agglomerering av partikler. Alle opp-lesninger som brukes steriliseres ved filtrering og inneholder 0,1% natriumazid som konserveringsmiddel. Produktet holdes ved 4°c, ved hvilken temperatur det er.stabilt i minst 3 måneder.
Virkningen av en sats av diagnostisk reagens undersokes ved å proves mot et panel på minst 50 menneskesera som inneholder forskjellige kjente titere av Australia antigen. Denne virk-ning sammenlignes med virkningen av standardprover for Australia antigen (geldiffusjon og kontra-immunoelektroforese) mot panelet og skulle gi i det minste lik folsomhet. Selektiviteten undersokes mot minst lOO menneskesera og blodprdver kjent for ikke å inneholde Australia antigen når ikke mere enn 3% av provene skulle gi en reaksjon.
Det rensete marsvin-antiserum som anvendes i eksempel 1 og 2 fremstille som folger: Marsvin immuniseres med Australia antigen som er renset fra prover av menneskeplasma ved isopyknisk behandling i en cae-siumklorid- eller kaliumbromid-gradient i en sonesentrifuge fulgt av sonesentrifugering i en sukrosegradient. En primær
-immunisering med antigen med Freund's komplette hjelpemiddel i fotputene folges av to intraperitoneale inokuleringer av antigen uten hjelpemiddel. Etter oppsamling av sera samlet opp fra marsvin fjernes gjenværende antilegeme til menneskeserum-proteiner hvis nodvendig ved å bringe antiserummet i kontakt med normalt menneskeserum polymerisert med etylklorofprmat. Serummet renses derpå ved utfelling med 14% vandig natrium-sulfat, dialyseres mot vandig fosfat pufret med saltopplosning og kan oppvarmes ved 56°C i 30 minutter hvis onsket for å 6de-. legge komplement. Natriumazid (0,1%) tilsettes derpå som konserveringsmiddel. Forbruk ved fremstilling av den diagnostiske
reagens fortynnes antiserummet hensiktsmessig. Den optimale fortynning velges ved å fremstille små satser av den diagnostiske reagens med forskjellige fortynninger av antiserummet og prove disse mot et panel av menneskesera kjent for å inneholde Australia antigen. Fortynningen som gir den beste virk-ning mot panelet når overtrukket på harpikspartikler velges for fremstilling av den diagnostiske reagens. Normalt ligger den optimale fortynning mellom 1:20 og 1:100.
B. Bestemmelser for å fastslå nærværet
av Australia antigen.
Eksempel 3
En dråpe (tilnærmet 25 / c 1) av en forsoksprove av menneskeserum anbringes på et mikroskopglass og en lignende dråpe av fortynnet (1:20) normalt marsvinserum tilsettes. Dette rores deretter svakt om med en engangs apoteker-trepinne i få sekunder. En dråpe av diagnostisk reagens fremstilt som i eksempel 1 tilsettes og blandingen rores om med apoteker-trepinnen inntil dråpens diameter er ca. 2 cm. Glasset anbragt på en sort bakgrunn rystes derpå svakt frem og tilbake i 2 minutter. Etter denne tid viser en serumprove som inneholder Australia antigen en avgjort agglutinering skjont en sterkt positiv prove vil agglutinere polystyrenpartiklene i lopet av 15 til 30 sekunder. Negative sera gir ingen synlig agglutinering i lopet av 2 minutter.
Eksempel 4
En dråpe (40/^1) av forsoksprdven av menneskeserum anbringes på en sort glass- (eller plastisk) plate. En dråpe av diagnostisk reagens fremstilt som i eksempel 2 tilsettes og blandingen rores om med en apoteker-trepinne inntil dråpens diameter er ca. 2 cm. Platen rystes svakt frem og tilbake i 5 minutter. Etter denne tid viser en serumprove som inneholder Australia antigen avgjort agglutinering skjont en sterkt positiv prove vil agglutinere polystyrenpartiklene i lopet av 15 til 30 sekunder. Negative sera gir ingen synlig agglutinering i lopet av 5 minutter.
Eksempel 5
En dråpe (tilnærmet 40/ti) av venost eller finge kapillarblod fra mennesker tilsettes til et ror som inneholder 200 / cl av en fortynnet opplosning med folgende sammensetning: 0,1% trinatriumcitrat, 0,1% natriumazid og 0,02% av et ikke-ionisk o\erflatekativt middel (iso-oktylfenoksy-polyetoksyetanol, Triton X-100, Rohm & Haas Co.) i destillert vann. Etter blan-ding ved svak rystning og henstand i 10 minutter for å lose cellene i blodet anbringes 2 dråper av blandingen sammen på en sort glass- eller plastikk-plate og en dråpe av den diagnostiske reagens fremstilt som i eksempel 2 tilsettes, og proven utfores som i eksempel 4.
Eksempel 6
20^1 blod (venost eller kapillarblod) tilsettes til tilnærmet 50 av en fortynnet opplosning med sammensetning som i eksempel 5 på en sort glass- eller plastikk-plate. Blodet og fortynningsmidlet rores om med en apoteker-trepinne, og blandingen får henstå mellom 5 og IO minutter for å sikre full-stendig losning av blodcellene. En dråpe diagnostisk reagens fremstilt som i eksempel 2 tilsettes og proven utfores som i eksempel 4.
Eksempel 7
Blod som inneholder ethvert av standard-antikoaguleringsmid-lene slik som citrat sentrifugeres for å fjerne hovedparten av cellene. Det resulterende plasma skilles fra de sammenpak-kede cellene og undersokes derpå på Australia antigen ved en av metodene i eksemplene 5 eller 6, noyaktig som for normalt blod.
Det er fordelaktig når man utforer en rekke prover ifolge noen av eksemplene 3 til 7 å inkludere et kjent "positivt" eller "negativt" serum i hver serie for sammenligningsformål.
Claims (3)
1. Fremgangsmåte for å fastslå nærvær av Australia-antigen 1 en blodprove hvor proven blandes med et egnet volum av en vandig suspensjon av finfordelte, syntetiske harpikspartikler av i det vesentlige ensartet form og storrelse, og som er,, overtrukket med antilegemet spesifikt for Australia-antigen og at blodproven og den vandige suspensjon blandes i minst 2 min., og hvor opptreden av synlige agglomerater angir nærvær av antigenet i forsøksprøven, karakterisert ved at forsoksproven også bringes i kontakt med normalt serum fra samme dyreart sdrri antilegemet ble fremstilt fra.
2. Fremgangsmåte ifolge krav 1, karakterisert ved at det normale serum tilsettes den vandige suspensjon av harpikspartikler for denne tilsettes blodproven.
3. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at det normale serum blandes med forsoksproven for forsbksprbven blandes med suspensjonen av harpikspartikler .
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB3609771A GB1390617A (en) | 1971-07-31 | 1971-07-31 | Diagnostic reagents test method and pack |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO138394B true NO138394B (no) | 1978-05-16 |
| NO138394C NO138394C (no) | 1978-08-23 |
Family
ID=10384922
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO2721/72A NO135801C (no) | 1971-07-31 | 1972-07-28 | |
| NO3782/72A NO138394C (no) | 1971-07-31 | 1972-10-20 | Fremgangsmaate for aa fastslaa naervaer av australia-antigen i en blodproeve |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO2721/72A NO135801C (no) | 1971-07-31 | 1972-07-28 |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS4829487A (no) |
| AR (1) | AR192962A1 (no) |
| AT (1) | AT316752B (no) |
| AU (1) | AU472607B2 (no) |
| BE (1) | BE787014A (no) |
| BR (1) | BR7205058D0 (no) |
| CH (1) | CH572621A5 (no) |
| DK (1) | DK144988C (no) |
| ES (2) | ES405387A1 (no) |
| FI (1) | FI55408C (no) |
| FR (1) | FR2148081B1 (no) |
| GB (1) | GB1390617A (no) |
| IE (1) | IE36589B1 (no) |
| IL (1) | IL39991A0 (no) |
| IT (1) | IT963332B (no) |
| NL (1) | NL163877C (no) |
| NO (2) | NO135801C (no) |
| SE (1) | SE410768B (no) |
| ZA (1) | ZA725257B (no) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3992517A (en) * | 1975-02-19 | 1976-11-16 | Pfizer Inc. | Detection of hepatitis B surface antigen by latex agglutination |
| US4642285A (en) * | 1975-09-29 | 1987-02-10 | Diamedix Corporation | Sandwich EIA for antigen |
| US4474878A (en) * | 1975-09-29 | 1984-10-02 | Cordis Laboratories, Inc. | Sandwich EIA for antigen associated with hepatitis |
| CA1100037A (en) * | 1977-03-11 | 1981-04-28 | Chung-Mei Ling | Hb.sub.c ag coated on solid phase |
| JP2572035B2 (ja) * | 1986-02-12 | 1997-01-16 | ユニチカ株式会社 | マルチフイラメント糸 |
-
0
- BE BE787014D patent/BE787014A/xx not_active IP Right Cessation
-
1971
- 1971-07-31 GB GB3609771A patent/GB1390617A/en not_active Expired
-
1972
- 1972-07-24 IE IE1035/72A patent/IE36589B1/xx unknown
- 1972-07-25 IT IT27383/72A patent/IT963332B/it active
- 1972-07-25 SE SE7209728A patent/SE410768B/xx unknown
- 1972-07-25 IL IL39991A patent/IL39991A0/xx unknown
- 1972-07-26 AU AU45020/72A patent/AU472607B2/en not_active Expired
- 1972-07-27 DK DK373072A patent/DK144988C/da active
- 1972-07-27 FI FI2104/72A patent/FI55408C/fi active
- 1972-07-27 AT AT648072A patent/AT316752B/de not_active IP Right Cessation
- 1972-07-28 NO NO2721/72A patent/NO135801C/no unknown
- 1972-07-28 FR FR7227335A patent/FR2148081B1/fr not_active Expired
- 1972-07-28 BR BR5058/72A patent/BR7205058D0/pt unknown
- 1972-07-31 AR AR243342A patent/AR192962A1/es active
- 1972-07-31 ES ES405387A patent/ES405387A1/es not_active Expired
- 1972-07-31 CH CH1134472A patent/CH572621A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1972-07-31 JP JP47076027A patent/JPS4829487A/ja active Pending
- 1972-07-31 NL NL7210503.A patent/NL163877C/xx not_active IP Right Cessation
- 1972-07-31 ZA ZA725257A patent/ZA725257B/xx unknown
- 1972-07-31 ES ES405388A patent/ES405388A1/es not_active Expired
- 1972-10-20 NO NO3782/72A patent/NO138394C/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE36589L (en) | 1973-01-31 |
| NL163877B (nl) | 1980-05-16 |
| BR7205058D0 (pt) | 1973-11-01 |
| AT316752B (de) | 1974-07-25 |
| NL7210503A (no) | 1973-02-02 |
| NO138394C (no) | 1978-08-23 |
| DK144988B (da) | 1982-07-19 |
| NO135801B (no) | 1977-02-21 |
| GB1390617A (en) | 1975-04-16 |
| ES405388A1 (es) | 1975-07-01 |
| ES405387A1 (es) | 1975-07-01 |
| BE787014A (fr) | 1973-01-31 |
| AU472607B2 (en) | 1976-05-27 |
| IL39991A0 (en) | 1972-09-28 |
| JPS4829487A (no) | 1973-04-19 |
| ZA725257B (en) | 1973-04-25 |
| DK144988C (da) | 1982-12-06 |
| NL163877C (nl) | 1980-10-15 |
| AR192962A1 (es) | 1973-03-21 |
| CH572621A5 (no) | 1976-02-13 |
| SE410768B (sv) | 1979-10-29 |
| AU4502072A (en) | 1974-02-07 |
| NO135801C (no) | 1977-06-08 |
| IT963332B (it) | 1974-01-10 |
| FR2148081B1 (no) | 1977-08-26 |
| IE36589B1 (en) | 1976-12-08 |
| FI55408C (fi) | 1979-07-10 |
| DE2237204B2 (de) | 1977-04-07 |
| FR2148081A1 (no) | 1973-03-11 |
| DE2237204A1 (de) | 1973-02-08 |
| FI55408B (fi) | 1979-03-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4731330A (en) | Whole blood control sample | |
| US3551555A (en) | Coated immunochemical reagent particles and process of preparation | |
| DK150170B (da) | Fremgangsmaade til bestemmelse af et antigen eller dets tilsvarende antistof | |
| JPH0684970B2 (ja) | 糞便中の潜血検出方法 | |
| JPS6243138B2 (no) | ||
| US4711841A (en) | Method for determining one or more antigens in a sample | |
| US4157280A (en) | Test set for detecting the presence of antigens associated with hepatitis | |
| DK144395B (da) | Fremgangsmaade og proevningssaet til proevning for tilstedevaerelsen af hepatitis b overfladeantigen i menneskeblod | |
| US5043289A (en) | Method and device for assaying immunologically reactive substances of clinical interest | |
| US3562384A (en) | Immunological indicator and test system | |
| NO138394B (no) | Fremgangsmaate for aa fastslaa naervaer av australia-antigen i en blodproeve | |
| GB2069694A (en) | Immunological reagent for detecting rheumatoid factor | |
| Paek et al. | Performance control strategies of one-step immuno-chromatographic assay system for Salmonella typhimurium | |
| US5302512A (en) | Agglutinant complex as blood typing reagent | |
| FR2511155A1 (fr) | Detection d'anticorps auto-bloquant | |
| US3828103A (en) | Indirect hemagglutination test with simultaneous absorption of heterologous antibodies | |
| US3840655A (en) | Diagnostic methods and reagents for infectous mononucleosis | |
| US4090846A (en) | Indirect latex test for determination of fibrinogen degradation products | |
| US3497319A (en) | Diagnostic reagent | |
| US4403040A (en) | Diagnostic test for the detection of a specific tumor antigen with CoA-SPC | |
| Horzinek et al. | Structural constituents of Venezuelan equine encephalitis virus | |
| US3477817A (en) | Diagnostic test for presence of galactose | |
| DE2237204C3 (de) | Verfahren zum Nachweis des Australien-Antigens oder des Antikörpers hierzu in einer Blut-Testprobe | |
| RU2195670C1 (ru) | Способ определения функциональной активности компонента c2 комплемента человека | |
| NO173297B (no) | Fremgangsmaate for detektering eller bestemmelse av en analytt |