[go: up one dir, main page]

NL8703075A - Acridiniumverbindingen als chemiluminescentie-merkstof. - Google Patents

Acridiniumverbindingen als chemiluminescentie-merkstof. Download PDF

Info

Publication number
NL8703075A
NL8703075A NL8703075A NL8703075A NL8703075A NL 8703075 A NL8703075 A NL 8703075A NL 8703075 A NL8703075 A NL 8703075A NL 8703075 A NL8703075 A NL 8703075A NL 8703075 A NL8703075 A NL 8703075A
Authority
NL
Netherlands
Prior art keywords
group
chemiluminescence
compound according
acridinium
compounds
Prior art date
Application number
NL8703075A
Other languages
English (en)
Original Assignee
Nederlanden Staat
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nederlanden Staat filed Critical Nederlanden Staat
Priority to NL8703075A priority Critical patent/NL8703075A/nl
Priority to ES88202802T priority patent/ES2056907T3/es
Priority to EP88202802A priority patent/EP0324202B1/en
Priority to DE3851216T priority patent/DE3851216T2/de
Priority to AT88202802T priority patent/ATE110366T1/de
Priority to CA000586045A priority patent/CA1334418C/en
Priority to JP63318327A priority patent/JPH0819106B2/ja
Publication of NL8703075A publication Critical patent/NL8703075A/nl
Priority to US07/719,656 priority patent/US5521103A/en
Priority to US08/478,125 priority patent/US6018047A/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/06—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials
    • C09K11/07—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials having chemically interreactive components, e.g. reactive chemiluminescent compositions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D219/00—Heterocyclic compounds containing acridine or hydrogenated acridine ring systems
    • C07D219/04—Heterocyclic compounds containing acridine or hydrogenated acridine ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the ring system
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/805—Optical property

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Luminescent Compositions (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Other In-Based Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Description

> N.0. 34733 1 ?
Acridiniumverbindingen als chemiluminescentie-merkstof
De uitvinding heeft betrekking op acridiniumverbindingen die geschikt zijn als chemiluminescentie-merkstof.
5 Uit de Europese aanvrage 82.636 zijn chemiluminescerende acridiniumverbindingen met formule 2 bekend die een in de substituent aanwezige functionele groep bezitten, welke een koppeling met biologisch interessante stoffen kan aangaan.
Chemiluminescentie is het verschijnsel waarbij elektromagnetische 10 straling (licht) wordt uitgezonden als gevolg van een chemische reactie. Gewoonlijk is daarbij sprake van een reactieprodukt dat, in verband met de aard van de reactie, ontstaat in een elektronisch aangeslagen toestand. Dit aangeslagen reactieprodukt kan in de "normale" toestand, de grondtoestand, terechtkomen door zijn energieoverschot af te 15 geven in de vorm van elektromagnetische straling. Bij acridiniumverbindingen zoals die volgens de genoemde Europese octrooiaanvrage 82.636 (zie ook Cl in. Chem. 29 (8), 1474-1479 (1983)) treedt de chemilumines-centie op door reactie met basisch waterstofperoxide zoals voor de verbinding 2 is weergegeven in het schema van figuur 1.
20 Chemiluminescerende stoffen kunnen, net als stoffen met een radioactieve isotoop, als merkstof worden gebruikt om stoffen waarmee zij zich op een of andere wijze binden aan te tonen. De voordelen van chemiluminescerende boven radioactieve merkstoffen zijn onder meer het geringere gevaar, de grotere gevoeligheid en de langere levensduur.
25 Het gebruik van dergelijke merkstoffen is vooral van belang in biologische systemen. Aldus kunnen bijvoorbeeld eiwitten, koolhydraten en andere biologisch relevante stoffen worden bepaald, maar ook kunnen de biologische reacties van dergeïijke stoffen met daarvoor in aanmerking komende reactiepartners worden gevolgd. Voorbeelden zijn de wis-30 selwerking tussen een geneesmiddel en een receptor, tussen een gifstof en een receptor of tegengif en, in het bijzonder, de immuun-reactie tussen een antigeen en een antilichaam.
Een bijzondere bepalingsvorm waarin van de chemiluminescentiereac-tie gebruik wordt gemaakt is die waarbij de energie van het aangeslagen 35 reactieprodukt (de donor) niet direct als licht wordt uitgestraald, maar stralingsloos wordt overgedragen op een daartoe geschikte acceptor, veelal een fluorescerende stof. Deze acceptor kan de opgenomen energie vervolgens weer afstaan in de vorm van elektromagnetische straling waarvan de golflengte verschilt van de golflengte van de chemilu-40 minescentie van de donor. Dit verschijnsel is o.a. beschreven door »703075 # 2 ¥ T. Förster (Ann. Phys. (Leipzig) 2, 55-75 (1948) en Z. Naturforsch.
4a, 321-334 (1949)). Doordat de golflengte van het uitgezonden licht specifiek is voor de acceptor of voor het donor-acceptorcomplex, kan de acceptor, die bijvoorbeeld een met een fluorescerende stof gemerkt an-5 tilichaam kan zijn, dan wel het met de donor gekoppelde substraat (b.v. een antigen) worden bepaald zonder dat afscheiding van de complexen noodzakelijk is. Deze z.g. homogene bepaling door middel van chemilumi-nescentie-energieoverdracht is beschreven met isoluminol-derivaten als merkstof, zie A. Patel en A.K. Campbell, Clin. Chem. 29(9), 1604-1608 10 (1983). Luminol en isoluminol en derivaten daarvan hebben echter als nadeel een betrekkelijke lage kwantumopbrengst; bovendien is voor het starten van de chemiluminescentie van deze stoffen een katalysator nodig.
Een nadeel van de uit de Europese octrooiaanvrage 82.836 bekende 15 acridiniumverbindingen is dat deze niet bruikbaar blijken voor homogene immuunbepalingen gebaseerd op chemiluminescentie en energieoverdracht. Gevonden is nu een groep verbindingen die chemiluminescerend zijn en geschikt zijn als merkstof zowel voor heterogene als voor homogene biologische bepalingen zoals immuunbepalingen.
20 De acridiniumverbindingen volgens de uitvinding worden gekenmerkt doordat de verbindingen voldoen aan formule 1_, waarin A een tweewaardige organische rest is, X een groep is die met waterstofperoxide samen met C-9 van het acridine in een dioxetnaan kan worden omgezet, 25 Y een tegenion is, en Z een functionele groep is, en waarvan de benzeenringen een of meer substituenten kunnen dragen.
De verbindingen volgens de uitvinding hebben enerzijds een chemi-luminescentie-functie, d.w.z. dat zij door een chemische reactie worden 30 omgezet in een elektronisch aangeslagen produkt, dat vervolgens zijn energieoverschot in de vorm van licht uitzendt. Deze functie is aanwezig op C-9 van het acridine. Anderzijds bezitten zij een koppelings-functie, d.w.z. dat zij via een organische rest een functionele groep bezitten die bijvoorbeeld met biologisch actieve stoffen zoals eiwitten 35 e.d., maar ook met bijvoorbeeld toxicologisch relevante stoffen een koppeling tot stand kan brengen. De koppelingsfunctie heeft als aanhechtingsplaats het stikstofatoom van de acridiniumeenheid. Door deze tweeledige functie zijn de verbindingen geschikt als merkstof, bijvoorbeeld voor immuunbepalingen, waarbij zij door specifieke koppeling met 40 de te bepalen stof of met een reagens voor de te bepalen stof de aanwe- 8753075 t 3 .
zigheid van het koppelingsprodukt of van de wisselwerking met het reagens door de chemiluminescentie aantonen.
Het voordeel van de acridiniumverbindingen volgens de uitvinding is dat bij chemische reactie die tot luminescentie leidt, d.w.z. de 5 reactie met waterstofperoxide via een dioxetaan tot een aangeslagen 9-acridon, de koppeling met te bepalen stof in stand blijft. Hierdoor kan de energie van het aangeslagen produkt desgewenst worden overgedragen op een elders in het koppelingsprodukt of in het complex daarvan aanwezige acceptor zoals fluoresceïne of lucifer-yellow. De energie-10 overdracht is hierbij efficiënter dan bij chemiluminescentie-donoren van het isoluminol-type, en verder is daarbij geen katalysator nodig.
Een verder voordeel van de verbindingen volgens de uitvinding is dat het verloop van de chemiluminescentie van het koppelingsprodukt (een met de acridiniumverbinding gemerkte, bijvoorbeeld biologisch 15 werkzame, stof, zoals een sterofde) afhankelijk is van de aanwezigheid van een met de gemerkte stof reagerende stof zoals een antistof of een antiserum. Bij dergelijke immuunreacties is het verloop van de luminescentie van het immuuncomplex in de tijd verschillend van het verloop van de luminescentie van de niet gecomplexeerde gemerkte stof, 20 hetgeen tot uiting kan komen in een verschuiving van het tijdstip van maximale emissie. Hierdoor behoeven de immuuncomplexen niet te worden gescheiden om te kunnen worden gemeten en is er dus ook sprake van een homogene immuunbepaling.
De tweewaardige organische rest A dient als zogenaamde "spacer", 25 die de afstand tussen de acridiniumrest en de functionele groep van het substraat waarmee de groep Z moet reageren overbrugt. De lengte van groep A is zodanig dat reactie van de functionele groep Z met een functionele groep van het substraat mogelijk is. Deze minimale lengte is dus afhankelijk van het substraat waarmee de verbinding met formule J.
30 moet worden gekoppeld. De aard van groep A is niet belangrijk, zolang deze groep de reactiviteit van functionele groep Z of de gewenste reactie van groep X met waterstofperoxide niet stoort. De rest A kan alkyl-eengroepen, aryleengroepen, carbonyl groepen, heteroatomen, zoals stikstof, zuurstof en zwavel, e.d. bevatten, bijvoorbeeld gecombineerd tot 35 estergroepen, thioestergroepen, amidegroepen e.d.. De rest A kan ook zijn opgebouwd uit bifunctionele eenheden zoals dicarbonzuren, thiol en, hydroxyzuren, aminozuren, thiolzuur enz..
Hoewel groep A dus elke niet-storende tweewaardige organische rest kan zijn, kiest men om complicaties bij de synthese van de verbindingen 40 met de formule j[ te vermijden, bij voorkeur een eenvoudige rest zoals 87030 75 t 4 * een, eventueel door een of meer heteroatomen en/of carbonyl groepen onderbroken, tweewaardige koolwaterstofrest. In het bijzonder is A een alkyleengroep met 1-4 koolstofatomen.
De X kan elke groep zijn die met waterstofperoxide een 1,2-di-5 oxetaan vormt. Dit dioxetaan omvat naast de twee van waterstofperoxide afkomstige zuurstofatomen nog het C-9 atoom van het acridine. De groep X moet daarom een koolstofatoom zijn dat is gesubstitueerd met een groep die bij een reactie van waterstofperoxide bijvoorbeeld als negatief ion kan vertrekken, zoals een halogeenatoom, een alkoxy-, aryloxy-10 of alkylthiogroep, of een ammonium- of sulfoniumgroep. Als groep X kunnen worden genoemd 1-halogeenalkyl, 1-alkoxyalkyl e.d. en halogeenfor-myl, alkoxycarbonyl, alkylthiocarbonyl, aryloxycarbonyl e.d.; bij voorkeur is groep X een alkoxycarbonylgroep of in het bijzonder een aryl-oxycarbonylgroep.
15 Het anion Y kan elk anion zijn zoals halogenide, sulfaat, areen- sulfonaat e.d.; bijvoorbeeld kan Y het ion zijn dat bij de quaternise-ring van het acridine-stikstofatoom als vertrekkende groep optreedt.
De groep Z is een functionele groep die met een organisch substraat een koppeling kan aangaan. Z kan worden gekozen afhankelijk van 20 de in het substraat aanwezige functionele groepen. Zijn in het substraat bijvoorbeeld aminogroepen, hydroxygroepen of mercaptogroepen aanwezig, dan kan Z een carboxyl groep of reactief derivaat daarvan, zoals een ester, zuurchloride e.d. zijn. De koppeling wordt dan tot stand gebracht in de vorm van een (thio)ester- of (thio)amide-binding. Een 25 geschikte groep, die ook volgens de Europese octrooiaanvrage 82.636 wordt gebruikt, is de N-succinimidyloxycarbonylgroep. Z kan ook een isocyanaat of isothiocyanaat zijn; de koppeling heeft dan de vorm van een ureumbinding of urethaan, danwel van een mono- of dithioanaloog daarvan. Andere mogelijke groepen Z die met amino-, hydroxy- en/of mer-30 captogroepen kunnen reageren zijn halogeenatomen, eventueel op de β-plaats geactiveerd door een carbonyl- of alkeenfunctie, sulfonzuurde-rivaten en fosforzuurderivaten, aziden en eventueel geprotoneerde car-boximidaten.
Wanneer het substraat beschikt over carboxyl groepen of derivaten 35 daarvan zoals esters, kan de groep Z bijvoorbeeld een aminofunctie zijn.
De voorkeur hebben acridiniumverbindingen met formule 1_ waarin Z een carboxylgroep of een daarvan afgeleide reactieve groep is.
De verbindingen volgens de uitvinding kunnen op op zichzelf beken-40 de wijze worden bereid. Uitgegaan kan worden van acridine of van een 87030 75 5 reeds op de 9-pTaats op geschikte wijze gesubstitueerd acridine, zoals 9-acridinecarbonzuur of een derivaat daarvan, 9-halogeenmethyl, 9-al-koxymethyl- of 9-aryloxymethyl-acridine. Het 9-acridinecarbonzuur kan dan worden omgezet in een geschikte ester of in een ander derivaat dat 5 met waterstofperoxide een dioxetaan kan opleveren. Een dergelijk 9-ge-substitueerd acridine kan vervolgens worden omgezet door quaternisering van de stikstof op positie 10, waarna de keten A kan worden opgebouwd en tenslotte een eenheid die groep Z draagt kan worden ingevoerd. In het bijzonder kan het acridine-stikstofatoom direkt worden gequarterni-10 seerd met de groep A-Z waarbij acridine wordt omgezet met een verbinding Y'-A-Z, waarin Y' een reactieve groep is zoals een halogeenatoom of een andere vertrekkende groep. Het kan gewenst zijn de functionele groep Z tijdens de synthese te beschermen om ongewenste reacties te vermijden. Bescherming van groep Z kan op bekende wijze geschieden; in-15 dien Z een carboxylgroep is kan deze bijvoorbeeld worden beschermd in de vorm van een ester zoals een t-butyl-, benzyl-, succinimidylester enz..
De acridiniumverbindingen volgens de uitvinding geven bij reactie met waterstofperoxide aanleiding tot chemilumilescentie volgens het 20 schema van figuur 2.
De groep X is in figuur 2 weergegeven als de groep CR2L waarin de groepen R bijvoorbeeld ieder een waterstofatoom of een alkylgroep zijn of samen een oxogroep vormen en L een groep is die bijvoorbeeld als negatief ion kan vertrekken zoals een halogeenatoom, een aryloxy-25 groep of een ammoniumgroep e.d.. Bij reactie met waterstofperoxide en base wordt acridiniumverbinding _1' onder uitstoting van de groep L omgezet in het spirodioxetaan met formule 4. Dit dioxetaan of dioxetanon splitst een molecuul CR2=0 af waarbij het acridon met formule jj in aangeslagen toestand ontstaat dat door uitzending van licht de grond-30 toestand bereikt. De chemiluminescentie kan met bekende instrumenten worden gemeten, bijvoorbeeld met een LUMAC Biocounter 2010.
De verbindingen met de formule _1 chemiluminesceren na reactie met waterstofperoxide in het algemeen met een golflengte van 420 nm. De verbinding waarin de groep X (= CR2L) de betekenis van een fenoxycar-35 bonylgroep en de groep A-Z die van een carboxymethylgroep heeft, zendt na reactie met waterstofperoxide licht uit met een golflengte van 420 nm. De detectiegrens van deze laatste verbinding is lager dan 8 fg (=8.10“15 g) Wat overeenkomt met ca. 16 amol (= 1,6 x 10“17 mol). De chemiluminescentie kan zoals bekend ana-40 lytisch worden toegepast. Wanneer de verbinding 1 als merkstof wordt S703075 9 6 gekoppeld aan een substraat en dit koppelingsprodukt wordt gescheiden van niet-gekoppelde acridiniumverbinding, is de intensiteit van de bij waterstofperoxide-reactie uitgezonden straling een maat voor de concentratie van het koppelingsprodukt, welke concentratie kan worden gereia-5 teerd aan de hoeveelheid substraat.
De uitvinding heeft ook betrekking op de toepassing van acridi-niumverbindingen met formule 1 voor immuunbepalingen door middel van chemiluminescentie.
Hierbij wordt de chemiluminescerende verbinding .1 gebonden aan een 10 bij een immuunreactie betrokken stof, bijvoorbeeld een anti geen. Het aldus gemerkte antigeen levert dan bij complexering of andere wisselwerking met een eveneens bij de immuunreactie betrokken stof, bijvoorbeeld een antilichaam, een gemerkt complex op dat (na scheiding van niet-gecomplexeerd antigeen) door middel van de chemiluminescentie-15 reactie kwalitatief, en desgewenst kwantitatief, kan worden bepaald.
De uitvinding heeft tevens betrekking op de toepassing van acridi-niumverbindingen met formule 1_ voor immuunbepalingen door middel van chemiluminescentie en energieoverdracht.
Hierbij wordt bijvoorbeeld het antilichaam gekoppeld met een ener-20 gieacceptor, zoals een fluorescerende stof, waarna het antigeen-antili-chaamcomplex door chemiluminescentie en energieoverdracht kan worden bepaald, zonder dat scheiding van het niet-gecomplexeerde antigeen nodig is. De verbindingen volgens de uitvinding zijn voor deze bepalingsmethode zeer geschikt doordat energieoverdracht van het acridiniumge-25 deelte naar een acceptor zeer efficiënt is en tijdens de chemilumi-nescentie-reactie geen dissociatie optreedt tussen de donor (de acridi-neverbinding) en de acceptor.
De uitvinding heeft verder betrekking op verbindingen met formule 1_, gekoppeld aan een bij immuunreacties betrokken stof.
30 Ook omvat de uitvinding de toepassing van de hierboven bedoelde koppel ingsprodukten van de acridineverbindingen met formulej^met een bij immuunreacties betrokken stof, voor bepalingen van immuunreacties en immuunstoffen door middel van chemiluminescentie al of niet in combinatie met energieoverdracht.
35 Voorbeelden Voorbeeld I
Bereiding van fenyl-9-acridinecarbo)^ylaat
Acridine-9-carbonzuur (5 g) wordt gesuspendeerd in thionylchloride (75 ml). Onder terugvloeikoeling wordt het mengsel verwarmd en geroerd 40 gedurende vier uur. De overmaat thionylchloride wordt afgedestilleerd.
87030 75 7 *
Het residu wordt gesuspendeerd in pyridine (75 ml) en het mengsel geroerd bij kamertemperatuur gedurende tien minuten. Fenol (4,5 g) wordt aan de suspensie toegevoegd. Het resulterende reactiemengsel wordt geroerd bij kamertemperatuur gedurende zestien uur. De ontstane oplossing 5 wordt uitgegoten in 1 normaal zoutzout 1 normaal zoutzuur (200 ml). Het gevormde neerslag (6,5 g) wordt afgefiltreerd en herkristalliseerd uit benzeen/cyclohexaan.
Voorbeeld II
Bereiding van 4-metho*yfenyl-9-acridinecarboxylaat 10 Deze verbinding wordt overeenkomstig voorbeeld I bereid door toepassing van 4-methoxyfenol in plaats van fenol.
Voorbeeld III
Bereiding van 4-chloorfenyl-9-acridinecarboxylaat
Deze verbinding wordt overeenkomstig voorbeeld I bereid door toe-15 passing van 4-chloorfenol in plaats van fenol.
Voorbeeld IV
Bereiding van 4-acetylfenyl-9-acridinecarboxylaat
Deze verbinding wordt overeenkomstig voorbeeld I bereid door toepassing van 4-hydroxyacetofenon in plaats van fenol.
20 Voorbeeld V
Bereiding van t-butyljoodacetaat
Een mengsel van t-butylchlooracetaat (20 g) en natriumjodide (25 g) wordt geroerd in aceton (200 ml) gedurende 20 uur. De aceton wordt verwijderd door destillatie onder verlaagde druk. Het residu 25 wordt opgenomen in diethylether (100 ml) en water (50 ml). De etherlaag wordt afgescheiden, gewassen met water, 5% natriumthiosulfaat en water.
De organische laag wordt gedroogd op natriumsulfaat en ingedampt onder verlaagde druk. Er wordt 25 gram t-butyljoodacetaat verkregen.
Voorbeeld VI
30 Bereiding van benzyljoodacetaat
Deze verbinding wordt overeenkomstig voorbeeld V bereid uit benzyl chl ooracetaat.
Voorbeeld VII
Bereiding van t-butyl-3-joodpropionaat 35 Een mengsel van 3-chloorpropionylchloride (20 g), pyridine (20 g) en t-butanol (20 g) in dichloormethaan (200 ml) wordt geroerd bij kamertemperatuur gedurende 20 uur. Het reactiemengsel wordt uitgegoten in water (200 ml). De organische laag wordt gewassen met water, 0,1 normaal zoutzuur, water en 5¾ natriumbicarbonaat. Na drogen op natriumsul-40 faat wordt het organische oplosmiddel verwijderd door destillatie onder 87030 75 , 8 verlaagde druk. Een gedeelte van het residu (5 g) wordt opgelost in aceton (10 ml) en behandeld met een oplossing van natriumjodide (8 g) in aceton. Het reactie wordt onder terugvloeikoeling verwarmd en geroerd gedurende 20 uur. Opwerken zoals beschreven onder voorbeeld V 5 geeft 6,5 gram t-butyl-3-joodpropionaat.
Voorbeeld VIII
Bereiding van 9-fenoxycarbonyl-10-carboxymethylacridiniumbromide
Een mengsel van fenyl-9-acridinecarboxylaat (100 mg) en t-butyl-joodacetaat wordt onder roeren verwarmd op 110°C gedurende vijf uur. De 10 resulterende oplossing wordt uitgegoten in diethylether (25 ml) en het gevormde neerslag afgefiltreerd. Een gedeelte van dit neerslag (10 mg) wordt geroerd in 33¾ waterstofbromide in azijnzuur (1 ml) en verwarmd op 50°C gedurende twee uur. Het reactiemengsel wordt uitgegoten in water en het gevormde neerslag (ca. 6 mg) geïsoleerd.
15 Voorbeeld IX
Berei di ng van 9-fenoxycarbonyl -10-carboxyethylacri di ni umbromi de
Een mengsel van fenyl-9-acridinecarboxylaat (100 mg) en t-butyl- 3-joodpropionaat (5 g) wordt onder roeren verwarmd op 130°C gedurende 16 uur. De resulterende oplossing wordt uitgegoten in benzeen (25 ml) 20 en het gevormde neerslag afgefiltreerd. Een gedeelte van dit neerslag (10 mg) wordt geroerd in een mengsel van 33¾ waterstofbromide in azijnzuur (1 ml) en verwarmd op 50°C gedurende twee uur. Het reactiemengsel wordt uitgegoten in water en het gevormde neerslag (ca. 6 mg) geïsoleerd.
25 Voorbeeld X
Chemiluminescentie van 9-fenoxycarbonyl-10-carboxymethylacridiniumbro-mide (acridinium-ester A)
Er wordt een voorraadoplossing gemaakt van 0,1 milligram acridi-niumester A in 1 ml methanol. Deze voorraadoplossing wordt verder ver-30 dund in 0,001 normaal zoutzuur. De chemiluminescentie die optreedt wanneer deze verdunde oplossingen worden behandeld met basisch waterstofperoxide (dit reagens wordt vers bereid door 100 microliter 5 normaal natronloog en 20 microliter waterstofperoxide te verdunnen met 20 milliliter water) wordt gemeten in een LUMAC Biocounter 2010. Er wordt een 35 dosisrespons-curve verkregen zoals aangegeven in de figuur.
87030 75

Claims (10)

1. Acridiniumverbinding die geschikt is als chemiluminescentie-merkstof, met het kenmerk, dat de verbinding voldoet aan formule 1, 5 waarin A een tweewaardige organische rest is, X een groep is die met waterstofperoxide samen met C-9 van het acridine in een dioxetaan kan worden omgezet, Y een tegenion is, en Z een functionele groep is, 10 en waarvan de benzeenringen een of meer substituenten kunnen dragen.
2. Acridiniumverbinding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat A een eventueel door een of meer heteroatomen en/of carbonyl groepen onderbroken tweewaardige kool waterstofrest is.
3. Acridiniumverbinding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat 15. een alkyleengroep met 1-4 kool stofatomen is.
4. Acridiniumvebrinding volgens een der conclusies 1-3, met het kenmerk, dat X een alkoxycarbonylgroep of aryloxycarbonylgroep is.
5. Acridiniumverbinding volgens een der conclusies 1-4, met het kenmerk, dat Z een carboxyl groep of een van een carboxyl groep afgeleide 20 reactieve groep is.
6. Toepassing van een verbinding volgens een der conclusies 1-5 voor immuunbepalingen door middel van chemiluminescentie.
7. Toepassing van een verbinding volgens een der conclusies 1-5 voor immuunbepalingen door middel van chemiluminescentie en energie- 25 overdracht.
8. Koppelingsprodukt van een verbinding volgens een der conclusies 1-5 met een bij immuunreacties betrokken stof.
9. Toepassing van een koppelingsprodukt volgens conclusie 8 voor bepalingen door middel van chemiluminescentie. 30
10. Toepassing van een koppelingsprodukt volgens conclusie 8, voor bepalingen door middel van chemiluminescentie- en energieoverdracht. ++++++++++ 87Ö3075
NL8703075A 1987-12-18 1987-12-18 Acridiniumverbindingen als chemiluminescentie-merkstof. NL8703075A (nl)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL8703075A NL8703075A (nl) 1987-12-18 1987-12-18 Acridiniumverbindingen als chemiluminescentie-merkstof.
ES88202802T ES2056907T3 (es) 1987-12-18 1988-12-07 Compuestos de acridinio que pueden utilizarse como marcadores quimioluminogenos.
EP88202802A EP0324202B1 (en) 1987-12-18 1988-12-07 Acridinium compounds as chemiluminogenic label
DE3851216T DE3851216T2 (de) 1987-12-18 1988-12-07 Akridinium-Verbindungen als chemilumineszierende Bezeichnungen.
AT88202802T ATE110366T1 (de) 1987-12-18 1988-12-07 Akridinium-verbindungen als chemilumineszierende bezeichnungen.
CA000586045A CA1334418C (en) 1987-12-18 1988-12-15 Acridinium compounds as chemiluminogenic label
JP63318327A JPH0819106B2 (ja) 1987-12-18 1988-12-16 化学ルミノゲン標識としてのアクリジニウム化合物
US07/719,656 US5521103A (en) 1987-12-18 1991-06-24 Acridinium compounds as chemiluminogenic label
US08/478,125 US6018047A (en) 1987-12-18 1995-06-07 Acridinium compounds as chemiluminogenic label

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL8703075A NL8703075A (nl) 1987-12-18 1987-12-18 Acridiniumverbindingen als chemiluminescentie-merkstof.
NL8703075 1987-12-18

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NL8703075A true NL8703075A (nl) 1989-07-17

Family

ID=19851117

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NL8703075A NL8703075A (nl) 1987-12-18 1987-12-18 Acridiniumverbindingen als chemiluminescentie-merkstof.

Country Status (8)

Country Link
US (2) US5521103A (nl)
EP (1) EP0324202B1 (nl)
JP (1) JPH0819106B2 (nl)
AT (1) ATE110366T1 (nl)
CA (1) CA1334418C (nl)
DE (1) DE3851216T2 (nl)
ES (1) ES2056907T3 (nl)
NL (1) NL8703075A (nl)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5110932A (en) * 1986-10-06 1992-05-05 Ciba Corning Diagnostics Corp. Polysubstituted aryl acridinium esters
DE3750503T2 (de) * 1986-10-22 1995-02-09 Abbott Lab Chemilumineszierende Acridinium- und Phenantridiniumsalze.
US5284952A (en) * 1987-12-31 1994-02-08 London Diagnostics, Inc. Sulfonyl substituted chemiluminescent labels and their conjugates, and assays therefrom
NZ227506A (en) † 1987-12-31 1992-06-25 London Diagnostics Inc Specific binding assays using chemiluminescent compounds
US5338847A (en) * 1987-12-31 1994-08-16 London Diagnostics, Inc. Hydrolytically stable chemiluminescent labels and their conjugates, and assays therefrom by adduct formation
US5321136A (en) * 1987-12-31 1994-06-14 London Diagnostics, Inc. Peri substituted fused ring chemiluminescent labels and their conjugates, and assays therefrom
US5227489A (en) * 1988-08-01 1993-07-13 Ciba Corning Diagnostics Corp. Stable hydrophilic acridinium esters suitable for liposome encapsulation
US5241070A (en) * 1988-09-26 1993-08-31 Ciba Corning Diagnostics Corp. Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium esters and uses thereof
US5663074A (en) * 1988-09-26 1997-09-02 Chiron Diagnostics Corporation Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium ester conjugates and syntheses thereof
US5340716A (en) * 1991-06-20 1994-08-23 Snytex (U.S.A.) Inc. Assay method utilizing photoactivated chemiluminescent label
EP0651752A1 (en) * 1992-07-20 1995-05-10 Behringwerke Ag Novel chemiluminescent compounds and methods of use
US6002000A (en) * 1992-07-20 1999-12-14 Dade Behring Marburg Gmbh Chemiluminescent compounds and methods of use
WO1994003812A1 (en) * 1992-07-31 1994-02-17 Syntex (U.S.A.) Inc. Photoactivatable chemiluminescent matrices
JP3584379B2 (ja) * 1993-02-04 2004-11-04 持田製薬株式会社 アクリジニウム化合物およびアクリジニウム化合物複合体
US5593845A (en) * 1993-05-17 1997-01-14 Lumigen, Inc. Aryl N-alkylacridancarboxylate derivatives useful for chemiluminescent detection
US5731148A (en) * 1995-06-07 1998-03-24 Gen-Probe Incorporated Adduct protection assay
EP0761652A1 (en) * 1995-08-01 1997-03-12 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Acridinium compound having a plurality of luminescent groups and binding groups, and conjugate thereof
US5800999A (en) * 1996-12-16 1998-09-01 Tropix, Inc. Dioxetane-precursor-labeled probes and detection assays employing the same
US6165800A (en) * 1997-05-30 2000-12-26 Bayer Corporation Chemiluminescent energy transfer conjugates and their uses as labels in binding assays
US6017769A (en) * 1998-06-17 2000-01-25 Lumigen, Inc. Non-enzymatic methods of generating chemiluminescence from acridan alkenes
US6355803B1 (en) 1998-08-11 2002-03-12 Bayer Corporation Near infrared chemiluminescent acridinium compounds and uses thereof
US6673560B1 (en) 1998-11-25 2004-01-06 Bayer Corporation Measurement of hydride using chemiluminescent acridinium compounds and applications thereof
KR100399370B1 (ko) * 2000-12-22 2003-09-26 김병효 아크리디늄 화합물 및 이를 이용한 화학발광 조성물
US7101683B2 (en) 2001-06-26 2006-09-05 Abbott Laboratories Methods for the simultaneous detection of HCV antigens and HCV antibodies
US6723851B2 (en) 2001-10-31 2004-04-20 Quest Diagnostics Investment Incorporated Chemiluminescent compounds and use thereof
US7319041B2 (en) * 2002-09-27 2008-01-15 Siemens Medical Solutions Diagnostic Applications of acridinium compounds and derivatives in homogeneous assays
US7309615B2 (en) * 2002-09-27 2007-12-18 Siemens Medical Solutions Diagnostic High quantum yield acridinium compounds and their uses in improving assay sensitivity
JP2006526137A (ja) * 2003-05-28 2006-11-16 ジーイー・ヘルスケア・ユーケイ・リミテッド 内部標準の存在下で色素を標識することによる閉じた膜構造上の細胞表面タンパク質の示差分析
GB0320236D0 (en) * 2003-08-29 2003-10-01 Molecular Light Tech Res Ltd Chemiluminescent compounds
US7682839B2 (en) * 2005-03-14 2010-03-23 Lumigen, Inc. Methods using novel chemiluminescent labels
US20060205094A1 (en) * 2005-03-14 2006-09-14 Lumigen, Inc. Methods using novel chemiluminescent labels
US20070151234A1 (en) * 2005-12-30 2007-07-05 Lampkin Charles B Iii Electricity produced by sustained air pressure
US20210040556A1 (en) * 2019-08-07 2021-02-11 Bgi Shenzhen Co., Ltd. Acridinium ester-containing compounds and methods of using the same for chemiluminescence-based one-color sequencing

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2645594A (en) * 1948-10-19 1953-07-14 Abbott Lab Antiseptic acridane compounds
NL6515469A (nl) * 1965-01-22 1966-07-25
US3431264A (en) * 1965-11-05 1969-03-04 American Cyanamid Co 9-cyanoacridans and process for their production
US3615416A (en) * 1969-06-05 1971-10-26 Eastman Kodak Co 9 10-substituted acridines as sensitizers in electrophotographic systems
GB1461877A (en) * 1974-02-12 1977-01-19 Wellcome Found Assay method utilizing chemiluminescence
DE3279029D1 (en) * 1981-12-11 1988-10-20 Welsh Nat School Med Luminescent labelling materials and procedures
EP0103469B1 (en) * 1982-09-10 1989-02-08 The Welsh National School of Medicine Immunological procedure for quantifying substances
JP2509574B2 (ja) * 1985-08-15 1996-06-19 アモコ・コーポレーション 標識付けした核酸
JPS6261969A (ja) * 1985-09-06 1987-03-18 アモコ・コーポレーション アクリジニウムエステルの合成法
US4745181A (en) * 1986-10-06 1988-05-17 Ciba Corning Diagnostics Corp. Polysubstituted aryl acridinium esters
DE3750503T2 (de) * 1986-10-22 1995-02-09 Abbott Lab Chemilumineszierende Acridinium- und Phenantridiniumsalze.

Also Published As

Publication number Publication date
US6018047A (en) 2000-01-25
EP0324202A1 (en) 1989-07-19
US5521103A (en) 1996-05-28
DE3851216T2 (de) 1995-02-16
ATE110366T1 (de) 1994-09-15
DE3851216D1 (de) 1994-09-29
JPH0819106B2 (ja) 1996-02-28
JPH01199949A (ja) 1989-08-11
ES2056907T3 (es) 1994-10-16
EP0324202B1 (en) 1994-08-24
CA1334418C (en) 1995-02-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NL8703075A (nl) Acridiniumverbindingen als chemiluminescentie-merkstof.
JP3117459B2 (ja) 螢光化合物からの発光信号増幅方法
US4946958A (en) Chemiluminescent acridinium labelling compounds
EP0068875B1 (en) Fluorescent chelates and labeled specific binding reagents prepared therefrom
EP0478626B1 (en) Detecting or quantifying multiple analytes using labelling techniques
CA1258424A (en) Phenanthridinium ester as a labelling compound in luminometric immunoassay
US5438139A (en) Acridinium compounds and conjugates thereof
US7053249B2 (en) Metal chelates and methods of using them for time-resolved fluorescence
US20110082279A1 (en) Chemiluminescent Compounds
US6087502A (en) Acridinium compound having a plurality of luminescent groups and binding groups, and conjugate thereof
EP0511366A1 (en) Chemiluminescent compounds
US11578040B2 (en) [5]Helicene derivatives as molecular reporters for diagnostic applications and methods of synthesis therefor
JP2012020958A (ja) 化合物および標識抗体
EP0179868A1 (en) Chemiluminescent labeled organic reagents and their use in analysis of organic compounds
US6994980B2 (en) Chemiluminescent compounds and use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
A1B A search report has been drawn up
BV The patent application has lapsed