NL8200217A - Bicyclische verbindingen, werkwijzen ter bereiding ervan, alsmede farmaceutische preparaten, die deze bicyclische verbindingen bevatten. - Google Patents

Description

’* * 1 1 / N.0. 30.756 / %

Bicyclische verbindingen, werkwijzen ter bereiding ervan, alsmede ^ farmaceutische preparaten, die deze bicyclische verbindingen bevat- ten.

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op bicyclische verbindingen met de algemene formule 1, waarin een van de substi-1 2 tüenten R en R waterstof en de andere waterstof of een al of niet gesubstitueerde alkylgroep met 1 tot k koolstofatomen en X een al 5 of niet gesubstitueerde alkanoyloxygroep met 1 tot 3 koolstofatomen, een al of niet gesubstitueerde cycloalkylthiogroep met 3 tot 7 koolstofatomen, alkenylthiogroep met 2 tot 6 koolstofatomen of heterocyclische thiogroep of een gesubstitueerde alkylthiogroep met 1 tot k koolstofatomen of fenylthiogroep voorstellen, de ge-10 makkelijk hydrolyseerbare esters ervan, farmaceutisch verenigbare zouten ervan alsmede hydraten van deze verbindingen.

De uitvinding heeft voorts betrekking op werkwijzen ter bereiding van de hiervoor gedefinieerde verbindingen, farmaceutische preparaten op basis van deze verbindingen en de bereiding ervan, 15 alsmede de toepassing van deze verbindingen als geneesmiddel, in het bijzonder voor de behandeling en profylaxe van infectieziekten.

Alkylresten met 1 tot ^ koolstofatomen kunnen recht of vertakt zijn. Gesubstitueerde alkylresten met 1 tot koolstofatomen kunnen de volgende substituenten bevatten: fluor, chloor, broom; 20 een -S(0) -R· rest met n = 0, 1, 2 en 2' = alkyl met 1 tot 3 kool-n stofatomen; een -CO-R* rest met R' = hydroxy, alkoxy met 1 tot 3 koolstofatomen, alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen, amino, alkyl-amino met 1 tot 3 koolstofatomen of dialkylamino met 1 tot 3 koolstofatomen per alkylrest; een aminorest -NR‘RH, waarbij R' en RM 25 waterstof of alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen voorstellen of een OR’ rest met R' = waterstof, methyl, SO^ÏÏ, ΟΗ^ΟΟΟΕ" (R" = alkyl met 1 tot koolstofatomen).

1 2

Voorbeelden van substituenten R /R zijn: methyl, ethyl, isopropyl, 3-chloorpropyl, mesylmethyl, 2-(methoxycarbonyl)-ethyl, 30 hydroxymethyl, 1-hydroxyethyl, 1-hydroxypropyl, 1-hydroxy-1-methyl-ethyl, 3-fflethoxypropyl, 1-sulfoxyethyl, 1-hydroxy-2,2,2-trifluor-ethyl, 1-(pivaloyloxy-methoxy)-ethyl, 1-aminoethyl.

Als substituenten in de rest X komen de volgende in aanmerking: 35 Alkanoyloxygroepen met 1 tot 3 koolstofatomen kunnen met 8200217 ί ϊ 2 ν / / hydroxy, alkoxy met 1 tot 3 koolstofatomen, fenyl of alkylthio met 1 tot 3 koolstofatomen gesubstitueerd zijn*

Gesubstitueerde alkylthioresten met 1 tot if koolstofatomen kunnen een of meer substituenten R bevatten, waarbij H het volgen-3 de kan voorstellen:

Fenyl, dat op zijn beurt gesubstitueerd kan zijn met een of meer fluor-, chloor- of broomatomen, alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen, alkylthio met 1 tot k koolstofatomen, alkanoyl met 1 tot 3 koolstofatomen, carboxyl of alkoxycarbonyl met 1 tot 3 koolstof- 10 atomen: of met een groep -(CH ) -NRR' of -(CEL) MCR=NR’ of 1 2 n 2 n -(CH.) -N=CR-N(R‘),, waarbij n 0, 1, 2 of 3 kan zijn en R en R' 2 n 2 waterstof of alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen zijn* fluor, broom; een oxime- of oximeetherrest =N-0R' (R* = H of alkyl met 1 tot 15 3 koolstofatomen) in de syn- of anti-vorm; een uit 3 tot 7 atomen bestaande monocyclische, verzadigde, onverzadigde of aromatische heterocyclische rest met 1 tot if hetero-atomen (N, 0, S; die gesubstitueerd kan zijn met een of meer fluor-, chloor- of broomatomen, alkylgroepen met 1 tot 3 koolstofatomen, 20 alkylthiogroepen met 1 tot if koolstofatomen, alkanoylgroepen met 1 tot 3 koolstofatomen, carboxylgroepen of alkoxycarbonylgroepen met 1 tot 3 koolstofatomen; of een groep -(’CH,) -NRR' of

w XX

-(CH,) -NH-CR=NR' of -(CH,) -N=CR-N(R») , waarbij n = 0, 1, 2 of 3 2 n 2 n 2 kan zijn en R en R' H of alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen zijn, 25 alsmede met oxogroepen); een cycloalkylrest met 3 tot 6 koolstofatomen; een -S(0) -R’ rest (met n = 1 of 2 en R* alkyl met 1 tot 3 n koolstofatomen); een -C0R' rest [met Rf = alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen, 30 fenyl, fenoxy, benzyloxy, cycloalkyl met 3 tot 6 koolstofatomen of een uit 3 tot 7 atomen bestaande heterocyclische ring met 1 tot if heteroatomen (N, 0, S), die op de hiervoor vermelde wijze gesubstitueerd kan zijn.

Gesubstitueerde fenylthioresten kunnen gesubstitueerd zijn met 35 een of meer fluor-, chloor- of broomatomen, een van de groepen -(CH,) -NRR’, -(CH,) -NR-CR'=NRM en -(CH,) -N=CR-NR1Rn (met n = 2 n 2 n 2 n 0, 1, 2, 3 en H, R' en RH H of alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen, alkanoyl met 1 tot 3 koolstofatomen) of ook met alkylgroepen met 1 tot 3 koolstofatomen, alkanoylaminogroepen met 1 tot 3 koolstof-ifO atomen, hydroxylgroepen, alkoxygroepen met 1 tot if koolstofatomen 8200217 3 ' * κ of acyloxygroepen.

Cycloalkylthioresten met 3 tot 7 koolstofatomen kunnen gesubstitueerd zijn met een van de groepen -(CH^^-NRR', -(0Η2)η-ΝΒ-0Ε,=ΝΗΗ en -(CHj -N=CR-NR*R“ (met n = 0, 1, 2, 3 en R, R' en R" H of al-5 kylgroepen met 1 tot 3 koolstofatomen» alkanoylgroepen met 1 tot 3 koolstofatomen) of met oxogroepen, hydroxylgroepen» alkylgroepen met 1 tot b koolstofatomen, alkoxygroepen met 1 tot 4 koolstof atomen, carboxylgroepen of alkoxycarbonylgroepen of met acylresten van een alifatisch of aromatisch carbonzuur met 1 tot 7 koolstofatomen.

10 Alkenylthioresten met 2 tot 6 koolstofatomen kunnen een of twee dubbele bindingen bevatten en gesubstitueerd zijn met een van de groepen “(CJH^-NRR», -(CH^-NR-CR^NR" en -(CH2VN=GE"NR,3R" (met n = 0, 1, 2, 3 en R, R' en B" ïï of alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen, alkanoyl met 1 tot 3 koolstofatomen) of ook met alkyl 13 met 1 tot 3 koolstofatomen, fenyl, een uit 3 tot 7 atomen bestaande verzadigde, onverzadigde of aromatische heterocyclische ring met 1 tot b heteroatomen (N, 0, S); cyaan, carboxy, alkoxycarbonyl met 1 tot 4 koolstofatomen, aminocarbonyl of acylamino.

Heterocyclische thioresten zijn bij voorkeur 4 tot 7 atomen 20 bevattend en monocyclisch en kunnen verzadigd, onverzadigd of aromatisch zijn. Bij voorkeur bevatten zij 1 tot b heteroatomen (N, 0, S). Zij kunnen enkelvoudig of meervoudig gesubstitueerd zijn met fluor, chloor of broom, 'een oxo- of iminogroep of een alkylgroep met 1 tot 5 koolstofatomen, alkylthiogroep met 1 tot 3 25 koolstofatomen, hydroxylgroep, cyaangroep, N-oxidogroep, trifluor-methylgroep, alkoxygroep met 1 tot 4 koolstofatomen, alkanoyloxy-groep met 1 tot b koolstofatomen, fenoxygroep, alkanoylgroep met 1 tot b koolstofatomen, fenoxycarbonylgroep, pivaloyloxymethoxy-carbonylgroep, carbaraoylgroep, alkylcarbamoylgroep met 1 tot 3 30 koolstofatomen in de alkylgroep of dialkylcarbamoylgroep met 1 tot 3 koolstofatomen in de alkylgroep of met -(CH^^-NNR*, -(CHJ -NR-GR'=NR" of -(CH.) -N=CR-NR,RM met n = 0, 1, 2, 3 en R, 2 n 2 n R' ea R" = H, alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen, alkanoyl met 1 tot 3 koolstofatomen: of met -(CH_) COR' met n = 0, 1, 2 of 3 en B' = 2 zx 35 hydroxy, alkoxy met 1 tot 3 koolstofatomen, amino of waarin m = 2, 3 of 4; of ook met -(CH_) OH met n = 0, 1, 2 of 3· C *1

Voorbeelden van resten X zijn: 2-(acetylamino)-vinylthio, (1-methyl-1H-tetrazool-5-yl)-thio, (1,4,5,6-tetrahydro-4-methyl- 5,6-dioxo-as-triazin-3-yl)-thio, (2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl-bO 5-oxo-as-triazin-3-yl)-thio, (1-ethyl-1,2-dihydro-2-oxo-4-pyrimidi- 8200217

t I

b /' / nyl)-thio»(5-methyl-1»3»il--thiadiazool-2--yl)-thiotacetoxy.

Als gemakkelijk hydrolyseerbare esters van de verbindingen met formule 1 dienen zodanige esters te worden verstaan» die in het bijzonder onder fysiologische omstandigheden gesplitst worden.

5 Voorbeelden van dergelijke esters zijn de alkanoyloxyalkylesters met een klein aantal koolstofatomen in de alkylgroep, bijvoorbeeld de acetoxyraethyl-, pivaloyloxymethyl-, 1-acetoxyethyl- en 1-pivaloyl-oxyethylester; de alkoxycarbonyloxyalkylesters met een klein aantal koolstofatomen in de alkylgroepen, bijvoorbeeld de methoxycarbonyl-10 oxymethyl-, 1-ethoxycarbonyloxyethyl- en 1-isopropoxycarbonyloxy-ethylesterj de lactonylesters, bijvoorbeeld de ftalidyl- en thio-ftalidylester; de alkoxymethylesters met een klein aantal koolstofatomen in de alkylgroep, bijvoorbeeld de methoxymethylester en de alkanoylamidomethylesters met een klein aantal koolstofatomen in de 15 alkylgroep, bijvoorbeeld de aceetamidomethylester; de benzyl- en cyaanmethylester, alsmede de (2-oxo-1,3-<3ioxool-V-yl)-methylester.

Voorbeelden van zouten van de verbindingen met formule 1 zijn alkalimetaalzouten, zoals het natrium- en kaliumzout; het ammonium-zout; aardalkalimetaalzouten, zoals het calciumzout; zouten met 20 organische basen» zoals zouten met aminen, bijvoorbeeld zouten met N-ethylpiperidine, procaxne of N,N*-dibenzylethyleendiamine, alsmede zouten met aminozuren, zoals bijvoorbeeld zouten met arginine of lysine. De zouten kunnen mono-, di- of trizouten zijn. De zoutvorming kan behalve aan de carboxylgroep op de 2-plaats ook plaats 25 hebben aan een voor zoutvorming geschikte groep van een substituent.

De verbindingen met de formule 1 kunnen voorts additiezouten vormen met organische of anorganische zuren. Voorbeelden van dergelijke zouten zijn waterstofhalogeniden, bijvoorbeeld waterstof-chloride, waterstofbromide, waterstofjodide, alsmede andere zouten 30 van anorganische zuren, bijvoorbeeld sulfaten, nitraten, fosfaten en dergelijke, alkyl- en monoarylsulfonaten, zoals ethaansulfona-ten, tolueensulfonaten, benzeensulfonaten en dergelijke en zouten met andere organische zuren zoals acetaten, tartraten, maleaten, citraten, benzoaten, salicylaten, ascorbaten en dergelijke.

35 De verbindingen met de formule 1 (met inbegrip van de zouten en esters) kunnen tenslotte gehydrateerd zijn. De hydratering kan tijdens het bereidingsproces plaats hebben of geleidelijk als gevolg van hygroscopische eigenschappen van een eerst watervrij pro-dukt optreden.

ifO De verbindingen volgens de uitvinding kunnen bereid worden, 8200217 5 / * 12

doordat men een verbinding met de formule 2, waarin R , R en X

zoals in conclusie 1 gedefinieerd zijn, R"' een gemakkelijk splits- bare rest en R\ E"7 en E alkyl met 1 tot 6 koolstof at omen» fenyl of p-methoxyfenyl voorstellen, doet ringsluiten, eventueel in een 5 substituent aanwezige beschermende groepen afsplitst en desgewenst de verkregen ester omestert^eventueel door afsplitsing van de rest 3 B in de vrije zuren resp· de zouten ervan omzet en eventueel een verkregen produkt in een hydraat omzet.

De ringsluiting van een verbinding 2 kan op een op zichzelf 10 bekende wijze, bij voorkeur in een inert organisch oplosmiddel, bijvoorbeeld ethylacetaat, benzeen, tolueen, xyleen, dioxan, bij temperaturen tussen ongeveer 50°C en 150°G, worden uitgevoerd.

3

Door afsplitsing van de rest R uit de estergroep op een op zichzelf bekende wijze worden de overeenkomstige vrije zuren resp. 15 de zouten ervan met formule 1 verkregen. Onder een gemakkelijk af- 3 , splitsbare rest B^ dienen groepen te worden verstaan, die een estersplitsing onder voorzichtige omstandigheden, in het bijzonder door reductie (bijvoorbeeld hydrogenolyse) of door hydrolyse (bijvoorbeeld enzymatisch) mogelijk maken. Voorbeelden van geschikte 20 groepen R^ zijn benzyl (waarbij de fenylring met halogeen, nitro, alkoxy of acyloxy gesubstitueerd kan zijn), bij voorkeur o- en p-nitrobenzyl of p-methoxybenzyl, benzhydryl, 2,2,2-trichloorethyl, 2-broomethyl, 2-joodethyl, 2-trimethylsilylethyl, acetonyl of allyl. Als resten R^ komen ook resten van onder fysiologische om-25 standigheden splitsbare esters in aanmerking, zoals deze als gemakkelijk hydrolyseerbare esters reeds hiervoor vermeld werden.

De omzetting van vrije zuren met de formule 1 of de zouten ervan in gemakkelijk hydrolyseerbare esters kan op een op zichzelf bekende wijze worden uitgevoerd, bijvoorbeeld door omzetting met 30 een reactief veresteringsreagens, zoals bijvoorbeeld een verbinding X-CH^-O-CO-R of een verbinding met formule 19 of 20, waarin X broom, jood of een andere splitsbare groep, E een rechte of vertakte alkylrest met 1 tot k koolstofatomen en R' waterstof of een gebruikelijke substituent kunnen zijn.

35 Een omestering heeft doelmatig plaats via het vrije zuur.

Natuurlijk kan ook door middel van algemeen bekende reacties een substituent van een verbinding 1 in het kader van de aangegeven definities gemodificeerd worden.

De verbindingen met formule 1 worden in het algemeen niet als k0 vrije zuren geïsoleerd, maar tijdens het bereidings- en zuiverings- 8200217 j 1 6 / proces direkt als zouten ervan resp* de hydraten van deze zouten verkregen. Daarbij kan zoutvorming ook aan een eventueel aanwezige» voor de zoutvorming geschikte substituent, bijvoorbeeld een hydroxyl- of aminogroep plaats hebben. Het is voorts mogelijk, dat 5 een basische groep in een substituent, bijvoorbeeld een araino- of een amidinogroep van een inwendig zout met een zure groep, bijvoorbeeld de carboxylgroep op de 2-plaats, vormt. Ben omzouting kan volgens op zichzelf bekende technieken bij temperaturen van bij voorkeur 0 tot 25°C in een oplosmiddel zoals water, ethanol, 10 methanol, aceton, ethylacetaat of mengsels daarvan plaats hebben, waarbij de produkten door kristallisatie of chromatografie gezuiverd kunnen worden.

Hydraten worden meestal automatisch tijdens het bereidings-proces of als gevolg van hygroscopische eigenschappen van een 15 eerst watervrij produkt verkregen. Voor een gerichte bereiding van een hydraat kan een geheel of ten dele watervrij produkt aan een vochtige atmosfeer, bijvoorbeeld bij ongeveer +10°C tot +ifO°C, worden blootgesteld.

De verbindingen volgens de uitvinding worden in het algemeen 20 gemengd met hun optische antipoden, dat wil zeggen als 52/5S-meng-sels verkregen. Gaat het daarbij om een 1:1 mengsel, dan wordt de stereochemie van de produkten door de aanduiding rac-(5KS, enz.) aangegeven, bijvoorbeeld pivaloyloxymethyl-rac-(5fiS,éRS)-6-[(BS)-1-hydroxye thy1]-3-[[(1-me thy1-1H-1e trazool-5-y1)-thio]-25 methyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3.2.0]hept-2-een-2-carboxylaat. Worden daarentegen niet exacte 1:1 mengsels verkregen, zoals dat bij produkten uit enantioselectieve reacties, bijvoorbeeld uit enzymatische reacties het geval kan zijn, dan wordt hun stereochemie door de aanduiding (5B, enz. en 5S, enz.) gekenmerkt, bijvoorbeeld 30 natrium-(5H,6S en 5$,6R)-6-hydroxymethyl-3-[[ (1-methyl-1H-tetra-zool-5-yl)-thio]-methyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3.2.0]hept-2-een-2-carboxylaat«

De onderhavige uitvinding omvat evenwel niet alleen deze mengsels, maar in het bijzonder ook de zuivere 5S-vormen. Splitsing van 35 de 5R/5-S-mengsels in de zuivere 52- resp. 5S-vormen kan volgens een van de gebruikelijke methoden plaats hebben, doelmatig bij een voortrap. Zo kunnen bijvoorbeeld een diastereomeer zoutpaar van een racemische verbinding 11 of een paar diastereomere derivaten van een verbinding 8-1 gescheiden worden. De racemaatsplitsing kan ook ifO bij de trappen van de verbindingen 11, 10, 8 of 7 worden uitge- 8200217 t * 7 ' voerd.

Een speciale ondergroep van de verbindingen volgens de uitvinding zijn verbindingen met de formule 1a, waarin X hetzelfde betekent zoals hiervoor» alsmede de gemakkelijk hydrolyseerbare esters 5 ervan, farmaceutisch verenigbare zouten ervan alsmede hydraten van deze verbindingen. Zeer in het bijzonder de voorkeur verdienen verbindingen, waarbij de configuratie aan de centra 5» 6 en in de substituenten van de 6-plaats met die van het natuurlijke thienamy-cine overeenkomt, bijvoorbeeld natrium-(5R»6S)-6-[(R)-1-hydroxy-10 ethylJ-3-[[(1-methyl-lH-tetrazool-5-yl)-thio]-méthyl]-7“Oxo-1-aza-bicyclo[3 · 2·0]hept-2-een-2-carboxylaat.

De uitgangsverbindingen met formule 2 kunnen volgens het reactiescheraa volgens fig. 1 verkregen worden.

Reductie van de 3»3-ethyleendioxyboterzuur-ethylester (1½) met 15 diisobutylaluminiumhydride in hexaan/tetrahydrofuran bij -80°C tot -60°C geeft 3,3-ethyleendioxybutyraldehyd (13)» dat door omzetting met bijvoorbeeld fosfonazijnzuur-triethylester in een mengsel van dichloormethaan en 28-procents natriumhydroxide bij aanwezigheid van benzyltriethylammoniumchloride in een E/Z-mengsel van de 5 »5-20 ethyleendioxy-2-hexeenzuur-ethylester (12) kan worden omgezet. De 3-amino-5,5-ethyleendioxy-capronzuur-ethylester (11) kan door additie van ammoniak onder normale druk of verhoogde druk (autoclaaf) aan de onverzadigde ester 12 verkregen worden, waarbij het E- alsmede het Z-isomeer op dezelfde wijze geschikt zijn. De reactie 25 wordt bij voorkeur in met ammoniak verzadigde alcohol bij een temperatuur tussen 20°C en 100°C uitgevoerd. Ringsluiting van 11 tot i|--(2,2-ethyleendioxypropyl)-2-azetidinon (10) kan op een op zichzelf bekende wijze, bijvoorbeeld door omzetting met trimethyl-chloorsilaan bij aanwezigheid van triethylamine en daaropvolgende 30 behandeling met 1 equivalent ethylmagnesiumbromide plaats hebben.

1 2

De invoering van een substituent R of R op de 3-plaats van het azetidinon X onder vorming van een verbinding 8 kan op een op zichzelf bekende wijze door omzetting van het tussentijds verkregen dilithiumzout 9 (uit 10 met 2 equivalenten van een alkyllithium-35 verbinding, bijvoorbeeld butyllithium, in tetrahydrofuran bij -20°C tot +20°C) met een overeenkomstig elektrofiel reagens, doelmatig onder een beschermend gas, bij een temperatuur tussen -100°C en +50°C plaats hebben. Een andere werkwijze voor de invoering van de 1 2 substituenten R en R op de 3-plaats van de azetidinonring van een kO verbinding 10 bestaat daarin, het β-lactam-waterstof eerst door een 8200217 δ φ' ' trialkylsilylgroep, bijvoorbeeld tert.bu;tyldimethylsilylgroep, te vervangen (door omzetting van een verbinding 10 met tert.butyldi-methylchloorsilaan in dime thy Iformamide bij aanwezigheid van tri-ethylamine) en het door omzetting van de silylverbinding 10-1 met 5 1 equivalent van een sterke base, bijvoorbeeld met lithiumdiiso- propylamide in tetrahydrofuran bij lage temperatuur (-7δ°0), tussentijds gevormde lithiumzout 9-1 met een elektrofiel reagens op een voor de reactie 9 —δ analoge wijze om te zetten. De verkregen verbinding 8-1 kan dan hetzij direkt tot een verbinding 7 gebro-10 meerd worden hetzij eerst door afsplitsing van de silylgroep (bijvoorbeeld door middel van tetrabutylammoniumfluoride in tetrahydrofuran) in het 4-(2,2-ethyleendioxypropyl)-2-azetidinon (8) worden omgezet. Tijdens de beschreven invoering van een substituent R of 2 R worden gewoonlijk cis/trans-mengsels (met betrekking tot de 15 4-ethyleendioxypropylrest) verkregen, die eventueel met gebruikelijke scheidingsmethoden, bijvoorbeeld chromatografie aan kiezel-gel, gefractioneerde kristallisatie of destillatie, gescheiden kunnen worden.

Een andere synthese van de verbindingen 7 wordt in voorbeeld 20 XXII toegelicht: (zie fig. 2).

Het kan doelmatig zijn functionele groepen, die met de sub-1 2 stituenten R of R worden ingevoerd, gedurende de verdere synthese in beschermde vorm te houden. Dergelijke functionele groepen kunnen in het bijzonder de hydroxyl-, de amino- of de carboxylfunctie zijn.

25 Er kunnen de voor deze functies bekende beschermende groepen worden toegepast, voorzover hun verwijdering op de geschikte plaats van de synthese mogelijk is. De door beschermende groepen gemaskeerde functies kunnen reeds in het met het dilithiumzout 9 resp. de li- thiumzouten 9-1 of 17 omgezette elektrofiele reagens aanwezig zijn.

30 Anderzijds kan het doelmatig zijn, functies, die eerst bij de in- 1 2 voering van de substituenten R en R ontstaan, bijvoorbeeld een hydroxylfunctie, vervolgens te beschermen.

Door bromering van een verbinding 8 met broom in een alkanol R'OH als oplosmiddel verkrijgt men een broomketaal met de formule 7. 35 Bij deze omzetting (bij voorkeur in methanol of ethanol bij een temperatuur tussen 10°G en 60°C) vindt een omketalisering plaats: de ethyleendioxygroep wordt in een dialkoxygroep omgezet. Zoals reeds hiervoor vermeld kan bij de bromeringsreactie ook een silylverbinding met de formule 8-1 gebruikt worden, omdat onder de 40 reactieomstandigheden de silylgroep wordt afgesplitst.

82 0 0 2 1 7 ï i <* 9

De esters met de algemene formule 6 kunnen volgens algemeen bekende methoden uit de azetidinonen met de formule 7 bereid worden, bijvoorbeeld door omzetting met glyoxylesters met de algemene g formule OHC-COOR of de hemiacetalen ervan. In dit geval worden de 5 beide reactiepartners doelmatig in een inert oplosmiddel, zoals benzeen of tolueen, tot kooktemperatuur verhit en worden de gevormde laagmoleculaire reactieprodukten (water en alcohol) azeotroop uit de reactieoplossing gedestilleerd#

Het; is evenwel ook mogelijk verbindingen met de formule 7 met jO glyoxylzuur-monohydraat eerst tot een met de ester 6 overeenkomend zuur (R3 = H) om te zetten en dit vervolgens met een geschikt alkyleringsmiddel bij aanwezigheid van een base te veresteren. De omzetting met glyoxylzuurmonohydraat heeft bijvoorbeeld plaats in dimethylformamide bij kamertemperatuur bij aanwezigheid van een 15 water bindend middel, bijvoorbeeld een moleculaire zeef# Door na elkaar volgende toevoeging van een base, bijvoorbeeld kaliumcarbo-naat of triethylamine, en een alkyleringsmiddel, zoals pivaline-zuur-joodmethylester, wordt dan de carboxylaatgroep (R^ = bijvoorbeeld K of triethylammonium) in situ veresterd.

20 Door omzetting van een ester 6 met thionylchloride in een inert organisch oplosmiddel, zoals tetrahydrofuran, bij aanwezigheid van een base, bijvoorbeeld pyridine of 2,6-lutidine, bij temperaturen tussen -30°C en +20°C wordt een ester 5 verkregen, die L 5 5 met een trigesubstitueerd fosfien PR R R , het meest voordelig met 25 trifenylfosfien, op een op zichzelf bekende wijze, dat wil zeggen in een aprotisch oplosmiddel (bijvoorbeeld dioxan, tetrahydrofuran, dimethylformamide), bij een temperatuur tussen 0 en 60°C, in het 1l 5 6 R , R , R gesubstitueerde fosforan 4 omgezet wordt# Uit dit ketaal wordt het vrije keton met de formule 3 door zure hydrolyse onder de 30 gebruikelijke reactieomstandigheden, bijvoorbeeld met water bevattend zwavelzuur, fosforzuur, waterstofchloride of waterstofbromide in een organisch oplosmiddel, zoals aceton, dioxan, ethanol, verkregen. Door het aanhouden van lage temperaturen (-10°C tot 0°C) kunnen ongewenste nevenreacties, zoals de hydrolyse van het fosfo-35 ran, vermeden worden.

Het is ook mogelijk de ketaalfunctie onder watervrije omstandigheden te splitsen, doordat men bij aanwezigheid van een zure katalysator de beschermende groep op een ander keton, bijvoorbeeld aceton, overdraagt.

*1-0 Tenslotte worden de broomketonen met de formule 3 onder vorming 8200217 10 van de verbindingen 2 met de groep 10 verkregen verbindingen omgezet,. die een nucleofiel zuurstof- of zwavelatoom bevatten. De omzetting kan in een inert organisch oplosmiddel, bijvoorbeeld di-chloormethaan, ethylacetaat, dimethylformamide, dimethylsulfoxide, 5 acetonitrile of ethanol plaats hebben bij temperaturen van -8o°C tot de terugvloeitemperatuur van het reactiemengsel, bij voorkeur tussen -20°C en +40°C.'Het tijdens de reactie vrijkomende waterstof- N.

bromide wordt doelmatig door een zwakke, niet-nucleofiele organisch base, zoals een trialkylamine of amidine, of een anorganische base 10 (natrium- of kaliumcarbonaat) gebonden.

De verbindingen volgens de uitvinding zijn werkzaam tegen gram-positieve en gram-negatieve bacteriën, bijvoorbeeld tegen Staphylococcen, Streptococcen, Salmonellen en Escherichia coli en werken als β-lactamase-remmers.

15 Anti-bacteriële activiteit in vitro

In de volgende tabel zijn de minimale remmingsconcentraties (ΜΞΚ) van enkele representatieve verbindingen met formule 1 tegen een reeks pathogens raicroorganismen samengevat.

20 8200217 * 11 3 t _____MHK (uq/ml)_,

Verbinding van voorbeeld

| Organisme__III VII__IX · XIX XXIII

E. coli 1346__5 12,5 0,05 0,06 0,2 11 25922__>50__=__0,25 j 11 TEM 11__>100__0,05 0,25 0,2 i " 1527 E1__3__-__0J.__0,25 0,2 ! Klebs. pneumoniae 4181__r__0 >05__0,12 0,1

Prot. vulgaris 10281__=__z__0/1 0,12 0,4 I Prot. inirabilis 21171__-__~ _ 0/2__0,25 0,8

Prot. mirabilis 29H__- 0,4 ........1__0,8

Strept. faecalis 6__- >100__1,6__2,1 24

Strept. pyocrenes 015__0,3 -6__-__z__..

Staph, aureus 6538__1,2 -6__0,025 0,12. 0,4 "_8871__>40__i_6__0,05__0,12 0,8

Serratia marcescens 803/151_ >40 >100__<L_8__8,5 1,5

Serratia marcescens 69438__>100__1,6 17__3

Klebs. aeroqenes 1082E1 - >100__0,4 0,5 _ _6_

Enterobacter cloacae 9081 _;__— >100__1,6 17__12_

Enterobacter cloacae 130471__1100__3,2__34__3

Salmonella typh. BA__-__25__0,05__0,06 0,2

Pseudomonas aer. 1559E1__Z__25__134__124 _»_BA1__>100 25 >34 >24

Acinetobacter anitr. 51-156_____Z_Z_1.6 8,510,8_ 8200217 β-lactamase producerend organisme.

De verbinding van voorbeeld VII werd op DST-agar + ?,5 % bloed onderzocht, de overige op DST-agar (diagnostic Sensitivity Test Agar) alleen.

1 ( 12

Antibacteriële activiteit in vivo

De verbindingen van de voorbeelden VI, VII en IX werden in vivo op hun antibacteriële activiteit (ED^q) tegen systemische infecties van de muis onderzocht. De preparaten werden tweemaal 5 toegepast (1 en 3 uren na de infectie).

ED (mg/kg)

Verbinding van voorbeeld Infectie VI VII IX

Escherichia coli 13^6 δ,3 sc >25 sc 2*1 sc

Streptococcus pyogenes 10 sc 12,5 sc < 3 sc 10 β15 50 p.o. >12 p.o.

Proteus mirabilis 2117 >25 sc - 17 sc

Serratia marcescens 69^38 > 25 sc g-Dactamase-remming 15 De β-lactamase-remwerking (IC,_0; nitrocefine als substraat) van de verbinding van voorbeeld IX tegen verschillende β-lactamasen is als volgt:

Enzym I°50 ^/Ug/ml) E. coli 102½ 0,191 20 K. pneumoniae NCTC if18 0,063 P. vulgaris 1028 0,0005 E. coli BTEM 0,035

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen voor de profylaxe en therapie van infectieziekten worden toegepast. Voor volwassenen 25 komt een dagelijkse dosering van ongeveer 0,05 S tot ongeveer k g, in het bijzonder ongeveer 0,1 g tot ongeveer 2 g in aanmerking. De parenterale toediening verdient in het bijzonder de voorkeur.

De produkten volgens de uitvinding kunnen als geneesmiddel, bijvoorbeeld in de vorm van farmaceutische preparaten toepassing 30 vinden, die deze of in het bijzonder hun zouten gemengd met een voor de enterale of parenterale toediening geschikt farmaceutisch, organisch of anorganisch inert dragermateriaal, zoals bijvoorbeeld water, gelatine, arabische gom, melksuiker, zetmeel, magnesium-stearaat, talk, plantaardige oliën, vaseline, enz. bevatten. De 35 farmaceutische preparaten kunnen in vaste vorm, bijvoorbeeld als 8200217 I * 13 tabletten» dragees» suppositoria» capsules of in vloeibare vorm» bijvoorbeeld als oplossingen» suspensies of emulsies aanwezig zijn· Eventueel zijn zij gesteriliseerd en/of bevatten hulpstoffen, zoals conserveermiddelen, stabilisatoren, bevochtigings- of emulgeermid-5 delen, zouten voor de verandering van de osmotische druk, anesthetics of buffers· Zij kunnen ook nog andere therapeutisch waarde-volle stoffen bevatten· De verbindingen met de formule 1 en hun zouten resp* hydraten komen bij voorkeur voor de parenterale toediening in aanmerking en worden tot dit doel bij voorkeur als 10 lyofilisaten of droge poeders ter verdunning met gebruikelijke agentia zoals water of isotone keukenzoutoplossing, ter beschikking gesteld· De gemakkelijk hydrolyseerbare esters van de verbindingen met formule 1 en hun zouten resp· hydraten komen ook voor de enterale toediening in aanmerking.

15 De preparaten kunnen de verbindingen volgens de uitvinding in hoeveelheden van ongeveer 25 - 1000 mg, bij voorkeur 50 - 500 mg, per afzonderlijke doseringsvorra bevatten·

Voorbeeld I

Een oplossing van 585 mg pivaloyloxymethyl-rac-2-[3-[(l-20 ethyl-1,2-dihydro-2-oxo-if-pyrimidinyl)-thio]-acetonyl]-if-oxo-a-(trifenylfosforanyliden)-1-azetidineacetaat in 50 ml tolueen werd gedurende 1 uur onder een atmosfeer van argon onder terug-vloeikoeling gekookt· De doorzichtige oplossing werd afgekoeld, met weinig ethylacetaat verdund en onder verminderde druk van het 25 oplosmiddel bevrijd. Het residu werd aan kiezelgel met ethylacetaat als elueermiddel aan een chromatografische behandeling onderworpen* De fracties, die het produkt bevatten, werden geconcentreerd en de achterblijvende olie werd uit ethylacetaat/hexaan gekristalliseerd . Men verkreeg 55 mg pivaloyloxymethyl-rac-3-[[ (1-30 ethyl-1,2-dihydro-2-oxo-if-pyrimidinyl)-thio]-methyl]-7-oxo-1-aza-bicyclo[3.2.0]hept-2-een-2-carboxylaat als gele kristallen met smpt. 1VI-H3°C· IE (CHClJ: 1785, 1750, 1736, 1659» 1622, 161^ cm"1.

Het uitgangsmateriaal werd als volgt bereid: 35 (a) Aan een oplossing van 3^8,½ g 3,3-ethylideendioxy-boterzuur- ethylester in 2 liter hexaan en 0,2 liter tetrahydrofuran werd in 90 minuten bij een temperatuur van -70°C tot -o7°C 1,79 liter van een 1»12 molaire oplossing van diisobutylaluminiumhydride in hexaan toegevoegd. De doorzichtige reactieoplossing werd nog 2 uren kO bij -75°C bewaard en vervolgens werden in 2 minuten 100 ml methanol 8200217 , r 14 toegevoegd. Nu werd het koelbad verwijderd en werd in 8 minuten een oplossing van 100 ml ijsazijn in 100 ml hexaan toegevoegd. Het reactiemengsel werd nu in 10 minuten op -20°C verwarmd en daarna werden in 5 minuten 200 ml verzadigde ammoniumchlorideoplossing 5 toegevoegd. De temperatuur van de reactieoplossing liet men in 10 minuten op 0°C komen en men roerde nog 15 minuten bij 0 - 3°C· Nu werd van neerslag afgezogen en het afgezogen produkt werd met 600 ml dichloormethaan nagewassen. Het filtraat werd met 300 ml verzadigde natriumchlorideoplossing gewassen* waarbij opnieuw een 10 neerslag ontstond. Het mengsel werd nogeens afgezogen, het filtraat werd afgescheiden en de organische fase werd met een verdere hoeveelheid van 300 ml verzadigde natriumchlorideoplossing gewassen. Het afzuigresidu werd nog met in totaal 1,8 liter dichloormethaan geextraheerd en de extracten werden met de natriumchlorideoplos-15 singen gewassen. De organische fasen werden boven natriumsulf aat gedroogd,, het oplosmiddel werd bij verminderde druk verwijderd en de achterblijvende olie werd onder een verminderde druk opgewekt met de waterstraalpomp gedestilleerd. De tussen 40 en 95°C kokende fractie werd vervolgens over een Vigreux-kolom van 80 cm gefractio-20 neerd. Men verkreeg 184 g 3»3-ethyleendioxybutyraldehyd met kpt.11 70-73°C.

NMR (CDCl^) 1 J'l,43 (fi*- 3H); 2,73 (d, J=3 Hz, 2H); 4,00 (s, 4 H); 9,75 (t* j=3 Hz, 1H) dpm.

(b) Aan een op 0°C vooraf gekoeld mengsel van 300 ml 28-procents 25 water bevattend natriumhydroxide en 600 ml dichloormethaan voegde men onder krachtig roeren in 25 minuten een oplossing toe van 130,1 g 3,3-ethyleendioxybutyraldehyd, 224,2 g fosfonazijnzuur-triethylester en 7,4 g benzyltriethylammoniumchloride in 540 ml dichloormethaan, waarbij de temperatuur op 15°C steeg. Men liet in 30 10 minuten op 20°C komen en roerde nog 30 minuten bij deze tempe ratuur. Daarna werd met 400 ml dichloormethaan en 400 ml water verdund en werden de fasen in de scheitrechter gescheiden. De organische fase werd nog tweemaal met telkens 400 ml water neutraal gewassen en de waterfasen werden met 300 ml dichloormethaan geextra-35 heerd. De organische fasen werden boven natriumsulfaat gedroogd, volledig geconcentreerd en de achterblijvende olie werd over een Vigreux-kolom van 50 cm gefractioneerd. Na een voorloop verkreeg men 179 g 5,5-ethyleendioxy-2-hexeenzuur-ethylester met kpt.Q £ 70-76°C als E/Z -mengsel (verhouding ca. 6:1).

8200217 15 NMR (CDOl^): signalen van het E-isomeer: é 1,28 (t, J=7 Hz, 3H)j 1,33 (s, 3H)j 2,53 (d, J=7,5 Hz, 2H)j 3,93 (s, itH) 5 4,16 (q, j=7 Hz, 2H); 5,85 (d, J=16 Hz, 1H); 6,92 (dxt, J=16 en 7,5 Hz, 1H) dpm 3 signalen van het Z-isomeer: o.a. <ζ 3,03 (d, J=6,5 Hz, 2H); 5,83 (d, J=11,5 Hz, 1H); 6,30 (dxt, J=11,5 en 6,5 Hz, 1H) dpm.

(c) Bij een oplossing van 200,2 g 5,5-ethyleendioxy-2-hexeenzuur-ethylester (ca. 6:1 E/Z-mengsel) in 2 liter abs. ethanol werden in 10 een roerautoclaaf eerst ongeveer 250 g ammoniakgas geperst en daarna werd de druk met stikstof op 2000 kPa gebracht. Het reactiemehg-sel werd gedurende 40 uren op 70°C verwarmd. De afgekoelde reactie-oplossing werd van oplosmiddel bevrijd, 200 ml ether werden toegevoegd en er werd wederom volledig geconcentreerd. De achterblijven-15 de olie werd in 275 ml ether opgenomen en 2 uren bij 0°C bewaard. Gekristalliseerd rac-3-amino-5,5-ethyleendioxy-capronzuuramide werd door filtratie afgescheiden. Het geconcentreerde filtraat werd in 600 ml ether/hexaan (Volumeverhouding 1:2) opgenomen en de oplossing werd viermaal met 200 ral water geextraheerd. De afzonder-20 lijke extracten werden nog met tweemaal 300 ml ether/hexaan (volu-meverhouding 1:2) gewassen. De verenigde waterfasen werden met natriumchloride verzadigd en werden met in totaal 750 ml dichloor-methaan geextraheerd. Her dichloormethaanextract werd boven na-triumsulfaat gedroogd en volledig geconcentreerd. Destillatie van 25 de achterblijvende olie in een sterk verminderde druk gaf 131 g zuivere rac-3-amiuo-5,5-ethyleendioxy-capronzuur-ethylester met kookpunt^ ^ 95-100°C.

MR (CDC1 j): é‘ 1,28 Ct, J=7 Hz, 3H) 5 1,38 (s, 3H); 1,74 (breed s, 2H); 1,76 (d, J=6 Hz, 2H); 2,05-2,72 (m, AB-deel 30 van het ABX-systeem, 2H); 3,21-3,72 (m, 1H); 3,98 (s, 4H); 4,13 (q, J=7 Hz, 2H) dpm.

(d) Aan een oplossing van 108,6 g rac-3-amino-5,5-?thyleendioxy- capronzuur-ethylester in 330 ml ether voegde men druppelsgewijze onder roeren bij 0-5°C in 15 minuten 54,3 g trimethylchloorsilaan 35 en onmiddellijk daarna 50,6 g triethylamine toe, waarbij een dik neerslag ontstond. Men liet het reactiemengsel in 30 minuten onder o roeren op 15 C komen en vervolgens liet men gedurende 24 uren bij kamertemperatuur staan. Daarna werd onder uitsluiting van vocht door een filter afgezogen en reactiereservoir en afgezogen produkt 40 werden met in totaal 150 ml ether nagewassen. Aan het filtraat 8200217 16 werden onder roeren in 40 minuten bij 0 - 5°C 290 ml van een 1,92 molaire ethylmagnesiumbromide/etheroplossing toegevoegd, waarbij gasontwikkeling ontstond. Men roerde het heterogene reac-tiemengsel gedurende 16 uren bij kamertemperatuur. Daarna werd op 5 0°C gekoeld en werden bij een temperatuur van 0 - 10°C 170 ml van een half verzadigde ammoniumchlorideoplossing druppelsgewijze toegevoegd, waarbij een dik neerslag ontstond. Door toevoeging van ongeveer 180 ml 3 N zoutzuur werd de pH van het reactiemengsel tot ongeveer 7 verlaagd, waarbij het grootste deel van het neerslag 10 in oplossing ging. De waterfase werd afgescheiden en de organische fase werd met tweemaal 200 ml water geextraheerd. De waterfasen werden verenigd, bij 0°C met natriumchloride verzadigd en viermaal met telkens 500 ml dichloormethaan geextraheerd. De dichloorme-thaanextracten werden boven natriumsulfaat gedroogd en volledig ge-15 concentreerd. Voor de afscheiding van polaire bijprodukten werd de achterblijvende olie door 200 g kiezelgel gefiltreerd, waarbij met ethylacetaat geelueerd werd. Kristallisatie van het van oplosmiddel bevrijde eluaat uit ether/hexaan gaf 49,6 g zuiver rac-4-(2,2-ethyleen-dioxypropyl)-2-azetidinon met smpt. 43 - 45°C· 20 IR (CÏÏ01-): 1756 cm"1.

5 max (e) Aan een oplossing van 3,42 g rac-4-(2,2-ethyleendioxypropyl)- 2-azetidinon in 36 ml methanol werden bij kamertemperatuur 4 ml van een 1 molaire oplossing van broom in methanol toegevoegd. De reactieoplossing werd 3 minuten op 50°C verwarmd, waarbij ontkleuring 25 intrad. Nu werden in 8 minuten nogeens 16 ml van een 1 molaire oplossing van broom in methanol druppelsgewijze toegevoegd en gelijktijdig werd de reactieoplossing op 33°C gekoeld. Er werd nog 24 uren bij deze temperatuur geroerd en de lichtgele reactieoplossing werd dan op een mengsel van 30 ml verzadigde natriumcarbonaatoplos-30 sing, 10 ml 0,1 N natriumthiosulfaatoplossing en ijs gegoten. Men extraheerde met in totaal 200 ml dichloormethaan. De organische fasen werden met een natriumchlorideoplossing gewassen, boven na-triumsulfaat gedroogd en onder een verminderde druk volledig geconcentreerd. De achterblijvende olie werd aan kiezelgel met ethyl-35 acetaat/hexaan (volumeverhouding 2:1) als elueermiddel aan een chromatografische behandeling onderworpen. De produkt bevattende fracties werden geconcentreerd en het residu werd uit ethylacetaat/ hexaan gekristalliseerd. Men verkreeg 2,03 g rac-4-(3-broom-2,2-di-methoxypropyl)-2-azetidinon met smpt. 94-95°C.

40 (f) Aan een oplossing van 6,30 g rac-4-(3-broom-2,2-diraethoxy- 8200217 f' * 17 propyl)-2-azetidinon en 2,58 g glyoxylzuur-monohydraat in 17 ml dimethylformamide werden 3 S moleculaire zeef toegevoegd en er werd gedurende 5 uren onder argon bij kamertemperatuur geroerd.

Daarna voegde men 2,07 g vast kaliumcarbonaat toe en men roerde 5 nog 30 minuten. Het reactiemengsel werd op 0°C gekoeld, een oplossing van 6,8 g joodmethylpivalaat in 6 ml dimethylformamide werd toegevoegd en vervolgens werd nog 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd met 100 ml ethylacetaat en J>Q ml ether verdund en daarna driemaal met telkens 50 ml water gewassen.

10 De organische fase werd boven natriumsulfaat gedroogd', volledig geconcentreerd en de achterblijvende olie werd aan kiezelgel met ethylacetaat/hexaan (volumeverhouding 2:1) aan een chromatografi-sche behandeling onderworpen. Men verkreeg 3*3 g pivaloyloxyme-thyl-rac-2-(3-broom-2,2-dimethoxyprbpyl)-a-hydroxy-if-oxo-1-azeti-15 dineacetaat (diastereomerenmengsel) als olie.

IE (CHC1,): \? 3528, 1760 cm"1 3 1 max

Rf: 0,37/0,lf3 (dubbele vlek; SiO^, ethylacetaat/hexaan volumeverhouding 2:1).

(g) Aan een oplossing van 3,2 g pivaloyloxymethyl-rac-2-(3-broom-20 2,2-dimethoxypropyl) -a-hydroxy-if-oxo_1-azetidineacetaat in 60 ml tetrahydrofuran werden bij -23°C 1,02 g 2,6-lutidine toegevoegd.

Daarna werd in 1 minuut een oplossing van 1,0if g thionylchloride in 11 ml tetrahydrofuran druppelsgewijze toegevoegd, waarbij de temperatuur door koeling onder -20°C gehouden werd. Het reactie-25 mengsel werd 20 minuten bij -20°C en daarna 20 minuten bij kamertemperatuur geroerd. Vervolgens werd van neerslag afgezogen en werd het afgezogen produkt nog met k0 ml tolueen nagewassen. Het filtraat werd onder verminderde druk volledig geconcentreerd, het residu werd in 20 ral tolueen opgenomen en opnieuw volledig gecon-30 centreerd.

. De verkregen olie werd in 22 ml dimethylformamide opgelost, bij kamertemperatuur werd een oplossing van 2tkk g trifenylfosfien in 7 ml dimethylformamide toegevoegd en de oplossing werd 1 uur bewaard. Daarna werd onder een sterk verminderde druk bij een tem-35 peratuur van 30°C het grootste deel van het oplosmiddel verwijderd, werd de achterblijvende olie in 70 ral dichloormethaan opgenomen en werd de oplossing tweemaal met telkens 50 ml van een fosfaatbuffer met een pH van 7 gewassen. De waterfasen werden nog met 100 ml dichloormethaan geextraheerd, de verenigde organische fasen weidden k0 boven natriumsulfaat gedroogd en volledig geconcentreerd. De ach- 8200217 18 terblijvende olie werd met kiezelgel aan een chromatografische behandeling onderworpen, waarbij eerst met dichloormethaan de overmaat trifenylfosfien en daarna met ethylacetaat het produkt ge-elueerd werd. De fracties, die het produkt bevatten, werden gecon-5 centreerd. Men verkreeg 3,2 g pivaloyloxymethyl-rac-2-(3*broom- 2,2-dimethoxypropyl)-4-oxo-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidine-acetaat als kleurloos, amorf materiaal.

IR (CHClJ: V Y 1741» 1635 cm’1.

3 max (h) Een op 4°C gekoelde oplossing van 3 g pivaloyloxymethyl-rac- 10 2-(3-broom-2,2-dimethoxypropyl)-4-oxo-a-(trifenylfosforanylid een)- 1-azetidineacetaat in 115 ml aceton werd in 2 minuten aan 38 ml op 4°C vooraf gekoeld 48-procents waterstofbromide druppelsgewijze toegevoegd, waarbij de temperatuur van het reactiemengsel op 20°G kwam. Men koelde in 3 minuten op 4°C en roerde nog 10 minuten bij 15 deze temperatuur. Daarna werd de kleurloze oplossing op 27,6 g natriumcarbonaat, 90 ml van een 0,6 molaire fosfaatbufferoplossing met een pïï van 7 en 50 g ijs gegoten en werd het mengsel driemaal met telkens 100 ml dichloormethaan geëxtraheerd. De organische fasen werden met 80 ml fosfaatbufferoplossing met een pH van 7 gewas-20 sen, boven natriumsulfaat gedroogd en volledig geconcentreerd. De verkregen olie werd aan kiezelgel aan een chromatografische behandeling onderworpen, waarbij met ethylacetaat geëlueerd werd. De fracties, die produkt bevatten, werden geconcentreerd en hexaan werd toegevoegd. Men verkreeg 2,03 g zuiver pivaloyloxymethyl-rac-25 2-(3-broomacetonyl)-4-oxo-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidine- acetaat als witte kristallen met smpt. 117 - 118°C.

IR (CHClJ: \? 1745» I64O cm”1.

3 max (i) iflj.7 mg pivaloyloxymethyl-rac-2-(3-broomacetonyl)-4-oxO“ a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat en 114 mg 1-ethyl- 30 4-thiouracil werden in 20 ml dichloormethaan opgelost en de oplossing werd in 10 minuten bij een temperatuur van 50°C bij verminderde druk volledig geconcentreerd. Het residu werd in 20 ml dichloormethaan opgelost en de oplossing werd in 10 minuten onder dezelfde omstandigheden geconcentreerd. Deze methode werd nogeens 35 herhaald, vervolgens werd de achterblijvende olie in 50 ml dichloormethaan opgenomen en werd de gele oplossing achtereenvolgens met een verdunde oplossing van natriumwaterstofcarbonaat en natrium-chloride gewassen. De waterfasen werden met dichloormethaan nage-extraheerd, de verenigde organische fasen werden boven natriumsul-40 faat gedroogd en volledig geconcentreerd. Chromatografie van de 8200217 19 achterblijvende olie aan kiezelgel met aceton/dichloormethaan (volumeverhouding 1:1) als elueermiddel gaf 427 mg pivaloyloxy-methyl-rac-2-[3-[ (1 -e thyl-1,2-dihydro-2-oxo- 4-pyr imi dinyl)-thio]-acetonyl]-4-oxo-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat 5 als gele olie, IE (CÏÏC1-): V 1741» 1660 cm"1.

3 max

Voorbeeld II

275 g Pivaloyloxymethyl-rac-2-(3-acetoxyacetonyl)-4-oxo-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat werden volgens de 10 in voorbeeld I beschreven methode ringgesloten. Men verkreeg na chromatografische zuivering van het onzuivere produkt ongeveer 150 mg pivaloyloxymethyl-rac-3-(acet oxyraethyl)-7-oxo-1-azabicyclo-[3.2.Ο]hept-2-een-2-carboxylaat als kleurloze olie.

IE (CHC13): Vmgx 1789, 1749» 1835 cm"1.

15 Het uitgangsprodukt werd als volgt bereid:

Aan een oplossing van 383 mg pivaloyloxymethyl-rac-2-(3-broomacetonyl)-4-oxo-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineace-taat in 9 ml dimethylformamide werden 54 mg natriumacetaat toegevoegd en het reactiemengsel werd gedurende 16 uren bij kamertempe-20 ratuur geroerd. Daarna werd met 50 ml dichloormethaan verdund en werd de oplossing na elkaar met water en een verzadigde oplossing van natriumchloride gewassen. De waterfasen werden met dichloormethaan geëxtraheerd» de verenigde organische fasen werden boven natriumsulfaat gedroogd en volledig geconcentreerd. De verkregen 25 olie werd na verwijdering van polair produkt door kiezelgel gefiltreerd, waarbij met ethylacetaat geelueerd werd. De zuivere fracties werden volledig geconcentreerd en het achterblijvende produkt werd uit ethylacetaat/hexaan gekristalliseerd. Men verkreeg 314 mg pivaloyloxymethyl-rac-2-(3-acetoxyacetonyl)-4-oxo-a-(trifenyl-30 fosforanylideen)-1-azetidineacetaat met smpt. 139 - 141°C.

IE (CHClJ: 9 1741» 1637 cm"1.

p IflcQC

Voorbeeld III

Door toevoeging van 1 N natriumhydroxide aan een water bevattende oplossing van natriumdiwaterstoffosfaat werd een 0,05 mo-35 laire fosfaatbufferoplossing met een pH van 7 bereid. Aan 40 ml van deze oplossing werden na elkaar 168 mg natriumwaterstofcarbo-naat en 0,3 ml van een suspensie van varkenslever-esterase EC 3* 1.1.1 (ongeveer 300 eenheden) in een 3»2 molaire ammoniumsulfaat-oplossing toegevoegd. De doorzichtige oplossing werd op 36°G ver-40 warrad en onder roeren werd een oplossing van 102 mg pivaloyloxy- 8200217 ‘ ' 20 * methyl-rac-3-(acetoxymethyl)-7-oxo-1-azabicyclo[3.2.0]-hept-2-een-2-carboxylaat in 1,5 ml dimethylsulfoxide toegevoegd. Men roerde gedurende 30 minuten bij 36°C, koelde en extraheerde het reactiemengsel viermaal met telkens 40 ml ether. De etherfasen 3 werden nog met 10 ml water teruggeëxtraheerd, de verenigde waterfasen werden gefiltreerd en de pïï van het filtraat werd met 0,1 N zoutzuur op 7,06 ingesteld. Deze oplossing bevatte een mengsel van ongeveer 28 mg natrium (5R en 5S)-3*-(acetoxymethyl)-7-oxo-1-aza-bicyclo[3*2.o]-hept-2-een-carboxylaato Ί0 UV (H^O): ^max = 202 nm (met hydroxylamine uitwisbaar).

Voorbeeld IV

p-Nitrobenzyl-rac-7-oxo-3-[(fenethylthio)-methyl]-1-azabi-cyclo[3*2.o]hept-2-een-carboxylaat werd in een mengsel van dioxan/ ethanol/water bij aanwezigheid van natriumwaterstofcarbonaat met palladium-op-kool (5 #)als katalysator bij normale druk gehydro-geneerdo Men filtreerde de katalysator af, verdunde met water en extraheerde met if hoeveelheden ether. De water bevattende fase bevatte natrium-rac-7-oxo-3-[(fenethylthio)-methyl]-1-azabicyclo-[3.2.0]hept-2-een-2-carboxylaat.

20 Het uitgangsprodukt werd als volgt bereid: (a) Uit een oplossing van 1,89 g i?ac-4-(3-broom-2,2-diraethoxy-propyl)-2-azetidinon en 2,if6 g glyoxylzuur-p-nitrobenzylester-ethyl-hemiacetaal in 50 ml tolueen werden in 2 minuten bij normale druk 27 ml van het oplosmiddel continu gedestilleerd. Het afge- 25 koelde reactiemengsel werd volledig geconcentreerd en het achterblijvende residu werd met kiezelgel aan een chromatografische behandeling onderworpen. Een mengsel van aceton/dichloormethaan/ hexaan (volumeverhouding 1:4:1) elueerde 3»25 g p-nitrobenzyl-raG-2- ( 3-broom-2,2-dime thoxypropyl) -α-hy droxy- if-oxo-1 -aze tidineace taat 30 als diastereomerenmengsel.

IR (CHC1-): 3530, 1765» 1611, 1530, 1500 cm"1 3 max

Rf: ca. 0,2 (Si0^t aceton/CH^C^/hexaan in de volume verhouding 1:4:1· (b) Onderwierp men 3,25 g p-nitrobenzyl-rac-2-(3-broom-2,2-dime-33 thoxypropyl)-a-hydroxy-4-oxo-1-azetidineacetaat (diastereomerenmengsel) aan de in voorbeeld I (g) beschreven reactieomstandighe-den, dan verkreeg men na kristallisatie uit dichloormethaan/hexaan 2,48 g p-nitrobenzyl-rac-2-(3-broom-2,2-dimethoxypropyl)-4-oxo-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat als witte kristal- 2*0 len met smpt. 189 - 190°C.

8200217 1 l 21 IR (CHCl,): „ 1737, 1620» 1607 cm"1.

3 max (c) Onderraerp men 2,77 g p-nitrobenzyl~rac-2-(3-broom-2,2-dime-thoxypropyl)-4-oxo-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat aan de in voorbeeld I (h) beschreven werkwijze, dan verkreeg men 5 1*35 g p-nitrobenzyl-rac-2-(3-broomacetonyl)-4-oxo-a-(trifenyl- fosforanylideen)-1-acetidineacetaat als witte kristallen met smpt.

127 - 128°C.

IR (CHC1_) t V 17½, 1636, 1609, 1579, 1525 cm"1.

3 max (d) Aan een oplossing van 1,32 g p-nitrobenzyl-rac-2-(3-broom-10 acetonyl)-4-oxo-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat en 0,29 g 2-fenyl-ethylmercaptan in 20 ml dichloormethaan arerd 0,21 g triethylamine toegevoegd en er werd gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd· Men verdunde met dichloormethaan en waste na elkaar met een verdunde oplossing van natriumwaterstofcarbonaat en 15 een verzadigde oplossing van natriumchloride. De organische fase werd boven natriumsulfaat gedroogd, volledig ingedampt en het residu werd aan kiezelgel aan een chromatografische behandeling onderworpen. Een mengsel van ethylacetaat/hexaan (volumeverhouding 1 :1) elueerde 1,07 g p-nitrobenzyl-rac-4-oxo-2-[3-(fenerthylthio)-20 acetonyl]-a-( trifenylfosforanylid-een)-1-azetidineacetaat.

(e) Door toepassing van de in voorbeeld I beschreven ringslui-tingsomstandigheden op p-nitrobenzyl-rac~4-oxo-2-[3-(feiiethyl-thio)-acetonyl]-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat verkreeg men na chromatografische zuivering p-nitrobenzyl-rac-7- 25 oxo-3-[fenethylthio)-methyl]-1-azabicyclo[3 »2·0]hept-2-een-2-carboxylaat.

Voorbeeld V

Men verkreeg natrium-rac-3“[(cyclohexylthio)-methyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3*2.0]hept-2-een-2-carboxylaat, doordat men p-nitro-30 benzyl-rac-3“[(cyclohexylthio)-methyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3.2.o]-hept-2-een-2-carboxylaat aan de in voorbeeld IV beschreven hydro-generingsomstandigheden onderwierp.

Het uitgangsprodukt werd als volgt bereid: (a) 1,32 g p-nitrobenzy1-rac-2-(3-broomacetonyl)-4-oxo-a-(tri- 35 fenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat en 0,24 g cyclohexyl-mercaptan werden volgens de in voorbeeld IV (d) beschreven werkwijze omgezet. Men isoleerde na chromatografische zuivering 0,96 g p-nitrobenzyl-rac-2-[3-(cyclohexylthio)-acetonyl]-4-oxo-a-(trife-nylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat.

8200217 22 (b) Door toepassing van de in voorbeeld I beschreven ringslui-tingsofflstandigheden op p-nitrobenzyl-rac-2-[3-(oyclohexylthio)-acetonyl]-lt-oxo-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azatidineacetaat verkreeg men na chromatografische zuivering p-nitrobenzyl-rac-5 3-[(cyclohexylthio)-methyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3.2.o]hept-2-een- 2-carboxylaat.

Voorbeeld VI

Een oplossing van 267 mg pivaloyloxymethyl-rac-trans-3-ethyl-2-[3-[(l-ethyl-1,2-dihydro-2-oxo-if-pyrimidinj:l)-thio]-acetonyl]-10 if-oxo-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat in 12 ml tolueen werd gedurende 3 uren onder een argonatmosfeer op 100°C verhit· De reactieoplossing werd volledig geconcentreerd en het residu werd aan kiezelgel aan een chromatografische behandeling onderworpen. Een mengsel van dichloormethaan/aceton (volumeverhou-15 ding 6:1) elueerde het zuivere produkt, dat uit ethylacetaat onder toevoeging van hexaan kon worden gekristalliseerd· Men verkreeg 122 mg pivaloyloxymethyl-rac-6a-ethyl-3-[[(l-ethyl-1,2-di-hydro-2-oxo-i).-pyrimidinyl)-thio]-methyl]-7-oxo-5a-1-azabicyclo-[3«2,0]hept-2-een-2-carboxylaat als witte kristallen met smelt-20 punt 105 - 106°C· IE (CHClJ: V? 17Sif, 1756, 1735, 1661, 162^, 1610 cm“1 3 max ME (CDGl^): ^ 1,01 (t, J=7Hz, 3H); 1,2i* (s, 9H): 1,38 (t, J=7Hz, 3H); 1,67-1,95 (m, 2H); 2,90-3,22 (m, 3H); 3,79-3,96 (m, 3H); i».,37A,52 (AB-systeera, 25 J=1i*Hz, 2H); 5,38/5,97 (AB-systeem, J=5Hz, 2H); 6,20 (d, J=7Hz, 1H); 7,35 (d, J=7Hz, 1H) dpm.

Het uitgangsprodukt werd als volgt bereid: (a) Aan een oplossing van 0,513 g rac-4-[(2-raethyl-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon in 12 ml tetrahydrofuran werden bij 30 -20°C k nil van een 1,635 molaire butyllithium/hexaan-oplossing toegevoegd en er werd gedurende 90 minuten in een ijsbad in een argonatmosfeer bewaard· De bruingele oplossing werd op -40°C gekoeld, een oplossing van 360 mg ethylbromide in 0,8 ml tetrahydrofuran werd toegevoegd en daarna werd gedurende 90 minuten in het 35 ijsbad bewaard. Men goot op een ijskoude verzadigde natriumchlori-deoplossing en men extraheerde met ethylacetaat, De extracten werden nogeens met een verzadigde oplossing van natriurachloride gewassen, boven natriumsulfaat gedroogd en volledig geconcentreerd. Door chromatografie van het residu aan kiezelgel met ethylacetaat/ ifO hexaan (volumverhouding 2:1) als elueermiddel verkreeg men zuiver 8200217 23 rac-trans-3-ethyl-4-[ (2-methyl-1 ,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azeti-dinon. Kristallisatie uit ether/hexaan gaf 122 rag witte kristallen met een smeltpunt van 44 - 45°C.

IK (CHClj): ^max 3k22i 1752 cm"1* 5 (b) Aan 4»3 g rac-trans-3-ethyl-4~[(2-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)- methyl]-2~azetidinon in 30 ml methanol voegde men ongeveer 4 ral van 21,6 ml van een 1 molaire oplossing van broom in methanol toe en men verwarmde op 50°C. Na ongeveer 3 minuten trad ontkleuring in» waarna de rest van de broomoplossing in 1 minuut druppelsge-10 wijze werd toegevoegd· De kleurloze reactieoplossing werd op een mengsel van 30 ml van een verzadigde oplossing van natriumchloride en 20 g ijs gegoten, daarna werd met vast natriumchloride verzadigd en werd na elkaar met 50 ml ether en tweemaal met telkens 50 ml ethylacetaat geëxtraheerd. De organische fasen werden nog 15 met een mengsel van 30 ml van een verzadigde natriumwaterstofcarbo-naatoplossing en 20 ml 1 N natriumthiosulfaatoplossing alsmede met 30 ml van een verzadigde natriumchlorideoplossing gewassen, boven natriumsulfaat gedroogd en volledig geconcentreerd* De achterblijvende olie werd aan kiezelgel met ethylacetaat als elueermiddel 20 aan een chromatografische behandeling onderworpen. Door kristallisatie van het gezuiverde produkt uit ethylacetaat/hexaan verkreeg men 2,99 g rac-trans-4-(3-broom-2,2-dimethoxypropyl)-3-ethyl-2-azetidinon als witte kristallen met smeltpunt 77 - 79°C* (c) De in voorbeeld I (f)-(h) beschreven werkwijze werd op ana-25 loge wijze op 2,8 g rac-trans-4-(3-hroom-2,2-dimethoxy-propyl)- 3~ethyl-2-azetidinon toegepast. Men verkreeg na chromatografische zuivering en kristallisatie uit ethylacetaat/hexaan 0,51 g pivaloyl-oxyme thyl-rac-tr ans-2- (3-br oomace t onyl) -3-e thyl- 4- oxo -ex- (trifenyl-fosforanylideen)-1-azetidineacetaat als witte kristallen met 30 smeltpunt 128 - 129°C.

(d) 333 mg Pivaloyloxymethyl-rac-trans-2-(3-broomacetonyl)-3- ethyl-4-oxo-a“(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat en 78 mg 1-ethyl-4-thiouracil werden volgens de in voorbeeld IV (d) beschreven werkwijze omgezet. Men isoleerde na chromatografische 35 zuivering 291 mg pivaloyloxymethyl)-rac-trans-3-ethyl-2-[3-[(l- ethyl-1,2-dihydro-2-oxo-4-pyrimidinyl)-thio]-acetonyl]-4-oxo-a- (trifenylfosforanylideen)-l-azetidineacetaat als wit schuim· IR (CHClJ: 9 1745 met schouder bij 1720, 1662, 1627, 1580, 3 max .

1514 cm" .

8200217 24

Voorbeeld VII

Een oplossing van 151 mg pivaloyloxymethyl-rac-trans-3-ethyl-2-[3-[(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)-thio]-acet onylJ-4-οχο-α-(trifenylfosforanylideen)-l-azetidineacetaat in 12 ml tolueen werd 5 gedurende 90 minuten onder een argon atmosfeer op 100°G verhit.

Men isoleerde na chromatografische zuivering 79 mg pivaloyloxyme-thyl-rac-6a-ethyl-3-[[(5-methyl-1,3*4-thiadiazool-2-yl)-thio]-rae-thyl]-7-oxo-5a-1-azabicyclo[3«2.0]hept-2-een-2-carboxylaat als bleekgele olie.

10 NMR (CDC1 ^): é 1,00 (t, J=7Hz, 3H); 1,07 (s, 9H); 1,43-2,17 (m, 2H); 2,73 (s, 3H): 2,92-3*30 (m, 3H); 3*70-4,13 (m, 1H): 4,40/4,59 (AB-systeem, J=14Hz, 2H); 5,86/5*94 (AB-systeera, J=6ïïz/2H) dpm.

Het uitgangsprodukt werd als volgt bereid: 15 1*33 g Pivaloyloxymethyl-rac-trans-2-(3-broomacetonyl)-3-ethyl- 4-oxo-a-(tri£enylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat en 0,26 g 2-mercapto-5-methyl-1,3*4-thiadiazool werden op een wijze analoog aan de in voorbeeld IV Cd) beschreven werkwijze omgezet. Men isoleerde na chromatografische zuivering 1,24 g pivaloyloxymethyl-20 rac-trans-3-e.thyl-2-[3-[ (5-methyl-1,3,4-thiadiazool-2-yl)-thio]-acetonyl]-4-oxo-a-(trifenylfos£oranylideen)-1-azetidineacetaat als amorf poeder.

IB (CHClJ: 1740, 1636 cm"1.

3 max

Voorbeeld VIII

25 Een oplossing van 270 mg pivaloyloxymethyl-rac-(2KS, 3SR)- 2-[3-[(l-methyl-1H-tetrazol-5-yl)-thio]-acetonyl]-4-oxo-3-[(HS)-1-(trimethylsilyloxy)-ethyl]-a-(fosforanylideen)-1-azetidineacetaat in 32 ml tolueen werd gedurende 1 uur onder een argon atmosfeer op 105°C verhit. De kleurloze reactieoplossing werd met 50 ml 30 ethylacetaat verdund en onder verminderde druk volledig geconcentreerd. Het residu werd na afscheiding van het trifenylfosfienoxide door kiezelgel gefiltreerd, waarbij met ethylacetaat/dichloorme-thaan (volumeverhouding 1 : 1) geelueerd werd. De fracties, die het ringsluitingsprodukt bevatten, werden geconcentreerd. Het resi-35 du werd in 17 ml methanol opgenomen, aan de oplossing werden 35 mg ammoniumfluoride toegevoegd en er werd gedurende 40 minuten bij kamertemperatuur geroerd. Men verdunde met 30 ml ethylacetaat, concentreerde onder een verminderde druk volledig en chromatografeerde het residu aan kiezelgel met ethylacetaat/dichloorraethaan (volume-40 verhouding 1:1) als elueermiddel. Men verkreeg 60 mg pivaloyloxy- 8200217 25 .

me thyl-r ac- (5BS ,6SR)-6-[ (RS)-1-hydroxyethyl]-3-C[(1-methyl-1H-r tetrazool-5-yl)-thio]-methyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3.2.0]hept-2-een-2-carboxylaat als kleurloze olie.

IR (CHC1_): 3616, 3446, 1780, 1752» 1732, 1623 cm”1.

3 max 5 Het uitgangsprodukt werd als volgt bereid: (a) Aan een op 0°C gekoelde oplossing van 34,2 g rac-4-(2,2-ethyleendioxypropyl)-2-azetidinon en 31»7 g tert.butyldimethyl-chloorsilaan in 160 ml dimetbylformamide werden in 2 minuten 22,2 g . triethylamine druppelsgewijze toegevoegd, waarbij direkt een neer-, 10 slag ontstond. Men roerde gedurende 1 uur bij 0°C, verdunde daarna met 500 ml ether en waste het reactiemengsel met vijfmaal 200 ml water. De waterfasen werden met 250 ml ether na-geëxtraheerd. De organische fasen werden boven natriumsulfaat gedroogd, op een roterende verdamper van oplosmiddel bevrijd en de achterblijvende 15 olie werd onder een sterk verminderde druk gedestilleerd. Men verkreeg 53,5 g rac-1-(tert.butyldimethylsilyl)-4-[(2-methyl-1,3“ dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon met kpt.^ ^ 125 - 130°C als kleurloze olie.

IR (CHC1,): V 1728 cm"1.

3 ' max 20 NMR (CDClj): <£ 0,22 (s, 6H); 0,98 (s, 9H); 1,31 (e, 3H)j 1,62-2,34 (m, AS-deel van een ABX-systeem, 2H); 2,70-3,31 (m, AB-deel van een ABX-systeem, 2H)j 3,51-3,85 (m, X-deel, 1H); 3,85-4,03 Cm, 4H) dpm.

(b) Een oplossing van. 3,66 g diisopropylamine in 90 ml tetrahy-25 drofuran werd op -78°C gekoeld en in 5 minuten werden 24 ml van een 1,635 molaire butyllithium/hexaan-oplossing toegevoegd. Men roerde gedurende 20 minuten bij -78°C onder een atmosfeer van argon en voegde druppelsgewijze vervolgens in 5 minuten een oplossing toe van 8,55 g rac-1-(tert.butyldimethylsilyl)-4-[(2-methyl-30 1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon in 90 ml tetrahydrofuran . Na nogeens 30 minuten roerden bij -78°C werden aan de reactie-oplossing 2,22 g methylacetaat toegevoegd. Men liet in 5 minuten op 0°C komen en roerde nog 20 minuten bij deze temperatuur. Het reactiemengsel werd op 150 ml van een verzadigde oplossing van na-35 triumchloride gegoten en vervolgens werd met in totaal 400 ml ethylacetaat geëxtraheerd. De organische fase werd met een verzadigde oplossing van natriumchloride neutraal gewassen, boven natriumsulfaat gedroogd en volledig geconcentreerd. Het residu werd aan kiezelgel met ethylacetaat/hexaan (volumeverhouding 1 : 2) als 40 elueermiddel aan een chromatografische behandeling onderworpen en 8200217 2 6 het proöukt van de geconcentreerde zuivere fracties werd onder een sterk verminderde druk gedestilleerd. Men verkreeg 4,49 g rac-trans-3-acetyl-1-(tert.butyl -dimethylsilyl)-4-[(2-methy1-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon als kleurloze olie met kpt.Q^^ 5 118 - 120°C.

IE (GHC1-): 1743, 1712 om*1.

3 max NMR (CDClj): ö 0,22 (s, 3H)j 0,26 (s, 3H); 0,98 (s, 9H)j 1.32 (s, 3H); 1,66-2,37 (m, 2H); 2,30 (s, 3H); 3,75-4,00 (m p); 4,00-1*,25 (m, 2H) dpm,· 10 (c) Een mengsel van 14,3 g rac-trans-3-acetyl-1-(tert.butyldi me thylsilyl)-4-[ (2-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon en 0,78 g platinaoxide in 70 ml ethylacetaat werd bij normale druk gedurende 8 uren gehydrogeneerd. Men filtreerde de katalysator af, concentreerde het filtraat onder een verminderde druk volledig en 15 kristalliseerde het residu uit hexaan. Men verkreeg 12,4 g van een mengsel van 2 isomere alcoholen in de verhouding 3*2. Door ge-fractioneerde kristallisatie uit ethylacetaat/hexaan kon eerst de hoofdcomponent in zuivere vorm "geïsoleerd worden: rac-(3SR,4HS)-1-(tert.butyldimethylsilyl)-3-[(ES)-1-hydroxyethyl]-4-[(2-methyl-20 1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon met smeltpunt 81 - 82°C.

IE (CHC13): V>max 3500, 1735 cm**1.

NMR (CDCLj): é 0,22 (s, 3H); 0,24 (s, 3H); 0,96 (s, 9H); 1,34 (d, J=6Hz, 3H); 1,41 (s, 3H); 1,82-2,27 (m, 2H); 2,96 (dxd, J=9Hz en 2Hz, 1H); 3,15 25 (d, J=5H, 1H); 3,54-3,61 (m, 1H); 3,94-4,02 (m, 4H) dpm.

Door herhaald kristalliseren van de moederloog uit ethylacetaat/hexaan kon rac-(3SR,4RS)-1-(tert.butyldime thylsilyl)-3-[(SR)-1-hydroxyethyl]-4-[(2-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-30 azetidinon met smeltpunt 86 - 88°C verkregen worden.

IR (CHC13): Ϋ max 3630, 3588, 3504, 1728 cm**1.

NMR (CDCl ): 6 0,22 (s, 3H); 0,24 (s, 3H); 0,96 (s, 9H)j 1.32 (d, J=6Hz, 3H); 1,36 (s, 3H); 1,78-2,27 (m, 2H); 2,46 (d, J=5Hz, 1H); 3,15 (dxd, J=5Hz en 35 2,5 Hz, 1H); 3,59-3,68 (m, 1H); 3,89-4,01 (m, 4H); 4,03-4,16 (ra, 1H) dpm.

(d) Aan een op 0 0 gekoelde oplossing van 79 g rac-(3SR»4RS)- 1-(t er t.butyldime thylsilyl)-3-[(RS)- 1 -hyd roxye thyl]-4-[(2-methyl- 1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon in 720 ml pyridine werden 40 onder roeren 63,7 g chloormierezuur-2,2,2-trichlooret-hylester toe- 8200217 27 gevoegd. Daarbij ontstonden klonten» die na enige tijd tot een fijn neerslag oplosten. Men roerde gedurende 17 uren bij kamertemperatuur en verwijderde vervolgens met een roterende verdamper onder een sterk verminderde druk het grootste deel van het oplos-5 middel. Het geconcentreerde reactiemengsel werd in 2 liter ethyl-acetaat opgenomen* met driemaal telkens 600 ml water gewassen en de waterfasen werden met 1 liter ethylacetaat na-geextraheerd. De organische fasen werden boven natriumsulfaat gedroogd» het oplosmiddel werd op een roterende verdamper verwijderd en de achterblij-10 vende olie werd door filtratie door kiezelgel met ethylacetaat/ hexaan (volumeverhouding 1 : 1) als elueermiddel van polaire verontreinigingen bevrijd. Door concentreren van de zuivere fracties verkreeg men 126 g onzuiver rac-(3SR,4RS)-1-(tert.butyldimethyl-silyl)-3-[ (RS)-1-(2»2,2-trichloorethoxycarbonyloxy)-ethyl]-l<.-13 [(2-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon als olie.

IR (CHC1,): _ 1758, 17**0 cm~1.

p max (e) Aan een op 60°C vooraf verwarmde oplossing van 126 g onzuiver rac-(3SR,4 RS)-1-(tert.butyldime thylsily1)-3-[(3SS)-1-(2,2,2-tri-chloorethoxycarbonyloxy)-ethyl]-4-[(2-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)-20 methyl]-2-azetidinon in 700 ml methanol voegde men onder roeren if g broom toe. Na ongeveer 3 minuten roeren bij 60°C trad ontkleuring op. Nu werden aan de reactieoplossing in 8 minuten nogeens 36 g broom druppelsgewijze toegevoegd en daarbij daalde de reactie-temperatuur in 3 minuten op ^0°C. Na voltooide toevoeging hield men 25 de temperatuur nogeens 12 minuten op 40°C, waarbij de reactieoplossing praktisch kleurloos werd. Men koelde op 10°C af, neutraliseerde door toevoeging van i|-1 ml water bevattende ammoniak (25 , voegde 8,6 g ammoniumfluoride toe en roerde 1 uur bij kamertemperatuur. De gele oplossing werd op een roterende verdamper tot onge-30 veer het halve volume geconcentreerd en daarna in 1,2 liter ethyl-acetaat-ether (volumeverhouding 1:1) opgenomen. Men waste driemaal met telkens i*50 ml van een verzadigde natriumchlorideoplossing en extraheerde de waterfasen nogeens met in totaal 1,3 liter ethylacetaat. De organische fasen werden boven natriumsulfaat gedroogd, 35 onder verminderde druk van oplosmiddel bevrijd en het residu werd aan kiezelgel aan een chromatografische behandeling onderworpen.

Een mengsel van ethylacetaat/dichloormethaan/hexaan (volumeverhouding 1:1:1) elueerde het vooraf gezuiverde produkt, dat uit ethylacetaat onder toevoeging van hexaan gekristalliseerd kon worden. kO Men verkreeg 57 g rac-(3SR,iiRS)-4-(3-broom-2,2_dimethoxypropyl)- 8200217 28 3-[(2S)-1-(2,2,2-trichloorethoxycarbonyloxy)-ethyl]-2-azetidinon als kleurloze kristallen met smpt. 84 - 85°C.

(f) Ben mengsel van 23*58 g rac-(3SR»42S)-if-(3-broom-2,2-dime-thoxypropyl)-3-[(RS)-1-(2 »2,2-trichloorethoxycarbonyloxy)-ethyl]- 5 2-azetidinon, g glyoxylzuur-monohydraat en 15 g moleculaire zeef #A in 25 ml dimethylformamide werd gedurende 20 uren bij kamertemperatuur geroerd· Het reactieraengsel werd op -10 C gekoeld en 5*25 g triethylamine werden toegevoegd· Na 5 minuten werden 13*3 g joodmethylpivalaat toegevoegd, waarbij de temperatuur door 10 koelen op 3°C werd gehouden· Men roerde 15 minuten bij 3°C en nogeens 20 minuten bij kamertemperatuur. Daarna werd van de moleculaire zeef gedecanteerd en werd gelijktijdig met 200 ml ethyl-acetaat verdund· Men waste driemaal met telkens 100 ml van een halfverzadigde oplossing van natriumchloride en extraheerde de 15 waterfasen nogeens met 200 ml ethylacetaat. De organische fasen werdén boven natriumsulfaat gedroogd en onder een verminderde druk van het oplosmiddel bevrijd» Chromatografie van het residu aan kie-zelgel met ethylacetaat/hexaan (volumeverhouding 1:1) gaf 13*5 g pivaloyloxyme thyl-rac-(2RS,3^2)-2-(3-broom-2,2-dimethoxypropyl)-20 if-oxo-3-[ (RS)-1-(2,2, 2-trichloorethoxycarbonyloxy) -e thyl ]-<x-hy-droxy-1-azetidineacetaat (diastereomerenmengsel) als kleurloze olie, IR (CHCLj): V^max 3528, 1769 cm"1.

NMR (CDCl^): o.a. é 1,23 (s, 9H); 1,50 (d, J=6Hz, 3H); 25 2,20-2,60 (m, 2H); 3*05-3,30 (m, 7H): 3,M* (breed s, 2H); ij.,73 (s, 2H) dpm.

(g) Aan een op -20°C gekoelde oplossing van 15*5 g pivaloyloxy-methyl-rac-[2RS,3SR)-2-(3-broom-2,2-dimethoxypropyl)-ij.-oxo- 3-[(RS)-1-(2 * 2»2-trichloorethoxycarbonyloxy)-ethyl]-a-hydroxy-1-30 azetidineacetaat (diastereomerenmengsel) in 200 ml tetrahydrofuran werden 3*50 g 2,6-lutidine toegevoegd· Daarna werd in 1 minuut een oplossing van 3t7k g thionylchloride in IfO ml tetrahydrofuran druppelsgewijze toegevoegd, waarbij de temperatuur door koelen beneden -20°C werd gehouden. Het reactiemengsel werd 20 minuten bij -20°C 35 en 20 minuten bij kamertemperatuur geroerd. Daarna werd van neerslag afgezogen en werd het afgezogen produkt met 360 ml tolueen nagewassen· Het filtraat werd onder een verminderde druk volledig geconcentreerd, het residu werd in 150 ml tolueen opgenomen en opnieuw volledig geconcentreerd.

ifO De aldus verkregen olie werd in 75 ml dimethylformamide opge- 8200217 29 1 van nomen en een oplossing 8 g trifenylfosfien m 23 ml dimethylforma-mide werd toegevoegd. Men liet 1 uur bij kamertemperatuur staan en verwijderde daarna het grootste deel van het oplosmiddel onder een sterk verminderde druk bij een temperatuur van 30°C. Het residu 5 werd in 300 ml dichloormethaan opgenomen, de oplossing werd tweemaal met telkens 240 ml van een 1 molaire fosfaatbuffer met een pH van 7 gewassen en de waterfasen werden met 300 ml dichloormethaan nageextraheerd. De organische fasen werden boven natriurasulfaat gedroogd, onder een verminderde druk van oplosmiddel bevrijd en de 10 achterblijvende olie werd aan kiezelgel aan een chromatografische behandeling onderworpen. Een mengsel van ethylacetaat/dichloorme-thaan/hexaan (volumeverhouding 1 : 1 i 1) elueerde eerst overmaat trifenylfosfien en vervolgens het produkt. Door volledig concentreren van de zuivere fracties verkreeg men 14*89 g pivaloyloxy-15 methyl-rac-(2RS,3SR)-2-(3-broom-2,2-dimethoxypropyl)-4-oxo-3- [(RS)-1-(2,2,2-trichloore thoxycarb onyloxy)-ethyl]-a-(tri fenylfos-foranylideen)-1-azetidineacetaat als amorf poeder.

IR (CHC15>: y>max 1747, 1634 cm"1.

(h) Aan een op -10°C gekoelde oplossing van 2,66 g pivaloyloxy-20 methyl-rac-(2RS,3SR)-2-(3-broom-2,2-dimethoxypropyl)-4-oxo-3- [(RS)-1-(1,1,1-trichloorethoxycarbonyloxy)-ethyl]-a-(trifenylfos-foranylideen)-1-azetidineacetaat in 75 ml aeeton werden onder roeren 75 ml op -10°C vooraf gekoeld 48-procents waterstofbromide toegevoegd, waarbij de temperatuur op 10°C kwam. Men koelde in 3 mi-25 nuten op 0°C, roerde nog 15 minuten bij deze temperatuur en goot de kleurloze reactieoplossing op een mengsel van 17*4 S natriumcarbo-naat, 150 ml van een 1 molaire fosfaatbufferoplossing met een pH van 7 en 150 g ijs. Men extraheerde met in totaal 400 ml dichloormethaan. De organische fase werd met 50 ml van een 1 molaire fos-30 faatbufferoplossing met een pH van 7 gewassen, boven natriumsul-faat gedroogd en volledig geconcentreerd. Men verkreeg 2,45 S onzuiver pivaloyloxymethyl-rac-(2RS,3SR)-2-(3-bro omacet onyl)-4-oxo- 3-[(RS)-1-(2,2,2-trichloorethoxyc arb onyloxy)-e thy1]-<x- (trifenyl-fos£oranylideen)-1-azetidineacetaat als witte vaste stof.

55 IR (CHC1-): ^ 1750 met schouder bij 1710, 1641 cm"’1.

3 max 0 (i) Aan een oplossing van 1+28 mg pivaloyloxymethyl-rac-(2RS, 3SR)-2-(3-broomacetonyl)-if-oxo-3-[(RS )-1-(2,2,2-trichloorethoxy-carbonyloxy)-ethylJ-a-(trxfenylfosfor anylideen)-1-azetidine-ace-taat en 64 mg 5-mercapto-1-methyl-1H-tetrazool in 10 ml dichloor- 40 methaan werden 60 mg triethylamine toegevoegd en vervolgens werd 8200217 . 30 2 uren bij kamertemperatuur geroerd* Men verdunde met 10 ml dichloormethaan en waste met telkens 10 ml van een verzadigde oplossing van natriumwaterstofcarbonaat en natriumchloride. De waterfasen werden met weinig dichloormethaan nageëxtraheerd, de organi-5 sche fasen werden boven natriumsulfaat gedroogd en volledig geconcentreerd*

Het residu werd in 3 ml ijskoud 90-procents azijnzuur opgelost. Men voegde 1,5 g zinkpoeder toe en roerde gedurende 20 minuten bij 0°C. Het residu werd met i+0 ml dichloormethaan verdund en na 10 elkaar met 15 ml verzadigde natriumcarbonaatoplossing en tweemaal telkens 25 ml water gewassen* De waterfasen werden met tweemaal telkens 1*0 ml dichloormethaan nageëxtraheerd * de organisEhe fasen werden boven natriumsulfaat gedroogd en volledig geconcentreerd.

Het residu werd in een mengsel van 3 »1 dichloormethaan en 15 1,5 ml pyridine opgenomen en han de oplossing werd 0»4ifr g trime- thylchloorsilaan toegevoegd* Men roerde gedurende 1 uur bij kamertemperatuur» verdunde met 35 ml ethylacetaat en waste achtereenvolgens met 15 al 5-procents natriumwaterstofcarbonaatoplossing en 25 ml verzadigde natriumchlorideoplossing* De waterfasen werden 20 met 60 ml ethylacetaat nageëxtraheerd,, de organische fasen werden boven natriumsulfaat gedroogd en volledig geconcentreerd. Het residu werd aan kiezelgel met ethylacetaat/hexaan (volumeverhouding 1:1) als elueermiddel aan een chromatografische behandeling onderworpen* Men isoleerde 198 mg pivaloyloxymethy1-rac-(2RS,3SR)-2-25 [3-[(1-niethyl-1iï-tetrazool-5-yl)-thio]-acetonyl]-Voxo-3-[(RS)- 1-(trimethylsilyloxy)-ethyl]-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azeti-dineacetaat als kleurloze olie* IR (CHCl^): VmaX 1?^7* l6^° cm~1*

Voorbeeld 9 30 Door toevoeging van 1 N natriumhydroxide aan een water bevat tende oplossing van natriumdiwaterstoffosfaat werd een 0,05 molaire fosfaatbufferoplossing met een pH van 7 bereid en aan 150 ml van deze oplossing werden 1,5 ml van een suspensie van varkenslever-esterase EG 3·1·1·1· (ongeveer 1500 eenheden) in een 3,2 molaire 35 ammoniumsulfaatoplossing toegevoegd. Daarna voegde men onder roeren een oplossing toe van 228 mg pivaloyloxymethyl-rac-(5HS,6SR)- 6-[(RS)-1-hydroxyethyl]-3-[[(1-methy1-1H-tetrazool-5-yl)-thio]-me-thyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3.2.0]hept-2-een-2-carboxylaat in 3 ml methanol, waarbij een fijn neerslag ontstond. Men roerde gedurende ifO 3,3 uren bij 23°C en hield daarbij de pH van het reactiemengsel 8200217 31 door toevoeging van 0,1 N natriumhydroxide op 7*1· De nog enigszins troebele oplossing werd viermaal met telkens 50 ml ether geëxtraheerd en de etherfasen werden nog tweemaal met telkens 50 ml water teruggeextraheerd* De waterfasen werden onder een verminderde druk 5 bij een temperatuur van 0-20°C op ongeveer 30 ml geconcentreerd en

R

aan EP-18-kiezelgel (LiChroprep , 40-63^um) met 3-procents water bevattende methanol (volumeverhouding) aan een chromatografische behandeling onderworpen* De fracties, die het produkt bevatten, werden verenigd, geconcentreerd en de met 0,1 N natriumhydroxide 10 op een pH van 7,1 ingestelde oplossing werd gelyofiliseerd* Men verkreeg een mengsel van natrium-(5R»6S en 5S,6R)_6-[Cb en S)-1-hyd roxyethylJ-3-[[(1-methyl-1H-tetrazool-5-yl)-thio]-methyl]- 7-oxo-1-azabicyclo[3»2.0]hept-2-een-2-carboxylaat als wit, amorf poeder* 15 UV (H^O): )ïmax = 278 (met hydroxylamine uitwisbaar).

IE (KBr): 1758, 1603, 1400 cm"1.

* IBcwC

NMB (DMSO-dg): 1,15 Cd, J=6Hz, 3H); 2,66-2,86 (m, 2H); 3,03 (dxd, J=7Hz en 2,5Hz, 1H); 3,80-3,96 (m, 2ïï): 3,97 Cs, 3H); 4,40/4,66 (AB-systeem, J=12Hz, 2H) 20 dpm.

Voorbeeld X

126 mg Pivaloyloxymethyl-rac-(2ES,3SR)-2-[3-[(5-methyI-1,3,4-thiadiazool-2-yl)-thio]-acetonyl]-4-oxo-3-[ (KS)-l-(trimethylsilyl-oxy)-ethyl]-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat werden 25 aan de in voorbeeld VIII beschreven ringsluitingswerkwijze onderworpen. Men verkreeg na chromatografische zuivering 24 mg pivaloyl-oxyme thyl-rac-(5RS,6SB)-6-[(ES)-1-hydroxyethyl]-3-[[(5-methyl- 1,3, 4- thiadiazool—2—yl) - thio ]-methyl ]-7-oxo-1 -azabicyclo[3.2* 0 ]-hept-2-een-2-carboxylaat als kleurloze olie.

30 UV (EtOH): )\ = 292 nm.

'max

De uitgangsverbindingen voor de voorbeelden X, XII, XIII, XIV en XVIII werden als volgt bereid: (a) Pivaloyloxymethyl-rac-(2BS,3SR)-2-(3-broomacétonyl)-4-oxo- 3-[(ES)-1-(2,2,2-trichloorethoxycarbonyloxy)-ethyl]-a-(trifenyl-35 fosforanylideen)-1-azetidineacetaat werd volgens het in voorbeeld VIII (i) beschreven proces omgezet met het verschil, dat in plaats van 5-mercapto-1-methyl-1H-tetrazool in voorbeeld X 5-mercapto-2-methyl-1,3,4-thiadiazool, in voorbeeld XII 2-mercaptopyrimidine, 40 in voorbeeld XIII 4-aceetamino-thiofenol, 8200217 • # 32 in voorbeeld XIV 1,2,3*^-tetrahydro-if-methyl-3-thioxo-as- triazin-5 ,6-dion, in voorbeeld XVIII methyl-1-methyl-5-mercapto-1H-1,2»if-triazool- 3-carboxylaat.» 5 toegepast werd.

Men verkreeg na chromatografische zuivering in voorbeeld X: pivaloyloxymethyl-rac-(2RS,3SR)-2-[3-[(5-methy1-1,3 > if-thiadiazool- 2-yl)-thio]-acetonyl]-2f-oxo-3-[(RS)-1-(trimethylsilyloxy)-ethyl]-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat als wit schuim· 10 IR (CHOI,): a 17*f9» löijO cm”1.

y DlcOC

in voorbeeld XII: pivaloyloxyrae thy1-rac- ( 2R, 3SR ) - if- oxo-3- [(RS)-1-(trime thylsilyloxy)-ethyl]-2-[3-(2-pyrimi dinyl-thi o)_acetonyl]-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat als kleurloze olie. IR (CÏÏC1-): V 1739 met schouder bij 1715* 1632 cm”1» 15 in voorbeeld XIII: pivaloyloxyraethyl-rac-(2RS,3SR)-2-[3-[(p-a-ceet-arainofenyl)-thio ]-acetonyl]-if-oxo-3-[ (RS )-1-( trimethylsilyloxy)-ethyl]-a-(trifenylfosforanyiideen)-1-azetidineacetaat als amorf poeder.

IR (CHC13): '^max 3^36, 3322, 17Ml·, 1712, 1636 cm”1.

20 in voorbeeld XIV: pivaloyloxymethyl-rac-(2RS,3SR)-2-[3-[(1»*f,5,6-tetrahydro-4-methyl-5i6-dioxo-as-triazin-3-yl)-thio]-acetonyl]-if-oxo-3-[(RS )-1-(trime thylsilyloxy )-ethyl]-a-(trifenylfosforanyli-deen)-1-azetidineacetaat als kleurloze olie.

IR (CHC13): ^ fflax 339^f* 1750, 1712, 1616, 1595 cm"1.

25 in voorbeeld XVIII: pivaloyloxymethyl-rac-(2RS,3SR)-2-[3-[3-(me-thoxycarbonyl) -1 -methyl-1H-1,2, if-triazool-5-yl ] - thi 0 ]-ace t onyl ]-if-oxo-3-[(RS)-1-( trime thylsilyloxy ) -e thy 1 ]-a- (tr i f eny If os f or anyli -deen)-1-azetidineacetaat als kleurloze olie.

IR (CHC13): \;max 1741. 1715, 1636 cm"1.

30 Voorbeeld XI

Pivaloyloxyraethyl-rac-(5RS,6SR)-6-[(RS)-1-hydroxyethyl]-3-[ [ (5-me thyl-1,3, if-thiadiazool-2-yl) -thio ]-me thyl ]-7-oxo-1 -aza-bicyclo[3.2.0]hept-2-een-2-carboxylaat werd op analoge wijze aan de in voorbeeld beschreven hydrolyse-werkwijze onderworpen. Men 35 verkreeg volgens RP-18-kiezelgel-chromatografie een mengsel van natrium-(5R,6s en 5S,öR)-6-[(R en S)-1-hydroxyethylJ-3-[[(5-methyl- 1,3,4-thiadiazool-2-yl)-thio]-methyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3.2.0]-hept-2-een-2-carboxylaat.

UV (IL,0): ?imax = 278 nm (met hydroxylamine verschuiving naar kO 278 nm).

8200217 Η 33 *

Voorbeeld XII

1β3 mS Pivaloyloxymethyl-rac-(2RS,3SB)-4-oxo-3-[(BS)-l-(tri-methylsilyloxy)-ethyl]-2-[3-(2-pyrimidinyl-thio)-acetonyl]-a-(triT fenylf9sforanylideen)-1-azetidineacetaat werden aan de in voorbeeld 5 VIII beschreven werkwijze onderworpen met het verschil, dat de reactietijd van de ringsluitingsreactie 3 uren bedroeg. Men isoleerde na chromatografische zuivering 42 mg pivaloyloxymethyl-rac-(5&S,6SR)-6-[ (RS ) -1-hydroxyethyl]-7-oxo-3-[(2-pyrimidinyl-thio)-methyl]-1-azabicyclo[3*2.0]hept-2-een-2-carboxylaat als kleurloze 10 olie.

IR (CHC1,): Vmav 3618, 3430, 1775, 1753, 1622, 1567, 1331 cm"1.

2 melX

De bereiding van het uitgangsprodukt is in voorbeeld X (a) beschreven.

Voorbeeld XIII

15 157 mg Pivaloyloxymethyl-rac-(2RS,3SB)-2-[3-[(p-aceetamino- fenyl)-thio]-acetonyl]-4-oxo-3-[(BS)-1-(trimethylsilyloxy)-ethyl]-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat worden op analoge wijze aan de in voorbeeld XII beschreven werkwijze onderworpen.

Men isoleerde na chromatografische zuivering 33 mg pivaloyloxyme-20 thyl-rac-(5BS,6SR)-3-[[(p-aceetaminofenyl)-thio]-methyl]-6-[(RS)- 1-hydroxyethyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3*2.0]hept-2-een-2-carboxylaat als amorf poeder.

IR (GHClj): Vaax 3618, 3434» 3382, 1778, 1755, 1695, 1619 om“1.

NMR (CDClj): é' 1,22 (s, 9H); 1,31 (d, J=6Hz, 3H); 1,91 (d, 25 J=4Hz, 1H)5 2,17 (s, 3H)j 2,85-3,10 (m, 2H); 3,08 (dxd, J=6,5Hz en 3Hz, 1H)j 3,89/4,07 (AB-systeem, J=13Hz, 2H); 4,07-4,18 (m, 2H); 5,68/5,78 (AB-systeem, J=5,5Hz, 2H)j 7,34 (d, J=8,5Hz, 2H); 7,36 (s, 1H); 7,44 (d, 30 J=8,5Hz, 2H) dpm.

De bereiding van het uitgangsprodukt is in voorbeeld X (a) beschreven.

Voorbeeld XIV

400 mg Pivaloyloxymethyl-rac-(2RS,3SR)-2-[3-[0 ,4,5,6-tetra-35 hydro-4-methyl-5,6-dioxo-as-triazin-3-yl)-thio]-acetonyl]-4-oxo- 3-[(BS)-1-(trimethylsilyloxy)-ethyl]-a-(trifenylfosforanylideen)- 1-azetidineacetaat werden op analoge wijze aan de in voorbeeld VIII beschreven werkwijze onderworpen. Men verkreeg na chromatografische zuivering 31 mg pivaloyloxymethyl-rac-(5ES,6SB)-6-[(RS)-l-hydroxy-40 ethyl]-3-[[(1,4,5,6-tetrahydro-4-raethyl-5,6-dioxo-as-triazin-3-yl)- 8200217 3k thio]-methyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3.2.0]hept-2-een-2-carboxylaat.

UV (EtOH): ^ = 280 nm (met NH-OH verschuiving naar 289 nm).

max d

De bereiding van het uitgangsprodukt is in voorbeeld X (a) beschreven.

5 Voorbeeld XV

Het produkt uit voorbeeld XIV werd op analoge wijze aan de in voorbeeld IX beschreven werkwijze onderworpene Men verkreeg een mengsel van natrium-(5R,6S en 5S,6R)-6-[(R en S)-1-hydroxyethyl]- 3-[ [ (1,^ »3»ö-tetrahydro-if-methyl-5 ,6-dioxo-as-triazin-3-yl) -thio ]- 10 methyl]-7-oxo-1-azabi cyclo[3·2.0 Jhept-2-e en-2-carb oxylaat.

UV (H-0): = 283 nm, 2 'max

Voorbeeld XVI

186 mg Pivaloyloxymethyl-rac-(2RS,3SR)-2-[3-[[2,5-<3ihydro- 2-methyl-5-oxo-6-[(pivaloyloxy)-methoxy]-as-triazin-3-yl]-thio]-13 acetonyl]-4-oxo-3-[(RS)-1-(trimethylsilyloxy)-ethyl]-a-(tri£enyl-fos£oranylideen)-1-azetidinacetaat werden analoog aan de in voorbeeld VIII beschreven werkwijze omgezet. Men verkreeg na chromatografische zuivering 65 mg pivaloyloxymethyl-rac-(5RS,6SR)- 6-[(RS)-1-hydroxyethyl]-3-[[[2,5-<5ihydro-2-methyl-5-oxo-6-[(piva-20 loyloxy)-methoxy]-as-triazin-3-yl]-thio]-methyl]-7-oxo-1-azabicy-clo[3*2.0]hept-2-een-2-carboxylaat als kleurloze olie.

IR (CHC1,): 3692, 361^1 3370, 1775, 1753, 1737, 1670, I62O cm"" .

NMR (CDCl^): ^ 1,22 (s, 18H); 1,31 (d, J=6Hz, 3H); 1,80 (d, 25 J=^»5Hz, 1H); 2,97-3*23 (m, 2H); 3,18 (dxd, J=6,5Hz en 2Hz, 1H); 3*70 (s, 3H); **,13-1*,28 (m, 2H); l*,lf0/ki5k (AB-systeem, J» 13,5Hz, 2H); 5,88/5,97 (AB-systeem, J=7Hz, 2H); 5,93 (2, 2H), dpm.

30 Het uitgangsprodukt werd als volgt bereid: (a) Aan een oplossing van 858 mg pivaloyloxymethyl-rac-(2RS,3SR)- 2-(3-broomacetonyl)-it-oxo-3-[(RS)-1-(2,2,2-trichloorethoxycarbonyl-oxy)-ethyl]-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat en 159 mg 1,2,3,4-tetrahydro-2-methyl-3-thioxo-as-triazin-5,6-dion in 35 10 ml dimethylformamide werden 202 mg triethylamine in 2 ml di- chloormethaan toegevoegd en vervolgens werd 20 minuten bij kamertemperatuur geroerd, De doorzichtige oplossing werd op 0°C gekoeld, 21*2 mg joodmethylpivalaat werden toegevoegd en er werd nog 15 minuten bij 0°C en 15 minuten bij kamertemperatuur geroerd. Men ver-1*0 dunde met ethylacetaat en waste achtereenvolgens met 5-procents 8200217 35 ' natriumwaterstofcarbonaat oplo s s ing en verzadigde natriumchloride-oplossing. De organische fase werd boven natriumsulfaat gedroogd» volledig geconcentreerd en het residu werd aan kiezelgel met ethyl-acetaat als loopvloeistof aan een chromatografische behandeling 5 onderworpen*

Het gezuiverde produkt werd analoog aan de in voorbeeld VIII

(i) beschreven werkwijze met zink in 90-procents azijnzuur en vervolgens met trimethylchloorsilaan behandeld* Men verkreeg na chromatografische zuivering 196 mg pivaloyloxyme thyl-rac-(2RS,3SR)-2-10 [3—C [2 »5-<3ihydro-2-methyl-5-oxo-6-[ ( pi valoyloxy ) -methoxy]-as- triazin-3-yl]-thio]-acetonyl]-4-oxo-3-[(RS)-1-(trimethylsilyloxy)-e thyl]-a-(tri fenylfos foranyli deen)-1-azet id ineac e taat als kleurloze olie*

Voorbeeld XVII

15 Het produkt uit voorbeeld XVI werd op analoge wijze aan de in voorbeeld IX beschreven werkwijze onderworpen* Men verkreeg een mengsel van (5R,6S en 5S,6R)-6-[(R en S)-1-hydroxyethyl]-3-[[2,5- dihydro-6-hydroxy-2-methyl-5-oxo-as-triazin-3-yl)-thio]-7-oxo-1- azabicyclo[3 *2.0]-hept-2-een-2-carbonzuur dinatriumzout· 20 ÜV (H,0): ^ = 22*2, 281 nm.

£* iosx ^ IR (KBr): V 1755» 1602 met schouder 1650, 1404 cm 1.

v max

Voorbeeld XVIII

180 mg Pivaloyloxymethyl-rac-(2RS,3SR)-2-[3“[[3-(methoxy-carbonyl)-1-methyl-1H-1,2,4-triazool-5-yl]-thio]-acetonyl ]-4-oxo-25 3-[(RS)-1-trime thylsilyloxy)-ethyl]-a-(tri fenylfos foranylid e en)- 1-azetidineacetaat werden aan de in voorbeeld VIII beschreven werkwijze onderworpen. Men verkreeg na chromatografische zuivering ongeveer 70 mg pivaloyloxymathyl-rac-(5RS,6SR)-6-[(RS)-l-hydroxy-ethyl]-3-[[[3-(methoxycarbonyl)-1-methyl-lH-1 j2»4-*triazool-,5-yl]-30 thio]-methyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3*2.0]hept-2-een-2-carboxylaat als kleurloze olie.

IR (CÏÏCl^): Vmax 3680, 3608, 3440, 1780, 1742, 1620 cm"1.

NMR (CDClj)ï 1,22 (s, 9H)j 1,32 (d, J=6Hz, 3H)j 1,82 (breed -0H-signaal); 3»03-3»15 (m, 2H); 3»26 (dxdj 35 J=6,5Hz en 3Hz, 1H); 3,89 (a, 3H); 3»9δ (s, 3H); 4,10-4,25 (m, 2H); 4,42/4*42 (gedegenereerd AB-systeem, J»13,5Hz; 2H); 5,85/5,93 (AB-systeem, J=5»5Hz, 2H) dpm*

De bereiding van het uitgangsprodukt is in voorbeeld X (a) 40 beschreven.

8200217 36

Voorbeeld XIX

Het produkt uit voorbeeld XVIII werd op analoge wijze aan de in voorbeeld IX beschreven werkwijze onderworpen· Men verkreeg een mengsel van natrium-(5R»6S en 5S,6S)-6-[(E en S)-1-hydroxyethyl]- 5 3-[[[3-(methoxycarbonyl)-1-methyl-1H-1,2 ,k-triazol-5-yl]-thio]- me thyl]-7 -oxo-azabicyclo[3«2.0]hept-2-een-2-carboxylaat.

HV (Ho0): = 278 nm (met NH-QH uitwisbaar).

(L ’max (L λ IE (KBr): 1738 met schouder 1753* 1591» 1395 cm” max

Voorbeeld XX

10 0,6 g Pivaloyloxymethyl-rac-trans~2-[3-[(1-methyl-1H-tetra- zool-5-yl)-thio]-acetonyl]-3-[1-methy1-1-(triraethylsilyloxy)-ethyl]-ij.-oxo-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat werd aan de in voorbeeld VIII beschreven ringsluitingswerkwijze onderworpen, met het verschil, dat ter verwijdering van de beschermende 15 trimethylsilylgroep het aan een chromatografische behandeling onderworpen ringsluitingsprodukt in 60 ml methanol bij aanwezigheid van 0,6 g ammoniumfluoride gedurende k uren bij kamertemperatuur werd geroerd* Men isoleerde ha chromatografische zuivering 52 mg pivaloyloxymethyl-rac-6a-(1-hydroxy-1-methylethyl)-3~[[(1-methyl-20 lH-tetrazool-5-yl)-thio]-methyl]-7-oxo-5a-1-azabicyclo[3»2.0]-hept-2-een-2-carboxylaat als kleurloze olie· UV (EtOH): λ = 296 nm (met EE.QH uitwisbaar).

max d ^ IE (CHC1,): Ϋ a 3690, 3610, 1779» 1752, 1730, 1622 cm” . y max

Heu uitgangsprodukt werd als volgt bereid: 25 (a) Aan een oplossing van 8,56 g rac-if-[ (2-methyl-1,3-dioxolan- 2-yl)-methyl]-2-azetidinon in 150 ml tetrahydrofuran werden bij -30°C in k minuten 65,5 ml van een 1,6 molaire butyllithium/he-xaanoplossing toegevoegd en vervolgens werd gedurende 90 minuten in een ijsbad in een atmosfeer van argon bewaard. De bruingele 30 oplossing werd op -30°C gekoeld en een oplossing van 3,2 g ace-ton in 10 ml tetrahydrofuran werd toegevoegd0 Men roerde nog 30 minuten bij 0°C en goot de reactieoplossing op 50 g ijs. De organische fase werd afgescheiden en met 50 ml van een verzadigde oplossing van natriumchloride gewassen· De verenigde waterfasen wer-35 den nog met in totaal 300 ml dichloormethaan geextraheerd· De organische fasen werden boven natriumsulfaat gedroogd, bij een verminderde druk volledig geconcentreerd en de achterblijvende olie werd aan kiezelgel aan een chromatografische behandeling onderworpen·

Een mengsel van aceton en dichloormethaan (volumeverhouding 1 : 8) k0 elueerde eerst niet verbruikt uitgangsprodukt, daarna rac-cis-3- 8200217 37 (l-hydroxy-1-methylethyl)-4-[ (2-methyl-1, 3- d i oxolan-2-y1) -me thy 1 ]- 2- azetidinon, dat na kristallisatie uit ethylacetaat/hexaan als 0,80 g witte kristallen met een smeltpunt van 134-135°C verkregen werd· 5 IR (CHCl): ]/aax 3604, 3424* 1751 cm"1.

Door verder elueren verkreeg men rac-trans-3-(1-b.ydroxy-1-methylethyl)-4-[(2-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon, dat uit ethylacetaat/hexaan 1,59 g witte kristallen met een smeltpunt van 84-S6°C gaf, 10 IR (CHCl,): v 3604, 3420, 1731 cm"1.

p max (b) De in voorbeeld VIII (a) en (d)-(i) beschreven werkwijzen werden op analoge wijze op 4 g rac-trans-3-(l-hydroxy-1-methyl-ethyl)-4-[(2-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon toegepast· Men verkreeg 0,96 g pivaloyloxymethyl-rac-trans-2-[3-[(1-me-15 thyl-1H-tetrazool-5-yl)-thio]-acetonyl]-3-[l-methyl-1-(trimethyl-silyloxy)-ethyl]-4-oxo-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidine-acetaat als kleurloze olie· IR (CHCl,); Vmav 1744, 1635 cm"1.

p max

Voorbeeld XXI

20 Het produkt uit voorbeeld XX werd op analoge wijze aan de in voorbeeld IX beschreven werkwijze onderworpen# Men verkreeg een mengsel van natrium-(5R»6S en 5Si6R)-6x-(l-hydroxy-1-methylethyl)- 3- [[(1-methyl-1H-tetrazool-5-yl)-thio]-methyl]-7-oxo-5a-1-azabicy- clo[3·2.0]hept-2-een-2-carboxylaat.

25 UV (H-0): l? = 279 um (met ΝΗ-0Η uitwisbaar).

'2 r max 2

Voorbeeld XXII

230 mg Pivaloy1oxymethy1-rac-1rans-2-[3-[(1-methyl-1H-tetra-zool-5-yl)-thio]-acetonyl]-4-oxo-3-[(trimethylsilyloxy)-methyl]-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat worden aan de in 30 voorbeeld VIII beschreven werkwijze onderworpen, met het verschil, dat de reactietijd van de ringsluitingsreactie 30 minuten bedroeg. Men isoleerde na chromatografische zuivering 66 mg pivaloyloxy-methyl-rac-6a-(hydroxymethyl)-3-[[(1-methyl-1H-tetrazool-5-yl)-thio]-me thyl]-7-oxo-5a-1-azabicyclo[3.2.0]hept-2-een-2-carboxylaat 35 als kleurloze olie, UV (StOH): /) = 289 nm (met ΝΞ-0Η uitwisbaar).

Π13Χ & IR (CHCl-): V3440, 1782, 1752, 1619 cm"1.

p ulcLX

Het uitgangsprodukt werd als volgt bereid; (a) 15,8 g tert.Butyldimethylchloorsilaan en 25,2 g rac-4-(3- 40 broom-2,2-dimethoxypropyl)-2-azetidinon werden achtereenvolgens in 8200217 38 150 ml dimethylformamide opgelost, de oplossing werd op 0°C gekoeld en onder roeren werden 22,0 g triethylamine toegevoegd, waarbij een neerslag ontstond. Men roerde 15 minuten bij 0°C, verdunde met 1 liter ether/hexaan (volumeverhouding 1 : 1) en ex-5 traheerde viermaal met telkens 400 ml water. De waterfasen werden nog met 500 ml ether/hexaan (volumeverhouding 1:1) teruggeextra-heerd, de organische fasen werden boven natriumsulfaat gedroogd en volledig geconcentreerd. De achterblijvende olie werd in weinig hexaan opgenomen en bij -20°C bewaard. Men verkreeg 31 »3 g rac-10 4-(3-broom-2,2-dimethoxypropyl)-1-(tert.butyldimethylsilyl)-2-aze-tidinon als witte kristallen met een smeltpunt van 61 - 63°C.

(b) 7»06 g rac-4-(3“broom~2,2-dimethoxypropyl)-1-(tert.butyldi- methylsilyl)-2-azetidinon werden op analoge wijze aan de in voorbeeld VIII (b) beschreven werkwijze onderworpen, met het verschil, 15 dat in'plaats van methylacetaat 6,0 g methylformiaat werden toegepast. Men verkreeg door kristallisatie van het door chromatografie gezuiverde produkt uit ether/petroleumether 2,19 g rac-trans~4-(3-broom-2,2-dimethoxypropyl)-1-(tert.butyldimethylsilyl)-3-formyl-2-azetidinon als witte kristallen met een smeltpunt van 70 - 72°C.

20 (c) Aan een op 0°C gekoelde oplossing van 788 mg rac-trans-4- (3-broom-2,2-dimethoxypropyl)-1-(tert.butyldimethylsilyl)-3-formyl-2-azetidinon in 12 ml methanol werden 38 mg natriumboorhydride toegevoegd en het reactiemengsel werd 10 minuten geroerd. Men verdunde met ethylacetaat, waste met een verzadigde oplossing van natrium-25 chloride, droogde de organische fase boven natriumsulfaat en concentreerde volledig. Kristallisatie van het residu uit ethylacetaat/ hexaan gaf 685 mg rac-trans-4-(3-broom-2,2-dimethoxypropyl)-1-(tert.butyldimethylsilyl)-3-(hydroxymethyl)-2-azetidinon als witte kristallen met een smeltpunt van 119 - 120°C.

30 (d) 7187 g rac-trans-4-(3-broom-2,2-dimethoxypropyl)-1-(tert.bu- tyldimethylsilyl)-3-(hydroxymethyl)-2-azetidinon werden aan de in voorbeeld VIII (d) beschreven werkwijze onderworpen en het kristal-lijne reactieprodukt werd vervolgens in 240 ml methanol bij aanwezigheid van 0,70 g ammoniumfluoride gedurende 20 minuten bij kamer-35 temperatuur geroerd. Men verkreeg na waterige opwerking en kristallisatie van het onzuivere produkt uit ethylacetaat/hexaan 7j°6 g rac-trans-4-(3-broom-2,2-dime thoxypropyl)-3-[(2,2,2-tri chloore thoxy-carbonyloxy)-methyl]-2-azetidinon met smeltpunt 108 - 109°C.

(e) De in voorbeeld VIII (f)-(i) beschreven reactievolgorde werd 40 op analoge wijze op 5i2 g rac-trans-4-(3-broom-2,2-dimethoxypropyl)- 8200217 39 . ‘ 3- [(2,2,2-trichloorethoxycarbonyloxy)-methylJ-2-azetidinon toege-past. Men verkreeg 0,23 g pivaloyloxymethyl-rac-trans-2-[3~[(l- methyl-1H-tetrazool-5-yl)-thio]-acetonyl]-4-oxo-3-[(trimethylsi-lyloxy)-methyl]-a-(trifenylfosforanylideen)-1-azetidineacetaat 5 als kleurloze olie·

Voorbeeld XXIII

Het produkt uit voorbeeld XXII werd op analoge wijze aan de in voorbeeld IX beschreven werkwijze onderworpen. Men verkreeg een mengsel van natrium-(52,6S en 5S,6R)-6a-(hydroxymethyl)-3-[[(l-me- 10 thyl-1H-tetrazool-5-yl)-thio]-methyl]-7--oxo-5a-1-azabicyclo- [3,2«0]hept-2-een-2-carboxylaat.

UV (H_0): /\ a 277 um (met NH_0H uitwisbaar).

2 ' max 2

Voorbeeld XXIV

41 mg rac-1-(tert.butyldimethylsilyl)-3-(Z)-ethylideen- 1-5 4-[(2-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon werden in 2 ml ethylacetaat bij aanwezigheid van 50 mg platinadioxide bij normale druk gehydrogeneerd· Men verkreeg een 6:1 cis/trans-iso-merenmengsel, waaruit de hoo'fdcomponent door gefractioneerde kristallisatie van het onzuivere produkt uit hexaan in zuivere vorm 20 verkregen kon worden: rac-cis-1-(tert.butyldimethylsilyl)-3-ethyl- 4- [(2-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon, smeltpunt 80 - 82°C.

Het uitgangsprodukt werd als volgt bereid:

Aan een op 0°C gekoelde oplossing van 330 mg rac-(3SR,4Ss)-25 1—(tert.butyldimethylsilyl)-3-[(SR)-1-hydroxyethyl]-4-[(2-methyl- 1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon en 400 mg trifenylfosfien in 20 ml tetrahydrofuran werden 300 mg azodicarbonzuur-diisopro-pylester toegevoegd en de oplossing werd gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. Daarna werd tussen water en ethylacetaat 30 verdeeld, werd de organische fase boven natriumsulfaat gedroogd en volledig geconcentreerd. Het residu werd aan kiezelgel met ethyl-acetaat/dichloormethaan/hexaan (volumeverhouding 1:1:2) als loopvloeistof aan een chromatografische behandeling onderworpen en het gezuiverde produkt werd uit hexaan herkristalliseerd. Men ver-35 kreeg 100 rag rac-1-(tert*butyldimethylsilyl)-3-(Z)-ethylideen-4-[(2-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon als kleurloze kristallen met smeltpunt 85 - 86°C.

IR (CHC1-): I? 1722 cm"1.

3 v max

Voorbeeld XXV

40 1,04 g rac-cis-1-(tert.butyldiraethylsilyl)-4-[(2-methyl-1,3- 8200217 ♦ i. * ¥3 dioxolan-2-yl)-methyl]-3-[l-raethyl-1-[(2,2 ,2-trichloorethoxy-carbonyloxy)-ethyl]-2-azetidinon werden op analoge wijze aan de in voorbeeld VIII (e) beschreven werkwijze onderworpen* met het verschil, dat de bromering bij een temperatuur van 45°G werd uitge-5 voerd· Men isoleerde na chromatografische zuivering en kristallisatie uit ethylacetaat/hexaan 0,5^ g rac-cis-ii.-(3-broom-2,2-dimetho-xypropyl)-3-[1-me thyl-1-(2,2,2-trichloorethoxycarbonyloxy)-ethyl]- 2-azetidinon als kleurloze kristallen met smeltpunt 1Qif - 106°C.

IH (GHC1 ): \?max 1765 onf1.

10 Het uitgangsprodukt werd als volgt bereid:

rac-cis-3-(l-hydroxy-1-methylethyl)-if-[(2-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon werd in analogie aan iï£;evoorbeeld VIII (a) en (d) beschreven werkwijze omgezet. Men verkreeg na kristallisatie uit hexaan rac-cis-1-(tert.butyldimethylsilyl)-4-[(2-me-15 thyl-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-3-[l-methyl-1-(2,2,2-trichloor-ethoxycarbonyloxy)-ethyl]-2-azetidinon met smeltpunt 89 - 91°G* Voorbeeld XXVI

Past men (—)-(3S,4E)-1-(tert.butyldimethylsilyl)-3-[(E)-1-hydroxye thyl ]-if-[(2-me thyl-1,3-<ïioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon 20 als uitgangsmateriaal toe voor de in voorbeeld VIII beschreven, van trap (d) uitgaande reactievolgorde en onderwerpt men het pro-dukt aan de in voorbeeld IX beschreven werkwijze, dan verkrijgt men natrium-(5R,6S)-6-[(E)-1-hydroxyethyl]-3-[[(l-methyl-1H-tetra-zool-5-yl)-thio]-methyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3«2.0]hept-2-een-2-25 carboxylaat.

ÏÏV (H-0): λ = 278 nm (met NH_0H uitwisbaar).

2 max d

Het uitgangsprodukt werd als volgt bereid: (a) Aan een op 0°C gekoelde oplossing van 19»8 g rac-(3SR,4RS)-1-(tert.butyldimethylsilyl)-3-[(HS)-1-hydroxyethyl]-¥-[(2-methyl-30 1,3-clioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon in 120 ml pyridine werden 18,8 g (-O-camfaanzuurchloride toegevoegd. Men roerde gedurende 22 uren bij kamertemperatuur. Daarna werd het reactiemengsel met 1,2 liter ethylacetaat verdund en na elkaar met telkens 360 ml van een verdunde natriumwaterstofcarbonaatoplossing en een verzadigde 35 natriumchlorideoplossing gewassen. De waterfasen werden met 1 liter ethylacetaat teruggeëxtraheerd, de verenigde organische fasen werden boven natriumsulfaat gedroogd, volledig geconcentreerd en het residu werd aan kiezelgel aan een chromatografische behandeling onderworpen. Een mengsel van ethylacetaat/dichloormethaan/hexaan 40 (volumeverhouding 1:6:6) elueerde eerst een (+) draaiende 8200217 I if 41 camfaanzuurester, die uit ether/hexaan gekristalliseerd kon worden. Men verkreeg (+)-(3R»4S)~1-(tert.butyldimethylsilyl)-3~ [ (iS)-l-camfanoyloxyethyl ]-!*-[ (2-methyl~1 ,3--dioxolan-2-yl)-methyl ]-2-azetidinon met smeltpunt 125 - 127° C en [a]p0 = +15iO° (c = 1* 5 EtOAc). Na enkele mengfracties werden fracties verkregen, die als hoofdcomponent een (-)-draaiende camfaanester bevatten. Deze werd door kristallisatie uit ether/hexaan gezuiverd. Men verkreeg (-)-(3S ,4R)-1-tert-butyldimethylsilyl)-3-[(IR)-l-camfanoyloxy-ethyl,]-4-[ (2-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon met 10 smeltpunt 112 - 113°C en [a]^° = -19*9° (c = 1, EtOAc).

(b) Aan een oplossing van 0,5 g (“)-(3S,4R)-1-(tert.butyldime-thylsilyl)-3-[(lH)-1-camfanoyloxyethyl]-4-[(2-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon van trap (a) in 10 ml tolueen werden bij 0°C 4 ml van een 1,12 molaire oplossing van diisobutylalumi-15 niumhydride in hexaan toegevoegd en het reactiemengsel werd vervolgens gedurende 2 uren bij kamertemperatuur geroerd. Men goot op een verzadigde natriumchlorideoplossing ..en men extraheerde met ethyl-acetaat. De organische fasen' werden nogeens met een verzadigde oplossing van natriumchloride gewassen, boven natriumsulfaat ge-20 droogd en volledig geconcentreerd. De achterblijvende olie werd aan kiezelgel met ethylacetaat/hexaan (volumeverhauding 1 : 1) als elueermiddel aan een chromatografische behandeling onderworpen.

Men verkreeg na tweemaal kristallisatie uit hexaan (~)-(3S,4R)-1-(tert.butyldimethylsilyl)-3-[(R)-1-hydroxyethyl]-4-[(2-methyl-25 1,3-dioxolan-2-yl)-methyl]-2-azetidinon met smeltpunt 83 - 84°C en [a]^° = -50,8° (c = 1, EtOAc).

Voorbeeld XXVII

Aan een op 0°C gekoelde oplossing van 10 mg natriura-(5R,6S en 5S,6R)-6-[(R en S)-1-hydroxyethyl]-3-[[(l-methyl-tetrazool-1H-5- 30 yl)-thio]-methyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3.2.0]hept-2-een-2-carboxy- laat in 0,2 ml dimethylformamide werden 7 mg broommethylacetaat toegevoegd en vervolgens werd 1 uur bij kamertemperatuur geroerd.

Men verdunde met ethylacetaat, waste met een 0,05 molaire fosfaat- buffer met een pH van 7i droogde boven natriumsulfaat en concen- 35 treerde volledig. Chromatografie van het residu aan kiezelgel met ethylacetaat/dichloormethaan als elueermiddel gaf 1,8 mg acetoxy- methyl-(5R,6S en 5S,6R)-6-[(R en S)-1-hydroxyethyl]-3-[[(l-methyl- 1H-tetrazool-5-yl)-thio]-methyl]-7-oxo-1-azabicyclo[3.2.0]hept-2- een-carboxylaat als bleekgele olie.

40 UV (EtOH): λ = 295 am (met NIL.OH uitwisbaar).

max & 8200217 42 IR (CHC1 ): ^max 17711 1738.

Voorbeeld XXVIII

Door zinvolle toepassing van de in de voorafgaande voorbeelden beschreven werkwijzen kunnen de in tabel A vermelde verbindingen 5 met formule 1 bereid worden· Daarbij kan het onder bepaalde omstandigheden van voordeel zijn de volgorde van de reactietrappen te veranderen of in bepaalde gevallen andere beschermende groepen toe te passen. De verbindingen 28), J>0) » 43) resp. 44) worden door omzetting van verbindingen 27)» 29)» 41) resp· 21) volgens alge-10 meen bekende methoden» bijvoorbeeld met raethylformimidaat in waterige oplossing bij een pH van 8 - 8»5 verkregen.

8200217 - b3 - R2 Η .

rU

|6 15 \

I I yV—CHg—X I

/?—

COOH

ƒ fr

Tabel^e-"!

Verbinding R1 R2 X zout

H * N

1) H -CH2CH3 ^ £ Na

“s I

ch3 “jv.

« H.

2) H -CH^CH, AN'X

2 3 — S/ N ^COOCHj 3) H -CH2CH3 —s^h^o "

OH

4) —CHCH0CH0 H l~*\ 2 3 Λ»* S i CH.

OH 3 5} -CHCH0CH-, H //“J " 2 3 CHjCOOHa

OH

I CH3>s /NX/®* 6) -CHCH2CH3 H jf T " —S'^VsNX^%'0

OH

I 1! '' 7) -CH-CF, H ./A·3

3 ” I

ch3

OH N~*N

% i Jf i

8 -CHr-CF H

3 Cil3 i i 8200217 - kk - - 2*1 ' Ί

Verbinding R R X -zout

OH

J CH3~v /H^Wi 9) -CH-CF3 H ΛΑ Na OH /-¾

10) -CH-CH3 ; H

H

11) “ » _,A\ —s | COOCHjCHj | 12) . " - 13) ·· " Na

H

i n 14) " " S*»'· "

mmS' N

s — u 15) " " -G'/^N>^Sca " ”*3 .

S —s 16 ) " "

17) " » XX

-S s 'coONa

^CHJ

18) " " t-—S ^ s ^COOCHjCHj 19) " " AX) •S 5 i i i ί 8200217 - 45 - 14 · * R I R X zout

OH

J CH2CH2OH

20) -CH-CH3 h Ji\ Na

-S ^CH

1 · 3 ί ✓ CH-CH.NH,

! jK

2D " ” I

I »

' I

22) " " ; 3 Na ί 'CH-j

i A . I

23) " " ; An A | » ; “Λ _ j 24) " " : AA *! " i CONH, ’· 2 [ i ! 25) " ·· ί r\ - _sAAC0ONa ch3n

i N—N

26) " ·· — “n 27) " " 7·-«.

C"3N

28) " ·· Γ\\ _

CH2-NH-CH*NH

CH3\ n""n

29) " " __SAA

CHj-CH2-NH2 ®3 S, N*”N. _

30) i " A

j ——S' N ^ CHjCHjNH-CH-NH

! ί lil I 1 8200217 i j - Ifé -

Verbindingj X

. 'r i OH

' H »

31) -CH-CH-j H

_A.K

ch3

• i -n/H

I 32) ·· " fj - i —S * •i - i ’ CT3\ : ; . 331 " ΛΚ “'s CONHCH2CH2HH2 CH3CHiS /***% 34) " /-¾ H2N\ 35 ) ' " “ _SA/ H2M \ V HH-NH2 ]~ζ

36) " " „syVN

^γγ0** * 37) " 33) ·· " Χί

NH2 N — N

39) " " yAj

' S I

COOCHj

N —N

// 40) " " „./A-21

CH2-COONa N —N

41) " " I yA „)»

“ I

CH2CH2NH2 I i I i ! ! I I 1 i 8200217 _______ ί * -- i ν <· - ί > ί ί ; ' - 47, - ί ; ' i Ï 2 1

Verbinding R R X

N —N

?H _A* . 42) -CK-CH Η I yen, ^ * ^ch3 M — N // * 43) " ”

i I

\ CH2CH2-NH-CH»NH

f ych2ch2nh-ch«nh 44) " " ' ·—S S ^CH3 0 45) " » X) 0 N fT 2 3 46) · Λ 47) " " \ji ^C”3 ; 0 48) " *· ’ 0

49) - - A

—S^N^ch I 3 f CH3 ; 50) " " Λ. Nv

NX

51) " " I nA

Ι _,αλ,

« I

I H

ι \ i I 1 i 1 ι 8200217 i I i - 48 - * ί .

- - , ο Γ-

Verbinding R j R X zout °H n^y'Co°chjch3 52) -CH-CH H I A Na -3 —s^'n'^Nh2 o 531 _ΑΛ NHNH2

54) " " jfS

0 Λ 55) ” " -.AJ Na

H

O

56) ·· .. Λ · ··

—S ^ H

- H

571 " Λ,λ —S N HHCHj ‘ rf'** 58) " " _.Λλ « nh2 59) " - _SAN^ ~“s ** ^NH2

OH

60) " " I P-chj „

>S KN

__g ' ^ N ^ Λ 61) " " " n 62 ) " " COONa 1 8200217 - 49 - __

Verbinding R R X zout , 'H J0

63) -CH-CH3 H

conhch2ch2nh2 nk2 64) " " ιΓί " Na

_SAA

65) " H _sj0^OH

0 Λ 66) " " " OCHjCHjCHj Γ3 67) " " ». r5] "

_s AA

CH

xN^s^-OCHj

68 ’ · " AA

69) " " (Γί. " 0 70) " " -0-C-CH3 " ?/CH3 -X\

711 H -C<CH8 -I

J CH3 CH3·^ ^N^>/0Na

72} " " AA

N — N

73) " " At

— ' H

- Ιηγη,ν'·™3 2 2v'CK3 j_!_!___ 8200217

Λ I

50

Voorbeeld XXIX

Bereiding van droge ampullen voor de intrarausculaire toediening.

Op gebruikelijke wijze wordt een lyofilisaat van 500 mg 5 natrium-(5R»6S)-6-[(B)-1-hydroxyethyl]-3-[[(l-methyl-1H-tetrazool- 5- yl)-thio]-methyl]-7~oxo-1-azabicyclo[5.2.0]hept-2-een- 2-carboxy-laat bereid en in een ampul afgevuld. Voor de toediening worden aan het lyofilisaat 2,5 ml van een 2-procents oplossing van lido-caïnehydrochloride in water toegevoegd.

10 Voorbeeld XXX

Op gebruikelijke wijze werd een gelatine-capsule met de volgende samenstelling bereid:

Pivaloyloxyme thyl-(5R,6S)-3-[[(1-ethyl-1,2-dihydro-2-oxo-lf-pyrimidinyl) -thio]-methyl]-15 6-[(E)-1-hydroxyethyl]-7-oxo-1-azabicyclo- [3.2.0]hept-2-een-2-carboxylaat 500 mg

Luviskol (in water oplosbaar polyvinylpyrrolidon) 20 mg

Mannitol 20 mg

Talk 15 mg 20 Magnesiumstearaat 2 mg 557 mg

Voorbeeld XXXI

Op de volgende wijze werd een tablet met de volgende samenstelling bereid: 25 Pivaloyloxymethyl-(5E,óS)-3-[[(l-ethyl-1,2- dihydro-2-oxo-it-pynmidinyl) - thio ]-methyl]- 6- [(E)-1-hydroxyethyl]-7-oxo-1-azabicyclo- [3*2.0]hept-2-een-2-carboxylaat 250 mg

Lactose 70 mg 30 Maïszetmeel 65 mg

Polyvinylpyrrolidon 10 mg

Magnesiumstearaat 5 mg 1).00 mg

Met de werkzame stof, de lactose, het polyvinylpyrrolidon en 35 1+0 gew.dln van het maïszetmeel wordt op gebruikelijke wijze een granulaat bereid. Dit wordt met de resterende 25 gew.dln maïszetmeel en 5 gew.dln magnesiumstearaat gemengd en tot tabletten geperst.

8200217

Claims (18)

1. Bicyclische verbindingen met de algemene formule 1, waarin 1 2 een van de substituenten R en R waterstof en de andere waterstof of een al of niet gesubstitueerde alkylgroep met 1 tot 4 koolstof-5 atomen en X een al of niet gesubstitueerde alkanoyloxygroep met 1 tot 3 koolstofatomen, een al of niet gesubstitueerde cycloalkyl-thiogroep met 3 tot 7 koolstofatomen, alkenyltbiogroep met 2 tot 6 koolstofatomen of heterocyclische thiogroep of een gesubstitueerde alkylthiogroep met 1 tot 4 koolstofatomen of fenylthiogroep voor-10 stelt , de gemakkelijk hydrolyseerbare esters ervan, farmaceutisch verenigbare zouten ervan, alsmede hydraten van deze verbindingen.

2. Verbindingen volgens conclusie 1, met het k e n - 1 2 merk, dat een van de substituenten R en R waterstof en de andere waterstof, alkyl met 1 tot 4 koolstofatomen of alkyl met 15. tot 4 koolstofatomen gesubstitueerd met fluor, chloor, broom; een -S(0) -R' met n = 0, 1, 2 en R' = alkyl met 1 tot 3 koolstof-n atomen; een -C0-R' rest met R’ = hydroxy, alkoxy met 1 tot 3 koolstofatomen, alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen, amino, alkylamino met 1 tot 3 koolstofatomen of dialkylamino met 1 tot 3 koolstof-20 atomen in de alkylgroep; een aminorest -NR'R", waarbij R’ en RH waterstof of alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen voorstellen of een 0R’ rest met R’ = waterstof, methyl, SO^ÏÏ, CH^OCOR" (r” = alkyl met 1 tot 4 koolstofatomen) voorstelt.

3. Verbindingen volgens conclusie 2, met het ken- 1 2 25 merk, dat een van de substituenten R en R waterstof en de andere waterstof, ethyl, hydroxymethyl, 1-hydroxyethyl, 1-hydroxy-propyl, 1-hydroxy-2,2,2-trifluorethyl of 1-hydroxy-1-methylethyl is.

4. Verbindingen volgens een van de conclusies 1-3, met 30 het kenmerk, dat X alkanoyloxy met 1 tot 3 koolstofatomen of alkanoyloxy met 1 tot 3 koolstofatomen gesubstitueerd met hydroxy, alkoxy met 1 tot 3 koolstofatomen, fenyl of alkylthio met 1 tot 3 koolstofatomen voorstelt.

5. Verbindingen volgens een van de conclusies 1 - 3i met 35 het kenmerk, dat X alkylthio met 1 tot 4 koolstofatomen gesubstitueerd met fenyl, dat gesubstitueerd kan zijn met een of meer fluor-, chloor- of brooiaatomen, alkylgroepen met 1 tot 3 koolstof aromen, alkylthiogroepen met 1 tot 4 koolstofatomen, alkanoylgroepen met 40 1 tot 3 koolstofaromen, carboxylgroepen of alkoxycarbonylgroepen 8200217 * , 52 met 1 tot 3 koolstof atomen; of met een -(CH^^-NRR1 -(CH_) -NHCR=NR» of -(OH.) -N=CR-N(R‘)_ groep, waarbij η = 0, 1, du du d 2 of 3 kan zijn en R en B' waterstof of alkyl met 1 tot 3 koolstof atomen is; 5 fluor, broom; een oxime- of oximeetherrest =N-QR’ (R* = ïï of alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen) in syn- of anti-vorm; een uit 3-7 atomen bestaande monocyclische, verzadigde, onverzadigde of aromatische heterocyclische ring met 1-4 hetero-10 atomen (N, 0, S; die gesubstitueerd kan zijn met een of meer fluor-, chloor- of broomatomen, alkylgroepen met 1 tot 3 koolstof-atomen, alkylthiogroepen met 1 tot 4 koolstofatomen, alkanoylgroe-pen met 1 tot 3 koolstofatomen, carboxylgroepen of alkoxycarbonyl-groepen met 1 tot 3 koolstofatomen; of met een -(CH^)^-NRR' of 15 -(CH_) -NH-CR=NR» of -(CH.) -N=CR-N(R*)0 groep, waarbij n = 0, 1, dU dU d 2 of 3 kan zijn en R en R’ waterstof of alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen is, alsmede door oxogroepen); een cycloalkylrest met 3 tot 6 koolstofatomen; een -S(0) -R' rest (met n = 1 of 2 en R’ = alkyl met 1 tot 3 n 20 koolstofatomen); een -COR1 rest [met R’ = alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen, fenyl, fenoxy, benzyloxy, cycloalkyl met 3 tot 6 koolstofatomen of een uit 3-7 atomen bestaande heterocyclische groep met 1-4 hetero-atomen (N, 0, S), die op de hiervoor vermelde wijze gesubstitueerd 25 kan zijn, voorstelt·

6. Verbindingen volgens een van de conclusie 1 tot 3» met het kenmerk, dat X fenylthio gesubstitueerd met een of meer fluor-, chloor- of broomatomen, een van de groepen 30 -(CHn) -NRR', -(CH_) -NR~CR'=NR" en -(CH_) -N=CR-NR'R" (met n = 2 n 2 n 2 n 0, 1, 2, 3 en fi, E' en E1' H of alkyl met 1 tot 3 koolstofatomen, alkanoyl met 1 tot 3 koolstofatomen) of ook met alkylgroepen met 1-3 koolstofatomen, alkanoylaminogroepen met 1-3 koolstofatomen, hydroxylgroepen, alkoxygroepen met 1-4 koolstofatomen of acyloxy-35 groepen voorstelt.

7. Verbindingen volgens een van de conclusies 1 tot 3, met het kenmerk, dat X cycloalkylthio met 3 tot 7 koolstofatomen of cycloalkylthio met 3 tot 7 koolstofatomen gesubstitueerd met een of meer oxogroepen, hydroxylgroepen, alkylgroepen met 1 tot 40. koolstofatomen, alkoxygroepen met 1 tot 4 koolstofatomen, carb- 8200217 'V * oxylgroepen of alkoxycarbonylgroepen of met een van de groepen -(CHJ -NES', -(CH_) -NR-CR^NE» en -(CH,) -IfcCR-NR1R” (met n = 2 n 2 a 2 a 0, 1j 2j 3 en R, R’ en R" H of alkyl met 1-3 koolstofatomen, alkanoyl met 1-3 koolstofatomen) of met een of meer acylresten 5 van een alifatisch of aromatisch carbonzuur met 1-7 koolstofato-men voorstelt.

8. Verbindingen volgens een van de conclusies 1 tot 3» met het kenmerk, dat X alkenylthio met 2-6 koolstofatomen of alkenylthio met 2-6 koolstofatomen gesubstitueerd met een van 10 de groepen -(CH„) -NRR’, -(CHJ -NR-CR‘=NR" en -(CH_) -NzzCR-NR'R" d n dn £ n (met n = 0, 1, 2, 3 en fi, R' en Htt H of alkyl met 1-3 koolstofatomen » alkanoyl met 1-3 koolstofatomen) of ook met alkyl met 1-3 koolstofatomenj fenyl, een uit 3-7 atomen bestaande verzadigde, onverzadigde of aromatische heterocyclische rest met 1 - 4 15 heteroatomen (stikstof, zuurstof, zwavel), cyaan, carboxy, alkoxy-carbonyl met 1 - 4 koolstofatomen, aminocarbonyl of acylamino voors'telt.

9. Verbindingen volgens' een van de conclusies 1-3, met het kenmerk, dat X een uit 4-7 atomen bestaande mono- 20 cyclische, verzadigde, onverzadigde of aromatische heterocyclische ring met 1-4 heteroatomen (N, 0, S) voorstelt, die gesubstitueerd kan zijn met fluor, chloor, broom, oxo, imino, alkyl met 1 tot 5 koolstofatomen, alkylthio met 1-3 koolstofatomen, hydroxy, cyaan, N-oxido, trifluormethyl, alkoxy met 1-4 koolstof-25 atomen, alkanoyloxy met 1-4 koolstofatomen, fenoxy, alkanoyl met 1-4 koolstofatomen, fenoxycarbonyl, pivaloyloxymethoxycarbonyl» carbamoyl, alkylcarbamoyl met 1-3 koolstofatomen in de alkyl-groep en/of dialkylcarbamoyl met 1-3 koolstofatomen in de alkyl-groepen of met -(CH^i^NER*, -(CH^^-NR-CR1 =NR" of 30 -(CH„) -NsCR-NR'R" met n = Ö, 1, 2, 3 en R, R' en R" = H, alkyl d n met 1-3 koolstofatomen, alkanoyl met 1-3 koolstofatomen; of met -(CH-) -COR1 met n = 0, 1, 2, 3 en S' = hydroxy, alkoxy met d n 1-3 koolstofatomen, amino of -NH-(CH-) -NEL, waarin m = 2, 3, 4; d m d of ook met -(CH_) OH met n = 0, 1, 2, 3 voorstelt. d n

10. Verbindingen volgens een van de conclusies 1-3, met het kenmerk, dat X 2-(acetylamino)-vinylthio, (1-methyl-1H-tetrazool-5-yl)-thio, (1,4,5,6-tetrahydro-4-methyl- 5,6-dioxo-as-triazin-3-yl)-thio, (2,5-dihydro-6-hydroxy-2-methyl- 5-oxo-as-triazin-3-yl)-thio, (1-ethyl-1,2-dihydro-2-oxo-4-pyrimi-40 dinyl)-thio, (5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)-thio of acetoxy 8200217 ‘ ' 5k voorstelt.

11. Verbindingen volgens een van de conclusies 1 - 10j zoals zij als eindprodukten in een van de voorbeelden I - III gedefinieerd zijn.

12. Verbindingen volgens een van de conclusies 1 - 10j zoals zij als eindprodukten in een van de voorbeelden IV - XXVIII gedefinieerd zijn.

13· Verbindingen volgens een van de conclusies 1-10, met de algemene formule 1a, alsmede de geraakkelijk hydrolyseerbare esters 10 ervan, farmaceutisch verenigbare zouten ervan, alsmede hydraten van deze verbindingen. 1^· Verbindingen met de algemene formule 2, waarin R1, R2, R^, R^, R^, R^ en X de in conclusie 19 aangegeven betekenis hebben, waarbij X ook broom kan voorstellen. 15 15· Verbindingen volgens een van de conclusies 1-13 als farmaceutisch werkzame stoffen.

16. Verbindingen volgens een van de conclusies 1-13 als farmaceutisch werkzame stoffen voor de behandeling en profylaxe van infectie-ziekten. 20 17· Farmaceutische preparaten, gekenmerkt door een gehalte aan een verbinding volgens een van de conclusies 1-13·

18. Farmaceutische preparaten voor de behandeling en profylaxe van infectie-ziekten, gekenmerkt door een gehalte aan een verbinding volgens een van de conclusies 1-13·

19. Werkwijze ter bereiding van een verbinding volgens con clusie 1, met het kenmerk, dat men een verbinding 12 met formule 2, waarin R , R en X zoals m conclusie 1 gedefx- 3 k 5 nieerd zijn, R een gemakkelijk afsplitsbare rest is en R , R en R^ alkyl met 1-6 koolstofatomen, fenyl of p-methoxyfenyl voor-30 stellen, doet ringsluiten, eventueel de in een substituent aanwezige beschermende groep afsplitst en eventueel de verkregen ester 3 omestert, eventueel door afsplitsing van de rest R in het vrije zuur resp. een zout ervan omzet en eventueel een verkregen pro-dukt in een hydraat omzet.

20. Werkwijze volgens conclusie 19, met het ken- merk, dat R , R·7 en R° elk een fenylrest voorstellen.

21. Toepassing van een verbinding volgens een van de conclusies 1-13 bij de behandeling resp. profylaxe van infectie-ziekten. ***** 8200217