MXPA97003975A - Nueva formulacion antitrombotica, proceso para su fabricacion y uso de la misma - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a una nueva formulación farmacéutica que comprende el inhibidor de trombina HOOC-CH2-(R)-Cgl-Aze-Pab en combinación con uno o más agentes mejoradores de absorción, un proceso para la preparación de tal formulación farmacéutica, el uso de tal formulación en el tratamiento de tromboembolia asícomo para tratar a un paciente en necesidad de tratamiento antitrombótico y tromboembolia mediante la utilización de la formulación.

Description

NUEVA FORMULACIÓN ANTITROMBÓTICA. PROCESO PARA SP FABRICACIÓN Y USO DE LA MISMA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con una formulación farmacéutica nueva que comprende el inhibidor de trombina HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab en combinación con uno o más agentes mejoradores de absorción, un proceso para la preparación de tal formulación farmacéutica y el uso de tal formulación en el tratamiento de tromboembolia, así como un método para tratar a un paciente en necesidad de tal tratamiento mediante la utilización de la formulación.

ANTECEDENTES La coagulación sanguínea es el proceso clave involucrado tanto en la hemostasis (es decir, prevención de pérdida de sangre por un vaso dañado) como de la trombosis (es decir, la oclusión patológica de un vaso sanguíneo por un coágulo de sangre) . La coagulación es el resultado de una serie compleja de reacciones enzimáticas,- una de las etapas finales es la conversión de la proenzima protrombina a la enzima activa trombina. REF: 24753 La trombina juega un papel central en la coagulación. Activa las plaquetas, convierte el fibrinógeno en monómeros de fibrina los cuales polimerizan espontáneamente en filamentos y activa el factor XIII, el cual a su vez forma un polímero reticulado a fibrina insoluble. La trombina activa de manera adicional al factor V y al factor VIII en una reacción de retroalimentación positiva. Por lo tanto, se espera que los inhibidores de trombina sean anticoagulantes efectivos por inhibición de la activación plaquetaria, formación de fibrina y estabilización de fibrina. Al inhibir el mecanismo de retroalimentación positiva se espera que tales inhibidores ejerzan inhibición al inicio de la cadena de eventos que llevan a la coagulación y la trombosis. Los inhibidores de trombina peptídicos o similares a péptidos, como muchas otras sustancias similares a péptidos son susceptibles a absorción limitado variable cuando se administran. Esto se debe a la influencia de las diferentes barreras de carácter metabólico y físico tales como degradación enzimática, tendencias hacia la formación de complejos con componentes a partir de la formulación o del ambiente biológica, limitaciones en las posibilidades de transporte, etc. Un objetivo de la presente formulación farmacéutica es facilitar que el agente activo supere tales barreras y obtener una absorción mejorada y reproducible del agente activo. Los componentes de formulación que tienen tal influencia y por lo tanto pueden ayudar al agente activo se denominan mejoradores de absorción.

TÉCNICA ANTERIOR Respecto al uso de mejoradores de absorción en formulaciones farmacéuticas existen varios informes y revisiones en la literatura. Se han reportado propiedades mejoradoras de diferentes tipos de sustancias tales como agentes tensioactivos y lípidos, quelantes y polímeros. Se han presentado revisiones amplias por E. J. van Hoogdalem et al., Pharmac Theor vol 44, 407-443 (1989), por S. Muranishi, Crit Rev Ther Drug Carrer Syst vol 7, 1-33 (1990), por E. S. S enson y W. J. Curatolo, Adv Drug Deliv Rev vol 8, 39-92 (1992) y en Drug Absorption Enhancement (Ed. : A B G de Boer) , Har ood Academic Publishiers 1994.

DESCRIPCIÓN DB LA INVENCIÓN Se ha encontrado que la absorción del inhibidor de trombina terapéuticamente activo HOOC-CH-- (R) -Cgl-Aze-Pab se puede modificar al encontrar agentes mejoradores en las formulaciones farmacéuticas que contienen al compuesto terapéuticamente activo. Por lo tanto, un objetivo de la presente invención es proporcionar formulaciones farmacéuticas novedosas que comprenden el inhibidor de trombina HOOC-CH2-(R) -Cgl-Aze-Pab en combinación con uno o más agentes mejoradores de la absorción y de manera opcional un portador farmacéuticamente aceptable, y un proceso para la preparación de tales formulaciones farmacéuticas. Los medios para obtener formulaciones mejoradas de este medicamento terapéuticamente activo se basan en el uso de agentes mejoradores de absorción, tales como, pero sin limitarse a, agentes tensioactivos, lípidos, otros medicamentos y polímeros para obtener efectos positivos los cuales resulten en una absorción mejorada y/o menos variable del agente terapéuticamente activo cuando tal agente se administre por las diferentes vías de administración, por ejemplo, por vía oral, rectal, bucal, nasal, pulmonar, por inhalación, etc., y combinaciones de tales agentes con el fin de obtener efectos sinergísticos incluso más positivos los cuales resulten en una absorción mejorada en grado superior. Los efectos mejoradores de absorción descritos en esta invención significa que se obtienen por uno o más aditivos en la formulación, tales como, pero sin limitarse a: medicamentos antiinflamatorios no esteroidales y derivados tales como salicilato de sodio, 5-metoxisalicilato de sodio, indometacina y diclofenac; Tensioactivos tales como tensioactivos no iónicos, por ejemplo esteres de sorbitán (de la serie Span) , polisorbatos (de la serie Tween) , monoéteres de glicolpolietoxilados (por ejemplo de la serie Brij ) , esteres de alquilo polioxilados (de la serie Myrj ) , fenoles alquílicos polioxietilados (como la serie Tritón) , glucósidos de alquilo tales como glicósidos de azúcar, por ejemplo, dodecilmaltósido, esteres de ácido graso y azúcar, por ejemplo, laurato de sacarosa, monoestearato de sacarosa, etc. y saponinas; tensioactivos anfolíticos, por ejemplo betaínas; tensioactivos aniónicos, por ejemplo alcoholes grasos sulfatados, alcoholes poliexietilados sulfatados, otros como sulfosuccinato de dioctilo; tensioactivos catiónicos, por ejemplo compuestos de amonio . Sales biliares tales como sales dihidroxibiliares como desoxicolato de sodio, sales trihidroxibiliares como glicolato de sodio y fusidates, por ejemplo dihidrofusidate de sodio,- Jabones y ácidos grasos, y sus sales, por ejemplo ácido octanoico, ácido decanoico y decanoato de sodio; Lípidos tales como glicéridos, por ejemplo glicerilmonooctanoato y glicerilmonooleína,- fosfolípidos, por ejemplo DPPC y DMPC; Aceites, por ejemplo, aceite de frijol de soya y aceite de girasol; Enaminas tales como DL-fenilanalina y etilacetoacetato de enamina; Agentes quelantes, por ejemplo EDTA, EGTA y ácido cítrico; Fenotiazinas, por ejemplo cloropromazina; Derivados de ácido graso de carnitina y péptidos, por ejemplo, palmitoil-DL-carnitina y N-miristoil-L-propil-L-prolil-glicinato,- Otras sustancias, por ejemplo, azona, concanavalina A, fosfato y derivados de fosfato tales como DL-a-glicerofosfato y 3-amino-l-hidroxipropilideno-l, 1-difosfonato, maleato de dietilo y malonato de dietildietoximetileno; Productos de la reacción de Maillard, por ejemplo compuestos de una reacción de glucoselisina,- Polímeros tales como ácidos poliacrílicos, por ejemplo, CarbopolMR, policarbofil; quitosán y derivados de qui osan; y copolímeros de bloque, por ejemplo, poloxámeros, poloxaminas y meroxapoles. Las combinaciones diseñadas adecuadas de los agentes mejoradores son, pero no se limitan a: Lípidos y sales biliares, por ejemplo, monooleina y taurocolato de sodio; Lípidos y fosfolípidos, por ejemplo, glicéridos de cadena media y lecitinas; Tensioactivos y aceites, por ejemplo, esteres de ácido graso y sacarosa, y aceites de frijol de soya; y Polímeros y lípidos, por ejemplo, policarbofil y monooleína . La forma de dosificación utilizada puede ser una preparación sólida, semisólida o líquida preparada por técnicas conocidas. Habitualmente, la sustancia activa constituirá entre 0.1 y 99% en peso de la preparación, de manera más específica entre 0.1 y 50% en peso de las preparaciones diseñadas para administración parenteral y entre 0.2 y 90% en peso para preparaciones adecuadas para administración oral. Las dosis diarias adecuadas del medicamento terapéuticamente activo en el tratamiento terapéutico de seres humanos es de aproximadamente 0.001-100 mg/kg de peso corporal por administración peroral de 0.001-50 mg/kg de peso corporal en administración parenteral.

El agente mejorador, o combinaciones de agentes mejoradores constituirán entre 0.1 y 99% en peso de la preparación. Las formulaciones obtenidas de esta manera incrementarán la absorción y/o minimizarán la variabilidad de la absorción del medicamento terapéuticamente activo por diferentes mecanismos. Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención comprenden al dipéptido modificado HOOC-CH2- (R) -Cgl-Aze-Pab y los agentes mejoradores de absorción se diseñan para profilaxis y tratamiento en tromboembolia arterial y venosa. Otro objetivo de la invención es un proceso para la fabricación de una formulación farmacéutica que comprende agregar agentes mejoradores de absorción a una solución de un compuesto terapéuticamente activo HOOC-CH2-(R) -Cgl-Aze-Pab, opcionalmente ajustar el pH con un agente amortiguador a un pH terapéuticamente aceptable, por ejemplo entre 5 y 9, de manera preferible entre 7 y 8, por ejemplo 7.4, y mezclar todos los ingredientes. El agente amortiguador puede ser amortiguador de fosfato tal como K2HP04 : Na2HP04. También se pueden agregar a la formulación farmacéutica de la presente invención otros ingredientes utilizados convencionalmente en formulaciones farmacéuticas tales como portadores, agentes isotónicos tales como NaCl, los cuales son conocidos por una persona habitualmente experta en la técnica.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra el efecto de dos agentes mejoradores de absorción sobre la permeabilidad de la membrana intestinal para HOOC-CH2- (R) -Cgl-Aze-Pab.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La siguiente descripción es ilustrativa de aspectos de la invención.

PARTE EXPERIM TA Procedimientos experimentales generales Los espectros de masas se registraron en un espectrómetro de masas triple cuadropolo Finnigan MAT TSQ 700 equipado con una interfase de electroaspersión. Las mediciones de XH RMN y 13C RMN se realizan en espectrómetros BRUKER AC-P 300 y BRUKER AM 500, el primero opera a una frecuencia de XH de 500.14 MHz y una frecuencia de l3C de 125.76 MHz y el último a una frecuencia de XH y 13C de 300.13 MHz y 75.46 MHz respectivamente. Las muestras son de aproximadamente 10-50 mg, disueltas en 0.6 mi de uno de los siguientes solventes,-CDC13 (pureza isotópica > 99.8%), CD3OD (pureza isotópica > 99.95%) o D20 (pureza isotópica > 99.98%). Todos los solventes se adquirieron del Dr. Glaser AG, Basilea. Los valores de desviación químicas LH y 13C en CDC13 y CD-jOD son en relación al tetrametilsilano como un estándar externo. Las desviaciones químicas de XH en D20 se relacionan con la sal de sodio del ácido 3- (trimetilsilil) -d4-propanoico y las desviaciones químicas de 13C en D20 se hace referencia en relación a 1,4-dioxano (67.3 ppm), ambos como estándar externos. La calibración con un estándar externo, en algunos casos puede causar diferencias menores en el desplazamiento en comparación con un estándar interno, sin embargo, la diferencia en la desviación química de H es menor de 0.02 ppm y en 13C, menor de 0. l ppm. El espectro de XH RMN de secuencias de péptidos que contienen prolina o un residuo "similar a prolina" con frecuencia muestra dos conjuntos de resonancias. Esto corresponde a la existencia de dos confórmeros contribuyentes con respecto a la rotación alrededor del enlace amida, cuando la prolina contiene la parte N del enlace amida. Los confórmeros se nombran cis y trans. En los compuestos que contienen tales secuencias, las secuencias (R)Cha-Aze y (R) Cha-Pie- con frecuencia dan lugar a un equilibrio cis-trans con un confórmero como el confórmero preponderante (>90%) . En aquéllos casos en los que únicamente las desviaciones químicas de lK del rotámero principal se reportan. Únicamente en los casos en los que las señales del rotámero menor se separan claramente, se han reportado en la documentación de RMN. El mismo criterio es válido para las señales NH en CDC13, únicamente en los casos en los que las señales se han separado claramente, estas se han reportado en la documentación de RMN. Esto implica que el número de protones reportados para alguno de los intermediarios es menor que el número de protones que se esperaban a partir de la fórmula química. La cromatografía instantánea se lleva a cabo en gel de sílica Merck 60 (40-63 mm, malla 230-400) bajo presión de aire. La liofilización se realiza en un aparato Leybold-Heraeus, modelo Lyovac GT 2.

PREPARACIÓN DE MATERIALES INICIALES 4-aminometil-l- (N- (benciloxicarbonilamidino) -benceno (H-Pab(Z)) (i) Azida de 4-cianobencilo Una solución de 20.23 g (0.31 moles) de azida de sodio en 50 mi de agua se agrega a 49.15 g (251 mmoles) de bromuro de 4-cianobencilo en 200 mi de DMF a temperatura ambiente. Se produce una reacción exotérmica y después de 1.5 h la mezcla de reacción se diluye con 200 mi de tolueno (precaución: con el fin de evitar la separación de compuestos de compuestos de azida potencialmente explosivos, es aconsejable agregar tolueno a la mezcla de reacción antes de la adición de agua) y 500 mi de agua. La fase acuosa se extrae con 2 x 50 mi adicionales de tolueno. Los extractos orgánicos combinados se lavan con 2 x 50 mi de agua, con salmuera, y finalmente se secan (MgS04) y se filtran. La solución se utiliza sin procesamiento adicional en la siguiente etapa. 'H-RMN (300 MHz, CDC13) ; d 4.4 (s, 2H) , 7.4 (d, 2H) , 7.7 (d, 2H) . (ii) 4-amidinobencilazida Se burbujea cloruro de hidrógeno en una mezcla de 250 mi de etanol absoluto y la solución de la etapa (i) (aproximadamente 200 mi) por encima de -5°C, hasta saturación. El almacenamiento a 8°C durante 4 h y la evaporación de la mayor parte del solvente seguido por precipitación por adición de éter anhidro proporciona cristales blancos los cuales se aislan por filtración y se disuelven en 1.8 1 de amoníaco alcohólico. Después de 48 h la mayor parte del solvente se elimina y se agregan 200 mi de una solución 3.75 M de NaOH, con lo cual la 4-amidinobencilazida precipita como cristales incoloros. Los cristales se aislan por filtración. En este punto, el rendimiento de la 4-aminobencilazida es de 22.5 (total 51%) .

Clorhidrato de etilimidatobencilazida: "H-RMN (500 MHz, CD3OD) ; d 1.6 (t, 3H) , 4.5 (s, 2H) , 4.65 (c, 2H) , 4.8 (s amplio, 2H) , 7.6 (d, 2H) , 8.1 (d, 2H) 4-amidinobencilazida: XH-RMN (500 MHz, CDC13) ; d 4.3 (s, 2H) , 5.7 (s amplio, 3H) , 7.3 (d, 2H) , 7.6 (d, 2H) . 13C-RMN (125 MHz, CDC13) : carbono de amidina: d 165.5. (iii) 4- (benciloxicarbonilamidino)bencilazida Los cristales de (ii) anterior se disuelven en 500 mi de cloruro de metileno y la solución resultante se seca (K2C03) , se filtra y se agregan 27 mi (194 mmoles) de trietilamina. Se agregan lentamente 25 mi de cloroformiato de bencilo a la solución agitada mientras que la mezcla de reacción se enfría en un baño de hielo. Después de minutos se agregan 2 mi adicionales de cloroformiato de bencilo y se continúa la agitación durante otros 30 minutos . Posteriormente se agrega agua y la fase acuosa se ajusta a pH 7 con HCl 2 M. La fase orgánica se seca (MgS04) y el solvente se elimina in vacuo. Finalmente se aisla 4- (benciloxicarbonilamidino)bencilazida como cristales incoloros a partir de éter/cloruro de me ileno/hexano. lH-RMN (500 MHz, CDC13) ; d 4.4 (s, 2H) , 5.3 (s, 2H) , 6.3-7.0 (S amplio, 1H) , 7.3-7.4 (m, 5H) , 7.5 (d, 2H) , 7.9 (d, 2H) , 9.3-9.6 (s amplio, 1H) . 13C-RMN (125 MHz, CDC13) : carbono de amidina: d 167.5. (iv) 4-aminometil-l- (N-benciloxicarbonilamidino) -benceno (H-Pab(Z)) Se agregan 26.3 g (100 mmoles) de trifenilfosfina a temperatura ambiente a la 4 - (benciloxicarbonila idino)bencilazida de (iii) anterior disuelta en 160 mi de THF. Después de 16 h se agregan 6.6 g adicionales (25 mmoles) de trifenilfosfina se permite que la solución repose durante 4 h antes de la extracción del solvente in vacuo. El residuo se disuelve en cloruro de metileno y se extrae con HCl 2 M. La fase acuosa se lava con cloruro de metileno y éter y posteriormente se vuelve alcalina con una solución de hidrc ido de sodio 3.75 M. La extracción con cloruro de metileno seguida por secado (K2C03) y la extracción del solvente in vacuo proporcionan g (El rendimiento total a partir de bromuro de cianobencilo es de 28%) de un aceite amarillo el cual solidifica al dejar reposar. "?-RMN (500 MHz, CDC13) ; d 1.2-2.2 (s amplio, 2H) , 3.8 (s, 2H) , 5.2 (s, 2H) , 7.2-7.35 (m, 5H) , 7.4 (d, 2H) , 7.8 (d, 2H) , 9.1-9.6 (s amplio, 1H) . "C-RMN (125 MHz, CDC13) : amidina y carbonos carbonílicos: d 164.6 y 168.17.

H-Aze-OMe x HCl Se prepara de acuerdo con el procedimiento descrito por Seebach D. et. al. en Liebigs Ann. Chem., p. 687, 1990.

BOC- (R)Cgl-OH Se disuelve Boc- (R) -Pgl-OH, 32.6 g (0.13 moles) en 300 mi de metanol y se agrega 5 g de Rh/Al203. La solución se hidrogena desde 5.2 hasta 2.8 MPa durante 3 días. Después de la filtración y evaporación del solvente, la RMN muestra la presencia de aproximadamente 25% del éster metílico del compuesto del título. El material sin tratar se disuelve en 500 mi de THF y se agregan 300 mi de agua y 20 g de LiOH. La mezcla se agita durante la noche y se evapora el THF. La fase acuosa remanente se acidifica con KHS04 y se extrae tres veces con acetato de etilo. La capa orgánica combinada se lava con agua, se seca (Na2S04) y se evapora para proporcionar 28.3 g (83%) del producto deseado. XH-RMN (300 MHz, CDC13) ; d 0.9-1.7 (m, 20H) , 4.0- 4.2 (m, 1H) , 5.2 (d, 1H) .

Boc- (R)Cgl-Aze-OH (i) Boc- (R)Cgl-Aze-OMe A una mezcla agitada de 3.86 g (15 mmoles) de Boc- (R)Cgl-OH, 2.27 g (15 mmoles) H-Aze-OMe x HCl y 2.75 g (22.5 mmoles) de DMAP en 40 mi de CH3CN a 5°C se agregan 3.16 g de EDC (16.5 mmoles) . La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 48 h. El solvente se evapora y el residuo se disuelve en 150 mi de EtOAc y 20 mi de H20.

La capa orgánica separada se lavéi con 2 x 20 mi de KHS04 0.5 M, 2 x 10 mi de NaHC03 (saturado), l x 10 mi de H20, 1 x 10 mi de salmuera y se seca (MgSO . La evaporación del solvente proporciona 4.91 g (92%) del compuesto del título el cual se utiliza sin purificación adicional en la siguiente etapa. ?-RMN (500 MHz, CDC13 0.1 g/ml); rotámero principal, 0.83-1.35 (m, 5H) , 1.38 (S, 9H) , 1.47-1.84 (m, 6H) , 2.18-2.27 (ra, 1H) , 2.50-2.62 (m, 1H) , 3.72 (se, 3H)-, 3.94-4.06 (m, 1H) , 4.07-4.15 (m, 1H) , 4.39-4.47 (m, 1H) , 4.68 (dd, J = 9.1, J = 5.1, 1H) , 5.09 (d, J = 9.2, 1H) .

Picos separados del rotámero menor, 2.27-2.35 (m, 1H) , 3.77 (s, 3H) , 3.80-3.87 (m, 1H) , 3.88-3.95 (m, 1H) , 4.92 (d, J = 9.2, 1H) , 5.21 (dd, J = 9.1, J~5, 1H) . (ii) Boc- (R)Cgl-Aze-OH Se llevó a cabo la hidrólisis de Boc- (R)Cgl-Aze-OMe de acuerdo con el procedimiento descrito para Boc- (R) Cha-Pic-OEt (véase abajo). El producto cristaliza a partir de EtOH/acetona/agua (1/1/3.95) rendimiento, 80%. XH-RMN (500 MHz, CDC13) ; d 0.85-1.3 (m, 5H) , 1.40 (s, 9H) , 1.5-1.9 (m, 6H) , 1.95-2.2 (m, 2H) , 3.92 (m, 1H) , 4.09 (m, 1H) , 4.35 (m, 1H) , 4.95 (m, 1H) , 5.16 (bd, 1H) .

Preparación del compuesto HOOC-CH-- (R)Cgl-Aze-Pab (i) Boc- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) A una mezcla agitada de 3.40 g (10 mmoles) de Boc- (R) Cgl-AzeOH (véase la preparación de materiales iniciales) y 5.13 g de DMAP (42 mmoles) en 120 mi de CH3CN se agregan 3.18 g de H-Pab(Z) x HCl (Véase la preparación de materiales iniciales) . Después de agitar durante 2 horas a temperatura ambiente la mezcla se enfría a -80°C y se agregan 2.01 (10.5 mmoles) de EDC. Se permite que la reacción alcance la temperatura ambiente y se continúa la agitación durante 47 horas adicionales. El solvente se evapora y el residuo se disuelve en 200 mi de EtOAc. La fase orgánica se lava con 1 x 50 mi de agua, 1 x 50 + 2 x 25 mi de 0.5 M KHS04, 2 x 25 mi de NaHC03 (saturado), 1 x 50 mi de agua y se seca. La evaporación del solvente proporciona 5.21 g (86%) del compuesto del título.

?-RMN (500 MHz, CDC13) ; d 0.8-1.9 (m, 20H; del mismo 1.30 (s, 9H) ) , 2.35-2.6 (m, 2H) , 3.74 (bt, 1H) , 4.10 (m, 1H) , 4.25-4.4 (m, 2H) , 4.45-4.6 (m, IH, rotámeros) , 4.75-5.0 (m, 1H, rotámeros) , 5.08 (bd, 2H) , 5.15 (s, 2H) , 7.15-7.35 (m, 5H) , 7.41 (d, 2H) , 7.77 (d, 2H) , 8.21 (m, 1H) . (ii) H- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) A una solución fría (temperatura de baño con hielo) de 18.8 g de HCl(g) en 195 mi de EtOAc se agregan 4.69 g (7.743 mmoles) de Boc- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) junto con 40 mi de EtOAc. Se permite que la mezcla de reacción alcance la temperatura ambiente» y se agita durante 30 minutos. Se agregan 140 mi de Et20 a una solución transparente, por lo cual se forma un precipitado. La reacción se mantiene a temperatura ambiente durante 1 h y 40 minutos adicionales. El precipitado se separa por filtración, se lava rápidamente con 150 mi de Et20 y se seca in vacuo. El precipitado se disuelve en 50 mi de agua y se vuelve alcalino con 15 mi de NaOH 2M. La fase acuosa alcalina se extrae con l x 100 + 1 x 50 mi de CH2C12. La fase orgánica combinada se lava con 1 x 20 mi de agua, 1 x 20 mi de salmuera y se seca (MgS04) . La evaporación del solvente proporciona 3.44 g (88%) del compuesto del título.

Hí-RMN (500 MHz, CDC13) ; d 0.8-2.0 (m, 1H) , 2.51 (m, 1H) , 2.67 (m, 1H) , 3.07 (d, 1H) , 4,.11 (m, 1H) , 4.18 ( , 1H) , 4.43 (dd, 1H) , 4.53 (dd, 1H) , 4.91 (m, 1H) , 5.22 (S, 2H) , 7.2-7.4 (m, 7H) , 7.45 (d, 2H) , 8.51 (d, 2H) . (iii) BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) Se mezclan 1.13 g (2.2 mmoles) de H- (R) Cgl-Aze-Pab (Z), 0.9 g (2.6 mmoles) de bencil-2- (orto-nitrobencensulfoniloxi) acetato ( (2-NO-) Ph-S02OCH2-COOBn) (Véase preparación de materiales iniciales, 0.99 g (5.6 mmoles) de K2C03 y 113 mi de CH3CN, y se calientan en un baño de aceite a 60 °C durante 3 horas. El solvente se evapora in vacuo. Se agrega EtOAc y la mezcla se lava con agua, la fase orgánica se extrae con KHS04 1 M y esta fase acuosa se lava con EtOAc. La fase acuosa acida se vuelve alcalina con NaOH 1 M hasta pH > 8 y se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con agua, se seca (Na2S04) , se filtra y se evapora in vacuo para proporcionar 1.17 g de un residuo que se somete dos veces a cromatografía instantánea utilizando, en primer lugar, CH2Cl2/MeOH(saturado con NH3) 95/5, y posteriormente éter dietílico/MeOH (saturado con NH3) 9/1 como eluyentes, para proporcionar 0.252 g (36%) del compuesto del título.

La alquilación también se lleva a cabo utilizando bencil-2- (para-nitrobencensulfoniloxi) acetato ( (4-N02) Ph-S02-0CH2-C00Bn) (Véase la preparación de materiales iniciales) utilizando el mismo procedimiento que en lo anterior para producir el compuesto del título con un rendimiento de 52%. "H-RMN (300 MHz, CDC13) ; d 0.85-2.15 (ra, 11H) , 2.48 (m, 1H) , 2.63 (m, 1H) , 2.88 (d, 2H) , 3.24 (d, 1H) , 3.27 (d, 1H) , 3.95 (m, 1H) , 4.05 (m, 1H) , 4.44 (m, 1H) , 4.55 (m, 1H) , 4.91 (m, 1H) , 5..07 (s, 2H) , 5.22 (s, 2H) , 7.2-7.4 (m, 10H) , 7.45 (d, 2H) , 7.79 (d, 2H) , 8.42 (m, 1H) . (iv) HOOC-CH2-(R) Cgl-Aze-Pab x 2 HCl Se disuelve 20 mg de BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z)., (0.031 mmoles), en 5 mi de metanol. Se agregan algunas gotas de cloroformo y Pd/C al 5%, y la mezcla se hidrogena a presión atmosférica durante 1 h. Después de la filtración y evaporación, el producto se liofiliza a partir de agua para producir 11 mg (72%) del compuesto del título. "H-RMN (500 MHz, D20) ; d 1.0-2.0 (m, 11H) , 2.10 (m, 1H) , 2.44 (m, 1H) , 2.82 (m, 1H) , 3.90 (s, 2H) , 4.09 (d, 1H) , 4.4-4.55 (m, 2H) , 4.66 (s, 2H) , 5.08 (m, 1H) , 7.65 (d, 2H) , 7.89 (d, 2H) .

"C-RMN (75.5 MHz, D20) : amidina y carbonos carbonílicos : d 167.3, 167.9, 169.9 y 172.4. (iv) HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab Se disuelve BnOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (Z) en EtOH (99%) y se hidrogena sobre Pd/C al 5% a presión atmosférica durante 5 horas. La filtración del catalizador a través de Cellite y la evaporación del solvente proporciona el compuesto del título con un rendimiento del 97%. rH-RMN (500 MHz, CD3OD, mezcla de dos rotámeros) : rotámero principal: d 1.00-1.12 (m, 1H) , 1.13-1.34 (m, 4H) , 1.55-1.70 (m, 3H) , 1.73-1.85 (m, 2H) , 1.94-2.02 (bd, 1H) , 2.32-2.42 (m, 1H) , 2.54-2.64 (m, 1H) , 2.95-3.10 (AB-sistema más d, 3H) , 4.18-4.25 (bq, 1H) , 4.28-4.32 (bq, 1H) , 4.43'-4.60 (AB-sistema, 2H) , 4.80-4.85 (dd, 1H) , 7.48-7.54 (d, 2H) , 7.66-7.71 (d, 2H) . Señales separadas del rotámero menor aparecen en d 0.95 (m) , 1.43 (m) , 2.24 (m) , 2.84 (d) , 3.96 (m) , 4.03 (m) , 7.57 (bd) , 7.78 (bd) . 13C-RMN (125 MHz, CD3OD) : amidina y carbonos carbonílicos: d 168.0, 173.0, 176.3 y 179.0 Preparación de las formulaciones Formulación A: HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (base) 1.1 mg/10 mi monoestearato de sacarosa (S-1570) 1.1 mg/10 mi amortiguador de fosfato (KH2P04:Na2HP04) 0.1 M ph 7.4 a 10 mi Formulación B: HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (base) 1.1 mg/10 mi monopalmitato de sacarosa (P-1570) 1.1 mg/10 mi amortiguador de fosfato (KH2P04:Na2HP04) 0.1 M pH 7.4 a 10 mi. Formulación C: H00C-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (base) 1.1 mg/10 mi Solutol 50 mg/10 mi NaCl 0.9 g/1 pH 7.4 y 10 mi Formulación D: H00C-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (base) 1.1 mg/10 mi Docusate-natrium (dioctilsilfosuccinato de sodio) 2.2 mg/10 mi NaCl 0.9 g/1 pH 7.4 y 10 mi Formulación E: H00C-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (base) 1.1 mg/10 mi Dodecilmaltósida 2.2 mg/10 mi NaCl 0.9 g/1 pH 7.4 y 10 mi Formulación F: H00C-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (base) 1.1 mg/10 mi EDTA 17 mg/ml NaCl 0.9 g/1 pH 7.4 y 10 mi Formulación G: HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab (base) 1.1 mg/10 mi Palmitoil-dl-carnitina 2.2 mg/10 mi NaCl 0.9 g/1 pH 7.4 y 10 mi Formulación H: HOOC-CH2- (R) -Cgl-Aze-Pab (base) 0.5 mg/ml EDTA 2% p/p NaCl 0.9 g/1 Formulación I: HOOC-CH2- (R) -Cgl-Aze-Pab (base) 0.43 mg/ml Captex 72% p/p Capmul 22% p/p Tween 80 3% p/p NaCl 0.9 g/1 Formulación J: HOOC-CH2- (R) -Cgl-Aze-Pab (sal oleato) 0.43 mg/ml Aceite de oliva 100% p/p ácido oleico Formulación K: HOOC-CH2- (R) -Cgl-Aze-Pab (base) 0.43 mg/ml policarbofil (Carbopol) 0.5% p/p Amortiguador de fosfato 0.1M pH 7.4 Las formulaciones A-G, respectivamente, se prueban en íleon de rata o segmentos de colon montados en cámaras Ussing (descritas por Artursson et al, Pharm. Res. vol. 10, No. 8, p 1123-29, 1993). Las muestras de la solución en ambos lados de la membrana intestinal se extraen a intervalos de tiempo regulares y se analizan para determinar la concentración de HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab. Se prueba la capacidad de atravesar la membrana intestinal en base a las mediciones de la permeabilidad. Se calcula el coeficiente de permeabilidad utilizando la velocidad de aparición de estado estable, dQ/dt del compuesto en el lado seroso de los segmentos de área superficial, A, y la concentración inicial en el lado de la mucosa, C0, de acuerdo con la ecuación Papp=dQ/dt*l/AC0. Los resultados de las formulaciones A y B probadas se presentan en la figura 1, los de las formulaciones C y D probadas en la figura 2, los de las formulaciones E y F probadas en la figura 3 y los de la formulación G en la figura 4. La letra N en las figuras indica el número de ratas utilizadas. Los resultados muestran que los esteres de sacarosa, monoestearato y monopalmitato, así como el éter de glucosa, dodecilmaltósido, incrementan la permeabilidad de HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab dos a tres veces sobre la membrana intestinal. También se puede observar la misma magnitud de incremento en la permeabilidad sobre la membrana con el uso de formulaciones que contienen los tensoactivos solutol o docusato de sodio, el derivado de ácido graso palmitoil-dl-carnitina, o el quelante de calcio EDTA. Todos estos mejoradores incrementan la permeabilidad intestinal del inhibidor de trombina H00C-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab en circulación sistémica y por lo tanto incrementan la biodisponibilidad. Las formulaciones H, I, J y K, respectivamente, se prueban in vivo en el modelo de rata utilizando animales no anestesiados, con catéter intraduodenal . Las formulaciones I, J y K se administran como una inyección en bolo, mientras que la formulación H se administra como una infusión durante 60 minutos. Se extraen muestras de sangre en ciertos intervalos de tiempo hasta por 4 horas después de la administración de las diferentes formulaciones. Se analiza la concentración de H00C-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab en plasma y se calcula la biodisponibilidad a partir del área bajo la curva (AUC) utilizando métodos farmacocinéticos estándar o convencionales (Rowland y Tozer, Farmacocinética Clínica, conceptos y aplicaciones, 1980) . Los resultados de las formulaciones H e I, J y K probadas in vivo en la rata se presentan en las figuras 5 y 6, respectivamente. La biodisponibilidad se incrementa entre dos veces hasta diez veces utilizando las diferentes formulaciones en comparación con el experimento control en el que se utiliza el amortiguador de fosfato de pH 8. Todas las formulaciones probadas incrementaron la disponibilidad del inhibidor de trombina H00C-CH2- (R) -Cgl-Aze-Pab después de su administración en el duodeno. Por lo tanto, es probable que los mejoradores de absorción utilizados comúnmente para el tracto gastrointestinal afecten más o menos la biodisponibilidad de este medicamento utilizando la administración oral y también incrementen su biodisponibilidad utilizado otras vías de administración tales como la rectal, bucal, nasal o pulmonar .

ABREVIATURAS Aze = Ácido (S) -azetidin-2-carboxílico Cgl = (S)Ciclohexilglicina Pab = l-amidino-4-aminometilbenceno Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el convencional, para la manufactura de los objetos a que la misma se refiere. Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes:

Claims (25)

REIVINDICACIONES

1. Una formulación farmacéutica caracterizada porque comprende el compuesto terapéuticamente activo HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab como tal o como un estereoisómero del mismo, o una sal fisiológicamente aceptable del mismo, y uno o más agentes mejoradores de absorción, y de manera opcional un portador farmacéutico.

2. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación l, caracterizada porque el agente mejorador de absorción es un tensioactivo.

3. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el tensioactivo es un glicósido de alquilo tal como glicósido de azúcar.

4. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el tensioactivo es un éster de ácido graso de azúcar.

5. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque el éster de ácido graso de azúcar es monoestearato de sacarosa o monopalmitato de sacarosa.

6. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación l, caracterizada porque el agente mejorador de la absorción es un medicamento antiinflamatorio no esteroidal o un derivado del mismo.

7. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente mejorador de absorción es una sal biliar.

8. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente mejorador de absorción es un lípido.

9. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente mejorador de absorción es un jabón, un ácido graso o un derivado de ácido graso de carnitina o un péptido.

10. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación l, caracterizada porque el agente mejorador de absorción es un aceite.

11. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente mejorador de absorción es una enamina.

12. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente mejorador de absorción es un agente quelante.

13. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente mejorador de absorción es una fenotiazina.

14. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente mejorador de absorción es un producto de reacciones de Maillard.

15. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente mejorador de absorción es un polímero.

16. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente mejorador de absorción es azona, concanavalina A, fosfato o derivado de fosfonato, maleato de dietilo o malonato de dietiletoximetileno .

17. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente mejorador de absorción es una combinación de lípidos, un lípido y un fosfolípido, un lípido y una sal biliar, un lípido y un aceite, un lípido y un tensioactivo o un lípido y un polímero.

18. La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente mejorador de absorción es una combinación de tensioactivos y aceites.

19. La formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque el compuesto activo HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab está en forma de una base libre.

20. Un proceso para la producción de la formulación farmacéutica definida de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque se agrega un agente mejorador de absorción a una solución del compuesto HOOC-CH2- (R)Cgl-Aze-Pab, al ajustar el pH mediante un agente amortiguador hasta un pH terapéuticamente aceptable y mezclar todos los ingredientes .

21. El uso de una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes 1-19, caracterizada porque se utiliza para el tratamiento de tromboembolia.

22. Un método para tratar a un paciente en necesidad de un tratamiento tromboembólico, el método está caracterizado porque comprende administrar al paciente una cantidad efectiva de una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-19.

23. Un método para el tratamiento de tromboembolia, caracterizado porque comprende administrar a un paciente en necesidad de tal tratamiento una cantidad efectiva de una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-19.

24. Un método para mejorar la absorción del compuesto terapéuticamente activo HOOC-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab, caracterizado porque comprende agregar a la solución del compuesto activo un agente mejorador de absorción que se selecciona de un tensioactivo, un alquilglicósido, un éster de ácido graso de azúcar, una sal biliar, un lípido, un jabón, un ácido graso o un derivado de ácido graso de carnitina, un péptido, un medicamento antiinflamatorio no esteroidal, un aceite, una enamina, un agente quelante, una fenotiazina, un polímero, un producto de reacciones de Maillard, una azona, concanavalina A, fosfato o derivados de fosfonato, maleato de dietilo, malonato de dietiletoximetileno o combinaciones de los mismos, opcionalmente ajustar el pH con un agente amortiguador hasta un pH farmacéuticamente aceptable y mezclar todos los ingredientes .

25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el agente mejorador de la absorción se selecciona de monoestearato de sacarosa o monopalmitato de sacarosa.