MXPA97002578A - Formulaciones de solucion de alfa-interferonestable acuosa - Google Patents

Abstract

La presente invención da a conocer formulaciones de solución acuosa estables que contienen interferón de tipo alfa, v.gr., interferón alfa-2a, e interferón alfa-2b, un estabilizador para mantener el pH dentro de la escala de 4.5 a 7.1, polisorbato 80 como un estabilizador, disodio de adetato como un agente de quelación, cloruro de sodio como un agente de tonicidad y m-cresol como un agente de conservación antimicrobiano y que mantiene una estabilidad elevada química, física y biológica del interferón de tipo alfa durante un periodo de tiempo prolongado de por lo menos 24 meses.

Description

"FORMULACIONES DE SOLUCIÓN DE ALFA-INTERFERON ESTABLE ACUOSA" ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Esta invención se relaciona con formulaciones de una solución estable acuosa que están exentas de productos derivados del suero de la sangre humana que mantienen una alta actividad biológica y una estabilidad química elevada y física elevada del interferón del tipo alfa, durante un periodo de tiempo prolongado. La Patente Norteamericana Número 4,496,537 da a conocer formulaciones de la solución acuosa de alfa-interferón biológicamente estable que contiene alfa-interferón, albúmina de suero humano, alanina o glicina, agua y un sistema estabilizador para mantener el pH a un valor de 6.5 a 8.0. La albúmina de suero humano ("HSA") actúa como un estabilizador para el alfa-interferón e impide las pérdidas del alfa-interferón de la solución mediante revestimiento y/o absorción del alfa-interferón hacia las superficies de acero inoxidable y vidrio de recipientes mezcladores, el equipo del proceso y los envases de almacenamiento. Las formulaciones de la solución que contienen alfa-interferón y HSA han mantenido la estabilidad química y biológica del alfa-interferón cuando estas soluciones se han almacenado a temperatura de 2°C a 8°C, durante periodos prolongados, es decir, durante más de dos años. Recientemente, la SIDA epidémica mundial ha dado por resultado agencias de registro de salud que requieren fabricantes para colocar avisos en los productos, tales como el alfa-interferón, que contienen productos derivados de sangre humana, tal como HSA. Hay una necesidad para volver a formular los productos de la solución de interferón de tipo alfa para obtener una formulación de solución exenta de productos derivados de sangre humana, tales como HSA, mientras que se mantiene una estabilidad química elevada y fisica elevada y una actividad biológica elevada del interferón de tipo alfa, en las formulaciones de solución acuosa durante periodos de almacenamiento prolongados.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona una formulación de una solución estable acuosa que mantiene alta actividad biológica del interferón de tipo alfa y que está exenta de productos derivados de la sangre humana que comprende: a. de 0.1 x 106 a 100 x 106 IU/mililitro del interferón del tipo alfa; b. un sistema estabilizador para mantener un pH dentro de la escala de 4.5 a 7.1; c. una cantidad efectiva de un agente de quelación; d. una cantidad de un derivado de poli (oxi-1, 2-étandiilo) de mono-9-octadecenoato suficiente para estabilizar el interferón de tipo alfa contra pérdida del interferón de tipo alfa; e. una cantidad efectiva de un agente de tonicidad; f. una cantidad efectiva de un agente de conservación antimicrobiano; y g. una cantidad de agua para inyección suficiente para preparar una solución de los ingredientes anteriormente enumerados. La presente invención proporciona una formulación de una solución estable acuosa que tiene una actividad biológica elevada del interferón de tipo alfa y que está exenta de productos derivados de la sangre humana que comprende: a. de 0.1 x 106 a 100 x 106 IU por mililitro del interferón de tipo alfa. b. un sistema estabilizador suficiente para mantener el pH de la solución dentro de la escala de 4.5 a 7.1; c. de aproximadamente 0.01 a 1 miligramo por mililitro de etilendiamintetraacetato de dihidrógeno de disodio. d. de aproximadamente 0.01 a 1 miligramo por mililitro de un derivado de poli (oxi-1, 2-etandiilo) de mono-9-octadecenoato de sorbitan; e. de aproximadamente 1 a 9 miligramos por mililitro de cloruro de sodio; f. una cantidad efectiva de un agente de conservación antimicrobiano que se selecciona de m-cresol, fenol, metilparabeno, propilparabeno o mezclas de los mismos; y g. agua para inyección en cantidad suficiente para alcanzar un mililitro. En un aspecto preferido, la presente invención proporciona una formulación de una solución estable acuosa que tiene una alta actividad biológica del interferón de tipo alfa, y que está exenta de productos derivados de la sangre humana que comprende : mg/ml a. Interfón de Alfa-2 5 x 106 a 50 x 106 IU b. Fosfato de Sodio Dibásico Anhidro 1.8 c . Monohidrato Monobásico de Fosfato de Sodio 1 . 3 d. Etilendiamintetraacetato de Dihidrógeno de Disodio 0.1 e. Polisorbato 80 0.1 f. Metilparaben 1.2 g. Propilparaben 0.12 h. Cloruro de Sodio; 7.5 y i. Agua para Inyección cantidad suficiente para llegar a 1 mililitro En otro aspecto preferido, la presente invención además proporciona una formulación de una solución estable acuosa que tiene una alta actividad biológica del interferón de tipo alfa y que está exenta de productos derivados de sangre humana que comprende: mg/ml a. Interferón Alfa-2 5 x 106 a 50 x 106 IU b. Fosfato de Sodio Dibásico Anhidro 1.8 c. Monohidrato Monobásico de Fosfato de Sodio 1.3 d. Etilendiamintetraacetato de Dihidrógeno de Disodio 0.1 e. Polisorbato 80 0.1 f. m-Cresol 1.5 g. Cloruro de Sodio; 7.5 y h. Agua para Inyección cantidad suficiente para llegar a 1 mililitro La presente invención proporciona asimismo un proceso para preparar una formulación de la solución estable acuosa que tiene alta actividad biológica del interferón tipo alfa y que está exenta de productos derivados de sangre humana que comprende mezclar una cantidad efectiva del interferón del tipo alfa con un sistema estabilizador capaz de mantener un pH dentro de la escala de 4.5 a 7.1, un agente de quelación, un derivado de poli (oxi-1, 2-etandiilo) de mono-9-octadecenoato de sorbitan, un agente de tonicidad, un agente de conservación antimicrobiana en cantidad suficiente para formar una solución. en un aspecto preferido del proceso de la presente invención, la solución se prepara y se mantiene esencialmente exenta de oxigeno disuelto y un espacio superior de atmósfera inerte por encima de la solución se mantiene en un valor de menos de aproximadamente 4 por ciento en volumen de oxigeno.

DESCRIPCIÓN DETALLADA Hemos seleccionado cantidades especificas de un juego de ingredientes especifico que nos han permitido desarrolar una formulación de una solución acuosa de interferón de tipo alfa que no contiene albúmna de suero humano, pero que sin embargo mantiene estabilidad química biológica y física elevada para el interferón de tipo alfa durante el almacenamiento a temperatura de 2°C a 8°C durante periodos de tiempo prolongados de por lo menos 24 meses . El término "exenta de productos derivados de sangre humana" como se usa en la presente con referencia a las formulaciones de la presente invención significa que no se usan productos derivados de la sangre humana, tales como HSA en la preparación de las formulaciones de la solución de la presente invención. El término "estabilidad química elevada" como se usa en la presente con referencia al interferón de tipo alfa usado en las formulaciones de la presente invención, significa que el interferón de tipo alfa mantiene por lo menos 85 por ciento, de preferencia de 85 por ciento a 100 por ciento de su integridad química durante el almacenamiento a temperatura de 2°C a 8°C durante por lo menos 24 meses. Véanse los Cuadros 1 y 2. La integridad química se determina midiendo el contenido de proteina en un ensayo de HPLC tal como aquél dado a conocer por T.L. Nagabhushan, y otros, en un articulo denominado "Characterization of Genetically Engineered ALFA-2 Interferon", páginas 79 a 88 que aparece en Interferon Research Clinical Application and Regulatory Consideration, Zoon y otros, editores, Elsevier Science Publishing Co. Inc. 1984 (Veáse los resultados en los Cuadros 1 a 4) . El término "estabilidad biológica elevada" como se usa en la presente con referencia al interferón de tipo alfa usado en las formulaciones de la presente invención significa que el interferón de tipo alfa en la formulación mantiene por lo menos 75 por ciento, de preferencia por lo menos 85 por ciento y de mayor preferencia de 90 por ciento a 100 por ciento de su actividad biológica durante el almacenamiento a temperatura de 2°C a 8°C durante por lo menos 24 meses (veáse los resultados en los Cuadros 1 a 4) como se mide en el método de inhibición normal del efecto citopático (CPE) de un virus tal como el método dado a conocer por W.P. Protzman y otros, en J. Clinical Microbiology, (1985), 22, 596-599.

El término "estabilidad fisica elevada" como se usa en la presente con referencia al interferón de tipo alfa usado en las formulaciones de la presente invención, significa que la formulación de la presente invención permanece cristalina, es decir, no exhibe turbidez o materia en partículas visible (es decir, partículas mayores de aproximadamente 60 a 70 micrones de diámetro) durante el almacenamiento a 2°C hasta 8°C durante por lo menos 24 meses. Véanse los Cuadros 1, 2 y 3. Los resultados enumerados en los Cuadros 1, 2 y 3 son sorprendentes ya que la mayoría de las formulaciones de la solución que contienen productos de proteina, tales como el interferón de tipo alfa tienden a desarrollar materia en partículas visualmente observable (es decir, partículas que tienen diámetros mayores de 60 a 70 micrones) durante un almacenamiento prolongado a una temperatura de 2°C a 8°C. El método de prueba usado para determinar la materia en partículas en la formulación de la solución de esta invención (véanse los Cuadros 1 a 4) se describe en The United States Pharmacopeia/The National Formulary USP 23/NF 18, publicada por United States Pharmacopeia Convention, Inc. (1995), de Rockville, Maryland; veáse la Prueba Fisica <788> en las páginas 1813 a 1816. El método usado para determinar la descripción visual de las formulaciones de la solución de esta invención se describe también en la USP 23 como "General Requirement Test and Assays <1> Injections" en las páginas 1650 a 1652. Hemos encontrado que añadiendo un agente de quelación a las formulaciones de la presente invención, hemos sido capaces de evitar la materia en partículas visible. Los agentes de quelación apropiados típicos incluyen tetraacetato de etilendiamina de dihidrógeno de disodio (EDTA o disodio de edetato) o ácido cítrico. El uso de disodio de edetato se prefiere. Aún cuando no deseamos quedar ligados mediante ninguna teoría, se cree que el disodio de edetato se forma en complejo de manera efectiva con cantidades vestigiales de los cationes de metal, tales como Zn^"1", Fe^+, Cu^+ o A1-3+, cuyos iones pueden estar presentes en excipientes y componentes de empaquetado, v.gr., tapones o empaquetaduras de caucho. Puesto que el disodio de edetato tiene mayor afinidad para estos cationes de metal que los interferones de tipo alfa, la interacción entre los cationes de metal y el interferón de tipo alfa que da por resultado la formación de complejos insolubles (en la forma, por ejemplo, de una materia en partículas visible) y pérdida de actividad, se evitan desde luego. La cantidad efectiva del agente de quelación queda dentro de la escala de 0.01 a 1 miligramo por mililitro basándose de 0.1 x 106 a 100 x 106 Unidades Internacionales ("IU") del interferón de tipo alfa por mililitro. De preferencia se - Il ¬ usa 0.1 miligramo de disodio de edetato para 5 x 106 a 50 x 106 IU del interferón alfa-2. Los sistemas de estabilización apropiados para las formulaciones de la presente invención son aquellos que mantienen el pH de la formulación de la solución acuosa dentro de la escala de 4.5 a 7.1, de preferencia de 6.5 a 7.1 y de manera especialmente preferida a 6.8. El uso de un sistema estabilizador de fosfato de sodio dibásico y fosfato de sodio monobásico se prefiere. Normalmente, de 0.005 a 0.1 molar del agente de estabilización del sistema monobásico de fosfato de sodio/estabilizador dibásico preferido se usa para una formulación que contiene de 0.1 x 106 a 100 x 10ß IU del interferón de tipo alfa por mililitro. Otros sistemas estabilizadores apropiados para mantenerse la escala de pH deseada de 4.5 a 7.1, incluyen citrato de sodio/ácido cítrico y acetato de sodio/ácido acético. El agente de tonicidad útil en la presente invención es cualquier agente capaz de hacer que las formulaciones de la presente invención sean iso-osmóticas con el suero humano. Los agentes de tonicidad apropiados típicos incluyen cloruro de sodio, manitol, glicina, glucosa y sorbitol. Se prefiere el uso de cloruro de sodio como un agente de tonicidad.

La cantidad del agente del tonicidad usada queda dentro de la escala de 1 a 10 miligramos por mililitro cuando la formulación de la presente invención contiene de 0.1 x 106 a 100 x 10ß IU del interferón de tipo alfa por mililitro. El uso de 7.5 miligramos por mililitro de cloruro de sodio se prefirere para 5 x 10^ a 50 x 10^ IU del interferón de tipo alfa por mililitro, en las formulaciones de la presente invención. Los derivados de poli (oxi-1, 2-etandiilo) de mono-9-octadecenoato de sorbitan, tales como polisorbato 80 o polisorbato 20 son útiles como un agente estabilizador para impedir la absorción de las proteínas del interferón tipo alfa, tales como el interferón alfa-2b sobre superficies de acero inoxidable y de vidrio del equipo usado para hacer las formulaciones indicadas que contienen el interferón de tipo alfa. La cantidad de polisorbato 20 u 80 efectivo en la formulación, de esta invención queda dentro de la escala de 0.01 a 1.0 miligramo por mililitro para una formulación que contiene de 0.1 x 10^ a 100 x 106 IU del interferón de tipo alfa por mililitro. Se prefiere el uso de polisorbato 80. El uso de 0.1 miligramo por mililitro de polisorbato 80 se prefiere especialmente en todas las formulaciones de la solución de la presente invención. Cuando las concentraciones del interferón de tipo alfa, tales como el interferón alfa-2 son menores de aproximadamente 15 x 10^ IU/mililitro, v,gr, de 6 x 106 IU/mililitro, la pérdida de actividad debida a la absorción del alfa-interferón en ausencia del polisorbato 80 disminye significativamente la actividad biológica de la formulación. Sorprendentemente hemos encontrado que el polisorbato 80 impide la pérdida del interferon alfa-2b y permite el suministro sistemático del interferón alfa-2b sin pérdida de actividad biológica. En el curso del desarrollo de la formulación de la presente invención, hemos encontrado sorprendemente que el polisorbato 80 proporcionó estabilidad química y biológica superior al interferón alfa-2b en comparación con los otros agentes tensioactivo no iónicos, v.gr., Pluronic F127 y Pluronic F-68. La cantidad del interferón de tipo alfa útil en la formulación de la presente invención queda dentro de la escala de 0.1 x 106 a 100 x 106 IU por mililitro, de preferencia de 5 x 10^ a 50 x 10^ iu por mililitro. El término "interferón de tipo alfa" como se usa en la presente significa la familia de proteínas específicas de la especie altamente homologas que inhiben la duplicación viral y la proliferación celular y modulan la respuesta inmune. Los interferones de tipo alfa apropiados típicos incluyen interferón alfa-2a tal como ROFERON A, un interferón alfa-2a que puede obtenerse de Hoffman-La Roche, de Nutley, N.J., interferón alfa-2b, tal como INTRON A el interferón alfa-2b obtenible de Schering Corporation, de Kenilworth, N.J., el interferón alfa-2c, tal como BEROFOR el interferópn alfa-2c obtenible de Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc., de Ridgefield, CT, el interferón alfa-nl, una mezcla purificada de alfa-interferones naturales, tales como SUMIFERON obtenible de Sumitomo, Japón o como WELLFERON el interferón alfa-nl obtenible de The Wellcome Foundation Ltd. de Londres, Gran Bretaña, o en consenso de alfa-interferón que puede obtenerse de Amgen, Inc. de Newbury Park, California o el interferón alfa-n3, una mezcla de alfa-interferones naturales que se producen mediante Interferón Sciences y que puede obtenerse de Purdue Frederick Co. de Norwalk, CT, bajo el nombre de fábrica ALFERON. El uso del interferón alfa-2a o alfa-2b se prefiere. Se prefiere especialmente el uso del interferón alfa-2b. Los agentes de conservación antimicrobianos que se han encontrado que son útiles en la presente invención incluyen m-cresol, fenol y metil-paraben y propilparaben y mezclas de los agentes de conservación anteriormente numerados, v.gr., mezclas de fenol-metilparaben. La cantidad efectiva de m-cresol que se encuentra que es útil en la presente invención quedan dentro de la escala de 0.5 a 2 miligramos por mililitro para una formulación que contiene de 0.1 x 106 a 100 x 106 IU/mililitro del interferón de tipo alfa. Se prefiere usar 1.5 miligramos por mililitro de m-cresol para una formulación que contiene de 5 x 10^ a 50 x 10^ IU por mililitro del interferón alfa-2b. La cantidad efectiva de fenol que se encuentra útil queda dentro de la escala de 0.5 a 5 miligramos por mililitro para una formulación de la solución que contiene de 0.1 x 106 a 100 x 106 IU por mililitro del interferón de tipo alfa. La cantidad efectiva de metilparaben queda dentro de la escala de 0.6 a 1.8 miligramos por mililitro, y la cantidad de propilparaben queda dentro de la escala de 0.06 a 0.18 miligramo por mililitro cuando la formulación de la presente invención contiene de 0.1 x 10^ a 100 x 10^ IU/mililitro del interferón de tipo alfa. Se prefiere usar 1.2 miligramos por mililitro del metilparaben en combinación con 0.12 miligramo por mililitro de poliparaben cuando la formulación de la presente invención contiene de 0.1 x 10^ a 100 x 10^ IU por mililitro del interferón alfa-2b. El uso de m-cresol como un agente de conservación antimicrobiano se prefiere especialmente. El agua usada para la preparación de las formulaciones de la presente invención de preferencia es agua para inyección.

Durante el curso del desarrollo de las formulaciones de la solución acuosa de la presente invención que mantendrían una actividad biológica elevada así como estabilidad elevada química y elevada física del interferón de tipo alfa a través de un periodo de almacenamiento prolongado sin emplear HSA como un estabilizador hemos identificado que la cantidad de un derivado de poli (oxi-1, 2-etandiilo) de mono-9-octadecenoato de sorbitan, tal como polisorbato 80 requerido para actuar como un agente de estabilización para el interferón de tipo alfa, tenía un efecto directo en la cantidad efectiva del agente de conservación antimicrobiano que podría añadirse a la formulación de la solución acuosa a fin de proporcionar la protección antimicrobiana apropiada para la formulación, de acuerdo con los distintos requisitos de registro de salubridad sin ocasionar formación de turbidez indeseable en la solución. De esta manera, cuando estaba presente en las formulaciones de la presente invención, el agente de estabilización preferido, el polisorbato 80, en la cantidad efectiva preferida de 0.1 miligramo por mililitro, la cantidad efectiva del agente de conservación antimicrobiano preferido, v.gr., m-cresol que podría añadirse sin ocasionar turbidez de la formulación se encontró que era crítico. Por ejemplo, si la cantidad de m-cresol añadida a una formulación que contenía 0.1 miligramo por mililitro de polisorbato 80, tal como se muestra en el Ejemplo 3 se aumenta hasta más de 1.75 miligramos por mililitro, se observa turbidez. Un problema de turbidez semejante se observó cuando la cantidad de polisorbato 80 en la formulación resultante se varió de 0.01 a 1 miligramo por mililitro. No se observó turbidez cuando se añadió una cantidad de 1.75 miligramos por mililitro o menos, de preferencia de aproximadamente 1.5 miligramos por miligramos de m-cresol a una formulación preparada de conformidad con los procedimientos del Ejemplo 3 que contiene 0.1 miligramo por mililitro del polisorbato 80. Esta criticalidad se observó también con los parabenes y el fenol cuando se usaron comno agentes de conservación antimicrobianos. Para las formulaciones de la presente invención que contienen de 0.01 a 1 miligramo por mililitro de polisorbato 80, la cantidad efectiva de metilparaben debe ser no mayor de aproximadamente 1.2 miligramos por mililitro cuando se usa con 0.12 miligramo por mililitro de propilparaben para evitar la turbidez, y la cantidad efectiva de fenol (cuando se usa en vez de parabenes) debe quedar dentro de la escala de 0.5 hasta menos de aproximadamente 4 miligramos por mililitro, para evitar el enturbiamiento .

Las formulaciones de interferón de tipo alfa son útiles para el tratamiento de una variedad de estados de enfermedad, tales como carcinomas de célula renal, sarcoma de Kaposi relacionada con SIDA, hepatitis B crónica y aguda, hepatitis no A, no B/C crónica y aguda. Las formulaciones de la presente invención son útiles para tratar estos estados de enfermedad, de preferencia como soluciones acuosas inyectables.

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos no limitativos ilustran la preparación de las soluciones acuosas de los interferones de tipo alfa. Los procedimientos enumerados después del Ejemplo se usan para preparar las formulaciones de la presente invención de los Ejemplos 1 a 5.

EJEMPLO 1 Substancia Activa: Interferón alfa-2b de 0.1 x 106 a 100 x 106 IU/ml* Agente Estabilizador: Fosfato de Sodio (monobásico/dibásico) de 0.005 a 0.1 M Agente de Quelación: Disodio de Edetato de 0.01 a 1 mg/ml Estabilizador: Polisorbato 80 de 0.01 a 1 mg/ml Agente de Ajuste de Tonicidad: Cloruro de Sodio de 1 a 9 mg/ml Agente de Conservación Antimicrobiano: m-Cresol de 0.5 a 1.75 mg/ml o Fenol de 0.5 a <4 mg/ml o Metilparaben de 0.6 a 1,2 mg/ml Propilparaben de 0.06 a 0.12 mg/ml Solvente: Agua para Inyección en cantidad suficiente para alcanzar 1 mi *IU - Unidades Internacionales EJEMPLO 2 Interferón alfa-2b 10 xlO6 IU/ml Fosfato de Sodio Dibásico Anhidro 1.8 mg/ml Monohidrato Monobásico de Fosfato de Sodio 1.3 mg/ml Disodio de Edetato 0.1 mg/ml Polisorbato 80 0.1 mg/ml Metilparaben 1.2 mg/ml Propilparaben 0.12 mg/ml Cloruro de sodio 7.5 mg/ml Agua para Inyección cantidad suficiente para alcanzar 1 mi EJEMPLO 3 Interferón alfa-2b 10 x 106 IU/ml Fosfato de Sodio Dibásico Anhidro 1.8 mg/ml Monohidrato Monobásico de Fosfato de Sodio 1.3 mg/ml Disodio de Edetato 0.1 mg/ml Polisorbato 80 0.1 mg/ml m-Cresol 1.5 mg/ml Cloruro de Sodio 7.5 mg/ml Agua para Inyección cantidad suficiente para alcanzar 1 mi Los datos de estabilidad en los Ejemplos 2 y 3 se resumen en los Cuadros 1 y 2, respectivamente.

EJEMPLO 4 Se preparó la formulación del Ejemplo 3 con 6 x 106 IU/ml de interferón alfa-2b de conformidad con el método de fabricación detallado a continuación usando rociadura de nitrógeno de la solución y no manteniendo más de aproximadamente 4 por ciento en volumen del oxígeno en el espacio superior. Los frascos pequeños que contienen un volumen de 3 mililitros de solución se almacenaron a temperaturas de 30°C, 25°C y 4°C. Los resultados se resumen en el Cuadro 3. EJEMPLO 5 Se preparó la formulación del Ejemplo 4 de conformidad con el método de fabricación detallado a continuación en todos los detalles, excepto que no se roció nitrógeno a través de la solución ni se colocó por encima de la misma y el volumen de oxígeno en el espacio superior fue de ~20 por ciento en volumen como se encuentra en el aire ambiente. Los frascos pequeños que contienen un volumen de 3 mililitros de solución se almacenaron a temperaturas de °C, 25°C y 4°C, los resultados se resumen en el Cuadro 4. Se esperan resultados semejantes si el interferón alfa-2b en los Ejemplos 1 a 5 se subtituye de una cantidad equivalente de Roferon A, Wellferon o Sumiferon, en interferon alfa.

CUADRO 1 Datos de Estabilidad del Interferon Alfa-2b en el Ejemplo 2 Tiempo Tempe- Ensayo Antiviral Contenido de Proteina ratura (CPE) (Ensayo de HPLC) (mes) (°C) (xl06IU/ml) (% de L.S .) (mcg/ml) (% de Inicial) Inicial 10.0 100 42.5 100 3 4 9.0 90 42.4 100 6 4 10.0 100 41.8 98 9 4 10.0 100 43.2 102 12 4 10.0 100 44.3 104 18 4 9.8 98 41.5 98 24 4 10.0 100 39.5 93 Materia en Partículas Descripción (partículas/envase) _>10µ >25µ >50µ 40 3 1 CCS1 16 13 11 CCS 8 3 1 CCS 52 3 0 CCS 17 4 2 CCS 6 1 0 CCS 5 1 0 CCS * ccs - solución cristalina incolora, esencialmente exenta de partículas visibles.

CUADRO 2 Datos de Estabilidad del Interferon Alfa-2b en el Ejemplo 3 Tiempo Tempe- Ensayo Antiviral Contenido de Proteina ratura (CPE) (Ensayo de HPLC) (mes) (°C) (xl06IU/ml) (% de L.S .) (mcg/ml) ( Inicial) Inicial 10.3 103 37.9 100 1 4 10 100 38.2 101 3 4 10 100 38.9 103 6 4 10 100 40.0 105 9 4 10 100 37.1 97.9 12 4 10 100 36.6 96.6 4 10 100 36.1 95.3 Materia en Partículas Descripción (partículas/envase) >10µ >25µ >50µ 68 4 3 CCS* 142 24 23 CCS 311 63 35 CCS 206 17 16 CCS 211 109 50 CCS 300 65 12 CCS 123 8 6 CCS *ccs - solución cristal.ina incolora, esencialmente exenta de partículas vis ¡ibles CUADRO 3 Datos de Estabilidad del Interferon Alfa-2b en el Ejemplo 4 Tiempo Tempe- Posición Ensayo Antiviral ratura del frasco (CPE) (mes) (°C) pequeño* (xl06IU/ml) (% de L.S.) Inicial UP 6.00 100 INV 6.00 100 UP 6.00 100 INV 6.00 100 25 UP 6.00 100 INV 6.00 100 UP 6.00 100 INV 6.00 100 25 UP 5.58 92.3 INV 6.00 100 12 UP 6.00 100 INV 6.00 100 (Cuadro 3 continuación) Contenido de Proteína Ensayo de m-Cresol (Ensayo de HPLC) (mcg/ml) (% Inicial) (mg/ml) % de LS pH .7 100 1.47 98.0 6.91 24.8 96.5 1.47 98.0 6.90 24.8 96.5 1.47 98.0 6.90 23.5 91.4 1.46 97.3 6.88 24.2 94.2 1.46 98.7 6.87 21.7 84.4 1.43 95.3 6.88 21.7 84.4 1.47 98.0 6.88 24.6 95.7 1.46 97.3 6.84 24.3 94.6 1.45 96.7 6.84 .5 79.8 1.45 96.7 6.85 .4 79.4 1.44 96.0 6.85 23.4 91.0 1.47 98.0 6.84 23.4 91.0 1.46 97.3 6.84 *UP - Vertical INV - Invertido CUADRO 3 (continuación) Tiempo Tempe- Posición Materia en Partículas Des- ratura del frasco (No. de Partículas/ cripción pequeño1 frasco pequeño) (mes] (°C) >10µm _>25µm >50µm Inicial 23 CCS' 1 30 UP 109 61 16 CCS INV 55 11 2 CCS UP 29 2 0 CCS INV 59 23 2 CCS 25 UP 141 76 17 CCS INV 49 16 3 CCS UP 59 21 3 CCS INV 68 20 4 CCS 25 UP 38 4 0 CCS INV 57 4 0 CCS 12 UP 21 2 0 CCS INV 18 2 0 CCS * CCS - Solución cristalina incolora, esencialmente exenta de partículas visibles.

CUADRO 4 Datos de Estabilidad del Interferon Alfa-2b en el Ejemplo 5 Tiempo Tempe- Posición Ensayo Activiral ratura del frasco (CPE) (mes) (°C) pequeño* (xl06IU/ml) (% de L.S.) Inicial 6.00 100 1 30 U UPP 6 6..0000 100 I INNVV 6 6..0000 100 3 4 U UPP 6 6..0000 100 INV 6.00 100 25 U UPP 6 6..0000 100 INV 6.00 100 6 4 U UPP 6 6..0000 100 INV 6.00 100 25 U UPP 6 6..0000 100 INV 6.00 100 12 4 U UPP 7 7..5566 126 I INNVV 7 7..0000 117 (Cuadro 4 (continuación) Contenido de Proteína Ensayo de m-Cresil Ensayo de HPLC) (mcg/ml) (% inicial) (mg/ml) % de LS pH .5 100 1.47 98.0 6.85 19.5 76.5 1.49 99.3 6.82 19.5 76.5 1.50 100 6.83 24.0 94.1 1.43 95.3 6.81 24.0 94.1 1.43 95.3 6.82 .2 79.2 1.39 92.7 6.82 19.6 76.9 1.41 94.0 6.82 24.6 96.5 1.47 98.0 6.82 24.6 96.5 1.47 98.0 6.83 17.2 67.5 1.47 98.0 6.83 16.1 63.1 1.48 98.7 6.84 23.3 91.4 1.58 105 6.88 23.2 91.0 1.41 94.0 6.88 (Cuadro 4 (continuación) Tiempo Tempe- Posición Materia en Partículas Des- ratura del frasco (No. de partículas/ crip- pequeño frasco pequeño) ción (mes) (°C) >10µm >25µm >50µm Inicial 144 CCS1 1 30 UP 89 3 1 CCS INV 64 1 0 CCS 3 4 UP 39 1 0 CCS INV 77 19 6 CCS 3 25 UP 57 1 0 CCS INV 140 24 1 CCS 6 4 UP 66 1 0 CCS INV 220 87 27 CCS 25 UP 92 3 0 CCS INV 241 5 0 CCS 12 4 UP 63 1 0 CCS INV 119 6 1 ees *CCS - Solución cristalina incolora, esencialmente exenta de partículas vis ;ibles.

Método de Fabricación para los Ejemplos 1 a 5 A. Mezclado de Formulaciones de la Solución Acuosa que Contiene Paraben tal como se Muestrra en el Ejemplo 2. 1. Se cargan aproximadamente 80 por ciento de agua para inyección a una temperatura mayor de 70°C en un recipiente de mezclar con camisa equipado con un agitador. 2. Se carga separadamente aproximadamente 30 por ciento del agua para inyección en otro recipiente apropiado. Se enfría y se mantiene la temperatura del agua entre 20°C y 25°C. Se comienza a rociar y colocar por encima el agua que se usará para llevar el lote al volumen final con el nitrógeno filtrado para mantener un nivel de oxígeno disuelto de o menor de 0.25 parte por millón. 3. Se carga y disuelve con mezclado el metilparaben y el propilparaben en el recipiente de mezclar en el paso 1, mientras que la temperatura de la solución se mantiene entre 70°C y 80°C. 4. Se enfría la solución en el paso 3 a una temperatura de entre 20°C y 25°C. Se rocía y se coloca por encima de la solución con nitrógeno filtrado. Se mantiene un nivel de oxígeno disuelto a o menor de 0.25 parte por millón. 5. Se cargan y disuelven con mezclado los siguientes ingredientes en la solución en el paso 4, mientras que se mantiene el rociado y colocación del nitrógeno: Fosfato de sodio dibásico anhidro Monohidrato monobásico de fosfato de sodio Disodio de edetato Cloruro de sodio 6. Se descontinua el rociado de nitrógeno de la solución del paso 5. Mantenga el nitrógeno por encima del recipiente de mezclar. 7. Se carga y disuelve el polisorbato 80 en aproximadamente 50 mililitros de agua para inyección para un lote de tamaño de un litro en un recipiente separado, se transfiere la solución de polisorbato 80 hacia la solución del paso 6. 8. Se comprueba el pH de la solución. Debe ser entre 6.6 y 7.0. No se requiere ningún ajuste de pH. 9. Se carga la solución de la droga a granel del interferón alfa-2b en la solución en el paso 8, mientras que se se mezcla. 10. Se añade agua para inyección que se ha rociado con nitrógeno (del paso 2) para llevar el lote al volumen final. Se agita la solución suavemente hasta quedar homogénea. 11. Se filtra asépticamente a la solución a través de un filtro esterilizado que se ha lavado y probado para su integridad. Se recoge la solución esterilizada en un recipiente de llenado esterilizado que se ha llenado con nitrógeno filtrado estéril. Se prueba para su integridad el filtro después de la filtración. 12. Se llena el recipiente de llenado en el paso 11 con nitrógeno filtrado estéril y se sella.

B. Mezclado de las Formulaciones de la Solución Acuosa que Contiene m-Cresol, tal como se Muestra en el Ejemplo 3.

El procedimiento de fabricación usado para preparar la solución acuosa que contiene m-cresol como un agente de conservación (tal como se muestra en el Ejemplo 3) es exactamente el mismo que se describe en lo que antecede con la excepción de que la temperatura de la solución en el Paso 3 se mantiene entre 20°C y 25°C y el m-cresol se carga después del Paso 6.

C. Mezclado de las Formulaciones de la Solución Acuosa de Alfa-Interferón Exenta de HSA Bajo Aire Ambiente El procedimiento de fabricación usado para preparar las formulaciones acuosas de alfa-interferón exentas de HSA de los Ejemplos 1 a 4 se usó para preparar las formulaciones, tales como aquella del Ejemplo 5 con la excepción de que todos los pasos se llevaron a cabo bajo aire ambiente. No se roció nitrógeno a través de la solución ni se colocó por encima y el aire ambiente (que contiene normalmente aproximadamente 20 por ciento de volumen de oxígeno) ocupó el volumen del espacio superior. Para mantener la estabilidad química, física y biológica elevada, se prefiere que el agua usada para preparar la solución acuosa de alfa-interferón así como la solución acuosa de alfa-interferón formada de esta manera esté esencialmente exenta de oxígeno disuelto y la solución acuosa puede prepararse y almacenarse con un espacio superior de una atmósfera inerte, tal como nitrógeno que no contiene más de 4 por ciento en volumen de oxígeno. Mediante el término "esencialmente exenta de oxígeno disuelto" como se usa en la presente, se quiere dar a entender un nivel de oxígeno de no más de aproximadamente 0.25 parte por millón a una temperatura del agua de aproximadamente 20°C a 25°C. Normalmente, este nivel de oxígeno disuelto preferido de 0.25 parte por millón se logra convenientemente rociando una atmósfera inerte, v.gr., gas de nitrógeno hacia el agua usada para preparar las soluciones acuosas (mantenidas a una temperatura de aproximadamente 20°C a 25°C) durante un periodo de tiempo suficiente (v.gr., a aproximadamente 30 minutos) para disminuir el oxígeno disuelto hasta un valor de no más de aproximadamente 0.25 parte por millón. La rociadura se continua a través del procedimiento de fabricación para mantener el nivel de oxígeno disuelto a 0.25 parte por millón. Hemos encontrado que las formulaciones acuosas de la presente invención tienen un nivel de oxígeno disuelto de una parte por millón y un contenido de oxígeno en el espacio superior de 7 por ciento en volumen, demostraron pérdidas significativamente mayores de estabilidad química de la alfa-interferón después de tres meses de almacenamiento a 25°C, en comparación con una formulación acuosa semejante que tiene el nivel de oxígeno disuelto preferido de 0.25 partes por millón y un contenido de oxígeno en el espacio superior de 4 por ciento en volumen almacenado bajo las mismas condiciones. Una comparación lado a lado del dato de estabilidad de la solución del interferón alfa-2b que se muestra en los Cuadros 3 y 4 muestra que no hay diferencia de estabilidad significativa entre las formulaciones de la solución acuosa de la presente invención que se prepararon bajo condiciones de nitrógeno/oxígeno bajo usadas en el Ejemplo 4 y aquellas preparadas de conformidad con el Ejemplo 5 bajo aire ambiente durante un almacenamiento de 12 meses a 4°C. En contraste, una comparación de la estabilidad del interferón alfa-2b en soluciones de los Ejemplos 4 y 5 almacenada a temperaturas más elevadas v.gr., de 25°C a 30°C muestra el efecto protector logrado por el uso preferido (más seguro de rociadura de nitrógeno para efectuar niveles de oxígeno disueltos bajos en la solución acuosa mientras que se mantiene simultáneamente un contenido de oxígeno en el espacio superior a un valor no mayor de aproximadamente 4 por ciento en volumen. La formulación de la solución acuosa de la presente invención puede almacenarse en cualquiera de los recipientes de llenado lavados y esterilizados apropiados o en un envase tal como frascos pequeños de vidrio de capacidad de 2 mililitros o 5 mililitros de Tipo I con cierres de caucho de butilo color gris. Las formulaciones de la solución acuosa de la presentre invención también pueden almacenarse en jeringas prellenadas de dosis múltiples, tales como aquellas útiles para suministrar las soluciones de drogas tales como insulina. Las jeringas apropiadas típicas incluyen sistemas que comprenden un frasco pequeño prellenado fijado a una jeringa de tipo de pluma tal como Novolet Novo Pen que puede obtenerse de Novo Nordisk. Los sistemas apropiados típicos incluyen una jeringa de tipo de pluma prellenada que permite la auto-inyección fácil por el usuario así como graduaciones de dosis exactas reproducibles. Las formulaciones de las soluciones acuosas de la presente invención, tal como se presentan en los Ejemplos pueden liofilizarse también para formar un polvo para reconstitución. El polvo de interferón del tipo alfa liofilizado es de esperarse que mantenga su estabilidad química y biológica cuando se almacena a temperatura de 2°C a 8°C durante por lo menos 2 años.

Claims (13)

R E I V I N D I C A C I O N E S :

1. Una formulación estable acuosa que tiene gran actividad biológica del interferón de tipo alfa y que está exenta de productos derivados de sangre humana que comprende : a. de 0.1 x 106 a 100 x 106 IU/mililitro del interferón de tipo alfa; b. un sistema estabilizador para mantener un pH dentro de la escala de 4.5 a 7.1. c. una cantidad efectiva de un agente de quelación; d. una cantidad de un derivado de poli (oxi-1, 2- etandiilo) de mono-9-octadecenoato de sorbitan, suficiente para estabilizar el interferón de tipo alfa contra pérdida del interferón de tipo alfa; e. una cantidad efectiva de un agente de tonicidad; f. una cantidad efectiva de un agente de conservación antimicrobiano; y g. una cantidad de agua para inyección suficiente para preparar una solución de los ingredientes enumerados en lo que antecede.

2. La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde el sistema estabilizador es fosfato dibásico de sodio y fosfato monobásico de sodio.

3. La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde el agente de quelación es disodio de edetato o ácido cítrico.

4. La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde el agente de tonicidad es cloruro de sodio.

5. La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde el agente de conservación se selecciona de m-cresol, fenol, metilparaben, propilparaben o mezclas de los mismos.

6. La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde el interferón de tipo alfa es interferón alfa-2.

7. Una formulación de una solución acuosa estable que tiene alta actividad biológica del interferón alfa-2 y que está exento de albúmina de suero humano que comprende: mg/ml a. Interferón alfa-2 5 x 106 a 50 x 106 IU b. Fosfato de Sodio Dibásico Anhidro 1.8 c. Monohidrato Monobásico de Fosfato de Sodio 1.3 d. Etilendiamintetráacetato de Dihidrógeno de Disodio 0.1 e. Un Derivado de Poli (Oxi-1, 2- Etandiilo) de Mono-9-Octadecenoato de Sorbitan 0.1 f. Metilparaben 1.2 g. Propilparaben 0.12 h. Cloruro de Sodio; y 7.5 i. Agua para Inyección cantidad suficiente para llegar a 1 mi

8. Una formulación de una solución estable acuosa que tiene alta actividad biológica del interferón alfa-2 y que está exenta de albúmina de suero humano que comprende : mg/ml a. Interferón alfa-2 5 x 106 a 50 x 106 IU b. Fosfato de Sodio Dibásico Anhidro 1.8 c. Monohidrato Monobásico de Fosfato de Sodio 1.3 d. Etilendiamintetraacetato de Dihidrógeno de Disodio 0.1 e. Un Derivado de Poli (Oxi-1, 2- Etandiilo) de Mono-9-Octadecenoato de Sorbitan 0.1 f. m-Cresol 1.5 g. Cloruro de Sodio; y 7.5 h. Agua para Inyección cantidad suficiente para legar a 1 mililitro

9. Un artículo de fabricación que comprende un material de empaquetadura y la formulación de cualesquiera de las reivindicaciones que anteceden, en donde el material de empaque es un frasco pequeño de vidrio de dosis múltiples .

10. Un artículo de fabricación que comprende una jeringa prellenada que contiene una cantidad efectiva de la formulación de cualesquiera de las reivindicaciones que anteceden.

11. Un artículo de fabricación que comprende un material de empaquetadura y la formulación de cualquiera de las reivindicaciones que anteceden, en donde el material de empaque es un frasco pequeño de una sola dosis.

12. Un proceso para preparar una formulación estable acuosa que tiene alta actividad biológica del intererón de tipo alfa y que está exenta de productos derivados de sangre humana que comprenden mezclar una cantidad efectiva del interferón de tipo alfa con un sistema estabilizador capaz de mantener el pH dentro de la escala de 4.5 a 7.1, y un agente de quelación, un derivado de poli (oxi-1, 2-etandiilo) de mono-9-octadecenoato de sorbitan, un agente de tonicidad, un agente de conservación antimicrobiano y agua suficiente para producir una solución acuosa.

13. El proceso de conformidad con la reivindicación 12, en donde la solución acuosa se prepara y se mantiene esencialmente exenta de oxígeno disuelto.