MXPA05007129A

MXPA05007129A - Usos de la citocina de mamifero; reactivos relacionados.

Info

Publication number: MXPA05007129A
Application number: MXPA05007129A
Authority: MX
Inventors: Elena Vaisberg-Targulian
Original assignee: Schering Corp
Priority date: 2002-12-31
Filing date: 2003-12-18
Publication date: 2005-08-26
Also published as: US20120225030A1; NZ579795A; JP4727995B2; US8178308B2; US7445779B2; DE60336930D1; EP1589998A2; US20040219096A1; AU2003301114B2; AU2003301114A1; CA2511838A1; CA2511838C; US20070224166A1; ATE506987T1; WO2004060291A3; WO2004060291A2; JP2006514057A; EP1589998B1; EP1589998A4

Abstract

Se proveen citocinas y metodos de modulacion de la actividad del sistema inmune utilizando agonistas y antagonistas de citocina; tambien se proveen metodos de tratamiento de trastornos inmunes y proliferativos.

Description

USOS DE LA CITOCINA DE MAMIFERO: REACTIVOS RELACIONADOS CAMPO DE LA INVENCION La presente invención provee métodos para mejorar o inhibir ia producción del IFNgamma en el tratamiento de diversos trastornos inmunes.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La respuesta inmune en mamíferos se basa en una serie de interacciones celulares complejas, denominadas la "red inmune". La investigación reciente ha provisto discernimientos novedosos en el funcionamiento interno de esta red. Aunque es evidente que gran parte de la respuesta gira, de hecho, alrededor de las interacciones semejantes a la red de linfocitos, macrófagos, granulocitos, y otras células, actualmente los inmunólogos generalmente mantienen la opinión de que las proteínas solubles, conocidas como citocinas desempeñan un papel crítico en el control de estas interacciones celulares. Por lo tanto, existe un interés considerable en el aislamiento, caracterización, y mecanismos de acción de los factores moduladores de la célula, un entendimiento que llevará a avances significativos en el diagnóstico y la terapia de numerosas anormalidades médicas, por ejemplo, trastornos del sistema inmune. Algunos de estos factores son factores de crecimiento y/o diferenciación hematopoiética, por ejemplo, factor de célula madre (SCF) o IL-12 (véase, por ejemplo, Mire-Sluis y Thorpe (1998) Cytokines, Academic Press, San Diego, CA; Thomson (ed.) (1998) The Cytokine Handbook (3a ed.) Academic Press, San Diego, CA; Metcalf y Nicola (1995) The Hematopoietic Colony Stimulating Factors, Cambridge Univ. Press, Cambridge, RU; y Aggarwal y Gutterman (1991) Human Cytokines, Blackwell, Malden, MA). Las citocinas median las actividades celulares en una variedad de modos. Se ha mostrado que éstas apoyan la proliferación, crecimiento, y diferenciación de células madre hematopoiéticas pluripotenciales hacia un gran número de progenitores que comprenden diversos linajes celulares que conforman un sistema inmune complejo. Las interacciones adecuadas y balanceadas entre los componentes celulares son necesarias para una respuesta inmune saludable. Los linajes celulares diferentes frecuentemente responden de manera diferente cuando las citocinas se administran en conjunción con otros agentes. Los linajes celulares especialmente importantes para la respuesta inmune incluyen: células B, las cuales pueden producir y secretar inmunoglobulinas (proteínas con la capacidad de reconocimiento y unión a materia externa para llevar a cabo su remoción), células T de diversas subpoblaclones que secretan citocinas e inducen o suprimen a las células B y diversas otras células (incluyendo otras células T) que conforman la red inmune, células NK, las cuales son responsables de la producción de la citocina en respuesta a agentes infecciosos y células tumorales, y células presentadoras del antígeno tales como células dendríticas y otras células derivadas de mieloide. La presente invención provee métodos para utilización de la IL-27, una citocina relacionada con IL-12. La IL-12 desempeña un papel crítico en la inmunidad mediada por célula. Sus actividades son provocadas a través de un complejo receptor de alta afinidad que comprende dos subunidades, IL-12Rbeta1 e IL-12Rbeta2. La subunidad p35 de la IL-12 se puede unir a una segunda proteína soluble denominada EBI3, y se ha sugerido que p35 y EBI3 forman un heterodímero secretado, aunque la función de este heterodímero no es clara. EBI3 también se une a otra proteína, p28, para formar un heterodímero soluble que comprende p28 y EBI3, actualmente denominada IL-27. La subunidad p28 también se conoce como IL-80 o como IL-D80. Un ADNc que codifica la subunidad p35 de humano y de ratón se ha descrito en US20020 64609 y WO 02/068596, ambas incorporadas como referencias (véase, por ejemplo, Devergne, et al. (1997) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 94: 12041-12046; Chua, et al. (1995) J. Immunol. 155: 4286: 4294; Presky, et al. (1998) J. Immunol. 160: 2174-2179; Gately, et al. (1998) Ann. Rev. Immunol. 16: 495-521 ; Presky, et al. (1996) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 93: 14002-14007; Trinchieri (1998) Adv. Immunol. 70: 83-243; Trinchieri (1998) Immunol. Res. 7: 269-278; Trinchieri (1995) Annu. Rev. Immunol. 13: 251-276). La presente invención provee métodos para modular la expresión del interferón-gamma (IFNgamma) para el propósito de estimular la defensa inmune en contra de bacterias y parásitos, por ejemplo, bacterias y parásitos ¡ntracelulares, y en contra de virus, cánceres, y tumores. El IFNgamma puede mediar la respuesta inmune en contra de bacterias intercelulares, en donde las especies bacterianas ¡ntracelulares comunes incluyen Salmonella sp., Shigella sp., Listeria sp., Francisella sp., Mycobacteria sp. (tuberculosis; lepra), Legionella sp., Rickettsia sp., Orienta sp., Ehrlichia sp., Anaplasma sp., Neorícketísia sp., Chlamydia sp., y Coxiella sp. Adicionalmente, el IFNgamma media las respuestas a los parásitos, por ejemplo, Plasmodia sp. (malaria), Toxoplasma sp., Leishmania sp., Trypanosoma sp., y Cryptosporidium sp. Además, el IFNgamma media la defensa inmune en contra de virus, por ejemplo, VIH, ortopoxvirus, tales como virus de viruela y virus de vaccinia (viruela), y herpesvirus, incluyendo alfa herpesvirus, por ejemplo, virus Herpes Simplex, y beta herpesvirus, por ejemplo, Cytomegalovirus. También se proveen métodos para reducir o inhibir la expresión del IFNgamma, por ejemplo, para el tratamiento de trastornos inflamatorios crónicos, tal como enfermedad de Crohn (véase, por ejemplo, Kent, et al. (2000) Vaccine 18: 2250-2256; Ismail, et al. (2002) FEMS Microbiol. Lett. 207: 111-120; Kaufmann (2001 ) Nature Revs. Immunol. 1 : 20-30; Goebel y Gross (2001 ) TRENDS Microbiol. 9: 267-273; Heussler, et al. (2001) Int. J. Parasitol. 31 : 1166-1176; Luder, et al. (2001 ) Carsten, et al. (2001) TRENDS Parasitol. 17: 480-486; Rook, et al. (2001 ) Eur. Resp. J. 17: 537-557; Stenger y Rollinghoff (2001) Ann. Rheum. Dis. 60: iii43-iii46; Haas, et al. (2002) Am. J. Dermatopathol. 24: 319-323; Dormán y Holland (2000) Cytokine Growth Factor Revs. 1 1 : 321-333; Smith, et al. (2002) J. Gen. Virol. 83 (Pt. 12) 2915-2931; Cohrs y Gilden (2001) Brain Pathol. 11 : 465- 474; Tannenbaum y Hamilton (2002) Sem. Cáncer Biol. 10: 113-123; Ikeda, et al. (2002) Cytokine Growth Factor Revs. 13: 95-109; Klimp, et al. (2002) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 44: 143-161; Frucht, et al. (2001) TRENDS Immuno!. 22: 556-560). A partir de lo precedente, es evidente que los descubrimientos de funciones y métodos novedosos relacionados con las citocinas y receptores de citocina, por ejemplo, con relación a la IL-27, IL-12, y sus receptores, pueden contribuir a terapias novedosas para un amplio intervalo de condiciones degenerativas o anormales, por ejemplo, infecciones y cánceres, en donde las terapias implican directamente o indirectamente al sistema inmune y/o a las células hematopoiéticas. En particular, el descubrimiento y desarrollo de las citocinas que mejoran o potencian las actividades benéficas de citocinas conocidas podrían ser altamente ventajosos. La presente invención provee métodos para mejorar la producción del IFNgamma utilizando IL-27.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención se basa, en parte, en el descubrimiento de que la IL-27 mejora la producción del interferón-gamma (IFNgamma). La presente invención provee un método para modular la expresión o niveles del interferón-gamma (IFNgamma) por una célula que comprende tratar a la célula con una cantidad efectiva de un agonista o antagonista de la citocina IL-27. En otra modalidad, la presente invención provee un método de modulación de la expresión o niveles del interferón-gamma (IFNgamma) por una célula que comprende tratar a la célula con una cantidad efectiva de un agonista de la IL-27 y un agonista de la IL-12, IL-15, IL-18, o IL- 23; o un antagonista de la IL-27. También se provee el método anteriormente mencionado en donde la modulación es creciente y el tratamiento se realiza con un agonista de la IL-27; o es decreciente y el tratamiento se realiza con un antagonista de la IL- 27; el método anteriormente mencionado en donde el agonista es una IL-27 variante o derivada, y la IL-27 variante o derivada posee al menos una propiedad biológica de la IL-27; así como el método anteriormente mencionado en donde la IL-27 variante o derivada comprende una hipercina IL-27 y, además, el método anteriormente mencionado en donde el incremento es de aproximadamente dos veces, de aproximadamente 5-veces, de aproximadamente 10-veces, de aproximadamente 20-veces, o de aproximadamente 50-veces mayor que el nivel de expresión o de producción en la ausencia de la cantidad efectiva de la IL-27, o IL-27 variante o derivada. En otro aspecto, la invención provee el método anteriormente mencionado en donde el tratamiento con un agonista comprende adicionalmente el tratamiento con un agonista de una citocina adicional; o el tratamiento con un antagonista comprende adicionalmente el tratamiento con un antagonista de una citocina adicional; así como el método anteriormente mencionado en donde la citocina adicional es IL-2; IL-15; IL-12; IL-23; o IL-18. Otra modalidad de la invención abarca el método anteriormente mencionado en donde el tratamiento con un agonista comprende adicionalmente el tratamiento con un agonista de dos citocinas adicionales; o el tratamiento con un antagonista comprende emocionalmente el tratamiento con un antagonista de dos citocinas adicionales; así como el método anteriormente mencionado en donde las dos citocinas adicionales son IL-2 e IL-12; IL-2 e IL-23; IL-15 e IL-12; IL-15 e IL-23; o IL-18 e IL-2, IL- 15, IL-12, o IL-23. En incluso otro aspecto, la invención provee el método anteriormente mencionado en donde la célula tratada con el agonista se trata con agonistas de tres citocinas adicionales; o la célula tratada con el antagonista se trata con antagonistas de tres citocinas adicionales; así como el método anteriormente mencionado en donde las tres citocinas adicionales son IL-18 e IL-2 e IL-15; o IL-18 e IL-12 e IL-23. En otra modalidad, la invención provee el método anteriormente mencionado en donde la célula es una célula T; o una célula NK; el método anteriormente mencionado en donde la célula se localiza en un sujeto, y el agonista de la IL-27 o antagonista de la IL-27 se administra al sujeto; y el método anterior en donde el sujeto tiene, o se sospecha de que tiene, un trastorno o condición patológica que se puede tratar o mejorar mediante la modulación de los niveles del IFNgamma en el sujeto.

Incluso otro aspecto de la invención provee el método anteriormente mencionado en donde el tratamiento es con un agonista o antagonista de la IL-27 y el trastorno o condición comprende cáncer, neoplasma, o tumor; un patógeno intraceiular; o una condición inflamatoria o autoinmune; el método anteriormente mencionado en donde el tratamiento es con un agonista o antagonista de la IL-27 y el patógeno intraceiular comprende Leishmania sp.; Mycobacterium sp.; Listeria sp.; Toxoplasma sp.; herpesvirus; citomegalovirus; o virus de inmunodeficiencia humana (VIH); el método anteriormente mencionado en donde el tratamiento es con un agonista o antagonista de la IL-27 y las condiciones inflamatorias o autoinmunes comprenden artritis reumatoide; o asma o alergia; así como el método anteriormente mencionado en donde el tratamiento es con un antagonista o antagonista de la IL-27 y el trastorno o condición comprende condición o trastorno de TH1 ; esclerosis múltiple; psoriasis; enfermedad de Crohn; diabetes tipo I; o lupus eritematoso sistémico. La presente invención también provee un método para tratar o mejorar un trastorno o condición patológica de un sujeto mediante la modulación de la expresión o de los niveles del IFNgamma en el sujeto, que comprende administrar una cantidad efectiva de un agonista o antagonista de la citocina IL-27. También se provee el método anteriormente mencionado en donde el sujeto es un sujeto humano; o sujeto veterinario; así como en el método anteriormente mencionado en donde la modulación es creciente y el tratamiento se realiza un agonista de la IL-27; o es decreciente y el tratamiento se realiza con un antagonista de la IL-27 y, además, el método anteriormente mencionado en donde el agonista es una IL-27 variante o derivada, y la IL-27 variante o derivada posee al menos una propiedad biológica de la IL-27; y el método anteriormente mencionado en donde la IL-27 variante o derivada comprende una hipercina IL-27, así como el método anteriormente mencionado en donde el incremento es de aproximadamente dos veces, de aproximadamente 5-veces, de aproximadamente 10-veces, de aproximadamente 20-veces, o de aproximadamente 50-veces mayor que la expresión o nivel de producción en la ausencia de la cantidad efectiva administrada de la IL-27, o IL-27 variante o derivada. Además, la presente invención también provee un método para tratar o mejorar un trastorno o condición patológica de un sujeto mediante la modulación de la expresión o de los niveles del IFNgamma en el sujeto, que comprende administrar una cantidad efectiva de un agonista o antagonista de la citocina IL-27; en donde el sujeto tratado con el agonista se trata con un agonista de una citocina adicional; o el sujeto tratado con el antagonista se trata con un antagonista de una citocina adicional. También se provee el método anteriormente mencionado en donde la citocina adicional es IL-2; IL-15; IL-12; IL-23; o IL-18; así como el método anteriormente mencionado en donde el sujeto tratado con el agonista se trata con agonistas de dos citocinas adicionales; o el sujeto tratado con el antagonista se trata con antagonistas de dos citocinas adicionales; y el método anteriormente mencionado en donde las dos citocinas adicionales son IL-2 e IL-12; IL-2 e IL-23; IL-15 e IL-12; IL-15 e IL-23; o IL-18 e IL-2, IL-15, IL-12, o IL-23. Incluso otra modalidad de la invención provee el método anteriormente mencionado en donde la célula tratada con el agonista se trata con agonistas de tres citocinas adicionales; o la célula tratada con el antagonista se trata con antagonistas de tres citocinas adicionales; el método anteriormente mencionado en donde las tres citocinas adicionales son IL-18 e IL-2 o IL-15; e IL-12 o IL-23; y el método anteriormente mencionado en donde el sujeto tiene, o se sospecha que tiene, o trastorno o condición que se puede tratar o mejorar al modular los niveles del IFNgamma en el sujeto y, además, el método anteriormente mencionado en donde el tratamiento es con un agonista o antagonista de la IL-27 y el trastorno o condición comprende cáncer, neoplasma, or tumor; un patógeno ¡ntracelular; o una condición inflamatoria o autoinmune. Además, la presente invención provee el método anteriormente mencionado en donde el tratamiento es con un agonista or antagonista de la IL-27 y el patógeno ¡ntracelular comprende Leishmania sp.; Mycobacteríum sp.; Listeria sp.; Toxoplasma sp.; herpesvirus; citomegalovirus; o virus de inmunodeficiencia humana (VIH); el método anteriormente mencionado en donde el tratamiento es con un agonista o antagonista de la IL-27 y la condición inflamatoria o autoinmune comprende artritis reumatoide; o asma o alergia; así como el método anteriormente mencionado en donde el tratamiento es con un antagonista o agonista de la IL-27 y la condición inflamatoria o autoinmune comprende una condición o trastorno de TH1 ; esclerosis múltiple; psoriasis; enfermedad de Crohn; diabetes tipo I; o lupus eritematoso sistémico; y el método anteriormente mencionado en donde el antagonista se deriva a partir del sitio de unión al antígeno de un anticuerpo; o de un ácido nucléico. La presente invención provee el método anteriormente mencionado en donde las dos citocinas adicionales son IL-2 e IL-12, IL-15, IL-18, o IL-23; IL-12 e IL-2, IL-15, IL-18, o IL-23; IL-15 e IL-2, IL-12, IL-18, o IL-23; IL-18 e IL-2, IL-12, IL-15, o IL-23; e IL-23 e IL-2, IL-12, IL-15, o IL-18. También se provee el método anteriormente mencionado en donde las tres citocinas adicionales son interleucinas 2, 12, y 15; ¡nterleucinas 2, 12, y 18; interleucinas 2, 12, y 23; interleucinas 2, 15, y 18; interleucinas 2, 15, y 23; interleucinas 2, 18, y 23; interleucinas 12, 15, y 18; ¡nterleucinas 12, 15, y 23; interleucinas 12, 18, e interleucinas 23; 15, 18, y 23.

DESCRIPCION DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS Todas las referencias citadas en la presente invención se incorporan aquí como referencia hasta el mismo punto como si cada publicación individual con solicitud de patente estuviera específicamente e individualmente indicada para ser incorporada como referencia. Como se utiliza en la presente invención, incluyendo las reivindicaciones anexas, las formas singulares de palabras tales como "un", "una" y "el/la", incluyen sus referencias plurales correspondientes a menos que el contexto claramente lo ordene de otra manera.

I. Definiciones. Una aplicación particularmente útil de la IL-27 implica la capacidad de la IL-27 para mejorar la producción del IFNgamma. Antes de la descripción en detalle de este aspecto de la presente invención, se definen los siguientes términos. Cuando se utilizan en la presente invención, estos términos tienen los siguientes significados a menos que se indique de otra manera. Una molécula posee al menos una "actividad biológica de la IL-27" o "actividad agonista de la IL-27" si la molécula se puede reconocer por un anticuerpo generado en contra de una proteína IL-27 nativa; o si la molécula posee cualquier actividad estimulante, inhibidora o de unión de una proteína IL-27 nativa. Por ejemplo, la molécula puede mejorar que una célula inmune produzca IFNgamma o la molécula se puede unir a un receptor de la IL-27. Preferiblemente la molécula se une a WSX-1/TCCR, y más preferiblemente es capaz de mejorar la producción del IFNgamma. "Administración" y "tratamiento", como se aplica a un humano, veterinario, animal, sujeto experimental, célula, tejido, órgano, o fluido biológico, se refiere al contacto de un agente exógeno farmacéutico, terapéutico, diagnóstico, o composición al animal, humano, sujeto, célula, tejido, órgano, o fluido biológico. "Administración" y "tratamiento" se pueden referir, por ejemplo, a los métodos terapéuticos, farmacocinéticos, diagnósticos, de investigación, y experimentales. El tratamiento de una célula abarca el contacto de un reactivo con la célula, así como el contacto de un reactivo con un fluido, en donde el fluido está en contacto con la célula. El tratamiento de una célula incluye situaciones en donde el reactivo está en contacto con un fluido biológico en un humano o animal, pero en donde no se ha demostrado que el reactivo esté en contacto con la célula. El tratamiento abarca adicionalmente situaciones en donde un reactivo administrado o célula se modifica mediante el metabolismo, degradación, o por condiciones de almacenamiento." "Mejoramiento" de la producción del IFNgamma por una célula se refiere al incremento en el nivel del IFNgamma producido por la célula. El nivel del IFNgamma se puede determinar mediante cualquier método establecido en la técnica, tal como ELISA o ensayo de proliferación celular. La mejoría en la producción del IFNgamma en 5 veces significa que el nivel novedoso incrementado del IFNgamma es 5 veces aquel nivel original del IFNgamma. De manera similar, la mejoría en la producción del IFNgamma en 10 veces significa que el incrementado del IFNgamma es 10 veces aquel nivel original del IFNgamma, y así consecutivamente. Se proveen los métodos para utilizar variantes conservativamente modificadas, derivados, y muteínas de polipéptidos y ácidos nucleicos de la IL-27. "Las variantes conservativamente modificadas" se aplican tanto a las secuencias de aminoácidos como a las secuencias de ácidos nucleicos. Con respecto a las secuencias de ácidos nucleicos particulares, las variantes conservativamente modificadas se refieren a aquellos ácidos nucleicos que codifican secuencias de aminoácidos idénticos o esencialmente idénticos o, en donde el ácido nucléico no codifica una secuencia de aminoácidos, a secuencias esencialmente idénticas de ácidos nucleicos. Debido a la degeneración del código genético, un gran número de ácidos nucleicos funcionalmente idénticos puede codificar cualquier proteína dada. En cuanto a las secuencias de aminoácidos, un experto en la técnica reconocerá que una sustitución individual de un ácido nucléico, péptido, polipéptido, o secuencia proteica la cual sustituye a un aminoácido o a un pequeño porcentaje de aminoácidos en la secuencia codificada para un aminoácido conservado es una "variante conservativamente modificada. "Los cuadros de sustitución conservativa que proveen aminoácidos funcionalmente similares se conocen bien en la técnica. Un ejemplo de una sustitución conservativa es el intercambio de un aminoácido en uno de los siguientes grupos por otro aminoácido del mismo grupo (Patente de E.U.A. No. 5,767, 063 expedida a Lee, et al.; Kyte y Doolittle (1982) J. Mol. Biol. 57: 105-132): (1) Hidrófobo: Norleucina, lie, Val, Leu, Phe, Cys, o Met; (2) Hidrófilo neutro: Cys, Ser, Thr; (3) Acido: Asp, Glu; (4) Básico: Asn, Gln, His, Lys, Arg; (5) Residuos que influyen sobre la orientación de la cadena: Gly, Pro; (6) Aromático: Trp, Tyr, Phe; (7) Aminoácidos pequeños: Gly, Ala, Ser. Una "cantidad efectiva" es una cantidad de un agente terapéutico adecuada para lograr el propósito pretendido. Por ejemplo, una cantidad efectiva de una composición para un método de mejoría en la producción del IFNgamma es una cantidad de la composición adecuada para producir una producción incrementada del IFNgamma en comparación con el nivel de producción cuando está ausente la composición. Una cantidad efectiva para tratar o mejorar un trastorno, enfermedad, o condición médica es una cantidad adecuada para producir una reducción o remoción completa de los síntomas del trastorno, enfermedad, o condición médica. La cantidad efectiva de un agente terapéutico dado variará con los factores tales como la naturaleza del agente, la ruta de administración, el tamaño y especie de animal que recibe el agente terapéutico, y el propósito de la administración. La cantidad efectiva en cada caso individual se puede determinar empíricamente por un experto en la técnica de conformidad con los métodos establecidos en la técnica. "Exponer" una célula a una sustancia se refiere a proveer la sustancia a la célula directamente o indirectamente. La sustancia se puede proveer indirectamente, por ejemplo, al proveer un precursor de la sustancia, el que se sabe que se convierte hacia la sustancia. Por ejemplo, la exposición de una célula blanco a la IL-27 se puede lograr al proveer a la célula blanco una composición que comprende la proteína IL-27, o mediante la introducción del gen(es) que codifica para la IL-27 dentro de la célula blanco. Alternativamente, esto también se puede lograr mediante la introducción del gen(es) que codifica para la IL-27 dentro de una segunda célula y mezclando la célula blanco con la segunda célula. "Expresión" abarca la biosíntesis de un ácido nucleico, por ejemplo, ARNm, o de un polipéptido, así como cambios en la compartamentalización de una macromolécula, por ejemplo, mediante movimiento traversa! a partir del núcleo hacia el citosol, inserción dentro de la membrana plasmática, degranulación, o secreción. La expresión o producción de una macromolécula por la célula puede incluir solamente la cantidad encontrada en la célula, por ejemplo, en un homogeneizado celular, en un punto de tiempo dado. Generalmente, esta definición se aplica a la expresión de moléculas no secretadas. Alternativamente, la expresión o producción de una macromolécula por una célula incluye la cantidad encontrada en una célula más la cantidad secretada y acumulada, por ejemplo, en un medio celular o compartimento biológico. Generalmente, esta definición se aplica a proteínas secretadas o degranuladas, por ejemplo, citocinas. "Niveles "se refiere a las concentraciones en un compartimento, incluyendo un compartimento biológico, por ejemplo, en un volumen predeterminado de, por ejemplo, plasma, suero, sangre, fluido intestinal, fluido cerebroespinal, u orina, en un órgano total o fragmento del órgano, en un compartimento dentro de un órgano, por ejemplo, pulpa roja, pulpa blanca, o isletas pancreáticas, o en una célula específica o grupo de células, por ejemplo, macrófagos. Una "hipercina" es una citocina heterodimérica, homodimérica, o multimérica diseñada en donde al menos dos subunidades polipeptídicas de la citocina están covalentemente enlazadas juntas (Pflanz, et al. (2002) Immunity 16: 779-790). Una "célula inmune" es una célula del sistema inmune, tal como una célula B, célula T, célula NK, monocito, macrófago, célula cebada, eosinófilo, o célula presentadora del antígeno (APC), o célula dendrítica. Dependiendo del contexto, una célula inmune también puede ser cualquier célula que expresa mediadores de inmunidad, una célula epitelial que expresa citocinas, dependiendo del contexto. "Microorganismo intracelular" abarca a un organismo unicelular o multicelular que ocupa una célula viva, por ejemplo, una célula hospedera viva, durante parte o todo su ciclo de vida. Un trastorno, condición médica, o enfermedad "autoinmune" se caracteriza por el reconocimiento de un auto antígeno por el sistema inmune propio de una persona o de un animal. Las enfermedades autoinmunes incluyen, sin estar limitadas a, esclerosis múltiple, psoriasis, enfermedad de Graves, diabetes tipo I dependiente de insulina, anemia perniciosa, artritis reumatoide, tiroiditis, glomerulonefritis, lupus eritematoso, síndrome de Sjogren, enfermedad de Addison, hepatitis activa crónica, miastenia gravis, polimiositis/dermatomiositis, cirrosis biliar primaria, escleroderma, uveitis y vitíligo. Un sujeto humano o animal "que se sospecha que tiene" un trastorno, enfermedad, o condición médica es uno que aún no se ha diagnosticado que tiene el trastorno, enfermedad, o condición médica, pero que muestra uno o más síntomas del trastorno, tiene una disposición genética para el trastorno, o ha sido previamente tratado para el trastorno, en donde el trastorno es sujeto de recurrencia. Un "neoplasma" o "tumor" es un crecimiento anormal del tejido, generalmente formando una masa distintiva, que crece mediante proliferación celular más rápidamente que el crecimiento del tejido norma!. Los neoplasmas pueden mostrar ausencia parcial o total de organización estructural y coordinación funcional con el tejido normal. Como se utiliza en la presente invención, se pretende que un neoplasma abarque neoplasmas hematopoiéticos así como neoplasmas sólidos. Un neoplasma puede ser benigno (tumor benigno) o maligno (tumor maligno o cáncer). Los tumores malignos se pueden clasificar ampliamente en tres tipos principales. Los neoplasmas malignos que se generan a partir de estructuras epiteliales se denominan carcinomas, los neoplasmas malignos que se originan a partir de tejidos conectivos tales como músculo, cartílago, tejido graso o hueso se denominan sarcomas y los tumores malignos que afectan a las estructuras hematopoiéticas (estructuras relacionadas con la formación de las célula sanguíneas) que incluyen a los componentes del sistema inmune, se denominan leucemias y linfomas. Otros neoplasmas incluyen, pero no se limitan a neurofibromatosis. "Ácido nucléico "abarca ácido nucleicos en una cadena sencilla así como ácido nucleicos en una cadena doble comprendidos de un complejo de una cadena de ácido nucleicos de cadena sencilla y su cadena complementaria. La presente invención abarca métodos para utilización de un ácido nucleico, por ejemplo, que reside en un vector de expresión, que comprende un ácido nucleico que codifica solamente a la IL-27; solamente a la IL-2; solamente a la IL-12; solamente a la IL-15; solamente a la IL-18; solamente a la IL-23; IL-27 e IL-2; IL-27 e IL-15; IL-27 e IL-12; IL-27 e IL-23; IL-27 e IL-18; IL-27, IL-2 e IL-18; IL-27, IL-15 e IL-18; IL-27, IL-12 e IL-18; así como IL-27, IL-23, e IL-18. La invención también provee un método para la utilización del ácido nucléico anteriormente mencionado, en donde el ácido nucléico también codifica una o más de IL-1 , IL-12, IL-15, IL-18, o IL-23. También se abarcan los métodos para la utilización de un ácido nucleico que codifica todas las citocinas anteriormente mencionadas. La invención contempla métodos en donde, por ejemplo, todos los ácido nucleicos anteriormente mencionados se codifican por un vector; en donde un ácido nucléico es codificado por un primer vector y en donde los ácidos nucleicos remanentes se codifican por un segundo vector; y en donde cada ácido nucléico se codifica por vectores separados, respectivos, y diversas combinaciones de los mismos. También se contemplan los métodos que proveen las citocinas anteriormente mencionadas, en donde se provee una o más atocinas por un vector y en donde se provee directamente una o más citocinas mediante un polipéptido de citocina, por ejemplo, tratamiento con una composición que comprende un vector y un polipéptido. Los vectores del método contemplado comprenden, por ejemplo, un primer promotor operativamente asociado con un primer ácido nucléico; un segundo promotor operativamente asociado con un segundo ácido nucléico; un tercer promotor operativamente asociado con un tercer ácido nucléico, y los similares, así como un primer promotor operativamente asociado con un primer y segundo ácido nucléico, un primer promotor operativamente asociado con un primer, segundo, y tercer ácido nucléico, y los similares. "Tratamiento o mejoría" significa la reducción o la remoción completa de los síntomas de un trastorno, enfermedad, o condición médica.

II. Generalidades. La presente invención provee un método para mejorar la producción del IFNgamma a partir de una célula inmune mediante la utilización de la IL-27. Por lo tanto, como se describe a continuación, las células T y las células NK se pueden estimular para producir IFNgamma mediante citocinas. Se ha demostrado previamente que la IL-2, IL-12, IL-15, 1L-18 e IL-23 son las más efectivas en la estimulación de la producción del IFNgamma, solas o en combinación. Cuando la célula también está expuesta a la IL-27, la producción del IFNgamma se mejora sinergísticamente, hasta 100 veces en comparación con el nivel de producción cuando está ausente la IL-27. Por lo tanto, la presente invención provee un método para producir efectivamente IFN gamma. Este método se puede aplicar in vitro o in vivo. Para facilitar la producción in vitro del IFN gamma, la IL-27 se puede añadir a cultivos de células inmunes para incrementar la producción del IFN gamma. Preferiblemente, también se añade al cultivo al menos una citocina adicional, en particular IL-2, IL-12, IL-15, IL-18 y/o IL-23. Las citocinas son preferiblemente una combinación de la IL-2 (o IL-15) con IL-12 (o IL-23 o IL-18), además de IL-27. La IL-27 se puede añadir a la combinación de IL-2 (o IL-15), IL-12 (o IL-23) e IL-18. En respuesta a la IL-27, se espera que la producción del IFNgamma se incremente varias veces sobre el nivel de la IFNgamma sin la IL-27, preferiblemente por al menos aproximadamente 5, 10, 15, 20, 50, 75, 100, 200, 500, 750 o 1000 veces. La invención provee métodos para tratar a las células, ex vivo, con la IL-27, o con la IL-27 y una, dos, tres, o más citocinas, seguido por la introducción de las células tratadas dentro de un sujeto. Por ejemplo, la célula(s) se puede tratar ex vivo con IL-27, IL-2, IL-12, e IL-18, seguido por la introducción de la célula(s) dentro de un sujeto humano o animal. La invención también provee métodos en donde la célula se trata ex vivo con una, dos, tres, o más citocinas, y en donde el sujeto se trata con la misma una, dos, tres, citocinas o con citocinas diferentes. Por ejemplo, la invención provee un método en donde la célula se trata ex vivo con la IL-27 e IL-2, y en donde el sujeto se trata con la IL-18. Alternativamente, por ejemplo, la célula se trata ex vivo con la IL-18, y el sujeto se trata con la IL-27 e IL-2. El método también se puede utilizar para mejorar la producción del IFNgamma en un animal, particularmente en un mamífero, por ejemplo, un humano, mono, simio, roedor, o mamífero empleado en la agricultura, o un sujeto veterinario. Por lo tanto, la IL-27 se puede administrar a un animal mediante cualquier método conocido en la técnica, por ejemplo, mediante métodos intravenosos, subcutáneos, intramusculares, cerebrales, dermales, oculares, rectales, o mediante, vectores virales. Preferiblemente, la IL-27 se administra en una composición farmacéutica que también comprende al menos una citocina adicional y un excipiente/vehículo farmacéuticamente aceptable. La citocina adicional preferiblemente es IL-2, IL-12, IL-15, IL-18 y/o IL-23, más preferiblemente una combinación de IL-2 (o IL-15) con IL-12 (o IL-23 o IL-18), y más preferiblemente una combinación de IL-2 (o IL-15), IL-12 (o IL-23) e IL-18. La composición preferiblemente mejora el nivel sanguíneo del IFNgamma del animal en al menos aproximadamente 5, 10, 15, 20, 50, 75, 100, 200, 500, 750 o 1000 vecess. El IFNgamma es la citocina activadora del macrófago principal y desempeña funciones críticas en la inmunidad innata así como inmunidad específica mediada por célula. Al liberar al IFNgamma, las células T y las células NK activan a los macrófagos para eliminar a los microorganismos fagocitados. Por lo tanto, el IFNgamma desempeña un papel importante en la defensa en contra de infecciones microbianas, particularmente infecciones por microorganismos intracelulares. El IFNgamma también incrementa la expresión del MHC clase I en células neoplásicas, incrementando así la sensibilidad de las células neoplásicas a la lisis por las células T citotóxicas. Además, el IFNgamma es la citocina clave de la subpoblación Th1 de células T, produciendo una respuesta Th1 más que una respuesta Th2, por lo tanto inhibiendo a las reacciones alérgicas dependientes de la IgE. El estudio de la presente invención ha mostrado de la IL-27 mejora la producción del IFNgamma, y se sabe que la alteración del WSX-1/TCCR, un receptor para la IL-27, lleva a una expresión más baja del IFNgamma. Por lo tanto, un antagonista de la IL-27 se puede utilizar para reducir la producción del IFNgamma in vivo o in vitro. El antagonista puede ser un anticuerpo, o un fragmento del mismo, en contra de la IL-27, p28, o EBI3. Además el antagonista puede comprender una variante estructural o una muteína de la IL-27, o una variante o una muteína de un receptor de la IL-27, por ejemplo, un receptor soluble, que es capaz de reducir la expresión del IFNgamma. El antagonista también puede ser un ácido nucléico antisentido que es complementario a un ARNm de la IL-27 (es decir el ARNm para p28 o para EBI3), o que es complementario a un ARNm de la IL-27R, o un ácido nucléico ARN de interferencia. La presente invención provee adicionalmente un método para seleccionar a agonistas o antagonistas de la IL-27. Los antagonistas se pueden seleccionar basándose en la capacidad de inhibir la actividad de la IL- 27 para mejorar la producción del IFNgamma. Por ejemplo, se puede establecer un sistema de ensayo en donde las células NK se ponen en contacto con la IL-27 para incrementar el nivel de producción del IFNgamma. Luego se añade un compuesto prueba al ensayo y se mide el nivel del IFN. Los compuestos prueba que eliminan el efecto de la IL-27 en la producción del IFNgamma sin afectar la producción de línea basal del IFNgamma en la ausencia de la IL-27 probablemente son antagonistas específicos de la IL-27. De manera similar, la capacidad de la IL-27 para mejorar la producción del IFNgamma se puede utilizar en un sistema de ensayo para agonistas de la IL-27.

III. Antagonistas y agonistas. El bloqueo de las actividades de la IL-27 se puede lograr por un antagonista de la IL-27, por ejemplo, un anticuerpo al ligando, IL-27, un anticuerpo a una subunidad del ligando, por ejemplo, anticuerpo anti-p28 o anticuerpo anti-EBI3, un anticuerpo que se une tanto a p28 como a EBI3, un anticuerpo al receptor, por ejemplo, WSX-1 , o una proteína receptora WSX-1 soluble. La interferencia con la interacción ligando-receptor ha probado ser una estrategia efectiva para el desarrollo de antagonistas. Existen diversos métodos para antagonizar la actividad mediada por el ligando, por ejemplo, bloqueo del ligando con un anticuerpo o bloqueo del receptor con un anticuerpo. Diversos epítopes existirán sobre cada uno de ellos, los cuales bloquearán su interacción, por ejemplo, ocasionando bloqueo de interacción por impedimento estérico. La capacidad de un anticuerpo para unirse a un ligando, o para unirse a un receptor, no necesariamente significa que el anticuerpo también bloqueará la señalización, por ejemplo, el anticuerpo puede no tener un efecto detectable sobre la señalización, o el anticuerpo puede ser un anticuerpo agonístico. Otro método es utilizar un ligando muteína o variante la cual retiene la actividad de unión al receptor, pero no puede inducir la señalización del receptor. La muteína puede ser un inhibidor competitivo de la señalización del ligando. Alternativamente, las librerías de moléculas pequeñas se pueden seleccionar para compuestos los cuales pueden bloquear la interacción o señalización mediada por un par ligando-receptor identificado. La presente invención se provee para el uso de un anticuerpo o composición para unión la cual específicamente se une a un ligando de citocina especificado, preferiblemente de mamífero, por ejemplo, de primate, humano, gato, perro, rata, o ratón. Los anticuerpos se pueden generar a partir de diversas proteínas citocinas, incluyendo variantes individuales, polimórficas, alélicas, cepas, o especies, y fragmentos de las mismss, tanto en sus formas que se presentan en la naturaleza (de longitud total) como en sus formas recombinantes. Adicionalmente, los anticuerpos se pueden generar hacia proteínas receptoras tanto en su forma nativa (o activa) como en su forma inactiva, por ejemplo, forma desnaturalizada. Los anticuerpos anti-idiotípicos también pueden ser utilizados.

Numerosos ¡nmunógenos se pueden seleccionar para producir anticuerpos específicamente reactivos con ligandos o proteínas receptoras. La proteína recombinante es un inmunógeno preferido para la producción de anticuerpos monoclonales o policlonales. La proteína que se presenta de manera natural, a partir de fuentes apropiadas, por ejemplo, primate, roedor, etc., también se puede utilizar ya sea en forma pura o en forma impura. Los péptidos sintéticos, elaborados utilizando las secuencias protéicas adecuadas, también se pueden utilizar como un inmunógeno para la producción de anticuerpos. La proteína recombinante se puede expresar y purificar en células eucariontes o procariontes como se describe, por ejemplo, en Coligan, et al. (eds.) (1995 y en suplementos periódicos) Current Protocols ¡n Protein Science, John Wiley & Sons, New York, NY; y Ausubel, et al (eds.) (1987 y suplementos periódicos) Current Protocols in Molecular Biology, Greene/Wiley, New York, NY. El material naturalmente plegado o desnaturalizado se puede utilizar, como sea apropiado, para producir anticuerpos. Se pueden generar cualesquiera de los anticuerpos monoclonales o policlonales, por ejemplo, para uso subsecuente en inmunoensayos para medir la proteína, o para métodos de inmunopurificación. Los métodos para producir anticuerpos policlonales se conocen bien por aquellos expertos en la técnica. Típicamente, un inmunógeno, preferiblemente una proteína purificada, se mezcla con un adyuvante y los animales se inmunizan con la mezcla. La respuesta inmune del animal a la preparación de ¡numógeno se monitorea al tomar sangrados prueba y determinar el título de reactividad a la proteína de interés. Por ejemplo, cuando se obtienen títulos suficientemente elevados de anticuerpo al inmunógeno, usualmente después de inmunizaciones reptidas, la sangre se recolecta a partir del animal y se prepara el antisuero. Si se desea se puede llevar a cabo el fraccionamiento adicional del antisuero para enriquecer los anticuerpos reactivos a la proteína. Véase, por ejemplo, Harlow y Lañe; o Coligan. La inmunización también se puede llevar a cabo a través de otros métodos, por ejemplo, inmunización con vector de ADN. Véase, por ejemplo, Wang et al, (1997) Virology 228: 278-284. Los anticuerpos monoclonales se pueden obtener mediante diversas técnicas familiares a los investigadores expertos en la técnica. Típicamente, las células del bazo a partir de un animal inmunizado con un antígeno deseado se inmortalizan, comúnmente mediante fusión con una célula de mieloma. Véase, Kohler y Milstein (1976) Eur. J. Immunol. 6: 511-519. Los métodos alternativos de inmortalización incluyen transformación con el virus Epstein Barr, oncogenes, o retrovirus, u otros métodos conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Doyle, et al. (eds.) (1994 y suplementos periódicos) Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures, John Wiley and Sons, New York, NY. Las colonias que se generan a partir de una sola célula inmortalizada se seleccionan para la producción de anticuerpos de la especificidad y afinidad deseada para el antígeno, el rendimiento de anticuerpos monoclonales producidos por dichas células se puede mejorar mediante diversas técnicas, incluyendo inyección dentro de la cavidad peritoneal de un hospedero vertebrado. Alternativamente, uno puede aislar las secuencias de ADN que codifican un anticuerpo monoclonal o un fragmento de unión del mismo mediante la selección de una librería de ADN a partir de células B de humano de conformidad, por ejemplo, con el protocolo general descrito por Huse, et al. (1989) Science 246: 1275-1281. Los anticuerpos o las composiciones de unión, incluyendo fragmentos de unión y versiones de cadena sencilla, en contra de fragmentos predeterminados de ligando o de proteínas receptoras se pueden generar mediante inmunización de animales con conjugados de los fragmentos con proteínas vehículo. Los anticuerpos monoclonales se preparan a partir de células que secretan el anticuerpo deseado. Estos anticuerpos se pueden seleccionar mediante la unión a una proteína normal o defectuosa. Los anticuerpos o las composiciones para unión usualmente se unirán con al menos una KD de aproximadamente O"3 M, más usualmente al menos 10"6 M, típicamente al menos 10"7 M, más típicamente al menos 10'8 M, preferiblemente al menos aproximadamente 10"9 M, y más preferiblemente al menos 10"10 M, y más preferiblemente al menos 10" 1 M (véase, por ejemplo, Presta, et al. (2001 ) Thromb. Haemost. 85: 379-389; Yang, et al. (2001 ) Crit. Rev. Oncol. Hemato. 38: 17-23; Carnahan, et al. (2003) Clin. Cáncer Res. (Suppl.) 9: 3982s-3990s). En ciertos casos, es deseable preparar anticuerpos monoclonales (mAbs) a partir de diversos hospederos mamíferos, tales como ratones, roedores, primates, humanos, etc. La descripción de las técnicas para la preparación de dichos anticuerpos monoclonales se puede encontrar en, por ejemplo, Stites, et al. (eds.) Basic and Clinical Immunology (4a ed.) Lange Medical Publications, Los Altos, CA, y referencias citadas en la presente invención; Harlow y Lañe (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press; Goding (1986) Monoclonal Antibodies: Principies and Practice (2a ed.) Academic Press, New York, NY; y particularmente en Kohier y Milstein (1975) Nature 256: 495-497, el cual discute un método para generar anticuerpos monoclonales. Brevemente en resumen, este método implica la inyección de un animal con un inmunógeno. Luego el animal se sacrifica y las células se toman a partir de bazo, las cuales se fusionan entonces con las células de mieloma. El resultado es una célula híbrida o "hibridoma" que es capaz de reproducirse in vitro. La población de hibridomas se selecciona entonces para aislar las clonas individuales, cada una de las cuales secreta una especie de anticuerpo particular al inmunógeno. De esta manera, las especies de anticuerpo individuales obtenidas son el producto de células B inmortalizadas y clonadas de manera particular a partir del animal inmune generado en respuesta a un sitio específico reconocido en la sustancia inmunogénica. Los polipéptido y anticuerpos de la presente invención se pueden utilizar con o sin modificación, incluyendo anticuerpos quiméricos o anticuerpos humanizados. Frecuentemente, los polipéptidos y anticuerpos serán marcados mediante la unión, ya sea covalentemente o no covalentemente, de una sustancia la cual se provee para una señal detectabie. Una amplia variedad de marcas y de técnicas para conjugación se conocen y se reportan extensivamente tanto en la literatura científica como en la literatura de patentes. Las marcas adecuadas incluyen radionúclidos, enzimas, sustratos, cofactores, inhibidores, porciones fluorescentes, porciones quimioluminiscentes, partículas magnéticas, y los similares. Las patentes que enseñan el uso de dichas marcas incluyen las Patentes de E.U.A. Nos. 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149; y 4,366,241. También, se pueden producir las inmunogiobulinas recombinantes, véase, Cabilly, Patente de E.U.A. No. 4,816,567; y Queen, et al. (1989) Proc. Nati Acad. Sci. USA 86: 10029-10033; o se pueden elaborar en ratones transgénicos, véase Méndez, et al. (1997) Nature Genetics 15: 146-156; también véase las tecnologías de Abgenix y Medarex. Los anticuerpos monoclonales generalmente se derivan a partir de fuentes no de humano, más que a partir de fuentes de humano (Harlow y Lañe (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243). El uso de fuentes que no son de humano puede limitar la eficiencia terapéutica de un anticuerpo monoclonal. Los anticuerpos derivados a partir de murino o de otras fuentes que no son de humano pueden tener las propiedades no deseadas que provocan una respuesta inmune, reclutamiento débil de la función efectora, y eliminación rápida a partir del torrente sanguíneo (Baca, et al. (1997) J. Biol. Chem. 272: 10678-10684). Por estas razones, puede ser deseable preparar anticuerpos terapéuticos mediante humanización.

"Anticuerpo humanizado" significa un anticuerpo que comprende una región para unión al antígeno que no es de origen de humano, por ejemplo, roedor, y al menos una porción de una inmunoglobulina de origen de humano, por ejemplo, una región de estructura base de humano, una región constante de humano, una porción de las mismas (véase, por ejemplo, Patente de E.U.A. No. 6,352,832). Un anticuerpo humanizado contiene las secuencias de aminoácidos a partir de seis regiones determinantes de la complementariedad (CDRs) del anticuerpo parental de ratón, las cuales se injertan en una estructura base de anticuerpo de humano. Preferiblemente el contenido de las secuencias que no son de humano en anticuerpos humanizados es bajo, por ejemplo, de aproximadamente 5% (Baca, et al. (1997) J. Biol. Chem. 272: 10678-10684). Para lograr la unión óptima, el anticuerpo humanizado puede necesitar un ajuste fino, al cambiar ciertos aminoácidos de la estructura base, usualmente implicada en el mantenimiento de la conformación de las CDRs, de vuelta al aminoácido correspondiente encontrado en el anticuerpo de ratón parental. Los aminoácidos de la estructura base que generalmente se cambian de vuelta a aquellos de la estructura parental son aquellos implicados en el mantenimiento de la conformación de las asas CDR (Chothia, et al. (1989) Nature 342: 877-883; Foote y Winter (1992) J. Mol. Biol. 224: 487-499). Los residuos de la estructura base que más frecuentemente influyen en la unión del antígeno son relativamente pocos, y pueden ser tan pocos como de once residuos (Baca, et al. (1997) J. Biol. Chem. 272: 10678-10684).

Los anticuerpos humanizados incluyen anticuerpos que tienen todos los tipos de regiones constantes, incluyendo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE, y cualquier isotipo, incluyendo lgG1, lgG2, lgG3 e lgG4. Cuando es deseable que un anticuerpo humanizado exhiba actividad citotóxica, el dominio constante es usualmente un dominio constante para fijación del complemento y la clase típicamente es IgGl Cuando no se desea dicha actividad citotóxica, el dominio constante puede ser de la clase lgG2. El anticuerpo humanizado puede comprender secuencias a partir de más de una clase o isotipo (Patente de E.U.A. No. 6,329,511 expedida a Vasquez, et al.). La técnica de exhibición del fago se puede utilizar para clasificación y selección de anticuerpos con alta afinidad de unión (Hoogenboom y Chames (2000) Immunol. Today 21 : 371-377; Barbas, et al. (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York; Kay, et al. (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual Academic Press, San Diego, CA). Los anticuerpos también se pueden preparar o diseñar utilizando el método de exhibición del fago o las librerías de anticuerpo de humano contenidas en ratones transgénicos (véase, por ejemplo, de Bruin, et al. (1999) Nature Biotechnology 17: 397-399; Vaughan, et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 309-314; Barbas (1995) Nature Medicine 1 : 837-839; Méndez, et al. (1997) Nature Genetics 15: 146-156; Huse, et al. (1989) Science 246: 1275-1281 ; Ward, et al. (1989) Nature 341 : 544-546).

Los anticuerpos son meramente una forma de composiciones para unión específica. Otras composiciones de unión, las cuales frecuentemente tendrán usos similares, incluyen moléculas que se unen con especificidad al ligando o receptor, por ejemplo, en una manera de copartícipe de unión-copartícipe de unión, una interacción anticuerpo-antígeno, o en la interacción natural fisiológicamente relevante proteína-proteína, ya sea covalente o no covalente, por ejemplo, proteínas que se asocian específicamente con la proteína deseada. La molécula puede ser un polímero, o un reactivo químico. Un análogo funcional puede ser una proteína con modificaciones estructurales, o puede ser una molécula estructu raímente no relacionada, por ejemplo, la cual tiene una forma molecular que interactúa con los determinantes de unión apropiados. Los compuestos para unión al anticuerpo, incluyendo fragmentos de unión, de esta invención pueden tener valor diagnóstico o terapéutico significativo. Estos pueden ser útiles como compuestos de unión no neutralizantes y puede ser acoplados a toxinas o radionúclidos de manera que cuando los compuestos de unión se unen al antígeno, una célula que lo expresa, por ejemplo, en su superficie, ésta es eliminada. Además, los compuestos de unión se pueden conjugar a los fármacos o a otros agentes terapéuticos, ya sea directamente o indirectamente mediante un enlazador, y pueden afectar el direccionamiento del fármaco. Los agonistas incluyen a la IL-27, variantes conservativamente modificadas o muteínas de las mismas, fragmentos de las mismas, y análogos químicos. Estos polipéptidos serán utilizados para inducir la señalización del receptor.

IV. Composiciones terapéuticas; diagnósticos; métodos. La presente invención provee métodos para utilizar agonistas de la IL-27 y al menos una citocina diferente seleccionada a partir de la IL-12, IL-2, IL-23, IL-15, e IL-18, para el tratamiento de, por ejemplo, infecciones, incluyendo patógenos intracelulares, cánceres y tumores, proliferación celular, infecciones virales, trastornos inflamatorios, o trastornos a autoinmunes. También se proveen métodos para utilizar antagonistas de antagonistas de la IL-27 y de al menos una citocina seleccionada a partir de la IL-12, IL-2, IL-23, IL-15, e IL-18, para el tratamiento de, por ejemplo, infecciones, incluyendo patógenos intracelulares, cánceres y tumores, proliferación celular, infecciones virales, trastornos inflamatorios, o trastornos autoinmunes. Se contemplan los métodos anteriormente mencionados utilizando agonistas para la estimulación o mejoría de la expresión del IFNgamma, por ejemplo, para trastornos que se pueden tratar mediante IFNgamma, tales como tumores. Se contemplan los métodos anteriormente mencionados utilizando antagonistas para la exhibición o reducción de la expresión o concentración del IFNgamma, por ejemplo, para tratar trastornos tipo TH1 o trastornos asociados con la producción incrementada del IFNgamma, tales como psoriasis, uveoretinitis, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, lupus eritematoso sistémico, lupus nefritis, tiroiditis de Hashimoto, y enfermedad de Graves (véase, por ejemplo, Steinman (2001) Curr. Opinión Immunol. 13: 597-600; Mizuguchi, et al. (2002) Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz) 50: 243-254; Rotondi, et al. (2003) J. Endocrinol. Invest. 26: 177-180; Asadullah, et al. (1999) Drugs Today (Barc) 35: 913-924; Ghoreschi, et al. (2003) J. Mol. Med. 81 : 471-480; Bouma y Strober (2003) Nature Revs. Immunol. 3: 521-533; Tomita, et al. (2001) J. Neurosci. Res. 64: 26-33; Richards, et al. (2001) Kidney lnt. 60: 2173-2180). También se proveen métodos para utilizar los agonistas o antagonistas anteriormente mencionados para el tratamiento de trastornos autoinmunes e inflamatorios, por ejemplo, esclerosis múltiple, fibrosis, artritis reumatoide, tiroiditis, lupus, psoriasis, diabetes, y trastorno de intestino inflamatorio (IBD), incluyendo enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, y enfermedad celíaca. Debe mencionarse que los niveles incrementados del IFNgamma se asocian con la protección o mejoría de la artritis inducida por colágena (CIA) y con la encefalitis autoinmune experimental (EAE), aunque los niveles disminuidos se asocian con la protección o mejoría del lupus experimental y la diabetes experimental, y esa enfermedad de Crohn es una enfermedad tipo TH1 , asociada con el IFNgamma incrementado, aunque la colitis ulcerativa es una enfermedad tipo TH2.

Se proveen los métodos para utilizar los agonistas o antagonistas anteriormente mencionados para el tratamiento del tratamiento de trastornos inflamatorios o inmunes de los pulmones, por ejemplo, asma, alergias, trastorno pulmonar obstructivo crónico (COPD), y fibrosis pulmonar idiopática (véase, por ejemplo, Ikeda, et al. (2002) Cytokine and Growth Factor Revs. 13: 95-109; Matthys, et al. (2000) J. Leukocyte Biol. 68: 447-454; Younes y Amsden (2002) J. Pharmaceutical Sci. 91: 2-17; Frucht, et al. (2001) TRENDS Immunol. 22: 556-560; Bouma, anteriormente mencionado; Klimp, et al. (2002) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 44: 143-161; Aggarwal y Behera (2000) Expert Opin. Pharmacother. 1: 1423-1427; Dormán y Holland (2000) Cytokine Growth Factor Revs. 11: 321-333; Busse y Rosenwasser (2003) J. Allergy Clin. Immunol. 111 : S799-S804; Skurkovich y Skurkovich (2003) Curr. Opin. Mol. Ther. 5: 52-57). La presente invención provee métodos para modular la activación, desarrollo, o proliferación de, por ejemplo, células T, monocitos/macrófagos, células NKT, células NK, células presentadoras del antígeno (APCs), incluyendo células dendríticas, células B, neutrófilos, y células endoteliales, incluyendo células endoteliales vasculares. También se proveen métodos para modular la expresión del MHC clase I y del MHC clase II, métodos para modular la respuesta a TH1 , respuesta a TH2, y métodos para modular la expresión de la IgE. Los antagonistas y/o agonistas de la presente invención se pueden administrar solos o en combinación con otro inhibidor o agonista de la misma ruta o de rutas anexas; u otros compuestos utilizados para el tratamiento de síntomas, por ejemplo, antagonistas, o esteroides tales como glucocorticoides. Los métodos diagnósticos incluyen aspectos tales como el pronóstico de la prognosis; definición de subpoblaciones de pacientes que responderán o no a un curso terapéutico particular; diagnóstico de trastornos relacionados con el sistema inmune o cáncer o subtipos de estos trastornos; o evaluación de la respuesta a la terapia. El tratamiento, terapia, o diagnóstico se puede llevar a cabo mediante la administración directa del agonista o antagonista o mediante la administración de un ácido nucleico que codifica el agonista o antagonista. El agonista o antagonista que abarca una composición de unión derivada a partir de un anticuerpo, un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une específicamente a la IL-27 o a un IL-27R, una IL-27 muteína o variante, un ácido nucléico anti-sentido, un ARN de interferencia, o un vector que expresa un ácido nucléico que codifica el agonista o antagonista (véase, por ejemplo, Arenz y Schepers (2003) Naturwissenschaften 90: 345-359; Sazani y Kole (2003) J. Clin. Invest. 112: 481-486; Pirollo, et al. (2003) Pharmacol. Therapeutics 99: 55-77; Wang, et al. (2003) Antisense Nucí. Acid Drug Devel. 13: 169-189). Para preparar composiciones farmacéuticas o estériles que incluyen el anticuerpo, composición para unión del mismo, citocina agonista, o antagonista de molécula pequeña, la entidad se mezcla con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable el cual preferiblemente es inerte. La preparación de dichas composiciones farmacéuticas se conoce en la técnica, véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences y U. S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984). Los anticuerpos, composiciones de unión, o citocinas normalmente se administran parenteralmente, preferiblemente intravenosamente. Puesto que dichas proteínas y péptidos pueden ser inmunogénicos, preferiblemente éstos se administran lentamente, ya sea mediante un dispositivo de administración IV convencional o a partir de un depósito subcutáneo, por ejemplo como se enseña por Tomasi, et al, Patente de E.U.A. No. 4,732,863. Se pueden aplicar los métodos para minimizar las reacciones inmunológicas. Las entidades de molécula pequeña pueden ser oralmente activas. Cuando se administran parenteralmente los elementos biológicos se formularán en una forma inyectable de dosis unitaria (solución, suspensión, emulsión) en asociación con un vehículo parental farmacéuticamente aceptable. Dichos vehículos típicamente son inherentemente no tóxicos y no terapéuticos. Los elementos terapéuticos se pueden administrar en vehículos acuosos tales como agua, solución salina, o vehículos con pH regulado con o sin diversos aditivos y/o agentes diluyentes. Alternativamente, una suspensión, tal como una suspensión de zinc, se puede preparar para que incluya al péptido. Dicha suspensión puede ser útil para inyección subcutánea (SQ) o intramuscular (IM). La proporción de elementos biológicos y aditivos puede variar en un amplio intervalo siempre y cuando ambos estén presentes en cantidades efectivas. El anticuerpo preferiblemente se formula en forma purificada substancialmente libre de agregados, otras proteínas, endotoxinas, y los similares, a concentraciones de aproximadamente 5 a 30 mg/ml, preferiblemente de 10 a 20 mg/ml. Preferiblemente, los niveles de endotoxina son menores de 2.5 EU/ml. Véase, por ejemplo, Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, 2a ed., Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, 2a ed., Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Dekker, NY; Fodor, et al (1991) Science 251: 767-773, Coligan (ed.) Current Protocols in Immunology; Hood, et al. (1984) Immunology, Pearson, Upper Saddle River, NY; Paul (ed.) (1999) Fundamental Immunology, 4a ed., Lippincott Williams & Wilkins Publishers, Phila., PA; Parce, et al. (1989) Science 246: 243-247; Owicki, et al. (1990) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 87: 4007-4011 ; y Blundell y Jonson (1976) Protein Crystallography, Academic Press, New York. La selección de un régimen de administración para un elemento farmacéutico depende de diversos factores, incluyendo la velocidad de recambio en suero o en el tejido de la entidad, el nivel de síntomas, la inmunogenicidad de la entidad, y la accesibilidad de las células blanco, tiempo de administración, etc. Preferiblemente, un régimen de administración maximiza la cantidad del elemento terapéutico administrado al paciente de manera consistente con un nivel aceptable de efectos laterales. Por consiguiente, la cantidad del elemento biológico administrado depende en parte de la entidad particular y de la severidad de la condición a ser tratada. Las guías para la selección de dosis apropiadas de anticuerpos se encuentra en, por ejemplo Bach, et al., Capítulo 22, en Ferrone, et al. (eds.) (1985) Handbook of Monoclonal Antibodies, Noges Publications, Park Ridge, NJ; y Haber, et al. (eds.) (1977) Antibodies ¡n Human Diagnosis and Therapy, Raven Press, New York, NY (Russell, páginas 303-357, y Smith, et al., páginas 365-389). Alternativamente, las dosis de citocina o de moléculas pequeñas se determinan utilizando metodologías estándares. La determinación de la dosis apropiada se realiza por el médico, por ejemplo, utilizando parámetros o factores conocidos o que se sospecha en la técnica que afectan el tratamiento o que se pronostica que afectan el tratamiento. Generalmente la dosis empieza con una cantidad de alguna forma menor a la dosis óptima y a contiuación se incrementa en incrementos pequeños hasta que se alcanza el efecto deseado u óptimo en relación con cualesquiera efectos laterales negativos. Las medidas diagnósticas importantes incluyen aquellas de síntomas de, por ejemplo, la inflamación o nivel de citocinas inflamatorias producidas. Preferiblemente, un elemento biológico que será utilizado se deriva a partir de la misma especie que el animal al que se dirige el tratamiento, por lo tanto minimizando una respuesta humoral al reactivo. Los intervalos de dosis semanales totales para anticuerpos o fragmentos de los mismos, que se unen específicamente al ligando o al receptor generalmente son de aproximadamente 10 µg, más generalmente de aproximadamente 100 µg, típicamente de aproximadamente 500 µg, más típicamente de aproximadamente 1000 g, preferiblemente de aproximadamente 5 mg, y más preferiblemente de aproximadamente 10 mg por kilogramo de peso corporal. Generalmente el intervalo será menor de 100 mg, preferiblemente menor de aproximadamente 50 mg, y más preferiblemente menor de aproximadamente 25 mg por kilogramo de peso corporal. El agonista o las moléculas terapéuticas pequeñas se pueden utilizar a molaridades similares. Los intervalos de dosis semanales para antagonistas de señalización mediada por el receptor de citocina, por ejemplo, anticuerpo o fragmentos de unión, tienen un intervalo de aproximadamente 1 µg, preferiblemente de al menos aproximadamente 5 µg, y más preferiblemente de al menos aproximadamente 10 µg por kilogramo de peso corporal. Generalmente, el intervalo será menor de aproximadamente 1000 µg, preferiblemente menor de aproximadamente 500 µg, y más preferiblemente menor de aproximadamente 100 µg por kilogramo de peso corporal. Las dosis están en un programa el cual lleva a cabo el tratamiento deseado y pueden ser periódicas durante un plazo más corto plazo o más largo. En general, los intervalos serán de al menos aproximadamente 10 µg a aproximadamente 50 mg, preferiblemente de aproximadamente 100 µg a aproximadamente 10 mg por kilogramo de peso corporal. Los agonistas de citocina o terapéuticos de molécula pequeña típicamente serán utilizados a cantidades molares similares, pero debido a que éstos probablemente tienen pesos moleculares más pequeños, tendrán menores dosis en peso. La presente invención también se provee para la administration de elementos biológicos en combinación con terapias conocidas, por ejemplo, vacunas, esteroides, particularmente glucocorticoides, los cuales alivian los síntomas, por ejemplo, asociados con la inflamación, o antibióticos o antiinfecciosos. Las dosis diarias para glucocorticoides tendrán un intervalo de al menos aproximadamente 1 mg, generalmente al menos aproximadamente 2 mg, y preferentemente al menos aproximadamente 5 mg por día. Generalmente, la dosis será menor de aproximadamente 100 mg, típicamente menor de aproximadamente 50 mg, preferiblemente menor de aproximadamente 20 mg, y más preferiblemente de al menos aproximadamente 10 mg por día. En general, los intervalos serán de al menos aproximadamente 1 mg a aproximadamente 100 mg, preferiblemente de aproximadamente 2 mg a 50 mg por día. La frase "cantidad efectiva" significa una cantidad suficiente para mejorar un síntoma o signo de la condición médica. Los hospederos mamíferos típicos incluirán ratones, ratas, gatos, perros, y primates, incluyendo humanos. Una cantidad efectiva para un paciente particular puede variar dependiendo de factores tales como la condición a ser tratada, la salud general del paciente, la ruta y dosis de administración del método y la severidad de los efectos laterales. Cuando se encuentra en combinación, una cantidad efectiva se encuentra en relación con respecto a una combinación de componentes y el efecto no se limita a los componentes individuales solos Una cantidad efectiva de un elemento terapéutico disminuirá los síntomas típicamente por al menos aproximadamente 10%; usualmente en al menos aproximadamente 20%; preferiblemente en al menos aproximadamente 30%; o más preferiblemente en al menos aproximadamente 50%. La presente invención provee reactivos los cuales encontrarán su uso en aplicaciones terapéuticas como se describe en otro lugar en la presente invención, por ejemplo, en la descripción general para tratar trastornos asociados con las indicaciones anteriormente descritas. Berkow (ed.) The Merck Manual of Diagnosis and Therapy Merck & Co., Rahway, N. J.; Brauwald, et al. (eds.) (2001 ) Harrison's Principies of Internal Medicine, 15a ed., McGraw-Hill, NY; Gilman, et al. (eds.) (1990) Goodman and Gilman's: The Pharmacological Bases of Therapeutics 8a Ed., Pergamon Press; Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed. (1990), Marck Publishing Co., Easton, Penn; Langer (1990) Science 249. 1527-1533; Merck Index, Merck & Co., Rahway, Ney Jersey; y Physician's Desk Reference (PDR); Cotranm et al. (eds.), anteriormente mencionado; y Dale y Federman (eds.) (2000) Scientific American Medicine, Healtheon/WebMD, New York, NY. El amplio alcance de esta invención se entiende mejor con referencia a los siguientes ejemplos, los cuales no se pretende que limiten las invenciones de las modalidades específicas.

EJEMPLOS I. Métodos generales. Muchos de los métodos estándares a continuación se describen o son referidos, por ejemplo, en Maniatis, et al. (1982) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Press, NY; Sambrook, et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2a ed.) Vols. 1-3, CSH Press, NY; Ausubel, et al., Biology, Greene Publishing Associates, Brookiing, NY; o Ausubel, et al. (1987 y suplementos) Current Protocols in Molecular Biology, Wiley/Greene, NY; Innis, et al. (eds.) (1990) PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press, NY: Los métodos para purufucación de proteína incluyen dichos métodos tales como precipitación con sulfato de amonio, cromatografía en columna, electroforesis, centrifugación, cristalización, y otros. Véase, por ejemplo, Ausubel, et al. (1987 y suplementos periódicos); Deutscher (1990) "Guide to Protein Purification", Methods in Enzymology, vol. 182, y otros volúmenes en esta serie; Coligan, et al. (1995 y suplementos) Current Protocols in Protein Science, John Wiley and Sons, New York, NY; P. Matsudaira (ed.) (1993) A Practical Guide to Protein and Peptide Purification for Microsequencing, Academic Press, San Diego, CA; y literatura de los fabricantes sobre el uso de productos para purificación de proteína, por ejemplo, Pharmacia, Piscataway, NJ, o Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA. La combinación con técnicas recombinantes permite la fusión a segmentos apropiados (marcas de epítope), por ejemplo, a una secuencia FLAG o un equivalente el cual se puede fusionar, por ejemplo, vía una secuencia removible por proteasa. Véase, por ejemplo, Hochuli (1989) Chemische Industrie 12: 69-70; Hochuli (1990) "Purification of Recombinant Proteins with Metal Chelate Absorbent" en Setlow (ed.) Genetic Engineering, Principie and Methods 12: 87-98, Plenum Press, NY; y Crowe, et al. (1992) QIAexpress: The High Level Expression & Protein Purification System, QIAGEN, Inc., Chatsworth, CA. Se describen las técnicas ¡nmunológicas estándares, por ejemplo, en Hertzenberg, et al. (eds.) (1996) Weir's Handbook of Experimental Immunology vols. 1-4, Blackwell, Malden, MA; Coligan (1991 ) Current Protocols in Immunology Wiley/Greene, NY; y Methods in Enzymology vols. 70, 73, 74, 84, 92, 93, 108, 116, 121, 132, 150, 162, y 163. Los ensayos de citocina se describen, por ejemplo, en Thomson (ed.) (1998) The Cytokine Handbook (3a ed.) Academic Press, San Diego; Mire-Sluis y Thorpe (1998) Cytokines, Academic Press, San Diego, CA; Metcalf y Nicola (1995) The Hematopoietic Colony Stimulating Factors, Cambridge Univ. Press, Cambridge, RU; y Aggarwal y Gutterman (1991) Human Cytokines, Blackwell, Malden, MA. Los ensayos para actividades biológicas vasculares se conocen bien en la técnica. Estas abarcarán actividades angiogénicas o angiostáticas en tumor, u otros tejidos, por ejemplo, proliferación de múculo liso arterial (véase, por ejemplo, Koyoma, et al. (1996) Cell 87: 1069-1078), adhesión de monocito al epitelio vascular (véase, por ejemplo, McEvoy, et al. (1997) J.

Exp. Med. 185: 2069-2077; Ross (1993) Nature 362: 801-809; Rekhter y Gordon (1995) Am. J. Pathol. 147: 668-677; Thyberg, et al. (1990) Atherosclerosis 10: 966-990 ; Gumbiner (1996) Cell 84 : 345-357. Se describen los ensayos para actividades biológicas de la célula neural, por ejemplo, en Wouterlood (ed. 1995) Neuroscience Protocols módulos 10, Elsevier; Methods in Neurosciences, Academic Press; y Neuromethods Humana Press, Totowa, NJ. La metodología de los sistemas de desarrollo se describe, por ejemplo, en Meisami (ed.) Handbook of Human Growth and Developmental Biology, CRC Press; y Chrispecls (ed.) Molecular Techniques and Approaches in Developmental Biology, Interscience. Los análisis FACS se describen en Melamed, et al. (1990) Flow Cytometry and Sorting, Wiley-Liss, Inc., New York, NY; Shapiro (1988) Practical Flow Cytometry, Liss, New York, NY; y Robinson, et al. (1993) Handbook of Flow Cytometry Methods, Wiley-Liss, New York, NY.

II. Inducción del IFNgamma. Se midió la capacidad de la IL-27 de humano e IL-27 de ratón para inducir la producción del IFNgamma en la presencia de un mAb anti-IL-2 neutralizante, con la coestimulación vía antiCD3 o con anti-CD3/anti-CD28. Las células se trataron en la ausencia y presencia de la IL-12. En las pruebas de las células T CD4+CD45RA de humano, ni la hlL-27 ni la hlL-12 por sí mismas indujeron la producción del IFNgamma, en donde las células también se trataron con el anti-CD3 o con el anti- CD3/antiCD28. Solamente en la presencia de ambas IL-27 e IL-12 fue detectable la producción del IFNgamma, demostrando una fuerte sinergia éntre la IL-27 y la IL-12. Las pruebas de células T clasificadas de ratón CD4+CD45RBele ada no tratadas también demostraron sinergia entre la IL-27 y la IL-12. Las células T clasificadas de ratón CD4+CD45RBelevada no tratadas fueron estimuladas por 4 días con mAb anti-CD3 solo o con mAb anti-CD3/mAb anti-CD28 y cantidades en saturación de la IL-27 y/o de la IL-12. Con anti-CD3 solamente (sin estimulación por el anti-CD28) ni la IL-27 ni la IL-12 por sí mismas fueron capaces de inducir cantidades sustanciales del IFNgamma. No obstante, la combinación de la IL-27 e IL-12 indujo hasta aproximadamente 300 ng/ml del IFNgamma. Con la co-estimulación del antiCD3/anti-CD28, la IL-27 sola así como la IL-12 sola fue capaz de inducir la producción del IFNgamma. La combinación de ambas IL-27 e IL-12 condujo a un efecto aditivo con el IFNgamma producido a niveles de hasta aproximadamente 550 ng/ml. El estudio de la presente invención ha ejemplificado los efectos de la IL-27 sobre la producción del IFNgamma por células asesinas naturales (NK). Las células CD56 NK positivas de humano se aislaron a partir del células mononucleares de sangre periférica de donantes saludables normales utilizando selección por adherencia positiva con microlechos revestidos con anti-CD56 (Miltenye, Auburn, CA), seguido por una selección positiva de las células CD56+CD3". Luego las células NK así aisladas se cultivaron en la presencia de una citocina, o una combinación de citocinas, por 72 horas a 37°C. Los sobrenadantes de los cultivos celulares se cosecharon y se determinaron las cantidades del IFNgamma en los sobrenadantes mediante ELISA. Además, el ARN se aisló partir de los concentrados celulares y se analizó para la expresión del ARNm del IFNgamma. Se muestra una serie típica de resultados (cuadro 1).

CUADRO 1 El efecto de la IL-27 sobre la producción del IFNgamma (ng/ml) a partir de células NK. Se añadieron IL-2 (200 unidades/mi). 1L-12 (1.0 na/mi), e IL-18 (0.1 mg/ml), a las concentraciones indicadas Se indica la concentración de la IL-27 (ng/ml) utilizada en cada experimento (columna más hacia la izquierda, cuadro 1). Los datos representan la cantidad de IFNgamma (ng) producido. Por lo tanto, la IL-12 sola indujo la producción del IFNgamma por células NK purificadas a un bajo nivel (menos de 1 ng/ml). La IL-27 sola no indujo producción detectable del IFNgamma (datos no mostrados). No obstante, la adición de la IL-27 a la IL-12, mejoró la producción del IFNgamma por 10-20 veces, por ejemplo, a aproximadamente 3.0 ng/ml. Por lo tanto, la IL-27 actuó sinergísticamente con IL-12 para mejorar la producción del IFNgamma. La IL-27 también tuvo un efecto sinergístico sobre otras citocinas o combinaciones de citocinas. La combinación de la IL-12 y de la IL-2, en la ausencia de la IL-27, resultó en la producción incrementada del IFNgamma en comparación con la IL-12 sola. De nuevo, la adición de la IL-27 a la combinación de la IL-2 y de la IL-12 produjo un incremento dosis-dependiente de nivel del IFNgamma (hasta 50-100 ng/ml). El efecto sinergístico más sorprendente se observó cuando IL-2, IL-12 e IL-18 se combinaron con la IL-27. La triple combinación, en la ausencia de la IL-27, resultó en la producción de niveles del IFNgamma de 50-100 ng/ml. La adición de la IL-27 a la triple combinación resultó en una producción sinergística dosis dependiente del IFNgamma de hasta aproximadamente 2000 ng/ml (cuadro 1). En estudios similares, se mostró que la IL-15 se puede utilizar el lugar de la IL-2, aunque la IL-23 se puede utilizar en lugar de la IL-12. De manera interesante, el análisis del ARNm utilizando reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real indica que el efecto sinergístico de la IL-27 y otras citocinas no se refleja por un incremento en la cantidad del ARNm del IFNgamma (cuadro 2). Por lo tanto, la mejoría en la producción probablemente se ejerce al nivel traduccional o post-traduccional.

Los resultados demuestran que las cantidades de saturación de las combinaciones de citocinas previamente caracterizadas no producen los niveles de producción del IFNgamma que se pueden lograr con la adición de la IL-27. Por lo tanto, la producción del IFNgamma hasta su mayor potencial es dependiente de la presencia de una serie selecta de citocinas, y omitiendo una de ellas se puede crear un efecto limitante de la velocidad.

CUADRO 2 Expresión relativa del ¡nterferón-qamma a partir del células NK de humano, como se determina mediante PCR en tiempo real Taqman® III. La IL-27 no dirige la polarización Th2 de las células T sin tratamiento Las células T clasificadas de ratón CD4+CD45RBe,evada se cultivaron con anti-CD3 y anti-CD28 unido a una placa en la presencia de IL-4 e IL-27. La inclusión de la IL-27 en los cultivos resultó en una producción disminuida de la IL-13 tanto en la ausencia como en la presencia de la IL-4. Por lo tanto, aunque se induce una fuerte respuesta Th1, la IL-27 no parece promover la polarización T 2.

IV. La 1L-27 se une al WSX-1/TCCR. Debido a la relación entre la IL-27 y la familia IL-6/IL-12, la búsqueda para los receptores de señalización se concentró en esta familia. Los miembros de esta familia se introdujeron dentro de células BaF3 y se ensayaron para unión a la IL-27. De los receptores evaluados solamente las células Ba/F3 que expresan el receptor de citocina huérfano WSX-1/TCCR mostraron unión a la IL-27 marcada (véase, por ejemplo, Sprecher, et al. (1998) Biochem. Biophys, Res. Comm. 246: 82-90; Chen, et al. (2000) Nature 407: 916-920). Las células BaF3 infectadas con las construcciones retrovirales que expresaron ya sea ADNc de WSX- marcado con F de humano o de ratón (F-hWSX-1 o F-mWSX-1) mostraron tinción celular utilizando mAb anti-flag. Luego las células que expresaron F-hWSX-1 se incubaron ya sea con hEBI3-Ig solo o con hp28-E y EBI3-lg coexpresados por dos horas. p28/EBI3 heterodimérico se unió a WSX-1 mientras que EBI3-lg por sí mismo no mostró unión detectable. De manera similar, solamente la combinación de mp28-E y de mEBI3-lg proveyó una interacción detectable con las células BaF3 que expresan mWSX-1 , mientras que las dos proteínas individuales no fueron capaces de hacer esto. La incubación de mp28-E y de mEBI3-lg independientemente expresadas con las células BaF3 que expresan F-mWSX-1 también llevó a una tinción celular. Las células control no transfectadas no se tiñeron mediante p28/EBI3, demostrando la especificidad de las interacciones observadas.

Estos resultados se confirmaron mediante experimentos de co-inmunoprecipitación utilizando una forma extracelular soluble de hWSX-1 con una marca C-terminal RSGH6 (R). Las proteínas a partir de los sobrenadantes de células HEK293T transitoriamente transfectadas que contienen F-hEBI3 o que coexpresan hp28-E/F-hEBI3 fueron inmunoprecipitadas utilizando ya sea flag M2-agarosa, proteína G Sepharose®-acoplada a mAb anti-etag o protein G Sepharose®-acoplada a mAb ant¡-H5. Los precipitados primarios se lavaron y luego se incubaron con los sobrenadantes de las células HEK293T que contenían shWSX-1-R. Los precipitados secundarios se separaron mediante SDS-PAGE y se sometieron a western blot. Las proteínas precipitadas se visualizaron mediante ECL utilizando anticuerpos en contra de las marcas protéicas respectivas. Solamente cuando las tres proteínas estaban presentes (h-p28-E, F-hEBI3 y shWSX-1-R), la inmunoprecipitación de una proteína coprecipitó a otros dos componentes independientemente del anticuerpo inmunoprecipitante utilizando. El mismo experimento de co-inmunoprecipitación utilizando los ortólogos respectivos de ratón tuvo resultados similares. Para resolver la pregunta de si WSX-1 fue adecuado para mediar la transducción de la señal por la IL-27, se evaluó la proliferación de las células BaF3 que expresan WSX-1 de humano o de ratón. Estas células proliferan en respuesta a la IL-3 pero no proliferan en respuesta a la IL-27. Por lo tanto WSX-1 parece ser requerido pero no es suficiente para la transducción de la señal mediada por la IL-27. La identificación de subunidades receptoras transductoras de la señal de la IL-27 adicionales esta actualmente en progreso. Todas las referencias citadas en la presente invención se incorporan aquí como referencia hasta el mismo grado como si cada publicación individual, patente o solicitud de patente estuviera específicamente e individualmente indicada para ser incorporada como referencia en su totalidad para todos los propósitos. Se pueden realizar muchas modificaciones y variaciones de esta invención sin apartarse de su espíritu y alcance, como será evidente a aquellos expertos en la técnica. Las modalidades específicas descritas en la presente invención se ofrecen a manera de ejemplo solamente, y la invención se debe limitar solamente por los términos de las reivindicaciones anexas, junto con el alcance total de los equivalentes a los cuales se refieren dichas reivindicaciones.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1.- Un método in Vitro para la modulación de la producción del interferón-gamma (IFNgamma) por una célula que comprende el tratamiento de la célula con una cantidad efectiva de: a) un agonista de la IL-27 y un agonista de una primera citocina, en donde dicha citocina se selecciona a partir del grupo que consiste de IL-15, IL-18 e IL-23; o b) un antagonista de la IL-27 y un antagonista de una primera citocina, en donde dicha citocina se selecciona a partir del grupo que consiste de IL-15, IL-18 e IL-23. 2. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque dicha IL-27 agonista es una IL-27 variante o derivada, y la IL-27 variante o derivada posee al menos una propiedad biológica de la IL-27. 3. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque la IL-27 variante o derivada comprende una hipercina IL-27. 4. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque la modulación es: a) creciente y el tratamiento se realiza con dicho agonista de la IL-27 y dicho agonista de una primera citocina; o b) decreciente y el tratamiento se realiza con dicho antagonista de la IL-27 y dicho antagonista de una primera citocina. 5. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque la modulación es creciente y es aproximadamente dos veces, aproximadamente 5-veces, aproximadamente 10-veces, aproximadamente 20-veces, o aproximadamente 50-veces mayor que el nivel de expresión o de producción en la ausencia de la cantidad efectiva de dicho agonista de la IL-27 y dicho agonista de una primera citocina. 6. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque la modulación e creciente y dicho tratamiento comprende adicionalmente tratamiento con un agonista de una segunda citocina que es diferente del agonista de una primera citocina. 7. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque el agonista de una segunda citocina es: a) IL-2; b) IL-15; c) IL-12; d) IL-23; o e) IL-18. 8.- El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque dicho agonista de la primera citocina y dicho agonista de la segunda citocina son: a) IL-23 e IL-2; b) IL-15 e IL-12; c) IL-15 e IL-23; o d) IL-18 y cualesquiera de IL-2, IL-15, IL-12, o IL-23. 9.- El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque comprende adicionalmente tratar con el agonista de una tercera citocina que es diferente de dicho agonista de una primera citocina y dicho agonista de la segunda citocina. 10. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado además porque el agonista de la primera citocina es IL-18 y dicho agonista de la segunda citocina y el agonista de la tercera citocina son: a)IL-2 e IL-15; o b) IL-12 e IL-23. 11. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque la modulación es decreciente y dicho tratamiento comprende adicionalmente tratamiento con un antagonista de la segunda citocina que es diferente del antagonista de la primera citocina. 12. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 11 , caracterizado además porque la segunda citocina es: a) IL-2; b) IL-15; c) IL-12; d) IL-23; o e) IL-18. 13. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque dicha primera citocina y dicha segunda citocina son: a) IL-23 e IL-2; b) IL-15 e IL-12; c) IL-15 e IL-23; o d) IL-18 y cualesquiera de IL-2, IL-15, IL-12, o IL-23. 14. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado además porque comprende adicionalmente el tratamiento con el antagonista de la tercera citocina que es diferente de dicho antagonista de una primera citocina y dicho antagonista de la segunda citocina. 15. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado además porque la primera citocina es IL-18 y dicha segunda citocina y dicha tercera citocina son: a) IL-2 e IL-15; o b) IL-12 e IL-23. 16. - El método in Vitro de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-15, caracterizado además porque la célula es una: a) célula T; o b) célula NK. 17. - El método in Vitro de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-16, caracterizado además porque la célula se localiza en un cultivo celular y en donde dichos agonistas o dichos antagonistas se administran a dicho cultivo celular. 18. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado además porque las células tiene o se sospecha que tienen, un trastorno o condición patológica que se puede tratar o mejorar mediante la modulación de los niveles del IFNgamma en la célula. 19. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado además porque las células son tratadas para modular los niveles de IFNgamma en el cultivo celular. 20.- El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 18 o 19, caracterizado además porque la célula o cultivo celular es una: a) célula humana; o b) célula animal. 21. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque la condición del cultivo celular comprende: a) modelo de un cáncer, neoplasma, o tumor; b) un modelo de patógeno intracelular; o c) un modelo de condición inflamatoria o autoinmune. 22. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado además porque el cultivo celular es tratado para: a) incrementar o mejorar la producción de IFNgamma; o b) reducir la producción de IFNgamma 23. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado además porque la IL-27 agonista y el agonista de la primera citocina se administran al sujeto, y en donde el patógeno intracelular comprende: a) Leishmania sp.; b) Mycobacterium sp.; c) Listeria sp.; d) Toxoplasma sp.; e) herpesvirus; f) citomegalovirus; o g) virus de inmunodeficiencia humana (VIH). 24. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado además porque la IL-27 agonista y el agonista de la primera citocina se administran al sujeto y en donde la condición inflamatoria o autoinmune comprende: a) artritis reumatoide; o b) asma o alergia. 25. - El método in Vitro de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 22, 23 ó 24, caracterizado además porque comprende adicionalmente administrar el agonista de una segunda citocina. 26. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado además porque comprende adicionalmente administrar el agonista de la tercera citocina. 27. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque la IL-27 antagonista y el antagonista de la primera citocina se administran al sujeto y el trastorno o condición comprende: a) una condición o trastorno de TH1 ; b) esclerosis múltiple; c) psoriasis; d) enfermedad de Crohn; c) diabetes tipo I; o d) lupus eritematoso sistémico. 28. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado además porque comprende adicionalmente administrar el antagonista de la segunda citocina. 29. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado además porque comprende adicionalmente administrar el antagonista de la tercera citocina. 30. - Un método in Vitro para la modulación de la expresión o niveles del IFNgamma en un cultivo celular, que comprende administrar a) un agonista de la citocina IL-27 y un agonista de una primera citocina, en donde dicha citocina se selecciona a partir del grupo que consiste de IL-15, IL-18 e IL-23; o b) un antagonista de la IL-27 y un antagonista de una primera citocina, en donde dicha citocina se selecciona a partir del grupo que consiste de IL-15, IL-18 e IL-23. 31. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado además porque la modulación es: a) creciente y el tratamiento se realiza con dicho agonista de la IL-27 y dicho agonista de una primera citocina; o b) decreciente y el tratamiento se realiza con dicho antagonista de la IL-27 y dicho antagonista de una primera citocina. 32. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado además porque dicho agonista de la IL-27 es una IL-27 variante o derivada, y la IL-27 variante o derivada posee al menos una propiedad biológica de la IL-27. 33. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado además porque ia IL-27 variante o derivada comprende una hipercina IL-27. 34. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado además porque la modulación se incrementa y es de aproximadamente dos veces, aproximadamente 5-veces, aproximadamente 10-veces, aproximadamente 20-veces, o aproximadamente 50-veces mayor que el nivel de expresión o de producción en la ausencia de la cantidad efectiva de dicho agonista de la IL-27 y dicho agonista de una primera citocina. 35. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado además porque la modulación es creciente y dicha modulación comprende adicionalmente modular con un agonista de una segunda citocina que es diferente del agonista de una primera citocina. 36.- El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado además porque el agonista de una segunda citocina es: a) IL-2; b) IL-15; c) IL-12; d) IL-23; o e) IL-18. 37. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado además porque dicho agonista de la primera citocina y dicho agonista de la segunda citocina son: a) IL-23 e IL-2; b) IL-15 e IL-12; c) IL-15 e IL-23; o d) IL-18 y cualesquiera de IL-2, IL-15, IL-12, o IL-23. 38. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado además porque comprende adicionalmente modular con el agonista de una tercera citocina que es diferente de dicho agonista de una primera citocina y dicho agonista de la segunda citocina. 39. - El método ¡n Vitro de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado además porque el agonista de la primera citocina es IL-18 y dicho agonista de la segunda citocina y el agonista de la tercera citocina son: a) IL-2 e IL-15; o b) IL-12 e IL-23. 40. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 31 , caracterizado además porque la modulación es decreciente y dicha modulación comprende adicionalmente modular con un antagonista la segunda citocina que es diferente del antagonista de la primera citocina. 41. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado además porque la segunda citocina es: a) IL-2; b) IL-15; c) IL-12; d) IL-23; o e) IL-18. 42. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 41 , caracterizado además porque dicha primera citocina y dicha segunda citocina son: a) IL-23 e IL-2; b) IL-15 e IL-12; c) IL-15 e IL-23; o d) IL-18 y cualesquiera de IL-2, IL-15, IL-12, o IL-23. 43. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado además porque comprende adicionalmente modular con el antagonista de la tercera citocina que es diferente de dicho antagonista de una primera citocina y dicho antagonista de la segunda citocina. 44. - El método ¡n Vitro de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado además porque la primera citocina es IL-18 y dicha segunda citocina y dicha tercera citocina son: a) IL-2 e IL-15; o b) IL-12 e IL-23. 45. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado además porque el trastorno o condición comprende: a) modelo de cáncer, neoplasma, o tumor; b) un modelo de patógeno intracelular; o c) un modelo de condición inflamatoria o autoinmune. 46. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque el tratamiento es con un agonista de la IL-27 y un agonista de una primera citocina y el patógeno intracelular comprende: a) Leishmania sp.; b) Mycobacteríum sp.; c) Listeria sp.; d) Toxoplasma sp.; e) herpesvirus; f) citomegalovirus; o g) virus de inmunodeficiencia humana (VIH). 47. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque el tratamiento es con un agonista de la IL-27 y un agonista de una primera citocina y los modelos de las condiciones inflamatorias o autoinmunes comprenden: a) un modelo de artritis reumatoide; o b) modelos de asma o alergia. 48. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque el tratamiento es con un antagonista de la IL-27 y un antagonista de una primera citocina y el modelo de trastorno o condición comprende: a) una condición de modelo de TH1 ; b) esclerosis múltiple; c) psoriasis; d) enfermedad de Crohn; c) diabetes tipo I; o d) modelos de lupus eritematoso sistémico. 49. - El método in Vitro de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado además porque el antagonista de la IL-27 es: a) derivada a partir del sitio de unión al antígeno de un anticuerpo; o b) un ácido nucleico. 50. - El uso de a) un agonista de la IL-27 y un agonista de una primera citocina, en donde dicha citocina se selecciona a partir del grupo que consiste de IL-15, IL-18 e IL-23; o b) un antagonista de la IL-27 y un antagonista de una primera citocina, en donde dicha citocina se selecciona a partir del grupo que consiste de IL-15, IL-18 e IL-23, para preparar un medicamento para la modulación de la producción del interferón-gamma (IFNgamma) por una célula. 51. - El uso que se reclama en la reivindicación 50, en donde dicha IL-27 agonista es una IL-27 variante o derivada, y la IL-27 variante o derivada posee al menos una propiedad biológica de la IL-27. 52. - El uso que se reclama en la reivindicación 51, en donde la IL-27 variante o derivada comprende una hipercina IL-27. 53. - El uso que se reclama en la reivindicación 50, en donde la modulación es: a) creciente y el tratamiento se realiza con dicho agonista de la IL-27 y dicho agonista de una primera citocina; o b) decreciente y el tratamiento se realiza con dicho antagonista de la IL-27 y dicho antagonista de una primera citocina. 54. - El uso que se reclama en la reivindicación 53, en donde la modulación es creciente y es aproximadamente dos veces, aproximadamente 5-veces, aproximadamente 0-veces, aproximadamente 20-veces, o aproximadamente 50-veces mayor que el nivel de expresión o de producción en la ausencia de la cantidad efectiva de dicho agonista de la IL-27 y dicho agonista de una primera citocina. 55. - El uso que se reclama en la reivindicación 53, en donde la modulación e creciente y dicho tratamiento comprende adicionalmente tratamiento con un agonista de una segunda citocina que es diferente del agonista de una primera citocina. 56. - El uso que se reclama en la reivindicación 55, en donde el agonista de una segunda citocina es: a) IL-2; b) IL-15; c) IL-12; d) IL-23; o e) 1L-18. 57. - El uso que se reclama en la reivindicación 56, en donde dicho agonista de la primera citocina y dicho agonista de la segunda citocina son: a) IL-23 e IL-2; b) IL-15 e IL-12; c) IL-15 e IL-23; o d) IL-18 y cualesquiera de IL-2, IL-15, IL-12, o IL-23. 58.- El uso que se reclama en la reivindicación 55, en donde comprende adicionalmente tratar con el agonista de una tercera citocina que es diferente de dicho agonista de una primera citocina y dicho agonista de la segunda citocina. 59.- El uso que se reclama en la reivindicación 58, en donde el agonista de la primera citocina es IL-18 y dicho agonista de la segunda citocina y el agonista de la tercera citocina son: a)IL-2 e IL-15; o b) IL-12 e IL-23. 60.- El uso que se reclama en la reivindicación 53, en donde la modulación es decreciente y dicho tratamiento comprende adicionalmente tratamiento con un antagonista de la segunda citocina que es diferente del antagonista de la primera citocina. 61.- El uso que se reclama en la reivindicación 60, en donde la segunda citocina es: a) IL-2; b) IL-15; c) IL-12; d) IL-23; o e) IL-18. 62.- El uso que se reclama en la reivindicación 61, en donde dicha primera citocina y dicha segunda citocina son: a) IL-23 e IL-2; b) IL-15 e IL-12; c) IL-15 e IL-23; o d) IL-18 y cualesquiera de IL-2, IL-15, IL-12, o IL-23. 63.- El uso que se reclama en la reivindicación 60, en donde comprende adicionalmente el tratamiento con el antagonista de la tercera citocina que es diferente de dicho antagonista de una primera citocina y dicho antagonista de la segunda citocina. 64. - El uso que se reclama en la reivindicación 63, en donde la primera citocina es IL-18 y dicha segunda citocina y dicha tercera citocina son: a) IL-2 e IL-15; o b) IL-12 e IL-23. 65. - El uso que se reclama en cualesquiera de las reivindicaciones 50-64, en donde la célula es una: a) célula T; o b) célula NK. 66. - El uso que se reclama en cualesquiera de las reivindicaciones 50-65, en donde la célula se localiza en un cultivo celular y en donde dichos agonistas o dichos antagonistas son administrables al sujeto. 67. - El uso que se reclama en la reivindicación 66, en donde el sujeto tiene o se sospecha que tienen, un trastorno o condición patológica que se puede tratar o mejorar mediante la modulación de los niveles del IFNgamma en la célula. 68.- El uso que se reclama en la reivindicación 67, en donde el sujeto es un: a) sujeto humano; o b) sujeto veterinario. 69.- El uso que se reclama en la reivindicación 67, en donde el trastorno o condición comprende: a) cáncer, neoplasma, o tumor; b) un patógeno ¡ntracelular; o c) una condición inflamatoria o autoinmune. 70. - El uso que se reclama en la reivindicación 69, en donde la IL-27 agonista y el agonista de la primera citocina son administrables al sujeto, y en donde el patógeno ¡ntracelular comprende: a) Leishmania sp.; b) Mycobacterium sp.; c) Listeria sp.; d) Toxoplasma sp.; e) herpesvirus; f) citomegalovirus; o g) virus de inmunodeficiencia humana (VIH). 71. - El uso que se reclama en la reivindicación 69, en donde la IL-27 agonista y el agonista de la primera citocina son administrables al sujeto y en donde la condición inflamatoria o autoinmune comprende: a) artritis reumatoide; o b) asma o alergia. 72. - El uso que se reclama en cualesquiera de las reivindicaciones 70 ó 71 , que comprende adicionalmente proveer un agonista de una segunda citocina. 73.- El uso que se reclama en la reivindicación 72, que comprende adicionalmente proveer un agonista de la tercera citocina. 74.- El uso que se reclama en la reivindicación 67, en donde la IL-27 antagonista y el antagonista de la primera citocina son administrables al sujeto y el trastorno o condición comprende: a) una condición o trastorno de TH1 ; b) esclerosis múltiple; c) psoriasis; d) enfermedad de Crohn; c) diabetes tipo I; o d) lupus eritematoso sistémico. 75. - El uso que se reclama en la reivindicación 74, que comprende adicionalmente proveer un antagonista de la segunda citocina. 76. - El uso que se reclama en la reivindicación 75, que comprende adicionalmente proveer un antagonista de la tercera citocina. 77. - El uso de a) un agonista de la citocina IL-27 y un agonista de una primera citocina, en donde dicha citocina se selecciona a partir del grupo que consiste de IL-15, IL-18 e IL-23; o b) un antagonista de la IL-27 y un antagonista de una primera citocina, en donde dicha citocina se selecciona a partir del grupo que consiste de IL-15, IL-18 e IL-23, para preparar un medicamento para tratar o mejorar un trastorno o condición patológica de un sujeto mediante la modulación de la expresión o niveles del IFNgamma en el sujeto. 78. - El uso que se reclama en la reivindicación 77, en donde la modulación es: a) creciente y el tratamiento se realiza con dicho agonista de la IL-27 y dicho agonista de una primera citocina; o b) decreciente y el tratamiento se realiza con dicho antagonista de la IL-27 y dicho antagonista de una primera citocina. 79. - El uso que se reclama en la reivindicación 77, en donde dicho agonista de la IL-27 es una IL-27 variante o derivada, y la IL-27 variante o derivada posee al menos una propiedad biológica de la IL-27. 80. - El uso que se reclama en la reivindicación 79, en donde la IL-27 variante o derivada comprende una hipercina IL-27. 81. - El uso que se reclama en la reivindicación 78, en donde la modulación se incrementa y es de aproximadamente dos veces, aproximadamente 5-veces, aproximadamente 10-veces, aproximadamente 20-veces, o aproximadamente 50-veces mayor que el nivel de expresión o de producción en la ausencia de la cantidad efectiva de dicho agonista de la IL-27 y dicho agonista de una primera citocina. 82. - El uso que se reclama en la reivindicación 78, en donde la modulación es creciente y dicho tratamiento comprende adicionalmente tratamiento con un agonista de una segunda citocina que es diferente del agonista de una primera citocina. 83 - El uso que se reclama en la reivindicación 82, en donde el agonista de una segunda citocina es: a) IL-2; b) IL-15; c) IL-12; d) IL-23; o e) IL-18. 84.- El uso que se reclama en la reivindicación 83, en donde dicho agonista de la primera citocina y dicho agonista de la segunda citocina son: a) IL-23 e IL-2; b) IL-15 e IL-12; c) IL-15 e IL-23; o d) IL-18 y cualesquiera de IL-2, IL-15, IL-12, o IL-23. 85.- El uso que se reclama en la reivindicación 82, que comprende adicionalmente tratar con el agonista de una tercera citocina que es diferente de dicho agonista de una primera citocina y dicho agonista de la segunda citocina. 86.- El uso que se reclama en la reivindicación 85, en donde el agonista de la primera citocina es IL-18 y dicho agonista de la segunda citocina y el agonista de la tercera citocina son: a) IL-2 e IL-15; o b) IL-12 e IL-23. 87.- El uso que se reclama en la reivindicación 78, en donde la modulación es decreciente y dicho tratamiento comprende adicionalmente tratamiento con un antagonista de la segunda citocina que es diferente del antagonista de la primera citocina. 88. - El uso que se reclama en la reivindicación 87, en donde la segunda citocina es: a) IL-2; b) IL-15; c) IL-12; d) IL-23; o e) IL-18. 89. - El uso que se reclama en la reivindicación 88, en donde dicha primera citocina y dicha segunda citocina son: a) IL-23 e IL-2; b) IL-15 e IL-12; c) IL-15 e IL-23; o d) IL-18 y cualesquiera de IL-2, IL-15, IL-12, o IL-23. 90. - El uso que se reclama en la reivindicación 87, que comprende adicionalmente tratar con el antagonista de la tercera citocina que es diferente de dicho antagonista de una primera citocina y dicho antagonista de la segunda citocina. 91. - El uso que se reclama en la reivindicación 90, en donde la primera citocina es IL-18 y dicha segunda citocina y dicha tercera citocina son: a) IL-2 e IL-15; o b) IL-12 e IL-23. 92. - El uso que se reclama en la reivindicación 77, en donde el trastorno o condición comprende: a) cáncer, neoplasma, o tumor; b) un patógeno intracelular; o c) una condición inflamatoria o autoinmune. 93. - El uso que se reclama en la reivindicación 92, en donde el tratamiento es con un agonista de la IL-27 y un agonista de una primera citocina y el patógeno intracelular comprende: a) Leishmania sp.; b) Mycobacterium sp.; c) Listería sp.; d) Toxoplasma sp.; e) herpesvirus; f) citomegalovirus; o g) virus de inmunodeficiencia humana (VIH). 94. - El uso que se reclama en la reivindicación 92, en donde el tratamiento es con un agonista de la IL-27 y un agonista de una primera citocina y las condiciones inflamatorias o autoinmunes comprenden: a) artritis reumatoide; o b) asma o alergia. 95. - El uso que se reclama en la reivindicación 92, en donde el tratamiento es con un antagonista de la IL-27 y un antagonista de una primera citocina y el trastorno o condición comprende: a) una condición o trastorno de TH1 ; b) esclerosis múltiple; c) psoriasis; d) enfermedad de Crohn; c) diabetes tipo I; o d) lupus eritematoso sistémico. 96. - El uso que se reclama en la reivindicación 77, en donde el antagonista de la IL-27 es: a) derivada a partir del sitio de unión al antígeno de un anticuerpo; o b) un ácido nucleico.