MX2014003794A - Procesos para preparar compuestos útiles como inhibidores de cinasa ataxia telangiectasia mutada y rad3 relacionados (atr). - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a procesos e intermediarios para preparar compuestos útiles como inhibidores de la cinasa ATR, tales como los derivados de aminopirazin-isoxazol y moléculas relacionadas. La presente invención se refiere, además a compuestos útiles como inhibidores de la proteína cinasa ATR. La invención se refiere a composiciones farmacéuticamente aceptables que comprenden los compuestos de esta invención; métodos para tratar diversas enfermedades, transtornos y condiciones con el uso de los compuestos de esta invención; procesos para preparar los compuestos de esta invención; intermedios para preparar los compuestos de esta invención; y formas sólidas de los compuestos de esta invención. Los compuestos de esta invención tienen fórmula I o II: Ver formula. (I) (II) En donde las variables son tal como se definan en la presente descripción.

Description

PROCESOS PARA PREPARAR COMPUESTOS UTILES COMO INHIBIDORES DE CINASA ATAXIA TELANGIECTASIA MUTADA Y Rad3 RELACIONADOS (ATR) ANTECEDENTES DE LA INVENCION La cinasa ATR ("ATM y Rad3 relacionados") es una proteína cinasa implicada en las respuestas celulares al daño en el ADN. La cinasa ATR actúa con la cinasa ATM ("ataxia telangiectasia mutada" ) y muchas otras proteínas para regular la respuesta de una célula al daño en el ADN, mencionada comúnmente como respuesta al daño en el ADN (DDR, por sus siglas en inglés) . La DDR estimula la reparación del ADN, promueve la supervivencia y detiene el avance del ciclo celular por la activación de controles del ciclo celular que proporcionan tiempo para la reparación. Sin la DDR, las células son mucho más sensibles al daño en el ADN y mueren rápidamente por las lesiones en el ADN inducidas por procesos celulares endógenos tales como la replicación del ADN o agentes exógenos que dañan el ADN usados comúnmente en el tratamiento contra el cáncer.

Las células saludables pueden depender de un huésped de proteínas diferentes para la reparación del ADN que incluyen la cinasa ATR de DDR. En algunos casos, estas proteínas pueden compensarse entre sí por la activación de procesos de reparación del ADN funcionalmente redundantes. Por el contrario, muchas células cancerosas contienen Ref. 247815 defectos en algunos de sus procesos de reparación del ADN, tales como señalización de ATM y, por lo tanto, muestran una dependencia mayor en sus proteínas de reparación del ADN intactas restantes que incluyen ATR.

Además, muchas células cancerosas expresan oncogenes activados o carecen de supresores de tumores principales y esto puede hacer que estas células cancerosas tiendan a exhibir fases desreguladas de replicación del ADN que, a su vez, causan daño en el ADN. La ATR ha estado implicada, como un componente crítico de la DDR, en la respuesta a la replicación del ADN alterado. En consecuencia, estas células cancerosas dependen más de la actividad de ATR para la supervivencia que las células saludables. En consecuencia, los inhibidores de ATR pueden ser útiles para tratar el cáncer, ya sea solos o combinados con agentes que dañan el ADN, porque detienen un mecanismo de reparación del ADN que es más importante para la supervivencia celular en muchas células cancerosas que en células normales saludables .

De hecho, se ha mostrado que la interrupción de la función de ATR (por ejemplo, por supresión de genes) promueve la muerte de las células cancerosas en ausencia y presencia de agentes que dañan el ADN. Esto sugiere que los inhibidores de ATR pueden ser eficaces como agentes simples y como sensibilizantes potentes para radioterapia o quimioterapia genotóxica .

Por todo esto, existe la necesidad de desarrollar inhibidores de ATR potentes y selectivos para tratar el cáncer, ya sea como agentes simples o como terapias de combinación con radioterapia o quimioterapia genotóxica. Además, sería deseable contar con una ruta sintética para los inhibidores de ATR que posibilite la síntesis a gran escala y perfeccione los métodos conocidos actualmente.

El péptido de ATR puede expresarse y aislarse con el uso de diversos métodos conocidos en la literatura (ver, por ejemplo, Ünsal -Kacmaz et al., PNAS 99: 10, págs . 6673-6678, 14 de mayo de 2002; ver, además, Kumagai et al. Cell 124, págs. 943-955, 10 de marzo de 2006; Unsal- acmaz et al. Molecular and Cellular Biology, febrero de 2004, págs. 1292-1300; y Hall-Jackson et al. Oncogene 1999, 18, 6707-6713).

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención se refiere a procesos e intermediarios para preparar compuestos útiles como inhibidores de la cinasa ATR, tales como derivados de aminopirazin-isoxazol y moléculas relacionadas. Los derivados de aminopirazin-isoxazol son útiles como inhibidores de ATR y también son útiles para preparar inhibidores de ATR. La presente invención se refiere, además, a formas sólidas de inhibidores de ATR, así como a inhibidores deuterados de ATR.

Un aspecto de la invención proporciona un proceso para preparar un compuesto de fórmula I : que comprende preparar un compuesto de fórmula 4 4 a partir de un compuesto de fórmula 3 : 3 en condiciones de formación de oxima adecuadas.

Otro aspecto comprende preparar un compuesto de fórmula 4 : a partir de un compuesto de fórmula 3 : 3 en condiciones de formación de oxima adecuadas.

Otro aspecto de la presente invención comprende un compuesto de fórmula II : II o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en donde cada uno de Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6 , R7, R8, R9a, R9b, R10, R11, R12 y R13 es, independientemente, hidrógeno o deuterio, y al menos uno de Rla, Rlb, Rl , R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, Rb, R10, R11, R12 y R13 es deuterio.

Aún otro aspecto de la invención proporciona formas sólidas de un compuesto de fórmula 1-2: 1-2 presente descripción se exponen aspectos de la invención.

La presente invención tiene varias ventajas sobre los métodos conocidos previamente. En primer lugar, el presente proceso tiene un menor número de etapas sintéticas totales en comparación con procesos descritos previamente. En segundo lugar, el presente proceso presenta mejores rendimientos que los procesos descritos previamente . En tercer lugar, el presente proceso es eficaz para compuestos en donde R3 es una amplia variedad de grupos, tales como grupos alquilo o una porción grande e impedida, tal como un anillo. En cuarto lugar, el presente proceso comprende intermediarios que son más estables y tienen una vida útil más prolongada. En ciertas modalidades, la formación del grupo oxima en las condiciones no ácidas del presente proceso permite preservar los grupos protectores sensibles a ácidos tales como Boc o CBz durante el curso de la síntesis. En otras modalidades, el proceso es más fácil de escalar hasta grandes cantidades debido a la eliminación de la cromatografía como etapa de purificación.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS Figura la: XRPD de la base libre del compuesto 1-2 Figura 2a: TGA de la base libre del compuesto 1-2 Figura 3a: DSC de la base libre del compuesto 1-2 Figura 4a: Gráfico ORTEP de la unidad asimétrica de la estructura de cristal único de la forma libre del compuesto 1-2 Figura Ib: XRPD del compuesto 1-2 · HC1 Figura 2b: TGA del compuesto 1-2 · HC1 Figura 3b: DSC del compuesto 1-2 · HC1 Figura 4b: Gráfico ORTEP de la unidad asimétrica de la estructura de cristal único de la forma libre del compuesto 1-2 · HC1.

Figura le: XRPD del compuesto 1-2 · 2HC1 Figura 2c: TGA del compuesto 1-2 · 2HC1 Figura 3c: DSC del compuesto 1-2 · 2HC1 Figura 4c: Estado sólido de la base libre del compuesto 1-1 Figura Id: XRPD del compuesto 1-2 · HC1 monohidratado Figura 2d: TGA del compuesto 1-2 · HC1 monohidratado Figura 3d: DSC del compuesto 1-2 · HC1 monohidratado Figura 4d: 13CNMR en estado sólido del compuesto 1-1 · HC1 Figura le: XRPD del compuesto 1-2 · HC1 · 2H20 Figura 2e: TGA del compuesto 1-2 · HC1 · 2H20 Figura 3e: DSC del compuesto 1-2 · HC1 · 2H20 Figura 4e: 13CN R en estado sólido compuesto I-1«2HC1.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Un aspecto de la invención proporciona un proceso para preparar un compuesto de fórmula 4: 4 a partir de un compuesto de fórmula 3: 3 en condiciones de formación de oxima adecuadas; en donde R1 es un alquilo de Ci-6 R2 es un alquilo de Ci-e; o R1 y R2, conjuntamente con los átomos de oxigeno a los que están unidos, forman un anillo heterociclico saturado de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido, que tiene dos átomos de oxigeno ; R3 es hidrógeno, alquilo de C-i-6 o un heterociclilo saturado o parcialmente insaturado de 3-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en oxigeno, nitrógeno y azufre; en donde el heterociclilo está sustituido opcionalmente con 1 unidad de halógeno o alquilo de Ci-3; J1 es halógeno, alquilo de C1-4 o alcoxilo de C1-4; PG es un grupo protector carbamato.

Otro aspecto proporciona un proceso para preparar un compuesto de fórmula I : I que comprende las etapas de : preparar un compuesto de fórmula 4 : 4 a partir de un compuesto de fórmula 3: R2.CZHÍT\=/ PÍ1G J 3 en condiciones de formación de oxima adecuadas; en donde R1 es un alquilo de Ci-6; R2 es un alquilo de Ci-6; o R1 y R2, conjuntamente con los átomos de oxígeno a los que están unidos, forman un anillo heterocíclico saturado de 5 o 6 miembros y opcionalmente sustituido, que tiene dos átomos de oxígeno; R3 es hidrógeno, alquilo de C~i-6 o un heterociclilo saturado o parcialmente insaturado de 3-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en oxígeno, nitrógeno y azufre; en donde el heterociclilo está sustituido opcionalmente con 1 unidad de halógeno o alquilo de Ci-3; R4 es Q es fenilo, piridilo o una piridina N-alquilada; J1 es H, halógeno, alquilo de Ci-4 o alcoxilo de C1-4; J2 es halógeno; CN; fenilo; oxazolilo; o un grupo alifático de Ci-6, en donde hasta 2 unidades de metileno están opcionalmente reemplazadas por 0, NR" , C(0), S, S(0) o S(0)2; ese grupo alifático de Ci_6 está opcionalmente sustituido con 1-3 fluoro o CN; q es 0, 1 o 2; PG es un grupo protector carbamato.

Otra modalidad comprende, además, la etapa de proteger un compuesto de fórmula 2 : 2 condiciones de protección adecuadas para formar compuesto de fórmula 3.

Otra modalidad comprende, además, la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula 1 : con una amina adecuada en condiciones de aminación reductora adecuadas para formar un compuesto de fórmula 2.

En algunas modalidades, la amina adecuada es NHCH3. En otras modalidades, la amina adecuada es Otra modalidad comprende, además, la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula 4: 4 en condiciones de formación de isoxazol adecuadas para formar un compuesto de fórmula 5 : Otra modalidad comprende, además, la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula 5 en condiciones de acoplamiento adecuadas, seguido de condiciones de desprotección adecuadas para formar un compuesto de fórmula I .

En algunas modalidades, PG es Boc o Cbz . En algunas modalidades, PG es Boc.

En otras modalidades, R1 es etilo y R2 etilo.

En aún otras modalidades, R3 es CH3 o En algunas moda es en donde Q es fenilo. En algunas modalidades, Q está sustituido en la posición para con J2, en donde q es 1.

En algunas modalidades, J1 es H o halógeno. En algunas modalidades, J1 es H. En otras modalidades, J1 es halógeno .

En otras modalidades, J2 es un grupo alifático de Ci-6/ en donde hasta 1 unidad de metileno está opcionalmente sustituida con S(0) 2 . En algunas modalidades, J2 es -S(0)2-(alquilo de C1-5) . En algunas modalidades, q es 1.

De acuerdo con otra modalidad, R1 es etilo; es etilo; es CH3 o PG es Boc o Cbz; J1 es H; R4 es en donde Q es fenilo; J2 es -S (O) 2-CH (CH3) 2 ; q es 1; En algunas modalidades, R3 es CH3. En algunas modalidades, R3 es CH3. En aún otras modalidades, R3 es CH3 o acuerdo con o dad, PG es Boc; J1 es H; R4 es en donde Q es piridilo; J2 es q es 1; En algunas modalidades, R4 es Condiciones de reacción En algunas modalidades, las condiciones de formación de oxima adecuadas consisten en una secuencia de una etapa o una secuencia de dos etapas.

En algunas modalidades, la secuencia de dos etapas consiste en desproteger, primeramente, el grupo cetal del compuesto de fórmula 3 en un aldehido en condiciones de desprotección adecuadas y, después, formar la oxima de la fórmula 4 en condiciones de formación de oxima adecuadas. En algunas modalidades, las condiciones de desprotección adecuadas comprenden añadir cantidades catalíticas de ácido para-toluensulfónico (pTSA) , acetona y agua; y las condiciones de formación de oxima adecuadas comprenden mezclar hidroxilamina, una cantidad catalítica de ácido, un agente deshidratante y un solvente alcohólico. En otras modalidades, el ácido es pTSA o HCl, el agente deshidratante son tamices moleculares o dimetoxiacetona, y el solvente alcohólico es metanol o etanol .

En otras modalidades, la secuencia de una etapa comprende añadir NH20H.HC1 y una mezcla de THF y agua. En otras modalidades, la secuencia comprende añadir NH20H.HC1 con una mezcla de 2-metil tetrahidrofurano y, opcionalmente, agua regulada con Na2S04 - En algunas modalidades, 1 equivalente del compuesto de fórmula 3 se combina con 1.1 equivalentes de NH20H.HC1 en una mezcla 10:1 v/v de THF y agua. En algunas modalidades, 1 equivalente del compuesto de fórmula 3 se combina con 1.1 equivalentes de NH20H.HC1 en una mezcla 10:1 v/v de 2-metil tetrahidrofurano y agua, opcionalmente, regulada con Na2S04.

En otras modalidades, las condiciones de protección se seleccionan del grupo que consiste en • R-OCOC1, una base de amina terciaria adecuada y un solvente adecuado; en donde R es un alquilo de Ci_e opcionalmente sustituido con fenilo; • R(C02)0R', un solvente adecuado y, opcionalmente, una cantidad catalítica de base, en donde R y R1 son, cada uno e independientemente, alquilo de C1-6 opcionalmente sustituido con fenilo; • [RO(C=0)]20, una base adecuada y un solvente adecuado.

En algunas modalidades, la base adecuada es Et3N, diisopropilamina y piridina; y el solvente adecuado se selecciona de un solvente clorado, un éter o un hidrocarburo aromático. En otras modalidades, la base adecuada es Et3N y el solvente adecuado es un solvente clorado seleccionado de DCM. En aún otras modalidades, las condiciones de protección comprenden añadir 1.20 equivalentes de (Boc)20 y 1.02 equivalentes de Et3N en DCM.

De acuerdo con otra modalidad, las condiciones de acoplamiento adecuadas comprenden añadir un metal adecuado y una base adecuada en un solvente adecuado. En otras modalidades, el metal adecuado es Pd [P (tBu) 3] 2 el solvente adecuado es una mezcla de acetonitrilo y agua; y la base adecuada es carbonato sódico. En otras modalidades, las condiciones de acoplamiento adecuadas comprenden añadir 0.1 equivalentes de Pd [P (tBu) 3] 2 ; 1 equivalente de ácido o éster borónico; y 2 equivalentes de carbonato sódico en una relación 2:1 v/v de acetonitrilo/agua a 60-70 °C.

De acuerdo con otra modalidad, las condiciones de desprotección adecuadas comprenden combinar el compuesto de fórmula 5_ con un ácido adecuado en un solvente adecuado. En algunas modalidades, el ácido adecuado se selecciona de ácido para-toluensulfónico (pTSA) , HCl, TBAF, H3P04 o TFA, y el solvente adecuado se selecciona de acetona, metanol, etanol, CH2C12, EtOAc, THF, 2-MeTHF, dioxano, tolueno o éter dietílico .

De acuerdo con otra modalidad, las condiciones de formación de isoxazol adecuadas consisten en dos etapas; la primera etapa comprende hacer reaccionar el compuesto de fórmula 4 en condiciones de formación de clorooxima adecuadas para formar un intermediario clorooxima; la segunda etapa comprende hacer reaccionar el intermediario clorooxima con acetileno en condiciones de cicloadición adecuadas para formar un compuesto de fórmula 5.

De acuerdo con otra modalidad, las condiciones de formación de clorooxima adecuadas se seleccionan de - N-clorosuccinimida y solvente adecuado, o ¦ peroximonosulfato de potasio, HC1 y dioxano.

En algunas modalidades, el solvente adecuado se selecciona de un solvente no prótico, un hidrocarburo aromático o un acetato de alquilo. De acuerdo con otra modalidad, las condiciones de formación de clorooxima adecuadas son 1.05 equivalentes de N-clorosuccinimida en acetato de isopropilo a 40-50 °C.

De acuerdo con otra modalidad, las condiciones de cicloadición adecuadas consisten en una base adecuada y un solvente adecuado. En algunas modalidades, la base adecuada se selecciona de piridina DIEA, TEA, t-BuONa y K2C03, y el solvente adecuado se selecciona de acetonitrilo, tetrahidrofurano , 2-metiltetrahidrofurano, TBE, EtOAc , i-PrOAc, DCM, tolueno, DMF y metanol . En otras modalidades, la base adecuada se selecciona de Et3N y el solvente adecuado se selecciona de DCM.

De acuerdo con otra modalidad, la segunda etapa comprende hacer reaccionar 1 equivalente de acetileno con 1.2 equivalentes del intermediario clorooxima y 1.3 equivalentes de Et3N en DCM a temperatura ambiente.

De acuerdo con otra modalidad, las condiciones de formación de isoxazol adecuadas comprenden combinar el compuesto de fórmula 4 con un oxidante en un solvente adecuado. En algunas modalidades, ese oxidante es [bis (trifluoroacetoxi) yodo] benceno, y ese solvente es una mezcla 1:1:1 de metanol, agua y dioxano.

Síntesis de los compuestos 1-2 e 1-3 Una modalidad proporciona un proceso para preparar un compuesto de fórmula 1-2: 1-2 que comprende una o más de las etapas siguientes: a) Hacer reaccionar un compuesto de fórmula Ib: con metilamina en condiciones de aminación reductora adecuadas para formar un compuesto de fórmula 2b: b) hacer reaccionar un compuesto de fórmula 2b en condiciones de protección con Boc adecuadas para formar el compuesto de fórmula 3b: 3b c) hacer reaccionar un compuesto de fórmula 3b en condiciones de formación de oxima adecuadas para formar el compuesto de fórmula 4-i: 4-i d) hacer reaccionar un compuesto de fórmula 4-i en condiciones de formación de clorooxima adecuadas para formar el compuesto de fórmula 4-ii: 4-ii e) hacer reaccionar el compuesto de fórmula 4-ii con un compuesto de fórmula 4-iii 4 - iii en condiciones de cicloadición adecuadas para formar un compuesto de fórmula 4-iv: f) hacer reaccionar un compuesto de fórmula 4-iv con un compuesto de fórmula ?-5-i: ?-5 - i en condiciones de acoplamiento adecuadas para formar el compuesto de fórmula 5-i: g) desproteger un compuesto de fórmula 5-i en condiciones desprotección de Boc adecuadas seguido, opcionalmente , por el tratamiento en condiciones acuosas básicas para formar un compuesto de fórmula 1-2.

Otra modalidad proporciona un proceso para preparar un compuesto de fórmula 1-3: que comprende una o más de las etapas siguientes: a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula A-l: A-l con tetrahidro-2H-piran-4 -amina en condiciones de aminación reductora adecuadas para formar un compuesto de fórmula A-2: A-2 b) hacer reaccionar un compuesto de fórmula A-2 en condiciones de protección con Boc adecuadas para formar el compuesto de fórmula A-3: A-3 c) hacer reaccionar un compuesto de fórmula A-3 en condiciones de formación de oxima adecuadas para formar el compuesto de fórmula A-4: A-4 d) hacer reaccionar un compuesto de fórmula A-4 A-4 en condiciones de formación de clorooxima adecuadas para formar el compuesto de fórmula ?-4-i: ?-4-i e) hacer reaccionar el compuesto de fórmula ?-4-i con un compuesto de fórmula ?-4-ii: ?-4-ii en condiciones de cicloadición adecuadas formar un compuesto de fórmula A-5: A-5 f) hacer reaccionar un compuesto de fórmula con un compuesto de fórmula ?-5-i: ?-5-i en condiciones de acoplamiento adecuadas para formar el compuesto de fórmula A-6: A-6 g) desproteger un compuesto de fórmula A-6 en condiciones de desprotección de Boc adecuadas seguido, opcionalmente, por el tratamiento en condiciones acuosas básicas para formar un compuesto de fórmula 1-3.

Las condiciones de acoplamiento adecuadas comprenden combinar un catalizador de paladio adecuado con una base adecuada en un solvente adecuado. Los catalizadores de paladio adecuados incluyen, pero no se limitan a, Pd[P(tBu)3]2, Pdídtbpf)C12, Pd(Pf3)2Cl2, Pd (PCy3) 2C12, Pd(dppf)Cl2 y Pd(dppe)Cl2. Los solventes adecuados incluyen, pero no se limitan a, tolueno, MeCN, agua, EtOH, IPA, 2-Me-THF o IPAc. Las bases adecuadas incluyen, pero no se limitan a, K2C03, Na2C03 o K3P04.

Las condiciones de formación de oxima adecuadas consisten en una secuencia de una etapa o una secuencia de dos etapas. La secuencia de dos etapas consiste en desproteger, primeramente, el grupo cetal del compuesto de fórmula A-3 en un aldehido en condiciones de desprotección adecuadas y, después, formar la oxima de fórmula A-4 en condiciones de formación de oxima adecuadas .

La secuencia de una etapa comprende, por ejemplo, mezclar hidroxilamina, un ácido, un solvente orgánico y agua.

En algunas modalidades, se añade NH20H.HC1 a una mezcla de THF y agua. En algunas modalidades, 1 equivalente del compuesto de fórmula 3 -A se combina con 1.1 equivalentes de NH20H.HC1 en una mezcla 10:1 v/v de THF/agua.

Las condiciones de desprotección adecuadas comprenden añadir un ácido, acetona y agua. Los ácidos adecuados incluyen pTSA o HCl; los solventes orgánicos adecuados incluyen solventes clorados (por ejemplo, diclorometano (DCM) , dicloroetano (DCE) , CH2C12 y cloroformo) ; éteres (por ejemplo, THF, 2-MeTHF y dioxano) ; hidrocarburos aromáticos (por ejemplo, tolueno y xilenos) u otros solventes apróticos.

Las condiciones de cicloadición adecuadas comprenden una base adecuada (por ejemplo, piridina, DIEA, TEA, t-BuONa o K2C03) y un solvente adecuado (por ejemplo, acetonitrilo, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, MTBE, EtOAc, i-PrOAc, DCM, tolueno, DMF y metanol_.

Las condiciones de formación de clorooxima adecuadas comprenden añadir HCl en dioxano a una solución de la oxima en presencia de NCS en un solvente adecuado seleccionado de solventes no próticos (DCM, DCE, THF y dioxano) , hidrocarburos aromáticos (por ejemplo, tolueno, xilenos) y acetatos de alquilo (por ejemplo, acetato de isopropilo, acetato de etilo) .

Las condiciones de desprotección de Boc adecuadas comprenden añadir un agente de desprotección de Boc adecuado (por ejemplo, TMS-Cl, HCl, TBAF, H3P04 o TFA) y un solvente adecuado (por ejemplo, acetona, tolueno, metanol, etanol, 1-propanol, isopropanol, CH2C12, EtOAc, acetato de isopropilo, tetrahidrofurano, 2 -metiltetrahidrofurano, dioxano y éter dietílico) . En algunas modalidades, las condiciones de desprotección de Boc adecuadas comprenden añadir un agente de desprotección de Boc adecuado seleccionado de HCl, TFA, y un solvente adecuado seleccionado de acetona, tolueno, acetato de isopropilo, tetrahidrofurano o 2-metiltetrahidrof rano .

Las condiciones de protección con Boc adecuadas incluyen (Boc)20, una base adecuada y un solvente adecuado. Las bases adecuadas incluyen, pero no se limitan a, Et3N, diisopropilamina y piridina. Los solventes adecuados incluyen, pero no se limitan a, solventes clorados (por ejemplo, diclorometano (DCM) , dicloroetano (DCE) , CH2C12 y cloroformo) ; éteres (por ejemplo, THF, 2-MeTHF y dioxano) ; hidrocarburos aromáticos (por ejemplo, tolueno y xilenos) u otros solventes apróticos. En algunas modalidades, la base adecuada es Et3N, el solvente adecuado es DCM, tetrahidrofurano o 2 -metiltetrahidrofurano . En ciertas modalidades, las condiciones de protección comprenden añadir 1.05 equivalentes de (Boc)20 en 2-metiltetrahidrofurano o DCM.

Las condiciones de aminación reductora adecuadas comprenden añadir un agente reductor seleccionado de NaBH4, NaBH3CN o NaBH(OAc)3 en presencia de un solvente seleccionado de diclorometano (DCM) , dicloroetano (DCE) , un solvente alcohólico seleccionado de metanol, etanol, 1-propanol, isopropanol, o un solvente no prótico seleccionado de dioxano, tetrahidrofurano o 2-metiltetrahidrofurano y, opcionalmente , una base seleccionada de Et3N o diisopropiletilamina . En algunas modalidades, las condiciones de aminación reductora adecuadas comprenden añadir 1.2 equivalentes de tabletas de NaBH4 en presencia de Et3N en MeOH.

Otro aspecto de la presente invención proporciona un compuesto de fórmula II: II o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en donde cada Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c es, independientemente, hidrógeno o deuterio, y al menos uno de Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c es deuterio.

En algunas modalidades, R9a y R9b son iguales. En otras modalidades, R9a y R9b son deuterio, y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3C, R4, R5, R6, R7, R8 , R10, Rlla, Rllb, R12a, R12b, R13a, R13b, R14a y R14b son deuterio o hidrógeno. En aún otra modalidad, R9a y R9b son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3C, R4, R5, R6, R7, R8, R10, Rlla, Rll , R12a, R12b, R13a, R13b, R14a y R14b son hidrógeno.

En una modalidad, R9a, R9b, R10a, R10 y R10c son iguales. En otra modalidad, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son deuterio, y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7 y R8 son deuterio o hidrógeno. En algunas modalidades, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7 y R8 son hidrógeno.

En otras modalidades, R10a, R10b y R10c son iguales.

En una modalidad, R10a, R10 y R10c son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a y R9b son deuterio o hidrógeno. En aún otra modalidad, R10a, R10b y R10c son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6 , R7, R8 , R9a y R9b son hidrógeno.

En algunas modalidades, Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b y R3c son iguales. En otra modalidad, Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b y R3C son deuterio y R4 , R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b y R10C son deuterio o hidrógeno. En aún otra modalidad, Rla , Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b y R3c son deuterio y R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9\ R10a, R10b y R10c son deuterio.

En otra modalidad, R6 es deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son deuterio o hidrógeno. En aún otra modalidad, R6 es deuterio y 10 Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son hidrógeno.

En otras modalidades, R2 es deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R3a, R3b y R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son deuterio o hidrógeno. En otra modalidad, R2 es deuterio y Rla, 15 Rlb, Rlc, R3a, R3b y R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son hidrógeno.

En otra modalidad, R7 es deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3C, R4, R5, R6, R8, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son deuterio o hidrógeno. En otras modalidades, R7 es deuterio y ->? T5la T?lb 0lc l?3a ü3b T53c D4 T?5 T?6 D8 ü9a T39b D10a R10b, R10c son hidrógeno.

En aún otra modalidad, R8 es deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3C, R4, R5, R6, R7, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son deuterio o hidrógeno. En otra modalidad, R8 es deuterio y pía plb pie p2 D3a p3b p3c p4 p5 p6 p7 p9a p9b p10a R10b, R10c son hidrógeno.

En algunas modalidades, al menos uno de R10a, R10b o R10c son iguales. En otra modalidad, al menos uno de R10a, R10b o R10c son deuterio y Rla, Rl , Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4 , R5, R6, R7, R8, R9a y R9b son deuterio o hidrógeno. En aún otra modalidad, al menos uno de R10a, R10b o R10c son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3C, R\ R5, Rs, R7, R8, R9a y R9b son hidrógeno .

En algunas modalidades, al menos dos de R10a, R10b o R10c son iguales. En otra modalidad, al menos dos de R10a, R10b o R10c son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a y R9b son deuterio o hidrógeno. En aún otra modalidad, al menos dos de R10 , R10b o R10c son deuterio y Rla, hidrógeno .

En otra modalidad, Rla, Rlb, Rlc, R3a, R3b y R3C son iguales. En algunas modalidades, Rla, Rlb, Rlc, R3a, R3b y R3c son deuterio y R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9 , R 10a / R10b y R10C son deuterio o hidrógeno. En aún otra modalidad, Rla , Rlb, Rlc, R3a, R3b y R3c es deuterio y R2, R4, R5, R6, R7, R8 / R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son hidrógeno.

En aún otra modalidad, R4 es deuterio y Rla, Rlb, Rlc R2 R3a R3b R3c R5 R6 R7 R8 R9a R9b R10a R10b R10c son deuterio o hidrógeno. En otras modalidades, R4 es deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son hidrógeno.

En otra modalidad, R5 es deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R6, R7, R8 , R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son deuterio o hidrógeno. En aún otra modalidad, R5 es deuterio y Dla plb pie p2 p3a p3b p3c p4 p6 p7 p8 p9a p9b p10a p10b r y R10 son hidrógeno .

En otra modalidad, al menos uno de R9a o R9b son iguales. En otras modalidades, al menos uno de R9a o R9b son deuterio y Rla, Rl , Rlc, R2 , R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R10a, R10b y R10c son deuterio o hidrógeno. En algunas modalidades, al menos uno de R9a y R9b son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3C, R4, R5, R6, R7, R8, R10a, R10b, R10c son hidrógeno .

En una modalidad, R6, R9a y R9b son iguales. En algunas modalidades, R6, R9a y R9b son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3 , R3C, R4, R5, R7, R8 , R10a, R10b, R10c son deuterio o hidrógeno. En otras modalidades, R6, R9a y R9b son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4 , R5, R7 , R8, R10a, R10b y R10c son hidrógeno.

En algunas modalidades, R2, R10a, R10 y R10c son iguales. En otra modalidad, R2, R10a, R10b y R10c son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R3a, R3b, R3C, R4, R5, R6, R7, R8, R9a y R9b son deuterio o hidrógeno. En aún otra modalidad, R2, R10a, R10b y R10c son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a y R9b son hidrógeno.

En algunas modalidades, R7 y al menos dos de R10a, R10b o R10c son iguales. En otra modalidad, R7 y al menos dos de R10a, R10b o R10c son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3 , R4, R5, R6, R8, R9a y R9b son deuterio o hidrógeno. En aún otra modalidad, R7 y al menos dos de R10a, R10b o R10c son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4 , R5, R6 , R8, R9a y R9b son hidrógeno.

En algunas modalidades, Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3C y al menos uno de R10a, R10b o R10c son iguales. En otra modalidad, Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3 , R3c y al menos uno de R10a, R10b o R10c son deuterio y R4, R5, R6, R7, R8, R9a y R9b son deuterio o hidrógeno. En aún otra modalidad, Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a , R3b , R3c y al menos uno de R10a, R10b o R10C son deuterio y R4, R5, R6, R7, R8, R9a y R9b son hidrógeno.

En algunas modalidades, Rla, Rlb, Rlc, R3a, R3b, R3C y R5 son iguales. En otra modalidad, Rla, Rlb , Rlc , R3a, R3b, R3C y R5 son deuterio y R2, R4, R6, R7, R8 , R9a, R9b, R10a, R10 y R 10c son deuterio o hidrógeno. En aún otra modalidad, R a, R , R c, R3a, R3b, R3c y R5 son deuterio y R2, R4, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son hidrógeno.

En otras modalidades, R4 y Rs son iguales. En otra modalidad, R4 y R6 son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3C, R5, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son deuterio o hidrógeno. En aún otra modalidad, R4 y R6 son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R5, R7, R8 , R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son hidrógeno.

En una modalidad, R2, R5, R9a y R9b son iguales. En algunas modalidades, R2, R5, R9a y R9 son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R3a, R3b, R3c, R\ R6, R7, R8, R10a, R10b y R10c son deuterio o hidrógeno. En otra modalidad, R2, R5, R9a y R9b son deuterio y Rla, Rlb, Rlc, R3a, R3b, R3c, R4, R6, R7, R8, R10a, R10b y R10c son hidrógeno .

En aún otra modalidad, Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R5, R6, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son iguales. En algunas modalidades, Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R5, R6, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c son deuterio y R4 , R7 y R8 son deuterio o hidrógeno. En otras modalidades, Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R5, R6, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c es deuterio y R4, R7 y R8 son hidrógeno.

En algunas modalidades, las variables son como se representan en los compuestos de la descripción, que incluyen los compuestos indicados en las tablas más abajo. 1-1 1-2 -16 11-17 11-18 11-22 Los compuestos de esta invención incluyen aquellos descritos de manera general en la presente descripción y se ilustran aún más por medio de las clases, subclases y especies descritas en la presente descripción. Como se usa en la presente descripción, se aplican las siguientes definiciones a menos que se indique de cualquier otra manera. Para los propósitos de esta invención, los elementos químicos se identifican según la Tabla periódica de los elementos, versión CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75.° Ed. Además, los principios generales de la química orgánica se describen en "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999 y en "March's Advanced Organic Chemistry", 5.a Ed. , Ed. : Smith, M.B. y March, J. , John Wiley & Sons, New York: 2001, el contenido completo de las cuales se incorpora en la presente descripción como referencia.

Tal como se describe en la presente descripción, un intervalo de números de átomos específico incluye cualquier entero comprendido en él. Por ejemplo, un grupo que tiene 1-4 átomos podría tener 1, 2, 3 o 4 átomos.

Tal como se describe en la presente descripción, los compuestos de la invención pueden sustituirse, opcionalmente, con uno o más sustituyentes , tal como se ilustra de manera general en la presente descripción o tal como se ejemplifica por medio de clases, subclases y especies particulares de la invención. Se apreciará que la frase "sustituido opcionalmente" se usa indistintamente con la frase "sustituido o no sustituido". Generalmente, el término "sustituido", precedido o no por el término "opcionalmente" se refiere al reemplazo de radicales hidrógeno en una estructura determinada por el radical de un sustituyente especificado. A menos que se indique de cualquier otra manera, un grupo sustituido opcionalmente puede tener un sustituyente en cada posición sustituible del grupo y, cuando más de una posición en una estructura determinada puede sustituirse con más de un sustituyente seleccionado de un grupo específico, el sustituyente puede ser el mismo o uno diferente en cada posición. Las combinaciones de sustituyentes contempladas en esta invención son, preferentemente, aquellas que producen la formación de compuestos estables o químicamente posibles.

A menos que se indique de cualquier otra manera, un sustituyente conectado por un enlace ilustrado desde el centro de un anillo significa que el sustituyente puede unirse a cualquier posición en el anillo. En el ejemplo i más abajo, por ejemplo, J1 se puede unir a cualquier posición en el anillo piridilo. Para los anillos bicíclicos, un enlace ilustrado a través de ambos anillos indica que el sustituyente puede unirse desde cualquier posición del anillo bicíclico. En el ejemplo ii más abajo, por ejemplo, J1 puede unirse al anillo de 5 miembros (por ejemplo, en el átomo de nitrógeno) y al anillo de 6 miembros. i ii El término "estable" , como se usa en la presente descripción, se refiere a compuestos que no se alteran sustancialmente cuando se exponen a condiciones necesarias para su producción, detección, recuperación, purificación y uso para uno o más de los propósitos descritos en la presente descripción. En algunas modalidades, un compuesto estable o compuesto químicamente posible es aquel que no se altera sustancialmente cuando se mantiene a una temperatura de 40 °C o menor, en ausencia de humedad u otras condiciones químicamente reactivas por al menos una semana.

El término "alifático" o "grupo alifático", como se usa en la presente descripción, se refiere a una cadena de hidrocarburos recta (es decir, no ramificada) , ramificada o cíclica, sustituida o no sustituida completamente saturada o que contiene una o más unidades de insaturación que tienen un solo punto de unión al resto de la molécula.

A menos que se especifique de cualquier otra manera, los grupos alifáticos contienen 1-20 átomos de carbono alifáticos. En algunas modalidades, los grupos alifáticos contienen 1-10 átomos de carbono alifáticos. En otras modalidades, los grupos alifáticos contienen 1-8 átomos de carbono alifáticos. En otras modalidades, los grupos alifáticos contienen 1-6 átomos de carbono alifáticos y en otras modalidades los grupos alifáticos contienen 1-4 átomos de carbono alifáticos. Los grupos alifáticos pueden ser grupos alquilo, alquenilo o alquinilo lineales o ramificados, sustituidos o no sustituidos. Los ejemplos específicos incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, isopropilo, n-propilo, sec-butilo, vinilo, n-butenilo, etinilo y tere-butilo. Los grupos alifáticos pueden ser, además, cíclicos o pueden tener una combinación de grupos linaales o ramificados y cíclicos. Los ejemplos de los tipos de grupos alifáticos incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, -CH2-ciclopropilo, CH2CH2CH(CH3) -ciclohexilo.

El término "cicloalifático" (o "carbociclo" o "carbociclilo" ) se refiere a un hidrocarburo de C3-C8 monocíclico o hidrocarburo de C8-Ci2 bicíclico que está completamente saturado o contiene una o más unidades de insaturación, pero que no es aromático, que tiene un solo punto de unión al resto de la molécula, en donde cualquier anillo individual en ese sistema anular bicíclico tiene 3-7 miembros. Los ejemplos de grupos cicloalifáticos incluyen, pero no se limitan a, grupos cicloalquilo y cicloalquenilo . Los ejemplos específicos incluyen, pero no se limitan a, ciclohexilo, ciclopropenilo y ciclobutilo.

El término "heterociclo" , "heterociclilo" o "heterocíclico", como se usa en la presente descripción, se refiere a sistemas de anillos no aromáticos, monocíclicos , bicíclicos o tricíclicos en los cuales uno o más miembros de anillo son un heteroátomo seleccionado independientemente. En algunas modalidades, el grupo "heterociclo", "heterociclilo" o "heterocíclico" tiene tres a catorce miembros de anillo en los cuales uno o más miembros de anillo es un heteroátomo seleccionado independientemente de oxígeno, azufre, nitrógeno o fósforo, y cada anillo en el sistema contiene 3 a 7 miembros de anillo.

Los ejemplos de heterociclos incluyen, pero no se limitan a, 3-lH-benzimidazol-2-ona, 3- (1-alquil) - benzimidazol-2-ona, 2-tetrahidrofuranilo, 3 tetrahidrofuranilo, 2 -tetrahidrotiofenilo, 3 tetrahidrotiofenilo, 2-morfolino, 3-morfolino, 4-morfolino 2-tiomorfolino, 3 -tiomorfolino, 4-tiomorfolino, 1 pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo, 3-pirrolidinilo, 1 tetrahidropiperazinilo, 2-tetrahidropiperazinilo, 3 tetrahidropiperazinilo, 1-piperidinilo, 2 -piperidinilo, 3 piperidinilo, 1-pirazolinilo, 3 -pirazolinilo, 4-pirazolinilo 5-pirazolinilo, 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3 piperidinilo, -piperidinilo, 2-tiazolidinilo, 3 tiazolidinilo, 4-tiazolidinilo, 1-imidazolidinilo, 2 imidazolidinilo, 4-imidazolidinilo, 5-imidazolidinilo, indolinilo, tetrahidroquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, benzotiolano, benzoditiano y 1, 3-dihidro-imidazol-2-ona.

Los grupos cíclicos (por ejemplo, cicloalifáticos y heterociclos) , pueden estar fusionados linealmente, unidos con puentes o pueden ser espirocíclicos .

El término "heteroátomo" se refiere a uno o más de los siguientes: oxígeno, azufre, nitrógeno, fósforo o silicio (que incluyen cualquier forma oxidada de nitrógeno, azufre, fósforo o silicio; la forma cuaternizada de cualquier nitrógeno básico o un nitrógeno sustituible de un anillo heterocíclico, por ejemplo, N (tal como en 3 , 4 -dihidro-2H-pirrolilo) , NH (como en pirrolidinilo) o NR+ (como en pirrolidinilo N-sustituido) ) .

El término "insaturado" , como se usa en la presente descripción, significa que una entidad tiene una o más unidades de insaturación . Tal como conoce un experimentado en la materia, los grupos insaturados pueden estar parcialmente insaturados o totalmente insaturados. Los ejemplos de grupos parcialmente insaturados incluyen, pero no se limitan a, buteno, ciclohexeno y tetrahidropiridina . Los grupos totalmente insaturados pueden ser aromáticos, antiaromáticos o no aromáticos. Los ejemplos de grupos totalmente insaturados incluyen, pero no se limitan a, fenilo, ciclooctatetraeno, piridilo, tienilo y l-metilpiridin-2 (1H) -ona .

Los términos "alcoxi" o "tioalquilo" , como se usan en la presente descripción, se refieren a un grupo alquilo, tal como se definió anteriormente, unido a través de un átomo de oxígeno ("alcoxi") o azufre ("tioalquilo").

Los términos "haloalquilo" , "haloalquenilo" , "haloalifático" y "haloalcoxi" significan alquilo, alquenilo o alcoxi, según sea el caso, sustituido con uno o más átomos de halógeno. Este término incluye grupos alquilo perfluorados, tales como -CF3 y -CF2CF3.

Los términos "halógeno", "halógeno" y "hal" significan F, Cl , Br o I .

El término "arilo" usado solo o como parte de una porción más grande como en "aralquilo" , "aralcoxi" o "ariloxialquilo" se refiere a sistemas de anillos monocíclicos , bicíclicos y tricíclicos que tienen un total de cinco a catorce miembros de anillo, en donde al menos un anillo en el sistema es aromático, y en donde cada anillo en el sistema contiene 3 a 7 miembros de anillo. El término "arilo" se puede usar indistintamente con el término "anillo de arilo" .

El término "heteroarilo", usado solo o como parte de una porción más grande como en "heteroaralquilo" o "heteroarilalcoxi" , se refiere a sistemas de anillos monocíclicos, bicíclicos y tricíclicos que tienen un total de cinco a catorce miembros de anillo, en donde al menos un anillo en el sistema es aromático, al menos un anillo en el sistema contiene uno o más heteroátomos y en donde cada anillo en el sistema contiene 3 a 7 miembros de anillo. El término "heteroarilo" se puede usar indistintamente con el término "anillo heteroarilo" o el término "heteroaromático" . Los ejemplos de anillos heteroarilo incluyen, pero no se limitan a, 2-furanilo, 3-furanilo, N-imidazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, 5-imidazolilo, benzimidazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5- isoxazolilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo, N-pirrolilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-pirimidinilo, -pirimidinilo, 5-pirimidinilo, piridazinilo (por ejemplo, 3 -piridazinilo) , 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5- tiazolilo, tetrazolilo (por ejemplo, 5-tetrazolilo) , triazolilo (por ejemplo, 2 -triazolilo y 5-triazolilo) , 2-tienilo, 3-tienilo, benzofurilo, benzotiofenilo, indolilo (por ejemplo, 2-indolilo) , pirazolilo (por ejemplo, 2-pirazolilo), isotiazolilo, 1 , 2 , 3-oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1 , 2 , -oxadiazolilo, 1, 2, 3 -triazolilo, 1,2,3-tiadiazolilo, 1, 3 , 4-tiadiazolilo, 1 , 2 , 5-tiadiazolilo, purinilo, pirazinilo, 1 , 3 , 5-triazinilo, quinolinilo (por ejemplo, 2-quinolinilo, 3-quinolinilo, 4-quinolinilo) e isoquinolinilo (por ejemplo, 1-isoquinolinilo, 3-isoquinolinilo o 4-isoquinolinilo) .

Se entiende que el término "heteroarilo" incluye ciertos tipos de anillos heteroarilo que existen en equilibrio entre dos formas diferentes. Más específicamente, por ejemplo, las especies tales como hidropiridina y piridinona (y, de manera similar, hidroxipirimidina y pirimidinona) están contempladas dentro de la definición de "heteroarilo" .

Los términos "grupo de protección" y "grupo protector", como se usan en la presente descripción, se emplean indistintamente y se refieren a un agente usado para bloquear temporalmente uno o más grupos funcionales deseados en un compuesto con múltiples sitios reactivos. En ciertas modalidades, un grupo de protección tiene una o más o, preferentemente, todas las siguientes características: a) se añade selectivamente a un grupo funcional con el rendimiento adecuado para producir un sustrato protegido que es b) estable a reacciones que ocurren en uno o más de los otros sitios reactivos; y c) se puede eliminar selectivamente, con el rendimiento adecuado, por medio de reactivos que no atacan el grupo funcional desprotegido regenerado. Tal como entendería una persona con experiencia en la materia, en algunos casos, los reactivos no atacan otros grupos reactivos en el compuesto. En otros casos, los reactivos pueden reaccionar, además, con otros grupos reactivos en el compuesto. Los ejemplos de grupos de protección se detallan en Greene, T. W. , Wuts, P. G en "Protective Groups in Organic Synthesis", tercera edición, John Wiley & Sons, New York: 1999 (y otras ediciones del libro) , el contenido completo del cual se incorpora en la presente descripción como referencia. El término "grupo de protección de nitrógeno" , como se usa en la presente descripción, se refiere a un agente usado para bloquear temporalmente uno o más sitios reactivos de nitrógeno deseados en un compuesto multifuncional . Los grupos de protección de nitrógeno preferidos tienen, además, las características mencionadas anteriormente para un grupo de protección y ciertos grupos de protección de nitrógeno ilustrativos se detallan, además, en el capítulo 7, Greene, T.W., uts, P. G, "Protective Groups en Organic Synthesis" , tercera edición, John Wiley & Sons, New York: 1999, cuyo contenido completo se incorpora en la presente descripción como referencia.

En algunas modalidades, una unidad de metileno de una cadena alquilo o alifática se reemplaza, opcionalmente , por otro átomo o grupo. Los ejemplos de esos átomos o grupos incluyen, pero no se limitan a, nitrógeno, oxígeno, azufre, -C(0)-, -C(=N-CN)-, -C(=NR)-, -C(=N0R)-, -SO- y -S02- . Estos átomos o grupos pueden combinarse para formar grupos más grandes. Los ejemplos de los grupos más grandes incluyen, pero no se limitan a, -OC(O)-, -C(0)CO-, -C02-, -C(0)NR-, -C(=N-CN), -NRCO-, -NRC(0)0-, -S02NR-, -NRS02-, -NRC(0)NR-, -OC(0)NR- y -NRS02NR- , en donde R es, por ejemplo, H o Ci-6alifático. Se entenderá que estos grupos pueden unirse a las unidades de metileno de la cadena alifática a través de enlaces simples, dobles o triples. Un ejemplo de un reemplazo opcional (átomo de nitrógeno en este caso) que se une a la cadena alifática a través de un enlace doble sería -CH2CH=N-CH3. En algunos casos, especialmente en el extremo terminal, un reemplazo opcional puede unirse al grupo alifático a través de un enlace triple. Un ejemplo de esto sería CH2CH2CH2C=N. Debe entenderse que en este caso, el nitrógeno terminal no se une a otro átomo.

Debe entenderse, además, que el término "unidad de metileno" puede referirse, además, a unidades de metileno ramificadas o sustituidas. Por ejemplo, en una porción isopropilo [-CH(CH3)2]/ un átomo de nitrógeno (por ejemplo NR) que reemplaza la primera "unidad de metileno" mencionada produciría dimetilamina [-N(CH3)2] · En casos tales como estos, una persona con experiencia en la materia entendería que el átomo de nitrógeno no tendrá átomos adicionales unidos a él, y el "R" de "NR" estaría ausente en este caso.

A menos que se indique de cualquier otra manera, los reemplazos opcionales forman un compuesto químicamente estable. Los reemplazos opcionales pueden producirse dentro de la cadena y/o en cualquier extremo de la cadena; es decir, en el punto de unión y/o además en el extremo terminal. Además, dos reemplazos opcionales pueden estar adyacentes entre sí dentro de una cadena siempre que produzca un compuesto químicamente estable. Por ejemplo, un C3 alifático se puede reemplazar, opcionalmente, por 2 átomos de nitrógeno para formar -C-N = N. Los reemplazos opcionales, además, pueden reemplazar completamente todos los átomos de carbono en una cadena. Por ejemplo, un C3 alifático se puede reemplazar, opcionalmente, por -NR-, -C(O)- y -NR- para formar -NRC(0)NR- (una urea) .

A menos que se indique de cualquier otra manera, si el reemplazo se produce en el extremo terminal, el átomo de reemplazo se une a un átomo de hidrógeno en el extremo terminal. Por ejemplo, si una unidad de metileno de CH2CH2CH3 se reemplaza opcionalmente por -0-, el compuesto resultante podría ser -OCH2CH3, -CH20CH3 o -CH2CH20H. Debería entenderse que si el átomo del terminal no contiene ningún electrón de valencia libre, entonces un átomo de hidrógeno no es necesario en el extremo terminal (por ejemplo, CH2CH2CH=0 o -CH2CH2C=N) .

A menos que se indique de cualquier otra manera, las estructuras representadas en la presente descripción incluyen, además, todas las formas isoméricas (por ejemplo, enantioméricas , diastereoméricas, geométricas, conformacionales y rotacionales) de la estructura. Por ejemplo, las configuraciones R y S para cada centro asimétrico, isómeros de enlace doble (Z) y (E) e isómeros conformacionales (Z) y (E) se incluyen en esta invención. Tal como entenderá una persona con experiencia en la materia, un sustituyente puede rotar libremente alrededor de cualquier enlace rotativo. Por ejemplo, un sustituyente representado como representa, además, Por lo tanto, los isómeros estereoquímicas individuales así como las mezclas enantioméricas , diastereoméricas , geométricas, conformacionales y rotativas de los compuestos de la presente están dentro del alcance de la invención.

A menos que se indique de cualquier otra manera, todas las formas tautoméricas de los compuestos de la invención están dentro del alcance de la invención.

En los compuestos de esta invención, se entiende que cualquier átomo no designado específicamente como isótopo particular representa cualquier isótopo estable de ese átomo. A menos que se indique de otra manera, cuando una posición se designa específicamente como "H" o "hidrógeno", se entiende que la posición tiene hidrógeno en su composición isotópica de abundancia natural. Además, a menos que se indique de otra manera, cuando una posición se designa específicamente como "D" o "deuterio", se entiende que la posición tiene deuterio en una abundancia que es al menos 3340 veces mayor que la abundancia natural del deuterio, que es de 0.015 % (es decir, al menos 50.1 % de incorporación de deuterio) .

"D" y "d" se refieren a deuterio.

Además, a menos que se indique de cualquier otra manera, las estructuras representadas en la presente invención están previstas, además, para incluir compuestos que difieren solamente en presencia de uno o más átomos enriquecidos isotópicamente. Por ejemplo, los compuestos que tienen las estructuras de la presente descripción, excepto por el reemplazo del hidrógeno por deuterio o tritio o el reemplazo de un carbono por un carbono enriquecido con 13C o 14C están dentro del alcance de esta invención. Tales compuestos son útiles, por ejemplo, como herramientas analíticas o sondas en ensayos biológicos .

Procesos Los procesos y compuestos descritos en la presente descripción son útiles para producir inhibidores de ATR que contienen un núcleo de aminopirazin-isoxazol . Los procesos sintéticos generales que se muestran en los esquemas de reacción de la presente descripción son útiles para generar un conjunto amplio de especies químicas que pueden usarse en la fabricación de compuestos farmacéuticos.

ESQUEMA DE REACCIÓN ? Etapa 1 El compuesto de fórmula I se puede elaborar de acuerdo con los etapas descritas en el Esquema de reacción A. La etapa 1 representa el uso de un aldehído/acetal inmediatamente disponible como punto de partida para la preparación de compuestos de fórmula I, I-A y I-B. La aminacióñ reductora entre el compuesto 1 y una amina primaria adecuada, en condiciones conocidas por aquellos con experiencia en la materia, conduce al compuesto 2, en donde se ha instalado un motivo bencilamina. Por ejemplo, las iminas pueden formarse mediante la combinación de una amina y un aldehido en un solvente adecuado, tal como diclorometano (DCM) , dicloroetano (DCE) , un solvente alcohólico (por ejemplo, metanol, etanol) , o un solvente no prótico (por ejemplo, dioxano o tetrahidrofurano (THF) ) . Después, estas iminas pueden reducirse por agentes reductores conocidos, que incluyen, pero no se limitan a, NaBH , NaBH3CN y NaBH(OAc)3 (ver JOC 1996, 3849) . En algunas modalidades, se combina 1.05 equivalentes de amina con 1 equivalente de aldehido en metanol . En otras modalidades, se combina 1.2 equivalentes de amina con 1 equivalente de aldehido en metanol . Después de esta etapa sigue la reducción con 0.6 a 1.4 (por ejemplo, 1.2) equivalentes de NaBH . En algunos casos, si se usa una sal de amina, se puede añadir, además, una base (por ejemplo, Et3N o diisopropiletilamina) .

Etapa 2 La etapa 2 representa la protección de la bencilamina 1 preparada anteriormente, mediante el uso de un grupo protector a base de carbamato, en condiciones de protección adecuadas conocidas por aquellos con experiencia en la materia. Se puede usar varios grupos protectores, tales como Cbz y Boc . Las condiciones de protección incluyen, pero no se limitan a, las siguientes: a) R-OCOC1, una base de amina terciaria adecuada y un solvente adecuado; en donde R es un alquilo de C1-6 opcionalmente sustituido con fenilo; b) R(C02)OR', un solvente adecuado y, opcionalmente, una cantidad catalítica de base, en donde R y R' son, cada uno e independientemente, alquilo de Ci-6 opcionalmente sustituido con fenilo; c) [RO(C=0)]20, una base adecuada y un solvente adecuado .

Los ejemplos de bases adecuadas incluyen, pero no se limitan a, Et3N, diisopropilamina y piridina. Los ejemplos de solventes adecuados incluyen solventes clorados (por ejemplo, diclorometano (DCM) , dicloroetano (DCE) , CH2C12 y cloroformo) , éteres (por ejemplo, THF, 2-MeTHF y dioxano) , hidrocarburos aromáticos (por ejemplo, tolueno, xile os) y otros solventes apróticos.

En algunas modalidades, se puede efectuar la protección por medio de hacer reaccionar la bencilamina con (Boc)20 y Et3N en DCM. En algunas modalidades, se usa 1.02 equivalentes de (Boc)20 y 1.02 equivalentes de Et3N.1.02. En otra modalidad, se puede efectuar la protección por medio de hacer reaccionar la bencilamina con (Boc)20 en 2-MeTHF. En algunas modalidades, se usa 1.05 equivalentes de (Boc)20.

Etapa 3 La etapa 3 muestra el modo en que el grupo funcional cetal de 3_ se convierte en la oxima 4 en una sola etapa. Esta conversión directa de cetal a oxima no se describe ampliamente en la literatura y se apreciará que esta etapa podría realizarse, además, en una secuencia de dos etapas a partir del aldehido después de la desprotección del cetal con el uso de metodologías conocidas por aquellos con experiencia en la materia.

Las condiciones de formación de oxima adecuadas comprenden mezclar hidroxilamina, ácido, un agente deshidratante y un solvente alcohólico. En algunas modalidades, el ácido es una cantidad catalítica. En algunas modalidades, el ácido es pTSA o HC1 , el agente deshidratante son tamices moleculares o dimetoxiacetona, y el solvente alcohólico es metanol o etanol . En algunas modalidades, se usa clorhidrato de hidroxilamina, en cuyo caso no se requiere ácido adicional. En otras modalidades, el producto deseado se aisla por vía bifásica y, opcionalmente , precipitación o cristalización. Si se usa una vía bifásica, no se necesita un agente deshidratante.

En otra modalidad, las condiciones de formación de oxima adecuadas comprenden mezclar hidroxilamina, un ácido, un solvente orgánico y agua. Los ejemplos de solventes orgánicos adecuados incluyen solventes clorados (por ejemplo, diclorometano (DCM) , dicloroetano (DCE) , CH2C12 y cloroformo) , éteres (por ejemplo, THF, 2-MeTHF y dioxano) , hidrocarburos aromáticos (por ejemplo, tolueno, xilenos) y otros solventes apróticos. En algunas modalidades, se usa 1.5 equivalentes de clorhidrato de hidroxilamina, el solvente orgánico es 2-MeTHF y el agua está regulada con Na2S04. En otra modalidad, se usa 1.2 equivalentes de clorhidrato de hidroxilamina y el solvente orgánico es THF.

En algunas modalidades, las condiciones de desprotección adecuadas comprenden añadir cantidades catalíticas de ácido para-toluensulfónico (pTSA) , acetona y agua; y, después, formar la oxima mediante el uso de condiciones conocidas para un experto en la materia. En otras modalidades, se usa una secuencia de una etapa. En algunas modalidades, la secuencia de una etapa comprende añadir NH20H.HC1 y una mezcla de THF y agua. En algunas modalidades, 1 equivalente del compuesto de fórmula 3 se combina con 1.1 equivalentes de NH20H.HC1 en una mezcla 10:1 v/v de THF/agua. Etapa 4 La etapa 4 ilustra el modo en que la oxima 4 se transforma y participa en una cicloadición [3+2] al isoxazol 5^. Esta transformación se puede realizar en un recipiente, pero requiere dos etapas distintas. La primera etapa es una oxidación del grupo funcional oxima en una nitrona o un intermedio similar con el mismo grado de oxidación, por ejemplo, una cloro oxima. Después, esta especie reactiva reacciona con un alquino en una cicloadición [3+2] para formar el aducto de isoxazol.

En algunas modalidades, las condiciones de formación de isoxazol adecuadas consisten en dos etapas; la primera etapa comprende hacer reaccionar el compuesto de fórmula 4 en condiciones de formación de clorooxima adecuadas para formar un intermediario clorooxima; la segunda etapa comprende hacer reaccionar el intermediario clorooxima con acetileno en condiciones de cicloadición adecuadas para formar un compuesto de fórmula 5.

En algunas modalidades, las condiciones de formación de clorooxima adecuadas se seleccionan de a) N-clorosuccinimida y solvente adecuado; b) peroximonosulfato de potasio, HCl y dioxano; y c) hipoclorito sódico y un solvente adecuado Los ejemplos de solventes adecuados incluyen, pero no se limitan a, solventes no próticos (por ejemplo, DCM, DCE, THF, 2-MeTHF, MTBE y dioxano) , hidrocarburos aromáticos (por ejemplo, tolueno, xilenos) y acetatos de alquilo (por ejemplo, acetato de isopropilo, acetato de etilo) .

El aislamiento del producto se puede lograr por medio de añadir un antisolvente a una solución de un compuesto de fórmula 5. Los ejemplos de solventes adecuados para aislar el intermediario clorooxima incluyen mezclas de solventes adecuados (EtOAc, IPAC) con hidrocarburos (por ejemplo, hexanos, heptano, ciclohexano) o hidrocarburos aromáticos (por ejemplo, tolueno, xilenos) . En algunas modalidades, se añade heptano a una solución de clorooxima en IPAC.

Las condiciones de cicloadición adecuadas consisten en combinar la clorooxima con acetileno, con una base adecuada y un solvente adecuado. Los solventes adecuados incluyen solventes próticos, solventes apróticos, solventes polares y solventes no polares. Los ejemplos de solvente adecuados incluyen, pero no se limitan a, acetonitrilo, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, MTBE, EtOAc, i-PrOAc, DCM, tolueno, D F y metanol . Las bases adecuadas incluyen, pero no se limitan a, piridina, DIEA, TEA, t-BuONa y K2C03. En algunas modalidades, las condiciones de cicloadición adecuadas comprenden añadir 1.0 equivalentes de clorooxima, 1.0 equivalentes de acetileno y 1.1 equivalentes de Et3N en DCM.

El aislamiento del producto se puede lograr por medio de añadir un antisolvente a una solución de un compuesto de fórmula 5. Los ejemplos de solventes adecuados para aislar la clorooxima incluyen mezclas de solventes adecuados (EtOAc, IPAC) con hidrocarburos (por ejemplo, hexanos, heptano, ciclohexano) o hidrocarburos aromáticos (por ejemplo, tolueno, xilenos) . En algunas modalidades, se añade heptano a una solución de clorooxima en IPAC.

Etapa 5 La etapa 5 representa la última etapa de la preparación de compuestos de fórmula I. Cuando el grupo R4 es bromo, el intermediario 5 se puede someter a un acoplamiento cruzado de Suzuki con ácidos o esteres borónicos, en condiciones conocidas por aquellos con experiencia en la materia, para formar compuestos en donde R4 es un grupo arilo, heteroarilo o porciones alternativas provenientes de la reacción de acoplamiento asistida por metales. Cuando el intermediario 5_ está funcionalizado adecuadamente, se puede realizar una etapa de desprotección para eliminar los grupos protectores y generar los compuestos de fórmula I .

Las reacciones de acoplamiento asistidas por metales son conocidas en la materia (ver, por ejemplo, Org. Proc . Res. Dev. 2010, 30-47). En algunas modalidades, las condiciones de acoplamiento adecuadas comprenden añadir 0.1 equivalentes de Pd [P (tBu) 3] 2 ; 1 equivalente de ácido o éster borónico, y 2 equivalentes de carbonato sódico en una relación 2:1 v/v de acetonitrilo/agua a 60-70 °C. En otras modalidades, las condiciones de acoplamiento adecuadas comprenden añadir 0.010-0.005 equivalentes de Pd(dtbpf) Cl2, 1 equivalente de ácido o éster borónico y 2 equivalentes de carbonato de potasio en una relación 7:2 v/v de tolueno y agua a 70 °C El producto final puede tratarse con un secuestrador de metales (gel de sílice, resinas funcionalizadas , carbón vegetal) (ver, por ejemplo, Org. Proc. Res. Dev. 2005, 198-205). En algunas modalidades, la solución del producto se trata con resina MP-TMT de Biotage.

El producto se puede aislar, además, por cristalización de un solvente alcohólico (por ejemplo metanol, etanol, isopropanol) . En algunas modalidades el solvente es etanol . En otras modalidades el solvente es isopropanol .

La desprotección de los grupos Boc es conocida en la materia (ver por ejemplo, Protecting Groups in Organic Synthesis, Greene y Wuts) . En algunas modalidades, las condiciones de desprotección adecuadas son ácido clorhídrico en acetona a 35-45 °C. En otras modalidades, las condiciones de desprotección adecuadas son TFA en DCM.

Etapa 6 La etapa 6 ilustra el modo en que los compuestos de fórmula I se convierten en compuestos de fórmula I-A mediante el uso de una base en condiciones adecuadas conocidas por aquellos con experiencia en la materia. En algunas modalidades, el aislamiento de la forma base libre de los compuestos de fórmula I se puede lograr por medio de añadir una base adecuada, tal como NaOH, a una solución alcohólica ácida de los compuestos de fórmula I para precipitar el producto .

Etapa 7 La etapa 7 ilustra el modo en que los compuestos de fórmula I-A se convierten a compuestos de fórmula I-B, mediante el uso de un ácido en condiciones adecuadas conocidas por aquellos con experiencia en la materia.

En algunas modalidades, las condiciones adecuadas implican añadir HC1 acuoso a una suspensión de compuestos de fórmula I-A en acetona a 35 °C y, después, de calentar a 50 °C.

ESQUEMA DE REACCIÓN B: Formación de dl-boronato El Esquema de reacción B muestra un método sintético general para preparar intermediarios dl-boronato. Se trata un 1-halo- (isopropilsulfonil) benceno adecuado con una base tal como, pero sin limitarse a, NaH, LiH DS o KHMDS, seguido de la inactivación del anión con una fuente de deuterio, tal como D20. Después, el halógeno se transforma en un derivado boronato adecuado vía, por ejemplo, acoplamiento cruzado mediado por metales y catalizado con, por ejemplo, Pd^Bus o Pdídppf) C12-DCM.

ESQUEMA DE REACCIÓN C: Formación de d6 -boronato El Esquema de reacción C muestra un método sintético general para preparar intermediarios d6-boronato. Se trata un 1-halo- (metilsulfonil) benceno adecuado con una base tal como, pero sin limitarse a, NaH, LiHMDS o KHMDS, seguido de la inactivación del anión con una fuente de deuterio, tal como D3CI . Esta reacción se repite hasta que se haya incorporado la cantidad deseada de deuterio en la molécula. Después, el halógeno se transforma en un derivado boronato adecuado vía, por ejemplo, acoplamiento cruzado mediado por metales catalizado con, por ejemplo, Pd(tBu3)2 o Pd(dppf) C12-DCM.

ESQUEMA DE REACCIÓN D: Formación de d7 -boronato El Esquema de reacción D muestra un método sintético general para preparar intermediarios d7-boronato. Se trata 4-bromobencenotiol con una base tal como, pero sin limitarse a, NaH, LiHMDS o KHMDS, seguido de la inactivación del anión con una fuente de deuterio tal como 1,1,1,2,3,3,3-heptadeuterio-2-yodo-propano. Después, el sulfuro se oxida a la correspondiente sulfona mediante el uso de, por ejemplo, mCPBA u oxona. Después, el halógeno se transforma en un derivado boronato adecuado vía, por ejemplo, acoplamiento cruzado mediado por metales catalizado con, por ejemplo, Pd(tBu3)2 o Pd(dppf) Cl2-DCM.

ESQUEMA DE REACCIÓN E: Formación de boronato con anillo arilo deuterado El Esquema de reacción E muestra un método sintético general para preparar intermediarios boronato, en donde el anillo arilo está sustituido con un deuterio. Se trata un derivado de l-yodo-4 -bromo-arilo adecuado con un tiol sustituido tal como propano-2-tiol , en condiciones de acoplamiento catalizado por metales mediante el uso de un catalizador tal como Cul . Después, el sulfuro se oxida a la correspondiente sulfona mediante el uso de, por ejemplo, mCPBA u oxona. Después, el bromuro se transforma en un derivado boronato adecuado vía, por ejemplo, acoplamiento cruzado mediado por metales catalizado con, por ejemplo, Pd(tBu3)2 o Pd(dppf) Cl2-DCM. Después, el sustituyente restante se convierte en deuterio mediante, por ejemplo, intercambio halógeno-deuterio catalizado por metales con el uso de un catalizador metálico adecuado, tal como Pd sobre C bajo atmósfera de <deuterio gaseoso. Además, el l-bromo-( isopropilsulfonil) benceno se puede tratar con una base tal como, pero sin limitarse a, NaH, LiHMDS o KHMDS , seguido de la inactivación del anión con una fuente de deuterio, tal como D20. Después, el halógeno se transforma en un derivado boronato adecuado vía, por ejemplo, acoplamiento cruzado mediado por metales y catalizado por, por ejemplo, Pd(tBu3)2 o Pd (dppf) Cl2¦ DCM. Después, el sustituyente restante se convierte en deuterio mediante, por ejemplo, intercambio halógeno-deuterio catalizado por metales con el uso de un catalizador metálico adecuado, tal como Pd sobre C bajo atmósfera de deuterio gaseoso.

ESQUEMA DE REACCIÓN F: formación de boronato con anillo arilo deuterado El Esquema de reacción F muestra otro método sintético general para preparar intermediarios boronato, en donde el anillo arilo está sustituido con un deuterio. Un 4-bromobencenotiol sustituido se trata con una base tal como, pero sin limitarse a, NaH, LiHMDS o KHMDS, seguido de la inactivación del anión con una fuente de deuterio tal como 1 , 1 , 1 , 2 , 3 , 3 , 3 -heptadeuterio-2 -yodo-propano . Después, el sulfuro se oxida a la correspondiente sulfona mediante el uso de, por ejemplo, mCPBA u oxona . Después, el halógeno se transforma en un derivado boronato adecuado vía, por ejemplo, acoplamiento cruzado mediado por metales catalizado con, por ejemplo, Pd(tBu3)2 o Pd (dppf) Cl2 · DCM . Después, el sustituyente restante se convierte en deuterio mediante, por ejemplo, intercambio halógeno-deuterio catalizado por metales con el uso de un catalizador metálico adecuado, tal como Pd sobre C bajo atmósfera de deuterio gaseoso.

ESQUEMA DE REACCIÓN G: Formación de boronato con anillo arilo deuterado Formación de boronato.

El Esquema de reacción G muestra otro método sintético general para preparar intermediarios boronato, en donde el anillo arilo está sustituido con un deuterio. Un 4-bromobencenotiol sustituido se trata con una base tal como, pero sin limitarse a, NaH, LiHMDS o KHMDS, seguido de la inactivación del anión con, por ejemplo, Mel. Después, el sulfuro se oxida a la correspondiente sulfona mediante el uso de, por ejemplo, mCPBA u oxona. La sulfona se trata con una base tal como, pero sin limitarse a, NaH, LiH DS o KHMDS, seguido de la inactivación del anión con una fuente de deuterio, tal como D3CI . Esta reacción se repite hasta que se haya incorporado la cantidad deseada de deuterio en la molécula. Después, el halógeno se transforma en un derivado boronato adecuado vía, por ejemplo, acoplamiento cruzado mediado por metales catalizado con, por ejemplo, Pd(tBu3)2 o Pd (dppf) Cl2 · DCM. Después, el sustituyente restante se convierte en deuterio mediante, por ejemplo, intercambio halógeno-deuterio catalizado por metales con el uso de un catalizador metálico adecuado, tal como Pd sobre C bajo atmósfera de deuterio gaseoso.

ESQUEMA DE REACCIÓN H: Formación de intermediarios oxima con anillo arilo deuterado squema de reacción H muestra un método sintético general para preparar intermediarios oxima, en donde el anillo arilo está sustituido con un deuterio. El grupo metilo de un derivado 4 -metilbenzoato de metilo sustituido apropiadamente se puede convertir en el dibromuro correspondiente en condiciones tales como bromación catalizada por AIBN con NBS . Después, este dibromuro se hidroliza al aldehido correspondiente, por ejemplo, mediante el uso de AgN03 en acetona/agua. La protección del aldehido como un acetal adecuado, por ejemplo, el acetal dietílico y la posterior conversión del sustituyente restante en deuterio mediante, por ejemplo, intercambio halógeno-deuterio catalizado por metales con el uso de un catalizador metálico adecuado, tal como Pd sobre C bajo atmósfera de deuterio gaseoso da el intermediario éster deuterado. La funcionalidad éster puede reducirse mediante el uso de reactivos tales como LiAlH4, NaBH4, NaBD o LiAlD4 para dar el aldehido correspondiente. Este puede hacerse reaccionar en condiciones de aminación reductora mediante el uso de una amina adecuada, tal como metilamina o d3 -metilamina mediante un agente reductor tal como NaBH o NaBD4 para dar el derivado amina correspondiente. Este puede protegerse con, por ejemplo, un grupo Boc y el acetal puede convertirse en la oxima mediante el uso de, por ejemplo, clorhidrato de hidroxilamina en THF/agua .

ESQUEMA DE REACCIÓN I : Formación de intermediarios oxima con anillo arilo deuterado El Esquema de reacción I muestra otro método sintético general para preparar intermediarios oxima, en donde el anillo arilo está sustituido con un deuterio. El grupo metilo de un derivado 4 -met ilbenzoato de metilo sustituido apropiadamente se puede convertir en el dibromuro correspondiente en condiciones tales como bromación catalizada por AIBN con NBS . Después, este dibromuro se hidroliza al aldehido correspondiente, por ejemplo, mediante el uso de AgN03 en acetona/agua. La protección del aldehido como un acetal adecuado, por ejemplo, el acetal dimetílico y la posterior conversión del sustituyente restante en deuterio mediante, por ejemplo, intercambio halógeno-deuterio catalizado por metales con el uso de un catalizador metálico adecuado, tal como Pd sobre C, bajo atmósfera de deuterio gaseoso da el intermediario éster deuterado. La funcionalidad éster se puede convertir en la amida primaria correspondiente en condiciones estándar, tales como calentamiento con una solución de amoniaco en metanol . La amida se puede reducir a la amina correspondiente mediante el uso de reactivos no limitados a LiAlH4 o LiAlD . Este puede protegerse con, por ejemplo, un grupo Boc . El NH del carbamato puede alquilarse en condiciones básicas mediante el uso de, por ejemplo, NaH, LiHMDS o KHMDS , seguido de la inactivación del anión con una fuente de deuterio tal como Mel o D3CI . El acetal se puede convertir en la oxima mediante el uso de, por ejemplo, clorhidrato de hidroxilamina en THF/agua.

ESQUEMA DE REACCIÓN J: Formación de intermediarios oxima con anillo arilo deuterado El Esquema de reacción J muestra otro método sintético general para preparar intermediarios oxima, en donde el anillo arilo está sustituido con un deuterio. El grupo metilo de un derivado 4 -met ilbenzoato de metilo sustituido apropiadamente se puede convertir en el dibromuro correspondiente en condiciones tales como bromación catalizada por AIBN con NBS . Después, este dibromuro se hidroliza al aldehido correspondiente, por ejemplo, mediante el uso de AgN03 en acetona/agua. La protección del aldehido como un acetal adecuado, por ejemplo, acetal dimetílico y la posterior conversión del sustituyente restante en deuterio mediante, por ejemplo, intercambio halógeno-deuterio catalizado por metales con el uso de un catalizador metálico adecuado, tal como Pd sobre C bajo atmósfera de deuterio gaseoso da el intermediario éster deuterado. La funcionalidad éster se puede convertir en la amida primaria correspondiente en condiciones estándar, tales como calentamiento con una solución de amoniaco en metanol . La amida se puede reducir a la amina correspondiente mediante el uso de reactivos no limitados a LiAlH4 o LiAlD4. Este puede hacerse reaccionar en condiciones de aminación reductora mediante el uso de una amina adecuada, tal como metilamina, d3 -metilamina, formaldehído o d2 - formaldehído con un agente reductor tal como NaBH4 o NaBD4 para dar el derivado amina correspondiente. Este puede protegerse con, por ejemplo, un grupo Boc . El acetal se puede convertir en la oxima mediante el uso de, por ejemplo, clorhidrato de hidroxilamina en THF/agua.

ESQUEMA DE REACCIÓN K: Formación de intermediarios oxima con anillo arilo deuterado El Esquema de reacción K muestra otro método sintético general para preparar intermediarios oxima, en donde el anillo arilo está sustituido con un deuterio. El grupo metilo de un derivado 4 -metilbenzoato de metilo sustituido apropiadamente se puede convertir en el dibromuro correspondiente en condiciones tales como bromación catalizada por AIBN con NBS. Después, este dibromuro se hidroliza al aldehido correspondiente, por ejemplo, mediante el uso de AgN03 en acetona/agua. La protección del aldehido como un acetal adecuado, por ejemplo, acetal dimetílico y la conversión posterior del sustituyente restante en deuterio mediante, por ejemplo, intercambio halógeno-deuterio catalizado por metales con el uso de un catalizador metálico adecuado, tal como Pd sobre C bajo atmósfera de deuterio gaseoso da el intermediario éster deuterado. Este puede hacerse reaccionar en condiciones de aminación reductora mediante el uso de hidróxido de amonio con un agente reductor tal como NaBH4 o NaBD4 para dar el derivado amina correspondiente. Este puede protegerse con, por ejemplo, un grupo Boc y el NH del carbamato puede alquilarse en condiciones básicas mediante el uso de, por ejemplo, NaH, LiHMDS o KHMDS, seguido de la inactivación del anión con una fuente de deuterio tal como Mel o D3CI . El éster se puede reducir al alcohol correspondiente mediante el uso de un agente reductor adecuado tal como LiBH4 o NaBH4. El alcohol se puede oxidar al aldehido mediante el uso de reactivos tales como Mn02 o periodano de Dess-Martin. El acetal se puede convertir en la oxima mediante el uso de, por ejemplo, hidroxilamina acuosa.

ESQUEMA DE REACCIÓN L: Formación de intermediarios oxima deuterados El Esquema de reacción L muestra un método sintético general para preparar intermediarios oxima deuterados. El 4 - (dietoximet il ) benzaldehído se puede hacer reaccionar en condiciones de aminación reductora mediante el uso de una amina adecuada, tal como metilamina o d3 -metilamina, con el uso de un agente reductor tal como NaBH4 o NaBD4 para dar el derivado amina correspondiente. Este puede protegerse con, por ejemplo, un grupo Boc y el acetal puede convertirse en la oxima mediante el uso de, por ejemplo, clorhidrato de hidroxilamina en THF/agua.

ESQUEMA DE REACCIÓN M: Formación de intermediarios oxima deuterados El Esquema de reacción M muestra otro método sintético general para preparar intermediarios oxima deuterados. La funcionalidad éster del 4- (dimetoximetil) benzoato de metilo se puede convertir en la amida primaria correspondiente en condiciones estándar, tales como calentamiento con una solución de amoniaco en metanol . La amida se puede reducir a la amina correspondiente mediante el uso de reactivos no limitados a LiAlH4 o L1AID4. Este puede protegerse con, por ejemplo, un grupo Boc. El NH del carbamato puede alquilarse en condiciones básicas mediante el uso de, por ejemplo, NaH, LiHMDS o KHMDS , seguido de la inactivación del anión con una fuente de deuterio tal como Mel o D3CI . El acetal se puede convertir en la oxima mediante el uso de, por ejemplo, clorhidrato de hidroxilamina en THF/agua .

ESQUEMA DE REACCIÓN N: Formación de intermediarios oxima deuterados El Esquema de reacción N muestra otro método sintético general para preparar intermediarios oxima deuterados. La f ncionalidad éster del 4- (dimetoximetil) benzoato de metilo se puede convertir en la amida primaria correspondiente en condiciones estándar, tales como calentamiento con una solución de amoniaco en metanol . La amida se puede reducir a la amina correspondiente mediante el uso de reactivos no limitados a LiAlH4 o LÍAID4. Este puede hacerse reaccionar en condiciones de aminación reductora mediante el uso de una amina adecuada, tal como metilamina, d3 -metilamina , formaldehído o d2-formaldehído por medio de un agente reductor tal como NaBH4 o NaBD4 para dar el derivado amina correspondiente. Este puede protegerse con, por ejemplo, un grupo Boc . El acetal se puede convertir en la oxima mediante el uso de, por ejemplo, clorhidrato de hidroxilamina en THF/agua.

ESQUEMA DE REACCIÓN O: Formación de intermediarios oxima deuterados El Esquema de reacción 0 muestra otro método sintético general para preparar intermediarios oxima deuterados. Se puede proteger una bencilimina 4-sustituida con, por ejemplo, un grupo Boc. El NH del carbamato puede alquilarse en condiciones básicas mediante el uso de, por ejemplo, NaH, LiHMDS o KH DS, seguido de la inactivación del anión con una fuente de deuterio tal como Mel o D3CI . El éster se puede reducir al alcohol correspondiente mediante el uso de un agente reductor adecuado tal como LiBH4 o NaBH4. El alcohol se puede oxidar al aldehido mediante el uso de reactivos tales como Mn02 o periodano de Dess-Martin. El acetal se puede convertir en la oxima mediante el uso de, por ejemplo, hidroxilamina acuosa.

ESQUEMA. DE REACCIÓN P: Formación de derivados isoxazol El Esquema de reacción P muestra un método sintético general para la preparación de derivados pirazin- isoxazol deuterados . La 3 , 5-dibromopirazin-2-amina se convierte en el alquino correspondiente protegido con sililo en condiciones estándar de Sonagashira mediante el uso de, por ejemplo, Pd(Pf3)4 y Cul como catalizadores. Después, el NH2 de la pirazina se puede proteger como, por ejemplo, el derivado di-Boc. El acoplamiento del bromuro de pirazina con un boronato, por ejemplo, los descritos anteriormente en los Esquemas de reacción 1 a 6, en condiciones de acoplamiento cruzado estándar de Suzuki seguido de la eliminación del grupo protector de sililo da el intermediario alquino deseado. Las oximas , como las descritas anteriormente en los Esquemas de reacción 7 a 14, se pueden convertir en las clorooximas correspondientes mediante el uso de, por ejemplo, NCS . Los compuestos intermediarios alquino y clorooxima pueden someterse a una cicloadición [3+2] para dar el isoxazol correspondiente en condiciones estándar, por ejemplo, por medio de añadir Et3N. Los grupos protectores Boc se pueden eliminar en condiciones ácidas tal como TFA en DCM, o HCl en MeOH/DCM, para dar los pirazin-isoxazol deuterados .

ESQUEMA DE REACCIÓN Q: Formación de derivados isoxazol deuterados squema de reacción Q muestra un método sintético general para la preparación de derivados isoxazol deuterados . El NH2 de la pirazina y el NH de la bencilamina se pueden proteger en condiciones estándar mediante el uso de anhídrido trifluoroacético . La halogenación del anillo isoxazol, por ejemplo, NIS, seguida de la eliminación del grupo protector trifluoroacetato en condiciones básicas proporciona los intermediarios halogenados deseados. Después, el halógeno se convierte en deuterio mediante, por ejemplo, intercambio halógeno-deuterio catalizado por metales con el uso de un catalizador metálico adecuado, tal como Pd sobre C bajo atmósfera de deuterio gaseoso.

Abreviaturas Se usan las siguientes abreviaturas: ATP trifosfato de adenosina Boc carbamato de terc- butilo Cbz Carboxibencilo DCM diclorómetaño DMSO sulfóxido de dimetilo Et3N trietilamina 2-MeTHF 2- metiltetrahidrofurano NMM N-metil morfolina DMAP 4- dimetilaminopiridina TMS trimetilsililo MTBE éter metil terc- 5 butilico EtOAc acetato de etilo i -PrOAc acetato de isopropilo IPAC acetato de isopropilo DMF dimeti1formamida 10 DIEA diisopropiletilamina TEA trietilamina t-BuONa terc-butóxido sódico K2C03 carbonato de potasio PG Grupo protector pTSA ácido para- 15 toluensulfónico TBAF fluoruro de tetra-n- butilamonio XHNMR resonancia magnética nuclear protónica 20 HPLC cromatografía de líquidos de alta resolución LCMS cromatografía de líquidos- espectrometría de 25 masa TLC cromatografía en capa delgada Rt tiempo de retención Esquemas de reacción y ejemplos Los compuestos de la descripción se pueden preparar a la luz de la descripción con el uso de las etapas conocidas, generalmente, para las personas con conocimiento ordinario en la materia. Estos compuestos se pueden analizar por métodos conocidos que incluyen, pero no se limitan a, LCMS (cromatografía de líquidos -espectrometría de masa) y NMR (resonancia magnética nuclear) . Los esquemas de reacción genéricos y ejemplos siguientes ilustran cómo preparar los compuestos de la presente descripción. Los ejemplos se incluyen solamente a modo de ejemplo y no se interpretarán como limitantes del alcance de la invención de ninguna forma. Los espectros de 1H-N R se registraron a 400 MHz con el uso de un instrumento DPX 400 de Bruker. Las muestras de espectrometría de masa se analizaron en un espectrómetro de masa MicroMass Quattro Micro operado en modo MS único con ionización por electrorociado .

Ejemplo 1. Síntesis de 2- (4- (5-amino-6- (3- (4- ( (tetrahidro-2H- piran-4-ilamino) metil) fenil) isoxazol-5-il) pirazin-2 - il) piridin-2-il) -2 -metilpropanonitrilo (compuesto 1-1) Método 1.

En una solución de tetrahidropiran-4-amina (100 g, 988.7 mmol) en MeOH (3.922 1) se añadió 4- (dietoximetil ) benzaldehído (196.1 g, 941.6 mmol) durante 2 min a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 80 min, hasta completar la formación de aldimina (tal como se observa por NMR) .

Se añadió cuidadosamente NaBH4 (44.49 g, 1.176 mol) durante 45 min, se mantuvo la temperatura entre 24 °C y 27 °C por medio de un baño de hielo. Después de 75 min a temperatura ambiente, la reacción se había completado. La mezcla de reacción se enfrió con NaOH 1 M (1 1). La mezcla de reacción se dividió entre salmuera (2.5 1) y TBDME (4 1 después 2 x 1 1 ) . La fase orgánica se lavó con salmuera (500 mi) y se concentró al vacío. La mezcla cruda se redisolvió en DCM (2 1). La fase acuosa se separó, la fase orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y concentró al vacío para producir el compuesto del título como un aceite amarillo (252.99 g, 91 %) .

Método 2.

Una solución de N- [ [4- (dietoximetil ) feniljmetil] tetrahidropiran-4 -amina (252.99 g, 862.3 mmol) y anhídrido de BOC (191.9 g, 202.0 mi, 879.5 mmol) en DCM (2.530 1) se enfrió hasta 3.3 °C. Se añadió Et3N (89.00 g, 122.6 mi, 879.5 mmol) durante 4 min mientras se mantuvo la temperatura interna menor que 5 °C. El baño se eliminó 45 min después del final de la adición. Y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente de la noche a la mañana. La mezcla de reacción se lavó en secuencia con ácido cítrico 0.5 M (1 1), solución de NaHC03 saturada (1 1) y salmuera (1 1) . La fase orgánica se secó (MgS04), se filtró y concentró al vacío para producir un aceite incoloro (372.38 g, 110 %) . 1H NMR (400.0 MHz , DMSO) ; MS (ES+) Método 3.

Se disolvió N- [ [4 - (dietoximetil) fenil] met il] -N-tetrahidropiran-4 - il -carbamato de tere-butilo (372.38 g, 946.3 mmol) en THF (5 1) y agua (500 mi) . Se añadió clorhidrato de hidroxilamina (72.34 g, 1.041 mol) en una porción y la mezcla de reacción se agitó de la noche a la mañana a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se dividió entre DCM (5 1) y agua. El extracto orgánico combinado se lavó con agua (1 1 x 2) . La fase orgánica se concentró al vacío hasta obtener un volumen de aproximadamente 2 1. La capa orgánica se secó sobre MgS04 , se filtró y concentró al vacío para producir un aceite incoloro pegajoso que se cristalizó al asentarse bajo vacío. (334.42 g, 106 %) . 1H NMR (400.0 MHz , CDC13); MS (ES+) Método 4.

Se disolvió N-[[4-[(E)-hidroxiiminometil] fenil]metil] -N- tetrahidropiran-4 - il -carbamato de tere-butilo (334.13 g, 999.2 mmol) en acetato de isopropilo (3.0 1) (la mezcla se calentó hasta 40 °C para que los sólidos entraran en la solución) . Se añadió N-clorosuccinimida (140.1 g, 1.049 mol) en porciones durante 5 min y la mezcla de reacción se calentó hasta 55 °C (temperatura del bloque externo) . Después de 45 min a 55 °C la reacción se había completado. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente. Los sólidos se eliminaron por filtración y se enjuagaron con acetato de isopropilo (1 1). El extracto orgánico combinado se lavó en secuencia con agua (1.5 1, 5 veces) y salmuera, se secó sobre MgS04 , se filtró y concentró al vacío para producir un aceite amarillo viscoso (355.9 g 96 %) . 1H NMR (400.0 MHz , CDC13) ; MS (ES+) Método 5.

Se añadió Et3N (76.97 g, 106.0 mi, 760.6 mmol) durante 20 minutos en una solución de N- ( 5 -bromo- 3 -etinil-pirazin-2-il) -N-terc-butoxicarbonil-carbamato de tere-butilo (233.0 g, 585.1 mmol) y N- [ [4 - [ ( Z ) -C-cloro-N-hidroxi-carbonimidoil] fenil] metil] -N-tetrahidropiran-4 -il-carbamato de tere-butilo (269.8 g, 731.4 mmol) en DCM (2.330 1) a temperatura ambiente. Durante la adición de trietilamina, el exotermo se estabilizó por medio de enfriamiento de la mezcla en un baño de hielo, después, la mezcla de reacción se calentó gradualmente hasta la temperatura ambiente y la mezcla se agitó a temperatura ambiente de la noche a la mañana. La mezcla de reacción se lavó de manera secuencial con agua (1.5 1, 3 veces) y salmuera. El extracto orgánico se secó sobre gS04 , se filtró y se concentró parcialmente al vacío. Se añadió heptano (1.5 1) y la concentración continuó hasta obtener 547.63 g de un sólido amarillo-naranja.

Se sumergió 542.12 g en ~2 vol (1 1) de acetato de etilo. La mezcla se calentó hasta 74-75 °C internamente y se agitó hasta que todo el sólido ingresó en la solución. Con un embudo de adición se añadió lentamente heptano (3.2 L) a la solución caliente y la temperatura interna se mantuvo entre 71 °C y 72 °C. Al término de la adición, la solución de color marrón oscuro se sembró con una parte del producto recristalizado y la mezcla de reacción se dejó enfriar sin agitación hasta temperatura ambiente para cristalizar 0/N. El sólido se separó por filtración, se lavó con heptano (2 x 250 mi) y, después, se secó al vacío para dar 307.38 g del producto base (72 %) . 1H NMR (400.0 MHz, CDC13); MS (ES+) Método 6.

Se suspendió N- [ [4 - [5- [3 - [bis (terc-butoxicarboni 1 ) amino] - 6 -bromo-piraz in- 2 - il] isoxazol-3-il] fenil ] metil ] -N- tetrahidropiran- 4 - il - carbamato de tere-butilo (303 g, 414.7 mmol) y 2 -metil -2 - [ - (4 , 4 , 5 , 5 -tetrametil - 1,3, 2 -dioxaborolan-2 - il ) -2-piridil] propanonitrilo (112.9 g, 414.7 mmol) en MeCN (2 1) y H20 (1 1). Se añadió Na2C03 (414.7 mi de 2 M, 829.4 mmol) seguido de Pd[P(tBu)3]2 (21.19 g, 41.47 mmol) y la mezcla de reacción se desgasificó con N2 por 1 h. La mezcla de reacción se colocó en una atmósfera de nitrógeno y se calentó a 70 °C (temperatura del bloque) por 4 h (temperatura interna entre 60 °C y 61 °C) . La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente de la noche a la mañana. La mezcla de reacción se dividió entre EtOAc (2 1) y agua (500 mi) . El extracto orgánico combinado se lavó con salmuera (500 mi), se filtró a través de una almohadilla corta de celite y se concentró a presión reducida hasta un volumen de aproximadamente 3 1. La solución se secó sobre MgS04 , se filtró y se concentró parcialmente al vacío. Se añadió iPrOH (1.5 1) y el solvente se eliminó al vacío para producir el producto deseado como una espuma marrón clara (405 g) .

Se sumergió 400 g en ~5 vol (2 1) de iPrOH y la mezcla se calentó hasta 80 °C hasta que todo el sólido ingresó en la solución. La solución marrón oscuro se sembró y la mezcla de reacción se dejó que se enfriara lentamente hasta la temperatura ambiente de la noche a la mañana. El sólido se eliminó por filtración y se enjuagó con iPrOH (2 x 250 mi) y éter de petróleo (2x200 mi) . El sólido resultante se suspendió en éter de petróleo (2.5 1), se eliminó por filtración y se secó al vacío. El sólido resultante se disolvió en DCM (2.5 1) y se agitó lentamente por 1 h con 30 g de SPM32 ( 3 -mercaptopropil -etil sulfuro de sílice) . El sílice se filtró a través de una almohadilla de florisil y se enjuagó con DCM . El proceso se repitió dos veces, después, la solución de DCM se concentró al vacío para producir 238.02 g de un sólido amarillo claro.

Método 7.

N- [ [4- [5- [3- [bis (terc-butoxicarbonil) amino] -6- [2- (1-ciano-l-metil-etil) -4 -piridil] pirazin-2 -il] isoxazol-3 -il] fenil]metil] -N-tetrahidropiran-4 - il -carbamato de tere-butilo (238 g, 299.0 mmol) se disolvió en DCM (2.380 1). Se añadió TFA (500 mi, 6.490 mol) a temperatura ambiente durante 3 min. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 3.5 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, después, se formó un azeótropo con heptano (2x300 mi) . Después, el aceite se suspendió en EtOH (2.5 1) y se filtró. El sólido se disolvió en una mezcla de etanol (1.190 1) y agua (1.190 1) . Se añadió carbonato de potasio (124.0 g, 897.0 mmol) en agua (357.0 mi) a la solución y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente.

El sólido se eliminó por filtración, se lavó con agua (2.5 1) y se secó al vacío a 50 °C para producir 108.82 g del compuesto base (compuesto 1-1) como un polvo amarillo. (73 %) Se agitó una mezcla de terc-butil N-[[4-[5-[3-[bis (terc-butoxicarbonil) amino] - 6 -bromo-piraz in- 2 - il] isoxazol -3 - il] fenil]metil] -N- tetrahidropiran- 4 - il-carbamato (110.0 g, 151 mmol), K2C03 (41.6 g, 301 mmol) y 2-metil-2- [4- (4,4,5, 5 - tetramet i 1 - 1,3,2 -dioxaborolan- 2 -il) -2-piridil] propanonitrilo (41.0 g, 151 mmol) en tolueno (770 mi) y agua (220 mi) y se desgasificó con N2 durante 30 min a 20 °C. Se añadió el catalizador Pd(dtbpf)Cl2 (1.96 g, 3.01 mmol) y la mezcla se desgasificó durante otros 10 min. La mezcla se calentó a 70 °C hasta que la reacción se completó. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua (220 mi) y se filtró a través de un lecho de Celite. La fase orgánica se concentró para eliminar la mayor parte del solvente. El concentrado se diluyó con i-PrOH (550 mi) . La suspensión obtenida se agitó durante al menos 1 h y, después, el sólido se colectó por filtración para proporcionar un polvo de color canela. El sólido se disolvió en tolueno (990 mi) y se agitó con resina MP-TMT de Biotage (18.6 g) durante 2 h a temperatura ambiente. La resina se eliminó por filtración. El filtrado se concentró, después se diluyó con í-PrOH (550 mi) y, después, se volvió a concentrar. Se añadió i-PrOH (550 mi) y se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. La suspensión se enfrió a 5 °C, el sólido se colectó por filtración y, después, se secó para proporcionar terc-butil N- [ [4- [5- [3- [bis (terc-butoxicarbonil) amino] -6- [2- (1-ciano-l-metil-etil) -4-piridil]pirazin-2-il] isoxazol-3-il] fenil]metil] -N-tetrahidropiran-4 - il - carbamato (compuesto 1-1) (81.9 g; rendimiento 68 %, pureza por HPLC 98.7 % área) como un polvo de color crema.

Cambio de forma a compuesto I-1»HC1*1.5 H20 En un matraz equipado con agitación mecánica se agitó una suspensión de terc-butil N- [ [4- [5- [3-[bi s ( tere -buto i carboni 1 ) amino] - 6 - [ 2 - (1-ci ano - 1 -metil-etil) -4-piridil] pirazin-2-il] i soxazol - 3 -il] f eni 1 ] met il ] -N- tet rahidrop i ran- 4 - i 1 - carbamato (compuesto 1-1) (36.0 g, 72.6 mmol) en CH3CN (720 mi) a temperatura ambiente (20 °C) . Se añadió una solución acuosa de HCl 1 (72.6 mi; 72.6 mmol) . La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 20 h. El sólido se colectó por filtración. La torta del filtro se lavó con CH3CN (3 x 50 mi) y, después, se secó al vacío con humedad elevada durante 2 h para dar el compuesto I-1»HC1»1.5 H20 (30.6 g ; rendimiento 74 %) , pureza por HPLC 98.8 % área) como un polvo amarillo. 1H NMR (400 MHz , DMSO) d 9.63 (d, J = 4.7 Hz, 2H) , 9.05 (s, 1H) , 8.69 (d, J = 5.2 Hz , 1H), 8.21 (s, 1H) , 8.16 - 8.03 (m, 3H) , 7.84 (t, J" = 4.1 Hz, 3H) , 7.34 (br s, 2H) , 4.40 - 4.18 (m, 2H) , 3.94 (dd, J = 11.2, 3.9 Hz, 2H) , 3.32 (t, J = 11.2 Hz, 3H) , 2.17 - 2.00 (m, 2H) , 1.81 (s, 6H) , 1.75 (dd, J" = 12.1, 4.3 Hz, 2H) .

Ejemplo 2: síntesis de 3-[3-[4- [dideuterio (metilamino) metil] fenil] isoxazol-5-il] -5- (4-isopropilsulfonilfenil) pirazin-2 -amina (compuesto II-l) Etapa 1. 5-bromo-3- ( (trimetilsilil) etinil) pirazin-2 -amina ii Se añadió (trimetilsilil) acetileno (1.845 g, 2.655 mi, 18.78 mmol) gota a gota a una solución de 3,5- dibromopirazin-2-amina (compuesto i) (5 g, 19.77 mmol) en DMF (25 mi). Después, se añadió trietilamina (10.00 g, 13.77 mi, 98.85 mmol), yoduro de cobre (I) (451.7 mg, 2.372 mmol) y Pd(Pf3)4 (1.142 g, 0.9885 mmol), y la solución obtenida se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y agua, y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo adicionalmente con EtOAc, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron (MgS04) y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna y se eluyó con EtOAc/éter de petróleo al 15 % para dar el producto como un sólido amarillo (3.99 g, rendimiento 75 %) . 1H NMR (400.0 MHz, D SO) d 0.30 (9H, s) , 8.06 (IH, s); MS (ES+) 271.82.

Etapa 2: terc-butil N-terc-butoxicarbonil-N- [5-bromo-3 -( (trimetilsilil) etinil) pirazin-2-il] carbamato iii Se disolvió 5-bromo-3- (2-trimetilsililetinil) pirazin-2-amina (2.85 g, 10.55 mmol) en DCM (89.06 mi) y se trató con Boc anhídrido (6.908 g, 7.272 mi, 31.65 mmol) seguido de DMAP (128.9 mg, 1.055 mmol).

La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 2 horas. Después, la mezcla se diluyó con DCM y NaHC03, y se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo, adicionalmente, con DCM, se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna y se eluyó con diclorometano para dar el producto deseado como un aceite incoloro (4.95 g, rendimiento 99 %) . 1H NMR (400.0 MHz, DMSO) d 0.27 (9H, s) , 1.42 (18H, s) , 8.50 (1H, s) ; MS (ES+) 472.09.

Etapa 3. terc-butil N- (3-etinil-5- (4- ( isopropilsulfonil) fenil) pirazin-2-il) N- ercbutoxicarbonil-carbamato iv Se disolvió N- [5-bromo-3- (2-trimetilsililetinil) pirazin-2-il] -N-tertbutoxicarbonilcarbamato (3 g, 6.377 mmol) y ácido (4-isopropilsulfonilfenil) borónico (1.491 g, 6.536 mmol) en MeCN/agua (60/12 mi). Se añadió K3P04 (2.706 g, 12.75 mmol) y la mezcla de reacción se desgasificó con una corriente de nitrógeno (5 ciclos). Se añadió Pd[P(tBu)3]2 (162.9 mg, 0.3188 mmol) y la mezcla obtenida se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se vertió rápidamente en una mezcla de acetato de etilo (500 mi) , agua (90 mi) y metabisulfito sódico acuoso al 1 % a 4 °C, se agitó y se separaron las capas. La fracción orgánica se secó sobre gS04( se filtró y el filtrado se trató con etil sulfuro de 3 -mercaptopropilo sobre sílice (0.8 mmol/g, 1 g) , se preabsorbió sobre gel de sílice y, después, se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluida con EtOAc/éter de petróleo al 30-40 %. Los solventes se concentraron al vacío para obtener el producto como un aceite viscoso de color amarillo que se trituró con éter de petróleo para dar el producto como cristales de color beige (1.95 g, rendimiento 61 %) : 1H NMR (400 MHz , DMSO) d 1.20 (m, 6H) , 1.39 (s, 18H) , 3.50 (ra, 1H) , 5.01 (s, 1H) , 8.03 (m, 2H) , 8.46 (m, 2H) y 9.37 (s, IH) .

Etapa 4. 4- (dimetoximetil) benzamida i Se calentó una mezcla en un tubo sellado de 4-(dimetoximetil) benzoato de metilo (3.8 g, 18.08 mmol) y NH3 7 M en MeOH (30 mi de 7 M, 210.0 mmol) a 110 °C durante 22 horas. Se añadió una porción adicional de NH3 7 M en MeOH (20 mi de 7 M, 140.0 mmol) y la reacción se calentó a 135 °C durante 23 horas. La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y el solvente se eliminó al vacío. El residuo se volvió a someter a las condiciones de reacción (NH3 7 M en MeOH (30 mi de 7 M, 210.0 mmol) a 115 °C) durante otras 16 horas. El solvente se eliminó al vacío y el residuo se trituró con Et20. El precipitado obtenido se aisló por filtración para dar el compuesto base como un sólido blanco (590 mg, rendimiento 17 %) . El filtrado se purificó por cromatografía en columna (ISCO Companion, columna de 40 g, eluida con EtOAc/éter de petróleo de 0 a 100 % y MeOH/EtOAc al 10 % cargado en EtOAc/MeOH) para dar una porción adicional del producto base como un sólido blanco (225 mg, rendimiento 6 %) . Total aislado (815 mg, rendimiento 23 %) ; 1H NMR (400 MHz, DMSO) d 3.26 (s, 6H) , 5.44 (s, 1H) , 7.37 (s, 1H) , 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.84 - 7.91 (m, 2H) y 7.98 (s, 1H) ppm; MS (ES+) 196.0.

Etapa 5: dideuterio- [4- (dimetoximetil) fenil] metanamina ii Se añadió LiDH4 (12.52 mi de 1 M, 12.52 mmol) gota a gota a una solución agitada de 4 - (dimetoximetil ) benzamida (815 mg, 4.175 mmol) en THF (20 mi) a 0 °C bajo atmósfera de nitrógeno. La reacción se calentó a reflujo durante 16 horas y, después, se enfrió a temperatura ambiente. La reacción se inactivo mediante la adición secuencial de D20 (1 mi) , NaOH al 15 % en D20 (1 mi) y D20 (4 mi) . El sólido obtenido se separó por filtración y se lavó con EtOAc . El filtrado se concentró al vacío y el residuo se secó por destilación azeotrópica con tolueno (x 3) para dar el compuesto base como un aceite amarillo (819 mg) que se usó sin purificación adicional; 1H NMR (400 MHz, DMSO) d 3.23 (s, 6H) , 5.36 (s, 1H) y 7.30 - 7.35 (m, 4H) ppm; S (ES+) 167.0.

Etapa 6. terc-butil N- [dideuterio- [4-(dimetoximetil) fenil] metil] carbamato viii Se añadió Et3N (633.7 mg, 872.9 µ? , 6.262 mmol) a una suspensión agitada de dideuterio- [4-(dimetoximetil) fenil] metanamina (765 mg, 4.175 mmol) en THF (15 mi) a 0 °C. La reacción se dejó en agitación a esta temperatura durante 30 minutos y, después, se añadió Boc20 (956.8 mg, 1.007 mi, 4.384 mmol) en porciones. La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. El solvente se eliminó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (ISCO Companion, columna de 120 g, eluida con EtOAc/éter de petróleo de 0 a 50 % cargado en DCM) para dar el producto base como un aceite incoloro (1.04 g, rendimiento 88 %) ; 1H NMR (400 MHz, DMSO) d 1.40 (s, 9H) , 3.23 (s, 6H) , 5.36 (s, 1H) , 7.24 (d, J = 8.2 Hz, 2H) , 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 2H) y 7.38 (s, 1H) ppm.

Etapa 7. terc-butil N- [dideuterio- [4-(dimetoximetil) fenil] metil] -N-metil-carbamato Se añadió LiHMDS (1M en THF) (1.377 mi de 1 M, 1.377 mmol) gota a gota a una solución agitada de terc-butil N- [dideuterio- [4- (dimetoximetil) fenil] metil] carbamato (300 mg, 1.059 mmol) en THF (5 mi) a -78 °C. La solución se agitó a esta temperatura durante 10 minutos, después se añadió yodometano (225.4 mg, 98.86 µ?, 1.588 mmol) gota a gota y la mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción se enfrió nuevamente a -78 °C y se añadió LiHMDS (1 M en THF) (635.4 µ? de 1 M, 0.6354 mmol) . Después de 10 minutos se añadió yodometano (105.2 mg, 46.14 µ?, 0.7413 mmol) y la reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante 6 horas. La mezcla se diluyó con EtOAc y la capa orgánica se lavó con NaHC03 (x 2) , salmuera (x 1) , se secó (MgS0 ) , se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (ISCO Companion, columna de 24 g, eluida con EtOAc/éter de petróleo de 0 a 30 % cargado en DCM) para dar el producto base como un aceite incoloro (200 mg, rendimiento 63 %) ; 1H MR (400 MHz, DMSO) d 1.41 (d, J = 27.7 Hz , 9H) , 2.76 (s, 3H) , 3.24 (s, 6H) , 5.37 (s, 1H) , 7.23 (d, J = 7.9 Hz, 2H) y 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 2H) ppm.

Etapa 8. fcerc-butil N- [dideuterio- [4 - [hidroxiiminometil] fenil] metil] -N- (metil) carbamato x Se añadió clorhidrato de hidroxilamina (51.15 mg, 0.7361 mmol) a una solución agitada de terc-butil N- [dideuterio- [4- (dimetoximetil) fenil] metil] -N-metil -carbamato (199 mg, 0.6692 mmol) en THF (10 mi) /agua (1.000 mi) y la reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 4 horas. La reacción se particionó entre DCM y salmuera, y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con DCM (x 2) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (1 x) , se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto base como un sólido blanco (180 mg, rendimiento 100 %; 1H NMR (400 MHz , DMSO) d 1.41 (d, J = 24.6 Hz, 9H) 2.76 (s, 3H) , 7.25 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 8.13 (s, 1H) y 11.20 (s, 1H) ppm; MS (ES+) 211.0 (M-Boc) .

Etapa 9. terc-butil N- [ [4- [cloro-N-hidroxi -carbonimidoil] fenil] -dideuterio-metil] -iV-metil -carbamato xi Se trató terc-butil N- [dideuterio- [4- [hidroxiiminometil] fenil] metil] -N- (metil ) carbamato (178 mg, 0.6683 mmol) en DMF con NCS (89.24 mg, 0.6683 mmol) y la reacción se calentó a 65 °C durante 1 hora. La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se diluyó con agua. La mezcla se extrajo con EtOAc (x 2) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (x 4) , se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto base como un sólido blanco (188 mg, rendimiento 94 %) ; 1H NMR (400 MHz , DMSO) d 1.42 (d, J = 24.7 Hz , 9H) , 2.78 (s, 3H) , 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 2H) , 7.78 (d, J = 8.2 Hz, 2H) y 12.36 (s, 1H) ppm.

Etapa 10. terc-butil N- [ [4 - [5 - [3 - [bis (terc-butoxicarbonil) amino] -6 - (4 -isopropilsulfonil enil) irazin-2 - il] isoxazol-3-il] fenil] -dideuterio-metil] -iV-metil-carbamato xii Se añadió gota a gota Et3N (36.31 mg, 50.01 µ?, 0.3588 mmol) a una solución agitada de terc-butil N-terc-butoxicarbonil -N- [3-etinil-5- (4-isopropilsulfonilfenil) irazin-2 - il] carbamato (150 mg, 0.2990 mmol) y terc-butil N- [ [4- [cloro-W-hidroxi-carbonimidoil] fenil] -dideuterio-metil] -N-metil-carbamato (89.93 mg, 0.2990 mmol) en THF anhidro (3 mi) y la mezcla de reacción se calentó a 65 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc/salmuera . Se añadió agua hasta que la capa acuosa se volvió transparente y se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (x 1) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (x 1) , se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (ISCO Companion, columna de 40 g eluida con EtOAc/éter de petróleo de 0 a 30 % cargado en DCM) para dar el producto base como un sólido blanco (134 mg, rendimiento 59 %) ; 1H NMR (400 MHz, D SO) d 1.22 (d, J = 6.8 Hz, 6H) 1.32 (s, 18H) , 1.43 (d, J = 23.1 Hz , 9H) , 2.82 (s, 3H) , 3.56 (pent, 1H) , 7.43 (d, J = 8.3 Hz, 3H) , 8.02 - 8.03 (m 3H) , 8.06 - 8.11 (m, 2H) , 8.62 - 8.67 (m, 2H) y 9.51 (s, 1H) ppm; MS (ES+) 666.2 (M-Boc) .

Etapa 11. 3- [3- [4- [dideuterio (metilamino) metil] fenil] isoxazol -5-il] -5- (4 -isopropilsulfonilfenil) pirazin-2-amina (compuesto II-l) II-l Se añadió HCl 3 M en MeOH (1.167 mi de 3 M, 3.500 mmol) a una solución agitada de fcerc-butil N- [ [4- [5- [3- [bis (terc-butoxicarbonil ) amino] -6- (4-isopropilsulfonilfenil) pirazin-2-il] isoxazol-3-il] fenil] -dideuterio-metil] -iV-metil-carbamato (134 mg, 0.1750 mmol) en DCM (5 mi) y la reacción se calentó a reflujo durante 16 horas . La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y el precipitado obtenido se aisló por filtración y se secó al vacío a 40 °C para dar la sal di -HCl del compuesto base como un sólido amarillo (58.8 mg, rendimiento 62 %) ; 1H NMR (400 MHz , DMSO) d 1.20 (d, J = 6.8 Hz, 6H) , 2.60 (t, J = 5.4 Hz, 3H) , 3.48 (hept, J = 6.8 Hz , 1H) , 7.22 (br s, 2H) , 7.69 - 7.75 (m, 2H) , 7.85 (s, 1H) , 7.92 - 7.99 (m, 2H) , 8.08 - 8.15 (m, 2H) 8.37 - 8.42 (m, 2H) , 8.97 (s, 1H) y 9.10 (d, J = 5.8 Hz, 2H) ppm; MS (ES+) 466.2.

Ejemplo 3: síntesis de 3- [3- [4- [dideuterio-(trideuteriometilamino) metil] fenil] isoxazol-5-il] -5- (4-isopropilsulfonilfenil) pirazin-2-amina (compuesto II-2) Etapa 1. terc-butil N- [dideuterio- [4- (dimetoximetil) fenil] metil] -I- (trideuteriometil) carbamato iii Se añadió gota a gota LiHMDS (1 en THF) (1.181 mi de 1 M, 1.181 mmol) a una solución agitada de terc-butil N- [dideuterio- [4- (dimetoximetil) fenil]metil] carbamato (300 mg, 1.059 mmol) en THF (5 mi) a -78 °C. La solución se agitó a esta temperatura durante 30 minutos, después se añadió gota a gota trideuterio (yodo) metano (198.0 mg, 84.98 µ?, 1.366 mmol) y la mezcla se dejó calentar hasta la temperatura ambiente durante 21 horas. La reacción se enfrió nuevamente a -78 °C y se añadió una porción adicional de LiHMDS (1 M en THF) (635.4 µ? de 1 M, 0.6354 mmol). Después de 15 minutos se añadió más trideuterio (yodo) metano (76.75 mg, 32.94 µ? 0.5295 mmol) y la reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente durante 5 horas. La mezcla se diluyó con EtOAc y la capa orgánica se lavó con NaHC03 (x 2) , salmuera (x 1) , se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (ISCO Companion, columna de 24 g, eluida con EtOAc/éter de petróleo de 0 a 30 % cargado en DCM) para dar el producto base como un aceite incoloro (213 mg, rendimiento 67 %) ; 1H NMR (400 MHz, DMSO) d 1.36 - 1.42 (m, 9H) 3.22 (s, 6H) , 5.35 (s, 1H) , 7.21 (d, J = 7.8 Hz, 2H) y 7.35 (d, J = 7.7 Hz, 2H) ppm.

Etapa 2. terc-butil N- [dideuterio- [4- [hidroxiiminometil] fenil] metil] -iV- (trideuteriometil) carbamato xiv Se añadió clorhidrato de hidroxilamina (53.95 mg, 0.7763 mmol) a una solución agitada de terc-butil N- [dideuterio-[4- (dimetoximetil) fenil] metil] -N- (trideuteriometil) carbamato (212 mg, 0.7057 mmol) en THF (10 mi) /agua (1.000 mi) y la reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 22 horas. La reacción se particionó entre DCM y salmuera, y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con DCM (x 2) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (x 1) , se secaron (MgS0) , se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto base como un sólido blanco (190 mg, rendimiento 100 %) ; 1H NMR (400 MHz, DMSO) d 1.41 (d, J = 24.2 Hz, 9H) ) , 7.25 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 8.13 (s, 1H) y 11.20 (s, 1H) ppm.

Etapa 3. terc-butil N- [ [4- [cloro-N-hidroxi-carbonimidoil] fenil] -dideuterio-metil] -N-(trideuteriometil) carbamato Se trató terc-butil N- [dideuterio- [4- [hidroxiiminometil] fenil] metil] -N- (trideuteriometil) carbamato (190.0 mg, 0.7054 mmol) en DMF (2 mi) con NCS (94.19 mg, 0.7054 mmol) y la reacción se calentó a 65 °C durante 1 hora. La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se diluyó con agua. La mezcla se extrajo con EtOAc (x 2) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (x 4) , se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto base como un sólido blanco (198 mg, rendimiento 93 %) ; 1H NMR (400 MHz, DMSO) d 1.41 (d, J = 26.0 Hz, 9H) , 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 7.78 (d, J = 8.2 Hz, 2H) y 12.36 (s, 1H) ppm.

Etapa 4. terc-butil N- [ [4- [5- [3- [bis (terc-butoxicarbonil) amino] -6- (4 - isopropilsulfonilfenil ) pirazin-2-il] isoxazol-3-il] fenil] -dideuterio-metil] -N-(trideuteriometil) carbamato xvi Se añadió gota a gota Et3N (36.31 mg, 50.01 µ?, 0.3588 mmol) a una solución agitada de terc-butil N-terc-butoxicarbonil-N- [3-etinil-5- (4-isopropilsulfonilfenil) irazin-2 -il] carbamato (150 mg, 0.2990 mmol) y terc-butil N- [ [4- [cloro-W-hidroxi-carbonimidoil] fenil] -dideuterio-metil] -N-(trideuteriometil) carbamato (90.84 mg, 0.2990 mmol) en THF anhidro (3 mi) y la mezcla de reacción se calentó a 65 °C durante 3.5 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc/salmuera . Se añadió agua hasta que la capa acuosa se volvió transparente y se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (x 1) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (x 1) , se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (ISCO Companion, columna de 40 g eluida con EtOAc/éter de petróleo de 0 a 35 %, cargado en DCM) para dar el producto base como un sólido blanco (158 mg, rendimiento 69 %) ; 1H MR (400 MHz, DMSO) d 1.22 (d, J = 6.8 Hz, 6H) ) , 1.44 (d, J = 22.0 Hz, 9H) , 3.56 (dt, J = 13.5, 6.7 Hz, 2H) , 7.43 (d, J = 8.2 Hz, 3H) , 8.02 (d, J = 6.9 Hz , 2H) , 8.08 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 8.65 (d, J = 8.8 Hz, 2H) y 9.51 (s, 1H) ppm; MS (ES+) 669.3 (M-Boc) .

Etapa 5: 3 - [3 - [4 - [dideuterio- (trideuteriometilamino) metil] fenil] isoxazol-5-il] -5- (4-isopropilsulfonil enil) pirazin-2-amina (compuesto II-2) II-2 Se añadió HCl 3 M en MeOH (1.361 mi de 3 M, 4.084 mmol) a una solución agitada de terc-butil N- [ [4 - [5- [3 -[bis (terc-butoxicarbonil ) amino] -6- (4- isopropilsulfonilfenil)pirazin-2-il] isoxazol-3-il] fenil] -dideuterio-metil] -N- (trideuteriometil) carbamato (157 mg, 0.2042 mmol) en DCM (5 mi) y la reacción se calentó a reflujo durante 16 horas. La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y el precipitado obtenido se aisló por filtración y se secó al vacío a 40 °C para dar la sal di-HCl del compuesto base como un sólido amarillo (72.5 mg, rendimiento 66 %) ,- 1H NMR (400 MHz, DMSO) d 1.20 (d, J = 6.8 Hz, 6H) , 3.48 (dq, J = 13.6, 6.7 Hz, 1H) , 7.21 (s, 2H) , 7.68 - 7.78 (m, 2H) , 7.85 (s, 1H) , 7.91 - 7.99 (m, 2H) , 8.08 - 8.13 (m, 2H) , 8.36 -8.42 (m, 2H) , 8.96 (s, 1H) y 9.14 (s, 2H) ppm; MS (ES+) 469.1.

Ejemplo 4: síntesis de 5- (4-isopropilsulfonilfenil) -3- [3- [4- [ (trideuteriometilamino) metil] fenil] isoxazol-5-il] pirazin-2-amina (compuesto II -3) Etapa 1. 4- [( terc-butoxicarbonilamino) metil] benzoato de metilo viii Se añadió Et3N (1.882 g, 2.592 mi, 18.60 mmol) a una suspensión agitada de metil 4 - (aminometil) benzoato (ácido clorhídrico (1)) (1.5 g, 7.439 mmol) en THF (20 mi) a 0 °C. La reacción se dejó en agitación a esta temperatura durante 30 minutos y, después, se añadió Boc20 (1.705 g, 1.795 mi, 7.811 mmol) en porciones. La reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. La mezcla se diluyó con EtOAc . La capa orgánica se lavó con HC1 acuoso 1 M (x 2) , NaHC03 acuoso saturado (x 2) y salmuera (x 1) . La capa orgánica se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío para dar el compuesto base como un sólido blanco que se usó sin purificación adicional (1.93 g, rendimiento 98 %) ; 1H NMR (400 MHz, DMSO) d 1.40 (s, 9H) , 3.85 (s, 3H) , 4.20 (d, J = 6.1 Hz, 2H) , 7.38 (d, J = 8.2 Hz, 2H) , 7.49 (t, J = 6.1 Hz, 1H) y 7.92 (d, J = 8.2 Hz , 2H) ppm; MS (ES+ ) 251.1 (M- e) .

Etapa 2. 4-[[terc-butoxicarbonil (trideuteriometil) amino] metil] benzoato de metilo xix Se añadió gota a gota LiHMDS ( 1 M en THF) (8.112 mi de 1 M, 8.112 mmol) a una solución agitada de 4-[(terc-butoxicarbonilamino) metil] benzoato de metilo (1.93 g, 7.275 mmol) en THF (10 mi) a -78 °C. La solución se agitó a esta temperatura durante 30 minutos, después se añadió gota a gota trideuterio (yodo) metano (1.360 g, 9.385 mmol) y la mezcla se dejó calentar hasta la temperatura ambiente durante 3 horas. La reacción se enfrió nuevamente a -78 °C y se añadió una porción adicional de LiHMDS (1 M en THF) (2.182 mi de 1 M, 2.182 mmol) Después de 10 minutos se añadió una porción adicional de trideuterio (yodo) metano (527.4 mg, 3.638 mmol) y la reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente durante 17 horas. La mezcla se diluyó con EtOAc y la capa orgánica se lavó con NaHC03 (x 2) , salmuera (x 1) , se secó (MgS04) se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (ISCO Companion, columna de 120 g, eluida con EtOAc/éter de petróleo de 0 a 30 % cargado en DCM) para dar el producto base como un aceite amarillo pálido (1.37 g, rendimiento 67 %) ; 1H NMR (400 MHz , DMSO) d 1.38 (d, J = 44.2 Hz, 9H) , 3.83 (S, 3H) , 4.43 (s, 2H) , 7.33 (d, J = 8.2 Hz, 2H) y 7.94 (d, J = 8.1 Hz, 2H) ppm; MS (ES+) 268.1 (M-Me) Etapa 3. terc-butil N- [ [4- (hidroximetil) fenil] metil] -N-( trideuteriometil) carbamato xx Se añadió LiBH4 (158.5 mg, 7.278 mmol) a una solución agitada de 4-[[terc-butoxicarbonil (trideuteriometil) amino] metil] benzoato de metilo (1.37 g, 4.852 mmol) en THF (10 mi) y la reacción se calentó a 85 °C durante 15 horas. Se añadió otra porción de LiBH (158.5 mg, 7.278 mmol) y la reacción se agitó a 65 °C por otras 7 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, después se vertió sobre hielo triturado y, mientras se agitaba, se añadió ácido clorhídrico gota a gota hasta que no se observó efervescencia. La mezcla se agitó durante 10 minutos y, después, se añadió NaHC03 acuoso hasta que la mezcla alcanzó un pH 8. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (x 3) y los extractos orgánicos combinados se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (ISCO Companion, columna de 120 g, eluida con EtOAc/éter de petróleo de 0 a 100 % cargado en DCM) para dar el producto base como un aceite incoloro (1.03 g, rendimiento 84 %);1H NMR (400 MHz , DMSO) d 1.42 (d, J = 14.6 Hz, 9H) , 4.35 (s, 2H) , 4.48 (d, J = 5.7 Hz, 2H) , 5.15 (t, J = 5.7 Hz, 1H) , 7.18 (d, J = 7.9 Hz, 2H) y 7.30 (d, J = 7.7 Hz, 2H) ppm; MS (ES+) 181.1 (M-OcBu) .

Etapa 4. terc-butil N- [ (4-formilfenil) metil] -N- (trideuteriometil) carbamato Se añadió Mn02 (5.281 g, 1.051 mi, 60.75 mmol) a una solución agitada de terc-butil ¿V-[[4-(hidroximetil) fenil] metil] -N-(trideuteriometil) carbamato (1.03 g, 4.050 mmol) en DCM (10 mi) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. La reacción se filtró a través de una almohadilla de Celite y se lavó con DCM. El filtrado se concentró al vacío para dar el compuesto base como un aceite incoloro (891 mg, rendimiento 88 %) ; 1H NMR (400 MHz , DMSO) d 1.40 (d, J = 43.4 Hz, 9H) , 4.48 (s, 2H) , 7.43 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.91 (d, J = 7.9 Hz, 2H) y 10.00 (s , 1H) , ppm.

Etapa 5: terc-butil N- [ [4 - [hidroxiiminometil] fenil] metil] -N-( trideuteriometil) carbamato xxii Se añadió hidroxilamina (466.0 µ? de 50 % p/v, 7.054 mmol) a una solución agitada de terc-butil N-[(4-formi 1 feni 1 ) met i 1 ] -N- ( t rideuteriomet i 1 ) carbamato (890 mg, 3.527 mmol) en etanol (5 mi) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se colectó en agua y se extrajo con EtOAc (x 3) . Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (x 1), se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se trituró de éter de petróleo y el precipitado se aisló por filtración para dar el producto base como un sólido blanco (837 mg, rendimiento 89 %) ; 1H NMR (400 MHz, DMSO) d 1.41 (d, J = 25.8 Hz, 9H) , 4.38 (s, 2H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 8.13 (s, 1H) y 11.20 (s, 1H) ppm; MS (ES+) 212.0 (M-fcBu) .

Etapa 6: terc-butil N- [ [4- [cloro-iV-hidroxi-carbonimidoil] fenil] metil] -N- (trideuteriometil) carbamato xxiii Se trató terc-butil N-[[4- [hidroxiiminometil] fenil]metil] -N- ( trideuteriomet i 1 ) carbamato (250 mg , 0.9351 mmol) en DMF (2.5 mi) con NCS (124.9 mg, 0.9351 mmol) y la reacción se calentó a 65 °C durante 1 hora. La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se diluyó con agua. La mezcla se extrajo con EtOAc (x 2) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (x 4), se secaron (MgS04), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto base como un sólido blanco (259 mg , rendimiento 92 %) ; 1H NMR (400 MHz , DMSO) d 1.41 (d, J = 29.6 Hz, 9H) , 4.42 (s, 2H) , 7.31 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 7.78 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , y 12.38 (s, 1H) , ppm.

Etapa 7. terc-butil N- [ [4- [5- [3- [bis (terc-butoxicarbonil ) amino] -6- (4 - isopropilsulfonilfenil) pirazin-2-il] isoxazol-3-il] fenil] metil] -N- (trideuteriometil) carbamato xxiv Se añadió gota a gota Et3N (48.41 mg, 66.68 µ?, 0.4784' mmol) a una solución agitada de terc-butil iV-terc-butoxicarbonil-N- [3-etinil-5- (4-isopropilsulfonilfenil ) pirazin-2 -il] carbamato (200 mg, 0.3987 mmol) y terc-butil N- [ [4- [cloro-N-hidroxi -carbonimidoil] enil] metil] -N- (trideuteriometil) carbamato (120.3 mg, 0.3987 mmol) en THF anhidro (5 mi) y la mezcla de reacción se calentó a 65 °C durante 2.5 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc/salmuera . Se añadió agua hasta que la capa acuosa se volvió transparente y se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (x 1) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (x 1) , se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (ISCO Companion, columna de 40 g eluida con EtOAc/éter de petróleo de 0 a 20 % cargado en DC ) para dar el producto base como un sólido blanco (213.5 mg, rendimiento 70 %) ; 1H NMR (400 MHz, DMSO) d 1.22 (d, J = 6.8 Hz, 6H) , 1.31 (s, 18H) , 1.43 (d, J = 26.2 Hz, 9H) , 3.51 - 3.60 (m, 1H) , 4.47 (s, 2H) , 7.42 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 8.03 (d, J = 5.2 Hz , 3H) , 8.08 (d, J = 8.6 Hz, 2H) , 8.65 (d, J = 8.6 Hz, 2H) y 9.52 (s, 1H) ppm; MS (ES+) 667.4 (M-Boc) .

Etapa 8. 5- (4-isopropilsulfonilfenil) -3- [3- [4- [ (trideuteriometilamino) metil] fenil] isoxazol-5-il] pirazin-2-amina (compuesto II -3) II-3 Se añadió HCl 3 M en MeOH (1.5 mi de 3 M, 4.500 mmol) a una solución agitada de terc-butil ¿V- [ [4- [5- [3-[bis (terc-butoxicarbonil) amino] -6- (4-isopropilsulfonilfenil)pirazin-2-il] isoxazol-3-il] fenil]metil] -N- (trideuteriometil) carbamato (213 mg, 0.2777 mmol) en DCM (6 mi) y la reacción se calentó a reflujo durante 15 horas. Se añadió una porción adicional de HCl 3 M en MeOH (0.5 mi de 3 M, 1.500 mmol) y la reacción se calentó a reflujo durante otras 7 horas. La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y el precipitado obtenido se aisló por filtración y se secó al vacío a 40 °C para dar la sal di-HCl del compuesto base como un sólido amarillo (97.6 mg, rendimiento 65 %) ; 1H N R (400 Hz, DMSO) d 1.20 (d, J = 6.8 Hz, 6H) , 3.47 (tt, J = 14.0, 6.9 Hz, 1H) , 4.19 - 4.25 (m, 2H) , 7.23 (s, 2H) , 7.72 (d, J = 8.4 Hz, 2H) , 7.85 (s, 1H) , 7.95 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 2H) , 8.39 (d, J = 8.7 Hz , 2H) , 8.97 (s, 1H) y 9.11 (s, 2H) ppm; MS (ES+) 467.2.

Ejemplo 5: síntesis de 3- [3- [4- (metilaminometil) fenil] isoxazol -5- il] -5- [4- [1,2,2,2-tetradeuterio-1- (trideuteriometil) etil] sulfonilfenil] pirazin-2 -amina (compuesto II -4) Etapa 1. 1- [4- (dietoximetil ) fenil] -N-metil -metanamina xxvi Se diluyó metilamina 2 M en MeOH (288.1 mi, 576.2 mmoles) con metanol (1.000 1) y se agitó a -20 °C. Se añadió gota a gota 4- (dietoximetil) benzaldehído (100 g, 480.2 mmol) durante 1 minuto y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1.25 horas. Se añadió borohidruro sódico (29.07 g, 30.76 mi, 768.3 mmoles) en porciones durante 20 minutos mientras la temperatura se mantuvo entre 20 y 30 °C con un baño de hielo-agua. La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche y, después, se inactivo mediante la adición gota a gota de NaOH (960.4 mi de 1.0 M, 960.4 mmol) durante 20 minutos. La reacción se agitó durante 30 minutos y se concentró al vacío para eliminar el MeOH. La reacción se particionó con MTBE (1.200 1) y se separaron las fases. La fase orgánica se lavó con agua (300.0 mi), se secó (Na2S04) y se concentró al vacío para dar el compuesto base como un aceite amarillo (102.9 g, rendimiento 96 %) ; 1H NMR (400 MHz, CDC13) d 1.25 (t, 6H) , 2.46 (s, 3H) , 3.45 - 3.65 (m, 4H) , 3.75 (s, 2H) , 5.51 (s, 1H) , 7.32 (d, 2H) y 7.44 (d, 2H) ppm.

Etapa 2. terc-butil N- [ [4- (dietoximetil) fenil] metil] -iV-metil-carbamato xxvii Se equipó un reactor de 1 1 provisto de camisa de vidrio con un agitador de varilla, termopar y enfriador. Se agitó una solución de l-[4-( dietoximet i 1 ) feni 1 ] -N-met i 1 -metanamina (80.0 g, 358.2 mmol) en DCM (480.0 mi) a 18 °C. Se añadió una solución de Boc anhídrido (79.75 g, 83.95 mi, 365.4 inmoles) en DCM (160.0 mi) durante 10 minutos y la solución se agitó a 20 - 25 °C durante la noche. La mezcla de reacción se filtró, se lavó con DCM (3 x 50 mi) y el filtrado se concentró al vacío para proporcionar el compuesto base como un líquido amarillo pálido (116.6 g, rendimiento cuantitativo); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 1.25 (t, 6H) , 1.49 - 1.54 (2 x s, 9H) , 2.78 - 2.83 (2 x s, 3H), 3.50 - 3.66 (m, 4H) , 4.42 (s, 2H) , 5.49 (s, 1H), 7.22 (d, 2H) y 7.45 (d, 2H) ppm.

Etapa 3: terc-butil N- [ [4- [hidroxiiminometil] fenil] metil] -N-metil-carbamato xviii En un reactor de 1 1 provisto de camisa de vidrio se agitó una solución bifásica de terc-butil N- [ [4 - ( die toximet i 1 ) f eni 1 ] met i 1 ] -iV-met i 1 - carbamato (50.0 g, 154.6 mmol) en 2-MeTHF (400.0 mi) y Na2S04 (100.0 mi de 10 % p/v, 70.40 mmol) a 8 - 10 °C. Se añadió clorhidrato de hidroxi lamina (46.38 mi de 5.0 M, 231.9 mmoles) y la solución bifásica se agitó a 30 °C durante 16 horas. La reacción se diluyó con MTBE (200.0 mi) y las capas se separaron. La fase orgánica se lavó con agua (200.0 mi) , se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró al vacío. El residuo se diluyó con heptano (200.0 mi) y la suspensión obtenida se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El sólido se colectó por filtración para dar el compuesto base como un sólido blanco (36.5 g, rendimiento 89 %),· 1H NM (400 MHz, CDC13) d 1.50 (s, 9H) , 2.88 (br s, 3H) , 4.60 (s, 2H) , 7.26 (d, 2H) , 7.52 (d, 2H) y 8.15 (s, 1H) ppm .

Etapa 4. terc-butil N- [ [4- [cloro-N-hidroxi-carbonimidoil] fenil] metil] -N-metil-carbamato xxix Se agitó una suspensión de terc-butil iV-[[4-[hidroxiiminometil] fenil] metil] - -metil - carbamato (100 g, 378.3 mmol) en acetato de isopropilo (1.000 1) a temperatura ambiente. Se añadió N-clorosuccinimida (53.04 g, 397.2 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se particionó con agua (500.0 mi) y se separaron las fases. La fase orgánica se lavó con agua (500.0 mi) (2 x) , se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró al vacío para eliminar la mayor parte del solvente. Se añadió heptano (1.000 1) y la mezcla se concentró al vacío para eliminar la mayor parte del solvente. Se añadió heptano (1.000 1) y el precipitado obtenido se aisló por filtración. La torta del filtro se lavó con heptano (500 mi) y se secó con aire para dar el compuesto base como un polvo blanquecino (105.45 g, rendimiento 93 %) ; 1H NMR (400 MHz, CDC13) d 1.48 (2 x s, 9H) , 2.90 (2 x s, 3H) , 4.47 (s, 2H) , 7.26 (d, 2H) , 7.77 (d, 2H) y 8.82 (s, 1H) ppm .

Etapa 5: terc-butil N- [ [4- [5- [3 - [bis (terc-butoxicarbonil) amino] -6-bromo-pirazin-2-il] isoxazol-3-il] fenil] metil] -N-metil -carbamato XXX Se agitó una suspensión de terc-butil N- [ [4- [cloro-jV-hidroxi-carbonimidoil] fenil] metil] -N-metil -carbamato (100.0 g, 334.7 mmol) y terc-butil N-terc-butoxicarbonil -N- [3-etinil-5- (4 - isopropilsul onilfenil ) pirazin-2-il] carbamato (121.2 g, 304.3 mmol) en DCM (1.212 1) a temperatura ambiente. Se añadió trietilamina (33.87 g, 46.65 mi, 334.7 mmoles) en una sola porción y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se particionó con agua (606.0 mi) y se separaron las fases. La fase orgánica se lavó con agua (606.0 mi), se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró al vacío hasta casi sequedad. Se añadió heptano (363.6 mi) y la mezcla se concentró hasta aproximadamente 300 mi. Se añadió más heptano (1.212 1) y la mezcla se calentó a 90 °C con agitación. La mezcla se enfrió lentamente hasta la temperatura ambiente y se agitó a esta temperatura durante 1 hora. El precipitado obtenido se aisló por filtración y la torta del filtro se lavó con heptano (2 x 363.6 mi) y se secó con aire para dar el compuesto base como un sólido beige (181.8 g, rendimiento 90 %) ; 1H R (400 MHz, CDC13) d 1.41 (s, 18H) , 1.51 (s, 9H) , 2.88 (2 X s, 3H) , 4.50 (s, 2H) , 7.36 - 7.38 (m, 3H) , 7.86 (d, 2H) y 8.65 (s, 1H) ppm.

Etapa 6: l-bromo-4 - [1 , 2 , 2 , 2 -tetradeuterio- 1-(trideuteriometil) etil] sulfañil-benceno xxxii Se añadió hidruro sódico (246.5 mg, 6.163 mmol) en porciones a una solución agitada de 4-bromobencenotiol (compuesto xxxi) (970.9 mg, 5.135 mmol) en DMF (10 mi) a 0 °C. Después de agitar a esta temperatura durante 15 minutos, se añadió 1, 1, 1, 2 , 3 , 3 , 3 -heptadeuterio-2 -yodo-propano (1 g7 5.649 mmol) y la reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se inactivo por la adición de agua, y la mezcla se agitó durante 10 minutos. La mezcla se extrajo con éter dietílico (3 x) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (x 2) , salmuera (2 x) , se secaron (MgS04) , se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto base, que se usó directamente sin purificación adicional, suponiendo un 100 % de rendimiento y pureza; 1H NMR (500 MHz, DMSO) d 7.25 - 7.37 (m, 2H) y 7.48 - 7.55 (m, 2H) ppm.

Etapa 7. l-bromo-4 - [1 , 2 , 2 , 2 -tetradeuterio- 1- (trideuteriometil ) etil] sulfonil-benceno xxiii Se añadió mCPBA (2.875 g, 12.83 mmol) en porciones a una solución agitada de l-bromo-4 - [1 , 2 , 2 , 2-tetradeuterio-1-(trideuteriometil) etil] sulfanil-benceno (1.223 g, 5.134 mmol) en DCM (20 mi) a 0 °C, y la reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante 17 horas. La mezcla se lavó con solución acuosa de NaOH 1 M (x 2) , solución acuosa saturada de Na2S203 (x 3) , salmuera (x 1) , se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (ISCO Companion, columna de 80 g, eluida con EtOAc/éter de petróleo de 0 a 40 % cargado en DCM) para dar el producto base como un aceite incoloro (1.19 g, rendimiento 86 %);1H NMR (500 MHz, DMSO) d 7.77 - 7.81 (m, 2H) y 7.88 - 7.92 (m, 2H) ppm.

Etapa 8. 4 , 4 , 5 , 5-tetrametil-2- [4 - [1 , 2 , 2 , 2 -tetradeuterio- 1-(trideuteriometil) etil] sulfonilfenil] -1,3, 2-dioxaborolano xxxiv Se añadió Pd(dppf)Cl2- DCM (179.8 mg, 0.2202 mmol) a una suspensión agitada de l-bromo-4- [1 , 2 , 2 , 2 -tetradeuterio-1- (trideuteriometil) etil] sulfonil benceno (1.19 g, 4.404 mmol), bis (dipinacolato) de diboro (1.342 g, 5.285 mmol) y KOAc (1.296 g, 13.21 mmol) en dioxano (10 mi). La reacción se colocó en atmósfera de nitrógeno mediante 5 x ciclos de nitrógeno/vacío y la mezcla se calentó a 80 °C durante 4.5 horas. La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y el solvente se eliminó al vacío. El residuo se particionó entre Et20 y agua, y las capas se separaron. La capa orgánica se secó (MgS04) , se filtró y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en EtOAc/éter de petróleo al 30 % (35 mi) y se añadió 1.2 g de florosil. La mezcla se agitó durante 30 minutos, después, se filtró y los sólidos se lavaron con alícuotas adicionales de EtOAc/nafta al 30 % (x 3) . El filtrado se concentró al vacío y se trituró con EtOAc/éter de petróleo al 10 %. El sólido obtenido se aisló por filtración, se lavó con éter de petróleo y se secó al vacío para dar el compuesto base como un sólido blanquecino (1052.1 mg, rendimiento 75 %) . 1H NMR (400 MHz, DMSO) d 1.33 (s, 12H) , 7.87 (d, J = 8.4 Hz, 2H) y 7.94 (d, J = 8.4 Hz, 2H) ppm.

Etapa 9: terc-butil N- [ [4- [5- [3 - [bis (terc-butoxicarbonil) amino] -6- [4- [1,2,2, 2-tetradeuterio-l-(trideuteriometil) etil] sulfonilfenil] pirazin-2-il] isoxazol-3-il] fenil] metil] -N-metil-carbamato XXXV Se añadió [1 , 1 ' -bis (di- terc-butilfosfino) ferroceno] dicloropaladio (II) (106.8 mg, 0.1639 mmol) a una mezcla de 4 , 4 , 5, 5-tetrametil-2- [4- [1,2,2 , 2-tetradeuterio-l- (trideuteriometil) etil] sulfonilfenil] -1,3, 2-dioxaborolano (1.3 g, 4.098 mmol), terc-butil N- [ [4- [5- [3- [bis (terc-butoxicarbonil) amino] -6-bromo-pirazin-2-il] isoxazol-3-il] fenil] metil] -N-metil-carbamato (2.707 g, 4.098 mmol) y K2C03 (1.133 g, 8.200 mmol) en tolueno (9.100 ml) , EtOH (2.600 ml) y agua (2.600 ml) , y la mezcla de reacción se desgasificó con una corriente de nitrógeno (5 ciclos) .

La mezcla se calentó a 75 °C por 1.5 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió agua (5.2 ml) . Después de agitar, las capas se separaron y la capa orgánica se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró al vacío. El residuo se trituró con IPA y el precipitado obtenido se aisló por filtración, se lavó con IPA (3 4 ml) y se secó al vacío a 50 °C para dar el compuesto base como un sólido blanco (2.4 g, rendimiento 76 %) ; 1H NMR (400 MHz , CDC13) d 1.41 (s, 18H) , 1.50 (s, 9H) , 2.85 - 2.89 (m, 3H) , 4.50 (s, 2H) , 7.36 - 7.38 (m, 3H) , 7.87 (d, 2H) , 8.09 (d, 2H) , 8.35 (d, 2H) y 9.06 (s, 1H) ppm.

Etapa 10. 3- [3- [4- (metilaminometil) fenil] isoxazol-5-il] -5- [4- [1,2,2, 2-tetradeuterio-l- (trideuteriometil) etil] sulfonilfenil] pirazin-2 -amina (compuesto II -4) II-4 Se añadió HC1 concentrado (3.375 g, 2.812 mi de 37 % p/p, 34.25 mmol) a una solución de terc-butil -V-[[4-[5-[3-[bis( ere -buto icarboni 1 ) amino] - 6 - [4 - [1, 2, 2, 2-tetradeuterio-l-( trideuteriomet i 1 ) etil] sulfonilfenil]pirazin-2-i 1 ] i soxazol - 3 - i 1 ] fenil] met i 1 ] -iV-met i 1 - carbamato (2.2 g, 2.854 mmol) en acetona (28.60 mi) y la reacción se calentó a reflujo durante 7 horas. La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y el precipitado obtenido se aisló por filtración, se lavó con acetona (2 x 4.5 mi) y se secó al vacío a 50 °C para dar la sal di-HCl del compuesto base como un sólido amarillo (1.42 g, rendimiento 92 %); 1H NMR (400 MHz , DMSO) d 2.58 (t, 3H), 4.21 (t, 2H), 5.67 (br S, 2H) , 7.74 (d, 2H) , 7.85 (s, 1H), 7.94 (d, 2H) , 8.10 (d, 2H) , 8.38 (d, 2H) , 8.96 (s, 1H) y 9.33 (br S, 2H) ppm; MS (ES+) 471.8.

Ejemplo 6: síntesis de 5- (4- (terc-butilsulfonil) fenil) -3- (3-(4- ( (metilamino) metil) fenil) isoxazol-5-il) pirazin-2 -amina (compuesto 1-2) Compuesto l-2»2HCI Compuesto I-2-2HCI Etapa 1. Preparación del compuesto 4-ii 4-i 4-ii Se agitó una suspensión de terc-butil 4-( (hidroxiimino) metil) encil (metil) carbamato (compuesto 4-i) (650 g, 2.46 mol) en acetato de isopropilo (6.5 1) a temperatura ambiente. Se añadió N-clorosuccinimida (361 g, 2.71 moles) y la temperatura de reacción se mantuvo durante la noche a 20-28 °C para asegurar reacción completa. La mezcla de reacción se diluyó con agua (3.25 1) y EtOAc (1.3 1) y se separaron las fases. La fase orgánica se lavó con agua (2 x 3.25 1), se secó (Na2S04) y se concentró hasta una torta húmeda. El concentrado se diluyó con heptano (9.1 1), se eliminó ~2 1 del solvente y, después, se agitó a temperatura ambiente durante 2-20 h. El sólido se colectó por filtración. La torta del filtro se lavó con heptano (2 x 975 mi) y se secó para dar el compuesto 4-ii (692 g; rendimiento 94 %, pureza por HPLC 99.2 % área) como un polvo incoloro .

Etapa 2. Preparación de terc-butil (5-bromo-3- (3- (4- (( (terc-butoxicarbonil) (metil ) amino) metil) fenil) isoxazol-5-il) pirazin-2-il) (terc-butoxicarbonil) carbamato (compuesto 4-iv) Se agitó una suspensión de terc-butil N- (5- bromo- 3 -etinilpirazin-2-il) -N- tere -butoxicarbonilcarbamato (compuesto 4-iii) (1.59 kg, 3.99 mol) y terc-butil 4- ( cloro (hidroxiimino) metil ) bencil ( tet rahidro- 2H-pi an- 4 -il)carbamato (1.31 kg, 4.39 mol; 1.10 equiv.) en CH2C12 (12.7 1) a temperatura ambiente. Se añadió trietilamina (444 g, 611 mi, 4.39 moles) a la suspensión y la temperatura de reacción se mantuvo entre 20-30 °C durante 20-48 h para asegurar reacción completa. La mezcla de reacción se diluyó con agua (8 1) y se mezcló complet mente, después, se separaron las fases. La fase orgánica se lavó con agua (8 1) , se secó (Na2S04) y, después, se concentró hasta que quedara aproximadamente 1 1 de CH2C12. El concentrado se diluyó con heptano (3.2 1) y se concentró nuevamente a 40 °C/20.7 kPa (200 Torr) hasta que no se observó destilado. El concentrado se agitó y se diluyó adicionalmente con heptano (12.7 1) para precipitar un sólido. La suspensión se agitó durante la noche. El sólido se colectó por filtración, se lavó con heptano (2 x 3 1) y, después, se secó para dar el compuesto 4-iv (2.42 kg; rendimiento 92 %, pureza por HPLC 100 % área) como un polvo de color canela claro. XK NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.61 (s, 1H) , 7.82 (d, J" = 8.2 Hz, 2H) , 7.31 (m, 3H) , 4.46 (br s, 2H) , 2.84 (br d, 3H) , 1.57 (s, 2H) , 1.44 (br s, 9H) , 1.36 (s, 18H) .

Etapa 3. Preparación del compuesto 5-i Una mezcla de terc-but i 1 (5-bromo-3- (3- (4- ( ( ( erc-butoxicarbonil) (metil ) amino) metil ) fenil ) isoxazol - 5 -il) pirazin-2-il) ( erc-butoxicarbonil ) carbamato (compuesto 4-iv) (1.00 kg, 1.51 mol), K2C03 (419 g, 3.02 mol) y ácido ( -( isopropi lsul fonil ) fenil ) borónxco (345 g, 1.51 mol) en tolueno (7.0 1) y agua (2.0 1) se agitó y se desgasificó con N2 durante 30 min. Después, se añadió 1 , 1 ' -bis (di - -but i 1 fosfino) ferrocen-dicloro-paladio(II) [Pd (dtbpf ) Cl2 ; 19.7 g, 30.3 mmol] y se desgasificó durante otros 20 min. La mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante al menos 1 h para asegurar reacción completa. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y, después, se filtró a través de Celite. El recipiente de reacción y la almohadilla del filtro se lavaron con tolueno (2 x 700 mi) . Los filtrados se combinaron y se separaron las fases. La fase orgánica se agitó con resina MP-TMT de Biotage (170 g) durante 4-20 h. La resina se eliminó por filtración a través de Celite y la almohadilla del filtro se lavó con tolueno (2 x 700 mi) . El filtrado y los lavados se combinaron y se concentraron hasta casi sequedad, después se diluyeron con i-PrOH (5.75 1) y se volvieron a concentrar. El concentrado se disolvió nuevamente en agua caliente (45 °C) i-PrOH (5.75 1) y, después, se enfrió a temperatura ambiente, con agitación para inducir la cristalización y, después, se agitó durante aproximadamente 16 - 20 h. El sólido se colectó por filtración, se lavó con i-PrOH (2 x 1 1) y se secó para proporcionar VRT-1018729 (967 g; 84 %) como un polvo beige. 2H NMR (400 MHz, CDC13) d 9.04 (s, 1H) , 8.33 (d, J = 8.6 Hz, 2H) , 8.06 (d, J = 8.5 Hz, 2H) , 7.85 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 7.34 (m, 3H) , 4.47 (br s, 2H) , 3.25 (hept, J = 7.0 Hz, 1H) , 2.85 (br d, 3H) , 1.47 (s, 9H) , 1.38 (s, 18H) , 1.33 (d, J = 6.9 Hz, 6H) .

Etapa 4. Preparación del compuesto 1-2 · 2HC1 Se calentó una solución del compuesto 5-i (950 g, 1.24 mol) en acetona (12.35 1) a 40 °C y, después, se añadió HCl concentrado (1.23 kg, 1.02 1 de 37 % p/p, 12.4 moles) a una velocidad tal como para mantener la temperatura de reacción entre 40 - 45 °C durante al menos 5 h para asegurar reacción completa. La suspensión se enfrió hasta menos de 30 °C y el sólido se colectó por filtración. La torta del filtro se lavó con acetona (2 x 950.0 mi) y, después, se secó para dar el compuesto 1-2 · 2HC1 (578 g; rendimiento 87 %, pureza por HPLC 99.5 % de área) como un polvo amarillo. 1K NMR (400 MHz , DMSO) d 9.53 (br d, J = 4.8 Hz , 2H) , 8.93 (s, 1H) , 8.37 (d, J = 8.5 Hz, 2H) , 8.07 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 7.92 (d, J = 8.6 Hz, 2H) , 7.84 (s, 1H) , 7.75 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 4.23 - 4.15 (m, 2H) , 3.43 (hept, J = 6.8 Hz, 1H) , 2.55 (t, J = 5.3 Hz , 3H) , 1.17 (d, J = 6.8 Hz, 6H) .

Etapa 5: preparación del compuesto 1-2 · HCI a partir del compuesto 1-2 · 2HC1 Compuesto 1-2 · 2HCI Compuesto 1-2 · HCI Proceso de dos recipientes Se calentó una suspensión agitada del compuesto 1-2 · 2HC1 (874 g, 1.63 mol) en i-PrOH (3.50 1) y agua (0.87 1) a 50 °C durante 1-2 h, se enfrió a temperatura ambiente y se agitó durante 1-20 h. Se realizó XRPD en una pequeña muestra para asegurarse de que el compuesto 1-2 · 2HC1 se haya convertido a otra forma. La suspensión se enfrió a 5 °C y se agitó durante 1 h. El sólido se colectó por filtración y, después, la torta del filtro se lavó con i-PrOH/agua 80/20 (2 x 874 mi) y se secó brevemente.

Cuando la XRPD mostró la forma anhidra del compuesto 1-2 · HC1, el sólido se secó para dar el compuesto 1-2 · HCl anhidro (836 g, rendimiento 99 %, pureza por HPLC 99.2 % área) como un sólido amarillo. XH NMR (400 MHz, D SO) d 9.38 (s, 2H) , 8.96 (s, 1H) , 8.46 -8.34 (m, 2H) , 8.10 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 7.94 (d, J = 8.6 Hz, 2H) , 7.85 (s, 1H) , 7.75 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 7.23 (br s, 2H) , 4.21 (s, 2H) , 3.47 (hept, J = 6.7 Hz, 1H) , 2.58 (s, 3H) , 1.19 (d, J = 6.8 Hz, 6H) .

Cuando la XRPD mostró la forma hidratada del compuesto 1-2 · HCl, el sólido se agitó en medio fresco de i-PrOH (3.50 1) y agua (0.87 1) a 50 °C durante al menos 2 h hasta que la XRPD mostró la conversión completa al compuesto 1-2 · HCl anhidro. Después, la suspensión se enfrió a 5 °C y se agitó durante 1 h. El sólido se colectó por filtración y, después, la torta del filtro se lavó con i-PrOH/agua (2 x 874 mi) 80/20 y se secó para dar el compuesto 1-2· HCl anhidro.

Proceso alternativo usado (un recipiente) Se cargó el compuesto 1-2 · 2 HCl (392 g) en el reactor. Se cargó una mezcla 4:1 de IPA/agua (8 1) a un reactor y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se usó XRPD para confirmar la conversión a la forma mono-hidratada de la sal de mono-HCl . La mezcla se calentó a 50 °C. Se añadieron cristales del compuesto I-2 · HCl/anhidro (16 g) y la mezcla se calentó a 50 °C hasta que la XRPD confirmó la conversión completa a la forma anhidra deseada. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se filtró, el sólido se lavó con IPA/agua (2 x 800 mi) 4:1 y, después, se secó para dar el compuesto 1-2 · HC1 anhidro (343 g, rendimiento 94 %) .

Etapa 4. Método alternativo 1: preparación de la base libre del compuesto 1-2 Se agitó una solución del compuesto 5-i (100 g, 131 mmol) en DCM (200 mi) a temperatura ambiente y, después, se añadió TFA (299 g, 202 mi, 2.62 mol) . Después de 2 h, la solución de reacción se enfrió a 5 °C. La mezcla de reacción se diluyó con EtOH (1.00 1) durante unos 5 minutos y se obtuvo una suspensión de color amarillo brillante. La suspensión se enfrió a 10 °C, después se añadió NaOH (1.64 1 de 2.0 M, 3.28 moles) durante 30 min y, después, se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El sólido se colectó por filtración y, después, se lavó con agua (2 x 400 mi) , EtOH (2 x 200 mi) y se secó para dar la base libre del compuesto 1-2 (57.0 g, rendimiento 94 %, pureza por HPLC 99.7 % área) como un polvo fino de color amarillo. 1K NMR (400 MHz , DMSO) d 8.95 (s, 1H) , 8.39 (d, J = 8.5 Hz, 2H) , 7.95 (dd, J" = 11.6, 8.4 Hz, 4H) , 7.78 (s, 1H) , 7.51 (d, J = 8.2 Hz, 2H) , 7.21 (br s, 2H) , 3.72 (s, 2H) , 3.47 (hept, J = 6.8 Hz, 1H) , 2.29 (s, 3H) , 1.19 (d, J = 6.8 Hz, 6H) .

Etapa 4. Método alternativo 2: Preparación del compuesto 1-2 » HC1 Se agitó una suspensión de la base libre del compuesto 1-2 (10.0 g, 21.6 mmol) en acetona (80 mi) y se calentó a 35 °C. Se añadió una solución acuosa de HCI (11.9 mi de 2.0 M, 23.8 mmol) diluido con agua (8.0 mi) y la mezcla se calentó a 50 °C durante 4 h. La suspensión se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente y, después, se agitó durante la noche. El sólido se colectó por filtración. La torta del filtro se lavó con acetona (2 x 20 mi) , después se secó para dar 10.2 g del clorhidrato del compuesto 1-2 (rendimiento 95 %) como un polvo amar i lio.

Ejemplo 7: síntesis de 5- (4- (isopropilsulfonil) fenil) -3- (3- (4- (tetrahidropiran-4-ilamino)metil) fenil) isoxazol-5- il) pirazin-2-amina (compuesto 1-3) Esquema de reacción: Síntesis ilustrativa del compuesto 1-3 A-6 1-3 Etapa 1. Preparación de N- (4- (dietoximetil) bencil) tetrahidro- 2fí-piran-4 -amina (A-2) Se agitó una solución de clorhidrato de tetrahidro-2fí-piran-4 -amina (1.13 kg, 8.21 mol) en eOH (14.3 1) a aproximadamente 20 °C. Después, se añadió Et3N (1.06 kg , 1.43 1, 8.21 mol) . La mezcla se agitó durante al menos 5 min y, después, se añadió teref talaldehído dietil acetal (1.43 kg , 6.84 mol) mientras la temperatura de reacción se mantuvo entre 20-25 °C. La mezcla se agitó durante al menos 45 minutos para formar la imina . Se añadieron tabletas de NaBH4 (414 g, 11.0 mol) , mientras la temperatura de reacción se mantuvo por debajo de aproximadamente 25 °C. Una vez que se completó la adición, la mezcla se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se inactivo por la adición de NaOH 1 M (13.7 1) y, después, se extrajo con MTBE. La solución orgánica se lavó con salmuera (7.13 1) , después se secó (Na2S04) y se concentró para proporcionar el compuesto A-2 (2197 g; rendimiento 109 %, pureza por HPLC 94.4 % área) como un aceite turbio. 1K NMR (400 MHz, CDC13) d 7.43 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 7.31 (d, J = 8.1 Hz , 2H) , 5.49 (s, 1H) , 4.66 (br s, 1H) , 4.03 - 3.91 (m, 2H) , 3.82 (s, 2H) , 3.69 - 3.47 (m, 4H) , 3.38 (td, J" = 11.6, 2.1 Hz, 2H) , 2.78 - 2.65 (m, 1H) , 1.90 - 1.81 (m, 2H) , 1.53 - 1.37 (m, 2H) , 1.23 (t, J = 7.1 Hz, 6H) .

Etapa 2. Preparación de terc-butil 4- (dietoximetil) bencil (tetrahidro-2H-piran-4-il) carbamato (A-3) Se agitó una mezcla de N- (4- (dietoximetil) bencil) tetrahidro-2H-piran-4 -amina (A-2) (2195 g, 7.48 mol) en CH2C12 (22.0 1) a 25 °C y, después, se añadió dicarbonato de di-t-butilo (1.71 kg, 7.86 mol). Posteriormente, se añadió Et3N (795 g, 1.10 1), mientras la temperatura de reacción se mantuvo entre 20 - 25 °C. La mezcla de reacción se agitó a aproximadamente 25 °C durante 12 - 20 h. Una vez que la reacción se completó, la mezcla se enfrió hasta aproximadamente 20 °C y se inactivo con ácido cítrico acuoso 0.5 (7.48 1, 3.74 moles), mientras la temperatura de reacción se mantuvo entre 20 - 25 °C. Se colectó la fase orgánica, se lavó con una solución saturada de NaHC03 (6.51 1, 7.48 mol), se lavó con salmuera (6.59 1) , se secó (Na2S04) y, después, se concentró para dar terc-butil 4- (dietoximetil) bencil (tetrahidro-2H-piran-4-il) carbamato (A-3) (2801 g; rendimiento 95 %, pureza por HPLC 98.8 % área) como un aceite espeso de color ámbar. 1H NMR (400 MHz, CDC13) d 7.40 (d, J" = 8.1 Hz, 2H) , 7.21 (d, J = 7.9 Hz, 2H) , 5.49 (s, 1H) , 4.39 (br s, 3H) , 3.93 (br dd, J = 10.8, 3.8 Hz , 2H) , 3.67 - 3.47 (m, 4H) , 3.40 (br m, 2H) , 1.68 - 1.59 (m, 4H) , 1.39 (br s, 9H) , 1.23 (t, J = 7.1 Hz, 6H) .

Etapa 3. Preparación de terc-butil 4-( (hidroxiimino) metil) bencil (tetrahidro-2H-piran-4-il) carbamato (A-4) Se agitó una solución de terc-butil 4- (dietoximetil ) bencil (tetrahidro-2H-piran-4- il ) carbamato (A-3 ) (2.80 kg, 7.12 mol) en THF (28.0 1) y agua (2.80 1) a aproximadamente 20 °C. Se añadió clorhidrato de hidroxilamina (593 g, 8.54 moles), mientras la temperatura de reacción se mantuvo entre 20-25 °C. La mezcla de reacción se agitó a aproximadamente 20 °C durante 16 - 20 h, después se diluyó con CH2C12 (8.4 1) y salmuera (11.2 1) al 50 %, y se agitó durante al menos 5 min. Las fases se separaron, después, la fase orgánica se lavó con salmuera al 50 % (2 x 2.8 1), se secó (Na2S04) y se concentró. El concentrado se diluyó con MeOH (1.4 1) y se concentró nuevamente. El concentrado se diluyó con MeOH (14.0 1) y se transfirió a un recipiente de reacción. La solución se calentó hasta aproximadamente 25 °C y, después, se añadió agua (14.0 1) durante aproximadamente 1 - 1.5 h; después de añadir aproximadamente 10 1 de agua, la mezcla se sembró y se observó una suspensión turbia. Se añadió más agua (8.4 1) durante 1.5 h para precipitar aún más el producto. Después del envejecimiento, el sólido se colectó por filtración. La torta del filtro se lavó con heptano (5.6 1) y se secó para dar terc-butil 4- ( (hidroxiimino) metil ) bencil ( tetrahidro-2H-piran-4 -il)carbamato (A-4) (1678 g; 71 %, pureza por HPLC 91.5 % área) como un polvo blanquecino. NMR (400 MHz, CDC13) d 8.12 (s, 1H) , 7.51 (d, J = 8.2 Hz, 2H) , 7.24 (d, J = 7.9 Hz , 2H) , 4.40 (br s, 3H) , 3.96 (dd, J = 10.4, 3.6 Hz, 2H) , 3.41 (br ra, 2H) , 1.69 - 1.61 (m, 4H) , 1.39 (br s, 9H) .

Etapa 4. Preparación de (terc-butil 4- (cloro (hidroxiimino) metil) bencil (tetrahidro-2H-piran-4-i1) carbamato (A-4 - i ) A-4 ?-4-i En un reactor se agitó una suspensión de (E) -terc-butil 4- ( (hidroxiimino) metil) bencil (tetrahidro-2H-piran-4-iDcarbamato (A-4) (1662 g, 4.97 mol) en i-PrOAc (16.6 1) a 20 °C. Se añadió N-clorosuccinimida (730 g, 5.47 mol) y la temperatura se mantuvo en aproximadamente 20 °C. La suspensión se agitó a aproximadamente 20 °C para completar la reacción. La suspensión se diluyó con agua (8.3 1) y se agitó para disolver el sólido. Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con agua (8.3 1) . La fase orgánica se concentró y, después, se diluyó con i-PrOAc (831 mi) . Se añadió lentamente heptano (13.3 1; 8 V) para inducir la cristalización. Después, la suspensión espesa se agitó durante 1 h. El sólido se colectó por filtración; la torta del filtro se lavó con heptano (2 x 1.6 1; 2 x 1 V) y se secó para dar (Z) - terc-butil 4 - (cloro (hidroxiimino) metil ) bencil (tetrahidro-2H-piran-4-il) carbamato (?-4-i) (1628 g; 89 %, pureza por HPLC 98.0 % área) como un polvo blanco.

Etapa 5: preparación de terc-butil (5-bromo-3- (3- (4- ( ( (terc-butoxicarbonil) (tetrahidro-2H-piran-4 -il) amino)metil) fenil) isoxazol-5-il)pirazin-2-il) (terc-butoxicarbonil) carbamato (A-5) Se agitó una solución de terc-butil 4- (cloro (hidroxiimino) metil) bencil (tetrahidro-2H-piran-4-il) carbamato (?-4-i) (1.60 kg, 4.34 mol) y terc-butil N- (5-bromo-3-etinilpirazin-2-il) -N- terc-butoxicarbonilcarbamato (compuesto ?-4-ii) (1.73 kg, 4.34 mol) en CH2C12 (12.8 1) a 20 °C. Se añadió Et3N (483 g, 665 mi; 4.77 mol) y la temperatura de reacción se mantuvo por debajo de 30 °C. La suspensión se agitó a 20 °C para completar la reacción; después se diluyó con agua (8.0 1) y se agitó. Las fases se separaron; la fase orgánica se lavó con agua (8.0 1) y, después, se concentró. Se añadió i-PrOAc (1.6 1) y la mezcla se calentó a 50 °C. Se añadió lentamente heptano (4.0 1) , después, la suspensión se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se añadió más heptano (7.2 1) a la suspensión y se agitó durante 1 h. El sólido se colectó por filtración. La torta del filtro se lavó con heptano (2 x 1.6 1) y se secó para dar terc-butil ( 5 -bromo- 3- (3- (4- ( ( (terc-butoxicarbonil) (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) metil) fenil) isoxazol-5- il ) pirazin-2-il) ( terc-butoxicarbonil ) carbamato (A-5) (2.478 kg; 78 %, pureza por HPLC 97.8 % área) como un polvo fino de color canela. 1H N R (400 MHz, CDC13) d 8.60 (s, 1H) , 7.78 (d, J" = 8.3 Hz, 2H) , 7.31 (m, 3H) , 4.42 (br m, 3H) , 4.03 - 3.82 (m, 2H) , 3.38 (br s, 2H) , 1.60 (m, 4H) , 1.36 (s, 27H) .

Etapa 6: preparación de terc-butil terc-butoxicarbonil (3- (3-(4- ( ( (terc-butoxicarbonil) (tetrahidro-2H-piran-4 -il) amino)metil) fenil) isoxazol-5-il) -5- (4- ( isopropilsulfonil) fenil) pirazin-2-il) carbamato Se agitó una mezcla de terc-butil (5-bromo-3- (3- (4- ( ( (terc-butoxicarbonil) (tetrahidro-2iT-piran-4 -il) amino) metil) fenil) isoxazol-5-il) pirazin-2-il) ( terc-butoxicarbonil ) carbamato (A-5) (425 g, 582 mmol) , K2C03 (161 g, 1.16 mol; 2.0 equiv.) y ácido 4- ( isopropilsulfonil ) fenil borónico (133 g, 582 mmol) en tolueno (2.98 1) y agua (850 mi), y se desgasificó con N2 a temperatura ambiente. Se añadió el catalizador [1 , 1 ' -bis (di-terc-butilfosfino) ferroceno] dicloropaladio (II) , (Pd(dtbpf)C12; 1.90 g, 2.91 mmol) y la mezcla se desgasificó durante otros 10 min. La mezcla se calentó a 70 °C hasta que la reacción se completó. La mezcla se enfrió hasta 50 °C, se diluyó con agua (850 mi) y se filtró a través de un lecho de Celite. Las fases se separaron. La fase orgánica se concentró, después, el residuo se diluyó con EtOH (1.70 1) y se concentró nuevamente. Con mezclado a 40 °C, el concentrado se diluyó con EtOH (1.70 1) para inducir la cristalización. La suspensión se enfrió hasta 20 °C y se agitó durante 4 h. El sólido se colectó por filtración. La torta del filtro se lavó con EtOH (2 x 425 mi) y se secó por aire para dar terc-butil terc-butoxicarbonil (3- (3- (4- ( ( (terc-butoxicarbonil) (tetrahidro-2fí-piran-4-il) amino) metil) fenil) isoxazol-5-il) -5- (4- ( isopropilsulfonil) fenil) pirazin-2-il) carbamato (A-6) como un polvo beige. El sólido se disolvió en THF (2.13 1) y se suspendió con resina MP-TMT de Biotage (48 g) a temperatura ambiente. La resina se eliminó por filtración y el filtrado se concentró para eliminar la mayor parte del THF. El concentrado se diluyó con EtOH (970 mi) y se volvió a concentrar hasta aproximadamente la mitad del volumen original. El concentrado se diluyó nuevamente con EtOH (970 mi) y se mezcló durante 1 h a 40 °C. La suspensión se enfrió a temperatura ambiente, el sólido se colectó por filtración y, después, se secó para dar terc-butil tercbutoxicarbonil (3- (3- (4- ( ( (terc-butoxicarbonil) (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) metil) fenil) isoxazol-5-il) -5 - (4-(isopropilsulfonil) fenil)pirazin-2-il) carbamato (A-6) (416 g; rendimiento 86 %, pureza por HPLC 99.3 % área) como un polvo blanco. ? NMR (400 MHz , CDC13) d 9.04 (s, 1H) , 8.38 - 8.28 (m, 2H) , 8.10 - 8.01 (m, 2H) , 7.82 (d, J = 8.2 Hz, 2H) , 7.34 (m, 3H) , 4.44 (br s, 2H) , 3.94 (dd, J = 10.5, 3.5 Hz, 2H) , 3.40 (br s, 2H) , 3.25 (hept, J = 6.8 Hz, 1H) , 1.65 (m, 4H) , 1.38 (br s, 27H) , 1.33 (d, J = 6.9 Hz, 6H) .

Etapa 7: preparación de la forma base libre de 5- (4-(isopropilsulfonil) fenil) -3- (3- (4- ( ( (tetrahidro-2fí-piran-4-il) amino) metil) fenil) isoxazol-5-il) pirazin-2 -amina (1-3) En un matraz se agitó una suspensión de tere-butil terc-butoxicarbonil (3- (3- (4- ( ( (terc-butoxi carbón i 1 ) ( tetrahidro- 2H-piran- 4 -i 1 ) amino )metil) fenil) isoxazol-5-il) -5- ( 4 -( isopropilsulf onil ) fenil ) pirazin-2 - il ) carbamato (A-6) (410 g; 492 mmol) en CH2Cl2 (410 mi) a temperatura ambiente. Se añadió TFA (841 g, 568 mi; 7.4 mol) , mientras la temperatura de reacción se mantuvo entre 20-25 °C. La solución se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 3 h, cuando el análisis mostró la finalización de la reacción. La solución se enfrió hasta aproximadamente 5-10 °C y se diluyó con EtOH (3.3 1) , mientras la temperatura se mantuvo por debajo de 20 °C. Se añadió una solución acuosa de NaOH 5.0 M (1.77 1; 8.85 mol) , mientras la temperatura de reacción se dejó elevar de aproximadamente 14 °C a aproximadamente 42 °C. La suspensión se calentó a 70 - 75 °C durante 6 h, con eliminación simultánea del destilado. La suspensión se dejó enfriar hasta temperatura ambiente. El sólido se colectó por filtración y la torta del filtro se lavó con agua (4 x 1.64 1) . La torta del filtro se lavó con EtOH (2 x 820 mi) y se secó para dar 5- (4-( isopropilsulfonil) fenil)-3-(3-(4-(( ( tetrahidro -2H-pi ran-4 - i 1 ) amino ) met i 1 ) feni 1 ) i soxazol - 5 - i 1 ) piraz in - 2-amina (compuesto 1-1) (257 g ; rendimiento 98 %, pureza por HPLC 99.5 % área) como un polvo amarillo.

XH NMR (400 MHz , DMSO) d 8.94 (s, 1H), 8.44 - 8.33 (m, 2H) , 7.94 (t, J" = 8.2 Hz, 4H), 7.76 (s, 1H), 7.53 (d, J" = 8.2 Hz, 2H), 7.20 (s, 2H), 3.83 (m, 1H), 3.80 (s, 3H) , 3.46 (hept, J = 6.8 Hz, 1H) , 3.25 (td, J = 11.4, 2.1 Hz, 2H) , 2.66 - 2.54 (m, 1H), 1.79 (br dd, 2H) , 1.36 - 1.22 (m, 2H), 1.19 (d, J" = 6.8 Hz, 6H) . 13C NMR (101 MHz, DMSO) d 167.57, 151.76, 141.07, 137.58, 135.75, 129.16, 128.53, 126.57, 126.41, 125.69, 124.52, 102.13, 65.83, 54.22, 52.60, 49.19, 33.18, 15.20.

Datos analíticos de los compuestos 5 Intermedios Ejemplo 8: preparación de la oxima 5a ESQUEMA DE REACCIÓN BB Etapa Ib En un reactor a 20 °C se añadió MeOH (28.00 1) y -( dietoximetil ) benzaldehído (compuesto Ib) (3.500 g, 16.81 moles) . Se añadió metilamina al 33 % en EtOH (1.898 kg, 2.511 1 de 33 % p/p, 20.17 moles) mientras se mantuvo a 20-30 °C y, después, se agitó durante 1.5 h para formar la imina. Se añadieron cápsulas de NaBH4 (381.7 g, 10.09 mol) y la temperatura se mantuvo entre 20 - 30 °C. Se agitó a temperatura ambiente durante al menos 30 minutos para asegurar reacción completa. Se añadió NaOH acuoso (16.81 1 de 2.0 M, 33.62 moles) y se mantuvo a aproximadamente 20 °C. Se añadió MTBE (17.50 1) y salmuera (7.0 1), se agitó durante al menos 5 min y, después, se dejó que las fases se separaran. La capa acuosa se extrajo con MTBE (7.0 1), después, las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (3.5 1) y, después, se secaron (Na2S04) y se concentraron hasta 6 1. La mezcla bifásica se transfirió a un embudo de decantación y se eliminó la fase acuosa. La fase orgánica se concentró para dar 1- (4- (dietoximetil ) fenil) -N-metilmetanamina (compuesto 2b) (3755 g, 16.82 mol, rendimiento 100 %) como un aceite. XH NMR (400 MHz, CDC13) d 7.43 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 7.31 (d, J = 8.1 Hz , 2H) , 5.49 (s, 1H) , 3.75 (s, 2H) , 3.68 - 3.46 (m, 4H) , 2.45 (s, 3H) , 1.23 (t, J = 7.1 Hz, 6H) .

Etapas 2b y 3b A un reactor a 20 °C se añadió 2-MeTHF (15.00 1) y 1- (4- (dietoximetil) fenil) -N-metilmetanamina (compuesto 2b) (3.750 g, 16.79 moles). Se añadió una solución de Boc anhídrido (3.848 kg, 4.051 1, 17.63 mol) en 2-MeTHF (7.500 1) y se mantuvo a aproximadamente 25 °C. Se agitó durante al menos 30 minutos para asegurar la conversión completa a terc-butil 4- (dietoximetil) bencil (metil) carbamato (compuesto 3b), después, se agregó una solución de Na2S04 (1.192 kg, 8.395 mol) en agua (11.25 1). Se calentó hasta 35 °C y, después, se añadió una solución de clorhidrato de hidroxilamina (1.750 kg, 25.18 moles) en agua (3.75 1) ; posteriormente, se agitó durante al menos 6 h para asegurar reacción completa. Se enfrió hasta 20 °C, se detuvo la agitación y se extrajo la fase acuosa. La capa orgánica se lavó con salmuera (3.75 1), se secó (Na2S04) , se filtró y se concentró hasta aproximadamente 9 1. Se añadió heptano (15.00 1) y te.rc-butil 4 -( (hidroxiimino) metil) bencil (metil ) carbamato cristalino (compuesto 5a) (porciones de 1.0 g cada 10 minutos) hasta que la nucleación fue evidente, después, se concentró para dar una suspensión acuosa sólida. Se añadió heptano (3.75 1), después, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. Se lavó con heptano (5.625 1) y, después, se secó para dar terc-butil 4- ( (hidroxiimino) metil) bencil (metil) carbamato (compuesto 5a) (4023 g, 15.22 mol, rendimiento 91 %, pureza por HPLC 97.2 % área) como un sólido incoloro. ¾ NMR (400 MHz, CDC13) d 8.13 (s, 1H) , 7.54 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 7.25 (br d, 2H) , 4.44 (br s, 2H) , 2.83 (br d, 3H) , 1.47 (br s, 9H) .

Esquema de reacción CC : síntesis del intermediario ?-4-ii ión con Boc C-3 A-4-Ü El compuesto de fórmula ?-4-ii puede elaborarse de acuerdo con las etapas descritas en el Esquema de reacción C. Las reacciones de acoplamiento de Sonogashira son conocidas en la materia (ver, por ejemplo, Chem. Rev . 2007, 874-922) . En algunas modalidades, las condiciones de acoplamiento de Sonogashira adecuadas comprenden añadir 1 equivalente del compuesto de fórmula C - l , 1 equivalente de TMS-acetileno , 0.010 equivalentes de Pd(Pf3)2Cl2, 0.015 equivalentes de Cul y 1.20 equivalentes de NMM en isopropanol . El producto se puede aislar mediante la adición de agua a la mezcla de reacción alcohol ica .

Las sales de amina de un producto se forman por medio de disolver la amina en un solvente orgánico común y añadir un ácido. Los ejemplos de solventes adecuados incluyen solventes clorados (por ejemplo, diclorometano (DCM) , dicloroetano (DCE) , CH2C12 y cloroformo) , éteres (por ejemplo, THF, 2-MeTHF y dioxano) , esteres (por ejemplo, EtOAc , IPAC) y otros solventes apróticos. Los ejemplos de ácidos adecuados incluyen, pero no se limitan a, HC1, H3PO4, H2SO4, MSA y PTSA. En algunas modalidades, el solvente es IPAC y el ácido es PTSA. En algunas modalidades, la sal ácida de adición se convierte nuevamente a la base amina libre en presencia de un solvente adecuado y una base adecuada. Los solventes adecuados incluyen EtOAc, IPAC, diclorometano (DCM), dicloroetano (DCE), CH2C12, cloroformo, 2-MeTHF, y las bases adecuadas incluyen NaOH, NaHC03, Na2C03, KOH, KHC03 , K2C03 y Cs2C03. En algunas modalidades, el solvente adecuado es EtOAc y la base adecuada es KHC03.

La amina del compuesto C-2 puede protegerse con diversos grupos protectores de amina, tales como Boc (terc-butoxicarbonilo) . La introducción de grupos protectores Boc es conocida en la materia (ver, por ejemplo, Protectxng Groups en Organic Synthesis, Greene y Wuts) . En algunas modalidades, las condiciones adecuadas implican añadir 1.00 equivalente de la amina, 2.10 equivalentes de dicarbonato de di -tere -butilo y 0.03 equivalentes de DMAP en EtOAc .

La reducción en Pd se logra por tratamiento con un secuestrador de metales (gel de sílice, resinas funcionalizadas , carbón vegetal) . En algunas modalidades, las condiciones adecuadas implican añadir carbón vegetal.

El grupo protector TMS (trimetilsililo) del compuesto C-3 puede eliminarse mediante condiciones conocidas para un experto en la materia. En algunas modalidades, las condiciones de eliminación del TMS comprenden hacer reaccionar el compuesto protegido con TMS con una base adecuada en un solvente adecuado. Los ejemplos de solventes adecuados incluyen solventes clorados (por ejemplo, diclorometano (DCM) , dicloroetano (DCE) , CH2C12 y cloroformo) , éteres (por ejemplo, THF , 2-MeTHF y dioxano) , esteres (por ejemplo, EtOAc, IPAC) , otros solventes apróticos y solventes alcohólicos (por ejemplo, MeOH, EtOH, iPrOH) . Los ejemplos de bases adecuadas incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, NaOH, KOH, K2C03, Na2C03. En ciertas modalidades, las condiciones adecuadas comprenden añadir 1.00 equivalente del acetileno protegido por TMS, 1.10 equivalentes de K2C03, EtOAc y EtOH. En algunas modalidades, el solvente alcohólico, tal como EtOH, es el último que se añade a la reacción. En algunas modalidades, el producto acetileno se aisla mediante la adición de agua.

Esquema de reacción DD: síntesis ilustrativa del compuesto 4-ii 1. EtOAc, ac. KHC03 2. B0C2O, cat. D AP, EtOAc 3. Carbón vegetal «? C-1 (65-75%) C-2 (95-100%) C-3 ?-4-ii Ejemplo 9: síntesis del compuesto ?-4-ii ?-4-ii Etapa 1 : preparación de 5-bromo- 3 - ( (trimetilsilil) etinil) pirazin- 2-amina (compuesto C- 2 ) C-1 (65-75%) c-2 En un reactor se cargó isopropanol (8.0 1), agitó y se burbujeó con una corriente de N2. Al reactor se añadió 3, 5-dibromopirazin-2-amina (compuesto C-l) (2000 g, 7.91 moles), Pd(Pf3)2Cl2 (56 g, 0.079 moles), Cul (23 g, 0.119 moles) y NMM (1043 mi, 9.49 moles) bajo una atmósfera de N2. La temperatura de reacción se ajustó a 25 °C. El reactor se purgó con N2 mediante al menos tres ciclos de purga vacío/N2. A la mezcla de reacción se cargó TMS-acetileno (1.12 1, 7.91 moles) y la temperatura de reacción se mantuvo por debajo de 30 °C. Cuando la reacción se completó, la temperatura de la mezcla de reacción se bajó hasta 15 °C, después, se añadió agua (10 1) y se agitó durante al menos 2 h. El sólido se colectó por filtración y se lavó con IPA/agua 1:1 (2 x 6 1). La torta del filtro se secó al vacío, después se cargó en un reactor y se disolvió en EtOAc (12.5 1). Se cargó PTSA hidratado como sólido (1.28 kg, 6.72 mol) en el reactor. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante al menos 5 h, después, el sólido se colectó por filtración y se lavó con heptano/EtOAc 1:1 (3.5 1) seguido de heptano (3.5 1). La torta del filtro se secó para dar 5-bromo-3-( (trimetilsilil ) etinil ) pirazin-2 -amina (compuesto C-2) como sal de PTSA (2356 g, rendimiento 67 %, pureza por HPLC 98.9 % área). XH NMR (400 MHz, DMSO) d 8.12 (s, 1H) , 7.48 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 7.12 (d, J" = 8.0 Hz, 2H) , 2.29 (s, 3H) , 0.26 (s, 9H) .

Etapas 2 y 3 1. EtOAc, ac. KHC03 Etapa 2: preparación de terc-butil N- fcerc-butoxicarbonil-iy- [5-bromo-3- ( (trimetilsilil) etinil) pirazin-2-il] carbamato (compuesto C-3) Se agitó una solución de sal de PTSA de 5-bromo-3- ( (trimetilsilil) etinil) irazin-2 -amina (compuesto C-2) (2350 g, 5.31 mol) en EtOAc (11.5 1) con una solución acuosa de KHCO3 20 % p/p (4.5 kg, 1.5 eq.) por al menos 30 min. Las capas se separaron y la capa orgánica se concentró, después, se disolvió en EtOAc (7 1) y se añadió a un reactor. Se añadió lentamente DMAP (19.5 g, 0.16 mol) seguido de una solución de Boc20 (2436 g, 11.16 mol) en EtOAc (3 1). La reacción se agitó durante al menos 30 minutos para asegurar reacción completa, después, se añadió carbón vegetal (Darco G-60, 720 g) y Celite (720 g) y se agitó durante al menos 2 h. La mezcla se filtró y la almohadilla del sólido se lavó con EtOAc (2 x 1.8 1). El filtrado se concentró para dar terc-butil N- terc-butoxicarbonil-N- [5-bromo-3- ( (trimetilsilil) etinil) pirazin-2-il] carbamato (compuesto C-3) que se usó directamente en la etapa siguiente.

Etapa 3: preparación de terc-butil N- (5-bromo-3- etinilpirazin-2-il) -N-terc-butoxicarbonilcarbamato (compuesto ?-4-ii) En un reactor se cargó K2C03 (811 g, 5.87 mol) seguido de una solución del compuesto C-3 (2.300 g, 4.89 moles) disuelto en EtOAc (4.6 1) y se inició la agitación. Se añadió lentamente EtOH (9.2 1) y la mezcla se agitó durante al menos 1 h para asegurar que la reacción fuera completa, después, se añadió agua (4.6 1) y se agitó durante al menos 2 h. El sólido se colectó por filtración y se lavó con EtOH/agua 1:1 (4.6 1 seguido de 2.3 1) y, después, EtOH (2.3 1). La torta del filtro se secó para dar terc-butil N- (5-bromo-3-etinilpirazin-2-il) -iV-terc-butoxicarbonilcarbamato (compuesto ?-4-ii) (1568 g, rendimiento 78 %, 97.5 % área por HPLC) . XH NMR (400 MHz , CDC13) d 8.54 (s, 1H) , 3.52 (s, 1H) , 1.42 (s, 18H) .

Formas sólidas del compuesto 1-2 El compuesto 1-2 se preparó en diversas formas sólidas, que incluyen sales y cosolvatos . Las formas sólidas de la presente invención son útiles en la fabricación de medicamentos para el tratamiento del cáncer. Una modalidad proporciona el uso de una forma sólida descrita en la presente para tratar el cáncer. En algunas modalidades, el cáncer es cáncer pancreático o cáncer de pulmón de células no pequeñas. Otra modalidad proporciona una composición farmacéutica que comprende una forma sólida descrita en la presente descripción y un portador farmacéuticamente aceptable .

En la presente descripción, los solicitantes describen cinco formas sólidas novedosas del compuesto 1-2. Los nombres y la estequiometría de cada una de estas formas sólidas se proporcionan en la Tabla S-l: Tabla S-l Los espectros de NMR de estado sólido se adquirieron en el espectrómetro Advance III de 400 MHz de campo magnético ancho de Bruker-Biospin, equipado con sonda HFX de 4 mm de Bruker-Biospin. Las muestras se empacaron en rotores de Zr02 de 4 mm (aproximadamente 70 mg o menos, en función de la disponibilidad de la muestra) . Se aplicó una velocidad de rotación al ángulo mágico (MAS) de, típicamente, 12.5 kHz . La temperatura del cabezal de la sonda se fijó en 275 K para minimizar el efecto del calentamiento por fricción durante la rotación. Se midió el tiempo de relajación en protón mediante el experimento de recuperación de saturación para la relajación TI en 1H MAS, para configurar el retraso de reciclaje adecuado del experimento 13C polarización cruzada (CP) MAS. El tiempo mínimo del experimento 13C CPMAS se ajustó a un valor al menos 1.2 veces mayor que el tiempo de relajación TI en 1H, para maximizar la relación señal-ruido del espectro de carbono. El tiempo de contacto de la CP en el experimento 13C CPMAS se fijó en 2 ms . Se empleó un pulso en protón CP con rampa lineal (de 50 % a 100 %). El ajuste de Hartmann-Hahn se optimizó en la muestra de referencia externa (glicina) . Los espectros de carbono se adquirieron con SPINAL 64 y se desacopló con una intensidad de campo de aproximadamente 100 kHz . El desplazamiento químico se midió frente al estándar externo adamantano, con su resonancia campo arriba fijada en 29.5 ppm.

Los datos de XRPD de los Ejemplos 13-14 se midieron en un sistema Advance D8 de Bruker (activo V014333) equipado con una fuente de tubo sellado de Cu y un detector Vantec-1 (Bruker AXS, Madison, WI) a temperatura ambiente. El generador de rayos X se operó a un voltaje de 40 kV y una corriente de 40 mA. La muestra de polvo se colocó en un portamuestras de silicio de poca profundidad. Los datos se registraron en un modo de barrido por reflexión (acoplado bloqueado) en el intervalo de 2 theta de 3 o -40°, con un tamaño de paso de 0.0144° y un tiempo de permanencia de 0.25 s (105 s por paso) . Se usaron rendijas de divergencia variable .

Ejemplo 10: compuesto 1-2 (base libre) La base libre del compuesto 1-2 puede formarse de acuerdo con los métodos descritos en el Ejemplo 6, Etapa 4: Método alternativo 1.

XRPD del compuesto 1-2 (base libre) La Figura la muestra el difractograma de rayos X de polvos de una muestra que es característica de un fármaco cristalino .

Picos de XRPD representativos de la base libre del compuesto 1-2: Análisis térmico de la base libre del compuesto 1-2 Se realizó un análisis termogravimétrico de la base libre del compuesto 1-2 para determinar el porcentaje de pérdida de peso en función del tiempo. La muestra se calentó desde la temperatura ambiente hasta 350 °C a una velocidad de 10 °C/min en un TGA Q5000 de TA Instruments (activo V014258) .

La Figura 2a muestra el resultado del TGA con una pérdida de peso en una etapa antes de la evaporación o la descomposición térmica. Desde la temperatura ambiente hasta 215 °C, el peso fue -1.9 %.

Calorimetría diferencial de barrido de la base libre del compuesto 1-2 Las propiedades térmicas de la base libre del compuesto 1-2 se midieron con un DSC Q2000 de TA Instruments (activo V014259) . Se pesó una muestra de la base libre del compuesto 1-2 (1.6900 mg) en un platillo hermético de aluminio con orificios preperforados y se calentó desde la temperatura ambiente hasta 350 °C a 10 °C/min. Se observó un pico endotérmico a 210 °C, con una temperatura de inicio a 201 °C (Figura 3a) . La entalpia asociada con el pico endotérmico fue de 78 J/g.

NMR de estado sólido de la base libre del compuesto 1-2 13C CPMAS de la base libre del compuesto 1-2 275K; 1H Tl=1.30s giro a 12.5 kHz; ref. adamantano 29.5 ppm Ver el espectro completo en la Figura 4c.

Picos representativos Estructura cristalina de la base libre del compuesto 1-2 Se preparó la forma libre del compuesto 1-2 a partir de la sal HCl del compuesto 1-2 Se añadió 200 mg de la sal HCl del compuesto 1-2 a 1 mi de solución de NaOH 6 N. Se usó 20 mi de diclorometano para extraer la forma libre. La capa de diclorometano se secó sobre K2C03. La solución se separó por filtración y se añadió 5 mi de n-heptano a esta. Los cristales se obtuvieron por evaporación lenta de la solución a temperatura ambiente durante la noche.

La mayoría de los cristales obtenidos eran placas delgadas. Entre ellas, se encontraron algunos cristales de forma prismática.

Se seleccionó un cristal prismático amarillo con dimensiones de 0.2x 0.1x0.1 mm3, se montó en un icroMount y se centró en un difractómetro APEX II de Bruker. Para proporcionar una matriz de orientación y parámetros iniciales de celda, se obtuvieron tres lotes de 40 fotogramas separados en el espacio recíproco. Se obtuvieron los parámetros finales de celda y la recopilación de datos después del refinado se completó en base a la totalidad del conjunto de datos.

Se obtuvo un conjunto de datos de difracción de espacio recíproco a una resolución de 116.96° del ángulo 2T mediante el uso de pasos de 0.5° con una exposición de 10 s para cada fotograma. Los datos se colectaron a una temperatura de 100 (2) K con un criosistema de flujo de nitrógeno. La integración de las intensidades y el refinado de los parámetros de celda se realizaron mediante el uso del software APEXII.

Datos de los cristales Ejemplo 11: compuesto 1-2 · HCl El compuesto 1-2 · HCl puede formarse de acuerdo con los métodos descritos en el Ejemplo 6, Etapa 4: Método alternativo 2 y Ejemplo 6, Etapa 5.

XRPD del compuesto 1-2 · HCl La Figura Ib muestra el difractograma de rayos X de polvos de una muestra que es característica de un fármaco cristalino .

Picos de XRPD representativos del compuesto 1-2 · HC1 Análisis térmico del compuesto 1-2 » HC1 Se realizó un análisis termogravimétrico del compuesto 1-2 · HC1 para determinar el porcentaje de pérdida de peso en función del tiempo. La muestra se calentó desde la temperatura ambiente hasta 350 °C a una velocidad de 10 °C/min en un TGA Q5000 de TA Instruments (activo V014258). La Figura 2b muestra el resultado del TGA con una pérdida en peso de dos etapas antes de la evaporación o la descomposición térmica. Desde la temperatura ambiente hasta 100 °C, el peso fue de -1.1 %, y desde 110 °C hasta 240 °C la pérdida de peso fue de ~0.8 %.

Calorimetría diferencial de barrido del compuesto 1-2 * HC1 Las propiedades térmicas del compuesto 1-2 · HC1 se midieron con un DSC Q2000 de TA Instruments (activo V014259) . Se pesó una muestra del compuesto 1-2 · HC1 (3.8110 mg) en un platillo hermético de aluminio con orificios preperforados y se calentó desde temperatura ambiente hasta 350 °C a 10 °C/min. Se observó un pico endotérmico a 293 °C, con una temperatura de inicio a 291 °C (Figura 3b) . La entalpia asociada con el pico endotérmico fue de 160.3 J/g. El segundo pico endotérmico fue a aproximadamente 321 °C. Ambos picos se acoplaron con la evaporación y la descomposición de la muestra .

NMR de estado sólido del compuesto 1-2 * HCl 15CPMAS del compuesto 1-2 · HCl 275 K; giro a 12.5 kHz; ref. adamantano 29.5 ppm Ver el espectro completo en la Figura 4d Picos representativos Estructura cristalina del compuesto 1-2 · HC1 Se añadió 180 mg del compuesto 1-2 · HC1 a un vial con 0.8 mi de 2 -propanol y 0.2 mi de agua. El vial sellado se mantuvo en un horno a 70 °C durante dos semanas. Se observaron cristales de calidad de difracción.

Se seleccionó un cristal amarillo en forma de aguja con dimensiones de 0.15x 0.02x0.02 mm3, se montó en un MicroMount y se centró en un difractómetro APEX II de Bruker (V011510) . Para proporcionar una matriz de orientación y parámetros iniciales de celda, se obtuvieron tres lotes de 40 fotogramas separados en el espacio recíproco. Se obtuvieron los parámetros finales de celda y el refinado se completó en base a la totalidad del conjunto de datos.

Se obtuvo un conjunto de datos de difracción de espacio recíproco a una resolución de 116.96° del ángulo 2T mediante el uso de pasos de 0.5°, con una exposición de 20 s por fotograma para fotogramas de ángulo bajo y 60 s por fotograma para fotogramas de ángulo alto. Los datos se recolectaron a temperatura ambiente.

Para obtener los datos de la Tabla 1, se hizo circular nitrógeno seco sobre los cristales a una velocidad de 6 litros/min para eliminar la humedad ambiental. Los datos de la Tabla 2 se obtuvieron sin nitrógeno. La integración de las intensidades y el refinado de los parámetros de celda se realizaron mediante el uso del software APEXII. La ocupación de agua puede variar entre 0 y 1.

Análisis elemental de CHN El análisis elemental de CHN del compuesto 1-2 · HCl sugiere una sal de mono HCl .

Ejemplo 12: compuesto 1-2 · 2HC1 El compuesto 1-2 · 2HC1 puede formarse de acuerdo con los métodos descritos en el Ejemplo 6, Etapa 4.

XRPD del compuesto 1-2 · 2HC1 Los patrones de XRPD se adquirieron a temperatura ambiente en modo de reflexión mediante el uso de un sistema Discover D8 de Bruker (etiqueta de activo V012842) equipado con una fuente de tubo sellado y un detector de área Hi-Star (Bruker AXS, Madison, WI) . El generador de rayos X se operó a un voltaje de 40 kV y una corriente de 35 mA. La muestra de polvo se colocó en un portamuestra de níquel. Se registraron dos fotogramas con un tiempo de exposición de 120 s cada uno. Posteriormente, los datos se integraron en el intervalo de 2 theta de 4.5°-39°, con un tamaño de paso de 0.02° y se combinaron en un patrón continuo.

La Figura le muestra el difractograma de rayos X de polvos de una muestra que es característica de un fármaco cristalino .

Picos de XRPD representativos del compuesto 1-2 · 2HC1 Análisis térmico del compuesto 1-2 * 2HC1 Se realizó un análisis termogravimét rico del compuesto 1-2 · 2HC1 en el modelo TGA Q5000 de TA Instruments. El compuesto 1-2 · 2HC1 se colocó en un platillo portamuestras de platino y se calentó a 10 °C/min desde la temperatura ambiente hasta 350 °C. La Figura 2c muestra el resultado del TGA, el que indica una pérdida de peso de 7.0 % desde la temperatura ambiente hasta 188 °C, lo cual es consistente con la pérdida de 1 equivalente de HCl (6.8 %) . La temperatura de inicio de la degradación/fusión es de 263 °C.

Calorimetría diferencial de barrido del compuesto 1-2 · 2HC1 Se obtuvo un termograma DSC del lote 3 del fármaco compuesto 1-2 · 2HC1 mediante el uso del DSC Q2000 de TA Instruments. El compuesto 1-2 · 2HC1 se calentó a 2 °C/min desde -20 °C hasta 275 °C y se moduló a ± 1 °C cada 60 s. El termograma de DSC (Figura 3c) revela un pico endotérmico por debajo de 200 °C, lo que podría corresponder a la pérdida de 1 equivalente de HCl . La fusión/recristalización se produce entre 215-245 °C, seguida de la degradación.

NMR de estado sólido del compuesto 1-2 * 2HC1 13C CPMAS del compuesto 1-2 · 2HC1 275 K; 1H Tl=1.7 s giro a 12.5 kHz; ref. adamantano 29.5 ppm Ver el espectro completo en la Figura 4e.

Estructura cristalina del compuesto 1-2 ¦ 2HC1 Se añadió 180 mg del compuesto 1-2 · HCl a un vial con 0.8 mi de 2 -propanol y 0.2 mi de agua. El vial sellado se mantuvo en un horno a 70 °C durante dos semanas. Se observaron cristales de calidad de difracción.

Se seleccionó un cristal amarillo en forma de aguja con dimensiones de 0.15x 0.02x0.02 mm3, se montó en un MicroMount y se centró en un difractómetro APEX II de Bruker (V011510) . Para proporcionar una matriz de orientación y parámetros iniciales de celda, se obtuvieron tres lotes de 40 fotogramas separados en el espacio recíproco. Se obtuvieron los parámetros finales de celda y el refinado se completó en base a la totalidad del conjunto de datos.

Se obtuvo un conjunto de datos de difracción de espacio recíproco a una resolución de 116.96° del ángulo 2T mediante el uso de pasos de 0.5° con una exposición de 20 s por fotograma para fotogramas de ángulo bajo y 60 s por fotograma para fotogramas de ángulo alto. Los datos se colectaron a temperatura ambiente. Se hizo circular nitrógeno seco sobre los cristales a una velocidad de 6 litros/min para eliminar la humedad ambiental. La integración de las intensidades y el refinado de los parámetros de celda se realizaron mediante el uso del software APEXII .

Datos de los cristales Ejemplo 13: compuesto 1-2 · HCl * H20 El compuesto 1-2 · HCl» H20 puede formarse a partir del compuesto 1-2 · 2 HCl. (E29244-17) Se calentó una suspensión del compuesto 1-2 · 2 HCl (10.0 g, 18.6 mmol) en alcohol isopropílico (40 mi) y agua (10 mi) a 50 °C durante aproximadamente 1 h y, después, se enfrió hasta por debajo de 10 °C. El sólido se colectó por filtración. La torta del filtro se lavó con alcohol isopropílico/agua 80/20 (2 x 10 mi) y se secó con aire para dar el compuesto 1-2 · HCl» 2H20 como un polvo amarillo.

XRPD del compuesto 1-2 » HCl » H20 Los patrones de XRPD se adquirieron a temperatura ambiente en modo de reflexión mediante el uso de un sistema Discover D8 de Bruker (etiqueta de activo V012842) equipado con una fuente de tubo sellado y un detector de área Hi-Star (Bruker AXS, Madison, WI) . El generador de rayos X se operó a un voltaje de 40 kV y una corriente de 35 mA. La muestra de polvo se colocó en un portamuestra de níquel. Se registraron dos fotogramas con un tiempo de exposición de 120 s cada uno. Posteriormente, los datos se integraron en el intervalo de 2 theta de 4.5°-39°, con un tamaño de paso de 0.02° y se combinaron en un patrón continuo.

La Figura Id muestra el difractograma de rayos X de polvos de una muestra que es característica de un fármaco cristalino.

Picos de XRPD representativos del compuesto Análisis térmico del compuesto 1-2 * HC1 * H20 El análisis termogravimét rico (TGA) del compuesto 1-2 · HC1 · H20 se realizó en el modelo TGA Q5000 de TA Instruments. El compuesto 1-2 · HCl · H20 se colocó en un platillo portamuestra de platino y se calentó a 10 °C/min desde la temperatura ambiente hasta 400 °C. El termograma (Figura 2d) muestra una pérdida de peso de 2.9 % desde la temperatura ambiente hasta 100 °C, y una pérdida de peso de 0.6 % desde 100 °C hasta 222 °C, lo cual es consistente con un monohidrato teórico (3.5 %) .

Calorimetría diferencial de barrido del compuesto 1-2 · HCl · H20 Se obtuvo un termograma DSC del compuesto 1-2 • HCl · H20 mediante el uso del DSC Q2000 de TA Instruments. El compuesto 1-2 · HCl · H20 se calentó a 2 °C/min desde -20 °C hasta 275 °C y se moduló a ± 1 °C cada 60 sec . El termograma de DSC (Figura 3d) revela un pico endotérmico por debajo de 200 °C( lo que podría corresponder a la pérdida de 1 equivalente de HCl. La f sión/recristalización se produce entre 215-245 °C, seguida de degradación.

Ejemplo 14: compuesto 1-2 * HCl · 2H20 El compuesto 1-2 · HCl» 2H20 puede formarse a partir del compuesto 1-2 · 2 HCl. (E29244-17) Se calentó una suspensión del compuesto 1-2 · 2 HCl (10.0 g, 18.6 mmol) en alcohol isopropílico (40 mi) y agua (10 mi) a 50 °C durante aproximadamente 1 h y, después, se enfrió hasta por debajo de 10 °C. El sólido se colectó por filtración. La torta del filtro se lavó con alcohol isopropí lico/agua 80/20 (2 x 10 mi) y se secó con aire para dar el compuesto 1-2 · HC1« 2H20 como un polvo amarillo.

XRPD del compuesto 1-2 · HCl · 2H20 Las mediciones de difracción de rayos X de polvos se realizaron mediante el uso del difractómetro X-pert Pro de PANalytical a temperatura ambiente con radiación de cobre (1.54060 °A) . El haz óptico incidente estaba compuesto de una ventana de divergencia variable para asegurar una longitud iluminada constante sobre la muestra, y en el lado del haz difractado se usó un detector lineal rápido de estado sólido, con una longitud activa de 2.12 grados 2 theta medida en un modo de barrido. La muestra de polvo se empacó en el área dentada de un portamuestras de silicio de fondo cero y el giro se realizó de modo de lograr mejores estadísticas. Se midió un barrido simétrico a partir de 4 - 40 grados 2 theta con un tamaño de paso de 0.017 grados y un tiempo de paso de barrido de 15.5 s.

La Figura Id muestra el difractograma de rayos X de polvos de una muestra que es característica de un fármaco cristalino.

Picos de XRPD representativos del compuesto 1-2 · Análisis térmico del compuesto 1-2 · HCl · 2HzO Los termogramas del TGA (análisis termogravimétrico) se obtuvieron mediante el uso de un TGA Q500 de TA Instruments, a una velocidad de barrido de 10 °C/min sobre un intervalo de temperatura de 25-300 °C. En el análisis de TGA, las muestras se colocaron en un platillo abierto. El termograma muestra una pérdida de peso de ~6 desde la temperatura ambiente hasta 100 °C, lo cual es consistente con un dihidrato teórico (6.7 %) .

Calorimetría diferencial de barrido del compuesto 1-2 · HCl · 2H20 Se obtuvo un termograma de DSC (calorimetría diferencial de barrido) mediante el uso de un DSC Q2000 de TA Instruments a una velocidad de barrido de 10 °C/min sobre un intervalo de temperatura de 25-300 °C. Para el análisis de DSC, las muestras se pesaron en platillos herméticos de aluminio T-cero que se sellaron herméticamente y se punzaron con un solo orificio. El termograma de DSC reveló deshidratación entre la temperatura ambiente y 120 °C, seguida de fusión/recristalización entre 170-250 °C.

Estructura cristalina del compuesto 1-2 · HCl con agua Se añadió 180 mg del compuesto 1-2 · HCl a un vial con 0.8 mi de 2 -propanol y 0.2 mi de agua. El vial sellado se mantuvo en un horno a 70 °C durante dos semanas. Se observaron cristales de calidad de difracción.

Se seleccionó un cristal amarillo en forma de aguja con dimensiones de 0.15x 0.02x0.02 mm3, se montó en un MicroMount y se centró en un difractómetro APEX II de Bruker (V011510) . Después, la aguja se cubrió con un tubo Kapton con agua en su interior. El tubo se selló para garantizar que el cristal se equilibrara con el agua durante dos días antes de los experimentos de difracción. Para proporcionar una matriz de orientación y parámetros iniciales de celda, se obtuvieron tres lotes de 40 fotogramas separados en el espacio recíproco. Se obtuvieron los parámetros finales de celda y el refinado se completó en base a la totalidad del conjunto de datos .

Se obtuvo un conjunto de datos de difracción de espacio recíproco a una resolución de 116.96° del ángulo 2T mediante el uso de pasos de 0.5° con una exposición de 20 s por fotograma para fotogramas de ángulo bajo y 60 s por fotograma para fotogramas de ángulo alto. Los datos se colectaron a temperatura ambiente. La integración de las intensidades y el refinado de los parámetros de celda se realizaron mediante el uso del software APEXII.

Datos de los cristales Ejemplo 15: ensayo de inhibición de ATR celular.

Los compuestos se pueden analizar para determinar su capacidad para inhibir el ATR intracelular con el uso de un ensayo de microscopía por inmunofluorescencia para detectar la fosforilación de la histona del sustrato de ATR H2AX en células tratadas con hidroxiurea. Las células HT29 se colocan en placas a 14,000 células por pocilio en placas de imagen negras de 96 pocilios (BD 353219) en medio 5A de McCoy (Sigma M8403) suplementado con suero fetal bovino al 10 % (JRH Biosciences 12003) , solución de penicilina/estreptomicina diluida 1:100 (Sigma P7539) , y 2 mM de L-glutamina (Sigma G7513) y se dejó adherir de la noche a la mañana a 37 °C en C02 al 5 %. Después, los compuestos se añaden al medio celular desde una concentración final de 25 µ? en diluciones seriales de 3 veces y las células se incuban a 37 °C en C02 al 5 %. Después de 15 min se añade hidroxiurea (Sigma H8627) hasta una concentración final de 2 mM.

Después de 45 min de tratamiento con hidroxiurea, las células se lavan en PBS, se fijan por 10 min en formaldehído al 4 % diluido en PBS (Polysciences Inc 18814) , se lavan en Tween-20 al 0.2 % en PBS (regulador de lavado) y se permeabilizan por 10 min en Tritón X-100 al 0.5 % en PBS, todo a temperatura ambiente. Después, las células se lavan una vez en regulador de lavado y se bloquean por 30 min a temperatura ambiente en suero de cabra al 10 % (Sigma G9023) diluido en regulador de lavado (regulador de bloque) . Para detectar los niveles de fosforilación de H2AX, las células se incuban por 1 h a temperatura ambiente en anticuerpos primarios (anticuerpo monoclonal de ratón frente a la histona H2AX fosforilada en Serl39; Upstate 05-636) diluida 1:250 en regulador de bloque. Después, las células se lavan cinco veces en regulador de lavado antes de la incubación por 1 h a temperatura ambiente en la oscuridad en una mezcla de anticuerpo secundario (anticuerpo conjugado Alexa Fluor 488 anti-ratón de cabra; Invitrogen A11029) y tinción de Hoechst (Invitrogen H3570) ; diluidas 1:500 y 1:5000, respectivamente, en regulador de lavado. Después, las células se lavan cinco veces en regulador de lavado y, por último, se añade 100 ul de PBS en cada pocilio antes de tomar las imágenes.

Las células se captan en imágenes para determinar la intensidad de Hoechst y Alexa Fluor 488 con el uso del equipo BD Pathway 855 Bioimager y el software Attovision (BD Biosciences, versión 1.6/855) para cuantificar la H2AX Serl39 fosforilada y la tinción de ADN, respectivamente. Después, se calcula el porcentaje de núcleos positivos para la H2AX fosforilada en un montaje de 9 imágenes con una magnificación de 20x para cada pocilio con el uso del software BD Image Data Explorer (BD Biosciences Versión 2.2.15). Los núcleos H2AX-positivos fosforilados se definan como regiones de interés positivas a Hoechst que contienen la intensidad de Alexa Fluor 488 a 1.75 veces el promedio de la intensidad de Alexa Fluor 488 en células no tratadas con hidroxiurea. Por último, se gráfica el porcentaje de núcleos H2AX positivos en función de la concentración de cada compuesto y se determinan las IC50 para la inhibición de ATR intracelular con el uso del software Prism (GraphPad Prism versión 3.0cx para Macintosh, GraphPad Software, San Diego California, Estados Unidos) .

Los compuestos descritos en la presente descripción pueden probarse, además, de conformidad con otros métodos conocidos en la materia (ver, Sarkaria et al, "Inhibition of ATM and ATR Kinase Activities by the Radiosensitizing Agent, Caffeine: Cáncer Research 59: 4375-5382 (1999); Hickson et al, "Identification and Characterization of a Novel and Specific Inhibitor of the Ataxia-Telangiectasia Mutated Kinase ATM" Cáncer Research 64: 9152-9159 (2004); Kim et al, "Substrate Specificities and Identification of Putative Substrates of ATM Kinase Family Members" The Journal of Biological Chemistry, 274(53): 37538-37543 (1999); y Chiang et al, "Determination of the catalytic activities of mTOR and other members of the phosphoinositide-3-kinase-related kinase family" Metods Mol . Biol . 281:125-41 (2004)).

Ejemplo 16: ensayo de inhibición de ATR.

Los compuestos se analizaron para determinar su capacidad para inhibir la cinasa ATR con el uso de un ensayo de incorporación de fosfato radioactivo. Los ensayos se realizaron en una mezcla de Tris/HCl 50 mM (pH 7.5), MgCl2 10 mM y DTT 1 mM. Las concentraciones de sustrato finales fueron 10 µ? [g-33P]ATP (3mCi 33P ATP/mmol ATP, Perkin Elmer) y 800 µ? de péptido objetivo (ASELPASQPQPFSAKKK) .

Los ensayos se realizaron a 25 °C en presencia de 5 nM de ATR en toda su extensión. Se preparó una solución madre reguladora para ensayo que contenía todos los reactivos indicados anteriormente, excepto el ATP y el compuesto de interés para la prueba. Se colocó 13.5 µ? de la solución madre en una placa de 96 pocilios seguido de la adición de 2 µ? de solución madre de DMSO que contenía diluciones en serie del compuesto de prueba (que comenzaban, típicamente, a partir de una concentración final de 15 µ? con diluciones en serie de 3 veces) por duplicado (concentración final de DMSO: 7 %) . La placa se preincubó por 10 minutos a 25 °C y la reacción se inició por la adición de 15 µ? de [g-33P]ATP (concentración final de 10 µ?) .

La reacción se detuvo después de 24 horas por la adición de 30 µ? de ácido fosfórico 0.1 M que contenía 2 mM de ATP. Se trató previamente una placa de 96 pocilios con filtro de fosfocelulosa de análisis múltiple (Millipore, núm. de cat. MAPHN0B50) con 100 µ? de ácido fosfórico 0.2 M antes de la adición de 45 µ? de la mezcla de ensayo inactivada. La placa se lavó con 5 x 200 µ? de ácido fosfórico 0.2 M. Después del secado, se añadió en el pocilio 100 µ? de cóctel para escintilación de líquidos Optiphase 'SuperMix' (Perkin Elmer) antes del conteo por escintilación (1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter, Wallac) .

Después de eliminar los valores promedio de fondo de todos los puntos de datos se calcularon los datos de Ki (app) a partir del análisis de regresión no lineal de los datos de velocidad inicial con el uso del paquete de software Prism (GraphPad Prism versión 3. Ocx para Macintosh, GraphPad Software, San Diego California, Estados Unidos) .

Generalmente, los compuestos de la presente invención son efectivos para inhibir la ATR. Los compuestos 1-1, 1-2, II-l, II-2, II-3 y II-4 inhiben la ATR a valores de Ki menores que 0.001 µ?.

Ejemplo 17: ensayo de sensibilización de cisplatino Los compuestos se pueden analizar para determinar su capacidad para sensibilizar las células del cáncer colorectal HCT116 al cisplatino con el uso de un ensayo de viabilidad celular (MTS) de 96 horas. Las células HCT116 que tienen un defecto en la señalización de ATM al cisplatino (ver, Kim et al.; Oncogene 21:3864 (2002); ver, además, Takemura et al.; JBC 281:30814 (2006)) se colocan en placas a 470 células por pocilio en placas de poliestireno de 96 pocilios (Costar 3596) en 150 µ? de medio 5A de McCoy (Sigma M8403) suplementado con suero fetal bovino al 10 % (JRH Biosciences 12003) , solución de penicilina/estreptomicina diluida 1:100 (Sigma P7539) y L-glutamina 2 mM (Sigma G7513) y se dejan adherir durante la noche a 37 °C en C02 al 5 %. Después, los compuestos y el cisplatino se añaden simultáneamente en el medio celular en diluciones seriales de 2 veces a partir de una concentración final superior de 10 µ? como una matriz completa de concentraciones en un volumen celular final de 200 µ? y, después, las células se incuban a 37 °C en C02 al 5 %. Después de 96 h, se añade 40 µ? de reactivo MTS (Promega G358a) en cada pocilio y las células se incuban por l h a 37 °C en C02 al 5 %. Por último, se mide la absorbancia a 490 nm con el uso de un lector SpectraMax Plus 384 (Molecular Devices) y se puede reportar la concentración del compuesto necesaria para reducir la IC50 de cisplatino sola en al menos 3 veces (hasta 1 lugar decimal) .

Ejemplo 18: actividad del único agente HCT116 Los compuestos se pueden analizar para determinar la actividad de un solo agente contra las células del cáncer colorrectal HCT116 con el uso de un ensayo de viabilidad celular (MTS) de 96 horas. Las HCT116 se colocan en placas a 470 células por pocilio en placas de poliestireno de 96 pocilios (Costar 3596) en 150 µ? de medio 5A de McCoy (Sigma M8403) suplementado con suero fetal bovino al 10 % (JRH Biosciences 12003) , solución de penicilina/estreptomicina diluida 1:100 (Sigma P7539) y L-glutamina 2 mM (Sigma G7513) y se dejan adherir de la noche a la mañana a 37 °C en C02 al 5 %. Después, los compuestos se añaden en el medio celular en diluciones seriales de 2 veces a partir de una concentración final superior de 10 mM como una matriz completa de concentraciones en un volumen celular final de 200 µ? y, después, las células se incuban a 37 °C en C02 al 5 %. Después de 96 h, se añade 40 µ? de reactivo MTS (Promega G358a) en cada pocilio y las células se incuban por 1 h a 37 °C en C02 al 5 %. Por último, se mide la absorbancia a 490 nm con el uso de un lector SpectraMax Plus 384 (Molecular Devices) y se pueden calcular los valores de IC50.

Datos de los Ejemplos 18-21 Si bien hemos descrito varias modalidades de la esta invención, es evidente que los ejemplos básicos proporcionados pueden modificarse para obtener otras modalidades que emplean los compuestos, métodos y procesos de esta invención. Por lo tanto, debe mencionarse que el alcance de esta invención estará definido por las reivindicaciones anexas más que por las modalidades especificas representadas por via del ejemplo en la presente descripción.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (125)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un proceso para preparar un compuesto de la fórmula 4: 4 a partir de un compuesto de fórmula 3: en condiciones de formación de oxima adecuadas; caracterizado porque R1 es un alquilo de Ci-e; R2 es un alquilo de Ci- 6 o R1 y R2, conjuntamente con los átomos de oxígeno a los que están unidos, forman un anillo heterocíclico saturado de 5 o 6 miembros y opcionalmente sustituido, que tiene dos átomos de oxígeno; R3 es hidrógeno, alquilo de Ci- 6 o un heterociclilo saturado o parcialmente insaturado de 3-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en oxigeno, nitrógeno y azufre; en donde el heterociclilo está sustituido opcionalmente con 1 unidad de halógeno o alquilo de C1-3; J1 es H, halógeno, alquilo de C1-4 o alcoxilo de C1-4; PG es un grupo protector carbamato.

2. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el proceso se usa para fabricar un compuesto de fórmula I : en donde R4 es J1 es halógeno, alquilo de C1-4 o alcoxilo de C1-4; Q es fenilo, piridilo o una piridona N-alquilada; J2 es halógeno; CN; fenilo; oxazolilo; o un grupo alifático de C1-6, en donde hasta 2 unidades de metileno están opcionalmente reemplazadas por O, NR", C(O), S, S (O) o S(0)2/ ese grupo alifático de C1-6 está opcionalmente sustituido con 1-3 fluoro o CN; q es 0, 1 o 2; y R3 es hidrógeno, alquilo de Ci-e o un heterociclilo saturado o parcialmente insaturado de 3-6 miembros que tiene 1-2 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en oxigeno, nitrógeno y azufre; en donde ademá el heterociclilo está sustituido opcionalmente con 1 unidad de halógeno o alquilo de Ci-3 .

3. El proceso de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque comprende la etapa de proteger un compuesto de fórmula 2: 2 en condiciones de protección adecuadas para formar el compuesto de fórmula 3.

4. El proceso de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula 1: 1 con un ligando adecuado en condiciones de aminación reductora adecuadas para formar un compuesto de fórmula 2.

5. El proceso de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el ligando adecuado es una amina.

6. El proceso de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula 4: 4 en condiciones de formación de isoxazol adecuadas para formar un compuesto de fórmula 5:

7. El proceso de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula 5 en condiciones de acoplamiento adecuadas, seguido de condiciones de desprotección adecuadas para formar un compuesto de fórmula I.

8. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende una o más de las limitaciones siguientes: a) R1 es etilo y R2 es etilo; b) R3 es CH3 o c) J1 es H.

9. El proceso de conformidad con la reivindicación caracterizado porque R4 es en donde Q es fenilo, q es 1 y J2 es un grupo alifático de Ci-6, en donde hasta 1 unidad de metileno se reemplaza, opcionalmente, por S(0)2.

10. El proceso de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque J2 es -S (0) 2- (alquilo de C1-5) .

11. El proceso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque R1 es etilo; R2 es etilo; R3 es CH3 o PG es Boc o Cbz; J1 es H; R4 es en donde Q es fenilo; J2 es -S (0) 2-CH (CH3) 2; y q es 1.

12. El proceso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque R1 es etilo; R2 es etilo; R3 es PG es Boc; J1 es H; R4 es en donde Q es piridilo; y q es 1.

13. El proceso de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque R4 es

14. El proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, caracterizado porque las condiciones de formación de oxima adecuadas consisten en una secuencia de una etapa o una secuencia de dos etapas .

15. El proceso de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la secuencia de dos etapas consiste en desproteger, primeramente, el grupo cetal del compuesto de fórmula 3 en un aldehido en condiciones de desprotección adecuadas y, después, formar la oxima de la fórmula 4 en condiciones de formación de oxima adecuadas.

16. El proceso de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque a) las condiciones de desprotección adecuadas comprenden añadir un ácido, acetona y agua; y b) las condiciones de formación de oxima adecuadas comprenden mezclar hidroxilamina, un ácido, un solvente orgánico y, opcionalmente, agua o un agente deshidratante.

17. El proceso de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el ácido es pTSA o HC1, el solvente orgánico son solventes clorados seleccionados de diclorometano (DCM) , dicloroetano (DCE) , CH2CI2 y cloroformo; un éter seleccionado de THF, 2-MeTHF y dioxano; o hidrocarburos aromáticos seleccionados de tolueno y xilenos.

18. El proceso de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el ácido es pTSA o HC1, el agente deshidratante son tamices moleculares o dimetoxiacetona, y el solvente orgánico es un solvente alcohólico seleccionado de metanol o etanol.

19. El proceso de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la secuencia de una etapa comprende añadir NH2OH.HCI y una mezcla de THF y agua.

20. El proceso de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque 1 equivalente del compuesto de fórmula 3 se combina con 1.1 equivalentes de N OH.HCl en una mezcla 10:1 v/v de THF/agua.

21. El proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, caracterizado porque el PG se selecciona de Boc o Cbz.

22. El proceso de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque las condiciones de protección se seleccionan del grupo que consiste en a) R-OCOC1, una base de amina terciaria adecuada y un solvente adecuado; en donde R es un alquilo de C1-6 opcionalmente sustituido con fenilo; b) R(C02)OR', un solvente adecuado y, opcionalmente, una cantidad catalítica de base, en donde R y R1 son, cada uno e independientemente, alquilo de C1-6 opcionalmente sustituido con fenilo; c) [RO(C=0)]20, una base adecuada y un solvente adecuado.

23. El proceso de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque la base adecuada es Et3N, diisopropilamina y piridina; y el solvente adecuado se selecciona de un solvente clorado, un éter o un hidrocarburo aromático .

24. El proceso de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la base adecuada es Et3 y el solvente adecuado es un solvente clorado seleccionado de DCM.

25. El proceso de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque las condiciones de protección comprenden añadir 1.20 equivalentes de (Boc)20 y 1.02 equivalentes de Et3N en DCM.

26. El proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7-13, caracterizado porque las condiciones de acoplamiento adecuadas comprenden añadir un catalizador de paladio adecuado con una base adecuada en un solvente adecuado.

27. El proceso de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el catalizador de paladio adecuado se selecciona de Pd [ P (tBu) 3] 2, Pd (dtbpf) Cl2, Pd(Pf3)2Cl2, Pd (PCy3) 2CI2, Pd(dppf)Cl2 y Pd(dppe)Cl2; uno o más de los siguientes: tolueno, MeCN, agua, EtOH, IPA, 2-Me-THF o IPAc; y la base adecuada se selecciona de K2CO3, Na2CC>3, o K3PO4.

28. El proceso de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el catalizador de paladio adecuado es Pd [P (tBu) 3] 2; el solvente adecuado es una mezcla de acetonitrilo y agua; y la base adecuada es carbonato sódico.

29. El proceso de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque las condiciones de acoplamiento adecuadas comprenden añadir 0.1 equivalentes de Pd [P (tBu) 3 ] 2; 1 equivalente de ácido o éster borónico, y 2 equivalentes de carbonato sódico en una relación 2:1 v/v de acetonitrilo/agua a 60-70 °C.

30. El proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7-13, caracterizado porque las condiciones de desprotección adecuadas comprenden combinar el compuesto de fórmula 5 con un agente de desprotección de Boc adecuado en un solvente adecuado.

31. El proceso de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el agente de desprotección de Boc adecuado se selecciona de TMS-C1, HC1, TBAF, H3PO4 o TFA, y el solvente adecuado se selecciona de acetona, tolueno, metanol, etanol, 1-propanol, isopropanol, CH2CI2, EtOAc, acetato de isopropilo, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, dioxano o éter dietilico.

32. El proceso de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el agente de desprotección se selecciona de HC1, TBAF, H3PO4 o TFA, y el solvente adecuado se selecciona de metanol, etanol, CH2C1 THF2, EtOAc, THF, dioxano, tolueno o éter dietilico.

33. El proceso de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el agente de desprotección de Boc adecuado es HC1 o TFA, y el solvente adecuado es acetona, tolueno, isopropanol o acetato de isopropilo.

34. El proceso de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque las condiciones de formación de isoxazol adecuadas consisten en dos etapas; la primera etapa comprende hacer reaccionar el compuesto de fórmula 4 en condiciones de formación de clorooxima adecuadas para formar un intermediario clorooxima; la segunda etapa comprende hacer reaccionar el intermediario clorooxima con un acetileno en condiciones de cicloadición adecuadas para formar un compuesto de fórmula 5.

35. El proceso de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque el acetileno es un compuesto de fórmula 4-iii. 4-iii .

36. El proceso de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque las condiciones adecuadas de formación de clorooxima se seleccionan de d) N-clorosuccinimida y solvente adecuado, o e) peroximonosulfato de potasio, HC1 y dioxano.

37. El proceso de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque el solvente adecuado se selecciona de un solvente no prótico, un hidrocarburo aromático o un acetato de alquilo.

38. El proceso de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque las condiciones de formación de clorooxima adecuadas son 1.05 equivalentes de N-clorosuccinimida en acetato de isopropilo a 40-50 °C.

39. El proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 34-38, caracterizado porque las condiciones de cicloadición adecuadas consisten en una base adecuada y un solvente adecuado.

40. El proceso de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque la base adecuada se selecciona de piridina DIEA, TEA, t-BuONa y K2CO3, y el solvente adecuado se selecciona de acetonitrilo, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, MTBE, EtOAc, i-PrOAc, DCM, tolueno, DMF y metanol.

41. El proceso de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque la base adecuada se selecciona de Et3N y el solvente adecuado se selecciona de DCM.

42. El proceso de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque la segunda etapa comprende hacer reaccionar 1 equivalente de acetileno con 1.2 equivalentes del intermediario clorooxima y 1.3 equivalentes de Et3N en DCM a temperatura ambiente.

43. El proceso de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque las condiciones de formación de isoxazol adecuadas comprenden combinar el compuesto de fórmula 4 con un oxidante en un solvente adecuado.

44. El proceso de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque ese oxidante es [bis (trifluoroacetoxi) yodo] benceno y el solvente es una mezcla 1:1:1 de metanol, agua y dioxano.

45. Un proceso para preparar un compuesto de fórmula 1-3: caracterizado porque comprende la etapa de desproteger un compuesto de fórmula A-6: A-6 en condiciones de desprotección de Boc adecuadas seguido, opcionalmente, por tratamiento en condiciones acuosas básicas para formar un compuesto de fórmula 1-3.

46. El proceso de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque comprende etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula A-5 A-5 con un compuesto de fórmula ?-5-i: ?-5-i en condiciones de acoplamiento adecuadas para formar el compuesto de fórmula A-6.

47. El proceso de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque comprende las etapas de a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula A-4: A-4 en condiciones de formación de clorooxima adecuadas para formar el compuesto de fórmula ?-4-i: ?-4-i b) hacer reaccionar el compuesto de fórmula ?-4-i con un compuesto de fórmula ?-4-ii: ?-4-ii en condiciones de cicloadición adecuadas para formar un compuesto de fórmula ?-5.

48. El proceso de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula A-3: A-3 en condiciones de formación de oxima adecuadas para formar el compuesto de fórmula A-4.

49. El proceso de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque las condiciones de formación de oxima adecuadas consisten en una secuencia de una etapa o una secuencia de dos etapas.

50. El proceso de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque la secuencia de dos etapas consiste en desproteger, primeramente, el grupo cetal del compuesto de fórmula A-3: A-3 en un aldehido en condiciones de desprotección adecuadas y, después, formar la oxima de fórmula A-4 : en condiciones de formación de oxima adecuadas.

51. El proceso de conformidad con la reivindicación 50, caracterizado porque comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula A-2 : A-2 en condiciones de protección de Boc adecuadas para formar el compuesto de fórmula A-3.

52. El proceso de conformidad con la reivindicación 51, caracterizado porque comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula A-1: con tetrahidro-2H-piran-4-amina en condiciones de aminación reductora adecuadas para formar un compuesto de fórmula A-2.

53. Un proceso para preparar el compuesto 1-2· HC1 : Compuesto 1-2 caracterizado porque comprende agitar una suspensión del compuesto 1-2 · 2HC1 en i-PrOH y agua.

54. Un proceso para preparar el compuesto 1-2· HC1: caracterizado porque comprende combinar aproximadamente 1 equivalente de una solución acuosa de HC1 con la base libre del compuesto 1-2 en acetona.

55. Un proceso para preparar un compuesto de fórmula 1-2: caracterizado porque comprende la etapa de desproteger un compuesto de fórmula 5-i: en condiciones de desprotección de Boc adecuadas seguido, opcionalmente, por tratamiento en condiciones acuosas básicas para formar un compuesto de fórmula 1-2.

56. El proceso de conformidad con la reivindicación 55, caracterizado porque comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula 4-iv: en condiciones de acoplamiento adecuadas para formar el compuesto de fórmula 5-i.

57. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 46 o 56, caracterizado porque las condiciones de acoplamiento adecuadas comprenden combinar un catalizador de paladio adecuado con una base adecuada en un solvente adecuado.

58. El proceso de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado porque el catalizador de paladio adecuado se selecciona de Pd [ P (tBu) 3] 2, Pd (dtbpf) Cl2, Pd(Pf3)2Cl2, Pd (PCy3) 2CI2, Pd(dppf)Cl2 y Pd(dppe)Cl2; el solvente adecuado se selecciona de uno o más de los siguientes: tolueno, MeCN, agua, EtOH, IPA, 2- e-THF o IPAc; y la base adecuada se selecciona de K2CO3, Na2C03 o K3PO4.

59. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 53 o 56, caracterizado porque comprende las etapas de: a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula 4-i 4-i en condiciones de formación de clorooxima adecuadas para formar el compuesto de fórmula 4-ii: 4-ii b) hacer reaccionar el compuesto de fórmula 4-ii con un compuesto de fórmula 4:-iii 4-iii en condiciones de cicloadición adecuadas para formar un compuesto de fórmula 4-iv.

60. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 47 o 59, caracterizado porque las condiciones de cicloadición adecuadas comprenden una base adecuada seleccionada de piridina DIEA, TEA, t-BuONa o K2CO3, y un solvente adecuado seleccionado de acetonitrilo, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, MTBE, EtOAc, i -PrOAc, DCM, tolueno, D F y metanol.

61. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 47 o 59, caracterizado porque las condiciones de formación de clorooxima adecuadas comprenden añadir HC1 en dioxano a una solución de la oxima en presencia de NCS en un solvente adecuado seleccionado de un solvente no prótico (DCM, DCE, THF y dioxano), hidrocarburos aromáticos (por ejemplo, tolueno, xilenos) y acetatos de alquilo (por ejemplo, acetato de isopropilo, acetato de etilo) .

62. El proceso de conformidad con la reivindicación 59, caracterizado porque comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula 3b: 3b en condiciones de formación de oxima adecuadas para formar el compuesto de fórmula 4-i.

63. El proceso de conformidad con la reivindicación 62, caracterizado porque las condiciones de formación de oxima adecuadas consisten en una secuencia de una etapa o una secuencia de dos etapas.

64. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 49 o 63, caracterizado porque la secuencia de una etapa comprende añadir NH2OH.HCI y una mezcla de THF y agua .

65. El proceso de conformidad con la reivindicación 64, caracterizado porque 1 equivalente del compuesto de fórmula 3b se combina con 1.1 equivalentes de NH2OH.HCI en una mezcla 10:1 v/v de THF/agua.

66. El proceso de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la secuencia de dos etapas consiste en desproteger, primeramente, el grupo cetal del compuesto de fórmula 3b: 3b aldehido en condiciones de desprotección adecuadas después, formar la oxima de fórmula 5a: en condiciones de formación de oxima adecuadas.

67. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 50 o 66, caracterizado porque a) las condiciones de desprotección adecuadas comprenden añadir un ácido, acetona y agua; y b) las condiciones de formación de oxima adecuadas comprenden mezclar hidroxilamina, un ácido opcional, un solvente orgánico y agua.

68. El proceso de conformidad con la reivindicación 67, caracterizado porque el ácido es pTSA o HC1, el solvente orgánico son solventes clorados seleccionados de diclorometano (DCM) , dicloroetano (DCE) , CH2CI2 y cloroformo; un éter seleccionado de THF, 2-MeTHF y dioxano; o hidrocarburos aromáticos seleccionados de tolueno y xilenos. [otros solventes apróticos]

69. El proceso de conformidad con la reivindicación 68, caracterizado porque las condiciones de formación de oxima adecuadas comprenden añadir clorhidrato de hidroxilamina a una solución del compuesto 3b en THF y agua.

70. El proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 62-69, caracterizado porque comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula 2b: 2b en condiciones de protección de Boc adecuadas para formar el compuesto de fórmula 3b.

71. El proceso de conformidad con la reivindicación 70, caracterizado porque comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de fórmula Ib: Ib con metilamina en condiciones de aminación reductora adecuadas para formar el compuesto de fórmula 2b.

72. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 52 o 71, caracterizado porque las condiciones de aminación reductora adecuadas comprenden añadir un agente reductor seleccionado de NaBH4, NaBH3CN o NaBH(0Ac)3 en presencia de un solvente seleccionado de diclorometano (DCM), dicloroetano (DCE) , un solvente alcohólico seleccionado de metanol, etanol, 1-propanol, isopropanol, o un solvente no prótico seleccionado de dioxano, tetrahidrofurano o 2-metiltetrahidrofurano y, opcionalmente, una base seleccionada de Et3N o diisopropiletilamina .

73. El proceso de conformidad con la reivindicación 72, caracterizado porque las condiciones de aminación reductora adecuadas comprenden añadir 1.2 equivalentes de tabletas de NaBH4 en presencia de Et3 en MeOH .

74. El proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45-73, caracterizado porque las condiciones adecuadas de desprotección de Boc comprenden añadir un agente de desprotección de Boc adecuado seleccionado de TMS-Cl, HC1, TBAF, H3PO4 o TFA, y el solvente adecuado se selecciona de acetona, tolueno, metanol, etanol, 1-propanol, isopropanol, CH2CI2 , EtOAc, acetato de isopropilo, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, dioxano o éter dietilico.

75. El proceso de conformidad con la reivindicación 74, caracterizado porque el agente de desprotección de Boc adecuado es HC1 o TFA, y el solvente adecuado es acetona o CH2CI2 .

76. Un proceso para preparar un compuesto de fórmula ?-4-ii: A-4-Ü caracterizado porque comprende una o más de las etapas siguientes : f) hacer reaccionar un compuesto de fórmula C-1: C-1 en condiciones de acoplamiento mediado por metales adecuadas con TMS-acetileno para formar un compuesto de fórmula C-2 : C-2 g) hacer reaccionar un compuesto de fórmula C-2 en condiciones de protección de Boc adecuadas para formar un compuesto de fórmula C-3: C-3 h) hacer reaccionar un compuesto de fórmula C-3 en condiciones de desprotección con TMS adecuadas para formar un compuesto de fórmula ?-4-ii.

77. El proceso de conformidad con la reivindicación 70 o 76, caracterizado porque las condiciones de protección de Boc son añadir (Boc)2Ü, una base adecuada y un solvente adecuado .

78. El proceso de conformidad con la reivindicación 77, caracterizado porque la base adecuada es Et3N, diisopropilamina y piridina; y el solvente adecuado se selecciona de un solvente clorado, un éter o un hidrocarburo aromático .

79. El proceso de conformidad con la reivindicación 78, caracterizado porque la base adecuada es Et3N, el solvente adecuado es DC , tetrahidrofurano o 2-metiltetrahidrofurano .

80. El proceso de conformidad con la reivindicación 79, caracterizado porque las condiciones de protección de Boc comprenden añadir 1.05 equivalentes de (Boc)20 en 2-metiltetrahidrofurano o DCM.

81. El proceso de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado porque las condiciones de acoplamiento mediado por metales adecuadas son condiciones de acoplamiento de Sonogashira; las condiciones de protección de Boc comprenden añadir (Boc)20 en 2-metiltetrahidrofurano o DCM; y las condiciones de desprotección de TMS adecuadas comprenden añadir una base adecuada, solvente orgánico adecuado y agua .

82. El proceso de conformidad con la reivindicación 81, caracterizado porque las condiciones de acoplamiento de Sonogashira comprenden combinar 1 equivalente de TMS-acet ileno , 0.010 equivalentes de Pd(PÍ3) 2Cl2, 0.015 equivalentes de Cul y 1.20 equivalentes de NMM con el compuesto C-l en isopropanol; las condiciones de protección de Boc comprenden añadir 1.05 equivalentes de (Boc)20 en 2 -met iltetrahidrofurano o DCM; y las condiciones de desprotección de TMS comprenden añadir K2C03, EtOAc , EtOH y agua.

83. Un compuesto de fórmula II: o una sal farmacéuticamente aceptable de este, caracterizado porque cada Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R4, R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c es, independientemente, hidrógeno o deuterio y al menos uno de Rla, Rlb, Rlc, R2, R3a, R3b, R3c, R\ R5, R6, R7, R8, R9a, R9b, R10a, R10b y R10c es deuterio.

84. El compuesto de conformidad con la reivindicación 81, caracterizado porque es seleccionado del grupo que consiste en: -10 11-11 11-12 y 11-22.

85. El compuesto de conformidad con la reivindicación 81, caracterizado porque es seleccionado del grupo que consiste en los compuestos 11-1/ II-2, II-3 o II-4.

86. Una forma sólida de un compuesto de fórmula I- 2: 1-2 caracterizada porque la forma se selecciona del grupo que consiste en la base libre del compuesto 1-2, compuesto 1-2· HC1, compuesto 1-2 · HC1 · H20, compuesto 1-2 · HC1 · 2H20 y compuesto 1-2 »2~ácido clorhídrico.

87. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 86, caracterizada porque la forma es la base libre del compuesto 1-2.

88. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 86, caracterizada porque la forma es la base libre del compuesto cristalino 1-2.

89. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 88, caracterizada porque tiene un sistema cristalino monoclinico, que tiene un grupo espacial P2i/n y que tiene las siguientes dimensiones de celda única medidas a 120 K: a = 8.9677 (1) Á b = 10.1871 (1) Á c = 24.5914 (3) Á.

90. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 88, caracterizada por una pérdida de peso de aproximadamente 1.9 % en un intervalo de temperatura de aproximadamente 25 °C a aproximadamente 215 °C.

91. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 88, caracterizada por uno o más picos expresados en 2-theta ± 0.2 a aproximadamente 14.2, 25.6, 18.1, 22.0 y 11.1 grados en un patrón de difracción de rayos X de polvos obtenido mediante el uso de radiación K alfa de Cu.

92. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 88 , caracterizada por tener un patrón de difracción de rayos X de polvos sustancialmente idéntico al mostrado en la Figura la.

93. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 86, caracterizada porque la forma es el compuesto 1-2 · HC1.

94. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 86, caracterizada porque la forma es el compuesto cristalino 1-2 · HC1.

95. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 94, caracterizada porque el compuesto : HC1 están en una relación 1:1.

96. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 94, caracterizada porque tiene un sistema cristalino monoclinico, que tiene un grupo espacial P2 /n y tiene las siguientes dimensiones de celda única medidas a 120 K: a = 5.3332 (2) Á b = 35.4901 (14) A c = 13.5057 (5) Á.

97. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 94, caracterizada porque presente una pérdida de peso de aproximadamente 1.1 % en un intervalo de temperatura de aproximadamente 25 °C a aproximadamente 100 °C, y aproximadamente 0.8 % de 110 °C a aproximadamente 240 °C.

98. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 94, caracterizada porque presenta uno o más picos expresados en 2-theta + 0.2 a aproximadamente 13.5, 28.8, 15.0, 18.8 y 15.4 grados en un patrón de difracción de rayos X de polvos obtenido mediante el uso de radiación K alfa de Cu.

99. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 94, caracterizada porque presenta uno o más picos a aproximadamente 171.7, 153.4, 132.9, 31.8 y 15.7 ppm en 13CNMR en estado sólido.

100. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 94, caracterizada porque tiene un patrón de difracción de rayos X de polvos sustancialmente idéntico al mostrado en la Figura Ib.

101. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 86, caracterizada porque además la forma es el compuesto I-2»2-HCl.

102. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 86, caracterizada porque la forma es el compuesto cristalino 1-2· 2HC1.

103. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 102, caracterizada porque el compuesto : HC1 están en una relación 1:2.

104. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 102, caracterizada porque presenta uno o más picos a aproximadamente 15.1, 18.5, 11.5, 13.1 y 5.7 en un patrón de difracción de rayos X de polvos.

105. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 102, caracterizada porque tiene un patrón de difracción de rayos X de polvos sustancialmente idéntico al mostrado en la Figura le.

106. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 102, caracterizada porque tiene un sistema cristalino monoclinico, que tiene un grupo espacial P2\/n y que tiene las siguientes dimensiones de celda única medidas a 120 K: a = 5.3332 (2) Á b = 35.4901 (14) Á c = 13.5057 (5) Á.

107. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 102, caracterizada porque presenta una pérdida de peso de aproximadamente 7 % en un intervalo de temperatura de aproximadamente 25 °C a aproximadamente 188 °C.

108. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 102, caracterizada por uno o más picos a aproximadamente 15.1, 18.5, 11.5, 13.1 y 5.7 grados en un patrón de difracción de rayos X de polvos obtenido mediante el uso de radiación K alfa de Cu.

109. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 102, caracterizada porque tiene un patrón de difracción de rayos X de polvos sustancialmente idéntico al mostrado en la Figura le.

110. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 102, caracterizada porque presenta uno o más picos a aproximadamente 166.5, 137.6, 136.1, 34.2 y 16.4 ppm en 13CNMR en estado sólido.

111. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 86, caracterizada porque la forma es el compuesto 1-2· 2HC1 · H20.

112. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 86, caracterizada porque la forma es el compuesto cristalino 1-2· 2HC1 · H20.

113. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 112, caracterizada porque el compuesto : HCl : H20 están en una relación 1:2:1.

114. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 112, caracterizada por una pérdida de peso de aproximadamente 2.9 % en un intervalo de temperatura de aproximadamente 25 °C a aproximadamente 100 °C, y una pérdida de peso de aproximadamente 0.6 %, de aproximadamente 100 °C a aproximadamente 222 °C.

115. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 112, caracterizada por uno o más picos a aproximadamente 6.6, 19.5, 24.7, 8.1 y 11.2 grados en un patrón de difracción de rayos X de polvos obtenido mediante el uso de radiación K alfa de Cu.

116. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 112, caracterizada por tener un patrón de difracción de rayos X de polvos sustancialmente idéntico al mostrado en la Figura Id.

117. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 86, caracterizada porque la forma es el compuesto 1-2 · HCl · 2H20.

118. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 86, caracterizada porque la forma es el compuesto cristalino 1-2 · HCl* 2¾0.

119. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 118, caracterizada porque el compuesto : HC1 : H2O están en una relación 1:1:2.

120. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 118, caracterizada porque presenta una pérdida de peso de aproximadamente 6 % en un intervalo de temperatura de aproximadamente 25 °C a aproximadamente 100 °C

121. La forma sólida de conformidad con la reivindicación 118, caracterizada porque presenta uno o más picos a aproximadamente 26.6, 7.6, 6.3, 23.3 y 24.6 grados en un patrón de difracción de rayos X de polvos obtenido mediante el uso de radiación K alfa de Cu.

122. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende una forma sólida de conformidad con la reivindicación 86 y un portador farmacéuticamente aceptable.

123. El uso de una forma sólida de conformidad con la reivindicación 86, para fabricar un medicamento para tratar el cáncer.

124. El uso de una forma sólida de conformidad con la reivindicación 86, para tratar el cáncer.

125. El uso de conformidad con la reivindicación 123 o 124, en donde el cáncer es cáncer pancreático o cáncer de pulmón de células no pequeñas.