MX2010010503A - Metodos y composiciones para tratar perdida osea. - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona métodos y composiciones para tratar, por ejemplo, reducir la pérdida ósea, por ejemplo, pérdida ósea corticales y en particular pérdida ósea de la mano, en donde los cuales comprenden administrar un inhibidor TNFa, tal como un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo.

Description

MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA TRATAR PÉRDIDA ÓSEA Solicitudes Relacionadas La presente solicitud reclama el beneficio de prioridad de la Solicitud Provisional Norteamericana No. 61/039028, presentada el 24 de Marzo de 2008 y la Solicitud Provisional Norteamericana No. 61/148313, presentada el 29 de Enero de 2009. Los contenidos de todas las solicitudes de prioridad antes mencionadas, están incorporadas en su totalidad a la presente invención como referencia.

Antecedentes de la Invención La pérdida ósea está caracterizada por deterioro estructural del tejido óseo, lo cual puede conducir a fragilidad ósea y a una susceptibilidad incrementada a fracturas. La pérdida ósea está asociada con una cantidad de enfermedades, incluyendo osteoporosis, osteoartritis y artritis reumatoide.

Por ejemplo, en artritis reumatoide (RA), el daño a los huesos en radiografías, se presenta no únicamente como erosiones, sino también como osteoporosis periarticular [1]. Existen datos con respecto a la importancia de suprimir inflamación para evitar el daño óseo en RA. A través de los resultados de diversas pruebas clínicas controladas, aleatorizadas, los tratamientos antiinflamatorios potentes han mostrado reducir el progreso de erosiones de articulaciones [4-6]. La activación inflamatoria del osteoclasto está implicada en las fracturas de huesos, [2,3] y la supresión de la actividad de osteoclasto ha mostrado reducir el progreso de erosiones mediante ácido zoledrónico bisfosfonato [3].

Unos cuantos estudios han sugerido que la terapia anti-TNF puede tener la capacidad de prevenir la pérdida general de huesos. Por ejemplo, el efecto antiinflamatorio de la terapia de factor de necrosis anti-tumor (anti-TNF) ha mostrado reducir en forma significativa el progreso de daño a articulaciones radiográficas en pacientes RA [4-6]. También existe evidencia de que el tratamiento anti-inflamatorio reduce la osteoporosis generalizada [7-9].

Se han recomendado medidas cuantitativas de huesos de la mano por su sensibilidad en evaluar la implicación inflamatoria de los huesos en RA temprana [10]. Sin embargo, únicamente algunos estudios han revisado el efecto del tratamiento anti-inflamatorio (incluyendo terapia-TNF) en pérdida ósea de la mano en RA [9,11,12]. En un estudio que emplea ultrasonido cuantitativo (QUS), el uso de terapia anti-TNF tuvo un efecto positivo en hueso periarticular [11]. Sin embargo únicamente se ha llevado a cabo una prueba controlada, aleatorizada, en donde los efectos antiinflamatorios de prednisolona (7.5 mg diario) comparados con placebo mostraron reducir significativamente no únicamente el rango de daño a la articulación radiográfico, sino también el rango de pérdida ósea de la mano [12]. Además de su efecto anti-inflamatorio, sin embargo, la prednisolona también es conocida por originar osteoporosis [12]. Por lo tanto, permanece la necesidad de agentes terapéuticos para tratar pérdida ósea, especialmente pérdida ósea de la mano.

Breve Descripción de la Invención La presente invención proporciona un método para tratar pérdida ósea, por ejemplo reducir y/o prevenir pérdida ósea en un sujeto, en donde el método comprende administrar un inhibidor TNFa, por ejemplo un anticuerpo o parte de enlace de antígeno del mismo al sujeto. En una modalidad, se trata la pérdida ósea en la mano del sujeto. En una modalidad, se trata pérdida ósea cortical de la mano.

En una modalidad, el sujeto tiene un trastorno asociado con pérdida ósea. En una modalidad, el sujeto tiene osteoporosis. En una modalidad, el sujeto tiene osteoartritis. Aún en otra modalidad, el sujeto tiene artritis reumatoide (RA). En una modalidad, el sujeto tiene osteoporosis y RA.

En una modalidad de la presente invención, se administra el inhibidor TNFa en combinación con un agente adicional. En una modalidad, se administra el inhibidor TNFa en combinación con metotrexato. En otra modalidad, se administra el inhibidor TNFa en combinación con un agente antirreabsorción , por ejemplo, alendronato, alendronato más vitamina D3, ibandronato, risedronato, risedronato con calcio, ácido zoledrónico, calcitonina, estrógeno y raloxifeno. Aún en otra modalidad, el inhibidor TNFa se administra en combinación con un agente que forma los huesos, tal como hormona paratiroides, por ejemplo, teriparatida.

En una modalidad, el sujeto a quien se le administra un inhibidor TNFa para el tratamiento de pérdida ósea, puede ser seleccionado por tener y/o estar en riesgo de tener pérdida ósea. En una modalidad, la presente invención proporciona un método para tratar pérdida ósea de la mano en un sujeto, en donde el método comprende seleccionar un sujeto quien tenga pérdida ósea en la mano o esté en riesgo de tener pérdida ósea de la mano y administra un inhibidor TNFa al sujeto, de tal manera que se trate la pérdida ósea de la mano. En otra modalidad, el método de la presente invención se lleva a cabo en un sujeto quien fue seleccionado previamente por tener o estar en riesgo de tener pérdida ósea.

La presente invención también proporciona métodos para anticipar la pérdida ósea, que incluyen pero no se limitan a, pérdida ósea de la mano. La presente invención proporciona índices que se pueden utilizar para anticipar pérdida ósea, por ejemplo, pérdida ósea de la mano en un sujeto. Por ejemplo, la edad del sujeto y/o nivel CRP puede utilizarse para anticipar la pérdida ósea en la mano en un sujeto.

En una modalidad de la presente invención, el inhibidor TNFa es un anticuerpo TNFa, o parte de enlace de antígenos del mismo. En una modalidad, el anticuerpo TNFa, o parte de enlace de antígenos del mismo, es un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo. En otra modalidad, el anticuerpo TNFa, o parte de enlace de antígenos del mismo, es inliximab o golimumab. En una modalidad, el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, se disocia de TNFa con una Kd de 1x10"8 M o menos y una constante de rango Kdisociación de 1x10"3 s"1 o menos, ambos determinados mediante resonancia de plasmón de superficie, y neutraliza la citotoxicidad de TNFa humana en un ensayo estándar in vitro L929 con un IC50 de 1x10"7 M o menos. En otra modalidad, el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, tiene las siguientes características: se disocia de TNFa humano con una constante de rango Kdisociación de 1x10"3 M o menos, tal como se determina mediante resonancia de plasmón de superficie; tiene un dominio CDR3 de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácido de la SEC ID NO: 3, o modificada de la SEC ID NO: 3 por una sustitución de alanina simple en la posición 1, 4, 5, 7 ó 8, o por de una a cinco sustituciones de aminoácido conservadoras en las posiciones 1, 3, 4, 6, 8 y/o 9; y tiene un dominio CDR3 de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácido de la SEC ID NO: 4, o es modificada de la SEC ID NO: 4 por una sustitución de alanina simple en la posición 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ó 11 o por de una a cinco sustituciones de aminoácido consecutivas en las posiciones 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 y/o 12. En una modalidad, el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) que tiene un dominio CDR3 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 3, o es modificada de SEC ID NO: 3 por una sustitución de alanina simple en la posición 1, 4, 5, 7 ó 8, y que comprende una región variable de cadena pesada (HCVR) que tiene un dominio CDR3 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 4, o es modificada a partir de la SEC ID NO. 4 por una sustitución de alanina simple en la posición 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ó 11. En una modalidad, el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) que comprende la secuencia de aminoácido de la SEC ID NO: 1 y una región variable de cadena pesada (HCVR) que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 2. En una modalidad, el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, es adalimumab. En otra modalidad, el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, es golimumab.

Breve Descripción de las Figuras La figura 1, es una gráfica de flujo de los pacientes revisados con artritis reumatoide temprana en el presente análisis. Los números de rayos X faltantes comparados con el estudio J adicional se proporcionan en los paréntesis. MTX = metotrexato; DXR = radiogrametría de rayos X digital; MCI = índice cortical metacarpal; BMD = densidad de masa ósea.

La figura 2, muestra cambios en DXR-MCI (porcentaje) y la calificación Sharp modificada (unidades) con el tiempo en tres grupos de tratamiento del Estudio J (A=valores medios, B=valores promedio). Calificación Mod. Sharp = calificación Sharp total modificada; TX = metotrexato; DXR = radiogrametría de rayos digital; CI = índice cortical metacarpal.

La figura 3, es un trazo de probabilidad acumulativa -Cambios en DXR-MCI y calificaciones radiográficas en 104 semanas en el estudio J. Calificación Mod. Sharp = calificación Sharp que fue modificada; MTX=metotrexato; DXR=radiogrametría de rayos digital; MCI = índice cortical metacarpal .

Descripción Detallada de la Invención I. DEFINICIONES El término "TNFa humana" (abreviada en la presente invención como hTNFa, o simplemente hTNF), tal como se utiliza en la presente invención, pretende referirse a una citocina humana que existe como una forma secretada 17 kD y una forma asociada con membrana de 26 kD, cuya forma biológicamente activa está compuesta de un trímero de moléculas 17 kD enlazadas en forma covalente. La estructura de hTNFa se describe en forma adicional por ejemplo en las Publicaciones de Pennica, D., y asociados (1984) Nature 312:724 a 729; Davis, J. M., y asociados (1987) Biochemistry 26: 1322 a 1326; y Jones, E. Y., y asociados (1989) Nature 338:225 a 228. El término T F humana, pretende incluir TNFa humana recombinante (rhTNFa), que puede prepararse mediante métodos de expresión recombinante estándar o ser comprada comercialmente (R & D Systems, Catálogo No. 210-TA, Minneapolis, Minn.). TNFa también es referido en la presente invención como TNF.

El término "inhibidor TNFa" incluye agentes que interfieren con la actividad de TNFa. El término también incluye cada uno de los anticuerpos humanos anti-TNFa y partes de anticuerpo descritos en la presente invención como los descritos en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,090,382; 6,258,562; 6,509,015, y en las Solicitudes de Patente Norteamericana Series Nos. 09/801,185 y 10/302,356, cada una de las cuales está incorporada a la presente invención como referencia. En una modalidad, el inhibidor TNFa utilizado en la presente invención es un anticuerpo anti-TNFa, o fragmento del mismo, que incluye infliximab (Remicade®, Johnson y Johnson; descrito en la Patente Norteamericana No. 5,656,272, incorporada a la presente invención como referencia), CDP571 (un anticuerpo lgG4 anti-TNF-alfa monoclonal humanizado), CDP 870 (CIMZIA®, un fragmento de anticuerpo anti-TNF-alfa monoclonal humanizado), y dAb anti-TNF (Peptech), CNTO 148 (golimumab; Medarex y Centocor, ver Publicación de Patente WO 02/12502), y adalimumab (HUMIRA® Abbott Laboratories, un mAb anti-TNF humano, descrito en la Patente Norteamericana No. 6,090,382 como D2E7). Los anticuerpos TNF adicionales que se pueden utilizar en la presente invención se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,593,458; 6,498,237; 6,451,983; y 6,448,380, cada una de las cuales está incorporada a la presente invención como referencia. En otra modalidad, el inhibidor TNFa es una proteína de fusión TNF, por ejemplo, etanercept (Enbrel®, Amgen; descrita en las Publicaciones de Patente WO 91/03553 y WO 09/406,476, incorporadas a la presente invención como referencia). En otra modalidad, el inhibidor TNFa es una proteína de enlace TNF recombinante (r-TBP-I) (Serono).

El término "anticuerpo", tal como se utiliza en la presente invención, pretende referirse a moléculas de inmunoglobulina comprendidas de cuatro cadenas de polipéptido, dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) conectadas internamente mediante enlaces de disulfuro. Cada cadena pesada está comprendida en una región variable de cadena pesada (abreviada en la presente invención como HCVR o VH) y una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada está comprendida de tres dominios, CH1, CH2 y CH3. Cada cadena ligera está comprendida de una región variable de cadena ligera (abreviada en la presente invención como LCVR o VL) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera está comprendida de un dominio, CL. Las regiones VH y VL pueden subdividirse en forma adicional en regiones de hipervariabilidad denominadas regiones de determinación de complementariedad (CDR), dispersadas internamente con regiones que son más conservadas, denominadas, regiones de estructura (FR). Cada VH y VL está compuesta de tres CDRs y cuatro FRs, distribuidas del término amino al término carboxi en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Los anticuerpos de la presente invención se describen con mayor detalle en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,090,382; 6,258,562; y 6,509,015, cada una de las cuales está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia.

El término "parte de enlace de antígeno" o "fragmento de enlace de antígeno" de un anticuerpo (o simplemente "parte de anticuerpo"), tal como se utiliza en la presente invención, se refiere a uno o más fragmentos de un anticuerpo que retiene la capacidad de enlazar específicamente a un antígeno (por ejemplo, hTNFa). Se ha mostrado que la función de enlace de antígeno de un anticuerpo puede llevarse a cabo por fragmentos de un anticuerpo de longitud total. Los fragmentos de enlace incluyen Fab, Fab', F(ab')2, Fabc, Fv, cadena simple, y anticuerpos de cadena simple. Los ejemplos de fragmentos de enlace comprendidos dentro del término "parte de enlace de antígeno" de un anticuerpo incluyen (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios VL, VH, CL y CH1; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab enlazados por un puente de disulfuro en la región de articulación; (iii) un fragmento Fd que consiste en los dominios y CH1; (iv) un fragmento Fv que consiste en los dominios VL y VH de un brazo simple del anticuerpo, (v) un fragmento dAb (Ward y asociados (1989) Nature 341 :544 a 546), que consiste en un dominio VH o VL; y (vi) una región de determinación de complementariedad aislada (CDR). Además, aunque los dos dominios de fragmento Fv, VL y VH, son codificados por genes separados, pueden unirse utilizando métodos recombinantes a través de un enlazador sintético que les permite ser elaborados como una cadena de proteína simple en el cual las regiones VL y VH se emparejan para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv de cadena simple (scFv); ver la Publicación de Bird y asociados (1988) Science 242:423 a 426; y Huston y asociados (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85:5879 a 5883). Dichos anticuerpos de cadena simple también están proyectados para estar comprendidos dentro del término "parte de enlace de antígeno" de un anticuerpo. Otras formas de anticuerpos de cadena simple, tales como diacuerpos también están comprendidos. Los diacuerpos son anticuerpos biespecíficos, bivalentes en los cuales los dominios VH y VL se expresan en una cadena de polipéptido simple, pero utiliza un enlazador que es demasiado corto para permitir el emparejamiento entre los dos dominios en la misma cadena, forzando de esta forma a los dominios a emparejarse con dominios de complementariedad de otra cadena y creando dos sitios de enlace de antígeno (ver las Publicaciones de Holliger y asociados (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90:6444 a 6448; Poljak y asociados (1994) Structure 2:1121 a 1123). Las partes del anticuerpo de la presente invención se describen con mayor detalle en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,090,382, 6,258,562, 6,509,015, cada una de las cuales está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia.

Aún además, un anticuerpo o parte de enlace de antígenos del mismo puede ser parte de moléculas de inmunoadhesión más grandes, formadas mediante asociación covalente o no covalente del anticuerpo o parte del anticuerpo con una o más de otras proteínas o péptidos. Los ejemplos de dichas moléculas de inmunoadhesión incluyen el uso de la región de centro de estreptavidina para elaborar una molécula scFv tetramérica (Kipriyanov, S. M., y asociados (1995) Human Antibodies and Hybridomas 6:93 a 101) y el uso de un residuo de cisteína, un péptido marcador y una etiqueta de polihistidina C-terminal para elaborar moléculas scFv bivalentes y biotiniladas (Kipriyanov, S. . , y asociados (1994) Mol. Immunol. 31:1047 a 1058). Las partes de anticuerpo, tal como fragmentos Fab y F(ab')2, se pueden preparar a partir de anticuerpos totales utilizando técnicas convencionales tales como digestión de papaína o pepsina, respectivamente, de los anticuerpos completos. Además, los anticuerpos, partes de anticuerpo y moléculas de inmunoadhesion se pueden obtener utilizando técnicas de ADN recombinante estándar, tal como aquí se describe.

Una "sustitución de aminoácido conservadora" tal como se utiliza en la presente invención, es una en la cual se reemplaza un residuo de aminoácido con otro residuo de aminoácido que tiene una cadena lateral similar. Las familias de residuos de aminoácido que tienen cadenas laterales similares han sido definidas en la técnica, incluyendo cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina), cadenas laterales ácidas (por ejemplo ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofan), cadenas laterales beta-ramificadas (por ejemplo treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptofan, histidina).

Los "anticuerpos quiméricos" se refieren a anticuerpos en donde una parte de cada una de las secuencias de aminoácido de las cadenas pesadas y ligeras es homóloga a las secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de especies particulares o que pertenecen a una clase particular, aunque el segmento restante de la cadena es homólogo a secuencias correspondientes de otra especie. En una modalidad, la presente invención presenta un anticuerpo quimérico o parte de enlace de antígenos del mismo, en el cual las regiones variables de las cadenas tanto ligeras como pesadas mimetizan las regiones variables de anticuerpos derivadas de una especie de mamíferos, aunque las partes constantes son homologas a las secuencias en anticuerpos derivados de otra especie. En una modalidad preferida de la presente invención, los anticuerpos quiméricos se elaboran injertando CDRs de un anticuerpo de ratón en las regiones de estructura de un anticuerpo humano.

El término "anticuerpos humanizados" se refiere a anticuerpos que comprenden al menos una cadena que comprende residuos de estructura de región variable sustancialmente de una cadena de anticuerpo humana (referida como la inmunoglobulina aceptora o anticuerpo) y al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) sustancialmente de un anticuerpo no humano (por ejemplo ratón). Además del injerto de las CDRs, los anticuerpos humanizados normalmente pasan por alteraciones adicionales con el objeto de mejorar la afinidad y/o inmunogenicidad.

El término "anticuerpo multivalente" se refiere a un anticuerpo que comprende más de un sitio de reconocimiento de antígeno. Por ejemplo, un anticuerpo "bivalente" tiene dos sitios de reconocimiento de antígeno, mientras que un anticuerpo "tetravalente" tiene cuatro sitios de reconocimiento de antígenos. Los términos "monoespecífico", "biespecífico", "triespecífico", "tetraespecífico", etc. se refiere al número de especificidades del sitio de reconocimiento de antígeno diferentes (en forma opuesta al número de sitios de reconocimiento de antígenos) presentes en un anticuerpo multivalente. Por ejemplo, los sitios de reconocimiento de antígeno de un anticuerpo "monoespecífico", enlazan todos al mismo epítope. Un anticuerpo "biespecífico" o "específico doble" tienen al menos un sitio de reconocimiento de antígeno que enlaza a un primer epítope y al menos un sitio de reconocimiento de antígeno que enlaza a un segundo epítope que es diferente al primer epítope. Un anticuerpo "monoespecífico multivalente" tiene múltiples sitios de reconocimiento de antígenos que enlazan todos al mismo epítope. Un anticuerpo "biespecífico multivalente" tiene múltiples sitios de reconocimiento de antígeno, en donde cierto número de éstos se enlazan a un primer epítope y ciertos números de éstos se enlazan a un segundo epítope que es diferente al primer epítope.

El término "anticuerpo humano", tal como se utiliza en la presente invención, pretende incluir anticuerpos que tienen regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. Los anticuerpos humanos de la presente invención pueden incluir residuos de aminoácido no codificados por secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana (por ejemplo, mutaciones introducidas mediante mutagénesis aleatoria o específica de sitio in vivo o mediante mutación somática in vivo), por ejemplo en las CDRs en particular CDR3. Sin embargo el término "anticuerpo humano", tal como se utiliza en la presente invención, no pretende incluir anticuerpos en los cuales las secuencias CDR derivadas de línea germinal de otro especie de mamífero, tal como un ratón, hayan sido injertados en la secuencia de estructura humana.

El término "anticuerpo humano recombinante", tal como se utiliza en la presente invención, pretende incluir todos los anticuerpos humanos que son preparados, expresados, creados, aislados por medios recombinantes, tal como anticuerpos expresados utilizando un vector de expresión recombinante transfectado en una célula huésped (se describe con mayor detalle más adelante), anticuerpos aislados de una biblioteca de anticuerpo humana de combinación, recombinante (descrita en forma adicional más adelante), anticuerpos aislados de un animal (por ejemplo un ratón) que es transgénico para genes de inmunoglobulina humana (ver por ejemplo la Publicación de Taylor y asociados (1992) Nucí. Acids Res. 20:6287) o anticuerpos preparados, expresados, creados o aislados a través de cualquier otro medio que implica dividir las secuencias de gen de inmunoglobulina humana para otras secuencias de ADN. Dichos anticuerpos humanos recombinantes tienen regiones constantes y variables derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. En ciertas modalidades, sin embargo, dichos anticuerpos humanos recombinantes se someten a mutagénesis in vitro (o, cuando se utiliza un animal transgénico para las secuencias Ig humanas, mutagénesis somática in vivo), y por lo tanto las secuencias de aminoácido de las regiones VH y VL de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, aunque se deriven y relacionen con secuencias VH y VL de línea germinal humana, pueden no existir naturalmente dentro del repertorio de línea germinal de anticuerpo humano in vivo.

Dichos anticuerpos específicos quiméricos, humanizados, humanos y doble pueden producirse mediante técnicas de ADN recombinante conocidas en el arte, por ejemplo utilizando métodos descritos en la Solicitud Internacional del PCT No. PCT/US86/02269; Solicitud de Patente Europea No. 184,187; Solicitud de Patente Europea No. 171,496; Solicitud de Patente Europea No. 173,494; Publicación Internacional PCT No. WO 86/01533; Patente Norteamericana No. 4,816,567; Solicitud de Patente Europea No. 125,023; Better y asociados (1988) Science 240:1041 a 1043; Liu y asociados (1987) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 84:3439 a 3443; Liu y asociados (1987) J.

Immunol. 139:3521 a 3526; Sun y asociados (1987) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 84:214 a 218; Nishimura y asociados (1987) Cáncer Res. 47:999 a 1005; Wood y asociados (1985) Nature 314:446 a 449; Shaw y asociados (1988) J. Nati. Cáncer Inst. 80:1553 a 1559); Morrison (1985) Science 229:1202 a 1207; Oi y asociados (1986) BioTechniques 4:214; Patente Norteamericana No. 5,225,539; Jones y asociados (1986) Nature 321:552 a 525; Verhoeyan y asociados (1988) Science 239:1534; y Beidler y asociados (1988) J. Immunol. 141:4053 a 4060, Queen y asociados, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 86:10029 a 10033 (1989), Patente Norteamericana No. 5,530,101, Patente Norteamericana No. 5,585,089, Patente Norteamericana No. 5,693,761, Patente Norteamericana No. 5,693,762, Selick y asociados, Publicación de Patente WO 90/07861, Patente Norteamericana No. 5,225,539 de Winter.

Un "anticuerpo aislado", tal como se utiliza en la presente invención, pretende referirse a un anticuerpo que está sustancialmente libre de otros anticuerpos que tienen diferentes especificidades antigénicas (por ejemplo, un anticuerpo aislado que enlaza específicamente hTNFa está sustancialmente libre de anticuerpos que enlazan específicamente a antígenos diferentes a hTNFa). Un anticuerpo aislado que enlaza específicamente a hTNFa, sin embargo puede tener reactividad cruzada con otros antígenos, tales como moléculas TNFa de otras especies. Además, un anticuerpo aislado puede estar sustancialmente libre de otros materiales y/o químicos celulares.

Un "anticuerpo de neutralización", tal como se utiliza en la presente invención (o un "anticuerpo que neutraliza la actividad hTNFa"), pretende referirse a un anticuerpo cuyo enlace a hTNFa da como resultado la inhibición de la actividad biológica de hTNFa. Esta inhibición de actividad biológica de hTNFa puede evaluarse midiendo uno o más indicadores de actividad biológica hTNFa, tal como citotoxicídad inducida por hTNFa (ya sea in vitro o in vivo), activación celular inducida por hTNFa y enlace hTNFa a receptores hTNFa. Estos indicadores de actividad biológica hTNFa pueden elaborarse a través de uno o más de diversos ensayos in vitro o in vivo estándar conocidos en la técnica (ver Patente Norteamericana No. 6,090,382). Preferentemente, la capacidad de un anticuerpo para neutralizar actividad hTNFa se evalúa mediante inhibición de citotoxicidad inducida por hTNFa de células L929. Como un parámetro adicional o alternativo de la actividad de la actividad hTNFa, se puede evaluar la capacidad de un anticuerpo para inhibir la expresión inducida por hTNFa de ELAM-1 en HUVEC, como una medida de activación celular inducida por hTNFa.

El término "resonancia de plasmón de superficie" tal como se utiliza en la presente invención, se refiere a un fenómeno óptico que permite el análisis de interacciones bioespecíficas en tiempo real mediante la detección de alteraciones en las concentraciones de proteína dentro de la matriz de biosensor, por ejemplo utilizando un sistema BIAcore (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Suecia y Piscataway, NJ.). Para descripciones adicionales, ver el Ejemplo 1 de la Patente Norteamericana No. 6,258,562 y las Publicaciones de Jonsson y asociados (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19; Jonsson y asociados (1991) Biotechniques 11:620 a 627; Johnsson y asociados (1995) J. Mol. Recognit. 8:125; y Johnnson y asociados (1991) Anal. Biochem. 198:268.

El término "Kdisociación", tal como se utiliza en la presente invención, pretende referirse a la constante de rango de disociación, para una disociación de un anticuerpo del complejo de anticuerpo/antígeno.

El término "Kd", tal como se utiliza en la presente invención, pretende referirse a la constante de disociación de una interacción de anticuerpo-antígeno particular.

El término "IC50" tal como se utiliza en la presente invención, pretende referirse a la concentración del inhibidor requerida para inhibir el punto extremo biológico de interés, por ejemplo neutralizar la actividad de citotoxicidad .

El término "dosis" tal como se utiliza en la presente invención, se refiere a una cantidad de inhibidor TNFa que se administra a un sujeto.

El término "dosificación", tal como se utiliza en la presente invención, se refiere a la administración de una sustancia (por ejemplo, un anticuerpo anti-TNFa) para lograr un objetivo terapéutico (por ejemplo, tratamiento de pérdida ósea).

Un "régimen de dosificación" describe un programa de tratamiento para un inhibidor TNFa, por ejemplo, un programa de tratamiento durante un período de tiempo prolongado y/o a lo largo del juicio del tratamiento, por ejemplo, administrar una primera dosis de inhibidor TNFa en la semana 0 seguido de una segunda dosis de inhibidor TNFa en un régimen de dosificación bisemanal. En una modalidad, el régimen de dosificación incluye administrar un inhibidor TNFa, por ejemplo, un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, una vez al mes o cada cuatro semanas.

Los términos "régimen de dosificación bisemanal", "dosificación bisemanal" o "administración bisemanal", tal como se utiliza en la presente invención, se refiere al curso de tiempo de administración de una sustancia (por ejemplo, un anticuerpo anti-TNFa) a un sujeto para lograr un objetivo terapéutico, por ejemplo, a lo largo del curso de tratamiento. El régimen de dosificación bisemanal no pretende incluir un régimen de dosificación semanal. Por ejemplo la sustancia puede administrarse a cada 9 a 19 días, más preferentemente, cada 11 a 17 días, incluso más preferentemente cada 13 a 15 días, y más preferentemente, cada 14 días. En una modalidad, el régimen de dosificación bisemanal se inicia en el sujeto en la semana 0 de tratamiento. En otra modalidad, se administra una dosis de mantenimiento en un régimen de dosificación bisemanal. En una modalidad, tanto las dosis de carga como de mantenimiento se administran de acuerdo con un régimen de dosificación bisemanal. En una modalidad, la dosificación bisemanal incluye un régimen de dosificación en donde las dosis de un inhibidor TNFa se administran a un sujeto cada semana comenzando la semana 0. En una modalidad, la dosificación bisemanal incluye un régimen de dosificación en donde las dosis de un inhibidor TNFa se administran a un sujeto cada dos semanas en forma consecutiva durante un período de tiempo determinado, por ejemplo, 4 semanas, 8 semanas, 16, semanas, 24 semanas, 26 semanas, 32 semanas, 36 semanas, 42 semanas, 48 semanas, 52 semanas, 56 semanas, etc. Los métodos de dosificación bisemanal también se describen en la Patente Norteamericana No. US 20030235585, incorporada a la presente invención como referencia.

El término "combinación" como en la frase "un primer agente en combinación con un segundo agente" incluye la coadministración de un primer agente y un segundo agente, el cual por ejemplo puede ser disuelto o mezclado internamente en el mismo transportador farmacéuticamente aceptable, o administración de un primer agente seguido de un segundo agente, o administración del segundo agente, seguido del primer agente. La presente invención, por consiguiente, incluye métodos de tratamiento terapéutico en combinación y composiciones farmacéuticas en combinación.

El término "concomitante" como en la frase "tratamiento terapéutico concomitante" incluye administrar un agente en la presencia de un segundo agente. Un método de tratamiento terapéutico concomitante incluye métodos en los cuales el primero, segundo, tercero o agentes adicionales se administran en conjunto. Un método de tratamiento terapéutico concomitante también incluye métodos en los cuales el primero o agentes adicionales se administran en la presencia de un segundo o agentes adicionales, en donde el segundo o agentes adicionales, por ejemplo, pueden haber sido administrados previamente. Se puede ejecutar un método de tratamiento terapéutico concomitante por etapas a través de diferentes actores. Por ejemplo, un actor puede administrar a un sujeto un primer agente y un segundo actor puede administrar al sujeto un segundo agente, y los pasos de administración pueden ser ejecutados al mismo tiempo o casi al mismo tiempo, o en momentos distintos, siempre que el primer agente (y agentes adicionales) sean después de la administración en la presencia del segundo agente (y agentes adicionales). El actor y el sujeto pueden ser la misma entidad (por ejemplo, humano).

El término "terapia de combinación", tal como se utiliza en la presente invención, se refiere a la administración de dos o más sustancias terapéuticas, por ejemplo, un anticuerpo anti-TNFa y otro fármaco. El otro fármaco(s) puede administrarse en forma concomitante, antes de, o después de la administración de un anticuerpo anti-TNFa.

El término "tratamiento", tal como se utiliza dentro del contexto de la presente invención, pretende incluir el tratamiento terapéutico así como medidas profilácticas o supresoras, para tratar pérdida ósea, por ejemplo, pérdida ósea de la mano, por ejemplo, pérdida ósea corticales de la mano. Por ejemplo, el término tratamiento, puede incluir administración de un inhibidor TNFa antes o después del desencadenamiento de pérdida ósea, por ejemplo, pérdida ósea, por ejemplo, pérdida ósea de la mano, previniendo o eliminando de esta forma signos de la enfermedad o trastorno. Como otro ejemplo, la administración de un inhibidor TNFa después de la manifestación clínica de pérdida ósea para combatir los síntomas y/o complicaciones y trastornos asociados con la pérdida ósea comprende "tratamiento" de la enfermedad. Además, la administración del agente después del desencadenamiento y después de los síntomas clínicos y/o complicaciones han sido desarrolladas, cuando la administración afecta parámetros clínicos de la enfermedad o trastorno y posiblemente disminuye la enfermedad, comprende "tratamiento" de la pérdida ósea. En una modalidad, el tratamiento de pérdidas de huesos en un sujeto comprende reducir signos y síntomas.

Los sujetos que "necesitan tratamiento" incluyen mamíferos tales como humano, que ya han tenido pérdida ósea, incluyendo aquellos en los cuales se evitará la enfermedad o trastorno.

La presente invención proporciona de manera general usos y composiciones mejoradas para tratar pérdida ósea, por ejemplo, pérdida ósea de la mano, por ejemplo, pérdida de hueso cortical de la mano con un inhibidor TNFa, por ejemplo anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo. Las composiciones de artículos de fabricación incluyendo equipos, que se relacionan con métodos y usos para tratar pérdida ósea también están contemplados como parte de la presente invención. Se describen en la presente invención varios aspectos de la misma.

II. USOS Y COMPOSICIONES PARA TRATAR PÉRDIDA ÓSEA La presente invención proporciona un medio para tratar pérdida ósea, incluyendo pérdida ósea de la mano, administrando un inhibidor TNFa, por ejemplo, un anticuerpo TNFa, o parte de enlace de antígenos del mismo, a un sujeto que necesita de los mismos. En una modalidad, el método de la presente invención se puede utilizar para tratar a un sujeto que tiene pérdida ósea asociada con otro trastorno incluyendo por ejemplo artritis reumatoide, osteoartritis, y/o osteoporosis. Los sujetos que pueden beneficiarse de los métodos de la presente invención incluyen los sujetos que han sido diagnosticados en pérdida ósea (o un trastorno asociado con pérdida ósea), así como sujetos identificados como estando en riesgo de pérdida ósea (incluyendo sujetos diagnosticados con un trastorno asociado con pérdida de hueso). En una modalidad, los métodos de la presente invención son útiles para el tratamiento de pérdida ósea de la mano.

En una modalidad, un inhibidor TNFa, por ejemplo, un anticuerpo TNFa, o parte de enlace de antígenos del mismo, se administra a un sujeto que tiene pérdida ósea (o un trastorno asociado con pérdida ósea), de modo que el progreso de la pérdida de hueso se detenga, o se disminuya en forma relativa a la pérdida ósea sin tratamiento. Por lo tanto los métodos de la presente invención se pueden utilizar para reducir pérdida ósea en un sujeto así como para evitar pérdida ósea adicional.

Un aspecto de la presente invención se refiere al descubrimiento inesperado de que los inhibidores TNFa, por ejemplo, anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, pueden utilizarse para tratar pérdida de hueso de la mano. Antes de este descubrimiento, un estudio utilizando un anticuerpo TNFa quimérico infliximab, mostró que incluso si se detiene la pérdida de hueso en la cadera y columna vertebral de sujetos tratados, no se detiene la pérdida ósea de la mano [9]. Por lo tanto en una modalidad, los métodos y composiciones de la presente invención se pueden utilizar para tratar pérdida ósea de la mano, incluyendo pérdida ósea de la mano asociada con RA, osteoartritis y osteoporosis.

Los métodos y composiciones de la presente invención se pueden utilizar para tratar pérdida ósea de la mano en un sujeto quien tiene o puede desarrollar pérdida ósea de la mano.

En una modalidad, los métodos de la presente invención son útiles para el tratamiento de pérdida de hueso cortical. El hueso cortical, o hueso compacto, en contraste con hueso trabecular o reticulado, es denso y forma la superficie de los huesos que contribuye al 80% del peso del esqueleto humano. Es extremadamente duro, formado de múltiples capas apiladas con algunas aberturas. Su principal función es soportar el cuerpo, proteger órganos, proporcionar palancas para movimiento y (compartido con hueso reticulado) almacenar minerales. Tal como se describe en la presente invención, un descubrimiento de los ejemplos que se proporcionan más adelante, es que los inhibidores TNFa pueden utilizarse para tratar pérdida ósea corticales. En una modalidad, los métodos de la presente invención se pueden utilizar para tratar pérdida ósea corticales de la mano.

El tratamiento pérdida ósea, por ejemplo, pérdida ósea corticales o pérdida ósea de la mano, por ejemplo, pérdida ósea corticales de la mano se puede evaluar utilizando medios conocidos en la técnica incluyendo pero sin limitarse a radiogrametría de rayos X digital (DXR) (Sectra, Linkóping, Suecia). DXR mide la densidad mineral ósea de la mano (BMD) y el índice cortical metacarpal (MCI) en la misma mano digitalizada para evaluación del daño radiográfico de la articulación. DXR es una versión en computadora de la técnica de radiogrametría tradicional. En radiografías de la mano, la computadora reconoce automáticamente las regiones de interés (ROI) alrededor de la parte más angosta del segundo, tercero y cuarto hueso metacarpal y mide el grosor cortical, ancho del hueso, y porosidad 118 veces por cm. DXR-BMD se define como: c X VPAcomb X (1-p), en donde es una constante (determinada por el resultado de que DXR-BMD, en promedio, es igual a la región del antebrazo distal medio del dispositivo Hologic QDR-2000); VPA es el volumen por área, y p es porosidad. DXR- CI se define como el grosor cortical combinado dividido entre el diámetro cortical externo y es una-medida de huesos relativa independiente del tamaño de hueso, longitud de hueso y configuración de captura de imagen. Otros ejemplos de medios a través de los cuales se puede determinar la pérdida ósea se describe en la Publicación de Haugeberg (2008) Best Pract Res Clin Rheumatol 22(6): 1127-39.

En una modalidad, la presente invención proporciona un método para mejorar la calificación DXR-MCI y/o DXR-BMD en un sujeto que tiene pérdida de hueso, en donde el método comprende administrar un inhibidor TNFa, tal como un anticuerpo TNFa, o parte de enlace de antígenos del mismo, al sujeto que necesita del mismo. En una modalidad, una mejoría en la calificación DXR-MCI y/o DXR-BMD de un sujeto es el mantenimiento de la calificación DXR-MCI y/o DXR-BMD del sujeto antes del tratamiento con el inhibidor TNFa. Dicho mantenimiento de la calificación DXR-MCI y/o DXR-BMD, indica que no está progresando la pérdida ósea. Como alternativa, en una modalidad, la mejoría en la calificación DXR-MCI y/o DXR-BMD del sujeto que está siendo tratado para pérdida óseo puede medirse a través de un rango disminuido de pérdida de la calificación DXR-MCI y/o DXR-BMD. La mejoría en la calificación DXR-MCI y/o DXR-BMD del sujeto puede medirse en forma relativa a la calificación de línea de base inicial determinada antes del tratamiento. Por ejemplo, un sujeto puede tener disminución en una calificación DXR-MCI 1.4 o menos (por ejemplo, -1.4, -1.3, -1.2, -1.1., -1.0, -0.9, -0.8, -0.7, -0.6, -0.5, -0.4, -0.3, -0.2, -0.1, o 0.0 relativa a una calificación de línea de base) después de aproximadamente 26 semanas de tratamiento o aproximadamente 13 tratamientos del inhibidor TNFa. En otro ejemplo, una disminución menor a 0.44 (por ejemplo, -0.43, -0.42, -0.41, -0.40, -0.39, -0.38, -0.37, -0.36, -0.35, -0.34, -0.33, -0.32, -0.31, -0.30, -0.29, -0.28, -0.27, -0.26, -0.25, -0.24, -0.23, -0.22, -0.21, -0.20, -0.19, -0.18, -0.17, -0.16, -0.15, -0.14, -0.13, -0.12, -0.11, -0.10, -0.09, -0.08, -0.07, -0.06, -0.05, -0.04, -0.03, -0.02, -0.01) en la calificación DXR-MCI de un sujeto relativa a la calificación de línea de base, indica tratamiento de pérdida ósea en un sujeto.

En una modalidad, la presente invención proporciona un método para tratar pérdida ósea en un sujeto en donde el método comprende administrar un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, por ejemplo un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, al sujeto en la semana 0 en un régimen de dosificación bisemanal. En una modalidad, el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, se administra en forma subcutánea a un sujeto que tiene pérdida ósea (o está en riesgo de tener pérdida ósea) de acuerdo con un régimen de dosificación bisemanal. Como alternativa, el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, se administra a un sujeto que tiene pérdida ósea (o está en riesgo de tener pérdida ósea) de acuerdo con un régimen de dosificación mensual o un régimen de dosificación en donde el anticuerpo, o parte de enlace de antígenos del mismo, se administra una vez cada cuatro semanas.

En una modalidad, la pérdida ósea se trata mediante la administración del anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, en un régimen de dosificación bisemanal durante al menos aproximadamente 2 semanas, al menos aproximadamente 6 semanas, al menos aproximadamente 12 semanas, al menos aproximadamente 16 semanas, al menos aproximadamente 18 semanas, al menos aproximadamente 20 semanas, al menos aproximadamente 22 semanas, al menos aproximadamente 24 semanas, al menos aproximadamente 30 semanas, al menos aproximadamente 36 semanas, al menos aproximadamente 52 semanas al menos aproximadamente 72 semanas, al menos aproximadamente 96 semanas, al menos aproximadamente 104 semanas, etc. Los rangos de valores entre cualesquiera de los valores mencionados anteriormente también están proyectados para estar incluidos en el alcance de la presente invención, por ejemplo, 23 semanas, 60 semanas, 64 semanas, etc.

En una modalidad, el inhibidor TNFa, por ejemplo, anticuerpo, o parte de enlace de antígenos del mismo, también puede administrarse a un sujeto para el tratamiento o pérdida ósea durante un período definido en meses, por ejemplo, 3 meses, 6 meses, 12 meses, 18 meses, 24 meses, 30 meses, 36 meses, 42 meses, 48 meses, 54 meses, 60 meses, etc. Los rangos de valores entre cualesquiera de los valores mencionados anteriormente también están proyectados para estar incluidos en el alcance de la presente invención, por ejemplo, 38 meses, 50 meses, 52 meses.

En una modalidad, el inhibidor TNFa, por ejemplo, anticuerpo, o parte de enlace de antígenos del mismo, también se puede administrar a un sujeto para el tratamiento de pérdida ósea durante un período definido en años, por ejemplo 1 año, 2 años, 3 años, 4 años, 5 años, 6 años, 7 años, 8 años, etc. Los rangos de valores entre cualesquiera de los valores mencionados anteriormente también están proyectados para estar incluidos dentro del alcance de la presente invención, por ejemplo, 1.5 años, 2.2 años, 3.5 años.

El inhibidor TNFa utilizado en el método de la presente invención también se puede administrar de acuerdo con una determinación de dosificación conocida en la técnica. Por ejemplo, en una modalidad, el inhibidor TNFa se administra al sujeto para el tratamiento de pérdida ósea de acuerdo con un esquema de dosificación a base de peso, por ejemplo, mg/kg mediante lo cual se determina la cantidad de inhibidor TNFa por el peso del sujeto. Como alternativa, el inhibidor TNFa puede administrarse de acuerdo con una dosis fija o dosis de cuerpo total, mediante lo cual se suministra con cada administración, una cantidad fija constante del inhibidor TNFa. En una modalidad, el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, se administra al sujeto en una dosis fija que fluctúa de 10 a 100 mg. En una modalidad, el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, se administra al sujeto en una dosis fija de 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, etc. Los rangos de valores entre cualesquiera de los valores mencionados anteriormente también están proyectados para estar incluidos en el alcance de la presente, 85 mg, 95 mg, ya que los rangos están basados en las dosis antes mencionadas, por ejemplo, 20 a 80 mg.

En una modalidad, la administración del inhibidor TNFa es parenteral (por ejemplo, intravenosa, subcutánea, intraperitoneal , intramuscular). En una modalidad, el inhibidor TNFa se administra mediante infusión o inyección intravenosa. En otra modalidad, el inhibidor TNFa se administra mediante inyección intramuscular, o mediante inyección subcutánea (por ejemplo, una inyección subcutánea bisemanal). En una modalidad, un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, se administra al sujeto de acuerdo con técnicas pulmonares.

Los regímenes de dosificación aquí descritos se pueden ajusfar para proporcionar la respuesta deseada óptima, por ejemplo, tratamiento de pérdida ósea en consideración con las enseñanzas de la presente invención. Deberá observarse que los valores de dosificación pueden variar con el tipo y severidad de pérdida ósea. También se comprenderá que para cualquier sujeto en particular, los regímenes de dosificación específicos pueden ajustarse con el tiempo de acuerdo con las enseñanzas de la especificación y la necesidad individual y juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que las cantidades de dosificación y rangos aquí establecidos únicamente de ejemplo y no pretenden limitar el alcance o práctica de la invención reivindicada .

En una modalidad, los métodos de la presente invención comprenden seleccionar un sujeto que tiene o está en riesgo de tener pérdida ósea (o un trastorno asociado con pérdida ósea).

En otra modalidad, el método de la presente invención comprende administrar un inhibidor TNFa a un sujeto quien fue seleccionado previamente por tener o fue seleccionado por estar en riesgo de tener pérdida ósea (o un trastorno asociado con pérdida ósea).

En una modalidad, los anticipadores de pérdida ósea de la mano se describen en los ejemplos aquí descritos e incluyen edad y/o niveles CRP.

Los métodos y composiciones de la presente invención se pueden usar para tratar pérdida ósea asociada con otro trastorno. En una modalidad, se utiliza un inhibidor TNFa para reducir la pérdida ósea, por ejemplo, pérdida ósea de la mano, en un sujeto que tiene un trastorno asociado con pérdida de hueso. También está dentro del alcance de la presente invención que los métodos aquí descritos se pueden utilizar para prevenir pérdida ósea en un sujeto que tiene o está en riesgo de tener un trastorno asociado con pérdida ósea. Los detalles adicionales con respecto a trastornos asociados con pérdida ósea se describen más adelante.

Artritis reumatoide El factor de necrosis de tumor (TNF) es una citocina pivotal en la patogénesis de artritis reumatoide (RA). TNFa han estado implicado en la activación de inflamación de tejido y origina la destrucción de la articulación en artritis reumatoide (ver Publicación Moeller, A., y asociados (1990) Cytokine 2:162 a 169; Patente Norteamericana No. 5,231,024 de Moeller y asociados; Publicación de Patente Europea No. 260 610 B1 de Moeller, A.; Tracey y Cerami, supra; Arend, W. P. y Dayer, J-M. (1995) Arth. Rheum. 38:151 a 160; Fava, R. A., y asociados (1993) Clin. Exp. Immunol. 94:261 a 266). Además de destrucción de la articulación, los sujetos con RA tienen pérdida de hueso local y generalizada.

En años recientes, los modificadores de respuesta biológica que inhiben la actividad TNF, se han convertido en terapias establecidas para RA. Adalimumab, etanercept, y infliximab han demostrado mejorías marcadas tanto en el control de la enfermedad como en el retraso y prevención de daño radiográfico entre pacientes RA (Breedveld y asociados, Arthritis Rheum 2006; 54:26 a 37; Genovese y asociados J Rheumatol 2005; 32:1232-42; Keystone y asociados, Arthritis Rheum 2004; 50:1400-11; Navarro-Sarabia y asociados, Cochrane Datábase Syst Rev 2005 Jul. 20; (3):CD005113; Smolen y asociados, Arthritis Rheum 2006; 54:702-10; St. Clair y asociados Arthritis Rheum 2004; 50:3432-43; van der Heijde y asociados, Arthritis Rheum 2006; 54:1063-74).

Con respecto a los efectos de la terapia anti-TNF en pérdida ósea de la mano en sujetos que tienen artritis reumatoide (RA), únicamente se han llevado a cabo algunos estudios. Un estudio de cohorte abierto exploró el cambio BMD en la mano entre pacientes RA que reciben infliximab. En este cohorte, un descubrimiento clave fue que, incluso si se detiene la pérdida ósea en la cadera y columna vertebral, no se detiene la pérdida ósea en la mano [9], Por lo tanto, aunque el tratamiento con el inhibidor de TNFa, infliximab, detuvo la pérdida ósea generalizada en sujetos con RA, infliximab falló en detener la pérdida ósea en las manos. La presente invención proporciona el sorprendente descubrimiento de que los inhibidores TNFa, tales como anticuerpos TNFa, se pueden utilizar para tratar pérdida ósea, incluyendo pérdida ósea de la mano en sujetos que tienen RA.

También están dentro del alcance de la presente invención que los inhibidores TNFa puedan utilizarse para tratar pérdida ósea en sujetos en riesgo de tener pérdida ósea, incluyendo, por ejemplo, sujetos diagnosticados con RA. En una modalidad, un sujeto en riesgo de desarrollar pérdida ósea es un sujeto que tiene RA temprana o está diagnosticada con RA menos de 3 años.

En una modalidad, el tratamiento de pérdida de hueso se logra administrando un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, a un sujeto que tiene artritis reumatoide, en donde el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo se administra en un régimen de dosificación bisemanal. En una modalidad, el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, se administra en una dosis de aproximadamente 10 a 100 mg, incluyendo, pero sin limitarse a una dosis de aproximadamente 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, o 100 mg. En una modalidad, el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, es adalimumab o golimumab. Sorprendentemente, tal como aquí se muestra, se ha descubierto que un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, reduce la pérdida ósea, por ejemplo, pérdida de hueso cortical, por ejemplo, pérdida de hueso cortical de la mano, en sujetos con artritis reumatoide (RA) independientemente de su efecto en la actividad de la enfermedad evaluada en forma clínica. Por lo tanto, los beneficios de la terapia de inhibidor TNFa pueden derivarse en sujetos que tienen RA que no muestran mejorías clínicas, ya que la pérdida ósea puede ser tratada independientemente de los parámetros clínicos.

Osteoporosis Los métodos de la presente invención se pueden utilizar para tratar pérdida ósea, por ejemplo, pérdida ósea de la mano en un sujeto que tiene o está en riesgo de tener osteoporosis. La osteoporosis es una enfermedad caracterizada por masa ósea de bajo nivel y deterioro estructural del tejido óseo. La osteoporosis puede conducir a fragilidad de huesos y una susceptibilidad incrementada a fracturas, especialmente a la cadera, columna vertebral y cintura, aunque puede ser afectado cualquier hueso. Los ejemplos de osteoporosis incluyen pero no se limitan a osteoporosis idiopática, osteoporosis secundaria y osteoporosis temporal de la cadera.

La osteopenia es una condición en donde la densidad mineral ósea es menor a la normal, y también puede tratarse de acuerdo con los métodos de la presente invención. La osteopenia con frecuencia se considera un precursor de osteoporosis. Por lo tanto, los inhibidores TNFa se pueden utilizar para reducir o prevenir la pérdida ósea, incluyendo pérdida ósea de la mano, en pacientes que tienen osteopenia.

La osteoporosis y osteopenia pueden resultar no únicamente del transcurso de los años y estado reproductor, sino también puede ser secundaria a numerosas enfermedades y trastornos así como debido al uso prolongado de numerosos medicamentos, por ejemplo anticonvulsivos (por ejemplo, para epilepsia), corticoesteroides (por ejemplo, para artritis reumatoide y asma), y/o agentes inmunosupresores (por ejemplo, cáncer). Por ejemplo, la osteoporosis inducida por glucocorticoides es una forma de osteoporosis que es originada por tomar medicamentos glucocorticoides tales como as prednisona (Deltasona, Orasona, etc.), prednisolona (Prelona), dexametasona (Decadron, Hexadrol), y cortisona (Acetato de Cortona). Estos medicamentos con frecuencia se utilizan para ayudar a controlar muchas enfermedades reumáticas, incluyendo artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, enfermedad inflamatoria del intestino, y polimialgia reumática.

Otras enfermedades en las cuales la osteoporosis puede ser secundaria incluyen pero no se limitan a artritis reumatoide juvenil, diabetes, osteogénesis imperfecta, hipertiroidismo, hiperparatiroidismo, síndrome de Cushing, síndrome de mala absorción, anorexia nerviosa y/o enfermedad de riñon. Además, se han asociado numerosos comportamientos con osteoporosis, tal como, inactividad o inmovilidad prolongada, nutrición no adecuada (especialmente calcio, vitamina D); ejercicio excesivo que conduce a amenorrea (ausencia de períodos), fumar y/o abuso de alcohol.

En forma notable, los pacientes con trastornos reumatológicos tipo artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, lupus eritematoso sistémico y artritis idiopática juvenil poliarticular, están en riesgo de osteoporosis, ya sea como parte de su enfermedad o debido a otros factores de riesgo (notablemente terapia corticoesteroide). Por lo tanto, en una modalidad, los métodos de la presente invención se pueden utilizar para tratar osteoporosis en un paciente que tiene artritis reumatoide.

Osteoartritis Los métodos de la presente invención se pueden utilizar para tratar pérdida ósea, por ejemplo, pérdida ósea de la mano, en un sujeto que tiene o que está en riesgo de tener osteoartritis. El factor de necrosis de tumor ha estado implicado en la patofisiología de osteoartritis, (Venn y asociados (1993) Arthritis Rheum. 36:819; Westacott y asociados (1994) J Rheumatol. 21:1710). Osteoartritis (OA) también es referida como osteoartritis hipertrófica, osteoartritis y enfermedad de articulaciones degenerativa. OA es una enfermedad degenerativa crónica de las articulaciones esqueléticas que afecta articulaciones específicas normalmente rodillas, caderas, articulaciones de las manos y columna vertebral, en adultos de todas las edades. OA está caracterizado por un número de las siguientes manifestaciones incluyendo degeneración y adelgazamiento del cartílago articular con desarrollo asociado de "úlceras" o cráteras, formación de osteofito, hipertrofia de huesos en los márgenes y cambios de la membrana sinovial y alargamiento de articulaciones afectadas. Además, la osteoartritis está acompañada por dolor y rigidez, particularmente después de actividad prolongada. El anticuerpo, o fragmento de enlace de antígeno del mismo, de la presente invención se puede utilizar para tratar osteoartritis. Las características radiográficas características de la osteoartritis incluyen estrechamiento de espacio de la articulación, esclerosis subcondral, osteofitosis, formación de quistes subcondral, cuerpo ósea laxo (o "ratón articular").

Los medicamentos utilizados para tratar osteoartritis incluyen una variedad de fármacos anti-inflamatorios no esteroidales (NSAIDs). Además, también se utilizan los inhibidores COX 2, incluyendo Celebrex, Vioxx, y Bextra y Etoricoxib, para tratar OA. Los esferoides que pueden inyectarse directamente en articulación también se pueden utilizar para reducir inflamación y dolor. En una modalidad de la presente invención, los anticuerpos TNFa de la presente invención se administran en combinación con NSAID, un inhibidor COX2 y/o esteroides.

Otros trastornos asociados con pérdida ósea En otra modalidad, la pérdida ósea se puede tratar en un sujeto que tiene o está en riesgo de tener un trastorno asociado con pérdida ósea, por ejemplo, un trastorno en el cual existe una pérdida progresiva de la densidad ósea y adelgazamiento del tejido óseo. Dichas condiciones incluyen pero no se limitan a, artritis de erosión, malignidades de huesos, osteomalacia, cambios esqueléticos de hiperparatiroidismo, falla renal crónica (osteodistrofia renal), osteítis deformans (enfermedad de hueso de Paget) y metástasis osteolítica. En una modalidad, los métodos de la presente invención se utilizan para tratar a un sujeto que tiene un trastorno relacionado con TNFa (ver, por ejemplo los trastornos descritos en la Patente Norteamericana No. US20040126372 y US6,090,382, cuyos contenidos están incorporados de manera expresa a la presente invención como referencia).

En una modalidad, el sujeto a quien se le administra un inhibidor TNFa para el tratamiento de pérdida de ósea, se puede seleccionar por tener y/o estar en riesgo de tener pérdida ósea. Por ejemplo, un sujeto quien es postmenopáusico puede estar en riesgo de desarrollar pérdida ósea. En otro ejemplo, el sujeto diagnosticado con osteoartritis puede tener pérdida ósea, incluyendo pérdida ósea de la mano y por consiguiente se puede beneficiar de los métodos de la presente invención. Por lo tanto, en una modalidad la presente invención incluye identificación de sujetos que se pueden beneficiar de los métodos de la presente invención, por ejemplo, tratamiento de pérdida ósea, por ejemplo, pérdida ósea de la mano, y en forma subsecuente administrar un inhibidor TNFa al sujeto para tratamiento. En una modalidad, la presente invención también proporciona un método para tratar pérdida ósea de la mano en un sujeto, en donde el método comprende seleccionar un sujeto quien tienen pérdida ósea de la mano o está en riesgo de tener pérdida ósea de la mano y administrar un inhibidor TNFa al sujeto, de modo que se trate la pérdida ósea de la mano. Como alternativa, el método de la presente invención se puede llevar a cabo en un sujeto quien fue seleccionado previamente por tener o estar en riesgo de tener pérdida ósea, incluyendo pérdida ósea de la mano.

III. INHIBIDORES TNF Un inhibidor TNFa utilizado en los métodos y composiciones de la presente invención incluye cualquier agente que interfiera con la actividad de TNFa. En una modalidad preferida, el inhibidor TNFa puede neutralizar la actividad TNFa, particularmente actividad TNFa perjudicial.

En una modalidad, el inhibidor TNFa utilizado en la presente invención es un anticuerpo TNFa (también referido en la presente invención como un anticuerpo TNFa), o un fragmento de enlace de antígeno del mismo, incluyendo anticuerpos quiméricos humanizados humanos. Los ejemplos de anticuerpos TNFa que se pueden utilizar en la presente invención incluyen pero no se limitan a, infliximab (Remicade®, Johnson y Johnson; descritos en la Patente Norteamericana No. 5,656,272, incorporada a la presente invención como referencia), CDP571 (un anticuerpo lgG4 anti-TN F-alfa monoclonal humanizado), CDP 870 (un fragmento de anticuerpo anti-TN F-alfa monoclonal humanizado), un dAb anti-TNF (Peptech), CNTO 148 (golimumab; Medarex y Centocor, ver Publicación de Patente WO 02/12502 y Patente Norteamericana No. 7,250,165, incorporadas a la presente invención como referencia), y adalimumab (HUMIRA® Abbott Laboratories, un mAb anti-TNF humano descrito en la Patente Norteamericana No. 6,090,382 como D2E7). Los anticuerpos TNF adicionales (y secuencias de los mismos) que se pueden utilizar en la presente invención se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,593,458; 6,498,237; 6,451,983; 7,250,165; y 6,448,380, cada una de las cuales se incorpora de manera expresa a la presente invención como referencia.

Otros ejemplos de inhibidores TNFa que se pueden utilizar en los métodos y composiciones de la presente invención incluyen etanercept (Enbrel, descrito en las Publicaciones de Patente WO 91/03553 y WO 09/406,476), receptor TNF soluble Tipo I, receptor TNF soluble pegilado Tipo I (PEGs TNF-R1), p55TNFR1gG (Lenercept), y proteína de enlace TNF recombinante (r-TBP-l) (Serono).

En una modalidad, el término "inhibidor TNFa" excluye infliximab. En una modalidad, el término "inhibidor TNFa" excluye adalimumab. En otra modalidad, el término "inhibidor TNFa" excluye adalimumab y infliximab.

En una modalidad, el término "inhibidor TNFa" excluye etanercept, y, opcionalmente adalimumab, infliximab, y adalimumab y infliximab.

En una modalidad, el término "anticuerpo TNFa" excluye infliximab. En una modalidad, el término "anticuerpo TNF " excluye adalimumab. En otra modalidad, el término "anticuerpo TNFa" excluye adalimumab y infliximab.

En una modalidad, la presente invención presenta usos y composiciones para tratar o determinar la eficacia de un inhibidor TNFa para el tratamiento de pérdida ósea, en donde el anticuerpo TNFa es un anticuerpo humano aislado, o parte de enlace de antígenos del mismo, que enlaza a TNFa humano con alta afinidad y un rango de disociación bajo, y también tiene alta capacidad de neutralización. Preferentemente, los anticuerpos humanos utilizados en la presente invención son anticuerpos anti-hTNFa humanos de neutralización, recombinantes. El anticuerpo de neutralización recombinante más preferido de la presente invención se refiere en la misma como D2E7, también referido como HUMIRA o adalimumab (la secuencia de aminoácido de la región D2E7 VL se muestra en la SEC ID NO: 1; la secuencia de aminoácido de la región D2E7 VH se muestra en la SEC ID NO: 2). Las propiedades de D2E7 (adalimumab/HUMIRA®) han sido descritas en la Publicación de Salfeld y asociados, Patentes Norteamericanas Nos. 6,090,382, 6,258,562 y 6,509,015, cada una de las cuales está incorporada a la presente invención como referencia. Los métodos de la presente invención también se pueden llevar a cabo utilizando anticuerpos anti-hTNFa de múrido quiméricos y humanizados que han pasado por pruebas clínicas para tratamiento de artritis reumatoide (ver por ejemplo las Publicaciones de Elliott, M. J., y asociados (1994) Lancet 344:1125 a 1127; Elliot, M. J., y asociados (1994) Lancet 344:1105 a 1110; Rankin, E. C, y asociados (1995) Br. J. Rheumatol. 34:334 a 342).

En una modalidad, el método de la presente invención incluye determinar una eficacia de anticuerpos D2E7 y las partes de anticuerpo, anticuerpos relacionados con D2E7 y partes de anticuerpo u otros anticuerpos humanos y partes de anticuerpos con propiedades equivalentes a D2E7, tal como enlace de afinidad de alto nivel a hTNFa con cinéticas de disociación de bajo nivel y alta capacidad de neutralización, para el tratamiento de pérdida ósea. En una modalidad, la presente invención proporciona tratamiento con un anticuerpo humano aislado o una parte de enlace de antígenos del mismo, que se disocia de TNFa humana con un Kd de 1x10-8 M o menos y una constante de rango Kdisociación de 1x10-3 s-1 o menos, ambos determinados mediante resonancia de plasmón de superficie, y neutraliza la citotoxicidad TNFa humana en un ensayo L929 in vitro estándar con un IC50 de 1x10-7 M o menos. Más preferentemente, el anticuerpo humano aislado, o parte de enlace de antígenos del mismo, se disocia de TNFa humana con una Kdisociación de 5x10-4 s-1 o menos, o incluso más preferentemente, con una Kdisociación de 1x10-4 s-1 o menos. Más preferentemente, el anticuerpo humano aislado, o parte de enlace de antígenos del mismo, neutraliza la citotoxicidad TNFa humana en un ensayo L929 estándar con un IC50 de 1x10-8 M o menos, incluso más preferentemente un IC50 de 1x10-9 M o menos y aún más preferentemente un IC50 de 1x10-10 M o menos. En una modalidad preferida, el anticuerpo es un anticuerpo recombinante humano aislado, o parte de enlace de antígenos del mismo.

Es bien sabido en la técnica que los dominios CDR3 de cadena pesada y ligera del anticuerpo desempeñan un papel importante en la especificidad/afinidad de enlace de un anticuerpo para un antígeno. Por consiguiente, en otro aspecto, la presente invención pertenece al tratamiento de pérdida ósea, administrando anticuerpos humanos que tienen cinéticas de disociación lenta para asociación con hTNFa y que tienen dominios CDR3 de cadena ligera y pesada que estructuralmente son idénticos a, o se relacionan con los de D2E7. La posición 9 de la CDR3 D2E7 VL puede ser ocupada por Ala o Thr sin afectar sustancialmente la Kdisociación . Por consiguiente, un motivo de consenso para CDR3 D2E7 VL comprende la secuencia de aminoácido: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEC ID NO: 3). Además, la posición 12 de la CDR3 D2E7 VH puede ser ocupada por Tyr o Asn, sin afectar sustancialmente la Kdisociación. Por consiguiente, un motivo de consenso para la CDR3 D2E7 VH comprende la secuencia de aminoácido: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEC ID NO: 4). Además, tal como se muestra en el Ejemplo 2 de la Patente Norteamericana No. 6,090,382, el dominio CDR3 de las cadenas pesadas y ligeras D2E7, es adecuado para sustitución con un residuo de alanina simple (en la posición 1, 4, 5, 7 ó 8 dentro de la CDR3 VL o en la posición 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ó 11 dentro de la CDR3 VH) sin afectar sustancialmente la Kdisociación. Aún además, los expertos en la técnica apreciarán que, debido a la docilidad de los dominios CDR3 D2E7 VL y VH a sustituciones mediante alanina, sustitución de otros aminoácidos con dominios CDR3 puede ser posible aunque detengan aún la constante de rango de disociación baja del anticuerpo, en particular sustituciones con aminoácidos conservadores. Preferentemente, se elaboran no más de una a cinco sustituciones de aminoácido conservadoras dentro de los dominios CDR3 D2E7 VL y/o VH. Más preferentemente, se elaboran no más de una a tres sustituciones de aminoácido conservadoras dentro de los dominios CDR3 VL y/o VH. Además, las sustituciones de aminoácido conservadoras no se deben realizar en las posiciones de aminoácido criticas para el enlace a hTNFa. Las posiciones 2 y 5 de la CDR3 D2E7 VL y las posiciones 1 y 7 de la CDR3 D2E7 VH parecen ser importantes para la interacción con hTNFa y por lo tanto, las sustituciones de aminoácido conservadoras preferentemente no se elaboran en estas posiciones (aunque es aceptable una sustitución de alanina en la posición 5 de la CDR3 D2E7 VL tal como se describió anteriormente) (ver Patente Norteamericana No. 6,090,382).

Por consiguiente, en otra modalidad, el anticuerpo o parte de enlace de antígenos del mismo contiene preferentemente las siguientes características: a) se disocia de TNFa humana con una constante de rango Kdisociación de 1x10-3 s-1 o menos, tal como se determina mediante resonancia de plasmón de superficie; b) tiene un dominio CDR3 de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 3, o se modificada a partir de SEC ID NO: 3 por una sustitución de alanina simple en la posición 1, 4, 5, 7 ó 8 o por de una a cinco sustituciones de aminoácido conservadoras en las posiciones 1, 3, 4, 6, 7, 8 y/o 9; c) tiene un dominio CDR3 de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 4, o se modifica a partir de SEC ID NO: 4 a través de una sustitución de alanina simple en la posición 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 o 11 o a través de una a cinco sustituciones de aminoácido conservadoras en las posiciones 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 y/o 12.

Más preferentemente, el anticuerpo, o parte de enlace de antígenos del mismo, se disocia de TNFa humana con una Kdisociación de 5x10-4 s-1 o menos. Incluso más preferentemente, el anticuerpo, o parte de enlace de antígenos del mismo, se disocia de TNFa humana con una Kdisociación de 1x10-4 s-1 o menos.

Aún en otra modalidad, el anticuerpo o parte de enlace de antígenos del mismo contiene preferentemente una región variable de cadena ligera (LCVR) que tiene un dominio CDR3 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 3, o modificada a partir de SEC ID NO: 3 a través de una sustitución de alanina simple en la posición 1, 4, 5, 7 ó 8, y con una región variable de cadena pesada (HCVR) que tiene un dominio CDR3 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 4, o modificada a partir de SEC ID NO: 4 por una sustitución de alanina simple en la posición 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ó 11. Preferentemente, la LCVR tiene además un dominio CDR2 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 5 (es decir la CDR2 D2E7 VL) y la HCVR tiene además un dominio CDR2 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 6 (es decir, la CDR2 D2E7 VH). Incluso en forma más preferentemente, la LCVR tiene además un dominio CDR1 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 7 (es decir, la CDR1 D2E7 VL) y la HCVR tienen un dominio CDR1 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 8 (por ejemplo, la CDR1 D2E7 VH). Las regiones de estructura para VL son preferentemente de la familia de línea germinal humana V I, más preferentemente del gen VK de línea germinal humana A20 y más preferentemente de la secuencia de estructura D2E7 VL mostradas en las figuras 1A y 1B de la Patente Norteamericana No. 6,090,382. Las regiones de estructura para VH son preferentemente de la familia de línea germinal humana VH3, más preferentemente del gen VH de línea germinal humana DP-31 y más preferentemente de las secuencias de estructura D2E7 VH mostradas en las figuras 2A y 2B de la Patente Norteamericana No. 6,090,382.

Por consiguiente, en otra modalidad, el anticuerpo o parte de enlace de antígenos del mismo contiene preferentemente una región variable de cadena ligera (LCVR) que comprende la secuencia de aminoácido de la SEC ID NO: 1 (es decir, D2E7 VL) y una región variable de cadena pesada (HCVR) que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 2 (es decir, D2E7 VH). En ciertas modalidades, el anticuerpo comprende una región constante de cadena pesada tal como una región constante I gG 1 , lgG2, lgG3, lgG4, IgA, IgE, IgM o IgD. Preferentemente, la región constante de cadena pesada es una región constante de cadena pesada I g G 1 o una región constante de cadena pesada lgG4. Además, el anticuerpo puede comprender una región constante de cadena ligera, ya sea región constante de cadena ligera kappa o región constante de cadena ligera lambda. Preferentemente, el anticuerpo comprende una región constante de cadena ligera kappa. Como alternativa, la parte del anticuerpo puede ser, por ejemplo, un fragmento Fab o un fragmento Fv de cadena simple.

Aún en otras modalidades, la presente invención incluye usos de un anticuerpo humano aislado, o parte de enlace de antígenos del mismo, que contiene dominio CDR3 VL y VH relacionados con D2E7. Por ejemplo, los anticuerpos, o parte de enlace de antígenos del mismo, con una región variable de cadena ligera (LCVR) que tiene un dominio CDR3 que comprende una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NO: 3, SEC ID NO: 11, SEC ID NO: 12, SEC ID NO: 13, SEC ID NO: 14, SEC ID NO: 15, SEC ID NO: 16, SEC ID NO: 17, SEC ID NO: 18, SEC ID NO: 19, SEC ID NO: 20, SEC ID NO: 21, SEC ID NO: 22, SEC ID NO: 23, SEC ID NO: 24, SEC ID NO: 25 y SEC ID NO: 26 o con una región variable de cadena pesada (HCVR) que tiene un dominio CDR3 que comprende una secuencia de aminoácido seleccionado del grupo que consiste en SEC ID NO: 4, SEC ID NO: 27, SEC ID NO: 28, SEC ID NO: 29, SEC ID NO: 30, SEC ID NO: 31, SEC ID NO: 32, SEC ID NO: 33, SEC ID NO. 34 y SEC ID NO: 35.

El anticuerpo TNFa utilizado en los métodos y composiciones de la presente invención se pueden modificar para el tratamiento mejorado de pérdida ósea. En algunas modalidades, el anticuerpo TNFa o parte de enlace de antígenos del mismo, se modifica químicamente para proporcionar un efecto deseado. Por ejemplo, la pegilación de anticuerpos o fragmentos de anticuerpo de la presente invención se puede llevar a cabo a través de una de las reacciones de pegilación conocidas en la técnica, tal como se describe, por ejemplo, en las siguientes referencias: Focus on Growth Factors 3: 4 a 10 (1992); EP 0 154 316; y EP 0 401 384 (cada una de las cuales está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia). Preferentemente, la pegilación se lleva a cabo a través de una reacción de acilación o una reacción de alquilación con una molécula de polietilenglicol reactiva (o un polímero soluble en agua reactivo análogo). Un polímero soluble en agua preferida para pegilación de los anticuerpos y fragmentos de anticuerpo de la presente invención, es polietilenglicol (PEG). Tal como se utiliza en la presente invención, el término "polietilenglicol" pretende comprender cualesquiera de las formas de PEG que hayan sido utilizadas para derivar otras proteínas tales como (Cl — CIO) alcoxi- o ariloxi- polietilenglicol .

Los métodos para preparar anticuerpos pegilados y fragmentos de anticuerpo de la presente invención, generalmente comprenderán los pasos de (a) hacer reaccionar el anticuerpo o fragmento de anticuerpo con polietilenglicol, tal como un éster reactivo o derivado de aldehido de PEG, bajo condiciones en donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo queda adherido a uno o más grupos PEG, y (b) obtener los productos de reacción. Tal como lo apreciarán los expertos en la técnica, se seleccionan las condiciones de reacción óptimas o reacciones de acilación con base en parámetros conocidos y el resultado deseado.

Los anticuerpos pegilados y fragmentos de anticuerpo generalmente se pueden utilizar para derivar o prevenir la pérdida ósea mediante administración de anticuerpos TNFa y fragmentos de anticuerpo aquí descritos. Generalmente, los anticuerpos pegilados y fragmentos de anticuerpo han incrementado la vida media, en comparación con anticuerpos no pegilados y fragmentos de anticuerpo. Los anticuerpos pegilados y fragmentos de anticuerpo se pueden emplear solos, juntos o en combinación con otras composiciones farmacéuticas.

Aún en otra modalidad de la presente invención, los anticuerpos TNFa o fragmentos de los mismos se pueden alterar cuando la región constante del anticuerpo se modifica para reducir al menos una función efectora biológica transmitida por región constante relativa a un anticuerpo no modificado. Para modificar un anticuerpo de la presente invención, de modo que exhiba enlace reducido al receptor Fe, el segmento de región constante de inmunoglobulina del anticuerpo se puede mutar en regiones particulares necesarias para las interacciones del receptor Fe (FcR) (ver por ejemplo las Publicaciones de Canfield, S. . y S. L. Morrison (1991) J. Exp. Med. 173:1483 a 1491; y Lund, J. y asociados (1991) J. of Immunol. 147:2657 a 2662). La reducción de la capacidad de enlace FcR del anticuerpo para reducir también otras funciones efectoras que dependen de las interacciones FcR, tal como opsonización y fagocitosis y citotoxicidad celular dependiente de antígenos.

Un anticuerpo o parte de anticuerpo utilizado en los métodos de la presente invención, se puede derivar de una sal a otra molécula funcional (por ejemplo, otro péptido o proteína). Por consiguiente, los anticuerpos y partes de anticuerpo de la presente invención están proyectados para incluir derivados y formas de otra forma modificadas de los anticuerpos anti-hTNFa humanos aquí descritos, incluyendo moléculas de inmunoadhesión. Por ejemplo, un anticuerpo o parte de anticuerpo de la presente invención se puede enlazar funcionalmente (por ejemplo mediante acoplamiento químico, fusión genética, asociación no covalente u de otra forma) a una o más de otras entidades moleculares tales como otros anticuerpos (por ejemplo un anticuerpo biespecífico o diacuerpo), un agente detectable o agente citotóxico, un agente farmacéutico, y/o proteína o péptido que puede transmitir la asociación del anticuerpo o parte de anticuerpo con otra molécula (tal como región de centro de estreptavidina o etiqueta de polihistidina).

Un tipo de anticuerpo derivado se produce reticulando dos o más anticuerpos (del mismo tipo o de tipos diferentes, por ejemplo, para crear anticuerpos biespecíficos). Los reticuladores adecuados incluyen los que son heterobifuncionales, que tienen dos grupos reactivos distintos separados por un espaciador adecuado (por ejemplo, éster de m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimida) o homobifuncionales (por ejemplo, suberato de disuccinimidilo). Dichos enlazadores están disponibles en Pierce Chemical Company, Rockford, 111.

Los agentes detectables útiles con los cuales un anticuerpo o parte de anticuerpo de la presente invención se puede derivar incluyen compuestos fluorescentes. Los agentes detectables fluorescentes de ejemplo incluyen fluorescenia, isocianato de fluorescenia, rodamina, cloruro de 5-dimetilamin-1 -naftalensulfonilo, ficoeritrina y similares. Un anticuerpo también se puede derivar con enzimas detectables, tales como fosfatasa alcalina, peroxidasa de rábano, oxidasa de glucosa y similares. Cuando un anticuerpo se deriva con una enzima detectable, se detecta agregando reactivos adicionales que la enzima utiliza para producir un producto de reacción detectable. Por ejemplo, cuando está presente la peroxidasa de rábano en un agente detectable, la adición del peróxido de hidrógeno y diaminobencidina conduce a un producto de reacción con color, el cual es detectable. También se puede derivar un anticuerpo con biotina, y detectarse a través de una medida indirecta del enlace de avidina o estreptavidina.

Un anticuerpo, o parte de anticuerpo, utilizado en los métodos y composiciones de la presente invención, se pueden preparar mediante expresión recombinante de genes de cadena ligera y pesada de inmunoglobulina en una célula huésped. Para expresar en forma recombinante un anticuerpo, se transfecta una célula huésped con uno o más vectores de expresión recombinantes que llevan fragmentos ADN que codifican las cadenas ligeras y pesadas de inmunoglobulina del anticuerpo, de modo que las cadenas ligeras y pesadas se expresen en la célula huésped y preferentemente, se secreten en el medio en el cual se cultivan las células huésped, medio del cual se recuperan los anticuerpos. Se utilizan metodologías de ADN recombinante estándar para obtener genes de cadena pesada y ligera del anticuerpo, incorporar estos genes en vectores de expresión recombinante e introducir los vectores en células huésped, tal como las descritas en las Publicaciones de Sambrook, Fritsch y Maniatis (eds), Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N. Y. , (1989), Ausubel, F. M. y asociados (eds.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, (1989) y la Patente Norteamericana No. 4,816,397 de Boss y asociados.

Para expresar (D2E7) o un anticuerpo relacionado · con adalimumab (D2E7), se obtienen primero fragmentos de ADN que codifican las regiones variables de cadena ligera y pesada. Estos cADN se pueden obtener mediante amplificación y modificación de las secuencias variables de cadena ligera y pesada de línea germinal utilizando la reacción de cadena de polimerasa (PCR). Las secuencias de ADN de línea germinal para genes de región variable de cadena pesada y ligera son conocidas en la técnica (ver por ejemplo, la base de datos de secuencia de línea germinal humana "Vbase"; ver también la Publicación de Kabat, E. A., y asociados (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edición, U.S. Department of Health and Human Services, Publicación NIH No. 91 a 3242; Tomlinson, I. M., y asociados (1992) "Repertorio de la Secuencia VH de Línea Germinal Humana Revela aproximadamente Cincuenta grupos de segmentos VH con Diferentes Lazos Hipervariables" J. Mol. Biol. 227:776 a 798; y Cox, J. P. L. y asociados (1994) "Directorio de Segmentos VH de Línea Germinal Revela una Fuerte Inclinación en su Uso" Eur. J. Immunol. 24:827 a 836; cuyos contenidos están incorporados en forma expresa a la presente invención como referencia). Para obtener un fragmento ADN que codifica la región variable de cadena pesada de D2E7, o un anticuerpo relacionado con D2E7, se amplifica un miembro de la familia VH3 de los genes VH de línea germinal humana mediante PCR estándar. Más preferentemente, se amplifica la secuencia de línea germinal DP-31 VH. Para obtener un fragmento de ADN que codifica la región variable de cadena ligera de' D2E7, o un anticuerpo relacionado con D2E7, se amplifica un miembro de la familia VKI de los genes VL de línea germinal humana mediante PCR estándar. Más preferentemente, se amplifica la secuencia de línea germinal A20 VL. Los cebadores PCR adecuados para utilizarse en la amplificación de las secuencias VH de línea germinal DP-31 y VL de línea germinal A20 se pueden diseñar con base en las secuencias de nucleótido descritas en las referencias mencionadas supra, utilizando métodos estándar.

Una vez que se obtienen los fragmentos VH y VL de línea germinal, estas secuencias se pueden mutar para codificar las secuencias de aminoácido D2E7 relacionadas con D2E7 aquí descritas. Las secuencias de aminoácido codificadas por las secuencias de ADN VH y VL de línea germinal se comparan primero con las secuencias de aminoácido VH y VL D2E7 o relacionadas con D2E7 para identificar residuos de aminoácido en D2E7 o en las secuencias relacionada con D2E7 que difiere de la línea germinal. Posteriormente, los nucleótidos adecuados de las secuencias de ADN de línea germinal se mutan de modo que las secuencia de línea germinal mutada codifica la secuencia de aminoácido D2E7 o relacionada con D2E7, utilizando el código genético para determinar que cambios de nucleótidos se deben realizar. La mutagénesis de la secuencia de línea germinal se lleva a cabo a través de métodos estándar tales como mutagénesis transmitida con PCR (en donde los nucleótidos mutados se incorporan en los cebadores PCR de modo que el producto PCR contiene mutaciones) mutagénesis dirigida al sitio.

Además, se debe observar que si las secuencias de "línea germinal" obtenidas mediante amplificación PCR codifican las diferencias de aminoácido en las regiones de estructura de la configuración de línea germinal real (es decir, diferencias en la secuencia amplificada en comparación con la secuencia de línea germinal real, por ejemplo como resultado de mutación somática), puede ser deseable cambiar estas diferencias de aminoácido nuevamente a las secuencias de línea germinal (por ejemplo, "retromutación" de residuos de estructura a la configuración de línea germinal).

Una vez que los fragmentos de ADN que codifican los segmentos VH y VL D2E7 o relacionados con D2E7 se obtienen (mediante amplificación y mutagénesis de los genes VH y VL de línea germinal, tal como se describió anteriormente), estos fragmentos ADN se pueden manipular en forma adicional mediante técnicas de ADN recombinante estándar, por ejemplo para convertir los genes de región variable a genes de cadena de anticuerpo de longitud total, para genes de fragmento Fab o para el gen scFv. En estas manipulaciones, el fragmento de ADN que codifica VL o VH se enlaza en forma operativa a otro fragmento de ADN que codifica otra proteína, tal como una región constante de anticuerpo o un enlazador flexible. El término "enlazado en forma operativa, tal como se utiliza dentro de este contexto, pretende significar que los dos fragmentos de ADN se unen de modo que las secuencias de aminoácido codificadas por los dos fragmentos ADN permanecen dentro de la estructura.

El ADN aislado que codifica la región VH se puede convertir a un gen de cadena pesada de longitud total enlazando en forma operativa el ADN que codifica VH a otra molécula de ADN que codifica las regiones constantes de cadena pesada (CH1, CH2 y CH3). Las secuencias de los genes de región constante de cadena pesada humana son conocidos en la técnica (ver, por ejemplo la Publicación de Kabat, E. A., y asociados (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edición, U.S. Department of Health and Human Services, Publicación NIH No. 91 a 3242) y fragmentos de ADN que comprenden estas regiones se pueden obtener mediante amplificación PCR estándar. La región constante de cadena pesada puede ser una región constante I g G 1 , lgG2, lgG3, lgG4, IgA, I g E , IgM o IgD aunque más preferentemente es una región constante lgG1 o lgG4. Para un gen de cadena pesada del fragmento Fab, el ADN que codifica VH se puede enlazar en forma operativa a otra molécula de ADN que codifica únicamente la región constante CH1 de cadena pesada.

El ADN aislado que codifica la región VL se puede convertir a un gen de cadena ligera de longitud total (así como un gen de cadena ligera Fab) enlazando un forma operativa un ADN que codifica VL a otra molécula de ADN que codifica la región constante de cadena ligera, CL. Las secuencias de los genes de región constante de cadena ligera humana son conocidos en la técnica (ver por ejemplo, la Publicación de Kabat, E. A., y asociados (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edición, U.S. Department of Health and Human Services, Publicación NIH No. 91 a 3242) y los fragmentos de ADN que comprenden estas regiones se pueden obtener mediante amplificación PCR estándar. La región constante de cadena ligera puede ser una región constante kappa o lambda, aunque más preferentemente es una región constante kappa.

Para crear un gen scFv, los fragmentos de ADN que codifican VH y VL se enlazan en forma operativa a otro fragmento que codifica un enlazador flexible, por ejemplo, que codifica la secuencia de aminoácido (Gly4-Ser)3, de modo que las secuencias VH y VL se pueden expresar como una proteína de cadena simple contigua, con las regiones VL y VH unidas por un enlazador flexible (ver, por ejemplo las Publicaciones de Bird y asociados (1988) Science 242:423 a 426; Huston y asociados (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85:5879 a 5883; cCafferty y asociados, Nature (1990) 348:552 a 554).

Para expresar los anticuerpos, o partes de anticuerpo utilizados en la presente invención, los ADNs que codifican las cadenas ligeras y pesadas parciales o de longitud total, obtenidas como se describió anteriormente, se insertan en vectores de expresión de modo que los genes se enlacen en forma operativa a secuencias de control de transcripción y traducción. Dentro de este contexto, el término "enlazado en forma operativa" pretende significar que un gen de anticuerpo se liga en un vector de modo que las secuencias de control de transcripción y traducción dentro del vector, puedan servir a su función proyectada de regular la transcripción y traducción del gen del anticuerpo. El vector de expresión y las secuencias de control de expresión se eligen para ser compatibles con la célula huésped de expresión utilizada. El gen de cadena ligera del anticuerpo y el gen de cadena pesada del anticuerpo se puede insertar en un vector separado o más normalmente, que insertan ambos genes en el mismo vector de expresión. Los genes de anticuerpo se insertan en el vector de expresión mediante método estándar (por ejemplo, ligadura de los sitios de restricción complementario en el fragmento de gen de anticuerpo y vector, o ligadura de extremo romo si no están presentes sitios de restricción). Antes de la inserción de las secuencias de cadena pesada y ligera D2E7 o relacionadas con D2E7, el vector de expresión puede llevar ya las secuencias de región constante del anticuerpo. Por ejemplo, un método para convertir las secuencias de VH o VL D2E7 relacionadas con D2E7 para genes de anticuerpo de longitud total, es insertarlas en los vectores de expresión que ya codifican las regiones constantes de cadena pesada y de cadena ligera respectivamente, de modo que el segmento VH se enlaza en forma operativa al segmento(s) CH dentro del vector y el segmento VL se enlaza en forma operativa al segmento Cl dentro del vector. Además o en forma alternativa, el vector de expresión recombinante puede codificar un péptido de señal que facilita la señal secreción de la cadena de anticuerpo a la célula huésped. El gen de cadena de anticuerpo puede clonarse en el vector de modo que el péptido de señal se enlace en estructura al término amino del gen de la cadena de anticuerpo. El péptido de señal puede ser un péptido de señal de inmunoglobulina o un péptido de señal heterólogo (por ejemplo, un péptido de señal de una proteína sin inmunoglobulina).

Además de los genes de la cadena de anticuerpo, los vectores de expresión recombinante de la presente invención llevan secuencias reguladoras que controlan la expresión de los genes de cadena de anticuerpo en una célula huésped. El término "secuencia reguladora" pretende incluir promotores aumentadores y otros elementos de control de expresión (por ejemplo, señales de poliadenilación) que controlan la transcripción o traducción de los genes de cadena de anticuerpo. Dichas secuencias reguladoras se describen, por ejemplo, en la Publicación de Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990). Los expertos en la técnica podrán apreciar que el diseño del vector de expresión, incluyendo la selección de secuencias reguladoras puede depender de factores tales como la elección de la célula huésped que será transformada, el nivel de expresión de la proteína deseada, etc. Las secuencias reguladoras preferidas para la expresión de célula huésped de mamífero incluyen elementos virales que dirigen anchos niveles de expresión de proteína en células de mamífero, tales como promotores y/o aumentadores derivados de citomegalovirus (CMV) (tal como promotor/aumentador de CMV), Virus de Simio 40 (SV40) tal como promotor/aumentador de SV40), adenovirus (por ejemplo, promotor tardío mayor de adenovirus (AdMLP)) y polioma. Para una descripción adicional de elementos reguladores virales y secuencias de los mismos, ver la Patente Norteamericana No. 5,168,062 . de Stinski, Patente Norteamericana No. 4,510,245 de Bell y asociados y Patente Norteamericana No. 4,968,615 de Schaffner y asociados.

Además de los genes de cadena de anticuerpo y secuencias reguladoras, los vectores de expresión recombinantes utilizados en la presente invención pueden llevar secuencias adicionales, tales como secuencias que regulan la réplica del vector en células huésped (por ejemplo, orígenes de réplica) y genes marcadores seleccionables. El gen marcador seleccionable facilita la selección de células huésped en las cuales el vector ha sido introducido (ver por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 4,399,216, 4,634,665 y 5,179,017, todos de Axel y asociados). Por ejemplo, normalmente el gen marcador seleccionable confiere resistencia a fármacos tales como G418, higromicina o metotrexato, en una célula huésped en la cual el vector ha sido introducido. Los genes marcadores seleccionables preferidos incluyen el gen de reductasa de dihidrofolato (DHFR) (para utilizarse en células huésped dhfr con selección/amplificación de metotrexato) y el neo gen (para la selección G418).

Para la expresión de las cadenas ligeras y pesadas, el vector(s) de expresión que codifica las cadenas pesadas y ligeras se transfectan en una célula huésped mediante técnicas estándar. Las diversas formas del término "transfección" pretenden comprender una amplia variedad de técnicas comúnmente utilizadas para la introducción de un ADN exógeno en una célula huésped procariótica o eucariótica, por ejemplo, electroporación, precipitación de calcio-fosfato, transfecciones de dextrano-DEAE y similares. Aunque teóricamente es posible expresar anticuerpos de la presente invención ya sea en células huésped procarióticas o eucarióticas, la expresión de los anticuerpos en células eucarióticas, y más preferentemente células huésped de mamífero, es más probable que ensamble y secrete un anticuerpo multiplicado en forma adecuada e inmunológicamente activo que las células eucarióticas. La expresión procariótica de los genes de anticuerpo ha sido reportada como efectiva para la producción de altos rendimientos del anticuerpo activo (Boss, M. A. y Wood, C. R. (1985) Immunology Today 6:12-13).

Las células huésped de mamíferos preferidas para expresar los anticuerpos recombinantes de la presente invención incluyen células de Ovario de Hámster Chino (células CHO) (incluyendo células dhfr-CHO, descritas en la Publicación de Urlaub y Chasin, (1980) Proc. Nati. Acad. Sci. E.U.A. 77:4216-4220, utilizadas con un marcador seleccionable DHFR, por ejemplo, como se describe en la Publicación de R. J. Kaufman y P. A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601-621), células de mieloma NSO, células COS y células y SP2. Cuando se introducen vectores de expresión recombinante que codifican genes de anticuerpo en células huésped de mamífero, los anticuerpos se producen cultivando las células huésped durante un período de tiempo suficiente para permitir la expresión del anticuerpo en las células huésped, o más preferentemente, la secreción del anticuerpo en el medio de cultivo libre en el cual se crecen las células huésped. Los anticuerpos pueden ser recuperados del medio de cultivo utilizando métodos de purificación de proteína estándar.

Las células huésped se pueden utilizar partes de los anticuerpos intactos, tales como fragmentos Fab o moléculas scFv. Quedará entendido que las variaciones en el procedimiento anterior están dentro del alcance de la presente invención. Por ejemplo, puede ser deseable transfectar una célula huésped con un ADN que codifica ya sea la cadena ligera o la cadena pesada (pero no ambas) de un anticuerpo de la presente invención. La tecnología de ADN recombinante se puede utilizar para eliminar parte o todo el ADN que codifica cualquiera de, o ambas de las cadenas ligeras y pesadas que no son necesarias para enlazar a hTNFa. Las moléculas expresadas de dichas moléculas de ADN truncadas también están comprendidas en los anticuerpos de la presente invención. Además, los anticuerpos bifuncionales se pueden producir cuando una cadena pesada y una cadena ligera son un anticuerpo de la presente invención y la otra cadena pesada y ligera son específica para un antígeno diferente a hTNFa mediante reticulación de un anticuerpo de la presente invención a un segundo anticuerpo mediante métodos de reticulación química estándar.

En un sistema preferido para la expresión recombinante de un anticuerpo, una parte de enlace de antígenos del mismo, de la presente invención, un vector de expresión recombinante que codifica tanto la cadena pesada del anticuerpo como la cadena ligera del anticuerpo se introduce en las células dhfr-CHO mediante transfección transmitida por calcio-fosfato. Dentro del vector de expresión recombinante, los genes de cadena pesada y ligera del anticuerpo cada uno se enlazan en forma operativa a los elementos reguladores del aumentador CMV/promotor AdMLP para conducir altos niveles de transcripción de los genes. El vector de expresión recombinante también lleva un gen DHFR, el cual permite la selección de células CHO que han sido transfectadas con el vector utilizando selección/amplificación de metotrexato. Las células huésped transformadoras seleccionadas son cultivos que permiten la expresión de las cadenas pesadas y ligeras del anticuerpo, y el anticuerpo intacto se recupera del medio de cultivo. Se utilizan técnicas de biología molecular estándar para preparar el vector de expresión recombinante, transfectar células huésped, seleccionar transformadores, cultivar células huésped y recuperar el anticuerpo del medio de cultivo.

En virtud de lo anterior, las composiciones de ácido nucleico, vector y célula huésped que se pueden utilizar para expresión recombinante de los anticuerpos y partes de anticuerpo utilizados en la presente invención incluyen ácidos nucleicos, y vectores que comprenden los ácidos nucleicos, que comprenden el anticuerpo TNFa humano adalimumab (D2E7). La secuencia de nucleótido que codifica la región variable de cadena ligera D2E7 se muestra en la SEC ID NO: 36. El dominio CDR1 de LCVR que comprende los nucleótidos 70 a 102, el dominio CDR2 que comprende los nucleótidos 148 a 168 y el dominio CDR3 que comprenden los nucleótidos 265 a 291. La secuencia de nucleótido que codifica la región variable de cadena pesada D2E7 se muestra en la SEC ID NO: 37. El dominio CDR1 de HCVR comprende los nucleótidos 91 a 105, el dominio CDR2 comprende los nucleótidos 148 a 198 y el dominio CDR3 comprende los nucleótidos 295 a 330. Los expertos en la técnica podrán apreciar que las secuencias de nucleótido que codifican anticuerpos relacionados con D2E7, o partes de los mismos (por ejemplo, un dominio CDR, tal como un dominio CDR3), se pueden derivar de secuencias de nucleótido que codifican LCVR y HCVR D2E7 utilizando el código genético y técnicas de biología molecular estándar.

Los anticuerpos recombinantes de la presente invención además de D2E7 o una parte de enlace de antígeno del mismo, o anticuerpo relacionados con D2E7 aquí descritos se pueden aislar clasificando de una biblioteca de anticuerpo de combinación recombinante, preferentemente una biblioteca de despliegue de fagos scFv, preparado utilizando cDNAs VL y VH humanos preparados a partir de mARN derivado de linfocitos humanos. Las metodologías para preparar y clasificar dichas librerías son conocidas en la técnica. Además de los equipos comercialmente disponibles para generar bibliotecas de despliegue de fago (por ejemplo, el Sistema de Anticuerpo de Fago Recombinante de Pharmacia, catálogo no. 27-9400-01; y el equipo de despliegue de fagos Stratagene SurfZAP™, catálogo no. 240612), se presentan ejemplos de métodos y reactivos particularmente adaptables para utilizarse en generación y clasificación de bibliotecas de despliegue de anticuerpo y se puede encontrar por ejemplo, en la Patente Norteamericana No. 5,223,409 de Ladner y asociados, Publicación PCT No. WO 92/18619 de Kang y asociados; Publicación PCT No. WO 91/17271 de Dower y asociados; Publicación PCT No. WO 92/20791 de Winter y asociados; Publicación PCT No. WO 92/15679 de Markland y asociados; Publicación PCT No. WO 93/01288 de Breitling y asociados; Publicación PCT No. WO 92/01047 de McCafferty y asociados; Publicación PCT No. WO 92/09690 de Garrard y asociados; Publicación PCT No. Fuchs y asociados (1991) Bio/Technology 9:1370-1372; Hay y asociados (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-65; Huse y asociados (1989) Science 246:1275-1281; McCafferty y asociados, Nature (1990) 348:552-554; Griffiths y asociados (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins y asociados (1992) J Mol Biol 226:889-896; Clackson y asociados (1991) Nature 352:624-628; Gram y asociados (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrard y asociados (1991) Bio/Technology 9:1373-1377; Hoogenboom y asociados (1991) Nuc Acid Res 19:4133-4137; y Barbas y asociados (1991) PNAS 88:7978 a 7982.

En una modalidad preferida, para aislar anticuerpos humanos con alta afinidad y una constante de rango de disociación de bajo nivel para hTNFa, se utiliza primero un anticuerpo anti-hTNFa de múrido que tiene alta afinidad y un constante de rango de disociación de bajo nivel para hTNFa (por ejemplo, MAK 195, el hibridoma para el cual tiene el número de depósito ECACC 87 050801) para seleccionar secuencias de cadenas de pesada y ligera humana que tengan actividad de enlace similar hacia hTNFa, utilizando los métodos de impresión de epítope descritos en la Publicación PCT No. WO 93/06213 de Hoogenboom y asociados. Las bibliotecas de anticuerpo utilizadas en este método son preferentemente bibliotecas scFv preparadas y clasificadas como se describe en la Publicación PCT No. WO 92/01047 de McCafferty y asociados, McCafferty y asociados, Nature (1990) 348:552-554; y Griffiths y asociados, (1993) EMBO J 12:725-734. Las bibliotecas de anticuerpo scFv son clasificadas preferentemente utilizando TNFa humano recombinante, como el antígeno.

Una vez que se seleccionan los segmentos VL y VH humanos iniciales, se clasifican experimentos "mezcla y "cotejo", en los cuales se clasifican diferentes pares de segmentos VL y VH seleccionados inicialmente para enlace hTNFa, para seleccionar combinaciones de pares VL/VH preferidas.

Además, para mejorar en forma adicional la afinidad y/o disminuir la constante de rango de disociación para el enlace hTNFa, los segmentos VL y VH del par(s) VL/VH preferidos se puede mutar en forma aleatoria, preferentemente dentro de la región CDR3 de y/o VL, en un proceso análogo al proceso de mutación somática ¡n vivo responsable de la maduración de afinidad de anticuerpos durante una respuesta inmune natural. Esta maduración de afinidad in vitro se puede lograr amplificando las regiones VH y VL utilizando cebadores PCR complementarios para VH CDR3 o VL CDR3, respectivamente, en donde los cebadores han sido "obstruidos" con una mezcla aleatoria de las cuatro bases de nucleótido en ciertas posiciones de modo que los productos PCR resultantes codifiquen segmentos VH y VL en los cuales se han introducido mutaciones aleatorias en las regiones CDR3 VH y/o VL. Estos segmentos VH y VL mutados en forma aleatoria se pueden clasificar otra vez para enlazar a hTNFa y se pueden seleccionar las secuencias que exhiben alta afinidad y un bajo rango de disociación para el enlace a hTNFa.

Después de clasificar y aislar un anticuerpo anti-hTNFa de la presente invención a partir de una biblioteca de despliegue de inmunoglobulina recombinante, el ácido nucleico que codifica el anticuerpo seleccionado puede ser recuperado del paquete de despliegue (por ejemplo, del genoma de fago) y subclonado en otros vectores de expresión mediante técnicas de ADN recombinante estándar. Si se desea, el ácido el ácido nucleico puede ser manipulado en forma adicional para crear otras formas de anticuerpo de la presente invención (por ejemplo, enlazado al ácido nucleico que codifica dominios de inmunoglobulina adicionales, tal como regiones constantes adicionales). Para expresar un anticuerpo humano recombinante aislado clasificando una biblioteca de combinación, el ADN que codifica el anticuerpo se clona en un vector de expresión recombinante y se introduce en células huésped de mamífero, tal como se describe con mayor detalle anteriormente.

Los métodos para aislar anticuerpos de neutralización humanos con alta afinidad y una baja constante de rango de disociación para hTNFa, se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,090,382, 6,258,562, y 6,509,015, cada una de las cuales está incorporada a la presente invención como referencia.

Los anticuerpos, partes de anticuerpos y otros inhibidores TNFa para utilizarse en los métodos de la presente invención, se pueden incorporar en composiciones farmacéuticas adecuadas para administración a un sujeto. Normalmente, la composición farmacéutica comprende un anticuerpo, parte de anticuerpo u otro inhibidor TNFa, y un transportador farmacéuticamente aceptable. Tal como se utiliza en la presente invención, el término "transportador farmacéuticamente aceptable" incluye cualesquiera y todos los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes que retrasan la absorción e isotónicos y similares que son fisiológicamente compatibles. Los ejemplos de transportadores farmacéuticamente aceptables incluyen uno o más de agua, solución salina, solución salina amortiguada por fosfato, dextrosa, glicerol, etanol y similares, así como combinaciones de las mismas. En muchos casos, es preferible incluir agentes isotónicos (por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, o cloruro de sodio en la composición). Los transportadores farmacéuticamente aceptables pueden comprender en forma adicional cantidades menores de sustancias auxiliares tales como agentes de humectación o emulsificación , conservadores o amortiguadores que aumentan la vida en anaquel o efectividad del anticuerpo, parte de anticuerpo u otro inhibidor.

Las composiciones para utilizarse en los métodos y composiciones de la presente invención, pueden estar en una variedad de formas. Estas incluyen, por ejemplo, formas de dosificación líquida, semi-sólida y sólida, tal como soluciones líquidas (por ejemplo, soluciones inyectables e infusibles) dispersiones o suspensiones, tabletas, pildoras, polvos, liposomas y supositorios. La forma preferida depende del modo de administración proyectado y la aplicación terapéutica. Las composiciones preferidas típicas están en la forma de soluciones inyectables o infusibles, tal como composiciones similares a las utilizadas para inmunización pasiva de humanos con otros anticuerpos u otros inhibidores TNFa. El modo de administración preferido es parenteral (por ejemplo, intravenoso, subcutáneo, intraperitoneal, intramuscular). En una modalidad preferida, el anticuerpo u otro inhibidor TNFa se administra mediante infusión o inyección intravenosa. En otra modalidad preferida, el anticuerpo u otro inhibidor TNFa se administra mediante inyección intramuscular o subcutánea.

Las composiciones terapéuticas normalmente deben ser estériles y estables bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento. La composición puede formularse como una solución, microemulsión , dispersión, liposoma u otra estructura ordenada adecuada para alta concentración de fármacos. Las soluciones inyectables estériles pueden prepararse incorporando el compuesto activo (es decir anticuerpo o parte de anticuerpo o un inhibidor TNFa) en la cantidad requerida en el solvente adecuado con uno o una combinación de ingredientes descritos anteriormente, según se requiera, seguido de esterilización filtrada. Generalmente, las dispersiones se preparan incorporando el compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de los enumerados anteriormente. El en caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son secado al vacío y secado por congelación que produce un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado de una solución filtrada estéril previamente del mismo. Se puede mantener la fluidez adecuada en una solución por ejemplo, a través del uso de un recubrimiento tal como lecitina, a través del mantenimiento del tamaño de partícula requerida en el caso de dispersión y mediante el uso de tensoactivos. Se puede proporcionar la absorción prolongada de las composiciones inyectables, incluyendo en la composición de un agente que retrasa la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina.

En una modalidad, la presente invención incluye composiciones farmacéuticas que comprenden un inhibidor TNFa efectivo y un transportador farmacéuticamente aceptable, en donde el inhibidor TNFa efectivo puede utilizarse para tratar artritis reumatoide. En una modalidad, el anticuerpo o parte de anticuerpo para utilizarse en los métodos de la presente invención se incorpora en una formulación farmacéutica tal como se describe en la Publicación PCT/I B03/04502 y en la solicitud Norteamericana No. 20040033228, incorporada a la presente invención como referencia. Esta formulación incluye una concentración 50 mg/ml del anticuerpo D2E7 (adalimumab), en donde la jeringa llena previamente contiene 40 mg del anticuerpo para inyección subcutánea.

Los anticuerpos o partes de anticuerpo y otros inhibidores TNFa de la presente invención, se pueden administrar a través de una variedad de métodos conocidos en la técnica, aunque para muchas aplicaciones terapéuticas, la ruta/modo de administración preferidos parenteral por ejemplo, inyección subcutánea. En otra modalidad, la administración es mediante inyección o infusión intravenosa.

Tal como lo podrán apreciar los expertos en la técnica, la ruta y/o modo de administración variará dependiendo de los resultados deseados. En ciertas modalidades, el compuesto activo puede prepararse como un transportador que protegerá al compuesto contra liberación rápida, tal como una formulación de liberación controlada incluyendo implantes, parches transdérmicos y sistemas de suministro microencapsulado. Se pueden utilizar polímeros biocompatibles, biodeg radables , tales como acetato de vinilo de etileno, polianhídridos, ácido poliglucólido, colágeno, poliortoésteres y ácido láctico. Muchos métodos para la preparación de dichas formulaciones están patentados o son conocidos de manera general para los expertos en la técnica. Ver por ejemplo, la Publicación de Sistemas de Suministro de Fármaco de Liberación Controlada y Sostenida de Robinson, ed., Dekker, Inc., Nueva York, 1978.

En una modalidad, los anticuerpos TNFa e inhibidores utilizados en la presente invención se suministran a un sujeto en forma subcutánea. En una modalidad, el sujeto administra el inhibidor TNFa, incluyendo, pero sin limitarse a, un anticuerpo TNFa, o una parte de enlace de antígenos del mismo.

Los anticuerpos TNFa e inhibidores utilizados en la presente invención, también se pueden administrar en la forma de formulaciones de cristal de proteína que incluyen una combinación de cristales de proteína encapsulados mediante un transportador polimérico para formar partículas recubiertas. Las partículas recubiertas de la formulación de cristal de proteína pueden tener una morfología esférica y ser microesferas de hasta 500 micrómetros de diámetro o pueden tener alguna otra morfología y ser microparticulados. La concentración mejorada de cristales de proteína permiten al anticuerpo de la presente invención ser suministrado en forma subcutánea. En una modalidad, los anticuerpos TNFa de la presente invención se suministran a través de un sistema de suministro de proteína, en donde una o más de una formulación o composición de proteína, se administra a un sujeto con un trastorno relacionado con TNFa. Las composiciones y métodos para preparar formulaciones estabilizadas de cristales de anticuerpo completos o cristales de fragmento de anticuerpo también se describen en la Publicación PCT 02/072636, la cual está incorporada a la presente invención como referencia. En una modalidad, se utiliza una formulación que comprende los fragmentos de anticuerpo cristalizados descritos en la Publicación PCT PCT/I B03/04502 y en la Solicitud Norteamericana No. 20040033228, incorporadas a la presente invención como referencia, para tratar artritis reumatoide utilizando los métodos de tratamiento de la presente invención.

En ciertas modalidades, un anticuerpo, parte de anticuerpo u otro inhibidor TNFa de la presente invención se puede administrar en forma oral, por ejemplo, con un diluyente inerte o un transportador comestible asimilable. El compuesto (y otros ingredientes si se desea) también se pueden guardar en una cápsula de gelatina de cubierta dura o blanda, comprimirse en tabletas o incorporarse directamente en la dieta del sujeto. Para administración terapéutica oral, los compuestos se pueden incorporar con excipientes y utilizarse en la forma de tabletas ingeribles, tabletas bucales, trociscos, cápsulas, elíxires, suspensiones, jarabes, obleas y similares. Para administrar un compuesto de la presente invención a través de una administración diferente a parenteral, puede ser necesario recubrir el compuesto con, o administrarse junto con un material para evitar su desactivación.

Los compuestos activos suplementarios también se pueden incorporar en las composiciones. En ciertas modalidades, un anticuerpo o parte de anticuerpo para utilizarse en los métodos de la presente invención se formula junto con y/o se administra junto con uno o más agentes terapéuticos adicionales, incluyendo un inhibidor o antagonista de artritis reumatoide. Por ejemplo, un anticuerpo anti-hTNFa o parte de anticuerpo de la presente invención, se puede formular junto con y/o administrar junto con uno o más anticuerpos adicionales que enlazan a otros objetivos asociados con trastornos relacionados con TNFa (por ejemplo, anticuerpos que enlazan otras citocinas y que enlazan moléculas de la superficie celular), una o más citocinas, receptor TNFa soluble (ver por ejemplo, Publicación PCT No. WO 94/06476) y/o uno o más agentes químicos que inhiben la producción o actividad hTNFa (tal como derivados de ciciohexano-ilideno tal como se describe en la Publicación PCT No. WO 93/19751) o cualquier combinación de los mismos. Además, uno o más anticuerpos de la presente invención se pueden utilizar en combinación con dos o más de los agentes terapéuticos anteriores. Dichas terapias de combinación pueden utilizar convenientemente menores dosis de agentes terapéuticos administrados, evitando de esta forma posibles efectos secundarios, complicaciones o un bajo nivel de respuesta por parte del paciente, asociados con las diversas monoterapias.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención, pueden incluir una "cantidad terapéuticamente efectiva" o una "cantidad profilácticamente efectiva" de un anticuerpo o parte de anticuerpo de la presente invención. Una "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a una cantidad efectiva, en dosis y durante períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado terapéutico deseado. Una cantidad terapéuticamente efectiva del anticuerpo, parte de anticuerpo u otro inhibidor TNFa puede variar de acuerdo con factores tales como el estado de la enfermedad, edad, sexo y peso del individuo y la capacidad del anticuerpo, parte del anticuerpo u otro inhibidor TNFa para provocar una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad terapéuticamente efectiva también es una en la cual cualesquiera efectos tóxicos o perjudiciales del anticuerpo, parte de anticuerpo u otro inhibidor TNFa son ponderados por los efectos terapéuticamente benéficos. Una "cantidad profilácticamente efectiva" se refiere a una cantidad efectiva, en dosis y durante períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado profiláctico deseado. Normalmente, ya que se utiliza una dosis profiláctica en sujetos antes de o en una etapa temprana de la enfermedad, la cantidad profilácticamente efectiva será menor a la cantidad terapéuticamente efectiva.

En la Parte II de la presente especificación también se describe en forma adicional métodos y usos de la presente invención que comprenden la administración de un inhibidor TNFa.

La presente invención también pertenece a composiciones farmacéuticas empacadas o equipos para administrar los anticuerpos TNF de la presente invención para el tratamiento de artritis reumatoide. En una modalidad de la presente invención, el equipo comprende un inhibidor TNFa, tal como un anticuerpo e instrucciones para administración del inhibidor TNFa para tratar pérdida ósea. Las instrucciones pueden describirse, por ejemplo, como en forma subcutánea y cuando por ejemplo en la semana O, semana 2, semana 4, etc., se deben administrar dosis diferentes del inhibidor TNFa a un sujeto para tratamiento. Otro aspecto de la presente invención, pertenece a equipos que contienen una composición farmacéutica que comprende un inhibidor TNFa, tal como un anticuerpo, y un transportador farmacéuticamente aceptable y una o más composiciones farmacéuticas que comprenden cada una un agente terapéutico adicional útil para tratar pérdida ósea y un transportador farmacéuticamente aceptable. Como alternativa, el equipo comprende una sola composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-TNFa, uno o más fármacos útiles para tratar pérdida ósea y un transportador farmacéuticamente aceptable. Las instrucciones pueden describir como, por ejemplo en forma subcutánea, y cuando, por ejemplo en la semana 0, semana 2, semana 4, etc., se deben administrar a un sujeto para tratamiento las diferentes dosis de inhibidor TNFa y/o el agente terapéutico adicional.

El equipo puede contener instrucciones para dosificación de las composiciones farmacéuticas para el tratamiento de pérdida ósea. En la subsección II se encuentra una descripción adicional con respecto a artículos de fabricación de la presente invención .

El paquete o equipo puede contener alternativamente el inhibidor TNFa y puede ser promovido para utilizarse, ya sea dentro del paquete o a través de información adjunta, para los usos o tratamiento de los trastornos aquí descritos. Los farmacéuticos empacados o equipos pueden incluir además un segundo agente (tal como se describe en la presente invención) empacado con, o promovido junto con instrucciones para utilizar el segundo agente con un primer agente (tal como se describe en la presente invención).

IV. ARTICULOS DE FABRICACION La presente invención también proporciona una composición farmacéutica empacada en donde el inhibidor TNFa, por ejemplo, anticuerpo TNFa, se empaca dentro de un equipo o un artículo de fabricación. El equipo o artículo de fabricación de la presente invención contiene materiales útiles para el tratamiento, incluyendo inducción y/o remisión; prevención y/o diagnóstico de pérdida de hueso. El equipo o artículo de fabricación comprende un contenedor y una etiqueta o inserto de paquete o material impreso en, o asociado con el contenedor, el cual proporciona información con respecto al uso del inhibidor TNFa, por ejemplo, un anticuerpo TNFa, para el tratamiento de pérdida ósea.

Un equipo o un artículo de fabricación se refiere a un producto empacado que comprende componentes con los cuales se administra un TNFa para el tratamiento de pérdida ósea. El equipo comprende preferentemente una caja o contenedor que retiene los componentes del equipo. La caja o contenedor se fija con una etiqueta o una etiqueta probada por la Administración de Alimentos y Fármacos, incluyendo un protocolo para administrar el inhibidor TNFa. La caja o contenedor retiene componentes de la presente invención que están contenidos preferentemente dentro de envases de plástico, polietileno, polipropileno, etileno o propileno. Los envases pueden ser tubos o botellas tapados con sello. El equipo también puede incluir instrucciones para administrar el anticuerpo TNFa de la presente invención. En una modalidad el equipo de la presente invención incluye la formulación que comprende el anticuerpo humano adalimumab (o D2E7), tal como se describe en la Publicación PCT/I B03/04502 y la solicitud Norteamericana. No. 10/222,140, incorporada a la presente invención como referencia.

El término "inserto de paquete" se utiliza para referirse a instrucciones normalmente incluidas en los paquetes comerciales de productos terapéuticos que contienen información con respecto a indicaciones, usos, dosis, administración, contraindicaciones y/o avisos con respecto al uso de dichos productos terapéuticos.

En una modalidad, el artículo o fabricación de la presente invención comprende (a) un primer contenedor con una composición ahí contenida, en donde la composición comprende un anticuerpo TNFa; y (b) un inserto de paquete que indica que el anticuerpo TNFa puede utilizarse para tratar pérdida ósea.

Los contenedores adecuados para el inhibidor TNFa, por ejemplo, un anticuerpo TNFa, incluyen, por ejemplo, botellas, frascos, jeringas, plumas, etc. Los contenedores se pueden formar de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico. El contenedor retiene una composición la cual es por sí misma, o cuando se combina con otra composición, efectiva para tratar prevenir y/o diagnosticar la condición y puede tener una puerta de acceso estéril.

En una modalidad, el artículo de fabricación comprende un inhibidor TNFa, por ejemplo, un anticuerpo TNFa, y una etiqueta que indica al sujeto que administrará el inhibidor TNFa con respecto al uso del inhibidor TNFa para el tratamiento de pérdida ósea. La etiqueta puede estar dentro en cualquier lugar o en un artículo de fabricación. En una modalidad, el artículo de fabricación comprende un contenedor, tal como una caja, que comprende el inhibidor TNFa y un inserto de paquete o etiqueta que proporciona información que pertenece al uso del inhibidor TNFa para el tratamiento de pérdida ósea. En otra modalidad, la información se imprime en una etiqueta la cual está fuera del artículo de fabricación, en una composición que es visible para compradores prospecto.

En una modalidad, el inserto de paquete de la presente invención informa al lector, incluyendo un sujeto, por ejemplo, un comprador, quien administrará el inhibidor TNFa para tratamiento, que el inhibidor TNFa, por ejemplo, un anticuerpo TNFa tal como adalimumab, es un tratamiento indicado para pérdida ósea.

El inserto del empaque de la presente invención también puede proporcionar información a sujetos quienes van a recibir adalimumab, con respecto a los usos de combinación tanto con propósitos de seguridad como de eficacia.

El inserto del empaque de la presente invención puede contener alertas y precauciones con respecto al uso del inhibidor TNFa, por ejemplo, un anticuerpo TNFa tal como adalimumab. En una modalidad, la presente invención proporciona un artículo de fabricación que comprende un material de empaque; un anticuerpo TNFa, o una parte de enlace de antígenos del mismo; y una etiqueta o inserto de paquete contenido dentro del material de empaque que indica que en estudios para el anticuerpo TNFa, o una parte de enlace de antígenos del mismo, se observaron ciertos eventos adversos, incluyendo cualesquiera de los descritos en la sección de Ejemplos.

La etiqueta de la presente invención puede contener información con respecto al uso del inhibidor TNFa, por ejemplo, un anticuerpo TNFa tal como adalimumab, en estudios clínicos para pérdida ósea. En una modalidad, la etiqueta de la presente invención describe los estudios aquí descritos como los Ejemplos, ya sea como una totalidad o en parte.

En una modalidad de la presente invención, el equipo comprende un inhibidor TNFa, tal como un anticuerpo, una segunda composición farmacéutica que comprende un agente terapéutico adicional, e instrucciones para administración de ambos agentes para el tratamiento de pérdida ósea. Las instrucciones pueden describir como, por ejemplo, en forma subcutánea, y cuando, por ejemplo en la semana 0, semana 2, y posteriormente en forma bisemanal, las dosis del anticuerpo TNFa y/o el agente terapéutico adicional, deberán de ser administradas a un sujeto para tratamiento.

Otro aspecto de la presente invención pertenece a equipos que contienen composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo anti-TNFa y un transportador farmacéuticamente aceptable y una o más composiciones farmacéuticas adicionales, comprendiendo cada una un fármaco útil para tratar un trastorno relacionado con TNFa y un transportador farmacéuticamente aceptable. Como alternativa, el equipo comprende una composición farmacéutica simple que comprende un anticuerpo anti-TNFa, uno o más fármacos útiles para tratar un trastorno relacionado con TNFa y un transportador farmacéuticamente aceptable. Los equipos contienen además instrucciones para dosificar las composiciones farmacéuticas para el tratamiento de un trastorno relacionado con TNFa.

El paquete o equipo puede contener como alternativa el inhibidor TNFa y puede promoverse para uso, ya sea dentro del paquete o a través de información adjunta, para los usos o tratamientos de los trastornos aquí descritos. Los farmacéuticos o equipos empacados pueden incluir además un segundo agente (tal como aquí se describe) empacado con o promovido junto con las instrucciones para utilizar el segundo agente con un primer agente (tal como se describe en la presente invención). V. AGENTES TERAPEUTICOS ADICIONALES Los métodos, usos y composiciones de la presente invención también incluyen combinaciones de inhibidores TNFa, incluyendo anticuerpos, y otros agentes terapéuticos, para el tratamiento de pérdida ósea, incluyendo, pero sin limitarse a, pérdida ósea de la mano. Deberá quedar entendido que los anticuerpos de la presente invención o parte de enlace de antígeno del mismo se pueden utilizar solos o en combinación con un agente adicional, por ejemplo, un agente terapéutico, siendo seleccionado el agente adicional por los expertos en la técnica para su propósito proyectado. Por ejemplo, el agente adicional puede ser un agente terapéutico reconocido como útil para tratar la enfermedad o condición que está siendo tratada por el anticuerpo de la presente invención. El agente adicional también puede ser un agente que imparta un atributo benéfico a la composición terapéutica, por ejemplo, un agente que afecte la viscosidad de la composición.

Deberá quedar entendido que las combinaciones que serán incluidas dentro de la presente invención, son las combinaciones útiles para su propósito proyectado. Los agentes establecidos más adelante son para propósitos ilustrativos y no pretenden ser limitados. Las combinaciones que son parte de la presente invención, pueden ser anticuerpos de la presente invención y al menos un agente adicional seleccionado de las listas que se encuentran más adelante. La combinación también puede incluir más de un agente adicional, por ejemplo, dos o tres agentes adicionales si la combinación es tal que la composición formada pueda llevar a cabo su función pretendida.

En una modalidad, se administra un inhibidor TNFa en combinación con un agente de anti-reabsorción, incluyendo, pero sin limitarse a, alendronato, alendronato más vitamina D3, ibandronato, risedronato, risedronato con calcio, ácido zoledrónico, calcitonina, estrógeno, y, raloxifeno. Aún en otra modalidad, el inhibidor TNFa se administra en combinación con un agente que forma huesos, tal como hormona paratiroide, por ejemplo, teriparatida .

Los inhibidores TNFa aquí descritos pueden utilizarse en combinación con agentes terapéuticos adicionales tales como Fármaco Anti-Rheumatic que Modifica la Enfermedad (DMARD) o un Fármaco Anti-inflamatorio No Esteroidal (NSAID) o un esferoide o cualquier combinación de los mismos. Lo ejemplos preferidos de un DMARD son hidroxicloroquina, leflunomida, metotrexato, oro parenteral, oro oral y sulfasalazina. Los ejemplos preferidos de un fármaco (anti-inflamatorio no esteroidal también referidos como NSAIDS incluyen fármacos tipo ibuprofeno. Otras combinaciones preferidas son corticoesteroides incluyendo prednisolona; los efectos secundarios bien conocidos del uso de esteroides se pueden reducir o incluso eliminar, ahusando la dosis de esteroides requerida cuando los pacientes se tratan en combinación con los anticuerpos anti-TNFa de la presente invención. Los ejemplos sin limitación de los agentes terapéuticos para artritis reumatoide con los cuales el anticuerpo o parte de anticuerpo de la presente invención, se pueden combinar, incluyen los siguientes: fármaco(s) anti-inflamatorio supresor de citocina (CSAIDs); anticuerpos para o antagonistas de otras citocinas humanas o factores de crecimiento, por ejemplo, TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-16, IL-18, IL-21, IL-23, interferonas EMAP-II, GM-CSF, FGF, y PDGF. Los anticuerpos de la presente invención, o partes de enlace de antígeno de los mismos, se pueden combinar con anticuerpos para moléculas de superficie celular tales como CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90, CTLA o sus ligandos incluyendo CD154 (gp39 o CD40L).

Las combinaciones preferidas de agentes terapéuticos pueden interferir en diferentes puntos en la cascada inflamatoria autoinmune y subsecuente; los ejemplos preferidos incluyen inhibidores TNFas tales como receptor TNF p55 o p75 soluble derivados de los mismos, (p75TNFR1gG (Enbrel™) o p55TNFRIgG (Lenercept), anticuerpos TNF quiméricos, humanizados o humanos o un fragmento del mismo, incluyendo infliximab (Remicade®, Johnson y Johnson; descrito en la Patente Norteamericana No. 5,656,272, incorporada a la presente invención como referencia), CDP571 (un anticuerpo lgG4 anti-TNF-alfa monoclonal humanizado), CDP 870 (un fragmento de anticuerpo anti-TNF-alfa monoclonal humanizado), un dAb anti-TNF (Peptech), CNTO 148 (golimumab; Medarex y Centocor, ver Publicación PCT WO 02/12502), y adalimumab (Humira® Abbott Laboratories, un mAb anti-TNF humano, descrito en la Patente Norteamericana No. 6,090,382 como D2E7). Los anticuerpos TNF adicionales que se pueden utilizar en la presente invención se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,593,458; 6,498,237; 6,451,983; y 6,448,380, cada una de- las cuales está incorporada a la presente invención como referencia. Otras combinaciones que incluyen inhibidores de enzima de conversión TNFa (TACE); inhibidores IL-1 (inhibidores de enzima de conversión interleucina-1 , IL-IRA etc.) pueden ser efectivos por la misma razón. Otras combinaciones incluyen el anticuerpo IL-6 tocilizumab (Actemra). Otras combinaciones preferidas incluyen interleucina 11. Aún otra combinación preferida son otros participantes clave de la respuesta autoinmune que pueden actuar en forma paralela a, dependiente de o junto con la función TNFa; especialmente preferidos son los antagonistas IL-18 incluyendo anticuerpos IL-18 o receptores IL-18 solubles, o proteínas de enlace IL-18. Se ha mostrado que TNFa y IL-18 tienen traslape pero funciones distintas y una combinación de antagonistas para ambos puede ser lo más efectivo. Aún otra combinación preferida son los inhibidores anti-CD4 sin agotamiento. Aún otras combinaciones preferidas incluyen antagonistas de la trayectoria de co-estimulación CD80 (B7.1) o CD86 (B7.2) incluyendo anticuerpos, receptores solubles o ligandos antagónicos.

En una modalidad, los métodos y composiciones de la presente invención proporcionan un uso de combinación de un anticuerpo TNFa, por ejemplo, adalimumab, y un DMARD, por ejemplo, metotrexato.

Los inhibidores TNFa utilizados en los métodos y composiciones de la presente invención también pueden combinarse como agentes metotrexato, 6-MP, sulfasalazina de azatioprina, mesalazina, cloroquinina de olsalazina de hidroxicloroquina, pencilamina, aurotiomalato (intramuscular y oral), azatioprina, coquicina, corticoesteroides (oral, inhalado e inyección local), agonistas adrenoreceptores beta-2 (salbutamol, terbutalina, salmeteral), xantinas (teofilina, aminofilina), cromoglicato, nedocromil, cetotifen, ipratropio y oxitropio, ciclosporina, FK506, rapamicina, mofetil de micofenolato, leflunomida, NSAIDs, por ejemplo, ibuprofeno, corticoesteroides tales como prednisolona, inhibidores de fosfodiesterasa, agonistas de adenosina, agentes anti- trombóticos, inhibidores de complemento, agentes adrenérgicos, agentes que interfieren con la señalización mediante citocinas pro-inflamatorias tales como TNFa o IL-1 (por ejemplo inhibidores de cinasa, IRAK, NIK, IKK, p38 o MAP), inhibidores de enzima de conversión l L- 1 ß , inhibidores de enzima de conversión TNFa (TACE), inhibidores de señalización de célula T tal como inhibidores de cinasa, inhibidores de metaloproteinasa , sulfasalazina, azatioprina, 6-mercaptopurinas, inhibidores de enzima de conversión de angiotensinas, receptores de citocinas solubles y derivados de los mismos (por ejemplo, receptores TNF p55 o p75 solubles y derivados p75TNFRIgG (Enbrel y p55TNFR1gG (Lenercept), sIL-1RI, sIL-IRII, slL-6R, citocinas an-ti-inflamatorias (por ejemplo, IL-4, IL-10, IL-11, IL-13 y TGFp). celecoxib, ácido fólico, sulfato de hidroxicloroquina, rofecoxib, etanercept, ¡nfliximab, naproxen, valdecoxib, sulfasalazina, metilprednisolona, meloxicam, acetato de metilprednisolona, tiomalato de sodio de oro, aspirina, acetonida de triamcinolona, napsilato de propoxifeno/apap, folato, nabumetona, diclofenac, piroxicam, etodolac, sodio de diclofenac, oxaprozin, oxicodona hcl, bitartrato de hidrocodona/apap, sodio de diclofenaco/misoprostol, fentanilo, anakinra, recombinante humano, tramadol hcl, salsalato, sulindac, cianocobalamin/fa/piridoxina, acetaminofen, sodio de alendronato, prednisolona, sulfato de morfina, clorhidrato de lidocaína, indometacina, sulfato de glucosamina/condroitina, amitriptilina hcl, sulfadiazina, oxicodona hcl/acetaminofen, olopatadina hcl, misoprostol , sodio de naproxen, omeprazol, ciclofosfamida, rituximab, IL-1 TRAP, MRA, CTLA4-IG, IL-18 BP, anti-IL-18, Anti-I L15, BIRB-796, SCIO-469, VX-702, AMG-548, VX-740, Roflumilast, IC-485, CDC-801, y Mesopram. Las combinaciones preferidas incluyen metotrexato o lefiunomida y en casos de artritis reumatoide moderada a severa, ciclosporina.

Los agentes adicionales no limitantes también se pueden utilizar en combinación con un inhibidor TNFa para tratar un trastorno asociado con actividad TNFa perjudicial y pérdida ósea. Por ejemplo, incluido dentro del alcance de la presente invención se encuentra el uso en combinación de un anticuerpo TNFa, o una parte de enlace de antígenos del mismo, y un agente para tratar artritis reumatoide, incluyendo, pero sin limitarse a, los siguientes: fármaco(s) anti-inflamatorio no esferoidal (NSAIDs); fármaco(s) anti-inflamatorio, supresor de citocina (CSAIDs); CDP-571 /BAY-10-3356 (anticuerpo anti-TNFa humanizado; Celltech/Bayer); cA2/infliximab (anticuerpo anti-TNFa quimérico; Centocor); 75 kdTNFR-lgG/etanercept (proteína de fusión IgG 75 kD-receptor TNF-; Immunex; ver por ejemplo, la Publicación de Artritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med. (1996) Vol. 44, 235A); 55 kdTNF-lgG (proteína de fusión IgG receptor TNF 55 kD; Hoffmann-LaRoche); I DEC-C E9.1 /SB 210396 (anticuerpo anti-CD4m primatizado sin agotamiento; I DEC/SmitKiine; ver Publicación, Artritis & Rheumatism (1995) Vol. 38, S185); DAB 486-IL-2 y/o DAB 389-IL-2 (proteínas de fusión IL-2; Seragen; ver por ejemplo la Publicación de Artritis & Rheumatism (1993) Vol. 36, 1223); Anti-Tac (anti-IL-2Ra humanizado; Protein Design Labs/Roche); IL-4 (citocina anti-inflamatoria; DNAX/Schering); IL-10 (SCH 52000; IL-10 recombinante, citocina anti-inflamatoria; DNAX/Schering); IL-4; agonistas IL-10 y/o IL-4 (por ejemplo, anticuerpos agonistas); IL-IRA (antagonista de receptor IL-1; Synergen/Amgen) ; anakinra (Kineret®/Amgen); TNF-bp/s-TNF (proteína de enlace TNF soluble; ver por ejemplo, la Publicación de Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S284; Amer. J. Fysiol.-- Heart y Circulatory Fysiology (1995) Vol. 268, pp. 37-42); R973401 (inhibidor Tipo IV de fosfodiesterasa; ver por ejemplo, la Publicación de Patente Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S282); MK-966 (inhibidor COX-2; ver por ejemplo, la Publicación de Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S81); lloprost (ver por ejemplo, la Publicación de Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S82); metotrexato; talidomida (ver por ejemplo, la Publicación de Patente Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S282) y fármacos relacionados con talidomida (por ejemplo, Celgen); leflunomida (inhibidor anti- inflamatorio de citocina; ver por ejemplo, la Publicación de Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S131; Inflammation Research (1996) Vol. 45, pp. 103-107); ácido tranexámico (inhibidor de activación de plasminógeno; ver por ejemplo, la Publicación de Patente Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S284); T-614 (inhibidor de citocina; ver por ejemplo, la Publicación de Patente Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39 No. 9 (suplemento), S282); prostaglandina E1 (ver por ejemplo, Publicación de Patente Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S282); Tenidap (fármaco anti-inflamatorio no esteroidal; ver por ejemplo, la Publicación de Patente Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S280); Naproxen (fármaco antiinflamatorio no esteroidal; ver por ejemplo, la Publicación de Patente Neuro Report (1996) Vol. 7, pp. 1209-1213); Meloxicam (fármaco anti-inflamatorio no esteroidal), Ibuprofen (fármaco anti-inflamatorio no esteroidal); Piroxicam (fármaco antiinflamatorio no esteroidal); Diclofenac (fármaco antiinflamatorio no esteroidal); Indometacin (fármaco anti-inflamatorio no esteroidal); Sulfasalazina (ver por ejemplo, Publicación de Patente Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S281); Azatioprina (ver por ejemplo, Publicación de Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39 No. 9 (suplemento), S281); inhibidor ICE (enzima de conversión de enzima de de interleucina-1 ß); inhibidor zap-70 y/o Ick (inhibidor de tirosina cinasa zap-70 o Ick); inhibidor VEGF y/o inhibidor de VEGF-R (inhibidores del factor de crecimiento de célula endotelial vascular o receptor de factor de crecimiento de célula endotelial vascular; inhibidores de angiogénesis); fármacos anti-inflamatorios corticoesteroides (por ejemplo, SB203580); inhibidores de TN F-convertasa ; anticuerpos anti-IL-12; anticuerpos anti-IL-18; inhibidores de interleucinan-11 (ver por ejemplo, Publicación de Patente Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S296); interleucina 13 (ver por ejemplo, Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S308); interleucina-17 (ver por ejemplo, Publicación de Artritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S120); oro; penicilamina; cloroquina; clorambucilo; hidroxicloroquina; ciclosporina; ciclofosfamida ; irradiación de linfoide total; globulina anti-timocito; anticuerpos anti-CD4; CD5-toxinas; péptidos administrados oralmente y colágeno; disodio de lobenzarit; Agentes de Regulación de Citocina (CRAs) HP228 y HP466 (Houghten Farmaceuticals, Inc.); oligo-deoxinucleótidos de fosforotioato anti-sentido ICAM-1 (ISIS 2302; Isis Farmaceuticals, Inc.); receptor 1 de complemento soluble (TP10; T Cell Sciences, Inc.); prednisona; orgoteina; polisulfato de glucosaminoglucan; minociclina; anticuerpos anti-IL2R; lípidos marinos y botánicos (ácidos grasos de semillas de plantas y peces; ver por ejemplo, la Publicación de DeLuca y asociados (1995) Rheum. Dis. Clin.

Nort Am. 21:759-777); auranofin; fenilbutazona; ácido meclofenámico; ácido flufenámico; globulina inmune intravenosa; zileuton; azaribina; ácido micofenólico (RS-61443); tacrolimus (FK-506); sirolimus (rapamicina); amiprilosa (terafectin); cladribina (2-clorodeoxi adenosina); metotrexato; antivirales; y agentes de modulación inmune.

En una modalidad, un anticuerpo TNFa, o una parte de enlace de antigenos del mismo, se administra en combinación con uno de los siguientes agentes para el tratamiento de artritis reumatoide: inhibidor de molécula pequeña de KDR (ABT-123), inhibidor de molécula pequeña de Tie-2; metotrexato; prednisona; celecoxib; ácido fótico; sulfato de hidroxicloroquina; rofecoxib; etanercept; infliximab; leflunomida; naproxen; valdecoxib; sulfasalazina; metilprednisolona; ibuprofen; meloxicam; acetato de metilprednisolona; tiomalato de sodio de oro; aspirina; azatioprina; acetonida de triamcinolona; napsilato de propxifeno/apap; folato; nabumetona; diclofenac; piroxicam; etodolac; sodio de diclofenac; oxaprozin; oxicodona hcl; birtrato de hidrocodona/apap; sodio de diclofenac/misoprostol ; fentanilo; anakinra, recombinante humano; tramadol hcl; salsalato; sulindac; cianocobalamin/fa/piridoxina; acetaminofen; sodio de alendronato; prednisolona; sulfato de morfina; clorhidrato de lidocaína; indometacina; sulfato de glucosamina/condroitina; ciclosporina; amitriptilina hcl; sulfadiazina; oxicodona hcl/acetaminofen; olopatadina hcl; misoprostol; sodio de naproxen; omeprazol; mofetil de micofenolato; ciclofosfamida; rituximab; IL-1 TRAP; M RA; CTLA4-IG; IL-18 BP; ABT-874; ABT-325 (anti-IL 18); anti-IL 15; BIRB-796; SCIO-469; VX-702; AMG-548; VX-740; Roflumilast; IC-485; CDC-801; y mesopram. En otra modalidad, un anticuerpo TNF, o una parte de enlace de antígenos del mismo, se administra para el tratamiento de un trastorno relacionado con TNF en combinación con uno de los agentes mencionados anteriormente para el tratamiento de artritis reumatoide.

Los anticuerpos de la presente invención, o partes de enlace de antígenos del mismo, también se pueden combinar con agentes tales como alemtuzumab, dronabinol, Unimed, daclizumab, mitoxantrona, clorhidrato de xaliproden, fampridina, acetato de glatiramer, natalizumab, sinabidol, a-inmunocina NNS03, ABR-215062, AnergiX.MS, antagonistas de receptor de quimosinas, BBR- 2778, calagualina, CPI-1189, LEM (mitoxantrona encapsulada por liposomas), TCCBD (agonista canabinoide) MBP-8298, mesopram (inhibidor PDE4), MNA-715, anticuerpo de receptor anti-IL-6, neurovax, alotrap pirfenidona 1258 (RDP-1258), sTNF-RI, talampanel, teriflunomida, TGF-beta2, tiplimotida, agonistas VLA-4 (por ejemplo, TR-14035, VLA4 Ultrahaler, Antegran-ELAN/Biogen), antagonistas de interferón gamma a agonistas IL-4.

La presente invención se ilustra en forma adicional a través del siguiente ejemplo, el cual no deberá construirse como limitante en forma alguna.

EJEMPLO: LA TERAPIA ANTI-TNFa REDUCE LA PERDIDA ÓSEA A. La terapia de Adalimumab reduce la pérdida ósea en la mano en pacientes con artritis reumatoide temprana Revisión General Un objetivo de este estudio (Estudio J) fue comparar la pérdida de hueso cortical de las manos en pacientes con artritis reumatoide temprana (RA) a través de las tres ramificaciones del tratamiento: adalimumab más metotrexato (MTX); monoterapia de adalimumab; y monoterapia de MTX. Un objetivo secundario fue buscar anticipadores de pérdida de hueso de la mano.

Generalmente el estudio incluyó 768 pacientes con RA active durante <3 años quienes fueron naive a MTX. Las recolecciones de datos clínicos y revisiones radiográficas de las manos se llevaron a cabo en la línea de base, y después de 26, 52 y 104 semanas de terapia. La pérdida ósea de la mano fue evaluada mediante radiogrametría de rayos X (DXR), principalmente como el índice cortical metacarpal (MCI), en las mismas radiografías utilizadas para evaluaciones de daño articular.

Los resultados mostraron que el porcentaje de pérdida promedio de DXR-MCI fue significativamente mayor en el grupo MTX versus el grupo de combinación a las 52 semanas (-2.87 versus -2.16, p = 0.009) y 104 semanas (-4.62 versus -3.03, p<0.001). la pérdida promedio en el grupo MTX fue numéricamente mayor que la pérdida en el grupo de adalimumab a las 52 semanas (-2.87 versus -2.45, p =0.19) y 104 semanas (-4.62 versus -4.03, p = 0.10). Además, la edad avanzada, el CRP de línea de base elevado y el no uso de adalimumab fueron anticipadores independientes de pérdida de hueso de las manos en un modelo de regresión lineal.

En conclusión, Adalimumab protegió contra pérdida ósea de la mano RA temprana. El orden de la pérdida de huso en las tres ramificaciones del tratamiento fue similar al orden de la progresión radiográfica. Este análisis de datos soporta medidas cuantitativas de los huesos de la mano para detección de daño a los huesos inflamatorio en pacientes RA. También demuestra que la pérdida de hueso de la mano y el daño de huesos radiográfico ocurre a través de mecanismos patogenéticos similares.

Objetivo El objetivo principal de este análisis fue comparar la pérdida ósea corticales de la mano en las tres ramificaciones del Estudio J: adalimumab más metotrexato (MTX) versus monoterapia de adalimumab versus monoterapia de MTX, para todos los pacientes con RA agresiva, temprana. En forma secundaria, se evaluaron anticipadores potenciales de pérdida ósea de la mano en los pacientes RA del Estudio J.

Métodos Muestra v diseño de estudio Los datos radiográficos y clínicos de este estudio controlado aleatorizado, doble ciego, de centro múltiple de 2 años (Estudio J) se ha descrito con detalle (ver la Publicación de Breedveld y asociados (2006) Artritis Rheum 54:26-37). La eficacia y seguridad de adalimumab más MTX se compare con la monoterapia de adalimumab y con la monoterapia de MTX en 799 pacientes adultos RA agresiva, temprana (<3 años), (calificación de erosión promedio de aproximadamente 12 unidades Sharp, progreso TSS anual estimado de aproximadamente 27 unidades Sharp) quienes no habían sido tratados previamente con MTX, ciclofosfamida, ciclosporina, azatioprina o más de otros 2 DMARDs (Breedveld y asociados (2006), supra). El grupo de combinación recibió 40 mg de adalimumab en forma subcutánea (se) cada dos semanas más MTX oral semanalmente (incremento rápidamente a 20 mg/semana), y los grupos de monoterapia recibieron ya sea 40 mg de adalimumab se cada dos semanas más placebo o MTX oral semanal más placebo. Las radiografías de las manos y pies fueron calificadas de acuerdo con una calificación Sharp modificada (rango 0 a398) (Breedveld y asociados (2006), supra).

El siguiente estudio presenta datos de pérdida de hueso de la mano durante 26, 52, y 104 semanas de seguimiento. Para mantener el diseño del estudio original de una prueba controlada, aleatorizada, ciega, se mantuvo secreto el código de tratamiento para el investigador quien analizó los datos, hasta que todos los análisis habían sido completados.

Medida de hueso de las manos-DXR Se utilizó radiogametría de rayos X digital (DXR) (Sectra, Linkoping, Suecia) para medir la densidad mineral ósea de la mano (BMD) y el índice cortical metacarpal (MCI) en los mismos rayos X de la mano digitalizados utilizados para evaluar el daño articular radiográfico. DXR es una versión en computadora de la técnica de radiogrametría tradicional [13] y ha mejorado el método y su precisión sustancialmente. DXR ha descrito con detalle [14, 15, 16]. En radiografías de la mano, la computadora reconoce automáticamente regiones der interés (ROI) alrededor de la parte más angosta del segundo, tercero y cuarto hueso metacarpal y mide el grosor cortical, ancho del hueso y porosidad 118 veces por cm. DXR-BMD se define como: c X VPAcomb X (1-p), en donde c es una constante (determinar por el resultado de que DXR-BMD, en promedio, es igual a la región del antebrazo distal-medio del dispositivo Hologic QDR-2000); VPA es el volumen por área; y p es porosidad. DXR-MCI se identifica como el grosor cortical combinado dividido entre el diámetro cortical externo y es una medida de hueso relativa independiente del tamaño de hueso, longitud de hueso y configuración de captura de imagen [16.17]. Tanto DXR-BMD como DXR-MCI proporcionan grados de precisión sustancial [17].

DXR-BMD fue proyectado para ser la medida de resultado principal en este estudio. Sin embargo, muchas radiografías pueden ser analizadas para BMD debido a la resolución de imagen desconocida. Generalmente, la ecuación para DXR-BMD se basa en el volumen por área y requiere una resolución definida o conocida, ya que una distancia en una radiografía digitalizada no puede medirse cuando la resolución es desconocida. Por lo tanto DXR-MCI, es una medida relativa independiente de la resolución de imagen, y se utilizó como la medida de resultado primaria. La correlación entre DXR-BMD y DXR-MCI ha mostrado ser sustancial (r > 0.90), tanto en sección cruzada [18] como longitudinal [19].

Por comparación también se proporcionan resultados para DXR-BMD. Todas las imágenes de resolución desconocida fueron analizadas asumiendo 254 dpi (la resolución de exploración de las radiografías antes de la calificación). Sin embargo varias de las radiografías fueron claramente de una resolución diferente a 254 dpi, lo más probable debido a que habían sido impresas en un tamaño no real antes de la exploración. Todas las imágenes disponibles de la línea de base fueron analizadas, así como 26, 52 y 104 semanas, mediante DXR-BMD y el ancho metacarpal promedio calculado.

Con base en el análisis de otros estudios con una resolución controlada, [19] una desviación del ancho de la línea de base mayor al 2% se consideró que indica probablemente un valor incorrecto. Con este valor del 2% como un corte, se excluyeron el 23% de las radiografías de los análisis DXR-BMD adicionales. La gráfica de flujo en la figura 1, ilustra los pacientes quienes fueron incluidos en los análisis DXR-MCI y DXR-BMD.

Para evitar polarizaciones con respecto a la mano dominante versus no dominante para lograr una mejor precisión, las medidas de valor promedio de ambas manos fueron utilizadas [10]. Si la radiografía de una mano puede no ser analizada o faltara, se utilizó la radiografía de la mano disponible para todos los análisis en diferentes puntos de tiempo.

Análisis estadístico Ya que los datos no fueron distribuidos normalmente, se llevaron a cabo análisis sin parámetro. No se llevaron a cabo imputaciones. Los valores de línea de base se compararon entre grupos de tratamiento con el método Kruskall-Wallis para variables continuas y con el método de qui-cuadrado para variables categóricas. Las comparaciones de cambios en la BMD de la mano se llevaron a cabo siguiendo metodologías paralelas y similares a las empleadas en el Estudio J [6]. Se compararon dos grupos en un orden jerárquico con la prueba ann-Whitney U (es decir, comparación de dos lados del grupo de combinación versus MTX, seguido de comparaciones de dos lados entre las ramificaciones del tratamiento de monoterapia, y finalmente las comparaciones de dos lados entre la monoterapia de adalimumab y el grupo de combinación). Se completó cada comparación por pares únicamente si la comparación previa fue estadísticamente significativa. La pérdida ósea con el tiempo se expresó como un valor negativo. Se desarrolló un modelo de regresión lineal para buscar los anticipadores de pérdida BMD de la mano a las 104 semanas. Se llevaron a cabo análisis de correlación de Spearman en un intento para correlacionar cambios en DXR-MCI a las 04 semanas con las siguientes variables de línea de base: curación de la enfermedad; actividad de la enfermedad medida mediante DAS28; [20] CRP; índice de discapacidad de las calificaciones del Cuestionario de Evaluación de Salud (HAQ DI); [21] uso previo de DMARDs y cortisona; daño radiográfico de articulaciones; ramificación de tratamiento aleatorizada y valor DXR-MCI absoluto. Las variables con un valor-p menor a 0.15, se incluyeron en el modelo de multivariado, lo cual también se ajustó para la edad y el sexo. La ramificación de tratamiento fue codificada como una variable de simulación (MTX como 0, adalimumab como 1 y el grupo de combinación como 2).

Imprevistos y éticas del estudio Tal como se reportó, el Estudio J fue aprobado por una tabla de revisión institucional central y un comité de éticas independiente en cada sitio participante [6].

Resultados Los valores DXR-MCI de la línea de base estuvieron disponibles para los 768 de 799 pacientes inscritos en el Estudio J, y los valores DXR-MCI faltaron para 2 de 539 pacientes quienes completaron el estudio (figura 1). Los números correspondientes para los datos DXR-BMD disponibles (con base en los valores de corte para resolución de imagen descritos en la sección de "Métodos") fueron 765 y 369, respectivamente (figura 1). Las características clínicas demográficas y la línea de base fueron comparables entre los tres grupos de tratamiento (Tabla 1).

Tabla 1. Características de línea de base para pacientes con artritis reumatoide temprana en el Estudio J* Adalimumab + Monoterapia de Monoterapia de Metotrexato Metotrexato Adalimumab (N=261) (N=261) (N=246) Característica demográficas Edad, años 52.2(13.8) 51.9(13.7) 51.9(13.3) Mujeres, no. (%) 187 (71.6) 205 (78.5) 181 (73.6) Características clínicas Duración de enfermedad, 0.7 (0.8) 0.7 (0.8) 0.8 (0.9) años DMARDs tomadas 84 (32.2) 87 (33.3) 78 (31.7) previamente, no. (%) Corticoesteroides 92 (35.2) 94 (36.0) 85 (34.6) tomados previamente no.

(%) Conteo de articulación 31.1 (14.1) 31.7 (13.5) 32.2 (14.3) sensible, 0-66 Conteo de articulación 21.2 (11.1) 21.7 (10.2) 21.6 (11.3) inflamada, 0-66 Proteína reactiva-C, mg/1 39.5 (42.4) 40.7 (38.6) 40.6 (41.2) HAQ, 0-3 1.5(0.6) 1.6(0.6)** 1.5(0.7) DAS28 6.3 (0.9) 6.4 (0.9) 6.3 (0.9) Análisis de imagen TSS modificado Media 18.1 (20.3) 18.4 (18.2) 21.5 (21.8) Promedio (25 a 75 12.8(6.0-24.0) 13.5 (5.1-25.5) 15.5(7.5-28.5) porcentual) DXR-MCI 0.45 (0.09) 0.45 (0.09) 0.46 (0.08) DXR-BMD, g/cm2 0.57 (0.08) 0.57(0.08) 0.58 (0.08) *Excepto cuando los resultados indicados se proporcionan en una desviación promedio ± estándar para las variables continuas y los números porcentajes para las variables categóricas.

"Valores significativamente mayores en el grupo de adalimumab en comparación tanto con el grupo de metotrexato como con el grupo de combinación.

RA = artritis reumatoide; DMARDs = fármacos anti-reumáticos que modifican la enfermedad; HAQ = Cuestionario de Evaluación de Salud; DAS28=calificación de actividad de enfermedad de 28 articulaciones; TSS = calificación Sharp total; DXR = radiogrametría de rayos X digital; BMD= densidad mineral ósea; MCI = índice metacarpal cortical.

La única diferencia estadísticamente significativa entre las ramificaciones del tratamiento fue una calificación HAQ promedio ligeramente mayor para el grupo de monoterapia de adalimumab. Antes de la inscripción, se habían utilizado corticoesteroides en el 35% de los pacientes (dosis diaria promedia de prednisolona fue de 6.6 mg), y el 32% había sido tratado con DMARDs tradicionales además de MTX. Las calificaciones de daño radiográfico de la línea de base fueron similares en los grupos de tratamiento, con una calificación Sharp promedio media de 14.0 (19.3) (Tabla 1).

El porcentaje promedio de los cambios DXR-MCI para todos los pacientes fue de -1.29, -2.45 y -3.72 después de 26, 52 y 104 semanas, respectivamente. Los valores correspondientes para DXR-BMD fueron de -1.07%, -1.72% y -2.63%. Estos cambios de la línea de base en DXR-MCI y DXR-BMD fueron significativos para todos los grupos en todos los puntos de tiempo durante el seguimiento (p<0.001 para todos). El uso de corticoesteroides o DMARDs no afecta la pérdida ósea de la mano (datos no mostrados).

Los coeficientes de correlación (r) entre los cambios DXR- MCI y DXR-BMD fueron 0.88, 0.93 y 0.94 a las 26, 52 y 104 semanas, respectivamente (p < 0.001 para todos).

Cambios DXR-MCI entre ramificaciones de tratamiento A las 26, 52, y 104 semanas, el porcentaje promedio de los cambios DXR-MCI fue de -1.15, -2.16, y -3.03 para el grupo de combinación de adalimumab más MTX; -1.33, -2.45, y -4.03 para el grupo de monoterapia de adalimumab; y de -1.42, -2.87, y -4.62 para el grupo de monoterapia de MTX (figura 2).

El rango de pérdida DXR-MCI fue significativamente mayor para el grupo MTX en comparación con el grupo de combinación a las 52 semanas (p = 0.009) y 104 semanas (p < 0.001), y también se observó la misma tendencia a las 26 semanas (p = 0.19). La pérdida ósea en el grupo de MTX también fue numéricamente inferior que en el grupo 104 semanas (p = 0.10). Cambios DXR-BMD entre ramificaciones de tratamiento Los cambios en el porcentaje DXR-BMD promedio en el grupo de combinación fueron de -1.06 a las 26 semanas, -1.63 a las 52 semanas, y -2.49 a las 104 semanas. En el grupo de adalimumab, los cambios respectivos a las 26, 52, y 104 semanas fueron de -0.96, -1.97, y -2.40; y para el grupo MTX, los cambios fueron de -1.20, -1.86, y -3.58. Se observó una diferencia significativa entre el cambio DXR-BMD en el grupo MTX y grupo de combinación a las 104 semanas (p = 0.049) y una tendencia hacia una diferencia de significancia a las 52 semanas (p = 0.10). Además, se observe una tendencia hacia una diferencia entre los grupos de MTX y adalimumab para valores de 104 semanas (p = 0.16).

Daño radiográfico v DXR-MCI Los cambios radiográficos promedio (media) en la calificación de Sharp modificada a las 26, 52, y 104 semanas respectivamente fueron de 0 (0.5), 0 (0.9), y 0 (1.0) para el grupo de combinación; y 0.5 (2.1), 0.5 (3.3), y 1.0 (4.8) para el grupo de monoterapia de adalimumab. Para el grupo de monoterapia de MTX, los cambios respectivos fueron 1.0 (3.4), 2.0 (5.1), y 2.0 (6.4) (figura 2). La discrepancia en los resultados de este análisis versus el descubrimiento del Estudio J original es probable que sean resultado de las ligeras diferencias en el número de participantes del estudio (figura 1) y el hecho de que no se llevaron a cabo aquí imputaciones. Las correlaciones (r) entre el cambio DXR-MCI y el cambio en calificación de Sharp a las 26, 52, y 104 semanas fue de r = -0.12 (p = 0.001); r = -0.23 (p < 0.001); y r = -0.32 (p < 0.001). Los valores-r comparables para correlaciones entre los cambios de DXR-BMD y la calificación de Sharp fueron de -0.15, -0.23, y -0.33, respectivamente (p < 0.001 para todos).

Modelo de multivariado Las variables incluidas en el modelo de multivariado final fueron valores de línea de base de la duración de la enfermedad, calificación DAS28, CRP, DXR-MCI, HAQ, daño radiográfico, y grupo de tratamiento (variable de simulación), junto con edad y sexo.

La edad avanzada, CRP mayor y el no uso de adalimumab se convirtieron en anticipadores independientes para pérdida de hueso cortical de la mano, aunque las calificaciones DAS28 mayores (es decir, severidad de enfermedad mayor) (p = 0.07), y las duraciones de enfermedad más cortas (p = 0.11 ) tuvieron tendencia hacia una significancia estadística dentro del modelo (Tabla 2).

Tabla 2. Anticipadores para el porcentaje de pérdida DXR-MCI a las 104 semanas de sequimiento para pacientes con artritis RA 515 explorados mediante modelos de regresión lineal de multivariante.

Cambios de porcentaje DXR-MCI a las 104 semanas Beta p-valor Edad, años -0.25 <0.001 Mujeres -0.04 0.36 Duración de enfermedad, años 0.06 0.11 Proteína reactiva-C, mg/l -0.23 <0.001 DAS28 -0.09 0.07 Grupo de tratamiento* 0.16 <0.001 R2, ajustado 0.19 * El grupo de tratamiento codificado como una variable de simulación: 0=MTX, 1 = adalimumab, 2 = adalimumab más MTX Línea de base MCI, Línea de base de Calificación, y HAQ no influenciaron el modelo RA = artritis reumatoide, DXR = radiogrametría de rayos X digital, MCI = índice cortical motararnal ??? = P.noctinnanr» rio Fwali lariAn Ho <5ali ?? ??£ 8 = P.alifirariAn He El descubrimiento clave de este análisis fue que la terapia anti-TNF con adalimumab en combinación con MTX proporcionó una mejor protección a los huesos que cualesquiera de las monoterapias de adalimumab o MTX en pacientes con cierto tipo de RA, por ejemplo, RA agresiva, temprana. El orden de la pérdida de hueso de la mano a través de las tres ramificaciones de tratamiento fue el mismo que se había observado para el daño radiográfico general en el Estudio J (figura 2). Además, los resultados del modelo de multivariado señalaron la importancia de inflamación (evaluado con CRP) como la fuerza conducente para el daño a huesos en RA activa y la importancia de la implicación de TNF en este proceso.

Con respecto al mecanismo, el análisis de la presente invención soporta la hipótesis de que tanto las erosiones como la osteoporosis son el resultado del mismo mecanismo patofisiológico, lo cual incluye la activación de la célula de osteoclasto. Esta hipótesis de basa en los descubrimientos de estudios tanto en animales [2,22] como humanos. [3] Los osteoclastos que son las células principales para la degradación de huesos, son conducidos por la inflamación sinovial y estimulados por TNF, el factor de generación de columna de macrófago (M-CSF), y el activador de receptor del ligando de factor- (RANKL). Estas citocinas activan el osteoclasto que posteriormente origina la osteoporosis (localizada y generalizada) y erosiones. [23] Los descubrimientos por este estudio, soportan el hecho de que la supresión de inflamación a través de la terapia anti-TNF, reduce la pérdida ósea de la mano. Además, a partir del modelo de multivariado que se llevó a cabo, CRP probó ser un anticipador fuerte para la pérdida de DXR-MCI.

Aunque no deseamos limitarnos a la teoría, la pérdida ósea en el grupo de combinación (adalimumab y MTX) puede ser atribuible, al menos en parte, a la actividad en la enfermedad sustancial en los pacientes RA tempranos que participan en el Estudio J, y su pronóstico deficiente en términos de daño de huesos (factor reumatoide-positividad y enfermedad erosiva) [24].

Aunque los efectos positivos de la terapia de antagonista TNF en RA activa pareció haber sido más pronunciados para el daño a articulaciones radiográficas que para la masa de hueso de la mano (figura 2), la terapia de antagonista-TNF descubrió reducir aún el riesgo de desarrollar erosiones y el rango de pérdida de hueso de la mano relacionada con la inflamación. Aunque no pretendemos limitarnos a la teoría, una explicación para esta discrepancia, puede ser que las radiografías convencionales no son lo suficientemente sensibles para detectar el daño a los huesos. Tanto el ultrasonido (US) como la generación de imagen de resonancia magnética (MRI) han demostrado ser más sensibles que las radiografías para detectar erosiones [25]. Además, MRI puede detectar erosiones años antes de que sean visibles en radiografías [26]. Además, la sinovitis MRI ha sido detectada en pacientes RA en el estado de remisión tanto clínica como radiográfica ("remisión real") [27]. La pérdida ósea de la mano evaluada mediante DXA, también ha mostrado ser un marcador más sensible para daño a los huesos que las radiografías convencionales [10]. Por consiguiente, la combinación de la inflamación siempre presente en pacientes con mayor actividad de enfermedad, así como la capacidad de DXR para detectar pequeños cambios en la masa de huesos, puede explicar la pérdida en curso de los huesos de la mano, incluso en el grupo de terapia de combinación. También es importante observar la influencia de la pérdida ósea normal que tiene lugar también en adultos sanos, especialmente mujeres post-menopáusicas. La pérdida de hueso normal para DXR-MCI ha sido revisada únicamente en estudio de sección transversal que reportan un rango anual de pérdida ósea entre 0.7-0.9 % [16,28,29].

Cuando se planeo este análisis, las radiografías principalmente para DXR-BMD, eran para ser analizadas originalmente. Sin embargo, por las razones descritas en la sección de "Métodos", hubieron dificultades en el análisis de un porcentaje notable de radiografías para DXR-BMD. Este estudio estuvo basado en análisis hoc del Estudio J. utilizando la medida DXR-MCI relativa en lugar de la medida absoluta de BMD, no estuvo disponible la oportunidad de corregir la porosidad. Además, DXR-BMD, en forma opuesta DXR-MCI, se calibra para emborronamiento y calidades particulares del equipo de medición radiográfica diferente. Sin embargo, DXR ha mejorado la precisión de MCI, [17] y existe una fuerte correlación entre DXR-BMD y DXR-MCI (r>0.9) [18,19]. DXR- MCI y DXR-BMD también se descubrieron como correlacionadas en gran parte con DXA-BMD [19]. Estos hechos sugieren que DXR-MCI es un sustituto válido para medir el cambio en masa de los huesos de la mano.

Existe poca información con disponible con respecto al uso de bisfosfonatos en pacientes que participan en el Estudio J, sin embargo, el diseño de estudio de una prueba controlada, a leatorizada , doble ciego minimizó el efecto de una polarización potencial. Además, el ácido zoledrónico no estuvo en el mercado para el tratamiento de osteoporosis cuando se llevo a cabo Estudio J. Además, en otro estudio, el efecto positivo de infliximab para suprimir inflamación en huesos se descubrió como independiente de los bisfosfonatos [7].

En conclusión, este estudio proporciona evidencia de que la terapia anti-TNF potente no únicamente reduce el riesgo de desarrollar erosiones, sino también reduce el rango de pérdida ósea de la mano relacionados con la inflamación en RA. Este estudio también sugiere que el proceso de enfermedad del daño de los huesos aún puede estar presente en pacientes RA tratados con antagonistas TNF, incluso si se detiene el daño a la articulación observado en radiografías.

B. Reduce la pérdida ósea de la mano en Artritis Reumatoide Adalimumab (RA) Independiente de la Respuesta Clínica: Subanálisis del Estudio J El adalimumab reduce a los rangos tanto daño de articulaciones radiográficos como pérdida de hueso de la mano en pacientes con RA temprana. El rango de progreso de articulación radiográfico ha mostrado reducirse en forma independiente de la respuesta clínica del paciente a adalimumab. Esto no ha sido revisado previamente para pérdida de hueso de la mano, la segunda característica de la implicación del hueso en RA inflamatoria.

El objetivo del estudio aquí descrito fue revisar la relación entre la pérdida ósea de la mano y la respuesta clínica en pacientes que reciben monoterapia de metotrexato (MTX) y en pacientes que reciben adalimumab más MTX en el Estudio J. Métodos Tal como se describe anteriormente, el Estudio J comparó la eficacia de adalimumab más MTX versus MTX sólo y adalimumab sólo en pacientes RA naive-MTX, activos temprano (<3 años). El subanálisis aquí descrito implicó los grupos de monoterapia de MTX y de la terapia de combinación. Se evaluó la pérdida ósea de la mano mediante el índice cortical metacarpal de radiogrametría de rayos X digital (DXR-MCI), calculada a partir de radiografías digitalizadas (DXR, Sectra, Suecia). MCI, definida como el grosor cortical metacarpal combinado dividido entre el diámetro de hueso externo, ha mostrado estar bien correlacionado con la densidad mineral ósea. El cambio en porcentaje MCI de la línea de base hasta las 52 semanas se evaluó para pacientes con diferentes respuestas clínicas. Se evaluó la actividad de enfermedad mediante calificaciones DAS28 a las 52 semanas en 4 subgrupos: Remisión = DAS28<2.60; Actividad de enfermedad baja = DAS28 2.61-3.20; Actividad de enfermedad moderada = DAS28 3.21-5.20; y alta actividad de la enfermedad = DAS28>5.20. Se llevaron a cabo comparaciones de grupo sin parámetro.

Resultados Para el grupo de terapia de combinación (MTX y adalimumab), no hubo diferencia en la pérdida ósea entre pacientes RA con remisión, actividad de enfermedad baja moderada y alta (p= 0.97). Para el grupo MTX, hubieron diferencias numéricas entre los 4 subgrupos de actividad de enfermedad clínica (p = 0.10) (Tabla 3). Debido a los pequeños números de pacientes en algunos de los 4 subgrupos (ver Tabla 3), dividimos en forma adicional pacientes en otros 2 subgrupos: remisión y baja actividad de la enfermedad versus actividad de la enfermedad moderada y alta. En el grupo MTX, los pacientes con DAS28 moderada y alta ha perdido significativamente más DXR-MCI que los pacientes con DAS 28 de bajo nivel (-4.65 versus -2.99, p = 0.01), aunque no se observó una diferencia estadísticamente significativa en grupos de terapia de combinación (-3.10 versus -2.70, p = 0.99). La correlación entre la actividad de la enfermedad y la pérdida ósea de la mano (porcentaje DXR-MCI) fue de -0.14 (p = 0.06) en el grupo MTX y -0.07 (p = 0.33) para el grupo de terapia de combinación.

Tabla 3. Diferencias en pérdida ósea entre pacientes RA con actividad de la enfermedad en remisión, baja, moderada, y alta tratados con MTX solo, o con Adalimumab + MTX (terapia de combinación).

En conclusión, estos datos sugieren que adalimumab reduce la pérdida ósea de la mano independientemente de la actividad de la enfermedad evaluada en forma clínica tal como se muestra previamente para daño de articulación radiográfico. Estos resultados soportan la hipótesis de que TNF influencia la pérdida ósea no únicamente estimulando RANKL mediante inflamación sino también activando directamente el osteoclasto. REFERENCIAS 1. Arnett FC, Edworthy SM, Bloch DA, McShane DJ, Fries JF, Cooper NS, y asociados. "La Asociación Americana de Reumatismo 1987 revisó los criterios para clasificación de artritis reumatoide" (The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis). Arthritis Rheum 1988; 31. páginas de la 315 a la 324. 2. Pettit AR, Ji H, von Stechow D, Muller R, Goldring SR, Choi, Y, y asociados. 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"¿Son las erosiones óseas detectadas mediante generación de imagen de resonancia magnética y ultrasonografía erosiones reales?, Una comparación con tomografía computarizada en articulaciones metacarpofalengeales de artritis reumatoide" (Are bone erosions detected by magnetic resonance imaging and ultrasonography true erosions? A comparison with computed tomography in rheumatoid arthritis metacarpophalangeal joints). Arthritis Res Ther 2006; 8: R110. 26. Ostergaard M, Hansen M, Stoltenberg M, Jensen KE, Szkudlarek M, Pedersen-Zbinden B, y asociados. "Nuevas erosiones óseas radiográficas en cintura de pacientes con artritis reumatoide, son detectables con generación de imagen de resonancia magnética en un promedio de dos años previos" (New radiographic bone erosions in the wrists of patients with rheumatoid arthritis are detectable with magnetic resonance imaging a median of two years earlier). Arthritis Rheum 2003; 48: páginas de la 2128 a la 2131. 27. Brown AK, Quinn MA, Karim Z, Conaghan PG, Peterfy CG, Hensor E, y asociados. "Presencia de sinovitis significativa en pacientes con artritis reumatoide con remisión clínica inducida por fármacos antirreumáticos que modifican la enfermedad: evidencia de un estudio de generación de imagen puede explicar el progreso estructural" (Presence of significant synovitis in rheumatoid arthritis patients with disease-modifying antirheumatic drug-induced clinical remission: evidence from an imaging study may explain structural prog ression) . Arthritis Rheum 2006; 54: páginas de la 3761 a la 3773. 28. Bottcher J, Pfeil A, Schafer ML, Petrovitch A, Seidl BE, Mentzel HJ, y asociados. "Datos normativos para radiogrametría de rayos X digital de un hombre y una mujer" (Normative data for digital X-ray radiogrammetry from a female and male Germán cohort). J Clin Densitom 2006; 9: páginas de la 341 a la 350. 29. Toledo VA, Jergas M. 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EQUIVALENTES Los expertos en la técnica reconocerán, o tendrán la capacidad de confirmación utilizando no más que la experimentación de rutina, muchas equivalentes a las modalidades específicas de la invención aquí descrita. Dichos equivalentes están proyectados para estar comprendidos en las siguientes reivindicaciones. Los contenidos de todas las referencias, patentes, y solicitudes de patente publicadas, y solicitudes de patente mencionadas a lo largo de la presente solicitud, están incorporadas a la presente invención como referencia.

Claims (21)

REIVINDICACIONES

1. Un método para tratar pérdida ósea en un sujeto, en donde el método comprende administrar un anticuerpo TNFa humano, o una parte de enlace de antígeno del mismo, al sujeto de modo que se trate la pérdida ósea.

2. El método tal como se describe en la reivindicación 1, caracterizado porque el sujeto tiene artritis reumatoide.

3. El método tal como se describe en la reivindicación 2, caracterizado porque el tratamiento comprende además administrar metotrexato.

4. El método tal como se describe en la reivindicación 1 , caracterizado porque se trata la pérdida ósea de la mano.

5. El método tal como se describe en la reivindicación 1 , caracterizado porque el anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo se selecciona del grupo que consiste en a) un anticuerpo humano, o una parte de enlace de antígenos del mismo, que disocia de TNFa humana con una Kd de 1x10"8 M o menos y una constante de rango tiisoc¡ac¡ón de 1x10"3 s"1 o menos, ambas determinadas mediante resonancia de plasmón de superficie y neutraliza la citotoxicidad de TNFa humana en un ensayo L929 in vitro con un IC50 de 1x10~7 M o menos; b) un anticuerpo humano, o una parte de enlace de antígenos del mismo, que tiene las siguientes características: i) se disocia el TNFa humano con una constante de rango Kd¡SOc¡ac¡ón de 1x10"3 s"1 o menos, tal como se determina mediante resonancia de plasmón de superficie; ii) tiene un dominio de CDR3 de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácido de la SEC ID NO: 3, o se modifica a partir de SEC ID NO: 3 mediante una sustitución de alanina simple en la posición 1, 4, 5, 7 ó 8 o mediante una a cinco sustituciones de aminoácido conservadoras en las posiciones 1, 3, 4, 6, 8 y/o 9; iii) tiene un dominio CDR3 de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácido de la SEC ID NO: 4, o se modifica a partir de SEC ID NO: 4 a través de una sustitución de alanina simple en la posición 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ó 11 o mediante de una a cinco sustituciones de aminoácido conservadoras en las posiciones 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 y/o 12, c) un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) que tiene un dominio CDR3 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 3, o se modifica a partir de SEC ID NO: 3 a través de una sustitución de alanina simple en la posición 1, 4, 5, 7 ó 8, y que comprende una región variable de cadena pesada (HCVR) que tiene un dominio CDR3 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 4, o se modifica a partir de SEC ID NO: 4 a través de una sustitución de alanina simple en la posición 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ó 11; d) un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígeno del mismo, que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 1 y una región variable de cadena pesada (HCVR) que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 2; e) adalimumab; y f) golimumab.

6. El método tal como se describe en la reivindicación 1, caracterizado porque el sujeto fue seleccionado previamente por tener o estar en riesgo de tener pérdida ósea.

7. Un método para tratar pérdida ósea de la mano en un sujeto, en donde el método comprende administrar un anticuerpo TNFa humano o parte de enlace de antígeno del mismo al sujeto, para tratar la pérdida ósea de la mano.

8. El método tal como se describe en la reivindicación 7, caracterizado porque el sujeto tiene artritis reumatoide.

9. El método tal como se describe en la reivindicación 8, caracterizado porque el tratamiento comprende además administración de metotrexato.

10. El método tal como se describe en la reivindicación 7, caracterizado porque el sujeto tiene osteoporosis.

11. El método tal como se describe en la reivindicación 7, caracterizado porque el sujeto tiene osteoartritis.

12. El método tal como se describe en la reivindicación 7, caracterizado porque se trata la pérdida ósea corticales de la mano.

13. El método tal como se describe en la reivindicación 7, caracterizado porque el anticuerpo TNFa humano o una parte de enlace de antígenos del mismo se selecciona del grupo que consiste en a) un anticuerpo humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, que disocia de TNFa humana con una Kd de 1x10"8 M o menos y una constante de rango Kd¡SOc¡ac¡6n de 1x10"3 s"1 o menos, ambas determinadas mediante resonancia de plasmón de superficie y neutraliza la citotoxicidad de TNFa humana en un ensayo L929 in vitro con un IC50 de 1x10"7 M o menos; b) un anticuerpo humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, que tiene las siguientes características: i) se disocia el TNFa humano con una constante de rango Kdisocjacl0n de 1x10 3 s"1 o menos, tal como se determina mediante resonancia de plasmón de superficie; ii) tiene un dominio de CDR3 de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácido de la SEC ID NO: 3, o se modifica a partir de SEC ID NO: 3 mediante una sustitución de alanina simple en la posición 1, 4, 5, 7 ó 8 o mediante una a cinco sustituciones de aminoácido conservadoras en las posiciones 1, 3, 4, 6, 8 y/o 9; iii) tiene un dominio CDR3 de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácido de la SEC ID NO: 4, o se modifica a partir de SEC ID NO: 4 a través de una sustitución de alanina simple en la posición 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 0 11 o mediante de una a cinco sustituciones de aminoácido conservadoras en las posiciones 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 y/o 12, c) un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) que tiene un dominio CDR3 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 3, o se modifica a partir de SEC ID NO: 3 a través de una sustitución de alanina simple en la posición 1, 4, 5, 7 ó 8, y que comprende una región variable de cadena pesada (HCVR) que tiene un dominio CDR3 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 4, o se modifica a partir de SEC ID NO: 4 a través de una sustitución de alanina simple en la posición 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 6 1 ; d) un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígeno del mismo, que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 1 y una región variable de cadena pesada (HCVR) que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 2; e) adalimumab; y f) golimumab.

14. El método tal como se describe en la reivindicación 7, caracterizado porque el sujeto fue seleccionado previamente por tener o estar en riesgo de tener pérdida ósea.

15. Un método para tratar pérdida ósea de la mano en un sujeto, caracterizado porque comprende seleccionar un sujeto quien tiene pérdida ósea de la mano o está en riesgo de tener pérdida ósea de la mano y, porque se administra un anticuerpo TNFa o parte de enlace de antígeno del mismo, al sujeto de modo que se trate la pérdida ósea de la mano.

16. El método tal como se describe en la reivindicación 15, caracterizado porque el sujeto tiene artritis reumatoide.

17. El método tal como se describe en la reivindicación 16, caracterizado porque el tratamiento comprende además administración de metotrexato.

18. El método tal como se describe en la reivindicación 15, caracterizado porque el sujeto tiene osteoporosis.

19. El método tal como se describe en la reivindicación 15, caracterizado porque el sujeto tiene osteoartritis.

20. El método tal como se describe en la reivindicación 15, caracterizado porque se trata la pérdida ósea corticales de la mano.

21. El método tal como se describe en la reivindicación 15, caracterizado porque el anticuerpo TNFa humano o una parte de enlace de antígeno del mismo se selecciona del grupo que consiste en a) un anticuerpo humano, o una parte de enlace de antígenos del mismo, que disocia de TNFa humana con una Kd de 1x10"8 M o menos y una constante de rango KdiS0Ciac¡ón de 1x10"3 s" o menos, ambas determinadas mediante resonancia de plasmón de superficie y neutraliza la citotoxicidad de TNFa humana en un ensayo L929 in vitro con un IC50 de 1x10"7 M o menos; b) un anticuerpo humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, que tiene las siguientes características: i) se disocia el TNFa humano con una constante de rango Kd¡soc¡ación de 1x10 3 s" o menos, tal como se determina mediante resonancia de plasmón de superficie; ii) tiene un dominio de CDR3 de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácido de la SEC ID NO. 3, o se modifica a partir de SEC ID NO: 3 mediante una sustitución de alanina simple en la posición 1, 4, 5, 7 ó 8 o mediante una a cinco sustituciones de aminoácido conservadoras en las posiciones 1, 3, 4, 6, 8 y/o 9; iii) tiene un dominio CDR3 de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácido de la SEC ID NO: 4, o se modifica a partir de SEC ID NO: 4 a través de una sustitución de alanina simple en la posición 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ó 11 o mediante de una a cinco sustituciones de aminoácido conservadoras en las posiciones 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 y/o 12, c) un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígenos del mismo, que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) que tiene un dominio CDR3 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 3, o se modifica a partir de SEC ID NO: 3 a través de una sustitución de alanina simple en la posición 1, 4, 5, 7 ó 8, y que comprende una región variable de cadena pesada (HCVR) que tiene un dominio CDR3 que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 4, o se modifica a partir de SEC ID NO: 4 a través de una sustitución de alanina simple en la posición 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 6 11; d) un anticuerpo TNFa humano, o parte de enlace de antígeno del mismo, que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 1 y una región variable de cadena pesada (HCVR) que comprende la secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 2; e) adalimumab. y f) golimumab.