MX2008012672A

MX2008012672A - Analogos de 2-metilen-1a-hidroxi-18,19,21-trinor vitamina d3 y sus usos.

Info

Publication number: MX2008012672A
Application number: MX2008012672A
Authority: MX
Inventors: Margaret Clagett-Dame; Lori A Plum; Hector F Deluca; Rafal Barycki
Original assignee: Wisconsin Alumni Res Found
Priority date: 2006-04-06
Filing date: 2007-04-06
Publication date: 2008-10-15
Also published as: US8575136B2; WO2008035206A2; CA2645185A1; NZ570712A; WO2008035206A3; JP2009532457A; AU2007298651A1; EP2001841A2; US20070238701A1; EP2001841B1

Abstract

Se proporcionan compuestos de la fórmula I en donde X1 y X2 se eligen independientemente de H o grupos protectores hidroxi. Dichos compuestos se emplean para preparar composiciones farmacéuticas y son útiles para tratar una variedad de condiciones biológicas.

Description

ANÁLOGOS DE 2-METILEN-1a-HIDROXM 8,19,21-TRINOR VITAMINA D3 Y SUS USOS CAMPO DE LA INVENCIÓN Está invención se relaciona a los compuestos de la vitamina D y más particularmente a 2-metilen-1 o-hidroxi-18,19,21-trinor vitamina D3 (SX-99) y a formulaciones farmacéuticas que incluyen este compuesto. La invención también se relaciona al uso de 2-metilen-1ar-hidroxi-18,19,21 -trinor vitamina D3 o sus sales en la preparación de medicamentos para su uso en el tratamiento de varias enfermedades. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La hormona natural, 1a,25-dihidroxi vitamina D3 (también referida como lCT,25-dihidroxicolecalciferol y calcitriol) y su análogo en la serie ergosterol, es decir, 1o,25-dihidroxi vitamina D2, son conocidos por ser reguladores del calcio altamente potentes en la homeostasis en animales y humanos, y también ha sido establecida su actividad en la diferenciación celular, Ostrem et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 84, 2610 (1987). Muchos análogos estructurales de estos metabolitos han sido preparados y probados, que incluyen ?s-hidroxivitamina D3, 1 s-hidroxivitamina D2, varias vitaminas homologadas de cadena lateral y análogos fluorados. Algunos de estos compuestos exhiben una separación interesante de actividades en la diferenciación celular y la regulación del calcio. Esta diferencia en la actividad es útil en el tratamiento de una variedad enfermedades como son establecidas en la técnica, tales como osteodistrofia renal, raquitismo resistente a vitamina-D, osteoporosis, psoriasis, y ciertas enfermedades malignas (ver por ejemplo, Zemplar, Calcipotriol, MC-903, Dovonex, 22- oxa-1o, 25-(OH)2D3). Slatopolsky, E., Finch, J., Ritter, C, Denda, M., Morrissey, J., Brown, A. & DeLuca, H. (1995) Am. J. Kidney Dis. 26, 852-860; Kubodera, N., Sato, K. & Nishii, Y. (1997) in Vitamin D, eds. Feldman, D., Glorieux, F.H. & Pike, J.W. (Academic, New York), Vol. 63, pp. 1071-1086; Calverley, MJ. (1987) Tetrahedron Lett. 43, 4609-4619; Uskokovic, M.R., Studzinski, G.P. & Reddy, S. G. (1997) in Vitamin D, eds. Feldman, D., Glorieux, F.H. & Pike, J.W. (Academic, New York), Vol. 62, pp. 1045-1070; Kensler, T.W., Dolan, P.M., Gange, SJ., Lee, J.-K., Wang, Q. & Posner, G.H. (2000) Carcinogenesis 21 , 1341-1345; Binderup, L, Binderup, E. & Godfredsen, W.O. (1997) ¡n Vitamin D, eds.

Feldman, D., Glorieux, F.H. & Pike, J. W. (Academic, New York), Vol. 61 , pp. 1027-1043; Jones, G. (1997) in Vitamin D, eds. Feldman, D., Glorieux, F.H. & Pike, J.W. (Academic, New York), Vol. 58, pp. 973-994; Brown, AJ. & Slatopolsky, E. (1997) in Vitamin D, eds.

Feldman, D., Glorieux, F.H. & Pike, J.W. (Academic, New York), Vol. 59, pp. 995-1009; Shankar, V.N., Propp, A.E., Schroeder, N.S., Surber, B.W., Makin, H.LJ. & Jones, G. (2001 ) Arch. Biochem. Biophys. 387, 297-306. Todas estas referencias se incorporan aquí por referencia para todos los propósitos. Como se discutió anteriormente, la osteodistrofia renal es una osteopatía que ocurre cuando los ríñones fallan para mantener los niveles apropiados del calcio y fósforo en la sangre. La osteodistrofia renal es un problema común en personas con nefropatía y afecta al 90 por ciento de los pacientes sometidos a diálisis. La osteodistrofia renal es más grave en niños porque sus huesos aún están creciendo. La condición hace más lento el crecimiento de los huesos y causa deformidades. Una de tales deformidades ocurre cuando las piernas se doblan hacia adentro hacia otra y entre sí hacia afuera; esta deformidad es referida como "raquitismo renal". Otra consecuencia importante es la baja estatura. Los síntomas pueden ser vistos en el crecimiento de los niños con afección renal incluso antes se comenzaron la diálisis. Los cambras de los huesos por la osteodistrofia renal pueden comenzar muchos años antes de que aparezcan los síntomas en adultos con nefropatía. Los síntomas de la osteodistrofia renal no son usualmente vistos en adultos hasta que han estado en diálisis por varios años. Los pacientes de mayor edad y las mujeres que han pasado por la menopausia están en un mayor riesgo para esta enfermedad porque son ya vulnerables a la osteoporosis, incluso sin la nefropatía. Si se deja sin tratamiento, los huesos gradualmente llegan a ser más delgados y débiles, y una persona con osteodistrofia renal comienza a experimentar dolor de huesos y articulaciones y un riesgo incrementado de fracturas óseas. En adultos sanos, el tejido óseo está siendo continuamente remodelado y reconstruido. Los ríñones desempeñan una función importante en mantener la masa ósea sana y la estructura, porque equilibran los niveles de calcio y fósforo en la sangre. Si los niveles de calcio en la sangre llegan a ser demasiado bajos, las glándulas paratiroides liberan la hormona paratiroidea (PTH= parathyroid hormone). Esta hormona extrae el calcio de los huesos para elevar los niveles de calcio en la sangre. El exceso de PTH en la sangre causa alteraciones en la homeostasis del calcio y el fósforo. Esto, a su vez, elimina demasiado calcio de los huesos; con el paso del tiempo, la eliminación constante de calcio debilita a los huesos. El hiperparatiroidismo secundario es caracterizado por una elevación de PTH asociada con niveles inadecuados de la hormona de vitamina D activa. Típicamente, la Vitamina D requiere de dos hidroxilaciones secuenciales en el hígado y en el riñon hasta unirse y activar el receptor de la Vitamina D (VDR = Vitamin D receptor). El activador endógeno VDR, calcitriol [1 ,25(OH)2 D3] es una hormona que se une a los VDRs que están presentes en la glándula paratiroides, intestino, riñon, y hueso para mantener la función paratiroidea y la homeostasis del calcio y el fósforo, y los VDRs son encontrados en muchos otros tejidos, que incluyen próstata, endotelio, y células inmunitarias. El fósforo también ayuda a regular los niveles de calcio en los huesos. Los ríñones sanos retiran el exceso de fósforo de la sangre. Cuando los ríñones dejan de funcionar normalmente, los niveles de fósforo en la sangre llegan a ser muy elevados, dando lugar a niveles más bajos de calcio en la sangre y resultando en la pérdida de calcio de los huesos. Los ríñones sanos producen calcitriol para ayudar al cuerpo a absorber el calcio en la dieta en la sangre y los huesos. Si los niveles de calcitriol caen demasiado bajos, los niveles de PTH incrementan, y el calcio es eliminado de los huesos. El calcitriol y la PTH funcionan juntos para mantener el balance normal de calcio y los huesos sanos. En un paciente con insuficiencia renal, los ríñones dejan de hacer calcitriol, el calcio en la dieta no es absorbido y el calcio es eliminado de los huesos. El control de los niveles de PTH impide que el calcio sea retirado de los huesos. Usualmente, las glándulas paratiroideas hiperactivas son controlables con un cambio en la dieta, tratamientos de diálisis, o medicación. El medicamento clorohidrato de cinacalcet (Sensipar), aprobado por la Administración de Drogas y Alimentos (FDA= Food and Drug Administration) en el 2004, reduce los niveles de PTH por la unión al receptor de calcio que controla la liberación de PTH. Si los niveles de PTH no pueden ser controlados, las glándulas paratiroides necesitarían ser eliminadas quirúrgicamente. Otros tratamientos para la condición incluyen la toma de calcitriol sintético como una pildora o en una forma inyectable. La osteodistrofia renal también puede ser tratada con cambios en la dieta. La reducción de la ingesta del fósforo en la dieta es uno de los pasos más importantes en la prevención de enfermedades óseas. A menudo, los medicamentos tales como el carbonato de calcio (Tums), el acetato de calcio (PhosLo), el hidrocloruro de sevelamer (Ranagel), o el carbonato de lantano (Fosrenol) son prescritos con las comidas y los bocadillos para unir fósforo en el intestino, lo que disminuye la absorción del fósforo en la sangre. Otras opciones de tratamiento para la osteodistrofia renal incluyen el Paracalcitol, el ingrediente activo de Zemplar (inyección de paracalcitol USP), que es una vitamina D sintética biológicamente activa análoga del calcitriol con modificaciones de la cadena lateral y el anillo A (19-nor). Los estudios pre clínicos e in vitro han demostrado que las acciones del paricalcitol están mediadas a través de la unión al VDR, lo que resulta en la activación selectiva de las vías de respuesta de la Vitamina D. El calcitriol y el paracalcitol han mostrado reducir los niveles de la hormona paratiroidea por la inhibición de la síntesis y secreción de la PTH.

La estructura de 1 ff,25-dihidroxivitamina D3 y el sistema de numeración utilizada para denotar los átomos de carbono en este compuesto son mostrados a continuación. 1a,25-Dihidroxivitamina D3 = 1a,25-Dihidroxicolecalciferol = Calcitriol. Típicamente, la clase de los análogos de la vitamina D tales como los compuestos 19-nor de la vitamina D está caracterizada por la ausencia del carbono 19 del grupo metileno exocíclico aníllo-A, típico del sistema de la vitamina D. Pruebas biológicas de tales análogos 19-nor (por ejemplo, 1o,25-dihídroxi-l9-nor- vitamina D3) revelaron un perfil de actividad selectiva con potencia elevada en la inducción de la diferenciación celular, y muy baja actividad de la movilización del calcio. Por lo tanto, estos compuestos son potencialmente útiles como agentes terapéuticos para el tratamiento de enfermedades malignas, o para el tratamiento de varios trastornos cutáneos. Dos métodos diferentes de la síntesis de tales análogos 19-nor de vitamina D han sido descritos (Perlman et al., Tetrahedron Lett. 31 , 1823 (1990); Perlman et al., Tetrahedron Lett. 32, 7663 (1991 ), and DeLuca et al., Patente de los E.U.A. No. 5,086,191 ). En las solicitudes de la Patente de los E.U.A. Nos. de Serie 11/669,029 y 1 1/669,053 presentadas el 30 de enero de 2007, (20R, 25S)-2-metilen-19,26-dinor-1a,25-dihidroxivitamina D3 (NEL) y (20S, 25S)-2-metilen- 19,26-dinor-1 ,25-dihidroxivitamina D3 (RAK) han sido descritos y que examinados por DeLuca et al. como medicamentos potenciales para el tratamiento de la osteodistrofia renal. En la Patente de los E.U.A. No. 4,666,634, los análogos 2ß -hidroxi y alcoxi (por ejemplo, ED- 71 ) de 1s,25 -dihidroxi vitamina D3 han sido descritos y examinados por el grupo de Chugai como medicamentos potenciales para la osteoporosis y como agentes anti-tumorales. También ver Okano et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 163, 1444 (1989). Otros análogos de anillo-A 2-sustituidos (con hidroxialquilo, por ejemplo, ED- 120, y grupos fluoralquileno) de 1s,25 -dihidroxi vitamina D3 también han sido preparados y probados (Miyamoto et al., Chem. Pharm. Bull. 41 , 1111 (1993); Nishii et al., Osteoporosis Int. Suppl. 1, 190 (1993); Posner et al., J. Org. Chem. 59, 7855 (1994), y J. Org. Chem. 60, 4617 (1995)). Varios análogos de 1o,25-dihidroxi-19-nor-vitamina D3 2-sustituidos también han sido sintetizados, es decir, compuestos sustituidos en la posición 2 con grupos hidroxi o alcoxi (DeLuca et al., Patente de los E.U.A. No. 5,536,713), con grupos 2-alquilo (DeLuca et al., Patente de los E.U.A. No. 5,945,410), y con grupos 2-alquilideno (DeLuca et al., Patente de los E.U.A. No. 5,843,928), que exhiben un perfil de actividad selectiva e interesante. Todos estos estudios indican que los sitios de unión a los receptores en la vitamina D pueden acomodar diferentes sustituyentes en C-2 en los análogos sintetizados de la vitamina D. En un esfuerzo continuo por explorar la clase 19-nor de los compuestos de la vitamina D importantes farmacológicamente, análogos que están caracterizados por la presencia de un sustituyente metileno en el carbono 2 (C-2), un grupo hidroxilo del carbono 1 (C-1 ), y una cadena lateral corta unida al carbono 20 (C-20) también han sido sintetizados y probados. 1a-hidroxi-2-metilen-19-nor-pregnacalciferol está descrito en la Patente de los E.U.A. No. 6,566,352 mientras que 1o-hidroxi-2-metilen-19-nor-(20S)-homopregnacalciferol esta descrita en la Patente de los E.U.A. No. 6,579,861 y ? s-hidroxi-2-metilen- 19-nor- bishomopregnacalciferol esta descrita en la Patente de los E.U.A. No. 6,627,622. Todos los tres de estos compuestos tienen la actividad de unión relativamente elevada para los receptores de vitamina D y la actividad de diferenciación celular relativamente elevada, pero poca o ninguna actividad calcémica en comparación con 1a,25-dihidroxi vitamina D3. Sus actividades biológicas hacen a estos compuestos candidatos excelentes para una variedad de usos farmacéuticos, como se establecen en las patentes '352, '861 y "622. Otros compuestos 19-nor están expuestos en las Solicitudes de Patente de los E.U.A. Números de Serie 10/996,642 y 10/997,698. Todas estas patentes y solicitudes de la patente se incorporan aquí por referencia para todos los propósitos. Ya que los tratamientos actualmente disponibles, que incluyen compuestos y formulaciones descritas antes tienen varias limitaciones en una mayor o menor medida, nuevos compuestos y formulaciones farmacéuticas son convenientes que continúen para disminuir el efecto calcémico, mientras que retienen la habilidad para suprimir la PTH. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La invención proporciona en general 2-metilen-1a-hidroxi-18,19,21-trinorvitamina D3 (SX-99) y compuestos relacionados, formulaciones farmacéuticas que incluyen SX-99 y el uso de este compuesto en la preparación de medicamentos para su uso en el tratamiento de varios estados de enfermedad. Por lo tanto, en un aspecto, la invención proporciona un compuesto que tiene la fórmula I como se muestra a continuación: en donde Xi y X2 son ¡guales o diferentes y son seleccionados independientemente de grupos protectores H o hidroxi. En algunas modalidades, ?t y X2 son grupos protectores hidroxi tales como grupos silil-éter, grupos alquilil-éter, grupo alcoxialquilo éter, grupos acetal y grupos éster. En algunas de tales modalidades, y X2 son el grupo t-butildimetilsilil éter (TBDMS), grupo trimetilsilil éter (T S), grupo trietilsilil éter (TES), grupo Triisopropilsilil éter (TIPS), grupo t-butildifenilsilil éter (TBDPS), grupo tetrahidropirano (THP), grupo metoxietoximetilo (MEM), grupo metoximetilo (MOM), grupo benzil éter, grupo t-butil éter, grupo N-ftalimido acetal (Nphth), isopropilideno, trimetoxi butano, grupo 2,4-dimetilpentano-3-iloxicarbonilo (Doc). Varios de otros grupos protectores hidroxi son conocidos para aquellos con destreza ordinaria en la técnica, por ejemplo ver Jarowicki et al, J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1 , 1998, 4005-4037, que se incorpora aquí por referencia para todos los propósitos. En otras modalidades, Xi y X2 son H tal que el compuesto es 2-metilen-1a-hidroxi-18,19,21— trinor vitamina D3 (SX-99) que tiene la fórmula II como se muestra a continuación: II Otra modalidad de la presente invención proporciona una composición farmacéutica, que comprende una cantidad efectiva del compuesto de la fórmula I o II y un portador farmacéuticamente aceptable. En esta composición farmacéutica la cantidad efectiva comprende desde aproximadamente 0.01 pg a aproximadamente 1 mg del compuesto por gramo de la composición. Más preferentemente, la cantidad efectiva comprende aproximadamente de 0.1 pg a aproximadamente 500 pg del compuesto por gramo de la composición. En ciertas modalidades, la presente invención proporciona un método de tratamiento a un sujeto que sufre de una condición biológica, que comprende la administración de una cantidad efectiva del compuesto de la fórmula I o II, al sujeto, en donde la condición biológica es seleccionada de enfermedades metabólicas de huesos tales como osteomalacia y raquitismos resistentes a vitamina D; psoriasis; leucemia; cáncer de colón; cáncer de mama; cáncer de próstata; cáncer de piel, cáncer de pulmón; esclerosis múltiple; lupus; diabetes mellitus; reacción de hospedero contra injerto; rechazo de trasplantes de órganos; una enfermedad inflamatoria seleccionada de artritis reumatoide, asma, o enfermedades inflamatorias del intestino seleccionadas de la enfermedad celiaca, colitis ulcerativa y la enfermedad de Crohn; una condición de la piel seleccionada de arrugas, falta de firmeza adecuada de la piel, falta de la hidratación adecuada dérmica, o insuficiencia de la secreción del sebo; osteodistrofia renal; osteopenia; u osteoporosis, particularmente osteoporosis senil, osteoporosis postmenopáusica, osteoporosis inducida por esferoides y osteoporosis de bajo recambio de huesos. En una modalidad ejemplar, la condición biológica es osteodistrofia renal, raquitismo resistente a vitamina D, osteoporosis o artritis psoriásica. En otra modalidad ejemplar, la condición biológica es seleccionada de leucemia, cáncer de colón, cáncer de mama, cáncer de piel, cáncer de pulmón o cáncer de próstata. Aún en otra modalidad preferida, la condición biológica seleccionada de esclerosis múltiple, lupus, diabetes mellitus, |a reacción del hospedero versus injerto, o rechazo de trasplantes de órganos. Todavía en otra modalidad ejemplar, la condición biológica es seleccionada de artritis reumatoide, asma, o enfermedades inflamatorias del intestino seleccionadas de la enfermedad celiaca, colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn. Aún en otra modalidad preferida, la condición biológica es seleccionada de arrugas, falta de la firmeza adecuada de la piel, falta de hidratación adecuada dérmica, o insuficiente secreción del sebo. Preferentemente también, en esta modalidad, la cantidad efectiva del compuesto es administrada al sujeto por vía oral, parenteral, a través de la piel, nasal, rectal, sublingual, o tópica. Aún más preferentemente, la cantidad efectiva del compuesto es administrada por vía intraperitoneal. En esta modalidad, el compuesto es administrado en una dosis desde 0.01 pg por día a 1 mg por día.

Otro aspecto de la invención proporciona el uso del compuesto de la fórmula I en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una condición biológica seleccionada de enfermedades metabólicas de huesos tales como osteomalacia y raquitismos resistentes a vitamina D; psoriasis; leucemia; cáncer de colon; cáncer de mama; cáncer de próstata; cáncer de piel; cáncer de pulmón; esclerosis múltiple; lupus; diabetes mellitus; reacción del hospedero versus injerto; rechazo del trasplante de órganos; una enfermedad inflamatoria seleccionada de artritis reumatoide, asma, o enfermedades inflamatorias del intestino seleccionadas de la enfermedad celiaca, colitis ulcerosa y la enfermedad de Crohn; una condición de la piel seleccionada de las arrugas, la falta de la firmeza adecuada de la piel, la falta de la hidratación adecuada dérmica, o insuficiencia de la secreción del sebo; osteodistrofia renal; osteopenia; u osteoporosis, particularmente osteoporosis senil, osteoporosis postmenopáusica, osteoporosis inducida por esferoides y osteoporosis de bajo recambio de huesos. Aún otra modalidad preferida de la presente invención proporciona el compuesto que tiene la fórmula II La invención también enseña una composición farmacéutica que tiene una cantidad efectiva del compuesto de la fórmula II y un portador farmacéuticamente aceptable. Otro aspecto de la invención proporciona el uso del compuesto de la fórmula II en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una condición biológica seleccionada de enfermedades metabólicas de huesos tales como osteomalacia y raquitismos resistentes a vitamina D; psoriasis; leucemia; cáncer de colon; cáncer de mama; cáncer de próstata; cáncer de piel; cáncer de pulmón; esclerosis múltiple; lupus; diabetes mellitus; reacción de hospedero versus injerto; rechazo de trasplantes de órganos; una enfermedad inflamatoria seleccionada de artritis reumatoide, asma, o enfermedades inflamatorias del intestino seleccionadas de la enfermedad celiaca, colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn; una condición de la piel seleccionada de arrugas, falta de firmeza adecuada de la piel, falta de hidratación adecuada dérmica, o insuficiente secreción de sebo; osteodistrofia renal; osteopenia; u osteoporosis, particularmente osteoporosis senil, osteoporosis postmenopáusica, osteoporosis inducida por esteroides y osteoporosis de bajo recambio de huesos. Adicionales objetos, características y ventajas de la invención serán aparentes de la siguiente descripción detallada, dibujos y reivindicaciones adjuntas. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Las Figuras 1-5 ilustran varias actividades biológicas de 2-metilen-1<7-hidroxi-18, 9,21— trinor vitamina D3 (referida como "SX-99" en las Figuras) comparada con aquellas de la hormona nativa 1 s, 25-dihidroxivitamina D3 (referido como "1, 25(OH)2D3" en las Figuras). La Figura 1 es un gráfico que compara la actividad relativa de SX-99 y 1 ,25(OH)2 D3 para competir por la unión con [3H]-1 ,25-(OH)2-D3 para el receptor de la vitamina D de extensión completa recombinante de rata. La Figura 2 es una gráfica de barras que comparar la actividad de movilización del calcio de los huesos de SX-99 con la 1 ,25(OH)2D3. La Figura 3 es una gráfica de barras que compara la actividad transporte del calcio intestinal de SX-99 con la de 1 ,25(OH)2D3. La Figura 4 es una gráfica que compara el por ciento de diferenciación celular HL-60 como una función de la concentración de SX-99 con la de 1 ,25(OH)2D3. La Figura 5 es un gráfico que compara la actividad de transcripción in vitro de SX-99 con la de 1 ,25(OH)2D3. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Generalmente, la invención proporciona un compuesto que tiene la fórmula I como se muestra a continuación: en donde Xi y X2 son los mismos o diferentes grupos y son seleccionados independientemente de los gaipos protectores H o hidroxi. En algunas modalidades, Xi y X2 son grupos protectores hidroxi tales como grupos silil-éter, grupos alquilo éter, grupo alcoxialquil éter, grupos acetal y grupos éster. En algunas de tales modalidades, Xi, X2 y X3 son los grupos t-butildimetilsilil éter (TBDMS), grupo trimetilsilil éter (TMS), grupo trietilsilil éter (TES), grupo Triisopropilsilil éter (TIPS), t- butildifenilsilil éter (TBDPS), grupo tetrahidropirano (THP), grupo metoxietoximetilo (MEM), grupo metoximetilo ( OM), benzil éter, t-butil éter, grupo N-ftalimido acetal (Nphth), isopropilideno, trimetoxi butano, grupo 2,4-dimetilpentano-3-iloxicarbonilo (Doc). Como se discutió anteriormente, varios otros grupos hidroxi protectores son conocidos por aquellos con destreza ordinaria en la técnica, por ejemplo ver Jarowicki et al, J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1 , 1998, 4005-4037, que se incorpora aquí por referencia para todos los propósitos. También como aquí se utiliza, el término "grupo protector hidroxi" significa cualquier grupo comúnmente utilizado para la protección temporal del grupo funcional hidroxi (-OH), tal como, pero no esta limitado a, los grupos alcoxicarbonilo, acilo, alquilsililo o alquilarilsilil (de aquí en adelante referido simplemente como grupos "sililo"), y grupos alcoxi-alquilo. Los grupos protectores alcoxicarbonilo son los grupos alquil-O-CO-tal como metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo, butoxicarbonilo, isobutoxicarbonilo, tert-butoxicarbonilo, benziloxicarbonilo o aliloxicarbonilo. El término "acilo" significa un grupo alcanoilo de 1 a 6 carbonos, en todas sus formas isoméricas, o un grupo carboxialcanoilo de 1 a 6 carbonos, tal como un grupo oxalilo, malonilo, succinilo, glutarilo, o un grupo acilo aromático tal como un grupo benzoilo, o un grupo benzoilo halo, nitro o alquilo-sustituido. Los grupos protectores alcoxialquilo son agrupaciones tales como metoximetilo, etoximetilo, metoxietoximetilo, o tetrahidrofuranilo y tetrahidropiranilo. Grupos protectores sililo preferidos son trimetilsililo, trietilsililo, t-butildimetilsililo, dibutilmetilsililo, difenilmetilsililo, fenildimetilsililo, difenil-t- butilsililo y radicales análogos sililo alquilados. El término "arilo" especifica un grupo fenilo-, o un alquilo-, nitro- o halo- sustituido. Una lista extensa de los grupos protectores para la funcionalidad hidroxi es encontrada en Protective Groups in Organic Synthesis, Greene, T. W.; Wuts, P. G. M., John Wiley & Sons, New York, NY, (3a Ed, 1999) que puede ser agregada o removida utilizando los procedimientos que se establecen en ella y que aquí se incorporan por referencia en su totalidad y para todos los propósitos como se establece aquí completamente. Un grupo "hidroxi protegido" es un grupo hidroxi derivatizado o protegido por cualquiera de los grupos anteriores comúnmente utilizados para la protección temporal o permanente de los grupos funcionales hidroxi, por ejemplo, el grupo sililo, alcoxialquilo, acilo o alcoxicarbonilo, como son descritos previamente. En otras modalidades, Xi y X2 son H tal que el compuesto es 2-metilen-1 a-hidrox¡-18,19,21-trinor vitamina D3 (SX-99) que tiene la fórmula II como se muestra a continuación: El compuesto de la fórmula II (SX-99) exhibe un patrón deseado y altamente ventajoso de actividad biológica. Este compuesto es caracterizado por una unión relativamente elevada a los receptores de vitamina D, y significante actividad de transporte de calcio intestinal en comparación con la de 1o,25-dihidroxivitamina D3, y tiene buena capacidad para movilizar el calcio de los huesos, en comparación con 1 ,25-dihidroxivitamina D3. Por lo tanto, este compuesto puede caracterizarse por tener significante actividad calcémica. Por lo tanto, es útil como una terapia para el tratamiento de enfermedades metabólicas de huesos. El compuesto de la invención es también adecuado especialmente para el tratamiento y la profilaxis de desordenes humanos que son caracterizados por un desequilibrio en el sistema inmunológico, por ejemplo en las enfermedades autoinmunes, que incluyen a la esclerosis múltiple, lupus, diabetes mellitus, reacción del hospedero versus injerto, y al rechazo de los trasplantes de órganos; y, además, para el tratamiento de las enfermedades inflamatorias, tales como artritis reumatoide, asma, y enfermedades inflamatorias del intestino tales como la enfermedad celiaca, colitis ulcerosa y la enfermedad de Crohn. Acné, alopecia e hipertensión son otras condiciones que son tratadas con el compuesto la invención. El compuesto anterior también se caracteriza por la actividad de diferenciación celular relativamente elevada. Por lo tanto, este compuesto también proporciona un agente terapéutico para el tratamiento de psoriasis, o como un agente anti-cáncer, especialmente en contra de la leucemia, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de piel, cáncer de pulmón y cáncer de próstata. Además, debido a su actividad de diferenciación celular relativamente elevada, éste compuesto proporciona un agente terapéutico para el tratamiento de varias condiciones de la piel que incluyen las arrugas, la falta de la hidratación adecuada dérmica, es decir, piel seca, la falta de la firmeza adecuada en la piel, es decir, piel holgada, y la insuficiencia de la secreción del sebo. El uso de este compuesto, por lo tanto, no solamente resulta en la humectación de la piel sino también mejora la función barrera de la piel. Los compuestos de la invención son utilizados para preparar formulaciones farmacéuticas o medicamentos que incluyen un compuesto de la invención en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. Tales formulaciones farmacéuticas y medicamentos son utilizados para tratar varios trastornos biológicos tales como los que son descritos aquí. Los métodos para el tratamiento de tales trastornos típicamente incluyen la administración, de una cantidad efectiva del compuesto en una cantidad apropiada de una formulación farmacéutica o un medicamento que incluye el compuesto, a un sujeto que sufre del trastorno biológico. En algunas modalidades, el sujeto es un mamífero. En algunas de tales modalidades, el mamífero seleccionado de un corredor, un primate, un bovino, un equino, un canino, un felino, un ursino, un porcino, un conejo o un conejillo de Indias. En algunas de tales modalidades, el mamífero es una rata o es un ratón. En algunas modalidades, el sujeto es un primate tal como, en algunas modalidades, un humano. El compuesto está presente en una composición para tratar las enfermedades antes mencionadas y los trastornos están en una cantidad de aproximadamente 0.01 pg/gm a aproximadamente 1 mg/gm de la composición, preferentemente de aproximadamente de 0.1 pg/gm a aproximadamente 500 pg/gm de la composición, y es administrada por vía tópica, a través de la piel, por la vía oral, o parenteral en dosis de aproximadamente 0.01 pg/día a aproximadamente 1 mg/día, preferentemente de aproximadamente 0.1 pg/día a aproximadamente 500 pg/día. En una modalidad, la invención proporciona compuestos II como se muestra a continuación: !l En una modalidad preferida, 2-metilen-1 ff-hidroxi-18,19,21-trinor vitamina D3 (SX-99) fue sintetizada y probada, y es útil en el tratamiento de una variedad de condiciones biológicas como aquí se describe. La preparación de 2-metilen-1 a-hidroxi-18,19,21-trinor vitamina D3 (SX-99) puede lograrse al condensar una cetona tipo Windaus-Grundmann bicíclica apropiada (III) con fosfina óxido alílico IV seguido por desprotección (separación de los grupos Yi y Y2). Otros compuestos de la presente invención se sintetizan de manera similar.

IV En óxido de fosfina IV, e Y2 de preferencia son grupos protectores hidroxi tales como grupos protectores sililo. En una modalidad preferida, el grupo trietilsililo (TES) y el grupo t-butildimetilsililo (TBDMS), son ejemplos de grupos hidroxi protectores particularmente útiles. El proceso descrito anteriormente representa una aplicación del concepto de síntesis convergente, que se ha aplicado efectivamente para la preparación de diversos compuestos de vitamina D (ver Lythgoe et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 590 (1978); Lythgoe, Chem. Soc. Rev. 9, 449 (1983); Toh et al., J. Org. Chem. 48, 1414 (1983); Baggiolini et al., J. Org. Chem. 51 , 3098 (1986); Sardina et al., J. Org. Chem. 51 , 1264 (1986); J. Org. Chem. 51 , 1269 (1986); DeLuca et al., patente de los E.U.A. No. 5,086,191 ; DeLuca et al., patente de los E.U.A. No. 5,536,713; y DeLuca et al., patente de los E.U.A. No. 5,843,928, todas las cuales aquí se incorporan por referencia en su totalidad y para todos los propósitos como si se establecieran aquí). Fosfina óxido IV es un reactivo conveniente que puede utilizarse para preparar una gran cantidad de compuestos 19-nor vitamina D y se prepara de acuerdo con tos procedimientos descritos por Sicinski et al., J. Med. Chem., 41 , 4662 (1998), DeLuca et al, patente de los E.U.A. No. 5,843,928; Perlman et al., Tetrahedron Lett. 32, 7663 (1991 ); y DeLuca et al., patente de los E.U.A. No. 5,086,191. El Esquema I muestra el procedimiento general para sintetizar fosfina óxido IV como se establece en la patente de los E.U.A. No. 5,843,928, que aquí se incorpora por referencia en su totalidad como si se estableciera por completo. Modificación del método mostrado en el Esquema I se utiliza para producir una gran cantidad de análogos de vitamina D, como será aparente 5 para aquellos con destreza en la especialidad. Por ejemplo, una amplia variedad de compuestos de fosfonio se utiliza en lugar de MePh3P+Br~ utilizado para convertir la cetona B en alqueno C. Ejemplos de estos compuestos incluyen EtPh3P+Br~, PrPh3P+Br~, y compuestos generalmente preparados por la reacción de trifenilfosfina con un alquil haluro, un alquenil haluro, un hidroxialquil haluro protegido y un hidroxi alquenil haluro í o protegido. Alquenos preparados utilizando este procedimiento pueden entonces transportarse para preparar un fosfina óxido en una forma análoga a la utilizada para preparar fosfina óxido H en el Esquema I. En forma alterna, un alqueno análogo al compuesto C del Esquema I se reduce con (Ph3P)3RhCI y H2 para proporcionar otros análogos de vitamina D. Ver, la patente de los E.U.A. No. 5,945,410 y Sicinski, R. R. et 15 al., J. Med. Chem., 41 , 4662-4674 (1998) ambas de las cuales aquí se incorporan por referencia en su totalidad y para todos los propósitos. Por lo tanto, el procedimiento para formar la fosfina óxido mostrado en el Esquema I se utiliza para preparar una amplia variedad de análogos de vitamina D además del compuesto de la presente invención. 20 25 Esquema I Hidraindanonas de la estructura III pueden prepararse por métodos conocidos o métodos adaptados como será fácilmente aparente para una persona con destreza en la técnica y descritos aquí. Ejemplos específicos de algunas cetonas bicíclicas importantes utilizadas para sintetizar vitamina D y análogos son los descritos por Mincione et al., Synth. Commun 19, 723, (1989); y Peterson et al., J. Org. Chem. 51 , 1948, (1986). En una modalidad preferida, la cetona III (19) y el compuesto de la Fórmula II (SX-99) (22) se prepararon por los siguientes Esquemas II y III, como se muestra a continuación: Esquema II Esquema III (I) O,, MeOH, pi ; NaBH«, 76%. (I¡) Ac,0, Et3N. DMAP, CH2CI2, 97%. (iíi) TESOTf, 2,6- lutitfina, CH2CI2. (iv) MeONa/MeOH, 97% de 2. (v) S03/ p¡ , DMSO, Et5N, CH2CI2, 78%. (vi) 02, /-BuOK, f-BuOH, 67%. (vií) m-CPBA, ciclohexano , 58%. (viü) MeONa/MeOH, MeOH, 90%. (ix) PDC, PPTS, CH2CI2, 85%. (x) 10, f-BuOK. THF, 63%. (xi) 5% Pd/C. EtOAc, 93%. (xii) CSA, r>-BuOH, 98%. (xiii) /-BuONO, CHCI3. (xiv) hv, CeHe, i-PrOH, 40% de , 13. (XV) Ac20, 92%. (xvi) MeONa, MeOH, 89%. (xvii) K, HMPA, f-BuOH, Et2O,80%. (xviii) PDC, PPTS, CH2CI2. 86%. (xix) 20, PhLi, THF, 40%. (xx) CSA, n-BuOH, 62%.

Un proceso total para sintetizar compuestos 2-alquiliden-19-nor-vitamina D se ilustra y describe en la patente de los E.U.A. No. 5,843,928, patente de los E.U.A. No. 6,627,622, patente de los E.U.A. No. 6,579,861 , patente de los E.U.A. No. 5,086,191 , patente de los E.U.A. No. 5,585,369, y patente de los E.U.A. No. 6,537,981 , que aquí se incorporan por referencia en su totalidad y para todos los propósitos como si se establecieran completas aquí. Compuestos de la fórmula I y fórmula II, pueden prepararse utilizando los métodos mostrados en los esquemas I, II y III. Para el compuesto de la fórmula II, el material de partida, compuesto 10, se prepara utilizando procedimientos conocidos como se ¡lustra a continuación en el esquema IV. Ver también, Andrzej R. Daniewski y Wen Liu, J. Org. Chem. 66, 626- 628 (2001 ), que aquí se incorporan por referencia en su totalidad y para todos los propósitos como si se establecieran completas aquí. Esquema IV: (i) TsCI, Et3N, DMAP, CH2CI2. 96%. (íi) UBr, D F, 55%. (iii) Ph3P. PhMe. 81%.

Los siguientes ejemplos ilustran síntesis y actividad biológica de los compuestos selectos que se proporcionan en la presente invención. Estos ejemplos son para propósitos ilustrativos solamente y no habrán de considerarse que limitan el alcance de la invención. Ejemplo I: SÍNTESIS DE SX-99 Des-A,B-23,24-dinorcolan-8/?,22-diol (1 ). Una solución de vitamina D2 (5 g; 12.7 mmoles) en metano! (400 mL) y piridina (5 mL) se enfría a -78 °C mientras que se purga con argón. La corriente de argón se detiene y la corriente de ozono se pasa hasta que aparece color azul. La solución se purga con oxígeno hasta que el color azul desaparece y trata con NaBH4 (1 .2 g; 32 mmoles). Después de 20 min., la segunda porción de NaBH4 (1 .2 g; 32 mmol) se agrega y la reacción se deja que caliente a temperatura ambiente. La tercer porción de NaBH4 (1 .2 g; 32 mmol) se agrega y la mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se neutraliza con 70 mL de agua y concentra al vacío. El residuo se extrae con cloruro de metileno (3 x 100 mL). La fase orgánica se lava con solución acuosa 1 M de HCI (2 x 100 mL), solución acuosa saturada de NaHC03 (100 mL), seca sobre MgS04 anhidro y concentra al vacío. El residuo se purifica por cromatografía instantánea (25% etil acetato/hexano) para dar como resultado 2.05 g (9.69 mmoles; 76% de rendimiento) de diol 1 como cristales blancos. [a]D - + 56.0 (c 0.95, CHCI3); p.f. 1 10 -1 1 1°C; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 6 0.96 (3H, s), 1 .03 (3H, d, J = 6.6 Hz), 3.38 (1 H, dd, J = 10.5 Hz, J = 6.8 Hz), 3.64 (1 H, dd, J = 10.5 Hz, J = 3.2 Hz), 4.09 (1 H, d, J = 2.3 Hz); 13C RMN (100 MHz, CDCI3) d 13.6, 16.6, 17.4, 22.6, 26.6, 33.5, 38.2, 40.2, 41.3, 52.3, 52.9, 67.8, 69.2; MS (El) m/z 212 (M+, 2), 194 ( 17), 179 (18), 163 ( 10), 135 ( 19), 125 (34), 1 1 1 ( 100); masa exacta calculada para C13H220 ([M - H2Of) 194.1671, encontrado 194.1665. Des-A,B-22-(acetoxi)-23,24-dinorcolan-8S-ol (2).

A una solución agitada de 1 (3.50 g, 16.5 mmoles) y DMAP ( 100 mg) en trietilamina (3.00 mL, 1.67 g, 21 .6 mmoles) y cloruro de metileno (300 mL), se agrega anhídrido acético (1 .54 mL, 2.18 g, 16.5 mmoles) por gotas a 0°C. La mezcla de reacción se mantiene a 4°C durante la noche. Se retiran solventes bajo presión reducida y el residuo se redisuelve en cloruro de metileno a (200 mL), lava con solución acuosa al 10% de HCI (50 mL), solución acuosa saturada de NaHC03 (50 mL) y agua (50 mL). La fase orgánica se seca sobre Na2S04 anhidro y concentra bajo presión reducida para dar 4.06 g (16.0 mmoles; 97% rendimiento) de 2 como cristales blancos. [o]D = +33.7 (c 0.90), CHCI3); p.f. 78 - 80°C; 1H RMN (500 MHz, CDCI3) ó 0.96 (3H, s), 1 .00 (3H, d, J = 6.6 Hz), 2.05 (3H, s), 3.77 ( IH, dd, J - 10.6 Hz, J = 7.7 Hz), 4.06 (1 H, dd, J = 10.6 Hz, J = 3.3 Hz), 4.11 (1 H, br s); 13C RMN (100 MHz, CDCI3) ó 13.5, 17.0, 17.4, 21 .0, 22.5, 26.6, 33.5, 35.3, 40.2, 41 .9, 52.3, 53.2, 69.1 , 69.4, 171 .4; MS (El) m/z 254 (M+, 2), 236 (5), 205 (2), 194 (12), 176 (22), 161 (14), 135 (16), 125 (34), 1 11 ( 100); masa exacta (ESI) calculada para C15H2303Na ([M + Na]+) 277.1780, encontrada 277.1791 . Des-A, B-22-(acetoxi)-8ff-[(trietilsilil)oxi]-23,24-dinorcolano (3). A una solución agitada de 2 (4.00 g, 16.6 mmol) en cloruro de metileno (40 mL) y 2,6-lutidina (2.67 mL, 2.46 g, 23.0 mmol) se agrega trietilsilil trifluorometansulfonato (4.52 mL, 5.28 g, 20.0 mmol) por gotas bajo argón a -50 °C. Después de 30 min., cloruro de metileno húmedo (5 mL) y agua (80 mL) se agregan. La mezcla de reacción se extrae con cloruro de metileno (3 x 120 mL) y la fase orgánica se lava con solución acuosa saturada de CuS04 (50 mL), seca sobre Na2S04 anhidro y concentra bajo presión reducida para dar el crudo 3 como aceite. [a]0 = +42.2 (c 1.25, CHCI3); 1H RMN (500 MHz, CDCI3) d 0.55 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.93 (3H, s), 0.95 (9H, t, J = 8.0 Hz), 0.98 (3H, d, J = 6.6 Hz), 2.05 (3H, s), 3.77 (1 H, dd, J = 10.6 Hz, J = 7.5 Hz), 4.04-4.07 (2H, m); 13C RMN (125 MHz, CDCI3) d 4.9, 6.9, 13.5, 17.1 , 17.6, 21.0, 23.0, 26.8, 34.6, 35.4, 40.6, 42.2, 52.8, 53.4, 69.2, 69.6, 171 .4; MS (El) m/z 368 (M+, 4), 339 (30), 325 (15), 177 (89), 145 (100); masa exacta calculada para C2iH o03S¡ 368.2747, encontrada 368.2748. Des-A, B-8/?-[(thetilsil¡l)ox¡]-23,24-d¡norcolano-22-ol (4). A una solución agitada del crudo 3 en metanol (100 mL), solución al 10% de metanolato de sodio en metanol (20 mL) se agrega por gotas. Después de 2 horas, se agregan solución acuosa saturada de NH4CI (20 mL) y agua (60 mL) y la mezcla se extrae con CH2CI2 (5 x 100 mL). La fase orgánica se seca sobre Na2S04 anhidro, concentra bajo presión reducida y el residuo se purifica en columna de gel de sílice (10 - 20% etil acetato/hexano) para dar 5.25 g (16.1 mmoles; 97% rendimiento de 2) de 4. [a]0 = +40.3 (c 1 .00, CHCI3); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) S 0.55 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.93-0.97 (12H, m), 1.02 (3H, d, J = 6.6 Hz), 3.37 (1 H, dd, J = 10.4 Hz, J = 6.8 Hz), 3.63 (1 H, dd, J = 10 Hz, J = 3.0 Hz), 4.04 (1 H, d, J = 1.8 Hz); 3C RMN (100 MHz, CDCI3) 6 4.9, 6.9, 13.6, 16.6, 17.6, 23.0, 26.8, 34.6, 38.3, 40.6, 42.1 , 52.8, 53.1 , 68.0, 69.3; MS (El) m/z 326 (M\ 10), 31 1 (2), 297 (93), 283 (36), 225 (16), 193 (21 ), 177 (100); masa exacta calculada para C19H3802Si 326.2641 , encontrada 326.2639. Des-A,B-8S-[(trietilsilil)oxi]-23,24-dinorcolan-22-al (5). Complejo trióxido de azufre-piridina (7.42 g, 46.5 mmol) se agrega a la solución agitada de 4 (2.32 g, 7.02 mmol) en trietilamina (5.46 mL, 3.94 g, 39.0 mmoles), DMSO anhidro (8.0 mL) y CH2CI2 anhidro (40 mL) a 0°C bajo argón. Después de 20 min., se agrega cloruro de metileno (150 mL) y la mezcla de reacción se lava con solución acuosa saturada de CuS04 (40 mL) y agua (40 mL). La fase orgánica se seca sobre Na2S04 anhidro, concentra bajo presión reducida y el residuo se purifica en gel de sílice (0.5 - 2% etil acetato/hexano) para dar 1.80 mg (5.56 mmoles; 78% rendimiento) de 5. [a]D = +42.6 (c 1.15, CHCI3); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 6 0.57 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.94-0.98 (12H, m), 1.10 (3H, d, J = 6.8 Hz), 2.35 (1 H, m), 4.07 (1 H, d, J = 2.5 Hz), 9.58 (1 H, d, J = 3.2 Hz); 13C RMN ( 100 MHz, CDCI3) d 5.0, 6.9, 13.4, 13.9, 17.6, 23.3, 26.2, 34.6, 40.6, 42.7, 49.1 , 51 .8, 52.5, 53.2, 69.1 , 205.3; MS (El) m/z 324 (M+, 4), 31 1 (12), 295 (100); masa exacta calculada para C17H3i02Si ([M - C2H5J+) 295.2093, encontrada 295.2086. Des-A,B-8 ?-[(trietilsilil)oxi]-pregnan-20-ona (6). A través de una solución de ter-butanolato de potasio (3.7 g; 33 mmoles) en ter-butanol (90 ml_), se pasa oxígeno por 15 min. Después una solución de 5 en ter-butanol (45 ml_) se agrega por gotas que se purgan con oxígeno. Solución acuosa saturada de NH4CI (80 ml_) y agua (50 ml_) se agrega en los productos de reacción se extraen con Et20 (5 x 1 50 mL). La fase orgánica se seca sobre MgS0 , anhidro, concentra bajo presión reducida y el residuo se purifica por cromatografía en columna (3 - 6% etil acetato/hexano) para dar 1 .14 g (3.68 mmol; 67% rendimiento) de 6. [a]D = +107.1 (c 0.80, CHCI3); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 6 0.55 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.85 (3H, s), 0.94 (9H, t, J = 7.9 Hz), 2.09 (3H, s), 2.47 (1 H, t, J = 9.0 Hz), 4.07 (1 H, d , J - 2.3 Hz); 3C RMN (100 MHz, CDCI3) ¿ 4.9, 6.9, 15.3, 17.6, 21 .8, 23.1 , 31 .5, 34.4, 39.9, 43.7, 53.3, 64.5, 68.9, 209.5; MS (El) m/z 310 (M+, 50), 281 (84), 21 1 (73), 173 (94), 87 (100); masa exacta calculada para C18H3402S¡ 310.2328, encontrada 310.2332. Des-A, B-8/?-[(trietilsil¡l)oxi]-testosterona acetato (7). A una solución agitada de 6 en ciclohexano (50 mL) se agrega ácido meta-cloroperbenzóico (77% max.; 1 .5 g) a 0°C. Después, la mezcla de reacción se calienta a temperatura ambiente y agita por 5 días. Las siguientes porciones de ácido meta-cloroperbenzóico (1.0 g, 0.8 g y 0.6 g) se agregan después de 1 día, 2 días y 4 días, respectivamente. La suspensión se separa por filtración y el filtrado se lava con solución acuosa saturada de NaHC03 (20 mL). La fase orgánica se seca sobre MgS04 anhidro, concentra bajo presión reducida y el residuo se purifica por cromatografía en columna (1 -3% etil acetato/hexano) para dar 0.89 g (2.73 mmoles; 58% rendimiento) de 7. [a]D - + 18.7 (c 0.9, CHCI3); H RMN (400 MHz, CDCI3) 6 0.56 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.95 (9H, t, J = 7.9 Hz), 1.1 1 (3H, s), 2.03 (3H, s), 4.05 (1 H, d, J = 2.0 Hz); 3C RMN (100 MHz, CDCI3) 6 4.9, 6.9, 13.6, 17.2, 21 .2, 22.2, 26.7, 34.5, 37.8, 42.0, 47.8, 69.0, 82.9, 171 .3; MS (El) m/z 326 (M+, 3), 297 (18), 283 (8), 145 (70), 135 (100); masa exacta calculada para C18H3403Si 326.2277, encontrada 326.2269. Des-A, B-8 ?-[(triet¡ls¡lil)oxi]-testosterona (8). 7 (972 mg; 2.98 mmoles) se disuelve en metanol (25 ml_) y trata con solución al 10% de metóxido de sodio en metanol (5 ml_) por 2.5 h. Solución acuosa saturada de NH4CI (10 ml_) y agua (15 ml_) se agregan y el producto se extrae con dicloruro de metileno (5 x 75 ml_). La fase orgánica se seca sobre MgS04 anhidro, concentra bajo presión reducida y el residuo se purifica por cromatografía en columna (5 - 15% etil acetato/hexano) para dar 764 mg (2.69 mmoles; 90% rendimiento) de 8. [a]D = +39.6 (c 0.95, CHCI3); p.f. 95 °C; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 0.56 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.95 (9H, t, J = 7.9 Hz), 0.96 (3H, s), 3.56 (1 H, m), 4.02 (1 H, d, J - 2.4 Hz); 13C RMN (100 MHz, CDCI3) 6 5.0, 6.9, 12.4, 17.3, 22.2, 29.9, 34.6, 37.5, 42.2, 48.1 , 69.1 , 82.2; MS (El) m/z 284 (M+, 9), 255 (100), 237 (40), 135 (42), 103 (66); masa exacta calculada para C14H27O2S1 ([M - C2H5]+) 255.1780, encontrada 255.1770. Des-A,B-8/?-[(trietilsilil)oxi]-androstan-17-ona (9). A una solución agitada de 8 (760 mg; 2.68 mmoles) y PPTS (30 mg; 0.12 mmol) en dicloruro de metileno (90 ml_) PDC (2.25 g; 5.98 mmoles) se agrega a 0 °C. El baño de enfriamiento se retira y la mezcla de reacción se agita por 9 h. Después el solvente se retira bajo presión reducida y el residuo se purifica por cromatografía en columna (5 - 10% etil acetato/hexano) para dar 642 mg (2.28 mmoles; 85% rendimiento) de 9. [a]D = +82.9 (c 0.90, CHCI3); 1H RMN (500 MHz, CDCI3) d 0.60 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.97 (9H, t, J = 7.9 Hz), 1.1 1 (3H, s), 2.43-2.47 (1 H, m), 4.19 (1 H, m); 13C RMN (125 MHz, CDCI3) d 4.9, 6.9, 16.3, 17.0, 21 .3, 32.3, 34.5, 35.3, 47.5, 48.8, 69.9, 221 .2; MS (El) m/z 282 (M+, 10), 252 (100), 133 (17), 103 (39); masa exacta calculada para C16H3o02Si 282.2015, encontrada 282.2013. (17Z)-Des- A,B-8/S-[(trietilsilil)oxi]-21 -norcolest-17-eno (1 1 ). A una suspensión agitada de 10 (4.10 g; 9.35 mmol) en THF (13.5 mL) solución 1 M de ter-butóxido de potasio en THF (8.90 mL; 8.90 mmoles) se agrega por gotas a -10 °C. La suspensión se agita y calienta a 0°C durante 30 min. Después una solución de 9 (716 mg; 2.53 mmoles) en THF (3.0 mL) se agrega por cánula y la mezcla resultante se agita a 45°C por 4 días. Después, solución acuosa saturada de NH4CI (20 mL) y agua (30 mL) se agregan y la mezcla se extrae con dietil éter (3 x 100 mL). La fase orgánica se seca sobre MgS04 anhidro, concentra bajo presión reducida y el residuo se purifica por cromatografía en columna (hexano - 5% etil acetato/hexano) para dar 572 mg (1 .60 mmoles; 63% rendimiento) de 1 1 (Proporción Z/E 5 : 1 ). [a]D = +4.1 (c 0.95, CHCI3); 1H RMN (600 MHz, CDCI3) ó 0.56 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.86 (6H, d, J = 6.7 Hz), 0.95 (9H, t, J = 7.9 Hz), 1 .10 (3H, s), 4.1 1 (1 H, s), 4.94 (0.83H, t, J = 7.3 Hz), 5.36 (0.17H, t, J = 4.7 Hz); 13C RMN (100 MHz, CDCI3) 6 5.0, 7.0, 18.0, 19.9, 22.6, 22.7, 23.8, 27.5, 27.6, 27.7, 28.0, 28.7, 30.6, 34.6, 38.3, 38.7, 38.9, 44.2, 52.8, 69.7, 1 19.3, 130.0, 149.9; MS (El) m/z 364 (M+, 6), 335, (23), 321 (10), 279 (37), 232 (54), 205 (43), 171 (51 ), 147 (100); masa exacta calculada para C23H44OSi 364.3161 , encontrada 364.3175. Des-A, B-8£-[(trietilsilil)ox¡]-21 -norcolestano (12). Una mezcla agitada de 1 1 (552 mg; 1 .52 mmoles) y Pd/C al 5% (160 mg) en etil acetato (20 mL) se trata con hidrógeno durante la noche. Después el catalizador se separa por filtración y el filtrado se concentra bajo presión reducida. El residuo se purifica en cartuchos Sep-Pack de gel de sílice (hexano) para dar 515 mg (1 .41 mmoles; 93% rendimiento) de 12. [s]0 = +41.8 (c 1 .15, CHCI3); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 0.55 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.81 (3H, s), 0.86 (6H, d , J = 6.6 Hz), 0.95 (9H, t, J = 7.9 Hz), 4.05 (1 H, m); 13C RMN (100 MHz, CDCI3) d 5.0, 7.0, 14.1 , 17.6, 22.7, 22.7, 23.4, 27.8, 28.0, 29.1 , 30.0, 35.0, 38.9, 39.1 , 41 .5, 51 .7, 52.8, 69.2; MS (El) m/z 337 (100), 323 (59), 271 (67), 233 (77); masa exacta calculada para C2,H4iOSi ([M - C2H5J+) 337.2927, encontrada 337.291 1 . Des-A,B-21 -norcolestan-8£-ol (13). Una solución agitada de 12 (485 mg; 1 .33 mmoles) en n-butanol (25 ml_), ácido ( 1 S)-(+)-10-canforsulfónico (330 mg; 1 .42 mmoles). Después de un día, el solvente se retira bajo presión reducida y el residuo se purifica por cromatografía en columna (5 - 1 5% etil acetato/hexano) para dar 328 mg (1 .30 mmoles; 98% rendimiento) de 13. [a]D = +34.1 (c 1 .25, CHCI3); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) é 0.84 (3H, s), 0.86 (6H, d, J - 6.6 Hz), 4.10 ( 1 H , br s); 13C RMN (100 MHz, CDCI3) 6 14.0, 17.4, 22.7, 22.7, 22.9, 27.6, 28.0, 28.0, 29.0, 29.9, 33.9, 38.5, 39.1 , 41 .3, 51 .5, 52.3, 69.3; MS (El) m/z 252 (M\ 43), 237 (44), 219 (22), 209 (19), 125 (49), 1 1 1 (100); masa exacta calculada para C17H320 252.2453, encontrada 252.2446. Des-A,B-21 -norcolestan-8 ?-il nitrito (14). A una solución agitada de 1 3 (275 mg, 1 .09 mmoles) en cloroformo (5 mL) se agrega ter-butil nitrilo (1 .5 mL) por gotas en la oscuridad. Después de 1 hora, se agrega benceno y los solventes se retiran bajo presión reducida. (18E)-18-(Hidroxiimino)-des-A,B-21 -norcolestan-8 y8-ol (15). 14 crudo se disuelve en benceno anhidro (1 50 mL) e irradia en un aparato que consiste de un recipiente Pyrex con un pozo de inmersión enfriado por agua y lámpara de arco de mercurio con alta presión Hanovia equipada con filtro Pyrex. Una lenta corriente de argón se pasa a través de solución y la temperatura se mantiene a aproximadamente 10°C. El avance de reacción se supervisa por TLC. Después de 30 min., la reacción se completó. El benceno se retira bajo presión reducida y el residuo se disuelve en 2-propanol (5 mL) y mantiene durante la noche para lograr isomerización de un compuesto nitroso a una oxima. El solvente se evapora y el residuo se purifica en cartucho Waters silica gel Sep-Pack (15 - 25% etil acetato/hexano) para dar 122 mg (0.43 mmol, hasta 40% rendimiento partiendo de 13) de 15. [a]0 - +35.5 (c 0.90, CHCI3); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) ¿ 0.86 (6H, d, J = 6.6 Hz), 4.06 (1 H, m), 6.81 (1 H, br s), 7.23 (1 H, s), 10.91 (1 H, s); 13C RMN (100 MHz, CDCI3) d 17.3, 22.0, 22.6, 22.6, 27.7, 27.9, 28.1 , 29.1 , 34.4, 34.6, 38.9, 49.1 , 51 .8, 52.0, 67.4, 152.4; MS (El) m/z 281 (M+, 1 1 ), 264 (72), 246 (57), 205 (49), 183 (100); masa exacta calculada para C17H30NO ([M - OH]*) 264.2327, encontrada 264.2326. 8/?-(Acetoxi)-des-A,B-21 -norcolestan-18-nitrilo (16). Una solución de 15 (120 mg, 0.43 mmol) en anhídrido acético (7 mL) se refiuja por 1 .5 h. La mezcla de reacción se enfría, vacía cuidadosamente en hielo y extrae con benceno (3 x 40 mL). Fases orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de NaHC03 (2 x 30 mL), agua (15 mL), secan sobre Na2S04 anhidro y evaporan. El residuo se purifica en un cartucho Waters Silica gel Sep-Pack (3 - 5% etil acetato/hexano) para dar 121 mg (0.40 mmol, 92% rendimiento) de 16. [a]D +5.2 (c 1.30, CHCI3); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) ó 0.86 (6H, d, J = 6.6 Hz), 2.13 (3H, s), 2.25 - 2.28 (1 H, m), 5.21 (1 H, s); 13C RMN (100 MHz, CDCI3) d 18.5, 20.9, 22.6, 23.3, 27.2, 27.6, 27.9, 28.2, 30.1 , 30.8, 34.0, 38.9, 46.5, 49.1 , 51.2, 68.4, 121.4, 170.9; 20.9, 22.3, 23.4, 27.4, 29.8, 32.1 , 36.2, 45.7, 51 .9, 56.2, 68.6, 121.1 , 170.9; MS (El) m/z 305 (M\ 7), 288 (3), 263 (83), 245 (44), 220 (79), 205 (100); masa exacta calculada para (ESI) Ci9H3iN02Na 328.2252, encontrada 328.2249. Des-A,B-21 -norcolestan-18-nitrilo-8 ?-ol (17). 16 (120 mg, 0.39 mmol) se disuelve en metanol (3 mL) y trata con solución al 10% de MeONa en metanol (3 mL) por 2 h. Después de eso el solvente se retira bajo presión reducida, el residuo se trata con agua (10 mL) y solución acuosa saturada de NH4CI (8 mL) y extrae con dicloruro de metileno (3 x 25 mL). La fase orgánica se seca sobre Na2S04 anhidro y evapora. El residuo se purifica en un cartucho Waters silica gel Sep-Pack (15 - 25% etil acetato/hexano) para dar 91 mg (0.35 mmol, 89% rendimiento) de 17. [a]D = +23.0 (c 1 .10, CHCI3); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 0.86 (6H, d, J = 6.6 Hz), 2.24 (1 H, d, J = 13.0 Hz), 4.12 (1 H, m); 13C RMN (100 MHz, CDCI3) ó 17.8, 22.6, 22.9, 27.3, 27.6, 27.9, 28.3, 30.7, 33.0, 34.2, 38.9, 45.7, 49.0, 52.6, 67.2, 122.5; MS (El) m/z 263 (M\ 64), 246 (39), 236 (77), 220 (92), 206 (84), 193 (95), 134 (100); masa exacta calculada para C17H29NO 263.2249, encontrada 263.2256. Des-A, B-18,21 -dinorcolestan-8 ?-ol (18). A una mezcla agitada de potasio (90 mg, 2.31 mmoles) en HMPA (350 µ?, 361 mg, 2.01 mmoles) y dietil éter (800 µ?) la solución de 17 (90 mg, 0.34 mmol) en ter-butil alcohol (80 µ?) y dietil éter (300 µ?) se agrega por gotas a 0 °C bajo argón. La mezcla se deja que caliente a temperatura ambiente y agita durante la noche. El potasio restante se retira, unas cuantas gotas de 2-propanol y benceno (20 mL) se agregan. La fase orgánica se lava con agua a (5 mL), seca sobre Na2S04 anhidro y concentra bajo presión reducida. El residuo se purifica en un cartucho Waters silica gel Sep — Pack (5 - 15% etil acetato/hexano) para dar 65 mg (0.27 mmol, 80% rendimiento) de 18. [a]D = +66.8 (c 1 .00, CHCI3); 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d 0.86 (6H, d, J = 6.6 Hz), 4.04 ( H, s); 13C RMN (100 MHz, CDCI3) d 20.2, 22.6, 22.6, 24.4, 27.7, 27.9, 28.6, 29.2, 30.6, 33.5, 34.4, 39.0, 43.6, 44.6, 50.3, 67.8; MS (El) m/z 238 (M+, 50), 220 (76), 205 (41 ), 195 (79), 135 (82), 122 (86), 93 (100); masa exacta calculada para C16H30O 238.2297, encontrada 238.2323. Des-A,B-18,21-dinorcolestan-8-ona ( 19).

A una solución agitada de 18 (7 mg; 29 //moles) y PPTS (2 cristales) en dicloro de metileno (2 mL), se agrega PDC (40 mg; 105 //moles) a 0°C. El baño de enfriamiento se retira y la mezcla se agita por 3 h. Después, el solvente se retira bajo presión reducida y el residuo se purifica en cartucho Sep-Pack de gel de sílice (2 - 5% etil acetato/hexano) para dar 6 mg (25 //moles; 86% rendimiento) de 19. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) ó 0.86 (6H, d, J = 6.6 Hz); 13C RMN ( 100 MHz, CDCI3) ¿ 21 .1 , 22.6, 22.7, 27.7, 27.8, 28.0, 28.4, 29.1 , 29.6, 34.2, 39.0, 41 .5, 45.8, 54.8, 58.1 , 21 .7; MS (El) m/z 236 (M\ 69), 220 (31 ), 205 (100), 193 (67), 138 (61 ), 121 (94); masa exacta calculada para C16H280 236.2140, encontrada 236.2136. 2-Metilen-1 o-hidroxi-18, 19,21 -trinorvitamina D3 (SX-99) (22). A una solución agitada de 20 (20 mg; 35 //moles) en THF (500 /L), dos gotas de solución 1.8 M de PhLi en di-n-butil éter se agregan a -20°C hasta que la solución viró a naranja intenso. Después 17 / L (32 //moles) de la solución de PhLi se agregan por gotas. Después de 20 minutos, la mezcla de reacción se enfría a -78°C y la solución de 19 (5 mg; 21 //mol) en THF (200 //L) se agrega por cánula. Después de 3 horas, se agrega hexano (15 mL) y la fase orgánica se lava con salmuera (3 mL), seca sobre MgS04 anhidro y concentra bajo presión reducida. El residuo se purifica en cartucho Sep-Pack de gel de sílice (hexano - 3% etil acetato/hexano) para dar 5 mg-(8 //moles; 40% rendimiento) de 21 . H RMN (400 MHz, CDCI3) d 0.03 (3H, s), 0.04 (3H, s), 0.07 (3H, s), 0.08 (3H, s), 0.86 - 0.87 ( 15H, m), 0.89 (9H, s), 2.18 (1 H, dd, J = 12.4 Hz, J = 7.8 Hz), 2.38 - 2.49 (3H, m), 2.86 (1 H, d, J = 13.6 Hz), 4.42 (2H, m), 4.93 (1 H, s), 4.96 (1 H, s), 5.92 (1 H, d, J - 11.1 Hz), 6.19 (1 H, d, J = 11.1 Hz); MS (El) m/z 468 (77), 366 (55), 234 (32), 220 (42), 205 (63), 73 (100); masa exacta calculada para C31H52OSi ([M - t-BuSi(Me)20 - Hf) 468.3787, encontrada 468.3785.

A una solución agitada de 21 (4 mg; 6.5 ymoles) en etanol (500 /vl_) ácido (1 S)-(+)-10-canforsulfónico (3 mg; 13 µ?t???) se agregan a 0°C. Después, el baño de enfriamiento se retira y la mezcla de reacción se agita por 3 días. Unas cuantas gotas de solución acuosa saturada de NaHC03 y agua (2 ml_) se agregan y la mezcla se extrae con etil acetato (5 x 7 ml_). Fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgS0 anhidro, concentran bajo presión reducida y el residuo se purifica en cartucho Sep-Pack de gel de sílice (15 - 25% etil acetato/hexano) para dar aproximadamente 2.5 mg de crudo 22. La vitamina cruda se purifica en HPLC (10% isopropanol/hexano; columna Zorbax-Sil de 10 mm x 25 cm; 4 mL/min.; P = 6.56 min. y agua al 5%/metanol; 9.4 mm x 25 cm, 5/vm, columna Zorbax Eclipse XDB-CI8; 4 mL/min.; Rt = 9.74 min.) para dar 1.5 mg (4 /vmoles; 62% rendimiento) de 22. UV (EtOH) Xm3x = 243, 251 , 260 nm; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 6 0.86 (6H, d, J = 6.6 Hz), 2.29-2.37 (2H, m), 2.58 (1 H, dd, J = 13.2 Hz, J = 3.7 Hz), 2.79 -2.88 (2H, m), 4.48 (2H, m), 5.09 (1 H, s), 5.11 (1 H, s), 5.97 (1 H, d, J = 11.3 Hz), 6.35 (1 H, d, J = 1 1 .3 Hz); MS (El) m/z 372 (M+, 91 ), 354 (10), 287 (100), 219 (53), 107 (51 ); masa exacta calculada para C25H40O 372.3028, encontrada 372.3046. 5 metil-hexil éster de ácido toluen-4-sulfónico (23). A una solución agitada de 5-metil-l-hexanol (3.65 mL; 3.00 g; 25.7 mmoles), trietilamina (5.00 mL; 3.64 g; 36.0 mmol) y DMAP (200 mg; 1.64 mmoles) en dicloruro de metileno (120 mL) cloruro de tosilo (5.72 g; 30.0 mmoles) se agrega a 0 °C. Después el baño de enfriamiento se retira y la mezcla se deja que repose durante la noche. Solución acuosa saturada de NH4CI (30 mL) y agua (30 mL) se agregan y la mezcla se extrae con dicloruro de metileno (3 x 150 mL). Fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgS04 anhidro y concentran bajo presión reducida. El residuo se purifica por cromatografía en columna (5 - 10% etil acetato/hexano) para dar 6.66 g (24.7 mmoles; 96% rendimiento) de 27. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 6 0.83 (6H, d, J = 6.6 Hz), 1.09 (2H, m), 1.28 (2H, m), 1.47 ( IH, m), 1.62 (2H, m), 2.45 (3H, s), 4.02 (2H, t, J - 6.5 Hz), 7.34 (2H, d, J - 8.1 Hz), 7.79 (2H, d, J = 8.1 Hz); 13C RMN (100 MHz, CDCI3) d 21 .6, 22.5, 23.2, 27.8, 29.1 , 38.2, 70.2, 127.9, 129.8, 133.2, 144.6; MS (El) m/z 255 (2), 226 (2), 205 (3), 190 (5), 173 (67), 155 (57), 98 (59), 91 (100); masa exacta calculada para C13H19O3S ([M - CH3J+) 255.1055, encontrada 255.1062. l-Bromo-5-met¡l-hexano (24). A una solución agitada de LiBr (6.26 g; 72.0 mmoles) en DMF (40 mL), una solución de 23 (6.60 g; 24.4 mmoles) en DMF (6 mL) se agrega. La mezcla resultante se agita a 45 °C por 3 horas. Después agua (100 mL) se agrega y el producto de reacción se extrae con dietil éter (5 x 250 mL). La separación del solvente da por resultado en 2.40 g (13.4 mmoles; 55%) de 24. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 6 0.88 (6H, d, J = 6.6 Hz), 1.19 (2H, m), 1 .42 (2H, m), 1.54 (1 H, m), 1.83 (2H, m), 3.41 (2H, t, J = 6.9 Hz); 13C RMN (100 MHz, CDCI3) d 22.5, 26.0, 27.8, 33.1 , 34.1 , 38.0; MS (El) m/z 179 (M\ 80), 163 (14), 155 (9), 137 (100); masa exacta calculada para C6H12Br ((M - CH3J+) 163.0122, encontrada 163.0121. Bromuro de trifenilfosfonio (5-Metilhexil) (10). Una solución de 24 (2.30 g; 12.8 mmoles) y trifenilfosfina (3.70 g; 14.1 mmoles) se refluja en tolueno (12 mL) por 20 horas. Después el solvente se retira y el cristal resultante se lava con tolueno (3 mL) y dietil éter (3 mL) para dar 4.57 g (10.4 mmoles; 81% rendimiento) de 10. p.f. 227 - 228 °C; H RMN (500 MHz, CD3CN) d 0.82 (6H, d, J = 6.6 Hz), 1 .16 (2H, m), 1 .42 - 1.52 (3H, m), 1.59 (2H, m), 3.30 (2H, m), 7.72 (12H, m), 7.85 (3H, m); 13C RMN (125 MHz, CD3CN) d 22.7, 23.2, 28.4, 28.8, 28.9, 38.6, 131.2, 131.3, 134.7, 134.7, 136.0. Ejemplo II: ACTIVIDAD BIOLÓGICA (A) Enlace Receptor de Vitamina D Material de Prueba Fuente de Proteína Receptor de rata recombinante de longitud íntegra se expresa en células BL21 (DE3) Codon Plus RIL E. co// y purifica a homogeneidad utilizando dos sistemas de cromatografía en columna diferentes. El primer sistema fue una resina de afinidad de níquel que utiliza la etiqueta histidína C-terminal en esta proteína. La proteína que se eluyó con esta resina además se purifica utilizando cromatografía de intercambio de iones (S-Sepharose Fast Flow). Alícuotas de la proteína purifica se congelaron rápidamente en nitrógeno líquido y almacenan a -80 grados C hasta utilizar. Para utilizar en ensayos de enlace, la proteína se diluye en TEDK50 (Tris 50 mM, EDTA 1.5 mM, pH 7.4, DTT 5 mM, KCI 150 mM) con detergente Chaps al 0.1 %. La concentración de ligando y proteína receptora se optimiza de manera tal que no más de 20% del ligando radio-etiquetado agregado se liga al receptor. Drogas de Estudio Ligandos no etiquetados se disolvieron en etanol y las concentraciones se determinaron utilizando espectrofotometría de UV (1 ,25(OH)2D3: coeficiente de extinción molar = 18,200 y Amax = 265 nm; Análogos: coeficiente de extinción molar = 42,000 y Amax = 252 nm). Ligando radio-etiquetado (3H- 1 ,25(OH)2D3, -159 Ci/mmol) se agrega en etanol a una concentración final de 1 nM. Condiciones de Ensayo Ligandos radio-etiquetados y no etiquetados se agregaron a 100 mcl de la proteína diluida a una concentración final de etanol de <10%, mezclaron e incubaron durante la noche en hielo para alcanzar el equilibrio de enlace. El día siguiente, 100 mcl de fango de hidroxilapatita (50%) se agrega a cada tubo y mezcla a intervalos de 10 minutos por 30 minutos. La hidroxilapaptita se recolecta por centrifugación, después lava tres veces con amortiguador Tris-EDTA (Tris 50 mM, EDTA 1.5 m , pH 7.4) contiene Titron X-100 al 0.5%. Después de lavado final, los gránulos se transfirieron a ampolletas de destelleo que contienen 4 mi de cóctel de destelleo Biosafe II, mezcla y colocan en un contador de destelleo. Enlace total se determina de los tubos que contienen solo ligando radio-etiquetado. (B) Diferenciación HL-60 Material de Prueba Drogas de Estudio Las drogas de estudio se disolvieron en etanol y las concentraciones se determinaron utilizando espectrofotometría de UV. Diluciones en serie se prepararon de manera tal que un intervalo de concentraciones de droga puede probarse sin cambiar la concentración final de etanol (< 0.2%) presente en los cultivos celulares. Células Células de leucemia promielocítica humana (HL60) se desarrollaron en medio RPMI-1640 que contiene suero bovino fetal al 10%. Las células se incubaron a 37 grados C en la presencia de C02 al 5%. Condiciones de Ensayo Células HL60 se revistieron a 1.2 x 105 células/ml. Dieciocho horas después de revestir, las células en duplicado se trataron con la droga. Cuatro días después, las células se recolectaron y se realizó un ensayo de reducción de nitro azul de tetrazolio (Collins et al., 1979; J. Exp. Med. 149:969-974). El por ciento de células diferenciadas se determina al contar un total de 200 células y registrar el número que contiene depósitos de formazan negro-azul intracelulares. La verificación de diferenciación a células monocíticas se determina al medir actividad fagocítica (datos no mostrados).

(C) Ensayo de Transcripción In Vitro La actividad de transcripción se mide en células ROS 17/2.8 (hueso) que se transfectaron en forma estable con un gen promotor 24-hidroxilasa (240hase) corriente arriba de un gen reportero luciferasa (Arbour et al., 1998). Células se les dió un intervalo de dosis. Dieciséis horas después de la dosis, las células se recolectaron y se midieron las actividades de luciferasa utilizando un luminómetro. Unidades de luciferasa relativas (RLU = relative luciferase units). (D) Transporte de Calcio Intestinal y Movilización de Calcio en Huesos Ratas Sprague-Dawley destetadas, machos, se colocaron en Dieta 11 (Dieta 0.47% de Ca) +AEK por una semana seguido por Dieta 1 1 (Ca 0.02%) +AEK por 3 semanas. Las ratas después se cambiaron a una dieta que contiene Ca al 0.47% por una semana seguido por dos semanas de una dieta que contiene Ca al 0.02%. La administración de dosis empezó durante la última semana en dieta con calcio al 0.02%. Cuatro dosis ¡p consecutivas se suministraron aproximadamente 24 horas separadas. Veinticuatro horas después de la última dosis, se toma sangre del cuello cortado y la concentración de calcio en suero se determina como una medida de movilización de calcio en hueso. Los primeros 10 cm del intestino también se recolectaron para análisis de transporte de calcio intestinal utilizando el método de saco intestinal invertido. El ensayo de saco intestinal invertido se lleva a cabo como se describió previamente por Martin and Deluca, Am. J. Physioi. 216, 1351 (1969); (DeLuca et al., patente de los E.U.A. Número 4,188,345), que se incorpora aquí por referencia como si se estableciera por completo. Preparación de Dosis Material de control A. Material de control negativo El material de control negativo se prepara al medir volumétricamente etanol (< 5%) y propilen glicol, mezclar y después colocar en almacenamiento a 2 a 8°C. B. Material de control positivo 1 ,25(OH)2D3 se prepara al determinar la concentración de una solución madre de etanol utilizando espectrofotometría de UV (coeficiente de extinción = 18,200; X™ax = 265 nm). La cantidad requerida de 1 ,25(OH)2D3 se mide volumétricamente en propilen glicol, de manera tal que hay menos que 5% de etanol en la solución final. La solución se mezcla y después almacena de 2 a 8°C. Material de Prueba Los análogos se preparan al primero determinar la concentración de una solución madre de etanol utilizando espectrofotometría UV (coeficiente de extinción = 42,000; Amax = 252 nm). Las soluciones análogas se agregan volumétricamente a propilen glicol, de manera tal que hubo menos de 5% de etanol en la solución final. La solución se mezcla y almacena de 2 a 8°C. Método de Administración de Dosis Tanto los artículos de control como de prueba se administran por inyección intraperitoneal en 100 microlitros por 4-7 días consecutivos espaciados aproximadamente 24 horas. 1 ,25(OH)2D3 se da por 4 días consecutivos, mientras que las drogas de prueba se dan por 7 días consecutivos. Análisis de Calcio en Suero Veinticuatro horas después de la dosis final, aproximadamente 1 mi de sangre se deja que coagule a temperatura ambiente y después se centrifuga a 3000 x g por 15 minutos. El suero se transfiere a un tubo de polipropileno y almacena congelado a -20°C. El nivel de calcio se determina al diluir el suero en cloruro de lantano 0.1 % y medir la absorbencia en un espectrofotómetro de absorción atómica (Perkin Elmer Model 31 10, Shelton, CT). 2-Metilen-1 o-hidroxi- 18,19,21 -trinorvitamina D3 (SX-99) liga al receptor de vitamina D recombinante y se es considerablemente menos activo cuando se compara con 1 a,25-dihidroxivitamina D3 en este aspecto (ver la Figura 1 ). Adicionalmente, es también menos activo para estimular la transcripción de un gen reportero transfectado en forma estable en células Rosl7/2.8 (hueso), ¡n vivo, este compuesto se esperaría que se hidroxile en el hígado para producir el compuesto 1 a,25-d¡hidroxiv¡tam¡na D3 que después será capaz de ligar firmemente al receptor llevar a cabo la transcripción (ver la Figura 5). Es ligeramente menos activo que 1 o,25-dihidroxivitamina D3 para inducir diferenciación de células HL-60 (ver la Figura 4). Tiene significante actividad de movilización de calcio en huesos y potente actividad de transporte de calcio in vivo (ver las Figuras 2 y 3). De acuerdo con esto, SX-99 se espera que posea actividad significante para suprimir niveles de hormona paratiroides en ratas normales. Similarmente, otros compuestos semejantes de la presente invención como se ilustra en la fórmula I o II, se espera que liguen al receptor de vitamina D, estímulo de transcripción de un gen reportero en forma estable transfectado en células Ros 17/2.8 (hueso), induce diferenciación de células HL-60, tiene limitada actividad calcémica como se mide ya sea por transporte intestinal de calcio o movilización de calcio en huesos 1 s,25- dihidroxivitamina D3 y posee actividad significante para suprimir niveles de hormona paratiroide en ratas normales. De acuerdo con esto, este compuesto SX-99 y otros compuestos descritos en la invención deberán encontrar sus usos en el tratamiento de enfermedades auto-inmunes tales como esclerosis múltiples, diabetes tipo I, artritis reumatoide, lupus y otras enfermedades degenerativas similares. También deberá tener una actividad significante para tratar crecimientos malignos tales como cánceres colorectal, de mama, piel, pulmón y próstata. Todas estas actividades deberán ser evidentes en la ausencia de elevadas concentraciones de calcio en suero (ver Figuras 2 y 3). Este compuesto también deberá ser útil para tratar hiperparatiroidismo secundario que se encuentra en pacientes que hayan perdido la función renal tales como aquellos en hemodiálisis o diálisis peritoneal. Su actividad calcémica significante deberá hacerlo útil en el tratamiento de osteopenia y enfermedades metabólicas de huesos tales como osteomalacia, raquitismos de resistencia de vitamina D y osteoporosis particularmente osteoporosis senil, osteoporosis postmenopáusica, osteoporosis inducida por esteroides y osteoporosis de bajo recambio de huesos. En una modalidad, los compuestos de la fórmula I se utilizan en una composición farmacéutica. Por ejemplo, cada mi de la composición farmacéutica puede comprender 5 pg del compuesto, 30% (v/v) de propilen glicol y 20% (v/v) de alcohol. Los compuestos de la invención son también útiles para evitar o tratar obesidad, inhibir diferenciación de adipocitos, inhibir transcripción de gen SCD-I, y/o producir grasa corporal en sujetos animales. Por lo tanto, en algunas modalidades, un método para evitar o tratar obesidad, inhibir diferenciación de adipocitos, inhibir transcripción de genes SCD-I, y/o reducir grasa corporal en un sujeto animal, incluye administrar al sujeto animal, una cantidad efectiva del compuesto o una composición farmacéutica que incluye el compuesto. La administración del compuesto o la composición farmacéutica al sujeto inhibe la diferenciación de adipocitos, inhibe transcripción de genes y/o reduce la grasa corporal en el sujeto animal. Para propósitos de tratamiento, los compuestos definidos por la fórmula I y fórmula II se formulan para aplicaciones farmacéuticas como una solución en solventes inocuos o como una emulsión, suspensión o dispersión de solventes o portadores convenientes o como pildoras, tabletas o cápsulas, en conjunto con portadores sólidos, de acuerdo con métodos convencionales conocidos en especialidad. Cualquiera de estas formulaciones también pueden contener otros excipientes farmacéuticamente aceptables y no tóxicos tales como estabilizantes, antioxidantes, aglutinantes, agentes colorantes o agentes emulsif ¡cantes o que modifican el gusto. Excipientes y portadores farmacéuticamente aceptables en general se conocen por aquellos con destreza en la técnica y de esta manera se incluyen que la presente invención. Estos excipientes y portadores se describen por ejemplo en "Remingtons Pharmaceutical Sciences" Mack Pub. Co., New Jersey (1991 ), que aquí se incorpora por referencia en su totalidad y para todos propósitos como si se estableciera por completo aquí. Los compuestos se administran en forma oral, tópica, parenteral, nasal, rectal, sublingual o transdérmica. Los compuestos se administran ventajosamente por inyección o por infusión intravenosa o soluciones estériles convenientes, o en la forma de dosis líquidas o sólidas por el canal alimentario o en la forma de cremas, ungüentos, parches o vehículos similares adecuados para aplicaciones transdérmicas. En algunas modalidades, dosis desde 0.001 pg a aproximadamente 1 mg por día del compuesto, son apropiadas para propósitos de tratamiento. En algunas de estas modalidades, una dosis apropiada y efectiva puede estar en el intervalo de 0.01 pg a 1 mg por día del compuesto. En otras de estas modalidades, una dosis apropiada y efectiva puede estar en un intervalo de 0.1 pg a 500 pg del compuesto por día. Estas dosis se ajustarán acuerdo con el tipo de enfermedad o condición a tratar, la severidad de la condición o enfermedad, y la respuesta del sujeto como es bien comprendido en la técnica. El compuesto se administra convenientemente sólo o junto con otros compuestos de vitamina D activo. En una modalidad, el compuesto de la formula II se utiliza en una composición farmacéutica. Por ejemplo, cada mi de la composición farmacéutica puede comprender 5 pg del compuesto, 30% (v/v) de propilen glicol y 20% (v/v) de alcohol. Composiciones para utilizar en la invención incluyen la cantidad efectiva de 2-metilen-1 a-hidrox¡-18,19,21-trinor vitamina D3 (SX-99) como el ingrediente activo y un portador conveniente. Una cantidad efectiva del compuesto para utilizar de acuerdo con algunas modalidades de la invención, en general será una cantidad en dosis tal como aquellas descritos aquí, y se administra en forma tópica, transdérmica, oral, nasal, rectal, sublingual, parenteral. En una modalidades, la dosis de administrar en forma intraperitoneal. Los compuestos de la fórmula I o II se administran ventajosamente en cantidades suficientes para efectuar la diferenciación de promielocitos a macrófagos normales. Dosis como se describe anteriormente son convenientes, entendiéndose que las cantidades dadas habrán ajustarse acuerdo con la severidad del enfermedad de la condición y respuesta del sujeto como bien se comprende en la especialidad. El compuesto se formula como cremas, lociones, ungüentos, aerosoles, supositorios, parches tópicos, pildoras, cápsulas o tabletas o en forma líquida como soluciones, emulsiones, dispersiones o suspensiones en solventes o aceites farmacéuticamente inocuos y aceptables, y estas preparaciones para contener además, otros componentes farmacéuticamente inocuos o benéficos, tales como estabilizantes, antioxidantes, emulsificantes, agentes colorantes, aglutinantes o agentes que modifican el gusto. Las formulaciones de la presente invención comprenden el ingrediente activo en asociación con un portador farmacéuticamente aceptables del mismo y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos. El portador debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de las formulaciones y no ser nocivo a su recipiente.

Formulaciones de la presente invención adecuadas para administración oral que están en la forma de unidades discretas como cápsulas, saquitos, tabletas o pastillas, cada una que contiene la cantidad predeterminada de ingrediente activo; en la forma de un polvo o granulos; la forma de una solución o suspensión en un líquido acuoso o líquido no acuoso; o en la forma de una emulsión de aceite-en-agua o una emulsión de agua-en-aceite. Formulaciones para administración rectal están en la forma de un supositorio que incorpora el ingrediente activo y portador tal como manteca de cacao, o en la forma de un enema. Formulaciones adecuadas para administración parenteral comprenden convenientemente una preparación acuosa o aceitosa estéril del ingrediente activo de preferencia es isotónico con la sangre del recipiente. Formulaciones adecuadas para administración tópica incluyen preparaciones líquidas o semilíquidas tales como linimentos, lociones, agentes de aplicación, emulsiones de aceite-en-agua o agua-en-aceite tales como cremas, ungüentos o pastas; o soluciones o suspensiones tales como gotas; o como rocíos o nebulizaciones. Pueden emplearse para formulaciones de administración nasal, inhalación de polvo, autopropulsadas o de nebulización, surtidas con una lata de nebulización, un nebulizador o un atomizador. Las formulaciones cuando se surten, de preferencia tienen un tamaño de partículas en el intervalo de 10 a 100 mieras. Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosis unitaria y se preparan por cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de farmacia. Por el término "unidad de dosis" se entiende una dosis unitaria, es decir sencilla que es capaz de ser administrada a un paciente como una dosis unitaria física y químicamente estable que comprende ya sea el ingrediente activo como tal o una mezcla del mismo con diluyentes o portadores farmacéuticos sólidos o líquidos. Todas las referencias aquí citadas se incorporan específicamente por referencia su totalidad y para todos los propósitos como si se establecen por completo aquí. Se entiende que la invención no se limita a las modalidades establecidas aquí para ilustración, pero abarca todas estas formas que caen dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones.

Claims

REIVINDICACIONES 1 . Un compuesto que tiene la fórmula I i en donde X, y X2 se eligen independientemente de H y grupos protectores hidroxi. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque Xi y X2 son grupos protectores hidroxi. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque Xi y X2 son grupos trietilsililo o t- butildimetilsililo. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque Xi y X2 son H y el compuesto tiene la fórmula II: 5. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva del compuesto de la reivindicación 1 y un portador farmacéuticamente aceptable. 6. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque la cantidad efectiva comprende aproximadamente 0.01 µg a aproximadamente 1 mg del compuesto por gramo de la composición. 7. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque la cantidad efectiva comprende de aproximadamente 0.1 /vg a aproximadamente 500 µ< del compuesto por gramo de la composición. 8. Un método para tratar un sujeto que sufre de una condición biológica, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva del compuesto de la reivindicación 1 al sujeto, en donde la condición biológica se elige de enfermedad metabólica de huesos; psoriasis; leucemia; cáncer de colon; cáncer de mama; cáncer de próstata; cáncer de piel; cáncer de pulmón; esclerosis múltiple; lupus; diabetes mellitus; reacción de hospedero contra injerto; rechazo de trasplantes de órganos; una enfermedad inflamatoria seleccionada de artritis reumatoide, asma, o enfermedades inflamatorias intestinales; una condición de la piel seleccionada de arrugas, falta de firmeza adecuada de la piel, falta de hidratación dérmica adecuada o insuficiente secreción de sebo; osteodistrofia renal, osteopenia u osteoporosis. 9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la condición biológica es osteodistrofia renal, raquitismo resistente a vitamina D, osteoporosis o artritis psoriásica. 10. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la condición biológica se elige de leucemia, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de piel, cáncer pulmonar o cáncer de próstata. 1 1 . El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la condición biológica se elige de esclerosis múltiple, lupus, diabetes mellitus, reacción de hospedero contra injerto o rechazo de trasplantes de órganos. 12. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la condición biológica se elige de artritis reumatoide, asma o enfermedades inflamatorias intestinales seleccionadas de enfermedad celiaca, colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn. 13. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la condición biológica se elige de arrugas, falta de firmeza adecuada de la piel, falta de hidratación dérmica adecuada o insuficiente secreción de sebo. 14. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el compuesto se administra en forma oral, parenteral, nasal, rectal, sublingual, transdérmica o tópica al sujeto. 15. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el compuesto se administra intraperitonealmente. 16. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el compuesto se administra en una dosis de 0.01 µ por día a 1 mg por día. 17. El compuesto que tiene la fórmula II II 18. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad efectiva del compuesto de la reivindicación 17 y un portador farmacéuticamente aceptable. 19. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada porque la cantidad efectiva comprende de aproximadamente 0.01 /vg a aproximadamente 1 mg del compuesto por gramo de la composición. 20. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada porque la cantidad efectiva comprende de aproximadamente 0.1 g a aproximadamente 500 /yg del compuesto por gramo de la composición. 21. Un método para tratar o evitar obesidad de un animal, inhibir diferenciación de adipocitos, inhibir transcripción de gen SCD-I, y/o reducir grasa corporal en un animal, que comprende administrar a un animal que lo requiere una cantidad efectiva de un compuesto que tiene la fórmula: en donde ?? y X2 se eligen independientemente de H y grupos hidroxi protectores. 22. El método de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado porque el compuesto se administra en forma oral, parenteral, nasal, rectal, sublingual, transdérmica o tópica al animal. 23. El método de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado porque el compuesto se administra en una dosis desde 0.01 jug por día a 1 mg por día. 24. El método de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado porque el compuesto es 2-metilen-1 a-hidroxi-18,19,21 -trinorvitamina D3 que tiene la fórmula: 25. El método de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado porque el animal es un humano. 26. El método de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado porque el animal es un animal doméstico. 27. El método de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado porque el animal es un animal agrícola.