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KR910002552B1 - 헤르페스 비루스 특이성 면역학적 물질 및 방법 - Google Patents

헤르페스 비루스 특이성 면역학적 물질 및 방법 Download PDF

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KR910002552B1
KR910002552B1 KR1019850006087A KR850006087A KR910002552B1 KR 910002552 B1 KR910002552 B1 KR 910002552B1 KR 1019850006087 A KR1019850006087 A KR 1019850006087A KR 850006087 A KR850006087 A KR 850006087A KR 910002552 B1 KR910002552 B1 KR 910002552B1
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Abstract

내용 없음.

Description

헤르페스 비루스 특이성 면역학적 물질 및 방법
본 발명은 항체물질, 보다 자세하게는 헤르페스 심플렉스 비루스타입 1과 2의 당단백질 D(HSV gD-1과 gD-2) 및 구조상 관련 화합물들에 대하여 독특한 다중특이성 면역반응성을 나타내는 항체물질에 관한 것이다.
최근, 비리온 표피의 구조 성분을 구성하며 비루스 감염을 개시시키는데 중요한 역할을 하리라고 생각되는 헤르페스 심플렉스 비루스 당단백질의 분리 및 특성화에 많은 연구 노력이 기울여져 왔다. 이러한 연구에 기초한 보다 중대한 진전중에는, 왁찐 조성물의 활성 면역원으로 사용될 경우 HSV 감염에 대한 중대한 보호 역할을 해주는 HSV 당단백질 D의 신규제법에 대한 본 출원인들의 발견 및 HSV gD에 존재하는 아미노산의 연속 서열을 복제하거나 혹은 실질적으로 복제하는 면역학상 중요한 폴리펩티드에 대한 본 출원인들의 다른 발견이 있다. 당분야의 배경 정보를 제공할 목적으로 본 발명에서 참고로한 것은 본 출원인들의 동시 계속출원 미국 특허출원 일련번호 제 463, 141호(1983년 2월 4일 출원, 제목:"헤르페스 심플렉스 비루스 예방접종을 위한 물질 및 방법")이다. 또한 국제 특허출원 WO 83/02897(공개:1983년 9월 1일)를 참고로 할 수 있다.
HSV gD-1과 gD-2의 특성 규정에 대한 연구는 DNA 재조합 기술을 gD-1와 gD-2의 폴리펩티드 서열 전부 또는 일부에 대한 DNA 서열 코딩을 미생물 숙주(예:배양중인 포유동물의 세포, 효모 및 세균)내에서 클로닝 및 발현시키는데에 적용시킴으로써 얻어진 결과에 의해 많은 도움을 받았다. 단백질에 대한 유전자 코딩의 DNA 서열화에 의하여 그의 1차적 구조형태(아미노산 서열)를 추측하게 되었다. 예컨대, Watson등의 Science〔218, pp. 381-384(1982)〕를 보면, "리더(leader)"부위 및 "성숙한" 단백질 부위라고 명시된 부위를 포함한 gD-1의 추측된 서열이 나와있다. 그와 유사한 재조합법으로 인하여 gD-2 서열의 추측 및 그의 gD-1과의 비교가 가능하게 되었다. 그러므로, 본 발명에서 특히 참고로한 것은 Watson의 발표〔Gene, 26, pp.307-312(1983)〕인데, 이 문헌에는 DNA 서열화에 기초한 "성숙한" HSV gD-1과 gD-2-2의 추측된 비교상의 1차적 구조형태(아미노산 서열)에 관하여 하기 표-Ⅰ에 나온 것과 같은 정보를 제공하고 있다.
표와 명세서 전반에 걸쳐, 아미노산 잔기에 대한 한글자 및 세글자"암호"를 사용하고자 한다 : A=Ala=알라닌; C=Cys=시스테인; D=Asp=아스파르트산; E=Glu=글루탐산; F=Phe=페닐알라닌; G=Gly=글리신; H=His=히스티딘; I=Ile=이소로이신; K=Lys=리신; L=Leu=로이신; M=Met=메티오닌; N=Asn=아스파라긴; P=Pro=프롤린; Q=Glu=글루타민; R=Arg=아르기닌; S=Ser=세린; T=Thr= 트레오닌; V=Val=발린; W=Trp=트립토판; Y=Tyr=티로신.
[표 Ⅰ]
Figure kpo00001
간단히 요약하자면, gD-1과 gD-2의 성숙형은 각기 369개와 368개의 아미노산 잔기로 구성되어 있는데, gD-2에는 gD-1의 잔기 304에 해당하는 잔기가 없으며 두 서열 사이에는 약 85%의 동종이 존재하리라 추측된다. 또한 , Lasky 등의 문헌 〔DNA, 3, pp.23-29(1984)〕 및 Rawls 등의 문헌 〔J.Virol., 51, pp.263-265(1984)〕을 참고로 할 수 잇다.
HSV gD-1과 gD-2를 특성화하는 상대 연구는, 타입-특이성 및 타입-공통 모노클로날항체(monoclonal antibody)의 사용을 통하여 이들 물질의 항원 결정인자의 위치를 측정하는데에 기울여졌었다〔참조;Eisenberg 등의 J.Virol., 41, pp.1099-1104(1982), Cohen 등의 J.Virol., 49, pp. 102-108(1984), Eisenberg 등의 J.Virol., 49, pp.265-268(1984) 및 거의 인용된 참고문헌〕. 이러한 연구의 본질상 이중의 목적은, HSV 숙주내에서 중화성 항체의 생산을 자극하는 하나 또는 그 이상의 결정인자를 알아내는 것과, 그러한 면역학상 중요물질의 탐지, 정량 및 친화성 정제에 유용한 항체물질을 확인하는 것이다.
전술한 바와 같은 당분야의 진보사항에도 불구하고, gD-1, gD-2 및 구조상의 관련 화합물들, 예컨대 gD-1과 gD-2 단편 및/또는 유사체를 탐지 및 정량하고 천연 및 재조합(源)으로부터 친화성 정제에의해 분리시키는데 유용한 항체물질에 대한 필요성이 계속 존재하고 있다.
본 발명은 헤르페스 심플렉스 비루스 타입 1과 2의 당단백질 D(HSV gD-1과 gD-2) 및 구조상 관련 화합물에 대하여 독특한 다중특이성 면역반응성을 나타내는 신규의 항체물질을 제공하고, gD-1과 gD-2 및 구조상 관련 화합물을 탐지 및 정량하고 친화성 정제에 의해 분리시키기 위한 물질 및 그 방법을 제공해준다.
본 발명의 항체물질은, 특히, 천연 및 변성상태의 gD-1과 gD-2 모두에 공통적으로 결합함을 특징으로 하는데, 이로써, 본 항체는 두 당단백질내의 동일한 또는 본질상 동일한 에피토프에 결합하며 에피토프의 결합형은 형태적이라기 보다 선형이라는 것을 알 수 잇다. 또한 본 발명의 항체물질은, gD-1과 gD-2에 대한 추측 서열의 잔기 266에서 287까지 뻗쳐있는 아미노산 잔기들 [즉, PELA(또는 V) PEDPEDSAL-LEDPV (또는 V) GTVA (또는 S)]의 연속 서열 전부 또는 면역학상 중요부분을 포함하는 단백질성 물질에 가역적으로 면역결합함을 특징으로 한다. 바람직한 형태에 있어서, 본 발명의 항체물질은 하이브리도마셀 라인(cell line)에 의해 생산된 모노클로날 항체로 구성된다.
본 발명에 따라 예시적으로 제공되는 것은, 미생물 기탁에 대한 민국 특허청의 요건에 따라 미국 기준배양균 수집소에 기탁된 쥐-쥐 하이브리도마 셀 라인 A.T.C.C.No HB 8606(기탁일:1984년 10월 26일)에 의해 생산된 모노클로날 항체이다.
본 발명에 의한 바람직한 구체화중의 하나는 하이브리도마 셀 라인 A.T.C.C.No.HB 8606에 의해 생산된 "DL-6"이라는 IgD 모노클로날 항체이다. 이 항체는 하기 (a), (b), (c) 및 (d)를 그 특징으로 한다. ; (a)단백질 A와 결합하는 능력 ; (b)HSV-1과 HSV-2의 시험관내 감염성을 중화시키는 능력 ; (c) 글리코실화되었든 아니든간에 천연 및 변성 형태의 자연발생 및 재조합 gD-1과 gD-2와의 특이적 면역반응성 및 그들과 가역적으로 면역결합하는 능력 ; (d) gD-1과 gD-2의 잔기 266에서 287까지, 즉, PELA(또는 V) PEDPEDSALLEDPV(또는 A) GTVA(또는 S)에 잔존하리라 추측되는 것을 복제하는 아미노산 서열의 전부 또는 실질상의 면역학적 중요 부분을 포함한 단백질성 물질들과의 특이적 면역반응성 및 그들의 가역적으로 면역결합하는 능력, 항체 DL-6과의 면역반응성을 갖는다고 본 명세서에 구체적으로 기재된 단백질성 물질중에는, 형질변환 E. 콜리 세포내에서 생산된 글리코실화되지 않은 단편 "8-300〔1〕", Hep-2세포내에서 생산된 글리코실화"1-287〔1〕"단편, E. 콜리 세포내에서 생산된 "-5-369〔1〕 생성물 및 아미노산의 중합에 의해 생산된 합성 팹티드 "266-279〔1〕", "266-279〔2〕" 및 "268-287〔1〕"와 같은 재조합체 방법론에 의해 생산된 gD-1 단편이 있다. 항체 DL-6과의 면역반응성이 없는 것은 CHO 세포내에서 생산된 클로코실화 단편 "1-275〔1〕", gD-1과 gD-2 및 그의 "혼성체"의 아미노 말단의 처음 23개 잔기의 여러부분을 복제하는 합성 펩티드 및, gD-1의 잔기 340에서 356까지의 추측된 1차적 구조형태를 복제하는 합성펩티드"340-356〔1〕"와 같은, 재조합 기술에 의해 생산된 gD-1 단편이 있다.
항체 DL-6을 사용하여 천연원으로부터 gD-1을 친화성 정제시키는 것은 매우 효과적이라는 것이 밝혀졌으며, 이로써, 선행기술의 모노클로날 안티-gD 항체 제법을 사용하여 얻어진 것의 두배 내지 세배 과량의 수율로 면역학적 활성 gD-1이 수득된다. 그로써 분리된 감염세포 배지-유래 gD-1은 적어도 예전의 분리물질 정도의 활성을 갖는 보호 면역원임이 밝혀졌다.
본 발명에 의한 그 외의 특색과 장점은, 하기의 바람직한 구체화에 대한 상세한 설명을 참작함으로써 알 수 있을 것이다.
하기 실시예들은 하이브리도마 셀라인 A.T.C.C.Mo.HB8606을 생산하는 본 발명의 실시를 예증해준다.
또한 하기 실시예에서 예중하고 있는 것은, 이들 셀라인에 의해 생산된 모노클로날 항체의 특성화, 증폭 및 성질 결정이며, 하이브리도마 셀라인 A.T.C.C.No.HB8606에 의해 생산된 현재의 바람직한 항체 "DL-6"의 면역학적 특성 및 용도에 특히 중점을 두고 있다.
보다 구체적으로, 실시예 1은 이후의 실시예에서 여러 가지로 사용되는 일반적인 방법 및 물질에 관한 것이다. 실시예 2는 gD-1에 대한 폴리클로날 항체 생산을 위해 쥐를 자극시키는 것 ; 쥐의 비장세포와 쥐의 골수종 세포와의 융합 ; 그리고 셀라인 A.T.C.C.No.HB8606으로 구성되는 하이브리도마 세포의 스크린, 클로닝 및 중식에 관한 것이다. 실시예 3은 전술한 셀라인에 의해 생산된 모노클로날 항체의 면역반응성을 예비 스크린하는 것에 관한 것이다. 실시예 4는, 그의 면역학적 특색 및 그와 결합하는 에피토프의 본질을 보다 완전히 확립하기에 알맞는 모노클로날 항체 DL-6의 보다더 다방면의 스크린에 관한 것이다. 실시예 5는 항체 DL-6을 사용하여 천연원으로부터 gD-1을 친화성 정제하기 위한 과정의 예비 실시에 관한 것이다.
[실시예 1]
A. 세포, 비루스 및 방사성 표지(labelling) 과정
BHK 및 KB세포의 증식과 유지 및 비루스 번식을 위해 사용되는 일반적 조건은 문헌〔Cohen 등의 J.Virol., 14, pp.20-25(1974) ; Cohen 등의 J.Virol., 10, pp.1021-2030(1972)〕에 기재된 바와 같다. 감염시키기 위하여 HSV-1(HF 균주) 20pfu와 HSV-2(Savage 균주) 10pfu를 사용한다. HSV 감염세포를 〔35s〕-메티오닌(특이활성 : 600Ci/mmol) 및 〔2,33H〕-아르기닌(특이활성;15 ci/mmol)으로 표지하는 과정은 문헌[Cohen 등의 J.Virol., 27, pp.172-181(1978) ; Eisenberg 등의 J.Virol., 31, pp. 608-620(1979) ; Eisenberg 등의 J.Virol., 41, pp.478-488(1982) ; Eisenberg 등의 J.Virol., 35, pp.428-435(1980)]에 기재된 바와 같다.
B. 모노클로날 항체
하기 실시예에서 비교목적상 사용되는 모노클로날 항체들(""MCAb's")는 다음과 같다 : MCAb HD-1(Ⅰ군)와 MCAb (Ⅶ군)은 Periera 등의 문헌 〔Infect.Immun., 35, pp. 363-367(1982) 및 Eisenberg 등의 문헌 J.Virol., 41, pp. 478-488 *1982)〕에 기재된 바와 같고, MCAb's 55S, 57S(Ⅴ군), 11S(Ⅲ군), 41S(Ⅳ군) 및 45S(Ⅵ군)은 Showalter 등이 문헌 〔Infect. -Immun., 34, pp. 684-692(1981)〕에 기재된 바와 같다.
C. 합성 펩티드
gD-1과 gD-2 1-23 위치내의 잔기에 기초하는 펩티드에 대한 항체 반응성을 스크린하는데 사용되는 합성 펩티드는 Cohen 등의 문헌〔J.Virol., 49, pp.102-108(1984)〕에 기재된 바와 같이 제조한다. 아미노말단에 시스테인이 첨가된 합성 펩티드 340-356〔1〕과, 카르복시 말단에 시스테인이 첨가된 268-287〔1〕은 Peninsula Labs., Inc.에 의해 제조된다. 합성 펩티드 266-279〔1〕과 266-279〔2〕는 Merrifield의 문헌〔J.Am.Chem.Soc., 85, pp.2149-2154(1963)〕의 기재된 것과 같은 공지의 고상 과정에 따라 제조될 수 있다. 펩티드를 열쇠구멍 삿갓조개 해모시아닌(KLH)에 결합시키는 과정은 일반적으로 Liu 등의 문헌〔 Biochemistry, 18, pp.690-697(1979)〕에 기재된 바와 같다. 면역블롯(immunoblot) 분석에 사용하기 위하여 펩티드를 0.1M 트리스(pH 7.8), 0.15M HCI에 용해시킨다.
D. 천연 및 변성 gD의 제조
다른 언급이 없는한, gD-1과 gD-2는 Eisenberg 등의 문헌〔J.Virol., 41, pp.478-488(1982)〕에 기재된 바와 같이 MCAb HD-1을 사용하여 감염 세포의 세포질 추출물로부터 친화 크로마토그라피에 의해 정제시킨다. 면역흡착 칼럼으로부터 KSCN을 사용하여 용출시키고 0.01M 트리스 (pH 7.5), 0.15 MCnNa, 0.1% Nonidet-P40(NP-40)(TSN 완충액)에 대해 투석시킨 단백질은 "천연"형태라고 명명한다. 변성 물질을 제조하기 위해, 정제된 gD-1 또는 gD-2를 분해성 완충액에 현탁시킴으로써 3% SDS, 100mM 트리스(pH 7.0) 10% 2-메르캅토에탄올 및 0.5% 글리세롤의 최종농도를 산출한다. 이 샘플을 5분간 끓인다. 요오드아세트아미드(pH 8.0인 0.1M 트리스내의 0.1M)를 첨가하여 요오드아세트아미드의 최종농도가 33mM이 되도록 하고, 혼합물을 실온하에 1시간동안 배양한다. 샘플을 TSN 완충액에 대해 다방면으로 투석시킨다.
E. 재조합 gD 물질
1. 숙성 gD-1에 대해 추측된 잔기 1-275로 구성되는 첫 번째 절단 당단백질("1-275〔1〕")은 형질변환된 차이니즈햄스터(Chiness Hamster) 난소세포의 분비 생성물로서 Lasky 등의 문헌〔Biotechnology, 2, pp. 527-532(1984)〕에 기재된 과정에 따라 제조되며, Eisenberg 등의 문헌〔J. Virol., 41, 1099-1104(1982)〕에 기재된 바에 따라 친화 크로마토그라피에 의해 정제된다.
2. gD-1에 대해 추측된 잔기 1-287과 HSV 티미딘 키나제(TK)의 48 카르복시말단 잔기들의 융합 생성물로 구성되는 두 번째 절단 당단백질("1-287〔1〕"은 비루스로 감염된 Hep-2 세포의 분비 생성물로서 Gibson 등의 문헌〔J. Cell. Biochem., Supp. 8B(1984) Abstracts, 13th Annual U.C.L.A
Symposia, #1337, P.191 그외에, J. Virol., 48, pp. 396-404(1983)참조〕에 기재된 과정에 따라 제조된다. 간단히 말해서, 비루스 벡터는 절단된 형태의 gD-1유전자를 포함한다. (유전자 위쪽의 Sac Ⅰ 부위로부터, TK 유전자의 Bgl Ⅱ 부위로 삽입되는 잔기 287상의 Nar Ⅰ 부위까지 뻗쳐있음). 이 단백질은 Noble 등의 문헌〔J. Virol., 129, 218-224(1983)〕에 기재된 바와 같이 MCAb Ⅱ-436-1을 사용하여 친화 정제시킨다.
3. 잔기 8-(약) 300으로 구성된 세 번째의 절단 폴리펩티드("8-300〔1〕")는 Watson 등의 문헌〔Science, 218, pp. 381-384(1982)〕에 기재된 바에 따라 E. 콜리내에서 생산된다.
4. gD-1의 위치-5에서 369까지의 잔기 및 β-갈락토시다제의 11아미노말단 잔기로 구성되는 용합 폴리펩티드("-5-369〔1〕")는, Watson 등의 문헌〔Science, 218, pp. 318-384(1982)〕에 기재된 바에 따라 Nco Ⅰ부터 Nru Ⅱ gD-1까지의 유전자 단편을 벡터내에 존재하는 β-갈락토시다제 유전자 안쪽의 부위에 끼워넣은 M13 mp8 비루스 벡터로 E. 콜리 숙수세포를 형질변환시킴으로써 얻어진다.
F. 면역 침전 및 SDS-PAGE
항혈청 또는 MCAb 및 스타필로코커스 아우레우스 단백질 A(IgG Sorb, 뉴잉글랜드 효소 센타)를 사용하여, HSV-1 또는 HSV-2로 감염된 세포 추출물(6시간동안 감염시킨 세포)로부터 당단백질 D을 면역침전시킨다. SDS-PAGE는 Eisenberg 등의 문헌〔J. Virol., 31, pp. 608-620(1979)〕및 Watson의 문헌〔Gene, 26, pp. 307-312(1983)〕에 기재된 바와같이 0.4% N, N'-디알릴타타르디아미드(DATA)와 가교결합된 10% 아크릴아미드의 평판내에서 수행된다. 방사선 사진용으로 겔을 여과지위에서 건조시키고 코닥 XAR-5 필름과 접촉시켜 놓는다. 형광사진용으로 겔을 앰플리파이(Amplify ; Amersham)로 처리하고 여과지 위에서 건조시킨 후 -70℃에서 코닥 XAR-5 필름에 노출시킨다.
G. 면역블롯 및 중화분석
면역블롯 분석은 Cohen 등의 문헌〔J. Virol., 49, pp. 102-108(1984)〕및 Hebrink 등의 문헌〔J. Immunol. Methods, 48, pp. 672-682(1983)〕에 기재된 바와 같이 수행된다. HSV-1(HF) 또는 HSV-2(Savage)를 이용하는 비루스 중화분석(50%플라크 감소법)은 Cohen 등의 문헌〔J. Virol., 47, pp. 172-11(1978)〕및 Cohen 등의 문헌〔J. Virol., 10, pp. 1021-2040(1972)〕에 기재된 바와같이 수행된다.
[실시예 2]
다음과 같은 과정에 따라 쥐-쥐 하이브리도마 셀라인이 얻어진다. BALB/c 쥐는 실시예 1의 친화 정제 gD-1을 사용하여 고도 면역시키는데, 이때 gD-1은 6
Figure kpo00002
의 초기용량으로 복강내 투여된다〔Long 등의 Infect. Immun., 37, pp. 761-164(1984)참조〕. 면역원 1
Figure kpo00003
을 정맥내 투여한지 3일후에, 비장을 분리해내고, Kennett 등의 문헌〔"모노클로날 항체 하이브리도마 : 생화학적 분석에 있어서의 새로운 차원" ; Plenum Press, New York, N.Y.(1980)〕에 나온 McKearn의 방법(pp. 368-369)에 따라 PEG-융합원을 사용하여 세포를 BALB/c SP 2/0 세포로 융합한다. HAT 처리후에 생육성 세포 군체를 함유하는 웰(wells)로 부터의 상청액을 면역브롯 과정에 의해 스크린하여 gD-특이성 항체의 존재를 확인한다. gD-1과 gD-2에 대한 양성 세포를 서브크론(subclone)하고, 모노클로날 항체 "DL-6"을 생산하는 대표적인 셀라인을 No. HB8606으로 A. T. C. C. 에 기탁하였다. AMICON 여과 농축 후 황산암모늄으로 침전시킴으로써, 이들 네 셀라인이 증식하는 액체배지로부터 모노클로날 항체를 분리시킬 수 있다. 그와는 달리, 농축 액체배지를 단백질 A 세파로즈 컬럼(Pharmacia Corp.)에 흡착시킬 수 있다.
또 다른 교체방법으로서, Kennett 등의 문헌(전술하였음) 403 페이지에 일반적으로 기재된 바와 같이 복수(復水) 법에 의해 모노클로날 항체 증폭된 형태로 제조할 수도 있다. 간단히 약 3×106내지 3×107하이브리도마 세포를, 프리스탄 0.25ml을 넣어준 BALB/c 쥐의 복강내에 주사해준다. 항체는 Eisenberg 등의 문헌〔J. Virol., 41, pp. 1099-1104(1982)〕에 기재된 바와 같이 황산암모늄 침전 및 DEAE 세파덱스에 의하여 복수액으로부터 분리시킬 수 있다. 면역흡착 칼럼을 제조하기 위하여, 분리된 IgG 타입 2항체를 브롬화시아노겐으로 활성화된 세파로스 4B 칼럼에 연결시킬 수 있는데, IgG의 양은 세파로스 1g 당 5-12mg으로 하는 것이 전형적이다. Greenwood 등의 클로르아민 T 방법〔Biochem. J., 89, pp. 114-123(1963)〕, 또는 바람직하게, Liu 등의 락토 퍼옥시다제 방법에 의해서, 정제 항체를125Ⅰ로 요오드화시킬 수 있다.
[실시예 3]
모노클로날 항체 DL-6을 정제된 gD에 대한 면역블롯 분석으로 예비 스크린한 결과, 이것이 천연 및 변성 gD-1 및 gD-2와는 면역반응성이 있으나 재조합 당단백질 1-275〔1〕과는 면역반응성이 없음을 발견하였다. 이로써, 인식된 타입-공통 에피토프는 gD-1과 gD-2의 잔기 340-356사이에 존재하도록 계획된 연속 에피토프(V군)가 아니라는 것을 알 수 있다.
gD-1과 gD-2의 잔기 1-23을 복제하는 합성 펩티드에의 결합이 부재함에 근거하여, 그 부위에 있는 에피토프(Ⅶ군)의 항체인식이 제외된다. A. T. C. C. No. HB8606 배양액에서 복수법에 의해 증폭된 형태로 생산된 DL-6 모노클로날 항체는 하기 실시예에 기재된 바와 같은 다방면의 스크린 과정에 사용된다.
[실시예 4]
항체 DL-6을 감염 세포에 대한 형광 항체분석으로 시험한 결과, 이것이 타입-공통막 면역형광성이라는 것이 밝혀졌으며, 이로써, 당단백질을 세포막에 끼워넣을 경우 인식된 gD-1과 gD-2의 에피토프는 당단백질상의 결합에 유용하다는 것을 알 수 있다.
중화분석(시험관내)을 한 결과, DL-6 항체는 1 : 50 회석시에 HSV-1을 중화시키며 1 : 20 회석시에 HSV-2를 중화시킨다는 것이 밝혀졌는데, 이때 50% 종말점을 사용한다〔Eisenberg 등의 J. Virol., 41, pp. 1099-1104(1982)참조.〕
면역블롯 분석을 사용하여, 하기 표 Ⅱ에 기재된 각종 합성 펩티드에의 결합에 대한 스크린을 한다. 이 표에서, 펩티드중의 아미노산 서열은 처음 두 숫자로 표현되었으며, 괄호안의 수는 서열의 타입 특이성을 가리킨다. 괄호안의 H는 그 서열이 타입 1과 타입 2서열의 혼성체라는 것을 카리킨다.
[표 Ⅱ]
Figure kpo00004
표 Ⅱ의 펩티드를 사용한 면역블롯 분석결과는, DL-6이 펩티드(a)에서 (1)까지 또는 (p)와는 면역반응성이 없으나, gD-1 과 gD-2의 266-279 및 gD-1의 268-287을 나타내는 펩티드(m), (n) 및 (o)와는 상당한 반응성을 갖는다는 사실을 알려준다.
DL-6 면역블롯 분석으로 인해, 투니카마이신 존재하에 배양된 HSV-1 및 HSV-2 감염세포에서 얻은 총 침전물내에 존재하는 gD-1과 gD-2와의 상당한 반응성이 밝혀졌으므로, DL-6에 의해 인식된 에피토프내의 탄수화물 포함은 제외된다.
각종 당단백질 D 유형의 단편 및 재조합 기술에 의해 생산된 유사체 물질과 DL-6과의 면역반응성은 면역블롯에 의해 측정된다. 전술한 바와 같이, DL-6은 Lasky 등의 과정에 의해 생산된 재조합 당단백질 1-275〔1〕과는 본질적으로 반응성이 없다. 그러나 DL-6은 잔기 266-287에 걸쳐있는 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 모든 재조합 시험생성물, 즉 실시예 1에 기재된 재조합 1-287〔1〕, 재조합체8-300〔1〕 및 재조합체-5-396〔1〕과는 면역반응성이 있다.
상기 시험에 의해 산출된 면역 반응성 "프로우필"에 근거하여, 항체 DL-6이라고 표시되는 본 발명 항체에 의해서 인식된 에피토프에 관한 다음과 같은 결론이 제외된다. 본 항체는 천연, 변성 및 비-글리코실화 형태의 gD-1과 gD-2를 인식하는데, 이로써, 에피토프는 타입-공통 또는 본질상 타입-공통인 아미노산 잔기의 연속 서열로 구성된다는 것을 알 수 있다. 본 항체는 gD-1 의 잔기 266-287의 연속 서열을 포함하는 모든 재조합 gD-1 래플리카 및 유사체를 인식한다. 재조합 당단백질 1-275〔1〕의 인식이 결여되었다는 것은, 추측된 잔기 275 너머의 적어도 몇몇 잔기가 에피토프의 인식에 대해 중요하다는 사실 (그리고, 펩티드 266-279〔1〕과의 반응성에 대한 상호관련에 의해 아마도 4 또는 그 이상의 부가적 잔기가 포함될 수 있다는 사실)을 알려준다. 그 반면, 266-279〔1〕, 266-279〔2〕및 268-287〔1〕반응성 펩티드의 타입-특이적 성질과 상호연관시킬 경우, 본 항체의 gD-1 과 gD-2 타입-공통 인식 능력은, 인식된 에피토프가 합성펩티드에 공통적인 타입-공통 서열, 즉 추측 잔기 270-279, PEDPEDSALL로 이루어진 서열을 포함하거나 또는 그 안에 포함된다는 것을 지적해준다.
상기 실시예는, 본 발명에 의한 매우 특이적인 모노클로날 항체가 gD-1 과 gD-2의 잔기 266-287로서 잔존하도록 계획된 아미노산잔기 전부 또는 그 일부분을 복제하는 아미노산 잔기의 연속 서열을 함유하는 펩티드 및 단백질성 물질을 포함한 gD-1, gD-2 및 구조상 관련 화합물을 탐지하고 정량하는데 있어서의 명백한 가치를 예증하기에 적합하다. 하기 실시예는, 이전에 개발된 항체에 비교하여 gD-1, gD-2 및 구조상 관련 화합물에 대한 본 발명 항체의 친화도를 확인하는 연구에 관한 것이다.
[실시예 5]
복수에서 유래된 항체 DL-6을 전술한 바와 같은 브롬화시아노겐-활성 세파로즈 4B 칼럼에 흡착시키고, 친화 정제에 의해 감염세포로부터 gD-1을 분리시키는데 사용한다. 동일한 조건을 사용했을 때, DL-6 항체 칼럼은 (Ⅰ군) MCAb HD-1을 사용한 칼럼에 비해 2배 내지 3배이상의 표적 당단백질에 결합할 수 있게 된다. 더욱이 활성 면역원으로서 DL-6 친화 정제물질을 사용한 쥐에 대하여 예비적 예방접종 연구를 한 결과, 이 물질은 치명적인 비루스 도전에 대한 보호적 면역 반응을 일으키는데 있어서 HD-1 친화 정제물질과 적어도 동일한 정도의 활성을 나타낸다는 것이 밝혀졌다.
"경쟁"분석을 수행하였는데, 이때 모노클로날 항체 DL-6, HD-1, iis 45s 및 170 (100-200
Figure kpo00005
, IgG 150-600ug을 표시)을 세파로즈 4B 칼럼에 결합시키고, 이 칼럼을 사용하여 HSV-1으로 감염된 세포의 세포질 추출물(37℃에서 2시간 동안 배양된 추출물 100
Figure kpo00006
)을 흡착시킨다. 면역 흡착물을 완충액으로 10회 세척하고, 요오드화된 두 번째 항체(계산치 : 250,000cpm)를 첨가한다. 다방면의 세척후, 감마 계수기를 사용하여 군체의 수를 센다. 과잉량의 항체가 칼럼에 사용되었으므로, 이론상으로는 동일안 유형의 어떠한 표지 항체도 칼럼에 부착될 수 없다. 표지된 그의 대응물에 대해 시험된 모든 항체 중에서, DL-6은 표지된 그의 대응물을 제외하고 gD-1에 결합하는 가장 우수한 능력을 나타낸다.
상기 실시예는 쥐의 비장과 종양세포의 화학적으로 촉진된 표준 융합에 의해 형성된 모노클로날 항체-생산 하이브리도마 셀라인에 관한 것이다.
하이브리도마 세포 생산에 대한 각종 기술을 종(種)이 다른 포유동물의 세포에 적용시킴으로써, 아미노산 서열 RNHPEDPEDSALLCOR' (R과 R'는 같거나 다른 아미노산 잔기이거나, 또는 R이 수소이거나 또는 R'가 히드록실이다)를 포함하는 gD-1, gD-2 및 구조상 관련 화합물과의 특이적 면역반응성을 갖는 항체를 생산할 수 있는 본 발명의 하이브리도마 셀라인이 제공됨을 잘 알 수 있을 것이다.
따라서 본 발명에 의해 구체적으로 알 수 있는 것은, 융합이 화학적 매개를 통해 수행되든 혹은 전기적 매개를 통해 수행되든간에, 그리고 전체 세포를 포함하든 혹은 유전학상 중요한 단편을 포함하든 간에, 하이브리도마 셀라인은 인간, 쥐 또는 다른 포유동물 종의 세포물질(또는 그의 종간 화합물)의 유전적 융합에 의해 형성된다는 것이다. 마찬가지로, 상기 실시예의 하이브리도마 전개에 사용된 면역원은 천연원으로부터 유래된 친화 정제 gD-1이었으나, 그에 대한 적합한 대체물로서 여러 가지 면역원을 사용할 수 있다. 전형적인 대체물의 예로써, 부가적 아미노 또는 카르복시말단 아미노산 잔기를 갖거나 갖지않는 글리코실화 또는 비-글리코실화 형태로 제공되는 적합한 미생물 숙주(예 : 배양중의 세균, 효모 및 포유동물 세포)내에서 재조합 기술에 의해 생성된 천연 및 변성형태의 gD-1과 gD-2 폴리펩티드 레플리카 및 gD-2가 있다. 그외의 바람직한 대체물의 예로는, RNHPEDPEDSALLCOR' (여기서 R과 R'는 같거나 다른 아미노산 잔기이거나 또는 R은 수소이거나 또는 R'는 히드록실이다)의 연속서열과 같이 gD-1 또는 gD-2의 266-287 위치에 존재하는 아미노산 잔기 서열의 전부 또는 실질상 면역학적으로 중요한 부분을 복제하는 합성 펩티드가 있다.
이상의 실시예에 기재된 바와 같은 본 발명에서의 여러 가지 수정과 변화는 당업자에게 자명한 것이라 생각되면 따라서 청구범위에 나오는 제한 사항만이 그위에 가해져야 할 것이다.

Claims (7)

  1. 서열 PELA (또는 V) PEDPEDSALLEDPV (또는 A) GTVA(또는 S)의 일부분 또는 전부를 복제하는 아미노산 서열로 구성된 단백질성 물질 및 헤르페스 심플렉스 비루스 타입 1과 2의 당단백질 D와 특이적으로 결합할 수 있는 모노클로날 항체.
  2. 제1항에 있어서, 아미노산 서열 PELA (또는 V) PEDPEDSALL로 구성된 단백질성 물질과 특이적으로 결합할 수 있는 모노클로날 항체.
  3. 제1항에 있어서, 아미노산 서열 LA (또는 V) PEDPEDSALL (또는 A) GTVA (또는 S)로 구성된 단백질성 물질과 특이적으로 결합할 수 있는 모노클로날 항체.
  4. 제1항에 있어서, 아미노산 서열 PEDPEDSALL로 구성된 단백질성 물질과 특이적으로 결합할 수 있는 모노클로날 항체.
  5. 특이적 항체와의 선택적 면역반응을 기초로하여 헤르페스 심플렉스 비루스 타입 1 또는 타입 2의 당단백질 D 또는 면역학적 활성 단편 또는 그의 유사체를 분리시키는 면역학적 방법에 있어서, 제 1항의 모노클로날 항체를 사용하는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 특이적 항체와의 선택적 면역 반응을 기초로하여 헤르페스 심플렉스 비루스 타입 1 또는 타입 2의 당단백질 D 또는 면역학적 활성 단편 또는 그의 유사체를 정량 탐지하는 면역학적 방법에 있어서, 제 1항의 모노클로날 항체를 사용하는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 헤르페스 심플렉스 비루스 타입 1 또는 2의 당단백질 D 또는 아미노산 서열 PELA (또는 V) PEDPEDSALLEDPV (또는 A) GTVA (또는 S)의 일부분 또는 전부를 포함하는 그외의 단백질성 물질의 친화정제에 사용되기 위한, 제 1항의 모노클로날항체가 결합된 상태의 고체 지지체로 구성되는 면역흡착제.
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Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5149660A (en) * 1982-02-18 1992-09-22 University Patents, Inc. Diagnostic reagents relating to herpes simplex virus
DE3510734A1 (de) * 1985-03-25 1986-09-25 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zur herstellung eines fuer herpes simplex virus typ 2 spezifischen antigens, dazu geeignetes mittel und verwendung dieses antigens
US5250410A (en) * 1987-01-27 1993-10-05 Allegheny-Singer Research Institute Rapid detection of herpes virus with lectin
US5646041A (en) * 1987-02-12 1997-07-08 Harfeldt; Elisabeth Monoclonal antibody to herpes simplex virus and cell line producing same
WO1990001324A1 (en) * 1988-08-10 1990-02-22 Stephen Leslie Sacks PRODUCTION OF RADIOIODINATED 1-β-D-ARABINOFURANOSYL)-5(E)-(2-IODOVINYL)URACIL, AND USES THEREOF, AND RELATED ANALOGUES INCORPORATING ALTERNATIVE HALOGEN RADIONUCLIDES, THE GENERAL RADIOHALOGENATION PRECURSORS, 1-(2,3,5-TRI-O-ACETYL-β-D-ARABINOFURANOSYL)-5(Z and E)-(2-TRIMETHYLSILYLVINYL)URACIL, PROCESSES FOR RADIOHA
US5081010A (en) * 1989-02-09 1992-01-14 Eastman Kodak Company Extraction composition, test kit and their use to extract or determine herpes simplex viral antigen
WO1990013652A1 (en) * 1989-05-12 1990-11-15 Triton Diagnostics, Inc. Herpes simplex virus type 2-glycoprotein g proteins and polypeptides
JP3307637B2 (ja) * 1991-03-06 2002-07-24 オーソ ダイアグノスティック システムズ インコーポレイテッド 酵素結合抗体免疫吸着アッセイを改善するために変性した伝播体タンパク質
US5654174A (en) * 1995-07-07 1997-08-05 Competitive Technologies, Inc. Herpes simplex virus glycoprotein D variants
US7267940B2 (en) * 2003-03-04 2007-09-11 Bio-Rad Laboratories, Inc. HSV-2 type-specific immunoassays using glycoprotein G2 peptides
WO2010087813A1 (en) * 2009-01-05 2010-08-05 Dcb-Usa Llc Anti-herpes simplex virus antibodies
US8252906B2 (en) 2009-01-05 2012-08-28 Dcb-Usa Llc Anti-herpes simplex virus antibodies and methods of use thereof
EP2308895A1 (en) 2009-10-01 2011-04-13 Universität Duisburg-Essen Anti-HSV antibody
CA2832738A1 (en) * 2011-04-08 2012-10-11 Duke University Herpes simplex virus
WO2024117057A1 (ja) * 2022-11-28 2024-06-06 マルホ株式会社 抗体またはその抗原結合性断片、およびこれを用いた免疫学的測定装置

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4572896A (en) * 1980-08-27 1986-02-25 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies to herpes simplex virus type I polypeptides
US4430437A (en) * 1980-08-27 1984-02-07 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Test methods employing monoclonal antibodies against Herpes simplex virus types 1 and 2 nucleocapsids proteins
CA1240937A (en) * 1982-07-26 1988-08-23 Gordon R. Dreesman Monoclonal igm antibodies and method of preparation
US4535057A (en) * 1982-07-26 1985-08-13 Amf Incorporated Immunoassay employing monoclonal herpes simplex antibody and biotin-avidin detection system
US4618570A (en) * 1984-03-27 1986-10-21 Konishiroku Photo Industry Co., Ltd. Silver halide photographic materials

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