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KR870002258A - 유전공학적 미생물로부터 정제된 성장호르몬 회수방법 - Google Patents

유전공학적 미생물로부터 정제된 성장호르몬 회수방법 Download PDF

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KR870002258A
KR870002258A KR1019850005918A KR850005918A KR870002258A KR 870002258 A KR870002258 A KR 870002258A KR 1019850005918 A KR1019850005918 A KR 1019850005918A KR 850005918 A KR850005918 A KR 850005918A KR 870002258 A KR870002258 A KR 870002258A
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바트필드 다니엘
블룸버그 슈마르야휴
고렉키 마리안
하다리 단
지비 메나케임
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원본미기재
바이오-테크놀러지 제네랄 코포레이숀
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Abstract

내용 없음

Description

유전공학적 미생물로부터 정제된 성장호르몬 회수방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (45)

  1. 가)세균세포의 세포벽이나 그 단편들을 파열시켜 세포 용해물을 만들고
    나)입상의 불용물을 함유한 침전물을 세포용해물로부터 분리하고
    다)적당한 완충용액중에 위에서 분리한 침전물을 가하여 현탁물을 만들어,
    라)액체와 고체사이에 접촉이 일어나게끔 이 현탁물을 처리하고
    마)일부 또는 전부가 침전된 물질을 액체-고체접촉 현탁물에서 분리해 내어
    바)충분한 량의 물속에서 위에서 분리한 침전물을 넣어 용해시키고, pH를 적당한 알칼리성으로 조절한 용액으로 만들고
    사)적당한 조건하에서 용해된 호르몬이나 그 유사체를 기타 세포성분으로부터 한의여과법으로 분리하여 호르몬이나 그 유사체를 함유한 한의여과액을 얻은 다음,
    아)용해된 호르몬이나 그유사체를 다시 처리하여 정제한 후 농축하므로서 정제된 호르몬 또는 그 유사체를 회수하는 단계로 된 호르몬이나 그 유사체를 인코우드 하는 DNA 순차법으로 진핵세포 성장호르몬이나 그 유사체를 생성시키게 되는 세균세포로부터 정제된 진핵세포 성장호르몬이나 그 유사체를 회수하는 방법.
  2. 청구범위 제1항에 있어서, 호르몬이나 그 유사체가 동물의 성장호르몬이나 그 유사체인 방법.
  3. 청구범위 제2항에 있어서, 호르몬이나 그유사체가 소의 성장호르몬이나 그 유사체인 방법.
  4. 청구범위 제3항에 있어서, 유사체가 천연상태의 소의 성장호르몬의 페닐알라닌 형태의 N 말단에 부가된 아미노산 서열 Met-Asp-Gln로 된 것이고 세균세포가 대장균균주 ATCC No.39806호인 방법.
  5. 청구범위 제3항에 있어서, 유사체가 천연상태의 소의 성장 호르몬의 페닐알라닌 형태의 N말단에 부가된 메티오인 잔기로 된 것이고 세균세포가 대장균균주 ATCC No.39785호인 방법
  6. 청구범위 제1항에 있어서, 호르몬이나 그 유사체가 인간의 성장호르몬 또는 그 유사체인 방법.
  7. 청구범위 제6항에 있어서, 유사체가 인간의 성장호르몬중의 Met14에서 시작되는 아미노산 서열로 된 것이고 세균세포가 대장균균주 ATCC No.39386호인 방법.
  8. 청구범위 제6항에 있어서, 유사제가 천연상태의 인간의 성장호르몬중 N 말단에 메티오인이 먼저 있는 아미노산 서열로 된 것이고 세균세포가 대장균균주 ATCC No.39384호인 방법.
  9. 청구범위 제2항에 있어서, 호르몬이 돼지의 성장호르몬 또는 그것의 유사체인 방법.
  10. 청구범위 제9항에 있어서, 유사체가 천연상태의 돼지의 성장호르몬의 페닐알라닌 형태의 N말단에 부가된 메티오닌 잔기로 된 것이고 세균세포가 대장균균주 ATCC No.39804호인 방법.
  11. 청구범위 제2항에 있어서, 호르몬이나 그 유사체가 닭의 성장호르몬이나 그 유사체인 방법.
  12. 청구범위 제11항에 있어서, 유사체가 천연상태의 닭의 성장호르몬의 페닐알라닌 형태의 N말단에 부가된 메티오닌 잔기로 된 것이고 세균세포가 대장균균주 ATCC No.39792호인 방법.
  13. 청구범위 제1항에 있어서, (가) 단계에 앞서 발효즙 상태의 현탁물속에 세균세포가 이들의 단편들을 유지시키거나 중성 pH의 적당한 완충용액중에 현탁시키는 방법.
  14. 청구범위 제13항에 있어서, 증성 pH가 약 7.4인 방법.
  15. 청구범위 제1항에 있어서, (카)단계에서 세포를 기계적으로 파열시키는 방법.
  16. 청구범위 제1항에 있어서, 적당한 량의 탈염수로 제포용해물을 묽게한 후 입상의 물질을 분리하는 방법.
  17. 청구범위 제1항에 있어서, (나)단계 또는 (마)단계에서의 분리를 원심분리법으로 하는 방법.
  18. 청구범위 제1항에 있어서, (나) 단계 또는 (마)단계에서의 분리를 한의여과법으로 하는 방법.
  19. 청구범위 제1항에 있어서, (라) 단계에서의 처리를 현탁물 중에 존재하는 다당류를 소화시킬 수 있는 적당한 효소와 현탁물을 추가로 적당한 시간동안 접촉시켜서 되는 방법.
  20. 청구범위 제19항에 있어서, 적당한 효소로는 리소자임을 사용하는 방법.
  21. 청구범위 제1항에 있어서, 액체와 고체사이의 접촉이 잘되게 하는 (라)의 단계에서의 처리를 음파파쇄법으로 하는 방법.
  22. 청구범위 제1항에 있어서, 현탁물에서 적당량의 적절한 계면활성제를 첨가하고 적당한 시간동한 현탁물을 배양시켜 (라) 단계에서 현탁물의 액체-고체 접촉이 잘 되게 하여서 되는 방법.
  23. 청구범위 제1항에 있어서, (마)단계에서 액체-고체 접촉 현탁물로부터 일부 또는 전부를 분리한 침전물을 적당량의 적절한 매체중에 다시 현탁시켜 만든 현탁물을 적당한 조건하에서 액체와 고체를 접촉시키고 여기서 얻은 침전물을 액체-고체접촉 현탁물로부터 분리한 다음 (바)단계에서 용해시켜서 되는 방법.
  24. 청구범위 제23항에 있어서, 적절한 매체로서 완충용액 또는 비완충용액을 사용해서 되는 방법.
  25. 청구범위 제23항에 있어서, 생성된 침전물을 다시 현탁시키고 액체-고체사이에 접촉이 잘되게 한 후 최소한 다시 더 분리시켜서 되는 방법.
  26. 청구범위 제1항에 있어서, (바)단계에서의 용해에 소요되는 적당한 알칼리성 pH를 약 9.0-12.0정도로 하는 방법.
  27. 청구범위 제26항에 있어서, 약 9.0-12.0의 pH에서 침전물을 용해시킨 후 pH를 약 10.5정도로 낮추어서 되는 방법.
  28. 청구범위 제1항에 있어서, 적당히 농축된 붕산나트륨 수용액 적당량을 (바)단계에서 얻은 용액에다 첨가하는 방법.
  29. 청구범위 제1항에 있어서, (바)단계에서 용액을 적당한 조건하에서 용액중의 액체와 고체를 접촉시키므로써 정제하고, 적당한 조건하에서 원심분리하여 상청액을 분리한 후 액체를 여과하여 호르몬 또는 그 유사체를 함유한 정제된 용액을 얻은 것으로 해서 되는 방법.
  30. 청구범위 제1항에 있어서, (사)단계에서의 한의여과법에 의한 분리를 약 100K M.W.정도의 절단점을 가진 적당한 막을 사용해서 되는 방법.
  31. 청구범위 제1항에 있어서,(사)단계에서 얻은 잔류물을 최소한 한번 더 한의여과처리한 다음 (아)단계의 처리를 하는 방법.
  32. 청구범위 제31항에 있어서, 잔류물을 적당한 알칼리성 pH인 적당한 완충용액으로 묽게한 다음 다시 한의여과 처리를 하여서 되는 방법.
  33. 청구범위 제32항에 있어서, 적당한 알칼리성 pH를 약 9.0-12.0으로 해서 되는 방법.
  34. 청구범위 제32항에 있어서, 희석과 한의여과를 최소한 한번 더 반복해서 되는 방법.
  35. 청구범위 제31항에 있어서, 한의여과처리도중 잔류물을 거의 일정한 체적으로 유지해서 되는 방법.
  36. 청구범위 제35항에 있어서, 거의 일정한 잔류물 체적에서의 한의여과를 최소한 한번 더 반복하는 방법.
  37. 청구범위 제1항에 있어서, (아)단계에서의 용해된 호르몬의 처리를 이온고환 크로마토그래피로 해서 되는 방법.
  38. 청구범위 제37항에 있어서, 아민을 함유한 이온고환수지를 이용하여 이온교환 크로마토그래피처리하는 방법.
  39. 청구범위 제38항에 있어서, 아민을 함유한 이온교환수지가 디에틸아미노에틸-텍스트란 또는 디에틸 아미노에틸-세파로오스인 방법.
  40. 청구범위 제1항에 있어서, 정제된 호르몬 또는 그 유사체를 한의여과벅으로 농축하는 방법.
  41. 청구범위 제1항에 있어서, 정제된 호르몬 또는 그 유사체를 투석하여 정제한 후 건조시켜서 되는 방법.
  42. 청구범위 제41항에 있어서, 적당한 농도의 적당한 염을 함유한 용액에 대해 투석처리를 해서 되는 방법.
  43. 청구범위 제42항에 있어서, 적당한 염으로는 수산화 암모늄 또는 탄산수소 암모늄을 사용해서 되는 방법.
  44. 청구범위 제41항에 있어서, 동결건조법으로 건조시켜서 되는 방법.
  45. 청구범위 제41항에 있어서, 적당한 온도에서 분무건조법으로 건조시켜서 되는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019850005918A 1984-08-27 1985-08-16 유전공학적 미생물로부터 정제된 성장호르몬 회수방법 KR930009336B1 (ko)

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