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KR20240037188A - 신규의 안정한 항-vista 항체 - Google Patents

신규의 안정한 항-vista 항체 Download PDF

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KR20240037188A
KR20240037188A KR1020237040455A KR20237040455A KR20240037188A KR 20240037188 A KR20240037188 A KR 20240037188A KR 1020237040455 A KR1020237040455 A KR 1020237040455A KR 20237040455 A KR20237040455 A KR 20237040455A KR 20240037188 A KR20240037188 A KR 20240037188A
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South Korea
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vista
antibody
cancer
antibodies
cell
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KR1020237040455A
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Inventor
알랭 벡
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피에르 파브르 메디카먼트
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Publication date
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Abstract

본 발명은 약제 개발에 적합한 항-VISTA 항체, 상기 항체를 포함하는 약제학적 조성물, 및 VISTA-매개된 질환의 치료 방법을 제공한다.

Description

신규의 안정한 항-VISTA 항체
치료용 항체의 개발은 복잡한 과정이다. 다양한 물리화학적, 기능적 불안정성이 항체의 생산이나 치료 효능을 손상시킬 수 있다. 본 개시내용은 약제 개발에 적합한 항-VISTA 항체를 포함하는 약제학적 조성물, 및 VISTA-매개된 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
단클론(monoclonal) 항체는 현재 중추신경계 장애, 감염성 질환, 심혈관 질환을 포함해 암부터 천식까지 광범위한 질환 패널을 포괄하는 적응증을 갖는 바이오-약제의 주요 부류이다. 화학적 안정성은 효능과 안전성 모두에 영향을 미치기 때문에 단백질 치료제 개발에서 주요 관심사이며, 제형, 환경, 조작뿐만 아니라 단백질 자체 구조와 같은 수많은 요인과 연관되어 있다. 항체 약물은 글리칸 구조 차이, 아스파라긴(Asn) 탈아미드화, 아스파테이트(Asp) 이성질체화, 메티오닌/트립토판(Met/Trp) 산화, 및 비-효소적 리신(Lys) 당화를 포함한 광범위한 부수적인 화학적 변화를 나타내며, 이중 일부는 약물의 안전성이나 효능에 영향을 미칠 수 있다. 특히, Asn 및 Asp 잔기의 분해는 시험관내 안정성 및 생체내 생물학적 기능에 영향을 미칠 수 있는 것으로 공지되어 있다. 이러한 반응은 최종 항체 의약품의 적절한 보관 및 제형화 조건을 통해 통제될 수 있지만, 발효, 하류-처리 및 생체내에서의 분해는 충분히 통제할 수 없어 잠재적인 효능 상실 및/또는 제거율 증가로 이어질 수 있다.
Asn 탈아미드화는 재조합 단클론 항체에 영향을 미치는 매우 흔한 비-효소적 변형이다. Asn의 측쇄 카르보닐기는 n+1 펩티드 결합의 질소에 의한 친핵성 공격에 취약하여 준안정한 사이클릭 숙신이미드 중간체를 형성한다. 이어서 숙신이미드 중간체는 Asp(α 펩티드 연결) 또는 이소-Asp(β 펩티드 연결) 최종 생성물(product)로 가수분해된다. 단클론 항체의 경우 Fc 영역과 상보성 결정 영역(CDR)에서 탈아미드화가 보고되었다. CDR 영역의 탈아미드화는 약물 효능에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 다양한 연구에서 CDR 탈아미드화가 표적 결합에 직접적인 영향을 미칠 수 있다고 보고하였다; 예를 들어, 하기의 문헌을 참조한다: Harris et al. J Chromatogr B Biomed Sci Appl. 752(2): 233-245 (2001); Vlasak et al. Anal Biochem. 392(2): 145-154 (2009); Yan et al. J Pharm Sci. 98(10): 3509-3521 (2009); Yang et al. mAbs. 5(5): 787-794 (2013). 놀랍게도, 인간 항-CD52 IgG1에서 Asn33을 Asp 잔기로 대체하여 탈아미드화 생성물을 모방하면 항원 결합 친화도가 400배 감소하였다(Qiu et al. mAbs. 11(7): 1266-1275 (2019)).
면역요법은 암 치료 분야의 판도를 바꾸었다. 종양 항원이 반응을 자극한 후에는 면역 염증 반응이 지속적으로 활성화되지 않도록 하기 위해, 다중 조절 또는 "체크포인트"가 마련되거나 활성화된다. VISTA(T 세포 활성화의 V-도메인 Ig 억제인자)는 T 세포 활성화 및 면역 반응을 조절하는 음성 체크포인트 조절 단백질이다. VISAT는 PD-L1과 같은 여러 면역 체크포인트 단백질을 포함하는 B7 패밀리의 일원이다. 그러나 이 패밀리의 구성원들과 달리, VISTA는 비정상적으로 큰 단일의 Ig-유사 V형 도메인을 포함한다. 또한 VISTA 세포질 꼬리 도메인은 효과기 단백질에 대한 여러 도켓팅 부위(docketing site)를 함유하며, 이는 VISTA가 잠재적으로 수용체와 리간드 모두로 기능할 수 있음을 시사한다.
인간 VISTA에는 면역억제 기능을 갖는 2개의 확인된 결합 상대인 PSGL-1 및 VSIG3이 있다. VISTA는 생리학적 pH에서 VSIG3와 상호작용하지만, 산성 pH에서는 VISTA-발현 세포가 T 세포의 PSGL-1에 결합할 수 있다(Wang et al. Immunology. 156(1): 74-85 (2019); Johnston et al. Nature. 574(7779): 565-570 (2019)). 두 상호작용 모두 T 세포 기능을 억제한다. VSIG8(WO 2016/090347A1) 및 LRIG1(WO 2015/187359)을 포함한 다른 수용체도 또한 보고되었다.
생리학적으로 VISTA는 특히 T 세포 활성화를 조절함으로써 여러 수준에서 면역계에 대한 조절 기능을 발휘한다. 보다 최근에는 VISTA가 말초 T 세포 관용, 특히 미경험 T 세포 정지의 유지에 대한 최초의 체크포인트 조절자로 확인되었다. 암과 관련하여 VISTA는 억제 조절 T 세포(Treg) 및 골수-유래 억제 세포(MDSC)와 같은 면역억제성 종양 침윤 백혈구에서 상향 조절된다. 종양 미세환경에서 VISTA의 존재는 유효 T 세포 반응을 방해하며 전립선, 결장, 피부, 췌장 및 폐를 포함한 수많은 인간의 암과 연루되었다.
암 치료에 사용될 수 있는 여러 길항적 항-VISTA 항체가 기재되었다(ElTanbouly et al. Clin Exp Immunol. 200(2):120-130 (2020); Mehta et al. Sci Rep. 10(1):1 5171 (2020); Yuan et al. Trends Immunol. 42(3): 209-227 (2021); Tagliamento et al. Immunotargets Ther. 10: 185-200 (2021); Thakkar et al. J Immunother Cancer. 10(2): e003382 (2022); WO　2015/097536; WO　2016/094837; WO　2017/181139; WO　2019/183040). 특히, WO 2016/094837에는 VISTA의 항-종양 면역 반응 억제를 억제하여 보호적인 항-종양 면역을 부여할 수 있는 항체가 개시되어 있다. 그러나, 이 항체는 잠재적으로 탈아미드화에 취약한 여러 잠재적 Asn 잔기를 포함하여 약물 효능과 임상 및 제조 개발에 영향을 미칠 수 있다.
따라서 균일하고 안전하며 효과적인 항-VISTA 항체가 필요하다.
본원에 기재된 것과 유사하거나 등가인 모든 방법 및 물질은 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있으며, 적합한 방법 및 물질은 본원에 기재된다. 본 발명의 실시는 달리 명시하지 않는 한, 당해 분야의 기술 내에 있는 통상적인 기법 또는 단백질 화학, 분자 바이러스학, 미생물학, 재조합 DNA 기술 및 약리학을 사용한다. 이러한 기법은 문헌에 충분히 설명되어 있다(예를 들어 하기의 문헌을 참조한다: Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology, Current Protocols; 5th Ed., 2002; Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985; and Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; 3rd Ed., 2001). 본원에 기재된 분자 및 세포 생물학, 단백질 생화학, 효소학 및 의약 및 약학 화학과 관련하여 사용된 명명법, 실험실 절차 및 기법은 당업계에 주지되고 통상적으로 사용되는 것들이다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 기타 참고문헌은 그 전체가 참고로 포함된다. 또한, 물질, 방법 및 실시예는 달리 명시되지 않는 한 예시일 뿐이며 제한하려는 의도가 아니다.
본 발명의 다른 특징 및 장점은 하기의 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백해질 것이다.
발명의 요약
하기의 양태를 본원에 제공한다:
첫 번째 양태에서 본 개시내용은 VISTA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 이 항체는 본원에 제공된 중쇄 및 경쇄를 갖는다. 특히, 본 항-VISTA 항체는 55번 위치에 아스파르트산을 갖는다. 본원에 개시된 항-VISTA 항체는 바람직하게는 탈아미드화에 민감하지 않다.
바람직하게, 항체는 단클론 항체이고, 더욱 바람직하게는 인간화된 항체이다.
또 다른 양태에서, 항체는 세포독성제(cytotoxic)에 접합되어 항체-약물 접합체(antibody-drug conjugate)를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 단클론 항-VISTA 항체의 중쇄를 암호화(encoding)하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 개시내용은 또한 본원에 제공된 단클론 항-VISTA 항체의 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 개시내용은 또한 본원에 제공된 단클론 항-VISTA 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드 중 적어도 하나를 포함하는 발현 벡터(expression vector)를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 상기 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 바와 같은 단클론 항-VISTA 항체의 생산 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 제공된 숙주 세포를 적합한 조건 하에서 배양하는 단계; 및 배양 배지 또는 배양된 세포로부터 항-VISTA 항체를 회수하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 항-VISTA 항체 또는 이의 접합체, 및 약제학적으로 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제(excipient)를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 약제학적 조성물은 완충제, 바람직하게는 시트레이트 완충제, 포스페이트 완충제, 또는 히스티딘 완충제, 더욱 바람직하게는 히스티딘 완충제를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 또한 긴장성 개질제(tonicity modifier)를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 긴장성 개질제는 다가 당(sugar) 알코올, 예를 들어 글리세린, 에리트리톨, 아라비톨, 자일리톨, 소르비톨 및 만니톨과 같은 3가 이상의 당 알코올, 염 및 아미노산; 더욱 바람직하게는 염화나트륨, 숙신산나트륨, 황산나트륨, 염화칼륨, 염화마그네슘, 황산마그네슘 및 염화칼슘으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 염; 훨씬 더 바람직하게는 NaCl, MgCl2 및/또는 CaCl2로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다. 약제학적 조성물은 비이온성 계면활성제, 바람직하게는 폴리소르베이트, 예를 들어 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80을 포함할 수 있다. 바람직하게, 약제학적 조성물은 본원에 개시된 단클론 항-VISTA 항체외에, 25 mM 히스티딘, 150 mM NaCl, 0.3% 폴리소르베이트 80(w/w), pH 6.5를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본원에 개시된 단클론 항-VISTA 항체 또는 면역접합체 또는 약제학적 조성물은 환자의 VISTA-매개된 질환, 특히 암의 치료에 사용하기 위한 것이다. 바람직하게, 이러한 용도는 환자의 면역 반응을 유도하는 것을 포함한다. 바람직하게, 면역 반응은 CD4+ T 세포 증식의 유도, CD8+ T 세포 증식의 유도, CD4+ T 세포 사이토카인 생산의 유도, 및 CD8+ T 세포 사이토카인 생산의 유도를 포함한다. 바람직하게, 본원에 개시된 용도는 항체의 효과기 기능(effector function)의 활성화를 포함한다.
바람직한 양태에서, 본원에 개시된 치료적 용도는 제2 치료제의 투여를 포함한다. 이러한 제2 치료제는 유리하게는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체이다.
바람직하게, 암은 방광암(bladder cancer), 유방암(breast cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 결장암(colon cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 식도암(oesophageal cancer), 나팔관암(fallopian tube cancer), 담낭암(gall bladder cancer), 위장암(gastrointestinal cancer), 두경부암(head-and-neck cancer), 혈액암(haematological cancer)(예를 들어, 백혈병(leukaemia), 림프종(lymphoma) 또는 골수종(myeloma)), 후두암(laryngeal cancer), 간암(liver cancer), 폐암(lung cancer), 림프종, 흑색종(melanoma), 중피종(mesothelioma), 난소암(ovarian cancer), 원발성 복막암(primary peritoneal cancer), 침샘암(salivary gland cancer), 육종(sarcoma), 위암(stomach cancer), 갑상선암(thyroid cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 신세포암종(renal cell carcinoma), 교모세포종(glioblastoma) 및 전립선암(prostate cancer) 중에서 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 대상체(subject)에서 VISTA-매개된 암을 검출하기 위한 시험관내 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체의 생물학적 샘플을 본원에 제공된 바와 같은 단클론 항-VISTA 항체와 접촉시키는 단계; 및 항체와 생물학적 샘플과의 결합을 검출하는 단계를 포함하며, 여기서 항-VISTA 항체의 결합은 VISTA-매개된 암의 존재를 가리킨다. 바람직하게, 단클론 항-VISTA 항체는 검출 가능한 표지(detectable label)로 표지된다.
도 1: 양이온 교환 크로마토그래피, pH 구배로 확인된 전하 변이체. 좌측 패널: Ab3을 포함하는 생성물 1에 대해 여러 피크가 보이며, 이는 상기가 분해, 특히 아미노산 잔기 55에서 탈아미드화됨을 나타낸다. 우측 패널: Ab1을 포함하는 생성물 2에 대해 단일 피크가 보이며, 이는 상기가 더 이상 아미노산 잔기 55에서 탈아미드화에 민감하지 않고 안정함을 나타낸다.
도 2: 직접 rhVISTA ELISA의 3개 실험(N=3)에서 세 번째 시리즈의 항체로 획득된 평균 데이터의 그래프 표현. 색칠 된 사각형: Ab1, 다이아몬드: Ab3 배치 1, 역삼각형: Ab3 배치 2, 삼각형: IgG1 항-VISTA(양성 대조군), 빈 원: c9G4(음성 대조군), 빈 원 및 점선: 항-hVISTA 다클론 항체(양성 대조군).
도 3: 간접 rhVISTA ELISA의 3개 실험(N=3)에서 세 번째 시리즈의 항체로 획득된 평균 데이터의 그래프 표현. 색칠 된 사각형: Ab1, 다이아몬드: Ab3 배치 1, 역삼각형: Ab3 배치 2, 삼각형: IgG1 항-VISTA(양성 대조군), 빈 원: c9G4(음성 대조군), 빈 원 및 점선: 항-hVISTA 다클론 항체(양성 대조군).
도 4: PBMC와의 CHO-VISTA 공배양물에서 T 세포 활성화 및 사이토카인 방출의 평가: 실험의 도식적 표현.
도 5: PBMC와의 CHO-VISTA 공배양물에서 T 세포 활성화 및 사이토카인 방출의 평가: PBMC와의 CHO-VISTA 공배양물에서 항-VISTA Ab1 수용성 유도된 T 세포 활성화 및 사이토카인 방출. (공여자 119). Ab1 침묵: N298A 돌연변이가 있는 Ab1 변이체.
도 6: rhVSIG3-Fc =f([항-VISTA Ab1])에서 rhVISTA-Fc 및 rhVISTA-TagHis의 결합.
도 7: MC38 이종이식 모델에서 수용성 항-VISTA Ab1의 생체내 활성.
도 8: MC38 이종이식 모델에서 침묵 항-VISTA Ab1(N298A 변이체)의 생체내 활성.
본 발명은 본원에 제공된 상세한 설명 및 첨부된 도면으로부터 더욱 완전하게 이해될 것이며, 상기 설명 및 도면은 단지 예시로서 제공되고 본 발명의 의도된 범위를 제한하지 않는다.
정의
구체적으로 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 화학, 생화학, 세포 생물학, 분자 생물학 및 의학 분야의 숙련가가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.
"약" 또는 "대략"이라는 용어는 당업자에게 알려진 주어진 값 또는 범위에 대한 정상적인 오차 범위를 지칭한다. 대개는 주어진 값이나 범위의 20% 이내, 예를 들어 10% 이내, 또는 5% 이내(또는 1% 이하)를 의미한다.
본원에 사용되는 바와 같이, "항체-의존적인 세포-매개된 세포독성", "항체-의존적인 세포 세포독성" 또는 "ADCC"라는 표현은 특정 세포독성 효과기 세포에 존재하는 Fc 수용체(FcR)에 결합된 면역글로불린이 이들 세포독성 효과기 세포가 항원-함유 표적 세포에 특이적으로 결합하고 후속적으로 상기 표적 세포를 세포독소로 사멸시킬 수 있게 하는 세포독성의 한 형태를 지칭한다. 표적 세포의 용해는 세포외에서 이루어지고, 직접적인 세포-간 접촉을 필요로 하며, 보체를 포함하지 않는다. 예를 들어, 용해 또는 식세포작용에 의해 세포 파괴가 발생할 수 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 미국특허 제 5,500,362 호 또는 제 5,821,337 호에 기재된 것과 같은 시험관내 ADCC 분석을 수행할 수 있다. 이러한 분석에 유용한 효과기 세포에는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 자연 살해(NK) 세포가 포함된다. 대안적으로 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어 문헌[Clynes et al, PNAS(USA) 95:652-656(1998)]에 개시된 것과 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 "항체-의존적인 식세포작용" 또는 "ADCP" 또는 "옵소닌화"는 FcyR을 발현하는 비특이적 세포독성 세포가 표적 세포에 결합된 항체를 인식하고 후속적으로 상기 표적 세포의 식세포작용을 일으키는 세포-매개된 반응을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같이, "투여하다" 또는 "투여"는 체외에 존재하는 물질(예를 들어, 본원에 제공된 항-VISTA 항체)을 점막, 피내, 정맥내, 근육내 전달 및/또는 본원에 기재되거나 당업계에 공지된 임의의 다른 물리적 전달 방법 등을 통해 환자에게 주사하거나 달리 물리적으로 전달하는 행위를 지칭한다. 질환 또는 그 증상이 치료되는 경우, 물질의 투여는 전형적으로 상기 질환 또는 그 증상이 시작된 후에 발생한다. 질환 또는 그 증상이 예방되는 경우, 물질의 투여는 일반적으로 상기 질환 또는 그 증상이 시작되기 전에 이루어진다.
본원에 사용되는 바와 같이, "길항제" 또는 "억제제"는 VISTA와 같은 표적 단백질의 생물학적 활성 중 하나 이상을 억제하거나 달리 감소시킬 수 있는 분자를 지칭한다. 일부 구현예에서, VISTA의 길항제(예를 들어, 본원에 제공된 길항성 항체)는 예를 들어 VISTA를 발현하는 세포(예를 들어 VISTA-함유 종양 세포, 조절 T 세포, 골수-유래된 억제 세포 또는 억제성 수지상 세포)의 활성화 및/또는 세포 신호전달 경로를 억제하거나 달리 감소시켜, 길항제 부재 하의 생물 활성에 비해 세포의 생물 활성을 억제시킴으로써 작용할 수 있다. 예를 들어, VISTA의 길항제는 T 세포 면역(CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포 면역) 및/또는 염증전 사이토카인의 발현에 대한 VISTA의 억제 효과를 억제할 수 있다. 보다 구체적으로, VISTA의 길항제는 VISTA와 VSIG3, PSG-L1, VSIG8 및 LRIG1을 포함한 그의 리간드 중 적어도 하나와의 상호작용을 차단하거나 감소시킬 수 있다. 훨씬 더 구체적으로, VISTA의 길항제는 VISTA와 VSIG3 또는 PSG-L1의 상호작용을 차단하거나 감소시킬 수 있다. 바람직하게, VISTA의 길항제는 산성 pH(즉, pH 5.9 내지 6.5)에서 VISTA와 PSG-L1의 상호작용을 차단하거나 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 길항성 항-VISTA-1 항체이다. 특정 길항성 항체는 상기 항원의 생물학적 활성 중 하나 이상을 실질적으로 또는 완전히 억제한다. 예를 들어, 길항성 항-VISTA 항체는 T 세포 면역(CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포 면역) 및/또는 염증전 사이토카인의 발현에 대한 VISTA의 억제 효과를 억제할 수 있다. 보다 구체적으로, 길항성 항-VISTA 항체는 VISTA와 VSIG3, PSG-L1, VSIG8 및 LRIG1을 포함한 그의 리간드 중 적어도 하나와의 상호작용을 차단하거나 감소시킬 수 있다. 훨씬 더 구체적으로, 길항성 항-VISTA 항체는 VISTA와 VSIG3 또는 PSG-L1의 상호작용을 차단하거나 감소시킬 수 있다. 바람직하게, 길항성 항-VISTA 항체는 산성 pH(즉, pH 5.9 내지 6.5)에서 PSG-L1과 VISTA의 상호작용을 차단하거나 감소시킬 수 있다.
"항체" 및 "면역글로불린" 또는 "Ig"라는 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 이들 용어는 본원에서 가장 넓은 의미로 사용되며 특히 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE와 같은 임의의 아이소타입의 단클론 항체(전장 단클론 항체 포함), 다 클론 항체, 다중특이성 항체, 키메라 항체 및 항체 단편을 포함하나, 단 상기 단편은 원하는 생물학적 기능을 유지해야 한다. 이러한 용어는 특정 분자 항원에 결합할 수 있고 디설파이드 결합으로 상호 연결된 2개의 동일한 폴리펩티드 쇄의 쌍으로 구성된 면역글로불린 폴리펩티드 부류 내의 B 세포의 폴리펩티드 생성물을 포함하도록 의도되며, 여기서 각 쌍은 하나의 중쇄(약 50-70 kDa) 및 하나의 경쇄(약 25 kDa)를 갖고, 각 쇄의 각 아미노-말단 부분은 약 100 내지 약 130개 이상 아미노산의 가변 영역을 포함하며, 각 쇄의 각 카르복시-말단 부분은 불변 영역을 포함한다(문헌[Borrebaeck(ed.) (1995) Antibody Engineering, Second Ed., Oxford University Press.]; [Kuby (1997) Immunology, Third Ed., W.H. Freeman and Company, New York)]을 참조한다). 각 중쇄 및 경쇄의 각 가변 영역은 고가변 영역으로도 공지된 3개의 상보성 결정 영역(CDR), 및 아미노-말단에서부터 카르복시-말단까지 하기의 순서로 배열된 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분인 4개의 프레임워크(FR)로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄와 경쇄의 가변 영역에는 항원과 상호작용하는 결합 도메인이 포함되어 있다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 효과기 세포) 및 고전적 보체 시스템의 제1 성분(C1q)을 포함하는 호스트 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체에 의해 결합될 수 있는 특정 분자 항원은 표적 VISTA 폴리펩티드, 단편 또는 에피토프를 포함한다. 특정 항원과 반응하는 항체는, 파지 또는 유사한 벡터에서 재조합 항체 라이브러리의 선택과 같은 재조합 방법에 의해 또는 동물을 항원 또는 항원 암호화 핵산으로 면역화함으로써 생성될 수 있다.
항체는 또한 합성 항체, 단클론 항체, 재조합적으로 생성된 항체, 다중특이성 항체(이중특이성 항체 포함), 인간 항체, 인간화된 항체, 카멜화된 항체, 키메라 항체, 세포내항체(intrabody), 항-이디오타입(항-Id) 항체, 및 상기 중 임의의 것의 기능적 단편(이는 상기 단편이 유래된 항체의 생물학적 기능의 일부 또는 전부를 보유하는 항체 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드의 부분을 지칭한다)을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 본원에 제공된 항체는 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE , IgM, IgD , IgA 및 IgY), 임의의 부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 임의의 하위부류(예를 들어, IgG2a 및 IgG2b)의 것일 수 있다.
"항-VISTA 항체" "VISTA에 결합하는 항체", "VISTA 에피토프에 결합하는 항체"라는 용어 및 유사한 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용되며 VISTA 항원 또는 에피토프와 같은 VISTA 폴리펩티드에 결합하는 항체를 지칭한다. 이러한 항체에는 키메라, 인간화된 및 인간 항체를 비롯한 다클론 및 단클론 항체가 포함된다. VISTA 항원에 결합하는 항체는 관련 항원과 교차반응할 수 있다. 일부 구현예에서, VISTA에 결합하는 항체는 다른 항원, 예를 들어 B7 슈퍼패밀리에 속하는 다른 펩티드 또는 폴리펩티드와 교차반응하지 않는다. VISTA에 결합하는 항체는 예를 들어 면역분석, BIAcore, 또는 당업자에게 공지된 다른 기법에 의해 식별될 수 있다. 항체는, 예를 들어 방사성면역분석(RIA) 및 효소-결합된 면역흡착 분석(ELISA)과 같은 실험 기법을 사용하여 결정된 바와 같이 임의의 교차-반응성 항원 보다 더 높은 친화도로 VISTA에 결합할 때, VISTA에 결합한다, 예를 들어 VISTA에 특이적으로 결합한다. 전형적으로, 특이적 또는 선택적 반응은 배경 신호 또는 소음의 적어도 2배일 수 있으며 배경의 10배를 초과할 수도 있다. 항체 특이성에 관한 논의는 예를 들어 문헌[Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York at pages 332-336]을 참조한다. 일부 구현예에서, 관심 항원에 "결합하는" 항체는 항체가 항원을 발현하는 세포 또는 조직을 표적화하는 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 항원과 결합하고, 다른 단백질과는 그다지 교차-반응하지 않는 항체이다. 이러한 구현예에서, "비-표적" 단백질에 대한 항체의 결합 정도는 형광 활성화 세포 분류(FACS) 분석 또는 방사면역침전법(RIPA)에 의해 결정된 바와 같이 이의 특정 표적 단백질에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만일 것이다. 표적 분자에 대한 항체의 결합과 관련하여, 특정 폴리펩티드 또는 특정 폴리펩티드 표적 상의 에피토프에 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하다" 또는 "특이적이다"라는 용어는 비-특이적 상호작용과 측정 가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은, 예를 들어 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자인 대조용 분자의 결합과 비교하여 분자의 결합을 결정함으로써 측정될 수 있다. 예를 들어, 특이적 결합은 표적과 유사한 대조용 분자, 예를 들어 과량의 표지되지 않은 표적과의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우, 특이적 결합은 표지된 표적과 탐침의 결합이 표지되지 않은 과잉 표적에 의해 경쟁적으로 억제되는 경우를 가리킨다. 본원에 사용된 바와 같은 특정 폴리펩티드 또는 특정 폴리펩티드 표적 상의 에피토프에 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하다" 또는 "특이적인"이라는 용어는, 예를 들어 표적에 대해 적어도 약 10-4 M, 대안적으로 적어도 약 10-5 M, 대안적으로 적어도 약 10-6 M, 대안적으로 적어도 약 10-7 M, 대안적으로 적어도 약 10-8 M, 대안적으로 적어도 약 10-9 M, 대안적으로 적어도 약 10-10 M, 대안적으로 적어도 약 10-11 M, 대안적으로 적어도 약 10-12 M, 또는 그 이상의 KD를 갖는 분자에 의해 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, "특이적 결합"이라는 용어는 분자가 임의의 다른 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프에 실질적으로 결합하지 않고 특정 폴리펩티드 또는 특정 폴리펩티드 상의 에피토프에 결합하는 결합을 지칭한다. 일부 구현예에서, VISTA에 결합하는 항체는 ≤1 μM, ≤100 nM , ≤10 nM, ≤1 nM 또는 ≤0.1 nM의 해리 상수(KD)를 갖는다.
"항원"은 항체가 선택적으로 결합할 수 있는 미리 결정된 항원이다. 표적 항원은 폴리펩티드, 탄수화물, 핵산, 지질, 합텐 또는 기타 자연 발생 또는 합성 화합물일 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 예를 들어 VISTA 폴리펩티드를 포함한 폴리펩티드이다.
"항원 결합 단편", "항원 결합 도메인", "항원 결합 영역"이라는 용어 및 유사한 용어는 항원과 상호작용하고 결합제에 항원(예를 들어, 상보성 결정 영역(CDR))에 대한 이의 특이성 및 친화성을 부여하는 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 부분을 지칭한다.
"항원 결합 단편", "항원 결합 도메인", "항원 결합 영역"이라는 용어 및 유사한 용어는 항원과 상호작용하고 결합제에 항원(예를 들어, 상보성 결정 영역(CDR))에 대한 이의 특이성 및 친화성을 부여하는 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 부분을 지칭한다. 항체의 "항원-결합 단편"이라는 표현은 상기 항체의 표적(일반적으로 항원이라고도 함), 일반적으로 동일한 에피토프에 결합하는 능력을 보유하고 항체의 아미노산 서열의 적어도 5개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 10개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 15개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 20개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 25개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 40개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 50개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 60개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 70개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 80개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 90개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 100개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 125개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 150개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 적어도 175개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열, 또는 적어도 200개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 포함하는 임의의 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질을 가리키고자 한다. 특정 구현예에서, 상기 항원-결합 단편은 상기가 유래된 항체의 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 더욱 바람직한 구현예에서, 상기 항원 결합 단편은 상기가 유래된 항체의 2, 3, 4 또는 5개의 CDR, 보다 바람직하게는 6개의 CDR을 포함한다.
"항원 결합 단편"은 비제한적으로, Fab, Fab', (Fab')2, Fv, scFv(단쇄의 경우 sc), Bis-scFv, scFv-Fc 단편, Fab2, Fab3, 미니바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 및 나노바디, 및 XTEN(연장된 재조합 폴리펩티드) 또는 PAS 모티프와 같은 무질서한 펩티드를 갖는 융합 단백질, 및 폴리(에틸렌) 글리콜과 같은 폴리(알킬렌) 글리콜의 부가("PEG화")(Fv-PEG, scFv-PEG, Fab-PEG, F(ab')2-PEG 또는 Fab'-PEG라 지칭되는 peg화된 단편)(폴리(에틸렌) 글리콜에 대해 "PEG")와 같은 화학적 변형에 의해, 또는 리포솜에의 통합에 의해 반감기가 증가될 수 있는 임의의 단편(상기 단편은 본 발명에 따른 항체의 특징적인 CDR 중 적어도 하나를 갖는다)으로 이루어지는 그룹 중에서 선택될 수 있다. 항체 단편 중에서, Fab는 경쇄와 중쇄의 가변영역, 경쇄의 불변영역, 및 중쇄의 제1 불변영역(CH1)을 포함하는 구조를 가지며, 하나의 항원 결합 부위를 갖는다. Fab'는 중쇄 CH1 도메인의 C 말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 힌지 영역을 갖는다는 점에서 Fab와 다르다. F(ab')2 항체는 Fab'의 힌지 영역의 시스테인 잔기가 디설파이드 결합을 형성함으로써 생성된다. Fv는 중쇄 가변영역과 경쇄 가변영역만을 갖는 최소의 항체 단편으로서, Fv 단편을 생산하는 재조합 기법은 국제공개 WO 88/10649 등에 기재되어 있다. 이중쇄 Fv(dsFv)에서, 중쇄 가변영역과 경쇄 가변영역은 디설파이드 결합을 통해 서로 연결되며, 단쇄 Fv(scFv)에서는 중쇄 가변영역과 경쇄 가변영역이 일반적으로 펩티드 링커를 통해 서로 공유적으로 연결된다. 이들 항체 단편은 프로테이나제를 사용하여 수득될 수 있으며(예를 들어, Fab는 전체 항체를 파파인으로 제한 절단하여 수득될 수 있고, F(ab')2 단편은 펩신으로 제한 절단하여 수득될 수 있다), 바람직하게 유전공학 기법에 의해 수득될 수 있다. 바람직하게, 상기 "항원 결합 단편"은 상기가 유래된 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 쇄의 부분 서열로 구성되거나 이를 포함할 것이며, 상기 부분 서열은 표적에 관하여, 유래된 항체와 동일한 결합 특이성 및 충분한 친화도, 바람직하게는 유래된 항체의 친화도의 적어도 1/100, 더욱 바람직한 방식으로 적어도 1/10의 친화도를 유지하기에 충분하다. 이와 같은 항체 단편은 예를 들어 하기의 문헌에서 찾을 수 있다: Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989); Myers (ed.), Molec. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference, New York: VCH Publisher, Inc.; Huston et al., Cell Biophysics, 22:189-224 (1993); Pl
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ckthun and Skerra, Meth. Enzymol., 178:497-515 (1989) 및 Day, E.D., Advanced Immunochemistry, Second Ed., Wiley-Liss, Inc., New York, NY (1990).
"항원 제시 세포" 또는 "APC"라는 용어는 T 세포와 같은 특정 림프구에 의한 인식을 위해 항원을 처리하고 제시함으로써 세포성 면역 반응을 매개하는 이종 면역 세포 그룹을 지칭한다. APC에는 수지상 세포, 대식세포, 랑게르한스 세포 및 B 세포가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 "결합하다" 또는 "결합"이라는 용어는 생리적 조건 하에서 상대적으로 안정한 복합체를 형성하는 분자 사이의 상호작용을 지칭한다. 상호작용은 예를 들어 수소 결합, 이온 결합, 소수성 상호작용 및/또는 반 데르 발스 상호작용을 포함하는 비공유 상호작용일 수 있다. 복합체는 또한 공유 또는 비공유 결합, 상호 작용 또는 힘에 의해 함께 유지되는 2개 이상의 분자의 결합을 포함할 수 있다. 항체의 단일 항원 결합 부위와 VISTA와 같은 표적 분자의 단일 에피토프 사이의 전체 비공유 상호작용의 강도는 해당 에피토프에 대한 항체 또는 기능적 단편의 친화도이다. 1가 항원에 대한 항체의 결합(k1) 대 해리(k-1)의 비(k1/k-1)는 결합 상수 K이며, 이는 친화도의 척도이다. K 값은 항체와 항원의 다양한 복합체에 따라 다르며 k1 및 k-1 모두에 따라 달라진다. 본원에 제공된 항체에 대한 결합 상수 K는 본원에 제공된 임의의 방법 또는 당업자에게 주지된 임의의 다른 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 하나의 결합 부위의 친화도가 항상 항체와 항원 사이의 실제 상호작용 강도를 반영하는 것은 아니다. 다가 VISTA와 같은 다중 반복 항원 결정기를 포함하는 복합체 항원이 다중 결합 부위를 포함하는 항체와 접촉할 때, 하나의 부위에서 항체와 항원의 상호 작용은 두 번째 부위에서의 반응 확률을 증가시킬 것이다. 다가 항체와 항원 사이의 이러한 다중 상호작용의 강도를 결합활성(avidity)이라고 한다. 항체의 결합활성은 개별적인 결합 부위의 친화도보다 이의 결합 능력을 더 잘 측정할 수 있다. 예를 들어, 높은 결합활성은 IgG보다 낮은 친화도를 가질 수 있는 오량체 IgM 항체에서 때때로 발견되는 바와 같은 낮은 친화도를 보상할 수 있지만, 다가성으로 인해 발생하는 IgM의 높은 결합활성은 항원에 유효하게 결합할 수 있게 한다. 2개 분자가 결합하는지 여부를 결정하는 방법은 당업계에 주지되어 있으며, 예를 들어 평형 투석, 표면 플라스몬 공명 등을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 BSA 또는 카제인과 같은 비특이적 분자에의 결합에 대한 친화도보다 적어도 2배 더 큰 친화도로 VISTA에 결합한다. 보다 특정한 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VISTA에만 결합한다.
본원에 사용되는 바와 같이, "생물학적 샘플" 또는 "샘플"이라는 용어는 환자 또는 대상체와 같은 생물학적 공급원으로부터 수득되는 샘플을 지칭한다. 본원에 사용되는 바와 같은 "생물학적 샘플"은 특히 전체 유기체 또는 이의 조직, 세포 또는 성분 부분의 하위집합(예를 들어, 동맥, 정맥 및 모세혈관을 포함하는 혈관, 비제한적으로 혈액, 혈청, 점액, 림프액, 윤활액, 뇌척수액, 타액, 양수, 양수 제대혈, 소변, 질액 및 정액을 포함한 체액)을 지칭한다. "생물학적 샘플"은 또한 전체 유기체 또는 이의 조직, 세포 또는 성분 부분의 하위집합, 또는 이의 분획 또는 일부로부터 제조된 균질물, 용해물 또는 추출물을 지칭한다. 마지막으로, “생물학적 샘플"은, 단백질이나 핵산 분자와 같은 세포 성분을 포함하는, 유기체가 번식하는 영양 브로쓰 또는 젤과 같은 배지를 지칭한다.
예를 들어, "세포 증식성 장애" 및 "증식성 장애"라는 용어는 어느 정도 비정상적인 세포 증식과 관련된 장애를 지칭한다. 일부 구현예에서, 세포 증식성 장애는 종양 또는 암이다. 본원에 사용되는 바와 같은 "종양"은 악성이든 양성이든 모든 신생물 세포 성장 및 증식, 및 모든 전암성 및 암성 세포 및 조직을 지칭한다. "암", "암성", "세포 증식성 장애", "증식성 장애" 및 "종양"이라는 용어는 본원에서 언급된 바와 같이 상호 배타적이지 않다. "암" 및 "암성"이라는 용어는 전형적으로 조절되지 않는 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물의 생리학적 상태를 지칭하거나 기재한다. 본원에 사용되는 바와 같은 "암"은 원치 않는 성장, 침입 및 특정 조건 하에서 유기체 내 손상된 세포의 전이로 인해 발생하는 임의의 악성 신생물이다. 암을 일으키는 세포는 유전적으로 손상되어 있으며 대개는 세포 분열, 세포 이동 양상, 분화 상태 및/또는 세포 사멸 기전을 제어하는 능력을 상실하였다. 대부분의 암은 종양을 형성하지만 백혈병과 같은 일부 조혈암은 종양을 형성하지 않는다. 따라서, 본원에 사용되는 바와 같은 "암"은 양성 암과 악성 암을 모두 포함할 수 있다. 본원에 사용되는 바와 같은 "암"이라는 용어는 특히 어떠한 제한 없이 본 개시내용의 인간 항체에 의해 치료될 수 있는 임의의 암을 지칭한다. 암의 예로는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병 또는 림프성 악성종양이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 이러한 암의 보다 구체적인 예에는 편평세포암(squamous cell cancer)(예를 들어, 상피 편평세포암(epithelial squamous cell cancer)), 소세포 폐암(small-cell lung cancer), 비-소세포 폐암(non-small cell lung cancer), 폐의 선암종(adenocarcinoma) 및 폐의 편펑 암종(squamous carcinoma)을 포함한 폐암, 복막암(cancer of the peritoneum), 간세포암(hepatocellular cancer), 위장암을 포함한 위암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 구강암(oral cancer), 간암, 방광암, 요로암(cancer of the urinary tract), 간종양(hepatoma), 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁암종, 침샘암, 신장 또는 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간암종, 항문암종(anal carcinoma), 음경암종(penile carcinoma), 흑색종, 다발성 골수종(multiple myeloma) 및 B-세포 림프종(B-cell lymphoma), 뇌암(brain cancer)뿐만 아니라, 두경부암, 및 관련된 전이가 포함된다. 일부 구현예에서, 암은 혈액 생성 조직, 예를 들어 골수 또는 면역계의 세포에서 시작되는 암을 지칭하는 혈액암이다. 혈액암의 예는 백혈병(예를 들어, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 림프구성 백혈병(CLL) 또는 급성 단핵구성 백혈병(AMoL)), 림프종(호지킨 림프종(Hodgkin lymphoma) 또는 비호지킨 림프종) 및 골수종(다발성 골수종, 형질세포종(plasmacytoma), 국소 골수종(localised myeloma) 또는 골수외 골수종(extramedullary myeloma))이 있다.
"화학요법제"는 작용 기전에 관계없이 암 치료에 유용한 화학적 또는 생물학적 작용제(예를 들어, 소분자 약물 또는 생물제, 예를 들어 항체 또는 세포를 포함하는 작용제)이다. 화학요법제에는 표적요법과 기존 화학요법에 사용되는 화합물이 포함된다. 화학요법제는 알킬화제, 대사길항물질, 항종양 항생제, 유사분열 억제제, 염색질 기능 억제제, 항-혈관형성제, 항-에스트로겐, 항-안드로겐 또는 면역조절제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용되는 바와 같이, "CDR"은 면역글로불린(Ig 또는 항체) VH β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내의 3개의 고가변 영역(H1, H2 또는 H3) 중 하나, 또는 항체 VL β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내의 3개의 고가변 영역(L1, L2 또는 L3) 중 하나를 지칭한다. 따라서, CDR은 프레임워크 영역 서열 내에 산재된 가변 영역 서열이다. CDR 영역은 당업자에게 주지되어 있으며, 예를 들어 Kabat에 의해 항체 가변(V) 도메인 내에서 가장 고가변성이 있는 영역으로 정의되었다(Kabat et al. (1977) J. Biol. Chem. 252:6609-6616; Kabat (1978) Adv.Prot.Chem. 32:1-75). Kabat CDR은 서열 가변성을 기반으로 하며 가장 통상적으로 사용된다(Kabat eta/. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD). Chothia는 구조적 루프의 위치를 대신 지칭한다(Chothia and Lesk (1987) J Mol. Biol. 196:901-917). CDR 영역 서열은 또한 보존된 β-시트 프레임워크의 일부가 아닌 잔기로서 Chothia에 의해 구조적으로 정의되었으며, 따라서 상이한 형태를 채택할 수 있다(Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917). Kabat 넘버링 규약을 사용하여 넘버링될 때 Chothia CDR-H1 루프의 단부는 루프의 길이에 따라 H32 내지 H34에서 변한다(이는 Kabat 넘버링 방식이 H35A와 H35B에 삽입을 배치하기 때문이며; 35A도 35B도 존재하지 않는 경우, 루프는 32에서 끝나고; 35A만 존재하는 경우, 루프는 33에서 끝나며; 35A와 35B가 모두 존재하는 경우, 루프는 34에서 끝난다). 두 용어 모두 해당 분야에서 충분히 인식되고 있다. CDR 영역 서열은 또한 AbM, Contact 및 IMGT에 의해 정의되었다. AbM 고가변 영역은 Kabat CDR과 Chothia 구조 루프 사이의 절충안을 나타내며 Oxford Molecular's AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. "contact" 고가변 영역은 이용 가능한 복잡한 결정 구조 분석을 기반으로 한다. 최근에는 범용 넘버링 시스템인 ImMunoGeneTics(IMGT) 정보 시스템®(Lefranc et al. (2003) Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77)이 개발되어 널리 채택되었다. IMGT 범용 넘버링이 항원 수용체, 쇄 유형 또는 종에 관계없이 가변 도메인을 비교하기 위해 정의되었다[Lefranc M.-P. (1997) Immunol. Today 18: 509; Lefranc M.-P. (1999) The Immunologist 7: 132-136]. IMGT 범용 넘버링에서, 보존된 아미노산은 항상 동일한 위치, 예를 들어 시스테인 23(1st-CYS), 트립토판 41(CONSERVED-TRP), 소수성 아미노산 89, 시스테인 104(2nd-CYS), 페닐알라닌 또는 트립토판 118(J-PHE 또는 J-TRP)을 갖는다. IMGT 범용 넘버링은 프레임워크 영역(FR1-IMGT: 위치 1 내지 26, FR2-IMGT: 39 내지 55, FR3-IMGT: 66 내지 104 및 FR4-IMGT: 118 내지 128) 및 상보성 결정 영역: CDR1-IMGT: 27 내지 38, CDR2-IMGT: 56 내지 65 및 CDR3-IMGT: 105 내지 117의 표준화된 한계결정을 제공한다. 끊김은 비어 있는 위치를 나타내므로, CDR-IMGT 길이(괄호 안에 표시되고 점으로 분리됨, 예를 들어, [8.8.13])는 중요한 정보가 된다. IMGT 범용 넘버링은 IMGT Colliers de Perles로서 지정된 2D 그래프 표현[Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., Immunogenetics, 53: 857-883 (2002); Kaas, Q. and Lefranc, M.-P., Current Bioinformatics, 2: 21-30 (2007)], 및 IMGT/3D 구조-DB에서 3D 구조[Kaas, Q., Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., T cell receptor and MHC structural data. Nucl. Acids. Res., 32: D208-D210 (2004)]에 사용된다. 표준 항체 가변 도메인 내 CDR의 위치는 다수 구조의 비교에 의해 결정되었다(Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997); Morea et al., Methods 20:267-279 (2000)). 고가변 영역 내의 잔기 수는 항체마다 다르기 때문에, 표준 위치와 관련된 추가 잔기는 통상적으로 표준 가변 도메인 넘버링 방식(상기 문헌[Al-Lazikani et al.])에서 잔기 번호 옆에 a, b, c 등으로 번호가 지정된다. 이러한 명명법은 당업자에게 유사하게 주지되어 있다.
고가변 영역은 하기와 같은 "연장된 고가변 영역"을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34(L1), 46-56 또는 50-56(L2) 및 89-97 또는 89-96(L3), 및 VH에서 26-35 또는 26-35A(H1), 50-65 또는 49-65(H2) 및 93-102, 94-102 또는 95-102(H3). 상기 Kabat 등에 따르면 가변 도메인 잔기는 이들 각각의 정의에 대해 25개로 넘버링된다. 본원에 사용되는 바와 같이, "HVR" 및 "CDR"이라는 용어는 상호교환적으로 사용된다.
본원에 사용되는 바와 같이, "체크포인트 억제제"는 면역 체크포인트를 표적화하고 상기 면역 체크포인트의 기능을 차단하는 분자, 예를 들어 소분자, 가용성 수용체 또는 항체를 지칭한다. 보다 구체적으로, 본원에 사용되는 바와 같은 "체크포인트 억제제"는 면역 체크포인트의 생물학적 활성 중 하나 이상을 억제하거나 달리 감소시킬 수 있는 분자, 예를 들어 소분자, 가용성 수용체 또는 항체이다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 단백질(예를 들어, 본원에 제공된 길항성 항-VISTA 항체)의 억제제는 예를 들어 상기 면역 체크포인트 단백질을 발현하는 세포(예를 들어, T 세포)의 활성화 및/또는 세포 신호전달 경로를 억제하거나 달리 감소시켜, 길항제 부재 하의 생물학적 활성에 비해 세포의 생물학적 활성을 억제함으로써 작용할 수 있다. 면역 체크포인트 억제제의 예로는 소분자 약물, 가용성 수용체 및 항체가 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 "보체-의존적인 세포독성" 또는 "CDC"라는 용어는 항체가 세포에 위치한 항원에 결합할 때 상기 개략된 기전에 따라 상기 세포의 용해를 초래하는 항체-매개된 보체 활성화 과정을 지칭한다. 보체 활성화 경로는 동족 항원과 복합체를 형성한 분자(예를 들어, 항체)에 보체 시스템의 제1 성분(C1q)이 결합함으로써 시작된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들어 문헌[Gazzano-Santaro et al., J. Immunol. Methods, 202:163(1996)]에 기재된 바와 같은 CDC 분석을 수행할 수 있다. 해당 분야에서, 정상적인 인간 혈청이 보체 공급원으로 사용된다.
"불변 영역" 또는 "불변 도메인"이라는 용어는 항체와 항원의 결합에 직접적으로 관여하지 않지만 Fc 수용체와의 상호작용과 같은 다양한 효과기 기능을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카르복시 말단 부분을 지칭한다. 이 용어는 항원 결합 부위를 함유하는 가변 도메인인 면역글로불린의 다른 부분에 비해 더 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 부분을 지칭한다. 불변 도메인은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 도메인과 경쇄의 CL 도메인을 함유한다.
본원에 기재된 바와 같이, "세포독성제"는 대상체에게 투여될 때 세포 기능을 억제 또는 예방하고/하거나 세포사를 유발함으로써 대상체의 신체에서 세포 증식의 발달, 바람직하게는 암의 발달을 치료 또는 예방하는 작용제를 지칭한다. 본 항체-약물 접합체에 사용될 수 있는 세포독성제는 세포독성 효과 또는 세포 증식 억제 효과를 갖는 임의의 작용제, 이의 일부 또는 잔기를 포함한다. 이러한 작용제의 예에는 (i) 마이크로튜불린 억제제, 유사분열 억제제, 토포이소머라제 억제제 또는 DNA 인터킬레이터로서 기능할 수 있는 화학요법제; (ii) 효소적으로 기능할 수 있는 단백질 독소; 및 (iii) 방사성 동위원소(방사성 핵종)가 있다. 세포독성제는 항체, 예를 들어 항-VISTA 항체에 접합되어 면역접합체를 형성할 수 있다. 바람직하게, 세포독성제는 특정 조건, 예를 들어 산성 조건 하에서 항체로부터 방출되어, 예를 들어 표적 세포의 증식을 방지하거나 세포독성 효과를 나타냄으로써 표적 세포에 치료적으로 영향을 미친다.
본원에 사용되는 바와 같은 "감소된"이라는 용어는 단백질, 예를 들어 VISTA 의 활성이 참조값보다 적어도 1배(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 1000, 10,000배 이상) 더 낮음을 지칭한다. "감소된"은 대상체의 단백질, 예를 들어 VISTA의 활성이 또한 참조 샘플 중의 단백질의 활성보다 또는 상기 단백질의 참조값에 관하여 적어도 5%(예를 들어, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%), 95 %), 99%) 또는 100%) 더 낮음을 나타낸다. 본원에 사용되는 바와 같은 "감소된"이라는 용어는 또한 대상체의 생물마커, 예를 들어 VISTA의 수준이 이의 참조값보다 적어도 1배(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 1000, 10,000배 이상) 더 낮음을 지칭한다. "감소된"은 대상체의 생물마커, 예를 들어 VISTA의 수준을 지칭할 때, 또한 참조 샘플 중의 단백질의 활성보다 또는 상기 마커의 참조값에 관하여 적어도 5%(예를 들어, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%), 95 %), 99%) 또는 100%) 더 낮음을 나타낸다.
본원에 사용되는 바와 같은 "검출"이라는 용어는 정량적 또는 정성적 검출을 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같은 "검출 가능한 탐침"이라는 용어는 검출 가능한 신호를 제공하는 조성물을 지칭한다. 이 용어에는 활성을 통해 검출 가능한 신호를 제공하는 모든 형광단, 발색단, 방사성 표지, 효소, 항체 또는 항체 단편 등이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.
폴리펩티드와 관련하여, 본원에 사용되는 바와 같은 "유도체"라는 용어는 VISTA 폴리펩티드의 아미노산 서열, VISTA 폴리펩티드의 단편, 또는 아미노산 잔기 치환, 결실 또는 부가의 도입에 의해 변경된 VISTA 폴리펩티드에 결합하는 항체를 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 본원에 사용되는 바와 같은 "유도체"라는 용어는 또한 VISTA 폴리펩티드, VISTA 폴리펩티드의 단편, 또는 예를 들어 폴리펩티드에 대한 임의의 유형의 분자의 공유 부착에 의해 화학적으로 변형된 VISTA 폴리펩티드에 결합하는 항체를 지칭한다. 예를 들어, 비제한적으로, VISTA 폴리펩티드, VISTA 폴리펩티드의 단편, 또는 VISTA 항체는, 예를 들어 글리코실화, 아세틸화, peg화, 인산화, 공지된 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해적 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에의 연결 등에 의해 화학적으로 변형될 수 있다. 유도체는 부착된 분자의 유형 또는 위치에서 자연 발생하거나 또는 출발하는 펩티드 또는 폴리펩티드와 상이한 방식으로 변형된다. 유도체는 펩티드 또는 폴리펩티드에 자연적으로 존재하는 하나 이상의 화학기의 결실을 추가로 포함한다. VISTA 폴리펩티드의 유도체, VISTA 폴리펩티드의 단편, 또는 VISTA 항체는 당업자에게 공지된 기법, 예를 들어 비제한적으로 특정 화학적 절단, 아세틸화, 제형화, 튜니카마이신의 대사 합성 등을 사용하는 화학적 변형에 의해 화학적으로 변형될 수 있다. 또한, VISTA 폴리펩티드의 유도체, VISTA 폴리펩티드의 단편, 또는 VISTA 항체는 하나 이상의 비-고전적 아미노산을 함유할 수 있다. 폴리펩티드 유도체는 본원에 기재된 VISTA 폴리펩티드, VISTA 폴리펩티드의 단편, 또는 VISTA 항체와 유사하거나 동일한 기능을 보유한다.
"진단제"라는 용어는 질환의 진단을 돕기 위해 대상체에게 투여되는 물질을 지칭한다. 이러한 물질은 질환을 유발하는 과정의 국소화를 밝히고, 정확히 찾아내고, 정의하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 진단제는 대상체에게 투여되거나 대상체로부터의 샘플과 접촉될 때 암, 종양 형성, 또는 임의의 다른 VISTA-매개된 질환, 장애 또는 상태의 진단을 돕는, 본원에 제공된 항체에 접합된 물질을 포함한다.
"검출 가능한 작용제"라는 용어는 샘플 또는 대상체에서, 원하는 분자, 예를 들어 본원에 제공된 항체의 존재를 확인하는 데 사용될 수 있는 물질을 지칭한다. 검출 가능한 작용제는 시각화될 수 있는 물질 또는 달리 결정 및/또는 측정(예를 들어, 정량분석에 의해) 될 수 있는 물질일 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 "검출"이라는 용어는 정량적 또는 정성적 검출을 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같이, "진단" 또는 "~을 갖는 대상체를 식별하는"은 징후 및 증상으로부터 질환, 상태 또는 손상을 식별하는 과정을 지칭한다. 진단은 특히 개인이 질환 또는 질병(예를 들어, 암)에 걸린지를 결정하는 과정이다. 암은 예를 들어 VISTA와 같은 암과 연관된 마커의 존재를 검출함으로써 진단된다.
작용제, 예를 들어 약제학적 제형의 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 대상체에서 원하는 생물학적 반응을 이끌어내기 위해 필요한 투여량 및 투여 기간 동안 유효한 양을 지칭한다. 이러한 반응에는 치료할 질환 또는 장애의 증상 완화, 질환 또는 질환 자체의 증상 재발의 예방, 억제 또는 지연, 치료가 없을 때와 비교하여 대상체의 수명 증가, 또는 질환 증상이나 질환 자체의 진행을 예방, 억제 또는 지연시키는 것이 포함된다. "유효량"은 특히 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하는데 유효한 작용제의 양이다. 보다 구체적으로, 본원에 사용된 바와 같은 "유효량"은 치료적 이점을 부여하는 작용제의 양이다. 치료 유효량은 또한 작용제의 임의의 독성 또는 해로운 효과보다 치료적으로 유익한 효과가 더 큰 양이다.
유효량은 1회 이상의 투여, 적용 또는 투여량으로 투여될 수 있다. 이러한 전달은 개별 투여량 단위가 사용되는 기간, 작용제의 생체이용률, 투여 경로 등을 포함하는 수많은 변수에 따라 달라진다. 일부 구현예에서, 유효량은 또한 명시된 결과(예를 들어, T 세포 활성화 조절과 같은 면역 체크포인트 생물학적 활성의 억제)를 달성하기 위해 본원에 제공된 항체(예를 들어, 항-VISTA 항체)의 양을 지칭한다. 일부 구현예에서, 이 용어는 주어진 질환, 장애 또는 상태 및/또는 이와 관련된 증상의 중증도 및/또는 기간을 감소 및/또는 개선하기에 충분한 치료법(예를 들어, 항-VISTA 항체와 같은 면역 체크포인트 억제제)의 양을 지칭한다. 이 용어는 또한 주어진 질환, 장애 또는 상태의 진전 또는 진행의 감소 또는 개선, 주어진 질환, 장애 또는 상태의 재발, 발병 또는 개시의 감소 또는 개선, 및/또는 또 다른 치료법(예를 들어, 상기 면역 체크포인트 억제제 이외의 치료법)의 예방 또는 치료 효과(들)의 개선 또는 증대에 필요한 양을 포함한다. 암 치료법의 맥락에서, 치료적 이익은 예를 들어 암의 진행(예를 들어, 암의 한 단계에서 다음 단계로)을 중단하거나 늦추는 것, 암의 증상이나 징후의 악화 또는 열화를 중단하거나 늦추는 것, 암의 중증도 감소, 암의 완화 유도, 종양 세포 증식, 종양 크기 또는 종양 수의 억제, 또는 암을 나타내는 생물마커(들) 수준의 감소 중 어느 하나 또는 이들의 조합을 포함한 암의 임의의 개선을 의미한다. 일부 구현예에서, 항체의 유효량은 약 0.1 ㎎/㎏(대상체의 체중 ㎏당 항체 ㎎) 내지 약 100 ㎎/㎏이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체의 유효량은 약 0.1 ㎎/㎏, 약 0.5 ㎎/㎏, 약 1 ㎎/㎏, 3 ㎎/㎏, 5 ㎎/㎏, 약 10 ㎎/㎏, 약 15 ㎎/㎏, 약 20 ㎎/㎏, 약 25 ㎎/㎏, 약 30 ㎎/㎏, 약 35 ㎎/㎏, 약 40 ㎎/㎏, 약 45 ㎎/㎏, 약 50 ㎎/㎏, 약 60 ㎎/㎏, 약 70 ㎎/㎏, 약 80 ㎎/㎏, 약 90 ㎎/㎏ 또는 약 100 ㎎/㎏(또는 상기 중의 범위)이다.
본원에 사용되는 바와 같이, "효과기 기능"이라는 용어는 면역글로불린(예를 들어, 본원에 기재된 항-VISTA 항체)의 Fc 도메인에 의해 수행되는 생물학적 기능을 지칭한다. 이러한 Fc 도메인-매개된 활성은 살해 세포, 자연 살해 세포, 활성화된 대식세포 등의 면역학적 효과기 세포나 다양한 보체 성분을 통해 매개된다. 이들 효과기 기능은 항체의 Fc 도메인이 상기 수용체 또는 보체 성분(들)에 결합함으로써 상기 효과기 세포 표면 상의 수용체의 활성화를 수반한다. 본원에 사용되는 바와 같은 "효과기 기능"은 항체 의존적인 세포-매개된 세포독성(ADCC), 항체 의존적인 세포 식세포작용(ADCP), 보체 의존적인 세포독성(CDC)과 같은 활성을 포함한다.
본 원에 사용되는 바와 같은 "효과기 세포"는 하나 이상의 FcR을 발현하고 효과기 기능을 수행하는 백혈구를 지칭한다. 세포는 적어도 FcγRI, FCγRII, FcγRIII 및/또는 FcγRIV를 발현하고 ADCC 효과기 기능을 수행한다. 조혈 세포에서의 FcR 발현은 문헌[Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)]의 464페이지 표 3에 요약되어 있다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예에는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 자연 살해(NK) 세포, 단핵구, 세포독성 T 세포 및 호중구가 포함된다.
핵산 분자와 관련하여 사용된 "암호화하다"라는 용어 또는 이의 문법적 등가어는 고유 상태 또는 당업자에게 주지된 방법에 의해 조작시, 전사되어 mRNA를 생성하고 이어서 폴리펩티드 및/또는 이의 단편으로 번역될 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 안티센스 가닥은 이러한 핵산 분자의 보체이며, 암호화 서열은 이로부터 추론될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 "에피토프"라는 용어는 항체가 결합하는 VISTA 폴리펩티드 또는 VISTA 폴리펩티드 단편과 같은 항원의 영역을 지칭한다. 바람직하게, 본원에 사용되는 바와 같은 에피토프는 항체의 하나 이상의 항원 결합 영역에 결합될 수 있고 포유동물(예를 들어, 인간)과 같은 동물에서 항원성 또는 면역원성 활성을 갖는, 즉 면역 반응을 이끌어낼 수 있는 VISTA 폴리펩티드 또는 VISTA 폴리펩티드 단편과 같은 항원의 표면 상의 국소화된 영역이다. 면역원성 활성을 갖는 에피토프는 동물에서 항체 반응을 유도하는 폴리펩티드의 일부이다. 항원성 활성을 갖는 에피토프는 당업계에 주지된 임의의 방법, 예를 들어 면역분석에 의해 결정된 바와 같이 항체가 결합하는 폴리펩티드의 일부이다. 항원성 에피토프는 반드시 면역원성일 필요는 없다. 에피토프는 대개 아미노산이나 당 측쇄와 같은 분자의 화학적으로 활성인 표면 그룹으로 이루어지며 특정한 3차원 구조 특징 및 특정한 전하 특징을 갖는다. 에피토프는 인접한 잔기에 의해 형성되거나 항원 단백질의 폴딩에 의해 근접하게 된 비-인접 잔기에 의해 형성될 수 있다. 인접 아미노산에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 노출 시 유지되는 반면, 비-인접 아미노산에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 상기 노출 시 손실된다. 일부 구현예에서, VISTA 에피토프는 VISTA 폴리펩티드의 3차원 표면 특징이다. 다른 구현예에서, VISTA 에피토프는 VISTA 폴리펩티드의 선형 특징이다. 일반적으로 항원은 여러 개 또는 다수의 상이한 에피토프를 갖고 있으며 다수의 다양한 항체와 반응한다.
본원에 사용되는 바와 같은 "부형제"라는 용어는 제형에 단백질 안정성 증가, 단백질 용해도 증가 및 점도 감소와 같은 유익한 물리적 특성을 부여하는 약물에 대한 희석제, 비히클, 보존제, 결합제 또는 안정화제로서 통상적으로 사용되는 불활성 물질을 지칭한다. 부형제의 예에는 단백질(예를 들어, 혈청 알부민 등), 아미노산(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산, 리신, 아르기닌, 글리신, 히스티딘 등), 지방산 및 인지질(예를 들어, 알킬 설포네이트, 카프릴레이트 등), 계면활성제(예를 들어, SDS, 폴리소르베이트, 비이온성 계면활성제 등), 사카라이드(예를 들어, 슈크로스, 말토스, 트레할로스 등) 및 폴리올(예를 들어 만니톨, 소르비톨 등)이 있으나, 이들로 제한되지는 않는다. 또한, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA](내용 전체가 본원에 참고로 포함된다)을 참조한다.
"프레임워크" 또는 "FR" 잔기라는 용어는 본원에 정의된 고가변 영역 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. FR 잔기는 CDR에 측면 인접한 가변 도메인 잔기이다. FR 잔기는 예를 들어 키메라, 인간화된, 인간, 도메인 항체, 디아바디, 선형 항체 및 이중특이성 항체에 존재한다.
"중쇄"라는 용어는 항체와 관련하여 사용될 때 약 50-70 kDa의 폴리펩티드 쇄를 지칭하며, 여기서 아미노-말단 부분은 약 120 내지 130개 이상 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카르복시-말단 부분을 불변 영역을 포함한다. 불변 영역은 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 기반으로, 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 및 뮤(μ)라고 지칭되는 5개의 별개 유형 중 하나일 수 있다. 별개의 중쇄는 크기가 상이하다: α, δ 및 γ는 약 450개의 아미노산을 함유하는 반면, μ 및 ε은 약 550개의 아미노산을 함유한다. 경쇄와 결합될 때, 이러한 별개의 유형의 중쇄는 주지된 5가지 부류의 항체, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM을 생성하며, IgG의 4개의 하위부류, 즉 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 생성시킨다. 중쇄는 인간 중쇄일 수 있다.
"힌지 영역"이라는 용어는 본원에서 디설파이드 결합에 의해 2개 쇄를 연결하는, IgG 및 IgA 면역글로불린 부류의 중쇄 중심 부분에 있는 유연한 아미노산 스트레치를 지칭한다. 힌지 영역은 일반적으로 인간 IgG1의 Glu216에서 Pro230까지 이어지는 것으로 정의된다(Burton, Mol Immunol, 22: 161-206, 1985). 다른 IgG 아이소타입의 힌지 영역은 중쇄-간 S-S 결합을 형성하는 첫 번째 및 마지막 시스테인 잔기를 동일한 위치에 배치함으로써 IgG1 서열과 정렬될 수 있다. 인간 IgG Fc 부분의 "CH2 도메인"(또한 "Cγ2" 도메인으로도 지칭됨)은 대개 약 아미노산 231에서 약 아미노산 340까지 연장된다. CH2 도메인은 또 다른 도메인과 밀접하게 쌍을 이루지 않는다는 점에서 독특하다. 오히려, 2개의 N-연결된 분지된 탄수화물 쇄가 온전한 고유 IgG 분자의 2개의 CH2 도메인 사이에 삽입된다. 탄수화물은 도메인-도메인 쌍의 대용물을 제공하고 CH2 도메인의 안정화를 도울 수 있는 것으로 추측되어 왔다(Burton, Mol Immunol, 22: 161-206, 1985). "CH3 도메인"은 Fc 부분의 CH2 도메인에 대한 C-말단 잔기의 스트레치(즉, IgG의 약 아미노산 잔기 341부터 약 아미노산 잔기 447까지)를 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같은 "숙주"라는 용어는 동물, 예를 들어 포유동물(예를 들어, 인간)을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 "숙주 세포"라는 용어는 핵산 분자로 형질감염된 특정 대상체 세포 및 이러한 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 지칭한다. 이러한 세포의 자손은 다음 세대에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향 또는 숙주 세포 게놈으로의 핵산 분자의 통합으로 인해 핵산 분자로 형질감염된 모 세포와 동일하지 않을 수 있다.
"인간화된" 항체는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체를 지칭한다. 하나의 구현예에서, 인간화된 항체는 수용자의 CDR로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화성 및/또는 능력을 가진 마우스, 래트, 토끼, 또는 비-인간 영장류와 같은 비-인간 종(공여자 항체)의 CDR로부터의 잔기로 대체되는 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 경우에, 골격 분절 잔기(프레임워크의 경우 FR로 지칭됨)의 일부가 당업자에게 공지된 기법에 따라 결합 친화도를 보존하기 위해 변형될 수 있다(Jones et al., Nature, 321:522-525, 1986). 일부 구현예에서, 인간 면역글로불린의 FR 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 특정 구현예에서, 인간화된 항체는 CDR의 전부 또는 실질적으로 전부가 비-인간 항체의 CDR에 상응하고, FR의 전부 또는 실질적으로 전부가 인간 항체의 FR에 상응하는 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인의 실질적으로 전부를 포함할 것이다. 인간화된 항체는 임의로 항체 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 상기 부분을 포함할 수 있다. 항체, 예를 들어 비-인간 항체의 "인간화된 형태"는 인간화를 거친 항체를 지칭한다. 인간화의 목표는 항체의 전체 항원 결합 친화도와 특이성을 유지하면서 인간에의 도입을 위한 이종 항체(예를 들어, 쥐 항체)의 면역원성을 감소시키는 것이다. 추가 세부사항에 대해서는 예를 들어 하기의 문헌을 참조한다: Jones et al, Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992). 또한 예를 들어 하기의 문헌을 참조한다: Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1 :105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994); 및 미국특허 제 6,982,321 호 및 제 7,087,409 호.
본원에 사용되는 바와 같이, 질환이 있는 대상체를 지칭하는 경우의 "식별"은 대상체를 평가하고 대상체가 질환, 예를 들어 암을 앓고 있음을 결정하는 과정을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같이, "면역 체크포인트" 또는 "면역 체크포인트 단백질"이라는 용어는 T 세포와 같은 일부 유형의 면역계 세포 및 일부 암세포에 의해 만들어진 특정 단백질을 지칭한다. 이러한 단백질은 면역계에서 T 세포 기능을 조절한다. 특히, 이는 면역 반응을 억제하는 데 도움이 되며 T 세포가 암세포를 죽이는 것을 막을 수 있다. 상기 면역 체크포인트 단백질은 T 세포에 신호를 보내고 본질적으로 T 세포 기능을 끄거나 억제하는 특정 리간드와 상호작용함으로써 이러한 결과를 달성한다. 이들 단백질을 억제하면 T 세포 기능이 회복되고 암세포에 대한 면역 반응이 일어난다. 체크포인트 단백질의 예에는 CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, TIGIT, TIM3, GAL9, LAG3, VSIG4, KIR, 2B4(분자의 CD2 패밀리에 속하며 모든 NK, γδ, 및 기억 CD8+(αβ) T 세포 상에서 발현된다), CD160(또한 BY55로서 지칭된다), CGEN-15049, CHK1 및 CHK2 키나제, IDO1, A2aR, 및 다양한 B7 패밀리 리간드가 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다.
본원에 사용되는 바와 같은 "증가된"이라는 용어는 단백질, 예를 들어 VISTA의 활성이 이의 참조값보다 적어도 1배(예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 1000, 10,000배 이상) 더 큰 것을 지칭한다. "증가된"은 대상체의 단백질, 예를 들어 VISTA의 활성에 관하여 언급될 때, 또한 참조 샘플 중의 단백질의 활성보다 또는 상기 단백질에 대한 참조값에 관하여 적어도 5%(예를 들어, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 또는 100%) 더 큰 것을 나타낸다. 본원에 사용되는 바와 같은 "증가된"이라는 용어는 또한 대상체의 생물마커, 예를 들어 VISTA의 수준이 이의 참조값보다 적어도 1배(예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 1000, 10,000배 이상) 더 큰 것을 지칭한다. "증가된"은 또한 대상체의 생물마커, 예를 들어 VISTA의 수준에 관하여 언급될 때, 또한 참조 샘플 중의 수준보다 또는 상기 마커의 참조값에 관하여 적어도 5%(예를 들어, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100%) 더 큰 것을 나타낸다.
"억제하다" 또는 "차단하다"라는 용어 또는 이의 문법적 등가어는 항체와 관련하여 사용될 때, 항체가 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제, 억압 또는 감소시키는 항체를 지칭한다. 항체의 억제 효과는 항원의 생물학적 활성에 측정 가능한 변화를 가져오는 효과일 수 있다. 특정한 경우, "억제하다" 또는 "차단하다"는 항체가 결합하는 항원의 생물학적 활성을 방지하거나 중단시키는 항체를 지칭한다. 차단 항체는, 반응을 유발하지 않고 항원과 결합하지만 나중에 해당 항원과 결합하거나 복합체를 형성하는 다른 단백질을 차단하는 항체를 포함한다. 항체의 차단 효과는 항원의 생물학적 활성에 측정 가능한 변화를 가져오는 효과일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-VISTA 항체는 VSIG3에 결합하는 VISTA의 능력을 차단하며, 이는 VISTA의 억제 신호를 억제하거나 차단하는 결과를 가져올 수 있다. 본원에 기재된 특정 항-VISTA 항체는 적절한 대조군(예를 들어, 대조군은 시험되는 항체로 처리되지 않은 세포이다)과 비교하여, VISTA 발현 세포에서 VISTA의 억제 신호를 약 98% 내지 약 100%까지를 포함하여 억제하거나 차단한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-VISTA 항체는 세포외 도메인 VISTA와 VSIG3의 결합을 차단하고/하거나 VISTA-발현 세포와 VSIG3-발현 세포의 결합을 차단한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-VISTA 항체는 바람직하게는 산성 pH(5.9 내지 6.5 사이의 pH)에서 PSGL-1에 결합하는 VISTA의 능력을 차단하며, 이는 VISTA의 억제 신호를 억제하거나 차단하는 결과를 가져올 수 있다. 본원에 기재된 특정 항-VISTA 항체는 적절한 대조군(예를 들어, 대조군은 시험되는 항체로 처리되지 않은 세포이다)과 비교하여, VISTA 발현 세포에서 VISTA의 억제 신호를 약 98% 내지 약 100%까지를 포함하여 억제하거나 차단한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-VISTA 항체는 바람직하게는 산성 pH(5.9 내지 6.5 사이의 pH)에서 PSGL-1에 대한 세포외 도메인 VISTA의 결합을 차단하고/하거나 바람직하게는 산성 pH(5.9 내지 6.5의 pH)에서, VISTA 발현 세포와 PSGL-1 발현 세포의 결합을 차단한다.
"면역 침윤물" 또는 "종양 면역 세포"라는 용어는, 비제한적으로 림프구(예를 들어, T 세포, B 세포, 자연 살해(NK) 세포), 수지상 세포, 비만 세포, 및 대식세포를 포함한, 종양의 미세환경에 침윤하는 세포를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같이, 다른 치료법의 투여와 관련하여 "조합하여"라는 용어는 하나 초과의 치료법(예를 들어, 항-VISTA 항체 및 면역 체크포인트 억제제, 예를 들어 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체)의 사용을 지칭한다. "조합하여"라는 용어의 사용은 치료법이 대상체에게 투여되는 순서 또는 시간을 제한하지 않는다(예를 들어, 다른 치료법 전에, 이와 동시에 또는 이후에 하나의 치료법). 제1 치료법을 VISTA-매개된 질환, 장애 또는 상태가 있었거나, 있거나 또는 이에 민감한 대상체에게 제2 치료법 투여 전에(예를 들어 1분, 45분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주전에), 동시에, 또는 후에(예를 들어, 1분, 45분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 후에) 투여할 수 있다. 임의의 추가 치료법을 임의의 순서 또는 시간에 다른 추가 치료법과 함께 투여할 수 있다(예를 들어, 항-VISTA 항체 및 면역 체크포인트 억제제, 예를 들어 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체). 일부 구현예에서, 항체를 하나 이상의 치료법(예를 들어, VISTA-매개된 질환, 장애 또는 상태를 예방, 치료, 관리 및/또는 개선하기 위해 현재 투여되는 항체가 아닌 치료법)과 조합하여 투여할 수 있다. 항체와 조합하여 투여할 수 있는 치료법의 비제한적인 예에는 공동 억제 분자에 대한 길항제, 공동 자극 분자에 대한 효능제, 화학요법제, 방사선, 진통제, 마취제, 항생제 또는 면역조절제 또는 미국 약전 및/또는 Physician's Desk Reference에 나열된 임의의 다른 작용제가 포함된다.
"단리된" 항체는 그의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 예를 들어 전기영동(예를 들어, SDS-PAGE, 등전점 전기영동(IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 결정된 바에 같은 95% 또는 99% 초과의 순도로 정제된다. 항체 순도 평가 방법의 검토에 대해서는 예를 들어 문헌[Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87(2007)]을 참조한다.
"단리된" 핵산은 그의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 일반적으로 핵산 분자를 함유하는 세포에 함유된 핵산 분자가 포함되지만, 핵산 분자는 염색체 외에 또는 자연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다.
본원에 사용된 "KD"라는 용어는 특이적인 항체-항원 상호작용의 해리상수를 의미하며, 항원에 대한 항체의 친화도를 측정하는 지표로 사용된다. KD가 낮다는 것은 항원에 대한 항체의 친화도가 높다는 것을 의미한다.
본원에서 의도된 바와 같이, 생물마커, 예를 들어 VISTA의 "수준"은 샘플, 예를 들어 암 환자로부터 수집된 샘플 내 생물마커의 정량적 값으로 이루어진다. 일부 구현예에서, 정량적 값은 실제로 측정된 절대값으로 이루어지지 않고, 오히려 사용된 분석 포맷에서 발생하는 신호 대 소음비를 고려하고/하거나, 분석-간 암 마커 수준 측정의 재현성을 높이기 위해 사용되는 보정 참조 값을 고려한 최종 값으로 이루어진다. 일부 구현예에서, 생물마커, 예를 들어 VISTA의 "수준"은 임의의 단위로 표현되는데, 이는 중요한 것은 동일한 종류의 임의의 단위가 (i) 분석-간에, (ii) 한 암 환자에서 다른 환자, 또는 (iii) 동일한 환자에 대해 별개의 기간에 수행된 분석, 또는 (iv) 환자의 샘플에서 측정된 생물마커 수준과 미리 결정된 참조 값(이를 또한 본원에서 "컷오프" 값이라 칭한다)간에 비교된다는 것이기 때문이다.
"경쇄"라는 용어는 항체와 관련하여 사용되는 경우 약 25 kDa의 폴리펩티드 쇄를 지칭하며, 여기서 아미노-말단 부분은 약 100개 내지 약 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고 카르복시-말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 경쇄의 대략적인 길이는 211 내지 217개의 아미노산이다. 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 카파(κ) 또는 람다(λ)라고 하는 두 가지 유형이 존재한다. 경쇄 아미노산 서열은 당업계에 주지되어 있다. 경쇄는 인간 경쇄일 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, "단클론 항체"라는 용어는 거의 균일한 항체 집단에서 발생하는 항체를 나타내며, 여기서 집단은 최소 비율로 발견될 수 있는 몇 가지 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일한 항체를 포함한다. 단클론 항체는 하이브리도마와 같은 단세포 클론의 성장으로부터 발생하며, 하나의 부류 및 하위부류의 중쇄, 및 한 가지 유형의 경쇄를 특징으로 한다. 본원에 사용되는 바와 같이, 단클론 항체는 항체가 제시될 때 단일 항원 부위(즉, 단일 에피토프)에 특이적 결합을 나타낸다. 단클론 항체는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 생성될 수 있다.
"고유의"라는 용어는 핵산 분자, 폴리펩티드, 숙주 세포 등과 같은 생물학적 물질과 관련하여 사용될 때 자연에서 발견되고 인간에 의해 조작되지 않는 것들을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같이, "PEG화"라는 용어는 전술한 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 폴리에틸렌 글리콜을 도입하여 항체의 혈액 내 체류시간을 증가시키는 처리방법을 의미한다. 구체적으로, 폴리에틸렌 글리콜에 의한 중합체 나노입자의 PEG화에 따라, 나노입자 표면의 친수성이 증대되고, 이에 따라 인체의 대식세포를 포함하여 면역활성에 의한 인지를 방해하는 소위 잠행 효과로 인해 생체내에서의 빠른 분해가 방지되어 외부에서 도입된 병원체, 노폐물, 및 이물질의 식세포작용 및 소화를 유발할 수 있다. 이와 같이, PEG화에 의해 혈액 내 항체의 체류 시간이 증가될 수 있다. 본 발명에서 사용되는 PEG화는 히알루론산의 카르복실기와 폴리에틸렌 글리콜의 아민기의 결합을 기반으로 아미드기가 형성되는 방법에 의해 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 다양한 방법으로 수행될 수 있다. 이때, 사용되는 폴리에틸렌 글리콜은 특별히 제한되지 않으나, 분자량이 100 내지 1,000이고 선형 또는 분지형 구조를 갖는 폴리에틸렌 글리콜을 사용하는 것이 바람직하다.
본원에 사용되는 바와 같이, 핵산 또는 아미노산의 두 서열 사이의 "일치성 백분율" 또는 "%일치성"은 최적 정렬 후에 획득된 비교되는 두 서열 사이의 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 백분율을 의미하며, 이 백분율은 순전히 통계적이고 두 서열 간의 차이는 길이를 따라 무작위로 분포된다. 2개의 핵산 또는 아미노산 서열의 비교는 전통적으로 서열을 최적으로 정렬한 후 비교함으로써 수행되며, 상기 비교는 분절별로 또는 "정렬 창"을 사용하여 수행될 수 있다. 비교를 위한 서열의 최적 정렬은 손으로 비교하는 것 외에도 당업자에게 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다.
참조 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 일치성을 나타내는 아미노산 서열의 경우, 바람직한 예에는 참조 서열, 특정 변형, 특히 적어도 하나의 아미노산의 결실, 추가 또는 치환, 절두 또는 연장을 함유하는 것들이 포함된다. 하나 이상의 연속 또는 비-연속 아미노산의 치환의 경우, 치환된 아미노산이 "동등한" 아미노산으로 대체되는 치환이 바람직하다. 여기서, "동등한 아미노산"이라는 표현은 상응하는 항체 및 하기 정의된 특정 예의 생물학적 활성을 변형시키지 않으면서 구조적 아미노산 중 하나를 대체할 가능성이 있는 임의의 아미노산을 나타내는 것을 의미한다. 동등한 아미노산은 치환된 아미노산과의 구조적 상동성, 또는 생성될 가능성이 있는 다양한 항체 간의 생물학적 활성 비교 시험 결과에 따라 결정될 수 있다.
비제한적인 예로서, 하기 표 1은 상응하는 변형된 항원 결합 단백질의 생물학적 활성의 유의미한 변형을 초래하지 않고 수행될 가능성이 있는 가능한 치환을 요약하고 있으며; 동일한 조건 하에서 역치환이 당연히 가능하다.
[표 1]
본원에 사용되는 바와 같은 "약제학적으로 허용되는"이라는 용어는 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 미국 약전, 유럽 약전 또는 기타 일반적으로 인정되는 약전에 동물, 더욱 특히 인간에서의 사용에 대해 나열된 것을 의미한다. 보다 구체적으로, 담체를 언급할 때, "약제학적으로 허용되는"이라는 표현은 담체(들)가 조성물의 다른 성분(들)과 상용성이며 이의 수용자에게 해롭지 않음을 의미한다. 따라서, 본원에 사용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용되는 담체"라는 표현은 살아있는 유기체를 자극하지 않고 투여되는 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 지칭한다. 담체 유형은 의도된 투여 경로에 따라 선택될 수 있다. 사용되는 각 담체의 양은 해당 분야의 통상적인 범위 내에서 다양할 수 있다. 액체 용액으로 제조되는 조성물 중의 약제학적으로 허용되는 담체로서, 생리식염수, 멸균수, 완충식염수, 알부민 주사액, 덱스트로스 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤 및 이들 중 하나 이상의 혼합물을 살아있는 유기체에 적합한 멸균된 담체로서 사용할 수 있다. 필요한 경우 항산화제, 완충액, 세균발육억제제와 같은 통상적인 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제, 윤활제 등을 추가로 첨가하여, 조성물을 수용액, 현탁액, 및 유화액 등의 주사용 제형, 환제, 캡슐제, 과립제 또는 정제로서 제조할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, "다클론 항체"라는 용어는 하나 이상의 다른, 동일하지 않은 항체 중에서 또는 이들의 존재 하에서 생성된 항체를 지칭한다. 일반적으로, 다클론 항체는 동일하지 않은 항체를 생성하는 여러 다른 B-림프구의 존재 하에서 하나의 B-림프구로부터 생성된다. 일반적으로 다클론 항체는 면역된 동물로부터 직접 수득된다.
본원에 사용되는 바와 같이, "폴리뉴클레오티드", "뉴클레오티드", 핵산" "핵산 분자" 및 기타 유사한 용어는 상호교환적으로 사용되며 DNA, RNA, mRNA 등을 포함한다.
"방사선"이라는 용어는 세포(예를 들어, 암세포)를 죽이기 위해 강렬한 에너지 빔을 사용하는 치료 유형을 지칭한다. 방사선 치료에는 X-선, 양성자 또는 외부 빔을 통해 투여되는 기타 형태의 에너지를 사용하는 것이 포함된다. 방사선 요법은 또한 환자의 신체에 배치되는 방사선 치료(예를 들어, 근접요법)가 포함되며, 이에 따라 방사성 물질이 담긴 작은 용기를 종양 내 또는 종양 근처에 직접 이식한다.
본원에 사용되는 바와 같은 "참조값"이라는 용어는 참조 샘플에서 고려 중인 생물마커(예를 들어, VISTA)의 발현 수준을 지칭한다. 본원에 사용되는 바와 같은 "참조 샘플"은 질환이 없는 것으로 알려진 대상체, 바람직하게는 2명 이상의 대상체로부터 또는 대안적으로 일반 집단으로부터 얻은 샘플을 의미한다. 생물마커의 적합한 참조 발현 수준은 여러 적합한 대상체에서 상기 생물마커의 발현 수준을 측정함으로써 결정될 수 있으며, 이러한 참조 수준은 특정 대상체 집단에 맞게 조정될 수 있다. 참조값 또는 참조 수준은 절대값; 상대값; 상한 또는 하한을 갖는 값; 값의 범위; 평균값; 중앙값, 평균값, 또는 특정 대조군이나 기준선 값과 비교한 값일 수 있다. 참조값은 예를 들어 시험되는 대상체의 샘플에서 얻은 값과 같은 개별 샘플 값을 기반으로 할 수 있지만 더 이른 시점에 있을 수 있다. 참조값은 연대순으로 일치하는 그룹의 대상체 모집단과 같은 다수의 샘플을 기반으로 하거나 시험할 샘플을 포함하거나 제외하는 샘플의 풀을 기반으로 할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, "부작용"이라는 용어는 치료법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)의 원하지 않는 부작용을 포함한다. 원하지 않는 효과가 반드시 부정적인 것은 아니다. 치료법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)으로 인한 부작용은 해롭거나 불편하거나 위험할 수 있다. 부작용의 예로는 설사, 기침, 위장염, 천명음, 메스꺼움, 구토, 식욕부진, 복부 경련, 발열, 통증, 체중 감소, 탈수, 탈모증, 호흡곤란, 불면증, 현기증, 점막염, 신경 및 근육 영향, 피로, 구강 건조 및 식욕 부진, 투여 부위의 발진 또는 부기, 발열, 오한 및 피로 등의 독감 유사 증상, 소화관 문제 및 알레르기 반응이 있다. 환자가 경험하는 추가의 바람직하지 않은 효과는 수없이 많으며 당업계에 공지되어 있다. 많은 내용이 문헌[Physician's Desk Reference(67th ed., 2013)]에 기재되어 있다.
관심 항원(예를 들어, VISTA)에 특이적으로 결합하는 항체(이의 항체 단편 포함)를 포함하는 액체 제형과 관련하여 본원에 사용되는 바와 같은 "안정성" 및 "안정한"이라는 용어는 주어진 제작, 제조, 운송 및 보관 조건 하에서 응집, 분해 또는 단편화에 대한 제형 내 항체(이의 항체 단편 포함)의 내성을 지칭한다. 본 개시내용의 "안정한" 제형은 주어진 제작, 제조, 운송 및 보관 조건 하에서 생물학적 활성을 유지한다. 상기 항체(이의 항체 단편 포함)의 안정성은 참조 제형과 비교된, HPSEC, 역상 크로마토그래피, 정적 광산란(SLS), 동적 광산란(DLS), 퓨리에 변환 적외선 분광학(FTIR), 원형 이색성(CD), 요소 펼침 기법, 고유 트립토판 형광, 시차 주사 열량계 및/또는 ANS 결합 기법에 의해 측정된 바와 같은 응집, 분해 또는 단편화 정도에 의해 평가될 수 있다. 예를 들어, 참조 제형은 150 mM NaCl, 및 0.3% 폴리소르베이트 80을 함유하는 25 mM 히스티딘, pH 6.5 중의 20 ㎎/㎖의 항체(이의 항체 단편 포함)(예를 들어, 비제한적으로 서열번호 21의 중쇄 서열, 서열번호 22의 경쇄 서열을 포함하는 항체)로 이루어지는, -70℃에서 동결된 참조 표준일 수 있으며, 상기 참조 제형은 HPSEC에 의해 규칙적으로 단일 단량체 피크(예를 들어, ≥97% 면적)를 제공한다. 항체(이의 항체 단편 포함)를 포함하는 제형의 전반적인 안정성은 예를 들어 ELISA 및 단리된 항원 분자를 사용하는 방사성면역분석을 포함하는 다양한 면역학적 분석에 의해 평가될 수 있다.
본원에 기재된 방법론에 적용될 수 있는 "대상체"는 인간, 개, 고양이, 소, 염소, 돼지, 돼지, 양 및 원숭이를 포함하는 임의의 포유동물일 수 있다. 인간 대상체는 환자로서 공지될 수 있다. 하나의 구현예에서, "대상체" 또는 "필요로 하는 대상체"는 암을 앓고 있거나, 암을 앓고 있는 것으로 의심되거나, 암 진단을 받은 포유동물을 지칭한다. 본원에 사용되는 바와 같이, "암을 앓고 있는 대상체"는 암을 앓고 있거나 암 진단을 받은 포유동물을 지칭한다. "대조용 대상체"는 암을 앓고 있지 않으며 암을 앓고 있을 것으로 의심되지 않는 포유동물을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같이, "실질적으로 전부"는 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100%를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같이, "치료제"라는 용어는 VISTA-매개된 질환, 장애, 또는 상태 및/또는 이에 관련된 증상 중 하나 이상의 증상의 치료, 예방 또는 완화를 포함하여, 질환, 장애 또는 상태를 치료, 예방 또는 완화하는데 사용될 수 있는 임의의 작용제를 지칭한다. 일부 구현예에서, 치료제는 본원에 제공된 항-VISTA 항체를 지칭한다. 일부 구현예에서, 치료제는 본원에 제공된 항-VISTA 항체 이외의 작용제를 지칭한다. 일부 구현예에서, 치료제는 VISTA-매개된 질환, 장애, 상태, 및/또는 이와 관련된 증상 중 하나 이상의 증상의 치료, 예방 또는 완화에 유용한 것으로 공지되어 있거나, 사용되었거나, 현재 사용되고 있는 작용제이다.
치료법의 조합(예를 들어, 치료제의 사용)은 임의의 두 가지 이상의 단일 치료법의 부가 효과보다 더 유효할 수 있다. 예를 들어, 치료제 조합의 상승 효과는 작용제들 중 하나 이상의 더 낮은 투여량의 사용 및/또는 VISTA-매개된 질환, 장애 또는 상태 및/또는 이와 관련된 증상이 있는 대상체에 대한 작용제의 덜 빈번한 투여를 허용한다. 더 낮은 용량의 치료학적 요법을 활용하고/하거나 치료법을 덜 자주 투여하는 능력은 VISTA-매개된 질환, 장애 또는 상태 및/또는 이와 관련된 증상 중 하나 이상의 증상의 예방, 치료 또는 완화에 있어서 치료법의 효능을 감소시키지 않으면서 대상체에 대한 치료법의 투여와 관련된 독성을 감소시킨다. 또한, 상승 효과는 VISTA-매개된 질환, 장애 또는 상태 및/또는 이와 관련된 증상 중 하나 이상의 증상의 예방, 치료 또는 완화에서 치료법의 개선된 효능을 초래할 수 있다. 마지막으로, 치료법(예를 들어, 치료제)의 조합의 상승 효과는 단일 치료법의 사용과 관련된 유해하거나 원치 않는 부작용을 피하거나 감소시킬 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 "치료 유효량"이라는 용어는 주어진 질환, 장애 또는 상태 및/또는 이와 관련된 증상의 중증도 및/또는 기간을 감소 및/또는 개선하는 데 충분한 치료제(예를 들어, 항-VISTA 항체 또는 본원에 기재된 바와 같은 것을 포함한 임의의 다른 치료제, 예를 들어 체크포인트 억제제, 예를 들어 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체)의 양을 지칭한다. 치료제의 치료 유효량은 주어진 질환, 장애 또는 상태의 진행 또는 진전의 감소 또는 개선, 주어진 질환, 장애 또는 상태의 재발, 발병 또는 발병의 감소 또는 개선 및/또는 또 다른 치료법(예를 들어, 본원에 기재된 것을 포함하는 항-VISTA 항체의 투여 이외의 치료법)의 예방 또는 치료 효과를 개선하거나 증대하기에 필요한 양일 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, "치료법"이라는 용어는 VISTA-매개된 질환, 장애 또는 상태의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용될 수 있는 임의의 프로토콜, 방법 및/또는 작용제를 지칭한다. 일부 구현예에서, "치료법들" 및 "치료법"이라는 용어는 의료인과 같은 당업자에게 공지된 VISTA-매개된 질환, 장애 또는 상태의 치료, 예방 및/또는 개선에 유용한 생물학적 치료법, 지지 요법, 및/또는 기타 치료법을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같이, 대상체의 질환을 "치료하는" 또는 질환을 앓고 있는 대상체를 "치료하는"은 질환의 정도가 감소되거나 예방되도록 대상체에게 약제학적 치료, 예를 들어 약물 투여를 적용하는 것을 의미한다. 예를 들어, 치료는 질환 또는 상태의 적어도 하나의 징후 또는 증상의 감소를 초래한다. 치료에는 약제학적 조성물과 같은 조성물의 투여가 포함되지만 이에 제한되지는 않으며, 예방적으로, 또는 병리학적 사건의 개시 이후에 수행될 수 있다. 치료는 1회 초과의 작용제 및/또는 치료의 투여가 필요할 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 용어는 면역 조절에 반응하는 질환의 진행, 중증도 및/또는 기간의 감소 또는 개선을 지칭하며, 이와 같은 조절은 T 세포 활성화의 증가로부터 발생한다.
"종양 미세환경"이라는 용어는 종양이 존재하는 세포 환경을 지칭한다. 종양 미세환경에는 주변 혈관, 면역 세포, 섬유아세포, 골수 유래 염증 세포, 림프구, 신호 전달 분자 및 세포외 기질이 포함될 수 있다.
"가변 도메인" 또는 "가변 영역"이라는 용어는, 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 아미노 말단에 위치하고 중쇄에 약 120 내지 130개의 아미노산 길이 및 경쇄에 약 100 내지 110개의 아미노산 길이를 가지며, 특정 항원에 대한 각 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용되는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 일부를 지칭한다. 가변 도메인은 서로 다른 항체 사이에서 서열이 광범위하게 상이하다. 서열의 가변성은 CDR에 집중되는 반면, 가변 도메인의 덜 가변적인 부분은 프레임워크 영역(FR)으로서 지칭된다. 각 가변 영역은 4개의 FR에 연결된 3개의 CDR을 포함한다. 경쇄와 중쇄의 CDR은 주로 항체와 항원의 상호작용을 담당한다. FR은 항원 결합에 직접적으로 관여하지는 않지만, 분자의 폴딩을 결정하고 이에 따라 항원과의 상호작용을 위해 가변 영역 표면에 제시되는 CDR의 양을 결정한다. 일부 구현예에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다.
항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 중쇄의 가변 도메인은 "VH"로서 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 도메인은 "VL"로서 지칭될 수 있다. 이들 도메인은 일반적으로 항체의 가장 가변적인 부분이며 항원-결합 부위를 포함한다.
VISTA 또는 항-VISTA 항체와 관련하여 사용되는 "변이체"라는 용어는 고유 또는 변형되지 않은 서열과 비교하여 하나 이상(예를 들어, 약 1 내지 약 25개, 약 1 내지 약 20개, 약 1 내지 약 15개, 약 1개 내지 약 10개, 또는 약 1개 내지 약 5개) 아미노산 서열 치환, 결실 및/또는 부가를 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 예를 들어, VISTA 변이체는 고유 VISTA의 아미노산 서열에 대한 하나 이상(예를 들어, 약 1 내지 약 25개, 약 1 내지 약 20개, 약 1 내지 약 15개, 약 1 내지 약 10개, 또는 약 1 내지 약 5개)의 변화로부터 발생할 수 있다. 또한 예로서, 항-항-VISTA 항체의 변이체는 고유 또는 이전에 변형되지 않은 항-항-VISTA 항체의 아미노산 서열에 대한 하나 이상(예를 들어, 약 1 내지 약 25개, 약 1 내지 약 20개, 약 1 내지 약 15개, 약 1개 내지 약 10개, 또는 약 1개 내지 약 5개)의 변화로부터 발생할 수 있다. 바람직하게, 항-VISTA 항체의 변이체는 고유 또는 이전에 변형되지 않은 항-항-VISTA 항체의 아미노산 서열에 대한 하나의 변화로부터 발생할 수 있다. 일부 구현예에서, VISTA 변이체 또는 항-VISTA 항체 변이체는 적어도 각각 VISTA 또는 항-VISTA 항체 기능적 활성을 유지한다. 일부 구현예에서, 항-VISTA 항체 변이체는 CDR에서 탈아미드화를 겪지 않는다. 일부 구현예에서, 항-VISTA 항체 변이체는 VISTA에 결합하고/하거나 VISTA 활성에 길항적이다. 일부 구현예에서, 항-VISTA 항체 변이체는 CDR에서 탈아미드화를 겪지 않고, VISTA에 결합하고/하거나 VISTA 활성에 길항적이다. 변이체는 대립유전자 또는 스플라이스 변이체와 같이 자연적으로 발생하거나 인공적으로 생성될 수 있다. 일부 구현예에서, 변이체는 VISTA 또는 항-VISTA 항체 VH 또는 VL 영역 또는 하위영역을 암호화하는 핵산 분자의 단일 뉴클레오티드 다형성(SNP) 변이체에 의해 암호화된다. 폴리펩티드 변이체는 변이체를 암호화하는 상응하는 핵산 분자로부터 제조될 수 있다.
"벡터"라는 용어는 핵산 분자를 숙주 세포에 도입하는 데 사용되는 물질을 지칭한다. 특히, 본원에 사용된 바와 같은 "벡터"는 연결된 또 다른 핵산 분자를 전파할 수 있는 핵산 분자이다. 벡터의 한 가지 예는 추가적인 DNA 분절이 결찰될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA 루프를 의미하는 "플라스미드"이다. 벡터의 또 다른 예는 바이러스 벡터이며, 여기서 추가적인 DNA 분절이 바이러스 게놈에 결찰될 수 있다. 특정 벡터는 이것이 도입되는 숙주 세포에서 자율 복제가 가능하다(예를 들어, 세균 복제 기원을 갖는 세균 벡터 및 에피솜 포유 동물 벡터). 다른 벡터(예를 들어, 비-에피솜 포유동물 벡터)는 숙주 세포 내로 도입 시 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있으며, 이로써 숙주 게놈과 함께 복제된다. 따라서 "벡터"라는 용어는 자기-복제 핵산 구조로서의 벡터뿐만 아니라 이것이 도입된 숙주 세포의 게놈에 통합된 벡터도 포함한다. 사용하기에 적합한 벡터에는 예를 들어 발현 벡터, 플라스미드, 파지 벡터, 바이러스 벡터, 에피솜 및 인공 염색체가 포함되며, 이는 숙주 세포의 염색체로의 안정적인 통합을 위해 작동할 수 있는 선택 서열 또는 마커를 포함할 수 있다.
특정 벡터는 작동적으로 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터"(또는 간단히 "발현 벡터")로서 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기법에 유용한 발현 벡터는 플라스미드 형태이다. 본 명세서에서, "플라스미드"와 "벡터"는, 플라스미드가 가장 통상적으로 사용되는 벡터 형태이므로 상호교환적으로 사용될 수 있다. 그러나, 본 발명은 세균 플라스미드, YAC, 코스미드, 레트로바이러스, EBV-유래된 에피솜, 및 당업자가 관심 항체(예를 들어, 항-VISTA 항체)의 중쇄 및/또는 경쇄의 발현을 보장하는데 편리한 것으로 알 수 있는 모든 다른 벡터와 같은 발현 벡터의 형태를 포함하도록 의도된다. 당업자는 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 다른 벡터 또는 동일한 벡터에 클로닝될 수 있음을 인식할 것이다.
벡터는 하나 이상의 선택 가능한 마커 유전자 및 적절한 발현 조절 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 포함될 수 있는 선택 가능한 마커 유전자는 항생제 또는 독소에 대한 내성을 제공하고, 영양요구성 결핍을 보완하거나, 배양 배지에 없는 중요한 영양분을 공급한다. 발현 조절 서열은 구성적 및 유도성 프로모터, 전사 인핸서, 전사 종결자 등을 포함할 수 있으며, 이는 당업계에 주지되어 있다. 2개 이상의 핵산 분자가 공동 발현되어야 하는 경우(예를 들어 항체 중쇄 및 경쇄 모두), 두 핵산 분자는 예를 들어 단일 발현 벡터 또는 별도의 발현 벡터에 삽입될 수 있다. 단일 벡터 발현의 경우, 암호화 핵산은 하나의 공통 발현 조절 서열에 작동적으로 연결되거나 하나의 유도성 프로모터 및 하나의 구성적 프로모터와 같은 상이한 발현 조절 서열에 연결될 수 있다. 숙주 세포 내로의 핵산 분자의 도입은 당업계에 주지된 방법을 사용하여 확인될 수 있다. 이러한 방법에는 예를 들어 노던 블롯 또는 mRNA의 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 증폭과 같은 핵산 분석, 또는 유전자 산물의 발현을 위한 면역블롯팅, 또는 도입된 핵산 서열 또는 해당 유전자 산물의 발현을 시험하기 위한 다른 적합한 분석 방법이 포함된다. 당업자는 핵산 분자가 원하는 생성물(예를 들어, 본원에 제공된 항-VISTA 항체)을 생성하기에 충분한 양으로 발현된다는 것을 이해하며, 발현 수준을 당업계에 주지된 방법을 사용하여 최적화하여 충분한 발현을 획득할 수 있다는 것도 이해한다.
"VISTA" 또는 "VISTA 폴리펩티드"라는 용어 및 유사한 용어는 인간 염색체 10 개방 판독 프레임 54(VISTA) 유전자(이는 또한 당해 분야에서 B7-H5, 혈소판 수용체 Gi24, GI24, 스트레스 유발 분비 단백질1, SISP1 및 PP2135로서 공지되어 있다)에 의해 암호화되고, 예를 들어 하기의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드("폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다):
및 SNP 변이체를 포함한 관련 폴리펩티드를 지칭한다. VISTA 폴리펩티드는 아미노산 서열 내에 신호 서열(잔기 1-32; 문헌[Zhang et al., Protein Sci. 13:2819-2824 (2004)]을 참조한다); 면역글로불린 도메인 - IgV 유사(잔기 33-162); 및 막관통 영역(잔기 195-215)을 포함한 다수의 별개의 영역을 포함하는 것으로 입증되었거나 예측된다. 성숙한 VISTA 단백질은 서열번호 1의 아미노산 잔기 33-311을 포함한다. VISTA 단백질의 세포외 도메인은 서열번호 1의 아미노산 잔기 33-194를 포함한다. 관련 폴리펩티드에는 대립유전자 변이체(예를 들어, SNP 변이체); 스플라이스 변이체; 단편; 유도체; 치환, 결실 및 삽입 변이체; 융합 폴리펩티드; 및 바람직하게는 VISTA 활성을 유지하고/하거나 항-VISTA 면역 반응을 생성하기에 충분한 종간 상동체가 있다. VISTA는 고유 또는 변성된 형태로 존재할 수 있다. 본원에 기재된 VISTA 폴리펩티드는 인간 조직 유형 또는 다른 공급원과 같은 다양한 공급원으로부터 단리되거나 재조합 또는 합성 방법에 의해 제조될 수 있다. "고유 서열 VISTA 폴리펩티드"는 자연에서 유래된 상응하는 VISTA 폴리펩티드와 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 고유 서열 VISTA 폴리펩티드는 자연으로부터 단리될 수 있거나 재조합 또는 합성 수단에 의해 생성될 수 있다. "고유 서열 VISTA 폴리펩티드"라는 용어는 구체적으로 특정 VISTA 폴리펩티드의 자연 발생 절두된 또는 분비된 형태(예를 들어, 세포외 도메인 서열), 자연 발생 변이체 형태(예를 들어, 대안적으로 스플라이싱된 형태) 및 폴리펩티드의 자연 발생 대립유전자 변이체를 포함한다.
VISTA 폴리펩티드를 암호화하는 cDNA 핵산 서열은 예를 들어 하기를 포함한다:
VISTA는 골수 세포 집단, 특히 골수 유래 억제 세포(MDSC), 호중구, 단핵구, 대식세포 및 수지상 세포에서 주로 발현된다. VISTA는 조절 T 세포 및 CD4+ 미경험 T 림프구에서도 발현될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이, VISTA는 면역 조절제, 즉 면역 반응의 음성 체크포인트 조절제(예를 들어, 면역 반응을 억제하거나 억압한다)이다. VISTA는 T 세포 기능의 음성 체크포인트 조절자로 확인되었으며 다양한 자가면역 인간 및 마우스 모델에서 자가면역 반응을 억제하는 것으로 공지되어 있다. VISTA는 특히 종양 형성을 촉진하고 T 세포 기능을 차단하며 대식세포와 면역억제성 골수 유래 억제 세포(MDSC)의 활성을 조절하는 것으로 나타났다. VISTA는 억제 조절 T 세포(Treg) 및 MDSC와 같은 면역억제성 종양 침윤 백혈구에서 상향조절된다. 종양 미세환경에 VISTA의 존재는 효과적인 T 세포 반응을 방해하고 전립선암, 결장암, 피부암, 췌장암, 폐암을 비롯한 수많은 인간 암과 관련이 있다(ElTanbouly et al. Clin Exp Immunol. 200(2):120-130 (2020); Mehta et al. Sci Rep. 10(1):1 5171 (2020); Yuan et al. Trends Immunol. 42(3): 209-227 (2021); Tagliamento et al. Immunotargets Ther. 10: 185-200 (2021); Thakkar et al. J Immunother Cancer. 10(2): e003382 (2022); WO　2015/097536; WO　2016/094837; WO　2017/181139; WO　2019/183040)
VISTA 폴리펩티드에 대한 오솔로그(ortholog)도 당업계에 주지되어 있다. 예를 들어, VISTA 폴리펩티드에 대한 마우스 오솔로그는 T 세포 활성화의 V-영역 면역글로불린-함유 억제제(VISTA)(또한 PD-L3, PD-1H, PD-XL, Pro1412 및 UNQ730으로도 공지됨)이며, 인간 폴리펩티드와 대략 70%의 서열 일치성을 공유한다. VISTA의 오솔로그는 침팬지, 소, 래트 및 제브라피시를 포함한 추가 유기체에서도 찾을 수 있다.
"VISTA-발현 세포", "VISTA의 발현을 갖는 세포" 또는 이의 문법적 등가어는 세포 표면에서 내인성 또는 형질감염된 VISTA를 발현하는 세포를 지칭한다. VISTA 발현 세포에는 VISTA-보유 종양 세포, 조절 T 세포(예를 들어, CD4+ Foxp3+ 조절 T 세포), 골수 유래 억제 세포(예를 들어, CD11b+ 또는 CD11bhigh 골수 유래 억제 세포) 및/또는 억제성 수지상 세포(예를 들어, CD11b+ 또는 CD11bhigh 수지상 세포)가 포함된다. VISTA를 발현하는 세포는 항-VISTA 항체가 결합할 수 있고/있거나 PSGL-1 또는 PSGL-1을 발현하는 세포가 결합할 수 있을 만큼 충분한 수준의 VISTA를 표면에 생성한다. 일부 양태에서, 이러한 결합의 억제 또는 차단은 치료 효과를 가질 수 있다. VISTA를 "과발현"하는 세포는 VISTA를 발현하는 것으로 공지된 동일한 조직 유형의 세포에 비해 세포 표면에 VISTA 수준이 상당히 높은 세포이다. 이러한 과발현은 유전자 증폭이나 전사 또는 번역의 증가로 인해 발생할 수 있다. VISTA 과발현은 진단 또는 예후 분석에서 세포 표면에 존재하는 VISTA 단백질의 증가된 수준을 평가함으로써 결정될 수 있다(예를 들어, 면역조직화학 분석; FACS 분석을 통해). 대안적으로 또는 추가적으로, 세포내 VISTA 암호화 핵산 또는 mRNA의 수준을, 예를 들어 형광 원위치 하이브리드화; (FISH; 1998년 10월에 공개된 W098/45479 참조), 서던 블롯팅, 노던 블롯팅, 또는 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 기법, 예를 들어 실시간 정량적 PCR(RT-PCR)을 통해 측정할 수 있다. 상기 분석 외에도, 숙련된 의사는 다양한 생체내 분석을 이용할 수 있다. 예를 들어, 환자 신체 내의 세포를 검출 가능한 작용제로 임의로 표지된 항체에 노출시키고, 환자의 세포에 대한 항체의 결합을, 예를 들어 방사능에 대한 외부 스캐닝 또는 이전에 항체에 노출된 환자로부터 채취한 생검 분석을 통해 평가할 수 있다. VISTA-발현 종양 세포에는 급성 골수성 백혈병(AML) 종양 세포가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.
"VISTA-매개된 질환", "VISTA-매개된 장애" 및 "VISTA-매개된 상태"는 상호교환적으로 사용되며 VISTA에 의해 완전히 또는 부분적으로 발생하거나 VISTA의 결과인 모든 질환, 장애 또는 상태를 지칭한다. 그러한 질환, 장애 또는 상태에는 VISTA-발현 세포(예를 들어, 종양 세포, 골수 유래 억제 세포(MDSC), 억제성 수지상 세포(억제성 DC) 및/또는 조절 T 세포(T-reg))에 의해 발생하거나 이와 관련된 것을 포함하여, VISTA에 의해 유발되거나 이와 관련된 질환, 장애 또는 상태가 포함된다. 일부 구현예에서, VISTA는 세포 표면에서 비정상적으로(예를 들어, 고도로) 발현된다. 일부 구현예에서, VISTA는 특정 세포 유형에 대해 비정상적으로 상향조절될 수 있다. 다른 구현예에서, 정상, 비정상 또는 과도한 세포 신호전달은 VISTA와 결합하거나 상호작용할 수 있는 VISTA 수용체(예를 들어, PSGL-1, VSIG3, VSIG8 또는 LRIG1)에 대한 VISTA의 결합으로 인해 발생한다. 바람직하게, 본원에 사용된 "VISTA-매개된 질환"은 증식이 VISTA의 활성과 연관된 종양(즉, "VISTA-매개된 종양")을 지칭한다. 예를 들어, 종양 미세환경에 존재하는 세포(예를 들어, MDSC)에서 VISTA의 발현은 종양에 대한 면역 반응을 억제할 수 있다. 특정 사례에서, 종양 미세환경에 존재하는 세포, 예를 들어 MDSC에서 VISTA의 발현은 T 세포 면역(CD4+ 및 CD8+ T 세포 면역)의 억제 및/또는 염증전 사이토카인의 발현 예방을 초래할 수 있다. 특히, CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 증식이 억제될 수 있다. IFNγ, IL-2 또는 TNFα와 같은 사이토카인의 발현이 예방될 수 있다. 특정 양태에서, 이러한 효과는 종양 미세환경에 존재하는 세포, 예를 들어 MDSC에서 발현되고, 면역 세포, 예를 들어 T 세포, 또는 종양 세포에서 발현되는 PSG-L1, VSIG3, VSIG8 또는 LRIG1과 같은 수용체와 상호작용하는 VISTA에 의해 매개된다.
항-VISTA 항체
면역 체크포인트는 자기-관용을 유지하고 생리학적 조건에서 면역 매개 조직 손상을 제한하는 데 중요한 역할을 한다. VISTA는 조혈 구획에서 고도로 발현되는 B7 관련 면역글로불린 슈퍼패밀리에 속하는 I형 막관통 단백질이다. VISTA는 리간드이자 수용체 역할을 하며 CD4+ 및 CD8+ T 세포 증식과 염증전 사이토카인(예를 들어, IFNγ, TNFα 또는 IL-2) 생성을 억제함으로써 T 세포 활성화를 음으로 조절한다.
VISTA 면역 억제를 억제하여 항종양 면역 반응을 향상시킬 수 있는 단클론 항체 Ab3가 WO 2016/094837에 기재되어 있다. 이 항체의 CDR은 서열번호 3-8로 표시되고, VH 및 VL은 각각 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시된다. Ab3의 완전한 중쇄는 서열번호 11로 표시되는 서열을 갖고, Ab3의 완전한 경쇄는 서열번호 12로 표시되는 서열을 갖는다.
항체 Ab3의 전체 서열은 11개의 잠재적 탈아미드화 부위를 포함하고 있음을 가리킨다. 이들 부위는 모두 유효한 탈아미드화 부위일 것으로 예측되는 반면, 본 발명자들은 이들 중 단 하나, 즉 중쇄의 CDR2의 55번 위치에 있는 Asn 잔기가 실제로 탈아미드화되는 것을 발견하였다. 놀랍게도, 이러한 Asn을 Asp 잔기로 대체하는 것은 Ab3의 표적에 대한 결합에 영향을 미치지 않으며, 이는 CDR의 유사한 돌연변이가 상응하는 CD52 항원에 대한 친화도의 400배 감소를 가져온 선행 기술(Liu et al., 2022)의 교시와는 완전히 대조적이다. 또한, 돌연변이된 항체는 VISTA와 이의 두 결합 상대인 PSG-L1 및 VSIG3 각각 사이의 상호작용을 차단할 수 있기 때문에 VISTA 면역억제 활성을 억제하는 능력을 유지하며, 상기 상호작용은 T 세포 기능의 억제를 초래한다. 따라서, 돌연변이된 항체는 생체내에서 종양 증식을 억제한다.
첫 번째 양태에서, 본 개시내용은 신규의 항-VISTA 항체를 제공하며, 여기서 항체는 중쇄의 CDR2에서 Asn을 Asp로 치환한 것을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 항-VISTA 단클론 항체에는 합성 항체, 재조합적으로 생성된 항체, 다중 특이성 항체(이중특이성 항체 포함), 인간 항체, 인간화된 항체, 카멜화된 항체, 키메라 항체, 인트라바디, 항-이디오타입(항-Id) 항체 및 상기 중 어느 하나의 기능적 단편이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 항-VISTA 단클론 항체는 인간 또는 비-인간 기원일 수 있다. 비-인간 기원의 항-VISTA 항체의 예에는 포유동물 기원의 항체(예를 들어, 유인원, 설치류, 염소 및 토끼)가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 인간 항체의 모든 구조는 인간으로부터 유래되기 때문에 기존의 인간화된 항체나 마우스 항체에 비해 면역반응을 일으킬 확률이 낮고, 따라서 인간에게 투여 시 바람직하지 않은 면역반응을 일으키지 않는다는 장점이 있다. 따라서 치료용 항체로 매우 유리하게 사용될 수 있다. 따라서, 인간의 치료 용도를 위한 항-VISTA 단클론 항체는 바람직하게는 인간화되거나 완전히 인간이다. 더욱 바람직하게는 인간화된 것이다.
본원에 개시된 항체는 항체 Ab3과 실질적으로 동일한 항원에 대한 친화성을 갖는 항체이다. 친화성(affinity)이란 특정 항원 부위를 특이적으로 인식하여 결합하는 성질을 말하며, 항원에 대한 항체의 특이성과 함께 높은 친화성은 면역반응에 중요한 인자이다. 본 사례에서, 개시된 항체의 친화성은 경쟁적 ELISA에 의해 결정될 수 있다. 이 방법 이외에도 항원에 대한 친화성을 측정하는 다양한 방법이 채용될 수 있는데, 표면 플라스몬 공명 기술이 그 방법 중 하나이다.
본원에 개시된 단클론 항체는 VISTA가 구체적으로 인식될 수 있는 범위 내에서 본 명세서에 기재된 본 발명의 항-VISTA 항체의 서열뿐만 아니라, 이의 생물학적 등가물도 포함할 수 있으며, 여기서 생물학적 등가물은 항체의 향상된 결합 친화성 및/또는 기타 생물학적 특성을 나타낸다. 예를 들어, 항체의 결합 친화성 및/또는 다른 생물학적 특성을 더욱 향상시키기 위해, 항체의 아미노산 서열에 추가적인 변화가 이루어질 수 있다. 이러한 변형에는 예를 들어 항체의 아미노산 서열의 결실, 삽입 및/또는 치환이 포함된다. 아미노산의 이러한 변형은 아미노산의 측쇄 치환체 간의 상대적 유사성, 예를 들어 소수성, 친수성, 전하, 크기 등에 기초하여 이루어진다. 아미노산의 측쇄 치환체의 크기, 모양, 종류를 분석한 결과 아르기닌, 리신 및 히스티딘은 모두 양전하를 띠는 잔기이고; 알라닌, 글리신 및 세린은 크기가 유사하며; 페닐알라닌, 트립토판 및 티로신은 비슷한 모양을 가지고 있는 것으로 밝혀졌다. 따라서 상기 고려사항에 기반하여, 생물학적으로 아르기닌, 리신 및 히스티딘; 알라닌, 글리신 및 세린; 페닐알라닌, 트립토판 및 티로신은 기능적으로 동일하다고 할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본원에 기재된 항-VISTA 단클론 항체는 전장 항체, 다중쇄 또는 단쇄 항체, VISTA에 선택적으로 결합하는 이러한 항체의 단편(Fab, Fab', (Fab')2, Fv 및 scFv), 서로바디(surrobody)(대용 경쇄 작제물 포함), 단일 도메인 항체, 인간화된 항체, 카멜화된 항체 등의 형태로 존재할 수 있다. 이들은 또한 예를 들어 IgA(예를 들어, Ig1l 또는 IgA2), IgD, IgE, IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4) 또는 IgM을 포함하는 임의의 아이소타입이거나 이로부터 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-VISTA 항체는 IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)이다. 하나의 구현예에서, 항체는 인간 불변 영역을 추가로 포함한다. 추가 구현예에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3 및 IgG4로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 추가의 구체적인 구현예에서, 인간 불변 영역은 IgG1이다. 또한, 중쇄 불변 영역에는 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 및 엡실론(ε) 유형이 있고, 하위부류로서 감마1(γ1), 감마2(γ2), 감마3(γ3), 감마4(γ4), 알파1(α1) 및 알파2(α2)가 있다. 경쇄 불변 영역에는 카파(κ) 및 람다(λ) 유형이 있다.
본 개시내용의 맥락에서, 인간 IgG1 불변 영역을 포함하는 항체가 특히 바람직하다. 이들은 항체 Ab3와 동일한 친화성으로 VISTA에 결합할 뿐만 아니라 VISTA 면역억제 효과를 억제할 수도 있다. 놀랍게도, 이 활성은 항-VISTA 항체 Ab3에 대해 문서화된 적이 없는 항체의 효과기 기능을 필요로 한다.
바람직하게, 본원에 개시된 항-VISTA 항체는 서열번호 21 서열의 중쇄 및 서열번호 22 서열의 경쇄를 포함한다.
이 항체는 55번 위치에 Asp를 포함하여 탈아미드화를 거치지 않기 때문에 항체 Ab3보다 더 안정하고 더 균일하다. 또한 이 항체는 Ab3 항체와 동일한 친화성을 갖고 있어 VISTA 면역억제 활성을 억제한다. 특히 이러한 억제는 VISTA와 각 결합 상대인 PSG-L1 및 VSIG-3 사이의 상호작용이 중단된 결과이다. 대조적으로, 항체 Ab3가 이러한 상호작용을 방해한다는 징후는 없다. 더욱이, VISTA 면역 억제의 억제는 놀랍게도 본원에 개시된 항체의 효과기 기능을 필요로 한다.
항-VISTA 항체는 진단 용도에 유용한 표지된 항체를 포함한다. 항체는 예를 들어 특정 세포, 조직 또는 혈청에서 관심 표적의 발현을 검출하기 위해; 또는 예를 들어 주어진 치료 섭생의 효능을 결정하기 위한 임상 시험 절차의 일부로서 면역학적 반응의 진전 또는 진행을 모니터링하기 위해 진단적으로 사용된다. 항체를 검출 가능한 물질 또는 "표지"에 커플링시킴으로써 검출이 촉진될 수 있다. 표지는 본 개시내용의 항-VISTA 항체에 직접적으로 또는 간접적으로 접합될 수 있다. 표지는 그 자체로 검출 가능하거나(예를 들어, 방사성동위원소 표지, 동위원소 표지 또는 형광 표지), 효소 표지의 경우 검출 가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변경을 촉매할 수 있다. 검출 가능한 물질의 예로는 각종 효소, 보결단, 형광물질, 발광물질, 생물발광물질, 방사성물질, 각종 양전자방출단층촬영을 이용하는 양전자방출금속 및 비방사성 상자성금속이온이 있다. 검출 가능한 물질은 항체(또는 이의 단편)에 직접적으로 또는 당업계에 공지된 기법을 사용하여 중간체(예를 들어 당업계에 공지된 링커와 같은)를 통해 간접적으로 커플링되거나 접합될 수 있다. 효소 표지의 예에는 루시페라제(예를 들어, 반딧불이 루시페라제 및 세균성 루시페라제; 미국특허 제 4,737,456 호), 루시페린, 2,3-디하이드로프탈라진디온, 말레이트 데하이드로게나제, 우레아제, 퍼옥시다제, 예를 들어 양고추냉이 퍼옥시다제(HRPO), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 아세틸콜린에스테라제, 글루코아밀라제, 리소자임, 사카라이드 옥시다제(예를 들어, 글루코스 옥시다제, 갈락토스 옥시다제, 및 글루코스-6-포스페이트 데하이드로게나제), 헤테로사이클릭 옥시다제(예를 들어, 유리카제 및 잔틴 옥시다제), 락토퍼옥시다제, 마이크로퍼옥시다제 등이 있다. 적합한 보결분자단 복합체의 예에는 스트렙트아비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴이 포함되며; 적합한 형광 물질의 예에는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드, 디메틸아민-1-나프탈렌술포닐 클로라이드 또는 피코에리트린 등이 포함되고; 발광 물질의 예는 루미놀을 포함하고; 생물발광 물질의 예에는 루시페라제, 루시페린 및 에쿼린이 포함되며; 적합한 동위원소 물질의 예에는 13C, 15N, 및 중수소가 포함되고; 적합한 방사성 물질의 예에는 125I, 131I, 111In 또는 99Tc가 포함된다.
이중특이성 항체
또한, 본 개시내용은 본원에 개시된 단클론 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 다중특이성 항체를 제공한다.
본 발명에서 상기 다중특이성 항체는 바람직하게는 이중특이성 항체일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 다중-특이성 항체는 바람직하게는 본원에 기재된 항-VISTA 항체가 면역효과기 세포-특이성 표적분자에 대한 결합 특성을 갖는 항체 또는 이의 단편에 결합된 형태를 갖는다. 면역 효과기 세포-특이성 표적분자는 면역 체크포인트인 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 면역효과기 세포-특이성 표적분자의 예에는 예를 들어 PD-1, PD-L1, CTLA-4, TIM-3, TIGIT, BTLA, KIR, A2aR, VSIG4, B7-H3, TCR/CD3, CD16(FcγRIIIa) CD44, Cd56, CD69, CD64(FcγRI), CD89 및 CD11b/CD18(CR3)이 있다.
다중-특이성 항체는 동일한 항원의 상이한 다중(이중 또는 그 이상) 에피토프 또는 2개 이상의 별도의 항원을 동시에 인식할 수 있는 항체이며, 다중특이성 항체에 속하는 항체는 scFv-기반 항체, Fab-기반 항체, IgG-기반 항체 등으로 분류될 수 있다. 다중특이성, 예를 들어 이중특이성 항체의 경우, 2개의 신호를 동시에 억제 또는 증폭시킬 수 있으며, 따라서 하나의 신호를 억제/증폭시키는 경우보다 더 효과적일 수 있다. 각각의 신호를 각각의 신호억제제로 처리하는 경우에 비해, 저용량 투여를 달성할 수 있으며, 동일한 공간에서 동시에 2개의 신호를 억제/증폭시킬 수 있다.
이중특이성 항체의 생산 방법은 주지되어 있다. 통상적으로 이중특이성 항체의 재조합 생성은 2개의 중쇄가 서로 다른 특이성을 갖는 조건 하에서 2개의 면역글로불린의 중쇄/경쇄 쌍을 동시에 발현시키는 것을 기반으로 한다.
scFv-기반 이중특이성 항체의 경우, 상이한 scFv의 VL과 VH를 결합시킴으로써 하이브리드 scFv-기반으로 이종이량체 형태로 제조하여 디아바디를 제공하고(Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 90:6444, 1993), 상이한 scFv를 서로 연결시킴으로써 탠덤 ScFv를 생성시킬 수 있다. 각 scFv의 말단에 Fab의 CH1과 CL을 발현시킴으로써, 이종이량체 미니 항체를 생성시킬 수 있다(Muller et al., FEBS lett., 432:45, 1998). 또한, Fc의 동종이량체 도메인으로서 CH3 도메인의 부분 아미노산을 치환시킴으로써, 이종이량체 구조를 갖는 "구멍에 손잡이" 형태로 구조적 변화를 이루고, 이러한 변형된 CH3 도메인은 각각 상이한 scFv의 말단에 발현되어, 이종이량체성 scFv 형태의 미니바디를 생성시킬 수 있다(Merchant et al., Nat. Biotechnol., 16:677, 1998).
Fab-기반 이중특이성 항체의 경우, 디설파이드 결합 또는 매개체를 활용함으로써 특정 항원에 대한 개별 Fab'의 조합에 따라, 이종이량체 Fab 형태로 항체를 생성시킬 수 있으며, 특정 Fab의 중쇄 또는 경쇄 말단에 상이한 항원에 대한 scFv를 발현시킴으로써, 2의 항원 결합가를 획득할 수 있다. 또한, Fab와 scFv 사이에 힌지 영역을 가짐으로써, 4의 항원 결합가를 동종이량체 형태로 획득할 수 있다. 또한, 당해 분야에는 하기의 생산 방법이 공지되어 있다: 3의 항원 결합가가 Fab의 경쇄 말단 및 중쇄 말단에서 상이한 항원에 대한 scFv의 융합에 따라 획득되는 이중 표적 항체, 3의 항원 결합가가 Fab의 경쇄 말단 및 중쇄 말단에의 상이한 scFv의 융합에 따라 획득되는 삼중 표적 항체, 및 3개의 상이한 Fab의 화학적 융합에 의해 획득되는 단순한 형태의 삼중 표적 항체 F(ab')3.
IgG-기반의 이중특이성 항체의 경우, 마우스 및 래트 하이브리도마의 재-하이브리드화에 기반한, 하이브리드 하이브리도마, 소위 쿼드로마의 제조에 의한 이중특이성 항체의 생산 방법이 Trion Pharma에 의해 공지되어 있다. 또한, 상이한 중쇄 중의 Fc의 CH3 동종이량체 도메인의 일부 아미노산이 경쇄 부분을 공유하면서 변형된, 소위 "구멍에 손잡이" 형태의 이중특이성 항체의 생산 방법이 공지되어 있으며(Merchant et al., Nat. Biotechnol., 16 :677, 1998), 이종이량체 형태의 이중특이성 항체 외에, 가변 도메인 대신에 IgG의 경쇄 및 중쇄의 불변 도메인에 2개의 상이한 scFv의 융합에 이은 발현에 따른 이종이량체 형태의 (scFv)4-IgG의 생산 방법이 공지되어 있다. 더욱 또한, 인간 VEGFR-2에 대한 키메라 단클론 항체인 IMC-1C11을 기반으로, 마우스 혈소판 유래 성장인자 수용체-α에 대한 단일 가변 도메인만이 이중특이성 항체를 생성하도록 항체의 경쇄의 아미노 말단에 융합된다는 사실이 ImClone Systems에 의해 보고되었다. 더욱 또한, Rossi 등은 단백질 키나제 A(PKA) R 서브유닛의 이량체화 및 도킹 도메인(DDD), 및 PKA의 고정 도메인을 사용하는 소위 "도킹 및 잠금(DNL)" 방법에 기반한, CD20에 대한 항원 결합가가 높은 항체를 보고하였다(Rossi et al., Proc. Natl. Acad. Sci.USA., 103 :6841, 2006).
항체 유도체
본 발명의 항-VISTA 항체는 당업계에 공지되어 있고 용이하게 입수할 수 있는 추가의 비-단백질성 부분을 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 특히, 진단 및 치료 용도에 사용하기 위해 유도체화되거나, 공유 변형되거나, 또는 다른 분자에 접합된 항-VISTA 단클론 항체가 본원에 포함된다. 예를 들어, 유도체화된 항체에는 예를 들어, 글리코실화, 아세틸화, peg화, 인산화, 공지된 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에 대한 연결 등에 의해 변형된 항체가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 다양한 화학적 변형 중 어느 하나를 비제한적으로, 특정 화학적 절단, 아세틸화, 포르밀화, 튜니카마이신의 대사 합성 등을 포함한 공지된 기법에 의해 수행할 수 있다. 또한, 유도체는 하나 이상의 비-고전적 아미노산을 함유할 수 있다.
특히, 본 발명의 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체가 투여되는 생체내에서 체류 시간을 향상시키기 위해 상술한 바와 같이 특히 글리코실화 및/또는 PEG화에 의해 유도체화될 수 있다.
글리코실화 및/또는 PEG화에 관하여, 본 발명의 항체의 기능이 유지되는 한 당업계에 공지된 방법에 따라 글리코실화 및/또는 PEG화의 다양한 패턴을 변형시킬 수 있으며, 다양한 패턴의 글리코실화 및/또는 PEG화가 변형된 변형 단클론 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이 본 발명의 항체에 포함된다.
바람직하게, 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체이다. 수용성 중합체의 비제한적 예에는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올(예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알코올 및 이들의 혼합물이 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있으며 분지되거나 분지되지 않을 수 있다. 항체에 부착된 중합체의 수는 다양할 수 있으며, 하나 초과의 중합체가 부착된 경우에는 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은, 개선시키고자 하는 항체의 특정 특성 또는 기능, 항체 유도체가 한정된 조건 하에 치료법에 사용될 것인지 여부를 포함하나 이에 제한되지 않는 고려사항에 기초하여 결정될 수 있다.
구체적인 예에서, 본 개시내용의 항-VISTA 항체는 폴리(에틸렌글리콜)(PEG) 모이어티에 부착될 수 있다. 특정 구현예에서, 항체는 항체 단편이고, PEG 모이어티는 항체 단편에 위치한 임의의 이용 가능한 아미노산 측쇄 또는 말단 아미노산 작용기, 예를 들어 임의의 유리 아미노, 이미노, 티올, 하이드록실 또는 카르복실기를 통해 부착된다. 이러한 아미노산은 항체 단편에서 자연적으로 발생할 수 있거나 재조합 DNA 방법을 사용하여 단편으로 조작될 수 있다. 예를 들어 미국특허 제 5,219,996 호를 참조한다. 여러 부위를 사용하여 2개 이상의 PEG 분자를 부착시킬 수 있다. PEG 모이어티는 항체 단편에 위치한 적어도 하나의 시스테인 잔기의 티올기를 통해 공유적으로 연결될 수 있다. 티올기가 부착 지점으로 사용되는 경우, 적절하게 활성화된 효과기 모이어티, 예를 들어 말레이미드 및 시스테인 유도체와 같은 티올 선택적 유도체가 사용될 수 있다.
구체적인 예에서, 항-VISTA 항체 접합체는 예를 들어 EP0948544에 개시된 방법에 따라 PEG화된, 즉 PEG(폴리(에틸렌글리콜))가 공유적으로 부착된 변형된 Fab' 단편이다. 또한 하기의 문헌을 참조한다: Poly(ethyleneglycol) Chemistry, Biotechnical and Biomedical Applications, (J. Milton Harris (ed.), Plenum Press, New York, 1992); Poly(ethyleneglycol) Chemistry and Biological Applications, (J. Milton Harris and S. Zalipsky, eds., American Chemical Society, Washington D.C., 1997); 및 Bioconjugation Protein Coupling Techniques for the Biomedical Sciences, (M. Aslam and A. Dent, eds., Grove Publishers, New York, 1998); 및 Chapman, 2002, Advanced Drug Delivery Reviews 54:531-545. PEG는 힌지 영역의 시스테인에 부착될 수 있다. 일례에서, PEG-변형된 Fab' 단편은 변형된 힌지 영역의 단일 티올기에 공유적으로 연결된 말레이미드기를 갖는다. 리신 잔기는 말레이미드기에 공유적으로 연결될 수 있고 리신 잔기의 각 아민기에는 대략 20,000 Da의 분자량을 갖는 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 중합체가 부착될 수 있다. 따라서 Fab' 단편에 부착된 PEG의 총 분자량은 대략 40,000 Da일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 방사선 노출에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 항체와 비-단백질성 모이어티의 접합체가 제공된다. 하나의 구현예에서, 비-단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브이다(Kam et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA) 102:11600-11605 (2005)). 방사선은 임의의 파장일 수 있으며, 보통의 세포에 해를 끼치지 않지만 항체-비단백질성 모이어티에 인접한 세포가 사멸되는 온도까지 비-단백질성 모이어티를 가열하는 파장을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
면역접합체
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 바와 같은 항-VISTA 항체를 포함하는 면역접합체("항체-약물 접합체" 또는 "ADC"로서 상호교환적으로 지칭됨)를 제공하며, 상기 항체는 세포독성제에 접합된다.
많은 세포독성제가 단리되거나 합성되어 세포 증식을 억제하거나, 확실하지는 않더라도 적어도 종양 세포를 파괴 또는 감소시키는 것이 가능하다. 그러나 이러한 물질의 독성 활성은 종양 세포에만 국한되지 않으며 비-종양 세포도 영향을 받고 파괴될 수 있다. 더욱 특히, 조혈 세포 또는 상피 세포, 특히 점막 세포와 같이 빠르게 재생되는 세포에서 부작용이 관찰된다. 종양 세포에 대한 높은 세포독성을 유지하면서 정상 세포에 대한 부작용을 제한하기 위해, 암 치료에서 세포독성제의 국소 전달을 위해 면역접합체가 사용되어 왔다(Lambert, J. (2005) Curr. Opinion in Pharmacology 5:543-549; Wu et al (2005) Nature Biotechnology 23(9): 1137-1146; Payne, G. (2003) i 3:207-212; Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614; Niculescu-Duvaz and Springer (1997) Adv. Drug Deliv. Rev. 26:151-172; 미국특허 제 4,975,278 호). 면역접합체는 종양으로의 약물 모이어티(즉, 세포독성제)의 표적화된 전달 및 상기 중에서 세포내 축적을 허용하며, 여기서 비접합 약물의 전신 투여는 제거하고자 하는 종양 세포뿐만 아니라 정상 세포에 허용할 수 없는 수준의 독성을 초래할 수 있다(Baldwin et al, Lancet (Mar. 15, 1986) pp. 603-05; Thorpe (1985) "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review," in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications (A. Pinchera et al., eds) pp. 475-506). 다클론 항체 및 단클론 항체 모두 이러한 전략에 유용한 것으로 보고되었다(Rowland et al., (1986) Cancer Immunol. Immunother. 21 :183-87).
본원에 개시된 면역접합체에 사용되는 세포독성제는 약물(즉, "항체-약물 접합체"), 독소(즉, "면역독소" 또는 "항체-독소 접합체"), 방사성동위원소(즉, "방사성면역접합체" 또는 "항체-방사성동위원소 접합체") 등일 수 있으나, 이들로 제한되지는 않는다.
바람직하게, 면역접합체는 적어도 약물 또는 약제에 연결된 결합 단백질이다. 이러한 면역접합체는 대개 결합 단백질이 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 경우 항체-약물 접합체(또는 "ADC")로서 지칭된다.
첫 번째 구현예에서, 이러한 약물은 작용 방식과 관련하여 설명될 수 있다. 비제한적인 예로서, 알킬화제, 예를 들어 질소 머스타드, 알킬설포네이트, 니트로소우레아, 옥사조포린, 아지리딘 또는 이민-에틸렌, 대사길항물질, 항-종양 항생제, 유사분열 억제제, 염색질 기능 억제제, 항-혈관형성제, 항-에스트로겐제, 항-안드로겐제, 킬레이트제, 철 흡수 자극제, 사이클로옥시게나제 억제제, 포스포디에스테라제 억제제, DNA 억제제, DNA 합성 억제제, 세포사멸 자극제, 티미딜레이트 억제제, T 세포 억제제, 인터페론 작용제, 리보뉴클레오시드 트리포스페이트 리덕타제 억제제, 아로마타제 억제제, 난에스트로겐 수용체 길항제, 티로신 키나제 억제제, 세포 주기 억제제, 탁산, 튜불린 억제제, 혈관 신생 억제제, 대식세포 자극제, 뉴로키닌 수용체 길항제, 칸나비노이드 수용체 작용제, 도파민 수용체 작용제, 과립구 자극 인자 작용제, 에리스로포이에틴 수용체 작용제, 소마토스타틴 수용체 작용제, LHRH 작용제, 칼슘 감작제, VEGF 수용체 길항제, 인터류킨 수용체 길항제, 파골세포 억제제, 라디칼 형성 자극제, 엔도텔린 수용체 길항제, 빈카 알칼로이드, 항호르몬 또는 면역조절제, 또는 세포독성 또는 독소의 활성 기준을 충족하는 임의의 기타 신규 약물을 언급할 수 있다.
이와 같은 약물은 예를 들어, VIDAL 2010, 암종학 및 혈액학 컬럼 "세포독성"에 부착된 화합물 전용 페이지에 인용되어 있으며, 이 문서와 관련하여 인용된 이러한 세포독성 화합물은 여기서 바람직한 세포독성제로 인용되었다.
보다 구체적으로, 제한 없이, 하기의 약물이 본 발명에 따라 바람직하다: 메클로르에타민, 클로람부콜, 멜팔렌, 클로르하이드레이트, 피포브로멘, 프레드니무스틴, 이나트륨-포스페이트, 에스트라무스틴, 사이클로포스파미드, 알트레타민, 트로포스파미드, 설포포스파미드, 이포스파미드, 티오테파, 트리에틸렌아민, 알테트라민, 카르무스틴, 스트렙토조신, 포테무스틴, 로무스틴, 부술판, 트레오술판, 임프로술판, 다카르바진, 시스-백금, 옥살리플라틴, 로바플라틴, 헵타플라틴, 미리플라틴 하이드레이트, 카르보플라틴, 메토트렉세이트, 페메트렉세드, 5-플루오르우라실, 플록수리딘, 5-플루오로데옥시유리딘, 카페시타빈, 시타라빈, 플루다라빈, 시토신 아라비노시드, 6-머캅토푸린(6-MP), 넬라라빈, 6-티오구아닌(6-TG), 클로로데스옥시아데노신, 5-아자시티딘, 젬시타빈, 클라드리빈, 데옥시코포르마이신, 테가푸르, 펜토스타틴, 독소루비신, 다우노루비신, 이다루비신, 발루비신, 미톡산트론, 닥티노마이신, 미트라마이신, 플리카마이신, 미토마이신 C, 블레오마이신, 프로카바진, 파클리탁셀, 도세탁셀, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈, 토포테칸, 이리노테칸, 에토포사이드, 발루비신, 암루비신 하이드로클로라이드, 피라루비신, 엘립티늄 아세테이트, 조루비신, 에피루비신, 이다루비신 및 테니포시드, 라 족신, 마리마스타트, 바티마스타트, 프리노마스타트, 타노마스타트, 일로마스타트, CGS-27023A, 할로푸지논, COL-3, 네오바스타트, 탈리도마이드, CDC 501, DMXAA, L-651582, 스쿠알라민, 엔도스타틴, SU5416, SU6668, 인터페론-알파, EMD121974, 인터류킨-12, IM862, 안지오스타틴, 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜, 드롤록시펜, 요오독시펜, 아나스트로졸, 레트로졸, 엑세메스탄, 플루타미드, 닐루타미드, 스프리로노락톤, 시프로테론 아세테이트, 피나스테리드, 시미티딘, 보르테조미드, 벨케이드, 비칼루타미드, 시프로테론, 플루타미드, 풀베스트란, 엑세메스탄, 다사티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 이마티닙, 라파티닙, 닐로티닙, 소라페닙, 수니티닙, 레티노이드, 렉시노이드, 메톡살렌, 메틸아미노 레불린산염, 알데스류킨, OCT-43, 데닐류킨 디플리톡스, 인터류킨-2, 타소네르민, 렌티난, 시조필란, 로퀴니멕스, 피도티모드, 페가데마제, 티모펜틴, 폴리 I:C, 프로코다졸, Tic BCG, 코리네박테리움 파르붐, NOV-002, 우크라인, 레바미솔, 1311-chTNT, H-101, 셀몰류킨, 인터페론 알파2a, 인터페론 알파2b, 인터페론 감마1a, 인터류킨-2, 모베나킨, 렉신-G, 테셀류킨, 아클라루비신, 액티노마이신, 아르글라빈, 아스파라기나제, 카르지노필린, 크로모마이신, 다우노마이신, 류코보린, 마소프로콜, 네오카르지노스타틴, 페플로마이신, 사르코마이신, 솔라마진, 트라벡테딘, 스트렙토조신, 테스토스테론, 쿠네카테킨, 시네카테킨, 알리트레티노인, 벨로테칸 하이드로클로라이드, 칼루스테론, 드로모스타놀론, 엘립티늄 아세테이트, 에티닐 에스트라디올, 에토포시드, 플루옥시메스테론, 포름스테인, 포스페트롤, 고세렐린 아세테이트, 헥실 아미노레불리네이트, 히 스트렐린, 하이드록시프로게스테론, 익사베필론, 류프롤리드, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스테롤 아세테이트, 메틸프레드니솔론, 메틸테스토스테론, 밀테포신, 미토브로니톨, 나드롤론 페닐프로피오네이트, 노레틴드론 아세테이트, 프레드니솔론, 프레드니손, 템시롤리무스, 테스토락톤, 트리암코놀론, 트립토렐린, 바프레오티드 아세테이트, 지노스타틴 스티말라머, 암사크린, 삼산화비소, 비산트렌 하이드로클로라이드, 클로람부실, 클로르트리아니센, 시스-디암민디클로로플라티늄, 사이클로포스파미드, 디에틸스틸베스트롤, 헥사메틸멜라민, 하이드록시우레아, 레날리도미드, 로니다민, 메클로에탄아민, 미토탄, 네다플라틴, 니무스틴 하이드로클로라이드, 파미드로네이트, 피포브로만, 포르피머 나트륨, 라니무스틴, 라족산, 세무스틴, 소부족산, 메실레이트, 트리에틸렌멜라민, 졸레드론산, 카모스타트 메실레이트, 파드로졸 HCl, 나폭시딘, 아미노글루테티미드, 카르모푸르, 클로파라빈, 시토신 아라비노사이드, 데시타빈, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플루다라빈 포스페이트, 플루오로우라실, 프토라푸르, 우라실 머스타드, 아바렐릭스, 벡사로텐, 랄티테르크세드, 타미바로텐, 테모졸로미드, 보리노스타트, 메가스트롤, 클로드로네이트 이나트륨, 레바미솔, 페루목시톨, 철 이소말토사이드, 셀레콕시브, 이부딜라스트, 벤다무스틴, 알트레타민, 미토락톨, 템시롤리무스, 프랄라트렉세이트, TS-1, 데시타빈, 바이칼루타미드, 플루타미드, 레트로졸, 클로드로네이트 이나트륨, 데가렐릭스, 토레미펜 시트레이트, 히스타민 디하이드로클로라이드, DW-166HC, 니트라크린, 데시타빈, 이리노테아신 하이드로클로라이드, 암사크린, 로미뎁신, 트레티노인, 카바지탁셀, 반데타닙, 레날리도마이드, 이반드론산, 밀테포신, 비테스펜, 미파무르티드, 나드로파린, 그라니세트론, 온단세트론, 트로피세트론, 알리자프리드, 라모세트론, 돌라세트론 메실레이트, 포사프레피탄트 디메글루민, 나빌론, 아프레피탄트, 드로나비놀, TY-10721, 리슈리드 수소 말리에이트, 에피세람, 데피브로티드, 다비가트란 에텍실레이트, 필그라스팀, 페그필그라스팀, 레디툭스, 에포에틴, 몰그라모스팀, 오프렐베킨, 시풀류셀-T, M-Vax, 아세틸 L-카르니틴, 도네페닐 하이드로클로라이드, 5-아미노레불린산, 메틸 아미노레불리네이트, 세트로렐릭스 아세테이트, 이코덱스트린, 류프로렐린, 메트빌페니데이트, 옥트레오티드, 암렉사녹스, 플레릭사포, 메나테트레논, 아네톨 디티올레티온, 독세르칼시페롤, 시나칼세트 하이드로클로라이드, 알레파셉트, 로미플로스팀, 티모글로불린, 티말파신, 유베니멕스, 이미퀴모드, 에베로리무스, 시롤리무스, H-101, 라소폭시펜, 트리로스탄, 인카드로네이트, 강글리오사이드, 페가프타닙 옥타나트륨, 베르토포르핀, 미노드 론산, 졸레드론산, 갈륨 니트레이트, 알렌드로네이트 나트륨, 에티드로네이트 이나트륨, 이나트륨 파미드로네이트, 두타스테라이드, 나트륨 스티보글루코네이트, 아르모다피닐, 덱스라족산, 아미포스틴, WF-10, 테모포르핀, 다베포에틴 알파, 안세스팀, 사르그라모스팀, 팔리페르민, R-744, 네피더민, 오프레베킨, 데닐류킨 디프티톡스, 크리스산타스파제, 부세렐린, 데슬로렐린, 란레오티드, 옥트레오티드, 필로카르핀, 보센탄, 칼리케아미신, 메이탄시노이드 및 시클로니케이트.
보다 상세한 내용에 대해서, 당업자는 에서 편집된, 표제의 매뉴얼을 참조할 수 있다.
대안적으로, 면역접합체는 적어도 하나의 방사성동위원소에 연결된 결합 단백질을 포함할 수 있다. 이러한 면역접합체는 결합 단백질이 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 경우 일반적으로 항체-방사성동위원소 접합체(또는 "ARC")로서 지칭된다.
종양을 선택적으로 파괴하기 위해서, 항체는 고방사성 원자를 포함할 수 있다. 다양한 방사성 동위원소, 예를 들어 비제한적으로, , At211, C13, N15, O17, Fl19, I123, I131, I125, In111, Y90, Re186, Re188, Sm153, tc99m, Bi212, P32, Pb212, Lu, 가돌리늄, 망간 또는 철의 방사성 동위원소를 ARC의 생성에 이용할 수 있다.
당업자에게 공지된 임의의 방법 또는 공정을 사용하여 이러한 방사성 동위원소를 ARC에 포함시킬 수 있다(예를 들어, 문헌["Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy ", Chatal, CRC Press 1989]을 참조한다). 비제한적인 예로서, Tc99m 또는 I123, Re186, Re188 및 In111을 시스테인 잔기를 통해 부착시킬 수 있다. Y90을 리신 잔기를 통해 부착시킬 수 있다. I123을 IODOGEN 방법(Fraker et al (1978) Biochem. Biophys. Res. Commun. 80: 49-57)을 사용하여 부착시킬 수 있다.
항-CD20 단클론 항체 및 티오우레아 링커-킬레이터에 의해 결합된 In111 또는 Y90 방사성동위원소로 구성된 ARC인 Zevalin®(Wiseman et at (2000) Eur. Jour. Nucl. Med. 27(7):766-77; Wiseman et al (2002) Blood 99(12):4336-42; Witzig et at (2002) J. Clin. Oncol. 20(10):2453-63; Witzig et al (2002) J. Clin. Oncol. 20(15):3262-69); 또는 칼리케아미신에 연결된 항-CD33 항체로 구성된 Mylotarg®(미국특허 제 4,970,198; 5,079,233; 5,585,089; 5,606,040; 5,693,762; 5,739,116; 5,767,285; 5,773,001 호)와 같은 다수의 예를 ARC 분야의 당업자의 지식을 예시하기 위해 언급할 수 있다. 보다 최근에, 호지킨 림프종의 치료에 대해 FDA에 의해 최근 허용된 Adcetris(브렌툭시맙 베도틴에 상응함)로서 지칭되는 ADC를 또한 언급할 수 있다(Nature, 476: 380-381, 25 August 2011).
본 개시내용의 또 다른 구현예에서, 면역접합체는 독소에 연결된 결합 단백질을 포함할 수 있다. 이러한 면역접합체는 결합 단백질이 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 경우 일반적으로 항체-독소 접합체(또는 "ATC")로서 지칭된다.
독소는 살아있는 유기체가 생산하는 효과적이고 특정한 독이다. 이는 대개 분자량이 수백(펩티드)에서 십만 달톤(단백질) 사이로 변할 수 있는 아미노산 쇄로 이루어진다. 이는 또한 저분자 유기 화합물일 수도 있다. 독소는 세균, 곰팡이, 조류 및 식물과 같은 수많은 유기체에 의해 생성된다. 이들 중 다수는 극도로 유독하며, 독성은 신경작용제보다 몇 배나 더 크다.
ATC에 사용되는 독소에는 튜불린 결합, DNA 결합 또는 토포이소머라제 억제를 포함한 기전을 통해 세포독성 효과를 발휘할 수 있는 모든 종류의 독소가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.
사용될 수 있는 효소 활성 독소 및 이의 단편에는 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 쇄(슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 유래), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 동유 단백질, 디안틴 단백질, 미국 자리공 단백질(PAPI, PAPII 및 PAP-S), 여주 억제제, 커신, 크로틴, 비누풀 억제제, 젤로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센이 포함된다.
소분자 독소, 예를 들어 돌라스타틴, 아우리스타틴, 트리코테센 및 CC1065, 및 독소 활성을 갖는 이들 독소의 유도체도 본원에서 고려된다. 돌라스타틴 및 아우리스타틴은 미세소관 역학, GTP 가수분해, 및 핵 및 세포 분열을 방해하고 항암 및 항진균 활성을 갖는 것으로 나타났다.
본원에 기재된 면역접합체는 링커를 추가로 포함할 수 있다.
"링커", "링커 단위" 또는 "링크"는 결합 단백질을 하나 이상의 세포독성제에 공유 결합시키는 원자의 쇄 또는 공유 결합을 포함하는 화학적 모이어티를 의미한다.
링커는 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트(SPDP), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 이작용성 유도체(예를 들어, 디메틸 아디피미데이트 HCl), 활성 에스테르(예를 들어, 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드(예를 들어, 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물(예를 들어, 비스(p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체(예를 들어, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트(예를 들어, 톨루엔 2,6-디이소시아네이트) 및 비스-활성 불소 화합물(예를 들어, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)과 같은 다양한 이작용성 단백질 커플링제를 사용하여 제조될 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아나토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 주소 지정 시스템에 세포독성제를 접합시키기 위한 예시적인 킬레이트제이다. 다른 교차-링커 시약은 BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 및 설포-SMPB, 및 상업적으로 입수할 수 있는 SVSB(숙신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트)(예를 들어, Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, Ill., U.S.A로부터)일 수 있다.
링커는 "비-절단성" 또는 "절단성" 링커일 수 있다.
바람직하게, 링커는 세포내에서 세포독성제의 방출을 촉진하는 "절단성 링커"이다. 예를 들어, 산-불안정성 링커, 펩티다제 민감성 링커, 광불안정성 링커, 디메틸 링커 또는 디설파이드-함유 링커가 사용될 수 있다. 링커는 바람직하게는 링커의 절단이 세포내 환경에서 결합 단백질로부터 세포독성제를 방출하도록 세포내 조건 하에서 절단된다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 링커는 세포내 환경(예를 들어 리소솜 또는 엔도솜 또는 소포내)에 존재하는 절단제에 의해 절단될 수 있다. 링커는, 예를 들어 리소솜 또는 엔도솜 프로테아제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 세포내 펩티다제 또는 프로테아제 효소에 의해 절단되는 펩티딜 링커일 수 있다. 전형적으로, 펩티딜 링커는 적어도 2개의 아미노산 길이 또는 적어도 3개의 아미노산 길이이다. 절단제는 카텝신 B 및 D 및 플라스민을 포함할 수 있으며, 이들 모두는 디펩티드 약물 유도체를 가수분해하여 표적 세포 내부에서 활성 약물을 방출하는 것으로 공지되어 있다. 예를 들어, 암성 조직에서 고도로 발현되는 티올-의존성 프로테아제 카텝신-B에 의해 절단가능한 펩티딜 링커(예를 들어, Phe-Leu 또는 Gly-Phe-Leu-Gly 링커)가 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 세포내 프로테아제에 의해 절단될 수 있는 펩티딜 링커는 Val-Cit 링커 또는 Phe-Lys 링커이다. 세포독성제의 세포내 단백질 분해 방출을 사용하는 한 가지 장점은 접합시 작용제가 전형적으로 약독화되고 접합체의 혈청 안정성이 전형적으로 높다는 것이다.
다른 구현예에서, 절단성 링커는 pH 민감성, 즉 특정 pH 값에서 가수분해에 민감하다. 일반적으로 pH 민감성 링커는 산성 조건에서 가수분해 가능하다. 예를 들어, 리소솜에서 가수분해 가능한 산-불안정성 링커(예를 들어, 히드라존, 세미카르바존, 티오세미카르바존, 시스-아코니트아미드, 오르토에스테르, 아세탈, 케탈 등)가 사용될 수 있다. 이러한 링커는 혈액 내와 같은 중성 pH 조건에서는 상대적으로 안정적이지만, 리소솜의 대략적인 pH인 pH 5.5 또는 5.0 미만에서는 불안정하다. 특정 구현예에서, 가수분해 가능한 링커는 티오에테르 링커(예를 들어, 아실히드라존 결합을 통해 치료제에 부착된 티오에테르)이다.
또 다른 구현예에서, 링커는 환원 조건 하에서 절단될 수 있다(예를 들어, 디설파이드 링커). 예를 들어 SATA(N-숙신이미딜-S-아세틸티오아세테이트), SPDP(N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트), SPDB(N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)부티레이트) 및 SMPT(N-숙신이미딜-옥시카르보닐-알파-메틸-알파-(2-피리딜-디티오)톨루엔)을 사용하여 형성될 수 있는 것들을 포함한, 다양한 디설파이드 링커가 당업계에 공지되어 있다.
대조적으로 비-절단성 링커는 뚜렷한 약물 방출 기전이 없다. 이러한 비-절단성 링커를 포함하는 면역접합체는 내재화 후 세포독성제를 방출하는 항체의 완전한 리소솜 단백질분해적 분해에 의존한다.
비-절단성 링커를 포함하는 면역접합체의 예로서, 트라스투주맙을, 연결된 화학요법제인 메이탄신과 결합시키는 면역접합체 트라스투주맙-엠탄신(TDM1)을 언급할 수 있다(Cancer Research 2008; 68:(22). November 15, 2008).
바람직한 구현예에서, 본원에 개시된 면역접합체를 당업자에게 공지된 임의의 방법, 예를 들어 i) 항원 결합 단백질의 친핵기와 2가 링커 시약과의 반응에 이은 세포독성제와 반응, 또는 ii) 세포독성제의 친핵기와 2가 링커 시약과의 반응에 이은 항원 결합 단백질의 친핵기와의 반응에 의해 제조할 수 있다.
항원 결합 단백질의 친핵기에는 N-말단 아민기, 측쇄 아민기, 예를 들어 리신, 측쇄 티올기, 및 항원 결합 단백질이 글리코실화될 때의 당 하이드록실 또는 아미노기가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 아민, 티올 및 하이드록실기는 친핵성이며, 반응하여 링커 모이어티상의 친핵기 및 링커 시약, 예를 들어 비제한적으로, 활성 에스테르, 예를 들어 NHS 에스테르, HOBt 에스테르, 할로포르메이트 및 산 할라이드; 알킬 및 벤질 할라이드, 예를 들어 할로아세트아미드; 알데히드, 케톤, 카르복실 및 말레이미드기와 공유 결합을 형성할 수 있다. 항원 결합 단백질은 환원성 쇄 간 디설파이드, 즉 시스테인 가교를 가질 수 있다. 항원 결합 단백질은, DTT(디티오트레이톨)와 같은 환원제를 사용한 처리에 의해 링커 시약과의 접합에 대해 반응성으로 될 수 있다. 따라서 각 시스테인 가교는 이론적으로 2개의 반응성 티올 친핵체를 형성한다. 당업자에게 공지된 임의의 반응을 통해 추가적인 친핵기가 항원 결합 단백질에 도입될 수 있다. 비제한적인 예로서, 반응성 티올기는 하나 이상의 시스테인 잔기를 도입함으로써 항원 결합 단백질에 도입될 수 있다.
면역접합체는 또한, 링커 시약 또는 세포독성제 상의 친핵성 치환체와 반응할 수 있는 친전자성 모이어티를 도입하기 위해 항원 결합 단백질을 변형시킴으로써 생성될 수 있다. 글리코실화된 항원 결합 단백질의 당은 산화되어 링커 시약 또는 세포독성제의 아민기와 반응할 수 있는 알데히드 또는 케톤기를 형성할 수 있다. 생성된 이민 쉬프 염기 그룹은 안정한 연결을 형성할 수 있거나, 환원되어 안정한 아민 연결을 형성할 수 있다. 하나의 구현예에서, 글리코실화된 항원 결합 단백질의 탄수화물 부분과 갈락토스 옥시다제 또는 나트륨 메타-퍼요오데이트와의 반응은 약물상의 적절한 기와 반응할 수 있는 단백질내 카르보닐(알데히드 및 케톤)기를 생성시킬 수 있다. 다른 구현예에서, N-말단 세린 또는 트레오닌 잔기를 함유하는 단백질은 메타-퍼요오데이트와 반응하여, 첫 번째 아미노산 대신 알데히드를 생성시킬 수 있다.
키메라 항원 수용체
본 개시내용은 i) 본 발명의 항체; ii) 막관통 도메인; 및 iii) 상기 i)의 항체와 항원의 결합에 따라 T 세포 활성화를 일으키는 것을 특징으로 하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하는, CAR(키메라 항원 수용체) 단백질을 추가로 제공한다.
본 개시내용에서, CAR 단백질은 본 발명의 단클론 항체, 공지된 막관통 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인으로 구성되는 것을 특징으로 한다.
본원에 기재된 바와 같이, "CAR(키메라 항원 수용체)"라는 용어는 면역효과기 세포에 특정 항원에 대한 특이성을 제공할 수 있는 비-천연 수용체를 지칭한다. 일반적으로, CAR은 T 세포에 단클론 항체의 특이성을 부여하는데 사용되는 수용체를 가리킨다. CAR은 일반적으로 세포외 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 도메인으로 구성된다. 세포외 도메인은 항원 인식 영역을 포함하며, 본 설명에서 항원 인식 부위는 VISTA 특이성 항체이다. VISTA 특이성 항체는 전술한 바와 같으며, CAR에 사용되는 항체는 항체 단편 형태인 것이 바람직하다. Fab 또는 scFv 형태인 것이 더욱 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
더욱 또한, CAR의 막관통 도메인은 세포외 도메인과 연결된 형태를 가지며, 천연 또는 합성 형태에서 기원할 수 있다. 천연 형태에서 기원하는 경우에는 막-결합 또는 막관통 단백질에서 기원할 수 있으며, T 세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄와 같은 다양한 단백질의 막관통 도메인, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CDS, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154 또는 CD8로부터 기원하는 부분일 수도 있다. 이들 막관통 도메인의 서열은 막관통 단백질의 막관통 도메인이 잘 기재되어 있는 당업계에 주지된 문헌으로부터 얻을 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원에 기재된 CAR은 세포내 CAR 도메인의 일부이며, 막관통 도메인에 연결되어 있다. 본 발명의 세포내 도메인은, CAR의 항원 인식 부위에 항원 결합시 T 세포 활성화, 바람직하게는 T 세포 증식을 일으키는 성질을 갖는 것을 특징으로 하는 세포내 신호전달 도메인을 포함할 수 있다. 세포내 신호전달 도메인은, 세포 외부에 존재하는 CAR의 항원 인식 부위에 항원이 결합하여 T 세포 활성화를 일으킬 수 있는 것이라면 그 종류에 특별히 제한은 없으며, 다양한 종류의 세포내 신호전달 도메인이 사용될 수 있다. 이의 예에는 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)가 포함되며, ITAM은 CD3 제타(ξ), FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CDS, CD22, CD79a, CD79b, CD66d 또는 FcεRIγ로부터 기원하는 것들을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
더욱 또한, 본 개시내용의 CAR의 세포내 도메인은 세포내 신호전달 도메인과 함께 공동자극 도메인을 추가로 포함하는 것이 바람직하지만, 이에 제한되지는 않는다. 공동자극 도메인은 본원에 기재된 CAR에 포함되는 부분으로, 세포내 신호전달 도메인으로부터의 신호 외에 T 세포에 신호를 전달하는 역할을 하며, 공동자극 분자의 세포내 도메인을 포함한 CAR의 세포내 부분을 가리킨다.
공동자극 분자는 세포 표면 분자로서, 림프구가 항원에 대해 충분한 반응을 일으키기 위해 필요한 분자를 의미하며, 그 예로는 CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, LFA-1(림프구 기능 관련 항원-1), CD2, CD7, LIGHT, N㎏2C, B7-H3 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 공동자극 도메인은 공동자극 분자 및 이들의 조합으로 이루어지는 그룹으로부터 선택된 분자의 세포내 부분일 수 있다.
더욱이, 선택적으로, 짧은 올리고펩티드 또는 폴리펩티드 링커는 CAR의 세포내 도메인과 막관통 도메인을 연결할 수 있다. 이러한 링커는 본 발명의 CAR에 포함될 수 있지만, 항원과 세포외 항체의 세포내 도메인 결합을 통해 T 세포 활성화를 유도할 수 있는 한 특별히 제한되지 않는다.
핵산 및 발현 시스템
본 개시내용은 항체, 특히 항-VISTA 항체에 대한 면역글로불린 경쇄 및 중쇄 유전자를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 이러한 핵산을 포함하는 벡터, 및 본 개시내용의 항체를 생산할 수 있는 숙주 세포를 포함한다. 또한, 본원은, 예를 들어 상기 정의된 바와 같이 높은 엄격성, 중간 또는 낮은 엄격성 하이브리드화 조건 하에서 본원에 제공된 항체 또는 변형된 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 하이브리드화하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
첫 번째 양태에서, 본 개시내용은 상기 기재된 바와 같은 항체, 특히 VISTA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 본 개시내용은 특히 본원에 개시된 항-VISTA 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 보다 구체적으로, 특정 구현예에서, 본원에 제공된 핵산 분자는 본원에 개시된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열, 또는 이들의 임의의 조합(예를 들어, 본원에 제공된 항체, 예를 들어 전장 항체, 항체의 중쇄 및/또는 경쇄, 또는 본원에 제공된 단쇄 항체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열로서)을 포함하거나 이들로 이루어진다.
예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항-VISTA 항체의 3개의 중쇄 CDR을 암호화한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항-VISTA 항체의 3개의 경쇄 CDR을 암호화한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항-VISTA 항체의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 암호화한다. 또 다른 예는 2개의 폴리뉴클레오티드를 제공하는데, 여기서 첫 번째 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항-VISTA 항체의 3개의 중쇄 CDR을 암호화하고; 두 번째 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 동일한 항-VISTA 항체의 3개의 경쇄 CDR을 암호화한다.
또 다른 경우에, 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항-VISTA 항체의 중쇄 가변 영역을 암호화한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항-VISTA 항체의 경쇄 가변 영역을 암호화한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항-VISTA 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 암호화한다. 또 다른 예는 2개의 폴리뉴클레오티드를 제공하는데, 여기서 첫 번째 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항-VISTA 항체의 중쇄 가변 영역을 암호화하고; 두 번째 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 동일한 항-VISTA 항체의 경쇄 가변 영역을 암호화한다.
하나의 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항-VISTA 항체의 중쇄를 암호화한다. 하나의 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항-VISTA 항체의 경쇄를 암호화한다. 하나의 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항-VISTA 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화한다. 또 다른 구현예는 2개의 폴리뉴클레오티드를 제공하며, 여기서 첫 번째 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 항-VISTA 항체의 중쇄를 암호화하고; 두 번째 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 동일한 항-VISTA 항체의 경쇄를 암호화한다.
하나의 구현예에서, 상기 기재된 항-VISTA 항체의 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 바람직하게, 중쇄는 서열번호 13-15의 서열을 갖는 3개의 중쇄 CDR을 포함한다. 더욱 바람직하게, 중쇄는 서열번호 19의 서열의 가변 영역을 포함하는 중쇄를 포함한다. 더욱 더 바람직하게 중쇄는 서열번호 21로 표시되는 서열을 갖는다.
다른 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 상기 기재된 항-VISTA 항체의 경쇄를 암호화한다. 바람직하게, 상기 경쇄는 서열번호 16-18 서열의 3개의 경쇄 CDR을 포함한다. 더욱 바람직하게, 상기 경쇄는 서열번호 20의 서열의 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 더욱 더 바람직하게, 경쇄는 서열번호 222로 표시되는 서열을 갖는다.
코돈 축퇴성으로 인해 또는 인간 항체의 경쇄 및 중쇄 또는 이의 단편을 발현하고자 하는 유기체에서 선호되는 코돈을 고려하여, 본 발명의 단클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 암호화 영역에서 발현되는 항체의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열이 변하지 않는 범위 내의 암호화 영역, 및 심지어 상기 암호화 영역 이외의 영역에 다양한 변이를 가질 수 있으며, 유전자 발현에 영향을 주지 않는 범위 내에서 다양한 변화나 변형이 이루어질 수 있다. 당업자는 이들 변이 유전자도 본 발명의 범위에 속한다는 것을 쉽게 이해할 것이다. 즉, 동등한 활성을 갖는 단백질이 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되는 한, 하나 이상의 핵산 염기가 치환, 결실, 삽입 또는 이들의 조합에 의해 변화될 수 있으며, 이들 역시 본 발명의 범위에 속한다. 폴리뉴클레오티드의 서열은 단쇄일 수도 있고 이중 쇄일 수도 있으며, DNA 분자일 수도 있고 RNA(mRNA) 분자일 수도 있다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 항체를 발현시키기 위해 다양한 발현 시스템이 사용될 수 있다. 하나의 양태에서, 이러한 발현 시스템은 관심 암호화 서열이 생성되고 후속적으로 정제될 수 있는 비히클을 나타내지만, 또한 적절한 뉴클레오티드 암호화 서열로 일시적으로 형질감염될 때 원위치에서 IgG 항체를 발현할 수 있는 세포를 나타내기도 한다.
본 개시내용은 상기 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다. 하나의 구현예에서, 벡터는 관심 항-VISTA 항체의 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 함유한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 관심 항-VISTA 항체의 경쇄를 암호화한다. 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 관심 항-VISTA 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화한다. 더욱 또 다른 구현예에서, 한 쌍의 폴리뉴클레오티드가 제공되는데, 여기서 첫 번째 폴리뉴클레오티드는 관심 항-VISTA 항체의 중쇄를 암호화하고, 두 번째 폴리뉴클레오티드는 동일한 관심 항-VISTA 항체의 경쇄를 암호화한다.
본 개시내용은 또한 융합 단백질, 변형된 항체, 항체 단편 및 이의 탐침을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 분자를 포함하는 벡터를 제공한다.
관심 항-VISTA 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 발현하기 위해, 상기 중쇄 및/또는 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 유전자가 전사 및 번역 서열에 작동적으로 연결되도록 발현 벡터에 삽입된다. 바람직한 구현예에서, 이들 폴리뉴클레오티드는 2개의 벡터내로 클로닝된다.
"작동적으로 연결된" 서열은 관심 유전자와 인접한 발현 조절 서열 및 관심 유전자를 조절하기 위해 트랜스로 또는 거리를 두고 작용하는 발현 조절 서열을 모두 포함한다. 본원에 사용되는 바와 같은 "발현 조절 서열"이라는 용어는 결찰된 암호화 서열의 발현 및 가공에 영향을 미치는 데 필요한 폴리뉴클레오티드 서열을 지칭한다. 발현 조절 서열에는 적절한 전사 개시, 종결, 프로모터 및 인핸서 서열; 스플라이싱 및 폴리아데닐화 신호와 같은 효율적인 RNA 처리 신호; 세포질 mRNA를 안정화시키는 서열; 번역 효율을 향상시키는 서열(즉, Kozak 공통 서열); 단백질 안정성을 향상시키는 서열; 및 원하는 경우, 단백질 분비를 향상시키는 서열을 포함한다. 이러한 조절 서열의 성질은 숙주 유기체에 따라 다르며; 원핵생물에서 이러한 조절 서열은 일반적으로 프로모터, 리보솜 결합 부위 및 전사 종결 서열을 포함하고; 진핵생물에서 이러한 조절 서열은 일반적으로 프로모터 및 전사 종결 서열을 포함한다. "조절 서열"이라는 용어는 최소한 그 존재가 발현 및 가공에 필수적인 모든 성분을 포함하도록 의도되며, 또한 그 존재가 유리한 추가적인 성분, 예를 들어 리더 서열 및 융합 상대 서열도 포함할 수 있다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드 및 이들 분자를 포함하는 벡터는 적합한 숙주 세포의 형질전환에 사용될 수 있다. 본원에 사용되는 바와 같은 "숙주 세포"라는 용어는 관심 항-VISTA 항체를 발현하기 위해 재조합 발현 벡터가 도입된 세포를 지칭하도록 의도된다. 이러한 용어는 특정 대상체 세포뿐만 아니라 그러한 세포의 자손도 지칭하고자 하는 것으로 이해되어야 한다. 특정 변형은 돌연변이 또는 환경 영향으로 인해 다음 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 이러한 자손은 실제로 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 여전히 본원에 사용되는 바와 같은 "숙주 세포"의 범위 내에 포함된다.
형질전환은 폴리뉴클레오티드를 세포 숙주에 도입하기 위한 임의의 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다. 이러한 방법은 당업자에게 주지되어 있으며, 덱스트란-매개된 형질전환, 칼슘 포스페이트 침전, 폴리브렌-매개된 형질감염, 원형질체 융합, 일렉트로포레이션, 폴리뉴클레오티드의 리포솜내로의 캡슐화, 생물학적 주입 및 핵 내로 DNA의 직접 미세주입을 포함한다.
숙주 세포는 하나 이상의 발현 벡터로 공동형질감염될 수 있다. 예를 들어, 숙주 세포는 상기 기재된 바와 같이 관심 항-VISTA 항체의 중쇄 및 경쇄 둘 다를 암호화하는 벡터로 형질감염될 수 있다. 대안적으로, 숙주 세포는 관심 항-VISTA 항체의 중쇄를 암호화하는 제1 벡터 및 상기 항체의 경쇄를 암호화하는 제2 벡터로 형질전환될 수 있다. 포유동물 세포는 일반적으로 재조합 치료 면역글로불린의 발현, 특히 전체 재조합 항체의 발현에 사용된다. 예를 들어, HEK293 또는 CHO 세포와 같은 포유동물 세포는 인간 사이토메갈로바이러스로부터의 주요 중간 초기 유전자 프로모터 요소를 운반하는 신호와 같은 발현 신호를 함유하는 벡터와 함께 본 발명의 인간화된 항-VISTA 항체를 발현하기에 유효한 시스템이다(Foecking et al., 1986, Gene 45:101; Cockett et al., 1990, Bio/Technology 8:　2).
또한, 삽입된 서열의 발현을 조절하거나 원하는 특정 방식으로 유전자 생성물을 변형 및 처리하는 숙주 세포가 선택될 수 있다. 이러한 변형(예를 들어, 글리코실화) 및 단백질 생성물의 가공은 단백질 기능에 중요할 수 있다. 다양한 숙주 세포는 단백질 및 유전자 산물의 번역 후 처리 및 변형을 위한 특징과 특정 기전을 가지고 있다. 발현된 관심 항체의 올바른 변형 및 처리를 보장하기 위해 적절한 세포주 또는 숙주 시스템을 선택한다. 따라서, 1차 전사물의 적절한 처리, 유전자 생성물의 글리코실화를 위한 세포 기구를 보유하는 진핵 숙주 세포가 사용될 수 있다. 이러한 포유동물 숙주 세포에는 CHO, COS, HEK293, NS/0, BHK, Y2/0, 3T3 또는 골수종 세포가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다(이러한 모든 세포주는 공공 기탁소, 예를 들어 Collection Nationale des Cultures de Microorganismes, Paris, France, 또는 the American Type Culture Collection, Manassas, VA, U.S.A.로부터 입수 가능하다).
재조합 단백질의 장기간, 고수율 생산을 위해서는 안정적인 발현이 바람직하다. 본 발명의 하나의 구현예에서, 항체를 안정적으로 발현하는 세포주를 조작할 수 있다. 바이러스 복제 기원을 포함하는 발현 벡터를 사용하는 대신, 숙주 세포를 프로모터, 인핸서, 전사 종결자, 폴리아데닐화 부위 및 당업자에게 공지된 기타 적절한 서열, 및 선택성 마커를 포함하는 적절한 발현 조절 요소의 조절 하에서 DNA로 형질전환시킨다. 외래 DNA를 도입한 후, 조작된 세포를 농축 배지에서 1 내지 2일 동안 증식시킨 후 선택 배지로 옮긴다. 재조합 플라스미드의 선택 마커는 선택에 대한 내성을 부여하며, 세포가 플라스미드를 염색체에 안정적으로 통합되게 하고 세포주로 확장되게 한다. 안정한 세포주를 구성하기 위한 다른 방법은 해당 분야에 공지되어 있다. 특히, 부위-특이적인 통합 방법이 개발되었다. 상기 방법에 따르면, 프로모터, 인핸서, 전사 종결자, 폴리아데닐화 부위 및 기타 적절한 서열을 포함하는 적절한 발현 조절 요소의 조절 하에서 형질전환된 DNA를 이전에 절단된 특정 표적 부위에서 숙주 세포 게놈에 통합시킨다(Moele et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 104(9): 3055-3060; 미국특허 제 5,792,632 호; 미국특허 제 5,830,729 호; 미국특허 제 6,238,924 호; WO 2009/054985; WO 03/025183; WO 2004/067753)
다수의 선택 시스템, 예를 들어 비제한적으로, 각각 tk, hgprt 또는 aprt 세포에서 헤르페스 단순 바이러스 티미딘 키나제(Wigler et al., Cell 11:223, 1977), 하이포잔틴-구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(Szybalska et al., Proc Natl Acad Sci USA 48: 202, 1992), 메티오닌 설폭스이미드 존재 하의 글루타메이트 신타제 선택(Adv Drug Del Rev, 58: 671, 2006, and website or litreature of Lonza Group Ltd.) 및 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제(Lowy et al., Cell 22: 817, 1980) 유전자를 본 발명에 따라 사용할 수 있다. 또한, 대사길항물질 내성을 하기 유전자에 대한 선택 기준으로서 사용할 수 있다: 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여하는 dhfr(Wigler et al., Proc Natl Acad Sci USA 77: 357, 1980); 마이코페놀산에 대한 내성을 부여하는 gpt(Mulligan et al., Proc Natl Acad Sci USA 78: 2072, 1981); 아미노글리코시드, G-418에 대한 내성을 부여하는 neo(Wu et al., Biotherapy 3: 87, 1991); 및 하이그로마이신에 대한 내성을 부여하는 hygro(Santerre et al., Gene 30: 147, 1984). 재조합 DNA 기술 분야에 공지된 방법을 원하는 재조합 클론을 선택하기 위해 일상적으로 적용할 수 있으며, 이러한 방법은 예를 들어 문헌[Ausubel et al., eds., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1993)]에 기재되어 있다. 벡터 증폭을 통해 항체의 발현 수준을 높일 수 있다. 항체를 발현하는 벡터 시스템의 마커가 증폭 가능한 경우, 배양물에 존재하는 억제제 수준의 증가는 마커 유전자의 사본수를 증가시킬 것이다. 증폭된 영역은 본 발명의 IgG 항체를 암호화하는 유전자와 연관되어 있으므로, 상기 항체의 생산도 증가할 것이다(Crouse et al., Mol Cell Biol 3: 257, 1983). 본 발명의 유전자를 발현하는 대체 방법이 존재하며 이는 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 본 발명의 유전자 상류의 발현 조절 요소에 결합할 수 있는 변형된 아연 집게 단백질을 조작할 수 있으며; 본 발명의 숙주 세포에서 상기 조작된 아연 집게 단백질(ZFN)의 발현은 단백질 생산의 증가를 유도한다(예를 들어, 문헌[Reik et al., Biotechnol. Bioeng., 97(5): 1180-1189, 2006]을 참조한다). 더욱이, ZFN은 미리 결정된 게놈 위치로 DNA의 통합을 자극하여 고효율의 부위-특이적 유전자 추가를 초래할 수 있다(Moehle et al, Proc Natl Acad Sci USA, 104:3055, 2007).
관심 항-VISTA 항체는, 원하는 항체를 발현하는 데 필요한 배양 조건 하에서 형질전환된 숙주 세포의 배양물을 증식시킴으로써 제조될 수 있다. 이어서 생성된 발현된 항체를 배양 배지 또는 세포 추출물로부터 정제할 수 있다. 관심 항-VISTA 항체의 가용성 형태를 배양 상등액으로부터 회수할 수 있다. 이어서, 이를 면역글로불린 분자의 정제를 위해 당업계에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환, 친화성, 특히 Fc에 대한 단백질 A 친화성 등에 의해), 원심분리, 차등 용해도 또는 단백질 정제를 위한 다른 표준 기법에 의해 정제할 수 있다. 적절한 정제 방법은 당업자에게 명백할 것이다.
따라서 본 발명의 또 다른 양태는 본원에 기재된 항체(예를 들어, 항-VISTA 항체)의 생산 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 하기의 단계를 포함한다:
a) 적합한 배양 조건 하에 배양 배지에서 상술한 숙주 세포를 증식시키는 단계; 및
b) 배양 배지로부터 또는 상기 배양된 세포로부터 항체(예를 들어, 항-VISTA 항체)를 회수하는 단계.
형질전환체를 배양하여 수득된 항체를, 정제되지 않은 상태로 사용할 수 있다. 불순물을 추가적으로 원심분리, 한외여과 등 다양한 방법으로 제거할 수 있으며, 생성물에 투석, 염침전, 크로마토그래피 등을 가할 수 있고, 여기서 상기 방법을 단독으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이 중에는 친화성 크로마토그래피가 가장 널리 사용되고 있으며, 이온교환 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 하이드록시아파타이트 크로마토그래피 등이 있다.
약제학적 조성물
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 항-VISTA 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 항-VISTA 항체 또는 이의 접합체, 즉 본원에 기재된 항-VISTA 항체 중 하나를 포함하는 면역접합체를 포함하는 조성물을 제공한다.
이들 조성물은 예를 들어 대상체의 면역 반응을 자극하는 데 특히 유용하다. VISTA에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체는 T 세포 활성화를 억제하는 VISTA 단백질과 결합하여 T 세포 활성화를 유도함으로써 면역반응을 자극할 수 있다.
본원에 기재된 조성물은 또한 암 치료에 유용하다. 보호성 항종양 면역은 본원에 개시된 항-VISTA 항체, 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체를 포함하는 조성물을 투여함으로써 확립될 수 있다.
임의로, 조성물은 하기에 기재된 면역 체크포인트 억제제와 같은 하나 이상의 추가적인 치료제를 포함할 수 있다. 조성물은 일반적으로 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 포함하는 멸균 약제학적 조성물의 일부로서 공급될 것이다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체, 및 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
이 조성물은 임의의 적합한 형태일 수 있다(환자에게 투여하는 원하는 방법에 따라 다르다). 본원에 기재된 방법에 사용되는 조성물은 예를 들어 유리체내( 예를 들어 유리체강내 주사에 의해), 점안액, 근육내, 정맥내, 피내, 경피, 동맥내, 복강내, 병변내, 두개내, 관절 내, 전립선내, 흉막 내, 기관내, 척수강내, 비강내, 질내, 직장내, 국소, 종양내, 복막, 피하 , 결막 하, 방광내, 점막, 심낭내, 배꼽 내, 안내, 안와 내, 경구, 국소, 경피, 흡입 , 주사, 이식, 주입, 연속 주입, 직접적인 표적 세포 국소 관류욕, 카테터, 세척에 의해, 크림 또는 지질 조성물 중에서 투여될 수 있다. 본원에 기재된 방법에 사용되는 조성물은 또한 전신적으로 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 투여 방법은 다양한 요인(예를 들어, 투여되는 화합물 또는 조성물 및 치료되는 상태, 질환 또는 장애의 중증도)에 따라 달라질 수 있다. 임의의 주어진 경우에 가장 적합한 투여 경로는 특정 항체, 대상체, 질환의 성질 및 중증도, 대상체의 신체 상태에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 항-VISTA 항체, 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체를 수용액으로 제형화하여 피하 주사로 투여할 수 있다. 바람직하게는, 항-VISTA를 수용액으로 제형화하고 주입에 의해 투여한다.
약제학적 조성물은 용량당 미리 결정된 양의 항-VISTA, 이의 항원-결합 단편 또는 이의 접합체를 함유하는 단위 용량 형태로 편리하게 제공될 수 있다. 이러한 단위는 예를 들어 5 ㎎ 내지 5 g, 예를 들어 10 ㎎ 내지 1 g, 또는 20 내지 50 ㎎을 함유할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 본 개시내용에 사용하기 위한 약제학적으로 허용되는 담체는 예를 들어 치료할 상태 또는 투여 경로에 따라 매우 다양한 형태를 취할 수 있다.
본 개시내용의 약제학적 조성물은 원하는 정도의 순도를 갖는 항체를, 당업계에서 전형적으로 사용되는 임의의 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제(이들 모두 본원에서 "담체"로서 지칭된다), 예를 들어, 완충제, 안정화제, 보존제, 등장화제, 비이온성 세제, 항산화제, 및 기타 잡다한 첨가제와 혼합함으로써 동결건조된 제형 또는 수용액으로서 보관하기 위해 제조할 수 있다. 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition (Osol, ed. 1980)]을 참조한다. 이러한 첨가제는 사용된 투여량과 농도에서 수용자에게 무독성이어야 한다. 바람직하게는, 본원에 개시된 조성물은 액체 조성물이다. 더욱 바람직하게, 본 개시내용의 액체 조성물은 수성 조성물이다. 더욱 더 바람직하게, 본 개시내용의 액체 조성물은 수성 담체가 증류수인 수성 조성물이다.
유리하게, 본 개시내용의 조성물은 멸균성이다.
유리하게, 본 개시내용의 조성물은 균일하다.
유리하게, 본 개시내용의 조성물은 등장성이다.
본 개시내용은 단일 관심 항체, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 VISTA에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 안정한 액체 조성물을 포함한다. 본 개시내용은 또한 2개 이상의 관심 항체(이의 항체 단편 포함), 예를 들어 ICOS 폴리펩티드(들)에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 안정한 액체 조성물을 포함한다. 하나의 구현예에서, 본 개시내용의 조성물은 적어도 약 1 ㎎/㎖, 적어도 약 5 ㎎/㎖, 적어도 약 10 ㎎/㎖, 적어도 약 20 ㎎/㎖, 적어도 약 30 ㎎/㎖, 적어도 약 40 ㎎/㎖, 적어도 약 50 ㎎/㎖, 적어도 약 60 ㎎/㎖, 적어도 약 70 ㎎/㎖, 적어도 약 80 ㎎/㎖, 적어도 약 90 ㎎/㎖, 적어도 약 100 ㎎/㎖, 적어도 약 110 ㎎/㎖, 적어도 약 120 ㎎/㎖, 적어도 약 130 ㎎/㎖, 적어도 약 140 ㎎/㎖, 적어도 약 150 ㎎/㎖, 적어도 약 160 ㎎/㎖, 적어도 약 170 ㎎/㎖, 적어도 약 180 ㎎/㎖, 적어도 약 190 ㎎/㎖, 적어도 약 200 ㎎/㎖, 적어도 약 250 ㎎/㎖, 또는 적어도 약 300 ㎎/㎖의 본원에 개시된 항-VISTA 항체를 포함한다.
본 조성물은 완충제 또는 pH 조절제를 포함하여 개선된 pH 조절을 제공함으로써 pH를 원하는 범위로 유지한다. 예를 들어, 본원에에 개시된 바와 같은 조성물은 약 3.0 내지 약 9.0, 약 4.0 내지 약 8.0, 약 5.0 내지 약 8.0, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 6.5, 약 5.5 내지 약 8.0, 약 5.5 내지 약 7.0, 또는 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 추가 구현예에서, 본 개시내용의 조성물은 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.1, 약 5.2, 약 5.3, 약 5.4, 약 5.5, 약 5.6, 약 5.7, 약 5.8, 약 5.9, 약 6.0, 약 6.1, 약 6.2, 약 6.3, 약 6.4, 약 6.5, 약 6.6, 약 6.7, 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5, 또는 약 9.0의 pH를 갖는다. 특정 구현예에서, 본 개시내용의 조성물은 약 6.5의 pH를 갖는다.
완충제는 약 2 mM 내지 약 50 mM 범위의 농도로 존재할 수 있다. 바람직하게, 완충제는 적어도 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 45 mM의 농도로 존재한다. 바람직하게, 완충제는 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 5 또는 2 mM 미만의 농도로 존재한다. 보다 바람직하게, 완충제의 농도는 5 내지 45 mM, 10 내지 40 mM, 15 내지 35 mM, 20 내지 30 mM로 구성된다. 가장 바람직하게, 완충제의 농도는 약 25 mM이다.
본 개시내용과 함께 사용하기에 적합한 완충제는 유기산 및 무기산 및 이의 염, 예를 들어 시트레이트 완충제(예를 들어, 일나트륨 시트레이트-이나트륨 시트레이트 혼합물, 시트르산-삼나트륨 시트레이트 혼합물, 시트르산-일나트륨 시트레이트 혼합물 등), 숙시네이트 완충제(예를 들어, 숙신산-일나트륨 숙시네이트 혼합물, 숙신산-나트륨 하이드록사이드 혼합물, 숙신산-이나트륨 숙시네이트 혼합물 등), 타르트레이트 완충제(예를 들어, 타타르산-나트륨 타르트레이트 혼합물, 타타르산-칼륨 타르트레이트 혼합물, 타타르산-나트륨 하이드록사이드 혼합물 등), 푸마레이트 완충제(예를 들어, 푸마르산-일나트륨 푸마레이트 혼합물, 푸마르산-이나트륨 푸마레이트 혼합물, 일나트륨 푸마레이트-이나트륨 푸마레이트 혼합물 등), 글루코네이트 완충제(예를 들어, 글루콘산-나트륨 글루코네이트 혼합물, 글루콘산-나트륨 하이드록사이드 혼합물, 글루콘산-칼륨 글루코네이트 혼합물 등), 옥살레이트 완충제(예를 들어, 옥살산-나트륨 옥살레이트 혼합물, 옥살산-나트륨 하이드록사이드 혼합물, 옥살산-칼륨 옥살레이트 혼합물 등), 락테이트 완충제(예를 들어, 락트산-나트륨 락테이트 혼합물, 락트산-나트륨 하이드록사이드 혼합물, 락트산-칼륨 락테이트 혼합물 등) 및 아세테이트 완충제(예를 들어, 아세트산-나트륨 아세테이트 혼합물, 아세트산-나트륨 하이드록사이드 혼합물 등)을 포함한다. 추가로, 포스페이트 완충제, 히스티딘 완충제 및 Tris와 같은 트리메틸아민 염을 사용할 수 있다. 바람직하게, 완충제는 시트레이트 완충제, 포스페이트 완충제 및 히스티딘 완충제로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다. 더욱 바람직하게, 완충제는 히스티딘 완충제이다. 더욱 바람직하게, 히스티딘 완충제는 25 mM의 농도로 존재한다.
당업자는 본원에 개시된 조성물이 인간 혈액과 등장성일 수 있다는 것, 즉 조성물이 본질적으로 인간 혈액과 동일한 삼투압을 갖는다는 것을 이해할 것이다. 바람직하게, 본 조성물의 삼투압은 약 100 mOSm 내지 약 1200 mOSm, 또는 약 200 mOSm 내지 약 1000 mOSm, 또는 약 200 mOSm 내지 약 800 mOSm, 또는 약 200 mOSm 내지 약 600 mOSm, 또는 약 250 mOSm 내지 약 500 mOSm, 또는 약 250 mOSm 내지 약 400 mOSm, 또는 약 250 mOSm 내지 약 350 mOSm의 범위이다. 본 조성물은 더욱 바람직하게는 약 250 mOSm 내지 약 350 mOSm의 삼투압을 가질 것이다. 등장성을 예를 들어 증기압이나 빙결식 삼투압계를 사용하여 측정할 수 있다. 조성물의 긴장성은 긴장성 개질제를 사용하여 조정된다. "긴장성 개질제"는 본 발명의 액체 조성물의 등장성을 보장하기 위해 조성물에 첨가될 수 있는 약제학적으로 허용되는 불활성 물질이며, 다가 당 알코올, 예를 들어 글리세린, 에리트리톨, 아라비톨, 자일리톨, 소르비톨 및 만니톨과 같은 3가 이상의 당 알코올, 염 및 아미노산을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 개시내용의 조성물은 약 100 mOSm 내지 약 1200 mOSm, 또는 약 200 mOSm 내지 약 1000 mOSm, 또는 약 200 mOSm 내지 약 800 mOSm, 또는 약 200 mOSm 내지 약 600 mOSm, 또는 약 250 mOSm 내지 약 500 mOSm, 또는 약 250 mOSm 내지 약 400 mOSm, 또는 약 250 mOSm 내지 약 350 mOSm의 삼투압을 갖는다.
특정 구현예에서, 본 개시내용의 조성물은 100 mOSm 내지 1200 mOSm, 또는 200 mOSm 내지 1000 mOSm, 또는 200 mOSm 내지 800 mOSm, 또는 200 mOSm 내지 600 mOSm, 또는 250 mOSm 내지 500 mOSm, 또는 250 mOSm 내지 400 mOSm, 또는 250 mOSm 내지 350 mOSm의 삽투압을 갖는다.
본원에 기재된 조성물의 다양한 성분 중 임의의 하나 또는 임의의 조합의 농도는 최종 조성물의 원하는 긴장성을 달성하도록 조절된다. 긴장성 개질제로서 약제학적으로 허용되고 본 개시내용에 적합한 아미노산에는 프롤린, 알라닌, L-아르기닌, 아스파라긴, L-아스파르트산, 글리신, 세린, 리신 및 히스티딘이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 최종 조성물의 원하는 등장성은 특히 조성물의 염 농도를 조절함으로써 달성될 수 있다. 긴장성 개질제로서 약제학적으로 허용되고 본 개시에 적합한 염에는 염화나트륨, 숙신산나트륨, 황산나트륨, 염화칼륨, 염화마그네슘, 황산마그네슘 및 염화칼슘이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 유리하게, 본 조성물은 NaCl, MgCl2 및/또는 CaCl2를 포함한다. 다른 구현예에서, MgCl2의 농도는 약 1 mM 내지 약 100 mM이다. 하나의 구현예에서, NaCl의 농도는 약 75 mM 내지 약 150 mM이다.
미생물 성장을 지연시키기 위해 보존제를 첨가할 수 있으며 0.2%-1%(w/v) 범위의 양으로 첨가할 수 있다. 본 개시내용과 함께 사용하기에 적합한 보존제는 페놀, 벤질 알코올, 메타-크레졸, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 벤즈알코늄 할라이드(예를 들어, 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드), 헥사메토늄 클로라이드, 및 알킬 파라벤, 예를 들어 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레소르시놀, 사이클로헥산올 및 3-펜탄올을 포함한다. 안정화제는 증량제부터, 치료제(즉, 항-VISTA 항체, 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체)를 가용화하거나 변성 또는 용기 벽에의 부착을 방지하는 것을 돕는 첨가제에 이르기까지 기능 범위가 넓은 부형제의 광범위한 범주를 지칭한다. 전형적인 안정화제는 다가 당 알코올(상기에 열거됨); 아르기닌, 리신, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 알라닌, 오르니틴, L-류신, 2-페닐알라닌, 글루타민산, 트레오닌 등의 아미노산, 락토스, 트레할로스, 스타키오스, 만니톨, 소르비톨, 자일리톨, 리비톨, 미오이니시톨, 갈락티톨, 글리세롤 등의 유기당 또는 당 알코올, 이노시톨과 같은 사이클리톨을 포함; 폴리에틸렌 글리콜; 아미노산 중합체; 요소, 글루타티온, 티옥트산, 나트륨 티오글리콜레이트, 티오글리세롤, α-모노티오글리세롤 및 나트륨 티오 설페이트와 같은 황 함유 환원제; 저분자량 폴리펩티드(예를 들어, 10개 이하 잔기의 펩티드); 인간 혈청 알부민, 소 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 자일로스, 만노스, 프럭토스, 글루코스와 같은 폴리비닐피롤리돈 모노사카라이드와 같은 친수성 중합체; 락토스, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드 및 라피노스와 같은 트리사카라이드; 및 덱스트란과 같은 폴리사카라이드일 수 있다. 안정화제는 활성 단백질(예를 들어, 항-VISTA 항체 또는 이러한 항체를 포함하는 접합체) 중량부당 0.1 내지 10,000 중량 범위로 존재할 수 있다. 바람직하게, 본원에 기재된 약제학적 조성물은 아르기닌 및 슈크로스로부터 선택되는 적어도 하나의 안정화제를 포함한다. 아르기닌은 예를 들어 0 내지 50 mM의 농도로 존재할 수 있다. 다른 경우, 슈크로스 농도는 0 내지 6% 범위일 수 있다.
비이온성 계면활성제 또는 세제("습윤제"로도 알려짐)를 첨가하여 항-VISTA 항체(또는 이의 접합체)의 용해를 도울 뿐만 아니라, 교반 유발 응집으로부터 치료 단백질을 보호할 수 있으며, 이는 또한 단백질 변성을 일으키지 않으면서 제형을 전단 표면 응력에 노출되게 한다. 적합한 비이온성 계면활성제에는 폴리소르베이트(20, 80 등), 폴리옥사머(184, 188 등), 플루로닉 폴리올, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노에테르(TWEEN®-20, TWEEN®-80 등)가 포함된다. 비이온성 계면활성제는 약 0.05 ㎎/㎖ 내지 약 1.0 ㎎/㎖, 예를 들어 약 0.07 ㎎/㎖ 내지 약 0.2 ㎎/㎖의 범위로 존재할 수 있다. 바람직하게는, 본원에 기재된 약제학적 조성물은 폴리소르베이트, 예를 들어 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80인 비이온성 계면활성제를 포함한다. 폴리소르베이트는 약제학적 조성물에 0 내지 1%, 바람직하게는 0 내지 0.5%로 존재할 수 있다. 따라서 폴리소르베이트는 바람직하게는 0, 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4% 또는 0.5%의 농도로 본원에 기재된 약제학적 조성물에 존재한다.
추가적인 기타 부형제에는 증량제(예를 들어, 전분), 킬레이트제(예를 들어, EDTA), 항산화제(예를 들어, 아스코르브산, 메티오닌, 비타민 E) 및 공용매가 포함된다.
바람직하게, 본원에 개시된 약제학적 조성물은 25 mM 히스티딘, 150 mM NaCl, 0.3% 폴리소르베이트 80(w/w)*, pH 6.5를 포함한다. 보다 바람직하게, 이 약제학적 조성물은 20 ㎎/㎖의 본원에 개시된 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체를 포함한다.
본 개시내용은 추가로, 동시에, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한 조합 생성물로서 적어도 하기를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다:
i) 본원에 개시된 바와 같은 항-VISTA 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 이의 접합체; 및
ii) 제2 치료제, 예를 들어 하기에 기재된 바와 같은 면역 체크포인트 억제제.
본원에 사용되는 바와 같은 "동시 사용"은 본 발명에 따른 조성물의 2개 화합물을 단일의 동일한 약제학적 형태로 투여하는 것을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 "별도로 사용"은 본 발명에 따른 조성물의 2개 화합물을 별개의 약제학적 형태로 동시에 투여하는 것을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 "순차적 사용"은 각각 별개의 약제학적 형태인 본 발명에 따른 조성물의 2개 화합물의 연속적인 투여를 지칭한다.
항-VISTA 항체(또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체) 및 제2 치료제, 예를 들어 면역 체크포인트 억제제의 조성물은 하나 이상의 항-VISTA 항체(또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 접합체) 및/또는 하나 이상의 제2 치료제(예를 들어 하기 기재된 바와 같은 면역 체크포인트 억제제)의 혼합물로서 단독으로, 암 치료에 유용하거나 다른 암 요법에 보조적인 다른 작용제와의 혼합물 또는 조합으로 투여될 수 있다. 적합한 조합 및 보조 요법의 예를 하기에 제공한다.
본 개시내용은 항-VISTA 항체(또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 접합체)를 함유하고 본원에 기재된 약제학적 키트를 포함한다. 약제학적 키트는 항-VISTA 항체(예를 들어, 동결건조된 형태 중에 또는 수용액으로서) 및 하기 중 하나 이상을 포함하는 패키지이다:
·제2 치료제, 예를 들어 하기에 기재된 바와 같은 면역 체크포인트 억제제;
·항-VISTA 항체를 투여하기 위한 장치, 예를 들어 펜, 바늘 및/또는 주사기; 및
·억제제가 항체 형태인 경우 항체를 재현탁시키기 위한 의약품 등급의 물 또는 완충제.
항-VISTA 항체(또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체)의 각 단위 용량은 별도로 포장될 수 있으며, 키트는 하나 이상의 단위 용량(예를 들어, 2단위 용량, 3단위 용량, 4단위 용량, 5단위 용량, 8단위 용량, 10단위 용량 또는 그 이상)을 함유할 수 있다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 단위 용량은 각각 주사기 또는 펜에 수용된다.
유효량
항-VISTA 항체 및 이의 접합체는, 임의로 면역 체크포인트 억제제와 조합하여, 일반적으로 의도된 결과를 달성하는 데 유효한 양, 예를 들어 이를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 데 유효한 양으로 사용될 것이다. 항-VISTA 항체(또는 이의 접합체) 및/또는 면역 체크포인트 억제제를 포함하는 약제학적 조성물은 치료적으로 유효한 투여량으로 환자(예를 들어, 인간 대상체)에게 투여될 수 있다.
유효량의 결정은 특히 본원에 제공된 상세한 개시내용에 비추어 당업자의 능력 내에 있다. 화합물 또는 접합체의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 및 실험 동물에서의 표준 약제학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 대상체에게 투여될 본 조합 또는 다른 치료제의 유효량은 질환(예를 들어, 암)의 단계, 범주 및 상태 및 대상체의 특성, 예를 들어 일반적인 건강 상태, 연령, 성별, 체중 및 약물 내성에 따라 달라질 것이다. 투여될 본 치료제 또는 조합의 유효량은 또한 투여 경로 및 투여 형태에 따라 달라질 것이다. 투여량 및 간격은 원하는 치료 효과를 유지하기에 충분한 활성 화합물의 혈장 수준을 제공하기 위해 개별적으로 조절될 수 있다.
투여되는 항-VISTA 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 접합체의 양은 치료되는 질환(예를 들어, 암)의 성질 및 단계, 투여 형태, 경로 및 부위, 치료 섭생(예를 들어, 치료제가 면역 체크포인트 억제제와 함께 사용되는지 여부), 치료할 특정 대상체의 연령 및 상태, 항체 또는 접합체로 치료할 환자의 민감도를 포함한 다양한 요인에 따라 변할 것이다. 적절한 투여량은 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 궁극적으로 의사는 사용할 적절한 투여량을 결정할 것이다. 이 투여량은 적절한 만큼 자주 반복될 수 있다. 부작용이 발생하는 경우, 일반적인 임상 관행에 따라 투여량의 양 및/또는 빈도를 변경하거나 줄일 수 있다. 적절한 투여량 및 치료 섭생은 당업자에게 공지된 통상적인 기법을 사용하여 치료의 진행을 모니터링함으로써 확립될 수 있다.
유효 투여량을 시험관내 분석을 통해 초기에 추정할 수 있다. 예를 들어, 동물에 사용하기 위한 초기 용량은, 시험관내에서 측정된 VISTA에 대한 항체의 결합 친화도 이상인 항-VISTA 항체의 순환하는 혈액 또는 혈청 농도를 달성하도록 제형화될 수 있다. 특정 항체의 생체이용률을 고려하여 이러한 순환하는 혈액 또는 혈청 농도를 달성하기 위한 투여량을 계산하는 것은 숙련된 기술자의 능력 내에 있다. 안내를 위해, 독자는 문헌[Fingl & Woodbury, "General Principles" in Goodman and Gilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Chapter 1, latest edition, Pagamonon Press] 및 여기에 인용된 참고 문헌을 참조한다. 초기 투여량은 동물 모델과 같은 생체내 데이터를 통해 추정될 수 있다. 암과 같은 특정 질환을 치료하기 위한 화합물의 효능을 시험하는데 유용한 동물 모델은 일반적으로 당업계에 주지되어 있다. 숙련가는 인간 투여에 적합한 투여량을 결정하기 위해 이러한 정보를 일상적으로 조절할 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 항-VISTA 항체의 유효 용량은 단일(예를 들어, 일시주사) 투여, 수회 투여 또는 연속 투여당 약 0.001 내지 약 75 ㎎/㎏의 범위일 수 있거나, 단일(예를 들어, 일시주사) 투여, 수회 투여 또는 연속 투여당 0.01-5000 ㎍/㎖ 혈청 농도의 혈청 농도를 달성할 수 있는 범위, 또는 치료되는 상태, 투여 경로 및 대상체의 연령, 체중 및 상태에 따른 임의의 유효 범위 또는 그 안의 값일 수 있다. 특정 구현예에서, 각각의 용량은 체중 ㎏당 약 0.5 ㎍ 내지 약 50 ㎍, 예를 들어 체중 ㎏당 약 3 ㎍ 내지 약 30 ㎍ 범위일 수 있다.
투여량, 빈도, 및 투여 기간은 환자의 연령, 체중, 질환 상태 등 다양한 요인에 따라 달라진다. 투여를 위한 치료 섭생은 2주 내지 무기한, 2주 내지 6개월, 3개월 내지 5년, 6개월 내지 1 또는 2년, 8개월 내지 18개월 등 동안 지속될 수 있다. 임의로, 치료 섭생은 반복 투여로, 예를 들어 1일 1회, 1일 2회, 2일, 3일, 5일, 1주, 2주 또는 1개월마다 제공된다. 반복 투여는 동일한 용량 또는 다른 용량으로 이루어질 수 있다. 투여는 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회 또는 그 이상 반복될 수 있다. 치료 유효량의 항-VISTA 항체 또는 이의 접합체(임의로 면역 체크포인트 억제제와 조합하여)는 단일 용량으로 또는 치료 섭생 과정에 걸쳐, 예를 들어 1주, 2주, 3주, 1개월, 3개월, 6개월, 1년 또는 그 이상의 과정에 걸쳐 투여될 수 있다.
치료 방법
본원에 기재된 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체는 특히 항체의 효과기 기능의 활성화를 통해 T 세포 증식 및 사이토카인 생산을 비롯한 T 세포 활성화를 촉진할 수 있다. 따라서, 본원에 기재된 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체는 면역 반응을 유도하는 방법에 사용될 수 있으며, 여기서 상기 방법은 유효량의 항-VISTA 항체 또는 접합체를, 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 특히, 본 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체는 면역 반응을 유도하는데 사용하기 위한 것이다. 본 개시내용은 또한 면역 반응을 유도하기 위한 약제를 제조하기 위한 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체의 용도에 관한 것이다. 본원에 기재된 방법의 특정 구현예에서, 면역 반응의 유도는 항체의 효과기 기능의 활성화를 필요로 한다.
본원에 기재된 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체는 면역 반응을 유도하는 방법에 사용될 수 있으며, 여기서 면역 반응의 유도는 VISTA-매개된 면역억제를 억제하는 것을 포함하고, 상기 방법은 유효량의 항-VISTA 항체 또는 접합체를, 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 바람직하게, 본원에 기재된 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체 는 면역 반응을 유도하는 방법에 사용될 수 있으며, 여기서 면역 반응의 유도는 T 세포 활성화를 촉진하는 것을 포함하고, 상기 방법은 유효량의 항-VISTA 항체 또는 접합체를, 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. T 세포 활성화는 특히 T 세포 증식, 예를 들어 CD4+ T 세포 증식 및/또는 CD8+ T 세포 증식, 및/또는 사이토카인 생산, 특히 염증전 사이토카인, 예를 들어 INF-γ, IL-2 및/또는 TNF-α의 자극을 포함할 수 있다.
면역 반응을 유도하는, 예를 들어 특히 CD4+ T 세포 증식, CD8+ T 세포 증식, CD4+ T 세포 사이토카인 생산 및/또는 CD8+ T 세포 사이토카인 생산의 유도를 통해 T 세포 활성화를 촉진함으로써 면역 반응을 유도하는 본 항-VISTA 항체의 능력은 VISTA-매개된 면역억제를 억제하여 암을 비롯한 VISTA-매개된 질환을 치료하는 데 유용하다. 따라서 VISTA 억제 경로에 대한 치료적 중재는 다양한 VISTA-매개된 질환, 특히 암의 치료를 위해 염증 및 T 세포 매개 면역을 조절하는 유망한 접근법을 나타낸다. 실제로, 본원에 개시된 항체는 생체내에서 종양 성장을 억제한다.
따라서, 본원에 기재된 항-VISTA 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 접합체는 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있으며, 여기서 상기 방법은 유효량의 항-VISTA 항체 또는 접합체를 암 치료가 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 따라서, 본원에 기재된 항-VISTA 항체 또는 접합체는 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있으며, 여기서 치료는 VISTA-매개된 면역억제를 억제하는 것을 포함하고, 상기 방법은 유효량의 항-VISTA 항체 또는 접합체를, 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 바람직하게, 본원에 기재된 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체는 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있으며, 여기서 치료는 T 세포 활성화를 촉진하는 것을 포함하고, 상기 방법은 유효량의 항-VISTA 항체 또는 접합체를, 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
따라서 본원에 개시된 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체는 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하고, CD4+ T 세포 증식을 유도하고, CD8+ T 세포 증식을 유도하고, CD4+ T 세포 사이토카인 생산을 유도하고, 및/또는 CD8+ T 세포 사이토카인 생산을 유도하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 방법은 유효량의 항-VISTA 항체 또는 접합체를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 따라서, 바람직하게는, 본원에 개시된 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체는 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있으며, 여기서 치료는 CD4+ T 세포 증식을 유도하고, CD8+ T 세포 증식을 유도하고, CD4+ T 세포 사이토카인 생산을 유도하고, 및/또는 CD8+ T 세포 사이토카인 생산을 유도하는 것을 포함하며, 상기 방법은 유효량의 항-VISTA 항체 또는 접합체를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
놀랍게도, 본 항체에 의한 T 세포의 활성화에는 효과기 기능이 필요하다. 대조적으로, N298A 돌연변이를 통해 인간 Fcγ 수용체에 대한 결합을 피하도록 조작된, 따라서 어떠한 효과기 기능도 없는 인간화된 IgG1 항-VISTA mAb의 버전(Herbs et al. Nature 515(7528): 563-567)은 CD4+ 증식, CD8+ 증식, CD4+ T 세포 사이토카인 생산, 및 CD8+ T 세포 사이토카인 생산 중 어느 것도 유도할 수 없다. 따라서, 본원에 기재된 항-VISTA 항체의 이러한 변이체는 생체내에서 종양 증식을 억제할 수 없다.
보다 바람직하게, 본원에 기재된 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체는 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있으며, 여기서 치료는 항체의 효과기 기능의 활성화에 의해 T 세포 활성화를 촉진하는 것을 포함하며, 상기 방법은 유효량의 항-VISTA 항체 또는 접합체를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 훨씬 더 바람직하게, 본원에 기재된 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체는 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있으며, 여기서 치료는 항체의 효과기 기능의 활성화에 의해 CD4+ T 세포 증식을 유도하고, CD8+ T 세포 증식을 유도하고, CD4+ T 세포 사이토카인 생산을 유도하고, 및/또는 CD8+ T 세포 사이토카인 생산을 유도하는 것을 포함하며, 상기 방법은 유효량의 항-VISTA 항체 또는 접합체를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 본원에 기재된 치료 방법은 본원에 기재된 VISTA와 특이적으로 결합하는 항체, 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 개시된 바와 같은 이들 항체를 포함하는 접합체를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 따라서, 본원에 개시된 VISTA 항체 및 이의 접합체는 VISTA-매개된 질환, 특히 암의 치료를 위해 면역, 특히 T 세포 면역을 조절하는 데 유용하다.
따라서, 본 개시내용의 양태는 환자의 VISTA-매개된 질환, 특히 암의 치료에 사용하기 위한 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체에 관한 것이다. 또한, 본원은 VISTA-매개된 질환, 특히 암의 치료가 필요한 환자에서 상기 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 개시된 항-VISTA 항체, 이의 항원 결합 단편 또는 접합체를 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 본 개시내용은 또한 암 치료용 약제를 제조하기 위한 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체의 용도에 관한 것이다.
하나의 구현예에서, 본 개시내용은 환자의 VISTA-매개된 질환, 특히 암의 치료에 사용하기 위한, 본원에 개시된 항-VISTA 항체 또는 이의 접합체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본원은 VISTA-매개된 질환, 특히 암의 치료가 필요한 환자에서 상기 질환을 치료하는 방법을 제공되며, 상기 방법은 본원에 개시된 항-VISTA 항체, 이의 항원 결합 단편 또는 접합체를 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 본 개시내용은 또한 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하기 위한 약제를 제조하기 위한, 본원에 개시된 항-VISTA 항체, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체를 포함하는 조성물의 용도에 관한 것이다.
본원에 개시된 항체로 치료될 수 있는 암에는 모든 기관 또는 신체계의 모든 악성 또는 양성 종양이 포함될 수 있다. 예로는 유방, 소화기/위장, 내분비, 신경내분비, 눈, 비뇨생식기, 생식세포, 부인과, 두경부, 혈액/혈액, 근골격, 신경, 호흡기/흉부, 방광, 결장, 직장, 폐, 자궁내막, 신장, 췌장, 침샘, 간, 위, 복막, 고환, 식도, 전립선, 뇌, 자궁경부, 난소 및 갑상선의 암이 있으나, 이들로 제한되지는 않는다. 다른 암은 흑색종, 중피종, 육종, 교모세포종, 백혈병, 골수종 및 림프종과 같은 혈액암, 및 본원에 기재된 임의의 암을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 골수성 및/또는 T-세포로 침윤된다. 일부 구현예에서, 암은 백혈병, 림프종, 골수이형성 증후군(myelodysplastic syndrome), 중피종 및/또는 골수종이다. 일부 구현예에서, 암은 림프구성 백혈병 또는 골수성 백혈병, 예를 들어 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성(골수성) 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 털세포 백혈병(hairy cell leukaemia), T-세포 전림프구성 백혈병(T-cell prolymphocytic leukaemia), 거대 과립 림프구성 백혈병(large granular lymphocytic leukaemia), 또는 성인 T 세포 백혈병을 포함한 임의의 종류 또는 유형의 백혈병일 수 있다. 일부 구현예에서, 림프종은 조직구 림프종, 여포성 림프종 또는 호지킨 림프종이고, 일부 구현예에서 암은 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, 암은 고형 종양, 예를 들어 흑색종 또는 방광암이다. 특정 구현예에서, 암은 비소세포폐암(NSCLC)과 같은 폐암이다. 본 발명은 또한 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에서, 비제한적으로 백혈병, 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(ALL), B-세포, T-세포 또는 FAB ALL, 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 털세포 백혈병, 골수이형성증후군(MDS), 림프종, 호지킨병, 악성 림프종, 비호지킨 림프종, 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 다발성 골수종, 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 대장 암종, 췌장 암종, 비인두 암종(nasopharyngeal carcinoma), 악성 조직구증(malignant histiocytosis), 악성 부종양 증후군/고칼슘혈증(paraneoplastic syndrome/hypercalcemia of malignancy), 고형 종양, 선암종(adenocarcinomas), 육종, 악성 흑색종, 혈관종(haemangioma), 전이성 질환, 암 관련된 골 재흡수, 암-관련된 골통증 등에서 적어도 하나를 포함한 적어도 하나의 악성 질환의 조절 또는 치료 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 골수성 및/또는 T 세포로 침윤된다. 특정 구현예에서, 고형 종양은 비소세포폐암(NSCLC)과 같은 폐암이다. 또 다른 구현예에서, 고형 종양은 중피종이다.
바람직하게는, 상기 암은 방광암, 유방암, 자궁경부암, 대장암, 자궁내막암, 식도암, 난관암, 담낭암, 위장관암, 두경부암, 혈액암(예를 들어, 백혈병, 림프종 또는 골수종), 후두암, 간암, 폐암, 림프종, 흑색종, 중피종, 난소암, 원발성 복막암, 침샘암, 육종, 위암, 갑상선암, 췌장암, 신장 세포 암종, 교모세포종 및 전립선암으로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다.
본 항체는 상기에서 상세히 설명한 바와 같이 VISTA-매개된 질환이 있는 환자, 예를 들어 암 환자에서 면역 반응을 유도할 수 있기 때문에 특히 유용하다. 따라서, 하나의 구현예에서, 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체는 환자의 VISTA-매개된 질환, 특히 암의 치료에 사용하기 위한 것이며, 여기서 용도는 환자에서 면역 반응을 유도하는 것을 포함한다. 또한, 본원은 본원에 개시된 항-VISTA 항체 또는 이의 접합체를 환자에게 투여하고 이 환자에서 면역 반응을 유도하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 개시내용은 또한 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하기 위한 약제를 제조하기 위한 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체의 용도에 관한 것이며, 여기서 치료는 환자에서 면역 반응을 유도하는 것을 포함한다.
하나의 구현예에서, 본 개시내용은 환자의 VISTA-매개된 질환, 특히 암의 치료에 사용하기 위한 본 항-VISTA 항체 또는 이의 접합체를 포함하는 본원에 개시된 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기 용도는 환자의 면역 반응을 유도하는 것을 포함한다. 또한, 본원은 VISTA-매개된 질환, 특히 암의 치료가 필요한 환자에서 상기 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 상기 환자에게 본원에 개시된 항-VISTA 항체 또는 접합체를 투여하고 이 환자에서 면역 반응을 유도하는 것을 포함한다. 본 개시내용은 또한 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하기 위한 약제를 제조하기 위한, 본 항-VISTA 항체 또는 이의 접합체를 포함하는, 본원에 개시된 조성물의 용도에 관한 것이며, 여기서 치료는 환자에서 면역 반응을 유도하는 것을 포함한다.
하나의 구현예는 VISTA-매개된 질환을 갖는 환자, 예를 들어 암 환자에서 면역 반응을 유도하는데 사용하기 위한 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체를 제공한다. 또한 본원은 VISTA-매개된 질환이 있는 환자, 예를 들어 암 환자에서 면역 반응을 유도하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 개시된 항-VISTA 항체 또는 접합체를 상기 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 본 개시내용은 또한 VISTA-매개된 질환을 갖는 환자, 예를 들어 암 환자에서 면역 반응을 유도하기 위한 약제를 제조하기 위한 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체의 용도에 관한 것이다.
하나의 구현예에서, 본 개시내용은 VISTA-매개된 질환을 갖는 환자, 예를 들어 암 환자에서 면역 반응을 유도하는데 사용하기 위한, 본원에 개시된 항-VISTA 항체 또는 이의 접합체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본원은 VISTA-매개된 질환이 있는 환자, 예를 들어 암 환자에서 면역 반응 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 환자에게 본원에 개시된 항-VISTA 항체 또는 이의 접합체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 본 개시내용은 또한 VISTA-매개된 질환을 갖는 환자, 예를 들어 암 환자에서 면역 반응을 유도하기 위한 약제를 제조하기 위한, 본원에 개시된 항-VISTA 항체 또는 이의 접합체를 포함하는 조성물의 용도에 관한 것이다.
따라서, 본원에 개시된 항체에 의해 생성된 면역 반응은 CD4+ T 세포 증식의 유도, CD8+ T 세포 증식의 유도, CD4+ T 세포 사이토카인 생산의 유도, 및 CD8+ T 세포 사이토카인 생산의 유도를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 본원에 개시된 항체가 CD4+ T 세포 증식의 유도, CD8+ T 세포 증식의 유도, CD4+ T 세포 사이토카인 생산의 유도 및 CD8+ T 세포 사이토카인 생산의 유도를 포함하나 이에 제한되지 않는 면역 반응을 생성하기 위해 효과기 기능이 필요하다.
항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체는 제2 치료제와 혼합될 수 있다.
"치료제"는 생물제, 예를 들어 항체, 펩티드, 단백질, 효소 및 화학요법제를 포함한다. 치료제는 또한 세포결합제(CBA) 및 항체-약물 접합체(ADC)와 같은 화학적 화합물의 면역접합체를 포함한다. 접합체 내의 약물은 본원에 기재된 것과 같은 세포독성제일 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, 항-VISTA 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 접합체, 및 다른 치료제는 같은 날에, 예를 들어 동일한 환자 방문 동안 상기 환자에게 투여되는 경우 연속적으로 투여된다고 한다. 연속 투여는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8시간 간격으로 이루어질 수 있다. 대조적으로, 본 개시내용의 항-VISTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편 또는 접합체 및 다른 치료제는 환자에게 서로 다른 날에 투여되는 경우 별도로 투여된다고 한다, 예를 들어 본 개시내용의 항-VISTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 접합체 및 다른 치료제는 1일, 2일 또는 3일, 1주, 2주 또는 매월 간격으로 투여될 수 있다. 본 개시내용의 방법에서, 본 개시내용의 항-VISTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편 또는 접합체의 투여는 다른 치료제의 투여 전 또는 후에 투여될 수 있다.
비제한적인 예로서, 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체, 및 다른 치료제는 일정 기간 동안 동시에 투여된 다음, 본 개시내용의 항-VISTA 항체, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체 및 다른 치료제가 교번하여 투여되는 두 번째 기간이 이어질 수 있다.
본 개시내용의 병용 요법은, 항-VISTA 항체, 이의 항원-결합 단편 또는 접합체, 또는 다른 치료제 중 어느 것도 단독으로, 치료 유효량으로 투여되지 않는 경우의 치료 이점을 초과하는 부가적 또는 상승적 효과를 제공할 수 있다. 따라서, 이러한 작용제는 더 적은 양으로 투여될 수 있어 부작용의 가능성 및/또는 중증도를 줄일 수 있다.
바람직한 구현예에서, 다른 치료제는 화학요법제이다. 상기 화학요법제는 바람직하게는 알킬화제, 대사길항물질, 항종양 항생제, 유사분열 억제제, 염색질 기능 억제제, 항-혈관형성제, 항-에스트로겐제, 항-안드로겐제 또는 면역조절제이다.
본원에 사용되는 바와 같은 "알킬화제"라는 용어는 세포 내의 임의의 분자, 바람직하게는 핵산(예를 들어, DNA)을 가교결합시키거나 알킬화시킬 수 있는 임의의 물질을 지칭한다. 알킬화제의 예에는 질소 머스터드, 예를 들어 메클로르에타민, 클로람부콜, 멜팔렌, 클로라이드레이트, 피포브로멘, 프레드니무스틴, 디소딕 -포스페이트 또는 에스트라무스틴; 옥사조포린, 예를 들어 사이클로포스파미드, 알트레타민, 트로포스파미드, 설포포스파미드 또는 이포스파미드; 아지리딘 또는 이민-에틸렌, 예를 들어 티오테파, 트리에틸렌아민 또는 알테트라민; 니트로소우레아, 예를 들어 카르무스틴, 스트렙토조신, 포테무스틴 또는 로무스틴; 알킬-설포네이트, 예를 들어 부설판, 트레오설판 또는 임프로설판; 트리아젠, 예를 들어 다카르바진; 또는 백금 착체, 예를 들어 시스-백금, 옥살리플라틴 및 카르보플라틴이 포함된다.
본원에 사용되는 바와 같은 "대사길항물질"이라는 표현은 특정 활성, 대개는 DNA 합성을 방해하여 세포 성장 및/또는 대사를 차단하는 물질을 지칭한다. 대사길항물질의 예에는 메토트렉세이트, 5-플루루라실, 플록수리딘, 5-플루오로데옥시유리딘, 카페시타빈, 시타라빈, 플루다라빈, 시토신 아라비노사이드, 6-머캅토퓨린(6-MP), 6-티오구아닌(6-TG), 클로로데옥시아데노신, 5-아자시티딘, 젬시타빈, 클라드리빈, 데옥시코포르마이신 및 펜토스타틴이 포함된다.
본원에 사용되는 바와 같이, "항-종양 항생제"는 DNA, RNA 및/또는 단백질 합성을 예방하거나 억제할 수 있는 화합물이다. 항종양 항생제의 예로는 독소루비신, 다우노루비신, 이다루비신, 발루비신, 미톡산트론, 닥티노마이신, 미트라마이신, 플리카마이신, 미토마이신 C, 블레오마이신, 및 프로카바진이 포함된다.
본원에 사용되는 바와 같은 "유사분열 억제제"는 세포 주기 및 유사분열의 정상적인 진행을 방지한다. 일반적으로 파클리탁셀 및 도세탁셀과 같은 미세소관 억제제 또는 탁소이드가 유사분열을 억제할 수 있다. 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 및 비노렐빈과 같은 빈카 알칼로이드가 또한 유사분열을 억제할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, "염색질 기능 억제제" 또는 "토포이소머라제 억제제"라는 용어는 토포이소머라제 I 또는 토포이소머라제 II와 같은 염색질 모델링 단백질의 정상적인 기능을 억제하는 물질을 지칭한다. 염색질 기능 억제제의 예에는 토포이소머라제 I의 경우 캄토테신 및 이의 유도체, 예를 들어 토포테칸 또는 이리노테칸이 포함되고, 토포이소머라제 II의 경우 에토포시드, 에토포시드 포스페이트 및 테니포시드가 포함된다.
본원에 사용되는 바와 같이, "항-혈관형성제"라는 용어는 혈관 성장을 억제하는 임의의 약물, 화합물, 물질 또는 작용제를 지칭한다. 예시적인 항-혈관형성제에는 라족신, 마리마스타트, 바티마스타트, 프리노마스타트, 타노마스타트, 일로마스타트, CGS-27023A, 할로퓨지논, COL-3, 네오바스타트, BMS-275291, 탈리도마이드, CDC 501, DMXAA, L-651582, 스쿠알라민, 엔도스타틴, SU5416, SU6668, 인터페론-알파, EMD121974, 인터류킨-12, IM862, 안지오스타틴 및 비탁신이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다.
본원에 사용되는 바와 같이, "항-에스트로겐" 또는 "항-에스트로겐제"라는 용어는 에스트로겐의 작용을 감소시키거나 길항하거나 억제하는 모든 물질을 지칭한다. 항-에스트로겐제의 예로는 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜, 드롤록시펜, 요오독시펜, 아나스트로졸, 레트로졸 및 엑세메스탄이 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, "항-안드로겐" 또는 "항-안드로겐제"라는 용어는 안드로겐의 작용을 감소시키거나 길항하거나 억제하는 모든 물질을 지칭한다. 항안드로겐의 예로는 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 스프리로노락톤, 시프로테론 아세테이트, 피나스테리드 및 시미티딘이 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 "면역조절제"는 면역계를 자극하는 물질이다.
면역조절제의 예는 인터페론, 인터류킨, 예를 들어 알데스류킨, OCT-43, 데닐류킨 디플리톡스 및 인터류킨-2, 종양 괴사 인자, 예를 들어 타소네르민 또는 기타 면역조절제, 예를 들어 렌티난, 시조피란, 로퀴니멕스, 피도티모드, 페가데마제, 티모펜틴, 폴리 I:C 또는 레바미솔(5-플루오로우라실과 함께)을 포함한다.
보다 자세한 내용에 대해서, 당업자는 에서 편집된, 표제의 매뉴얼을 참조할 수 있다.
또한 화학제 또는 세포독성제, 예를 들어 게피티닙 또는 에를로티닙과 같은 모든 키나제 억제제가 언급될 수 있다.
보다 일반적으로, 적합한 화학요법제의 예에는 1-데히드로테스토스테론, 5-플루오로우라실 데카르바진, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 악티노마이신 D, 아드리아마이신, 알데스류킨, 알킬화제, 알로푸리놀 나트륨, 알트레타민, 아미포스틴, 아나스트로졸, 안트라마이신(AMC)), 항-유사분열제, 시스-디클로로디아민 백금(II)(DDP) 시스플라틴), 디아미노 디클로로 백금, 안트라사이클린, 항생제, 대사길항물질, 아스파라기나제, 생 BCG(방광내), 베타메타손 인산나트륨 및 베타메타손 아세테이트, 비칼루타미드, 블레오마이신 설페이트, 부설판, 칼슘 류코오린, 칼리케아미신, 카페시타빈, 카르보플라틴, 로무스틴(CCNU), 카르무스틴(BSNU), 클로람부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 콜히신, 접합된 에스트로겐, 사이클로포스파미드, 사이클로토스파미드, 시타라빈, 시타라빈, 시토칼라신 B, 시톡산, 다카바진, 닥티노마이신, 닥티노마이신(이전의 악티노마이신), 다우니루비신 HCL, 다우노루비신 시트레이트, 데닐류킨 디프티톡스, 덱스라조산, 디브로모만니톨, 디하이드록시안트라신 디온, 도세탁셀, 돌라세트론 메실레이트, 독소루비신 HCL, 드로나비놀, 에스케리키아 콜라이 L-아스파라기나제, 에메틴, 에포에틴-α, 에르위니아 L-아스파라기나제, 에스테르화 에스트로겐, 에스트라디올, 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨, 에티듐 브로마이드, 에티닐 에스트라디올, 에티드로네이트, 에토포시드 시트로룸 인자, 에토포시드 포스페이트, 필그라스팀, 플록수리딘, 플루코나졸, 플루다라빈 포스페이트, 플루오로우라실, 플루타미드, 폴린산, 젬시타빈 HCL, 글루코코르티코이드, 고세렐린 아세테이트, 그라미시딘 D, 그라니세트론 HCL, 하이드록시우레아, 이다루비신 HCL, 이포스파미드, 인터페론 α-2b, 이리노테칸 HCL, 레트로졸, 류코보린 칼슘, 류프롤리드 아세테이트, 레바미솔 HCL, 리도카인, 로무스틴, 메이탄시 노이드, 메클로레타민 HCL, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란 HCL, 머캅티퓨린, 메스나, 메토트렉세이트, 메틸테스토스테론, 미트라마이신, 미토마이신 C, 미토탄, 미톡산트론, 닐루타마이드, 옥트레오티드 아세테이트, 온단세트론 HCL, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파미드로네이트 이나트륨, 펜토스타틴, 필로카르핀 HCL, 플리마이신, 폴리페프로산 20(카르무스틴 임플란트 포함), 포르피머 나트륨, 프로카인, 프로카바진 HCL, 프로프라놀롤, 리툭시맙, 사르그라모스팀, 스트렙토조토신, 타목시펜, 탁솔, 테가푸르, 테니포시드, 테노포시드, 테스토락톤, 테트라카인, 티오에파 클로람부실, 티오구아닌, 티오테파, 토포테칸 HCL, 토레미펜 시트레이트, 트라스투주맙, 트레티노인, 발루비신, 빈블라스틴 설페이트, 빈크리스틴 설페이트 및 비노렐빈 타르트레이트가 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다.
본원에 개시된 항-VISTA 항체, 또는 이의 항원-결합 단편 또는 접합체를 화학요법제의 조합을 수용하는, 암 치료가 필요한 환자에게 투여할 수 있다. 화학요법제의 예시적인 조합은 류코보린(폴린산 또는 LV)과 조합된 5-플루오로우라실(5FU); 우라실(UFT) 및 류코보린과 조합된 카페시타빈; 우라실(UFT) 및 류코보린과 조합된 테가푸르; 5FU와 조합된, 또는 카페시타빈과 조합된 옥살리플라틴; 카페시타빈과 조합된 이리노테칸, 5FU, 이리노테칸 또는 카페시타빈과 조합된 미토마이신 C를 포함한다. 본원에 개시된 화학요법제의 다른 조합의 사용도 또한 가능하다.
항-VISTA 항체, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체를 또한 다른 치료 항체와 조합할 수 있다. 따라서, 본원에 개시된 항-VISTA 항체, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체 기반 치료법을, 예를 들어 비제한적으로, 항-EGFR(EGF 수용체) 단클론 항체 또는 항-VEGF 단클론 항체와 같은 상이한 단클론 항체와 병용하거나 또는 이에 보조적으로 투여할 수 있다. 항-EGFR 항체의 구체적인 예에는 세툭시맙 및 파니투무맙이 포함된다. 항-VEGF 항체의 구체적인 예는 베바시주맙이다.
특히, 본원에 기재된 치료 방법은 항-VISTA 항체, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체와 함께 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 면역 체크포인트 억제제 및 항-VISTA 항체, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체는 동시에, 별도로 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, "체크포인트 억제제"는 면역 체크포인트를 표적화하고 상기 면역 체크포인트의 기능을 차단하는 분자, 예를 들어 소분자, 가용성 수용체 또는 항체를 지칭한다. 보다 구체적으로, 본원에 사용되는 바와 같은 "체크포인트 억제제"는 T 세포와 같은 일부 유형의 면역계 세포에 의해 만들어진 특정 단백질, 및 일부 암 세포를 차단하는 분자, 예를 들어 소분자, 가용성 수용체 또는 항체이다.
첫 번째 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, TIGIT, TIM3, GAL9, LAG3, PSG-L1, VSIG4, KIR, 2B4(CD2 분자 패밀리에 속하며 모든 NK, γδ 및 기억 CD8+(αβ) T 세포에서 발현된다), CD160(BY55라고도 함), CGEN-15049, CHK 1 및 CHK2 키나제, IDO1, A2aR 및 다양한 B-7 패밀리 리간드 중 어느 하나 중 어느 하나의 억제제이다.
예시적인 면역 체크포인트 억제제에는 항-CTLA-4 항체(예를 들어, 이필리무맙), 항-LAG-3 항체(예를 들어, BMS-986016), 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 항-Tim3 항체(예를 들어, TSR-022, MBG453), 항-BTLA 항체, 항-KIR 항체, 항-A2aR 항체, 항 CD200 항체, 항-PD-1 항체(예를 들어, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙, 피딜리주맙), 항-PD-L1 항체(예를 들어, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두르발루맙, BMS 936559), 항-TIGIT 항체(예를 들어, 티라골루맙, 비보스톨리맙), 항-VSIG4 항체, 항-CD28 항체, 항-CD80 또는 -CD86 항체, 항-B7RP1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-HVEM 항체, 항-CD137 항체(예를 들어, 우레루맙), 항-CD137L 항체, 항-OX40(예를 들어, 9B12, PF-04518600, MEDI6469), 항-OX40L 항체, 항-CD40 또는 -CD40L 항체, 항-GAL9 항체, 항-IL-10 항체, PD-1 리간드(예를 들어, PDL-1 또는 PD-L2)의 세포외 도메인과 IgG1과의 융합 단백질(예를 들어, AMP-224), OX40 리간드(예를 들어, OX40L)의 세포외 도메인과 IgG1의 융합 단백질(예를 들어, MEDI6383), IDO1 약물(예를 들어, 에파카도스타트) 및 A2aR 약물이 포함된다. 다수의 면역 체크포인트 억제제는 승인되었거나 현재 임상 시험 중이다. 이러한 억제제에는 이필리무맙, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙, 피딜리주맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두르발루맙, 티라고루맙, 비보스톨리맙, BMS 936559, 우레루맙, 9B12, PF-04518600, BMS-986016, TSR-022, MBG453, MEDI6469, MEDI6383 및 에파카도스타트가 포함된다.
면역 체크포인트 억제제의 예는 예를 들어 하기의 문헌에 나열되어 있다: Marin-Acevedo et al., Journal of Haematology & Oncology 11: 8, 2018; Kavecansky and Pavlick, AJHO 13(2): 9-20, 2017; Wei et al., Cancer Discov 8(9): 1069-86, 2018.
바람직하게, 면역 체크포인트 억제제는 CTLA-4, LAG-3, Tim3, PD-1, PD-L1, PSG-L1, VSIG4, CD137, OX40 또는 IDO1의 억제제이다. 더욱 바람직하게, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1 또는 PD-L1의 억제제이다. 더욱 더 바람직하게, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1을 억제하는 항체 또는 PD-L1을 억제하는 항체이다.
따라서, 본 개시내용은 바람직하게는 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하기 위한 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체와 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 병용 요법에 관한 것이다. 첫 번째 양태에서, 본 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 접합체는 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하는데 사용하기 위한 것이며, 여기서 치료는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체를 추가로 투여하는 것을 포함한다. 본 개시내용은 또한 유효량의 본 항-VISTA 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 접합체, 및 유효량의 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체를, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 또한 VISTA-매개된 질환, 특히 암을 치료하기 위한 약제를 제조하기 위한 본원에 개시된 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 접합체의 용도에 관한 것이며, 여기서 치료는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함한다.
항-VISTA 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 접합체, 및 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 동시에, 별도로 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
진단 방법
VISTA는 다양한 암에서 과발현되는데, 이는 VISTA가 암 진단을 위한 신뢰할 수 있는 생물마커임을 가리킨다. 따라서 VISTA 단백질에 결합하는 본원에 제공된 표지된 항체와 같은 시약은 암과 같은 세포 증식성 질환, 장애 또는 상태를 검출, 진단 또는 모니터링하기 위한 진단 목적으로 사용될 수 있다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 면역 관용에 의해 매개되는 질환을 진단하기 위해 VISTA의 발현 수준을 측정하는 것을 포함하는 진단 방법에 관한 것이다. 예를 들어, 환자 샘플에서 높은 수준의 VISTA 발현(예를 들어, VISTA 단백질 또는 mRNA)이 검출되면 암의 존재를 가리킬 수 있다. 추가로, 이러한 진단 시험은, 예를 들어 환자 샘플에서 높은 수준의 VISTA 발현 검출에 기초하여 VISTA 길항제를 투여함으로써 환자에게 치료를 지정하는 데 사용될 수 있다.
본원에 제공된 항-VISTA 항체를 사용하여, 본원에 기재되거나 당업자에게 공지된 바와 같은 고전적 면역조직학적 방법을 사용하여 생물학적 샘플 중의 VISTA를 검출하거나 VISTA 수준을 분석할 수 있다(예를 들어, 문헌[Jalkanen et al., 1985, J. Cell. Biol. 101:976-985]; 및 [Jalkanen et al., 1987, J. Cell. Biol. 105:3087-3096]을 참조한다). 단백질 유전자 발현을 검출하는 데 유용한 다른 항체 기반 방법에는 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA) 및 방사면역분석(RIA)과 같은 면역분석이 포함된다. 적합한 항체 분석 표지는 당업계에 공지되어 있으며, 효소 표지, 예를 들어 글루코스 옥시다제; 방사성동위원소, 예를 들어 요오드(125I, 121I), 탄소(14C), 황(35S), 삼중수소(3H), 인듐(121In), 및 테크네슘(99Tc); 발광 표지, 예를 들어 루미놀; 및 형광 표지, 예를 들어 플루오레세인 및 로다민, 및 비오틴을 포함한다.
따라서, 첫 번째 양태에서, 본 발명은 대상체에서 VISTA-매개된 암을 검출하기 위한 시험관내 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 하기의 단계를 포함한다:
a) 상기 대상체의 생물학적 샘플을 본원에 개시된 항-VISTA 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
b) 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 상기 생물학적 샘플과의 결합을 검출하는 단계.
본 방법에 따르면, 항-VISTA 항체의 결합은 VISTA-매개된 암의 존재를 가리킨다. 바람직하게, 종양 미세환경의 면역 침윤물에서 항-VISTA 항체의 결합은 VISTA-매개된 암의 존재를 가리킨다.
본 발명은 또한 대상체에서 VISTA-매개된 암을 검출하기 위한 시험관내 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 하기의 단계를 포함한다:
a) 상기 대상체의 생물학적 샘플을 항-VISTA 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
b) 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 상기 생물학적 샘플과의 결합을 정량분석하는 단계.
본 방법에 따르면, 항-VISTA 항체의 결합은 VISTA-매개된 암의 존재를 가리킨다. 바람직하게, 종양 미세환경의 면역 침윤물에서 항-VISTA 항체의 결합은 VISTA-매개된 암의 존재를 가리킨다.
당업자에게 명백한 바와 같이, VISTA에 결합하는 항체의 수준은 이하에 상세히 설명되는 바와 같이 당업자에게 공지된 임의의 수단에 의해 정량분석될 수 있다. 바람직한 방법은 ELISA 또는 ELISPOT과 같은 면역효소 분석, 면역형광, 면역조직화학(IHC), 방사면역분석(RIA) 또는 FACS의 사용을 포함한다.
본 방법의 단계 b)의 정량분석은 샘플 중의, 특히 종양 미세환경의 면역 침윤물 중의 VISTA 발현 수준을 직접 반영하는 것이다. 따라서 본 방법은 상술한 바와 같이 VISTA의 발현 수준을 결정함으로써 VISTA-매개된 암을 식별할 수 있게 한다. 바람직한 구현예에서, 상기 샘플 중의, 특히 종양 미세환경의 면역 침윤물 중의 VISTA의 발현 수준을 참조 수준과 비교한다.
추가의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 대상체에서 VISTA-매개된 암을 검출하기 위한 시험관내 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 하기의 단계를 포함하며:
a) 상기 대상체의 생물학적 샘플 중의 VISTA의 발현 수준을 결정하는 단계; 및
b) 단계 a)의 발현 수준을 참조 수준과 비교하는 단계;
여기서 참조 수준과 비교하여 단계 a)에서 분석된 VISTA 수준의 증가는 VISTA-매개된 암을 가리킨다.
본 발명은 또한 대상체에서 VISTA-매개된 암을 진단하기 위한 시험관내 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 하기의 단계를 포함한다:
a) 상기 대상체의 생물학적 샘플 중의 VISTA의 발현 수준을 결정하는 단계; 및
b) 단계 a)의 발현 수준을 참조 수준과 비교하는 단계;
여기서 참조 수준과 비교하여 단계 (b)에서 분석된 VISTA 수준의 증가는 VISTA-매개된 암을 가리킨다.
VISTA의 발현 수준은 "참조 수준" 또는 "참조 발현 수준"이라고도 지칭되는 대조용 세포 또는 샘플의 수준과 관련하여 유리하게 비교되거나 측정된다. "참조 수준", "참조 발현 수준", "대조 수준" 및 "대조군"은 본 명세서에서 같은 의미로 사용된다. "대조 수준"은 일반적으로 질환이나 암이 없는 비교 가능한 대조용 세포에서 측정된 별도의 기준선 수준을 의미한다. 암 환자의 경우에도 종양 부위인 조직이 여전히 비-종양의 건강한 조직을 포함하기 때문에 상기 대조용 세포는 동일한 개인으로부터 유래할 수도 있다. 이는 또한 질환 또는 시험 샘플이 수득된 질환과 동일한 질환을 앓고 있지 않거나 정상인 다른 개인에게서 유래할 수도 있다. 본 발명의 맥락에서, "참조 수준"이라는 용어는 환자의 암 세포 함유 샘플에서 VISTA 발현의 시험 수준을 평가하는 데 사용되는 VISTA 발현의 "대조 수준"을 의미한다. 예를 들어, 환자의 생물학적 샘플에서 VISTA 수준이 VISTA의 참조 수준보다 높을 경우 해당 세포는 VISTA의 높은 수준의 발현 또는 과발현을 갖는 것으로 간주된다. 참조 수준은 다양한 방법으로 결정될 수 있다. 따라서 발현 수준은 VISTA 보유 세포를 정의하거나 대안적으로 VISTA를 발현하는 세포 수와 관계없이 VISTA의 발현 수준을 정의할 수 있다. 따라서, 각 환자에 대한 참조 수준은 VISTA의 참조 비에 의해 규정될 수 있으며, 여기서 참조 비는 본원에 기재된 참조 수준을 결정하기 위한 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다.
예를 들어, 대조군은 다양한 형태를 취할 수 있는 미리 결정된 값일 수 있다. 중앙값이나 평균과 같은 단일 구분값일 수 있다. "참조 수준"은 모든 환자에게 개별적으로 동일하게 적용되는 단일 숫자일 수도 있고, 환자의 특정 하위 집단에 따라 참조 수준이 달라질 수도 있다. 따라서 예를 들어, 동일한 암에 대해 노인 남성은 젊은 남성과 상이한 참조 수준을 가질 수 있고, 여성은 동일한 암에 대해 남성과 상이한 참조 수준을 가질 수 있다. 대안적으로, "참조 수준"은 시험할 종양 세포의 조직과 동일한 조직의 비-종양 암세포에서 VISTA의 발현 수준을 측정함으로써 결정될 수 있다. 또한 "참조 수준"은 동일한 환자 내 비종양 세포의 VISTA 수준에 대한 환자의 종양 세포내 VISTA의 특정 비일 수 있다. "참조 수준"은 또한 시험관내에서 배양된 세포의 VISTA 수준일 수 있으며, 이는 종양 세포를 시뮬레이션하기 위해 조작되거나, 또는 참조 수준을 정확하게 결정하는 발현 수준을 생성하는 임의의 다른 방식으로 조작될 수 있다. 한편, "참조 수준"은 VISTA 수준이 상승하지 않은 그룹, VISTA 수준이 상승한 그룹 등 비교 그룹을 기준으로 설정될 수 있다. 비교 그룹의 또 다른 예는 특정 질환, 상태 또는 증상이 있는 그룹과 질환이 없는 그룹이다. 예를 들어, 검사를 받은 모집단을 저위험군, 중위험군, 고위험군과 같은 그룹으로 동등하게(또는 불균등하게) 나누는 경우, 미리 결정된 값을 배열할 수 있다.
참조 수준은 또한 동일한 암을 앓고 있는 환자 집단의 VISTA 수준을 비교하여 결정할 수도 있다. 이는 예를 들어 환자의 전체 코호트가 그래픽으로 표시되는 히스토그램 분석에 의해 달성될 수 있으며, 여기서 첫 번째 축은 VISTA 수준을 나타내고, 두 번째 축은 주어진 수준에서 종양 세포가 VISTA를 발현하는 코호트의 환자 수를 나타낸다. 2개 이상의 별도의 환자 그룹은 동일하거나 유사한 VISTA 수준을 갖는 코호트의 하위집단 모집단을 식별함으로써 결정될 수 있다. 이어서 이러한 별도의 그룹을 가장 잘 구별하는 수준을 기반으로 참조 수준을 결정할 수 있다. 참조 수준은 또한 2개 이상의 마커의 수준을 나타낼 수 있으며 그 중 하나가 VISTA이다. 예를 들어, 2개 이상의 마커는 각 마커의 수준에 대한 값의 비에 의해 표시될 수 있다.
마찬가지로, 겉보기에 건강한 집단은 VISTA 발현과 관련된 상태를 갖는 것으로 알려진 집단과 다른 '정상' 범위를 가질 것이다. 따라서, 선택된 미리 결정된 값은 개인이 속하는 범주를 고려할 수 있다. 적절한 범위 및 범주는 당업자의 일상적인 실험만으로 선택될 수 있다. "상승된" "증가된"이란, 선택된 대조군에 비해 높음을 의미한다. 전형적으로 대조군은 적절한 연령층에 속하는 명백히 건강한 정상적인 개인을 기반으로 한다.
본 발명에 따른 대조군은 미리 결정된 값 외에, 실험 물질과 병행하여 시험된 물질의 샘플일 수 있다는 것도 이해될 것이다. 예로는 동일한 대상체로부터 동시에 수득된 조직 또는 세포가 포함된다(예를 들어, 단일 생검의 일부 또는 대상체로부터 수득된 단일 세포 샘플의 일부).
바람직하게, VISTA의 참조 수준은 정상 조직 샘플(예를 들어, VISTA-매개된 암을 앓지 않는 환자 또는 질환 발병 전 동일한 환자로부터의)에서 VISTA의 발현 수준이다.
VISTA-매개된 암에 대한 보다 확실한 진단을 통해 의료 전문가는 예방 조치 또는 공격적인 치료를 더 일찍 수행하여 VISTA-매개된 암의 발병 또는 추가 진행을 예방할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 비추어 상세히 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명이 하기 실시예에 한정되는 것은 아님은 자명하다.
실시예
실시예 1: Ab3 중의 탈아미드화 부위의 식별
단클론 항체 Ab3은 원래 WO2016/94837에 개시되었다. Ab3은 서열번호 11의 중쇄 및 서열 번호 12의 경쇄를 포함한다. 생물정보학적 분석은 Ab3의 경쇄에 2개의 잠재적 탈아미드화 부위 및 중쇄에 9개의 부위가 있는 것으로 예측한다.
이들 부위 중 어느 하나가 실제로 탈아미드화가 일어나는 지를 조사하기 위해, Ab3에 대해 문헌[Goyon et al. (J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 1065-1066:119-128 (2017)]에 기재된 바와 같이 양이온 교환 크로마토그래피(CEX)를 수행하였다.
방법 : CEX(pH 구배)
물질:
·컬럼 MabPac SCX-10 4x250 ㎜, 10 ㎛(Thermo, ref: 74625)
·용출제:
·완충액 A: CX-1 pH 구배 완충액 A pH 5.6(Thermo, ref: 85349)
·완충액 B: CX-1 pH 구배 완충액 B pH 10.2(Thermo, ref: 85349)
·완충액을 MilliQ 수로 1/10로 희석하고 여과한다/0.22 ㎛(임시 사용 을 위해)
·샘플 제조 및 방법:
·샘플을 MilliQ 수로 1 ㎎/㎖로 희석한다
·20 ㎕ 희석 샘플 주입
·구배: 표 2를 참조.
[표 2]
사용된 구배
결과
도 1에 도시된 바와 같이, Ab3은 40%의 중쇄 N55/N55, 33%의 N55 및 D55 탈아미드화된 변이체, 및 8%의 전체 D55 탈아미드화된 변이체를 갖는 3가지 주요 전하 변이체의 매우 이질적인 혼합물이다. 이 결과는 구조평가(LC-MS)를 통해 확인되었다. 강제 분해 연구(pH9, 40℃, 3일; vs 펨브롤리주맙)는 동일한 결론을 도출하였다: Ab3의 VL 및 VH 쇄의 Asn 잔기를 이러한 조건에서 검사할 때, 분해는 중쇄의 N55에 대해서만 관찰되는 반면, 다른 Asn 잔기는 영향을 받지 않는 것으로 보인다. 따라서, 이러한 모든 상이한 실험 조건에서, 중쇄 중의 N55번 위치는 Ab3의 유일한 탈아미드화 부위는 아니더라도 주요한 것으로 확인되었다.
실시예 2: Ab1의 생성 및 특성화
실시예 1의 결과를 기반으로, 중쇄 중의 55번 위치의 Asn을 Asp로 돌연변이시켜 Ab3의 변이체를 생성시켰다. 이 변이체를 Ab1로 지정하였다.
Ab1은 인간 면역글로불린 G1(IgG1 k; G1m3(R215) 알로타입) 프레임워크를 기반으로 하는 항-VISTA 인간화된 단클론 항체이다. 재조합 항체는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포에서 생성되며 각각 448개의 아미노산 잔기로 구성된 2개의 중쇄(HC) 및 각각 213개의 아미노산 잔기로 구성된 2개의 카파 경쇄(LC)로 이루어지며 전형적인 IgG1 쇄 간 및 쇄 내 디설파이드 결합을 갖는다.
항-VISTA 항체 Ab1의 구조, 물리화학적 특성, 면역학적 및 생물학적 특성은 포괄적인 방법 세트를 사용하여 확립되었다:
▶ 분자량: 147213 Da(G0F/G0F, pE/pE, 16개의 디설파이드 가교)
▶ 분자식: C6410H9904N1686O2009S50
▶ N-글리코실화 부위: 298, 298"
▶ 디설파이드 가교가 하기에 위치한다:
o 쇄-내(경쇄): Cys(23) - Cys(87); Cys(133) - Cys(193)　
o 쇄-내(중쇄): Cys(22) - Cys(96); Cys(145) - Cys(201); Cys(262) - Cys(322); Cys(368) - Cys (426)　
o 쇄-간(경쇄 및 중쇄): Cys(213)LC - Cys(221)HC; Cys(227)HC - Cys(227)HC; Cys(230)HC - Cys(230)HC
전장 IgG, 탈글리코실화된 IgG, IdeS 절단된 및 환원된 IgG의 예상 평균 몰 질량이 확인되었다. 중쇄의 N-말단 잔기는 글루타민으로 암호화되지만 주로 피로글루탐산 형태로 존재한다. 중쇄에는 하나의 N-글리코실화 부위(Asn298)가 있으며, 이는 CHO 생성된 재조합 IgG에 대해 예상되는 바와 같이 0, 1 또는 2개의 말단 갈락토스 잔기를 갖는 전형적인 코어 푸코실화된 바이안테너리(biantennary) 글리칸으로 주로 점유되어 있다. 중쇄 중의 대부분의 C-말단 리신은 잘려있다.
분자량을 하기 표 3에 나타낸다:
[표 3]
Ab1 분자량의 측정
실시예 3: VISTA에 결합하는 Ab1의 결정
CDR의 돌연변이는 항체의 결합 효능에 영향을 미치는 것으로 공지되어 있다. 예를 들어, 항-CD52 단클론 항체의 CRDL1에 있는 Asn33이 Asp로 대체되었을 때 항원 결합 친화력이 400배 감소한 것으로 관찰되었다(Qiu et al. mAbs. 11 (7):1266-1275 (2019)).
재조합 인간(rh) VISTA-His 단백질 VISTA에 대한 Ab1 결합을 직접 및 간접 ELISA에 의해 조사하였다. 직접 ELISA에서, rhVISTA-His 단백질은 플레이트에 직접 고정화된 반면, 간접 ELISA에서, rhVISTA-His 단백질은 고정화된 항-His 항체를 사용하여 포획되었다.
시험된 항체를 표 4에 제공한다.
[표 4]
ELISA에서 시험된 항체
55번 위치에 Asp를 갖는 항-VISTA 항체 Ab1을, Ab3 항체(55번 위치에 Asn을 갖는다)의 2개의 상이한 배치뿐만 아니라 IgG1 항-VISTA 및 항-hVISTA 토끼 다클론 항체(양성 대조군) 및 관련 없는 c9G4 항체(음성 대조군)와 비교하였다.
직접 ELISA
방법
웰을 1x D-PBS 중 0.3 ㎍/㎖의 rhVISTA 100 ㎕로 4℃에서 밤새 코팅하였다.
배양 후에, 코팅 용액을 제거하고 플레이트를 37℃에서 적어도 1시간 동안 차단 완충액(1x PBS 중의 0.5% 젤라틴) 250 ㎕를 첨가하여 차단하였다.
차단 후에, 희석 완충액(1x PBS + 0.1% 젤라틴 + 0.05% Tween 20) 중의 1차 항체(표 2에 나열된 것 중)를, 각 웰이 100 ㎕의 최종 부피를 갖도록 초기 농도 5 ㎍/㎖로부터 1:3으로 연속 희석하고 37℃에서 1시간 동안 배양하였다.
웰을 300 ㎕의 1x PBS로 3회 세척하였다.
희석 완충액에서 1:5000 희석된, 100 ㎕ 2차 항체(AffiniPure 염소 항-토끼 특이적 IgG(H+L) HRP(Immuno Research Jackson ref. 111-035-003) 또는 AffiniPure 염소 항-인간 특이적 IgG(Fc 단편) HRP(Immuno Research Jackson #109-035-098))를 웰에 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 배양하였다.
웰을 300 ㎕의 1x PBS로 3회 세척하였다.
100 ㎕ TMB를 각 웰에 첨가하고 플레이트를 실온에서 5분간 배양하였다. 웰당 100 ㎕의 1 M H2SO4를 첨가하여 반응을 중단시키고 흡광도를 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 450 ㎚에서 판독하였다.
결과
몇몇 IgG1 단클론 항체가 탈아미드화의 결과로서 활성을 상실하는 것으로 보고된 반면, Ab1 항-VISTA 항체의 결합 친화력은 뜻밖에도 유지되었다. 실제로, Ab1은 돌연변이되지 않은 항체 Ab3와 비교할 때 매우 유사한 프로파일을 가졌다(도 2 참조). EC50값은 이전에 관찰된 것과 대조적으로, 대략 8.83x10-10 M(CV 21%)(표 5)이었다. 예상대로, c9G4 음성 대조용 항체는 결합을 나타내지 않았다.
[표 5]
rhVISTA 직접 ELISA에서 3개의 실험(n1, n2 및 n3) 각각에서 시험된 항체에 대해 획득된 EC50 값.
간접 ELISA
방법
웰을 1x D-PBS 중 2 ㎍/㎖의 항-6x 히스티딘 마우스 단클론 IgG1, 클론 AD1.1.10(RD 시스템 카탈로그#MAB050) 100 ㎕로 4℃에서 밤새 코팅하였다(간접적인 ELISA).
배양 후에, 코팅 용액을 제거하고 플레이트를 37℃에서 적어도 1시간 동안 차단 완충액(1x PBS 중의 0.5% 젤라틴) 250 ㎕를 첨가하여 차단하였다.
차단 후에, 희석 완충액(1x PBS + 0.1% 젤라틴 + 0.05% Tween 20) 중의 rhVISTA 100 ㎕를 0.3 ㎍/㎖로 각 웰에 가하고 37℃에서 1시간 동안 배양하였다.
웰을 300 ㎕의 1x PBS로 3회 세척하였다.
희석 완충액 중의 1차 항체(표 2에 나열된 것 중에서)를, 각 웰이 100 ㎕의 최종 부피를 갖도록 초기 농도 5 ㎍/㎖로부터 연속 희석하고 37℃에서 1시간 동안 배양하였다.
웰을 300 ㎕의 1x PBS로 3회 세척하였다.
희석 완충액에서 1:5000 희석된, 100 ㎕의 2차 항체(AffiniPure 염소 항-토끼 특이적 IgG(H+L) HRP(Immuno Research Jackson ref. 111-035-003) 또는 AffiniPure 염소 항-인간 특이적 IgG(Fc 단편) HRP(Immuno Research Jackson #109-035-098))를 웰에 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 배양하였다.
웰을 300 ㎕의 1x PBS로 3회 세척하였다.
100 ㎕ TMB를 각 웰에 첨가하고 플레이트를 실온에서 5분간 배양하였다. 웰당 100 ㎕의 1 M H2SO4를 첨가하여 반응을 중단시키고 흡광도를 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 450 ㎚에서 판독하였다.
결과
몇몇 IgG1 단클론 항체가 탈아미드화의 결과로서 감소된 친화력을 갖는 것으로 보고된 반면, 여기서 Ab1 항-VISTA 항체의 친화력은 뜻밖에도 유지되었다. 실제로, Ab1은 돌연변이되지 않은 항체 Ab3와 비교할 때 매우 유사한 프로파일을 가졌다(도 3 참조). EC50값은 대략 4.20x10-11 M(CV 10%)(표 6)이었다. 예상대로, c9G4 음성 대조용 항체는 결합을 나타내지 않았다.
[표 6]
rhVISTA 간접 ELISA에서 3개의 실험(n1, n2 및 n3) 각각에서 시험된 항체에 대해 획득된 EC50 값.
실시예 4: PBMC와의 CHO-VISTA 공배양에서 T 세포 활성화 및 사이토카인 방출의 평가
VISTA는 면역반응을 결정적으로 조절하는 면역관문 단백질로서 공지되어 있다. Ab1은 원래 항체 Ab3과 동일한 친화도로 VISTA에 결합하므로, Ab1이 Ab3처럼 면역 억제를 역전시킬 수 있는지 여부를 조사하였다.
실험의 개략도를 도 4에 도시한다.
WT 또는 인간 VISTA 단백질을 발현하도록 형질감염된 중국 햄스터 난소(CHO) 세포를 Faxitron X-선 기계 90Gy로 조사하여 그의 증식과 대사를 감소시켰다.
이어서, 20,000개의 CHO 세포를 96웰 플레이트에서 200,000개의 PBMC 세포와 함께 배양하였다(CHO:PBMC 비 = 1:10).
이어서 혼합물을 총 200 ㎕/96웰에서 Ab1 또는 hIgG1 음성 대조군 10 ㎍/㎖의 존재 하에 항-CD3/CD28 비드(비: 32개 세포에 대해 1개의 비드)와 함께 37℃ 및 5% CO2에서 배양하였다.
3일차에, 상등액을 회수하고, 사이토카인 방출에 대해 MSD(Meso Scale Discovery)로 분석하고, CD4 및 CD8 T 세포에서의 CD25 T 세포 활성화 마커 발현에 대해 유식 세포분석(FACS)으로 분석하였다.
예상대로, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 증식은 CHO-VISTA의 존재 하에서 억제되었다. 이러한 억제는 항체 Ab1을 첨가함으로써 역전되었다. Ab1의 존재 하에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포 모두의 강력한 증식이 관찰될 수 있었다. 그러나 음성 대조군 hIgG1 항체에서는 그러한 자극이 검출되지 않았다. 마찬가지로, PBMC와 CHO-VISTA의 혼합물에 Ab1을 첨가하면 IFNγ, IL-2 및 TNFα의 강력한 생성이 촉발되어 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 활성화가 확인되었다(도 5). 다시 한번, hIgG1 음성 대조군은 효과를 나타내지 않았다. 따라서 이러한 결과는 Ab1이 VISTA-매개된 면역억제를 억제하는 활성을 유지하였음을 입증한다.
이러한 억제 기전을 이해하기 위한 시도로 Ab1의 Fc 도메인의 298번 위치에 돌연변이(N298A)를 도입하였다. 이 돌연변이가 있는 항체는 효과기 기능, 예를 들어 ADCC, CDC 및 ADCP를 활성화할 수 없는 것으로 공지되어 있는데, 이는 이 돌연변이가 인간 Fcγ 수용체에 결합하는 능력을 제거하기 때문이다(예를 들어, 문헌[Liu et al. Antibodies (Basel). 9(4): 64.(2020)]; 문헌[Herbst et al. Nature. 515(7528):563-567 (2014)]을 참조한다).
놀랍게도, 돌연변이는 CD4+ 및 CD8+ T 세포 증식을 유도하는 Ab1 능력을 완전히 없앴다. 마찬가지로, Asn298이 알라닌으로 대체된 경우 사이토카인 방출이 검출되지 않았다. 따라서 이러한 결과는 Ab1과 Fcγ 수용체의 상호작용(및 따라서 Ab1의 효과기 기능)이 VISTA 면역억제의 Ab1 역전에 결정적이라는 것을 나타낸다(도 5).
음성 대조군은 그의 Fc에 동일한 돌연변이가 도입되어도 영향을 받지 않았다.
이와 같이 Ab1에 의한 VISTA 차단은 면역 억제를 역전시킨다. 이 활성은 항체의 효과기 기능(ADCC 및/또는 CDC 및/또는 ADCP)을 필요로 한다.
실시예 5: Ab1은 PSG-L1 및 VSIG3에 대한 VISTA 결합을 억제한다.
여러 VISTA 리간드가 기재되었다. 특히, VSIG3은 T 세포 활성화의 특이적 결합 및 기능적 시험관내 억제를 입증하는 VISTA에 대한 주요 리간드로서 확인되었다(Wang et al. Immunology . 156 (1):74-85 (2019)). 또한, P-셀렉틴 당단백질 리간드-1(PSGL-1)에 대한 VISTA의 pH 의존적 결합이 기재되었으며; 산성 환경에서 이러한 상호작용을 차단하는 것은 생체내에서 VISTA-매개된 면역 억제를 역전시키기에 충분하다(Johnston et al. Nature. 574 (7779): 565-570. (2019)).
따라서 Ab1이 산성 pH 환경(pH = 6)에서 VISTA와 VSIG3 사이의 상호작용 및/또는 VISTA와 PSG-L1의 상호작용을 차단할 수 있는지 여부를 조사하였다.
CM5 센서 칩(2200 RU)에 접목된 rhVSIG3-Fc에 대한 rhVISTA-His(단량체) 또는 rhVISTA-Fc(이량체) 결합의 평가.
상호작용을 pH=7.4에서 Biacore에 의해 측정하였다.
rhVISTA-His(단량체) 및 rhVISTA-Fc(이량체)를 다양한 농도(0 내지 1200 nM)의 항-VISTA Ab1 존재 하에 700 nM에서 시험하였다.
도 6은 Ab1 부재 하의 VISTA-VSIG3 결합(100% 결합)과 비교하여 Ab1 존재 하의 VISTA-VSIG3 결합의 용량 반응 곡선을 도시한다. Ab1은 용량 의존적인 방식으로 VISTA-VSIG3 상호작용을 방해한다.
VISTA-Fc-d2와 PSGL1-His 사이의 상호작용에 대한 항-VISTA 항체의 평가.
분석 원리:
HTRF(균질 시간-분해 형광) 기술은 생체분자 간의 상호작용을 연구하기 위해 개발된 분석법이다. 이 검출 시스템은 형광 공명 에너지 전달(FRET)을 기반으로 한다. d2로 표지된 hVISTA-Fc(VISTA-Fc-d2)와 테르븀-표지된 항-His mAb(항 His-Tb/ Cisbio)를 보유하는 His-태그된 hPSGL-1(PSGL1-His) 사이의 상호작용은 HTRF 신호의 발생을 허용한다.
실험에서 시험된 항체는 하기와 같았다:
- 항 VISTA Ab1
- 항 VISTA R&D 시스템 #71261
- 인간 IgG1 대조용 아이소타입.
항체를, 항-His-Tb로 간접적으로 표지된 VISTA-Fc-d2 및 PSGL1-His와 함께 실온 및 pH=6에서 4시간 동안 다양한 농도(0 내지 20 ㎍/㎖)로 배양하였다.
음성 대조군에서는 신호 감소가 관찰되지 않았다. 반면, 양성 대조군, 즉 VISTA/PSGL-1 상호작용을 방지하는 상업용 항체(R&D 시스템 #71261)를 추가하면 예상대로, 측정된 HTRF 신호가 감소한다. 이 항체에 대해 측정된 IC50은 333 nM 이었다(표 7). 중요하게도, Ab1은 또한 신호 감소를 유발하는데, 이는 항체가 산성 pH에서 VISTA와 PSG-L1 사이의 상호작용을 차단한다는 것을 가리킨다(표 8 참조). VISTA/PSGL-1 HTRF 상호작용 분석에서 Ab1의 IC50은 2.3 nM 이었다(표 7).
[표 7]
VISTA/PSGL-1 HTRF 상호작용 분석에서 항-VISTA 항체 IC50
[표 8]
특정 HTRF 신호의 백분율로 표현된 3개 실험의 평균
실시예 6: MC38 쥐 결장 종양 모델에서 항-VISTA mAb1 항체의 생체내 평가
물질 및 방법
각 실험에 대해, MC38 세포의 냉동 바이알을 해동하고 10% 혈청이 있는 DMEM/F12에서 증식시켰다. 배양 2일 후, 트립신을 사용하여 세포를 수확하고 5x105 세포/㎖의 농도로 DMEM/F12에 재현탁하고 마우스당 100㎕를 주입하였다.
8-10주령의 암컷 C57Bl/6 hVISTA 마우스를 Genoway(Lyon, France)에서 구입하였다. 도착하자마자 마우스를 7일 동안 순응시킨 후에 오른쪽 옆구리를 면도하였다. 마우스의 면도한 옆구리에 100 ㎕의 MC38 세포 현탁액(50,000개 세포)을 피하(s.c.) 주사하였다.
종양이 직경 ∼6 ㎜(부피 ∼80 ㎣)에 도달하면 확립된 것으로 간주하였다. 일단 확립되면, 처리를 개시하였다. 쥐 Fc를 갖는 Ab1의 CDR에 상응하는 쥐화된 항-VISTA 항체(mAb1) 또는 상응하는 아이소타입 대조용 항체 mIgG2a를 30 ㎎/㎏(히스티딘 25 mM, NaCl 150 mM, 0.5% 폴리소르베이트 80, pH 6.5로 제형화된)으로, 3 내지 4일마다 총 4회 주사로 복강내 투여하였다. 종양 성장을 처리 과정 동안 및 실험이 종료될 때까지, 전자 캘리퍼스를 사용하여 길이(L), 첫 번째 측정까지 90°각도의 너비(W) 및 최종 높이(W)의 세 가지 차원에 걸쳐 주당 3회 평가하였다.
종양 부피는 하기와 같이 유도되었다: 부피 = 0.52x(LxWxH)
Ab1에 의한 T 세포 활성화는 시험관내에서 효과기 기능에 의존하는 것으로 나타났기 때문에, 항체의 항종양 활성에서 이러한 활성의 역할을 조사하였다. Ab1)에서 FcγR(N298A의 등가 잔기)과 상호작용하는 Asn이 Ala 잔기로 대체되어 임의의 효과기 기전이 제거되는 mAb1의 변이체가 생성되었다. mIgG1 항체를 음성 대조군으로 사용하였다(Chen et al. Front Immunol . 10 :292 (2019)).
결과
시험된 생착 조건 및 투여 일정에서, 수용성 포맷의 mAb1은 21일차에 47%의 종양 성장 억제를 유도한다(도 7). mAb1의 침묵 포맷은 종양 성장 억제를 유도하지 않는다(도 8).
실시예 7: Ab1에 대한 제형 설계
제품 개발의 중요한 양태인 제형 개발은 임상시험용 신약(IND) 신청에 필수적인 성공적인 임상 제조 및 안정성 연구를 위한 중요한 경로에 있는 경우가 많다. 항체는 특히 크기가 크기 때문에 일반적으로 주입을 통해 투여되었다. 복잡한 3차원 구조로 인해 항체는 용액에서 응집되는 경향이 있어 유효 기간이 단축되고 그에 따라 유용성이 감소한다.
따라서 Ab1 벌크 용액의 물리화학적 안정성을 위한 최상의 조성을 선택하기 위해 제형 스크리닝을 실시하였다.
실험 설계에 기초한 2단계 접근법을 사용하여 4개의 항체 제형을 선택하기 위해 제형화 전 연구를 수행하였다. 첫 번째 단계는 중요 인자 식별에 전념하였고 두 번째 단계는 1 내지 4개의 제형 정의에 전념하였다.
단계 1: 하기의 매개변수를 평가하였다:
- 완충제: 25 mM 시트레이트 또는 25 mM 히스티딘 또는 25 mM 포스페이트
- pH: 5.5 또는 6 또는 6.5
- 슈크로스 농도: 0 내지 6%(w/v)
- 아르기닌 농도: 0 내지 500 mM
- NaCl 농도: 0 내지 150 mM
- 폴리소르베이트 80 농도: 폴리소르베이트 없음, 폴리소르베이트 80 0.5% 또는 폴리소르베이트 20 0.5%(w/w)
- 단클론 항체의 농도를 20 ㎎/㎖로 고정하였다.
22개의 상이한 제형을 시험하였다. 실험 설계는 생성된 모델의 유효성과 관련성을 확인하기 위해 데이터의 통계적 분석을 수행하는 MODDE 소프트웨어(Umetrics)를 사용하여 설정되었다.
단계 2: 추가 조사를 위해 선택된 인자는 하기와 같다:
- 히스티딘 완충제 pH: 5.5 내지 6.5
- NaCl: 0 내지 150 mM
- 슈크로스 0 내지 6%(w/v)
- 폴리소르베이트 80: 0 내지 0.5%(w/w)
단클론 항체를, 응집체의 존재를 평가하기 위해 SEC-HPLC 및 비대칭 유동장-유동 분별(A4FUV), 전하 변이체를 결정하기 위해 CEX, 및 용융 온도(Tm)를 결정하기 위해 시차 주사 열량계(DSC)에 의해 특성화하였다.
하기의 제형을 40℃ 및 5℃에서 2주 및 4주 동안 배양하고 3회 동결/해동 주기를 거친 후 획득된 결과에 근거하여 선택하였다:
- A: 25 mM 히스티딘, 1% 슈크로스, 0.3% 폴리소르베이트 80(w/w)*, pH 6
- B: 25 mM 히스티딘, 150 mM NaCl, 0.3% 폴리소르베이트 80(w/w)*, pH 6.5
- C: 25 mM 히스티딘, 150 mM NaCl, 3% 슈크로스, 0.3% 폴리소르베이트 80(w/w)*, pH 6.5
- D: 25 mM 히스티딘, 15 mM NaCl, 5% 슈크로스, 0.5% 폴리소르베이트 80(w/w), pH 6.5
* 0.3% 폴리소르베이트 80(w/w)은 0.006% v/v와 동등하다.
이어서 -66℃, +5℃ 및 +40℃에서 1.5개월 및 2개월 + 3주 동안 보관하면서 이들 4개 제형에 대해 안정성 연구를 수행하였다. 하기의 시험을 수행하였다: 외관, 유광, pH, UV, SEC-HPLC에 의한 단백질 함량, CE-SDS(비-환원된)에 의한 항체 순도, CEX, DSC, MFI에 의한 전하 프로파일 및 ELISA에 의한 표적 결합.
2개월 3주 안정성 연구 후에 항체 품질에 대한 분석 기준은 차별적이지 않았으며 완충액의 삼투압 농도를 고려하였다. 제형 A는 저장성이었고, 반대로 제형 D는 고장성이었다. 이들 2개의 제형은 폐기되었다.
제형 B와 C 사이에서, 제형 B(즉, 25 mM 히스티딘, 150 mM NaCl, 0.3% 폴리소르베이트 80(w/w)*, pH 6.5)를 선택하여 조성물 중 원료 물질의 수를 제한하였다.
SEQUENCE LISTING <110> PIERRE FABRE MEDICAMENT <120> NEW STABLE ANTI-VISTA ANTIBODY <130> B381030PCTD41580 <150> US 63/182,316 <151> 2021-04-30 <160> 22 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 311 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Gly Val Pro Thr Ala Leu Glu Ala Gly Ser Trp Arg Trp Gly Ser 1 5 10 15 Leu Leu Phe Ala Leu Phe Leu Ala Ala Ser Leu Gly Pro Val Ala Ala 20 25 30 Phe Lys Val Ala Thr Pro Tyr Ser Leu Tyr Val Cys Pro Glu Gly Gln 35 40 45 Asn Val Thr Leu Thr Cys Arg Leu Leu Gly Pro Val Asp Lys Gly His 50 55 60 Asp Val Thr Phe Tyr Lys Thr Trp Tyr Arg Ser Ser Arg Gly Glu Val 65 70 75 80 Gln Thr Cys Ser Glu Arg Arg Pro Ile Arg Asn Leu Thr Phe Gln Asp 85 90 95 Leu His Leu His His Gly Gly His Gln Ala Ala Asn Thr Ser His Asp 100 105 110 Leu Ala Gln Arg His Gly Leu Glu Ser Ala Ser Asp His His Gly Asn 115 120 125 Phe Ser Ile Thr Met Arg Asn Leu Thr Leu Leu Asp Ser Gly Leu Tyr 130 135 140 Cys Cys Leu Val Val Glu Ile Arg His His His Ser Glu His Arg Val 145 150 155 160 His Gly Ala Met 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Claims (20)

  1. 서열번호 21로 표시되는 서열의 중쇄 및 서열번호 22로 표시되는 서열의 경쇄를 포함하는 단클론(monoclonal) 항-VISTA 항체.
  2. 세포독성제(cytotoxic)에 접합된 제1항의 단클론 항-VISTA 항체를 포함하는 항체-약물 접합체(antibody-drug conjugate).
  3. a) 제1항의 단클론 항-VISTA 항체의 중쇄를 암호화(encoding)하는 폴리뉴클레오티드,
    b) 제1항의 단클론 항-VISTA 항체의 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 및
    c) 제1항의 단클론 항-VISTA 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드
    로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 폴리뉴클레오티드.
  4. a) 제3항의 a)의 폴리뉴클레오티드 및 b)의 폴리뉴클레오티드; 또는
    b) 제3항의 c)의 폴리뉴클레오티드
    를 포함하는 발현 벡터(expression vector).
  5. 제4항의 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  6. 제1항의 단클론 항-VISTA 항체를 생산하는 방법으로서,
    a) 제5항의 숙주 세포를 적합한 조건 하에서 배양하는 단계; 및
    b) 배양 배지 또는 배양된 세포로부터 항-VISTA 항체를 회수하는 단계를 포함하는 방법.
  7. 제1항의 항체 또는 제2항의 항체-약물 접합체, 및 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제(excipient)를 포함하는 약제학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    완충제, 바람직하게는 시트레이트 완충제, 포스페이트 완충제, 또는 히스티딘 완충제, 더욱 바람직하게는 히스티딘 완충제를 포함하는 약제학적 조성물.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서,
    긴장성 개질제(tonicity modifier)를 포함하며, 상기 긴장성 개질제가 바람직하게는 다가 당(sugar) 알코올, 예를 들어 3가 이상의 당 알코올, 예를 들어 글리세린, 에리트리톨, 아라비톨, 자일리톨, 소르비톨 및 만니톨, 염 및 아미노산; 더욱 바람직하게는 염화나트륨, 숙신산나트륨, 황산나트륨, 염화칼륨, 염화마그네슘, 황산마그네슘 및 염화칼슘으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 염; 훨씬 더 바람직하게는 NaCl, MgCl2 및/또는 CaCl2로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는, 약제학적 조성물.
  10. 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    비-이온성 계면활성제, 바람직하게는 폴리소르베이트, 예를 들어 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80을 포함하는 약제학적 조성물.
  11. 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    25 mM 히스티딘, 150 mM NaCl, 0.3% 폴리소르베이트 80(w/w), pH 6.5를 포함하는 약제학적 조성물.
  12. 환자의 암 치료에서의 용도를 위한, 제1항에 따른 단클론 항-VISTA 항체, 제2항에 따른 면역접합체, 또는 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물.
  13. 제12항에 있어서,
    용도가 환자에서 면역 반응을 유도하는 것을 포함하는, 제1항에 따른 단클론 항-VISTA 항체, 제2항에 따른 면역접합체, 또는 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물.
  14. 제13항에 있어서,
    면역 반응이 CD4+ T 세포 증식의 유도, CD8+ T 세포 증식의 유도, CD4+ T 세포 사이토카인 생산의 유도, 및 CD8+ T 세포 사이토카인 생산의 유도를 포함하는, 제1항에 따른 단클론 항-VISTA 항체, 제2항에 따른 면역접합체, 또는 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물.
  15. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    암이 방광암(bladder cancer), 유방암(breast cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 결장암(colon cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 식도암(oesophageal cancer), 나팔관암(fallopian tube cancer), 담낭암(gall bladder cancer), 위장암(gastrointestinal cancer), 두경부암(head-and-neck cancer), 혈액암(haematological cancer)(예를 들어, 백혈병(leukaemia), 림프종(lymphoma) 또는 골수종(myeloma)), 후두암(laryngeal cancer), 간암(liver cancer), 폐암(lung cancer), 림프종, 흑색종(melanoma), 중피종(mesothelioma), 난소암(ovarian cancer), 원발성 복막암(primary peritoneal cancer), 침샘암(salivary gland cancer), 육종(sarcoma), 위암(stomach cancer), 갑상선암(thyroid cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 신세포암종(renal cell carcinoma), 교모세포종(glioblastoma) 및 전립선암(prostate cancer) 중에서 선택되는, 제1항에 따른 단클론 항-VISTA 항체, 제2항에 따른 면역접합체, 또는 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물.
  16. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    용도가 항체의 효과기 기능(effector function)의 활성화를 포함하는, 제1항에 따른 단클론 항-VISTA 항체, 제2항에 따른 면역접합체, 또는 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물.
  17. 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    제2 치료제의 투여를 추가로 포함하는, 제1항에 따른 단클론 항-VISTA 항체, 제2항에 따른 면역접합체, 또는 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물.
  18. 제17항에 있어서,
    제2 치료제가 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체인, 제1항에 따른 단클론 항-VISTA 항체, 제2항에 따른 면역접합체, 또는 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물.
  19. 대상체(subject)에서 VISTA-매개된 암을 검출하기 위한 시험관내 방법으로서,
    a) 대상체의 생물학적 샘플을 제1항의 단클론 항-VISTA 항체와 접촉시키는 단계; 및
    b) 상기 항체와 생물학적 샘플과의 결합을 검출하는 단계
    를 포함하고, 여기서 상기 항-VISTA 항체의 결합이 VISTA-매개된 암의 존재를 나타내는, 방법.
  20. 제19항에 있어서,
    단클론 항-VISTA 항체를 검출 가능한 표지(detectable label)로 표지하는 방법.
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023213814A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Pierre Fabre Medicament New formulation of anti vista antibody
WO2024121380A1 (en) 2022-12-08 2024-06-13 Pierre Fabre Medicament Vaccinal composition and adjuvant

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4970198A (en) 1985-10-17 1990-11-13 American Cyanamid Company Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex)
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5079233A (en) 1987-01-30 1992-01-07 American Cyanamid Company N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
GB8720833D0 (en) 1987-09-04 1987-10-14 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US5792632A (en) 1992-05-05 1998-08-11 Institut Pasteur Nucleotide sequence encoding the enzyme I-SceI and the uses thereof
US5474896A (en) 1992-05-05 1995-12-12 Institut Pasteur Nucleotide sequence encoding the enzyme I-SceI and the uses thereof
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5830729A (en) 1996-04-18 1998-11-03 Institut Pasteur I Sce I-induced gene replacement and gene conversion in embryonic stem cells
GB9625640D0 (en) 1996-12-10 1997-01-29 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
US5994071A (en) 1997-04-04 1999-11-30 Albany Medical College Assessment of prostate cancer
IL136544A0 (en) 1997-12-05 2001-06-14 Scripps Research Inst Humanization of murine antibody
WO2003025183A2 (en) 2001-09-14 2003-03-27 Cellectis Random integration of a polynucleotide after in vivo linearization
WO2004067736A2 (en) 2003-01-28 2004-08-12 Cellectis Custom-made meganuclease and use thereof
CA2703045C (en) 2007-10-25 2017-02-14 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for targeted integration
LT3712174T (lt) 2013-12-24 2022-05-25 Janssen Pharmaceutica Nv Anti vista antikūnai ir fragmentai
EP3152222A4 (en) 2014-06-04 2017-11-01 NGM Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for targeting a pathway
AU2015357463B2 (en) 2014-12-05 2021-10-07 Immunext, Inc. Identification of VSIG8 as the putative vista receptor and its use thereof to produce vista/VSIG8 modulators
EP3229838B1 (en) * 2014-12-11 2020-09-09 Pierre Fabre Médicament Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof
US20210017281A1 (en) 2016-04-15 2021-01-21 Immunext, Inc. Anti-human vista antibodies and use thereof
WO2019183040A1 (en) 2018-03-21 2019-09-26 Five Prime Therapeutics, Inc. ANTIBODIES BINDING TO VISTA AT ACIDIC pH
WO2020016459A1 (en) * 2018-07-20 2020-01-23 Pierre Fabre Medicament Receptor for vista
US10577424B1 (en) * 2019-08-15 2020-03-03 Beijing Mabworks Biotech Co., Ltd. Antibodies binding VISTA and uses thereof

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