KR20230117627A

KR20230117627A - 두피 혹은 피부의 개질, 창상 치유, 또는 모발의 개질에이용되기 위한 의약 조성물

Info

Publication number: KR20230117627A
Application number: KR1020237025598A
Authority: KR
Inventors: 히로타로 후쿠오카
Original assignee: 히로타로 후쿠오카
Priority date: 2017-10-02
Filing date: 2017-10-02
Publication date: 2023-08-08
Also published as: JPWO2019069354A1; JP6506482B1; AU2017434946A8; US11406668B2; EP3692998A4; US20220331367A1; KR20200060295A; AU2017434946A1; US20200101114A1; EP3692998A1; KR102755876B1; CA3059319A1; WO2019069354A1; MX2019014426A; CN110520137A; BR112019025209A2

Abstract

본 발명은 두피 혹은 피부의 개질, 창상 치유의 촉진, 또는 모발을 개질하는데 이용하기 위한 의약 조성물로서, 지방 줄기세포로부터의 분비물을 유효 성분으로 포함하고, 두피 또는 피부 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3∼0.6 ㎍의 상기 분비물이 투여되는 의약 조성물을 제공한다.

Description

두피 혹은 피부의 개질, 창상 치유, 또는 모발의 개질에 이용되기 위한 의약 조성물{PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR USE IN IMPROVING QUALITY OF SCALP OR SKIN, WOUND HEALING, OR IMPROVING QUALITY OF HAIR}

본 발명은 두피 혹은 피부의 개질, 창상 치유, 또는 모발의 개질에 이용되기 위한 의약 조성물 및 방법에 관한 것이다.

지방 줄기세포로부터 추출된 지방 유래 줄기세포 분비물에는 모모(毛母) 세포를 자극하는 작용과 증모 효과를 갖는 것이 개시되어 있다(비특허문헌 1). 또, 남성 호르몬을 억제하는 것에 의한 증모제도 개발되어 있다. 그러나, 이들 치료는 치료하고 있는 기간에는 증모 효과가 있지만, 치료를 종료하면 증모 효과가 소실된다.

Byung-Soon Park et al., Biomedical Research, 31(1): 27-34, 2010

본 발명자는 지방 줄기세포로부터의 분비물(이하, 「ASC-CM」라고 부름)을 특정 용량으로 피부에 투여하면, 피부의 재생을 촉진하는 것, 피부의 개질을 촉진하는 것, 피부의 창상을 치유할 수 있는 것, 또는 피부의 회춘을 촉진하는 것을 발견하였다. 또, 본 발명자는 ASC-CM을 특정 용량으로 두피에 투여하면, 두피의 재생을 촉진하는 것, 두피의 개질을 촉진하는 것, 또는 두피의 회춘을 촉진하는 것을 발견하였다. 본 발명자는 추가로 ASC-CM을 특정 용량으로 두피에 투여하면, 모발의 개질(큐티클의 개질, 백발의 개선, 모발 신장 속도의 증가, 모발의 굵기의 증가 등)을 촉진하는 것을 발견하였다.

본 발명에 의하면, 이하의 발명이 제공된다.

(1) 지방 줄기세포로부터의 분비물을 유효 성분으로 포함하는 두피 또는 피부를 개질하는데 이용하기 위한 국소 투여용 의약 조성물로서, 두피 또는 피부 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3∼0.6 ㎍의 상기 분비물이 투여되는 의약 조성물.

(2) 지방 줄기세포로부터의 분비물을 유효 성분으로 포함하는 창상을 치료하는데 이용하기 위한 국소 투여용 의약 조성물로서, 창상 부위 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3∼0.6 ㎍의 상기 분비물이 투여되는 의약 조성물.

(3) 지방 줄기세포로부터의 분비물을 유효 성분으로 포함하는 모발을 개질하는데 이용하기 위한 국소 투여용 의약 조성물로서, 두피 또는 피부 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3∼0.6 ㎍의 상기 분비물이 투여되는 의약 조성물.

(4) 모발의 개질이 백발의 감소인 상기 (3)에 기재된 의약 조성물.

(5) 모발의 개질이 모발의 큐티클의 거칠기의 개선인 상기 (3)에 기재된 의약 조성물.

(6) 모발의 개질이 모발의 굵기 또는 신장 속도의 개선인 상기 (3)에 기재된 의약 조성물.

(7) 두피 또는 피부의 표면의 1 ㎠∼4 ㎠에 1개소의 비율로 투여되는 상기 (1)∼(6) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물.

(8) 1개소 당 10∼30 ㎕의 용액량으로 투여되는 상기 (1)∼(7) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물.

(9) 투여 간격이 월에 2회부터 6월에 1회인 상기 (1)∼(8) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물.

본 발명에 의하면, 치료 종료 후에도 계속적으로 효과를 발휘할 수 있는 의약 조성물 또는 치료법이 제공된다는 점에서 유리하다.

도 1은 ASC-CM의 투여에 의한 모발의 큐티클에 대한 영향을 나타내는 사진이다.
도 2는 ASC-CM의 투여에 의해 백발이 근원 부분에 있어서 흑색으로 변화하고 있음을 나타내는 도면이다.
도 3은 ASC-CM의 투여와 피부의 지방층의 두께의 관계를 나타내는 도면이다. #1∼#5는 각각 치료 1∼5개월 후임을 나타낸다.
도 4a는 두부의 9 분할의 모식도이다.
도 4b는 ASC-CM 0.1 ㎍ 투여군에서의 9 분할된 두피 각각에 대한 증모 효과의 평점의 평균값(초회, 치료 개시 6∼9개월 후, 치료 종료 후인 치료 개시 2년 1개월∼3년 후)을 나타낸다.
도 4c는 ASC-CM 0.4 ㎍ 투여군에서의 9 분할된 두피 각각에 대한 증모 효과의 평점의 평균값(초회, 치료 개시 6∼9개월 후, 치료 종료 후인 치료 개시 2년 1개월∼3년 후)을 나타낸다.
도 5a는 치료 전후에서의 피부 조직 중의 콜라겐의 조직 염색을 나타낸다.
도 5b는 치료 전후에서의 피부 조직 중의 콜라겐의 조직 염색을 나타낸다.
도 5c는 지방세포의 크기에 대한 ASC-CM 투여의 용량 의존성을 나타내는 도면이다.
도 6은 창상에 대한 ASC-CM 투여 용량과 치유 효과의 관계를 나타낸다.
도 7은 ASC-CM 0.4 ㎍ 투여군에서의 두피 지방층의 면역 조직학적 염색(CD68 양성 대식세포의 염색, CD163 양성 대식세포의 염색 및 PPARγ 양성 지방세포의 염색)의 결과를 나타낸다.
도 8a는 ASC-CM 0.4 ㎍ 투여군에서의 모발의 신장 속도와 그 신장 속도의 총합을 나타낸다. 도 8a는 환자 C의 결과이다.
도 8b는 상기 도 8a의 방법에서 계측한 3명의 환자의 치료 전후의 모발의 길이의 총합을 나타내는 그래프이다. 도 8b에서는 왼쪽부터 순서대로 환자 A의 데이터, 환자 B의 데이터, 환자 C의 데이터가 나타나 있다.

본 명세서에서는 「대상」이란 포유동물을 의미한다. 포유동물로는, 예를 들면, 인간(남성 및 여성)을 들 수 있다.

본 명세서에서는 「지방 줄기세포」란 지방 조직에 존재하는 세포이며, 줄기세포로서의 성질을 갖고, 뼈 및 지방 중 어느 것으로도 분화하는 능력을 갖는 세포를 의미한다. 지방 줄기세포는, 예를 들면, CD13, CD29, CD44, CD73, CD90, CD105 및 CD166으로부터 선택되는 1 이상, 예를 들면 모두가 양성일 수 있다. 지방 줄기세포는 CD14, CD31 및 CD45로부터 선택되는 1 이상, 예를 들면 모두가 음성일 수 있다.

본 명세서에서는 「지방 줄기세포로부터의 분비물」이란 지방 줄기세포를 용액 중에서 배양할 때에 지방 줄기세포로부터 배양액 중에 분비되는 물질을 의미한다. 본 명세서에서는 지방 줄기세포로부터의 분비물을 ASC-CM라고 부르는 경우가 있다. 세포로부터의 분비물에는 세포 사이의 여러가지 전달 물질이 포함된다고 생각할 수 있고, 예를 들면, 엑소좀 등의 세포외 소포, mRNA 및 사이토카인 등의 단백질 등이 포함될 수 있다.

본 명세서에서는 「단백질량 환산」이란 포함되는 단백질의 중량을 기준으로 결정되는 것을 의미한다.

본 명세서에서는 「두피」란 두부의 피부 중 정수리부를 포함하고, 안면, 턱, 및 목(귀를 포함함) 이외의 영역을 말한다. 본 명세서에서는 「피부」는 두피 및 두피 이외의 피부를 포함하는 의미로 이용된다.

본 명세서에서는 「개질」이란 그 질을 개량하는 것, 개선하는 것, 향상시키는 것, 또는 좋게 하는 것을 의미한다. 본 명세서에서는 「개선」이란 현재의 상황보다도 좋아지는 것, 및 나쁜 부분이 보다 좋아지는 것을 포함하는 의미로 이용된다.

본 명세서에서는 「모발」이란 피부에 생기는 털을 의미한다. 본 명세서에서는 「두발」이란 두피에 생기는 털을 의미한다.

본 명세서에서는 「백발」이란 모발, 특히 두발로부터 유멜라닌(eumelanin)(또는 진성 멜라닌) 및/또는 페오멜라닌(pheomelanin) 등의 색소가 결핍하여 백색을 나타내는 모발을 의미한다. 본 명세서에서는 「흑발」이란 유멜라닌을 포함하여 흑색을 나타내는 모발을 의미한다.

본 명세서에서는 「큐티클」이란 모발의 표면을 덮는 구조이며, 모발의 최외층에 존재하는 구조이다. 큐티클은 모발을 외부로부터의 자극으로부터 보호하는 역할, 및 내부의 피질로부터의 수분 또는 성분의 외부로의 손실을 방지하는 역할을 담당하고 있다. 큐티클은 근원으로부터 털끝에 대해서 비늘 모양으로 모발을 덮는다.

본 명세서에서는 「창상」이란 조직의 물리적 손상을 의미한다. 창상에는 체표의 창상이 포함된다.

본 발명의 어느 양태에서는

(ⅰ) 지방 줄기세포로부터의 분비물을 유효 성분으로 포함하는 조직(예를 들면, 두피 또는 피부)을 개질하는데 이용하기 위한 국소 투여용 의약 조성물;

(ⅱ) 지방 줄기세포로부터의 분비물을 유효 성분으로 포함하는 창상을 치료하는데 이용하기 위한 국소 투여용 의약 조성물; 및

(ⅲ) 지방 줄기세포로부터의 분비물을 유효 성분으로 포함하는 모발을 개질하는데 이용하기 위한 국소 투여용 의약 조성물;

이 제공된다. 본 발명의 어느 양태에서는 상기 (ⅰ)∼(ⅲ)에 기재된 의약 조성물은 두피 또는 피부 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3∼0.6 ㎍의 상기 분비물이 투여될 수 있다.

본 발명의 어느 양태에서는

(A) 지방 줄기세포로부터의 분비물을 유효 성분으로 포함하는 조직(예를 들면, 두피 또는 피부)을 개질하는데 이용하기 위한 국소 투여용 의약 조성물로서, 두피 또는 피부 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3∼0.6 ㎍의 상기 분비물이 투여되는 의약 조성물;

(B) 지방 줄기세포로부터의 분비물을 유효 성분으로 포함하는 창상을 치료하는데 이용하기 위한 국소 투여용 의약 조성물로서, 창상 부위 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3∼0.6 ㎍의 상기 분비물이 투여되는 의약 조성물; 및

(C) 지방 줄기세포로부터의 분비물을 유효 성분으로 포함하는 모발을 개질하는데 이용하기 위한 국소 투여용 의약 조성물로서, 두피 또는 피부 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3∼0.6 ㎍의 상기 분비물이 투여되는 의약 조성물;

이 제공된다.

본 발명의 어느 양태에서는 두피 또는 피부 1개소 당 투여되는 분비물의 양은 단백질량 환산으로 0.3∼0.6 ㎍, 0.35∼0.5 ㎍, 0.35∼0.45 ㎍, 또는 약 0.4 ㎍일 수 있다. 본 발명의 어느 양태에서는 상기 ASC-CM에 증식인자 등의 추가적인 단백질 성분을 첨가해 이용해도 되지만, 그 경우에 있어서도 ASC-CM의 투여량은 단백질 환산으로 0.3∼0.6 ㎍, 0.35∼0.5 ㎍, 0.35∼0.45 ㎍, 또는 약 0.4 ㎍일 수 있다.

본 발명의 어느 양태에서는 지방 줄기세포로부터의 분비물은 지방 줄기세포를 배지 중에서 배양함으로써 배양 상청 중에 얻을 수 있다. 본 발명의 어느 양태에서는 지방 줄기세포로부터의 분비물은 지방세포를 무혈청 배지 중에서 배양함으로써 배양 상청 중에 얻을 수 있다. 본 발명의 어느 양태에서는 지방 줄기세포로부터의 분비물은 지방 줄기세포를 배지(예를 들면, 무혈청 배지) 중에서 저산소 조건 하에서 배양함으로써 배양 상청 중에 얻을 수 있다. 지방 줄기세포의 배지는 지방 줄기세포의 배양에 적절한 배지, 예를 들면, DMEM, F12, DMEM/F12 등의 배지, 또는 예를 들면, 화학적으로 정의된 배지에서 배양할 수 있다. 저산소 조건으로는 산소 농도가 예를 들면, 15% 이하, 10% 이하, 또는 5% 이하의 대기 하의 조건(예를 들면, 1.5%∼4%, 예를 들면, 약 2% 또는 3%)을 들 수 있다.

본 발명의 어느 양태에서는 지방 줄기세포로부터의 분비물은 지방 줄기세포를 DMEM/F12 배지 중에서 저산소 환경 하(예를 들면, 2% O₂, 5% CO₂, 93% N₂ 분위기 하)에서 37℃에서 72시간 배양해 얻을 수 있다.

지방 줄기세포는 통상의 기술자라면 지방 조직으로부터 용이하게 취득할 수 있다. 지방 줄기세포는 예를 들면, 복부의 지방 조직으로부터 얻을 수 있다. 복부의 지방 조직은 복부 지방 흡인에 의해 얻을 수 있다. 지방 줄기세포의 지방 조직으로부터의 정제는 예를 들면 이하와 같이 행할 수 있다. 지방 조직을 세정하고, I형 콜라게나아제로 세포 덩어리를 단일 세포에 해리시키고, 필터로 여과하여 세포 이외의 조직 단편 등을 제거한다. 필요에 따라 세정(예를 들면, 생리 식염수나 배지로의 현탁과 원심에 의한 세정)한다. 그 후, 지방 줄기세포를 세포의 밀도(비중)에 의해 분리한다. 예를 들면, 1.077 g/㎤의 비중을 갖는 피콜 용액(예를 들면, Histopaque-1077)으로 원심하고, 부유 세포로서 지방 줄기세포를 분리할 수 있다. 얻어진 지방 줄기세포는 지방 줄기세포의 마커의 발현으로 확인할 수 있다. 지방 줄기세포의 마커로는, 예를 들면, CD13, CD29, CD44, CD73, CD90, CD105 및 CD166으로부터 선택되는 1 이상, 예를 들면 모두를 들 수 있다. 또, 지방 줄기세포는 특정 마커가 발현하고 있지 않는 것으로 확인할 수 있다. 그러한 마커로는, 예를 들면, CD14, CD31 및 CD45로부터 선택되는 1 이상, 예를 들면 모두를 들 수 있다. 또, 얻어진 지방 줄기세포는 뼈로의 분화능 및 지방으로의 분화능을 지표로 하여 그 양쪽 모두를 갖는 것으로서 확인할 수 있다.

지방 줄기세포로부터의 분비물은 단백질 함량에 의해 용량을 결정할 수 있다. 단백질 함량은 통상의 기술자라면 상법(예를 들면, 피로갈롤 레드법 및 블래드포드법 등의 방법)에 따라 결정할 수 있다.

지방 줄기세포로부터의 분비물 또는 이것을 포함하는 의약 조성물은 투여 후에는 두피는 투여 부분 근방으로부터 개선되고, 그 효과는 시간이 걸려서 서서히 주위에 전파된다. 따라서, 두피 또는 피부 상에 점재시켜 시간을 들여 주위에도 발명의효과를 전파시킬 수도 있고, 밀집시켜 전파에 필요한 시간을 단축할 수도 있다. 본 발명의 어느 양태에서는 분비물은 특별히 한정되지 않지만 예를 들면, 1 ㎠∼10 ㎠, 1 ㎠∼5 ㎠, 1 ㎠∼4 ㎠, 1 ㎠∼3 ㎠, 1 ㎠∼2 ㎠, 0.5 ㎠∼2 ㎠, 0.7 ㎠∼1.5 ㎠에 대해 1개소로 할 수 있다. 본 발명의 어느 양태에서는 분비물은, 예를 들면, 0.5 ㎠에 1개소 이하, 0.6 ㎠에 1개소 이하, 0.7 ㎠에 1개소 이하, 0.8 ㎠에 1개소 이하, 0.9 ㎠에 1개소 이하, 또는 1 ㎠에 1개소에 1개소 이하의 투여 밀도로 투여할 수 있다. 본 발명의 어느 양태에서는 지방 줄기세포로부터의 분비물 또는 이것을 포함하는 의약 조성물은, 예를 들면, 피하 직하, 또는 진피층으로부터 지방층 상층에 국소 투여할 수 있다. 투여는, 예를 들면, 주사에 의해 행할 수 있다.

또, 예를 들면, 1개소 당 10 ㎕∼50 ㎕, 15 ㎕∼30 ㎕, 15 ㎕∼25 ㎕, 또는 약 20 ㎕의 용액(단, 용액은 상기에서 지정된 양의 유효 성분을 포함함)을 투여할 수 있다.

투여 부위는, 적절히 선택할 수 있지만, 예를 들면, 두피 전체에 투여할 수도 있고, 또는 두피 전체 중 다른 곳과 비교해 불량한 부분에 투여할 수 있다.

또, 놀랍게도 본 발명자들은 두피 전체 중 비교적 양호한 부위에 투여하면, 그 효과는 주위에 전파되기 쉬운 것을 발견하였다. 양호한 부분은 본 발명의 의약 조성물에 대한 응답성이 높고, 그 효과는 전파되어 당해 투여 개소의 주변에도 미친다. 전파에 의한 개선 효과는 투여 개소로부터 가까운 곳에서 강하게 나타나지만, 투여 개소로부터 수 ㎝의 범위(예를 들면, 1 ㎝∼4 ㎝)에 미친다. 따라서, 두피 중, 비교적 양호한 부위에 대해 투여할 수 있다. 또, 비교적 불량한 부위는 양호한 부위로부터 개선 효과가 전파되므로, 비교적 양호한 부위에 대해 투여하는 것만으로도 불량한 부위로의 치료 효과는 얻을 수 있다.

따라서, 두피 중, 비교적 양호한 부위에 대해 투여하고, 전파의 효과에 의해 불량한 부분의 개선을 시도해도 된다. 또, 비교적 불량한 부위에 있어서 개선이 얻어진다면 본 발명의 의약 조성물에 대한 응답성이 높아진다. 따라서, 두피 중, 비교적 양호한 부위에 대해 투여하고, 전파의 효과에 의해 불량한 부분의 개선이 진행되어 오면, 그 후에 당해 불량한 부분에 본 발명의 의약 조성물을 투여해도 된다.

ASC-CM을 투여할 때마다, 투여 부위에서의 조직 자극, 대식세포의 활성이나 유약 지방세포의 활성이 올라가 수복 기능이 상승한다고 생각된다. 환자의 증상(상황)과 개선 정도를 진찰해 투여하는 것이 바람직하다.

어느 양태에서는 단백질량 환산으로 15 ㎍/㎖∼25 ㎍/㎖(예를 들면, 약 20 ㎍/㎖)의 ASC-CM을 1개소 15 ㎕∼25 ㎕(예를 들면, 약 20 ㎕)의 양으로 두피에 국소 투여할 수 있다. 어느 양태에서는 상기 국소 투여는 성인의 두피 당 150개소∼250개소(예를 들면, 약 200개소), 또는 250개소∼800개소로 할 수 있고, 투여 개소의 수는 필요에 따라 결정할 수 있다. 여기서 용어 「약」이란 이 용어에 이어지는 수치의 ±10% 또는 ±5%의 수치 범위를 포함함을 의미한다.

지방 줄기세포로부터의 분비물 또는 이것을 포함하는 의약 조성물은 특별히 한정되지 않지만 예를 들면, 1월에 2회부터 6월에 1회, 1월에 2회부터 5월에 1회, 1월에 2회부터 4월에 1회, 1월에 2회부터 3월에 1회, 1월에 2회부터 2월에 1회, 1월에 1.5회부터 1.5월에 1회, 또는 1월에 1.2회부터 1.2월에 1회, 예를 들면, 약 월 1회의 투여 간격으로 투여할 수 있다.

지방 줄기세포로부터의 분비물 또는 이것을 포함하는 의약 조성물은 1회 투여하는 것만으로도 두피나 피부의 개질 효과를 갖고, 이 효과는 지속할 수 있다. 따라서, 투여는 1회라도 되고, 복수회라도 된다. 지방 줄기세포로부터의 분비물 또는 이것을 포함하는 의약 조성물은 계속적으로 치료가 완료될 때까지, 또는 환자가 만족할 때까지 계속적으로 투여할 수도 있다. 특히 본 발명에 의하면, 두피나 피부의 개질 효과는 상태가 좋은 부분으로부터 나타나고, 상태가 나쁜 부분에서는 늦게 나타난다. 따라서, 두피나 피부의 상태에 따라 치료 기간은 변동할 수 있다. 지방 줄기세포로부터의 분비물 또는 이것을 포함하는 의약 조성물에 의한 치료 기간은, 예를 들면, 최단으로 1회의 치료∼3년간, 최단으로 1회의 치료∼2년간, 최단으로 1회의 치료∼1.5년간, 최단으로 1회의 치료∼1년간, 최단으로 1회의 치료∼8개월, 최단으로 1회의 치료∼6개월, 또는 최단으로 1회의 치료∼4개월로 할 수 있다.

본 발명의 어느 양태에서는 상기 (A)에 기재된 의약 조성물은 두피 또는 피부의 회춘 또는 회춘을 촉진하기 위한 의약 조성물일 수 있다. 본 발명의 어느 양태에서는 상기 (A)에 기재된 의약 조성물은 두피 또는 피부의 재생 또는 재생을 촉진하기 위한 의약 조성물일 수 있다. 본 발명의 어느 양태에서는 상기 (A)에 기재된 의약 조성물은 두피 또는 피부의 활성화를 위한 의약 조성물일 수 있다. 본 발명의 어느 양태에서는 상기 (A)에 기재된 의약 조성물은 증모제나 육모제와 병용할 수 있다.

본 발명의 어느 양태에서는 상기 (B)에 기재된 의약 조성물은 창상을 치료하는데 이용할 수 있다. 본 발명에서는 창상의 치료는 창상의 치유, 창상의 치유의 촉진, 또는 창상의 치유의 조기화일 수 있다.

두피를 개선함으로써, 그 효과는 모발 그 자체에도 미친다. 그리고, 후술하는 실시예에 있어서 나타낸 것과 같이, 모발의 개선 효과로는 백발의 감소, 백발 부분의 무게의 감소, 및 백발의 비율의 감소, 백발의 비율의 감소, 큐티클의 거칠기의 개선, 모발의 굵기 및 신장 속도의 개선을 들 수 있다. 따라서, 본 발명의 어느 양태에서는 상기 (C)에 기재된 의약 조성물은 백발을 감소시키는데 이용하기 위한 의약 조성물일 수 있다. 백발의 감소로는 백발의 개수의 감소, 백발 부분의 무게의 감소, 및 백발의 비율의 감소를 들 수 있다. 백발의 감소는 각종 멜라닌에 의해 착색한 머리카락의 개수의 증가, 그러한 머리카락의 부분의 무게의 증가, 및 그러한 머리카락의 비율의 증가를 수반할 수 있다. 본 발명의 어느 양태에서는 상기 (C)에 기재된 의약 조성물은 모발의 큐티클의 거칠기를 개선하는데 이용하기 위한 의약 조성물일 수 있다. 머리카락의 큐티클의 거칠기를 개선하는 것으로는 큐티클의 정렬의 정도를 높이는 것, 및 큐티클이 흐트러진 영역을 감소시키는 것을 들 수 있다. 본 발명의 어느 양태에서는 상기 (C)에 기재된 의약 조성물은 모발의 굵기 또는 신장 속도를 개선하는데 이용하기 위한 의약 조성물일 수 있다. 모발의 굵기의 개선으로는 모발을 굵게 하는 것, 굵은 모발의 개수를 증가시키는 것, 및 굵은 모발의 비율을 증가시키는 것을 들 수 있다. 신장 속도의 개선으로는, 예를 들면, 월 10 ㎜ 이상, 11 ㎜ 이상, 12 ㎜ 이상, 13 ㎜ 이상, 14 ㎜ 이상, 15 ㎜ 이상, 16 ㎜ 이상, 17 ㎜ 이상, 18 ㎜ 이상, 19 ㎜ 이상, 20 ㎜ 이상, 또는 21 ㎜ 이상의 신장 속도를 갖는 모발의 개수 혹은 비율을 증가시키는 것을 들 수 있다.

본 발명의 어느 측면에서는

(a) 두피 또는 피부를 그 필요가 있는 대상(또는 그 필요가 있는 부위)에 있어서 개질하는 방법으로서, 두피 또는 피부 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3 ㎍∼0.6 ㎍의 지방 줄기세포로부터의 분비물을 국소 투여하는 것을 포함하는 방법;

(b) 창상을 그 필요가 있는 대상에 있어서 치료하는 방법으로서, 창상 부위 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3 ㎍∼0.6 ㎍의 지방 줄기세포로부터의 분비물을 국소 투여하는 것을 포함하는 방법; 및

(c) 모발을 그 필요가 있는 대상에 있어서 개질하는 방법으로서, 두피 또는 피부 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3 ㎍∼0.6 ㎍의 지방 줄기세포로부터의 분비물을 국소 투여하는 것을 포함하는 방법;

이 제공된다.

본 발명의 어느 측면에서는

(α) 두피 또는 피부를 개질하는데 이용하기 위한 국소 투여용 의약 제제의 제조에서의 지방 줄기세포로부터의 분비물의 사용{여기서, 당해 분비물은 두피 또는 피부 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3 ㎍∼0.6 ㎍ 투여됨};

(β) 창상을 치료하는데 이용하기 위한 국소 투여용 의약 제제의 제조에서의 지방 줄기세포로부터의 분비물의 사용{여기서, 당해 분비물은 창상 부위 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3 ㎍∼0.6 ㎍ 투여됨}; 및

(γ) 모발을 개질하는데 이용하기 위한 국소 투여용 의약 제제의 제조에서의 지방 줄기세포로부터의 분비물의 사용{여기서, 당해 분비물은 두피 또는 피부 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3 ㎍∼0.6 ㎍ 투여됨};

이 제공된다.

본 발명의 어느 양태에서는 의약 조성물은 지방 줄기세포로부터의 분비물에 더하여 부형제(예를 들면, 용매, 공용매, 가용화제, 습윤제, 현탁제, 증점제, 유화제, 킬레이트제, 완충액, pH 조정제, 항산화제, 환원제, 항균제, 보존제, 충진제, 보호제, 또는 등장제)를 포함할 수 있다. 본 발명의 어느 양태에서는 의약 조성물은 주사제의 형태일 수 있다. 본 발명의 어느 양태에서는 의약 조성물은 국소 투여, 예를 들면, 피내 투여 또는 피하 투여될 수 있다.

[실시예]

실시예 1: 지방 줄기세포 분비 물질에 의한 증모 효과

(1) 지방 줄기세포의 분비 물질(이하 「ASC-CM」라고도 부름)의 조제

지방 줄기세포의 분비 물질은 이하와 같이 조제하였다.

혈액 검사에 의해 바이러스 체크(HIV, HBV, HCV)를 행한 건강한 성인 여성 공여자(5명, 연령 20-21세)로부터 복부 지방 흡인에 의해 지방 조직을 채취하고, 이하의 방법으로 지방 유래 줄기세포(ADSCs)를 분리하였다. 300 g×10분의 원심 후, 0.075% 타입 I 콜라게나아제(Sigma-Aldrich, USA)를 첨가하고, 37℃에서 45분 처리하였다. 인산 완충액(PBS)을 가하고, 70 ㎛의 필터를 통해 여과하였다. 그 후 α-개변 이글 배지(Invitrogen, USA)를 소량 첨가하고, 300 g×10분의 원심 후, PBS를 가하고, 70 ㎛의 필터를 통해 여과하였다. Histopaque-1077(Sigma-Aldrich, USA)을 이용해 840 g×10분의 원심을 행하고, 상등을 폐기하여 Histopaque-1077에 부유하는 세포를 모아 ADSCs를 수득하였다.

FDA(미국의 의약식품국), 및 KFDA(한국의 의약식품국)의 가이드라인에 준거하여 지방 조직과 세정한 세포의 바이러스 검사, 세균 배양 검사를 행하여, 잡균의 감염을 배제하였다. Dulbecco 검사를 행하여, 잡균의 감염을 배제하였다. 둘베코 개변 이글 배지(DMEM), 뉴질랜드 종 10% 소 혈청 배지(FBS), 100 단위/㎖ 페니실린, 100 단위/㎖ 스트렙토마이신을 포함하는 배지를 이용해 37℃의 5% 이산화탄소의 환경 하에서 3-5일 배양하였다. 이 행정을 추가로 4회 반복하여, 100 ㎟ 당 4×10⁵ 개의 ADSCs(지방세포 유래 줄기세포)를 얻었다. ADSCs는 PBS에 의해 세정하고, 신선한 DMEM/F12 무혈청 배지(Invitrogen-Gibco-BRL, USA)를 가하였다. ADSCs의 분비를 촉진하기 위하여, 72시간 저산소 환경(2% O₂, 5% CO₂, 93% N₂)에 유지하였다. 그 후 300 g×5분의 원심 후, 0.22 ㎛의 주사기 필터를 이용해 여과하여 지방 유래 줄기세포의 배양 상청을 취득하였다. 이 시점에서 재차 바이러스 검사, 세균 배양 검사를 행하여, 세균·바이러스의 감염을 배제하였다. 마지막으로, 3-kDa 분자량 컷-오프 센트리콘 튜브(Millipore Corp, USA)를 이용해 분비된 성분을 정제하여 ASC-CM을 얻었다. ASC-CM의 단백질 함량은 블래드포드법 및 피로갈롤 레드법에 의해 확인되었다.

(2) 박모(薄毛) 환자에 대한 ASC-CM의 투여

박모 환자(25세∼72세의 남성 21명 및 여성 16명)의 두피(오른쪽 절반, 왼쪽 절반 또는 양쪽 모두)에 1개소 당 단백질량 환산으로 0.1 ㎍(n=14), 0.2 ㎍(n=3), 0.4 ㎍(n=9), 0.6 ㎍(n=9), 0.8 ㎍(n=4)의 ASC-CM을 주사기를 이용해 피하 투여하였다. 2명은 두피 오른쪽 절반과 왼쪽 절반에 상이한 용량으로 ASC-CM을 투여하였다. 이 때, 상기의 용량이 되는 농도로 1개소 당 20 ㎕를 두피의 200개소에 투여하였다. 두피의 절반을 치료할 때에는 각각의 농도를 100개소에 투여하였다. 이 때, 두피에 1 ㎠∼4 ㎠의 투여 밀도로 투여하였다. 투여는 예외적인 경우를 제외하고 1월 1회의 빈도로 행하고, 투여 기간은 6∼10개월간 이었다(평균적으로는 8개월). 관찰은 어느 경우에서도 투여 종료 1개월 후에 행하였다. 피부 표면 1개소 당 단백질량 환산으로 X ㎍ 투여한 군을 실시예 전체에 걸쳐 「X ㎍ 투여군」 또는 「X ㎍/1개소 투여」 등으로 부른다. 이하, ASC-CM의 투여량에 대해 0.4 ㎍라고 기술한 경우에는 예외없이 단백질 환산량으로 0.4 ㎍ 투여된 것을 의미한다.

초회 투여시의 모발의 개수에 대한 치료 후의 모발 개수의 경시적 변화를 육안에 의해 관찰하였다. 치료 전 및 치료의 단계마다 트리코그램에 의한 촬영에 동의를 얻었다. 환자의 양측의 눈꼬리를 머리 측에 연장하여, 양 귀와 정수리를 연결하는 선과 교차하는 2점에 먹물로 자청(刺靑)을 하고, 마킹을 중심으로 2 ㎝의 범위를 투여 3일 전의 타이밍에 매월 면도하였다. 트리코그램은 매회 마킹을 중심으로 촬영(Canon Power Shot A520, Tokyo, Japan)하였다. 이 때 유리판을 두피에 눌러 털을 눕힌 상태에서 털의 길이를 알도록 하여 촬영하였다. 촬영 범위에 포함되는 입묵(入墨)을 중심으로 한 직경 11 ㎜의 원(면적 95 ㎟) 내의 모발을 육안으로 계량함으로써 행하였다.

결과는 표 1에 나타낸 것과 같았다.

표 1에 나타낸 것과 같이, 1개소 당 단백질량 환산으로 0.1 ㎍(5 ㎍/㎖를 20 ㎕) 투여한 군(0.1 ㎍ 투여군)에서는 초회 투여시에 대해 모발 개수의 증가 효과가 확인되었지만, 이것에 대하여 0.2 ㎍ 투여군, 0.4 ㎍ 투여군, 0.6 ㎍ 투여군 및 0.8 ㎍ 투여군에서는 모발 개수의 눈에 띈 증가 효과는 관찰되지 않고, 8개월 또는 10개월 후에는 오히려 모발 개수의 감소가 관찰되었다. 단, ASC-CM 성분만의 투여에서는 상기와 같은 결과가 안정되지 않아, 모발의 개수에 의한 평가에서는 결정적인 결론을 내는 것은 어렵다고 생각되었다.

이와 같이, 박모의 처치에 있어서, 용량 의존성은 관찰되지 않고, 1개소 당 단백질량 환산으로 0.2 ㎍ 이상의 고용량의 투여는 오히려 모발 개수를 증가시키지 않는 것이 분명해졌다. 이들 결과로부터, 박모 환자의 처치에는 1개소 당 단백질량 환산으로 0.1 ㎍을 투여할 필요가 있다고 생각되었다.

이 결과는 발명자들에 의한 기존의 결과(모두 0.1 ㎍/1개소에서 행하였음)와 일관되는 데이터였다(Fukuoka et al., The American Journal of Cosmetic Surgery, 29(4):273-282, 2012).

실시예 2: 머릿결의 변화

본 실시예에서는 머리카락의 큐티클에 대해 처치 전후로 개선이 보였는지를 조사하였다.

ASC-CM 0.4 ㎍ 투여군(월 1회 투여)의 모발을 채취하고, (환자의 모발의 신장 속도를 고려하여, 치료 전 2개월에 상당하는 부위와 치료 개시부터 3.5개월째의 부위를) 채취일, 혹은 그 다음날에 검사 부위의 모발을 고정판에 레진으로 접착 고정시킨다. 그 다음날 혹은 다음다음날에 탄소 고정하고, 같은 날에 상법에 의해 주사 전자현미경에 의해 머리카락의 큐티클의 상태를 관찰하였다. 음성 대상으로서, 동일 환자의 처치되지 않은 부분의 모발을 이용하였다. 그리고, 모발의 새롭게 신장한 부분(근원측)과 기존의 부분(선단측)을 비교하였다. 대표적인 예를 도 1에 나타낸다.

그 결과, 치료한 모발에 대해서는 선단측에서는 큐티클이 거칠어지고 있는 것에 대하여, 새롭게 신장한 부분인 근원측에서는 큐티클이 가지런해지고 있는 모습이 관찰되어 머릿결의 차이가 분명하게 개선되고 있었다. 이것에 대하여, 음성 대상의 처치되지 않은 부분의 모발에서는 근원도 선단측도 큐티클의 거침이 관찰되어, 처치되지 않은 부분에서는 그 질의 개선 효과는 확인되지 않았다.

보다 많은 환자(3명)에 대해 동일한 평가를 실시하였다(ASC-CM 0.4 ㎍, 월 1회 투여, 3∼5개월 투여). 평가는 최후 투여로부터 1개월 후에 전자현미경 화상에 기초하여 하기의 평점에 기초하여 행하였다. 평가는 의료 종사자인 의사들 7명에 의해 행하였다. 평점의 평균값를 구하였다.

머릿결 평가의 평점표

5점: 큐티클이 가지런해져 있고, 거칠기가 눈에 띄지 않는다.

4점: 평균보다도 큐티클이 가지런해져 있지만, 다소의 거칠기가 확인된다.

3점: 큐티클의 가지런한 것이 평균적이다.

2점: 평균보다도 큐티클이 거칠어져 있고, 다소가 박리가 확인된다.

1점: 큐티클이 전체적으로 거칠어져 있고, 전체적으로 박리가 확인된다.

결과는 표 2에 나타낸 것과 같았다.

환자 3에 대해서는 본 실시예의 전에 벌써 치료가 개시되고 있었다. 그러나, 본 실시예에 의한 관찰을 개시하고 4개월 후에는 동일한 머릿결 변화가 확인되었다.

상술한 것과 같이, 0.4 ㎍ 투여군에서는 투여 후에 머릿결의 변화가 확인되었다. 다른 쪽으로, 0.1 ㎍ 투여군에서는 음성 대상과 동일하게 머릿결의 개선 효과는 관찰되지 않았다.

환자 3에서는 본 실시예 전에 치료가 개시되고 있었지만, ASC-CM의 0.4 ㎍ 투여에 의해 명확하게 머릿결의 개선이 확인되었다.

실시예 3: 머릿결의 변화

본 실시예에서는 머리카락의 색(백발)에 주목하여, 처치 전후로 그 개선 효과를 조사하였다.

ASC-CM의 0.4 ㎍ 투여군(n=5, 54세∼61세 남성)에 있어서, 치료 개시부터 6개월∼16개월(평균 9.4개월; 치료는 평균 9.2회) 후에 백발의 면적을 조사하여 치료 전과 비교하였다. 그 결과, 표 3에 나타낸 것과 같이, 면적 비로 평균 약 38%의 감소가 확인되었다.

도 2에서는 ASC-CM 0.4 ㎍ 투여군(67세 여성, 5회 치료, 치료 개시부터 6개월, 및 61세 남성, 8회 치료, 4개월의 경과 관찰을 하고 치료 개시부터 12개월) 치료 후에 백발의 근원 부분이 흑색이 된 모습을 나타낸다. 도 2에 나타낸 것과 같이, 이미 백발이 되어 있는 부분에 대해서는 백색 그대로지만, 치료 후에 새롭게 신장한 부분에 대해서는 흑색이 되어 있음이 나타나 있다.

실시예 4: 두피의 개질 효과의 검증

모발의 개질이 상기에 의해 나타났지만, 두피의 어떠한 개질에 기초하는 것인지를 검증하였다.

10 Mz의 프로브를 이용한 에코 검사에 의해 두피의 피하 조직의 지방층의 두께 변화를 관찰하였다. 이 검사에서는 피지선 영역으로부터 하방 부분의 영역이 측정되고, 대체로 진피층까지의 영역의 두께가 측정된다고 생각된다(단, 진피층은 측정값에 포함되지 않음). 결과는 도 3에 나타낸 것과 같았다. 도 3에서는 ASC-CM 0.4 ㎍/1개소를 월 1회 투여한 환자의 측정값이 나타나 있다. 도 3 중의 「#n」은 치료 n개월 후임을 나타낸다.

그 결과, 도 3에 나타낸 것과 같이, 치료 개시 후 5개월에서는 지방층의 두께에 유의한 변화는 확인되지 않았다.

또, ASC-CM 0.1 ㎍ 투여군에서는 두피의 개질이 생기지 않은 것에 대하여, ASC-CM 0.4 ㎍ 투여군에서는 두피의 개질이 생기고 있는 것이 분명해졌다. 지금까지의 연구에 의한 ASC-CM 0.1 ㎍ 투여에서는 단기간에서의 모발 개수의 증가 효과는 확인되었지만, 두피의 개질 효과는 확인되지 않았다. 한편, 보다 고용량(0.4 ㎍/1개소)에서의 ASC-CM 투여에서는 단기간에서의 모발 개수의 증가 효과는 약하기는 했지만, 두피의 개질 효과가 높은 것이 분명해졌다. 일견하여 고용량의 투여군에서는 단기간에서의 모발 개수의 증가 효과는 약했지만, 두피의 개질을 통해 머릿결의 개선(백발로부터 흑발로의 변화나, 큐티클의 거칠기의 개선)이 생겨 났다. 또, 장기적으로는 두피의 개질을 통해 증모 효과도 기대할 수 있음이 시사되었다.

실시예 5: 부위별 두피 개질 효과

본 실시예에서는 두피를 상부로부터 9개의 영역으로 나누어 치료에 의한 효과를 관찰하였다. 이것은 각각의 환자마다 좋은 부분(털이 많은 부분)과 나쁜 부분(털이 적은 부분)이 혼재하기 때문에, 치료 효과를 검토하는데 있어서 좋은 부분에 대한 영향과 나쁜 부분에 대한 영향을 나누어 평가함으로써 보다 정밀도가 높은 평가를 실현하기 위한 것이었다. 또, 지금까지의 실시예로부터, 고용량 투여에서는 두피의 개질이 생기지만, 개질에는 시간이 걸리는 것으로부터 장기의 관찰 기간이 필요하다고 생각되기 때문에, 장기의 관찰 기간을 설정하였다.

특히, 두피의 개질에 의해 치료 종료 후에도 증모 효과가 생기는지를 검토하였다. 이 목적에서 치료 기간은 대체로 8개월로 하며, 여기서 치료를 종료하고, 그 다음은 치료하지 않고 증모 효과만을 관찰하였다.

9개의 영역은 이하의 기준에 따라 설정하였다. 구체적으로는 정수리부 측으로부터 촬영한 두부 화상을 타원으로 봐서, 장축을 3 등분 하고 단축을 3 등분 하여 9개의 영역으로 구분하였다. 도 4a에는 두부의 9개의 구획을 어떻게 나누었는지 알 수 있도록 모식도를 나타낸다.

박모 환자(n=12)에 대하여, ASC-CM을 1개소 당 0.1 ㎍(0.1 ㎍ 투여군; n=4) 또는 0.4 ㎍(0.4 ㎍ 투여군; n=8)을 월 1회 6개월(n=1), 8개월(n=10), 및 10개월(n=1) 투여하고, 치료를 종료시켰다. 증모 효과의 관찰 및 평가는 그 후 3년에 걸쳐 실시하였다. 또한, 증모 효과는 의사 7명을 포함하는 합계 10명의 의료 종사자에 의해 평가하였다. 평점을 이하의 평점표에 기초하여 각 평가자에 의해 채점하고, 평균값를 산출하였다.

증모 효과의 평점

5점: 거의 정상

4점: 비어있는 정도가 20% 이하

3점: 비어있는 정도가 40% 이하

2점: 비어있는 정도가 60% 이하

1점: 비어있는 정도가 80% 이하

결과는 도 4b 및 도 4c에 나타낸 것과 같았다. 도 4b 및 도 4c에는 9개의 영역으로 나눈 각각의 구획의 평점의 평균점을 나타낸다.

도 4b에 나타낸 것과 같이, 0.1 ㎍ 투여군에서는 전체적으로 높은 증모 효과가 일찍부터 관찰되었지만, 치료를 정지하면 그 효과도 곧바로 사라졌다.

이것에 대하여, 0.4 ㎍ 투여군에서는, 도 4c에 나타낸 것과 같이, 조기의 증모 효과는 한정적이었지만, 치료 개시 8개월 후에 치료를 정지한 후에도 증모 효과가 지속되고, 최종적으로는 매우 만족도가 높은 증모가 달성되었다.

이것은 0.1 ㎍ 투여군에서는 근본 치료는 되지 않은 것에 대하여, 0.4 ㎍ 투여군에서는 두피의 실질적 개선 효과가 얻어졌기 때문에, 증모의 근본 치료에 가까워진 것을 시사한다.

추가로, 0.4 ㎍ 투여군에서는 우선 점수가 높은 곳(두피의 상태가 좋은 곳)으로부터 먼저 증모 효과가 나타나고, 점수가 낮은 곳(두피의 상태가 나쁜 곳)에서는 늦게 증모 효과가 나타났다. 이것은 두피의 개선에는 시간이 필요하지만, 두피가 개선되면 증모 효과가 나타난다고 하는 두피의 구조가 영향을 주고 있다고 생각되었다.

실시예 6: 개선 효과와 두피의 조직상

본 실시예에서는 두피가 개선됨에 따라 어떠한 조직상의 변화가 확인될지를 검토하였다. 본 실시예에서는 콜라겐의 증감 및 지방세포의 회춘을 관찰하였다.

(1) 콜라겐상의 변화

우선, Ⅲ형 이외의 콜라겐 및 Ⅲ형 콜라겐의 증감을 관찰하였다. 구체적으로는, 두피의 조직(표피로부터 두개골로 향하는 면)의 절편을 제작하고, Picrosirius Red Stain Kit 시약(Polysciences, Inc., Cat#: 24901-250)을 이용해 제조자에 의한 설명서에 따라 I형 콜라겐 및 Ⅲ형 콜라겐을 염색하였다. I형 콜라겐은 황색계에 염색되고, Ⅲ형 콜라겐은 녹색계에 염색되었다. 또, Ⅲ형 이외의 콜라겐은 황색∼적색계로 염색된다. 관찰상은 그레이 스케일로 디지털 화상으로서 보존하고, Photoshop(상표)에 의해 황색∼적색계와 녹색계를 각각 선택해 화상으로서 추출하고, 그 후 각 픽셀의 명도로부터 콜라겐 양(Ⅲ형 이외의 콜라겐과 Ⅲ형 콜라겐)을 추정하였다.

그 결과, 인간 검체(n=3)에서는 치료 전에는 조직 중에 Ⅲ형 콜라겐이 발견되고, ASC-CM 0.4 ㎍ 투여(월 1회)의 치료가 진행됨에 따라 Ⅲ형 콜라겐이 감소하는 경향이 확인되었다. 또 치료에 수반하여 전체적으로 Ⅲ형 이외의 콜라겐이 증가하는 경향이 확인되었다.

염색상의 대표예(2명)를 도 5a 및 도 5b에 나타낸다. 도 5a 및 도 5b에는 칼라 사진과 함께 황색∼적색(Ⅲ형 이외의 콜라겐) 화상 및 녹색계(Ⅲ형 콜라겐 양) 화상 각각을 명도를 기준으로 그레이 스케일화한 화상을 나타낸다. 도 5a는 치료 개시 4개월 후의 환자의 두피 조직, 도 5b는 치료 개시 6개월 후의 환자의 두피 조직을 각각 나타낸다. 어느 경우에서도 미치료 측에서는 Ⅲ형 이외의 콜라겐과 Ⅲ형 콜라겐이 양쪽 모두 발현하고 있지만, 치료 측에서는 Ⅲ형 콜라겐의 양이 감소하였다(약 66%로 감소). Ⅲ형 이외의 콜라겐이 증가하고 있음(약 113%로 증가)을 알 수 있다.

(2) 지방세포의 회춘

다음에, 지방세포의 회춘을 관찰하였다. 지방세포는 성장함과 동시에 세포질의 대부분이 지방적(脂肪滴)이 되어 세포질에 지방을 모아 비대화한다. 따라서, 큰 세포는 성숙한 오래된 세포를 의미하고, 작은 세포는 유약한 새로운 세포로 되어 있다. 보다 구체적으로는, ASC-CM을 1회 투여한 위스터 래트(n=3)의 배부(背部) 피부의 조직 절편을 관찰하여 지방층에서의 지방세포의 크기의 변화를 확인하였다. 지방세포의 화상을 원에 근사하고, 그 직경에 기초하여 S, M, 또는 L로 분류하였다. 그 직경이 25 ㎛ 이하인 세포를 「S」라 하고, 25 ㎛ 초과 36 ㎛ 이하인 세포를 「M」이라 하고, 36 ㎛를 초과하는 세포를 「L」로 집계하였다. 결과는 도 5c에 나타낸 것과 같았다.

도 5c에 나타낸 것과 같이, ASC-CM 0.4 ㎍ 투여군에서는 치료 4주 후에 있어서 「S」인 지방세포의 「L」에 대한 비율이 현저하게 증대하고 있었다. ASC 0.1 ㎍ 투여군에서는 지방층에서의 지방세포의 크기에 투여에 의한 변화는 확인되지 않았다.

Ⅲ형 콜라겐의 감소, Ⅲ형 이외의 콜라겐의 증가 및 작은 지방세포의 증가는 조직이 ASC-CM에 의해 재생하고 있을 가능성을 시사하는 결과이다.

실시예 7: 창상 치유에 대한 효과

지금까지의 실시예에 의해 특정 용량의 ASC-CM의 투여에 의해 피부 조직이 재생할 가능성이 시사되었다. 본 실시예에서는 ASC-CM을 창상 부위에 국소 투여함으로써 ASC-CM의 조직 수복능을 검증하였다.

창상의 작성: 12주령 위스터 래트(n=3)의 배부를 바리캉으로 면도하여 직경 8 ㎜의 원상 피부 전층 결손을 머리 측, 꼬리 측의 좌우에 각각 1개씩 작성하고, 1 개체에 4개의 피부 전층 결손을 작성하였다.

ASC-CM의 투여 방법: 창부 변연(邊緣)으로부터 4 ㎜ 떨어진 장소(상처의 상하좌우) 4개소에 단백질량 환산으로 0.1 ㎍, 0.2 ㎍, 0.4 ㎍ 또는 0.8 ㎍의 ASC-CM을 포함하는 0.02 ㎖를 피하 주입하였다.

창상 치유의 평점

5점: 치유

4점: 창상 부위의 면적의 축소율이 70% 이상

3점: 창상 부위의 면적의 축소율이 50% 이상 70% 미만

2점: 창상 부위의 면적의 축소율이 20% 이상 50% 미만

1점: 창상 부위의 면적의 축소율이 20% 미만

결과는 상기 평점을 생리 식염수의 평점으로 나누어 구하였다. 도 6에 나타낸 것과 같았다. 도 6에 나타낸 것과 같이, 창상 치유에 관해서는 ASC-CM 0.4 ㎍ 투여군에 있어서 현저하였다. 또, ASC-CM 0.1 ㎍ 투여군이나 0.8 ㎍ 투여군에서는 창상 치유의 효과는 생리 식염수와 동등하였다.

이것으로부터, ASC-CM은 고용량에서 피부의 개질 효과를 갖는 것, 및 그 효과는 각각 0.4 ㎍ 투여군에 있어서 특히 효과가 높은 것이 분명해졌다. 또, 피부의 개질 효과는 증모나 털의 질의 개선뿐만 아니라, 창상 치유의 개선에 있어서도 유익하였다. 두피의 개질이 생긴다고 생각되는 농도와 창상 치유 효과가 높은 농도가 일치한 것은 매우 흥미로운 결과였다.

실시예 8: ASC-CM 투여 후의 두피 조직에서의 조직 상재형 M2 모양 대식세포 및 PPARγ 양성 지방세포의 검출

말초 조직(특히 피부나 두피)에 있어서 조직 재생이 생길 때에 조직 상재형 M2 모양 대식세포의 증가, 또는 PPARγ 양성 지방세포의 증가가 생기는 것이 보고되어 있다(Festa E et al., Cell, 146: 761-71, 2011). 여기서, 본 실시예에서는 ASC-CM 투여 후의 두피 조직에 있어서, 조직 상재형 M2 모양 대식세포의 증가, 또는 PPARγ 양성 지방세포의 증가가 생기고 있는지를 조사하였다. 또, 두피에서의 세포 증식의 활성화 마커로서 Ki67 양성 세포의 증가가 생기고 있는지를 확인하였다. 조직 상재형 M2 모양 대식세포는 CD68 양성 세포 또는 CD163 양성 세포로서 검출하였다.

복수의 성인의 ASC-CM 0.4 ㎍ 투여군(월 1회 투여)의 두피의 조직 절편(두피 표면으로부터 두개골 골막 위까지를 포함하는 직경 3 ㎜ 펀치의 절편)을 상법에 의해 고정하여 면역 조직학적 염색을 행하였다. 경시적 변화도 보기 위하여 치료 4개월 후 및 치료 6개월 후에 채취하였다. 또, 본 실시예에서 염색에 이용한 1차 항체 및 2차 항체는 이하와 같았다.

또, 면역 조직학적 염색의 결과, CD68 양성 세포에 관해서는 미치료에서는 3 ㎜ 펀치의 절편 전체에서 평균 18.5개(n=2)인 것에 대하여, 치료 개시 4개월 후에는 24개(n=1), 치료 6개월 후에는 평균 76개(n=2)가 되어, 어느 환자에서도 CD68 양성 세포의 증가가 관찰되었다. 나아가서는 CD163 양성 세포에 관해서는 미치료에서는 3 ㎜ 펀치의 절편 전체에서 평균 36개(n=2)인 것에 대하여, 치료 6개월 후에는 평균 69.5개(n=2)가 되어, 어느 환자에서도 CD163 양성 세포의 증가가 관찰되었다. 또, PPARγ 양성 세포에 관해서는 미치료에서는 3 ㎜ 펀치의 절편 전체에서 평균 33.5개(n=2)인 것에 대하여, 치료 6개월 후에는 평균 88.5개(n=2)가 되어, 어느 환자에서도 PPARγ 양성 세포의 증가가 관찰되었다.

대표적인 면역 조직학적 염색의 결과를 도 7에 나타낸다. 도 7에서는 갈색으로 나타내는 양성 염색 개소에 대해 시인성을 높일 목적으로 각각 화살촉을 표시하였다.

조직 상재형 M2 모양 대식세포는 지방세포나 지방 조직의 유지(maintenance)를 행하고 있는 세포로 보고된 세포이다(Satoh T. et al., Nature, 495, 524-528, 2013). 이 세포의 증가는 지방세포의 유지가 활발해짐을 나타낸다고 생각된다. 또, PPARγ는 지방세포의 전구세포에 많이 발현하여, 유약한 지방세포가 생산되고 있음을 나타낸다. 따라서, PPARγ 양성 지방세포의 증가와 조직 상재형 M2 모양 대식세포의 증가는 지방세포의 회춘과 그 유지가 활발해진 것을 의미하여, 조직의 회춘(조직 재생)을 시사하는 것이 된다.

놀랍게도, 조직 상재형 M2 모양 대식세포의 증가 및 PPARγ 양성 지방세포의 증가는 치료 측에서의 증가가 늦고, 미치료 측에서도 관찰되었다. 예를 들면, 도 7의 가장 아래 패널은 미치료 측(두부 오른쪽 절반)의 면역 조직학적 염색의 결과이다. 도 7의 가장 아래 패널에서는 치료 전의 두부 오른쪽 절반과 비교하여 조직 상재형 M2 모양 대식세포의 증가 및 PPARγ 양성 지방세포의 증가가 확인되어, 치료의 효과가 치료하지 않은 영역에까지 전파됨을 알 수 있다. 또, 치료 측으로부터 먼 개소에서도 상기 증가는 관찰되었지만, 멀어진 만큼 증가는 늦게 생겼다. 두피의 개선 효과는 치료한 개소에 있어서 개시되고, 이것이 주위에 전파 하여, 주위의 두피 개선 효과로 연결되는 것이 시사되었다.

실시예 9: 두피의 개선과 머릿결의 개선 효과의 관계

상기 실시예 1에서는 모발 개수의 경시적 변화를 육안에 의해 관찰하였지만, 유의한 효과를 검출하는 데는 이르지 않았다. 상기 실시예 2∼7에 의하면, ASC-CM 0.4 ㎍ 투여군에서는 두피나 피부의 재생과 개질이 생기고, 이것에 의해 머릿결이 향상되는 효과가 생긴 것이 분명해졌다.

본 실시예에서는 상기 실시예의 결과로부터, 신장하는 속도가 빠른 머리카락에 착안하여, ASC-CM 0.4 ㎍ 투여군에서의 치료 효과를 평가하였다. 구체적으로는 3일에 0.9 ㎜ 이상 신장하는 모발을 두피 화상으로부터 추출하고, 신장한 길이의 총합을 산출하였다. 또한, 성인의 모발에서는 1개월에 약 10 ㎜의 비율(즉, 3일에 약 1 ㎜의 비율)로 신장하는 것이 알려져 있다.

이 목적을 위하여, ASC-CM 0.4 ㎍/1개소를 5회 투여(월 1회 투여)한 복수의 성인의 두피의 일부를 면도하고, 3일 후에 면도한 부위의 화상을 촬영하고, 화상 해석하였다. 면도 후, 모발은 평균적으로 0.4 ㎜의 길이를 갖고 있었다. 이하에서는 면도 3일 후에 1.4 ㎜ 이상의 길이를 갖는 모발에 대해 길이의 총합을 산출하였다. 3명의 환자(환자 A∼C)에서 계측을 실시하였다. 대표예로서 환자 C의 계수 결과를 도 8a에 나타낸다.

또, 3명의 환자 각각의 데이터를 도 8b에 나타낸다. 도 8b에서는 치료 전과 치료 6개월 후(6 M 후)가 비교되어 있다. 또, 도 8b에서는 면도 3일 후에 1.4 ㎜ 이상의 길이를 갖는 모발의 길이의 총합(1.4 ㎜ 이상)과, 면도 3일 후의 1.4 ㎜ 미만의 모발을 포함하는 모든 모발의 길이의 총합(전체)이 각각 나타나 있다. 도 8b에 나타낸 것과 같이, 환자 A에서는 3일 후에 1.4 ㎜ 이상의 길이를 갖는 모발에 대한 길이의 총합이 치료 전에 161.0인 것이 치료 후 6개월에 182.4로 증가하였다. 환자 B에서는 3일 후에 1.4 ㎜ 이상의 길이를 갖는 모발에 대한 길이의 총합이 치료 전에 34.8인 것이 치료 후 6개월에 59.6로 증가하였다. 환자 C에서는 3일 후에 1.4 ㎜ 이상의 길이를 갖는 모발에 대한 길이의 총합이 치료 전에 129.1인 것이 치료 후 6개월에 142.0으로 증가하였다.

또한, 도 8b에 나타낸 것과 같이, 면도 3일 후의 전체 모발의 길이의 총합이 환자 A에서는 치료 전에 227.0인 것이 치료 후 6개월에 272.3로 증가하였다. 환자 B에서는 치료 전에 76.9인 것이 치료 후 6개월에 121.8로 증가하였다. 환자 C에서는 치료 전에 219.1인 것이 치료 후 6개월에 272.2로 증가하였다.

이와 같이, ASC-CM 0.4 ㎍ 투여에서는 두피 개질과 그것에 의한 모발의 신장 속도의 개선이 확인되었다. 실시예 1의 결과와 합해 고찰하면, ASC-CM 0.4 ㎍ 투여의 효과는 모발의 개수보다도 모발의 신장 속도에 의해 강하게 나타난 것을 알 수 있다. 또, 환자 A 및 C와 비교하여 환자 B에서는 모발의 신장 속도가 전체적으로 낮고, 두피의 상태가 보다 나쁘다고 생각되었다. 도 8b에 의하면, 그러한 나쁜 두피 상태의 환자에 대해서도 ASC-CM 0.4 ㎍ 투여는 두피의 개질 효과를 발휘한 것이 분명하다.

또, 3일 후에 1.4 ㎜ 이상의 길이의 모발을 조사하면 신장하는 속도가 느린 모발(3일 후에 1.4 ㎜ 미만의 길이의 모발)과 비교하여 굵은 것이 화상 해석에 의해 분명해졌다. 구체적으로는, 면도 3일 후의 길이가 2.1∼2.2 ㎜인 모발의 굵기는 2명의 환자의 평균으로 97.42 ㎛인 것에 대하여, 신장이 1.4 ㎜ 미만인 모발의 굵기는 상기 2명의 환자의 평균으로 75.39 ㎛였다. 이 결과로부터, ASC-CM 0.4 ㎍ 투여에서는 신장 속도가 빠르고, 굵은 모발이 증가하는 것이 분명해졌다.

ASC-CM 0.4 ㎍ 투여에서는 모발의 탄력이나 탄성의 개선이 관찰되었지만(모발의 탄력이나 탄성이 향상하고, 모발의 볼륨 증가가 관찰됨), 이것과 굵은 모발이 증가하는 것은 일관된 결과였다.

이와 같이, 두피의 개질은 모발의 신장 속도의 개선과 굵은 탄성과 탄력이 있는 모발의 증가에 연결되어 있었다.

Claims

지방 줄기세포로부터의 분비물을 유효 성분으로 포함하는, PPARγ 양성 지방세포를 증가시키고 조직 상재형 M2 모양 대식세포를 증가시키기 위한 국소 투여용 의약 조성물로서, 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3∼0.6 ㎍의 상기 분비물이 투여되는 의약 조성물.
청구항 1에 있어서,
두피 또는 피부를 개질하기 위한 의약 조성물.
지방 줄기세포로부터의 분비물을 유효 성분으로 포함하는 창상을 치료하는데 이용하기 위한 국소 투여용 의약 조성물로서, 창상 부위 1개소 당 단백질량 환산으로 0.3∼0.6 ㎍의 상기 분비물이 투여되고, 1개소가 1 ㎠∼4 ㎠인 의약 조성물.
청구항 2에 있어서,
두피 또는 피부의 표면의 1 ㎠∼4 ㎠에 1개소의 비율로 투여되는 의약 조성물.
청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서,
1개소 당 10∼30 ㎕의 용액량으로 투여되는 의약 조성물.
청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 있어서,
투여 간격이 월에 2회부터 6월에 1회인 의약 조성물.