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KR20230022206A - 코로나바이러스 질환에 대응하는 재조합적 변형된 우두증 바이러스 앙카라 (mva) 백신 - Google Patents

코로나바이러스 질환에 대응하는 재조합적 변형된 우두증 바이러스 앙카라 (mva) 백신 Download PDF

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KR20230022206A
KR20230022206A KR1020237000078A KR20237000078A KR20230022206A KR 20230022206 A KR20230022206 A KR 20230022206A KR 1020237000078 A KR1020237000078 A KR 1020237000078A KR 20237000078 A KR20237000078 A KR 20237000078A KR 20230022206 A KR20230022206 A KR 20230022206A
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KR
South Korea
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sars
cov
leu
amino acid
acid sequence
Prior art date
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Pending
Application number
KR1020237000078A
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English (en)
Inventor
위르겐 하우스만
로빈 슈타이거발트
마티아스 하반
요세 메디나 에체베르츠
슈테판 람비흘러
Original Assignee
버베리안 노딕 에이/에스
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 버베리안 노딕 에이/에스 filed Critical 버베리안 노딕 에이/에스
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Abstract

본 발명은 스파이크 (S) 단백질 또는 이의 일부분, 이를 테면, 수용체-결합 도메인 (RBD)을 인코드하는 재조합적 변형된 우두증 바이러스 앙카라 (MVA), 그리고 코로나바이러스 질환 19 (COVID-19)의 원인 물질인 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스-2 (SARS-CoV-2)의 기타 단백질들로부터 파생된 추가 항원성 서열에 관한 것이다.

Description

코로나바이러스 질환에 대응하는 재조합적 변형된 우두증 바이러스 앙카라 (MVA) 백신
기술 분야
본 발명은 백신 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 감염성 질환을 표적으로 하는 항원 운반을 위한 바이러스성 벡터를 기반으로 하는 백신에 관계한다. 특히, 본 발명은 코로나바이러스 질환 19 (COVID-19)의 원인 물질인, 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2 (SARS-CoV-2)의 스파이크 (S) 단백질을 인코딩하는 재조합적 변형된 우두증 바이러스 앙카라 (MVA)에 관계한다. 본 발명은 SARS-CoV-2 S 단백질, 이를 테면, 수용체-결합 도메인 (RBD)의 일부분을 인코딩하는 재조합적 MVA, 그리고 기타 SARS-CoV-2 단백질들의 항원성 서열에 또한 관계한다. 본 발명은 추가로 COVID-19 예방에 있어서 재조합적 MVA의 의학적 용도에 관계한다.
배경
최근 몇 년 동안, 특정 코로나바이러스들이 인간에게 심각한 전염성 질환을 발병시켰다: 2002/2003년에 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 (SARS-CoV-1), 2012년 중동호흡기증후군 코로나바이러스 (MERS-CoV), 그리고 2019/2020년에 또다른 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 (SARS-CoV-2).
2019년 말, 중국 우한에서 일련의 미확인 폐렴이 발생한 직후에 SARS-CoV-2에 대해 기술되었다 (Zhou et al., 2020). 전형적인 임상증상은 발열, 마른기침, 호흡곤란, 두통, 폐렴으로 보고되었으며, 감염에 의해 때때로 폐포 손상으로 진행성 호흡부전이 발생하여, 심지어 사망에 이르기도 하였다(Zhou et al., 2020). 더욱이, 후각 및 미각 장애는 강력한 특정 증상으로 간주된다(Lechien et al., 2020). 2020년 3월, WHO는 코로나바이러스 질환 2019(COVID-19)로 불리는 이 질환을 대유행으로 규정했다. SARS-CoV-2는 대유행 초기 단계에서 재생 지수(reproductive index) R0이 3 이상인 인구 집단에서 효율적인 전파를 보였다.
SARS-CoV-1 및 MERS-CoV에 의해 야기되는 질환과 유사하게, COVID-19는 이 바이러스의 천연 보유 숙주 (아마도 가장 가능성이 큰 것이 박쥐임)로부터 중간 포유류 숙주를 경유하여 인간에게로 인수공통전염성 전염이 이의 기원인 것으로 간주된다. COVID-19가 최근에야 나타났기 때문에, 이 질환과 그 원인 바이러스인 SARS-CoV-2에 대한 지식과 이해에는 한계가 있다.
SARS-CoV-2는 포지티브-센스, 단일-가닥의 RNA 바이러스 계열인, 코로나비리데(Coronaviridae) 계열에 속한다. 다른 코로나바이러스들과 마찬가지로, SARS-CoV-2는 전자 현미경으로 볼 때, 이 바이러스 표면으로부터 튀어나온 스파이크에 의해 만들어진, 왕관-유사한("코로나") 모양이 특징이다. 이러한 스파이크 (S) 단백질들은 이 바이러스가 숙주 세포에 부착되고, 숙주 세포 안으로 침입하는 데 필수적이다. SARS-CoV-2 S 단백질은 두 개의 서브유닛 S1과 S2로 구성된, 유형 I의 큰 막관통 단백질이다. S1 서브유닛은 숙주 세포 수용체에 바이러스 부착을 매개하는 수용체-결합 도메인(RBD)을 함유한다. S2 서브유닛 (엑토도메인)은 바이러스성 막과 숙주 세포 막 사이의 융합을 매개한다.
상기 S 단백질은 중화 항체, T 세포 반응 및 보호 면역의 유도에 중요한 역할을 하는 것으로 추정된다. SARS-CoV-2가 숙주 세포로의 진입은 세포 수용체 안지오텐신 전환 효소 2(ACE)에 결합할 때, 일련의 구조적 변화와 관련되며, 결국 S 단백질은 융합-전 형태에서 융합-후 형태로 상당한 구조적 재배열을 겪는다(Wrapp et al., 2020). SARS-CoV-2가 숙주 세포로의 진입을 막기 위해, S의 융합-전 형태에 대응하는 항체들이 융합-후 형태에 대응하는 항체들보다 훨씬 더 효과적인 것으로 간주되며, 이로써 SARS-CoV-2 S의 융합-전 형태는 백신용으로 S의 선호되는 항원 형태가 된다.
그러나 SARS-CoV-2에 대한 전 세계적인 노력과 이에 대한 인지의 증가에도 불구하고, COVID-19를 예방하거나 또는 치료하기 위해 사용할 수 있는 약제학적 개입 조치는 여전히 없다.
COVID-19 대유행을 제한하고, 중지시키는 가장 효율적이고, 아마도 유일한 방법은 SARS-CoV-2에 대응하는 효과적인 예방 백신이다. 그러나, SARS-CoV-1 및 MERS-CoV에 대한 백신 후보를 평가한 결과, 이러한 코로나바이러스에 대응하는 백신을 개발할 때, 백신-관련된 면역병리학적 과정을 고려해야 한다는 것이 밝혀졌다.
적어도 두 가지 기전이 고려되어야 한다: 첫째, 관련된 SARS-CoV-1 감염의 항체-의존성 증강 (ADE)은 급성 폐 손상으로 이어질 수 있는 것으로 설명되었다 (Liu et al., 2019). 항체들은 바이러스의 주요 표면 단백질, S 단백질을 지향하며, 불완전한 중화는 폐 안의 특정 세포들로의 바이러스 흡수를 강화시킬 것이다. 사이토킨과 케모킨의 후속 분비는 다양한 유형의 면역 세포들을 유인할 수 있는데, 이들은 유익할 수도 있고, 뿐만 아니라 해로운 역할을 하여 질환을 악화시킬 수 있다. 둘째, 뉴클레오캡시드 단백질 N 또는 전체 불활성화 바이러스와 같은 일부 유형의 SARS-CoV-1 및 MERS-CoV 항원들은 면역병리학적 T 세포 반응을 선호하는 것으로 보이며, 때때로 바이러스에 대해 보호하지 않는 면역 체계의 일부 작동체 기능을 선호하고, 그리고 질환을 악화시킬 수 있는 소위 Th2 유형으로 편향된 면역 반응을 선호하는 것으로 보인다 (Deming et al., 2006; Yasui et al., 2008; Agrawal et al., 2016).
SARS-CoV-2에 대응하는 후보 백신은 다양한 플랫폼을 기반으로 개발 중인데, 그중에서도 핵산 (RNA-기반 백신 및 DNA-기반 백신), 단백질, 비활성화된 SARS-CoV-2 바이러스, live SARS-CoV-2 바이러스 및 각종 살아있는 바이러스성 벡터 백신들이 개발중이다 (Le et al., 2020). 대다수의 백신 후보에 대한 사용된 항원의 정확한 속성은 아직 공개되지 않았다.
발명의 요약
본 발명의 목적은 SARS-CoV-2 감염 및 관련된 질환들에 대응하는 백신을 제공하는 것이다. 특히, 오로지 면역병리학적 질환-강화 효과가 낮거나 또는 이러한 효과가 없는 백신을 제공하는 것이 목적이다.
SARS-CoV-2 파생된 항원들을 인코딩하는 재조합적 변형된 우두증 바이러스 앙카라 (MVA)를 제공함으로써 본 발명의 목적이 해결된다. 특히, 본 발명은 첨부된 특허청구범위에 의해, 그리고 다음의 측면들 및 그 구체예들에 의해 특정된다.
한 측면에서, 본 발명은 다음을 포함하는 재조합적 MVA를 제공한다:
SARS-CoV-2의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열 스파이크 (S) 단백질 또는 이의 일부분, 이때
(A) 상기 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열;
(B) 상기 아미노산 서열의 일부는 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부분의 아미노산 서열이며, 이때 이 일부는 SARS-CoV-2 S 수용체 결합 도메인 (RBD)을 포함하거나, 또는 이로 구성된다.
또다른 측면에서, 본 발명은 다음을 포함하는 재조합적 MVA를 제공한다:
(a) SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열, 이의 일부는 SARS-CoV-2 S RBD을 포함하거나 또는 이로 구성되며; 및/또는
(b) 하나 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들로부터 두 개 또는 그 이상의 항원성 부분을 포함하는 SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열, 이때 상기 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
여전히 또다른 측면에서, 본 발명은 바람직하게는 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기들을 포함하는, 더욱 바람직하게는 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기들과 푸린-유사 프로테아제에 의한 상기 전장 단백질의 단백질분해성 절단을 막을 수 있는 추가 변형을 포함하는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 재조합적 MVA를 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 바람직하게는 재조합적 바이러스를 제조하기 위한(또는 이에 적합한), 더욱 바람직하게는 본원에 기술된, 다음을 포함하는 재조합적 MVA를 제조하기 위한(또는 이에 적합한) DNA 서열, 예를 들면, 플라스미드를 제공한다:
(aa) SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열, 이의 일부는 SARS-CoV-2 S RBD을 포함하거나 또는 이로 구성되며; 및/또는
(bb) 하나 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들로부터 두 개 또는 그 이상의 항원성 부분을 포함하는 SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열, 이때 상기 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않고; 또는
(cc) 바람직하게는 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기들을 포함하는, 더욱 바람직하게는 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기들과 푸린-유사 프로테아제에 의한 상기 전장 단백질의 단백질분해성 절단을 막을 수 있는 추가 변형을 포함하는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산.
추가 측면에서, 본 발명은 재조합적 바이러스, 바람직하게는 본원에 기술된 재조합적 MVA를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은 다음 단계들을 포함한다:
(1) DNA 서열, 예를 들면, 본원에 기술된 플라스미드를 제공하는 단계;
(2) 전술한 DNA 서열에 상동성 재조합을 위한 MVA를 접촉시키는 단계; 그리고
(3) 상기 재조합적 바이러스, 바람직하게는 상기 재조합적 MVA를 획득하는 단계.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 기술된 재조합적 MVA을 포함하고, 약제학적으로 수용가능한 담체 또는 부형제를 더 포함하는, 약제학적 조성물, 또는 백신을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 약제학적 조성물, 또는 백신 제조를 위하여 본원에 기술된 재조합적 MVA의 용도를 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 약제, 또는 백신으로 사용하기 위한 용도로 본원에 기술된 재조합적 MVA를 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 바이러스성 감염, 바람직하게는 코로나바이러스 감염, 더욱 바람직하게는 코로나바이러스 질환 19 (COVID-19)의 예방 또는 치료용도로 본원에 기술된 재조합적 MVA를 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 약제, 또는 백신 제조를 위하여 본원에 기술된 재조합적 MVA의 용도를 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 바이러스성 감염, 바람직하게는 코로나바이러스 감염, 더욱 바람직하게는 코로나바이러스 질환 19(COVID-19)의 예방 또는 치료를 위한 약제, 또는 백신 제조를 위한 용도로 본원에 기술된 재조합적 MVA의 용도를 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 바이러스성 감염, 바람직하게는 코로나바이러스 감염, 바람직하게는 코로나바이러스 질환 19 (COVID-19)의 예방 또는 치료 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 본원에 기술된 재조합적 MVA를 투여하는 단계를 포함한다.
추가 측면에서, 본 발명은 대상체에서 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV-2에 대한 면역 반응을 유도하는 방법을 제공하여, 이 방법은 대상체에게 본원에 기술된 재조합적 MVA를 투여하는 단계를 포함한다.
추가 측면에서, 본 발명은 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열을 제공하며, 이때 이의 일부는 SARS-CoV-2 S RBD을 포함하거나 또는 이로 구성된다.
추가 측면에서, 본 발명은 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열을 인코드하는 핵산을 제공하며, 이때 이의 일부는 SARS-CoV-2 S RBD을 포함하거나 또는 이로 구성된다.
추가 측면에서, 본 발명은 하나 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들로부터 두 개 또는 그 이상의 항원성 부분을 포함하는 SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 제공하며, 이때 상기 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
추가 측면에서, 본 발명은 하나 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들로부터 두 개 또는 그 이상의 항원성 부분을 포함하는 SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열을 제공하며, 이때 상기 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
추가 측면에서, 본 발명은 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기들을 포함하는, 바람직하게는 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기들과 푸린-유사 프로테아제에 의한 상기 전장 단백질의 단백질분해성 절단을 막을 수 있는 추가 변형을 포함하는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기들을 포함하는, 바람직하게는 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기들과 푸린-유사 프로테아제에 의한 상기 전장 단백질의 단백질분해성 절단을 막을 수 있는 추가 변형을 포함하는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코드하는 핵산을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 묘사된 아미노산 서열을 포함하는 단백질 또는 펩티드, 또는 융합 단백질을 포함하고, 약제학적으로 수용가능한 담체 또는 부형제를 더 포함하는 약제학적 조성물, 또는 백신을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 약제, 또는 백신으로 사용을 위한, 본원에 묘사된 아미노산 서열을 포함하는 단백질 또는 펩티드, 또는 융합 단백질을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 바이러스성 감염, 바람직하게는 코로나바이러스 감염, 더욱 바람직하게는 코로나바이러스 질환 19 (COVID-19)의 예방 또는 치료에 사용을 위한 용도로 본원에 묘사된 아미노산 서열을 포함하는 단백질 또는 펩티드, 또는 융합 단백질을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 DNA 백신 제조를 위해 본원에 묘사된 아미노산 서열의 용도를 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 RNA, 예를 들면, mRNA, 백신 제조를 위해 본원에 묘사된 아미노산 서열의 용도를 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 묘사된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA, 약제학적으로 수용가능한 담체 또는 부형제를 더 포함하는, 약제학적 조성물, 또는 백신을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 약제, 또는 백신으로 사용하기 위한 용도로 본원에 묘사된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA를 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 바이러스성 감염, 바람직하게는 코로나바이러스 감염, 더욱 바람직하게는 코로나바이러스 질환 19 (COVID-19)의 예방 또는 치료용도로 본원에 묘사된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA를 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 묘사된 아미노산 서열을 인코딩하는 RNA, 예를 들면, mRNA, 약제학적으로 수용가능한 담체 또는 부형제를 더 포함하는, 약제학적 조성물, 또는 백신을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 약제, 또는 백신으로 사용하기 위한 용도로 본원에 묘사된 아미노산 서열을 인코드하는 RNA, 예를 들면, mRNA를 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 바이러스성 감염, 바람직하게는 코로나바이러스 감염, 더욱 바람직하게는 코로나바이러스 질환 19 (COVID-19)의 예방 또는 치료용도로 본원에 묘사된 아미노산 서열을 인코드하는 RNA, 예를 들면, mRNA를 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 단백질 3a, 단백질 E 및 단백질 M으로 구성된 군에서 선택된 SARS-CoV-2 단백질의 항원성 단편을 제공한다.
이러한 측면들 및 이의 구체예들은 본 발명의 설명과 관련하여 더 상세히 설명될 것이다.
도면의 간단한 설명
도 1은 SARS-CoV-2 S1 도메인의 일부 ("SARS-2 S-RBD-1")의 아미노산 서열(RBD 아미노산 서열을 비롯하여)와 인간 IgG 중쇄 ("hIgGH")의 신호 펩티드를 나타낸다. RBD 당화 부위에서 아미노산 변형 (N331A)이 추가로 표시된다.
도 2는 SARS-CoV-2 단백질 3a, 단백질 M 및 단백질 E의 전장 아미노산 서열을 나타낸다. SARS-CoV-2 융합 단백질 구축에 이용된 단편들은 밑줄로 표시된다.
도 3은 아미노산 위치 1에서 메티오닌 (상응하는 뉴클레오티드 서열에서 출발 코돈을 제공)으로 인한 SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열 ("SARS-2 3aEM-1")에 이어서, 도 2에서 묘사된 바와 같이, SARS-CoV-2 단백질 3a ("3a 단편 1, 2"), 단백질 E ("E 단편") 및 단백질 M ("M 단편 1, 2")의 단편들의 융합. 아미노산 변형 (A131W, Y132F 및 S179D, Y180F)을 추가로 보여준다.
도 4는 안정화된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질 (즉, N-말단 도메인 (NTD) 및 RBD가 내포된 S1 도메인; 막관통 도메인이 내포된 S2, S2' 도메인)의 아미노산 서열 ("SARS-2 S-FS-1") 및 이의 고유한 신호 펩티드의 아미노산 서열을 나타낸다. 기존 다염기성 RRAR 푸린 절단 부위에서 GSAS 아미노산 스트레치(stretch), S2 도메인에서 절단 부위 (아미노산 RS), 그리고 아미노산 교환 (K986P 및 V987P)의 결과로써, S2 도메인에서 두 개의 연속적인 프롤린을 더 나타낸다.
도 5는 SARS-CoV-2 S1 도메인의 일부분 ("SARS-2 S RBD-1") 및 SARS-CoV-2 3aEM 융합 단백질 ("SARS-2 3aEM-1")을 발현시키는 발현 카세트를 나타내며, 이 카세트를 MVA 게놈으로 삽입시켜, 재조합적 MVA-mBN499가 된다.
도 6는 안정화된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질 ("SARS-2 S-FS-1)을 발현시키는 발현 카세트를 나타내며, 이 카세트를 MVA 게놈으로 삽입시켜, 재조합적 MVA-mBN500가 된다.
도 7은 MVA-mBN499에 의한 RBD를 함유하는 SARS-CoV-2 S1 단편 ("SARS-2 S-RBD-1")의 발현을 보여준다. HeLa 세포들은 모의(mock) 감염되거나 또는 MVA-BN 또는 MVA-mBN499로 감염되었다. 세포 용해물 및 상청액내 단백질은 10% Mini-Protean TGX 젤에서 크기에 따라 분리되었고, 항-우두증 바이러스 토끼 다중클론성 혈청 (A) 및 항-RBD 단일클론 토끼 항체 (B)를 이용한 면역블랏팅, 이어서 적절한 이차 항체를 이용한 면역블랏팅을 이용하여 분석하였다. (A) 1 = 분자량 마커 (kDa), 2 = 용해물 MVA-mBN499 감염된 세포, 3 = 용해물 MVA-BN 감염된 세포, 4 = 모의 감염된 세포. (B) 1 = 분자량 마커 (kDa), 2 = 농축된 상청액 (sup) MVA-mBN499, 3 = 농축된 sup MVA-BN, 4 = 그대로의(plain) sup MVA-mBN499, 5= 그대로의 sup MVA-BN, 6 = 분자량 마커 (kDa), 7 = 용해물 MVA-mBN499 감염된 세포, 8 = 용해물 MVA-BN 감염된 세포.
도 8은 MVA-mBN500에 의한 융합-전 안정화된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질 ("SARS-2 FS-1")의 발현을 나타낸다. HeLa 세포들은 항-우두증 바이러스 토끼 다중클론성 혈청 (A, 그리고 B의 좌측 패널) 및 전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 지향하는 마우스 단일클론 항체 (A, 그리고 B의 우측 패널), 이어서 적절한 이차 항체들에 의해 표면-착색되었다. 착색된 세포들은 유세포 분석법으로 분석하였고 3개 중 단일 세포 샘플에 대한 대표적인 결과는 각각 도트 플롯(A)과 히스토그램 플롯(B)으로 나타낸다.
도 9는 MVA-mBN499 및 MVA-mBN500에 의한 SARS-CoV-2 인코딩되는 영역에 대한 항원 특이적 T 세포의 유도를 보여준다. 0일차 및 21일차에, Balb/c 마우스(n=3/그룹)를 1x108 TCID50 의 MVA-mBN499 또는 MVA-mBN500으로 근육내 백신접종하였다. 마우스를 프라임 면역화(prime immunization) 후, 34일차에 희생시켰다. IFN-γ ELISPOT, 이때 4x105 비장세포를 표시된 바와 같은 SARS-CoV-2 파생된 펩티드 푸울(pools)과 함께 항온처리된다. MVA E3L 우성 CD8+ T 세포 에피토프를 양성 대조군으로 이용하였다. 데이터는 평균 ± SEM으로 표시된다.
도 10 은 MVA-mBN499 및 MVA-mBN500에 의한 SARS-CoV-2 인코딩되는 영역에 대한 항원 특이적 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 유도를 보여준다. Balb/c 마우스(n=3/그룹)를 도 9에 기재된 바와 같이 백신접종하였고, 34일차에 희생시켰다. 세포내 사이토킨 착색, 4x105 비장세포를 표시된 바와 같은 SARS-CoV-2 파생된 펩티드 푸울과 함께 항온처리된다. MVA E3L 우성 CD8+ T 세포 에피토프를 양성 대조군으로 이용하였다. 6-시간 항온처리후 CD8+ CD44+ IFN-γ+ TNFα+ (A) 및 CD4+ CD44+ IFN-γ+ (B)의 백분율을 나타낸다. 배경 대조군은 차감된다. 데이터는 평균 ± SEM으로 표시된다.
도 11 에서 MVA mBN500은 SARS-CoV-2 RBD 도메인에 결합하는 항체들을 유도하지만 MVA mBN499는 그러지 못함을 보여준다. 0일차 및 21일차에, Balb/c 마우스 (n=3/그룹)를 도 9에 기재된 바와 같이 백신접종하였다. 1차 면역화 후, 20일차와 34일차에 차례로 마우스로부터 채혈하였다. 20일차 (A) 및 34일차 (최종일) (B)의 혈청을 연속 희석시키고, 대리(surrogate) 바이러스 중화 테스트를 이용하여 분석하였다.
도 12 에서 MVA-mBN500은 배액 사타구니 림프절에서 RBD-특이적 B 세포를 유도함을 보여준다. Balb/c 마우스 (n=4/그룹)를 한 다리 당 5x107 TCID50 MVA-mBN500 또는 2.5 μg 스파이크 단백질 + AddaVaxTM로 근육을 통하여 면역접종하였다. 사타구니 림프절을 백신접종-후 11일차에 수거하였고, 림프구를 단리시켰다. RBD-특이적 B 세포를 착색시키기 위해, 림프구는 AF488 및 BV421 라벨된 RBD-사량체로 착색시켰다. (A) CD19+IgM-IgD-세포들중에서 RBD-421/488 특이적 B 세포의 빈도 (B) 사타구니 림프절에서 모든 살아있는 림프구중에서 RBD-421/488 특이적 B 세포들의 빈도 데이터는 평균 ± SEM으로 표시된다.
도 13 에서는 MVA-mBN500으로 부스터(boost) 면역화는 RBD 도메인을 함유하는 SARS-CoV-2 펩티드 푸울에 대응하는 항원 특이적 IFN-γ 생산을 강화시킨다는 것을 보여준다. 0일차 및 21일차에, Balb/c 마우스(n=5/그룹)를 TBS 또는 1x108 TCID50의 MVA-mBN500으로 근육내 백신접종하였다. 21일차에, Balb/c 마우스에게 TBS 또는 1x108 TCID50의 MVA-mBN500로 근육내로 부스터시켰다. 마우스를 프라임 면역화(prime immunization) 후, 34일차에 희생시켰다. IFN-γ ELISPOT, 이때 5x105 비장세포를 표시된 바와 같은 SARS-CoV-2 파생된 펩티드 푸울(pools)과 함께 항온처리된다. 항-CD3 항체는 양성 대조군으로 이용되었다. 데이터는 평균 ± SEM으로 표시된다.
도 14 에서는 MVA-mBN500으로 부스터(boost) 면역화는 SARS-CoV-2 펩티드 푸울에 대응하는 항원 특이적 CD8+ T 세포를 강화시킨다는 것을 보여준다. Balb/c 마우스 (n=5/그룹)를 도 13에 기재된 바와 같이 백신접종하였고, 34일차에 희생시켰다. 세포내 사이토킨 착색, 5x105 비장세포를 SARS-CoV-2 파생된 펩티드 푸울과 함께 항온처리된다. 6-시간 항온처리 후, CD8+ CD44+ IFN-γ+의 백분율을 나타낸다. 배경 대조군은 차감된다. 데이터는 평균 ± SEM으로 표시된다.
도 15 에서는 MVA mBN500로 부스터 면역화는 SARS-CoV-2 RBD 도메인에 결합하는 항체들을 강화시킨다는 것을 보여준다. Balb/c 마우스 (n=3/그룹)를 도 13에 기재된 바와 같이 백신접종하였다. 1차 면역화 후, 20일차와 34일차에 차례로 마우스로부터 채혈하였다. 34일차 (최종일) (B)의 혈청을 연속 희석시키고, 대리(surrogate) 바이러스 중화 테스트를 이용하여 분석하였다. 최대 억제 농도의 절반(IC50)을 산출했다.
서열의 간단한 설명
서열 식별 번호: 1 은 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열 (YP_009724390.1; SARS-CoV-2 분리주 Wuhan-Hu-1, NC_045512.2)을 나타낸다.
서열 식별 번호: 2 는 서열 식별 번호: 1을 인코딩하는 핵산 서열을 나타낸다.
서열 식별 번호: 3 은 변형 (N331A)을 내포하는 SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열을 나타낸다 (도 1 참고, "RBD"로 지칭됨).
서열 식별 번호: 4 는 서열 식별 번호: 3을 인코딩하는 핵산 서열을 나타낸다.
서열 식별 번호: 5 는 변형 (N331A)이 내포된 SARS-CoV-2 S RBD를 포함하는 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부분의 아미노산 서열을 나타낸다(도 1 참고, "S1 도메인"으로 지칭됨).
서열 식별 번호: 6 은 서열 식별 번호: 5를 인코딩하는 핵산 서열을 나타낸다.
서열 식별 번호: 7 은 인간 IgGH 분비 신호 펩티드의 아미노산 서열을 나타낸다 (도 1 참고, "hIgGH 신호 펩티드"로 지칭됨).
서열 식별 번호: 8 은 서열 식별 번호: 7을 인코딩하는 핵산 서열을 나타낸다.
서열 식별 번호: 9 는 변형 (N331A)이 내포된 SARS-CoV-2 S RBD를 포함하는 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부에 더하여 인간 IgGH 분비 신호 펩티드의 아미노산 서열을 나타낸다 (도 1 참고, "SARS-2 S-RBD-1"로 지칭됨).
서열 식별 번호: 10은 서열 식별 번호: 9를 인코딩하는 핵산 서열을 나타낸다.
서열 식별 번호: 11은 SARS-CoV-2 전장 단백질 3a (YP_009724391.1)의 아미노산 서열을 나타낸다.
서열 식별 번호: 12는 SARS-CoV-2 전장 단백질 E (YP_009724392.1)의 아미노산 서열을 나타낸다.
서열 식별 번호: 13은 SARS-CoV-2 전장 단백질 M (YP_009724393.1)의 아미노산 서열을 나타낸다.
서열 식별 번호: 14는 SARS CoV-2 3aEM 융합 단백질 구축에 이용된 제 1 단백질 3a 단편 (3a-1)의 아미노산 서열을 나타낸다 (도 2 참고, 아미노산 번호. 56-83).
서열 식별 번호: 15는 SARS CoV-2 3aEM 융합 단백질 구축에 이용된 제 2 단백질 3a 단편 (3a-2)의 아미노산 서열을 나타낸다(도 2 참고, 아미노산 번호. 178-275).
서열 식별 번호: 16은 SARS CoV-2 3aEM 융합 단백질 구축에 이용된 단백질 E 단편의 아미노산 서열을 나타낸다(도 2 참고, 아미노산 번호. 38-73).
서열 식별 번호: 17은 SARS CoV-2 3aEM 융합 단백질 구축에 이용된 제 1 단백질 M 단편 (M-1)의 아미노산 서열을 나타낸다 (도 2 참고, 아미노산 번호. 37-51).
서열 식별 번호: 18은 SARS CoV-2 융합 단백질 구축에 이용된 제 2 단백질 M 단편 (M-2)의 아미노산 서열을 나타낸다(도 2 참고, 아미노산 번호. 94-212).
서열 식별 번호: 19는 함께 융합된, 단백질 3a-1, 3a-2, 단백질 E, 및 단백질 M-1, M-2 단편들을 포괄하는 아미노산 서열을 나타낸다.
서열 식별 번호: 20은 변형 (A131W, Y132F 및 S179D, Y180F)이 내포된 SARS-CoV-2 3aEM 융합 단백질의 아미노산 서열을 나타낸다 (도 3 참고, "SARS-2 3aEM-1"로 지칭됨).
서열 식별 번호: 21은 서열 식별 번호: 20을 인코딩하는 핵산 서열을 나타낸다.
서열 식별 번호: 22는 변형 (K986P, V987P, 및 기존 다염기성 절단 부위에서 GSAS 아미노산 스트레치)이 내포된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 나타낸다 (도 4 참고, "SARS-2 S-FS-1" 마이너스 "신호 펩티드").
서열 식별 번호: 23은 서열 식별 번호: 22를 인코딩하는 핵산 서열을 나타낸다.
서열 식별 번호: 24는 변형 (K986P, V987P, GSAS 아미노산 스트레치)이 내포된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질 + SARS-CoV-2 S 단백질의 고유 신호 펩티드의 아미노산 서열을 나타낸다 (도 4 참고, "SARS-2 S-FS-1"로 지칭됨).
서열 식별 번호: 25를 서열 식별 번호: 24를 인코딩하는 핵산 서열을 나타낸다.
서열 식별 번호: 26은 Pr13.5long 프로모터의 핵산 서열을 나타낸다.
서열 식별 번호: 27은 Pr1328 프로모터의 핵산 서열을 나타낸다.
발명의 설명
본원에서 우리는 수령자, 예를 들면, 인간에서 면역 반응을 유도하기 위한 SARS-CoV-2 항원들을 기수하는데, 이것들은 재조합적 MVA 백신을 통하여 전달된다.
백신 후보를 설계할 때, 면역 병리학적, 질환-강화 효과를 피하기 위해, 우리는 두 가지 전략을 고안했다.
첫째, 바이러스 수용체 역할을 하는 인간 ACE2 분자에 결합하는 SARS-CoV-2 S RBD를 발현시키는 재조합 MVA를 설계한다. 마우스에서 생성된 SARS-CoV-1 RBD에 대응하는 대부분의 단일클론 항체는 중화 항체인 것으로 나타났다 (He et al., 2006). 따라서, 단순히 S 단백질에만 결합하지만, SARS-CoV-2를 중화시키지 않는 항체(비-중화 S-결합 항체)의 비율은 RBD만을 사용할 때, 최소화되어야 한다. 효과적인 단백질 발현을 확보하기 위해, SARS-CoV-2 S 단백질의 RBD 도메인에 인접한 S1 도메인에 자연적으로 위치한 RBD 아미노산 서열 (전장 S 단백질을 사용하는 대신)의 N-말단 및 C-말단에 짧은 아미노산 서열을 추가하였다. 나아가, SARS-CoV-1관련하여, Chen et al. (2014)의 간행물을 기반, SARS-CoV-2의 RBD 내의 하나의 글리코실화 부위(아스파라긴 331)도 단백질 발현을 촉진하기 위해 돌연변이되었다. 마지막으로 RBD에 대한 중화항체 생산을 증가시키기 위해, 이 단백질이 효율적으로 분비될 수 있도록 신호 펩티드로 N-말단에서 추가로 변형되었다.
이러한 RBD 접근법은 T 세포 에피토프에서 풍부한 것으로 예측되고, 나타난 3개 SARS-CoV-2 바이러스성 단백질들, 즉 단백질 3a, 외피 단백질 (E), 및 막 당단백질 (M)로부터 아미노산 서열 스트레치를 함유하는 기획체 SARS-CoV-2-파생된 항원과 조합되었다. 바이러스 입자에 결합할 수 있고, 이러한 아미노산 서열이 외부 표면에 노출되어 ADE에 기여할 수 있는 백신 수용자에서 항체의 유도를 방지하기 위해, 백신 항원에서 막관통 도메인과 세포외/비리온외(extravirion) 도메인을 회피하였다. RBD 및 3aEM 항원은 재조합 MVA에 의해 매우 초기에, 그러나 오래 지속되는 발현을 구동시키고, 매우 효율적인 T 세포 및 항체 반응을 촉진하는 프로모터와 결합된다.
둘째, 백신으로 재조합 MVA를 사용하여, 융합-전 상태에서 안정화된 S 형태의 SARS CoV-2의 전장 S 단백질을 발현시킨다. 이것은 주로 두 개의 단일 아미노산이 프롤린으로 변경되는, 스파이크 단백질의 돌연변이에 의해 달성된다. 추가적으로, 다염기성 푸린 프로테아제 절단 부위, 즉, GSAS 스트레치로 돌연변이된 아미노산 잔기들 RRAR은 상기 전장 S 단백질의 푸린-매개된 단백질분해성 절단을 피하게 한다. 이러한 변형은 S의 융합-후 형태의 형성을 감소시키고, 결과적으로 중화 활성이 낮거나 또는 없는 S의 융합-후 형태에 대응하는 항체의 유도가 감소된다. 따라서, 중화 항체에 대비하여, ADE에 가장 크게 기여할 가능성이 있는 비-중화 항체의 비율이 낮아질 것이다.
정의
본 출원에서 사용되는 단수형태 "하나" 및 "그것"은 내용상 명확히 달리 언급이 없는 한 복수의 언급이 내포됨을 주지해야 한다. 따라서, 예를 들면, "핵산 서열"의 언급에는 하나 또는 그 이상의 핵산 서열이 내포된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 복수의 요소들 사이의 연결 용어 "및/또는"은 개별 및 조합된 옵션 모두를 포괄하는 것으로 이해된다. 예로써, 두 요소가 "및/또는"로 결합된 경우, 첫 번째 옵션은 두 번째 요소 없이, 첫 번째 요소의 적용 가능성을 나타낸다. 두 번째 옵션은 첫 번째 요소가 없이, 두 번째 요소의 적용 가능성을 나타낸다. 세 번째 옵션은 첫 번째 요소와 두 번째 요소를 함께 적용할 수 있는 가능성을 나타낸다. 이러한 옵션 중 임의의 하나가 이러한 의미에 속하는 것으로 이해되며, 따라서 여기에서 사용되는 용어 "및/또는"의 요구 사항을 충족시킨다. 하나 또는 그 이상의 옵션에 대한 동시 적용 가능성 또한 상기 의미 내에 포함되는 것으로 이해되므로, 따라서 "및/또는"이라는 용어의 충족요건에 부합된다.
본 명세서 및 하기 실시예 및 첨부된 청구 범위에서, 문맥 상 달리 요구되지 않는 한, 단어 "포함하다" 및 "포함하다" 및 "포함하는"과 같은 변형은 언급된 정수 또는 단계 또는 그룹의 포함을 의미하는 것으로 이해될 것이지만, 그러나 임의의 정수 또는 단계. 또는 다른 정수 또는 단계의 그룹을 제외하지 않는다. 본 발명의 설명에서 측면 또는 구체예의 맥락에서 사용될 때, "포함하는(comprising)"이라는 용어는 수정될 수 있고, 따라서 용어 "함유하는(containing)" 또는 "내포되는(including)"으로 대체되거나, 또는 본원에서 "갖는(having)"이라는 용어와 함께 사용될 때, 대체될 수 있다. 유사하게, 앞서 언급한 용어(포함하는, 함유하는, 내포되는, 갖는)중 임의의 용어가 본 발명의 설명에서 측면 또는 구체예의 맥락에서 사용될 때, "~로 구성된" 또는 "~로 필수적으로 구성된"이라는 용어들이 내포되며, 각 용어는 판단에 따라 특정한 법적 의미를 나타낸다.
본원에서 사용된 "~로 구성된(consisting of)"이란 청구 요소에 명시되지 않은 요소, 단계 또는 성분은 배제된다. 본원에서 사용된 "~로 필수적으로 구성된(consisting essentially of)"이란 청구범위의 기본적이고, 신규한 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 재료 또는 단계를 배제하지 않는다.
용어 "바이러스"란 바이러스, 바이러스 입자들 및 바이러스성 벡터들을 의미한다. 이 용어에는 야생형 바이러스, 재조합적 바이러스 및 비-재조합적 바이러스, 생 바이러스 및 생-감쇠된 바이러스가 내포된다.
본원에 기술된 용어 "재조합 MVA"이란 이의 게놈에 모 바이러스에 자연적으로 존재하지 않는, 삽입된 외인성 핵산 서열을 포함하는 MVA를 지칭한다. 따라서, 재조합적 MVA는 자연에서 발생하지 않거나 또는 자연에서 발견되지 않는 배열로 또다른 핵산에 연결된, 합성 또는 반-합성 기원의 핵산 서열의 두 개 또는 그 이상의 세그먼트의 인위적인 조합에 의해 만들어진 MVA를 지칭한다. 이러한 인위적인 조합은 잘-확립된 유전공학 기술을 사용하여, 단리된 핵산 세그먼트를 인위적으로 조작함으로써, 가장 일반적으로 수행된다. 일반적으로, 본원에서 기술된 "재조합적 MVA"란 표준 유전공학 방법에 의해 만들어진 MVA를 지칭하며, 예를 들면, 재조합적 MVA는 따라서 유전적으로 조작된 또는 유전적으로 변형된 MVA이다. 따라서, 용어 "재조합적 MVA"에는 이의 게놈에서 적어도 하나의 재조합적 핵산이 바람직하게는, 전사 단위 형태로 통합된 MVA (예를 들면, MVA-BN)가 내포된다. 전사 단위에는 프로모터, 인헨서, 종료자(terminator) 및/또는 침묵자(silencer)가 내포될 수 있다. 본 발명의 재조합적 MVA는 조절 요소들, 예를 들면, 프로모터의 유도 시, 항원성 결정인자, 폴리펩티드 또는 단백질들 (항원들)을 발현시킬 수 있다.
용어 "SARS-CoV-2 S 전장 단백질"이란 막관통 앵커(anchor) 및 세포질 도메인을 포괄하는 S 완전체 단백질을 지칭한다.
용어 "기원(original)"은 SARS-CoV-2 참조 균주, 즉 분리주 Wuhan-Hu-1 (NC_045512.2), 또는 이 균주의 단백질들에 관계한다. 따라서, "SARS-CoV-2 기원 단백질 서열"이란 서열 식별 번호: 1로 나타낸 서열 YP_009724390.1에 관계한다. 유사하게, "SARS-CoV-2 S 전장 단백질"은 서열 식별 번호:1에 따른 단백질에 관계한다.
용어 "고유한(native)"이란 변형안된 전구체 단백질 또는 펩티드를 지칭한다. 따라서, "고유한 신호 펩티드"는 YP_009724390.1의 서열에 관계한다.
용어 "비-고유한 프롤린 잔기들"이란 전구체 단백질에 함유되어 있지 않은, 즉, 아미노산 교환으로 인한 프롤린 잔기들을 지칭한다.
서열과 관련하여 사용될 때, "~에 상응하는(corresponds to)"이라는 말은 서열이 또다른 서열과 대등하거나 또는 동일함을 의미한다.
서열의 맥락에서 사용될 때, "~로부터 파생된(derives from)"라는 구절은 해당 서열이 전구체 서열과 비교하여, 변형 또는 돌연변이됨을 의미한다.
용어 "융합-전 상태" 또는 "융합-전 입체형태(conformation)"란 이들의 융합("융합 후 상태")에 근접하게 만드는 데 필요한 구조적 변화-전, 달성된 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 구조적 상태 또는 구조를 의미한다.
용어 "비리온"이란 핵산, 주로, 외피를 포함하는 바이러스 입자를 지칭한다.
단어 "약제학적으로 수용가능한"이란 담체 또는 부형제가 이들의 사용된 투여량 및 농도에서 실질적으로 이들이 투여되는 대상자에게 원치 않는 또는 유해한 영향을 일으키지 않는다는 것을 의미한다. "약제학적으로 수용가능한 담체 또는 부형제"란 수용가능한 또는 편리한 투여 형태를 준비하기 위해, 활성 분자, 이를 테면, 바이러스와 결합되는 임의의 불활성 물질이다.
용어 "대상체" (또는 "환자")는 백신 수령자로, 전형적으로 포유류, 이를 테면, 비-영장류 또는 영장류 (예를 들면, 원숭이 또는 인간)를 지칭하며, 바람직하게는 인간이다.
용어 "상동 프라임(prime)-부스트 백신접종"이란 최초 (프라이밍) 투여 및 임의의 후속 부스팅 투여가 본원에 기재된 것과 동일한 재조합 MVA를 사용하는 백신접종 요법을 지칭한다.
용어 "이종성 프라임-부스터 백신접종"이란 오직 최초 (프라이밍) 투여 또는 후속 부스팅 투여만 본원에 기술된 바와 같은 재조합 MVA를 사용하는 백신 접종 요법을 지칭한다.
약어
ACE2 안지오텐신-전환 효소 2
ADE 항체-의존적 강화
COVID-19 코로나바이러스 질환 19
hIgGH 인간 IgG 중쇄
IGR 유전자간(intergenic) 영역
MVA 변형된 우두증 바이러스 앙카라 (MVA)
RBD 수용체 결합 도메인
SARS-CoV-2 중증 급성 호흡기 증후군-관련된 코로나바이러스 2
S 단백질 스파이크 단백질
구체예들
SARS-CoV-2에서 파생되고, 재조합 MVA를 통해 전달가능한 다음의 항원들이 본원에서 기술된다: SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부분, SARS-CoV-2 S RBD, 융합 단백질 형태의 SARS-CoV-2 3aEM 항원, 그리고 융합-전 상태를 유지하도록 변형된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질.
SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부를 인코딩하는 MVA에 관련된 구체예들
한 측면에서, 본 발명은 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 재조합적 MVA를 제공하며, 이때 상기 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 DNA 서열, 예를 들면, 플라스미드를 제공하며, 이때 상기 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD를 포함하는 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부는 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 S1 도메인의 일부에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 220-650, 270-600, 300-570, 319-549, 또는 310-530에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 319-549에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 SARS-CoV-2 S RBD 아미노산 서열에 인접한 추가 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD 아미노산 서열에 인접한 상기 추가 아미노산 서열은 SARS CoV-2 S RBD의 효과적인 발현을 확보할 수 있다 (또는 발현을 용이하게 하거나 또는 강화시킬 수 있음).
한 구체예에서, 상기 추가 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열 내 SARS CoV-2 S RBD 아미노산 서열에 인접한 아미노산 서열에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, 상기 추가 아미노산 서열은 50개, 30개, 25개, 20개, 15개, 12개, 10개, 7개, 5개, 3개 또는 이 미만의 아미노산, 바람직하게는 25개 또는 12개 아미노산을 포함하거나, 또는 이로 구성된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 SARS-CoV-2 S RBD 아미노산 서열에 대해 N-말단에 인접한 제 1 아미노산 서열을 더 포함하고, 그리고 SARS-CoV-2 S RBD 아미노산 서열의 C-말단에 인접한 제 2 아미노산 서열을 더 포함한다.
한 구체예에서, 상기 추가 제 1 아미노산 서열 및 제 2 아미노산 서열은 SARS CoV-2 S RBD의 효과적인 발현을 확보할 수 있다 (또는 발현을 용이하게 하거나 또는 강화시킬 수 있음).
한 구체예에서, 상기 추가 제 1 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열 내 SARS CoV-2 S RBD 아미노산 서열에 대해 N-말단에 인접한 아미노산 서열에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, 상기 추가 제 2 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열 내 SARS CoV-2 S RBD 아미노산 서열에 대해 C-말단에 인접한 아미노산 서열에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, 상기 추가 제 1 아미노산 서열은 50개, 30개, 25개, 20개, 15개, 12개, 10개, 7개, 5개, 3개 또는 이 미만의 아미노산, 바람직하게는 12개 아미노산을 포함하거나, 또는 이로 구성된다.
한 구체예에서, 상기 추가 제 2 아미노산 서열은 50개, 30개, 25개, 20개, 15개, 12개, 10개, 7개, 5개, 3개 또는 이 미만의 아미노산, 바람직하게는 25개 아미노산을 포함하거나, 또는 이로 구성된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 변형되거나 또는 돌연변이된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 변형 또는 돌연변이, 바람직하게는 치환 또는 아미노산 교환을 포함한다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 331 (또는 아스파라긴 번호. 331)에서 치환을 포함한다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 (N331A) 교환을 포함한다. 위치 331은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 위치에 관계한다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 서열 식별 번호: 5에서 묘사된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 서열 식별 번호: 6에서 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)을 인코드하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 6에서 묘사된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 분비될 수 있다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)의 N-말단은 분비 신호 펩티드, 바람직하게는 인간 IgG 중쇄로부터 파생된 분비 신호 펩티드에 연계된다.
한 구체예에서, 상기 분비 신호 펩티드는 서열 식별 번호: 7에 묘사된다.
한 구체예에서, 상기 분비 신호 펩티드는 서열 식별 번호: 8에 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 서열 식별 번호: 9에서 묘사된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 서열 식별 번호: 10에서 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)을 인코드하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 10에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 유전자 발현을 위해 Pr13.5long 프로모터에 작동가능하도록 연계된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 MVA의 유전자간 영역 (IGR) 부위 64/65로 삽입된다.
SARS-CoV-2 S RBD를 인코딩하는 MVA에 관련된 구체예들
한 측면에서, 본 발명은 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 재조합적 MVA를 제공하며, 이때 상기 일부는 SARS-CoV-2 S RBD로 구성된다.
또다른 측면에서, 본 발명은 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 DNA 서열, 예를 들면, 플라스미드를 제공하며, 이때 상기 일부는 SARS-CoV-2 S RBD로 구성된다.
한 구체예에서, 상기 핵산 서열은 SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열를 인코드한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 RBD의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 SARS-CoV-2 RBD에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 변형되거나 또는 돌연변이된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 변형 또는 돌연변이, 바람직하게는 치환 또는 아미노산 교환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 331 (또는 아스파라긴 번호. 331)에 치환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 (N331A) 교환을 포함한다. 위치 331은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 위치에 관계한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 3에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 4에서 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 4에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 분비될 수 있다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열의 N-말단은 분비 신호 펩티드, 바람직하게는 인간 IgG 중쇄로부터 파생된 분비 신호 펩티드에 연계된다.
한 구체예에서, 상기 분비 신호 펩티드는 서열 식별 번호: 7에 묘사된다.
한 구체예에서, 상기 분비 신호 펩티드는 서열 식별 번호: 8에 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열은 유전자 발현을 위해 Pr13.5long 프로모터에 작동가능하도록 연계된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열은 MVA의 유전자간 영역 (IGR) 부위 64/65에 삽입된다.
SARS-CoV-2 3aEM 융합 단백질을 인코딩하는 MVA에 관련된 구체예들
한 측면에서, 본 발명은 하나 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들로부터 두 개 또는 그 이상의 항원성 부분을 포함하는 SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열을 포함하는 재조합적 MVA를 제공하며, 이때 상기 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
또다른 측면에서, 본 발명은 하나 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들로부터 두 개 또는 그 이상의 항원성 부분을 포함하는 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열을 포함하는 DNA 서열, 예를 들면, 플라스미드를 제공하며, 이때 상기 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 하나의 SARS-CoV-2 단백질의 하나, 두 개 또는 그 이상의 항원성 부분을 포함하고, 이때 이 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 두 개, 세 개, 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들의 항원성 부분을 포함하고, 이때 이 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 단백질들의 다섯 개의 상이한 항원성 부분, 바람직하게는 세 개의 SARS-CoV-2 단백질들을 포함하고, 이때 이 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
한 구체예에서, 상기 두 개, 세 개, 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질은 SARS-CoV-2 S 단백질과 무관한 구조 단백질들이다.
한 구체예에서, 상기 두 개, 세 개, 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들은 단백질 3a, 단백질 E 및 단백질 M로 구성된 군에서 선택된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 단백질 3a, 단백질 E 및 단백질 M의 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 단백질 3a의 두 개의 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 단백질 E의 한 개의 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 단백질 M의 두 개의 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 단백질 3a의 두 개의 항원성 부분, SARS-CoV-2 단백질 E의 한 개의 항원성 부분, 그리고 SARS-CoV-2 단백질 M의 두 개의 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 단백질 3a (3a-1 단편)의 항원성 부분, 또는 제 2 항원성 부분은 서열 식별 번호: 14에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 단백질 3a (3a-2 단편)의 항원성 부분, 또는 제 2 항원성 부분은 서열 식별 번호: 15에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 E 단백질의 항원성 부분은 서열 식별 번호: 16에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 단백질 M (M-1 단편)의 항원성 부분, 또는 제 1 항원성 부분은 서열 식별 번호: 17에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 단백질 M (M-2 단편)의 항원성 부분, 또는 제 2 항원성 부분은 서열 식별 번호: 18에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 14, 15, 16, 17, 및 18로 구성된 군에서 선택된 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 14, 15, 16, 17, 및 18에 나타낸 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 19에 나타낸 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 이로 구성된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 변형되거나 또는 돌연변이된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 변형 또는 돌연변이, 바람직하게는 치환 또는 아미노산 교환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 두 개 SARS-CoV-2 단백질의 항원성 부분 사이의 접합부에서 또는 이 부분에서 변형을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 두 개 SARS-CoV-2 단백질의 항원성 부분 사이의 접합부에서 또는 이 부분에서 네오에피토프 형성을 방지할 수 있는 변형을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 297개 아미노산으로 구성되며, 이 융합 단백질, 바람직하게는 서열 식별 번호: 19에 나타낸 SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 번호. 131, 132, 179, 그리고 180에 치환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 297개 아미노산으로 구성되며, 이 융합 단백질, 바람직하게는 서열 식별 번호: 19에 나타낸 SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 번호. 131, 132, 179, 그리고 180에 치환을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 297개 아미노산으로 구성되며, 그리고 바람직하게는 서열 식별 번호: 19에 나타낸 SARS-CoV-2 융합 단백질에서 (A131W), (Y132F), (S179D), 및 (Y180F) 교환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 아미노산 서열 297개 아미노산으로 구성되며, 바람직하게는 서열 식별 번호: 19에 나타낸 SARS-CoV-2 융합 단백질에서 (A131W), (Y132F), (S179D), 및 (Y180F) 교환을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 20에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 21에서 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 21에서 묘사된다.
한 구체예에서, 상기 발현된 SARS-CoV-2 융합 단백질은 감염된 세포의 세포질에 위치한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 유전자 발현을 위한 Pr13.5long 프로모터, 바람직하게는 서열 식별 번호: 26에 나타낸 프로모터에 작동가능하도록 연계된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 MVA의 유전자간 영역 (IGR) 부위 64/65에 삽입된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열 (상기에서 명시된 바와 같은)은 동일한 재조합적 MVA에 함께 함유되는데, 바람직하게는 하나의 발현 카세트 안에 함께 함유된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열 (상기에서 명시된 바와 같은)을 함유하는 발현 카세트는 MVA의 유전자간 영역 (IGR) 부위 64/65에 삽입된다.
SARS-CoV-2 S 전장 단백질을 인코딩하는 MVA에 관련된 구체예들
한 측면에서, 본 발명은 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 재조합적 MVA를 제공한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 변형되거나 또는 돌연변이된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 변형 또는 돌연변이, 바람직하게는 치환 또는 아미노산 교환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 융합-전 입체형태의 이러한 S 단백질을 안정화시킬 수 있는 변형을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기들을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 986 및 번호. 987에서 각각 비-고유한 프롤린 잔기를 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 (K986P) 및 (V987P) 교환을 포함한다. 위치 986 및 987은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열에서 아미노산 위치에 관계한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 추가 변형 또는 돌연변이, 바람직하게는 추가 치환 또는 아미노산 교환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 융합-전 입체형태의 이러한 S 단백질을 안정화시킬 수 있는 또는 안정화에 기여하는 추가 변형을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 전장 단백질의 단백질분해성 절단을 방지할 수 있는 추가 변형, 바람직하게는 푸린-유사 프로테아제에 의한 또는 푸린 절단 부위에서 전장 단백질의 단백질분해성 절단을 방지할 수 있는 추가 변형을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 푸린 절단 부위에서, 바람직하게는 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 682-685에서 아미노산 스트레치 GSAS를 만드는 연속적인 아미노산 RRAR의 치환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기를 포함하고, 그리고 푸린 절단 부위에서, 바람직하게는 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 682-685에서 아미노산 스트레치 GSAS를 만드는 연속적인 아미노산 RRAR의 치환, 더욱 바람직하게는 (R682G), (R683S), (R685S) 아미노산 교환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질의 아미노산 번호. 986 및 987 각각에 비-고유한 프롤린 잔기, 그리고 푸린 절단 부위에서, 바람직하게는 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 682-685에서 아미노산 스트레치 GSAS를 만드는 연속적인 아미노산 RRAR의 치환, 바람직하게는, 원래 SARS-CoV-2 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 682-685에서 연속 아미노산 RRAR의 치환, 더욱 바람직하게는 (R682G), (R683S), (R685S) 아미노산 교환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 1에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 2에서 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 2에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 22에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 23에서 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 23에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 분비될 수 있다.
한 구체예에서, 서열 식별 번호: 22에서 묘사된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 분비 신호 펩티드, 바람직하게는 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 신호 펩티드에 대응하는 또는 이로부터 유도된 분비 신호 펩티드에 연계된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 24에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 25에서 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 25에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 유전자 발현을 위해 Pr13.5long 프로모터에 작동가능하도록 연계된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 MVA의 유전자간 영역 (IGR) 부위 64/65에 삽입된다.
한 구체예에서, 본 발명은 본원에서 기술된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 재조합적 MVA를 제공하며, 이때 상기 재조합적 MVA는 항원 특이적 T 세포 반응, 바람직하게는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질, 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위에 대응하는, 바람직하게는 RBD 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위에 대응하는, CD8 T 세포 반응을 유도할 수 있다.
한 구체예에서, 본 발명은 본원에서 기술된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 재조합적 MVA를 제공하며, 이때 상기 재조합적 MVA는 바람직하게는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질, 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위에 대응하는, 바람직하게는 RBD 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위에 대응하는, 항원 결합 항체를 유도할 수 있다.
한 구체예에서, 본 발명은 본원에서 기술된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 재조합적 MVA를 제공하며, 이때 상기 재조합적 MVA는 바람직하게는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질, 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위에 대응하는, 바람직하게는 RBD 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위에 대응하는, 항원 특이적 B 세포를 유도할 수 있다.
SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부분에 관련된 구체예들
한 측면에서, 본 발명은 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함), 바람직하게는 변형된 또는 돌연변이된 SARS-CoV-2 S RBD를 제공한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함), 바람직하게는 변형된 또는 돌연변이된 SARS-CoV-2 S RBD를 인코딩하는 핵산 서열을 제공한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부분 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 S1 도메인의 일부분에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 220-650, 270-600, 300-570, 319-549, 또는 310-530에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 319-549에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 SARS-CoV-2 S RBD 아미노산 서열에 인접한 추가 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD 아미노산 서열에 인접한 상기 추가 아미노산 서열은 SARS CoV-2 S RBD의 효과적인 발현을 확보할 수 있다 (또는 발현을 용이하게 하거나 또는 강화시킬 수 있음).
한 구체예에서, 상기 추가 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열 내 SARS CoV-2 S RBD 아미노산 서열에 인접한 아미노산 서열에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, 상기 추가 아미노산 서열은 50개, 30개, 25개, 20개, 15개, 12개, 10개, 7개, 5개, 3개 또는 이 미만의 아미노산, 바람직하게는 25개 또는 12개 아미노산을 포함하거나, 또는 이로 구성된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 SARS-CoV-2 S RBD 아미노산 서열에 대해 N-말단에 인접한 제 1 아미노산 서열을 더 포함하고, 그리고 SARS-CoV-2 S RBD 아미노산 서열의 C-말단에 인접한 제 2 아미노산 서열을 더 포함한다.
한 구체예에서, 상기 추가 제 1 아미노산 서열 및 제 2 아미노산 서열은 SARS CoV-2 S RBD의 효과적인 발현을 확보할 수 있다 (또는 발현을 용이하게 하거나 또는 강화시킬 수 있음).
한 구체예에서, 상기 추가 제 1 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열 내 SARS CoV-2 S RBD 아미노산 서열에 대해 N-말단에 인접한 아미노산 서열에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, 상기 추가 제 2 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열 내 SARS CoV-2 S RBD 아미노산 서열에 대해 C-말단에 인접한 아미노산 서열에 상응하거나, 또는 이로부터 파생된다.
한 구체예에서, 상기 추가 제 1 아미노산 서열은 50개, 30개, 25개, 20개, 15개, 12개, 10개, 7개, 5개, 3개 또는 이 미만의 아미노산, 바람직하게는 12개 아미노산을 포함하거나, 또는 이로 구성된다.
한 구체예에서, 상기 추가 제 2 아미노산 서열은 50개, 30개, 25개, 20개, 15개, 12개, 10개, 7개, 5개, 3개 또는 이 미만의 아미노산, 바람직하게는 25개 아미노산을 포함하거나, 또는 이로 구성된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 변형되거나 또는 돌연변이된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 변형 또는 돌연변이, 바람직하게는 치환 또는 아미노산 교환을 포함한다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 331 (또는 아스파라긴 번호. 331)에서 치환을 포함한다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 (N331A) 교환을 포함한다. 위치 331은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 위치에 관계한다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 서열 식별 번호: 5에서 묘사된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 서열 식별 번호: 6에서 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)을 인코드하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 6에서 묘사된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 분비될 수 있다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)의 N-말단은 분비 신호 펩티드, 바람직하게는 인간 IgG 중쇄로부터 파생된 분비 신호 펩티드에 연계된다.
한 구체예에서, 상기 분비 신호 펩티드는 서열 식별 번호: 7에 묘사된다.
한 구체예에서, 상기 분비 신호 펩티드는 서열 식별 번호: 8에 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 서열 식별 번호: 9에서 묘사된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)은 서열 식별 번호: 10에서 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)을 인코드하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 10에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 유전자 발현을 위해 Pr13.5long 프로모터에 작동가능하도록 연계된다.
SARS-CoV-2 S RBD에 관련된 구체예들
한 측면에서, 본 발명은 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD로 구성됨), 바람직하게는 변형된 또는 돌연변이된 SARS-CoV-2 S RBD를 제공한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD로 구성됨), 바람직하게는 변형된 또는 돌연변이된 SARS-CoV-2 S RBD를 인코딩하는 핵산 서열을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 SARS-CoV-2 S RBD, 바람직하게는, 변형된 또는 돌연변이된 SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 제공한다.
여전히 또다른 측면에서, 본 발명은 SARS-CoV-2 S RBD, 바람직하게는 변형된 또는 돌연변이된 SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산을 제공한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 RBD의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 SARS-CoV-2 RBD로부터 파생된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 변형되거나 또는 돌연변이된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 변형 또는 돌연변이, 바람직하게는 치환 또는 아미노산 교환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 331 (또는 아스파라긴 번호. 331)에 치환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 (N331A) 교환을 포함한다. 위치 331은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 위치에 관계한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 3에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 4에서 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 4에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열은 분비될 수 있다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열의 N-말단은 분비 신호 펩티드, 바람직하게는 인간 IgG 중쇄로부터 파생된 분비 신호 펩티드에 연계된다.
한 구체예에서, 상기 분비 신호 펩티드는 서열 식별 번호: 7에 묘사된다.
한 구체예에서, 상기 분비 신호 펩티드는 서열 식별 번호: 8에 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S RBD의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열은 유전자 발현을 위해 Pr13.5long 프로모터에 작동가능하도록 연계된다.
SARS-CoV-2 3aEM 융합 단백질에 관련된 구체예들
한 측면에서, 본 발명은 하나 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들로부터 두 개 또는 그 이상의 항원성 부분을 포함하는 SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 제공하며, 이때 상기 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
또다른 측면에서, 본 발명은 하나 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들로부터 두 개 또는 그 이상의 항원성 부분을 포함하는 SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코드하는 핵산 서열을 제공하며, 이때 상기 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
추가 측면에서, 본 발명은 하나 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들로부터 두 개 또는 그 이상의 항원성 부분을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 융합 단백질을 제공하며, 이때 상기 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 하나의 SARS-CoV-2 단백질의 하나, 두 개 또는 그 이상의 항원성 부분을 포함하고, 이때 이 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 두 개, 세 개, 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들의 항원성 부분을 포함하고, 이때 이 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 단백질들의 다섯 개의 상이한 항원성 부분, 바람직하게는 세 개의 SARS-CoV-2 단백질들을 포함하고, 이때 이 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
한 구체예에서, 상기 두 개, 세 개, 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질은 SARS-CoV-2 S 단백질과 무관한 구조 단백질들이다.
한 구체예에서, 상기 두 개, 세 개, 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들은 단백질 3a, 단백질 E 및 단백질 M로 구성된 군에서 선택된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 단백질 3a, 단백질 E 및 단백질 M의 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 단백질 3a의 두 개의 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 단백질 E의 한 개의 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 단백질 M의 두 개의 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 단백질 3a의 두 개의 항원성 부분, SARS-CoV-2 단백질 E의 한 개의 항원성 부분, 그리고 SARS-CoV-2 단백질 E의 두 개의 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 단백질 3a (3a-1 단편)의 항원성 부분, 또는 제 1 항원성 부분은 서열 식별 번호: 14에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 단백질 3a (3a-2 단편)의 항원성 부분, 또는 제 2 항원성 부분은 서열 식별 번호: 15에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 E 단백질의 항원성 부분은 서열 식별 번호: 16에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 단백질 M (M-1 단편)의 항원성 부분, 또는 제 1 항원성 부분은 서열 식별 번호: 17에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 단백질 M (M-2 단편)의 항원성 부분, 또는 제 2 항원성 부분은 서열 식별 번호: 18에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 14, 15, 16, 17, 및 18로 구성된 군에서 선택된 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 14, 15, 16, 17, 및 18에 나타낸 항원성 부분을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 19에 나타낸 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 이로 구성된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 변형되거나 또는 돌연변이된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 변형 또는 돌연변이, 바람직하게는 치환 또는 아미노산 교환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 두 개 SARS-CoV-2 단백질의 항원성 부분 사이의 접합부에서 또는 이 부분에서 변형을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 두 개 SARS-CoV-2 단백질의 항원성 부분 사이의 접합부에서 또는 이 부분에서 네오에피토프 형성을 방지할 수 있는 변형을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 297개 아미노산으로 구성되며, 이 융합 단백질, 바람직하게는 서열 식별 번호: 19에 나타낸 SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 번호. 131, 132, 179, 그리고 180에 치환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 297개 아미노산으로 구성되며, 이 융합 단백질, 바람직하게는 서열 식별 번호: 19에 나타낸 SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 번호. 131, 132, 179, 그리고 180에 치환을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 297개 아미노산으로 구성되며, 그리고 바람직하게는 서열 식별 번호: 19에 나타낸 SARS-CoV-2 융합 단백질에서 (A131W), (Y132F), (S179D), 및 (Y180F) 교환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 아미노산 서열 297개 아미노산으로 구성되며, 바람직하게는 서열 식별 번호: 19에 나타낸 SARS-CoV-2 융합 단백질에서 (A131W), (Y132F), (S179D), 및 (Y180F) 교환을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 20에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 21에서 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 21에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 유전자 발현을 위해 Pr13.5long 프로모터에 작동가능하도록 연계된다.
SARS-CoV-2 S 전장 단백질에 관련된 구체예들
한 측면에서, 본 발명은 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기들을 포함하는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 제공한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기들을 포함하는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 제공한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열로부터 파생된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 986 및 번호. 987에서 각각 비-고유한 프롤린 잔기를 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 (K986P) 및 (V987P) 교환을 포함한다. 위치 986 및 987은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열에서 아미노산 위치에 관계한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 추가 변형 또는 돌연변이, 바람직하게는 추가 치환 또는 아미노산 교환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 융합-전 입체형태의 이러한 S 단백질을 안정화시킬 수 있는 또는 안정화에 기여하는 추가 변형을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 전장 단백질의 단백질분해성 절단을 방지할 수 있는 추가 변형, 바람직하게는 푸린-유사 프로테아제에 의한 또는 푸린 절단 부위에서 전장 단백질의 단백질분해성 절단을 방지할 수 있는 추가 변형을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 푸린 절단 부위에서, 바람직하게는 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 682-685에서 아미노산 스트레치 GSAS를 만드는 연속적인 아미노산 RRAR의 치환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기를 포함하고, 그리고 푸린 절단 부위에서, 바람직하게는 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 682-685에서 아미노산 스트레치 GSAS를 만드는 연속적인 아미노산 RRAR의 치환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 기원 S 단백질의 아미노산 번호. 986 및 987 각각에 비-고유한 프롤린 잔기, 그리고 푸린 절단 부위에서, 바람직하게는 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 682-685에서 아미노산 스트레치 GSAS를 만드는 연속적인 아미노산 RRAR의 치환, 더욱 바람직하게는 (R682G), (R683S), (R685S) 아미노산 교환을 포함한다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 22에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 23에서 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 23에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 분비될 수 있다.
한 구체예에서, 서열 식별 번호: 22에서 묘사된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 분비 신호 펩티드, 바람직하게는 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 신호 펩티드에 대응하는 또는 이로부터 유도된 분비 신호 펩티드에 연계된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 24에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 25에서 묘사된 핵산 서열에 의해 인코드된다.
한 구체예에서, 상기 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 25에서 묘사된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 유전자 발현을 위해 Pr13.5long 프로모터에 작동가능하도록 연계된다.
MVA에 관련된 구체예들
한 구체예에서, 상기 재조합적 MVA는 MVA-572, MVA-575, MVA-I721, NIH 클론 1 및 MVA-BN, 바람직하게는 MVA-BN 또는 MVA-BN 유도체로 구성된 군으로부터 선택된 MVA로부터 생성된다.
MVA-572는 1994년 1월 27일자 ECACC V94012707로 기탁되었고; MVA-575는 2000년 12월 7일자로 ECACC V00120707로 기탁되었고; MVA-I721은 Suter et al. Vaccine 2009, 27: 7442-7450에 언급되며; NIH 클론 1은 2003년 3월 27일자로 ATCC® PTA-5095로 기탁되었으며; 그리고 MVA-BN는 2000년 8월 30일자로 European Collection of Cell Cultures (ECACC)에 V00083008 번호로 기탁되었다.
한 구체예에서, 상기 재조합적 MVA는 재조합적 MVA-BN 또는 재조합적 MVA-BN 유도체이다.
추가 구체예들
서열 식별 번호: 1, 3, 5, 7, 9, 11-20, 22, 및 24중 임의의 서열 식별 번호로 특정된 아미노산 서열은 전술한 서열 식별 번호로 묘사된 아미노산 서열과 동일한 것으로 간주된다. 서열 식별 번호: 1, 3, 5, 7, 9, 11-20, 22, 및 24중 임의의 아미노산 서열 식별 번호에 의해 특정된 아미노산 서열은 전술한 서열 식별 번호에서 묘사된 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 95%, 98%, 또는 99%의 서열 상동성을 공유하는 것이 추가로 고려된다.
서열 식별 번호: 2, 4, 6, 8, 10, 21, 23, 및 25중 임의의 서열 식별 번호에 의해 특정된 핵산 서열은 전술한 서열 식별 번호로 묘사된 핵산 서열과 동일한 것으로 간주된다. 서열 식별 번호: 2, 4, 6, 8, 10, 21, 23, 및 25중 임의의 서열 식별 번호로 특정된 핵산 서열은 전술한 서열 식별 번호로 묘사된 핵산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 98%, 또는 99%의 서열 상동성을 공유하는 것이 추가로 고려된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 3aEM 융합 단백질의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 3aEM 융합 단백질의 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열의 일부분이다. SARS-CoV-2 3aEM 융합 단백질의 아미노산 서열이 또다른 서열의 N-말단 앞에 오는 경우, SARS-CoV-2 3aEM 융합 단백질의 아미노산 서열은 첫 메티오닌 잔기가 없는, 서열 식별 번호: 19로 묘사되거나, 또는 첫 메티오닌 잔기가 없는 서열 식별 번호: 20으로 묘사되는 것으로 간주된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 단백질의 항원성 부분은 서열 식별 번호: 14, 15, 16, 17, 및 18로 구성된 아미노산 서열 군으로부터 선택된다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 단백질 3a, 단백질 E 또는 단백질 M의 항원성 부분의 아미노산 서열은 차례로, 서열 식별 번호: 14, 15, 16, 17, 또는 18로 묘사된 아미노산 서열의 하위-구획이다.
한 구체예에서, SARS-CoV-2 단백질 3a, 단백질 E 또는 단백질 M의 항원성 부분의 아미노산 서열은 차례로, 서열 식별 번호: 14, 15, 16, 17, 또는 18, 또는 이의 하위-구획으로 묘사된 아미노산 서열을 포함한다.
한 구체예에서, 바람직하게는 재조합적 바이러스 제조를 위한, 더욱 바람직하게는 재조합적 MVA 제조를 위한 본원에 기술된 DNA 서열은 플라스미드, 선형 DNA, PCR 산물 및 합성 DNA로 구성된 군에서 선택된다.
한 구체예에서, 상기 재조합적 MVA를 포함하는 약제학적 조성물, 또는 백신은 어쥬번트를 더 포함한다. 본 발명의 재조합적 MVA를 포함하는 본 발명의 재조합적 MVA 및/또는 약제학적 조성물은 SARS-CoV-2에 노출된, 또는 노출되었을 수 있는 대상체, 또는 COVID-19 발생 위험에 처할 수 있는 대상체를 치료하는 방법에 이용될 수 있고, 이때 이 방법은 상기 재조합적 MVA 및/또는 약제학적 조성물을 전술한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 구체예들에서, 상기 재조합적 MVA 및/또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계로 인하여 대상체에서 면역 반응, 이를 테면, 예를 들면, 항체들 (예를 들면, 중화 항체들)이 생성된다. 이러한 방식에서, 본 발명은 대상체에서 면역 반응을 자극시키는 방법을 또한 제공하며, 이 방법은 본 발명의 재조합적 MVA 또는 본 발명의 재조합적 MVA를 포함하는 약제학적 조성물 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 이로 인하여 해당 대상체에서 면역 반응이 일어난다. 예를 들면, 상기 재조합적 MVA의 투여 후, 해당 대상체에 상기 재조합적 MVA에 특이적인 항체들이 존재한다면, 면역 반응이 이 대상체에서 일어난다고 말한다. 예를 들면, 상기 재조합적 MVA를 투여한 후, 상기 재조합적 MVA에 의해 인코드된 SARS-CoV-2 항원을 인지하는 항체들이 해당 대상체에서 생성된다면, 면역 반응이 이 대상체에서 일어난다고 말한다. 대상체에서 항체의 측정은 당업계에 잘 알려진 다양한 방법 중 임의의 것일 수 있다.
한 구체예에서, 상기 재조합적 MVA 및/또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계로 인하여 항원-결합 항체들의 생산, 항원 특이적 T 세포 반응의 유도, 바람직하게는 CD8 T 세포 반응, 및/또는 항원 특이적 B 세포 반응의 유도가 일어난다. 바람직하게는, 상기 항원-결합 항체들, T 세포 반응 및/또는 B 세포 반응은 SARS-CoV-2 S 전장 단백질, 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위를 지향하고, 더욱 바람직하게는 RBD, 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위를 지향한다.
한 구체예에서, 코로나바이러스 질환, 바람직하게는 COVID-19의 예방 또는 치료에 용도로써 재조합적 MVA는 항원-결합 항체들, 항원-특이적 T 세포 반응 및/또는 항원-특이적 B 세포 반응의 유도를 위해 이용된다.
한 구체예에서, 항원-결합 항체들, 항원-특이적 T 세포 반응 및/또는 항원-특이적 B 세포 반응을 유도하는데 이용된, 코로나바이러스 질환, 바람직하게는 COVID-19의 예방 또는 치료에 사용을 위한 재조합적 MVA는 본원에서 기술된 바와 같이, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 재조합적 MVA이다. 바람직하게는, 상기 용도의 재조합적 MVA는 MVA-mBN500이다.
한 구체예에서, 코로나바이러스 질환, 바람직하게는 COVID-19의 예방 또는 치료에 사용을 위한 상기 재조합적 MVA는 재조합적 비-MVA 바이러스와 조합으로 이용된다. 바람직하게는, 상기 재조합적 비-MVA 바이러스는 SARS-CoV-2 파생된 항원들을 인코드한다. 따라서, 본 발명은 대상체를 치료하거나 또는 대상체에서 면역 반응을 일으키는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 본 발명의 재조합적 MVA 및 전술한 재조합적 비-MVA 바이러스를 투여하는 것을 포함한다. 이들 구체예에서, 상기 재조합적 MVA 및 재조합적 비-MVA 바이러스를 동일한 시점에 또는 상이한 시점에 투여할 수 있다. 상기 재조합적 MVA 및 재조합적 비-MVA 바이러스를 상이한 시점에 투여하는 구체예들에서, 이들은 서로 12주 이내, 또는 서로 11주, 10주, 9주, 8주, 7주, 6주, 5주, 4주, 3주, 2주, 또는 1주 이내에 투여된다. 상기 재조합적 MVA 및 재조합적 비-MVA 바이러스는 동일한 경로를 통하여 투여되거나, 또는 상이한 경로를 통하여 투여될 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 재조합적 MVA 및 상기 재조합적 비-MVA 바이러스의 투여로 치료되는 대상체는 상기 재조합적 MVA 및 상기 재조합적 비-MVA 바이러스 각각에 의해 인코드된 항원에 대한 면역 반응을 일으킬 것이다.
한 구체예에서, 코로나바이러스 질환, 바람직하게는 COVID-19의 예방 또는 치료에 사용을 위한 상기 재조합적 MVA는 아데노바이러스와 조합으로 이용된다. 바람직하게는, 상기 재조합적 아데노바이러스는 하나 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 파생된 항원들을 인코드한다. 따라서, 본 발명은 대상체를 치료하거나 또는 대상체에서 면역 반응을 일으키는 방법을 제공하는데, 이 방법은 해당 대상체에게 본 발명의 재조합적 MVA 및 전술한 재조합적 아데노바이러스를 투여하는 것을 포함한다. 이들 구체예에서, 상기 재조합적 MVA 및 재조합적 아데노바이러스를 동일한 시점에 또는 상이한 시점에 투여할 수 있다. 상기 재조합적 MVA 및 재조합적 아데노바이러스를 상이한 시점에 투여하는 구체예들에서, 이들은 서로 12주 이내, 또는 서로 11주, 10주, 9주, 8주, 7주, 6주, 5주, 4주, 3주, 2주, 또는 1주 이내에 투여된다. 상기 재조합적 MVA 및 재조합적 아데노바이러스는 동일한 경로를 통하여 투여되거나, 또는 상이한 경로를 통하여 투여될 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 재조합적 MVA 및 상기 재조합적 비-MVA 바이러스의 투여로 치료되는 대상체는 상기 재조합적 MVA 및 상기 재조합적 아데노바이러스 각각에 의해 인코드된 항원에 대한 면역 반응을 일으킬 것이다.
한 구체예에서, 코로나바이러스 질환, 바람직하게는 COVID-19의 예방 또는 치료에 사용을 위한 상기 재조합적 MVA는 상동성 프라임-부스터 백신접종 투여방식(regimen)에 이용된다.
한 구체예에서, 상동성 프라임-부스터 백신접종 투여방식에 이용된, 코로나바이러스 질환, 바람직하게는 COVID-19의 예방 또는 치료에 사용을 위한 상기 재조합적 MVA는 본원에서 기술된 바와 같이, SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 재조합적 MVA이다. 바람직하게는, 상기 용도의 재조합적 MVA는 MVA-mBN500이다.
한 구체예에서, 코로나바이러스 질환, 바람직하게는 COVID-19의 예방 또는 치료에 사용을 위한 상기 재조합적 MVA는 이종성 프라임-부스터 백신접종 투여방식(regimen)에 이용된다. 바람직하게는, 하나 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 파생된 항원들을 인코딩하는 재조합적 아데노바이러스는 첫번째 (프라이밍) 투여에 이용되며, 본원에 기술된 재조합적 MVA는 후속적인 부스터 투여에 이용된다.
특정 구체예들에는 또한 다음의 항목들이 내포된다:
1. 다음을 포함하는, 재조합적 변형된 우두증 바이러스 앙카라 (MVA):
중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2 (SARS-CoV-2) 스파이크 (S) 단백질 또는 이의 일부분의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열, 이때
(A) 상기 아미노산 서열은 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기를 포함하는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열이며;
(B) 상기 아미노산 서열의 일부는 SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부분의 아미노산 서열이며, 이때 이 일부는 SARS-CoV-2 S 수용체 결합 도메인 (RBD)을 포함한다.
2. 항목 1의 재조합적 MVA에 있어서, 이것은 다음을 포함한다:
(a) SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)을 인코딩하는 핵산 서열; 그리고
(b) 두 개 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들의 항원성 부분을 포함하는 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열, 이때 이 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않는다.
3. 항목 2의 재조합적 MVA에 있어서, 이때 (a)의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 잔기 번호. 220-650, 270-600, 300-570, 319-549, 또는 310-530을 포함하고, 아미노산 잔기 번호. 319-549를 포함한다.
4. 항목 2 또는 3의 재조합적 MVA에 있어서, 이때 (a)의 아미노산 서열는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 잔기 번호. 331에서 치환을 포함하고, 바람직하게는 (N331A) 교환을 포함한다.
5. 항목 2의 재조합적 MVA에 있어서, 이때 (b)의 두 개 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질은 단백질 3a, 단백질 E 및 단백질 M으로 구성된 군에서 선택된다.
6. 항목 2 또는 5의 재조합적 MVA에 있어서, 이때 (b)의 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 단백질 3a의 두 개의 항원성 부분, SARS-CoV-2 단백질 E의 한 개의 항원성 부분, 그리고 SARS-CoV-2 단백질 M의 두 개의 항원성 부분을 포함한다.
7. 항목 2, 5 또는 6의 재조합적 MVA에 있어서, 이때 (b)의 아미노산 서열은 297개 아미노산으로 구성된 아미노산 서열을 포함하고, 아미노산 번호. 131, 132, 179, 및 180에서 치환을 포함하고, 바람직하게는 (A131W), (Y132F), (S179D), 및 (Y180F) 교환을 포함한다.
8. 항목 1의 재조합적 MVA에 있어서, 이때 (A)에서 아미노산 서열은 푸린-유사 프로테아제에 의한 SARS-CoV-2 전장 단백질의 단백질분해성 절단을 방지시킬 수 있는 추가 변형을 포함한다.
9. 항목 1 또는 8의 재조합적 MVA에 있어서, 이때 (A)에서 아미노산 서열은 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 잔기 번호. 986 및 번호. 987에서 각각 프롤린 치환을 포함하고, 바람직하게는 (X986P) 및 (Y987P) 교환을 포함한다.
10. 항목 1, 8 또는 9의 재조합적 MVA에 있어서, 이때 (A)에서 아미노산 서열은 푸린 절단 부위에서 GSAS 아미노산 스트레치를 만드는 연속적인 아미노산 RRAR의 치환을 포함하고, 바람직하게는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 잔기 번호. 682-685에서 GSAS 아미노산 스트레치를 포함한다.
11. 항목 1 ~ 10중 임의의 한 항목의 재조합적 MVA를 제조하기 위한, 다음을 포함하는 DNA 서열, 바람직하게는 플라스미드:
(aa) SARS-CoV-2 S 단백질 S1 도메인의 일부의 아미노산 서열 (이때 일부는 SARS-CoV-2 S RBD를 포함함)을 인코딩하는 핵산 서열; 그리고
(bb) 두 개 또는 그 이상의 SARS-CoV-2 단백질들의 항원성 부분을 포함하는 융합 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열, 이때 이 부분은 SARS-CoV-2의 표면 또는 이로부터 파생된 비리온 상에 자연적으로 노출되지 않고; 또는
(cc) SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열, 이때 상기 아미노산 서열은 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기들.
12. 항목 1~10중 임의의 한 항목의 재조합적 MVA를 제조하는 방법에 있어서, 이 방법은 다음의 단계들을 포함한다:
(1) DNA 서열, 항목 11 (aa) 및 (bb) 또는 항목 11 (cc)의 바람직하게는 플라스미드를 제공하는 단계;
(2) 전술한 DNA 서열에 상동성 재조합을 위한 MVA를 접촉시키는 단계; 그리고
(3) 상기 재조합적 MVA를 얻는 단계.
13. 항목 1~10중 임의의 한 항목의 재조합적 MVA를 포함하는, 그리고 약제학적으로 수용가능한 담체 또는 부형제를 더 포함하는 약제학적 조성물, 또는 백신.
14. 약제학적 조성물, 또는 백신을 제조하기 위한 항목 1~10중 임의의 한 항목의 재조합적 MVA의 용도.
15. 약제, 또는 백신으로 사용하기 위한 용도로 항목 1~10중 임의의 한 항목의 재조합적 MVA.
16. 바이러스성 감염, 바람직하게는 코로나바이러스 감염, 바람직하게는 코로나바이러스 질환 19 (COVID-19)의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 용도로 항목 1~10중 임의의 한 항목의 재조합적 MVA.
추가 설명
변형된 우두증 바이러스 앙카라 (MVA)
과거에, MVA는 백시나아 바이러스 (CVA) 앙카라 균주의 닭 배아 섬유 아세포에서 516 회 연속 계대에 의해 생성되었다 (참고용으로, Mayr et al. 1975 참고). 이 바이러스는 실질적으로 이의 변경된 속성들을 설명하기 위해, 계대 570에서 CVA에서 MVA로 이름이 변경되었다. MVA는 570회 이상의 계대까지 추가 계대를 거쳤다. 이러한 장기적인 계대의 결과로, 생성된 MVA 바이러스의 게놈은 약 31 킬로베이스의 게놈 서열이 결실되어 있었고, 따라서 조류 세포로의 복제용으로 한정된 숙주 세포로 기술되었다 (Meyer et al. 1991). 다양한 동물 모델에서 생성된 MVA가 완전히 복제 가능한 시작 물질과 비교하여 상당히 비독성인 것으로 나타났다(Mayr and Danner 1978).
본 발명의 실행에 유용한 MVA에는 MVA-572 (1994년 1월 27일자 ECACC V94012707로 기탁됨); MVA-575 (2000년 12월 7일자로 ECACC V00120707로 기탁됨); MVA-I721 (Suter et al. 2009에 언급됨); NIH 클론 1 (2003년 3월 27일자로 ATCC® PTA-5095로 기탁됨); 그리고 MVA-BN (2000년 8월 30일자로 European Collection of Cell Cultures (ECACC)에 V00083008 번호로 기탁됨)이 내포된다.
더욱 바람직하게는, 본 발명에 따른 MVA에는 MVA-BN 및 MVA-BN 유도체들이 내포된다. MVA-BN는 WO 02/042480에서 기술되어 있다. "MVA-BN 유도체"란 본원에 기술된 바와 같이, 본질적으로 MVA-BN과 동일한 복제 특성을 나타내지만, 이들 게놈의 하나 또는 그 이상의 부분에서 차이를 나타내는 임의의 바이러스를 지칭한다.
MVA-BN, 뿐만 아니라 MVA-BN 유도체들은 복제 능력이 없으며, 이는 생체 내 및 시험관 내에서 생식적으로 복제하지 못함을 의미한다. 보다 구체적으로, 시험관내에서, MVA-BN 또는 MVA-BN의 유도체들은 닭 배아 섬유 아세포 (CEF)에서 생식 복제가 가능하지만, 인간 각질세포 세포주 HaCat (Boukamp et al 1988), 인간 골육종 세포주 143B (ECACC 기탁 번호 91112502), 인간 배아 신장 세포주 293 (ECACC 기탁 번호 85120602) 및 인간 자궁 경부암 세포주 HeLa (ATCC 기탁 번호 CCL-2)에서 생식 복제가 불가능한 것으로 기술되어있다. 추가적으로, MVA-BN 및 MVA-BN 유도체들은 Hela 세포 및 HaCaT 세포주에서 MVA-575보다 적어도 2-배 미만, 보다 바람직하게는 3-배 미만의 바이러스 증폭률을 갖는다. MVA-BN 및 MVA-BN 유도체의 이러한 특성에 대한 테스트 및 분석은 WO 02/42480 및 WO 03/048184에 설명되어 있다.
상기 기재된 바와 같이, 인간 세포주에서 "생식 복제가 불가능함"이라는 용어는 예를 들어, WO 02/42480에 기재되어 있으며, 여기에서 상기 언급된 바와 같은 원하는 속성들을 갖는 MVA를 얻는 방법을 교시한다. 이 용어는 WO 02/42480 또는 US 6,761,893에 기술된 검정을 사용하여, 감염 후 4일차에 시험관내 바이러스 증폭률이 1 미만인 바이러스에 적용된다.
재조합적 MVA 바이러스의 예시적인 생성
본원에 개시된 바와 같은 재조합 MVA의 생성을 위해, 상이한 방법들이 적용될 수 있다. 바이러스에 삽입될 DNA 서열은 폭스바이러스의 DNA 부분과 상동인 DNA가 삽입된 대장균(E. coli) 플라스미드 구조물에 배치될 수 있다. 별도로, 삽입될 DNA 서열은 프로모터에 결찰될 수 있다. 프로모터-유전자 링키지는 프로모터-유전자 링키지가 비-필수 유전자좌를 함유하는 폭스바이러스 DNA의 영역 측면에 있는 DNA 서열에 상동성인 DNA에 의해 양 말단 측면에 있도록 플라스미드 구조체에 위치할 수 있다. 생성된 플라스미드 구조체는 대장균 박테리아 내에서 번식하여 증폭되고, 분리될 수 있다. 삽입될 DNA 유전자 서열을 함유하는 분리된 플라스미드는 새포 배양액, 이를 테면, 닭 배아 섬유아세포(CEFs)로 형질 감염될 수 있고, 이 배양물은 동시에 MVA에 감염된다. 플라스미드에서 상동성 MVA DNA와 바이러스성 게놈 간에 각기 재조합으로 외래 DNA 서열들, SARS-CoV-2 항원들을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 존재로 변형된 MVA가 만들어질 수 있다.
바람직한 구체예에 따르면, 예를 들어, CEF 세포와 같은 적합한 세포 배양물의 세포는 MVA 바이러스로 감염될 수 있다. 이어서, 상기 감염된 세포는 바람직하게는 폭스바이러스 발현 제어 요소의 전사 제어 하에, 외래 또는 이종 유전자 또는 유전자들, 이를 테면, 본원에 제공된 하나 또는 그 이상의 핵산을 포함하는 제 1 플라스미드 벡터로 형질감염될 수 있다. 상기 설명된 바와 같이, 상기 플라스미드 벡터는 MVA 바이러스 게놈의 선택된 부분으로 외인성 서열의 삽입을 지시할 수 있는 서열을 또한 포함한다. 임의선택적으로, 상기 플라스미드 벡터는 폭스바이러스 프로모터에 작동가능하게 연계된 마커 및/또는 선택 유전자를 포함하는 카세트를 또한 함유한다. 선택 또는 마커 카세트의 사용은 생성된 재조합 MVA의 식별 및 분리를 단순화시킨다. 그러나, 재조합 폭스바이러스는 PCR 기술로 또한 확인할 수 있다. 이어서, 추가의 세포를 상기 기재된 바와 같이 수득된 재조합 MVA로 감염시키고, 제 2의 외래 또는 이종성 유전자 또는 유전자들을 포함하는 제 2 벡터로 형질감염시킬 수 있다. 이 유전자를 폭스바이러스 게놈의 다른 삽입 부위에 도입해야 하는 경우, 제 2 벡터는 폭스바이러스의 게놈으로의 제 2 외래 유전자 또는 유전자들의 통합을 지시하는 폭스바이러스-상동성 서열에서 또한 상이하다. 상동성 재조합이 발생한 후, 두 개 또는 그 이상의 외래 또는 이종성 유전자를 포함하는 재조합 바이러스를 단리할 수 있다. 재조합 바이러스로 추가적으로 외래 유전자 도입을 위해, 감염 단계 및 형질감염 단계는 감염을 위해 이전 단계에서 단리된 재조합 바이러스를 사용하고, 형질감염을 위한 추가 외래 유전자 또는 유전자들을 포함하는 추가 벡터를 사용함으로써, 반복시킬 수 있다. 재조합 MVA를 생성하는 것으로 알려진 다른 기술이 많이 있다.
본 발명의 실시는 달리 명시되지 않는 한, 면역학, 분자 생물학, 미생물학, 세포 생물학 및 재조합 기술의 통상적인 기술을 사용할 것이며, 이들은 모두 당해 분야의 기술 내에 있다. 예를 들면, Sambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, 1989; Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel FM, et al., eds, 1987; the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); PCR2: A Practical Approach, MacPherson MJ, Hams BD, Taylor GR, eds, 1995; Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane, eds, 1988 참고.
실시예
하기 실시예들은 개시내용을 추가로 예시하는 역할을 한다. 그들은 본 발명을 제한하는 것으로 이해되어서는 안 되며, 본 발명은 첨부된 청구범위에 의해 결정된다.
실시예 1: SARS-CoV-2 항원들의 기획
모든 서열에 대한 참고 균주는 SARS-CoV-2 분리주 Wuhan-Hu-1 (NC_045512.2)이다.
1.1 RBD를 함유하는 SARS-CoV-2 S1 단편
RBD (아미노산 331-524)를 함유하는 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열 (YP_009724390.1; 서열 식별 번호: 1 참고)을 기본으로 삼았다.
발현될 아미노산 서열은 RBD 아미노산 서열 및 S1 도메인(RBD로부터 N- 및 C-말단에 위치)의 추가 아미노산을 함유하고, 따라서 원래 SARS-CoV-2 S1 도메인의 아미노산 319-549에 걸쳐 있다 (도 1 참고). 이 서열은 당화를 피하기 위해, 아미노산 331에서 변형되어 아스파라긴 잔기가 알라닌 잔기(N331A)로 대체된다. 인간 IgG 중쇄 "hIgGH")의 분비 태그(신호 펩티드)를 N-말단에 추가하여, 각각 RDB 및 S1 도메인 단편을 효율적으로 분비할 수 있도록 했다. 이의 최종 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 9 ("SARS-2 S-RBD-1")를 참고.
1.2 SARS-CoV-2 3aEM 융합 단백질
강력하고/또는 광범위한 T 세포 반응을 유도하는 항원 역할을 하는 융합 단백질을 생성하도록 하기 위해, 항원성 단편들은 SARS-CoV-2 단백질로부터 파생되었다. 상기 융합 단백질은 세포질 국소화를 위한 것이다(그러나 이에 국한되지 않음). 구조적 SARS-CoV-2 단백질의 표면 예측 아미노산을 제거하였고, 클러스터링된 검증 또는 예측 T 세포 항원성 펩티드 영역을 선택했다. 항원 단편들을 유도하는 데 사용된 SARS-CoV-2 단백질은 SARS-CoV-2 S 단백질과 관련이 없는 구조 단백질이었다: 단백질 3a (YP_009724391.1), 단백질 E (YP_009724392.1) 및 단백질 M (YP_009724393.1).
상기 융합 단백질에 이용된 두 개의 3a 단백질 단편들 (3a-1, 3a-2)은 차례로, 이 전장 3a 단백질의 아미노산 56-83 및 아미노산 178-275에 대응한다. 상기 융합 단백질에 이용된 단백질 E 단편은 전장 E 단백질의 아미노산 38-73에 대응한다. 상기 융합 단백질에 이용된 두 개의 단백질 M 단편 (M-1, M-2)은 차례로, 아미노산 37-51 및 아미노산 94-212에 대응한다.
융합 단백질 구축에 이용되는 단편들의 아미노산 서열은 도 2 및 서열 식별 번호: 14 ~ 18에 나타낸다. 생성된 융합 단백질은 서열 식별 번호: 19에 나타낸다.
단편들 간에 접합부에서 새로 만들어진 에피토프를 회피하기 위해, 이 융합 단백질은 다음과 같이 변형된다: 접합부 3a-2 단편/E 단편에서 두 개 아미노산 각각의 돌연변이 (A131W, Y132F), 그리고 접합부 M-1 단편/M-2 단편 (S179D, Y180F)이 도입되었다 (도 3 참고). 최종 SARS CoV-2 3aEM 융합 단백질 서열은 서열 식별 번호: 20 ("SARS-2 3aEM-1")을 참고한다.
1.3 SARS-CoV-2 S 전장 단백질
SARS-CoV-2 기원의 S 전장 단백질 서열 (YP_009724390.1; 서열 식별 번호: 1 참고)은 아미노산 986 및 987에서 치환에 의해 변형되어, 즉, 프롤린으로 아미노산 교환되어 (K986P, V987P), 발현된 단백질이 융합-전 상태로 안정화된다. 이 서열은 푸린 절단 부위 (아미노산 682-685)에서 연속적인 아미노산 RRAR의 치환에 의해 추가 변형되어, GSAS 아미노산 스트레치가 만들어진다 (도 4 참고). 최종 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 24 ("SARS-2 FS-1")를 참고한다.
실시예 2: SARS-CoV-2 항원들을 인코딩하는 구조체들
2.1 MVA-mBN499
MVA-mBN499 구조체는 (1) SARS-CoV-2 S1 단편의 분비된 형태의 SARS-2-CoV-2 S RBD를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열 (실시예 1.1 참고), 및 (2) SARS-CoV-2 3aEM 융합 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열 (실시예 1.2 참고)을 함유한다.
SARS-CoV-2 S RBD의 발현은 Pr13.5long 프로모터에 의해 구동되며 (Wennier et al., 2013; WO 2014/063832; 서열 식별 번호: 26 참고), SARS-CoV-2 3aEM 융합 단백질의 발현은 Pr1328 프로모터에 의해 구동된다 (서열 식별 번호: 27 참고). 상기 발현 카세트 및 MVA-BN에서 이들의 위치는 도 5를 참고한다.
이를 바탕으로, MVA-BN의 상동성 재조합을 위한 플라스미드가 준비되었다. MVA-BN에서 두 개 발현 카세트의 삽입 부위는 IGR 64/65이다.
2.2 MVA-mBN500
MVA-mBN500 구조체는 변형된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질 (실시예 1.3), 즉, 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린과 돌연변이된 다염기성 절단 부위를 갖는 융합-전 안정화된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질을 인코드하는 뉴클레오티드 서열을 함유한다.
상기 안정화된 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 발현 또한 Pr13.5long 프로모터에 의해 구동된다 (상기 참고). 상기 발현 카세트 및 MVA-BN에서 이의 위치는 도 6을 참고한다.
MVA-BN의 상동성 재조합을 위한 플라스미드가 준비되었다. MVA-BN에서 발현 카세트의 삽입 부위는 IGR 64/65이다.
실시예 3: SARS-CoV-2 항원들을 인코딩하는 재조합적 MVA
재조합 MVA의 생성은 실시예 2.1 및 2.2에 기술된 구조체를 사용하여 상동성 재조합에 의해 달성되었다. 이 절차는 기본적으로 설명되었다(Staib et al., 2004).
MVA-mBN499 및 MVA-mBN500에 의한 효율적인 SARS-CoV-2 항원 발현은 RT-PCR, 유세포분석 및 면역 블롯 기술을 사용하여 검증되었다 (하기 참고).
실시예 4: SARS-CoV-2 항원들의 발현
4.1 MVA-mBN499
SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 RBD의 MVA-mBN499-구동된 발현은 감염된 HeLa 세포 용해물의 면역블롯 분석으로 입증되었다.
DMEM/10% FCS의 HeLa 세포를 감염 당일 6-웰 플레이트에 1x106 개 세포/웰로 씨딩했다. 세포를 씨딩 후, 대략 8시간 시점에서 세포당 10 TCID50으로 MVA-BN 또는 MVA-mBN499로 37℃에서 모의 감염 또는 감염시켰다. 감염-후 16시간 시점에, 세포를 용해 완충액으로 긁어서 수확하고, 용해물을 PBS 및 2x Laemmli 샘플 완충액으로 희석했다. 세포의 상층액을 수집하였고, Amicon Ultra-0.5 필터 컬럼 장치를 사용하여 대략 12-배 농축시켰고, 세포로부터 그대로의 상청액 및 농축 상청액을 적절한 양의 Laemmli 완충액과 혼합했다. 세포 용해물 및 상청액내 단백질은 10% Mini-Protean TGX 젤에서 크기에 따라 분리되었고, 항-우두증 바이러스 토끼 다중클론성 혈청(Quartett, Berlin, Germany) (도 7A)과 항-RBD 단일클론 토끼 항체 (Sino Biological, 카탈로그 번호 40592-T62) (도 7B)를 이용한 면역블랏팅, 이어서 적절한 이차 항체를 이용한 면역블랏팅을 이용하여 분석하였다. 면역블랏 이미지는 ChemiDoc Touch System 및 Image Lab 소프트웨어를 사용하여 획득했다.
이들 블롯을 항-우두증 바이러스 항혈청으로 전개되었을 때, MVA-mBN499로 감염된 세포의 용해물과 부모계 비-재조합 MVA-BN은 유사한 패턴의 우두증 바이러스-특이적 단백질을 나타냈고, 한편 모의 감염된 대조군에서는 단백질이 검출되지 않았다 (도 7A). SARS-CoV-2 S-RBD 특이적 항체로 병렬 면역블롯을 검출했을 때, 28kDa 분자량의 단백질에 대해 예상 위치에서 이동하는 단백질이 검출되었고, 반면 부모계 MVA-BN에 감염된 대조군 세포에서는 그러한 단백질이 검출되지 않았다(도 7B). 따라서, SARS-CoV-2 RBD는 MVA-mBN499로 발현되었다.
MVA-mBN499에 의해 발현된 RBD 단백질은 MVA-mBN499 감염 세포의 상청액에서도 또한 검출 가능했다 (도 7B). MVA-mBN499 감염된 세포의 세포 상청액 농축시, 더 강력한 RBD 특이적 신호가 얻어졌고, 약 46 및 90kDa에서 아마도 올리고머 형태의 RBD를 나타내는 단백질이 검출가능했다(도 7B). MVA-BN 감염 세포의 농축 상청액에서는 이러한 신호가 얻어지지 않았다 (도 7B). 결론적으로, RBD는 mBN499 감염된 세포에서 발현되었고, 세포 상층액으로 분비되었다.
4.2 MVA-mBN500
SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 발현은 전장 스파이크 단백질-특이적 항체를 사용하여 MVA-mBN500 감염된 HeLa 세포 및 각각의 대조군의 유세포 분석으로 입증되었다.
HeLa 세포를 감염 전날, 1 ml의 DMEM/10% FCS에서 웰당 5x105개 세포로 6-웰 플레이트에 씨딩하였다. 세포를 모의 감염시키거나, 또는 37℃에서 MVA-BN 또는 MVA-mBN500으로 세포당 4 TCID50으로 0일차 시점에 삼중으로 감염시켰다. 감염-후 18시간 시점에, 세포를 긁어내었고, 세척하였고, 항-우두증 바이러스 토끼 다클론 혈청(Quartett, Berlin, Germany)(도 8A 및 도 8B의 왼쪽 패널) 및 전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질을 지향하는 마우스 단일클론항체(GeneTex GTX632604/Biozol, Eching, Germany) (도 8A, 및 도 8B의 우측 패널), 그리고 이어서 적절한 이차 항체로 표면-착색하기 전, 4% 포름알데히드로 고정시켰다.
MVA-mBN500에 감염된 세포는 우두증 항원 및 SARS-CoV-2 스파이크에 대해 이중-양성인 큰 세포 집단(>97%)을 나타냈고, 이것은 대부분의 감염된 세포에서 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 발현을 나타낸다 (도 8A, 우측 패널). MVA-mBN500를 이용한 감염은 대조군 MVA-BN 바이러스와 유사하게 효율적이었다 (도 8B, 좌측 패널). MVA-mBN500 감염된 세포는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질-특이적 표면 착색에서 명확한 단일 피크로 표시되어, 이것은 이 스파이크 단백질을 균질하게 발현하고 있음을 나타내고, 이들 스파이크 단백질의 발현 수준은 높았다 (도 8B, 우측 패널).
실시예 5: 생체내 SARS-CoV-2 항원들의 면역원성
5.1 항원-특이적 T 세포 반응의 유도
MVA-mBN499 또는 MVA-mBN500의 근육내 투여에 의한 상동성 프라임-부스트 백신접종이 SARS-Co-V-2 발현된 단백질 및 항원에 대한 T 세포 반응을 향상시키는지 여부를 결정했다.
Balb/c 마우스에게 0일차("프라임") 및 21일차("부스트") 시점에 MVA-mBN499 또는 MVA-mBN500의 1x108 TCID50으로 근육내 면역화시켰다. 마우스를 프라임 면역화 후, 34일차에 희생시켰다. 희생 당일, IFN-γ ELISPOT 및 유세포 분석법에 의한 세포내 사이토킨 착색(ICCS)을 모두 수행했다.
GenScript의 다음 펩티드 푸울을 테스트했다:
1. "SARS-CoV-2 스파이크 푸울 A": RBD 영역을 함유하는 펩티드 푸울;
2. "SARS-CoV-2 스파이크 푸울 B": 상기 스파이크 펩티드의 나머지를 함유하지만, 그러나, RBD를 함유하지 않은 펩티드 푸울.
3. "SARS-CoV-2 3aEM 펩티드 푸울 37-49": MVA mBN499에서 인크도된 항원들의 스트링(string)으로부터 생성된 펩티드 푸울 (오로지 Elispot에서 분석됨).
MVA-mBN499 또는 MVA-mBN500 면역화된 마우스의 ELISPOT 분석에서 스파이크 푸울 A에서 발현된 스파이크 RBD 도메인에 대응하는 IFN-γ를 발현시키는 T 세포가 유사하게 유도되었음을 보여주었다 (도 9A). MVA-mBN500 비장세포를 분석했을 때 스파이크 푸울 B에서 오로지 IFN-γ 스폿만이 검출되었으며, 이는 구조체 디자인과 일치한다 (도 9A). 유사하게, 적지만 검출 가능한 수의 스팟들 3a, E 및 M 단백질 단편의 서열에 걸친 펩티드 푸울과 함께 항온처리된 MVA-mBN499 비장 세포에서 검출되었다 (도 9A). 전체적으로, MVA-mBN499 및 MVA-mBN500 둘 모두에서 발현된 모든 백신 성분은 항원-특이적 T 세포 반응을 유도하였다.
유동 세포측정법에 의한 추가 분석에서 이러한 반응이 주로 CD8 T 세포 구동임을 보여주었다 (도 10A). IFNγ + TNFα+ CD8+ T 세포들이 발견되었고, MVA-mBN499 및 MVA-mBN500은 RBD에 대해 다중-사이토킨 생성 메모리 CD8+ T 세포를 생성했음을 나타낸다. CD4+ T 세포에 있어서, 매우 적지만 검출가능한 항원 특이적 IFNγ + 반응이 검출되었다 (도 10B).
5.2 항원-결합 항체들의 유도
백신을 접종받은 한배 새끼들에서 SARS-CoV-2 RBD 결합 항체의 존재 또한 분석되었다. 이를 위해, GensScript에서 개발한 대리 바이러스 중화 테스트를 제조업체의 지침에 따라 사용했다 (cPass™ SARS-CoV-2 중화 항체 검출 키트, GenScript; Tan et al., 2020).
상기에서 기술된 바와 같이 (실시예 5.1 참고), Balb/c 마우스에게 0일차("프라임") 및 21일차("부스트") 시점에 MVA-mBN499 또는 MVA-mBN500의 1x108 TCID50으로 근육내 면역화시켰다. 1차 면역화 후, 항체 분석용 혈청을 수거하기 위해, 20일차와 34일차에 마우스로부터 채혈하였다.
도 11A에서 입증된 바와 같이, MVA-mBN500에 의한 1차 면역화는 RBD에 결합하는 항체의 유도를 초래하였다. 이 효과는 희석되었다 (도 11A). 대조적으로, MVA-mBN499는 어떠한 RBD 결합 항체도 유도하지 않았다. 부스트 시, MVA-mBN500은 일련의 희석 시, 결합 능력을 유지하는 강력한 RBD 결합 항체를 유도했다 (도 11B). 다시, MVA-mBN499 부스트는 임의의 RBD 결합 항체를 생성하지 않았다.
5.3 항원-특이적 B 세포 반응의 유도
MVA-mBN500이 배액 림프절에서 항원-특이적 B 세포 반응을 유도할 수 있는지 여부를 추가로 분석했다.
Balb/c 마우스에게 5x107 TCID50 MVA-mBN500 또는 AddaVaxTM로 어쥬번트화된 2.5 μg 스파이크 단백질로 양다리의 근육을 통하여 면역접종하였다. 11일 후에 마우스를 희생시켰고, B 세포 분석을 위해 배액 사타구니 림프절을 수확하였다. 그 결과, PBS 대조군 마우스에 비해, MVA-mBN500 또는 스파이크 단백질로 면역접종된 마우스의 림프절에서 RBD-사량체 양성 B 세포가 검출되었다(도 12). 그러나, 주목할 것은, RBD-특이적 B 세포의 양은 MVA-mBN500 면역 마우스에서 더 우위에 있었다 (도 12).
5.4 프라임 및 프라임-부스터 투여방식
MVA-mBN500을 사용한 프라임 및 상동 프라임-부스트 면역을 비교했다.
Balb/c 마우스에게 0일차("프라임") 및 21일차("부스트") 시점에 MVA-mBN500의 1x108 TCID50으로 근육내 면역화시켰다. 1차 면역화 후, 항체 분석용 혈청을 수거하기 위해, 20일차와 34일차에 마우스로부터 채혈하였다. 마우스를 프라임 면역화 후, 34일차에 희생시켰다. 희생 당일, IFN-γ ELISPOT 및 유세포 분석법에 의한 세포내 사이토킨 착색(ICCS)을 모두 수행하여, MVA-mBN500의 근육내 투여에 의한 프라임 또는 상동성 프라임-부스트 백신접종이 SARS-CoV-2 펩티드 푸울에 대응하여 T 세포 반응을 향상시킬 것인지 여부를 결정하였다. RBD 서열을 함유하는 SARS-CoV-2 스파이크 푸울 A의 경우, 뿐만 아니라 스파이크 푸울 B에 내포된 다른 SARS-CoV-2 스파이크 성분들의 경우에서 MVA-mBN500를 이용한 프라임 면역화로 IFN-γ+ 스팟이 유도되었다 (도 13). MVA-mBN500을 사용한 상동성 프라임-부스트 면역화로 오로지 프라임 면역의 경우만 비교하여, IFN-γ+ 스팟의 수가 증가되었다 (도 13). 일관되게, 우리는 마우스가 프라임 면역의 경우에만 비교하였을 때, 프라임-부스트 투여방식으로 마우스에게 MVA-mBN500을 제공하였 때, CD8+ T 세포에 의한 우수한 사이토킨 생산을 확인했다(도 14).
마지막으로, 대리 바이러스 중화 테스트를 이용하여 34일차(첫 마지막 날)에 채취한 혈청을 순차적으로 희석하여, RBD 결합 항체의 수준을 분석하였다 (실시예 5.2 참고). 1:10 희석 단계(1:10~ 1:10,000,000까지)를 수행했다. 이러한 희석 단계를 통해 최대 억제 농도의 절반(IC50)을 산출할 수 있다. IC50은 항원 결합을 50% 억제하는 백신 유도 항체의 효능을 측정한다. 그 결과, MVA-mBN500 프라임만 투여한 마우스에 비교하여, 상동숭 프라임-부스트로서 MVA-mBN500을 투여한 마우스에서 가장 높은 농도의 RBD 결합 항체가 검출되었다(도 15).
최종 발언: 본 명세서의 본문 전반에 걸쳐 여러 문서가 인용된다. 본원에서 인용된 각 문서(모든 특허, 특허 출원, 과학 간행물, 제조업체의 사양, 지침 등을 비롯하여)는 이들의 전문이 참조 자료에 편입된다. 참고로 편입된 자료가 본 명세서와 모순되거나 일치하지 않는 경우, 본 명세서가 그러한 자료의 우의에 있다. 본 명세서의 어떤 것도 본 발명이 선행 발명에 의해 그러한 개시보다 선행할 자격이 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
참고자료
Agrawal AS, Tao X, Algaissi A, et al. (2016) Immunization with inactivated Middle East Respiratory Syndrome coronavirus vaccine leads to lung immunopathology on challenge with live virus. Hum Vaccin Immunother 12(9): 2351-2356.
Boukamp P, Petrussevska RT, Breitkreutz D, et al. (1988) Normal Keratinization in a Spontaneously Immortalized Aneuploid Human Keratinocyte Cell Line. J Cell Biol 106(3): 761-771.
Chen W-H, Du L, Chag SM, et al. (2014) Yeast-expressed recombinant protein of the receptor-binding domain in SARS-CoV spike protein with deglycosylated forms as a SARS vaccine candidate. Hum Vaccin Immunother 10(3): 648-658.
Deming D, Sheahan T, Heise M, et al. (2006) Vaccine Efficacy in Senescent Mice Challenged with Recombinant SARS-CoV Bearing Epidemic and Zoonotic Spike Variants. PLoS Med 3(12): e525.
He Y, Li J, Heck S, et al. (2006) Antigenic and Immunogenic Characterization of Recombinant Baculovirus-Expressed Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus Spike Protein: Implication for Vaccine Design. J Virol 80(12): 5757-5767.
Le TT, Andreadakis Z, Kumar A, et al. (2020) The COVID-19 vaccine development landscape. Nat Rev Drug Disc (19): 305-306.
Lechien JR, Chiesa-Estomba CM, De Siati, DR, et al. (2020) Olfactory and Gustatory Dysfunctions as a Clinical Presentation of Mild-To-Moderate Forms of the Coronavirus Disease (COVID-19): A Multicenter European Study. Eur Arch Otorhinolaryngol (6): 1-11.
Liu L, Wei Q, Lin Q, et al. (2019) Anti-spike IgG causes severe acute lung injury by skewing macrophage responses during acute SARS-CoV infection. JCI Insight 4(4): e123158.
Mayr A and Danner K (1978) Vaccination against pox diseases under immunosuppressive conditions. Dev Biol Stand 41: 225-234.
Mayr A, Hochstein-Mintzel V and Stickl H (1975). Abstammung, Eigenschaften und Verwendung des attenuierten Vaccinia-Stammes MVA. Infektion 3: 6-14.
Meyer H, Sutter G and Mayr A (1991). Mapping of deletions in the genome of the highly attenuated vaccinia virus MVA and their influence on virulence. J Gen Virol 72 ( Pt 5): 1031-1038.
Suter M, Meisinger-Henschel C, Tzatzaris M, et al. (2009). Modified vaccinia Ankara strains with identical coding sequences actually represent complex mixtures of viruses that determine the biological properties of each strain. Vaccine 27: 7442-7450.
Staib C, Drexler I and Sutter G (2004) Construction and isolation of recombinant MVA. Methods Mol Biol 269: 77-100.
Tan, CW, Chia, WN, Qin, X et al. (2020) A SARS-CoV-2 surrogate virus neutralization test based on antibody-mediated blockage of ACE2-spike protein-protein interaction. Nat Biotechnol 38: 1073-1078.
Wennier ST, Brinkmann K, Steinhausser C, et al. (2013) A novel naturally occurring tandem promoter in modified vaccinia virus ankara drives very early gene expression and potent immune responses. PLoS One 8(8): e73511.
Wrapp D, Wang N, Corbett KS, et al. (2020) Cryo-EM Structure of the 2019-nCoV Spike in the Prefusion Conformation. Science 367: 1260-1263
Yasui F, Kai C, Kitabatake M, et al. (2008) Prior Immunization with Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS)-Associated Coronavirus (SARS-CoV) Nucleocapsid Protein Causes Severe Pneumonia in Mice Infected with SARS-CoV. J Immunol 181: 6337-6348.
Zhou P, Yang X-L, Wang X-G, et al. (2020) Discovery of a novel coronavirus associated with the recent pneumonia outbreak in humans and its potential bat origin. Nature doi: 10.1038/s41586-020-2012-7.
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SEQUENCE LISTING <110> Bavarian Nordic A/S <120> A RECOMBINANT MODIFIED VACCINIA VIRUS ANKARA (MVA) VACCINE AGAINST CORONAVIRUS DISEASE <130> BN102PCT <150> EP20179347.8 <151> 2020-06-10 <160> 27 <170> BiSSAP 1.3.6 <210> 1 <211> 1273 <212> PRT <213> SARS coronavirus <220> <223> SARS-CoV-2 S protein, full-length <400> 1 Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val 1 5 10 15 Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe 20 25 30 Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu 35 40 45 His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp 50 55 60 Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp 65 70 75 80 Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu 85 90 95 Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser 100 105 110 Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile 115 120 125 Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr 130 135 140 Tyr His 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tgaaaggcgt gcagtgcaga 60 gtgcagccca cagagtctat cgtgcggttc cctgccatca ccaatctgtg cccttttggc 120 gaggtgttca acgccaccag attcgcctct gtgtacgcct ggaaccggaa gcggatcagc 180 aattgcgttg ccgactacag cgtgctgtac aactctgcca gcttctccac cttcaagtgc 240 tatggcgtgt ctcctaccaa gctgaacgac ctgtgcttca ccaacgtgta cgctgacagc 300 ttcgtgatca gaggcgacga agtgagacag attgctcctg gacagacagg caagattgcc 360 gattacaact acaagctccc tgacgacttc acaggctgtg tgattgcctg gaacagcaac 420 aacctggaca gcaaagtcgg aggtaactac aactacctgt acaggctgtt tcggaagtcc 480 aacctgaagc ctttcgagag agacatcagc accgagatct atcaggcagg cagcacacct 540 tgcaatggcg tggaaggctt caactgctac ttcccactgc agtcctacgg cttccagcct 600 acaaatggag tgggctacca gccttacaga gtggtggtgc tgagcttcga gctgctgcat 660 gctcctgcca cagtgtgcgg acctaagaaa agcaccaacc tggtgaagaa caaatgcgtg 720 aacttcaact tcaatggcct gacaggcacc tgataa 756 <210> 11 <211> 275 <212> PRT <213> SARS coronavirus <220> <223> SARS-CoV-2 protein 3a, full-length <400> 11 Met Asp Leu Phe Met Arg Ile Phe Thr Ile Gly Thr Val 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220 Val Glu His Val Thr Phe Phe Ile Tyr Asn Lys Ile Val Asp Glu Pro 225 230 235 240 Glu Glu His Val Gln Ile His Thr Ile Asp Gly Ser Ser Gly Val Val 245 250 255 Asn Pro Val Met Glu Pro Ile Tyr Asp Glu Pro Thr Thr Thr Thr Ser 260 265 270 Val Pro Leu 275 <210> 12 <211> 75 <212> PRT <213> SARS coronavirus <220> <223> SARS-CoV-2 protein E, full-length <400> 12 Met Tyr Ser Phe Val Ser Glu Glu Thr Gly Thr Leu Ile Val Asn Ser 1 5 10 15 Val Leu Leu Phe Leu Ala Phe Val Val Phe Leu Leu Val Thr Leu Ala 20 25 30 Ile Leu Thr Ala Leu Arg Leu Cys Ala Tyr Cys Cys Asn Ile Val Asn 35 40 45 Val Ser Leu Val Lys Pro Ser Phe Tyr Val Tyr Ser Arg Val Lys Asn 50 55 60 Leu Asn Ser Ser Arg Val Pro Asp Leu Leu Val 65 70 75 <210> 13 <211> 222 <212> PRT <213> SARS coronavirus <220> <223> SARS-CoV-2 protein M, full-length <400> 13 Met Ala Asp Ser Asn Gly Thr Ile Thr Val Glu Glu Leu Lys Lys Leu 1 5 10 15 Leu Glu Gln Trp Asn Leu Val Ile Gly Phe Leu Phe Leu Thr Trp Ile 20 25 30 Cys Leu Leu Gln Phe Ala Tyr Ala Asn Arg 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SARS-CoV-2 protein M-1 fragment <400> 17 Phe Ala Tyr Ala Asn Arg Asn Arg Phe Leu Tyr Ile Ile Lys Leu 1 5 10 15 <210> 18 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SARS-CoV-2 protein M-2 fragment <400> 18 Ser Tyr Phe Ile Ala Ser Phe Arg Leu Phe Ala Arg Thr Arg Ser Met 1 5 10 15 Trp Ser Phe Asn Pro Glu Thr Asn Ile Leu Leu Asn Val Pro Leu His 20 25 30 Gly Thr Ile Leu Thr Arg Pro Leu Leu Glu Ser Glu Leu Val Ile Gly 35 40 45 Ala Val Ile Leu Arg Gly His Leu Arg Ile Ala Gly His His Leu Gly 50 55 60 Arg Cys Asp Ile Lys Asp Leu Pro Lys Glu Ile Thr Val Ala Thr Ser 65 70 75 80 Arg Thr Leu Ser Tyr Tyr Lys Leu Gly Ala Ser Gln Arg Val Ala Gly 85 90 95 Asp Ser Gly Phe Ala Ala Tyr Ser Arg Tyr Arg Ile Gly Asn Tyr Lys 100 105 110 Leu Asn Thr Asp His Ser Ser 115 <210> 19 <211> 297 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SARS-CoV-2 protein 3a-1, 3a-2, E, M-1, M-2 fragments, fused <400> 19 Met Phe Gln Ser Ala Ser Lys Ile Ile Thr Leu Lys Lys Arg Trp Gln 1 5 10 15 Leu Ala Leu Ser Lys 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ctgccagcaa gatcatcacc ctgaagaaga ggtggcagct ggctctgtct 60 aaaggtgtgc acttcgtgtg caacctgcct atcagcgagc acgactatca gatcggaggc 120 tacaccgaga agtgggagtc tggcgtgaag gactgtgtgg tgctgcacag ctacttcacc 180 agcgactact accagctgta ctctacccag ctgagcaccg acacaggcgt ggaacacgtg 240 accttcttca tctacaacaa gatcgtggac gaacccgaag aacacgtgca gatccacaca 300 atcgatggca gctctggcgt ggtcaaccca gtgatggaac ccatctacga cgagcctacc 360 accaccacaa gcgtgcctct gagactgtgc tggttctgct gcaacatcgt gaacgtgtcc 420 ctggtcaagc ccagcttcta cgtgtacagc agagtgaaga acctgaacag cagcagggtt 480 cccgacctgt tcgcctacgc caacagaaac agattcctgt acatcatcaa gctggatttc 540 ttcatcgcca gcttcagact gttcgcacgg accagatcca tgtggtcctt caatcccgag 600 acaaacatcc tgctgaatgt gcctctgcac ggcaccatcc tgacaagacc tctgctggaa 660 agcgagctgg ttatcggtgc cgtgatcctg agaggccacc tgagaattgc aggacaccac 720 ctgggcagat gcgacatcaa ggacctgcca aaagaaatca ccgtggccac cagcaggacc 780 ctgagctact acaagctggg agcctctcag agagtggctg gcgattctgg atttgcagcc 840 tacagcagat accggatcgg caactacaaa ctgaataccg accacagcag ctaatga 897 <210> 22 <211> 1261 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SARS-CoV-2 S protein, full-length, modified, minus signal peptide <400> 22 Ser Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr 1 5 10 15 Thr Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg 20 25 30 Ser Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser 35 40 45 Asn Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr 50 55 60 Lys Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe 65 70 75 80 Ala Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr 85 90 95 Thr Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr 100 105 110 Asn Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe 115 120 125 Leu Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu 130 135 140 Phe Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser 145 150 155 160 Gln Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn 165 170 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Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val 1205 1210 1215 Met Val Thr Ile Met Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu 1220 1225 1230 Lys Gly Cys Cys Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp 1235 1240 1245 Ser Glu Pro Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr 1250 1255 1260 <210> 23 <211> 3789 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SARS-CoV-2 S protein, full-length, modified, minus signal peptide <400> 23 agccagtgtg tgaacctgac caccagaaca cagctgcctc cagcctacac caacagcttt 60 accagaggcg tgtactatcc cgacaaggtg ttcagatcca gcgtgctgca ctctacccag 120 gacctgttcc tgcctttctt cagcaacgtg acctggttcc acgccatcca cgtgagcggt 180 accaatggca ccaagagatt cgacaatccc gtgctgccct tcaacgacgg agtgtacttt 240 gccagcaccg agaagtccaa catcatcaga ggctggatct tcggcaccac actggacagc 300 aagacccaga gcctgctgat cgtgaacaac gccaccaacg tggtcatcaa agtgtgcgag 360 ttccagttct gcaacgatcc cttcctggga gtctactacc acaagaacaa caagagctgg 420 atggaaagcg agttcagagt gtacagctct gccaacaact gcaccttcga gtacgtgtcc 480 cagcctttcc tgatggacct ggaaggcaag cagggcaatt tcaagaatct ccgagagttc 540 gtgttcaaga acatcgacgg ctacttcaag atctacagca agcacacacc tatcaacctc 600 gtgagggatc tgcctcaggg cttctctgct ctggaacctc tggtggatct gcccatcggc 660 atcaacatca ctcggtttca gacactgctg gcactgcaca gaagctacct gacacctggc 720 gatagcagca gcggatggac agctggtgct gcagcttact atgtgggcta cctgcagcct 780 agaaccttcc tgctgaagta caacgagaac ggcaccatca ccgatgccgt ggattgtgct 840 ctggatcctc tgagcgagac aaagtgcacc ctgaagtcct tcaccgtgga gaagggcatc 900 taccagacca gcaacttcag ggtgcagccc accgaatcca tcgtgcggtt ccctaacatc 960 accaatctgt gtccctttgg cgaggtgttc aatgccacca gattcgcctc tgtgtacgcc 1020 tggaaccgga agcggatcag caattgcgtt gccgactact ccgtgctgta caactcagcc 1080 agcttcagca ccttcaagtg ctacggagtg agccctacca agctgaacga cctgtgcttc 1140 acaaacgtgt atgctgacag cttcgtgatc agaggagatg aagtgaggca gattgctcct 1200 ggacagacag gcaagattgc agattacaac tacaagctgc ctgacgactt cacaggctgt 1260 gtgattgcct ggaacagcaa caacctggac tccaaagtcg gaggcaacta caactacctg 1320 tacagactgt tcaggaagtc caatctgaag cccttcgaac gggacatctc caccgagatc 1380 tatcaggctg gcagcacacc ttgtaatgga gtggaaggct tcaactgcta cttcccactg 1440 cagtcctacg gctttcagcc cacaaatggc gtgggctatc agccctacag agtggtggtg 1500 ctgagcttcg aactgctgca tgctcctgcc acagtgtgcg gacctaagaa atccaccaat 1560 ctcgtgaaga acaaatgcgt gaacttcaac ttcaacggtc tgaccggtac aggcgtgctg 1620 acagagagca acaagaagtt cctgccattc cagcagtttg gcagggatat cgcagatacc 1680 acagacgctg ttagagatcc acagacactg gaaatcctgg acatcacacc ttgcagcttc 1740 ggaggcgtgt ctgtgatcac acctggcacc aacaccagca atcaggtggc agttctgtac 1800 caggacgtga actgtaccga agttcccgtg gccattcatg ccgatcagct gacacctaca 1860 tggagggtgt actccaccgg aagcaatgtg tttcagacca gagctggctg tctgatcgga 1920 gccgagcacg tgaacaatag ctacgagtgc gacatcccta tcggagctgg catctgtgcc 1980 agctaccaga cacagacaaa cagccctggc tctgcctctt ccgtggccag ccagtccatc 2040 attgcctaca caatgtctct gggagccgag aacagcgtgg cctactccaa caactctatc 2100 gctatcccta ccaacttcac aatcagcgtg accacagaga tcctgcctgt gtccatgacc 2160 aagaccagcg tggactgcac catgtacatc tgtggcgatt ccaccgagtg ctccaacctg 2220 ctgctgcagt acggcagctt ctgcacccag ctgaatagag ccctgacagg gatcgctgtg 2280 gaacaggaca agaacaccca agaggtgttc gcacaagtga agcagatcta caagacacct 2340 cctatcaagg acttcggagg attcaacttt agccagattc tgcctgatcc tagcaagcca 2400 agcaagcgga gcttcatcga ggacctgctg ttcaacaaag tgacacttgc cgacgctggc 2460 ttcatcaagc agtatggcga ttgtctggga gacattgctg ccagggatct gatttgtgcc 2520 cagaagttca acggactgac agtgctgcct cctctgctga ccgatgagat gatcgctcag 2580 tacacatctg ccctgctggc tggcacaatc acaagtggct ggacatttgg agctggagct 2640 gctctgcaga ttccctttgc tatgcagatg gcctaccggt tcaacggcat cggagtgacc 2700 cagaatgtgc tgtacgagaa ccagaagctg atcgccaacc agttcaactc tgccatcggc 2760 aagatccagg acagcctgag cagcacagca agcgcactgg gaaagctgca ggacgtggtc 2820 aaccagaatg cccaggcact gaacaccctg gtcaagcagc tgtcctccaa cttcggagcc 2880 atcagctctg tgctgaacga tatcctgagc agactggacc ctcctgaagc cgaggtgcag 2940 atcgacaggc tgatcacagg cagactgcag agcctccaga catacgtgac ccagcagctg 3000 atcagagctg ccgagattag agcctctgcc aatctggcag ccaccaagat gtctgagtgt 3060 gtgctgggac agagcaagag agtggacttc tgtggcaagg gctaccacct gatgagcttc 3120 cctcagtctg cacctcatgg cgtggtgttt ctgcacgtga catatgtgcc agctcaagag 3180 aagaacttca ccaccgctcc agccatctgc cacgacggta aagcccactt tcctagagaa 3240 ggcgtgttcg tgtccaacgg cacccattgg ttcgtgacac agcggaactt ctacgagcct 3300 cagatcatca ccaccgacaa caccttcgtg tctggcaact gcgacgtcgt gatcggcatt 3360 gtcaacaata ccgtgtacga ccctctgcag ccagagctcg acagcttcaa agaggaactg 3420 gacaagtact tcaagaacca cacaagccct gacgtggacc tgggagatat cagcggaatc 3480 aatgccagcg tcgtgaacat ccagaaagag attgacagac tgaacgaggt ggccaagaat 3540 ctgaacgaga gcctgatcga cctgcaagaa cttgggaagt acgagcagta catcaagtgg 3600 ccttggtaca tctggctggg cttcatcgca ggactgattg ccatcgtgat ggtcacaatc 3660 atgctgtgtt gcatgaccag ctgctgtagc tgtctgaagg gctgttgtag ctgtggcagc 3720 tgctgcaagt tcgacgagga cgattctgag ccagtgctga aaggcgtgaa actgcactac 3780 acatagtaa 3789 <210> 24 <211> 1273 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SARS-CoV-2 S protein, full-length, modified, plus signal peptide ("SARS-2 S-FS-1") <400> 24 Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val 1 5 10 15 Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe 20 25 30 Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu 35 40 45 His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp 50 55 60 Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp 65 70 75 80 Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu 85 90 95 Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser 100 105 110 Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile 115 120 125 Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr 130 135 140 Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr 145 150 155 160 Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu 165 170 175 Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe 180 185 190 Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr 195 200 205 Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu 210 215 220 Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr 225 230 235 240 Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser 245 250 255 Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro 260 265 270 Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala 275 280 285 Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys 290 295 300 Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val 305 310 315 320 Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys 325 330 335 Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala 340 345 350 Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu 355 360 365 Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro 370 375 380 Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe 385 390 395 400 Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly 405 410 415 Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys 420 425 430 Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn 435 440 445 Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe 450 455 460 Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys 465 470 475 480 Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly 485 490 495 Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val 500 505 510 Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys 515 520 525 Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn 530 535 540 Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu 545 550 555 560 Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val 565 570 575 Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe 580 585 590 Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val 595 600 605 Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile 610 615 620 His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser 625 630 635 640 Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val 645 650 655 Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala 660 665 670 Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Gly Ser Ala Ser Ser Val Ala 675 680 685 Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser 690 695 700 Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile 705 710 715 720 Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val 725 730 735 Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu 740 745 750 Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr 755 760 765 Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln 770 775 780 Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe 785 790 795 800 Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser 805 810 815 Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly 820 825 830 Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp 835 840 845 Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu 850 855 860 Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly 865 870 875 880 Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile 885 890 895 Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr 900 905 910 Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn 915 920 925 Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala 930 935 940 Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn 945 950 955 960 Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val 965 970 975 Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Pro Pro Glu Ala Glu Val Gln 980 985 990 Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val 995 1000 1005 Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu 1010 1015 1020 Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val 1025 1030 1035 1040 Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala 1045 1050 1055 Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu 1060 1065 1070 Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His 1075 1080 1085 Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val 1090 1095 1100 Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr 1105 1110 1115 1120 Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr 1125 1130 1135 Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu 1140 1145 1150 Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp 1155 1160 1165 Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp 1170 1175 1180 Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu 1185 1190 1195 1200 Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile 1205 1210 1215 Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile 1220 1225 1230 Met Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys 1235 1240 1245 Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val 1250 1255 1260 Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr 1265 1270 <210> 25 <211> 3825 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SARS-CoV-2 S protein, full-length, modified, plus signal peptide ("SARS-2 S-FS-1") <400> 25 atgttcgtct tcctggtcct gctccctctg gtgtccagcc agtgtgtgaa cctgaccacc 60 agaacacagc tgcctccagc ctacaccaac agctttacca gaggcgtgta ctatcccgac 120 aaggtgttca gatccagcgt gctgcactct acccaggacc tgttcctgcc tttcttcagc 180 aacgtgacct ggttccacgc catccacgtg agcggtacca atggcaccaa gagattcgac 240 aatcccgtgc tgcccttcaa cgacggagtg tactttgcca gcaccgagaa gtccaacatc 300 atcagaggct ggatcttcgg caccacactg gacagcaaga cccagagcct gctgatcgtg 360 aacaacgcca ccaacgtggt catcaaagtg tgcgagttcc agttctgcaa cgatcccttc 420 ctgggagtct actaccacaa gaacaacaag agctggatgg aaagcgagtt cagagtgtac 480 agctctgcca acaactgcac cttcgagtac gtgtcccagc ctttcctgat ggacctggaa 540 ggcaagcagg gcaatttcaa gaatctccga gagttcgtgt tcaagaacat cgacggctac 600 ttcaagatct acagcaagca cacacctatc aacctcgtga gggatctgcc tcagggcttc 660 tctgctctgg aacctctggt ggatctgccc atcggcatca acatcactcg gtttcagaca 720 ctgctggcac tgcacagaag ctacctgaca cctggcgata gcagcagcgg atggacagct 780 ggtgctgcag cttactatgt gggctacctg cagcctagaa ccttcctgct gaagtacaac 840 gagaacggca ccatcaccga tgccgtggat tgtgctctgg atcctctgag cgagacaaag 900 tgcaccctga agtccttcac cgtggagaag ggcatctacc agaccagcaa cttcagggtg 960 cagcccaccg aatccatcgt gcggttccct aacatcacca atctgtgtcc ctttggcgag 1020 gtgttcaatg ccaccagatt cgcctctgtg tacgcctgga accggaagcg gatcagcaat 1080 tgcgttgccg actactccgt gctgtacaac tcagccagct tcagcacctt caagtgctac 1140 ggagtgagcc ctaccaagct gaacgacctg tgcttcacaa acgtgtatgc tgacagcttc 1200 gtgatcagag gagatgaagt gaggcagatt gctcctggac agacaggcaa gattgcagat 1260 tacaactaca agctgcctga cgacttcaca ggctgtgtga ttgcctggaa cagcaacaac 1320 ctggactcca aagtcggagg caactacaac tacctgtaca gactgttcag gaagtccaat 1380 ctgaagccct tcgaacggga catctccacc gagatctatc aggctggcag cacaccttgt 1440 aatggagtgg aaggcttcaa ctgctacttc ccactgcagt cctacggctt tcagcccaca 1500 aatggcgtgg gctatcagcc ctacagagtg gtggtgctga gcttcgaact gctgcatgct 1560 cctgccacag tgtgcggacc taagaaatcc accaatctcg tgaagaacaa atgcgtgaac 1620 ttcaacttca acggtctgac cggtacaggc gtgctgacag agagcaacaa gaagttcctg 1680 ccattccagc agtttggcag ggatatcgca gataccacag acgctgttag agatccacag 1740 acactggaaa tcctggacat cacaccttgc agcttcggag gcgtgtctgt gatcacacct 1800 ggcaccaaca ccagcaatca ggtggcagtt ctgtaccagg acgtgaactg taccgaagtt 1860 cccgtggcca ttcatgccga tcagctgaca cctacatgga gggtgtactc caccggaagc 1920 aatgtgtttc agaccagagc tggctgtctg atcggagccg agcacgtgaa caatagctac 1980 gagtgcgaca tccctatcgg agctggcatc tgtgccagct accagacaca gacaaacagc 2040 cctggctctg cctcttccgt ggccagccag tccatcattg cctacacaat gtctctggga 2100 gccgagaaca gcgtggccta ctccaacaac tctatcgcta tccctaccaa cttcacaatc 2160 agcgtgacca cagagatcct gcctgtgtcc atgaccaaga ccagcgtgga ctgcaccatg 2220 tacatctgtg gcgattccac cgagtgctcc aacctgctgc tgcagtacgg cagcttctgc 2280 acccagctga atagagccct gacagggatc gctgtggaac aggacaagaa cacccaagag 2340 gtgttcgcac aagtgaagca gatctacaag acacctccta tcaaggactt cggaggattc 2400 aactttagcc agattctgcc tgatcctagc aagccaagca agcggagctt catcgaggac 2460 ctgctgttca acaaagtgac acttgccgac gctggcttca tcaagcagta tggcgattgt 2520 ctgggagaca ttgctgccag ggatctgatt tgtgcccaga agttcaacgg actgacagtg 2580 ctgcctcctc tgctgaccga tgagatgatc gctcagtaca catctgccct gctggctggc 2640 acaatcacaa gtggctggac atttggagct ggagctgctc tgcagattcc ctttgctatg 2700 cagatggcct accggttcaa cggcatcgga gtgacccaga atgtgctgta cgagaaccag 2760 aagctgatcg ccaaccagtt caactctgcc atcggcaaga tccaggacag cctgagcagc 2820 acagcaagcg cactgggaaa gctgcaggac gtggtcaacc agaatgccca ggcactgaac 2880 accctggtca agcagctgtc ctccaacttc ggagccatca gctctgtgct gaacgatatc 2940 ctgagcagac tggaccctcc tgaagccgag gtgcagatcg acaggctgat cacaggcaga 3000 ctgcagagcc tccagacata cgtgacccag cagctgatca gagctgccga gattagagcc 3060 tctgccaatc tggcagccac caagatgtct gagtgtgtgc tgggacagag caagagagtg 3120 gacttctgtg gcaagggcta ccacctgatg agcttccctc agtctgcacc tcatggcgtg 3180 gtgtttctgc acgtgacata tgtgccagct caagagaaga acttcaccac cgctccagcc 3240 atctgccacg acggtaaagc ccactttcct agagaaggcg tgttcgtgtc caacggcacc 3300 cattggttcg tgacacagcg gaacttctac gagcctcaga tcatcaccac cgacaacacc 3360 ttcgtgtctg gcaactgcga cgtcgtgatc ggcattgtca acaataccgt gtacgaccct 3420 ctgcagccag agctcgacag cttcaaagag gaactggaca agtacttcaa gaaccacaca 3480 agccctgacg tggacctggg agatatcagc ggaatcaatg ccagcgtcgt gaacatccag 3540 aaagagattg acagactgaa cgaggtggcc aagaatctga acgagagcct gatcgacctg 3600 caagaacttg ggaagtacga gcagtacatc aagtggcctt ggtacatctg gctgggcttc 3660 atcgcaggac tgattgccat cgtgatggtc acaatcatgc tgtgttgcat gaccagctgc 3720 tgtagctgtc tgaagggctg ttgtagctgt ggcagctgct gcaagttcga cgaggacgat 3780 tctgagccag tgctgaaagg cgtgaaactg cactacacat agtaa 3825 <210> 26 <211> 124 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pr13.5long promoter <400> 26 taaaaataga aactataatc atataatagt gtaggttggt agtattgctc ttgtgactag 60 agactttagt taaggtactg taaaaataga aactataatc atataatagt gtaggttggt 120 agta 124 <210> 27 <211> 100 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pr1328 promoter <400> 27 tatattatta agtgtggtgt ttggtcgatg taaaattttt gtcgataaaa attaaaaaat 60 aacttaattt attattgatc tcgtgtgtac aaccgaaatc 100

Claims (18)

  1. 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2 (SARS-CoV-2) 스파이크 (S) 전장 단백질을 인코드하는 핵산 서열을 포함하는 재조합적 변형된 우두증 바이러스 앙카라에 있어서, 이때 상기 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 융합-전 입체형태의 이러한 S 단백질을 안정화시킬 수 있는 변형을 포함하는 재조합적 변형된 우두증 바이러스 앙카라 (MVA).
  2. 청구항 1에 있어서, 항원 특이적 T 세포 반응을 유도할 수 있는, 바람직하게는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질, 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위에 대응하는, 바람직하게는, 수용체-결합 도메인 (RBD), 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위에 대응하는 항원 특이적 CD8 T 세포 반응을 유도할 수 있는, 재조합적 MVA.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질, 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위, 바람직하게는 RBD, 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위에 대응하는 항원 결합 항체들을 유도할 수 있는, 재조합적 MVA.
  4. 청구항 1 ~ 3중 임의의 한 항에 있어서, SARS-CoV-2 S 전장 단백질, 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위에 대응하는, 바람직하게는 RBD, 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위에 대응하는 항원 특이적 B 세포 반응을 유도할 수 있는, 재조합적 MVA.
  5. 청구항 1 ~ 4중 임의의 한 항에 있어서, 이때 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 두 개의 연속적인 비-고유한 프롤린 잔기들을 포함하고, 바람직하게는 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 번호. 986 및 번호. 987에서 각각 비-고유한 프롤린 잔기를 포함하고, 더욱 바람직하게는 SARS-CoV-2 기원 S 단백질 서열의 아미노산 위치와 비교하여 (K986P) 및 (V987P) 아미노산 교환을 포함하는, 재조합적 MVA.
  6. 청구항 1 또는 5에 있어서, 이때 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 융합-전 입체형태의 S 단백질을 안정화시키는데 기여하는 추가 변형을 포함하는, 재조합적 MVA.
  7. 청구항 1 ~ 6중 임의의 한 항에 있어서, 이때 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 전장 단백질의 단백질분해성 절단을 방지할 수 있는 추가 변형, 바람직하게는 푸린-유사 프로테아제에 의한 또는 푸린 절단 부위에서 전장 단백질의 단백질분해성 절단을 방지할 수 있는 추가 변형을 포함하는, 재조합적 MVA.
  8. 청구항 1 ~ 7중 임의의 한 항에 있어서, 이때 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 푸린 절단 부위에서, 바람직하게는 SARS-CoV-2의 기원 S 전장 서열의 아미노산 잔기 번호. 682-685에서 아미노산 스트레치 GSAS를 만드는 연속적인 아미노산 RRAR의 치환을 포함하는, 재조합적 MVA.
  9. 청구항 1 ~ 8중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 22 또는 24에서 묘사되는, 재조합적 MVA.
  10. 청구항 1 ~ 9중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열은 서열 식별 번호: 23 또는 25에서 묘사되는, 재조합적 MVA.
  11. 청구항 1 ~ 10중 임의의 한 항에 따른 재조합 MVA를 만드는데 적합한 DNA 서열, 바람직하게는 플라스미드는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는, DNA 서열, 바람직하게는 플라스미드.
  12. 청구항 1 ~ 10중 임의의 한 항에 따른 재조합 MVA를 만드는 방법에 있어서, 다음 단계들을 포함하는 방법:
    (1) 청구항 11의 DNA 서열을 제공하는 단계;
    (2) 전술한 DNA 서열에 상동성 재조합을 위한 MVA를 접촉시키는 단계; 그리고
    (3) 상기 재조합적 MVA를 얻는 단계.
  13. 청구항 1 ~ 10중 임의의 한 항에 따른 재조합 MVA를 포함하고, 약제학적으로 수용가능한 담체 또는 부형제를 더 포함하는, 약제학적 조성물, 또는 백신.
  14. 약제학적 조성물, 또는 백신 제조용으로 청구항 1 ~ 10중 임의의 한 항에 따른 재조합 MVA의 용도.
  15. 약제, 또는 백신의 용도를 위한 청구항 1 ~ 10중 임의의 한 항에 따른 재조합 MVA.
  16. 바이러스성 감염, 바람직하게는 코로나바이러스 감염, 바람직하게는 코로나바이러스 질환 19 (COVID-19)를 예방 또는 치료하기 위한 용도의 청구항 1 ~ 10중 임의의 한 항에 따른 재조합 MVA.
  17. 청구항 16에 있어서, 이때 항원 특이적 T 세포 반응, 바람직하게는 항원 특이적 CD8 T 세포 반응, 항원 결합 항체들 및/또는 항원 특이적 B 세포 반응은 바람직하게는 SARS-CoV-2 S 전장 단백질, 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위에 대응하여, 더욱 바람직하게는 RBD, 또는 이의 일부분 또는 이의 항원성 결정부위에 대응하여 유도되는, 재조합 MVA.
  18. 청구항 16 또는 17에 있어서, 이때 상기 재조합적 MVA는 상동성 프라임-부스터 백신접종 투여방식으로 이용되는, 재조합 MVA.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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US12194157B2 (en) 2020-04-09 2025-01-14 Finncure Oy Carrier for targeted delivery to a host
EP4132478A1 (en) 2020-04-09 2023-02-15 Finncure Oy Mimetic nanoparticles for preventing the spreading and lowering the infection rate of novel coronaviruses
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101676389A (zh) 2000-11-23 2010-03-24 巴法里安诺迪克有限公司 改良安卡拉痘苗病毒变体
AU2002356690B2 (en) 2001-12-04 2008-07-24 Bavarian Nordic A/S Flavivirus NS1 subunit vaccine
US8394385B2 (en) * 2009-03-13 2013-03-12 Bavarian Nordic A/S Optimized early-late promoter combined with repeated vaccination favors cytotoxic T cell response against recombinant antigen in MVA vaccines
US20140037680A1 (en) * 2012-08-06 2014-02-06 Glaxosmithkline Biologicals, S.A. Novel method
SG10201704657WA (en) 2012-10-28 2017-07-28 Bavarian Nordic As Pr13.5 promoter for robust t-cell and antibody responses
IL248511B (en) * 2014-05-13 2022-07-01 Bavarian Nordic As Combination therapy for treating cancer with a poxvirus expressing a tumor antigen and a monoclonal antibody against tim-3
EP3197490B1 (en) * 2014-09-26 2023-06-21 Bavarian Nordic A/S Methods and compositions for intra-nasal immunization with recombinant mva encoding flagellin
ES3001108T3 (es) * 2017-03-30 2025-03-04 Univ Queensland Moléculas quiméricas y usos de las mismas
WO2021163622A1 (en) * 2020-02-14 2021-08-19 Geovax, Inc. Vaccines and uses thereof to induce an immune response to sars-cov2
CN110951756B (zh) * 2020-02-23 2020-08-04 广州恩宝生物医药科技有限公司 表达SARS-CoV-2病毒抗原肽的核酸序列及其应用
CN111218459B (zh) * 2020-03-18 2020-09-11 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种以人复制缺陷腺病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗
CN111088283B (zh) * 2020-03-20 2020-06-23 苏州奥特铭医药科技有限公司 mVSV病毒载体及其病毒载体疫苗、一种基于mVSV介导的新冠肺炎疫苗

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