KR20230005810A

KR20230005810A - 피부 질환의 미생물 치료를 위한 조성물 및 방법

Info

Publication number: KR20230005810A
Application number: KR1020227029621A
Authority: KR
Inventors: 아만다 찬; 헬렌 플래너리; 존 토마스 개논; 홍승표; 레이몬드 이 잭슨; 조나단 데이비드 피터슨; 릭 더블유 예
Original assignee: 아이에프에프 유에스 홀딩, 엘엘씨
Priority date: 2020-01-31
Filing date: 2021-01-29
Publication date: 2023-01-10
Also published as: US20230054926A1; WO2021155118A1; BR112022015129A2; EP4096622A1; CN115427015A; JP2023512070A

Abstract

본 발명은 두피 질환의 치료를 제공하기 위한 스킨 케어 조성물, 스킨 케어 제형, 및 방법에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 비듬을 포함한 두피 질환의 치료를 위한, 적어도 하나의 야로위아(Yarrowia) 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하는 방법 및 조성물에 관한 것이다.

Description

피부 질환의 미생물 치료를 위한 조성물 및 방법

전자적으로 제출된 서열 목록의 참조

ASCII 텍스트 파일(20210127_NB41714PCT_ST25; 크기: 2 KB; 생성: 2021년 1월 27일)로서 본 출원과 함께 전자적으로 제출된 서열 목록의 내용은 본 출원의 일부를 형성하고 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.

피부는 흔히 유해하다고 여겨지는 외부 물질의 침투로부터 유기체를 보호할뿐만 아니라 유기체가 건조해지는 것을 방지하는 장벽으로서의 기능도 한다.

피부는 또한 다양한 미생물 집단의 본거지이며, 이들 중 대다수는 공생(비병원성 영구 거주자) 유기체이거나 일시적(임시 거주자) 유기체이다. 병원성 상호작용에서는 미생물만 이득을 보는 반면 숙주는 결국 해를 입는다. 많은 피부 병원체는 전형적으로, 공생 유기체로서 피부 상에 서식하는 것으로 발견될 수 있지만, 미생물 장내 불균형(microbial dysbiosis)(또는 미생물 불균형), 숙주의 유전적 변이, 및 면역 상태가 공생에서 병원체로의 전환을 주도할 수 있다(문헌[Findley, K. and Grice, E.A., The Skin Microbiome: A Focus on Pathogens and Their Association with Skin Disease. PLoS Pathog. 2014, 10]).

표피는 피부 조직의 최외측 영역을 구성하므로 환경에 대한 실제 보호 시스(sheath)를 형성한다. 표피의 외층(피부 각질층(Stratum corneum) 또는 각질층(Horny layer))은 환경과 접촉하는 부분이며, 특정 구조의 각질층은 피부를 보호하고, 이외에도 일정량의 수분에 결합하여 자신의 유연성을 안정화시킨다(문헌[P. M. Elias, Structure and Function of the Stratum Corneum Permeability Barrier, Drug Dev. Res. 13, 1988, 97-105]).

공간적으로, 피부 미생물총은 표피 아래 구획까지 확장될 수 있다(문헌[Nakatsuji, T et al., The Microbiome Extends to Subepidermal Compartments of Normal Skin. Nat. Commun. 2013, 4]). 피지선 밀도가 높은 얼굴, 가슴, 및 등 영역과 같은 부위는 프로피오니박테리움(Propionibacterium) 및 말라세지아(Malassezia)와 같은 친유성 미생물의 성장을 촉진한다.

말라세지아는 피부 미생물총의 우세한 진균류이며, 사실상 모든 사람의 두피에서 발견되고, 지루성 피부염, 비듬, 및 전풍(tinea versicolor)과 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 가장 흔한 피부 질환에 관여한다. 비듬은 두피의 지루에 대한 일반적인 용어이다. 이것은 주로 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta; 엠. 레스트릭타) 및 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa; 엠. 글로보사)와 관련이 있으며, 인구의 거의 50%의 매우 높은 유병률을 갖는다(문헌[Schommer, N. N.; Gallo, R. L., Structure and Function of the Human Skin Microbiome. Trends Microbiol. 2013, 21, 660-668]). 상기 질환의 개선은 항진균제의 치료적 적용에 의해 달성될 수 있지만 항균제에 의해서는 달성될 수 없다. 병원성의 기본 메커니즘은 불완전하게 이해되어 있다. 손상된 피부 장벽 기능은 질환의 경과를 촉진한다(문헌[Harding, C. Ret al., Dandruff: a condition characterized by decreased levels of intercellular lipids in scalp stratum corneum and impaired barrier function. Arch. Dermatol. Res. 2002, 294, 221-230]).

말라세지아 종(Malassezia spp)은 지방산 신타아제가 없기 때문에 탄소원에 대해 피지 지질에 의존해야 한다. 상기 종은 또한 효율적인 불포화 Fa(예를 들어 올레에이트) 이용을 위한 델타 2,3-에노일-CoA 이소머라아제가 결여되어 있다. 말라세지아 종은 (트리글리세리드를 자극성 지방산으로 분해하는 리파아제(들)를 분비함으로써) 피지 지방을 먹고, 피지 지방이 분해됨에 따라 유리 지방산(예컨대 올레산)이 부산물로 방출된다. 유리 지방산은 과다증식 및 인설을 유발하거나 염증에 또한 관여하는 아라키돈산의 방출을 유발할 수 있기 때문에 많은 사람들이 유리 지방산에 민감하고, 두피가 자극을 받아 반응한다. 자극에 대한 반응으로 두피는 염증을 일으키고 붉어지고 가렵기 시작하며, 신체는 자극물을 없애기 위해 평소보다 더 빨리 피부 세포를 떨어뜨린다. 피부가 벗겨지면 두피에 가시적인 박편이 나타나게 되며, 이것이 비듬이다.

두피의 비듬 상태를 치료하기 위한 방법 및 조성물과 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 두피 질환의 치료를 제공하기 위한 방법 및 스킨 케어 조성물을 찾을 필요가 남아 있다.

본 발명은 두피 질환의 치료를 제공하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

더 구체적으로, 본 발명은 비듬을 포함한 두피 질환의 치료를 위한, 야로위아 속의 적어도 하나의 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하는 방법 및 조성물에 관한 것이다.

예기치 않게도, 본 발명자들은 미생물, 특히 야로위아 속 미생물이 비듬을 유도하는 말라세지아 종, 특히 엠. 글로보사의 지질 분해 활성에 의해 생성되는 유리 지방산을 소비할 수 있고, 이에 의해 필요로 하는 대상체에서 비듬 상태를 감소시킬 수 있음을 관찰하였다. 또한, 본 발명자들은 예기치 않게도, 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물이 말라세지아 종의 성장을 감소시키고, 말라세지아 종의 생물막을 제거하고, 말라세지아 종의 생물막 형성을 방지하거나 감소시킬 수 있음을 관찰하였다.

일 실시 형태에서, 조성물은 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물이며, 이는 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하고, 여기서, 상기 조성물은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료한다.

일 양태에서, 두피 질환은 두피의 비듬 상태(지루성 피부염), 두피의 에코플로라 불균형, 두피의 불편감, 전풍, 건성 피부, 자극받은 피부, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일 실시 형태에서, 조성물은 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물이며, 이는 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하고, 여기서, 상기 조성물은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료하며, 조성물은 사피엔산(C16:1 시스-6), 팔미트산(C16:0), 미리스트산(C14:0), 페트로셀린산(C18:1 시스-6), 펜타데실산(C15:0), 스테아르산(C18:0), 라우르산(C12:0), 레익산, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 지질을 분해한다.

일 실시 형태에서, 조성물은 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물이며, 이는 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하고, 여기서, 상기 조성물은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료하며, 조성물은 말라세지아 종의 성장을 감소시킨다.

일 실시 형태에서, 조성물은 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물이며, 이는 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하고, 여기서, 상기 조성물은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료하며, 조성물은 말라세지아 종의 생물막을 제거한다.

일 실시 형태에서, 조성물은 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물이며, 이는 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하고, 여기서, 상기 조성물은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료하며, 조성물은 말라세지아 종의 생물막 형성을 방지하거나 감소시킨다.

일 실시 형태에서, 조성물은 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물이며, 이는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함한다: 야로위아 리폴리티카 ATCC 20362, 야로위아 리폴리티카 ATCC 9773, 야로위아 리폴리티카 ATCC 18942, 야로위아 리폴리티카 ATCC 20177, 야로위아 리폴리티카 CBS2073, 야로위아 리폴리티카 Phaff#50-47, 또는 이들의 임의의 조합.

일 실시 형태에서, 조성물은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하는 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 유효량의 스킨 케어 조성물(여기서, 상기 조성물은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료함), 및 하나 이상의 피부학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 성분을 포함하는 스킨 케어 제품이다.

일 실시 형태에서, 조성물은 로션, 세럼, 젤리, 크림, 젤, 에멀젼, 마스크, 패치 또는 스틱으로 이루어진 군으로부터 선택되는 스킨 케어 제품이며, 이는 하나 이상의 피부과학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 성분, 및 상기 스킨 케어 제형의 총 중량에 대하여 중량 기준으로 적어도 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%에서 최대 10%의 본원에 개시된 스킨 케어 제형을 포함한다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피 질환을 치료하는 방법이며, 상기 방법은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법이며, 상기 방법은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법이며, 이는 본원에 기술된 스킨 케어 조성물을 포함하는 스킨 케어 제품을 상기 대상체에게 국소 투여하는 단계를 포함한다.

본원에 기술된 조성물 및 피부병을 치료하기 위한 이의 사용 설명서를 포함하는 키트가 본원에 추가로 제공된다. 일부 실시 형태에서, 키트는 조성물을 적용하도록 구성된 하나 이상의 어플리케이터를 추가로 포함한다.

본 발명의 특징 및 장점은 다음의 상세한 설명을 읽음으로써 당업자에 의해 더욱 쉽게 이해될 것이다.

명확성을 위해 개별적인 실시 형태의 맥락에서 전술하고 후술한 본 발명의 특정 특징들이 단일 요소로 조합되어 제공될 수도 있음을 이해해야 한다. 반대로, 간결성을 위해 단일 실시 형태의 맥락에서 기술된 본 발명의 다양한 특징들이 또한 개별적으로 또는 임의의 하위 조합으로 제공될 수 있다. 다음에서, 본 발명의 하나의 광범위한 양태와 관련하여 언급된 실시 형태는 전술한 본 발명의 다른 광범위한 양태 각각에 동일하게 적용가능하다는 것이 이해될 것이다. 문맥이 달리 지시하지 않는 한, 후술된 실시 형태들이 조합될 수 있음이 추가로 이해될 것이다.

두피 질환

본 발명의 목적상, 용어 "두피 질환"은 두피의 비듬 상태(지루성 피부염), 두피의 에코플로라 불균형, 두피의 불편감, 전풍, 건성 피부, 자극받은 피부, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.

본 발명의 목적상, 용어 "비듬 상태"는 과도한 건조 또는 피지의 과도한 분비를 나타내는 두피에 의해 나타나는 상태를 말하며, 이는 경우에 따라 건성 비듬 또는 기름진 비듬 또는 지성 비듬, 또는 심지어 표피의 소양증 및/또는 염증의 존재를 특징으로 할 수 있다.

건성 비듬 상태는 두피의 건조증을 반영하며, 이는 각질층의 과도하게 빠른 재생과 조합될 수 있다. 건성 비듬 조각은 일반적으로 작은 백색 또는 회색 조각의 형태이며 두피와 의복에 퍼져서 비심미적 시각 효과를 일으킨다.

두피의 건조와 관련된 가려움증은 홍반, 소양증 또는 심지어 염증을 초래할 수 있다.

기름진 비듬 상태 또는 지성 비듬 상태는 지루성 피부염의 한 형태이다. 지루성 피부염을 앓고 있는 개체는 패킷을 형성하도록 축적되는 크고 기름지거나 지성인 황색 인설로 덮인 홍반성 두피를 갖는다. 상기 개체는 소양성 두피를 갖고, 종종 환부에 작열감이 있다. 이러한 현상은 병원성 미생물, 특히 말라세지아 종(말라세지아 spp.)의 존재에 의해 증폭될 수 있다. 본원에 기술된 말라세지아 종은 말라세지아 레스트릭타(엠. 레스트릭타) 및 말라세지아 글로보사(엠. 글로보사)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

피지로부터 지방산을 방출하는 특성을 갖는 이러한 미생물은 표피의 장벽 기능을 손상시키고 염증을 일으킬 수 있다.

두피의 비듬 상태 동안 피부 장벽이 불균형해지고, 이의 무결성 및 이의 수화가 손상되며, 이의 에코플로라가 교란된다. 두피의 피부는 자극을 받고, 소양성이고, 부서지기 쉽고, 수분이 부족하고, 감염에 민감하다.

예기치 않게도, 본 발명자들은 미생물, 구체적으로 야로위아 속 미생물이 비듬 유발 말라세지아 종의 지질 분해 활성에 의해 생성된 유리 지방산을 소비할 수 있음을 관찰하였다. 본 발명에 따른 미생물, 구체적으로 야로위아의 사용은 비듬 유발 말라세지아 종, 구체적으로 엠. 글로보사의 지질 분해 활성에 의해 생성된 유리 지방산의 감소를 초래할 수 있으며, 이에 의해 필요로 하는 대상체에서 비듬 상태를 감소시키는 것이 가능해진다. 지방산은 다른 친유성 박테리아로부터 생성될 수 있다. 지방산 발생 감소는 유리 지방산에 의해 야기되는 비듬 및 기타 피부 질환을 감소시킬 수 있다.

이러한 감소는 두피를 긁는 단계의 감소 및 이로 인한 장벽 기능 손상의 감소에 의해 반영될 수 있다. 이에 따라 피부가 덜 자극받고 덜 가려워지며, 비듬의 존재가 감소되거나 심지어 제거된다.

미생물, 이의 분획, 이의 세포 용해물, 이의 발효물 및 이의 대사산물

놀랍게도 그리고 예기치 않게도, 본원에 기술된 바와 같은 결과는 와이. 리폴리티카 및 엠. 글로보사를 함께 성장시켰을 때 와이. 리폴리티카의 존재 하에서의 엠. 글로보사의 성장이 크게 감소되었음을 보여주었으며(예를 들어, 와이. 리폴리티카는 말라세지아 종을 억제함), 따라서 야로위아 속의 미생물이 비듬 상태에 대한 미생물 치료제로 사용될 수 있음을 나타냈다. 본원에 기술된 바와 같이(표 2, 실시예 3), 엠. 글로보사는 무세포 배지에서 리파아제 활성을 발현하였지만(이는 리파아제가 분비되었음을 나타냄), 와이. 리폴리티카는 무세포 상청액에서 유의한 리파아제 활성을 나타내지 않았으며, 아마도 그 이유는 야로위아 리파아제 활성이 대부분 세포-결합된 것이거나 세포-관련된 것이기 때문이다. 이는 미생물 치료가 완료된 후 리파아제 활성이 피부에 남지 않고 유리 지방산 축적을 야기하기 때문에 미생물 치료제에 있어서 놀랍고도 유리한 특징이다. 본원에 기술된 바와 같이, 엠. 글로보사의 리파아제 활성에 의해 생성된 올레산 유리 지방산(FFA)은 와이. 리폴리티카에 의해서는 효율적으로 소비되었지만 엠. 글로보사에 의해서는 소비되지 않았으며(실시예 5, 표 4), 이는 또한, 엠. 글로보사가 올레산을 사용할 수 없었고(따라서 올레산에서의 성장이 불가능하거나 약하였고) 반면에 올레산이 야로위아 리폴리티카에 의해서는 효율적으로 동화되었음을 보여주는 결과(실시예 2, 표 1)와 일치한다. 올레산 유리 지방산(FFA)은 전염증성으로 간주되기 때문에 이 FFA의 효율적인 제거는 전염증성 올레산 FAA에 의해 야기되는 비듬 또는 기타 피부 질환에 대한 야로위아 미생물 치료제의 중요한 속성이다.

또한, 본 발명자들은 예기치 않게도, 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물이 말라세지아 종의 성장을 감소시키고, 말라세지아 종의 생물막을 제거하고, 말라세지아 종의 생물막 형성을 방지하거나 감소시킬 수 있음을 관찰하였다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "미생물(microorganism 또는 microbe)"은 박테리아, 진균, 바이러스, 원생동물 및 기타 미생물 또는 미시적 유기체를 지칭한다.

일부 실시 형태에서, 야로위아 속의 상기 적어도 하나의 미생물은 이를 비-복제성으로 만드는 처리, 예를 들어 열, 건조, y-조사 또는 UV-조사에 대한 노출을 받을 수 있다. 비-복제성 야로위아는 세포 분열이 불가능하게 된 생세포 또는 사세포일 수 있다. 비-복제성 야로위아는 온전한 세포 또는 부분적 용해 또는 완전한 용해를 겪은 세포일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 비-복제성 세포는 온전한 세포와 용해된 세포의 혼합물을 포함할 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "프로바이오틱" 또는 "프로바이오틱 미생물"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되며, 충분한 양으로 (국소 또는 경구로) 투여될 때 숙주 유기체에 유익한 영향을 미치는(즉, 하나 이상의 입증가능한 유익성, 예컨대 감소된 비듬 상태를 숙주 유기체에 부여함으로써 유익한 영향을 미치는) 살아 있는 미생물(예를 들어 박테리아 또는 효모 포함)을 지칭한다.

일 양태에서, 본 발명에서 사용하기에 적합한 미생물은 야로위아 속 미생물을 포함한다.

일 실시 형태에서, 야로위아 속의 상기 적어도 하나의 미생물은 야로위아 리폴리티카 ATCC 20362, 야로위아 리폴리티카 ATCC 9773, 야로위아 리폴리티카 ATCC 18942, 야로위아 리폴리티카 ATCC 20177, 야로위아 리폴리티카 CBS2073, 야로위아 리폴리티카 Phaff#50-47, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 미생물이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "분획" 또는 "야로위아 속의 적어도 하나의 미생물의 분획" 또는 "야로위아의 적어도 하나의 미생물의 분획" 또는 "이의 분획"은 더 구체적으로, 상기 전 미생물(whole microorganism)과 유사하게 두피의 비듬 상태의 치료에 효능이 있는 상기 미생물의 단편을 나타낸다.

야로위아 속의 상기 적어도 하나의 미생물의 분획은 야로위아 속의 상기 적어도 하나의 미생물로부터 수득되는 대사산물(야로위아 대사산물로도 지칭됨)을 포함한다. 일 양태에서, 야로위아 속의 상기 적어도 하나의 미생물의 분획은 야로위아 미생물의 대사로부터 유래되고 또한 두피 질환의 치료에 효능이 있는 하나 이상의 대사산물(들)(활성 화합물(들))을 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대사산물(들)" 또는 "야로위아 속의 상기 적어도 하나의 미생물의 대사산물(들)" 또는 "이의 대사산물(들)" 또는 "야로위아 대사산물(들)" 또는 "활성 대사산물"은 상호교환가능하게 사용되며, 야로위아 미생물의 대사로부터 유래되고 또한 두피 질환의 치료에 효능이 있는 임의의 물질을 지칭한다. 일 양태에서, 상기 하나 이상의 대사산물(들)은 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 야로위아 속의 상기 적어도 하나의 미생물의 배양(발효) 동안 생성되었다. 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 야로위아 속의 상기 적어도 하나의 미생물의 이러한 대사산물은 1차 대사산물(정상적인 성장, 발달 및 번식에 직접적으로 관여하는 대사산물), 가용성 대사산물, 펩티드, 단백질, 뉴클레오티드, 2차 대사산물, 폴리뉴클레오티드 및 다당류를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

분획이 본 발명의 제형에 직접 사용될 수 있거나, 사용 전에 임의의 적합한 수단에 의해 분획으로부터 하나 이상의 활성제(대사산물)가 단리될 수 있음이 명백할 것이다.

일 실시 형태에 따르면, 본 발명에 사용하기에 적합한 야로위아 대사산물 및/또는 분획은 용해물의 형태로 투여될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "세포 용해물" 또는 "용해물"은 임의의 적합한 수단에 의해 용해된 세포를 지칭한다. 통상적으로 용어 "세포 용해물" 또는 "용해물"은 세포 용해(이에 따라 고려 중인 미생물의 세포에 자연적으로 함유된 세포내 생물학적 성분의 방출을 일으킴)로 알려진 현상을 통한 생물학적 세포의 파괴 또는 용해 후 수득되는 물질을 나타낸다. 본 발명의 목적상, 용어 "용해물"은 선호 없이, 고려 중인 미생물의 용해를 통해 수득되는 전 용해물 또는 단지 이의 분획을 나타내기 위해 사용된다. 따라서 사용된 용해물은 세포내 생물학적 성분으로부터 및 세포의 벽 및 막의 성분으로부터 전적으로 또는 부분적으로 형성된다. 유리하게는, 본 발명에 사용되는 용해물은 고려 중인 미생물의 용해를 통해 수득된 전 용해물일 수 있다. 이러한 세포 용해는 삼투 충격, 열 충격, 초음파 분해, 초음파 처리, 균질화, 전단, 화학적 용해 또는 원심분리 유형의 기계적 응력 하에서와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 임의의 적합한 수단에 의해 수행될 수 있다.

일 양태에서, 야로위아 속의 상기 적어도 하나의 미생물의 세포 용해물은 야로위아 미생물의 대사로부터 유래되고 또한 두피 질환의 치료에 효능이 있는 하나 이상의 대사산물(들)(활성 화합물)을 포함한다.

세포 용해물이 본 발명의 제형에 직접 사용될 수 있거나, 사용 전에 임의의 적합한 수단에 의해 세포 용해물로부터 하나 이상의 활성제(대사산물)가 단리될 수 있음이 명백할 것이다.

용해물은 다양한 형태, 용액의 형태 또는 미분 형태로 사용될 수 있다. 미생물(들)은 살아 있는 형태, 반-활성 형태 또는 불활성화된 형태 또는 죽은 형태로 본 발명에 따른 조성물에 포함될 수 있다.

본 발명의 목적상, "불활성화된" 또는 "죽은" 미생물은 배양 중 콜로니를 더 이상 형성할 수 없는 미생물이다. 죽은 또는 불활성화된 미생물은 온전한 또는 파손된 세포막을 가질 수 있다. 죽은 또는 불활성화된 미생물은 당업자에게 공지된 임의의 방법을 통해 수득될 수 있다.

일부 실시 형태에서, 세포 파편은 사용 전에 제거된다. 일 실시 형태에서, 세포 용해물은 사용 전에 여과된다. 일 실시 형태에서, 세포는 예를 들어 초음파 처리, 균질화, 전단 또는 화학적 용해에 의해 용해된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "발효물"은 하나 이상의 살아 있는 미생물 주(strain)가 영양 배지에서 증식된 조성물로 이해되어야 한다. 일 양태에서, "발효물"은 세포가 제거된 야로위아 속의 적어도 하나의 미생물의 세포 배양물의 상청액을 지칭한다. 일 실시 형태에서, 세포는 원심분리에 의해 제거된다. 일 실시 형태에서, 발효물(세포 배양물의 상청액)은 야로위아 세포가 배양된 배양 배지의 여과에 의해 수득된다.

일 양태에서, 야로위아 속의 상기 적어도 하나의 미생물의 발효물은 야로위아 미생물의 대사로부터 유래되고 또한 두피 질환의 치료에 효능이 있는 하나 이상의 대사산물(들)(활성 화합물)을 포함한다.

발효물이 본 발명의 제형에 직접 사용될 수 있거나, 사용 전에 임의의 적합한 수단에 의해 발효물로부터 하나 이상의 활성제(대사산물)가 단리될 수 있음이 명백할 것이다.

일 양태에서, 발효물은 야로위아 속의 적어도 하나의 미생물의 발효 동안 생성된 가용성 대사산물과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 하나 이상의 대사산물을 포함할 수 있다.

일 실시 형태에서, 야로위아 속의 적어도 하나의 미생물의 배양(발효)으로부터 유래하는 발효물이 본 발명의 방법 및/또는 용도에 사용될 수 있다.

발효물 제조에 사용되는 영양 배지는 선택된 미생물의 증식에 적합한 필요 영양소를 포함하는 임의의 배지이다. 적합한 영양소는 아미노 펩티드, 펩티드, 효모 추출물 및/또는 비타민을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 배지는 유제품, 예컨대 밀크, 시리얼, 과일 및/또는 야채를 기반으로 할 수 있다.

본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "가용성 대사산물"은 세포가 제거된 세포 배양물의 상청액에 존재하는 대사산물(들)을 지칭한다.

일 실시 형태에서, 배양물을 약 0.5 이상의 OD600의 세포 밀도까지 성장시킨다. 일 실시 형태에서, 세포는 원심분리에 의해 제거된다. 일 실시 형태에서, 상청액은 여과된다. 상청액이 본 발명의 제형에 직접 사용될 수 있거나, 사용 전에 임의의 적합한 수단에 의해 상청액으로부터 하나 이상의 대사산물이 단리될 수 있음이 명백할 것이다.

일부 실시 형태에서, 본 발명의 조성물은 모든 또는 실질적으로 모든 야로위아 세포가 제거된 야로위아 발효물을 포함할 수 있다. 성장 배지로부터 세포를 분리하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 물리적 방법, 예를 들어 세포 펠렛 및 배양 상청액을 생성하기 위한 원심분리, 여과, 한외여과, 접선 유동 여과, 정상 유동 여과 또는 역삼투압에 의존할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 분리 방법은 리간드 기반일 수 있으며, 예를 들어 야로위아에 특이적으로 결합하는 항체를 포함할 수 있다. 항체는 자기 비드와 같은 고체 지지체에 커플링될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 조성물은 야로위아를 성장시킨 배지로부터 부분적으로 또는 실질적으로 단리된 야로위아를 포함한다. 야로위아는 살아 있거나 또는 비-복제성일 수 있으며, 예를 들어 불활성화될 수 있다(예를 들어, 열처리에 의해). 세포는 세포 생존력을 보존하는 조건 하에 동결건조되거나 냉동-건조될 수 있다. 동결건조 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.

일 실시 형태에서, 발효물은 본질적으로 비생존성 세포(예를 들어 온전한 세포)로 이루어진 야로위아를 포함할 수 있다.

또 다른 실시 형태에서, 발효물은 본질적으로 생존성 세포(예를 들어 온전한 비배양성 세포)로 이루어진 야로위아를 포함할 수 있다.

발효물의 맥락에서 "본질적으로 이루어진"이라는 용어는 야로위아의 적어도 90%가 표시된 특성(예를 들어 온전한 비생존성 세포) 또는 생존성 세포(예를 들어 온전한 비배양성 세포)를 갖는다는 것을 포함한다. 적절하게는 적어도 95%가 표시된 특성을 갖는다. 적절하게는 적어도 97%가 표시된 특성을 갖는다. 적절하게는 적어도 99%가 표시된 특성을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 적어도 100%가 표시된 특성을 갖는다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "무세포 발효물"("발효 상청액"이라는 용어와 동의어)은 발효물에 생존성 야로위아 세포가 실질적으로 없음을 의미한다.

일 실시 형태에서, 조성물은 적어도 하나의 야로위아 속 미생물의 발효로부터의 발효 상청액의 유효량을 포함하는, 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물이며, 여기서, 상기 조성물은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료한다.

일 실시 형태에서, 본 발명의 조성물 및 방법 및/또는 용도에 사용하기 위한 발효물은 생존성 야로위아 세포가 실질적으로 없을 수 있다(전형적으로 발효물 1 mL당 0개(또는 실질적으로 0개)의 생존성 세포를 함유함).

비듬 상태와 같은 피부 질환의 치료를 위한 스킨 케어 조성물 및 스킨 케어 제품.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "스킨 케어 조성물"은 스킨 케어 유익성을 제공할 수 있는 하나 이상의 스킨 케어 유익제를 포함하는 조성물을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "스킨 케어 유익제" 또는 "활성제"는 상호교환가능하게 사용되며, 스킨 케어 유익성을 제공할 수 있는 야로위아 속 미생물 및/또는 상기 미생물의 분획, 및/또는 상기 미생물의 세포 용해물, 및/또는 상기 미생물의 발효물, 및/또는 상기 미생물의 대사산물을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "스킨 케어 유익성"은 피부에 국소적으로 적용될 때 활성제(또는 유효량의 상기 활성제를 포함하는 스킨 케어 조성물 및/또는 스킨 케어 제품)에 의해 제공되는 유익성을 지칭한다. 본 발명의 일 양태에서, 스킨 케어 유익성은 비듬 상태 예방, 비듬 상태 감소, 비듬 상태 치료, 피부(두피) 상의 말라세지아 종의 발생 감소, 피부(두피) 상의 말라세지아 종의 생물막 형성 제거, 피부(두피) 상의 말라세지아 종의 생물막 형성의 방지 또는 감소, 피부 장벽 기능 개선, 피부 보습(피부 보습의 유지, 회복 및/또는 강화를 통해 피부를 탈수로부터 보호) 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "생물막"은 표면에 부착된 세포외 중합체 매트릭스에 매립된 미생물 군집을 지칭한다. 세포외 중합체 매트릭스는, 일반적으로 세포외 DNA, 단백질 및 다당류로 구성된 중합체성 응집체이다.

생물막은 하나 이상의 미생물을 가질 수 있고 물을 추가로 포함하며 다른 포획된 입자를 포함할 수 있다. 미생물은 그람 양성 또는 그람 음성 박테리아(호기성 또는 혐기성); 조류, 원생동물, 및/또는 효모 또는 사상균일 수 있다. 일 실시 형태에서, 생물막은 하나 이상의 말라세지아 종을 포함하는 생세포이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "표면"은 생물막의 부착을 허용하기에 충분한 매스(mass)를 갖는 임의의 구조를 의미한다. 표면은 경질 표면 및 연질 표면을 포함한다. 경질 표면은 금속, 유리, 세라믹, 목재, 광물(암석, 돌, 대리석, 화강암), 골재 재료, 예컨대 콘크리트, 플라스틱, 복합 재료, 경질 고무 재료 및 석고를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 기타 표면으로는 피부, 두피 또는 케라틴과 같은 생물학적 표면이 있을 수 있다.

스킨 케어를 위한 추가 유익제는 항비듬 활성제를 포함할 수 있다.

항비듬 활성제의 예는 각질 용해제, 예컨대 다양한 형태의 살리실산 및 황, 각질화 조절제, 예컨대 아연 피리티온, 피리딘티온 염, 트리할로카르브아미드, 트리클로산, 아졸 화합물, 항진균 중합체, 알란토인, 스테로이드, 예컨대 국소 코르티코스테로이드, 타르 또는 폴리타르(콜타르), 운데실렌산, 푸마르산, 알릴아민 및 이들의 혼합물, 시클로피록스, 옥토피록스, 피록톤 올아민, 클로베타솔 프로피오네이트, 베타메타손 발레레이트, 티트리 오일, 백리향과 개박하의 혼합 오일, 국소 항진균제, 예컨대 황화셀레늄, 이미다졸(예를 들어 케토코나졸), 히드록시피리돈(예를 들어 시클로피록스), 자연요법제, 예컨대 멜라레우카(Melaleuca) 종 오일, 알로에 베라 및 프로바이오틱 미생물을 포함한다. (문헌[Indian J. Dermatol, 2010 Apr-Jun; 55(2): 130-134]).

일 양태에서, 스킨 케어 유익제(활성제)는 적어도 하나의 야로위아 속 미생물, 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 대사산물로 이루어진다. 스킨 케어 유익제는 지질 소비 경쟁을 통해 비듬 유발 미생물의 성장 억제를 제공하는 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물의 약제, 리파아제 억제제, 소분자, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물의 스킨 케어 유익제는 말라세지아 종의 생물막을 제거하는 약제(활성제), 및 말라세지아 종의 생물막 형성을 방지하거나 감소시키는 약제(활성제)를 추가로 포함한다.

일 양태에서, 적어도 하나의 야로위아 속 미생물, 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 대사산물로 이루어진 스킨 케어 유익제(활성제)는 스킨 케어 조성물로 제형화된다.

본 발명에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물은 적어도 하나의 야로위아 속 미생물, 적어도 하나의 야로위아 대사산물 및/또는 적어도 하나의 야로위아 세포 용해물을 포함할 수 있음이 이해될 것이다.

본 발명에 따라 사용하기 위한 스킨 케어 조성물이 예를 들어 적어도 약 0.01 중량%, 약 0.05 중량%, 약 0.1 중량%, 약 0.2 중량%, 약 0.3 중량%, 약 0.4 중량%, 약 0.5 중량%, 약 0.6 중량%, 약 0.7 중량%, 약 0.8 중량%, 약 0.9 중량%, 약 1.0 중량%, 약 1.5 중량%, 약 2.0 중량%, 약 3.0 중량%, 약 4.0 중량%, 약 5.0 중량%, 약 6.0 중량%, 약 7.0 중량%, 약 8.0 중량%, 약 9.0 중량%, 약 10.0 중량%, 약 11.0 중량%, 약 12.0 중량%, 약 13.0 중량%, 약 14.0 중량%, 약 15.0 중량%, 약 16.0 중량%, 약 17.0 중량%, 약 18.0 중량%, 약 19.0 중량%, 약 20.0 중량%, 약 25.0 중량%, 약 30.0 중량%, 약 35.0 중량%, 약 40.0 약 45.0 중량%, 약 50.0 중량%의 야로위아 미생물(들), 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함할 수 있음이 추가로 명백할 것이다.

일 실시 형태에서, 스킨 케어 조성물 또는 스킨 케어 제형은 하나 이상의 피부과학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 성분, 및 상기 스킨 케어 제형의 총 중량에 대하여 중량 기준으로 적어도 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%에서 최대 10%의 본원에 기술된 스킨 케어 제형을 포함하는 로션, 세럼, 젤리, 크림, 젤, 에멀젼, 마스크, 패치 또는 스틱이다.

일부 실시 형태에서, 본 발명의 조성물은 하나 이상의 피부과학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 성분 담체와 조합된 단리된 야로위아를 포함할 수 있다. 야로위아는 살아 있거나 또는 비-복제성일 수 있으며, 예를 들어 불활성화될 수 있다(예를 들어, 열처리에 의해). 투여량은 다양할 수 있지만, 건조 중량 1 g당 약 10² 내지 약 10¹² cfu의 당량의 범위일 수 있다(예를 들어, 건조 중량 1 g당 1 x10² cfu, 5 x10² cfu, 1 x10³ cfu, 5 x10³ cfu, 1 x10⁴ cfu, 5 x10⁴ cfu, 1 x10⁵ cfu, 5 x10⁵ cfu, 1 x10⁶ cfu, 5 x10⁶ cfu, 1 x10⁷ cfu, 5 x10⁷ cfu, 1 x10⁸ cfu, 5 x10⁸ cfu, 1 x10⁹ cfu, 5 x10⁹ cfu, 1 x10¹⁰ cfu, 5 x10¹⁰ cfu, 1 x10¹¹ cfu, 5 x10¹¹ cfu, 1 x10¹² cfu).

일부 실시 형태에서, 야로위아는 하나 이상의 피부과학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 성분과 조합되기 전 또는 후에 통상적인 살균 기술을 사용하여 살균될 수 있다.

일 실시 형태에서, 스킨 케어 조성물은 피부에 투여하기 위한 스킨 케어 제품/제형으로 제형화된다.

본 발명에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물은 야로위아 속 미생물, 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물에 더하여 하나 이상의 프로바이오틱 박테리아를 추가로 포함할 수 있음이 추가로 이해될 것이다.

스킨 케어 조성물은 방부제, pH 조절제, 항산화제 및 킬레이팅제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 화합물을 포함할 수 있다.

방부제는 파라벤, 벤조산나트륨, 소르브산칼륨, 페닐 에틸 알코올, 라우릴 에틸 아르기네이트(LAE) 및 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

pH 조절제는 약산, 강산, pH를 조절할 수 있는 임의의 화합물, 예컨대 시트르산(이에 한정되지 않음), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

본원에 개시된 스킨 케어 조성물 또는 임의의 유효량의 상기 스킨 케어 조성물이 제형 및 스킨 케어 제품에 사용될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "스킨 케어 제품"은 화장품, 수성 용액, 에멀젼, 세럼, 젤리, 패치, 로션, 국소 보습제, 크림, 페이스트, 밤(balm), 연고, 포마드, 젤, 리퀴드, 스프레이, 폼, 키트 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만 이에 한정되지 않는, 본원에 개시된 스킨 케어 조성물의 유효량을 포함하는 제품을 지칭한다.

일 실시 형태에서, 스킨 케어 제품은 피부/두피에 대한 국소 투여용으로 제형화된다.

일 실시 형태에서, 스킨 케어 제품은 하나 이상의 피부과학적으로 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 성분, 및 스킨 케어 제형의 총 중량에 대하여 중량 기준으로 적어도 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%에서 최대 10%의 본원에 개시된 스킨 케어 제형을 포함하는 로션, 세럼, 젤리, 크림, 젤, 에멀젼, 마스크, 패치 또는 스틱이다.

일 실시 형태에서, 스킨 케어 제품은 적어도 하나의 야로위아 속 미생물을 포함하는 제품이며, 여기서, 미생물 및/또는 상기 미생물을 포함하는 스킨 케어 조성물은 젤, 에멀젼, 하이드로젤, 루즈 또는 콤팩트 파우더, 리퀴드 현탁액 또는 용액, 스프레이 용액, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 형태로 제형화된다.

본 발명에 사용하기 위한 국소 제형은 두피 또는 피부 표면에 적용하기에 적합한 임의의 형태, 예컨대 크림, 로션, 스프레이, 용액, 젤, 연고, 페이스트, 플라스터, 페인트, 생체접착제, 현탁액 등일 수 있고/있거나, 리포솜, 미셀, 및/또는 미소구체를 함유하도록 제조될 수 있다. 이러한 제형은 신체 표면에 적용시 및 그 이후에 신체 표면으로부터 증발하는 수분이 제형 내에서 유지되도록 폐색성 오버레이어와 조합되어 사용될 수 있다.

국소 제형은 활성 성분(들)이 당업계에 공지된 피부과학적 비히클에 용해되거나 분산된 것을 포함한다(예를 들어, 수성 또는 비수성 젤, 연고, 유중수 또는 수중유 에멀젼). 이러한 비히클의 구성요소는 물, 수성 완충 용액, 비수성 용매(예컨대 에탄올, 이소프로판올, 벤질 알코올, 2-(2-에톡시에톡시) 에탄올, 프로필렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 모노라우레이트, 글리코푸롤 또는 글리세롤), 오일(예를 들어 광유, 예컨대 액체 파라핀, 천연 또는 합성 트리글리세리드, 또는 실리콘 오일, 예컨대 디메티콘)을 포함할 수 있다. 특히, 제형의 특성과 그의 의도된 용도 및 적용 부위에 따라, 사용된 피부과학적 비히클은 하기 목록으로부터 선택되는 하나 이상의 성분(예를 들어, 제형이 수성 젤인 경우, 물에 더하여, 성분)을 함유할 수 있다: 가용화제 또는 용매(예를 들어 β-시클로덱스트린, 예컨대 히드록시프로필 β-시클로덱스트린, 또는 알코올 또는 폴리올, 예컨대 에탄올, 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤); 증점제(예를 들어 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스 또는 카보머); 젤화제(예를 들어 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체); 방부제(예를 들어 벤질 알코올, 벤잘코늄 클로라이드, 클로르헥시딘, 클로르부톨, 벤조에이트, 소르브산칼륨 또는 EDTA 또는 이의 염); 및 pH 완충제(들)(예컨대 인산이수소염과 인산수소염의 혼합물, 또는 시트르산과 인산수소염의 혼합물).

스킨 케어 제품은 용매로서 물과, 활성제, 방향제, 색소, 방부제, pH 조절제, 킬레이팅제, 또는 이들의 임의의 조합과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 수용성 첨가제(용질)를 포함하는 리퀴드 로션(진용액)을 포함한다.

스킨 케어 제품은 분산액, 예컨대 에멀젼 (액체 중 액체[유중수 W/O, O/W, W/O/W], 현탁액[고체/액체 또는 액체/고체], 에어로졸[액체/기체 또는 고체/기체], 폼/무스[기체/액체 또는 기체/에멀젼, 또는 기체/고체] 등, 그러나 이에 한정되지 않음)을 포함한다. 수중유[O/W] 에멀젼의 예는 수상, 유화제, 지방상 및 하나 이상의 첨가제의 조합을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 수상은 물, 휴멕턴트 및 안정화제(합성 중합체, 카보머, 천연 중합체, 잔탄 검, 아카시아 검, 카라기난, 젤란, 또는 이들의 임의의 조합 등, 그러나 이에 한정되지 않음)를 포함할 수 있다. 유화제는 음이온성 유화제, 양이온성 유화제, 비이온성 유화제, 양쪽성 유화제, 실리콘 유화제), 자가 유화제를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 지방상(친유성 성분)은 왁스, 버터, 지방 에스테르, 트리글리세리드, 식물성 오일, 광유(파르피눔), 실리콘 및 증점제/오일 젤리화제를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 첨가제는 방부제, 방향제(가장 흔히는 친유성), 색소, 항산화제, 킬레이팅제, 활성제, pH 조절제(시트르산, 락트산, AHA), 중화제/강염기제, 예컨대 NaOH, 트리메틸아민(아크릴 중합체를 젤리화하기 위한 것) 및 파우더를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

스킨 케어 제품은 수상(물, 휴멕턴트, 활성제를 포함함), 젤리화제(합성 중합체, 천연 중합체, 잔탄 검, 아카시아 검, 카라기난, 겔란 등, 그러나 이에 한정되지 않음) 및 첨가제(방향제, 고 HLB 계면활성제, 색소, 활성제, 방부제, pH 조절제, 중화제, 파우더 등, 그러나 이에 한정되지 않음)를 포함하는 수성 젤을 포함한다.

스킨 케어 제품은 수상(물, 휴멕턴트), 계면활성제, 첨가제(방향제, 고 HLB 계면활성제, 색소, 활성제, 방부제, pH 조절제, 중화제, 파우더 등, 그러나 이에 한정되지 않음) 및 선택적으로 젤리화제(합성 중합체, 천연 중합체, 잔탄 검, 아카시아 검, 카라기난, 겔란 등, 그러나 이에 한정되지 않음)를 포함하는 클렌징/계면활성제 시스템(샴푸, 샤워 젤, 미셀 워터 등, 그러나 이에 한정되지 않음)을 포함한다.

본원에 기술된 바와 같이, 본원에 기술된 바와 같은 적어도 하나의 야로위아 속 미생물, 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하는 스킨 케어 제품 또는 제형은 비듬 상태 예방, 비듬 상태 감소, 비듬 상태 치료, 피부/두피 상의 말라세지아 종(말라세지아 spp.)의 발생 감소, 피부 장벽 기능 개선, 피부 보습(피부 보습의 유지, 회복 및/또는 강화를 통해 피부/두피를 탈수로부터 보호) 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 스킨 케어 유익성을 제공한다.

피부과학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 담체가 또한 본 발명의 스킨 케어 제품(제형)에 혼입될 수 있고, 이는 당업계에서 통상적으로 사용되는 임의의 담체일 수 있다. 이의 예는 물, 저급 알코올, 고급 알코올, 다가 알코올, 단당류, 이당류, 다당류, 탄화수소 오일, 유지, 왁스, 지방산, 실리콘 오일, 비이온성 계면활성제, 이온성 계면활성제, 실리콘 계면활성제, 및 이러한 담체들의 물-기반 혼합물 및 에멀젼-기반 혼합물을 포함한다.

용어 "피부과학적으로 허용가능한" 또는 "피부과학적으로 허용가능한 담체" 또는 "스킨 케어용으로 허용가능한" 또는 "스킨 케어용으로 허용가능한 담체"는 바람직하지 않은 생물학적 효과 또는 제형의 다른 성분과의 원치 않는 상호작용를 야기하지 않으면서 피부과학적 또는 스킨 케어 제형에 혼입될 수 있는 화합물 또는 조성물을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "담체" 또는 "비히클"은 국소 적용 조성물에 혼입하기에 적합한 담체 물질을 지칭한다. 본원에서 유용한 담체 및 비히클은 당업계에 공지된 임의의 그러한 물질을 포함하며, 이는 비독성이고 그것이 함유된 제형의 다른 성분과 유해한 방식으로 상호작용하지 않는다.

용어 "수성"은 피부 또는 점막 조직에 적용한 후 수분을 함유하게 되거나 물을 함유하는 제형을 지칭한다.

본원에 개시된 스킨 케어 제품은 스킨 케어 사용에 대해 공지되거나 달리 효과적인 하나 이상의 피부과학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 성분을 추가로 포함할 수 있으며, 단, 선택 성분은 본원에 개시된 필수 성분과 물리적 및 화학적으로 상용성이거나, 제품의 안정성, 미적 특성, 또는 성능을 과도하게 손상시키지 않는다. 이러한 선택 성분의 비제한적인 예는 문헌[International Skin Care Ingredient Dictionary, Ninth Edition, 2002], 및 문헌[CTFA Skin Care Ingredient Handbook, Tenth Edition, 2004]에 개시되어 있다.

일 양태에서, 피부과학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 성분은 약 10 중량% 내지 약 99.9 중량%, 대안적으로 약 50 중량% 내지 약 95 중량%, 그리고 대안적으로 약 75 중량% 내지 약 95 중량%의 피부과학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 피부과학적으로 허용가능한 담체이다.

조성물(들)과 함께 사용하기에 적합한 담체는 예를 들어 무스, 토닉, 젤, 피부 보습제 및 로션의 제형에 사용되는 것들을 포함할 수 있다. 담체는 물; 유기 오일; 실리콘, 예컨대 휘발성 실리콘, 아미노 또는 비-아미노 실리콘 검 또는 오일 및 이들의 혼합물; 광유; 식물유, 예컨대 올리브유, 피마자유, 평지씨유, 코코넛유, 맥아유, 스위트 아몬드유, 아보카도유, 마카다미아유, 살구유, 홍화유, 캔들너트유, 폴스 플랙스(false flax)유, 타마누유, 레몬유 및 이들의 혼합물; 왁스; 및 유기 화합물, 예컨대 C2-C10 알칸, 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 휘발성 유기 C1-C12 알코올, C1-C20 산과 C1-C8 알코올의 에스테르, 예컨대 메틸 아세테이트, 부틸 아세테이트, 에틸 아세테이트 및 이소프로필 미리스테이트, 디메톡시에탄, 디에톡시에탄, C10-C30 지방 알코올, 예컨대 라우릴 알코올, 세틸 알코올, 스테아릴 알코올 및 베헤닐 알코올; C10-C30 지방산, 예컨대 라우르산 및 스테아르산; C10-C30 지방 아미드, 예컨대 라우릭 디에탄올아미드; C10-C30 지방 알킬 에스테르, 예컨대 C10-C30 지방 알킬 벤조에이트; 히드록시프로필셀룰로오스 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 일 양태에서, 담체는 물, 지방 알코올, 휘발성 유기 알코올 및 이들의 혼합물을 포함한다. 다른 담체가 당업자에 의해 제형화될 수 있다.

본원에 개시된 스킨 케어 제품은 조성물(들)에 원하는 점도를 제공하는 것을 돕기 위해 약 0.1% 내지 약 10%, 그리고 대안적으로 약 0.2% 내지 약 5.0%의 젤화제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 선택적 젤화제의 비제한적인 예는 가교결합 카르복실산 중합체; 미중화 가교결합 카르복실산 중합체; 미중화 개질된 가교결합 카르복실산 중합체; 가교결합 에틸렌/말레산 무수물 공중합체; 미중화 가교결합 에틸렌/말레산 무수물 공중합체(예를 들어, Monsanto로부터 구매가능한 EMA 81); 미중화 가교결합 알킬 에테르/아크릴레이트 공중합체(예를 들어, Allied Colloids로부터 구매가능한 SALCARE™ SC90); 폴리아크릴산나트륨, 광유, 및 PEG-1 트리데세스-6의 미중화 가교결합 공중합체(예를 들어, Allied Colloids로부터 구매가능한 SALCARE™ SC91); 메틸 비닐 에테르와 말레산 무수물의 미중화 가교결합 공중합체(예를 들어, International Specialty Products로부터 구매가능한 STABILEZE™ QM-PVM/MA 공중합체); 소수성으로 개질된 비이온성 셀룰로오스 중합체; 소수성으로 개질된 에톡실레이트 우레탄 중합체(예를 들어, Union Carbide로부터 구매가능한 알칼리 팽윤성 중합체의 UCARE™ Polyphobe 시리즈); 및 이들의 조합을 포함한다. 이와 관련하여, 용어 "미중화된"은 선택적 중합체 및 공중합체 젤화제 물질이 미중화 산 단량체를 함유함을 의미한다.

피부과학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 매질은 일반적으로 제품의 총 중량에 대하여 중량 기준으로 약 10 내지 약 90%의 비율로 지방 물질을 함유할 수 있으며, 여기서, 지방상은 하나 이상의 액체, 고체 또는 반고체 지방 물질을 함유한다. 지방 물질은 오일, 왁스, 검 및 소위 페이스트성 지방 물질을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 대안적으로, 본 제품은 유중수 또는 수중유 에멀젼과 같은 안정한 분산액의 형태일 수 있다. 추가로, 스킨 케어 제품은 항산화제, 방부제, 충전제, 계면활성제, UVA 및/또는 UVB 선스크린, 방향제, 증점제, 습윤제 및 음이온성, 비이온성 또는 양쪽성 중합체, 및 염료 또는 안료(착색제)를 포함하지만 이에 한정되지 않는 하나 이상의 통상적인 스킨 케어용 또는 피부과학적 첨가제 또는 보조제를 함유할 수 있다.

피부과학적으로 허용가능한 담체는 적어도 하나의 유화제, 적어도 하나의 계면활성제, 또는 이들의 임의의 조합을 함유하는 보습제 제형일 수 있다.

일 실시 형태에서, 스킨 케어 제품은 제1 스킨 케어 조성물 및 제2 스킨 케어 조성물을 포함하는 국소 투여용 제품이며, 여기서, 제1 스킨 케어 조성물은 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물로 이루어진 제1 활성제의 유효량을 포함하고, 제2 스킨 케어 조성물은 적어도 하나의 제2 활성제(예컨대 항비듬 활성제, 스킨 컨디셔닝제, 스킨 케어 활성 성분 물질)의 적어도 유효량을 포함한다.

스킨 케어 조성물 및 스킨 케어 제품은 선스크린제, 보습제, 휴멕턴트, 피부 유익제, 침적제, 예컨대 계면활성제, 폐색제(occlusive agent), 수분 장벽, 활택제, 연화제, 노화 방지제, 정전기 방지제, 연마제, 항미생물제, 컨디셔너, 각질 제거제, 방향제, 점도 부여제, 염, 지질, 인지질, 비타민, 거품 안정제, pH 조절제, 방부제, 현탁제, 실리콘 오일, 실리콘 유도체, 정유, 오일, 지방, 지방산, 지방산 에스테르, 지방 알코올, 왁스, 폴리올, 탄화수소 및 이들의 혼합물을 포함하는 스킨 케어 활성 성분 물질을 추가로 포함할 수 있다.

스킨 케어 조성물 또는 스킨 케어 제품에 포함될 수 있는 다른 성분은 제한 없이, 피부 질환의 치료 또는 예방, 스킨 케어 효과의 제공 또는 피부에의 보습 유익성의 제공을 위한 적어도 하나의 활성 성분, 예컨대 산화아연, 바셀린, 백색 바셀린, 광유, 대구 간유, 라놀린, 디메티콘, 경질 지방, 비타민 A, 알란토인, 칼라민, 카올린, 글리세린 또는 콜로이드성 오트밀 및 이들의 조합, 하나 이상의 천연 보습 인자(예컨대 세라마이드, 히알루론산, 글리세린, 스쿠알란, 아미노산, 콜레스테롤, 지방산, 트리글리세리드, 인지질, 글리코스핑고지질, 우레아, 리놀레산, 글리코 사미노글리칸, 뮤코다당류, 락트산나트륨 또는 소듐 피롤리돈 카르복실레이트 나트륨 등), 글리세리드, 살구씨유, 카놀라유, 스쿠알란, 스쿠알렌, 코코넛유, 옥수수유, 호호바유, 호호바 왁스, 레시틴, 올리브유, 홍화유, 참깨유, 시어 버터, 대두유, 스위트 아몬드유, 해바라기유, 티트리유, 시어 버터, 야자유, 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르, 왁스 에스테르, 지방산 및 오렌지유를 포함한다.

스킨 케어 제품에 일반적으로 사용되는 여러 가지 피부과학적으로 허용가능한 물질, 예컨대 피부 컨디셔닝제 및 피부 착색제가 본 발명의 스킨 케어 제품 내에 포함될 수 있다.

본원에서 정의되는 바와 같이, 피부 컨디셔닝제는 피부를 팽팽해지게 하는 수렴제; 죽은 피부 세포를 제거하는 각질 제거제; 매끄럽고 부드럽고 유연한 외관을 유지하는 데 도움이 되는 연화제; 피부 최상층의 수분 함량을 증가시키는 휴멕턴트; 피부 표면으로부터의 수분 증발을 지연시키는 폐색제; 건성 또는 손상 피부의 외관을 증강시키거나 벗겨짐을 줄이고 탄력을 회복시키는 기타 화합물을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 피부 컨디셔닝제는 당업계에 잘 알려져 있으며(예를 들어 Green 등의 국제 공개 제01/07009호 참조), 다양한 공급업체로부터 구매가능하다. 피부 컨디셔닝제의 적합한 예는 락토비온산, 글루콘산, 알파-히드록시산, 베타-히드록시산, 폴리올, 히알루론산, D,L-판테놀, 폴리살리실레이트, 비타민 A 팔미테이트, 비타민 E 아세테이트, 글리세린, 소르비톨, 실리콘, 실리콘 유도체, 라놀린, 천연 오일, 자일리톨, 푸코스, 람노스 및 트리글리세리드 에스테르를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 피부 컨디셔닝제는 폴리살리실레이트, 프로필렌 글리콜(CAS 번호 57-55-6, Dow Chemical, 미국 미시건주 미들랜드 소재), 글리세린(CAS 번호 56-81-5, Proctor & Gamble Co., 미국 오하이오주 신시내티 소재), 글리콜산(CAS 번호 79-14-1, DuPont Co., 미국 델라웨어주 윌밍턴 소재), 락트산(CAS 번호 50-21-5, Alfa Aesar, 미국 매사추세츠주 워드 힐 소재), 말산(CAS 번호 617-48-1, Alfa Aesar), 시트르산 (CAS 번호 77-92-9, Alfa Aesar), 타르타르산(CAS 번호 133-37-9, Alfa Aesar), 글루카르산(CAS 번호 87-73-0), 갈락타르산(CAS 번호 526-99-8), 3-히드록시발레르산(CAS 번호 10237-77-1), 살리실산(CAS 번호 69-72-7, Alfa Aesar) 및 1,3 프로판디올(CAS 번호 504-63-2, DuPont Co., 미국 델라웨어주 윌밍턴 소재)을 포함할 수 있다. 폴리살리실레이트는 본원에 참고로 포함된 White 등의 미국 특허 제4,855,483호에 기술된 방법에 의해 제조될 수 있다. 글루카르산은 문헌[Merbouh et al., Carbohydr. Res. 336:75-78 (2001)]에 기술된 방법을 사용하여 합성될 수 있다. 3-히드록시발레르산은 국제 공개 제02/012530호에 Bramucci에 의해 기술된 바와 같이 제조될 수 있다.

스킨 케어 조성물 및 스킨 케어 제품은 착색제/염료, 방향제, 활성제, 방부제, pH 조절제, 킬레이팅제 및 항산화제와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 스킨 케어 첨가제를 포함할 수 있다.

일 실시 형태에서, 스킨 케어 제품은 제1 스킨 케어 조성물 및 제2 스킨 케어 조성물을 포함하는 국소 투여용 제품이며, 여기서, 제1 스킨 케어 조성물은 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물로 이루어진 제1 활성제의 유효량을 포함하고, 제2 스킨 케어 조성물은 항비듬 활성제로부터 선택되는 적어도 하나의 제2 활성제의 적어도 유효량을 포함한다. 이러한 항비듬 활성제의 예는 각질 용해제, 예컨대 다양한 형태의 살리실산 및 황, 각질화 조절제, 예컨대 아연 피리티온, 피리딘티온 염, 트리할로카르브아미드, 트리클로산, 아졸 화합물, 항진균 중합체, 알란토인, 스테로이드, 예컨대 국소 코르티코스테로이드, 타르 또는 폴리타르(콜타르), 운데실렌산, 푸마르산, 알릴아민 및 이들의 혼합물, 시클로피록스, 옥토피록스, 피록톤 올아민, 클로베타솔 프로피오네이트, 베타메타손 발레레이트, 티트리 오일, 백리향과 개박하의 혼합 오일, 국소 항진균제, 예컨대 황화셀레늄, 이미다졸(예를 들어 케토코나졸), 히드록시피리돈(예를 들어 시클로피록스), 자연요법제, 예컨대 멜라레우카(Melaleuca) 종 오일, 알로에 베라 및 프로바이오틱 미생물을 포함한다. (문헌[Indian J. Dermatol, 2010 Apr-Jun; 55(2): 130-134]).

일 실시 형태에서, 스킨 케어 제품은 제1 스킨 케어 조성물 및 제2 스킨 케어 조성물을 포함하는 국소 투여용 제품이며, 여기서, 제1 스킨 케어 조성물은 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물로 이루어진 제1 활성제의 유효량을 포함하고, 제2 스킨 케어 조성물은 항비듬 활성제로부터 선택되는 적어도 하나의 제2 활성제의 적어도 유효량을 포함하며, 제1 스킨 케어 조성물은 젤, 에멀젼, 하이드로젤, 루즈 또는 콤팩트 파우더, 리퀴드 현탁액 또는 용액, 또는 스프레이 용액으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 형태로 제형화된다.

본원에 기술된 스킨 케어 조성물 및 스킨 케어 제품은 또한 비듬 상태를 예방하거나 감소시키기 위한 키트와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 하나 이상의 스킨 케어 유익성을 제공하기 위한 키트의 일부일 수 있다.

일 양태에서, 키트는 비듬 상태의 치료를 위한 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것에 대한 서면 설명서를 포함하는 키트이다.

일 양태에서, 키트는 필요로 하는 대상체의 비듬 상태의 치료를 위한 스킨 케어 제품(여기서, 상기 스킨 케어 제품은 적어도 하나의 야로위아 속 미생물을 포함함), 및 필요로 하는 대상체에게 상기 스킨 케어 제품을 투여하는 것에 대한 서면 설명서를 포함하는 키트이다.

두피 질환의 미생물 치료 방법

필요로 하는 대상체에서 두피 질환을 치료하는 방법이 본원에 추가로 제공되며, 상기 방법은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

일 양태에서, 미생물은 국소 투여된다.

일 양태에서, 미생물은 야로위아 리폴리티카 ATCC 20362, 야로위아 리폴리티카 ATCC 9773, 야로위아 리폴리티카 ATCC 18942, 야로위아 리폴리티카 ATCC 20177, 야로위아 리폴리티카 CBS2073, 야로위아 리폴리티카 Phaff#50-47, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 야로위아 속 미생물이다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피 질환을 치료하는 방법이며, 상기 방법은 야로위아 리폴리티카 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

본원에 기술된 스킨 케어 조성물 및 스킨 케어 제품은 두피 질환을 치료하는 방법에 사용될 수 있다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피 질환을 치료하는 방법이며, 상기 방법은 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 스킨 케어 조성물은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하며, 상기 조성물은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료한다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피 질환을 치료하는 방법이며, 상기 방법은 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 스킨 케어 조성물은 유효량의 야로위아 리폴리티카 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하며, 상기 조성물은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료한다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피 질환을 치료하는 방법이며, 상기 방법은 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 제품을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 스킨 케어 제품은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하며, 상기 스킨 케어 제품은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료한다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피 질환을 치료하는 방법이며, 상기 방법은 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 제품을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 스킨 케어 제품은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 리폴리티카 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하며, 상기 스킨 케어 제품은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료한다.

일 양태에서, 스킨 케어 조성물 또는 스킨 케어 제품은 국소 투여된다.

비듬 상태를 치료 및/또는 감소시키는 방법.

필요로 하는 대상체에서 비듬 상태를 치료하는 방법이 본원에 추가로 제공되며, 상기 방법은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법이며, 상기 방법은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 리폴리티카 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

일 양태에서, 미생물은 국소 투여된다.

일 양태에서, 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 야로위아 리폴리티카 ATCC 20362, 야로위아 리폴리티카 ATCC 9773, 야로위아 리폴리티카 ATCC 18942, 야로위아 리폴리티카 ATCC 20177, 야로위아 리폴리티카 CBS2073, 야로위아 리폴리티카 Phaff#50-47, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 야로위아 속 미생물이다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법이며, 상기 방법은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 적어도 하나의 야로위아 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 단일 조성물로 제형화된다.

일 양태에서, 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 국소 투여된다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법이며, 상기 방법은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 단일 조성물로 제형화되며, 조성물은 대상체의 피부 또는 두피에 투여된다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법이며, 상기 방법은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 단일 조성물로 제형화되며, 조성물은 스킨 케어 부형제, 부티르산, 글루코스, 글리코겐, 마그네슘 아스코르빌 포스페이트, 세틸 알코올, 디메티콘, 이소프로필 미리스테이트, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 쿼터늄(Quaternium)-52, 에탄올 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물을 추가로 포함한다.

본원에 기술된 스킨 케어 조성물 및 스킨 케어 제품은 비듬 상태를 치료하는 방법에 사용될 수 있다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법이며, 상기 방법은 비듬 상태의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 스킨 케어 조성물은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하며, 상기 조성물은 상기 비듬 상태를 감소시키고/시키거나 치료한다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법이며, 상기 방법은 비듬 상태의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 제품을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 스킨 케어 조성물은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하며, 상기 조성물은 상기 비듬 상태를 감소시키고/시키거나 치료한다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법이며, 상기 방법은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 말라세지아 종의 성장을 감소시킨다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법이며, 상기 방법은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 말라세지아 종의 생물막을 제거한다.

일 실시 형태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법이며, 상기 방법은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 말라세지아 종의 생물막 형성을 방지하거나 감소시킨다.

일 양태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법이며, 상기 방법은 본원에 기술된 스킨 케어 조성물을 포함하는 스킨 케어 제품을 국소 투여하는 단계를 포함한다.

일 양태에서, 방법은 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법이며, 상기 방법은 본원에 기술된 스킨 케어 조성물을 포함하는 스킨 케어 제품을 국소 투여하는 단계를 포함하고, 스킨 케어 제품은 상기 스킨 케어 제품의 총 중량에 대하여 중량 기준으로 적어도 1%, 2%, 3%, 4% 내지 5%의 상기 스킨 케어 조성물을 포함하는 로션, 세럼, 젤리, 크림, 젤, 에멀젼, 고형 화장품, 마스크, 패치 및 스틱으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일 양태에서, 비듬 상태를 치료하기 위한 본원에 기술된 방법은 말라세지아 종을 억제한다.

일 양태에서, 기술된 방법은, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물이 사피엔산(C16:1 시스-6), 팔미트산(C16:0), 미리스트산(C14:0), 페트로셀린산(C18:1 시스-6), 펜타데실산(C15:0), 스테아르산(C18:0), 라우르산(C12:0), 올레산, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 지질을 분해하는, 방법이다.

일반 정의

모든 인용된 특허 및 비-특허 문헌의 개시 내용은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.

본 발명에서는 많은 용어 및 약어가 사용된다. 구체적으로 달리 언급되지 않는 한, 다음 정의가 적용된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 본 발명의 요소 또는 구성요소 앞의 "a", "an" 및 "the"는 이 요소 또는 구성 요소의 경우(즉, 출현)의 수와 관련하여 비제한적인 것으로 의도된다. 따라서, 단수형("a", "an" 및 "the")은 하나 또는 적어도 하나를 포함하는 것으로 파악되어야 하며, 요소 또는 성분의 단수 단어 형태는 그 수가 명백히 단수임을 의미하지 않는 한 복수형도 포함한다.

양, 농도 또는 기타 값 또는 파라미터가 범위, 바람직한 범위 또는 바람직한 상한치와 바람직한 하한치의 목록으로 제공되는 경우, 이는 범위가 개별적으로 개시되는지 여부에 관계 없이 임의의 쌍의 임의의 상한 범위 또는 바람직한 값 및 임의의 하한 범위 또는 바람직한 값으로 형성된 모든 범위를 구체적으로 개시하는 것으로 이해되어야 한다. 수치의 범위가 본원에서 언급되는 경우, 달리 언급되지 않는 한, 범위는 이의 종점, 및 그 범위 내의 모든 정수 및 분수를 포함하도록 의도된다. 범위를 정의할 때 언급된 특정 값으로 그 범주를 한정하고자 하는 것은 아니다.

달리 명시되지 않는 한, 본 출원에 명시된 다양한 범위의 수치의 사용은 언급된 범위 내의 최소값과 최대값 둘 다 앞에 "약"이라는 용어가 있는 것처럼 근사치로 표시된다. 이러한 방식으로, 언급된 범위 위아래의 약간의 변동을 사용하여 범위 내 값과 실질적으로 동일한 결과를 달성할 수 있다. 또한, 이러한 범위의 개시는 최소값과 최대값 사이의 각각의 모든 값을 포함하는 연속적인 범위로 의도된 것이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 사용되는 성분 또는 반응물의 양을 수식하는 용어 "약"은 예를 들어, 실제 농축물 또는 사용 용액을 제조하는 데 사용되는 전형적인 측정 및 액체 취급 절차를 통해; 이러한 절차에서의 부주의한 오류를 통해; 조성물을 제조하거나 방법을 수행하는 데 사용되는 성분의 제조, 공급원 또는 순도의 차이를 통해; 및 기타 등등을 통해 발생할 수 있는 수치적 양의 변동을 지칭한다. 용어 "약"은 또한 특정 초기 혼합물로부터 생성되는 조성물에 대한 상이한 평형 조건으로 인해 상이해지는 양을 포함한다. 용어 "약"에 의해 수식되는지 여부에 관계 없이 청구범위는 양에 대한 등가물을 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "투여하다" 또는 "투여하는"은 하나 이상의 미생물(미생물 주), 스킨 케어 조성물(들), 스킨 케어 제형(들) 및/또는 스킨 케어 제품(들)을 두피 질환의 치료를 위해 필요로 하는 대상체에게 도입하는 작용을 의미한다.

하나 이상의 미생물(미생물 주), 스킨 케어 조성물(들), 스킨 케어 제형(들) 및/또는 스킨 케어 제품(들)을 대상체에게 투여하는 것은 하나 이상의 미생물(미생물 주), 스킨 케어 조성물(들), 스킨 케어 제형(들) 및/또는 스킨 케어 제품(들)을 두피, 피부 표면, 및 시험관 내 또는 생체 내 피부 세포에 적용하거나 도입하는 것을 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "생물학적 오염물질"은 미생물, 포자, 바이러스, 프리온 및 이들의 혼합물을 포함하지만 이에 한정되지 않는 하나 이상의 원치 않는 및/또는 병원성 생물학적 엔티티를 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "포함하는"은 청구범위에서 언급된 바와 같은 기술된 특징, 정수, 단계 또는 구성 요소의 존재를 의미하지만, 하나 이상의 다른 특징, 정수, 단계, 구성 요소 또는 이들의 군의 존재 또는 부가를 배제하지 않는다. 용어 "포함하는"은 용어 "~으로 본질적으로 이루어진" 및 "~으로 이루어진" 에 의해 포괄되는 실시 형태를 포함하도록 의도된다. 유사하게, 용어 "~으로 본질적으로 이루어진"은 용어 "~으로 이루어진"에 의해 포괄되는 실시 형태를 포함하도록 의도된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "실시 형태" 또는 "개시 내용"은 제한하는 것을 의미하는 것이 아니라, 청구범위에 정의되거나 본원에 설명된 임의의 실시 형태에 일반적으로 적용된다. 이러한 용어는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "부형제"는 제형에서 활성 성분의 담체로 사용되는 불활성 물질을 지칭한다. 부형제는 활성 성분의 보관 안정성과 같이, 제형에서 활성 성분을 안정화시키는 데 사용될 수 있다. 또한 부형제는 때때로 활성 성분을 포함하는 제형의 증량에 사용된다. "활성 성분"은 본원에 개시된 바와 같은 스킨 케어 유익제를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량"은 원하는 효과를 얻기에 충분한 양을 지칭한다. 원하는 효과는 비듬 상태의 예방, 감소 및/또는 치료와 같은 두피 질환의 예방, 감소 및/또는 치료를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "예방하다", "예방하는", "예방" 및 이들의 문법적 변형은, 부분적으로 또는 전적으로, 질환 또는 병태(예컨대 두피 질환) 및/또는 그의 수반되는 증상 중 하나 이상의 발병 또는 재발을 지연시키거나 방지하거나, 또는 대상체가 질환 또는 병태를 획득 또는 재획득하는 것을 막거나, 또는 대상체가 질환 또는 병태 또는 그의 수반되는 증상 중 하나 이상을 획득 또는 재획득할 위험을 감소시키는 방법을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 특정한 특질, 특성, 특징, 생물학적 과정, 또는 현상과 관련하여 용어 "감소시키는", "감소시키다" 및 이들의 문법적 변형은

상기 특정한 특질, 특성, 특징, 생물학적 과정, 또는 현상의 감소를 지칭한다. 상기 특질, 특성, 특징, 생물학적 과정, 또는 현상은 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 또는 100% 넘게 감소될 수 있다.

용어 "중량%", "중량 백분율(wt%)" 및 "중량-중량 백분율(% w/w)"은 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 중량%는 조성물, 혼합물, 용액 또는 제품 중에 포함된 물질의 질량 기준 백분율을 지칭한다.

용어 "16S rRNA" 또는 "16S 리보솜 RNA"는 원핵생물 리보솜의 작은 서브유닛을 구성하는 rRNA를 의미한다. 박테리아에서 이 서열은 조작 분류 단위(operational taxonomic unit)를 확인하고 특성화하는 데 사용될 수 있다.

용어 "ITS" 또는 "내부 전사 스페이서"는 성숙 동안 절제되고 분해되는 리보솜 전사체 내의 영역이다. 이들의 서열은 진균 또는 효모의 계통발생학적 분석 및/또는 확인에 사용될 수 있다.

모이스처라이저, 로션 또는 바디 로션이라는 용어는 피부를 수화시키거나 피부의 수분 손실을 감소시키는 스킨 케어 응용에서의 일차적인 유익성을 갖는, 오일과 물의 낮은 점도 내지 중간 점도의 에멀젼(가장 흔히는 수중유이지만 가능하게는 유중수)을 지칭한다. 거의 모든 모이스처라이저는 연화제, 폐색제 및 휴멕턴트의 조합을 함유한다. 주로 지질과 오일인 연화제는 피부를 수화시키고 피부의 외관을 개선시킨다. 매우 다양한 적합한 연화제가 알려져 있고 본원에서 사용될 수 있다(문헌[International Skin Care Ingredient Dictionary and Handbook, eds. Wenninger and McEwen, pp. 1656-61, 1626, 및 1654-55 (The Skin care, Toiletry, and Fragrance Assoc., Washington, D.C., 7th Edition, 1997)]("ICI Handbook"으로 칭해짐)은 적합한 물질의 많은 예를 포함한다). 바셀린, 라놀린 및 밀랍과 같은 폐색제는 피부에 소수성 장벽을 생성하여 경피 수분 손실을 감소시킨다. 글리세롤 및 우레아와 같은 휴멕턴트는 외부 환경으로부터 물을 끌어들이고 진피로부터 표피 내로의 수분 흡수를 향상시키는 것이 가능하다. 또한, 모이스처라이저 제형은 에멀젼의 안정성을 유지하기 위해 유화제를 함유할 수 있고, 원하는 점도 및 피부 느낌을 얻기 위해 증점제를 사용할 수 있다. 방향제, 염료, 방부제, 치료제, 단백질 및 안정화제와 같은 매우 다양한 기타 성분이 일반적으로 다른 소비자 선호 속성을 위하여 첨가된다.

기준 서열과 관련하여 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "서열 동일성 퍼센트(%)" 또는 "서열 유사성 퍼센트(%)"는 기준 폴리뉴클레오티드 서열과 후보 서열의 최적 정렬 및 갭 도입(필요한 경우)에 의해 최대 서열 동일성 퍼센트를 달성한 후 기준 폴리뉴클레오티드 서열의 잔기와 동일한 후보 서열의 뉴클레오티드 잔기의 백분율로 정의된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 미생물 "주"는 성장하거나 증식할 때 유전적으로 변하지 않은 채로 남아 있는 미생물(예컨대 박테리아 또는 진균)을 지칭한다. 다수의 동일한 미생물이 포함된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "생물학적으로 순수한 주"는 주의 복제를 방해하거나 정상적인 기술에 의해 검출할 수 있기에 충분한 양으로 다른 미생물 주를 함유하지 않는 주를 의미한다. 본원에 기술된 유기체 및 배양물과 관련하여 사용될 때 "단리된"은 생물학적으로 순수한 주뿐만 아니라 자연에서 발견되는 것 이외의 성장 또는 유지된 유기체의 임의의 배양물도 포함한다.

일 양태에서 본원에 기술된 피부 세포는 인간 또는 동물 피부 세포와 같은 포유류 피부 세포이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "서열 동일성" 또는 "서열 유사성"은 2개의 폴리뉴클레오티드 서열, 후보 서열 및 기준 서열이 후보 서열의 길이에 걸쳐 동일하거나(즉, 100%의 서열 동일성) 유사함(즉, 뉴클레오티드 대 뉴클레오티드 기준으로)을 의미한다. 후보 서열과 기준 서열의 비교에서, 후보 서열은 상기 두 서열의 최적 정렬을 위해 기준 서열(부가 또는 결실을 포함하지 않음)과 비교하여 부가 또는 결실(즉, 갭)을 포함할 수 있다. 서열 동일성을 결정하기 위한 서열들의 최적 정렬은 ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR)과 같은 당업계에 공지된 임의의 수의 공개적으로 이용가능한 국소 정렬 알고리즘을 사용하거나 검사에 의해 수행될 수 있다.

본 명세서 전체에 걸쳐 주어진 모든 최대 수치 제한은, 모든 하한 수치 제한이 본원에 명백하게 기재된 것처럼, 이러한 하한 수치 제한을 포함하려는 것이다. 본 명세서 전체에 걸쳐 주어진 모든 최소 수치 제한은, 더 큰 모든 수치 제한이 본원에 명백하게 기재된 것처럼, 이러한 더 큰 수치 제한을 포함할 것이다.

본 명세서 전체에 걸쳐 주어진 모든 수치 범위는, 더 넓은 수치 범위 내에 있는 더 좁은 모든 수치 범위가 본원에 명백하게 기재된 것처럼, 이러한 더 좁은 수치 범위를 포함할 것이다.

본원에 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명이 관련된 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.

본원에 개시된 조성물 및 방법의 비제한적인 예는 다음을 포함한다:

1. 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물로서, 상기 조성물은 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하고, 상기 조성물은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료하는, 스킨 케어 조성물.

2. 실시 형태 1에 있어서, 두피 질환은 두피의 비듬 상태(지루성 피부염), 두피의 에코플로라 불균형, 두피의 불편감, 전풍, 건성 피부, 자극받은 피부, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 스킨 케어 조성물.

3. 실시 형태 1에 있어서, 하나 이상의 항비듬 활성제를 추가로 포함하는, 스킨 케어 조성물.

4. 실시 형태 1에 있어서, 조성물은 사피엔산(C16:1 시스- 6), 팔미트산(C16:0), 미리스트산(C14:0), 페트로셀린산(C18:1 시스-6), 펜타데실산(C15:0), 스테아르산(C18:0), 라우르산(C12:0), 올레산, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 지질을 분해하는, 스킨 케어 조성물.

5. 실시 형태 1에 있어서, 조성물은 말라세지아 종의 성장을 감소시키는, 스킨 케어 조성물.

6. 제1항에 있어서, 조성물은 말라세지아 종의 생물막을 제거하는, 스킨 케어 조성물.

7. 제1항에 있어서, 조성물은 말라세지아 종의 생물막 형성을 방지하거나 감소시키는, 스킨 케어 조성물.

8. 실시 형태 1에 있어서, 부형제, 방부제, pH 조절제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추가 화합물을 추가로 포함하는, 스킨 케어 조성물.

9. 실시 형태 1에 있어서, 야로위아 리폴리티카 ATCC 20362, 야로위아 리폴리티카 ATCC 9773, 야로위아 리폴리티카 ATCC 18942, 야로위아 리폴리티카 ATCC 20177, 야로위아 리폴리티카 CBS2073, 야로위아 리폴리티카 Phaff#50-47, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 야로위아 속 미생물을 포함하는, 스킨 케어 조성물.

10. 유효량의 임의의 전술한 실시 형태의 스킨 케어 조성물의 스킨 케어 제품에서의 용도.

11. 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 스킨 케어 조성물의 유효량 및 하나 이상의 피부과학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 성분을 포함하는 스킨 케어 제품.

11b. 실시 형태 11에 있어서, 국소 투여용으로 제형화된, 스킨 케어 제품.

12. 실시 형태 11에 있어서, 상기 스킨 케어 조성물의 유효량이 상기 스킨 케어 제품의 총 중량에 대하여 중량 기준으로 적어도 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% 내지 10%인, 스킨 케어 제품.

12b. 제1 스킨 케어 조성물 및 제2 스킨 케어 조성물을 포함하는 국소 투여용 스킨 케어 제품으로서, 제1 스킨 케어 조성물은 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물로 이루어진 제1 활성제의 유효량을 포함하고, 제2 스킨 케어 조성물은 항비듬 활성제로부터 선택되는 적어도 하나의 제2 활성제의 적어도 유효량을 포함하는, 스킨 케어 제품.

12c. 실시 형태 10b에 있어서, 제1 스킨 케어 조성물은 젤, 에멀젼, 하이드로젤, 루즈 또는 콤팩트 파우더, 리퀴드 현탁액 또는 용액, 또는 스프레이 용액으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 형태로 제형화되는, 스킨 케어 제품.

12d. 실시 형태 10b에 있어서, 상기 적어도 하나의 제2 조성물은 헤어 로션, 샴푸, 헤어 컨디셔너, 디탱글러(detangler), 헤어 크림 또는 젤, 스타일링 래커, 헤어세팅 로션, 트리트먼트 로션, 염색 조성물, 헤어-강화(restructuring) 로션, 퍼머 조성물, 탈모 방지용 로션 또는 젤, 구충 샴푸 또는 약용 샴푸, 및 두피 케어 제품으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 구성원을 포함하는, 스킨 케어 제품.

13. 필요로 하는 대상체에서 두피 질환을 치료하는 방법으로서, 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

13b. 필요로 하는 대상체에서 두피 질환을 치료하는 방법으로서, 유효량의 적어도 하나의 야로위아 리폴리티카 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법. 13c. 필요로 하는 대상체에서 두피 질환을 치료하는 방법으로서, 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하는 스킨 케어 제품을 상기 대상체에게 국소 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

14. 실시 형태 13에 있어서, 두피 질환은 두피의 비듬 상태(지루성 피부염), 두피의 에코플로라 불균형, 두피의 불편감, 전풍, 건성 피부, 자극받은 피부, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.

15. 실시 형태 13에 있어서, 상기 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 대사산물은 국소 투여되는, 방법.

15B. 실시 형태 13c에 있어서, 상기 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 국소 투여되는, 방법.

16. 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법으로서, 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

16b. 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법으로서, 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하는 스킨 케어 제품을 상기 대상체에게 국소 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

17. 실시 형태 16에 있어서, 상기 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 대사산물은 국소 투여되는, 방법.

18. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 단일 조성물로 제형화되는, 방법.

18b. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물, 및/또는 이의 대사 산물은 적어도 하나 이상의 피부과학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 성분을 추가로 포함하는 조성물의 형태인, 방법.

19. 실시 형태 16에 있어서, 조성물은 대상체의 피부 또는 두피에 투여되는, 방법.

20. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물은 야로위아 리폴리티카 ATCC 20362, 야로위아 리폴리티카 ATCC 9773, 야로위아 리폴리티카 ATCC 18942, 야로위아 리폴리티카 ATCC 20177, 야로위아 리폴리티카 CBS2073, 야로위아 리폴리티카 Phaff#50-47, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.

21. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 말라세지아 종을 억제하는, 방법.

21b. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 말라세지아 종의 성장을 감소시키는, 방법.

21c. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물의 분획은 말라세지아 종의 성장을 감소시키는, 방법.

21d. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물의 세포 용해물은 말라세지아 종의 성장을 감소시키는, 방법.

1921e. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물의 발효물은 말라세지아 종의 성장을 감소시키는, 방법.

21f. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물의 대사산물은 말라세지아 종의 성장을 감소시키는, 방법.

22. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 말라세지아 종의 생물막을 제거하는, 방법.

22b. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물의 분획은 말라세지아 종의 생물막을 제거하는, 방법.

22c. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물의 세포 용해물은 말라세지아 종의 생물막을 제거하는, 방법.

22d. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물의 발효물은 말라세지아 종의 생물막을 제거하는, 방법.

22e. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물의 대사산물은 말라세지아 종의 생물막을 제거하는, 방법.

23. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 말라세지아 종의 생물막 형성을 방지하거나 감소시키는, 방법.

23b. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물의 분획은 말라세지아 종의 생물막 형성을 방지하거나 감소시키는, 방법.

23c. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물의 세포 용해물은 말라세지아 종의 생물막 형성을 방지하거나 감소시키는, 방법.

23d. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물의 발효물은 말라세지아 종의 생물막 형성을 방지하거나 감소시키는, 방법.

23e. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물의 대사산물은 말라세지아 종의 생물막 형성을 방지하거나 감소시키는, 방법.

24. 실시 형태 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 사피엔산(C16:1 시스-6), 팔미트산(C16:0), 미리스트산(C14:0), 페트로셀린산(C18:1 시스-6), 펜타데실산(C15:0), 스테아르산(C18:0), 라우르산(C12:0), 올레산, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 지질을 분해하는, 방법.

25. 실시 형태 16 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 스킨 케어 제품으로 투여되며, 상기 스킨 케어 제품은 상기 스킨 케어 제품의 총 중량에 대하여 중량 기준으로 적어도 1%, 2%, 3%, 4% 내지 5%의 상기 스킨 케어 조성물을 포함하는 로션, 세럼, 젤리, 크림, 젤, 에멀젼, 마스크, 패치 또는 스틱인, 방법.

26. 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법으로서, 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 스킨 케어 조성물을 포함하는 스킨 케어 제품을 상기 대상체에게 국소 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

27. 제26항에 있어서, 스킨 케어 제품은 상기 스킨 케어 제품의 총 중량에 대하여 중량 기준으로 적어도 1%, 2%, 3%, 4% 내지 5%의 상기 스킨 케어 조성물을 포함하는 로션, 세럼, 젤리, 크림, 젤, 에멀젼, 고형 화장품, 마스크, 패치 및 스틱으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.

28. 필요로 하는 대상체에서 두피의 비듬 상태를 치료하고/하거나 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 제1 미용 활성제 및 유효량의 적어도 하나의 제2 미용 활성제를 투여하는 단계를 포함하며, 제1 미용 활성제는 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물로 이루어진, 방법.

29. 실시 형태 28에 있어서, 제1 및 제2 미용 활성제는 대상체의 피부 또는 두피에 투여되는, 방법.

30. 실시 형태 28에 있어서, 제1 미용 활성제 및 상기 적어도 하나의 제2 미용 활성제는 단일 조성물로 제형화되는, 방법.

31. 실시 형태 28에 있어서, 제1 미용 활성제 및 상기 적어도 하나의 제2 미용 활성제는 별개의 조성물로 제형화되는, 방법.

32. 실시 형태 28에 있어서, 상기 적어도 하나의 제2 미용 활성제는 적어도 하나의 항비듬 활성제를 포함하는, 방법.

33. 실시 형태 28에 있어서, 상기 적어도 하나의 제2 미용 활성제는 아연 피리딘티온, 살리실산, 이황화셀레늄, 백리향과 개박하의 혼합 오일, 옥토피록스 및 프로바이오틱 미생물로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 구성원을 포함하는, 것.

34. 28에 있어서, 상기 적어도 하나의 제2 미용 활성제는, 각질 용해제, 예컨대 다양한 형태의 살리실산 및 황, 각질화 조절제, 예컨대 아연 피리티온, 피리딘티온 염, 트리할로카르브아미드, 트리클로산, 아졸 화합물, 항진균 중합체, 알란토인, 스테로이드, 예컨대 국소 코르티코스테로이드, 타르 또는 폴리타르(콜타르), 운데실렌산, 푸마르산, 알릴아민 및 이들의 혼합물, 시클로피록스, 옥토피록스, 피록톤 올아민, 클로베타솔 프로피오네이트, 베타메타손 발레레이트, 티트리 오일, 백리향과 개박하의 혼합 오일, 국소 항진균제, 예컨대 황화셀레늄, 이미다졸(예를 들어 케토코나졸), 히드록시피리돈(예를 들어 시클로피록스), 자연요법제, 예컨대 멜라레우카 종 오일, 알로에 베라 및 프로바이오틱 미생물로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 구성원을 포함하는, 방법.

35. 실시 형태 16에 있어서, 두피의 비듬 상태는 다음과 조합된 비듬을 포함하는, 방법: 두피의 건조, 두피의 과지루, 두피의 불균형한 에코플로라, 소양증, 염증, 또는 두피의 불균형한 장벽 기능.

36. 비듬 상태를 치료하기 위한 미용 조성물 또는 피부과학적 조성물을 제조하는 방법으로서, 유효량의 적어도 하나의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물, 및/또는 이의 분획을 적어도 하나의 미용 부형제 또는 피부과학적 부형제와 조합하는 단계를 포함하는, 방법.

37. 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물로서, 상기 조성물은 야로위아 세포의 발효물을 포함하며, 상기 조성물은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료하는, 스킨 케어 조성물.

38. 실시 형태 37에 있어서, 야로위아 세포의 전부 또는 실질적으로 전부가 발효물로부터 제거된, 스킨 케어 조성물.

39. 실시 형태 37에 있어서, 발효물은 배양 상청액인, 조성물.

40. 실시 형태 37에 있어서, 하나 이상의 피부과학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 성분을 추가로 포함하는, 조성물.

41. 실시 형태 37 내지 40 중 어느 하나의 스킨 케어 조성물을 포함하는 스킨 케어 제품.

42. 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 야로위아 발효물.

43. 실시 형태 36에 따라 사용하기 위한 야로위아 발효물로서, 야로위아 세포의 전부 또는 실질적으로 전부가 상기 발효물로부터 제거된, 야로위아 발효물.

44. 실시 형태 36에 따라 사용하기 위한 야로위아 발효물로서, 상기 발효물은 배양 상청액인, 야로위아 발효물.

45. 실시 형태 42 내지 44 중 어느 하나의 발효물을 포함하는 스킨 케어 제품.

46. 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물로서, 상기 조성물은 야로위아 세포의 대사산물을 포함하며, 상기 대사산물은 야로위아 미생물의 대사로부터 유래되고 또한 상기 두피 질환의 치료에 효능이 있으며, 상기 조성물은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료하는, 스킨 케어 조성물.

47. 실시 형태 40에 있어서, 하나 이상의 피부과학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 성분을 추가로 포함하는, 스킨 케어 조성물.

48. 실시 형태 46~47 중 어느 하나의 스킨 케어 조성물을 포함하는 스킨 케어 제품.

49. 두피 질환의 치료에 사용하기 위한 야로위아의 대사산물로서, 상기 대사산물은 야로위아 미생물의 대사로부터 유래되고 또한 상기 두피 질환의 치료에 효능이 있는, 야로위아의 대사산물.

실시예

다음 실시예들에서, 달리 언급되지 않는 한, 부(parts) 및 백분율은 중량 기준이고 도(degree)는 섭씨이다. 이들 실시예는 본 발명의 실시 형태들을 나타내는 한편 단지 예시로 제공되는 것임을 이해해야 한다. 상기 논의 및 이들 실시예로부터, 당업자는 다양한 용도 및 조건에 맞도록 본 발명을 다양하게 변화 및 변형시킬 수 있다. 이러한 변형도 첨부된 청구범위의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다.

본 명세서에서 하기 약어는 하기와 같이 측정 단위, 기술, 특성, 또는 화합물에 상응한다: "sec" 또는 "s"는 초를 의미하고, "min"은 분을 의미하고, "h" 또는 "hr"는 시간을 의미하고, "μL"은 마이크로리터를 의미하고, "mL"은 밀리리터를 의미하고, "L"은 리터를 의미하고, "mM"은 밀리몰을 의미하고, "M"은 몰을 의미하고, "mmol"은 밀리몰을 의미하고, "ppm"은 백만분율을 의미하고, "wt"는 중량을 의미하고, "wt%"는 중량 퍼센트를 의미하고, "g"는 그램을 의미하고, "mg"는 밀리그램을 의미하고, "μg"는 마이크로그램을 의미하고, "ng"는 나노그램을 의미하고, "conc."는 농도를 의미하고, "Trt"는 처리를 의미한다.

실시예 1

재료 및 방법

효모 주

효모는 ATCC(American Type Culture Collection), CBS(CBS- KNAW culture collection), 또는 Phaff Yeast Culture Collection(UC Davis)으로부터의 것이었다. 사용한 주는 엠. 글로보사(CBS 7966), 엠. 푸르푸르(M. furfur)(CBS 1878), 와이. 리폴리티카(ATCC 20362, ATCC 9773, ATCC 18942, ATCC 20177, CBS 2073, Phaff #50-47)이다.

성장 배지

10 g/L의 세균학적 펩톤, 2 g/L의 효모 추출물, 8 g/L의 건조 황소(ox) 담즙, 10 ml/L의 글리세롤, 0.5 g/L의 글리세롤 모노스테아레이트, 5 ml/L의 트윈(Tween)-60, 20 ml/L의 올리브유 또는 팜유를 함유하는 변형된 리밍 앤 노트만(Leeming & Notman; mLN) 배지에서 세포를 성장시켰다. 합성 성장 배지의 경우 아미노산이 없는 6.7 g/L의 효모 질소 염기, 6 g/L의 인산이칼륨, 4 g/L의 인산일칼륨, 및 상이한 양의, 탄소원으로서의 지질 및 유화제로서의 트윈-40, -60 또는 -80. 고체 배지의 경우 15 g/L의 한천을 첨가하였다. 배지를 110℃에서 20분 동안 오토클레이브에 의해 살균하였다.

리파아제 활성 분석

4-메틸움벨리페릴 올레에이트(Sigma-Aldrich, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)를 리파아제의 기질로 사용하고, 스톡 용액으로서 DMSO에 5 mg/ml까지 용해시켰다. 그 후 이것을 DMSO에서 0.5 mg/ml까지 희석시키고, 96웰 플레이트에서 각 반응에 50 μl를 사용하였다. 100 μl의 여과된(0.22 마이크론 필터) 세포 배양물을 각 웰에 첨가하고, 5회 피펫팅하여 혼합하였다. Tecan Spark^® 마이크로플레이트 판독기로 37C에서 1시간 동안 10분마다 형광 강도를 측정하였다. 여기 및 방출 파장은 355 및 460 nm였으며, 이때 게인(gain)은 55였다.

qPCR에 의한 세포 계수

정량적 PCR 또는 qPCR을 사용하여 다음의 3개의 시점에서 개별 배양 조건 및 조합 배양 조건에서 야로위아 리폴리티카 및 말라세지아 글로보사를 정량화하였다: 제1일, 제4일 및 제7일. 모든 말라세지아 글로보사 종의 검출에 사용한 qPCR 분석은 문헌[Clavaud et al. (2013), PLOS One, 8:10]에 기술된 바와 같았다. 사용한 프라이머/프로브는 다음과 같았다: 정방향 프라이머 1: 5' CTAAATATCGGGGAGAGACCGA(서열 번호 1), 및 역방향 프라이머 2: 5' GTACTTTTAACTCTCTTTCCAAAGTGCTT(서열 번호 2), 및 MGB 프로브 1: FAM-TTCATCTTTCCCTCACGGTAC-MGB(서열 번호 3).

야로위아 리폴리티카의 qPCR 분석은 SNF1 유전자를 표적화하며, 하기 프라이머/프로브를 포함한다: 정방향 프라이머 3: 5' ACACCATTCCCCCCTATCTGT(서열 번호 4), 역방향 프라이머 4: 5' TGACCACCAGCATCTGTTGAA(서열 번호 5) 및 프로브 2: 5' 6FAM-TGCCGGCGCAAAACACCTG-TAMRA. ((서열 번호 6) 말라세지아 글로보사 및 야로위아 리폴리티카 둘 다의 대표적인 주 유래의 게놈 DNA를 사용하여 절대 정량을 위한 표준 곡선을 생성하였다.

각 시점으로부터의, 개별적으로 또는 조합하여 성장시킨 야로위아 리폴리티카 및 말라세지아 글로보사의 배양물 1 ml를 원심분리하여 효모를 펠렛화하였다. 그 후 세포 펠렛을 게놈 DNA 추출에 사용하였다. 제조업체의 지침에 따라 Qiagen DNeasy PowerSoil Pro DNA 키트(Qiagen^TM, 미국 메릴랜드주 저먼타운)를 사용하여 DNA를 추출하였다. 말라세지아 글로보사 또는 야로위아 리폴리티카의 검출을 위해 2개의 개별 반응에서 각 샘플로부터의 정제된 게놈 DNA 1.5 μl를 각각의 다음의 것과 조합하였다: 10 μl의 ABI Universal TaqMan Mix(UNG 불포함), 0.2 μl의 100 μM 정방향 및 역방향 프라이머, 0.05 μl의 TaqMan 프로브 및 8.05 μl의 Molecular Biology Grade 물. 각 샘플을 다음과 같이 Quantstudio 7 기기에서 삼중 qPCR 반응으로 실행하였다: 10분 95℃ + 40 사이클(95℃ 15초 + 60℃ 60초). 형광 데이터를 증폭 동안 수집하였다.

선형 회귀 분석을 사용하여 알려진 양의 게놈 DNA(gDNA) 및 그의 상응하는 qPCR 유도 Ct 값을 기반으로 하여 말라세지아 글로보사 및 야로위아 리폴리티카 둘 다에 대한 표준 곡선을 확립하였다. 그 후 이러한 표준 곡선을 사용하여 3개 시점 각각으로부터의 샘플에서의 각 유기체의 카피 수를 결정하였다. 삼중 qPCR 반응의 평균값을 보고하였다.

배지 중 지질의 확인 및 정량화를 위한 기체 크로마토그래피(GC).

올레산 및 팔미트산에 대한 분석 표준물은 NuCheck Prpe, Inc.의 U46A(C18:1) 및 N16A(C16:0)였다. 각 화합물에 대해 후속 정량화를 위해 표준 곡선을 얻었으며; 표준물을 헥산에 중량 기준으로 제조하였다. GC 분석 동안 주입 부피의 가능한 편차를 보정하기 위해 내부 표준물로서 미리스트산(C14:0, Sigma #70079)을 헥산 용매에 첨가하였으며; 헥산 100 mL당 62 mg을 첨가하였다.

Agilent Technologies 7890A 기체 크로마토그래프를 사용하여 유리 지방산의 분리 및 정량화를 수행하였다. 이것에는 7683B 듀얼 인젝터 타워(전면/후면), G2614A 오토샘플러 및 화염 이온화 감지기(FID)가 장착되어 있었다. 헬륨이 캐리어 가스로 사용되는 한편, FID에 대한 연료 가스 및 지원 공기에 VWR 26000-034 수소 발생기가 제공되었다.

분석을 Agilent J&W DB-FFAP 컬럼, 니트로테레프탈산-변성 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 컬럼(30 m x 0.25 mm ID x 0.25 um)에서 수행하였다. 기구에 대한 방법은 다음과 같았다. 입구를 250℃로 설정하였으며, 이때 격막 퍼지는 3 mL/분이었고, 1 μL를 100:1 분할 모드로 주입하였다. 온도 프로그램은 2분 동안 80℃, 그 후 250℃까지 8℃/분, 10분 동안 유지(50℃에서 3분 동안 사후 실행)였다. 헬륨 가스 캐리어를 1.8 mL/분의 유속으로 사용하였으며, FID 설정은 300℃였고, 이때 H2 및 공기에 대해 각각 유속이 40 mL/분 및 450 mL/분이고, 메이크업 유속은 41.5 mL/분이었다. 분석된 샘플은 7일의 기간에 걸친 말라세지아 글로보사 및 야로위아 리폴리티카의 여러 진행 중인 배양으로부터의 분취물이었다.

1 mL의 분취물을 배양물로부터 취하고, GC-FID에 의한 C16:0 및 C18:1 함량에 대한 후속 분석이 있을 때까지 -80℃에서 냉동시켰다. 분석 시 샘플을 주위 온도에서 해동시켰다. 30~60초의 격렬한 볼텍싱에 의해 각 샘플을 균질화한 후, 250 μL를 2 mL 마이크로퓨지 튜브에 분취하였다. 이를 250 μL의 헥산으로 추출하고; C14:0 내부 표준물이 스파이크된 헥산을 사용하여 GC 주입의 변동성을 체크하였다. 샘플을 10분 동안 마이크로퓨지 튜브 캐러셀 어댑터를 사용하여 볼텍스 혼합기에서 진탕시키고; 그 후 샘플을 주위 온도에서 15분 동안 방치한 후 1900 x g에서 5분 동안 원심분리하였다. 추출된 유리 지방산을 포함하는 상단의 헥산 상을 GC-FID에 의한 후속 분석을 위해 유리 바이알로 옮겼다. 본 방법은 각각 19.4분 및 21.6분의 체류 시간에서 팔미트산 및 올레산을 분리하고 정량화할 수 있었다. GC 분석의 정확성을 내부 표준 미리스트산에 의해 검증하였으며, 17.8분에서의 피크가 분석 전반에 걸쳐 피크 면적에서 2~5% 변동되었다.

실시예 2

상이한 지질 배지에서의 말라세지아 종 및 야로위아 리폴리티카의 성장. 본 실시예는 탄소원으로 지질을 사용한 상이한 성장 배지에서의 엠. 글로보사 및 와이. 리폴리티카의 성장 표현형을 보여준다. 표 1에 나타낸 바와 같이, 모든 야로위아 리폴리티카 주는 테스트된 지질에서 매우 잘 성장하였고, 엠. 푸르푸르는 양호하거나 중간 정도의 성장을 보여주었다.

그러나 엠. 글로보사는 테스트된 모든 조건에서, 특히 올레에이트(무성장) 또는 올리브유(약한 성장 또는 무성장)에서 제대로 성장하지 않았으며, 팜유 또는 에틸 팔미테이트에서 약한 성장을 보여주었다. 올리브유는 주로 불포화 지방산(86%), 특히 올레산(78%)으로 구성된다. 팜유는 주로 팔미트산(44%) 및 올레산(40%)으로 구성된다.

표 1은 상이한 지질 플레이트들에서의 효모 주의 성장 표현형을 보여준다. 사용된 지질 및 유화제를 맨 윗줄에 나타낸다. 세포를 플레이트에 스트리킹하고, 32℃에서 3일 동안 성장시켰다. +++, 양호한 성장; ++, 중간 정도의 성장; +, 약한 성장; -, 무성장.

[표 1]

피지선의 생성물인 피지는 지질, 주로 트리글리세리드, 유리 지방산, 왁스 에스테르 및 스쿠알렌의 혼합물이다. 지방산 중, 피지 지질의 주성분은 사피엔산 및 팔미트산(palmitic acid)으로서, 이들 각각은 약 30%를 차지한다. 올레산은 부성분으로서, 약 2~5%이다(문헌[Akaza, et al. (2014), J. Dermatology 41: 1069]).

표 1에 나타낸 결과는 엠. 글로보사가 올레에이트(올레산)를 사용할 수 없었고(따라서 이것에서의 성장이 불가능하거나 약함) 팔미테이트에서 약간 성장할 수 있었음을 나타낸다.

대조적으로, 모든 야로위아 리폴리티카 주는 올레에이트 및 팔미테이트에서 성장할 수 있었다.

실시예 3

상이한 지질 배지에서의 말라세지아 종 및 야로위아 리폴리티카의 리파아제 활성

분비된 리파아제 활성을 측정하기 위해, 세포 배양 분취물(1 ml)을 수집하고, 0.22 마이크론 필터로 세포를 제거하였다. 4-메틸움벨리페릴 올레에이트(Sigma-Aldrich, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)를 여과된 배양 상청액 중 리파아제(들)의 기질로 사용하고, 활성을 형광에 의해 측정하였다.

표 2는 엠. 글로보사 및 와이. 리폴리티카의 세포 배양 상청액으로부터의 리파아제 활성을 나타낸다. 세포를 2일(와이. 리폴리티카) 또는 5일(엠. 글로보사) 동안 진탕하면서 32℃에서 1 ml/L의 에틸 팔미테이트 및 0.5 ml/L의 트윈-40을 함유하는 합성 배지에서 성장시켰다. 표시된 활성은 리파아제 활성에 의한 4-메틸움벨리페릴 올레에이트 가수분해에 의해 생성된 형광으로부터의 것이었다. 세포 없음(배지)은 배경 신호를 나타내는 대조군이다.

[표 2]

표 2에 나타낸 바와 같이, 엠. 글로보사는 무세포 배지(분비)에서 가장 높은 리파아제 활성을 발현하였다. 반면, 와이. 리폴리티카 주 ATCC 20362 및 CBS 2073은 무세포 상청액에서 유의한 리파아제 활성을 나타내지 않았으며, 이는 그의 리파아제 활성이 대부분 세포-결합되거나 세포-결부됨을 시사한다. 와이. 리폴리티카 주 Phaff #50-47은 배양 상청액에서 약간의 리파아제 활성을 생성하였다.

실시예 4

엠. 글로보사 및 와이. 리폴리티카에서의 경쟁적 성장 분석

본 실시예는 엠. 글로보사 및 와이. 리폴리티카를 함께 또는 개별적으로 성장시키는 경우 시간 경과에 따른 바이오매스 변화를 설명한다. 엠. 글로보사는 지방산 신타아제가 결여되어 있기 때문에 성장하기 위해서는 배지에 지질이 있는 것이 필요하고, 배지에 지질 및 유화제를 첨가하면 미셀 또는 지질 액적이 생성되어 광학 밀도로 세포 성장을 모니터링하는 것이 어려워진다. 엠. 글로보사는 또한 액체 배지에서 세포 덩어리로 성장하므로 플레이트에 배양 분취물을 스프레드한 후 콜로니를 계수하는 것은 세포 성장을 측정하는 정확한 방법이 아니다. 더 정확한 세포 성장 측정을 위해 qPCR 방법을 사용하여 DNA 함량으로 세포 성장을 모니터링하였다.

표 3은 팜유를 포함하는 변형 리밍 앤 노트만 배지를 이용한 효모들의 조합 성장 또는 단독 성장에 의한 엠. 글로보사와 와이. 리폴리티카 사이의 성장 경쟁의 결과를 보여준다. 배양 분취물을 7일에 걸쳐 3개의 상이한 시점에서 취하고, 효모 성장을 qPCR로 측정하였다. 그 결과는 엠. 글로보사를 단독으로 성장시키는 경우와 비교하여 상기 2가지 효모를 함께 성장시키는 경우 엠. 글로보사의 성장이 10배 초과로 영향을 받음/감소됨을 보여주었다. 그러나 와이. 리폴리티카의 성장은 와이. 리폴리티카 단독의 성장과 비교할 때 엠. 글로보사의 존재에 의해 사실상 영향을 받지 않았다.

표 3은 엠. 글로보사 및 와이. 리폴리티카(ATCC 20362)를 함께 또는 개별적으로 성장시켰을 때의 상기 두 효모의 qPCR 기반 세포 수를 보여준다. 20 ml/L의 팜유를 함유하는 100 ml mLN 배지에서 7일 동안 성장시킨 엠. 글로보사 배양물을 2개의 50 ml 배양물로 나누고, 하나의 50 ml에 와이. 리폴리티카를 0.1의 OD600까지 첨가하고(공동 배양) 다른 하나의 50 ml에는 첨가하지 않았다(엠. 글로보사 단독). '와이. 리폴리티카 단독' 배양물은 50 ml 신선 mLN 배지에 와이. 리폴리티카를 0.1의 OD600까지 접종한 것이었다. 게놈 DNA를 각 세포 배양물의 1 ml 분취물로부터 준비하고, qPCR 분석에 사용하였다.

[표 3]

표 3에 나타낸 바와 같이, 놀랍게도 그리고 예기치 않게도, 엠. 글로보사를 포함하는 배지 중 와이. 리폴리티카의 존재는 엠. 글로보사를 포함하는 것의 성장의 유의한 감소를 초래하였고(예를 들어, 와이. 리폴리티카는 말라세지아 종을 억제함), 따라서 이것은 비듬 상태에 대한 미생물 치료제로 사용될 수 있음을 나타냈다.

실시예 5

와이. 리폴리티카 지질 소비에 대한 GC 분석

본 실시예는 와이. 리폴리티카 및 엠. 글로보사에 의한 올레산 및 팔미트산 소비를 설명한다.

이것은 엠. 글로보사의 리파아제 활성에 의해 생성된 올레산 유리 지방산(FFA)이 와이. 리폴리티카에 의해 소비됨을 보여주기 위한 것이었다. 기체 크로마토그래피(GC)를 사용하여 배지 중 FFA의 양을 측정하였다.

세포 배양에는 팜유를 포함하는 변형된 리밍 앤 노트만(mLN) 배지를 사용하였다. 엠. 글로보사를 32℃에서 7일 동안 진탕시키면서 100 ml의 mLN 배지에서 성장시키고, 배양 상청액을 원심분리에 의해 수집하고, 2개의 50 ml로 분할하고, 250 ml 플라스크로 옮겼다. 50 ml 배양 상청액 중 하나에 와이. 리폴리티카의 하룻밤 배양물 500 μl를 0.1의 최종 OD600까지 첨가하였다. GC 분석을 위해 원심분리 전후에 샘플(1 ml)을 수집하였다. 대부분의 엠. 글로보사는 원심분리에 의해 제거되었지만 모든 엠. 글로보사 세포가 상청액으로부터 제거된 것은 아니었다. 와이. 리폴리티카를 첨가하거나 첨가하지 않은 엠. 글로보사 상청액 배양물을 진탕하면서 32℃에서 인큐베이션하였다. 1일, 2일, 3일, 4일 및 7일의 인큐베이션 후 GC 분석을 위해 1 ml의 분취물을 수집하였다.

표 4는 GC 분석 결과를 보여준다. 원심분리하여 대부분의 엠. 글로보사를 제거한 후, 팔미트산 및 올레산 둘 다가 유의하게 감소되었다. 이는 일부 FFA가 세포와 결부되어 원심분리 중에 함께 스핀다운되기 때문일 수 있다. '엠. 글로보사 상청액’과 ‘엠. 글로보사 상청액 + 와이. 리폴리티카’ 사이의 팔미트산 및 올레산 FFA의 양은 원심분리 후 비슷하였다(제0일).

'엠. 글로보사 상청액’의 경우, 대부분의 엠. 글로보사 세포가 원심분리에 의해 제거되었기 때문에 팔미트산 및 올레산 FFA의 양은 제4일까지는 크게 변하지 않았다. 그러나 제7일 후 샘플 중 FFA가 분명히 감소하였다. 반면에, 와이. 리폴리티카를 '엠. 글로보사 상청액'에 첨가할 경우, 팔미트산 및 올레산 FFA 둘 다가 빠르게 소비되었지만 올레산이 팔미트산보다 더 빠르게 소비되었다.

표 4는 GC에 의한 유리 지방산 정량을 보여준다. 엠. 글로보사를 7일 동안 20 ml/L의 팜유를 함유하는 100 ml의 mLN 배지에서 성장시키고, 원심분리 후 2개의 50 ml 상청액 분취물로 나누었다. 하나의 50 ml 분취물에 와이. 리폴리티카를 0.1의 OD600까지 첨가하고(엠. 글로보사 상청액 + 와이. 리폴리티카), 다른 하나의 50 ml에는 와이. 리폴리티카를 첨가하지 않았다(엠. 글로보사 상청액). 표에 표시된 바와 같이 진탕하면서 32℃에서 인큐베이션하는 동안 샘플을 취하고, 팔미트산 및 올레산 FFA에서 분석하였다. 제0일 샘플과 비교한 FFA의 상대적인 양은 괄호 안에 예시되어 있다.

[표 4]

놀랍게도 그리고 예기치 않게도, 표 3(실시예 4)의 결과는 와이. 리폴리티카 및 엠. 글로보사를 함께 성장시켰을 때 와이. 리폴리티카의 존재 하에서의 엠. 글로보사의 성장이 유의하게 감소되었음을 보여주었으며(예를 들어, 와이. 리폴리티카는 말라세지아 종을 억제함), 따라서 야로위아 속의 미생물이 비듬 상태에 대한 미생물 치료제로 사용될 수 있음을 나타냈다. 표 2에 나타낸 바와 같이, 엠. 글로보사는 무세포 배지에서 리파아제 활성을 발현하였지만(이는 리파아제가 분비되었음을, 와이. 리폴리티카는 무세포 상청액에서 유의한 리파아제 활성을 나타내지 않았으며, 아마도 그 이유는 야로위아 리파아제 활성이 대부분 세포-결합된 것이거나 세포-관련된 것이기 때문이다. 이는 미생물 치료가 완료된 후 리파아제 활성이 피부에 남지 않고 유리 지방산 축적을 야기하기 때문에 미생물 치료제로서 놀랍고도 유리한 특징이다. 표 4의 결과는 또한, 엠. 글로보사의 리파아제 활성에 의해 생성된 올레산 유리 지방산(FFA)이 와이. 리폴리티카에 의해서는 효율적으로 소비되었지만 엠. 글로보사에 의해서는 소비되지 않았음을 보여주었는데, 이는 또한, 엠. 글로보사가 올레산을 사용할 수 없었지만(따라서 올레산에서의 성장이 불가능하거나 약하였지만) 야로위아 리폴리티카에 의해서는 효율적으로 동화되었음을 보여주는 결과(표 1)와 일치한다. 올레산 유리 지방산(FFA)은 전염증성으로 간주되기 때문에 이 FFA의 효율적인 제거는 전염증성 올레산 FAA에 의해 야기되는 비듬 또는 기타 피부 질환에 대한 야로위아 미생물 치료제의 중요한 속성이다.

실시예 6

와이. 리폴리티카 무세포 배양 상청액(무세포 발효물)에 의한 엠. 글로보사 성장 억제의 유세포 분석적 분석

피부 질환과 관련된 말라세지아 종(말라세지아 spp.)은 지질 합성을 위한 지방산 신타아제가 없으므로 그의 성장을 위해서는 숙주 유래의 피지 지질에 의존한다(문헌[Xu et al., (2007) PNAS, 104: 18730]). 말라세지아 종을 위한 성장 배지는 10 g/L의 세균학적 펩톤, 2 g/L의 효모 추출물, 8 g/L의 건조 황소 담즙, 10 ml/L의 글리세롤, 0.5 g/L의 글리세롤 모노스테아레이트, 5 ml/L의 트윈-60, 및 20 ml/L의 팜유를 함유하는 변형된 리밍 앤 노트만(mLN) 배지였다.

mLN 배지 중 지질 및 계면활성제의 존재에 의한 지질 에멀젼과, 말라세지아 종의 세포 응집 표현형은 플레이트에 배양 분취물을 스프레드한 후 광학 밀도 측정 또는 콜로니 계수에 의해 세포 성장을 모니터링하는 것을 어렵게 만든다. 이 문제를 피하기 위해, 세포 염색 염색제를 사용한 유세포 분석을 사용하여 지질 에멀젼 배지에서 세포 성장을 정량적으로 측정하였다. 와이. 리폴리티카 무세포 배양 상청액으로 챌린징되는 경우 엠. 글로보사의 성장을 모니터링하기 위해 유세포 분석적 분석을 다음과 같이 수행하였다.

먼저, 야로위아 리폴리티카(와이. 리폴리티카) 배양물로부터 상이한 유형의 발효물을 생성하기 위해 와이. 리폴리티카 ATCC 20362 주를 YPD(10 g/L의 효모 추출물, 20 g/L의 펩톤, 20 g/L의 글루코스), YPG(10 g/L의 효모 추출물, 20 g/L의 펩톤, 20 ml/L의 글리세롤), 20 ml/L 팜유 함유 mLN, 또는 20 ml/L 올리브유 함유 mLN 배지에서 250 rpm에서 진탕하면서 32℃에서 초기 OD600을 0.1로 하여 5일 동안 성장시켰다. 무세포 야로위아 배양 상청액(무세포 발효물로도 지칭됨)은 야로위아 세포 배양물을 0.22 μm 여과막을 통해 2회 여과하여 세포를 제거함으로써 제조하고 -20℃에서 냉동 보관하였다.

와이. 리폴리티카 무세포 발효물에 의한 말라세지아 글로보사(엠. 글로보사) 성장 억제를 모니터링하기 위해 엠. 글로보사 3일 배양 접종물을 20 ml/L 팜유 함유 신선 mLN 배지에서 10배 희석하였다.

그 후, 희석된 배양물을 0.2 M 인산나트륨 완충액(pH 6.0)에서 5배 더 희석하였다. 200 μl의 와이. 리폴리티카 무세포 배양 상청액 또는 배지 단독을 96-딥 웰 플레이트(Biotix, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)에서 상기 희석 엠. 글로보사 배양물 800 μl에 첨가하고, 습도를 85%로 일정하게 하여 350 rpm에서 진탕하면서 32℃에서 인큐베이션하였다.

상이한 시점에서 각 배양물로부터의 50 μl 분취물을 Qsonica Q700(Qsonica, 미국 코네티컷주 뉴타운 소재)을 사용하여 30초 동안 1초의 온/오프 사이클 및 5의 진폭으로 약하게 초음파 처리하였다. 20 μl의 초음파 처리 세포 배양물을 50 μl의 인산염 완충 염수, pH 7.4(PBS), 10 μl의 희석(PBS 중 1:1,000) Cyto BC Green(Invitrogen), 10 μl의 희석(PBS 중 1:1,000) 프로피듐 요오다이드(Invitrogen) 및 10 μl의 희석(PBS 중 1:200) Concanavalin A(Invitrogen)와 혼합하고, 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 Novocyte Quanteon(Acea)을 사용하여 유세포 분석에 의해 분석하였다. 세포 투과성 DNA/RNA 삽입 염색제인 SytoBC를 488 레이저로 여기시키고, 530/30 대역폭 필터를 사용하여 탐지하였다. alexaFluor 640으로 표지된 만노스 결합 렉틴인 Concanavalin A를 637 nm 레이저로 여기시키고, 660/20 대역폭 필터를 사용하여 탐지하였다. 높은 만노스 및 높은 핵산 함량을 갖는 이벤트는 말라세지아 세포 대 이 채널에서 비교적 낮은 신호 강도를 갖는 에멀젼 액적에 의해 촉발된 이벤트인 것으로 결정되었다. 말라세지아 세포 수는 높은 sytoBC, 높은 ConA 이벤트에서의 게이팅 및 각 샘플에 대한 이벤트/ul 값의 기록에 의해 결정되었다.

표 5는 와이. 리폴리티카 ATCC 20362 유래의 다양한 무세포 배양 상청액 또는 항진균제인 암포테리신 B(2.5 μg/ml)의 첨가 후 엠. 글로보사 배양물의 유세포 분석적 분석을 보여준다. 각 배지 대조군과 비교한 엠. 글로보사 성장 억제의 백분율을 표 5에 나타낸다. 값은 중복 샘플의 평균이다.

[표 5]

테스트한 모든 야로위아 발효물에 있어서, 엠. 글로보사 성장은 각각의 배지 단독 대조군의 성장과 비교하여 시간이 지남에 따라 와이. 리폴리티카 무세포 배양 상청액의 첨가에 의해 감소되었다. 와이. 리폴리티카 무세포 배양 상청액 중, YPD 발효물은 3일 인큐베이션 후 엠. 글로보사의 성장에 가장 큰 영향을 미쳤으며, 이는 배지 대조군과 비교하여 세포 수의 81% 감소를 나타냈다.

실시예 7

2가지 상이한 와이. 리폴리티카 주로부터의 무세포 배양 상청액에 의한 엠. 글로보사 성장 억제의 유세포 분석적 분석

와이. 리폴리티카 무세포 배양 상청액으로 챌린징되는 경우 엠. 글로보사의 성장을 모니터링하기 위해 유세포 분석적 분석 방법을 사용하였다. 와이. 리폴리티카 주 ATCC 20362 또는 ATCC 9773을 YPD(10 g/L의 효모 추출물, 20 g/L의 펩톤, 20 g/L의 글루코스), YPG(10 g/L의 효모 추출물, 20 g/L의 펩톤, 20 ml/L의 글리세롤), 20 ml/L 팜유 함유 mLN(10 g/L의 세균학적 펩톤, 2 g/L의 효모 추출물, 8 g/L의 건조 황소 담즙, 10 ml/L의 글리세롤, 0.5 g/L의 글리세롤 모노스테아레이트, 5 ml/L의 트윈-60) 또는 20 ml/L 올리브유 함유 mLN에서 초기 OD600을 0.1로 하여 250 rpm에서 진탕하면서 32℃에서 5일 동안 성장시켰다. 무세포 야로위아 배양 상청액(무세포 발효물로도 지칭됨)은 야로위아 세포 배양물을 0.22 μm 여과막을 통해 2회 여과하여 세포를 제거함으로써 제조하고 -20℃에서 보관하였다.

엠. 글로보사 배양 접종물을 20 ml/L 팜유 함유 신선 mLN 배지에서 10배 희석하였다. 그 후, 희석된 배양물을 0.2 M 인산나트륨 완충액(pH 6.0)에서 5배 더 희석하였다. 200 μl의 와이. 리폴리티카 무세포 배양 상청액 또는 배지 단독을

96-딥 웰 플레이트(Biotix, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)에서 상기 희석 엠. 글로보사 배양물 800 μl에 첨가하고, 습도를 85%로 일정하게 하여 350 rpm에서 진탕하면서 32℃에서 인큐베이션하였다. 실시예 6에 기술된 바와 같이, 3일의 인큐베이션 후, 각 배양물로부터의 50 μl 분취물을 세포 염색 염색제를 사용하여 유세포 분석기로 분석하였다.

각 배지 대조군과 비교한 엠. 글로보사 성장 억제의 백분율을 표 6에 나타낸다. 값은 중복 샘플의 평균이다.

[표 6]

엠. 글로보사의 성장은 각각의 배지 단독 대조군과 비교하여 와이. 리폴리티카 무세포 발효물(무세포 배양 상청액)의 첨가에 의해 감소되었다. ATCC 20362 및 ATCC 9773 유래의 와이. 리폴리티카 무세포 배양 상청액 중, YPD 발효물은 3일 인큐베이션 후 엠. 글로보사의 성장에 가장 큰 영향을 미쳤으며, 이는 배지 대조군과 비교하여 엠. 글로보사의 약 65~69% 감소를 나타냈다.

실시예 8

야로위아 발효물에 의한 말라세지아 종의 생물막의 제거.

피부는 미생물이 종종 생물막으로 존재하는 독특한 환경이다(문헌[Brandwein, et al., NPJ Biofilms Microbiomes 2:3, 2016]). 생물막은 피부의 상피 표면 상에 또는 모낭 내부에 형성될 수 있다. 세포 외에도 생물막은 엑소폴리사카라이드, 단백질 및 DNA와 같은 세포외 구성요소로 이루어진다. 이 복잡한 구조는 특정 화합물에 대한 물리적 및 화학적 장벽이 될 수 있다. 그러나 더 중요하게는 생물막 상태의 미생물의 생리학은 플랑크톤 상태의 미생물과 매우 다르다. 이것은 특히, 환경 스트레스에 대항하고 다양한 항미생물제 치료에 저항하는 그의 능력에 해당되는데, 이는 놀라운 치료적 난제를 제공한다(문헌[Koo, et al., Nature Reviews Microbiology 15:740-755, 2017]).

건강한 피부와 건강하지 않은 피부 둘 모두로부터 단리된 효모 말라세지아 종은 시험관 내에서 생물막을 형성하는 것으로 나타났다(문헌[Angiolella, et al., Med Mycol. 0:1-7, 2020]). 말라세지아 글로보사(엠. 글로보사)의 이러한 단리체는 고도로 부착성이고/이거나 소수성일 수 있으며, 이외에도 생물막 생성자일 수 있다. 생물막 형태의 말라세지아 종은 항진균제에 대한 감수성이 유의하게 감소하는 것으로 나타났다(문헌[Figueredo, et al., Medical Mycology 8:863- 867, 2013]; 문헌[Bumroogthai, et al., Medical Mycology 54:544-549, 2016]). 생물막 부착 및 소수성은 말라세지아의 독성 인자(virulence factor)로 제안되었다(문헌[Allen, et al., J. of Clinical & Experimental Dermatology Research 6:311, 2015]; 문헌[Angiolella, et al., Medical Mycology 56:110-116,2018]). 따라서 말라세지아 생물막을 제거하는 전략은 이 유기체 군에 의해 야기되는 다양한 피부 병태를 치료하는 데 유익할 수 있다.

이 실시예에서 엠. 글로보사 ATCC MYA-4612를 아래에 설명된 바와 같이 생물막 분석의 개발에 사용하였다. 엠. 글로보사 ATCC MYA-4612는 속도를 100 rpm으로 하여 회전 진탕기에서 32℃에서 20 ml/L 팜유 함유 mLN 배지(실시예 6에 기술됨)에서 성장시켰다. 3일의 인큐베이션 후, 25 μl의 배양물을 탄소원으로 팜유를 사용하는 150 μl의 mLN 배지를 포함하는 폴리스티렌 96웰 플레이트의 웰에 접종하였다. 플레이트를 48시간 동안 진탕 없이 32℃에서 인큐베이션하여 현탁 세포(플랑크톤성 세포)로서 및 마이크로타이터 플레이트의 웰의 벽에 부착된 고착 생물막 세포로서 엠. 글로보사가 성장하도록 하였다.

생물막이 형성된 후, 성장 배지 및 미부착 세포를 제거하고, 웰을 1x 인산염 완충 염수(PBS)로 1회 세척하였다. PBS는 1X 작업 농도까지 희석되는 경우 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4, 및 2 mM KH2PO4를 포함하는 초순수 등급 인산염 완충액 및 식염수 용액의 pH 조정 블렌드이다. 세척 후, 2가지 상이한 야로위아 리폴리티카 주(ATCC20362 및 ATCC9773)의 250 μl 무세포 상청액(무세포 발효물)을 첨가하여 생물막 제거에 대한 그의 효능을 평가하였다. 250 ul의 1x PBS도 대조군으로 첨가하였다.

실시예 7에 기술된 바와 같이, 와이. 리폴리티카 주 ATCC 20362 또는 ATCC 9773을 YPD(10 g/L의 효모 추출물, 20 g/L의 펩톤, 20 g/L의 글루코스), YPG(10 g/L의 효모 추출물, 20 g/L의 펩톤, 20 ml/L의 글리세롤), 20 ml/L 팜유 함유 mLN(10 g/L의 세균학적 펩톤, 2 g/L의 효모 추출물, 8 g/L의 건조 황소 담즙, 10 ml/L의 글리세롤, 0.5 g/L의 글리세롤 모노스테아레이트, 5 ml/L의 트윈-60) 또는 20 ml/L 올리브유 함유 mLN에서 초기 OD600을 0.1로 하여 250 rpm에서 진탕하면서 32℃에서 5일 동안 성장시켰다. 무세포 야로위아 배양 상청액(무세포 발효물로도 지칭됨)은 야로위아 세포 배양물을 0.22 μm 여과막을 통해 2회 여과하여 세포를 제거함으로써 제조하고 -20℃에서 보관하였다.

이 실시예에서 20 ml/L 올리브유 함유 mLN 배지를 사용하여 야로위아 발효물을 생성하였다. 야로위아 발효물 또는 1xPBS를 첨가한 후, 생물막 제거 반응을 위하여 진탕 없이 생물막 플레이트를 32℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 상청액 또는 PBS를 제거하였다. 웰에 남아 있는 생물막의 양을 염색 후 정량화하였다. 생물막의 염색은 물에 용해시킨 0.1% 크리스탈 바이올렛 250 μl를 첨가하여 수행하였다. 플레이트를 실온에서 3분 동안 인큐베이션하였다. 염색 후, 1x PBS 250 μl를 각 웰에 첨가하여 미결합 염색제를 제거하였다. 이 과정을 한 번 더 반복하였다. 세척 후, 70% 에탄올 250 μl를 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 실온에서 5분 동안 인큐베이션하여 염색제를 방출시켰다. 염색제의 강도를 마이크로타이터 플레이트 판독기로 570 nm에서 측정하였다. OD 판독값을 사용하여 각 처리 후 남아 있는 생물막의 양을 정량화하였다. PBS로 처리된 웰을 기준물로 사용하여 생물막 제거 백분율을 계산하였다.

야로위아 주 유래의 배양 상청액(발효액)을 이용한 말라세지아 생물막 형성의 제거 결과를 표 8에 나타낸다.

[표 7]

야로위아 리폴리티카 주 ATCC 20362 유래의 무세포 발효물(상청액)의 첨가는 PBS 배지 대조군과 비교하여 생물막을 52% 감소시킨 반면, 주 ATCC 9773 유래의 상청액의 첨가는 PBS 배지 대조군과 비교하여 73% 감소를 초래하였다. 이 실험은 말라세지아 생물막 제거에 대한 2가지 상이한 야로위아 주 유래의 무세포 발효물의 효능을 입증하였다.

실시예 9

야로위아 발효물에 의한 말라세지아 종의 생물막 형성의 방지 및 감소

이전에 언급된 바와 같이, 두피를 포함한 피부 표면 상의 마이크로바이옴(microbiome)은 주로 생물막 군집으로 존재한다. 실시예 8에 기술된 바와 같은 사전 형성 병원성 생물막의 제거 못지않게, 말라세지아 종의 생물막 성장의 방지 및 감소가 지루성 피부염의 치료를 위한 또 다른 전략이다. 이 실시예에서, 말라세지아 생물막 형성의 형성을 방지하는 야로위아 발효물의 능력을 평가하였다.

말라세지아 글로보사(엠. 글로보사) ATCC MYA-4612를 생물막 성장 분석에 사용하였다. 실시예 6에 기술된 바와 같이, 상기 주를 출발 배양물로서 속도를 100 rpm으로 하여 회전 진탕기에서 32℃에서 20 ml/L 팜유 함유 mLN 배지에서 3일 동안 성장시켰다. 전형적인 생물막 성장 분석에서, 10 μl의 배양물을 90 μl의 용액을 함유하는 폴리스티렌 96웰 플레이트의 웰에 접종하였다. 이 용액은 야로위아 발효물이 있거나 없는 20 ml/L 팜유 함유 mLN 배지로 이루어졌다. 최종 부피는 100 μl였다. 팜유 농도는 20 ml/L였다.

이 실시예에서, YPD를 사용하여 야로위아 발효물을 생성하였다. 상이한 농도의 발효물(5, 10, 및 20 μl)을 감소 분석에 사용하였다. 대조군으로서, 동일한 농도의 YPD 배지(5, 10 및 20 μl)를 사용하였다. 생물막 분석 플레이트를 진탕 없이 32℃에서 48시간 동안 인큐베이션하여 마이크로타이터 플레이트의 웰의 벽에서 엠. 글로보사의 생물막이 성장하게 하였다.

생물막이 형성된 후, 성장 배지 및 미부착 세포를 제거하고, 웰을 1x 인산염 완충 염수(PBS)로 1회 세척하였다. PBS는 1X 작업 농도까지 희석되는 경우 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4, 및 2 mM KH2PO4를 포함하는 인산염 완충액 및 식염수 용액의 pH 조정 블렌드이다. 물에 용해시킨 0.1% 크리스탈 바이올렛 150 μl를 첨가하여 염색한 후 웰에 남아 있는 생물막의 양을 정량화하였다. 염색제를 첨가한 후 플레이트를 실온에서 3분 동안 인큐베이션하였다 염색 후, 1x PBS 150 μl를 각 웰에 첨가하여 미결합 염색제를 제거하였다. 이 과정을 한 번 더 반복하였다. 세척 후, 70% 에탄올 150 μl를 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 실온에서 5분 동안 인큐베이션하여 염색제를 방출시켰다. 염색제의 강도를 마이크로타이터 플레이트 판독기로 570 nm에서 측정하였다.

OD 판독값을 사용하여 각 처리 후 남아 있는 생물막의 양을 정량화하였다. YPD 배지 대조군으로 처리된 웰을 기준물로 사용하여 야로위아 상청액에 의한 생물막 제거의 백분율을 계산하였다.

야로위아 주 유래의 배양 상청액(발효물)을 이용한 말라세지아 생물막 형성의 결과를 표 9에 나타낸다.

[표 9]

야로위아 리폴리티카 주 유래의 상청액 5 μl의 첨가는 말라세지아 글로보사의 생물막 형성을 약 35% 억제하였다. 20 μl의 상청액의 첨가는 생물막 형성을 80% 넘게 억제하였다. 이 실험은 말라세지아 관련 병태의 치료를 위한 야로위아 주 유래의 상청액의 잠재적 효능을 입증하였다.

SEQUENCE LISTING <110> DuPont US Holding, LLC. Chan, Amanda Flannery, Helene Gannon, John Hong, Seung-Pyo Raymond Jackson, Raymond E Peterson, Jonathan D Ye, Rick Weizhang <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR MICROBIAL TREATMENT OF SKIN DISORDERS <130> NB41714 US PCT <150> US 62/968228 <151> 2020-01-31 <150> US 63/116193 <151> 2020-11-20 <160> 6 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> synthesized sequence <400> 1 ctaaatatcg gggagagacc ga 22 <210> 2 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> synthesized sequence <400> 2 gtacttttaa ctctctttcc aaagtgctt 29 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> synthesized sequence <400> 3 ttcatctttc cctcacggta c 21 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> synthesized sequence <400> 4 acaccattcc cccctatctg t 21 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> synthesized sequence <400> 5 tgaccaccag catctgttga a 21 <210> 6 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> synthesized sequence <400> 6 tgccggcgca aaacacctg 19

Claims

두피 질환의 치료에 사용하기 위한 스킨 케어 조성물로서, 상기 조성물은 유효량의 하나 이상의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하고, 상기 조성물은 상기 두피 질환을 감소시키고/시키거나 치료하는, 스킨 케어 조성물.
제1항에 있어서, 두피 질환은 두피의 비듬 상태(지루성 피부염), 두피의 에코플로라 불균형, 두피의 불편감, 전풍, 건성 피부, 자극받은 피부, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 스킨 케어 조성물.
제1항에 있어서, 하나 이상의 항비듬 활성제를 추가로 포함하는, 스킨 케어 조성물.
제1항에 있어서, 팔미트산, 올레산, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 지질을 분해하는, 스킨 케어 조성물.
제1항에 있어서, 말라세지아(Malassezia) 종의 성장을 감소시키는, 스킨 케어 조성물.
제1항에 있어서, 말라세지아 종의 생물막을 제거하는, 스킨 케어 조성물.
제1항에 있어서, 말라세지아 종의 생물막 형성을 방지하거나 감소시키는, 스킨 케어 조성물.
제1항에 있어서, 부형제, 방부제, pH 조절제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추가 화합물을 추가로 포함하는, 스킨 케어 조성물.
제1항에 있어서, 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 포함하는, 스킨 케어 조성물: 야로위아 리폴리티카 ATCC 20362, 야로위아 리폴리티카 ATCC 9773, 야로위아 리폴리티카 ATCC 18942, 야로위아 리폴리티카 ATCC 20177, 야로위아 리폴리티카 CBS2073, 야로위아 리폴리티카 Phaff#50-47, 또는 이들의 임의의 조합.
유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 스킨 케어 조성물의 스킨 케어 제품에서의 용도.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 스킨 케어 조성물의 유효량 및 하나 이상의 피부과학적으로 허용가능한 또는 스킨 케어용으로 허용가능한 성분을 포함하는 스킨 케어 제품.
제11항에 있어서, 상기 스킨 케어 조성물의 유효량이 상기 스킨 케어 제품의 총 중량에 대하여 중량 기준으로 적어도 약 1%, 2%, 3%, 4% 내지 5%인, 스킨 케어 제품.
두피 질환을 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 방법으로서, 유효량의 하나 이상의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제13항에 있어서, 두피 질환은 두피의 비듬 상태(지루성 피부염), 두피의 에코플로라 불균형, 두피의 불편감, 전풍, 건성 피부, 자극받은 피부, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
제13항에 있어서, 상기 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 국소 투여되는, 방법.
두피의 비듬 상태의 치료 및/또는 감소를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료 및/또는 감소시키는 방법으로서, 유효량의 하나 이상의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제16항에 있어서, 상기 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 대사산물은 국소 투여되는, 방법.
제16항에 있어서, 상기 하나 이상의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 단일 조성물로 제형화되는, 방법.
제16항에 있어서, 상기 조성물은 대상체의 피부 또는 두피에 투여되는, 방법.
제16항에 있어서, 상기 하나 이상의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 야로위아 리폴리티카 ATCC 20362, 야로위아 리폴리티카 ATCC 9773, 야로위아 리폴리티카 ATCC 18942, 야로위아 리폴리티카 ATCC 20177, 야로위아 리폴리티카 CBS2073, 야로위아 리폴리티카 Phaff#50-47, 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
제16항에 있어서, 상기 하나 이상의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 말라세지아 종의 성장을 감소시키는, 방법.
제16항에 있어서, 상기 하나 이상의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 말라세지아 종의 생물막을 제거하는, 방법.
제16항에 있어서, 상기 하나 이상의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 말라세지아 종의 생물막 형성을 방지하거나 감소시키는, 방법.
제16항에 있어서, 상기 하나 이상의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 팔미트산, 올레산, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 지질을 분해하는, 방법.
제16항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 유효량의 하나 이상의 야로위아 속 미생물 및/또는 이의 분획, 및/또는 이의 세포 용해물, 및/또는 이의 발효물, 및/또는 이의 대사산물은 스킨 케어 조성물 또는 스킨 케어 제품으로 투여되는, 방법.
두피의 비듬 상태의 치료 및/또는 감소를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료 및/또는 감소시키는 방법으로서, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 스킨 케어 조성물을 포함하는 스킨 케어 제품을 상기 대상체에게 국소 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제26항에 있어서, 스킨 케어 제품은 상기 스킨 케어 제품의 총 중량에 대하여 중량 기준으로 적어도 1%, 2%, 3%, 4% 내지 5%의 상기 스킨 케어 조성물을 포함하는 로션, 세럼, 젤리, 크림, 젤, 에멀젼, 고형 화장품, 마스크, 패치 및 스틱으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.