KR20220163447A - 항체 제형 - Google Patents

Abstract

약리학적으로 허용되는 농도 및 안정한 저장 수명을 갖는 항-CD47 항체의 제형이 제공된다.

Description

항체 제형

관련 출원의 교차 참조

본 출원은 2020년 4월 6일에 출원된 미국 임시 특허 출원 제63/005,755호의 이익 및 우선권을 주장하며, 그 전체 개시 내용은 모든 목적을 위해 그 전체가 본원에 인용되어 포함된다.

면역글로불린 단백질은 다양한 항원에 대한 세포 및 체액 반응을 촉진하는 면역계의 다기능 구성요소이다. 면역 요법의 한 형태는 선천적인 면역계의 능력을 이용한다. 식세포 수용체인 SIRPα와의 결합을 통한 세포 표면 단백질 CD47은 CD47을 발현하는 세포의 식균 작용을 차단할 수 있는 핵심적인 "don't eat-me" 신호를 제공한다. 식세포에 대한 SIRPα의 CD47 매개 결합을 차단하면 표적 세포의 식세포 제거를 향상시킬 수 있다. 항-CD47 항체 치료는 또한 암세포의 대식세포 식세포 작용을 가능하게 하는 것으로 나타났다.

항-CD47 항체의 안정한 치료 제형을 제공하는 것은 임상적으로 관련된 치료법을 개발하는 데 있어 중요한 단계이다. 그러나, CD47은 대부분의 인간 세포에서 어느 정도 발견되는 널리 발현되는 항체이다. 세포 표면의 표적에 대한 항-CD47 항체의 결합은 복합체의 세포 내재화에 이어 복합체의 후속적인 리소좀 분해를 유발할 수 있다. 전형적으로, 막 항원에 결합하는 mAb의 제거는 결합되지 않은 표적이 항체를 "흡수"하여 싱크 역할을 하기 때문에 저용량에서 더 빠르다(이 현상을 "항원 싱크"라고 함). 그 결과 상대적으로 높은 용량의 항체가 필요할 수 있다.

또한, 항체는 크고 복잡한 분자이기 때문에 그 제형은 특별한 문제를 갖는다. 단백질이 생물학적 활성을 유지하려면 제형이 단백질 아미노산의 적어도 핵심 서열의 형태적 완전성을 온전하게 보존하는 동시에 단백질의 여러 작용기를 분해로부터 보호해야 한다. 단백질의 분해 경로는 예를 들어 탈아미드화, 라세미화, 가수분해, 산화, 베타 제거 또는 이황화 교환과 같은 화학적 불안정성; 또는 변성, 응집, 침전 또는 흡착으로 인한 물리적 불안정성을 포함할 수 있다.

항체 치료제를 제형화하는 과정은 먼저 단백질이 동결/해동, 교반/전단, 열적 안정성과 같은 제조 또는 저장 동안 직면할 수 있는 응력 요인에 대한 노출을 처리하는 방법에 대한 이해를 필요로 한다. 항체는 고농도에서 응집하여 제형 최적화를 어렵게 만드는 경향이 있으며, 현재 FDA에서 항체 제형에 대해 승인한 완충제 및 부형제의 목록이 비교적으로 짧기 때문에 고농도 최적화를 위한 공간이 제한될 수 있다.

임상 사용을 위한 항체의 안정적인 저장을 제공하는 특정 제형은 여전히 도전 과제로 남아 있다.

관련 간행물은 미국 특허 제8,562,997호; 미국 특허 제9,399,682호; 미국 특허 제9,017,675호; 미국 특허 제9,382,320호; 미국 특허 제9,151,760호; 미국 특허 제8,758,750호; 미국 특허 제8,361,736호; 미국 특허 제8,709,429호; 미국 특허 제9,193,955호; 및 미국 특허 제7,514,229호 및 국제 특허 출원 US2016/049016호; 국제 특허 출원 US2016/030997호; 국제 특허 출원 US2016/036520호; 국제 특허 출원 US2015/046976호; 국제 특허 출원 US2015/044304호; 국제 특허 출원 US2015/057233호; 국제 특허 출원 US2015/026491호; 국제 특허 출원 US2015/019954호; 국제 특허 출원 US2015/010650호; 국제 특허 출원 US2014/035167호; 국제 특허 출원 US2014/018743호; 국제 특허 출원 US2014/038485호; 국제 특허 출원 US2013/021937호; 및 국제 특허 출원 US2011/066580호를 포함하며, 각각은 본원에 참고로 구체적으로 포함된다.

항-CD47 항체의 제형, 특히 약리학적으로 허용되는 농도 및 안정한 저장 수명을 갖는 항-CD47 항체의 수성 및 동결건조 제형이 제공된다.

일부 실시형태에서, 제형 중 항-CD47 항체는 사전 동결 건조되지 않으며, 예를 들어 액체 제형이다. 일부 실시형태에서, 제형 중 항-CD47 항체는 단일클론 항체이다. 일부 실시형태에서, 제형 중 항-CD47 항체는 전장 항체이다. 일부 실시형태에서, 제형 중 항-CD47 항체는 IgG 항체이다. 일부 실시형태에서, 제형 중 항-CD47 항체는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서 항체는 인간 IgG4 불변 사슬을 포함한다. 일부 실시형태에서 항체는 마그롤리맙이다.

일부 실시형태에서, 항-CD47 항체는 서열(SEQ ID NO: 1)을 포함하는 HCDR1 영역, 서열(SEQ ID NO: 2)을 포함하는 HCDR2 영역, 서열(SEQ ID NO: 3)을 포함하는 HCDR3 영역, 서열(SEQ ID NO: 4)을 포함하는 LCDR1 영역, 서열(SEQ ID NO: 5)을 포함하는 LCDR2 영역, 및 서열(SEQ ID NO: 6)을 포함하는 LCDR3 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서 이러한 항체는 인간 IgG4 불변 영역 서열을 포함한다.

일부 실시형태에서 제형은 10 내지 160 mg/ml, 예를 들어, 10 내지 100 mg/ml, 예를 들어, 10 내지 80 mg/ml의 항-CD47 항체; 및 5 내지 20 mM 농도의 약학적으로 허용되는 완충제; 안정화제, 및 계면활성제를 포함하며, 제형은 약 pH 4 내지 6.5의 pH를 갖는다. 일부 실시형태에서 항-CD47 항체는 마그롤리맙이다.

일부 실시형태에서 제형은 10 내지 20 mg/ml 마그롤리맙; 10 mM 아세테이트 완충제; 5% w/v 소르비톨; 0.01% 내지 0.04% 폴리소르베이트 20, 예를 들어, 0.01% 내지 0.02% 폴리소르베이트 20을 포함하는 액체 제형이며; 제형은 4.5 내지 5.5의 pH이다.

일부 실시형태에서 제형은 10 내지 20 mg/ml 마그롤리맙; 10 mM 아세테이트 완충제; 2 내지 12% w/v 수크로스, 예를 들어, 9% w/v 수크로스; 0.01% 내지 0.04% 폴리소르베이트 20, 예를 들어, 0.01% 내지 0.02% 폴리소르베이트 20을 포함하는 액체 제형이며; 제형은 4.5 내지 5.5의 pH이다.

일부 실시형태에서 제형은 10 내지 20 mg/ml 마그롤리맙; 10 mM 아세테이트 완충제; 2 내지 12% w/v 트레할로스, 예를 들어, 9% w/v 트레할로스; 0.01% 내지 0.04% 폴리소르베이트 20, 예를 들어, 0.01% 내지 0.02% 폴리소르베이트 20을 포함하는 액체 제형이며; 제형은 4.5 내지 5.5의 pH이다.

일부 실시형태에서 제형은 저장 중 항체의 안정성을 제공하며, 예를 들어 8주 초과, 16주 초과, 24주 초과, 48주 초과, 12개월 초과, 2년 초과, 3년 초과, 4년 초과, 5년 초과의 기간 동안 2 내지 8℃에서 저장 후 적어도 50% 활성, 적어도 75% 활성, 적어도 95% 활성을 유지한다. 12개월, 2년, 3년, 4년 또는 5년 후의 안정성은 100 ± 50%일 수 있다.

일부 실시형태에서 10 내지 80 mg/ml, 예를 들어, 20 내지 50 mg/ml 마그롤리맙; 10 mM 아세테이트 완충제; 5% w/v 소르비톨; 0.01% 내지 0.04% 폴리소르베이트 20, 예를 들어, 0.01% 내지 0.02% 폴리소르베이트 20을 포함하는 항체 제형의 유효 용량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 사용 방법이 제공되며; 제형은 4.0 내지 5.5, 예를 들어, 4.0 내지 5.3, 예를 들어, 4.0 내지 5.0의 pH이다.

일부 실시형태에서 10 내지 80 mg/ml, 예를 들어, 20 내지 50 mg/ml 마그롤리맙; 10 mM 아세테이트 완충제; 9% w/v 수크로스; 0.01% 내지 0.04% 폴리소르베이트 20, 예를 들어, 0.01% 내지 0.02% 폴리소르베이트 20을 포함하는 항체 제형의 유효 용량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 사용 방법이 제공되며; 제형은 4.0 내지 5.5, 예를 들어, 4.0 내지 5.3, 예를 들어, 4.0 내지 5.0의 pH이다.

일부 실시형태에서 4.0 내지 5.5, 예를 들어, 4.0 내지 5.3, 예를 들어, 4.0 내지 5.0의 pH에서 10 내지 80 mg/ml, 예를 들어, 20 내지 50 mg/ml 마그롤리맙; 10 mM 아세테이트 완충제; 9% w/v 트레할로스; 0.01% 내지 0.04% 폴리소르베이트 20, 예를 들어, 0.01% 내지 0.02% 폴리소르베이트 20을 포함하는 항체 제형의 유효 용량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 사용 방법이 제공된다.

도 1. 첨가된 폴리소르베이트 20의 함수로서 마그롤리맙 제형의 표면 장력.
도 2a 내지 도 2d. 메인 피크 WCX-HPLC 결과
도 3a 내지 도 3d. 프리-피크 WCX-HPLC 결과
도 4a 내지 도 4d. SE-HPLC 단량체 결과
도 5a 내지 도 5d. SE-HPLC 응집체/프리-피크 결과
도 6. 농도의 함수로서 측정된 마그롤리맙의 점도
도 7. 마그롤리맙을 사용하여 연구된 다양한 안정화 부형제

본 발명의 방법 및 조성물을 설명하기 전에, 본 발명은 설명된 특정 방법 또는 조성으로 제한되지 않으며, 물론 달라질 수 있음을 이해해야 한다. 본원에서 사용된 용어는 단지 특정 실시형태를 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범위가 첨부된 특허청구범위에 의해서만 제한될 것이기 때문에 제한하려는 의도가 아님을 이해해야 한다.

값의 범위가 제공되는 경우, 문맥이 명백하게 달리 지시하지 않는 한, 그 범위의 상한과 하한 사이의 각각의 중간 값이 하한 단위의 10분의 1까지 또한 구체적으로 개시되는 것으로 이해된다. 명시된 범위의 임의의 명시된 값 또는 중간 값과 해당 명시된 범위의 임의의 다른 명시된 또는 중간 값 사이의 각각의 더 작은 범위는 본 발명에 포함된다. 이들 더 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 그 범위에 포함되거나 배제될 수 있고, 본 발명 내에 또한 한계 중 어느 하나가 더 작은 범위에 포함되거나, 어느 것도 더 작은 범위에 포함되지 않거나, 둘 모두가 더 작은 범위에 포함되는 경우의 각각의 범위가 포함되고, 기재된 범위에서 임의의 구체적으로 배제된 한계로 처리된다. 기재된 범위가 한계 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우, 본 발명에서 또한 이들 포함된 한계 중 어느 하나 또는 둘 모두를 배제하는 범위가 포함된다.

달리 한정되지 않는 한, 본 명세서에 사용되는 모든 기술적 용어 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실행 또는 시험에 사용될 수 있지만, 일부 가능하고 바람직한 방법 및 재료가 이제 기재된다. 본원에 언급된 모든 공보는 본 개시내용을 참조하여 본원에 포함되고, 공보가 인용하는 것과 연결되어 방법 및/또는 재료를 기재한다. 본 개시내용이 모순이 있는 정도로 포함된 공보의 임의의 개시내용을 대신한다고 이해된다.

본원 및 첨부된 청구범위에 사용되는 바와 같이, 단수 형태는 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 주목해야 한다. 이와 같이, 예를 들어 "세포"의 언급은 이러한 세포의 복수를 포함하고, "펩티드"의 언급은 하나 이상의 펩티드 및 그의 균등물, 예를 들어 당업자에게 공지된 폴리펩티드 및 기타 등등에 대한 언급을 포함한다.

본원에 기술된 공보는 오로지 본 출원의 출원일 전의 이의 개시내용을 위해 제공된다. 선행 발명의 힘으로 이러한 공보에 선행하도록 본 발명이 권한 부여되지 않는다는 것의 인정으로서 본원에서 어느 것도 해석되지 않아야 한다. 추가로, 제공된 공개 일자는 독립적으로 확인될 필요가 있을 수 있는 실제 공개 일자와 다를 수 있다.

"포함하는"은 인용된 요소가 조성물/방법/키트에 필요하지만, 청구범위의 범위 내에서 조성물/방법/키트 등을 형성하기 위해 다른 요소가 포함될 수 있음을 의미한다. 예를 들어, 조성물은 안정성을 촉진하는 제제, 용해도를 촉진하는 제제, 보조제 등을 포함할 수 있으며, 이는 임의의 부정적인 단서에 포함되는 요소를 제외하고 당업계에서 용이하게 이해될 것이다.

"본질적으로 이루어진"은 본 발명의 기본적이고 신규한 특성(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 특정 재료 또는 단계에 대해 기재된 조성물 또는 방법의 범위의 제한을 의미한다. 예를 들어, 개시된 서열로 "본질적으로 이루어진" 항체는 그것이 유래된 서열에 기초하여 서열의 경계에서 개시된 서열의 아미노산 서열 플러스 또는 마이너스 약 5개 아미노산 잔기, 예를 들어 인용된 결합 아미노산 잔기보다 약 5개 잔기, 4개 잔기, 3개 잔기, 2개 또는 약 1개 적은 잔기, 또는 인용된 결합 아미노산 잔기보다 약 1개 잔기, 2개 잔기, 3개 잔기, 4개 잔기, 또는 5개 더 많은 잔기를 갖는다.

"이루어진"은 청구범위에 명시되지 않은 임의의 요소, 단계 또는 성분의 조성물, 방법 또는 키트로부터의 배제를 의미한다.

분자 및 세포 생화학의 일반적인 방법은 표준 교과서, 예컨대 Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed. (Sambrook et al., CSH Laboratory Press 2001); Short Protocols in Molecular Biology, 4th Ed. (Ausubel et al. eds., John Wiley & Sons 1999); Protein Methods (Bollag et al., John Wiley & Sons 1996); Nonviral Vectors for Gene Therapy (Wagner et al. eds., Academic Press 1999); Viral Vectors (Kaplift & Loewy eds., Academic Press 1995); Immunology Methods Manual (I. Lefkovits ed., Academic Press 1997); 및 Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures in Biotechnology (Doyle & Griffiths, John Wiley & Sons 1998)에서 확인할 수 있으며, 이의 개시내용은 본원에 인용되어 포함된다. 본 개시내용에서 언급된 유전자 조작을 위한 시약, 클로닝 벡터 및 키트는 BioRad, Stratagene, Invitrogen, Sigma-Aldrich 및 ClonTech와 같은 상업적 벤더로부터 입수 가능하다.

본원에 사용된 바와 같이, "항체"는 특정 항원과 면역학적으로 반응성인 면역글로불린 분자에 대한 언급을 포함하며, 폴리클론 및 단일클론 항체 둘 모두, 예를 들어 전체 사량체 IgG 단백질을 포함한다. 이 용어는 또한 키메라 항체(예를 들어, 인간화 뮤린 항체) 및 이종접합체 항체와 같은 유전적으로 조작된 형태를 포함한다. 용어 "항체"는 또한 항원 결합 능력을 갖는 단편을 포함하는 항체의 항원 결합 형태(예를 들어, Fab', F(ab')₂, Fab, Fv 및 rIgG를 포함한다. 상기 용어는 또한 재조합 단일 사슬 Fv 단편(scFv)을 지칭한다. 용어 항체는 또한 2가 또는 이중특이적 분자, 디아바디, 트리아바디, 및 테트라바디를 포함한다.

항체는 또한 다양한 펩티다아제에 의한 분해에 의해 생성된 다수의 잘 특성화된 단편으로 존재한다. 따라서, 펩신은 힌지 영역의 이황화 결합 아래에 있는 항체를 분해하여 그 자체가 이황화 결합에 의해 V_H-C_H1에 연결된 경쇄인 Fab의 이량체인 F(ab)'₂를 생성한다. F(ab)'₂는 온화한 조건 하에서 환원되어 힌지 영역의 이황화 결합을 파괴함으로써 F(ab)'₂ 이량체를 Fab' 단량체로 전환시킬 수 있다. Fab' 단량체는 본질적으로 힌지 영역의 일부를 갖는 Fab이다. 다양한 항체 단편이 온전한 항체의 분해의 면에서 정의되어 있지만, 당업자는 이러한 단편이 화학적으로 또는 재조합 DNA 방법론을 사용하여 신생 합성될 수 있는 것을 이해할 것이다. 이와 같이, 본원에 사용된 바와 같은 용어 항체는 또한 전체 항체의 변형, 또는 재조합 DNA 방법론(예를 들어, 단일 사슬 Fv)을 사용하여 신생 합성된 것 또는 파지 디스플레이 라이브러리를 사용하여 확인된 것에 의해 제조된 항체 단편을 포함한다.

"인간화 항체"는 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 면역글로불린 분자이다. 인간화 항체는 수혜자의 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화성, 및 능력을 갖는 마우스, 래트 또는 토끼와 같은 비인간 종(공여자 항체)의 CDR로부터의 잔기에 의해 대체된 인간 면역글로불린(수혜자 항체)을 포함한다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 잔기는 상응하는 비인간 잔기에 의해 대체된다. 인간화 항체는 또한 수혜자 항체에서도 유입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서도 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 및 통상적으로 2개의, 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함할 것이고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비인간 면역글로불린의 것에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크(FR) 영역은 인간 면역글로불린 컨센서스 서열의 것이다. 인간화 항체는 최적으로 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 통상적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역, 특히 IgG4 Fc 영역을 포함할 것이다.

본원에서 "CDR"은 Chothia 외; Kabat 외; 등에 의해 정의될 수 있다. 그 전체 내용이 본원에 인용되어 포함되는 문헌[Chothia C, Lesk AM. (1987) Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. J Mol Biol., 196(4):901-17] 참조. 그 전체 내용이 본원에 인용되어 포함되는 문헌[Kabat E. A, Wu T. T., Perry H. M., Gottesman K. S. and Foeller C. (1991). Sequences of Proteins of Immunological Interest. 5th edit., NIH Publication no. 91-3242, US Dept. of Health and Human Services, Washington, D.C.] 참조.

용어 "에피토프"는 항체에 특이적으로 결합할 수 있거나 그렇지 않으면 분자와 상호 작용할 수 있는 임의의 단백질 결정기를 포함한다. 에피토프 결정기는 일반적으로 아미노산이나 탄수화물 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹으로 이루어지며 특정 3차원 구조적 특성과 특정 전하 특성을 가질 수 있다. 에피토프는 "선형" 또는 "형태적"일 수 있다. 용어 "선형 에피토프"는 단백질과 상호 작용하는 분자(예컨대 항체) 사이의 모든 상호 작용 지점이 단백질의 1차 아미노산 서열(연속)을 따라 선형으로 발생하는 에피토프를 지칭한다. 용어 "형태적 에피토프"는 불연속적인 아미노산이 3차원 형태로 모이는 에피토프를 지칭한다. 형태적 에피토프에서 상호 작용 지점은 서로 분리된 단백질의 아미노산 잔기를 가로 질러 발생한다.

"동일한 에피토프에 결합한다"는 항체 또는 다른 결합제가 CD47에 결합하고 예시된 항체와 동일한 에피토프를 갖는 능력을 의미한다. 예시된 항체 및 CD47에 대한 다른 항체의 에피토프는 표준 에피토프 맵핑 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 당업계에 잘 알려진 에피토프 맵핑 기술은 문헌[Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E. Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, N.J.]의 에피토프 맵핑 프로토콜을 포함한다. 예를 들어, 선형 에피토프는 예를 들어 고체 지지체 상의 많은 수의 펩티드, 단백질 분자의 부분에 상응하는 펩티드를 동시에 합성하고, 펩티드가 지지체에 여전히 부착되어 있는 동안 펩티드를 항체와 반응시킴으로써 결정될 수 있다. 이러한 기술은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 미국 특허 제4,708,871호; 문헌[Geysen et al, (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:3998-4002]; 문헌[Geysen et al, (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:78-182]; 문헌[Geysen et al, (1986) Mol. Immunol. 23:709-715]에 기재되어 있다. 유사하게, 형태적 에피토프는 예를 들어 수소/중수소 교환, x-선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명과 같은 아미노산의 공간적 구조를 결정함으로써 쉽게 식별된다. 예를 들어, 상기 에피토프 맵핑 프로토콜 참조. 단백질의 항원성 영역은 또한 예를 들어 Oxford Molecular Group에서 입수할 수 있는 Omiga 버전 1.0 소프트웨어 프로그램을 사용하여 계산된 것과 같은 표준 항원성 및 수병증 플롯을 사용하여 식별할 수 있다. 이 컴퓨터 프로그램은 항원성 프로파일을 결정하기 위해 Hopp/Woods 방법을 사용하고(문헌[Hopp et al, (1981) Proc. Natl. Acad. Sci USA 78:3824-3828]) 수병증 플롯의 경우 Kyte-Doolittle 기술(문헌[Kyte et al, (1982) J. Mol. Biol. 157: 105-132])을 사용한다.

제형

본 개시내용의 제형은 10 내지 160 mg/ml, 예를 들어, 10 내지 100 mg/ml, 예를 들어, 10 내지 80 mg/ml의 항-CD47 항체; 및 5 내지 20 mM 농도의 완충제를 포함하는 약학적으로 허용되는 부형제; 안정화제, 및 계면활성제를 포함하며, 제형은 약 pH 4 내지 6.5의 pH를 갖는다.

"약학적으로 허용되는", "생리학적으로 허용되는"이라는 용어 및 이의 문법적 변형어는, 이들이 조성물, 담체, 희석제 및 시약을 지칭하면서, 상호교환 가능하게 사용되고, 그 재료가 조성물의 투여를 막는 정도로 원치 않는 생리학적 효과의 생성 없이 인간에게 또는 인간에 대한 투여를 할 수 있다는 것을 나타낸다.

"약학적으로 허용되는 부형제"는 일반적으로 안전하고, 비독성이고, 바람직한 약학 조성물을 제조하는 데 유용한 부형제를 의미하고, 수의 용도뿐만 아니라 인간 약학적 용도를 위해 허용되는 부형제를 포함한다. 이러한 부형제는 고체, 액체, 반고체, 또는 에어로졸 조성물의 경우에는 기체일 수 있다. 다양한 약학적으로 허용되는 희석제, 담체, 및 부형제, 및 약학 조성물의 제조 및 사용을 위한 기술은 본 개시내용을 고려하여 당업자에게 알려질 것이다. 예시적인 약학 조성물 및 약학적으로 허용되는 희석제, 담체, 및 부형제는 또한, 예를 들어, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. (Lippincott, Williams & Wilkins 2003)]; 문헌[Loyd V. Allen Jr (Editor), "Remington: The Science and Practice of Pharmacy," 22nd Edition, 2012, Pharmaceutical Press]; 문헌[Brunton, Knollman and Hilal-Dandan, "Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics," 13th Edition, 2017, McGraw-Hill Education / Medical]; 문헌[McNally and Hastedt (Editors), "Protein Formulation and Delivery, 2nd Edition, 2007, CRC Press]; 문헌[Banga, "Therapeutic Peptides and Proteins: Formulation, Processing, and Delivery Systems," 3rd Edition, 2015, CRC Press]; 문헌[Lars Hovgaard, Frokjaer and van de Weert (Editors), "Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins," 2nd Edition, 2012, CRC Press]; 문헌[Carpenter and Manning (Editors), "Rational Design of Stable Protein Formulations: Theory and Practice," 2002, Springer (Pharmaceutical Biotechnology (Book 13))]; 문헌[Meyer (Editor), "Therapeutic Protein Drug Products: Practical Approaches to Formulation in the Laboratory, Manufacturing, and the Clinic, 2012, Woodhead Publishing]; 및 문헌[Shire, "Monoclonal Antibodies: Meeting the Challenges in Manufacturing, Formulation, Delivery and Stability of Final Drug Product, 2015, Woodhead Publishing]에 기재되어 있다.

비경구 투여를 위한 본원에 기재된 바와 같은 항체를 포함하는 약학 조성물은 약학적으로 허용되는 비경구 비히클과 함께 단위 투여량 주사 가능한 형태(예를 들어, 용액, 현탁액, 에멀젼)로 제형화되고 멸균되고 실질적으로 등장성일 수 있고(250 내지 350 mOsm/㎏ 물), GMP 조건 하에 제조된다. 약학 조성물은 단위 투여량 형태(즉, 단일 투여를 위한 투여량)로 제공될 수 있다. 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 보조제를 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 선택된 투여 경로에 따라 다르다. 주사를 위해, 항체는 수용액으로, 예를 들어, 생리학적으로 적합한 완충제, 예컨대 포스페이트 완충 식염수, 아미노산 완충제(예를 들어, 히스티딘, 아스파르테이트, 글루타메이트, 아스파라긴, 글루타민, 라이신, 아르기닌을 비제한적으로 포함하는 하전된 아미노산), 트리스 완충액, 행크 용액, 링거 용액, 포도당 용액 및 5% 인간 혈청 알부민 또는 아세트산 완충제(주사 부위의 불편함을 줄이기 위해), 및 본원에 나열된 추가 완충제로 제형화될 수 있다. 용액은 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형화제를 함유할 수 있다. 대안적으로, 항체는 사용 전에 적합한 비히클, 예를 들어 멸균 무-발열원(pyrogen-free) 물과 함께 구성하기 위한 동결 건조된 형태일 수 있다. 약학 조성물의 제형 및 전달 방법은 일반적으로 치료될 부위 및 질환에 따라 조정될 것이다. 예시적인 제형은 비경구 투여, 예를 들어 정맥내 또는 피하 투여에 적합한 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

"약학적으로 허용되는 염 및 에스테르"는 약학적으로 허용되고 원하는 약물학적 특성을 갖는 염 및 에스테르를 의미한다. 이러한 염은 화합물에 존재하는 산성 양성자가 무기 염기 또는 유기 염기와 반응할 수 있는 경우에 형성될 수 있는 염을 포함한다. 적합한 무기 염은 알칼리 금속, 예를 들어 소듐 및 포타슘, 마그네슘, 칼슘, 및 알루미늄과 형성된 것을 포함한다. 적합한 유기 염은 유기 염기, 예컨대 아민 염기, 예를 들어 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 트로메타민, N 메틸글루카민, 및 기타에 의해 형성된 것을 포함한다. 이러한 염은 또한 무기 산(예를 들어, 염산 및 브롬화수소산) 및 유기 산(예를 들어, 아세트산, 시트르산, 말레산, 및 알칸-설폰산 및 아렌-설폰산, 예컨대 메탄설폰산 및 벤젠설폰산)과 형성된 산 부가 염을 포함한다. 약학적으로 허용되는 에스테르는 화합물에 존재하는 카복시, 설포닐옥시, 및 포스포녹시 기로부터 형성된 에스테르, 예를 들어 C_1-6 알킬 에스테르를 포함한다. 2개의 산성 기가 존재할 때, 약학적으로 허용되는 염 또는 에스테르는 모노-산-모노-염 또는 에스테르 또는 이염 또는 에스테르일 수 있고; 유사하게 2개 초과의 산성 기가 존재하는 경우, 이러한 기의 일부 또는 전부는 염화되거나 에스테르화될 수 있다. 본 발명에 명명된 화합물은 비염화된 형태 또는 비에스테르화된 형태, 또는 염화된 형태 및/또는 에스테르화된 형태로 존재할 수 있고, 이러한 화합물의 명명은 원래의(비염화된 및 비에스테르화된) 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염 및 에스테르 둘 모두를 포함하는 것으로 의도된다. 또한, 본 발명에서 명명된 특정 화합물은 하나 초과의 입체 이성질체 형태로 존재할 수 있으며, 이러한 화합물의 명명은 모든 단일 입체 이성질체 및 이러한 입체 이성질체의 모든 혼합물(라세미 또는 기타)을 포함하도록 의도된다.본원에 사용된 "완충제"는 산-염기 접합체 성분의 작용에 의한 pH 변화에 저항하는 완충 용액을 지칭한다. 약학 제형, 특히 비경구 투여용 제형에 유용한 완충제는 본 발명의 제형에 사용될 수 있으며, 비제한적으로 하기를 포함한다: 아세테이트 완충제, 예를 들어 아세트산/소듐 아세테이트; 히스티딘; 포스페이트, 시트레이트, 락테이트; 아스파르테이트; 석시네이트; 말레이트; 푸마레이트; 글루코네이트; 글루타메이트. 일부 실시형태에서 완충제는 아세테이트 완충제이다. 일부 실시형태에서 완충제는 히스티딘 완충제이다.

일부 실시형태에서, 제형 중 완충제는 5 내지 50 mM의 농도이다. 일부 실시형태에서, 제제 중 완충제는 7.5 내지 25 mM의 농도이다. 일부 실시형태에서, 제형 중 완충제는 10 내지 20 mM의 농도이다. 일부 실시형태에서, 제형 중 완충제는 아세테이트 완충제 또는 히스티딘 완충제이다.

수성 제형에서, 완충제의 농도는 약 5 mM, 6 mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM, 10 mM, 11 mM, 12 mM, 13 mM, 14 mM, 15 mM, 16 mM, 17 mM, 18 mM, 19 mM, 20 mM일 수 있다. 특정 실시형태에서 농도는 8 내지 12 mM, 예를 들어 10 mM이다. 이러한 수성 제형은 적절하거나 원하는 대로 동결 건조될 수 있다.

완충된 제형의 pH는 pH 4 내지 pH 6.5일 수 있다. 일부 실시형태에서 pH는 pH 4.5 내지 6이다. 일부 실시형태에서 pH는 pH 4.7 내지 5.3이다. 일부 실시형태에서 pH는 pH 4.75 내지 pH 5.25이다. 일부 실시형태에서 pH는 pH 4.9 내지 pH 5.1이다.

일부 실시형태에서 제형의 pH는 약 pH 4.5, pH 4.6, pH 4.7, pH 4.8, pH 4.9, pH 5, pH 5.1, pH 5.2, pH 5.3, pH 5.4, pH 5.5이다. 특정 실시형태에서 pH는 4.9 내지 5.1, 예를 들어 pH 5이다.

안정화제, 크라이오 보호제, 및/또는 동결 보호제가 저장, 이동 및 사용 조건에 걸쳐 항체의 안정성을 개선하기 위해 포함된다. 적합한 안정화제는 제한 없이 탄수화물, 아미노산, 공용매, 항산화제, 킬레이트제, 염, 장성 개질제, 이온 강도 조절제를 포함한다.

제형은 L-형태, D-형태 또는 이들 형태의 임의의 원하는 혼합물일 수 있는 임의의 원하는 유리 아미노산을 함유할 수 있다. 일 양태에서, 제형에 포함될 수 있는 유리 아미노산은 예를 들어 히스티딘, 알라닌, 아르기닌, 글리신, 글루탐산, 세린, 라이신, 트립토판, 발린, 시스테인, 메티오닌, 및 이들의 조합을 포함한다. 일부 아미노산은 예를 들어 수소 결합, 염 다리, 항산화 특성 또는 소수성 상호 작용을 통해 또는 단백질 표면으로부터의 배제에 의해 제조, 건조, 동결건조 및/또는 저장 동안 분해에 대해 단백질을 안정화할 수 있다. 아미노산은 장성 개질제로 작용할 수 있거나 제형의 점도를 감소시키는 작용을 할 수 있다. 또 다른 양태에서, 히스티딘, 글리신 및 아르기닌과 같은 유리 아미노산은 동결 보호제로서 작용할 수 있고 제형의 성분으로서 동결 건조될 때 결정화되지 않는다. 글루탐산 및 히스티딘과 같은 유리 아미노산은 단독으로 또는 조합으로 pH 5 내지 7.5 범위의 수용액에서 완충제로 작용할 수 있다.

본원에서 "당류"는 단당류, 이당류, 삼당류, 다당류, 당 알코올, 환원당, 비환원당 등을 포함하는 일반식(CH₂O) 및 이의 유도체를 갖는 화합물이다. 본원에서 당류의 예는 글루코스, 수크로스, 트레할로스, 락토스, 프럭토스, 말토스, 덱스트란, 에리트리톨, 글리세롤, 아라비토실리토소르비톨, 만니톨, 멜리비오스, 멜레지토스, 라프모스, 만노트리오스, 스타키오스, 말토스, 라크루로스, 말툴로스, 글루시톨, 말티톨, 락티톨, 이소-말툴로스, 소르비톨 등을 포함한다. 당류는 동결 보호제일 수 있다. 일 양태에서, 결정화되지 않는 당류는 수크로스 또는 트레할로스와 같은 동결 보호제이다. 일 양태에서, 본원에서 당류는 수크로스, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 비환원성 이당류이다.

용어 "킬레이터"는 하나 초과의 결합을 통해 원자에 결합하는 작용제를 지칭한다. 일 양태에서, 본원에서 킬레이터의 예는 시트레이트, EDTA, EGTA, 디머카프롤, 디에틸렌트리아민펜타아세트산, 및 N,N-비스(카르복시메틸)글리신을 포함한다. 또 다른 양태에서, 킬레이터는 시트레이트 또는 EDTA이다.

용어 항산화제는 다른 분자의 산화를 억제하는 작용제를 지칭한다. 본원에서 항산화제의 예는 시트레이트, 리포산, 요산, 글루타티온, 토코페롤, 카로텐, 리코펜, 시스테인, 포스포네이트 화합물, 예를 들어 에티드론산, 데스페록사민 및 말레이트를 포함한다.

본 개시내용의 제형에 대한 관심의 특정 안정화제는 하나 이상의 소르비톨, 예를 들어 약 2% 내지 약 12% 농도, 예를 들어, 약 2.5% 내지 약 10% 농도의 소르비톨; 수크로스, 예를 들어 약 2% 내지 약 12% 농도, 예를 들어, 약 2.5% 내지 약 10% 농도의 수크로스; 트레할로스, 예를 들어 약 2% 내지 약 12% 농도, 예를 들어, 약 2.5% 내지 약 10% 농도의 트레할로스; 약 100 내지 200 mM 농도의 NaCl; 약 15 mM 내지 75 mM 농도의 아르기닌; 또는 이들의 조합, 예를 들어 아르기닌과 소르비톨, 아르기닌과 수크로스, 아르기닌과 트레할로스, 수크로스와 소르비톨 등을 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서 안정화제는 약 2.5% w/v, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10% 농도의 소르비톨이다. 특정 실시형태에서 안정화제는 수성 완충제 중 약 5% 중량/부피 농도의 소르비톨이다.

"계면활성제"는 표면 활성 제제를 지칭한다. 계면활성제는 주로 고체/액체 계면, 액체/공기 계면 및 단백질/단백질 계면에서 단백질의 상호 작용을 줄이기 위해 제형에 포함된다. 계면활성제는 단백질의 표면에 대한 흡착을 감소시킴으로써 입자 형성을 감소시키며, 교반, 동결/해동, 전단 응력으로 인한 응집을 감소시킨다. 또한, 단백질의 용해도를 향상시킬 수 있다. 일반적으로 계면활성제의 범주는 음이온성, 예를 들어 소듐 선형 알킬벤젠 설포네이트(LABS); 소듐 라우릴 설페이트; 소듐 라우릴 에테르 설페이트; 석유 설포네이트; 리노설포네이트; 나프탈렌 설포네이트, 분지형 알킬벤젠 설포네이트; 선형 알킬벤젠 설포네이트; 알콜 설페이트; 양이온성, 예를 들어 스테아르알코늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 4차 암모늄 화합물; 아민 화합물, 비이온성, 예를 들어 도데실 디메틸아민 옥사이드; 코코 디에탄올-아미드 알콜 에톡실레이트; 선형 1차 알콜 폴리에톡실레이트; 알킬페놀 에톡실레이트; 알콜 에톡실레이트; EO/PO 폴리올 블록 중합체; 폴리에틸렌 글리콜 에스테르; 지방산 알칸올아미드; 양쪽성: 코코암포카르복시글리시네이트; 코카미도프로필베타인; 베타인; 이미다졸린이다.

상기 열거된 것들에 더하여, 적합한 비이온성 계면활성제는 알칸올아미드, 아민 옥사이드, 블록 중합체, 에톡실화 1차 및 2차 알코올, 에톡실화 알킬페놀, 에톡실화 지방 에스테르, 소르비탄 유도체, 글리세롤 에스테르, 프로폭실화 및 에톡실화 지방산, 알콜, 및 알킬 페놀, 알킬 글루코시드 글리콜 에스테르, 중합체성 다당류, 에톡실화된 알킬페놀의 설페이트 및 설포네이트, 및 중합체성 계면활성제를 포함한다. 적합한 음이온성 계면활성제는 에톡실화 아민 및/또는 아미드, 설포석시네이트 및 유도체, 에톡실화 알콜의 설페이트, 알콜의 설페이트, 설포네이트 및 설폰산 유도체, 포스페이트 에스테르, 및 중합체성 계면활성제를 포함한다.

일부 실시형태에서 제형의 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 80, 또는 플루로닉 F68이다. 특정 실시형태에서 계면활성제는 폴리소르베이트 20이다.

계면활성제의 이상적인 농도는 적어도 단백질의 소수성 표면을 완전히 포화시키는 농도가 되도록 선택되지만, 완전히 포화되지 않은 농도도 이점을 제공할 수 있다. 예를 들어, 표면 장력 측정은 계면활성제가 단백질 표면에 완전히 흡착되는 농도를 결정하기 위해 항체와 계면활성제의 상호 작용을 평가하는 데 사용될 수 있다. 계면 활성제의 양은 제형에서 단백질의 표면적 증가로 인해 단백질 농도가 증가함에 따라 증가할 것이다. 따라서, 단백질 농도가 증가함에 따라 계면활성제의 농도가 증가할 수 있다.

일부 실시형태에서 계면활성제의 농도는 20 내지 25 mg/ml 항체를 포함하는 액체 제형에서 약 0.002% 내지 약 0.02%이고; 약 0.0075% 내지 약 0.015%, 약 0.008% 내지 약 0.012%일 수 있다. 일부 실시형태에서 계면활성제 농도는 약 0.004%, 0.006%, 0.01%, 0.011%, 0.012%, 0.013%, 0.014%, 0.015%이다.

일부 실시형태에서 계면활성제 농도는 약 0.2 내지 약 2의 계면활성제:단백질 몰 범위이고, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.4, 약 0.5, 약 0.6 내지 약 2 이하, 약 1.5 이하, 약 1.2 이하일 수 있다. 이러한 실시형태에서 계면활성제는 예를 들어 폴리소르베이트일 수 있다.

"안정한" 제형은 저장 후에 환자에게 투여될 수 있는 제형이다. 양태에서, 제형은 저장 시 이의 생물학적 활성뿐만 아니라 물리적 및 화학적 특성을 본질적으로 유지한다. 단백질 안정성을 측정하기 위한 다양한 분석 기술이 당업계에서 이용 가능하며 예를 들어 문헌[Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991)] 및 문헌[Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)]에서 검토된다.

안정성은 이온 교환 크로마토그래피(IEC) 또는 이미지화된 모세관 등전 포커싱(icIEF), 크기 배제 크로마토그래피(SE-HPLC), CE-SDS 또는 SDS-PAGE 분석을 사용하여 전하 이질성을 평가하여 환원된 항체와 온전한 항체를 비교, 빛 차단에 의한 육안으로 보이지 않는 입자 형성, 미세 흐름 이미징 또는 현미경 검사; 항체의 생물학적 활성 또는 항원 결합 기능을 평가하는 것; 등에 의해 가용성 응집체 형성(예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피 사용, 탁도 측정) 및 육안 검사에 의한 가시적 입자 형성 평가를 포함하는 다양한 상이한 방식으로 정성적으로 및/또는 정량적으로 평가될 수 있다. 불안정에는 임의의 하기 중 하나 이상이 포함될 수 있다: 응집, 탈아미드화(예를 들어, Asn 탈아미드화), 산화(예를 들어, Met 산화), 이성질체화(예를 들어, Asp 이성질체화), 클리핑/가수분해/단편화(예를 들어, 힌지 영역 단편화), 석신이미드 형성, 짝을 이루지 않은 시스테인(들), N-말단 확장, C-말단 처리, 글리코실화 차이 등.

본원에 사용된 바와 같이, 단일클론 항체의 "생물학적 활성"은 항원에 결합하는 항체의 능력을 지칭한다. 이는 항원에 결합하여 시험관 내 또는 생체 내에서 측정될 수 있는 측정 가능한 생물학적 반응을 야기하는 항체를 추가로 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서 안정한 약학 제형은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16주 이상, 최대 3개월, 6개월, 9개월, 12개월 이상 안정하다. 특정 실시형태에서, 안정한 약학 제형은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 적어도 약 1, 2, 4, 6, 8, 12개월 이상 안정하다. 특정 실시형태에서, 안정한 약학 제형은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12개월 이상 안정하다.

추가 실시형태에서 제형 중 항-CD47 항체는 저장 후 생물학적 활성의 적어도 50%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 99%를 유지한다. 일부 실시형태에서 생물학적 활성은 CD47에 대한 항체 결합에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서 생물학적 활성은 FACS CD47 결합 검정에서 CD47에 대한 항체 결합에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서 생물학적 활성은 상기 항-CD47 항체의 ADCP 활성에 의해 측정된다.

또 다른 양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 안정한 약학 제형을 보유하는 용기를 포함하는 제조 물품이 본원에 제공된다. 일 실시형태에서 상기 용기는 유리 바이알, 예를 들어, 유형 1 유리 바이알, 중합체성 바이알(예를 들어, 시클릭 올레핀 중합체, 시클릭 올레핀 공중합체, 고밀도 폴리에틸렌(HDPE), 폴리카보네이트, 폴리에틸렌 테레프탈레이트 글리콜(PETG)), 중합체성 백 또는 파우치(예를 들어, 저밀도 폴리에틸렌(LDPE), 에틸 비닐 아세테이트(EVA)), 또는 금속 합금 용기이다.

"투여 단위"는 치료될 특정 개인에 대한 단일 투여량으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭한다. 각 단위는 필요한 약학적 담체와 관련하여 원하는 치료 효과(들)를 생성하도록 계산된 활성 화합물(들)의 미리 결정된 양을 함유할 수 있다. 투여 단위 형태에 대한 사양은 (a) 활성 화합물(들)의 고유한 특성 및 달성될 특정 치료 효과(들), 및 (b) 이러한 활성 화합물(들)을 컴파운딩하는 기술에 내재된 한계에 의해 지시될 수 있다.

본 발명의 제형의 투여 단위는 약 10 내지 약 160 mg/ml의 농도로, 약 10 내지 약 100 mg/ml의 농도로, 약 10 내지 약 80 mg/ml의 농도로, 약 15 내지 약 50 mg/ml의 농도로, 약 10 내지 약 25 mg/ml의 농도로, 약 15 내지 약 20 mg/ml의 농도로, 약 20 mg/ml의 농도로 1 ml, 2 ml, 5 ml, 10 ml, 15 ml, 20 ml, 30 ml, 40 ml, 50 ml, 60 ml일 수 있다. 일부 실시형태에서 투여 단위는 10 ml이다. 일부 실시형태에서 투여 단위는 20 ml이다. 일부 실시형태에서 투여 단위는 30 ml이다. 일부 실시형태에서 투여 단위는 40 ml이다. 일부 실시형태에서 투여 단위는 50 ml이다. 일부 실시형태에서 투여 단위는 60 ml이다.

"치료 유효 용량" 또는 "치료 용량"은 원하는 임상 결과에 영향을 미치기에(즉, 치료 효능을 달성하기에) 충분한 양이고, 제형의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 그 이상의 투여 단위를 사용할 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 항-CD47 작용제의 치료학적 유효 용량은 표적 세포(예를 들어 표적 세포)의 식균 작용을 증가시켜 질환 병태의 진행을 완화, 개선, 안정화, 역전, 예방, 감속 또는 지연시키기에; 예를 들어 혈액, 골수 등의 종양 세포 수를 줄이기에 충분한 양이다. 따라서, 항-CD47 작용제의 치료적 유효 용량은 표적 세포의 식균 작용을 증가시키기 위한 유효 용량에서, 식세포 상의 SIRPα에 대한 표적 세포 상의 CD47의 결합을 감소시킨다.

일부 실시형태에서, 제형 중 항-CD47 항체는 단일클론 항체이다. 일부 실시형태에서, 제형 중 항-CD47 항체는 전장 항체이다. 일부 실시형태에서, 제형 중 항-CD47 항체는 IgG 항체이다. 일부 실시형태에서, 제형 중 항-CD47 항체는 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서 항체는 인간 IgG4 불변 사슬을 포함한다.

일부 실시형태에서, 항-CD47 항체는 서열(SEQ ID NO: 1)을 포함하는 HCDR1 영역, 서열(SEQ ID NO: 2)을 포함하는 HCDR2 영역, 서열(SEQ ID NO: 3)을 포함하는 HCDR3 영역, 서열(SEQ ID NO: 4)을 포함하는 LCDR1 영역, 서열(SEQ ID NO: 5)을 포함하는 LCDR2 영역, 및 서열(SEQ ID NO: 6)을 포함하는 LCDR3 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서 이러한 항체는 인간 IgG4 불변 영역 서열을 포함한다. SEQ ID NO:7, 8 및 9는 예시적인 중쇄 가변 영역 서열을 제공하고; SEQ ID NO:10, 11, 12는 예시적인 경쇄 가변 영역 서열을 제공한다.

일부 실시형태에서 항체는 마그롤리맙이고, IgG4 중쇄 불변 영역과 함께 SEQ ID NO:8의 중쇄 가변 영역 서열 및 SEQ ID NO:11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 선택적으로, IgG4 불변 영역은 힌지 영역을 안정화하기 위한 아미노산 변형, 예를 들어 S228P 아미노산 치환을 갖는다.

사용 방법

조성물은 치료적 치료를 위해 투여될 수 있다. 조성물은 표적 세포의 식균 작용을 실질적으로 향상시키기에 충분한 양으로 환자에게 투여된다. 이를 달성하기에 적절한 양은 전체 생존율의 개선을 제공할 수 있는 "치료적 유효 용량"으로 정의된다. 조성물의 단일 또는 다중 투여는 환자가 필요로 하고 허용하는 투여량 및 빈도에 따라 투여될 수 있다. 치료에 필요한 특정 용량은 포유류의 의학적 병태 및 병력뿐만 아니라 연령, 체중, 성별, 투여 경로, 효율성 등과 같은 기타 인자에 따라 달라질 것이다.

본원에 기재된 제형은 예를 들어 암을 치료 또는 감소, 표적 세포를 CD47 활성을 차단하는 제형의 유효 용량과 접촉시키는 것 등을 포함하는 요법에서 감염을 감소시키는 데 사용된다. 암 치료를 위한 본 발명의 작용제의 유효 용량은 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태, 환자가 인간인지 동물인지, 투여되는 기타 약물, 및 치료가 예방적 또는 치료적인지를 포함하는 다양한 요인에 따라 달라진다. 일반적으로, 환자는 인간이지만, 비인간 포유류, 예를 들어 반려 동물, 예컨대 개, 고양이, 말 등, 실험실 포유류, 예컨대 토끼, 마우스, 래트 등이 또한 치료될 수 있다. 치료 투여량은 안전성 및 효능을 최적화하도록 적정될 수 있다.

"환자"는 인간 및 기타 동물, 특히 애완동물 및 실험실 동물을 비롯한 포유류, 예를 들어 마우스, 래트, 토끼 등을 포함한다. 따라서, 방법은 인간 치료 및 수의학 적용 둘 모두에 적용 가능하다. 일 실시형태에서 환자는 포유류, 바람직하게는 영장류이다. 다른 실시형태에서 환자는 인간이다.

용어 "암", "신생물" 및 "종양"은 이들이 세포 증식에 비해 유의한 제어 소실을 특징으로 하는 비정상 성장 표현형을 나타내도록 자율적인 비조절된 성장을 나타내는 세포를 지칭하도록 본원에 상호교환적으로 사용된다. 본 출원에서 검출, 분석, 또는 치료를 위한 관심 세포는 전암성(예를 들어, 양성) 세포, 악성 세포, 전전이성 세포, 전이성 세포, 및 비전이성 세포를 포함한다. 사실상 모든 조직의 암이 공지되어 있다. "암 부담"이라는 구절은 대상체에서의 암 세포 또는 암 부피의 양자를 지칭한다. 암 부담의 감소는 따라서 대상체에서의 암 세포의 수 또는 암 부피의 감소를 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "암 세포"는 암 세포이거나 암 세포로부터 유래된 임의의 세포, 예를 들어 암 세포의 클론을 지칭한다.

암의 "병리학"은 환자의 웰빙을 손상시키는 모든 현상을 포함한다. 이는 제한 없이 비정상 또는 제어 불가능한 세포 성장, 전이, 이웃 세포의 정상 기능에 의한 방해, 비정상 수준의 사이토카인 또는 다른 분비 생성물의 방출, 림프절 등과 같은 둘러싼 조직 또는 장기 또는 원위 조직 또는 장기의 염증성 반응 또는 면역학적 반응, 신생물, 전악성종양, 악성종양, 침윤의 억제 또는 악화를 포함한다.

본원에 사용되는 바와 같은 용어 "암 재발" 및 "종양 재발" 및 이의 문법적 변형어는 암의 진단 후 신생물 또는 암성 세포의 추가의 성장을 지칭한다. 특히, 암성 조직에서 추가의 암성 세포 성장이 발생할 때 재발이 발생할 수 있다. "종양 분산"은 유사하게 종양의 세포가 국소 조직 및 장기 또는 먼 조직 및 장기로 퍼질 때 발생하고; 따라서 종양 분산은 종양 전이를 포함한다. "종양 침윤"은 정상 장기 기능의 압박, 파괴, 또는 방지에 의해 관여된 조직의 기능을 손상시키도록 종양 성장이 국소로 분산할 때 발생한다.

본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "전이"는 장기 또는 신체 부분에서의 암성 종양의 성장을 지칭하고, 이는 원래의 암성 종양의 장기에 직접적으로 연결되지 않는다. 전이는 원래의 암성 종양의 장기에 직접적으로 연결되지 않은 장기 또는 신체 부분에서의 암성 세포의 검출 불가능한 수의 존재인 미세전이를 포함하도록 이해될 것이다. 전이는 또한 원래의 종양 부위로부터의 암 세포의 출발, 및 암 세포의 다른 신체 부분으로의 이동 및/또는 침윤과 같은 과정의 몇몇 단계로서 정의될 수 있다.

용어 "진단"은 분자 또는 병리학적 상태, 질환 또는 병태의 확인, 예컨대 유방암, 전립선암, 또는 다른 암 유형의 분자 하위유형의 확인을 지칭하는 것으로 본원에서 사용된다.

용어 "예후"는 난소암과 같은 신생물 질환의 재발, 전이성 분산, 및 약물 내성을 포함하는 암에 기인 가능한 사멸 또는 진행 가능성의 예측을 지칭하는 것으로 본원에서 사용된다. 용어 "예측"은 관찰, 경험, 또는 과학적 추론에 기초한 예지 또는 추정의 작용을 지칭하는 것으로 본원에 사용된다. 일 실시예에서, 의사는 환자가 암 재발 없이 소정의 시간 기간 동안 원발성 종양의 수술 제거 및/또는 화학치료 후에 살아있을 가능성을 예측할 수 있다.

일 실시형태에서 암은 혈액암 또는 골수이형성 증후군, 예를 들어 비호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군; 다발성 골수종 등이다. 실시형태에서, 비호지킨 림프종은 여포성 림프종, 소림프구성 림프종, 점막-연관 림프성 조직, 변연부, 미만성 거대 B 세포, 버킷 및 외투 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서 MDS가 치료된다. 일부 실시형태에서 AML이 치료된다. 다른 실시형태에서 암은 암종, 육종, 골수종, 신경교종 등이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료", "치료하는" 등은 효과를 수득하기 위한 목적으로 제제를 투여하거나 절차를 수행하는 것을 지칭한다. 효과는 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방한다는 점에서 예방적일 수 있고/있거나 질환 및/또는 질환의 증상에 대한 부분적 또는 완전한 치유를 달성한다는 점에서 치료적일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "치료"는 포유류, 특히 인간에서 종양의 치료를 포함할 수 있으며, 하기를 포함한다: (a) 질환의 소인이 있을 수 있지만 아직 질환에 걸린 것으로 진단되지 않은 대상체에서 질환 또는 질환의 증상이 발생하는 것을 예방(예를 들어, 1차 질환과 관련되거나 이에 의해 야기될 수 있는 질환 포함); (b) 질환의 억제, 즉 질환의 발달 저지; 및 (c) 질환의 경감, 즉 질환의 퇴행 유발.

치료는 완화; 차도; 증상의 감소 또는 질환 병태를 환자가 더 견딜 수 있게 하는 것; 퇴화 또는 쇠퇴의 속도 저하; 또는 퇴화의 최종 지점을 덜 쇠약하게 만드는 것과 같은 임의의 객관적 또는 주관적 매개변수를 포함하는 암의 치료 또는 개선 또는 예방에서의 성공의 임의의 지표를 지칭할 수 있다. 증상의 치료 또는 개선은 의사에 의한 검사 결과를 포함하는 객관적 또는 주관적 매개변수를 기반으로 할 수 있다. 따라서, 용어 "치료하는"은 암 또는 다른 질환과 관련된 증상 또는 병태의 발병을 예방 또는 지연, 완화, 저지 또는 억제하기 위한 본 발명의 화합물 또는 제제의 투여를 포함한다. 용어 "치료 효과"는 대상체에서 질환, 질환의 증상 또는 질환의 부작용의 감소, 제거 또는 예방을 지칭한다.

특정 실시형태에서, "~와 조합으로", "조합 요법" 및 "조합 생성물"은 환자에게 제1 치료제 및 본원에 사용된 화합물의 동시 투여를 지칭한다. 조합으로 투여되는 경우, 각 성분은 동시에 투여될 수 있거나 상이한 시점에 임의의 순서로 순차적으로 투여될 수 있다. 따라서, 각 성분은 개별적으로 투여될 수 있지만 원하는 치료 효과를 제공하기 위해 시간적으로 충분히 가깝게 투여될 수 있다.

일부 실시형태에서, 항-CD47 항체 제형의 치료 용량은 숙주 체중의 약 1 내지 100 mg/㎏, 예를 들어, 약 10 내지 90 mg/㎏, 예를 들어, 약 10 내지 60 mg/㎏, 그리고 더 일반적으로 10 내지 50 mg/㎏ 범위일 수 있다. 예를 들어, 용량은 약 20, 30, 40, 45, 50, 60 mg/㎏ 체중 또는 20 내지 60, 20 내지 50 또는 30 내지 60 mg/㎏ 범위일 수 있다. 예시적인 치료 요법은 3일마다, 매주, 2주마다, 3주마다 1회, 또는 1개월마다 1회, 6주마다 1회, 또는 3 내지 6개월마다 1회 투여를 수반한다. 본 발명의 치료제는 일반적으로 여러 번 투여된다. 단일 용량 사이의 간격은 매일, 매주, 매월 또는 매년일 수 있다. 간격은 또한 환자에서 치료제의 혈액 수준을 측정함으로써 표시되는 바와 같이 불규칙할 수 있다. 용량 및 빈도는 환자의 폴리펩티드 반감기에 따라 다르다.

독성은 예를 들어 LD₅₀(집단의 50%에 치명적인 투여량) 또는 LD₁₀₀(집단의 100%에 치명적인 투여량)을 결정함으로써 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 약학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 독성과 치료 효과 사이의 용량 비는 치료 지수이다. 이러한 세포 배양물 분석 및 동물 연구에서 수득한 데이터는 인간에 사용하기에 독성이 아닌 투여량 범위를 제형화하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 단백질의 투여량은 바람직하게는 독성이 거의 없는 또는 전혀 없는 유효 용량을 포함하는 순환 농도 범위 내에 있다. 투여량은 사용된 투여 형태 및 사용된 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 달라질 수 있다. 정확한 제형, 투여 경로 및 투여량은 환자의 병태를 고려하여 개별 의사에 의해 선택될 수 있다.

또한, 본 발명의 범위 내에는 본 발명의 제형 및 사용 설명서를 포함하는 키트가 있다. 키트는 액체 추출 보조제; 적어도 하나의 추가 시약, 예를 들어 화학 요법 약물, ESA 등을 추가로 함유할 수 있다. 키트는 일반적으로 키트 내용물의 용도를 나타내는 라벨을 포함한다. 용어 라벨은 키트에 또는 키트와 함께 제공되거나 또는 그렇지 않으면 키트를 동반하는 임의의 기록 또는 레코딩된 자료를 포함한다.

실시예

하기 실시예는 당업자에게 본 발명의 제조 및 사용 방법에 대한 완전한 개시 및 설명을 제공하기 위해 제시되며, 본 발명자들이 그들의 발명으로 간주하는 것의 범위를 제한하기 위한 것이 아니며 아래의 실험들이 수행된 모든 또는 유일한 실험임을 나타내기 위한 것이 아니다. 사용된 숫자(예를 들어, 양, 온도 등)에 대하여 정확성을 보장하기 위해 노력했지만 일부 실험 오차 및 편차가 고려되어야 한다. 달리 나타내지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 중량 평균 분자량이고, 온도는 섭씨 온도이고, 압력은 대기압 또는 대기압 부근이다.

실시예 1

인간화 5F9-G4 항체(마그롤리맙)의 안정성에 대해 시험된 제형.

pH, 장성 개질제 및 계면활성제를 포함하는 다양한 제형 조건에서 Hu5F9-g4의 안정성을 먼저 조사하였다. 이 연구는 생성물에 대한 효과적인 안정성 표시 분석인 약한 양이온 교환 HPLC(WCX-HPLC), 크기 배제 HPLC(SE-HPLC) 및 소듐 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE) 분석으로 수행되었다.

교반 응력이 가해지면 생성물이 흐릿해진다. 따라서, 계면활성제로서 폴리소르베이트 20을 Hu5F5-g4 제형에 첨가하여 응력 동안 생성물을 안정화시켰다. 추가적인 급성 응력 검사에서 생성물은 연속적인 동결/해동 사이클, 교반 및 광범위한 자외선(UV-light) 노출에 취약하지 않은 것으로 나타났다.

상이한 제형에서 Hu5F9-g4의 안정성은 최대 8주 동안 동결(-70℃), 냉장(5℃) 및 가속 온도(예를 들어, 25℃ 및 37℃)에서 정적 저장 조건 하에 조사되었다. 대부분의 제형은 온도 저장 동안 투명하고 입자가 없는 상태로 유지되었다. 그러나, pH 4.0에서 이온성 장성 개질제(염화나트륨)의 존재 하에, Hu5F9-g4는 흐릿하게 변했고 37℃에서 단 1주 후에 상당한 화학적 및 물리적 분해를 나타냈다. WCX-HPLC 분석은 pH 7 ± 1에서 그리고 특히 pH 6.0 및 6.5에서 이온성 장성 개질제가 없는 상태에서 제형화된 생성물의 상승된 온도 저장 동안 화학적 불안정성을 나타냈다. Hu5F9-g4의 물리적 안정성은 SE-HPLC 및 SDS-PAGE로 평가하였다. 이러한 검사는 특히 더 높은 pH에서 비이온성 장성 개질제와 포스페이트 완충제에서 제형화된 생성물에 대한 가속 온도 저장 동안 올리고머 또는 HMW 종의 상승된 수준을 검출하였다. 대조적으로, SE-HPLC 분석은 -70℃ 저장 동안 이온성 장성 개질제의 존재 하에 더 많은 HMW 종을 나타냈다.

10 mM 아세테이트 완충제, 비이온성 장성 개질제(5% 소르비톨) 및 폴리소르베이트 20(0.01%)을 포함하는 pH 5.0의 제형이 이 연구로부터 최고의 제형 후보로 선택되었다. 이 제형은 응력 동안 화학적 및 물리적 안정성을 모두 나타냈다.

선택된 A5S 제형의 안정성 결과는 다음과 같이 요약된다. 이 연구에서 대부분의 샘플은 동결/해동, 교반, UV-광 노출 및 온도 응력 후에도 투명하고 입자 없이 유지되었다. 따라서, 제형 후보 A5S에 대해 가시적인 물리적 분해는 관찰되지 않았다. 선택된 제형 후보에 대한 농도는 -70℃, 5℃, 25℃ 및 37℃ 저장에서 8주에 걸쳐 표적에 대하여 유지되었다.

8주의 온도 저장 후, 일부 Hu5F9-g4 제형은 안정성 연구 동안 표적보다 약간 더 높은 pH 값을 나타냈다. 그럼에도 불구하고, 온도 저장 동안 선택된 후보에 대한 pH 결과는 T=0에서 ± 0.2 pH 단위보다 더 벗어나지 않았다. 제형 후보에 대한 삼투압 농도 값은 거의 등장성이었다. 소르비톨로 제형화된 샘플은 NaCl을 포함하는 샘플보다 약간 더 고장성이다. 선택된 제형 후보(A5S)의 삼투압 농도는 314 mOsm이었다.

시험된 13개의 제형 각각은 UV-광 응력 이후에 비슷한 WCX-HPLC 데이터를 생성하였다. 이 응력 조건 동안 선택된 제형 후보에 대해 유의한 분해는 관찰되지 않았다.

다른 제형과 비교하여, A5S에 대한 백분율 순도는 -70℃, 5℃, 25℃ 및 37℃에서 8주 저장 동안 비교적 높게 유지되었다.

SE-HPLC 분석은 교반, 동결/해동 및 UV-광 노출 후 각 샘플에 대해 유사한 순도 결과를 나타냈다. 따라서, 선택된 제형 후보는 이러한 급성 응력 조건에 따른 상당한 올리고머화 또는 절단을 나타내지 않았다.

SDS-PAGE 검사는 -70℃, 5℃, 25℃ 및 37℃에서 저장 동안 선택된 후보에 대해 유의한 분해를 나타내지 않았다. 8주 동안 25℃ 및 37℃에서 저장된 샘플에 대한 SDS-PAGE 결과는 HMW 종이 NaCl 없이 더 높은 pH에서 제형화된 샘플에서만 검출되었음을 보여준다.

[표 1]

실시예 2

최종 제형 평가

제형 스크리닝. 다음과 같은 다양한 매개변수를 갖는 제형이 연구되었다:

a. pH: 4 내지 8

b. 완충제: 10 mM 소듐 아세테이트, 10 mM 히스티딘, 및 10 mM 소듐 포스페이트

c. 안정화제: 5% 소르비톨(비이온성) 및 150 mM NaCl(이온성)

평가된 제형을 표 2에 나타냈다.

[표 2]

계면활성제 평가. pH 6.5의 PBS 중 11 mg/mL의 마그롤리맙(hu5F9-g4)에 0.01% w/v 폴리소르베이트 20, 0.01% w/v 폴리소르베이트 80, 및 0.10% F68 플루로닉을 첨가하였다. 이들 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하고 600 nm에서의 시각적 외관 및 흡광도(표 2) 및 SE-HPLC에 의한 응집체 형성(표 3)에 의해 탁도를 평가하였다. 탁도 측정은 PS20 및 F68이 PS80보다 탁도가 낮음을 보여준다. 그러나, 전반적으로, 시각적 외관 결과는 시험된 3가지 계면활성제 모두가 마그롤리맙을 입자 형성으로부터 보호하는 것으로 나타났다. 시험된 3가지 계면활성제 모두에 대해 SE-HPLC 품질 프로파일에는 변화가 없었다.

[표 3]

[표 4]

pH 5.0에서 20 mg/mL 마그롤리맙, 10 mM 아세테이트, 5% w/v 소르비톨의 제형에 대한 폴리소르베이트 20의 상호 작용을 평가하기 위해 표면 장력 측정법을 수행하였다. 표면 장력 프로파일은 도 1에 도시되어 있다. 폴리소르베이트 20은 대략 0.01 mg/mL(0.001%)에서 단백질과 상호 작용하기 시작한다. 용액의 단백질은 대략 0.1 내지 0.2 mg/mL(0.01% 내지 0.02%)의 폴리소르베이트 20으로 완전히 포화되었다.

pH 4.0에서 10 mM 소듐 아세테이트, 150 mM NaCl을 함유하는 제형 1은 급속하게 분해되었다. 이 제형은 임의의 응력 조건 연구에서 더 이상 평가되지 않았다.

동결/해동, 교반 및 주변 광 노출 연구의 결과가 하기 표에 요약되어 있다.

[표 5]

열 안정성. 제형을 -70℃, 5℃, 25℃ 및 37℃에서 8주 동안 안정화시켰다. 제형을 단백질 농도, pH, 시각적 외관, SE-HPLC, WCX-HPLC, 및 SDS-PAGE 환원 및 비환원에 의해 평가하였다.

8주 후, 제형 1을 제외한 모든 제형은 시험된 모든 온도에서 투명하고 입자가 없었다. 제형 1은 37℃에서 1주 후 흐릿했고 연구에서 중단되었다.

단백질 농도는 표 6에 나타낸 바와 같이 8주 후에도 변하지 않은 채로 유지되었다.

[표 6]

연구 종료 시 pH를 측정하였다. 일반적으로 pH는 초기 시점보다 높았지만 측정 오차 범위 내에 있었다.

[표 7]

도 2 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 최대 8주 저장까지 다양한 저장 온도에서 모든 제형의 WCX-HPLC 메인 피크 및 프리-피크 프로파일을 측정하였다. -70℃ 및 5℃ 저장 시, 최대 8주까지 변화가 없다. 25℃ 및 37℃에서, 메인 피크의 감소량이 가장 적은 제형은 pH 5 및 pH 6의 제형이다. pH 4에서 소르비톨 제형은 NaCl 제형보다 더 안정한 반면, pH 6.5에서 소르비톨 제형은 NaCl 제형보다 덜 안정하다. 메인 피크가 감소함에 따라 프리-피크/산성 종은 증가하며 pH 및 안정화제에서 유사한 안정성 경향을 보인다.

8주까지의 다양한 저장 온도에서 모든 제형의 SE-HPLC 단량체 및 응집체/프리-피크 프로파일이 각각 도 4 및 도 5에 도시되어 있다. 5℃ 및 25℃ 저장 시, 최대 8주까지 유의한 변화가 없다. -70℃ 및 37℃에서는 단량체가 감소하고 이에 따라 응집체가 증가한다. -70℃에서 NaCl 또는 PBS를 함유하는 pH 6 내지 8의 제형은 더 높은 응집체 형성을 야기하였다. 37℃에서 pH 6 내지 8의 포스페이트 완충제와 소르비톨을 함유하는 제형은 응집체 형성 속도가 더 높았다.

안정한 제형 매개변수 공간에 대한 결과는 표 8에 요약되어 있다.

[표 8]

선택된 제형의 장기 안정성. 개발 연구를 기반으로 장기 연구를 위해 선택된 제형은 pH 5.0에서 20 mg/mL 마그롤리맙, 10 mM 아세테이트, 5% w/v 소르비톨, 0.01% 폴리소르베이트 20이었다. 이 제형은 플루오로폴리머 코팅된 부틸 마개가 있는 유형 1 유리 바이알에 저장되며, 아래 표에 자세히 나와 있는 바와 같이, SE-HPLC, icIEF, CE-SDS 환원 및 비환원 및 결합으로 측정할 때 5℃에서 적어도 3년 동안 안정하다.

[표 9]

실시예 3

마그롤리맙의 점도 측정

마그롤리맙의 점도는 농도의 함수로서 측정되었다. 단백질은 용액에 여전히 남아 있는 120 mg/mL 초과로 농축되었고 시각적으로 투명하였다. 단백질 점도는 낮고 160 mg/mL에서 대략 20 cP에 이른다. 결과는 도 6에 나와 있다.

실시예 4

마그롤리맙 제형의 탁도 평가

진탕 연구는 다양한 농도의 폴리소르베이트 20과 마그롤리맙을 사용하여 수행하였다. 제형에 폴리소르베이트 20이 0인 경우, 용액은 SEC-HPLC에 의해 측정된 증가된 탁도 및 응집체 형성 및 보이지 않는 입자를 나타냈다. 0.005% 이상의 폴리소르베이트 20 농도의 경우, 제형 품질 속성에 변화가 없었다. 이 결과는 표면 장력 측정 데이터와 잘 연관되었다.

실시예 5

마그롤리맙을 사용한 부형제 스크린

다양한 안정화 부형제를 마그롤리맙을 사용하여 연구하고 고유 형광에 의해 용융 온도를 평가하였다. 도 7에 표시된 용융 온도 및 안정성 데이터는 시험된 모든 부형제가 마그롤리맙을 안정화함을 나타낸다. 용융 온도는 마그롤리맙이 당류 부형제의 존재 하에 가장 안정화되었음을 나타냈다.

SEQUENCE LISTING <110> The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University <120> Antibody Formulation <130> STAN-1737WO <150> 63/005,755 <151> 2020-04-06 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Asn Tyr Asn Met His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr 1 5 <210> 7 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody hu5F9-vh1 <400> 7 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 8 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody hu5F9-vh2 <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 9 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody hu5F9-vh3 <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody hu5F9-vl1 <400> 10 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr His Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 11 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody hu5F9-vl2 <400> 11 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 12 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody hu5F9-vl3 <400> 12 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr His Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

Claims (25)

1. 약학적으로 안정한 수성 제형으로서, 10 내지 100 mg/ml의 항-CD47 항체;
   및 5 내지 20 mM 농도의 완충제를 포함하는 약학적으로 허용되는 부형제;
   적어도 하나의 안정화제, 및 계면활성제를 포함하며,
   약 pH 4 내지 6.5의 pH를 갖는, 약학적으로 안정한 수성 제형.
2. 제1항에 있어서, 완충제가 10 내지 15 mM의 농도로 존재하는, 약학적으로 안정한 수성 제형.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제형 중 완충제가 아세테이트 완충제 또는 히스티딘 완충제인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
4. 제3항에 있어서, 완충제가 아세테이트 완충제인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, pH가 pH 4 내지 pH 6.5인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
6. 제5항에 있어서, pH가 pH 4.7 내지 pH 5.3인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
7. 제5항에 있어서, pH가 pH 4.9 내지 pH 5.1인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 안정화제가 2.5% 내지 10% 농도의 소르비톨인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 안정화제가 2.5% 내지 10% 농도의 수크로스인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 안정화제가 2% 내지 12% 농도의 트레할로스인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
11. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 안정화제가 100 내지 200 mM 농도의 NaCl인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 계면활성제가 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 또는 플루로닉 F68인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
13. 제12항에 있어서, 계면활성제가 약 0.005% 내지 약 0.05%의 계면활성제 농도의 폴리소르베이트 20인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 적어도 12개월 동안 안정한, 약학적으로 안정한 수성 제형.
15. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 적어도 16주 동안 안정한, 약학적으로 안정한 수성 제형.
16. 제15항에 있어서, 제형 중 항-CD47 항체가 저장 후 그의 생물학적 활성의 적어도 50%를 유지하는, 약학적으로 안정한 수성 제형.
17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 제형 중 항-CD47 항체가 전장 항체인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
18. 제17항에 있어서, 항체가 인간 IgG4 불변 영역 서열을 포함하는, 약학적으로 안정한 수성 제형.
19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 항체는 서열(SEQ ID NO: 1)을 포함하는 HCDR1 영역, 서열(SEQ ID NO: 2)을 포함하는 HCDR2 영역, 서열(SEQ ID NO: 3)을 포함하는 HCDR3 영역, 서열(SEQ ID NO: 4)을 포함하는 LCDR1 영역, 서열(SEQ ID NO: 5)을 포함하는 LCDR2 영역, 및 서열(SEQ ID NO: 6)을 포함하는 LCDR3 영역을 포함하는 인간화 항체인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 마그롤리맙인, 약학적으로 안정한 수성 제형.
21. 약학적으로 허용되는 안정한 액체 제형으로서, 4.5 내지 5.5의 pH에서 10 내지 20 mg/ml 마그롤리맙; 10 mM 아세테이트 완충제; 5% w/v 소르비톨; 0.01% 내지 0.04% 폴리소르베이트 20을 포함하는, 약학적으로 허용되는 안정한 액체 제형.
22. 약학적으로 허용되는 안정한 액체 제형으로서, 4.5 내지 5.5의 pH에서 10 내지 20 mg/ml 마그롤리맙; 10 mM 아세테이트 완충제; 9% w/v 수크로스; 0.01% 내지 0.04% 폴리소르베이트 20을 포함하는, 약학적으로 허용되는 안정한 액체 제형.
23. 약학적으로 허용되는 안정한 액체 제형으로서, 4.5 내지 5.5의 pH에서 10 내지 20 mg/ml 마그롤리맙; 10 mM 아세테이트 완충제; 9% w/v 트레할로스; 0.01% 내지 0.04% 폴리소르베이트 20을 포함하는, 약학적으로 허용되는 안정한 액체 제형.
24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 제형의 단위 용량을 포함하는 제조 물품.
25. 유효 용량의 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 항체 제형을 투여함으로써 이를 필요로 하는 개체를 치료하는 방법.

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