KR20220135669A - 서팩틴을 생산하는 신규한 바실러스 서브틸리스 균주 및 이의 용도 - Google Patents
서팩틴을 생산하는 신규한 바실러스 서브틸리스 균주 및 이의 용도 Download PDFInfo
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Abstract
Description
도 2는 pb2441과 다른 고초균의 전장유전체의 구조를 비교한 그림이다.
도 3은 바실러스 서브틸리스 pb2441 KACC81145B의 성장률을 확인한 결과이다.
도 4는 바실러스 서브틸리스 pb2441 KACC81145B의 단백질 분해효소 분비량을 확인한 결과이다.
도 5는 바실러스 서브틸리스 pb2441 KACC81145B가 생산한 서팩틴을 정성분석한 결과이다.
도 6은 바실러스 서브틸리스 pb2441 KACC81145B가 생산한 서팩틴을 정량분석한 결과이다.
| 서열번호 2(바실러스 서브틸리스 pb2441의 16S rDNA 핵산 염기 서열) |
| gtagtggcggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcctgtaagactgggataactccgggaaaccggggctaataccggatggttgtctgaaccgcatggttcagacataaaaggtggcttcggctaccacttacagatggacccgcggcgcattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcgacgatgcgtagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccgcaatggacgaaagtctgacggagcaacgccgcgtgagtgatgaaggttttcggatcgtaaagctctgttgttagggaagaacaagtgccgttcaaataggcggcaccttgacggtacctaaccagaaagccacggctaactacgtgcccgcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttgtccggaattattgggcgtaaagggctcgcaggcggtttcttaagtctgatgtgaaagcccccggctcaaccggggagggtcattggaaactggggaacttgagtgcagaagaggagagtggaattccacgtgtagcggtgaaatgcgtagagatgtggaggaacaccagtggcgaaggcgactctctggtctgtaactgacgctgaggagcgaaagcgtggggagcgaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgggtgctaagtgttagggggtttccgccccttagtgctgcagctaacgcattaagcactccgcctggggagtacggtcgcaagactgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcctctgacaatcctagagataggacgt |
| 서열번호 3 (바실러스 서브틸리스 16S rDNA, internal transcribed spacer (ITS), 23S rDNA sequence |
| TTTTTCGAGTGT 1 TGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGGGACAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGGTGCGGCTGGATCACCTCCTTTCTA 2 AGGATATTATACGGAATATAAGACCTTGGGTCTTATAAGCAGAACGTTCCCTGTCTTGTTTAGTTTTGAAGGATCATTCCTTCGAAACGTGTTCTTTGAAAACTAGATAACAGTAGACATCACATTCAATTAGTAACACAAGATATCACATAGTGATTCTTTTTAAC GGTTAAGTTAGAAAGGGCGCACGGTGGATGCCTTGGCACTAGGAGCCGATGAAGGACGGG 3 ACGAACACCGATATGCTTCGGGGAGCTGTAAGCAAGCTTTGATCCGGAGATTTCCGAATGGGGAAACCCACCACTCGTAATGGAGTGGTATCCATATCTGAATTCATAGGATATGAGAAGGCAGACCCGGGGAACTGAAACATCTATTCCCCC 4 1 = 16S priming site, 2 = 16S rRNA 3' end sequence, 3 = 23S rRNA 5' sequence, 4 = 23S rRNA priming site. Internal trascribed spacer (ITS) sequence는 볼드체로 표시됨 |
| Features | B. amyloliquefaciens MT45 a | B. amyloliquefaciens DSM7T a | B. velezensis FZB42 a | B. licheniformis DSM13T a | B. pumilus SAFR-032 a | B. cereus ATCC14579T a | B. subtilis 168 a | B. subtilis pb2441 |
| Accession | NZ_CP011252.1 | NC_014551.1 | NC_009725.1 | NC_006322.1 | NC_009848.4 | NC_004722.1 | NC_000964.3 | |
| Genome size (bp) | 3,897,521 | 3,980,199 | 3,918,589 | 4,222,645 | 3,704,641 | 5,411,809 | 4215606 | 4,288,724 |
| G+C content (%) | 46.09 | 46.08 | 46.48 | 46.19 | 41.29 | 35.28 | 43.51 | 43.46 |
| CDS | 3,752 | 3,870 | 3,687 | 4,223 | 3,598 | 5,210 | 4,328 | 4,322 |
| rRNA | 24 | 30 | 29 | 24 | 21 | 42 | 30 | 30 |
| t-RNAs | 81 | 94 | 88 | 72 | 72 | 108 | 86 | 86 |
| 배지 1 | 배지 2 | 배지 3 | 배지 4 | 배지5 | |
| Sucrose | - | 15g | - | 15g | |
| Glucose | 6g | - | 6g | - | 40g |
| Yeast extract | 8g | 8g | 5g | 5g | 5g |
| peptone | - | - | 10g | 10g | 10g |
| K2HPO4 | 2.5g | 2.5g | 2.5g | 2.5g | 2.5g |
| NaCl | 1.5g | 1.5g | 1.5g | 1.5g | 1.5g |
| Na2CO3 | 0.5g | 0.5g | 0.5g | 0.5g | 0.5g |
| MgSO4 | 1g | 1g | 1g | 1g | 1g |
| 서팩틴 생산량 (g/l로 환산) | <0.1g | <0.1g | 0.1 g | 0.1 g | 2.0g |
| 24h | 48h | 72h | 96h | 120h | |
| pb2441 | 4.2±0.3 | 7.3±0.6 | 10.3±0.6 | 12.0±0.1 | 13.2±0.3 |
| BS21332 | 9.5±0.5 | 17.3±1.5 | 23.7±0.5 | 27.0±1.7 | 28.5±4.0 |
| 24h | 48h | 72h | 96h | 120h | |
| pb2441 | 0.0+0.0 | 3.0+0.3 | 6.3+0.6 | 8.7+0.6 | 12.0+1.0 |
| BS21332 | 9.7+2.0 | 16.0+0.0 | 25.7+0.6 | 25.7+0.6 | 30.0+1.2 |
| 실험 1 | 실험 2 | 실험 3 | ||||
| Dry cell (mg) | 서팩틴 (mg) | Dry cell (mg) | 서팩틴 (mg) | Dry cell (mg) | 서팩틴 (mg) | |
| B.s 21332 | 150 | 4.47 | 212.5 | 19 | 195.3 | 4.5 |
| pt2441 | 150 | 17.61 | 207.5 | 51.5 | 199.4 | 25.5 |
Claims (10)
- 서팩틴(sulfactin)을 생산하는 서열번호 1로 표시되는 전장유전체를 갖는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilits) pb2441 KACC81145BP.
- 제1항에 있어서,
상기 바실러스 서브틸리스 pb2441 KACC81145BP는 서열번호 2에 기재된 염기서열을 갖는 16S rDNA 유전자를 포함하는 것을 특징으로 하는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilits) pb2441 KACC81145BP.
- 다음 단계를 포함하는 서팩틴의 생산방법:
(a) 제1항의 서열번호 1로 표시되는 전장유전체를 갖는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilits) pb2441 KACC81145B을 고체배지에 배양하여 콜로니를 형성하는 단계; 및
(b) 상기 콜로니를 액체배지에 접종 및 배양하는 단계; 및
(c) 상기 배양액을 원심 분리한 후, 침전물로부터 서팩틴을 수득하는 단계.
- 제3항에 있어서,
상기 (a) 단계의 배양은 25℃ 내지 37℃에서 24시간 내지 48시간 동안 수행하는 것을 특징으로 하는 서팩틴의 생산방법.
- 제3항에 있어서,
상기 (b) 단계의 배양은 28℃ 내지 42℃에서 45시간 내지 60시간 동안 수행하는 것을 특징으로 하는 서팩틴의 생산방법.
- 제3항에 있어서,
상기 (b) 단계의 액체배지는 글루코오스(Glucose), 효모 추출물(Yeast extract), 펩톤(peptone), 제2인산칼륨(K2HPO4), 염화나트륨(NaCl), 탄산나트륨(Na2CO3) 및 황산마그네슘(MgSO4)을 포함하는 것을 특징으로 하는 서팩틴의 생산방법.
- 서열번호 1로 표시되는 전장유전체를 갖는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilits) pb2441 KACC81145B 균주를 포함하는 세제용, 천연 농자재용 또는 동물사료용 미생물 제제.
- 서열번호 1로 표시되는 전장유전체를 갖는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilits) pb2441 KACC81145B 균주, 이의 배양액 또는 배양액 추출물을 유효성분로 포함하는 기능성 천연 세제 조성물.
- 서열번호 1로 표시되는 전장유전체를 갖는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilits) pb2441 KACC81145B 균주, 이의 배양액 또는 배양액 추출물을 유효성분로 포함하는 천연 농자재 조성물.
- 서열번호 1로 표시되는 전장유전체를 갖는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilits) pb2441 KACC81145B 균주, 이의 배양액 또는 배양액 추출물을 유효성분로 포함하는 동물성장촉진제 조성물.
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118308278A (zh) * | 2024-06-13 | 2024-07-09 | 珠海鱼来鱼旺生物科技有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌的高密度液态发酵培养基及发酵方法 |
| KR20250019189A (ko) * | 2023-07-31 | 2025-02-10 | 전라남도 | 사료첨가제 및 이를 포함하는 사료 조성물 |
Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
| KR101291339B1 (ko) | 2011-03-10 | 2013-07-30 | 고려대학교 산학협력단 | 바이오 서펙틴 생산능 향상을 위한 유전자가 도입된 형질전환체 및 그 균주를 이용한 서펙틴 생성방법 |
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