KR20220040294A

KR20220040294A - 6-메톡시-2-펜에틸이소인돌린-1-온 유도체 및 이를 포함하는 신경질환의 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20220040294A
Application number: KR1020200123295A
Authority: KR
Inventors: 정재경; 이미경; 이대희; 이재강; 김선여; 윤다혜; 홍성민
Original assignee: 씨엔지바이오 주식회사; 충북대학교 산학협력단; 가천대학교 산학협력단
Priority date: 2020-09-23
Filing date: 2020-09-23
Publication date: 2022-03-30
Also published as: EP4219450A4; EP4219450A1; WO2022065825A1; US20230331672A1

Abstract

본 발명은 신경성장인자 증가 촉진능, 신경 세포 생장 촉진능, 및 항신경염 활성을 갖는 신규한 6-메톡시-2-펜에틸이소인돌린-1-온 유도체 화합물 및 이를 포함하는 신경질환의 예방, 개선 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

Description

6-메톡시-2-펜에틸이소인돌린-1-온 유도체 및 이를 포함하는 신경질환의 치료용 조성물 {6-METHOXY-2-PHENETHYLISOINDOLIN-1-ONE DERIVATIVES AND A COMPOSITION FOR TREATMENT OF NEUROLOGICAL DISEASES COMPRISING THE SAME}

최근 노인 인구의 급증과 더불어 다양한 퇴행성 신경질환 (Neurodegenerative Disease) 환자 수의 증가로, 이의 치료와 예방에 대한 관심이 고조되고 있다. 퇴행성 신경질환은 신경 세포의 기능 감소 또는 소실로 인해 운동 장애, 기억 장애, 인지 장애 등 여러 가지 병증을 유발하는 질병이다. 신경질환 환자에서뿐만 아니라 정상 성인의 뇌에서도 매일 많은 수의 신경 세포가 죽어가며, 노화에 따라 죽는 신경 세포 수는 기하급수적으로 증가한다.

퇴행성 신경질환에 속하는 주요 질병으로는 알츠하이머병, 파킨슨병, 루게릭병, 헌팅턴병 등이 있고, 현재까지 상기 질환의 발병기전이 완전히 밝혀지지 않았다. 알츠하이머병의 치료제로는 아세틸콜린에스테라제 억제제 또는 NMDA (N-methyl-D-aspartate) 수용체 길항제 등이 사용되고 있고, 파킨슨병의 치료제로 L-dopa, 도파민 작용제, MAO-B 억제제, 또는 COMT 억제제 등이 사용되고 있으며, 헌팅턴병의 치료제로 도파민 D2 수용체 등이 있으나, 상기 치료제들은 모두 신경전달 과정을 타깃하는 것이므로 상기 치료제들을 이용한 방법은 근본적인 치료가 아닌 증상을 완화시키는 것에 불과하다. 따라서 근본적인 치료가 가능한 신규 약물이 지속적으로 요구되어 왔다.

한편, 신경질환은 뇌신경세포의 기능저하 및 신경세포사와 밀접한 관계가 있는 것으로 알려져 있으며 (한국등록특허 10-0935615호), 본 발명자들은 6-메톡시-2-펜에틸이소인돌린-1-온 유도체가 신경성장인자 증가 촉진능, 신경 세포 생장 촉진능, 및 항신경염 활성이 우수한 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

한국등록특허 제10-0935615호

Yuan and Yankner, Nature. 407, 802-809, 2000

본 발명은 신경성장인자 증가 촉진능, 신경 세포 생장 촉진능, 및 항신경염증 활성을 갖는 신규한 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한 본 발명은 상기 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 신경질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 하기 화학식 22의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

[화학식 22]

상기 식에서, R₁은 수소, 할로, 히드록시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 알콕시, 히드록시알킬, 또는 알콕시알킬이고, R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 수소, 할로, 히드록시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 히드록시알킬, 또는 알콕시알킬이거나, R₃가 R₂ 및 R₂가 부착된 산소와 함께 5 내지 6 원 헤테로시클로알킬을 형성하고, 및 R₄는 수소 또는 알킬이다.

또한 본 발명은 상기 화학식 22의 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 신경질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 신규한 화합물은 신경성장인자 증가 촉진능, 신경 세포 생장 촉진능, 및 항신경염 활성을 갖는다.

따라서 본 발명의 신규한 화합물을 포함하는 조성물은 신경질환의 예방, 개선 및 치료 효과를 갖는 약학 조성물, 식품 조성물 및 사료 조성물로 사용될 수 있다.

도 1a 및 1b는 화학식 1의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 2a 및 2b는 화학식 2의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 3a 및 3b는 화학식 3의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 4a 및 4b는 화학식 4의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 5a 및 5b는 화학식 5의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 6a 및 6b는 화학식 6의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 7a 및 7b는 화학식 7의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 8a 및 8b는 화학식 8의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 9a 및 9b는 화학식 9의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 10a 및 10b는 화학식 10의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 11a 및 11b는 화학식 11의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 12a 및 12b는 화학식 12의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 13a 및 13b는 화학식 13의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 14a 및 14b는 화학식 14의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 15a 및 15b는 화학식 15의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 16a 및 16b는 화학식 16의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 17a 및 17b는 화학식 17의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 18a 및 18b는 화학식 18의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 19a 및 19b는 화학식 19의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 20a 및 20b는 화학식 20의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 21a 및 21b는 화학식 21의 화합물의 ¹H NMR 및 ¹³C NMR 분석 결과를 나타낸다.
도 22는 C6 glioma 세포에서의 신경성장인자 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 23은 C6 glioma 세포에서의 세포 독성 평가 결과를 나타낸 그래프이다.
도 24a 및 24b는 N2a 세포에서의 신경돌기 성장을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 25는 N2a 세포에서의 세포 독성 평가 결과를 나타낸 그래프이다.
도 26은 BV2 세포에서 측정한 NO 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 27은 BV2 세포에서의 세포 독성 평가 결과를 나타낸 그래프이다.

이하, 첨부한 도면을 참조하여 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본원의 실시태양 및 실시예를 상세히 설명한다. 그러나 본원은 여러 가지 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시태양 및 실시예에 한정되지 않는다.

본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

[화학식 22]

상기 식에서, R₁은 수소, 할로, 히드록시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 알콕시, 히드록시알킬, 또는 알콕시알킬이고; R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 수소, 할로, 히드록시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 히드록시알킬, 또는 알콕시알킬이거나, R₃가 R₂ 및 R₂가 부착된 산소와 함께 5 내지 6 원 헤테로시클로알킬을 형성하고; 및 R₄는 수소 또는 알킬이다.

일 실시태양에서, 상기 R₁은 수소, 할로, 할로알킬, 또는 알콕시이고; R₂는 수소 또는 알콕시알킬이고; R₃는 수소, 할로, 알킬, 알케닐, 또는 히드록시알킬이거나, R₂ 및 R₂가 부착된 산소와 함께 5 내지 6 원 헤테로시클로알킬을 형성하고; 및 R₄는 알킬일 수 있다.

일 실시태양에서, 본 발명은 하기 화학식 23의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

[화학식 23]

상기 식에서, R₁은 수소, 할로, 할로알킬, 또는 C₁-C₆ 알콕시이고; R₂는 수소 또는 C₁-C₆ 알콕시알킬이고; R₃는 수소, 할로, C₁-C₆ 알킬, C₂-C₆ 알케닐, 또는 C₁-C₆ 히드록시알킬이거나, R₂ 및 R₂가 부착된 산소와 함께 5 내지 6 원 헤테로시클로알킬을 형성하고; 및 R₄는 C₁-C₆ 알킬이다.

일 실시태양에서, 상기 R₁은 수소, 플루오로, 메톡시, 또는 트리플루오로메틸이고; R₂는 수소 또는 메톡시메틸이고; R₃는 수소, 브로모, 비닐, 알릴, 히드록시에틸, 또는 히드록시프로필이거나, R₂ 및 R₂가 부착된 산소와 함께 5 원 헤테로시클로알킬을 형성하고; 및 R₄는 메틸일 수 있다.

본원에 사용된 용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 약학적으로 허용 가능하고 모 화합물 (parent compound)의 바람직한 약리 활성을 갖는 본 발명의 일측면에 따른 염을 의미한다. 또한 본원에서 약학적으로 허용 가능한 염은 약학 조성물뿐만 아니라, 화장료 조성물 또는 식품 조성물에 사용될 수 있는 모든 염을 지칭하는 것으로 의도된다. 상기 염으로는 약학적으로 허용되는 것이면 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 염산, 황산, 질산, 인산, 불화수소산, 브롬화수소산, 포름산 아세트산, 타르타르산, 젖산, 시트르산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 톨루엔술폰산, 나프탈렌술폰산 등을 사용할 수 있다.

본 발명은 하기 화학식의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

[화학식 1]

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[화학식 2]

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[화학식 3]

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[화학식 4]

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[화학식 5]

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[화학식 6]

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[화학식 7]

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[화학식 8]

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[화학식 9]

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[화학식 10]

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[화학식 11]

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[화학식 12]

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[화학식 13]

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[화학식 14]

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[화학식 15]

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[화학식 16]

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[화학식 17]

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[화학식 18]

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[화학식 19]

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[화학식 20]

; 및

[화학식 21]

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본 발명은 상기 화학식 22의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 신경질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 상기 약학 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 신경질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다. 상기 대상체는 신경질환의 진단을 받거나 또는 신경질환의 발병 가능성이 있는, 인간을 포함하는 포유동물일 수 있다.

일 실시태양에서, 상기 화학식 22의 화합물은 신경성장인자의 증가를 촉진시키거나, 신경 세포의 생장을 촉진시키는 것일 수 있다. 다른 일 실시태양에서, 상기 화학식 22의 화합물은 항신경염 활성을 갖는 것일 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 첨가제를 포함할 수 있다. 상기 첨가제는 안정화제, 계면활성제, 활택제, 가용화제, 완충제, 감미제, 기제, 흡착제, 교미제, 결합제, 현탁화제, 경화제, 항산화제, 광택제, 착향제, 향미제, 안료, 코팅제, 습윤제, 습윤 조정제, 충전제, 소포제, 청량화제, 저작제, 정전 방지제, 착색제, 당의제, 등장화제, 연화제, 유화제, 점착제, 점증제, 발포제, pH조절제, 부형제, 분산제, 붕해제, 방수제, 방부제, 보존제, 용해 보조제, 용제, 유동화제 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 비경구투여 또는 경구 투여할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 또한 상기 조성물의 치료적으로 유효한 양은 투여방법, 목적부위, 환자의 상태에 따라 달라질 수 있으며, 인체에 사용시 투여량은 안전성 및 효율성을 함께 고려하여 적정량으로 결정되어야 한다.

본 발명은 상기 화학식 22의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 신경질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

일 실시태양에서 상기 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 추가로 포함할 수 있다.

일 실시태양에서 상기 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐, 액제, 페이스트, 겔, 또는 젤리 등의 형태를 포함하며, 상기 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.

상기 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.

본 발명은 상기 화학식 22의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 신경질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.

상기 사료 조성물은, 모든 비-인간 동물, 예를들어 비-인간 영장류, 양, 개, 소, 말 등에게 섭취시킬 수 있다.

본원에 사용된 용어 "예방"은 조성물의 투여에 의해 질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하고, "치료"는 조성물의 투여에 의해 질환의 의심 및 발병 개체의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, “개선”은 조성물의 투여로 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

일 실시태양에서, 상기 신경질환은 신경성장인자 활성 저하, 신경성장인자 감소, 신경세포사, 신경염증 또는 신경세포의 기능 저하와 관련되거나 이들 증상을 수반하는 신경질환일 수 있다. 바람직하게는, 상기 신경질환은 알츠하이머, 치매, 파킨슨병, 간질, 신경장애, 말초신경병, 중풍 또는 허혈성뇌질환일 수 있다.

정의

달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술용어는 본 발명이 속한 분야의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 더욱이, 본원에 기재된 수치는 명백히 언급되지 않는 한 "약"의 의미를 포함하는 것으로 간주한다. 본원에서 사용되는 잔기 및 치환기의 정의를 하기 제공한다. 달리 명시하지 않는 한, 각각의 잔기는 하기 정의를 가지며, 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다.

본원에 사용된 용어 "Cx-y" 또는 "Cx-Cy"는, 아실, 아실옥시, 알킬, 할로알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐 또는 알콕시와 같은 화학적 잔기와 함께 사용되는 경우, 사슬 내에 x 내지 y개의 탄소를 함유하는 기를 포함하는 것을 의미한다. C₀ 알킬은 치환기가 말단 위치에 있는 경우에는 수소, 내부에 있는 경우에는 결합을 의미한다. 또한, 예를 들어, C₁-C₆ 알킬기는 사슬 내에 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유한다.

본원에 사용된 용어 "치환된", 예를 들어 "치환된 알킬"은 알킬의 1개 이상의 수소 원자가 각각 독립적으로 비-수소 치환기에 의해 대체된 것을 의미한다. 치환기는 본원에 기재된 임의의 치환기, 예를 들어 할로겐, 히드록실, 알킬, 히드록시알킬, 할로알킬, 시아노알킬, 알콕시알킬, 카르보닐 (예컨대, 카르복실, 알콕시카르보닐, 포르밀, 또는 아실), 티오카르보닐 (예컨대, 티오에스테르, 티오아세테이트, 또는 티오포르메이트), 알콕실, 포스포릴, 포스페이트, 포스포네이트, 포스피네이트, 아미노, 아미도, 아미딘, 이민, 시아노, 니트로, 아지도, 술프히드릴, 알킬티오, 술페이트, 술포네이트, 술파모일, 술폰아미도, 술포닐, 헤테로시클릴, 아르알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 탄화수소 사슬 상의 치환된 잔기는 경우에 따라 그 자체가 치환될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "알킬"은 치환 또는 비치환된 1차, 2차, 3차 및/또는 4차 탄소 원자를 갖는 탄화수소이며, 직쇄형, 분지형, 환형, 또는 이들의 조합일 수 있는 포화 지방족기를 포함한다. 예를 들어, 알킬 기는 1 내지 20개의 탄소 원자 (즉, C₁-C₂₀ 알킬), 1 내지 10개의 탄소 원자 (즉, C₁-C₁₀ 알킬), 또는 1 내지 6개의 탄소 원자 (즉, C₁-C₆ 알킬)를 가질 수 있다. 달리 정의되지 않는 한, 바람직한 실시양태에서, 알킬은 C₁-C₆ 알킬을 지칭한다. 적합한 알킬 기의 예로는 메틸 (Me, -CH₃), 에틸 (Et, -CH₂CH₃), 1-프로필 (n-Pr, n-프로필, -CH₂CH₂CH₃), 2-프로필 (i-Pr, i-프로필, -CH(CH₃)₂), 1-부틸 (n-Bu, n-부틸, -CH₂CH₂CH₂CH₃), 2-메틸-1-프로필 (i-Bu, i-부틸, -CH₂CH(CH₃)₂), 2-부틸 (s-Bu, s-부틸, -CH(CH₃)CH₂CH₃), 2-메틸-2-프로필 (t-Bu, t-부틸, -C(CH₃)₃), 1-펜틸 (n-펜틸, -CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃), 2-펜틸 (-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₃), 3-펜틸 (-CH(CH₂CH₃)₂), 2-메틸-2-부틸 (-C(CH₃)₂CH₂CH₃), 3-메틸-2-부틸 (-CH(CH₃)CH(CH₃)₂), 3-메틸-1-부틸 (-CH₂CH₂CH(CH₃)₂), 2-메틸-1-부틸 (-CH₂CH(CH₃)CH₂CH₃), 1-헥실 (-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃), 2-헥실 (-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₂CH₃), 3-헥실 (-CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)), 2-메틸-2-펜틸 (-C(CH₃)₂CH₂CH₂CH₃), 3-메틸-2-펜틸 (-CH(CH₃)CH(CH₃)CH₂CH₃), 4-메틸-2-펜틸 (-CH(CH₃)CH₂CH(CH₃)₂), 3-메틸-3-펜틸 (-C(CH₃)(CH₂CH₃)₂), 2-메틸-3-펜틸 (-CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)₂), 2,3-디메틸-2-부틸 (-C(CH₃)₂CH(CH₃)₂), 3,3-디메틸-2-부틸 (-CH(CH₃)C(CH₃)₃), 및 옥틸 (-(CH₂)₇CH₃)을 들 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

더욱이, 명세서, 실시예 및 청구항 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "알킬"은 비치환된 및 치환된 알킬 기 모두를 포함하는 것으로 의도되며, 이들 중 후자는 트리플루오로메틸 및 2,2,2-트리플루오로에틸과 같은 할로알킬 기 등을 포함하는, 탄화수소 골격의 1개 이상의 탄소 상의 수소를 대체하는 치환기를 갖는 알킬 잔기를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "알케닐"은 1차, 2차, 3차 및/또는 4차 탄소 원자를 갖고, 직쇄형, 분지형 및 환형, 또는 이들의 조합을 포함하고, 1개 이상의 불포화 영역, 즉, 탄소-탄소 sp2 이중 결합을 갖는 탄화수소이다. 예를 들어, 알케닐기는 2 내지 20개의 탄소 원자 (즉, C₂-C₂₀ 알케닐), 2 내지 12개의 탄소 원자 (즉, C₂-C₁₂ 알케닐), 2 내지 10개의 탄소 원자 (즉, C₂-C₁₀ 알케닐), 또는 2 내지 6개의 탄소 원자 (즉, C₂-C₆ 알케닐)를 가질 수 있다. 적합한 알케닐 기의 예로는 비닐 (-CH=CH₂), 알릴 (-CH₂CH=CH₂), 시클로펜테닐 (-C₅H₇), 및 5-헥세닐 (-CH₂CH₂CH₂CH₂CH=CH₂)을 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본원에 사용된 용어 "알키닐"은 1차, 2차, 3차 및/또는 4차 탄소 원자를 갖고, 직쇄형, 분지형 및 환형기, 또는 이들의 조합을 포함하고, 1개 이상의 탄소-탄소 sp 삼중 결합을 갖는 탄화수소이다. 예를 들어, 알키닐기는 2 내지 20개의 탄소 원자 (즉, C₂-C₂₀ 알키닐), 2 내지 12개의 탄소 원자 (즉, C₂-C₁₂ 알키닐), 2 내지 10개의 탄소 원자 (즉, C₂-C₁₀ 알키닐), 또는 2 내지 6개의 탄소 원자 (즉, C₂-C₆ 알키닐)를 가질 수 있다. 적합한 알키닐 기의 예로는 아세틸레닉 (-C≡CH) 및 프로파르길 (-CH₂C≡CH)을 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본원에 사용된 용어 "알콕시"는 알킬기가 산소 원자를 통해 모 화합물에 부착된 것으로 -O-알킬로 표시될 수 있으며, 이 때 알킬기는 본원에 정의된 바와 같으며 치환 또는 비치환된 것일 수 있다. 알콕시기의 알킬기는 예를 들어, 1 내지 20개의 탄소 원자 (즉, C₁-C₂₀ 알콕시), 1 내지 12개의 탄소 원자 (즉, C₁-C₁₂ 알콕시), 1 내지 10개의 탄소 원자 (즉, C₁-C₁₀ 알콕시), 또는 1 내지 6개의 탄소 원자 (즉, C₁-C₆ 알콕시)를 가질 수 있다. 적합한 알콕시기의 예로는 메톡시 (-O-CH₃ 또는 -OMe), 에톡시 (-OCH₂CH₃ 또는 -OEt), 및 t-부톡시 (-OC(CH₃)₃ 또는 -O-tBu) 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한 본원의 화학식에서, "-OMe" 또는 "-OM"은 메톡시기 (-O-CH₃)를 의미하며, "-OMOM"은 -O-CH₂-O-CH₃ 치환기를 의미한다.

본원에 사용된 용어 "히드록시알킬"은 히드록시기로 치환된 알킬기를 지칭하며, -알킬-OH로 표시될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "알콕시알킬"은 본원에 정의된 알콕시기로 치환된 알킬기를 지칭하며, -알킬-O-알킬로 표시될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "할로" 및 "할로겐"은 모두 할로겐을 의미하고, 클로로, 플루오로, 브로모, 및 요오도를 포함한다.

본원에 사용된 용어 "할로알킬"은 본원에 정의된 하나 이상의 할로겐으로 치환된 알킬기를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "헤테로시클로알킬"은 고리 내에 1개 이상의 헤테로원자를 함유하는, 치환 또는 비치환된 모노시클릭, 바이시클릭 또는 폴리시클릭인, 비방향족 포화 또는 부분 포화 고리를 지칭한다. 헤테로시클로알킬은 1개 이상의 원자가 인접한 고리에 공통인 2개 이상의 고리로 이루어진 폴리시클릭 헤테로시클로알킬일 수 있다. 폴리시클릭 헤테로시클로알킬은 융합 고리계, 스피로시클릭 고리계 또는 다리 고리계일 수 있고, 고리 중 1개 이상은 헤테로시클로알킬이고, 다른 고리는 예를 들어, 본원에 정의된 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 및/또는 헤테로시클로알킬일 수 있다. 적합한 헤테로시클로알킬의 예로서 디히드로푸라닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 피롤리디닐, 모르폴리닐, 락토닐, 락타밀, 아제티디닐, 디히드로피리디닐, 디히드로인돌릴, 테트라히드로피리디닐(피페리디닐), 테트라히드로티오페닐, 황-산화된 테트라히드로티오페닐, 인돌레닐, 4-피페리디닐, 2-피롤리도닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 데카히드로퀴놀리닐, 옥타히드로이소퀴놀리닐, 6H-1,2,5-티아디아지닐, 2H,6H-1,5,2-디티아지닐, 피라닐, 크로메닐, 크산테닐, 페녹사티닐, 2H-피롤릴, 3H-인돌릴, 4H-퀴놀리지닐, 프탈라지닐, 나프티리디닐, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 프테리디닐, 4aH-카르바졸릴, 카르바졸릴, β-카르볼리닐, 페난트리디닐, 아크리디닐, 페난트롤리닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 푸라자닐, 페녹사지닐, 이소크로마닐, 크로마닐, 이미다졸리디닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 퀴누클리디닐, 및 옥사졸리디닐 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 하나, 하기의 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것이며 본원 발명의 범위를 한정하고자 하는 것은 아니다.

[실시예 1] 화학식 1의 화합물의 제조

메탄올 (5 mL) 중 메틸 4-브로모-3-히드록시-5-메톡시벤조에이트 (1.00 g, 3.83 mmol)의 용액에 2-(4-플루오로페닐)에탄아민 (1.07 g, 7.66 mmol)을 첨가하고, 30 %의 포름알데히드 용액 (2.0 mL)을 실온에서 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 60 ℃까지 승온시키고, 12시간 동안 교반하였다. TLC로 반응 완료를 확인한 후, 상기 반응 혼합물을 다시 실온으로 냉각시키고, 물로 켄칭 (quenching)하였다. 수층을 EtOAc로 세 번 추출하고, 결합된 유기층을 염수로 세척하고, 황산 나트륨으로 건조 및 증발시킨 후, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 1로 표시되는 흰색 고체의 5-브로모-2-(4-플루오로펜에틸)-4-히드록시-6-메톡시이소인돌린-1-온 (990 mg, 68%)을 수득하였다.

¹H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 7.28-7.24 (m, 2H), 7.09 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 6.80 (s, 1H), 4.25 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.74 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.90 (t, J = 6.8 Hz, 2H).¹³C NMR (DMSO-d6, 100 MHz): δ 166.7, 156.9, 149.8, 135.0, 132.8, 130.4, 130.3, 121.2, 115.7, 114.9, 103.4, 97.0, 56.5, 47.7, 43.2, 33.0

[실시예 2] 화학식 2의 화합물의 제조

CH₂Cl₂(25 mL) 중 화학식 1로 표시되는 5-브로모-2-(4-플루오로펜에틸)-4-히드록시-6-메톡시이소인돌린-1-온 (990 mg, 2.60 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (2.0 당량)의 용액에 메톡시메틸 클로라이드 (420 mg, 5.20 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. NaHCO₃ 포화 수용액 (30 mL)을 첨가하여 상기 반응을 켄칭하고, CH₂Cl₂ (3 Х 30 mL)로 세척하였다. 결합된 유기층을 MgSO₄으로 건조시키고, 여과하여 농축시켰다. 상기 조생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 2로 표시되는 무색 액체의 5-브로모-2-(4-플루오로펜에틸)-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)이소인돌린-1-온 (0.93 g, 84%)을 수득하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400MHz): δ 7.21-7.17 (m, 2H), 7.16 (s, 1H), 6.98 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 5.12 (s, 2H), 4.25 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.83 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.52 (s, 3H), 2.97 (t, J = 7.4 Hz, 2H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz): δ 167.6, 157.9, 150.5, 134.3, 133.8, 130.2, 130.2, 125.5, 115.7, 115.5, 110.2, 101.9, 98.3, 57.3, 57.0, 49.1, 44.4, 34.1

[실시예 3] 화학식 3의 화합물의 제조

20 mL 마이크로웨이브 바이알에서, 화학식 2로 표시되는 5-브로모-2-(4-플루오로펜에틸)-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)이소인돌린-1-온 (900 mg, 2.12 mmol), Cs₂CO₃ (3 당량), 및 PdCl₂(dppf)₂CH₂Cl₂ (0.1 당량)을 15 mL의 아르곤 퍼지된 THF/H₂O (9:1)에 용해시켰다. 그 후, 칼륨 비닐트리플루오로보레이트 (5 당량)를 첨가하고, 상기 혼합물을 탈기시킨 다음, 마이크로웨이브 반응기에서 2시간 동안 150 ℃에서 가열시켰다. 상기 반응을 물로 켄칭하고, 여과하고, EtOAc로 추출한 다음, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 3으로 표시되는 밝은 노란색 고체의 2-(4-플루오로펜에틸)-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-5-비닐이소인돌린-1-온 (330 mg, 41%)을 수득하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400MHz): δ 7.20-7.16 (m, 2H), 7.14 (s, 1H), 6.96 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 6.86 (dd, J = 17.8, 6.0 Hz, 1H), 6.08 (dd, J = 17.8, 2.4 Hz, 1H), 5.55 (dd, J = 12.0, 2.4 Hz, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.22 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.82 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.46 (s, 3H), 2.95 (t, J = 7.4 Hz, 2H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz): δ 168.1, 162.9, 160.5, 159.4, 150.9, 133.2, 130.2, 130.1, 127.6, 125.1, 122.3, 121.0, 115.6, 115.4, 101.3, 98.2, 57.1, 56.2, 55.9, 49.2, 44.3, 34.1

[실시예 4] 화학식 4의 화합물의 제조

THF (4 mL) 중 화학식 3으로 표시되는 2-(4-플루오로펜에틸)-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-5-비닐이소인돌린-1-온 (250 mg, 0.67 mmol)의 용액에 9-BBN (2.00 당량, 0.5 M)을 상온에서 처리하고, 상기 혼합물을 상온에서 24시간 동안 교반하였다. 상기 조생성물에 NaOH 수용액 (2.2 mL, 2 M) 및 H₂O₂ 수용액 (30%, 3 mL)을 0 ℃에서 연속으로 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온으로 승온시킨 다음, 24시간 동안 교반하였다. 그 후, 상기 혼합물을 Na₂S₂O₃ 포화 수용액 (5 mL)으로 처리하고, 10분 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 DCM (3Х10 mL)으로 추출하고, 결합된 유기층을 염수 (10mL)로 세척하고, Na₂SO₄으로 건조시켰다. 감압 농축 후, 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제하여 화학식 4로 표시되는 흰색 고체의 2-(4-플루오로펜에틸)-5-(2-히드록시에틸)-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)이소인돌린-1-온 (89 mg, 34%)을 수득하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400MHz): δ 7.21-7.17 (m, 2H), 7.14 (s, 1H), 6.98 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 5.06 (s, 2H), 4.25 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.84-3.78 (m, 4H), 3.51 (s, 3H), 3.03 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.96 (t, J = 7.6 Hz, 2H). ¹³C NMR (CD₃OD, 100 MHz): δ 170.2, 164.3, 161.9, 160.8, 152.8, 136.0, 133.6, 131.5, 131.4, 125.2, 124.3, 116.3, 116.1, 101.0, 98.6, 61.8, 56.4, 50.8, 49.6, 45.2, 37.0, 34.7, 28.8, 21.4

[실시예 5] 화학식 5의 화합물의 제조

메탄올 (2mL) 중 화학식 4로 표시되는 2-(4-플루오로펜에틸)-5-(2-히드록시에틸)-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)이소인돌린-1-온 (50 mg, 0.13 mmol)의 용액을 상온에서 메탄올 (3.00 당량) 중 1N HCl로 처리하고, 상기 혼합물을 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 출발 물질이 생성되자, 상기 반응을 0 ℃에서 NaHCO₃으로 켄칭하였고, 상기 반응 혼합물을 상온으로 승온시킨 다음, DCM (3Х10 mL)으로 추출하고, 결합된 유기층을 염수 (10mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시켰다. 감압 농축 후, 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제하여 화학식 5로 표시되는 흰색 고체의 2-(4-플루오로펜에틸)-4-히드록시-5-(2-히드록시에틸)-6-메톡시이소인돌린-1-온 (18 mg, 41%)을 수득하였다.

¹H NMR (CD₃OD, 400MHz): δ 7.27-7.23 (m, 2H), 7.00 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 6.88 (s, 1H), 4.22 (s, 2H), 3.83 (t, J = 7.6 Hz, 5H), 3.67 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.01-2.96 (m, 4H). ¹³C NMR (CD₃OD, 100 MHz): δ 171.0, 160.7, 152.4, 136.1, 132.7, 131.5, 131.4, 122.6, 119.7, 116.3, 116.1, 97.5, 62.4, 56.3, 45.3, 34.7, 27.9

[실시예 6] 화학식 6의 화합물의 제조

메탄올 (5 mL) 중 메틸 4-브로모-3-히드록시-5-메톡시벤조에이트 (1.00 g, 3.83 mmol)의 용액에 2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에탄아민 (1.44 g, 7.66 mmol)을 첨가하고, 30%의 포름알데히드 용액 (2.0 mL)을 실온에서 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 60 ℃까지 승온시키고, 12시간 동안 교반하였다. TLC로 반응 완료를 확인한 후, 상기 반응 혼합물을 다시 실온으로 냉각시키고, 물로 켄칭하였다. 수층을 EtOAc로 세 번 추출하고, 결합된 유기층을 염수로 세척하고, 황산 나트륨으로 건조 및 증발시킨 후, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 6으로 표시되는 흰색 고체의 5-브로모-4-히드록시-6-메톡시-2-(4-(트리플루오로메틸)펜에틸)이소인돌린-1-온 (1.02 g, 62%)을 수득하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400MHz): δ 7.55 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.98 (s, 1H), 5.90 (s, 1H), 4.23 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.89 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.07 (t, J = 7.2 Hz, 2H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz): δ 168.0, 157.2, 148.2, 142.7, 133.7, 129.1, 125.7, 120.0, 103.7, 98.5, 77.3, 57.0, 48.0, 43.9, 34.6

[실시예 7] 화학식 7의 화합물의 제조

CH₂Cl₂(25 mL) 중 화학식 6으로 표시되는 5-브로모-4-히드록시-6-메톡시-2-(4-(트리플루오로메틸)펜에틸)이소인돌린-1-온 (1.00 g, 2.32 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (2.0 당량)의 용액에 메톡시메틸 클로라이드 (0.37 g, 4.65 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. NaHCO₃ 포화 수용액 (30 mL)을 첨가하여 상기 반응을 켄칭하고, CH₂Cl₂ (3 Х 30 mL)로 세척하였다. 결합된 유기층을 MgSO₄으로 건조시키고, 여과하여 농축시켰다. 상기 조생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 7로 표시되는 무색 액체의 5-브로모-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-(트리플루오로메틸)펜에틸)이소인돌린-1-온 (940 mg, 86%)을 수득하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400MHz): δ 7.55 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.16 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.26 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.88 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.06 (t, J = 7.0 Hz, 2H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz): δ 167.7, 158.0, 150.5, 142.9, 133.7, 129.3, 129.1, 129.0, 125.7, 125.7, 125.4, 110.4, 101.9, 98.3, 77.3, 57.3, 57.0, 49.1, 44.0, 34.7

[실시예 8] 화학식 8의 화합물의 제조

20 mL 마이크로웨이브 바이알에서, 화학식 7로 표시되는 5-브로모-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-(트리플루오로메틸)펜에틸)이소인돌린-1-온 (920 mg, 2.12 mmol), Cs₂CO₃ (3 당량), 및 PdCl₂(dppf)₂CH₂Cl₂(0.1 당량)을 15 mL의 아르곤 퍼지된 THF/H₂O (9:1)에 용해시켰다. 칼륨 비닐트리플루오로보레이트 (5 당량)를 첨가하고, 상기 혼합물을 탈기시킨 다음, 마이크로웨이브 반응기에서 2시간 동안 150 ℃에서 가열시켰다. 상기 반응을 물로 켄칭하고, 여과하고, EtOAc로 추출한 다음, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 8로 표시되는 밝은 노란색 고체의 6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-(트리플루오로메틸)펜에틸)-5-비닐이소인돌린-1-온 (290 mg, 32%)을 수득하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400MHz): δ 7.55 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.15 (s, 1H), 6.87 (dd, J = 17.8, 8.8 Hz, 1H), 6.01 (dd, J = 17.8, 2.2 Hz, 1H), 5.57 (dd, J = 12.4, 2.2 Hz, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.24 (s, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.88 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.45 (s, 3H), 3.06 (t, J = 7.2 Hz, 2H). 13C NMR (CDCl₃, 100 MHz): δ 168.2, 159.5, 151.0, 143.0, 133.1, 129.2, 127.6, 125.6, 125.6, 125.1, 121.1, 101.4, 98.2, 57.1, 56.2, 49.3, 43.9, 34.8

[실시예 9] 화학식 9의 화합물의 제조

THF (4 mL) 중 화학식 8로 표시되는 6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-(트리플루오로메틸)펜에틸)-5-비닐이소인돌린-1-온 (250 mg, 0.59 mmol)의 용액에 9-BBN (2.00 당량, 0.5 M)을 상온에서 처리하고, 상기 혼합물을 상온에서 24시간 동안 교반하였다. 상기 조생성물에 NaOH 수용액 (2.2 mL, 2 M) 및 H₂O₂ 수용액 (30%, 3 mL)을 0 ℃에서 연속으로 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온으로 승온시킨 다음, 24시간 동안 교반하였다. 그 후, 상기 혼합물을 Na₂S₂O₃ 포화 수용액 (5 mL)으로 처리하고, 10분 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 DCM (3Х10 mL)으로 추출하고, 결합된 유기층을 염수 (10mL)로 세척하고, Na₂SO₄으로 건조시켰다. 감압 농축 후, 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제하여 화학식 9로 표시되는 흰색 고체의 5-(2-히드록시에틸)-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-(트리플루오로메틸)펜에틸)이소인돌린-1-온 (101 mg, 39%)을 수득하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400MHz): δ 7.56 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.14 (s, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.25 (s, 2H), 3.95-3.78 (m, 7H), 3.49 (s, 3H), 3.07-3.01 (m, 4H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz): δ 159.3, 151.5, 143.0, 133.2, 129.3, 129.2, 125.6, 107.3, 101.0, 97.6, 77.3, 62.4, 56.9, 56.2, 49.6, 43.8, 34.8, 34.5, 27.9

[실시예 10] 화학식 10의 화합물의 제조

메탄올 (2 mL) 중 화학식 9로 표시되는 5-(2-히드록시에틸)-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-(트리플루오로메틸)펜에틸)이소인돌린-1-온 (60 mg, 0.14 mmol)의 용액을 상온에서 메탄올 (3.00 당량) 중 1N HCl로 처리하고, 상기 혼합물을 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 출발 물질이 생성되자, 상기 반응을 0 ℃에서 NaHCO₃ 수용액으로 켄칭하고, 상기 반응 혼합물을 상온으로 승온시킨 다음, DCM (3Х10 mL)으로 추출하고, 결합된 유기층을 염수 (10mL)로 세척하고, Na₂SO₄으로 건조시켰다. 감압 농축 후, 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제하여 화학식 10으로 표시되는 흰색 고체의 4-히드록시-5-(2-히드록시에틸)-6-메톡시-2-(4-(트리플루오로메틸)펜에틸)이소인돌린-1-온 (23 mg, 42%)을 수득하였다.

¹H NMR (CD₃OD, 400MHz): δ 7.57 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.80 (s, 1H), 4.26 (s, 2H), 3.88 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.68 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.09 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.00 (t, J = 6.8 Hz, 2H). ¹³C NMR (CD₃OD, 100 MHz): δ 171.6, 160.7, 144.9, 130.5, 126.4, 126.4, 63.1, 56.2, 44.8, 33.3, 30.8, 27.9

[실시예 11] 화학식 11의 화합물의 제조

메탄올 (5 mL) 중 메틸 4-브로모-3-히드록시-5-메톡시벤조에이트 (1.00 g, 3.83 mmol)의 용액에 2-(4-메톡시페닐)에탄아민 (1.15 g, 7.66 mmol)을 첨가하고, 30 %의 포름알데히드 용액 (2.0 mL)을 실온에서 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 60 ℃까지 승온시키고, 12시간 동안 교반하였다. TLC로 반응 완료를 확인한 후, 상기 반응 혼합물을 다시 실온으로 냉각시키고, 물로 켄칭하였다. 수층을 EtOAc로 세 번 추출하고, 결합된 유기층을 염수로 세척하고, 황산 나트륨으로 건조 및 증발시킨 후, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 11로 표시되는 흰색 고체의 5-브로모-4-히드록시-6-메톡시-2-(4-메톡시펜에틸)이소인돌린-1-온 (886 mg, 59%)을 수득하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400MHz): δ 7.14 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.98 (s, 1H), 6.83 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.89 (s, 1H), 4.20 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.83 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.94 (t, J = 7.4 Hz, 2H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz): δ 167.9, 158.4, 157.1, 148.1, 134.0, 130.7, 129.7, 120.2, 114.2, 103.5, 98.4, 77.3, 57.0, 55.3, 48.1, 44.6, 34.0

[실시예 12] 화학식 12의 화합물의 제조

CH₂Cl₂(25 mL) 중 화학식 11로 표시되는 5-브로모-4-히드록시-6-메톡시-2-(4-메톡시펜에틸)이소인돌린-1-온 (0.86 g, 2.60 mmol), 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (2.0 당량)의 용액에 메톡시메틸 클로라이드 (0.35 g, 4.38 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. NaHCO₃ 포화 수용액 (30 mL)을 첨가하여 상기 반응을 켄칭하고, CH₂Cl₂ (3 Х 30 mL)로 세척하였다. 결합된 유기층을 MgSO₄으로 건조시키고, 여과하여 농축시켰다. 상기 조생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 12로 표시되는 무색 액체의 5-브로모-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-메톡시펜에틸)이소인돌린-1-온 (784 mg, 82%)을 수득하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400MHz): δ 7.17 (s, 1H), 7.14 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.83 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.12 (s, 2H), 4.23 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.82 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.51 (s, 3H), 2.94 (t, J = 7.4 Hz, 2H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz): δ 167.5, 158.4, 157.8, 150.4, 134.0, 130.7, 129.7, 125.6, 114.2, 110.2, 101.9, 98.3, 57.3, 57.0, 55.3, 49.1, 44.6, 34.0

[실시예 13] 화학식 13의 화합물의 제조

20 mL 마이크로웨이브 바이알에서, 화학식 12로 표시되는 5-브로모-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-메톡시펜에틸)이소인돌린-1-온 (750 mg, 1.72 mmol), Cs₂CO₃ (3 당량), 및 PdCl₂(dppf)₂CH₂Cl₂(0.1 당량)을 15 mL의 아르곤 퍼지된 THF/H₂O (9:1)에 용해시켰다. 칼륨 비닐트리플루오로보레이트 (5 당량)를 첨가하고, 상기 혼합물을 탈기시킨 다음, 마이크로웨이브 반응기에서 2시간 동안 150 ℃에서 가열시켰다. 상기 반응을 물로 켄칭하고, 여과하고, EtOAc로 추출한 다음, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 13으로 표시되는 밝은 노란색 고체의 6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-메톡시펜에틸)-5-비닐이소인돌린-1-온 (230 mg, 35%)을 수득하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400MHz): δ 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 3H), 6.87 (dd, J = 18.4, 12.4 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.09 (dd, J = 17.6, 2.4 Hz, 1H), 5.56 (dd, J = 12.4, 2.4 Hz, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.22 (s, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.82 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.47 (s, 3H), 2.94 (t, J = 7.0 Hz, 2H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz): δ 168.7, 160.0, 158.9, 151.5, 134.0, 131.4, 130.3, 128.2, 125.8, 122.8, 121.6, 114.7, 102.0, 98.8, 57.7, 56.8, 55.9, 49.9, 45.1, 34.6

[실시예 14] 화학식 14의 화합물의 제조

THF (4 mL) 중 화학식 13으로 표시되는 6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-메톡시펜에틸)-5-비닐이소인돌린-1-온 (100 mg, 0.26 mmol)의 용액에 9-BBN (2.00 당량, 0.5 M)을 상온에서 처리하고, 상기 혼합물을 상온에서 24시간 동안 교반하였다. 상기 조생성물에 NaOH 수용액 (2.2 mL, 2 M) 및 H₂O₂ 수용액 (30%, 3 mL)을 0 ℃에서 연속으로 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온으로 승온시킨 다음, 24시간 동안 교반하였다. 그 후, 상기 혼합물을 Na₂S₂O₃ 포화 수용액 (5 mL)으로 처리하고, 10분 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 DCM (3Х10 mL)으로 추출하고, 결합된 유기층을 염수 (10mL)로 세척하고, Na₂SO₄으로 건조시켰다. 감압 농축 후, 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 14로 표시되는 흰색 고체의 5-(2-히드록시에틸)-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-메톡시펜에틸)이소인돌린-1-온 (58mg, 55%)을 수득하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 400MHz): δ 7.15 (d, J = 8.6 Hz, 3H), 6.83 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.05 (s, 2H), 4.24 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.82 (t, J = 7.2 Hz, 4H), 3.78 (s, 3H), 3.51 (s, 3H), 3.03 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.93 (t, J = 6.8 Hz, 2H). ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz): δ 159.2, 158.4, 151.5, 130.9, 129.8, 123.8, 123.0, 114.1, 101.0, 97.6, 77.3, 62.4, 57.0, 56.2, 55.3, 49.5, 44.4, 43.2, 34.1, 27.9

[실시예 15] 화학식 15의 화합물의 제조

메탄올 (2 mL) 중 화학식 14로 표시되는 5-(2-히드록시에틸)-6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-메톡시펜에틸)이소인돌린-1-온 (40 mg, 0.10 mmol)의 용액을 상온에서 메탄올 (3.00 당량) 중 1N HCl로 처리하고, 상기 혼합물을 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 출발 물질이 생성되자, 상기 반응을 0 ℃에서 NaHCO₃수용액으로 켄칭하고, 상기 반응 혼합물을 상온으로 승온시킨 다음, DCM (3Х10 mL)으로 추출하고, 결합된 유기층을 염수 (10mL)로 세척하고, Na₂SO₄으로 건조시켰다. 감압 농축 후, 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제하여 화학식 15로 표시되는 흰색 고체의 4-히드록시-5-(2-히드록시에틸)-6-메톡시-2-(4-메톡시펜에틸)이소인돌린-1-온 (16 mg, 45%)을 수득하였다.

¹H NMR (CD₃OD, 400MHz): δ 7.15 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.82 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.71 (s, 1H), 4.20 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.79 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.69 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.00 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.92 (t, J = 6.6 Hz, 2H). ¹³C NMR (CD₃OD, 100 MHz): δ 163.0, 160.6, 159.9, 132.1, 130.7, 114.9, 56.2, 55.6, 55.5, 50.2, 45.5, 34.7, 27.9

[실시예 16] 화학식 16의 화합물의 제조

DMF 중 4-히드록시-6-메톡시-2-펜에틸이소인돌린-1-온 (1.50 g, 5.30 mmol)의 용액에 탄산 칼륨 2.5 당량을 첨가하고, 알릴 브로마이드 (1.27 g, 10.60 mmol)를 실온에서 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 15시간 동안 실온에서 교반하였다. NaHCO₃ 포화 수용액 (30 mL)을 첨가하여 상기 반응을 켄칭 (quenching)하고, CHCl₃ (3 × 30 mL)로 세척 후 결합된 유기층을 MgSO₄으로 건조시키고, 여과하여 농축시켰다. 상기 조생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (헥산/Et2O, 20:1)로 정제하여 화학식 16로 표시되는 흰색 고체의 4-(알릴옥시)-6-메톡시-2-펜에틸이소인돌-1-온 (1.55 g, 91%)를 수득하였다. 그 후, 생성물(1.55 g, 4.2 mmol)에 메시틸렌 (10 ml)을 상기 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 상기 냉각된 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, AcOEt (30 ml)에 용해시켰다. 유기층을 NaCl 포화 수용액 (100 ml)으로 세척 후 MgSO₄으로 건조시키고, 농축시켰다. AcOEt 및 헥산의 1:3 혼합물을 용리액으로 사용하여 상기 조생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 흰색 고체의 5-알릴-4-히드록시-6-메톡시-2-펜에틸이소인돌린-1-온 (1.34 g, 84%)를 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.31 - 7.15 (m, 5H), 6.97 (s, 1H), 5.95 (ddt, J = 16.2, 10.1, 6.1 Hz, 1H), 5.22 - 5.04 (m, 2H), 4.18 (s, 2H), 3.89 - 3.80 (m, 5H), 3.58 - 3.46 (m, 2H), 3.01 - 2.89 (m, 2H). ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 168.92, 158.66, 150.25, 138.75, 135.80, 132.70, 128.76, 128.70, 126.60, 121.06, 116.80, 116.48, 97.93, 56.24, 48.23, 44.35, 34.96, 27.96.

[실시예 17] 화학식 17의 화합물의 제조

THF (4 mL) 중 5-알릴-4-히드록시-6-메톡시-2-펜에틸이소인돌린-1-온 (20 mg, 0.06 mmol)의 용액에 9-BBN 2.00 당량 (0.5 M)을 상온에서 처리하고, 상기 혼합물을 상온에서 5시간 동안 교반하였다. 상기 조생성물에 NaOH 수용액 (3 mL, 2 M) 및 H₂O₂ 수용액 (5 당량)을 0 ℃에서 연속으로 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 상온으로 승온시킨 다음, 3시간 동안 교반하였다. 그 후, 상기 혼합물을 CDCl₃ (3Х30 mL)으로 추출하고, 결합된 유기층을 염수 (10mL)로 세척하고, MgSO₄으로 건조시켰다. 감압 농축 후, 실리카겔 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 17로 표시되는 흰색 고체의 4-히드록시-5-(3-히드록시프로필)-6-메톡시-2-펜에틸이소인돌린-1-온 (9mg, 41%)을 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.18 (s, 1H), 7.35 - 7.14 (m, 5H), 6.92 (s, 1H), 4.18 (s, 2H), 3.90 - 3.76 (m, 5H), 3.59 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.96 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.89 - 2.81 (m, 2H), 1.89 - 1.83 (m, 2H). ¹³C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 159.27, 151.01, 138.83, 132.25, 128.72, 126.56, 121.84, 118.89, 97.29, 71.90, 60.71, 56.04, 48.42, 44.26, 36.42, 34.97, 29.54, 20.09, 18.70 (s)

[실시예 18] 화학식 18의 화합물의 제조

메탄올 (10 ml) 중 메틸 3-히드록시-5-메톡시벤조이트(4.0g, 21.98mmol)의 용액에 페닐에탄아민 2 당량 (4.0mL, 33.03mmol)을 첨가하고, 30 %의 포름알데히드 용액 (4.0 mL)을 실온에서 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 60 ℃까지 승온시키고, 12시간 동안 교반하였다. TLC로 반응 완료를 확인한 후, 상기 반응 혼합물을 다시 실온으로 냉각시키고, 탄산수소 나트륨의 포화 수용액을 천천히 첨가하여 켄칭하였다. 수층을 EtOAc로 세 번 추출하고, 결합된 유기층을 염수로 세척하고, 황산 나트륨으로 건조 및 증발시킨 후, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 18로 표시되는 노란 오일의 메틸 7-메톡시-3-펜에틸-3,4-디히드로-2H-벤조[e][1,3]옥사진-5-카복실레이트 (3.25 g, 45%)를 수득하였다. 그 후, 상기 조생성물 (3.21g, 9.82mmol)에 에탄올을 적가한 후 HCl을 천천히 떨어뜨려 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 상기 냉각된 반응 혼합물을 pH 8에 도달할 때까지 NaOH 수용액을 첨가하여 상온에서 2시간 동안 혼합물을 교반하였다. 결합된 유기층을 CHCl₃로 세척하고 유기층을 염수로 켄칭하였다. 황산 나트륨으로 건조 및 증발시킨 후, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 18로 표시되는 백색 고체의 4-히드록시-6-메톡시-2-펜에틸이소인돌린-1-온 (1.52g, 55%)을 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.27 - 7.13 (m, 5H), 6.76 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 4.14 (s, 2H), 3.81 (dd, J = 9.3, 5.2 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.96 (t, J = 7.3 Hz, 2H). ¹³C NMR (100 MHz, CD₃OD) δ 169.56, 161.73, 153.10, 138.79, 134.31, 128.46, 128.27, 126.21, 120.75, 105.10, 97.57, 54.70, 44.11, 34.20.

[실시예 19] 화학식 19의 화합물의 제조

4-히드록시-5-(2-히드록시에틸)-6-메톡시-2-펜에틸이소인돌린-1-온 (40 mg, 0.12 mmol)을 실온에서 THF에 넣은 후, MsCl에 이어 TEA를 상기 반응 혼합물에 적가시킨 다음, 6시간 동안 교반하였다. 출발 물질이 생성되자, 상기 반응 혼합물을 0 ℃로 냉각시키고, THF 중 디메틸아민을 반응에 첨가한 후, 상기 반응 혼합물을 6시간 동안 60 ℃에서 교반하였다. 염수 (30 mL)로 상기 반응을 켄칭하고, CHCl₃ (3 Х 30 mL)로 세척하였다. 결합된 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하여 농축시켰다. 상기 조생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화학식 19로 표시되는 흰색 고체의 4-메톡시-7-펜에틸-7,8-디히드로-2H-푸로[2,3-이]이소인돌-6(3H)-1 (8 mg, 23%)을 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.31 - 7.19 (m, 5H), 6.91 (s, 1H), 4.65 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.10 (s, 2H), 3.88 - 3.81 (m, 5H), 3.17 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 2.97 (t, J = 7.3 Hz, 2H). ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 168.57, 157.08, 154.91, 138.85, 128.73, 126.59, 117.79, 115.13, 98.10, 72.91, 55.87, 47.71, 44.32, 34.94, 27.47.

[실시예 20] 화학식 20의 화합물의 제조

6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-(트리플루오로메틸)펜에틸)-5-비닐이소인돌린-1-온 (40 mg, 0.10 mmol)의 용액을 상온에서 메탄올 (3.00 당량) 중 1N HCl로 처리하고, 상기 혼합물을 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 출발 물질이 생성되자, 상기 반응을 0 ℃에서 NaHCO₃수용액으로 켄칭하고, 상기 반응 혼합물을 상온으로 승온시킨 다음, DCM (3Х10 mL)으로 추출하고, 결합된 유기층을 염수 (10mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시켰다. 감압 농축 후, 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제하여 화학식 20으로 표시되는 흰색 고체의 4-히드록시-6-메톡시-2-(4-(트리플루오로메틸)펜에틸)-5-비닐이소인돌린-1-온 (26 mg, 71%)을 수득하였다.

¹H NMR(CD₃OD, 400MHz): δ 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.93 (dd, J = 18.0, 12.0 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.11 (dd, J = 18.4, 2.6 Hz, 1H), 5.46 (dd, J = 12.4, 2.6 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 3.91-3.85 (m, 5H), 3.09 (t, J = 7.2 Hz, 2H). ¹³C NMR (CD₃OD, 100 MHz): δ 170.8, 160.8, 151.8, 144.8, 132.9, 130.5, 128.7, 126.4, 122.4, 120.2, 118.8, 97.7, 56.3, 44.9, 35.3

[실시예 21] 화학식 21의 화합물의 제조

6-메톡시-4-(메톡시메톡시)-2-(4-(메톡시펜에틸)-5-비닐이소인돌린-1-온 (30 mg, 0.08 mmol)의 용액을 상온에서 메탄올 (3.00 당량) 중 1N HCl로 처리하고, 상기 혼합물을 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 출발 물질이 생성되자, 상기 반응을 0 ℃에서 NaHCO₃수용액으로 켄칭하고, 상기 반응 혼합물을 상온으로 승온시킨 다음, DCM (3Х10 mL)으로 추출하고, 결합된 유기층을 염수 (10mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시켰다. 감압 농축 후, 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제하여 화학식 21로 표시되는 흰색 고체의 4-히드록시-6-메톡시-2-(4-(메톡시펜에틸)-5-비닐이소인돌린-1-온 (12 mg, 44%)을 수득하였다.

¹H NMR(CD₃OD, 400MHz): δ 7.14 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.92 (dd, J = 18.4, 9.2 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.82 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.10 (dd, J = 18.4, 2.4 Hz, 1H), 5.46 (dd, J = 11.6, 2.4 Hz, 1H), 4.61 (s, 1H), 4.19 (s, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.80 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.92 (t, J = 7.0 Hz, 2H).¹³C NMR (CD₃OD, 100 MHz): δ 170.8, 160.8, 159.8, 151.9, 133.1, 131.9, 130.7, 128.7, 122.3, 120.1, 118.7, 115.0, 97.6, 56.3, 55.6, 48.3, 34.6, 30.6

[실험예 1] 신경성장인자 증가 촉진능 및 세포 독성 평가

세포에 본 발명의 화합물을 처리하였을 때, 세포배지에 생성되는 신경성장인자 (NGF, Nerve Growth Factor)의 함량을 측정하고, 세포 생존률에 미치는 영향을 확인하기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다.

신경성장인자 (NGF, Nerve Growth Factor) 증가 촉진능 평가

24 웰 플레이트에 Rat 성상세포 (astrocytes) 유래 C6 glioma 세포를 1 Х10⁵ cell/well의 농도가 되도록 DMEM 배양액에 분주하여 하룻밤 동안 안정화시킨 후, 본 발명의 화합물을 10 μM의 농도로 처리하고, 37 ℃ 배양기에서 24시간 동안 반응시켰다. 처리된 배지를 수집하고 원심분리한 후, 효소결합 면역검사 키트 (enzyme linked immunoassay kit, ELISA kit)를 이용하여 흡광도를 측정하였다.

도 22에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물을 처리하였을 때, 세포 배지에 생성되는 신경성장인자가 증가하는 것을 확인하였으며, 특히 화학식 1, 6, 8 내지 11, 13, 15 내지 17, 및 20의 화합물을 처리하였을 때, 신경성장인자의 생성 증가가 현저히 우수한 것을 확인하였다.

세포 독성 평가

96 웰 플레이트에 Rat 성상세포 (astrocytes) 유래 C6 glioma 세포를 1 Х10⁵ cell/well의 농도가 되도록 DMEM 배양액에 분주하여 하룻밤 동안 안정화시킨 후, 본 발명의 화합물을 10 μM씩 처리하고, 24시간 동안 반응시켰다. 배양액을 제거한 후, 0.5 mg/ml 농도의 MTT 용액을 각 웰에 100 μl씩 넣고 최소 1시간 동안 37 ℃ 배양기에서 배양한 다음, MTT를 제거하고 DMSO를 200μl씩 분주하여 웰에 생성된 formazin을 ELISA reader를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

도 23에 나타낸 바와 같이, 모든 화합물을 처리한 경우에서 대조군과 세포 생존률의 유의한 차이가 나지 않았으며, 따라서 본 발명의 화합물은 세포 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다.

[실험예 2] 신경 세포 생장 촉진능 및 세포 독성 평가

N2a 세포에 본 발명의 화합물을 처리하였을 때, 신경돌기의 성장 정도를 측정하고, 세포 생존률에 미치는 영향을 확인하기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다. 신경기능장애 개선 효과를 가져 뇌기능장애 관련 질환의 치료제로 사용되는 cerebrolysin를 양성 대조군으로 사용하였다.

신경돌기 (Neurite) 성장 분석

N2a 세포 (Neuro-2a cell)를 24 웰 플레이트에 Poly-D-lysin (100 μg/ml) 용액으로 하룻밤 동안 코팅하고, 멸균수로 세척한 후, 1시간 동안 배양하였다. 15 ×10³cell/well 또는 30 ×10³cell/well 농도의 신경 세포를 DMEM에 분주하여 하룻밤 동안 안정화시킨 후, 본 발명의 화합물을 10 μM의 농도로 처리하고, Incucyte zoom live cell 분석 시스템을 이용하여 2시간마다 신경돌기의 성장을 측정하였다.

도 24a 및 24b에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물을 처리하였을 때, 신경돌기의 성장이 증가한 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 화합물이 신경영양인자에 효과적이며, 신경 세포의 생장을 촉진시키는 것을 확인하였다.

세포 독성 평가

96 웰 플레이트에 N2a 세포를 1 Х10⁵cell/well의 농도가 되도록 DMEM 배양액에 분주하여 하룻밤 동안 안정화시킨 후, 본 발명의 화합물을 10 μM의 농도로 처리하고, 24시간 동안 반응시켰다. 배양액을 제거한 후, 0.5 mg/ml 농도의 MTT 용액을 100 μl씩 각 웰에 넣고 최소 1시간 동안 37 ℃ 배양기에서 배양한 다음, MTT를 제거하고 DMSO를 200 μl씩 분주하여 각 웰에 생성된 formazin을 ELISA reader를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

도 25에 나타낸 바와 같이, 모든 화합물을 처리한 경우에서 대조군과 세포 생존률의 유의한 차이가 나지 않았으며, 따라서 본 발명의 화합물은 신경 세포에 대하여 세포 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다.

[실험예 3] NO 생성 분석 및 세포 독성 평가

BV2 세포에 본 발명의 화합물을 처리하였을 때의 NO 생성량 변화 및 세포 생존률에 미치는 영향을 확인하기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다. NO 합성 억제제인 L-NMMA (NG-Monomethyl-L-arginine)를 양성 대조군으로 사용하였다.

항신경염 활성 평가를 위한 NO 생성 분석

96 웰 플레이트에 BV2 세포 (미세아교세포)를 6 ×10⁴ cell/well의 농도가 되도록 DMEM 배양액에 분주한 후, 본 발명의 화합물을 10 μM씩 처리하고, 24시간 동안 배양하였다. 24시간 이후에 각각의 시료를 10 μM의 농도로 처리하고, 1시간 동안 반응시킨 후, 24시간 동안 100 ng/ml의 LPS로 자극하였다. 그리스 (Griess) 반응을 통해 NO (nitric oxide)의 가용성 산화 생성물인 아질산염의 생성을 배양 배지에서 측정하였다.

도 26에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물을 처리하였을 때, 무처리 대조군에 비하여 NO 생성이 감소하는 것을 확인하였으며, 특히 화학식 2 내지 4, 12, 13, 15, 17, 19, 및 21의 화합물을 처리하였을 때, NO 생성이 현저히 감소하였다. 따라서 본 발명의 화합물은 항신경염 효과를 갖는 것을 알 수 있었다.

세포 독성 평가

96 웰 플레이트에 BV2 세포를 1 Х10⁵cell/well의 농도가 되도록 DMEM 배양액에 분주하여 하룻밤 동안 안정화시킨 후, 본 발명의 화합물을 10 μM의 농도로 처리한 후, 24시간 동안 반응시켰다. 배양액을 제거한 후, 0.5 mg/ml 농도의 MTT 용액을 100 μl씩 각 웰에 넣고 최소 1시간 동안 37℃ 배양기에서 배양한 다음, MTT를 제거하고 DMSO를 200μl씩 분주하여 각 웰에 생성된 formazin을 ELISA reader를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

도 27에 나타낸 바와 같이, 모든 화합물을 처리한 경우에서 대조군과 세포 생존률의 유의한 차이가 나지 않았으며, 따라서 본 발명의 화합물은 미세아교세포에 대하여 세포 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다.

Claims

하기 화학식 22의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
[화학식 22]

상기 식에서,
R₁은 수소, 할로, 히드록시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 알콕시, 히드록시알킬, 또는 알콕시알킬이고;
R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 수소, 할로, 히드록시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 히드록시알킬, 또는 알콕시알킬이거나, R₃가 R₂ 및 R₂가 부착된 산소와 함께 5 내지 6 원 헤테로시클로알킬을 형성하고; 및
R₄는 수소 또는 알킬이다.
제1항에 있어서,
R₁은 수소, 할로, 할로알킬, 또는 알콕시이고;
R₂는 수소 또는 알콕시알킬이고;
R₃는 수소, 할로, 알킬, 알케닐, 또는 히드록시알킬이거나, R₂ 및 R₂가 부착된 산소와 함께 5 내지 6 원 헤테로시클로알킬을 형성하고; 및
R₄는 알킬인 것을 특징으로 하는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
하기 화학식 23의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
[화학식 23]

상기 식에서,
R₁은 수소, 할로, 할로알킬, 또는 C₁-C₆ 알콕시이고;
R₂는 수소 또는 C₁-C₆ 알콕시알킬이고;
R₃는 수소, 할로, C₁-C₆ 알킬, C₂-C₆ 알케닐, 또는 C₁-C₆ 히드록시알킬이거나, R₂ 및 R₂가 부착된 산소와 함께 5 내지 6 원 헤테로시클로알킬을 형성하고; 및
R₄는 C₁-C₆ 알킬이다.
제3항에 있어서,
R₁은 수소, 플루오로, 메톡시, 또는 트리플루오로메틸이고;
R₂는 수소 또는 메톡시메틸이고;
R₃는 수소, 브로모, 비닐, 알릴, 히드록시에틸, 또는 히드록시프로필이거나, R₂ 및 R₂가 부착된 산소와 함께 5 원 헤테로시클로알킬을 형성하고; 및
R₄는 메틸인 것을 특징으로 하는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
하기 화학식의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
[화학식 1]

;
[화학식 2]

;
[화학식 3]

;
[화학식 4]

;
[화학식 5]

;
[화학식 6]

;
[화학식 7]

;
[화학식 8]

;
[화학식 9]

;
[화학식 10]

;
[화학식 11]

;
[화학식 12]

;
[화학식 13]

;
[화학식 14]

;
[화학식 15]

;
[화학식 16]

;
[화학식 17]

;
[화학식 18]

;
[화학식 19]

;
[화학식 20]

; 및
[화학식 21]

.
하기 화학식 22의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 신경질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물:
[화학식 22]

상기 식에서,
R₁은 수소, 할로, 히드록시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 알콕시, 히드록시알킬, 또는 알콕시알킬이고;
R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 수소, 할로, 히드록시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 히드록시알킬, 또는 알콕시알킬이거나, R₃가 R₂ 및 R₂가 부착된 산소와 함께 5 내지 6 원 헤테로시클로알킬을 형성하고; 및
R₄는 수소 또는 알킬이다.
제6항에 있어서, 상기 신경질환은 알츠하이머, 치매, 파킨슨병, 간질, 신경장애, 말초신경병, 중풍 및 허혈성뇌질환으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 신경질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제6항에 있어서, 상기 화합물은 신경성장인자의 증가를 촉진시키는 것을 특징으로 하는, 신경질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제6항에 있어서, 상기 화합물은 신경 세포의 생장을 촉진시키는 것을 특징으로 하는, 신경질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제6항에 있어서, 상기 화합물은 항신경염 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 신경질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
하기 화학식 22의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 신경질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물:
[화학식 22]

상기 식에서,
R₁은 수소, 할로, 히드록시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 알콕시, 히드록시알킬, 또는 알콕시알킬이고;
R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 수소, 할로, 히드록시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 히드록시알킬, 또는 알콕시알킬이거나, R₃가 R₂ 및 R₂가 부착된 산소와 함께 5 내지 6 원 헤테로시클로알킬을 형성하고; 및
R₄는 수소 또는 알킬이다.
제11항에 있어서, 상기 신경질환은 알츠하이머, 치매, 파킨슨병, 간질, 신경장애, 말초신경병, 중풍 및 허혈성뇌질환으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 신경질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
하기 화학식 22의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 신경질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물:
[화학식 22]

상기 식에서,
R₁은 수소, 할로, 히드록시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 알콕시, 히드록시알킬, 또는 알콕시알킬이고;
R₂ 및 R₃은 각각 독립적으로 수소, 할로, 히드록시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 히드록시알킬, 또는 알콕시알킬이거나, R₃가 R₂ 및 R₂가 부착된 산소와 함께 5 내지 6 원 헤테로시클로알킬을 형성하고; 및
R₄는 수소 또는 알킬이다.