KR20220027785A - 신규한 코로나바이러스 재조합 스파이크 단백질, 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 상기 벡터를 포함하는 코로나바이러스감염증 예방 또는 치료용 백신 - Google Patents
신규한 코로나바이러스 재조합 스파이크 단백질, 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 상기 벡터를 포함하는 코로나바이러스감염증 예방 또는 치료용 백신 Download PDFInfo
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Abstract
Description
도 2는 본 발명의 코로나바이러스감염증-19 예방 또는 치료 백신이 항원으로서 스파이크 단백질을 코딩하는 유전자의 절단 인지 서열을 링커 서열로 치환한 재조합 스파이크 단백질이 구조의 안정성 및 항원 발현도가 높고, 항체 생성 B세포에 중화 항체를 생산하는 능력이 뛰어남을 나타낸 모식도이다.
도 3은 본 발명의 코로나바이러스감염증-19 예방 또는 치료용 백신의 작용 기전을 나타낸 모식도이다.
도 4는 아데노바이러스 혈청형 5(Adenovirus type 5, Ad5)의 유전체를 사용하여 제작한 대조군 발현 벡터를 나타난 모식도이다.
도 5는 항원 발현 유전자인 스파이크 단백질 항원을 탑재한 아데노바이러스 #1 내지 # 4 벡터를 나타낸 모식도이다.
도 6은 항원 발현 유전자인 스파이크 단백질 항원을 탑재한 아데노바이러스 #1 내지 # 4 벡터를 배양 세포주에 도입하였을 때 항원 발현도를 나타낸 도이다.
도 7은 항원 발현 유전자인 스파이크 단백질 항원을 탑재한 아데노바이러스 #1 내지 # 4 벡터를 배양 세포주에 도입하였을 때 세포 밖으로 배출되는 항원 발현도를 나타낸 도이다.
도 8은 항원 발현 유전자인 스파이크 항원을 탑재한 아데노바이러스 #1 내지 # 4 벡터를 마우스에 주입 후 항체 생성량을 나타낸 도이다.
도 9는 항원 발현 유전자인 스파이크 항원을 탑재한 아데노바이러스 # 3 벡터를 마우스에 주입 후 혈액 내에 존재하는 항원 특이 항체의 양을 나타낸 도이다.
도 10은 항원 발현 유전자인 스파이크 항원을 탑재한 아데노바이러스 # 3 벡터를 원숭이에 주입 후 항체 생성량을 나타낸 도이다.
도 11은 항원 발현 유전자인 스파이크 항원을 탑재한 아데노바이러스 # 3 벡터를 원숭이에 주입 후 중화 항체 농도를 나타낸 도이다.
도 12는 항원 발현 유전자인 스파이크 항원을 탑재한 아데노바이러스 # 1 내지 # 4 벡터를 원숭이 주입 후 혈중 간 독성 수치를 나타낸 도이다.
도 13은 항원 발현 유전자인 스파이크 항원을 탑재한 아데노바이러스 # 1 내지 # 3 벡터를 마우스에 주입 후 비장 세포 및 말초혈액단핵세포(PBMC)에서 T 세포 반응성을 나타낸 도이다.
도 14는 항원 발현 유전자인 스파이크 항원을 탑재한 아데노바이러스 # 3 벡터를 영장류에 주입 후 말초혈액단핵세포(PBMC)에서 T 세포 반응성을 나타낸 도이다.
도 15는 마우스에 실시예 3에서 제작한 스파이크 항원을 발현하는 #3 벡터 또는 #3 벡터의 아데노바이러스 유전자 중 E4 유전자를 바이러스 유전체의 E1 영역으로 재배치한 벡터를 주입하였을 때, 유사한 수준의 중화 항체를 생산한 것을 확인한 도이다.
도 16은 원숭이에 실시예 3에서 제작한 스파이크 항원을 발현하는 #3 벡터 또는 #3 벡터의 아데노바이러스 유전자 중 E4 유전자를 바이러스 유전체의 E1 영역으로 재배치한 벡터를 주입하였을 때, 유사한 수준의 중화 항체를 생산한 것을 확인한 도이다.
서열(5'→3') | 서열번호 | |
정방향 프라이머 | TCC AGC CTC CGA TTT GCC ACC ATG TTT GTG TTC CTG G | 4 |
역방향 프라이머 | GAT TAT GAT CAA TTT TCA TGG CCA CTT GAT GTA TTG TTC | 5 |
서열(5'→3') | 서열번호 | |
정방향 프라이머 | AGA CCA TCC TCA GGT CTG TGG CAA GCC AGA G | 9 |
역방향 프라이머 | CCT CCT ACC AGA CCC AGA CCA TCC TCA GGT | 10 |
서열(5'→3') | 서열번호 | |
정방향 프라이머 | CGG TGG CGG TGG GTC GAG GTC TGT GGC AAG CCA GAG | 13 |
역방향 프라이머 | GAC CCA CCG CCA CCG GTC TGG GTC TGG TAG GAG G | 14 |
서열(5'→3') | 서열번호 | |
정방향 프라이머 | GGG CGG TGG TGG GTC GGG TGG CGG CGG TTC CAG GTC TGT GGC AAG CCA GAG | 17 |
역방향 프라이머 | GAC CCA CCA CCG CCC GAC CCA CCG CCA CCG GTC TGG GTC TGG TAG GAG G | 18 |
Claims (19)
- 코로나바이러스 스파이크 단백질(Spike protein)의 S1 및 S2 유전자 사이의 절단 인지 서열이 제거되고 링커 서열을 도입한 재조합 스파이크 단백질.
- 제1항에 있어서, 상기 코로나바이러스는 SARS-CoV, MERS-CoV 또는 SARS-CoV-2인 것을 특징으로 하는, 단백질.
- 제2항에 있어서, 상기 코로나바이러스는 SARS-CoV-2인 것을 특징으로 하는, 단백질.
- 제1항에 있어서, 상기 링커는 (GGGGS)n으로 구성되는 것을 특징으로 하는, 단백질.
- 제4항에 있어서, 상기 n은 1 내지 5의 정수인 것을 특징으로 하는, 단백질.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커 서열로 연결된 스파이크 단백질 항원은 안정성(stability)이 증가된 것을 특징으로 하는, 단백질.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커 서열로 연결된 스파이크 단백질 항원은 항원 발현도가 증가하는 것을 특징으로 하는, 단백질.
- 코로나바이러스 스파이크 단백질(Spike protein)의 S1 및 S2 유전자 사이의 절단 인지 서열이 제거되고 링커 서열을 도입한 재조합 스파이크 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
- 제8항에 있어서, 상기 코로나바이러스는 SARS-CoV, MERS-CoV 또는 SARS-CoV-2인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오티드.
- 제8항에 있어서, 상기 링커 서열은 (GGGGS)n으로 구성되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오티드.
- 코로나바이러스 스파이크 단백질의 S1 및 S2 유전자 사이의 절단 인지 서열이 제거되고 링커 서열을 도입한 것을 특징으로 하는, 재조합 스파이크 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
- 제11항에 있어서, 상기 코로나바이러스는 SARS-CoV, MERS-CoV 또는 SARS-CoV-2인 것을 특징으로 하는, 벡터.
- 제12항에 있어서, 상기 코로나바이러스는 SARS-CoV-2인 것을 특징으로 하는, 벡터.
- 제11항에 있어서, 상기 벡터는 바이러스 또는 플라스미드인 것을 특징으로 하는, 벡터.
- 제14항에 있어서, 상기 바이러스는 아데노바이러스, 레트로바이러스, 렌티바이러스, modified vaccinia virus ankara(MVA), 아데노 연관 바이러스(Adeno-associated virus, AAV), 단순 헤르페스 바이러스(Herpes simplex virus) 또는 배큘로 바이러스(Baculovirus) 인 것을 특징으로 하는, 벡터.
- 제15항에 있어서, 상기 아데노바이러스는 Ad2, Ad4, Ad5, Ad11, Ad26, Ad35, ChAd68, FAd9 또는 PAd3인 것을 특징으로 하는, 벡터.
- 제15항 또는 제16항에 있어서, 상기 아데노바이러스는 항원 발현도가 높은 것을 특징으로 하는, 벡터.
- 코로나바이러스 스파이크 단백질의 S1 및 S2 유전자의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함하는 코로나바이러스 감염증 예방용 또는 치료용 백신.
- 제18항에 있어서, 상기 코로나바이러스 감염증은 SARS, MERS 또는 COVID-19인 것을 특징으로 하는, 코로나바이러스 감염증 예방용 또는 치료용 백신.
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Legal Events
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Comment text: Decision to Refuse Application Patent event code: PX06014S01D Patent event date: 20230208 Comment text: Amendment to Specification, etc. Patent event code: PX06012R01I Patent event date: 20230117 Comment text: Decision to Refuse Application Patent event code: PX06011S01I Patent event date: 20221021 Comment text: Amendment to Specification, etc. Patent event code: PX06012R01I Patent event date: 20220725 Comment text: Notification of reason for refusal Patent event code: PX06013S01I Patent event date: 20220525 |
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