KR20210093748A

KR20210093748A - 흉터형성을 최소화하는 데에 사용하기 위한 신경독소

Info

Publication number: KR20210093748A
Application number: KR1020207020827A
Authority: KR
Inventors: 사우산 아부샤크라; 와즈디에 아마드; 파우아드 하산; 마이클 자르페
Original assignee: 본티, 인크.
Priority date: 2017-12-18
Filing date: 2018-12-19
Publication date: 2021-07-28
Also published as: US20190183987A1; JP2024014923A; WO2019126322A1; CA3086160A1; AU2018388588A1; IL275451A; MX2020006391A; RU2020121973A; CL2020001639A1; US20220395561A1; JP2021506985A; CN111712253A; SG11202005745VA; BR112020012466A2; EP3727430A1

Abstract

상처 치유 과정 동안 흉터형성을 최소화하는 방법이 기술된다. 상처 상에 형성되는 흉터 외관의 개선 방법도 기술된다. 상기 방법들은 치료 유효량의 보툴리눔 독소 아형 E (BoNT/E)를 상처 부근에 투여하는 것을 포함한다.

Description

흉터형성을 최소화하는 데에 사용하기 위한 신경독소

[관련 출원의 상호 참조]

본 출원은 2017년 12월 18일자 U.S. 특허 가출원 제62/599,972호에 대하여 우선권의 혜택을 주장하며, 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.

[기술 분야]

본 개시내용은 흉터형성을 최소화하기 위한 신경독소의 사용에 관한 것이다.

수술 및 기타 침습성인 시술 또는 손상은 흉터형성을 초래할 수 있다. 조직 또는 관절을 기계적으로 고정하는 것이 흉터형성을 최소화하는 데에 효과적일 수 있기는 하지만, 상처와 연관되어 있는 흉터 형성과 관련된 임상 결과를 개선하는 방법에 대한 필요성이 남아 있다.

[발명의 개요]

본원에서 개시되는 것은 흉터형성을 최소화하는 데에 사용하기 위한 조성물 및 방법이다. 예를 들면, 개시되는 실시양태는 상처 부근의 근육 긴장을 감소시킴으로써 흉터형성을 예방하거나 감소시키기 위한 "속성-작용(fast-acting)" 보툴리눔(botulinum) 독소의 사용을 포함한다.

첫 번째 측면에서는, 흉터형성의 최소화 방법이 제공된다. 상기 방법은 치료 유효량의 속성-작용 신경독소를 환자의 상처 부근에 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서는, 수술 시술을 받는 환자에서의 흉터 형성의 예방 방법이 제공된다. 상기 방법은 치료 유효량의 속성-작용 신경독소를 환자의 수술 시술시 생성되는 상처 부근에 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서는, 상처 주변 동적 긴장의 속성 감소 방법이 제공된다. 상기 방법은 치료 유효량의 속성-작용 및/또는 단기-지속 신경독소를 환자의 상처 부근에 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서는, 최근에 수술 시술을 받았으며 상처의 흉터가 눈에 보이기 전인 환자에서의 흉터 형성의 예방 방법이 제공된다. 상기 방법은 치료 유효량의 속성-작용 신경독소를 환자의 수술 시술시 생성되는 상처 부근에 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서는, 이미 흉터를 가지고 있는 환자에서의 흉터의 치료 방법이 제공된다. 상기 방법은 치료 유효량의 속성-작용 및/또는 단기-지속 신경독소를 환자의 상처 부근에 투여하는 것을 포함한다.

일 실시양태에서, 속성-작용 신경독소는 보툴리눔 신경독소 혈청형 E를 포함한다.

일 실시양태에서, 치료 유효량은 약 10^-3 U/kg 내지 약 35 U/kg의 양을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 치료 유효량은 약 1 U/kg 내지 약 25 U/kg의 양을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 치료 유효량은 약 5 U/kg 내지 약 15 U/kg의 양을 포함한다.

또 다른 실시양태에서, 치료 유효량은 약 0.2 나노그램 내지 약 2 나노그램의 양을 포함한다.

또 다른 실시양태에서는, 피부 절개부 또는 열상 부근의 근육 활성이 감소됨으로써, 흉터 형성을 감소시키거나 예방한다.

또 다른 실시양태에서, 보툴리눔 독소는 속성-회복(fast-recovery) 독소이다.

또 다른 실시양태에서, "속성-작용" 보툴리눔 독소는 속성-회복 독소이기도 하다.

또 다른 실시양태에서, 방법은 또한 예를 들면 저속-작용(slower-acting) 신경독소와의 조합으로써의 속성-작용 보툴리눔 신경독소의 투여를 포함한다. 일 실시양태에서, 저속-작용 신경독소는 보툴리눔 독소 아형 A (BoNT/A)이다.

다른 실시양태에서, 방법은 또한 예를 들면 저속-회복(slower-recovery) 신경독소와의 조합으로써의 속성-회복 보툴리눔 신경독소의 투여를 포함한다.

또 다른 실시양태에서, 방법은 추가적인 수술 시술을 포함한다. 예를 들면, 개시되는 실시양태는 예컨대 피부 필러(filler) 주사, 아이 리프트(eye lift), 코성형술, 유방 확대술, 개방 골절, 열상 치료 등과의 조합으로써의 속성-작용 보툴리눔 신경독소의 투여를 포함한다.

BoNT/E에 의한 근육 이완 효과의 빠른 개시는 안면 열상 복구술을 받는 대상체와 같은 대상체에서 향상된 상처 치유 및 감소된 흉터 형성을 제공한다. BoNT/E에 의해 제공되는 더 짧은 근육 이완 기간 (2-4주) 역시 BoNT/A 생성물에서의 3-4개월에 비해 바람직하다.

또 다른 측면에서는, 흉터 외관을 개선하기 위한, 흉터 조직 형성의 감소 방법이 제공된다. 상기 방법은 상처에서의 동적 긴장을 감소시키고/거나 상처 부근에서 근육을 마비시키는 데에 효과적인 양으로 보툴리눔 독소 유형 E를 포함하는 제제를 상처 부근에 투여하는 것을 포함한다. 일 실시양태에서, BoNT/E를 투여하는 것은 치료되지 않고 유지되거나 보툴리눔 독소 유형 A (BoNT/A)를 사용하여 치료되는 유사한 상처에 비해 상처의 흉터 조직 형성을 감소시킨다.

일 실시양태에서, 상처는 대상체에서의 기저 세포 암종 또는 편평 세포 암종의 제거를 위하여 생성된다. 또 다른 실시양태에서, 상처는 모즈 수술(Mohs surgery) 동안 생성된다.

또 다른 실시양태에서, 상처는 안면 상의 것이다. 다른 실시양태에서, 상처는 눈 주변의 것, 이마, 코, 두피 상의 것, 또는 귀 주변의 것이다.

또 다른 실시양태에서, 상처는 이마 상의 단일 상처이다.

다른 실시양태에서, BoNT/E를 포함하는 제제 또는 조성물은 근육내로 투여된다.

일 실시양태에서, 제제는 모즈 수술 후에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제제는 모즈 수술 전에 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 제제는 모즈 수술 후 약 10분 내지 약 1시간 이내에 투여된다.

다른 실시양태에서, 흉터 외관은 VAS (시각적 아날로그 척도(visual analog scale))를 사용하여 임상의에 의해 평가된다. 또 다른 실시양태에서, 흉터 외관은 흉터 미용 평가 및 등급화 척도 (Scar Cosmesis Assessment and Rating Scale) (SCARS)를 사용하여 대상체에 의해 평가된다. 또 다른 실시양태에서, 흉터 외관은 환자 및 관찰자 흉터 평가 척도(Patient and Observer Scar Assessment Scale)를 사용하여 대상체에 의해 평가된다.

또 다른 측면에서는, 흉터 외관의 개선 방법이 제공된다. 상기 방법은 흉터의 발적을 감소시키고/거나, 경직을 감소시키고/거나, 변색을 감소시키는 데에 효과적인 양으로 보툴리눔 독소 유형 E를 포함하는 제제를 상처 부근에 투여하는 것을 포함하며, 여기서 발적, 경직 및/또는 변색의 상기 감소는 상처 치유의 최초 48시간, 72시간, 1주 또는 1개월 이내에 관찰된다. 일 실시양태에서, 상기 감소는 환자에 의해, 및/또는 임상의와 같은 관찰자에 의해 평가되며, 치료되지 않고 유지되거나 보툴리눔 독소 유형 A (BoNT/A)를 사용하여 치료되는 유사한 상처에 대비된다.

또 다른 측면에서는, 상처에서의 흉터 조직 형성의 감소 방법이 제공된다. 상기 방법은 보툴리눔 독소 유형 E를 포함하는 제제를 상처 부근에 피하로 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 투여는 치료되지 않고 유지되거나 보툴리눔 독소 유형 A를 사용하여 치료되는 유사한 상처에 비해 상처의 흉터 조직 형성을 감소시킨다.

일 실시양태에서, 상처는 이완되는 피부 긴장 선(relaxed skin tension line)에 대하여 수직이다.

일 실시양태에서, 보툴리눔 독소 유형 E는 상처에 대한 동적 긴장을 감소시키는 데에 효과적인 양으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 상처는 수술 절개부이다.

또 다른 측면에서는, 상처 상에 형성되는 흉터 외관의 개선 방법이 제공된다. 상기 방법은 치료 유효량의 보툴리눔 독소 아형 E (BoNT/E)를 상처 부근에 투여하는 것을 포함한다.

일 실시양태에서, 상처는 수술 상처이다. 또 다른 실시양태에서, BoNT/E는 수술 시술 전에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, BoNT/E는 수술 시술 후에 투여된다.

일 실시양태에서, 수술 상처는 대상체 상의 기존 흉터와 중첩된다.

일 실시양태에서, 치료 유효량은 BoNT/E를 사용하여 치료되지 않는 환자에서 유사한 상처 상에 형성되는 흉터에 비해 흉터의 발적을 감소시키는 양을 포함한다.

또 다른 실시양태에서, 치료 유효량은 BoNT/E를 사용하여 치료되지 않는 환자에서 유사한 상처 상에 형성되는 흉터에 비해 흉터의 경직을 감소시키는 양을 포함한다.

또 다른 실시양태에서, 상처 부근의 일정량의 보툴리눔 독소 아형 A는 상처 생성 전, 동안 또는 후에도 투여된다.

도 1은 보툴리눔 신경독소 (BoNT) 일차 구조의 도식을 나타낸다.
도 2a-2d는 BoNT/E (도 2a, 2c) 및 BoNT/B (도 2b, 2d)의 개략도 및 리본 도식이다. 촉매촉진, 전위 및 결합 도메인을 각각 CD, TD 및 BD로 표지하였다.
도 3a-3b는 근육들을 확인해주는 인간 신체 전방도 (도 3a) 및 후방도 (도 3b)의 예시이다.
도 4는 신경이 확인되어 있는 인간 신체의 예시이다.
도 5는 실시예 1에 기술되어 있는 연구를 위한 이마 주사 부위를 나타낸다.
도 6은 실시예 4에 기술되어 있는 연구를 위한 이마 주사 부위를 나타낸다.
도 7a는 모즈 수술 동안 전두근에 근육내로 BoNT/E 치료된 인간 환자 (파선이 충전된 막대), 그리고 모즈 수술의 일부로서 보툴리눔 독소를 사용하여 치료되지 않은 인간 환자 (위약, 개방된 막대)에서의 2-8일차, 2-30일차 및 2-90일차의 조사자가 등급화한 시각적 아날로그 척도 (VAS)의 평균 변화를 나타내는 막대 그래프이다.
도 7b는 모즈 수술 동안 전두근에 근육내로 BoNT/E 치료된 인간 환자 (파선이 충전된 막대), 그리고 모즈 수술의 일부로서 보툴리눔 독소를 사용하여 치료되지 않은 인간 환자 (위약, 개방된 막대)에서의 2-8일차, 2-30일차 및 2-90일차의 환자 및 관찰자 흉터 평가 척도 (POSAS)를 사용한 흉터 평가 중 환자-기록 색상 구성요소의 평균 변화를 나타내는 막대 그래프이다.
도 7c는 모즈 수술 동안 전두근에 근육내로 BoNT/E 치료된 인간 환자 (파선이 충전된 막대), 그리고 모즈 수술의 일부로서 보툴리눔 독소를 사용하여 치료되지 않은 인간 환자 (위약, 개방된 막대)에서의 2-8일차, 2-30일차 및 2-90일차의 환자 및 관찰자 흉터 평가 척도 (POSAS)를 사용한 흉터 평가 중 환자-기록 경직 구성요소의 평균 변화를 나타내는 막대 그래프이다.

본원에서 개시되는 실시양태들은 국소적 근육 활성을 감소시킴으로써, 흉터, 예를 들면 수술에 기인하는 흉터의 발생을 감소시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 수술은 미용 수술, 예를 들면 코성형술, 아이 리프트, "복부" 성형술("tummy" tuck) 등을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 수술은 다른 유형의 의학적 시술, 예를 들면 충수 제거, 기관 이식, 제왕절개 분만 등을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 개시되는 조성물을 상처 부근에 투여하는 것을 포함한다.

상처 복구의 미용상의 결과는 봉합의 질, 감염 및 봉합사 품질을 포함한 많은 인자들에 따라 달라진다. 핵심 인자는 염증을 증가시켜 섬유증 및 홍반으로 이어지는 경향이 있는 상처 가장자리에서의 긴장이다. 긴장은 정적 긴장 (상처 위치, 크기, 봉합 기술 등의 결과) 및 동적 긴장으로 구성된다. 여기서 동적 긴장은 상처 아래에 있는 근육의 작용에 의해 야기된다. 구체적으로, 이완되는 피부 긴장 선 (RSTL)에 평행하게 복구되는 상처는 더 적은 동적 긴장을 보유하므로, 더 우수한 미용상의 결과를 동반하여 치유된다. 상기 RSTL에 수직인 흉터는 증가된 긴장을 보유하는데, 이는 증가된 염증, 증가된 콜라겐 및 글리코스아미노글리칸의 침착, 증가된 섬유모세포 반응, 및 저조한 상처 치유, 그리고 증가된 흉터형성을 초래한다. 보툴리눔 독소를 사용하여 아래 근육을 탈신경화(denervating)함으로써 동적 긴장을 감소시키는 것은 잠재적으로 흉터형성을 저감하는 매력적인 방식을 제공한다.

일부 실시양태에서, 수술은 암, 예를 들면 피부암을 치료하기 위한 수술, 예컨대 모즈 수술을 포함할 수 있다. 모즈 미세도식 수술(Mohs micrographic surgery)은 눈, 코, 입술, 귀, 두피, 손가락, 발가락 또는 생식기 주변의 미용상 및 기능상 중요한 영역에서의 것들을 포함한 많은 기저 세포 암종 (BCC) 및 편평 세포 암종 (SCC)을 치료하는 데에 있어서 가장 효과적인 기술로 간주되고 있다.

BCC는 표피 (피부의 최외곽 층)의 가장 깊은 층을 라이닝하는 피부 기저 세포에서 발생하는 비정상적인 조절되지 않는 성장 또는 병변이다. BCC는 종종 개방된 궤양, 적색 패치, 분홍색 성장부, 반짝이는 혹 또는 흉터처럼 보이며, 보통 누적되고 강력한 우발적 태양광 노출의 조합에 의해 야기된다. 미국에서 매년 4백만건을 초과하는 기저 세포 암종 사례가 진단되고 있다. 사실상, BCC는 모든 암 중 가장 빈번하게 발생하는 형태이다. 매 3건의 새로운 암 중 하나를 초과하는 것이 피부암이며, 대다수가 BCC이다.

SCC는 피부의 중간 및 외부 층을 구성하는 편평 세포에서 발생하는 일반적인 형태의 피부암이다. 그것은 보통은 생명을 위협하지 않지만, 일부 경우에서는 침습성일 수 있다. 치료되지 않는 피부의 편평 세포 암종은 더 크게 성장하거나 신체의 다른 부분으로 확산하여 심각한 합병증을 야기할 수 있다. 대부분의 SCC는 태양광, 또는 일광욕용 침대 또는 램프 중 어느 하나로부터 유래하는 자외 (UV) 방사선에의 장기 노출에 기인한다. UV 광을 피하는 것이 피부 편평 세포 암종 및 기타 형태 피부암의 위험성을 감소시키는 데에 도움을 준다. 편평 세포는 신체의 많은 곳에서 발견되며, 편평 세포 암종은 편평 세포가 발견되는 어느 곳에서도 발생할 수 있다. 피부의 편평 세포 암종은 피부에서 발견되는 편평 세포에서 형성되는 암을 지칭한다.

뚜렷하지 않은 가장자리를 가지고 있거나 이전 치료 후 재발된 대형의 침습성이거나 빠르게 성장하는 BCC 또는 SCC에도 모즈가 권장된다. 일부 외과의들은 소정의 흑색종 사례에서도 성공적으로 모즈 수술을 사용하고 있다. 시술은 환자가 기다리는 동안 실험실 작업을 포함하여 단계별로 수행된다. 이는 건강한 조직은 아끼면서도 최고의 치유율로 모든 암성 세포의 제거를 가능하게 한다. 상기 시술은 전에는 치료되지 않았던 피부암에 대하여 99 %까지의 치유율을, 그리고 이전 치료 후 재발된 피부암에 대하여 94 %까지의 치유율을 나타낸다.

상기 시술은 제자리-흑색종 (외과의에 따라 77 % 내지 98 %의 치유율) 및 소정 유형의 흑색종 (치유율 52 %)의 제거에 사용되고 있다. 또 다른 제자리-흑색종 연구는 냉동 절편 모즈(frozen section Mohs)의 경우 95 %, 그리고 고정 조직 모즈법(fixed tissue Mohs method)의 경우 98 내지 99 %의 모즈 치유율을 밝히고 있다.

모즈 시술은 수술 경계(surgical margin)의 완전한 조사를 가능하게 하는 병리 절편화법(pathology sectioning method)이다. 그것은 수술 경계의 무작위 샘플이 조사되는 표준 "브레드 로핑(bread loafing)" 절편화 기술과는 다르다. 모즈 수술은 하기의 4개 단계로 수행된다:

a. 조직의 수술적 제거 (수술 종양학)

b. 조직의 조각을 매핑한 후, 냉동하고, 냉동미세절단기(cryostat)를 사용하여 5 내지 10 마이크로미터로 조직을 절단하고, 헤마톡실린 및 에오신 (H&E) 또는 다른 염료 (톨루이딘 블루 포함)로 염색하는 것

c. 현미경 슬라이드의 해석 (병리학)

d. 경우에 따른 수술 결함의 재구성 (재구성 수술).

모즈 시술은 보통 국소 마취하에 의사의 진료실에서 수행된다. 눈에 보이는 종양 주변을 절단하는 데에는 소형 스캘펄이 이용된다. 매우 작은 수술 경계가 이용되는데, 보통 1 내지 1.5 mm의 "자유 경계(free margin)" 또는 무관 피부를 사용한다. 제거되는 자유 경계의 양은 표준 피부암 절제에 요구되는 일반적인 4 내지 6 mm에 비해 훨씬 더 적다. 조직의 각 수술 제거 후, 시편은 처리된 후, 냉동미세절단기에서 절단되어, 슬라이드 상에 위치되고, H&E로 염색된 다음, 암성 세포에 대하여 절편을 조사하는 모즈 외과의/병리학자에 의해 해독된다. 암이 발견되는 경우, 그의 위치가 맵 (조직 도면) 상에 표시된 후, 외과의가 표시된 암성 조직을 환자로부터 제거한다. 이와 같은 시술은 더 이상의 암이 발견되지 않을 때까지 반복된다. 이후, 대다수의 사례가 모즈 외과의에 의해 재구성된다.

본원에서 개시되는 실시양태는 국소적 근육 활성을 감소시킴으로써, 흉터, 예를 들면 외상에 기인하는 흉터의 발생을 감소시킬 수 있다. 예를 들어 외상성 손상 후라면, 개시되는 실시양태는 개시되는 조성물을 외상, 예컨대 열상 또는 절단 부근에 투여하는 것을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 수술은 미용 수술, 예를 들면 코성형술, 아이 리프트, "복부" 성형술 등을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 수술은 다른 유형의 의학적 시술, 예를 들면 충수 제거, 기관 이식, 제왕절개 분만 등을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 개시되는 조성물을 상처 부근에 투여하는 것을 포함한다.

개시되는 실시양태를 실시하는 데에 유용한 투여 부위는 근육 활성이 감소되어야 하는 임의의 영역을 포함할 수 있다. 예를 들어 안면 미용 수술 시술과의 조합으로써 사용되는 경우, 개시되는 실시양태는 눈썹 주름근 및 눈살근을 포함한 미간 복합체; 안륜근; 안륜근의 상외측 섬유; 전두근; 비근; 상순비익거근; 구륜근; 교근; 구각하제근; 및 광경근에의 투여를 포함할 수 있다.

다른 수술 시술과의 조합으로써 사용될 경우, 개시되는 실시양태는 예를 들면 팔, 다리, 몸통 등의 근육에의 투여를 포함할 수 있다.

개시되는 실시양태는 절개부 부근에서의 근육 긴장을 감소시키기 위한 시술 전의 수술 부위 준비 방법을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에서 개시되는 조성물은 속성-작용 보툴리눔 독소, 예를 들면 보툴리눔 유형 E를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에서 개시되는 조성물은 속성-회복 보툴리눔 독소, 예를 들면 보툴리눔 유형 E를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에서 개시되는 조성물은 속성 작용성의 속성-회복 보툴리눔 독소, 예를 들면 보툴리눔 유형 E를 포함할 수 있다.

정의

"투여" 또는 "투여하는 것"은 제약 조성물 또는 활성 성분을 대상체에게 제공하는 (즉 투여하는) 단계를 의미한다. 본원에서 개시되는 제약 조성물은 수많은 적절한 경로를 통하여 투여될 수 있다. 예를 들면, 근육내, 진피내, 피하 투여, 수막강내 투여, 복막내 투여, 국소 (경피), 점적 및 이식 (예컨대 중합체성 이식물 또는 미니삼투 펌프와 같은 저속 방출 장치)이 모두 적절한 투여 경로가 될 수 있다.

"경감하는 것"은 통증, 두통, 또는 이상 또는 장애의 임의의 증상 또는 원인의 발생 감소를 의미한다. 따라서, 경감하는 것에는 약간의 감소, 상당한 감소, 거의 전체 감소 및 전체 감소가 포함된다.

"아미노산"이라는 용어는 자연 발생 또는 합성 아미노산은 물론, 아미노산 유사체, 입체이성질체, 그리고 자연 발생 아미노산과 유사한 기능을 하는 아미노산 모방체를 의미한다. 이와 같은 정의에 포함되는 것으로는 비자연 아미노산인 (a) 시트룰린 (Cit); (b) 시스틴; (c) 감마-아미노 부티르산 (GABA); (d) 오르니틴 (Orn); (f) 테아닌; (g) 호모시스테인 (Hey); (h) 티록신 (Thx)을 포함하여, (1) 히스티딘 (His; H) (2) 이소류신 (Ile; I) (3) 류신 (Leu; L) (4) 리신 (Lys; K) (5) 메티오닌 (Met; M) (6) 페닐알라닌 (Phe; F) (7) 트레오닌 (Thr; T) (8) 트립토판 (Trp; W) (9) 발린 (Val; V) (10) 아르기닌 (Arg; R) (11) 시스테인 (Cys; C) (12) 글루타민 (Gln; Q) (13) 글리신 (Gly; G) (14) 프롤린 (Pro; P) (15) 세린 (Ser; S) (16) 티로신 (Tyr; Y) (17) 알라닌 (Ala; A) (18) 아스파라긴 (Asn; N) (19) 아스파르트산 (Asp; D) (20) 글루탐산 (Glu; E) (21) 셀레노시스테인 (Sec; U)과 같은 자연 아미노산, 그리고 베타인; 카르니틴; 카르노신 크레아틴; 히드록시트립토판; 히드록시프롤린 (Hyp); N-아세틸 시스테인; S-아데노실 메티오닌 (SAM-e); 타우린; 티라민과 같은 아미노산 유도체들이 있다.

"동물 단백질이 없는"은 혈액 유래, 혈액 혼합수집 및 기타 동물 유래인 생성물 또는 화합물의 부재를 의미한다. "동물"은 포유동물 (예컨대 인간), 조류, 파충류, 어류, 곤충, 거미 또는 기타 동물 종들을 의미한다. "동물"에서 세균과 같은 미생물은 배제된다. 이에 따라, 동물 단백질이 없는 제약 조성물은 보툴리눔 신경독소를 포함할 수 있다. 예를 들어, "동물 단백질이 없는" 제약 조성물은 혈청 유래 알부민, 젤라틴 및 기타 동물 유래 단백질, 예컨대 이뮤노글로불린이 실질적으로 없거나, 본질적으로 없거나, 또는 완전히 없는 것 중 어느 하나인 제약 조성물을 의미한다. 동물 단백질이 없는 제약 조성물의 예는 (활성 성분으로서의) 보툴리눔 독소, 및 안정화제 또는 부형제로서의 적합한 다당류를 포함하거나 그것으로 이루어지는 제약 조성물이다.

"보툴리눔 독소" 또는 "보툴리눔 신경독소"는 클로스트리듐 보툴리눔(Clostridium botulinum)에 의해 생성되는 신경독소는 물론, 비-클로스트리듐 종에 의해 재조합으로 제조되는 보툴리눔 독소 (또는 그의 경쇄 또는 중쇄)를 의미한다. 본원에서 사용될 때, "보툴리눔 독소"라는 구는 보툴리눔 독소 혈청형 A, B, C, D, E, F, G, H 및 X, 그리고 이들의 아형, 모자이크 독소, 예컨대 BoNT/DC 및 BoNT/CD, 및 이들의 임의의 다른 유형의 아형들, 또는 매 경우 전기 중 어느 것의 것인 임의의 재-조작 단백질, 유사체, 유도체, 동종체, 일부, 일부-이하, 변이 또는 별형을 포괄한다. 본원에서 사용될 때, "보툴리눔 독소"는 또한 "변형된 보툴리눔 독소"를 포함한다. 또한, 본원에서 사용될 때의 "보툴리눔 독소"는 보툴리눔 독소 복합체 (예를 들면 300, 600 및 900 kDa 복합체)는 물론, 복합체 단백질과 결합되어 있지 않은 보툴리눔 독소의 신경독성 구성요소 (150 kDa)도 포괄한다. "정제된 보툴리눔 독소"는 배양 또는 발효 공정으로부터 그것이 수득될 때 보툴리눔 독소에 동반할 수 있는 다른 단백질 및 불순물로부터 단리되거나 실질적으로 단리된 순수한 보툴리눔 독소 또는 보툴리눔 독소 복합체를 의미한다. 이에 따라, 정제된 보툴리눔 독소는 적어도 95 %, 더욱 바람직하게는 적어도 99 %의 비-보툴리눔 독소 단백질 및 불순물이 제거되었을 수 있다.

"클로스트리듐 신경독소"는 그에 의해 클로스트리듐 독소가 세포를 중독시키며 저친화성 또는 고친화성 클로스트리듐 독소 수용체에의 클로스트리듐 독소의 결합, 독소/수용체 복합체의 내재화, 세포질로의 클로스트리듐 독소 경쇄의 전위, 및 클로스트리듐 독소 기질의 효소적 변형을 포괄하는 전체적인 세포 메커니즘을 실행할 수 있는, 클로스트리듐 독소 균주에 의해 생성되는 임의의 독소를 지칭한다. 클로스트리듐 독소의 비-제한적인 예에는 보툴리눔 독소, 예컨대 BoNT/A, BoNT/B, BoNT/C₁, BoNT/D, BoNT/CD, BoNT/DC, BoNT/E, BoNT/F, BoNT/G, BoNT/H (유형 FA 또는 HA로도 알려져 있음), BoNT/X, 테타누스(Tetanus) 독소 (TeNT), 바라티이(Baratii) 독소 (BaNT) 및 부티리쿰(Butyricum) 독소 (BuNT)가 포함된다. 신경독소가 아닌 BoNT/C₂ 세포독소 및 BoNT/C₃ 세포독소는 "클로스트리듐 독소"라는 용어에서 배제된다. 클로스트리듐 독소라는 용어에는 대략 150-kDa인 클로스트리듐 독소 단독 (즉 NAP가 없는 것)도 포함된다. 클로스트리듐 독소에는 자연 발생 클로스트리듐 독소 변이, 예를 들면 클로스트리듐 독소 동형들 및 클로스트리듐 독소 아형들; 비-자연 발생 클로스트리듐 독소 변이, 예를 들면 보존성인 클로스트리듐 독소 변이, 비-보존성인 클로스트리듐 독소 변이, 클로스트리듐 독소 키메라 변이, 및 이들의 활성인 클로스트리듐 독소 단편, 또는 이들의 임의 조합이 포함된다. 클로스트리듐 독소에는 또한 클로스트리듐 독소 및 비-독소 연관 단백질 (NAP)를 포함하는 복합체, 예를 들면 보툴리눔 독소 복합체, 테타누스 독소 복합체, 바라티이 독소 복합체 및 부티리쿰 독소 복합체를 지칭하는 클로스트리듐 독소 복합체가 포함된다. 클로스트리듐 독소 복합체의 비-제한적인 예에는 클로스트리듐 보툴리눔(Clostridium botulinum )에 의해 생성되는 것들, 예를 들면 900-kDa BoNT/A 복합체, 500-kDa BoNT/A 복합체, 300-kDa BoNT/A 복합체, 500-kDa BoNT/B 복합체, 500-kDa BoNT/C₁ 복합체, 500-kDa BoNT/D 복합체, 300-kDa BoNT/D 복합체, 300-kDa BoNT/E 복합체 및 300-kDa BoNT/F 복합체가 포함된다.

생물학적 활성 성분에 적용될 때의 "유효량"은 대상체에서 원하는 변화를 주기에 일반적으로 충분한 성분의 양을 의미한다. 예를 들어, 원하는 효과가 흉터 형성의 감소인 경우, 성분의 유효량은 적어도 흉터 형성의 실질적인 감소를 야기하며 상당한 독성은 초래하지 않는 양이다. 본 발명 실시양태의 다른 측면에서는, 치료적 유효 농도의 클로스트리듐 독소 활성 성분이 치료되는 알리멘트(aliment)와 연관된 증상을 예를 들면 10 % 이하, 20 % 이하, 30 % 이하, 40 % 이하, 50 % 이하, 60 % 이하, 70 % 이하, 80 % 이하, 90 % 이하 또는 100 % 이하까지 감소시킨다.

본원에서 사용될 때의 "속성-작용"은 예를 들면 보툴리눔 신경독소 유형 A, 예컨대 오나보툴리눔독소(onabotulinumtoxin)A에 의해 산출되는 것에 비해 더 빠르게 환자에서 효과를 산출하는 보툴리눔 독소를 지칭한다. 예를 들면, 속성-작용 보툴리눔 독소의 효과는 12시간, 24시간 또는 36시간 이내에 산출될 수 있다. 따라서, 유형 E와 같은 속성-작용 독소에 대비하면, 보툴리눔 독소 유형 A는 "저속-작용" 보툴리눔 독소로 분류될 수 있다. 일부 경우에서는, 저속-작용 보툴리눔 독소가 "중간-작용(intermediate-acting)" 독소로 지칭된다. 일부 실시양태에서, 속성-작용 보툴리눔 독소는 그의 투여 후 6시간, 12시간, 24시간 또는 36시간 이내에 측정가능한 치료 효과를 산출하고/거나, 오나보툴리눔독소A에 의해 산출되는 치료 효과에 비해 적어도 약 50 % 더 빠르게 그의 효과가 관찰된다.

본원에서 사용될 때의 "속성-회복"은 예를 들면 보툴리눔 신경독소 유형 A, 예컨대 오나보툴리눔독소A에 의해 산출되는 것에 비해 더 빠르게 환자에서 효과가 감소하는 보툴리눔 독소를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 속성-회복 보툴리눔 독소의 치료 효과는 그의 투여 후 약 3개월, 2개월 또는 6주 이내에 감소하며, 오나보툴리눔독소A에 의해 산출되는 효과에 비해 약 50 % 더 빠르게 그의 효과가 감소한다. 예를 들면, 속성-회복 보툴리눔 독소의 효과는 예컨대 120시간, 150시간, 300시간, 350시간, 400시간, 500시간, 600시간, 700시간, 800시간 등 이내에 감소할 수 있다. 다한증의 치료에서와 같이 샘(gland)을 치료하는 데에 사용되는 경우, 보툴리눔 독소 유형 A는 12개월까지 (문헌 [European J. Neurology 6 (Supp 4): S111-S1150:1999]), 일부 상황에서는 길게는 27개월까지 동안 효능을 가질 수 있는 것으로 알려져 있다. 예를 들면, 문헌 [Bushara K., Botulinum toxin and rhinorrhea, Otolaryngol Head Neck Surg 1996; 114(3):507] 및 [The Laryngoscope 109:1344-1346:1999]을 참조한다. 그러나, 보툴리눔 신경독소 유형 A 근육내 주사의 일반적인 지속기간은 통상적으로 약 3 내지 4개월이다. 따라서, 유형 E와 같은 속성-회복 독소에 대비할 때, 오나보툴리눔독소A와 같은 보툴리눔 독소 유형 A는 "저속-회복" 또는 "장기 작용" 보툴리눔 독소로 분류될 수 있다.

본원에서 사용될 때의 "중간-작용"은 속성-작용 독소가 하게 되는 것에 비해 더 느리게 효과를 산출하는 보툴리눔 독소를 지칭한다.

"국소 투여"는 예를 들면 근육내 또는 진피내 또는 피하 주사 또는 국소성 투여와 같은 것을 통한 약제의 생물학적 효과가 요구되는 동물 신체상 또는 신체 내 부위 부근에의 또는 부근으로의 약제의 직접 투여를 의미한다. 국소 투여에서 정맥내 또는 경구 투여와 같은 전신성 투여 경로는 배제된다. 국소성 투여는 제약 제제가 환자에게 적용되는 국소 투여의 일 유형이다.

"신경독소"는 신경 세포 표면 수용체에 대하여 특이적인 친화성을 가지는 생물학적으로 활성인 분자를 의미한다. 신경독소에는 순수 독소로서의 것, 및 1종 이상의 비-독소인 독소 연관 단백질과 복합체화된 것 모두로서의 클로스트리듐 독소가 포함된다.

"환자"는 의학적 또는 수의학적 관리를 받는 인간 또는 비-인간 대상체를 의미한다.

"제약 조성물"은 활성 제약 성분, 예를 들면 클로스트리듐 독소 활성 성분 예컨대 보툴리눔 독소, 그리고 적어도 1종의 추가적인 성분, 예를 들면 안정화제 또는 부형제 등을 포함하는 조성물을 의미한다. 따라서, 제약 조성물은 인간 환자와 같은 대상체에의 진단 또는 치료용 투여에 적합한 제제이다. 제약 조성물은 예를 들면 동결건조되거나 진공 건조된 상태, 동결건조되거나 진공 건조된 제약 조성물의 재구성 후 형성되는 용액, 또는 재구성을 필요로 하지 않는 용액 또는 고체로 존재할 수 있다. 언급될 때, 제약 조성물은 액체 또는 고체일 수 있다. 제약 조성물에는 동물-단백질이 없을 수 있다.

수술 부위를 "준비하는 것"은 절개 영역에서 근육 긴장을 감소시키기 위하여 본원에서 개시되는 조성물을 투여하는 것을 지칭한다.

본원에서 사용될 때의 "보충 투여"는 최초 신경독소 투여에 후속하는 보툴리눔 투여를 지칭한다.

"치료용 제제"는 말초 근육의 활성을 특징으로 하는 장애 또는 질환과 같은 장애 또는 질환, 및/또는 이들의 연관 증상을 치료함으로써 경감하는 데에 사용될 수 있는 제제를 의미한다.

"치료적 유효 농도", "치료 유효량", "유효량", "유효 투여량" 및 "치료적 유효 투여량"은 원하는 치료 효과를 달성하는 데에 필요한 작용제 (예컨대 보툴리눔 독소 또는 보툴리눔 독소를 포함하는 제약 조성물과 같은 것)의 최소 투여량을 지칭하는 것으로써, 상당한 부정적이거나 불리한 부작용은 야기하지 않으면서 치료되는 질환, 장애 또는 이상과 연관되어 있는 증상을 감소시키는 데에 충분한 투여량을 포함한다.

"치료하다", "치료하는 것" 또는 "치료"는 예컨대 상처를 입거나 손상된 조직의 치유에 의해, 또는 기존의 것이거나 인지된 질환, 장애 또는 이상을 변경하는 것, 변화시키는 것, 강화하는 것, 개선하는 것, 호전시키는 것 및/또는 미화하는 것에 의해 원하는 치료 또는 미용상의 결과를 달성하기 위한, 질환, 장애 또는 이상의 경감 또는 감소 (약간의 감소, 상당한 감소, 거의 전체 감소 및 전체 감소 포함), 해결 또는 예방 (일시적이거나 영구적인 것)을 의미한다.

"유닛" 또는 "U"는 시중에서 구입가능한 보툴리눔 신경독소 유형 A의 유닛과 등가인 신경근 차단 효과를 가지도록 표준화된 활성 보툴리눔 신경독소의 양을 의미한다.

본원에서 사용될 때의 "상처"는 예를 들면 손상에 의하거나 의도적으로 야기되는 피부의 파열을 지칭한다.

본 개시내용의 대안적인 실시양태, 요소 또는 단계들의 그룹화가 제한으로 해석되어서는 아니 된다. 각 군의 구성원은 개별적으로, 또는 본원에서 개시되는 다른 군 구성원과의 임의의 조합으로써 언급 및 청구될 수 있다. 편의성 및/또는 특허성을 이유로 하나 이상의 군의 구성원이 일 군에 포함되거나 그로부터 제외될 수도 있을 것으로 예상된다. 임의의 그와 같은 포함 또는 제외가 발생하는 경우, 본 명세서는 변형된 바와 같은 군을 함유함으로써 첨부된 청구범위에서 사용되는 모든 마르쿠쉬(Markush) 군의 기재된 설명을 충족하는 것으로 간주된다.

달리 표시되지 않는 한, 본 명세서 및 청구범위에서 사용되는 특징, 항목, 양, 파라미터, 특성, 기간 등을 표현하는 모든 수는 모든 경우에 "약"이라는 용어에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 본원에서 사용될 때, "약"이라는 용어는 그렇게 수식되는 특징, 항목, 양, 파라미터, 특성 또는 기간이 언급되는 특징, 항목, 양, 파라미터, 특성 또는 기간의 값 초과 및 미만으로 더하기 또는 빼기 10 %의 범위를 포괄한다는 것을 의미한다. 따라서, 달리 표시되지 않는 한, 명세서 및 첨부된 청구범위에서 제시되는 숫자 파라미터들은 가변적일 수 있는 개략치이다. 적어도, 청구범위의 영역에 대한 등가물의 원칙 적용을 제한하고자 하는 것은 아니나, 각 숫자 표시는 적어도 알려져 있는 유효 숫자의 수에 비추어, 그리고 일반적인 반올림 기술을 적용하여 해석되어야 한다. 넓은 개시 영역을 제시하는 숫자 범위 및 값들이 개략치라 할지라도, 구체적인 예에서 제시되는 숫자 범위 및 값들은 가능한 한 정밀하게 기록되어 있다. 그러나, 어떠한 숫자 범위 또는 값도 본질적으로 그의 각 시험 측정시 발견되는 표준 편차로부터 필연적으로 기인하는 소정의 오차를 함유하고 있다. 본원에서의 숫자 값 범위의 언급은 단순히 범위 내에 속하는 각 별도 숫자 값을 개별적으로 지칭하는 것의 단축 방법으로 사용하고자 하는 것이다. 본원에서 달리 표시되지 않는 한, 숫자 범위의 각 개별 값은 그것이 본원에서 개별적으로 언급된 것처럼 본 명세서에 개재된다.

본원에서 달리 표시되거나 문맥상 분명하게 부정되지 않는 한, 개시내용을 기술하는 문맥 (특히 하기 청구범위의 문맥)에서 사용되는 단수 용어 및 유사 지시물들은 단수 및 복수 모두를 포괄하는 것으로 해석되어야 한다. 본원에서 달리 표시되거나 아니면 문맥상 분명하게 부정되지 않는 한, 본원에서 기술되는 모든 방법은 어떠한 적합한 순서로도 수행될 수 있다. 본원에서 제공되는 임의의 모든 예 또는 예시적인 언어 (예를 들면 "예컨대")의 사용은 단순히 개시내용을 더 잘 부각하고자 하는 것으로써, 달리 청구되는 영역에 제한을 두는 것은 아니다. 본 명세서의 언어가 본원에서 개시되는 실시양태의 실시에 필수적인 임의의 비-청구 요소를 표시하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.

신경독소 조성물

본원에서 개시되는 실시양태는 신경독소 조성물, 예를 들면 속성-회복 신경독소를 포함한다. 그와 같은 신경독소는 임의의 제약상 허용되는 형태인 어떠한 제약상 허용되는 제제로도 제제화될 수 있다. 신경독소는 또한 임의의 제조자에 의해 공급되는 어떠한 제약상 허용되는 형태로도 사용될 수 있다.

신경독소는 클로스트리듐 세균, 예컨대 클로스트리듐 보툴리눔(Clostridium botulinum), 클로스트리듐 부티리쿰 (Clostridium butyricum ) 또는 클로스트리듐 베라티(Clostridium beratti ) 세균에 의해 제조될 수 있다. 또한, 신경독소는 변형된 신경독소; 즉 자연 또는 야생형 신경독소와 비교하였을 때 그의 아미노산들 중 적어도 하나가 결실, 변형 또는 치환된 신경독소일 수 있다. 또한, 신경독소는 재조합으로 제조된 신경독소, 또는 그의 유도체 또는 단편일 수 있다.

도 1은 보툴리눔 신경독소 (BoNT)의 일차 구조를 도시한다. 도 2a-2d는 BoNT/E (도 2a, 2c) 및 BoNT/B (도 2b, 2d)의 개략도 및 리본 도식이다. 촉매촉진, 전위 및 결합 도메인을 각각 CD, TD 및 BD로 표지하였다.

일부 실시양태에서, 개시되는 보툴리눔 신경독소 유형 E (BoNT/E) 조성물은 유형 A 대비 40 %의 아미노산 상동성을 가지는데, 그들은 디술피드 결합에 의해 연결된 100 kDa 중쇄 (HC) 및 50 kDa 경쇄 (LC)의 2개 사슬로 이루어진 동일한 기본 도메인 구조를 공유하며, 예를 들면 문헌 [Whelan et al., The complete amino acid sequence of the Clostridium botulinum type-E neurotoxin , derived by nucleotide-sequence analysis of the encoding gene, Eur. J. Biochem. 204(2): 657-667 (1992)]을 참조한다. 상기 HC는 수용체 결합 도메인 및 전위 도메인을 함유하는 반면, LC는 시냅토좀-연관 단백질 (SNAP) 효소 활성을 함유한다. 상기 도메인 구조는 모든 보툴리눔 신경독소 혈청형들에 의해 공유되는 동일한 구조이다.

개시되는 실시양태에서, 신경독소는 단위 투약 형태로 제제화되는데; 예를 들면 그것은 바이알 중 멸균 용액으로서, 또는 주사용 식염수와 같은 적합한 비히클을 재구성하기 위한 동결건조된 분말을 함유하는 바이알 또는 사셰(sachet)로서 제공될 수 있다.

일부 실시양태에서, 보툴리눔 독소는 식염수, 및 독소를 안정화하고 비-특이적 흡착을 통한 손실을 최소화하는 저온살균된 인간 혈청 알부민을 함유하는 용액 중에 제제화된다. 상기 용액은 멸균 여과되어 (0.2 ㎛ 필터), 개별 바이알에 충전된 다음, 진공-건조됨으로써 멸균된 동결건조 분말을 제공할 수 있다. 사용시에는, 멸균된 비보존 일반 식염수 (소듐 클로라이드 0.9 %의 주사용)의 첨가에 의해 분말이 재구성될 수 있다.

일 실시양태에서, 보툴리눔 유형 E는 pH 6.0인 0.03 M 소듐 포스페이트, 0.12 M 소듐 클로라이드 및 1 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA) 중 20 ng/mL의 5-mL 바이알 공칭 농도로 주사용 멸균 용액 중에 공급된다. 또 다른 실시양태에서, 보툴리눔 유형 E는 소듐 포스페이트, 소듐 클로라이드 및 HSA로 구성되는 액체 제제로서 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 보툴리눔 유형 E는 계면활성제 및 이당류를 포함하는 동결건조 또는 액체 제제로서 공급된다.

조성물이 단일 유형의 신경독소, 예를 들면 보툴리눔 유형 E만을 함유할 수 있기는 하지만, 개시되는 조성물은 강화된 장애 치료 효과를 제공할 수 있는 2종 이상 유형의 신경독소를 포함할 수 있다. 예를 들어, 환자에게 투여되는 조성물은 보툴리눔 유형 A 및 E를 포함할 수 있다. 2종의 서로 다른 신경독소를 함유하는 단일 조성물을 투여하는 것은 원하는 치료 효과를 여전히 달성하면서도 단일 신경독소가 환자에게 투여되는 경우에 비해 신경독소 각각의 유효 농도가 더 낮아지는 것을 가능하게 할 수 있다. 환자에게 투여되는 조성물은 또한 신경독소 또는 신경독소들과의 조합으로써 다른 제약상 활성 성분, 예컨대 단백질 수용체 또는 이온 채널 조절인자를 함유할 수 있다. 이러한 조절인자들은 여러 뉴런들 사이 신경전달의 감소에 기여할 수 있다. 예를 들면, 조성물은 GABA_A 수용체에 의해 매개되는 억제 효과를 강화하는 감마 아미노부티르산 (GABA) 유형 A 수용체 조절인자를 함유할 수 있다. GABA_A 수용체는 세포 멤브레인을 가로지르는 전류 흐름을 효과적으로 단락시키는 것에 의해 뉴런 활성을 억제한다. GABA_A 수용체 조절인자는 GABA_A 수용체의 억제 효과를 강화하여 뉴런으로부터의 전기 또는 화학적 신호 전달을 감소시킬 수 있다. GABA_A 수용체 조절인자의 예에는 벤조디아제핀, 예컨대 디아제팜, 옥사크세팜, 로라제팜, 프라제팜, 알프라졸람, 할라제아팜, 클로르디아제폭시드 및 클로라제페이트가 포함된다. 조성물은 글루타메이트 수용체에 의해 매개되는 흥분 효과를 감소시키는 글루타메이트 수용체 조절인자를 함유할 수도 있다. 글루타메이트 수용체 조절인자의 예에는 AMPA, NMDA 및/또는 키나제 유형의 글루타메이트 수용체를 통한 전류 흐름을 억제하는 작용제가 포함된다.

치료 방법

본원에서 개시되는 방법은 환자에의 속성-작용 신경독소의 투여를 포함할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 상기 신경독소는 보툴리눔 유형 E이다.

본원에서 개시되는 방법은 환자에의 속성-작용 신경독소의 보충 투여를 포함할 수 있다. 보충 투여를 포함하는 실시양태는 추가로 선행 신경독소 투여 결과의 의사 또는 환자 평가를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 속성-작용 신경독소의 투여는 수술 시술 전에 수행된다. 일부 실시양태에서, 투여는 예를 들면 시술 전 6시간 이내, 시술 전 5시간 이내, 시술 전 4시간 이내, 시술 전 3시간 이내, 시술 전 2시간 이내, 시술 전 60분 이내, 시술 전 50분 이내, 시술 전 40분 이내, 시술 전 30분 이내, 시술 전 20분 이내, 시술 전 10분 이내, 시술 전 5분 이내, 시술 전 2분 이내 등에 수행된다.

대안적인 실시양태에서, 속성-작용 신경독소의 투여는 수술 시술과 동시에 수행된다.

다른 실시양태에서, 속성-작용 신경독소의 투여는 수술 시술 후에 수행된다. 예를 들면, 투여는 시술 후 1분 이내, 시술 후 2분 이내, 시술 후 3분 이내, 시술 후 4분 이내, 시술 후 5분 이내, 시술 후 6분 이내, 시술 후 7분 이내, 시술 후 8분 이내, 시술 후 9분 이내, 시술 후 10분 이내, 시술 후 20분 이내, 시술 후 30분 이내, 시술 후 40분 이내, 시술 후 50분 이내, 시술 후 60분 이내, 시술 후 90분 이내, 시술 후 120분 이내, 시술 후 180분 이내, 시술 후 240분 이내, 시술 후 300분 이내 등에 수행될 수 있다. 일부 다른 실시양태에서, 투여는 시술 후 1 내지 3일 이내에 수행될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 투여는 시술 후 3개월 이내에 수행될 수 있다.

보충 투여를 포함하는 실시양태에서, 최초 신경독소 투여 결과의 평가는 예를 들면 최초 투여 6시간, 최초 투여 8시간, 최초 투여 10시간, 최초 투여 12시간, 최초 투여 14시간, 최초 투여 16시간, 최초 투여 18시간, 최초 투여 24시간, 최초 투여 30시간, 최초 투여 36시간, 최초 투여 42시간, 최초 투여 48시간, 최초 투여 54시간, 최초 투여 60시간, 최초 투여 66시간, 최초 투여 72시간, 최초 투여 78시간, 최초 투여 84시간, 최초 투여 90시간, 최초 투여 96시간, 최초 투여 102시간, 최초 투여 108시간, 최초 투여 114시간, 최초 투여 120시간, 최초 투여 1주, 최초 투여 2주, 최초 투여 3주, 최초 투여 4주, 최초 투여 5주, 최초 투여 6주, 최초 투여 7주, 최초 투여 8주, 최초 투여 9주, 최초 투여 10주, 최초 투여 11주, 최초 투여 12주 등 이내에 수행될 수 있다.

보충 투여를 포함하는 실시양태에서, 보충 투여량의 투여는 예를 들면 평가 6시간, 평가 8시간, 평가 10시간, 평가 12시간, 평가 14시간, 평가 16시간, 평가 18시간, 평가 24시간, 평가 30시간, 평가 36시간, 평가 42시간, 평가 48시간, 평가 54시간, 평가 60시간, 평가 66시간, 평가 72시간, 평가 78시간, 평가 84시간, 평가 90시간, 평가 96시간, 평가 102시간, 평가 108시간, 평가 114시간, 평가 120시간, 평가 1주, 평가 2주, 평가 3주, 평가 4주, 평가 5주, 평가 6주, 평가 7주, 평가 8주, 평가 9주, 평가 10주, 평가 11주, 평가 12주 등 이내에 수행될 수 있다.

일부 실시양태에서는, 보충 투여 자체가 예를 들면 속성-작용 신경독소의 최초 투여 6시간, 최초 투여 8시간, 최초 투여 10시간, 최초 투여 12시간, 최초 투여 14시간, 최초 투여 16시간, 최초 투여 18시간, 최초 투여 24시간, 최초 투여 30시간, 최초 투여 36시간, 최초 투여 42시간, 최초 투여 48시간, 최초 투여 54시간, 최초 투여 60시간, 최초 투여 66시간, 최초 투여 72시간, 최초 투여 78시간, 최초 투여 84시간, 최초 투여 90시간, 최초 투여 96시간, 최초 투여 102시간, 최초 투여 108시간, 최초 투여 114시간, 최초 투여 120시간, 최초 투여 1주, 최초 투여 2주, 최초 투여 3주, 최초 투여 4주, 최초 투여 5주, 최초 투여 6주, 최초 투여 7주, 최초 투여 8주, 최초 투여 9주, 최초 투여 10주, 최초 투여 11주, 최초 투여 12주 등 이내에 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 보충 투여는 예를 들면 최초 투여 3 내지 6개월 이내에 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 보충 투여는 최초 투여와 동시에 수행될 수 있다.

본원에서 개시되는 방법은 (예를 들면 속성-작용 신경독소를 사용하여) 속성-개시 효과를 제공할 수 있다. 예를 들면, 개시되는 실시양태는 예컨대 투여 후 30분, 투여 후 45분, 투여 후 60분, 투여 후 75분, 투여 후 90분, 투여 후 2시간, 투여 후 3시간, 투여 후 4시간, 투여 후 5시간, 투여 후 6시간, 투여 후 7시간, 투여 후 8시간, 투여 후 9시간, 투여 후 10시간, 투여 후 11시간, 투여 후 12시간, 투여 후 13시간, 투여 후 14시간, 투여 후 15시간, 투여 후 16시간, 투여 후 17시간, 투여 후 18시간, 투여 후 19시간, 투여 후 20시간, 투여 후 21시간, 투여 후 22시간, 투여 후 23시간, 투여 후 24시간, 투여 후 30시간, 투여 후 36시간, 투여 후 42시간, 투여 후 48시간, 투여 후 3일, 투여 후 4일, 투여 후 5일, 투여 후 6일, 투여 후 7일 등 이내에 수술 절개부 부근의 근육 활성을 감소시킬 수 있다.

본원에서 개시되는 방법은 (예를 들면 속성-회복 신경독소를 사용하여) 더 짧은 기간 동안 근육 활성의 감소를 제공할 수 있다. 예를 들면, 개시되는 실시양태는 예컨대 투여 후 3일, 투여 후 4일, 투여 후 5일, 투여 후 6일, 투여 후 7일, 투여 후 8일, 투여 후 9일, 투여 후 10일, 투여 후 11일, 투여 후 12일, 투여 후 13일, 투여 후 14일, 투여 후 15일, 투여 후 16일, 투여 후 17일, 투여 후 18일, 투여 후 19일, 투여 후 20일, 투여 후 21일, 투여 후 22일, 투여 후 23일, 투여 후 24일, 투여 후 25일, 투여 후 26일, 투여 후 27일, 투여 후 28일, 투여 후 29일, 투여 후 30일, 투여 후 45일, 투여 후 60일, 투여 후 75일, 투여 후 90일, 투여 후 105일 등 이내에 진정되는 근육 활성의 감소를 제공할 수 있다.

부작용이 보툴리눔 주사와 연관될 수 있다. 개시되는 실시양태는 통상적인 신경독소 치료, 예를 들면 유형 A와 같이 더 길게 작용하는 신경독소를 사용하는 치료에 비해 더 적은 부작용, 또는 단축된 기간을 가지는 부작용으로 이어지는 신경독소 치료를 제공할 수 있다.

예를 들면, 개시되는 실시양태는 더 적은 (또는 더 짧은 기간의) 복시 또는 흐려진 시각, 안검 마비 (대상체가 항상 열려있는 안검을 들어올릴 수 없음), 안면 근육 운동의 상실, 쉰소리, 방광 조절의 상실, 호흡 곤란, 연하 장애, 발음 장애, 사망 등의 사례를 초래할 수 있다.

개시되는 방법은 흉터형성의 경향이 있는 영역, 예를 들면 수술 절개부 부근의 영역, 또는 임의의 피부 손상, 예컨대 외상성 손상 부근의 영역에의 투여를 포함한다. 개시되는 실시양태는 흉터형성의 경향이 있는 영역에 근접한 근육, 예를 들면 골격근 조직 또는 평활근 조직에의 투여를 포함한다.

또한, 개시되는 실시양태는 어느 정도 더 긴 기간의 감소된 근육 활성을 제공할 수 있다. 예를 들면, 더 길게 작용하는 신경독소를 사용하면, 효과 기간의 20 % 변화로 1개월의 효과 기간 차이를 초래할 수 있다. 개시되는 속성-회복 신경독소를 사용하면, 이와 같은 20 % 변화는 효과 기간에 있어서 훨씬 덜 급격한 차이를 산출한다.

개시되는 속성-작용 신경독소 조성물은 바늘 또는 무바늘 장치를 사용하여 개체에게 주사될 수 있다. 특정 실시양태에서, 방법은 조성물을 개체에 피하로 주사하는 것을 포함한다. 예를 들면, 투여는 약 30 게이지 이하의 바늘을 통하여 조성물을 주사하는 것을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 보툴리눔 독소 유형 E를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.

조성물의 주사는 주사기, 카테터, 바늘 및 기타 주사 수단에 의해 수행될 수 있다. 주사는 비제한적으로 안면, 목, 몸통, 팔, 손, 다리 및 발을 포함하여 치료를 필요로 하는 포유동물 신체의 어떠한 영역 상에도 수행될 수 있다. 주사는 표피, 진피, 지방, 근육 또는 피하 층과 같은 특정 영역의 임의 위치에의 것일 수 있다.

예를 들면, 개시되는 조성물의 투여에 적합한 골격근은 도 3a-3b에 나타낸 예시의 근육 또는 근육 조합들 중 어느 것을 포함할 수 있다.

투여는 도 4의 개략도에 나타낸 신경들 중 하나 이상의 부근으로의, 또는 부근에의 주사를 포함할 수 있다.

개시되는 조성물의 투여에 적합한 평활근은 혈관 벽, 위 벽, 요관, 장, 대동맥 (혈관중간막), 안구의 홍채, 전립샘, 위장관로, 기도, 소동맥, 세동맥, 생식관로 (양 성), 정맥, 신장의 사구체 (혈관사이 세포로 지칭됨), 방광, 자궁, 피부의 입모근, 섬모체근, 괄약근, 기관, 담즙관 등 중 어느 것을 포함할 수 있다.

개시되는 방법하에서의 주사의 빈도 및 양은 치료되는 구체적인 영역의 특성 및 위치를 바탕으로 결정될 수 있다. 그러나, 특정 사례에서는, 최적의 결과를 달성하기 위하여 반복되는 주사가 요구될 수도 있다. 각 구체적인 사례에 있어서의 주사의 빈도 및 양은 관련 기술분야 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다.

투여 경로 및 투약량의 예가 제공되기는 하지만, 적절한 투여 경로 및 투약량은 일반적으로 담당의에 의해 사례별 기준으로 결정된다. 그와 같은 결정은 관련 기술분야 통상의 기술자에게는 일상적인 것이다 (예를 들면 문헌 [Harrison's Principles of Internal Medicine (1998), edited by Anthony Fauci et al., 14th edition, published by McGraw Hill] 참조). 예를 들어, 본원에서 개시되는 발명에 따른 클로스트리듐 신경독소의 투여 경로 및 투약량은 선택된 신경독소의 용해도 특징은 물론, 치료되는 이상의 강도 및 범위와 같은 기준을 바탕으로 선택될 수 있다.

속성-작용 신경독소는 약 10^-3 U/kg 내지 약 35 U/kg의 양으로 투여될 수 있다. 일 실시양태에서, 신경독소는 약 10^-2 U/kg 내지 약 25 U/kg의 양으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 신경독소는 약 10^-1 U/kg 내지 약 15 U/kg의 양으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 신경독소는 약 1 U/kg 내지 약 10 U/kg의 양으로 투여된다. 많은 경우에서, 보툴리눔 유형 E와 같은 신경독소 약 1 유닛 내지 약 500 유닛의 투여가 효과적인 치료적 경감을 제공한다. 일 실시양태에서는, 약 5 유닛 내지 약 200 유닛의 신경독소, 예컨대 보툴리눔 유형 E가 사용될 수 있으며, 또 다른 실시양태에서는 약 10 유닛 내지 약 100 유닛의 신경독소, 예컨대 보툴리눔 유형 E가 근육과 같은 표적 조직에 국소적으로 투여될 수 있다.

일부 실시양태에서, 투여는 약 10 유닛의 신경독소, 또는 약 20 유닛의 신경독소, 또는 약 30 유닛의 신경독소, 또는 약 40 유닛의 신경독소, 또는 약 50 유닛의 신경독소, 또는 약 60 유닛의 신경독소, 또는 약 70 유닛의 신경독소, 또는 약 80 유닛의 신경독소, 또는 약 90 유닛의 신경독소, 또는 약 100 유닛의 신경독소, 또는 약 110 유닛의 신경독소, 또는 약 120 유닛의 신경독소, 또는 약 130 유닛의 신경독소, 또는 약 140 유닛의 신경독소, 또는 약 150 유닛의 신경독소, 또는 약 160 유닛의 신경독소, 또는 약 170 유닛의 신경독소, 또는 약 180 유닛의 신경독소, 또는 약 190 유닛의 신경독소, 또는 약 200 유닛의 신경독소, 또는 약 210 유닛의 신경독소, 또는 약 220 유닛의 신경독소, 또는 약 230 유닛의 신경독소, 또는 약 240 유닛의 신경독소, 또는 약 250 유닛의 신경독소, 또는 약 260 유닛의 신경독소, 또는 약 270 유닛의 신경독소, 또는 약 280 유닛의 신경독소, 또는 약 290 유닛의 신경독소, 또는 약 290 유닛의 신경독소, 또는 약 300 유닛의 신경독소, 또는 약 310 유닛의 신경독소, 또는 약 320 유닛의 신경독소, 또는 약 330 유닛의 신경독소, 또는 약 340 유닛의 신경독소, 또는 약 350 유닛의 신경독소, 또는 약 360 유닛의 신경독소, 또는 약 370 유닛의 신경독소, 또는 약 380 유닛의 신경독소, 또는 약 390 유닛의 신경독소, 또는 약 400 유닛의 신경독소, 또는 약 410 유닛의 신경독소, 또는 약 420 유닛의 신경독소, 또는 약 430 유닛의 신경독소, 또는 약 440 유닛의 신경독소, 또는 약 450 유닛의 신경독소, 또는 약 460 유닛의 신경독소, 또는 약 470 유닛의 신경독소, 또는 약 480 유닛의 신경독소, 또는 약 490 유닛의 신경독소, 또는 약 500 유닛의 신경독소 등인 투여량을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 투여는 약 0.1 나노그램 (ng)의 신경독소, 0.2 ng의 신경독소, 0.3 ng의 신경독소, 0.4 ng의 신경독소, 0.5 ng의 신경독소, 0.6 ng의 신경독소, 0.7 ng의 신경독소, 0.8 ng의 신경독소, 0.9 ng의 신경독소, 1.0 ng의 신경독소, 1.1 ng의 신경독소, 1.2 ng의 신경독소, 1.3 ng의 신경독소, 1.4 ng의 신경독소, 1.5 ng의 신경독소, 1.6 ng의 신경독소, 1.7 ng의 신경독소, 1.8 ng의 신경독소, 1.9 ng의 신경독소, 2.0 ng의 신경독소, 2.1 ng의 신경독소, 2.2 ng의 신경독소, 2.3 ng의 신경독소, 2.4 ng의 신경독소, 2.5 ng의 신경독소, 2.6 ng의 신경독소, 2.7 ng의 신경독소, 2.8 ng의 신경독소, 2.9 ng의 신경독소, 3.0 ng의 신경독소, 3.1 ng의 신경독소, 3.2 ng의 신경독소, 3.3 ng의 신경독소, 3.4 ng의 신경독소, 3.5 ng의 신경독소, 3.6 ng의 신경독소, 3.7 ng의 신경독소, 3.8 ng의 신경독소, 3.9 ng의 신경독소, 4.0 ng의 신경독소, 4.1 ng의 신경독소, 4.2 ng의 신경독소, 4.3 ng의 신경독소, 4.4 ng의 신경독소, 4.5 ng의 신경독소, 5 ng의 신경독소, 6 ng의 신경독소, 7 ng의 신경독소, 8 ng의 신경독소, 9 ng의 신경독소, 10 ng의 신경독소 등인 투여량을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 투여는 약 0.1 나노그램 (ng)의 신경독소 내지 20 ng의 신경독소, 약 1 ng의 신경독소 내지 19 ng의 신경독소, 약 2 ng의 신경독소 내지 18 ng의 신경독소, 약 3 ng의 신경독소 내지 17 ng의 신경독소, 약 4 ng의 신경독소 내지 16 ng의 신경독소, 약 5 ng의 신경독소 내지 15 ng의 신경독소, 약 6 ng의 신경독소 내지 14 ng의 신경독소, 약 7 ng의 신경독소 내지 13 ng의 신경독소, 약 8 ng의 신경독소 내지 12 ng의 신경독소, 약 9 ng의 신경독소 내지 11 ng의 신경독소 등인 투여량을 포함할 수 있다. 실시양태에서, 투여는 약 0.1 나노그램 (ng)의 신경독소, 0.2 ng의 신경독소, 0.3 ng의 신경독소, 0.4 ng의 신경독소, 0.5 ng의 신경독소, 0.6 ng의 신경독소, 0.7 ng의 신경독소, 0.8 ng의 신경독소, 0.9 ng의 신경독소, 1.0 ng의 신경독소, 1.1 ng의 신경독소, 1.2 ng의 신경독소, 1.3 ng의 신경독소, 1.4 ng의 신경독소, 1.5 ng의 신경독소, 1.6 ng의 신경독소, 1.7 ng의 신경독소, 1.8 ng의 신경독소, 1.9 ng의 신경독소, 2.0 ng의 신경독소, 2.1 ng의 신경독소, 2.2 ng의 신경독소, 2.3 ng의 신경독소, 2.4 ng의 신경독소, 2.5 ng의 신경독소, 2.6 ng의 신경독소, 2.7 ng의 신경독소, 2.8 ng의 신경독소, 2.9 ng의 신경독소, 3.0 ng의 신경독소, 3.1 ng의 신경독소, 3.2 ng의 신경독소, 3.3 ng의 신경독소, 3.4 ng의 신경독소, 3.5 ng의 신경독소, 3.6 ng의 신경독소, 3.7 ng의 신경독소, 3.8 ng의 신경독소, 3.9 ng의 신경독소, 4.0 ng의 신경독소, 4.1 ng의 신경독소, 4.2 ng의 신경독소, 4.3 ng의 신경독소, 4.4 ng의 신경독소, 4.5 ng의 신경독소, 5 ng의 신경독소, 6 ng의 신경독소, 7 ng의 신경독소, 8 ng의 신경독소, 9 ng의 신경독소, 10 ng의 신경독소 등인 1회 이상의 주사를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 투여는 약 0.1 나노그램 (ng)의 신경독소 내지 20 ng의 신경독소, 약 1 ng의 신경독소 내지 19 ng의 신경독소, 약 2 ng의 신경독소 내지 18 ng의 신경독소, 약 3 ng의 신경독소 내지 17 ng의 신경독소, 약 4 ng의 신경독소 내지 16 ng의 신경독소, 약 5 ng의 신경독소 내지 15 ng의 신경독소, 약 6 ng의 신경독소 내지 14 ng의 신경독소, 약 7 ng의 신경독소 내지 13 ng의 신경독소, 약 8 ng의 신경독소 내지 12 ng의 신경독소, 약 9 ng의 신경독소 내지 11 ng의 신경독소 등인 1회 이상의 주사를 포함할 수 있다.

그러나, 궁극적으로 투여되는 독소의 양 및 그의 투여 빈도 양자는 치료를 담당하는 의사의 재량이 될 것이며, 독소에 의해 산출되는 안전성 및 효과 문제에 부합할 것이다.

일부 실시양태에서, 투여는 1회 이상의 주사, 예를 들면 실질적으로 절개 부위 또는 선 또는 선들을 따르는 주사를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 특정 패턴, 예를 들면 W 패턴, 및 X 패턴, Z 패턴, 별 패턴, 원 패턴, 반원 패턴, 정사각형 패턴, 직사각형 패턴, 초승달 패턴, 또는 이들의 조합인 주사를 포함할 수 있다.

인간에서의 BoNT/E의 작용 개시, 안전성 및 허용성을 평가하기 위하여, 미간 주름의 치료를 받는 인간 환자에게 BoNT/E가 투여되는 연구가 수행되었다. 상기 연구에 대해서는 실시예 1에서 기술된다. 도 5에 도시되어 있는 바와 같이, BoNT/E는 눈살근의 5개 주사 지점에 투여되었다. BoNT/E는 빠른 작용 개시 및 바람직한 안전성 및 허용성 프로파일을 동반하여 미간 주름 중증도의 개선을 제공하였다.

기저 세포 암종의 수술 치료를 받는 인간 환자에게 BoNT/E가 투여되는 또 다른 연구가 수행되었다. 실시예 5에 기술되어 있는 바와 같이, 이마 상의 기저 세포 암종 단일 병변을 제거하기 위한 모즈 수술이 예정된 12 명의 인간 대상체가 치료 군 (n=8) 및 위약 군 (n=4)으로 무작위화되었다. 양 군의 대상체들은 수술 부위 근처의 전두근에 단일 근육내 주사를 투여받았는데, 치료 군은 일정 투여량의 BoNT/E를 투여받았으며, 위약 군은 식염수를 투여받았다. 연구 2일차 (수술-후 24시간)에 시작하여, VAS, SCAR 및 POSAS 척도를 사용하여 각 대상체가 평가되었다 (실시예 4 참조). 대상체는 연구 8, 30 및 90일차에 여러 척도를 사용하여 다시 평가되었다. 결과를 도 7a-7c에 나타내었는데, 여기서 x-y일차로 나타낸 각 막대 그래프 x-축에 따른 시점은 y일차 - x일차에서의 평가 점수의 변화로 계산된다.

도 7a는 2-8일차, 2-30일차 및 2-90일차에 조사자가 등급화한 시각적 아날로그 척도 (VAS)의 평균 변화를 나타내는 막대 그래프이다. VAS는 0-10의 숫자 척도로써, 여기서 0은 최악의 가능한 흉터이며, 10은 최상의 가능한 흉터이다. 그래프에서, 파선이 충전된 막대는 모즈 수술 동안 전두근에 근육내로 BoNT/E 치료된 환자에 해당하며, 개방된 막대 (충전 없음)는 식염수로 치료된 위약 군의 환자에 해당한다. BoNT/E로 치료된 대상체는 수술 상처 치유 중의 급성 흉터 형성 단계 동안 2일차 및 30일차에 수행된 평가에서 BoNT/E로 치료되지 않은 대상체에 비해 더 큰 VAS 점수의 평균 변화를 나타내었다.

환자 및 관찰자 흉터 평가 척도 (POSAS) 사용시에는, 환자가 2, 8, 30 및 90일차에 그의 흉터의 색상을 평가하였다. 색상 구성요소는 1 내지 10의 척도로써, 여기서 1의 점수는 대상체의 정상적인 피부 색상에 해당하며, 10의 점수는 대상체의 정상 피부 대비 '매우 다른" 흉터 색상에 해당한다. 도 7b의 막대 그래프는 모즈 수술 동안의 전두근에의 근육내 BoNT/E 투여가 수술 후 처음 30일 동안 환자에 의해 관찰되는 변색을 개선한다는 것을 보여준다.

연구중인 환자들은 상처 부위에서의 조직의 경직을 평가하는 데에도 POSAS를 사용하였다. 1의 점수는 대상체 정상 피부의 경직에 해당하며 10의 점수는 대상체 정상 피부 대비 '매우 다른' 경직에 해당하는 1 내지 10의 척도를 사용하여, 2, 8, 30 및 90일차에 환자가 평가를 수행하였다. 도 7c는 2-8일차, 2-30일차 및 2-90일차에 환자 및 관찰자 흉터 평가 척도 (POSAS)를 사용하여 환자가 기록한 흉터 평가 경직 구성요소의 평균 변화를 나타내는 막대 그래프이다. 모즈 수술 동안 전두근에 근육내로 BoNT/E 치료된 환자 (파선이 충전된 막대)는 모즈 수술의 일부로서 보툴리눔 독소를 사용하여 치료되지 않은 환자 (위약, 개방된 막대)에 비해 개선된 흉터의 물리적 특징들을 기록하였다.

실시예 5 연구에서의 대상체들은 흉터와 연관된 가려움 및 통증에 대하여 질문을 받았다. 대상체들은 2, 8, 30 및 90일차에 하기의 질문을 받았다: "지난 24시간 이내에 흉터로부터의 소정의 가려움으로 괴로웠던 적이 있는가?". 2, 8, 30 및 90일차에 역시 대상체에 문의된 것은 "지난 24시간 이내에 흉터로부터의 소정의 통증으로 괴로웠던 적이 있는가?"이었다. 상기 질문들에 적극적으로 응답한 대상체들의 개요를 하기 표에 나타내었다.

BoNT/E로 치료된 대상체는 상처 생성 후 시작하여 상처 생성 후 약 21일차, 25일차 또는 30일차까지 상처 치유 중의 급성 흉터 형성 단계 동안 흉터와 연관된 가려움의 감소 및 통증의 감소를 기록하였다. 이에 따라, 일 실시양태에서, 상처의 치유와 연관된 흉터 형성의 최소화 및 흉터 외관의 개선 방법은 흉터와 연관된 가려움 및/또는 통증의 감소 방법을 동반한다. 즉, BoNT/E를 사용한 상처 또는 상처 아래 근육(들)의 치료는 개선된 흉터 외관을 제공하며, 흉터 형성 (또는 상처 치유)와 연관된 가려움 또는 통증을 감소시킨다. 일 실시양태에서, BoNT/E의 투여는 BoNT/E 치료를 받는 환자들 중 75 % 이상에서 흉터와 연관된 24-48시간 동안의 가려움 감각을 감소시킨다. 또 다른 실시양태에서, BoNT/E의 투여는 BoNT/E 치료를 받는 환자들 중 적어도 약 25 % 또는 50 %에서, 상처 생성 2-8일 또는 1주 후, 그리고 상처 치유 동안 통증을 감소시킨다.

연구 1일차의 수술 전에, 그리고 2일차 (수술 24시간 후) 및 30일차 및 90일차에, 수술 상처의 사진이 촬영되었다. 상기 사진 (본원에서는 나타내지 않음)은 BoNT/E로 치료된 대상체가 BoNT/E로 치료되지 않은 대상체에 비해 30일차 및 90일차에 더 적은 흉터의 발적을 나타낸다는 것을 밝혀주었다.

이에 따라, 일 측면에서는, 상처 부근에 보툴리눔 신경독소 유형 E 독소를 투여하는 것에 의한 상처 흉터형성의 최소화 방법이 제공된다. 실시예 5의 데이터에 의해 입증되는 바와 같이, 상처 또는 상처 부근의 근육에 투여되는 BoNT/E는 위약에 비해 흉터 외관의 결과를 개선하며, 특히 상처 생성 후 첫 번째 주 또는 10일 이내의 급성 흉터 형성 단계 동안 가려움 감소 및 더 적은 통증이라는 추가적인 이점을 제공한다.

또 다른 측면에서는, 상처 흉터형성의 최소화 방법 또는 흉터 외관의 개선 방법이 제공된다. 상기 방법은 상처의 생성 전, 동안 또는 후에 상처 또는 상처 부근에 BoNT/E를 투여하는 것을 포함한다. BoNT/E의 투여는 흉터의 외관을 개선하고/거나 흉터 형성을 최소화하며, 추가로 BoNT/E 투여 후 2-8일 이내에 흉터의 변색을 개선한다. 일 실시양태에서, 상기 치료 방법은 BoNT/E를 사용한 치료 30일, 60일 또는 90일 후에 감소된 흉터의 발적을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 치료 방법은 BoNT/E로 치료되지 않는 대상체에 비해 치료 후 처음 30일 동안 흉터의 경직을 감소시킨다.

실시예 5의 연구는 그의 작용이 저속-작용 독소에 비해 더 즉각적인 효과를 가지기 때문에, 속성-작용 BoNT/E가 상처 치유 동안 이점을 제공한다는 것을 보여준다. 흉터 형성의 생물학이 개시되는 경우, 상처 생성에 이어 수시간 및 수일 이내에 상처 부위에 제공되는 속성-작용 독소는 흉터의 전체적인 외관에 있어서 이점을 제공하고, 그의 발적 및 경직을 감소시키며, 통증 및 가려움을 감소시킨다. BoNT/E는 작용의 빠른 개시를 제공하여 계속 또는 본질적으로 그의 생성 후 수분 및 수시간 이내에, 또는 심지어는 BoNT/E가 상처 생성 전에 투여되는 경우 그의 생성 전에, 상처 부근의 근육을 마비시킨다. BoNT/E의 짧은 지속기간은 유리한데, 상처 치유 과정이 BoNT/E의 효과 지속기간과 상관되는 수주 내지 1개월의 수준에 있기 때문이다.

일 실시양태에서는, 기존 흉터 상에 생성되는 상처 상에 형성되는 흉터의 흉터형성을 최소화하거나 흉터 외관을 개선하는 것이 고려된다. 예를 들어, 선행 수술 시술과 동일하거나 유사한 부위에 두 번째 수술 시술을 받는 대상체는 선행 수술로부터의 기존 흉터와 중첩되는 부위에 생성되는 수술 상처를 가지게 된다. 기존 흉터 상에 형성되는 흉터는 피부 상에 형성되는 흉터에 비해 더 많은 변색 및/또는 발적을 나타낼 수 있다. 본원의 치료 방법은 기존의 흉터와 부분적으로 또는 본질적으로 완전히 중첩되는 부위에 존재하는 상처가 있는 환자용으로 고려된다.

특정 시간 기간에 걸쳐 예정된 속도로 생체 내에 신경독소를 전달하기 위하여, 조절 방출 시스템이 본원에서 기술되는 실시양태에 사용될 수 있다. 일반적으로, 방출 속도는 시스템의 설계에 의해 결정되며, pH와 같은 환경 조건과는 거의 무관할 수 있다. 수년의 기간에 걸쳐 약물을 전달할 수 있는 조절 방출 시스템이 알려져 있다. 반대로, 지속 방출 시스템은 통상적으로 24시간 이하 이내에 약물을 전달하며, 환경 인자가 방출 속도에 영향을 줄 수 있다. 예컨대, 이식된 조절 방출 시스템 ("이식물")로부터의 신경독소의 방출 속도는 캐리어 이식 재료 및 약물 자체의 물리화학적 특성의 함수이다. 통상적으로, 이식물은 숙주 반응을 적게 도출하거나 도출하지 않는 불활성 재료로 제조된다.

조절 방출 시스템은 캐리어에 도입된 신경독소로 구성될 수 있다. 상기 캐리어는 중합체 또는 생체-세라믹 재료일 수 있다. 조절 방출 시스템은 환자 신체의 선택된 위치에 주사되거나, 삽입되거나, 또는 이식될 수 있으며, 원하는 치료 효능을 제공하는 방식 및 농도로 이식물에 의해 신경독소가 방출되는 오랜 기간 동안 거기에 체류할 수 있다.

중합체 재료는 확산, 화학 반응 또는 용매 활성화로 인하여서는 물론, 자기, 초음파 또는 온도 변화 인자에 의한 영향하에서도 신경독소를 방출할 수 있다. 확산은 저장용기 또는 매트릭스에 기인할 수 있다. 화학적 조절은 중합체 분해 또는 중합체로부터의 약물의 절단에 기인할 수 있다. 용매 활성화는 중합체의 팽창 또는 삼투 효과와 연관될 수 있다.

이식물은 메틸렌 클로라이드에 용해된 적합한 중합체의 용액에 원하는 양의 안정화된 신경독소를 혼합하는 것에 의해 제조될 수 있다. 상기 용액은 실온에서 제조될 수 있다. 다음에, 페트리 접시(Petri dish)로 용액이 전달된 후, 진공 건조기에서 메틸렌 클로라이드가 증발될 수 있다. 원하는 이식물 크기 및 그에 따른 도입 신경독소의 양에 따라, 적합한 양의 건조된 신경독소 도입 이식물이 몰드에서 약 8000 p.s.i.로 5초 동안 또는 3000 p.s.i.로 17초 동안 압축됨으로써 신경독소를 봉입하고 있는 이식물 디스크가 형성된다.

바람직하게는, 사용되는 이식물 재료는 실질적으로 비-독성, 비-발암성 및 비-면역원성이다. 적합한 이식물 재료에는 폴리(2-히드록시 에틸 메타크릴레이트) (p-HEMA), 폴리(N-비닐 피롤리돈) (p-NVP)+, 폴리(비닐 알콜) (PVA), 폴리(아크릴산) (PM), 폴리디메틸 실록산 (PDMS), 에틸렌-비닐 아세테이트(EVAc) 공중합체, 폴리비닐피롤리돈/메틸아크릴레이트 공중합체, 폴리메틸메타크릴레이트 (PMMA), 폴리(락트산) (PLA), 폴리(글리콜산)(PGA), 폴리무수물, 폴리(오르소 에스테르), 콜라겐 및 셀룰로스계 유도체 및 생체세라믹, 예컨대 히드록시아파타이트 (HPA), 트리칼슘 포스페이트 (TCP) 및 알리미노칼슘 포스페이트 (ALCAP)와 같은 중합체들이 포함된다. 락트산, 글리콜산 및 콜라겐은 생분해성 이식물을 제조하는 데에 사용될 수 있다.

이식물 재료는 생분해성 또는 생체침식성일 수 있다. 생체침식성 이식물의 장점은 그것이 환자로부터 제거될 필요가 없다는 것이다. 생체침식성 이식물은 생체활성 물질의 멤브레인 또는 매트릭스 방출 중 어느 하나에 기초할 수 있다. PLA-PGA로부터 제조되는 생분해성 미세구체가 피하 또는 근육내 투여용으로 알려져 있다.

개시되는 실시양태를 실시하기 위한 키트도 본 개시내용에 의해 포괄된다. 상기 키트는 30 게이지 이하의 바늘 및 상응하는 주사기를 포함할 수 있다. 키트는 또한 클로스트리듐 신경독소 조성물, 예컨대 보툴리눔 유형 E 독소 조성물을 포함한다. 신경독소 조성물은 주사기 내로 제공될 수도 있다. 상기 조성물은 바늘을 통하여 주사가능하다. 키트는 주사기 및 바늘의 크기, 및 거기에 들어 있는 주사가능 조성물의 부피에 따라, 그리고 다시 그 키트가 치료하도록 설계되는 구체적인 결함에 따라 다양한 형태로 설계된다.

[ 실시예 ]

하기의 비-제한적인 실시예들은 오로지 예시 목적으로 제공되는 것으로써, 대표적인 실시양태들의 더 완전한 이해를 용이하게 하기 위한 것이다. 이와 같은 실시예들이 본 명세서에서 기술되는 실시양태들 중 어느 것을 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.

실시예 1

미간 주름을 치료하기 위한 보툴리눔 독소 유형 E의 사용

미간 눈살 주름이 있는 대상체에서의 개시되는 속성-작용 유형 E 조성물 단일 치료 주기의 안전성 및 효능을 평가하기 위하여, 인간에서의 무작위화 이중-맹검 위약-대조 상승 투여량 코호트(cohort)의 2a상 연구를 수행하였다. 이와 같은 연구는 상기 프로토콜 및 모든 적용가능한 연방 및 주 규제를 준수하여 수행되었다. 조성물은 보툴리눔 신경독소 아형 E (BoNT/E, "EB-001")로 구성되었다.

도 5에 나타낸 바와 같이, 전체 투여량을 하기 5회의 주사로 분할하였다: 눈살근 중앙의 1회 주사, 그리고 양방의 내측 및 외측 주름근 각각에의 단일 주사. 총 투여량은 하기와 같았다:

각 대상체는 5회의 주사를 투여받았으며, 부위 당 주사된 부피는 0.1 mL이었다. 외측 주름근에의 주사 간격은 잠재적인 처짐을 최소화한다고 알려져 있는 완와상 능선, 또는 그 위 약 1 cm이었다.

실시예 2

눈썹 리프트를 위한 보툴리눔 독소 유형 E의 사용

60세령의 여성이 그녀의 눈썹뼈 아래로 연장되는 눈썹을 나타낸다. 의사는 각 눈 위에 피하로 주사되는 본원에서 개시되는 바와 같은 조성물을 추천한다. 각 주사 부위에 약 10 유닛의 유형 E 보툴리눔 독소가 투여되는데, 눈의 양측에 수회의 주사가 이루어진다. 눈썹의 늘어짐은 약 2일 이내에 감소되며, 투여 후 3개월 동안 실질적으로 경감된다.

실시예 3

유방 확대를 위한 보툴리눔 독소 유형 E의 사용

30세령의 여성이 유방 확대 수술을 결정한다. 시술 4시간 전에, 수술 절개가 이루어지게 될 곳 부근에 보툴리눔 독소 유형 E를 투여한다. 상기 투여는 절개 영역에서의 근육 긴장을 감소시킴으로써, 최소한의 흉터형성을 초래한다. 시술 2주 후, 보충 투여량을 투여한다.

실시예 4

모즈 수술 후 흉터형성을 감소시키기 위한 보툴리눔 독소 유형 E의 사용

44세령 여성이 이마 영역의 피부암, 특히 기저 세포 암종 (BCC)으로 진단된다. BCC 이외에는, 환자는 우수한 건강 상태에 있으며, 임신이거나, 임신 계획이 있거나, 수유중이 아니다. 환자는 또한 기존의 신경근 연접부 장애 (중증 근무력증, 이튼-램버트 증후군 또는 근육위축 외측 경화증)가 없다. 환자는 모즈 시술 전의 과거 30일 이내에는 이마 영역에 어떠한 미용 시술, 레이저 재표면화(resurfacing) 치료 또는 레티노이드 치료법도 받은 바 없다. 환자는 기준선에서의 눈썹 또는 눈꺼풀 처짐이 없음은 물론, 어떠한 비대 흉터 또는 흉터종 형성의 이력, 또는 담당 의사에 의해 평가되었을 때의 기타 상처 이상도 없다.

환자는 담배를 사용하지 않으며, 결코 사용한 적도 없고, 체중은 140 파운드이다.

환자는 모즈 수술을 받을 것을 결정한다. 모즈 수술의 목표는 주변의 건강한 조직에는 최소한의 손상을 주면서 가능한 한 많은 피부암을 제거하는 것이다. 모즈 수술은 보통 국소 마취를 사용하여 외래환자 기준으로 수행된다.

피부암의 뿌리는 눈에 보이는 종양 부분을 넘어 연장될 수 있다. 이러한 뿌리가 제거되지 않는 경우, 암은 재발하게 된다. 미국 모즈 수술 대학(American College of Mohs Surgery) (ACMS)의 전문의가 눈에 보이는 병변을 조사하고 어느 조직을 제거할 것인지를 계획하는 것으로 모즈 시술을 시작한다. 다음에, 환자에게 국소 마취를 제공하고, 시술을 개시한다.

환자가 각 단계 사이에 대기하기는 하지만, 시술은 모두 1회 방문에서 단계별로 수행된다. 조직 층을 제거한 후, 외과의는 현장 실험실에서 현미경하에 그것을 조사한다. 외과의는 이후 기술자의 도움으로 염료를 사용하여 해당 절편들 각각을 색상-표지하고, 피부 상에 참조 표시를 만들어 절편의 기원을 나타낸다. 다음에, 각 소형 조직 부분이 어디에서 기원하는지를 정확히 추적하기 위하여, 수술 부위의 맵을 작도한다. 임의의 암 세포가 잔존하는 경우, 외과의는 가능한 한 많은 건강한 조직을 아끼면서 그 정밀한 위치로부터 또 다른 조직 층을 제거한다. 실험실에서, 외과의는 잔존하는 암에 대한 증거의 탐색으로써, 현미경을 사용하여 각 조직 절편의 하부표면 및 가장자리를 조사한다. 외과의가 현미경하에서 암 세포를 발견하는 경우, 그 또는 그녀는 그 위치를 "맵" 상에 표시하고, 또 다른 더 깊은 - 그러나 정확하게 암 세포가 기원하는 곳으로부터만 - 피부 층을 제거하기 위하여 환자에게 복귀한다. 이와 같은 방법은 모즈 수술이 가능한 한 더 작은 흉터를 생성시키는 것을 보장한다.

의사는 암 세포가 잔존하지 않을 때까지 이와 같은 과정을 반복한다.

수술 후, 0.03 M 소듐 포스페이트, 0.12 M 소듐 클로라이드 및 1 mg/mL 인간 혈청 알부민 (HSA), pH 6.0 중 19.1 ng/mL BoNT/E의 5-mL 바이알 공칭 농도를 가지는 주사용 멸균 용액으로 공급되는 보툴리눔 독소 유형 E를 사용하여, 환자 이마 상의 단일 2 cm 흉터를 치료한다. BoNT/E의 전체 투여량은 전두근으로의 2개 열 (뒤집어진 W 패턴, 도 6 참조)에 걸친 5개 주사 부위상으로 분할된 2.8 ng이다. 타박상 가능성을 최소화하면서 표면 전두근 조직에 영향을 주기 위하여, 전두 주사의 주사 깊이는 진피이하 수준까지이다. 바늘은 바늘 단부가 30-도 각도로 비스듬하게 들리도록 하여 주사 동안 높게 외측으로 배향된다.

후속 방문은 2, 8, 30 및 90일차로 예정된다. 1일차의 수술-전 (투여 전) 동안, 수술-후 1일차 및 2, 8, 30 (ET) 및 90일차 (EOS)에, 연구 매뉴얼(들) 상의 지침에 따라 표준화된 안면 사진들을 촬영하게 된다.

후속 방문은 하기를 포함한다:

a. 시각적 아날로그 척도 (VAS)를 사용한 흉터 평가

b. 흉터 미용 평가 및 등급화 척도 (SCARS)

c. 환자 및 관찰자 흉터 평가 척도 (POSAS)

d. 안면 주름 척도 (FWS-IA)를 사용한 최대 활동 및 휴식시의 이마 주름의 조사자 평가

VAS는 고정된 길이 (10 cm)의 직선인 수평선을 사용하여 최악에서 최상까지 흉터 외관을 평가한다. 말단들은 좌측 (최악)으로부터 우측 (최상) 방향으로 흉터 외관의 극한으로 정의된다. 평가자는 선상에 표시를 만들어 흉터의 외관을 표시하게 된다.

SCARS는 0 (최상의 가능한 흉터) 내지 15 (최악의 가능한 흉터) 범위인 총 환자 및 관찰자 점수를 사용하여 수술후 흉터 미용을 측정한다 (문헌 [Kantor, Reliability and Photographic Equivalency of the Scar Cosmesis Assessment and Rating (SCAR) Scale, an Outcome Measure for Postoperative Scars, JAMA Dermatol. 153(1):55-60, 2017]). SCAR 척도의 점수화는 6개의 관찰자-점수화 항목 및 2개의 환자 점수화 항목을 바탕으로 한다.

POSAS는 통증 및 가려움의 주관적 증상을 포함하며, 밴쿠버 흉터 척도(Vancouver Scar Scale) (VSS)에서 포착되는 객관적 데이터 상에서 확장된다. 그것은 하기 2종의 숫자 수 척도로 이루어진다: 환자 흉터 평가 척도 및 관찰자 흉터 평가 척도. 그것은 혈관분포, 색소화, 두께, 경감, 유연성 및 표면적을 평가하는데, 통증, 가려움, 색상, 경직, 두께 및 경감의 환자 평가를 포함한다 (문헌 [Draaijers et al., The patient and observer scar assessment scale: reliable and feasible tool for scar evaluation, Plast Reconstr. Surg. 113(7): 1960-1965, 2004]). POSAS는 통증 및 가려움의 주관적인 증상을 고려하는 유일한 척도이나, 다른 척도와 마찬가지로 이것 역시 통증 또는 가려움이 삶의 질을 방해하는지 여부에 관한 기능적인 측정이 결핍되어 있다. 선형 회귀 분석으로써, 관찰자의 의견은 혈관화, 두께, 색소화 및 경감에 의해 영향을 받는 반면, 환자의 의견은 주로 가려움 및 흉터 두께에 의해 영향을 받는다는 것이 입증되었다. POSAS는 수술후 흉터에 적용되고 유방암 수술 후 선형 흉터의 평가에 사용됨으로써, 환자 등급화를 포착한다는 추가적인 이점을 가지는 VSS와 비교하였을 때 내부 일관성 및 관찰자간 신뢰성을 입증하고 있다.

FWS-IA는 하기와 같이 이마 주름의 중증도를 표시하는 4-점 척도이다: 0 = 없음, 1 = 경증, 2 = 보통, 또는 3 = 중증. 조사자 평가를 바탕으로, FWS-IA는 최대 상승 및 휴식시에 평가하게 된다.

후속 방문에서 독소 확산 (SOT) 효과는 관찰되지 않는다.

실시예 5

흉터형성을 최소화하고 흉터 외관을 개선하기 위한 보툴리눔 독소 유형 E의 사용

연령 58-75세이며 이마상 기저 세포 암종의 단일 병변을 제거하기 위하여 모즈 수술이 예정되어 있는 12명의 인간 대상체를 치료 군 (n=8) 및 위약 군 (n=4)으로 무작위화하였다. 양 군의 대상체들은 수술 부위 근처의 전두근에 단일 근육내 주사를 투여받았는데, 치료 군은 일정 투여량의 BoNT/E를 투여받았으며, 위약 군은 식염수를 투여받았다. 대상체 및 연구 요원에 대해서는 맹검이었으며; 스폰서(sponsor)에 대해서는 맹검이 아니었다. 하기 표에 대상체의 인구통계(demographics)를 요약하였다.

연구 1일차에, 수술 시술을 위하여 대상체를 입원시키고, 근육내 주사를 통하여 위약 또는 BoNT/E를 투여하였다. 수술을 수행하여 암종을 제거하고, 상처 (길이 약 2 cm)를 봉합하였다. 연구 2일차, 수술 24시간 후에, VAS, SCAR 및 POSAS 척도 (실시예 4 참조)를 사용하여 각 대상체를 평가하였다. 8일차에, 여러 척도들을 사용하여 대상체를 다시 평가하고, 외부 봉합사를 제거하였다. 30일차 및 90일차에, 여러 척도들을 사용하여 대상체를 다시 평가하고, 90일차에는 연구를 공식적으로 종료하였다. 결과를 도 7a-7c에 나타내었다.

마지막으로, 본 명세서의 측면들이 구체적인 실시양태를 참조하여 조명되기는 하였지만, 관련 기술분야 통상의 기술자라면, 개시된 이러한 실시양태들이 오로지 본원에서 개시되는 주제의 원리를 예시하는 것임을 잘 알고 있을 것이라는 것이 이해되어야 한다. 이에 따라, 개시되는 주제가 어떠한 방식으로도 본원에서 기술되는 특정 방법론, 프로토콜 및/또는 시약 등으로 제한되지는 않는다는 것이 이해되어야 한다. 마찬가지로, 본 명세서의 기술사상에서 벗어나지 않고도 본원의 교시에 따라 개시되는 주제에 대한 다양한 변형 또는 변화, 또는 그의 대안적인 구성들이 이루어질 수 있다. 마지막으로, 본원에서 사용되는 용어는 오로지 구체적인 실시양태들을 기술할 목적의 것으로써, 청구범위에 의해서만 정의되는 본 개시내용의 영역을 제한하고자 하는 것이 아니다. 따라서, 본 개시내용의 실시양태들이 나타내고 기술한 바와 같이 정밀하게 그것으로 제한되는 것은 아니다.

본원에서는, 본원에서 기술되는 방법 및 장치를 수행하는 데에 있어서 본 발명자들이 알게 된 최적의 양식을 포함하여, 소정의 실시양태들을 기술하였다. 당연히, 전기한 상세한 설명을 해석하게 되면, 그러한 기술된 실시양태들의 변이들이 관련 기술분야 통상의 기술자에게 떠오르게 될 것이다. 이에 따라, 적용가능한 법에 의해 허용되는 바와 같이, 본 개시내용은 본원에 첨부된 청구범위에서 언급되는 주제의 모든 변형 및 등가물들을 포괄한다. 또한, 본원에서 달리 표시되거나 아니면 문맥상 분명하게 부정되지 않는 한, 모든 가능한 그의 변이에서의 상기한 실시양태들의 어떠한 조합도 본 개시내용에 의해 포괄된다. 본원에서 개시된 구체적인 실시양태들은 ~로 이루어지는 또는 본질적으로 ~로 이루어지는 이라는 언어를 사용하여 청구범위에서 추가 제한될 수 있다. 청구범위에서 사용될 때, 출원된 것인지 보정에 따라 추가된 것인지에 관계없이, "~로 이루어지는"이라는 전이 용어는 청구범위에서 상술되지 않는 임의의 요소, 단계 또는 성분을 배제한다. 전이 용어 "본질적으로 ~로 이루어지는"은 구체적인 물질 또는 단계, 그리고 기본적인 신규 특징(들)에는 실질적으로 영향을 주지 않는 것들로 청구범위의 영역을 제한한다. 그렇게 청구되는 본 개시내용의 실시양태들은 본원에서 본질적으로 또는 명시적으로 기술되어 구현된다.

Claims

치료 유효량의 속성-작용 신경독소를 환자의 상처 부근에 투여하는 것
을 포함하는 흉터형성의 최소화 방법.
제1항에 있어서, 상기 속성-작용 신경독소가 보툴리눔 신경독소 혈청형 E를 포함하는 것인 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 치료 유효량이 약 10^-3 U/kg 내지 약 35 U/kg의 양을 포함하는 것인 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 치료 유효량이 약 0.2 나노그램 내지 약 2 나노그램의 양을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여하는 것이 주사에 의해 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
제5항에 있어서, 상기 주사에 의해 투여하는 것이 근육내 주사인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 보툴리눔 독소 아형 A를 환자에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에의 저속-작용 신경독소의 투여를 추가로 포함하는 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에의 저속-회복 신경독소의 투여를 추가로 포함하는 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 상처가 수술 절개부를 포함하는 것인 방법.
제10항에 있어서, 상기 수술 절개부가 미용 수술 시술의 결과인 방법.
제10항에 있어서, 상기 수술 절개부가 모즈 시술의 결과인 방법.
치료 유효량의 보툴리눔 독소 아형 E (BoNT/E)를 상처 부근에 투여하는 것
을 포함하는, 상처 상에 형성되는 흉터 외관의 개선 방법.
제13항에 있어서, 상처가 수술 상처인 방법.
제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 투여하는 것이 수술 시술 전에 수행되는 것인 방법.
제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여하는 것이 수술 시술 후에 수행되는 것인 방법.
제14항에 있어서, 상기 수술 상처가 대상체 상의 기존 흉터와 중첩되는 것인 방법.
제13항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 유효량이 BoNT/E를 사용하여 치료되지 않는 환자에서 유사한 상처 상에 형성되는 흉터에 비해 흉터의 발적을 감소시키는 양을 포함하는 것인 방법.
제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 유효량이 BoNT/E를 사용하여 치료되지 않는 환자에서 유사한 상처 상에 형성되는 흉터에 비해 흉터의 경직을 감소시키는 양을 포함하는 것인 방법.
제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 보툴리눔 독소 아형 A를 상처 부근에 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.