KR20190084287A

KR20190084287A - 연골 손상 및 관절염 치료 방법 및 조성물

Info

Publication number: KR20190084287A
Application number: KR1020197016715A
Authority: KR
Inventors: 크리스틴 존슨; 요르크 골트한; 첼레스테 슈코티; 이고어 포스티아어
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2016-11-14
Filing date: 2017-11-13
Publication date: 2019-07-16
Also published as: US20190269754A1; CN109963579A; CN117860868A; IL266361B1; RU2019117884A3; JP2023039962A; KR20240045351A; CA3043667A1; IL266361A; WO2018087727A1; MX2019005621A; AU2017357785A2; JP2019535707A; MX2022011897A; US11351223B2; US20220331398A1; AU2017357785A1; AU2020281098B2; IL266361B2; EP3538127A1

Abstract

본 발명은 연골 손상 또는 관절염을 치료하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다.

Description

연골 손상 및 관절염 치료 방법 및 조성물

서열 목록

본 출원은 아스키 포맷으로 전자적으로 제출되어 그의 전체가 본원에 참조로 포함되는 서열 목록을 포함한다. 2017년 10월 26일 생성된 상기 아스키 본의 명칭은 PAT057513-WO-PCT_SL.txt이고, 크기는 95,244 바이트이다.

기술분야

본 발명은 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상) 또는 관절염의 치료 방법 및 조성물에 관한 것이다.

골관절염(OA)은 가장 흔한 근골격계 질환을 대표한다. 현재 약 4천만명의 미국인이 걸려있으며; 인구 고령화와 평균 수명 연장의 결과로 향후 20년 내에 6천만명으로 늘어날 것으로 예상되는 인구가 4번째로 큰 장애 원인이다. OA는 (관절에 윤활 및 완충 작용을 하는 세포와 기질을 함유하는) 관절 연골과 관절 연골 밑에 있는 연골하 골을 포함하는 관절의 퇴행성 쇠약이 특징이다. OA는 다양한 병인의 결과로 간주될 수 있다. 예를 들어, 관절 연골이나 뼈의 비정상적인 생체역학적 스트레스 또는 유전적 또는 후천적 이상으로 인해 발생할 수 있다.

관절 손상, 예를 들어 반월판 또는 인대 파열과 같은 급성 관절 상해 또는 관절내 골절은 또한 관절염, 예를 들어 외상후 관절염을 유발할 수 있다. 관절 연골은 제한된 수리 능력을 가지고 있기 때문에, 감지할 수 없는 작은 손상도 종종 시간이 지남에 따라 악화되어 OA로 이어질 수 있다.

외과적 기술 및 재생 기술이 연골의 회복, 퇴행의 둔화 및 관절 손상, 예를 들어 관절 연골 손상의 개선된 수리에서 일부 진전을 이루었지만, 연골 재생, 관절 손상, 예를 들어 관절 연골 손상 또는 OA의 치료를 위한 조성물 및 방법의 개선이 계속 요구되고 있다.

본 발명은 연골발생 활성을 갖는 프로테아제 내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량을 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절에 투여함으로써, 대상체의 관절염 또는 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)을 치료하기 위한 방법 및 조성물을 제공한다.

표 1에 열거된 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2 내지 200 mg의 관절내 투여용량을 인간 대상체의 관절에 투여함으로써 인간 대상체의 관절염 또는 연골 손상을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1을 기준으로 결정된 바와 같이 위치 423에서 K 또는 R 이외의 극성 아미노산인 아미노산을 포함하며, 상기 폴리펩티드는 연골발생 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 인간 대상체는 연골 손상을 갖는다. 일부 구현예에서, 인간 대상체는 골관절염, 외상성 관절염 또는 자가면역 관절염을 갖는다.

일부 구현예에서, SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 폴리펩티드의 아미노산은 Q 또는 S이거나 결실된다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 표 1에 열거된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 표 1에 열거된 아미노산 서열로 구성된다.

일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2 내지 200 mg의 관절내 투여용량을 인간 대상체의 관절에 투여함으로써 인간 대상체의 관절염 또는 연골 손상을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드 약 0.2 내지 200 mg의 관절내 투여용량을 인간 대상체의 관절에 투여함으로써 인간 대상체의 관절염 또는 연골 손상을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.

일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 0.2~100 mg이다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 0.2~60 mg이다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 0.2~40 mg이다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 2~40 mg이다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 10~40 mg이다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 20~40 mg이다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 40~60 mg이다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 0.2 mg이다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 2 mg이다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 10 mg이다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 20 mg이다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 40 mg이다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 60 mg이다.

일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드는 대상체의 관절에 단일 주사로 투여된다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드는 대상체의 관절에 다중 주사로 투여된다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드는 관절염 또는 연골 손상을 치료하기에 충분한 시간 동안 2주마다 1회 투여된다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드는 관절염 또는 연골 손상을 치료하기에 충분한 시간 동안 매달 투여된다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드는 관절염 또는 연골 손상을 치료하기에 충분한 시간 동안 매주 투여된다.

일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체의 감염된 관절에 외과적 처치를 수행하는 단계를 추가로 포함한다. 폴리펩티드는 외과적 처치 전, 도중 또는 후에 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 상기 방법은 추가 절차를 추가로 포함한다. 예를 들어, 폴리펩티드 또는 조성물은 골수 자극, 연골 대체, 자가 연골세포 이식(ACI) 또는 기질-유도된 자가 연골세포 이식(MACI) 중 임의의 하나와 함께 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드 또는 조성물은 ACI와 함께 투여될 수 있다.

또한, 표 1에 열거된 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2 내지 200 mg을 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 상기 폴리펩티드는 인간 대상체의 관절염 또는 연골 손상의 치료에 사용하기 위한, SEQ ID NO: 1을 기준으로 결정된 바와 같이 위치 423에 K 또는 R 이외의 극성 아미노산인 아미노산을 포함하며, 상기 폴리펩티드는 관절내로 투여된다. 관절염은 골관절염, 외상성 관절염 또는 자가면역 관절염일 수 있다.

일부 구현예에서, 인간 대상체의 관절염 또는 연골 손상의 치료에 사용하기 위한 SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2 내지 200 mg을 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 상기 폴리펩티드는 관절내로 투여된다. 일부 구현예에서, 인간 대상체의 관절염 또는 연골 손상의 치료에 사용하기 위한 SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드 약 0.2 내지 200 mg을 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 상기 폴리펩티드는 관절내로 투여된다.

일부 구현예에서, 인간 대상체의 관절염 또는 연골 손상의 치료에 사용하기 위한, SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2~60 mg(예를 들어, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~55 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~45 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~60 mg, 약 2~55 mg, 약 2~50 mg, 약 2~45 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~60 mg, 약 5~55 mg, 약 5~50 mg, 약 5~45 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~60 mg, 약 10~55 mg, 약 10~50 mg, 약 10~45 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~60 mg, 약 15~55 mg, 약 15~50 mg, 약 15~45 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~60 mg, 약 20~55 mg, 약 20~50 mg, 약 20~45 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~60 mg, 약 30~55 mg, 약 30~50 mg, 약 30~45 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~60 mg, 약 35~55 mg, 약 35~50 mg, 약 35~45 mg, 약 35~40 mg, 약 40~60 mg, 약 40~55 mg, 약 40~50 mg, 약 40~45 mg, 약 45~60 mg, 약 45~55 mg, 약 45~50 mg, 약 50~60 mg, 약 50~55 mg, 약 55~60 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg, 약 41 mg, 약 42 mg, 약 43 mg, 약 44 mg, 약 45 mg, 약 46 mg, 약 47 mg, 약 48 mg, 약 49 mg, 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 약 60 mg)을 포함하며, 상기 폴리펩티드는 관절내로 투여된다.

일부 구현예에서, 인간 대상체의 관절염 또는 연골 손상의 치료에 사용하기 위한, SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드 약 0.2~60 mg(예를 들어, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~55 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~45 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~60 mg, 약 2~55 mg, 약 2~50 mg, 약 2~45 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~60 mg, 약 5~55 mg, 약 5~50 mg, 약 5~45 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~60 mg, 약 10~55 mg, 약 10~50 mg, 약 10~45 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~60 mg, 약 15~55 mg, 약 15~50 mg, 약 15~45 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~60 mg, 약 20~55 mg, 약 20~50 mg, 약 20~45 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~60 mg, 약 30~55 mg, 약 30~50 mg, 약 30~45 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~60 mg, 약 35~55 mg, 약 35~50 mg, 약 35~45 mg, 약 35~40 mg, 약 40~60 mg, 약 40~55 mg, 약 40~50 mg, 약 40~45 mg, 약 45~60 mg, 약 45~55 mg, 약 45~50 mg, 약 50~60 mg, 약 50~55 mg, 약 55~60 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg, 약 41 mg, 약 42 mg, 약 43 mg, 약 44 mg, 약 45 mg, 약 46 mg, 약 47 mg, 약 48 mg, 약 49 mg, 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 약 60 mg)을 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 상기 폴리펩티드는 관절내로 투여된다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술되는 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료가 본 발명을 실시하는데 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료가 이하에 기술된다. 본원에 언급된 모든 공보, 특허 출원, 특허 및 기타 참고문헌은 그 전체가 참조로서 포함된다. 분쟁이 있는 경우, 정의를 포함하여 본 명세서가 우선할 것이다. 또한, 재료, 방법 및 실시예는 단지 예시적인 것이며, 제한하려는 것은 아니다.

본 발명의 하나 이상의 구현예의 상세한 설명은 하기의 첨부된 도면 및 설명에 기재되어 있다. 본 발명의 기타 특징, 목적 및 장점은 이러한 설명 및 도면으로부터, 그리고 청구항으로부터 명백할 것이다.

도 1은 슬관절 전치환술이 예정된 1차 골관절염 환자에서 SEQ ID NO: 17의 ANGPTL3 폴리펩티드에 대한 무작위, 위약 대조군, 이중-맹검 1차임상(first-in-human) 단일용량상승 연구의 연구 설계를 도시한다.

정의

당업자는 본 발명의 실시에 사용될 수 있는 본원에 기재된 것들과 유사하거나 동등한 많은 방법 및 재료를 인식할 것이다. 실제로, 본 발명은 설명된 방법 및 재료에 결코 제한되지 않는다.

본 명세서에서 사용된 단수 형태는 문맥이 달리 지시하지 않는 한 복수 대상을 포함한다.

항상 명시적으로 언급된 것은 아니지만, 모든 수치 표기에는 "약"이라는 용어가 선행한다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 반대로 지시되지 않는 한, 명세서 및 청구범위에 제시된 수치 파라미터는 본 발명에 의해 수득하고자 하는 원하는 성질에 따라 달라질 수 있는 근사치이다. 측정가능한 값을 언급할 때 용어 "약"은 명시된 값으로부터 +/-10%, 보다 바람직하게는 +/-5%, 더욱 더 바람직하게는 +/-1%, 더욱 더 바람직하게는 +/-0.1%의 변화를 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, pH를 언급할 때 용어 "약"은 명시된 pH 값의 +/-0.3의 변화를 포함하는 것을 의미한다.

"ANGPTL3"은 분비된 인자의 안지오포이에틴-유사 계열의 구성원인 안지오포이에틴-유사 3을 지칭한다. 우세하게 간에서 발현되며, 신호 펩티드, N-말단 코일형-코일 도메인(CCD) 및 C-말단 피브리노겐(FBN)-유사 도메인으로 구성된, 안지오포이에틴의 특징적인 구조를 갖는다. ANGPTL3은 αV/β3 인테그린에 결합하는 것으로 나타났으며, FBN-유사 도메인만으로도 내피 세포 부착 및 생체내 혈관신생을 유도하기에 충분했다(Camenisch 등, J. Biol. Chem. 277: 17281-17290, 2002). 내인성 ANGPTL3은 일반적으로 생체내에서 아미노-말단 및 카복실-말단 단편으로 절단된다.

ANGPTL3의 아미노산 서열(GenBank Accession No. NP_055310.1)은 SEQ ID NO:1에 제시되어 있으며; 그의 상응하는 폴리뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 2(NCBI 참조 서열 번호 NM_014495.3)에 제시되어 있다.

안지오포이에틴-관련 단백질 3 프리프로단백질[호모 사피엔스, NP_055310.1]

호모 사피엔스 안지오포이에틴 유사 3( ANGPTL3 ), cDNA[NM_014495.3]

"ANGPTL3 폴리펩티드"는 자연발생 ANGPTL3 단백질 또는 이의 단편 또는 변이체를 지칭한다. 본 발명의 목적을 위해, 아미노산의 넘버링은 전형적으로 전장 야생형 인간 ANGPTL3 폴리펩티드 서열(SEQ ID NO: 1)을 참조하여 결정된다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드가 전장 ANGPTL3의 C-말단 부분만 포함하고 N-말단 부분은 포함하지 않는 구현예에서, 펩티드는 길이가 460개 미만의 아미노산이지만, 위치의 넘버링은 SEQ ID NO: 1에 기초한다. 예를 들어, 본 발명의 ANGPTL3 폴리펩티드가 그 자체로 단지 200개 아미노산 길이일지라도, 본 발명의 ANGPTL3 폴리펩티드의 위치 423에 대한 참조는 SEQ ID NO: 1의 위치 423을 지칭한다. SEQ ID NO: 1과 같은 참조 서열의 위치에 "상응하는" 관심 서열 내의 아미노산을 결정함에 있어서, 이는 예를 들어, 디폴트 CLUSTAL 정렬 파라미터 또는 디폴트 BLAST 2 정렬 파라미터를 사용하는 것과 같이, 서열을 최적으로 정렬시키고 서열을 비교함으로써 수행된다. 예를 들어, "SEQ ID NO: 1을 참고로 결정된" 관심의 서열의 위치 423 또는 SEQ ID NO: 1의 위치 423에 "상응하는" 아미노산은 관심 서열이 SEQ ID NO: 1과 함께 최적으로 정렬되는 경우, SEQ ID NO: 1의 위치 423과 함께 정렬하는 아미노산을 의미한다.

본원에서 사용된 용어 "프로테아제-내성"은 상응하는 비-변형된 야생형 폴리펩티드보다 트립신-유사 프로테아제에 의한 절단을 폴리펩티드가 덜 일으키게 하는 변형을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다.

용어 "펩티드", "폴리펩티드", 및 "단백질"은 상호교환적으로 사용되고, 펩티드 결합에 의해 공유적으로 연결된 아미노산 잔기를 포함하는 화합물을 지칭한다. 단백질 또는 펩티드는 적어도 2개의 아미노산을 함유하여야 하고, 단백질 서열 또는 펩티드 서열을 포함할 수 있는 아미노산의 최대 수에 대한 제한은 존재하지 않는다. 폴리펩티드는 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 2개 이상의 아미노산을 포함하는 임의의 펩티드 또는 단백질을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 이 용어는 당해 분야에서 예를 들어 펩티드, 올리고펩티드 및 올리고머로도 통상적으로 지칭되는 짧은 사슬, 및 많은 종류가 존재하는, 일반적으로 당해 분야에서 단백질로 지칭되는 더 긴 사슬 둘 다를 지칭한다. "폴리펩티드"는 다른 것 중에서도, 예를 들어 생물학적 활성 단편, 실질적으로 상동성 폴리펩티드, 올리고펩티드, 동종이량체, 이종이량체, 폴리펩티드의 변이체, 변형된 폴리펩티드, 유도체, 유사체, 융합 단백질을 포함한다. 폴리펩티드는 천연 펩티드, 재조합 펩티드, 또는 이의 조합을 포함한다.

용어 "변이체"는 기준 폴리펩티드와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 가지거나, 실질적으로 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되고, 기준 폴리펩티드의 하나 이상의 활성을 가질 수 있는 폴리펩티드를 지칭한다. 예를 들어, 변이체는 기준 폴리펩티드의 하나 이상의 활성을 보유하면서, 기준 폴리펩티드에 대해 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 가질 수 있다.

용어 "아미노산"은 자연 발생 및 합성 아미노산뿐만 아니라 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 자연 발생 아미노산은 나중에 변형된 아미노산, 예를 들어, 하이드록시프롤린, γ-카복시글루타메이트 및 O-포스포세린뿐만 아니라 유전 암호에 의해 코딩되는 아미노산이다. 아미노산 유사체는 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조, 즉 수소에 결합되는 α 탄소, 카복실기, 아미노기 및 R 기, 예를 들어 호모세린, 노르류신, 메티오닌 술폭시드, 메티오닌 메틸 술포늄을 갖는 화합물을 지칭한다. 상기 유사체는 변형된 R 기(예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩티드 백본을 가지지만, 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 보유한다. 자연적으로 코딩된 아미노산은 20개의 통상의 아미노산(알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 및 발린)뿐만 아니라 피롤라이신, 피롤린-카복실-라이신 및 셀레노시스테인이다.

"보존적으로 변형된 변이체"는 아미노산 및 핵산 서열 모두에 적용된다. 특정 핵산 서열과 관련하여, 보존적으로 변형된 변이체는 동일하거나 본질적으로 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 지칭하거나, 또는 핵산이 아미노산 서열을 코딩하지 않는 경우, 본질적으로 동일한 서열을 지칭한다. 유전 암호의 퇴행 때문에 많은 기능적으로 동일한 핵산이 임의의 주어진 단백질을 코딩한다. 예를 들어, 코돈 GCA, GCC, GCG 및 GCU는 모두 아미노산 알라닌을 코딩한다. 따라서, 알라닌이 코돈에 의해 특정화되는 모든 위치에서, 코딩된 폴리펩티드를 변경하지 않으면서 기술된 상응하는 코돈의 임의의 것으로 코돈이 변형될 수 있다. 상기 핵산 변이는 보존적으로 변형된 변이의 한 종류인 "침묵 변이"이다. 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 본원의 모든 폴리펩티드 서열은 핵산의 모든 가능한 침묵 변이를 포함한다. 당업자는 핵산의 각 코돈(통상적으로 메티오닌의 유일한 코돈인 AUG 및 통상적으로 트립토판의 유일한 코돈인 TGG를 제외함)이 변형되어, 기능적으로 동일한 분자를 생성할 수 있음을 인지할 것이다. 따라서, 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 각 침묵 변이는 기술된 각각의 서열에 암시적이다. 당업자는 원래의 코딩된 아미노산 서열과 관련하여 단일 아미노산 또는 적은 퍼센트의 아미노산을 변경, 부가 또는 결실한 핵산, 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질 서열에 대한 개별적인 치환, 결실 또는 부가가 "보존적으로 변형된 변이체"를 초래하며, 상기 변형이 원래의 단백질과 유사한 기능적 활성을 갖는 구조적으로 유사한 단백질을 생산하는 폴리펩티드 서열 및/또는 화학적으로 유사한 아미노산에 의한 아미노산의 치환을 생성한다는 것을 인지할 것이다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 이 기술 분야에 잘 알려져있다. 상기 보존적으로 변형된 변이체는 본 발명의 다형성 변이체, 종간 동족체 및 대립유전자에 추가되고, 배제하지 않는다.

용어 "보존적 아미노산 치환"은 하나의 상기 기로부터의 아미노산을 동일한 기로부터의 상이한 아미노산으로 (개념적으로 또는 다르게) 치환하는 것을 지칭한다. 치환의 일례는 상동성 유기체의 상응하는 단백질 사이의 아미노산 변화의 표준화된 빈도를 분석하는 것에 기초한다(예를 들어, Schulz, G. E. 및 R. H. Schirmer, 단백질 구조의 원칙, Springer-Verlag 참조). 상기 분석에 따르면, 그룹 내의 아미노산이 서로 우선적으로 교환되어 전체 단백질 구조에 대한 영향에서 서로 가장 닮은 경우, 아미노산 기가 정의될 수 있다(예를 들어, Schulz, G. E. 및 R. H. Schirmer, 단백질 구조의 원칙, Springer-Verlag 참조). 이러한 방식으로 정의된 아미노산 기의 세트의 일례는 하기를 포함한다: (i) Glu 및 Asp, Lys, Arg 및 His로 구성된 하전 기; (ii) Lys, Arg 및 His로 구성된 양-하전 기; (iii) Glu 및 Asp로 구성된 음-하전 기; (iv) Phe, Tyr 및 Trp로 구성된 방향족 기; (v) His 및 Trp로 구성된 질소 고리 기; (vi) Val, Leu 및 Ile로 구성된 큰 지방족 무극성 기; (vii) Met 및 Cys로 구성된 약-극성 기; (viii) Ser, Thr, Asp, Asn, Gly, Ala, Glu, Gln 및 Pro로 구성된 소-잔기; (ix) Val, Leu, Ile, Met 및 Cys로 구성된 지방족 기; 및 (x) Ser 및 Thr로 구성된 소 하이드록실기. 공유된 물리적 특성들에 기초한 보존적 치환의 다른 예들은 하기 기들내에서의 치환이다: 1) 알라닌(A), 글리신(G); 2) 아스파르트산(D), 글루탐산(E); 3) 아스파라긴(N), 글루타민(Q); 4) 아르기닌(R), 라이신(K); 5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 발린(V); 6) 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W); 7) 세린(S), 트레오닌(T); 및 8) 시스테인(C), 메티오닌(M)(예를 들어, Creighton, Proteins (1984) 참조).

용어 "상동성" 또는 "동일성"은 2개의 중합체 분자 사이, 예를 들어 2개의 핵산 분자 사이, 예컨대, 2개의 DNA 분자 또는 2개의 RNA 분자 사이, 또는 2개의 폴리펩티드 분자 사이의 서브유닛 서열 동일성을 지칭한다. 2개의 분자 둘 다 내의 서브유닛 위치가 동일한 단량체 서브유닛에 의해 점유된 경우; 예를 들어, 각각의 2개의 DNA 분자 내의 위치가 아데닌에 의해 점유된 경우에, 이들은 그 위치에서 상동이거나 동일하다. 2개의 서열 사이의 상동성은 매칭되는 또는 상동성 위치의 수의 직접적인 함수이고; 예를 들어, 2개의 서열 내의 위치의 절반(예를 들어, 중합체 10개 서브유닛 길이 내의 5개의 위치)이 상동성일 경우에, 2개의 서열은 50% 상동성이고; 위치의 90%(예를 들어, 10개 중 9개)가 매칭되거나 상동성일 경우에, 2개의 서열은 90% 상동성이다. "서열 동일성"의 백분율은 비교 창에서 아미노산 서열의 단편이 2개의 서열의 최적 정렬에 대하여 (부가 또는 결실을 포함하지 않는) 기준 서열과 비교하여 부가 또는 결실(예를 들어, 갭 또는 오버행)을 포함할 수 있는 경우, 비교 창 상에서 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함으로써 결정될 수 있다. 백분율은 두 서열에서 동일한 아미노산 잔기가 발생하는 위치의 수를 결정하여 매칭된 위치의 수를 산출하고, 매칭된 위치의 수를 비교 창의 위치의 총 수로 나누고, 그 결과에 100을 곱하여 서열 동일성 백분율을 산출함으로써 계산될 수 있다. 산출은 조회 서열에 대한 대상체 서열의 퍼센트 동일성이다.

퍼센트 서열 동일성 및 서열 유사성을 결정하는데 적합한 알고리즘의 2가지 예는 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이며, 이들은 각각 문헌 [Altschul 등, (1977) Nuc. Acids Res. 25:3389-3402], 및 문헌 [Altschul 등 (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410]에 기술되어 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information)를 통해 공개적으로 이용가능하다. 이 알고리즘은 데이터베이스 서열에서 동일한 길이의 단어와 정렬될 때 일부 양수-값 임계 스코어 T와 매칭하거나 만족하는 조회 서열에서 길이가 W인 짧은 단어를 식별하여 높은 점수를 매기는 서열 쌍(HSP)을 먼저 식별하는 것을 포함한다. T는 인접 단어 스코어 임계값으로 지칭된다(Altschul 등, 상동). 상기 초기 인접 단어 적중은 검색을 개시하기 위한 기초(seed)로 작용되어, 이를 포함하는 더 긴 HSP를 찾는다. 상기 단어 적중은 누적 정렬 스코어를 증가시킬 수 있는 한 각 서열을 따라 양방향으로 확장된다. 누적 스코어는 뉴클레오티드 서열에 대해 파라미터 M(매칭하는 잔기의 쌍에 대한 보상 스코어; 항상 0 초과) 및 N(미스매칭 잔기에 대한 패널티 스코어; 항상 0 미만)을 사용하여 계산된다. 아미노산 서열의 경우, 누적 스코어를 계산하기 위해 스코어링 매트릭스가 사용된다. 누적 정렬 스코어가 최대 달성 값에서 양(quantity) X만큼 떨어질 때 각 방향의 단어 적중의 확장이 중단되며; 누적 스코어는 하나 이상의 음-스코어링 잔기 정렬의 누적으로 인해 0 이하가 되거나; 또는 두 서열 중 하나의 끝에 도달한다. BLAST 알고리즘 파라미터인 W, T 및 X는 정렬의 민감도와 속도를 결정한다. BLASTN 프로그램(뉴클레오티드 서열용)은 단어 길이(W) 11, 기대값(E) 또는 10, M=5, N=-4 및 두 가닥의 비교를 디폴트로 사용한다. 아미노산 서열의 경우, BLASTP 프로그램은 단어 길이 3, 기대값(E) 10, 및 BLOSUM62 스코어링 매트릭스(Henikoff and Henikoff (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 참조) 정렬(B) 50, 기대값(E) 10, M=5, N=-4 및 두 가닥의 비교를 디폴트로 사용한다. BLAST 알고리즘은 또한 두 서열 간의 유사성에 대한 통계적 분석을 수행한다(예를 들어, Karlin 및 Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 참조). BLAST 알고리즘에 의해 제공되는 유사성의 하나의 척도는 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 매치가 우연히 일어날 확률의 지표를 제공하는 최소 합계 확률(P(N))이다. 예를 들어, 핵산은 시험 핵산과 기준 핵산의 비교에서 최소 합계 확률이 약 0.2 미만, 보다 바람직하게는 약 0.01 미만, 가장 바람직하게는 약 0.001 미만인 경우 기준 서열과 유사하다고 간주된다.

용어 "단리된"은 핵산 또는 단백질에 적용되는 경우 핵산 또는 단백질이 천연 상태에서 결합된 다른 세포 성분을 본질적으로 함유하지 않도록 정제됨을 의미한다. 그것은 종종 균질 또는 거의 균질한 상태에 있다. 그것은 건조물 또는 수용액 중 하나일 수 있다. 순도 및 균질성은 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 고성능 액체 크로마토그래피 등과 같은 통상적으로 당 업계에 공지되어 사용되는 분석적 화학 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 제제에 존재하는 우세한 종인 단백질은 실질적으로 정제된다. 일부 구현예에서 용어 "정제된"은 단백질이 전기영동 겔에서 본질적으로 하나의 밴드를 발생시키는 것을 의미한다. 전형적으로, 이는 단백질이 적어도 85% 순수한, 보다 바람직하게는 적어도 95% 순수한, 가장 바람직하게는 적어도 99% 순수한 것을 의미한다.

용어 "대상체"는 본 발명의 방법에 따른 치료가 제공되는 동물, 인간 또는 비-인간을 지칭한다. 수의학 및 비-수의학 분야가 고려된다. 이 용어는 포유동물, 예를 들어, 인간, 다른 영장류, 돼지, 설치류, 예컨대 마우스 및 래트, 토끼, 기니피그, 햄스터, 소, 말, 고양이, 개, 양 및 염소를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 전형적인 대상체는 인간, 농장 동물, 및 애완 동물, 예컨대 고양이 및 개를 포함한다.

용어 "치료하다" 또는 "치료"는 치료적 치료 및 예방적 또는 방지적 수단 모두를 지칭하며, 그 목적은 바람직하지 않은 생리학적 변화 또는 장애를 예방하거나, 늦추는 것이다. 본 발명의 목적을 위해, 유익한 또는 바람직한 임상 결과는 증상의 경감, 질병 범위의 감소, 질병 상태의 안정화(즉, 악화되지 않음), 질병 진행의 지연 또는 감속, 질병 상태의 개선 또는 완화 및 차도(부분 또는 전체 여부에 관계없이)를 탐지가능 또는 탐지불가능과 관계없이, 포함하지만 이에 한정되지는 않는다.

연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드

본 발명은 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상) 또는 관절염의 치료를 위한 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드를 대상체(예를 들어, 인간 대상체)에 관절내로 투여하는 것에 관한 것이다. 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 WO2014/138687에 기재되어 있으며, 이는 그 전체가 참조로 포함된다.

본 명세서에 기재된 ANGPTL3 폴리펩티드는 연골발생 활성을 갖는다. 본원에서 정의된 바와 같이, 연골발생 또는 연골발생 활성은 간엽 줄기 세포(MSC)로부터의 연골세포의 발생을 지칭한다. 간엽 줄기 세포(MSC)는 성인 관절 연골에 존재하며, 격리시 연골세포 및 다른 간엽 세포 계통으로의 분화를 겪도록 시험관내에서 프로그래밍될 수 있으며, 연골 재생에 사용될 수 있다. 연골발생 활성의 지표에는 연골 기질 생산이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 연골 기질 생산은 다양한 마커, 예를 들어 예컨대 Sox9, 타입 II 콜라겐 또는 글리코사미노글리칸(GAG) 생산에 의해 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 타입 II 콜라겐 발현은 연골 기질 생산을 위한 마커로서 측정된다. 일부 구현예에서, GAG 생산은 연골 기질 생산을 위한 마커로서 측정된다. 일부 구현예에서, 연골 특이적 단백질 발현에 의한 GAG 생산의 3-배 증가는 양성 연골 기질 생산을 나타낸다.

본 명세서에 기재된 ANGPTL3 폴리펩티드는 프로테아제 내성이다. 폴리펩티드는 트립신과 같은 세린 프로테아제에 의한 절단을 측정하는 임의의 공지된 분석을 사용하여 프로테아제 내성에 대해 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 단백질분해 감수성을 평가하기 위해 사용되는 프로테아제는 세린 프로테아제 트립신이다. 폴리펩티드는 그의 야생형 대응물과 비교했을 때 트립신에 대한 감수성이 감소되면 프로테아제-내성인 것으로 간주된다. 분석의 예는 폴리펩티드가 상응하는 천연의 인간 펩티드와 비교하여 일정 기간 동안 트립신에 노출될 때 생성되는 절단된 생성물의 양을 측정하는 것이다. 절단은 임의의 공지된 분석법, 예를 들어, SDS PAGE 또는 LCMS를 사용하여 측정될 수 있다.

예시적인 분석에서, 트립신분해에 의한 제한된 단백질분해는 평가될 단백질 10 ng을 8000:1(단백질:트립신)의 질량비로 트립신과 함께 실온에서 1시간 동안 배양함으로써 수행된다. 트립신분해 반응은 아세트산의 첨가에 의해 켄칭되어 반응을 pH 3.0으로 가져올 수 있다. 켄칭된 샘플을 예를 들어 4~12% 트리스-비스 겔 상에서 SDS-PAGE에 의해 분리 분석하여 트립신 절단에 의해 생성된 단편의 출현에 의해 절단되는 단백질로부터 절단에 대하여 저항성인 단백질을 동정한다. 절단 산물은 그들의 야생형 대응물과 비교하여 프로테아제-내성 폴리펩티드에서 결핍되거나 감소된다.

일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 표 1에 열거된 아미노산 서열에 대하여 적어도 95%의 동일성 또는 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1을 기준으로 결정된 바와 같이, 위치 423에 K 또는 R 이외의 극성 아미노산인 아미노산을 포함하며, 폴리펩티드는 연골발생 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 표 1에 열거된 아미노산 서열에 대하여 적어도 95%의 동일성 또는 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 아미노산 잔기는 Q 또는 S이거나, 결실된다.

일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 3~30 중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대하여 적어도 95%의 동일성 또는 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1을 기준으로 결정된 바와 같이, 위치 423에 K 또는 R 이외의 극성 아미노산인 아미노산을 포함하며, 폴리펩티드는 연골발생 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 3~30 중 임의의 하나로부터 선택되는 아미노산 서열에 대하여 적어도 95%의 동일성 또는 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 아미노산 잔기는 Q 또는 S이거나, 결실된다.

추가의 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 3~18 중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대하여 적어도 95%의 동일성 또는 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1을 기준으로 결정된 바와 같이, 위치 423에 K 또는 R 이외의 극성 아미노산인 아미노산을 포함하며, 폴리펩티드는 연골발생 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 3~18 중 임의의 하나로부터 선택되는 아미노산 서열에 대하여 적어도 95%의 동일성 또는 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 아미노산 잔기는 Q 또는 S이거나, 결실된다.

추가의 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 17에 대하여 적어도 95%의 동일성 또는 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1을 기준으로 결정된 바와 같이, 위치 423에 K 또는 R 이외의 극성 아미노산인 아미노산을 포함하며, 폴리펩티드는 연골발생 활성을 갖는다. 추가의 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 17에 대하여 적어도 95%의 동일성 또는 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 아미노산 잔기는 Q 또는 S이거나, 결실된다.

일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 표 1에 열거된 서열 중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 3~30 중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 3~18 중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 17을 포함한다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 18을 포함한다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 37을 포함한다.

일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 표 1에 열거된 서열 중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 3~30 중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 3~18 중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 17로 구성된다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 18로 구성된다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 37로 구성된다.

[표 1]

본원에 기재된 ANGPTL3 폴리펩티드는 폴리펩티드 프로테아제 내성을 부여하기 위해 폴리펩티드의 C-말단 부분에 적어도 하나의 치환 또는 결실을 가질 수 있다. 치환 또는 결실은 R 또는 K 잔기에서 일어나므로 폴리펩티드는 프로테아제, 예를 들어 트립신-유사 프로테아제에 대한 증가된 내성을 갖는다. 임의의 아미노산은 프로테아제 내성 ANGPTL3 폴리펩티드에서 R 또는 K에 대하여 치환될 수 있거나, R 또는 K 잔기가 결실될 수 있다. 일부 구현예에서, 치환은 극성 아미노산, 예를 들어 H, N, Q, S, T, A 또는 Y이다. 일부 구현예에서, 치환은 H, N, Q, S, T 또는 Y이다. 일부 구현예에서, 치환은 S 또는 Q이다. 일부 구현예에서, 치환은 Q이다. 일부 구현예에서, 치환은 S이다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 펩티드는 K 또는 R 이외의, SEQ ID NO: 1을 기준으로, 위치 423의 아미노산을 갖는다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 극성 아미노산인 (SEQ ID NO: 1을 기준으로) 위치 423의 아미노산을 포함하며, 예를 들어 (SEQ ID NO: 1을 기준으로) 위치 423의 아미노산은 Q 또는 S 또는 또 다른 극성 아미노산일 수 있다. 특정 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 (SEQ ID NO: 1을 기준으로) 위치 423에 Q를 갖는다. 다른 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 (SEQ ID NO: 1을 기준으로) 위치 423에 S를 갖는다. 일부 구현예에서, (SEQ ID NO: 1을 기준으로) 423에서의 치환에 추가하여, 프로테아제-내성 ANGPTL3 펩티드는 SEQ ID NO: 1의 C-말단에서 또 다른 R 또는 K의 치환, 또는 이의 변이체를 가지며, 상기 치환은 R 또는 K 이외의 극성 아미노산이다. 일부 구현예에서, (SEQ ID NO: 1을 기준으로) 위치 423에서의 치환은 프로테아제-내성 ANGPTL3 펩티드에서 Q 또는 S이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 아미노산은 프로테아제-내성 ANGPTL3 펩티드에서 결실된다.

일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 250개 아미노산 이하의 길이이며, SEQ ID NO: 5~18 중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 인간 ANGPTL3 단백질의 카복실-말단(C-말단) 단편(예를 들어, 적어도 100, 150, 200, 220 또는 215 인접 아미노산)이거나, 인간 ANGPTL3 단백질 서열의 C-말단 단편과 실질적으로 동일한 서열을 갖고, 상기 폴리펩티드는 연골발생 활성을 보유한다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 C-말단 서열의 적어도 일부가 결여되어 있으며, 예를 들어 SEQ ID NO: 1의 C-말단으로부터 5, 10, 15 또는 20개의 아미노산이 결여되어 있다(즉, SEQ ID NO: 1의 456~460, 451~460, 446~460 또는 441~460이 결여됨).

일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 아미노산 영역에 상응하는 인접 아미노산, 즉 SEQ ID NO:1의 아미노산 241~455, 또는 241~460; SEQ ID NO:1의 아미노산 242~455, 또는 242~460; SEQ ID NO:1의 아미노산 233~455 또는 233~460; SEQ ID NO:1의 아미노산 228~455 또는 228~460, SEQ ID NO:1의 아미노산 226~455- 또는 226~260 또는 아미노산 225~455- 또는 225~260을 포함하며, 상기 아미노산은 R 또는 K 잔기로 치환되거나, R 또는 K 잔기가 결실된다. 일부 구현예에서, 치환 또는 결실은 SEQ ID NO: 1을 기준으로 결정된 바와 같이 위치 423에 있다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 영역 207~455 또는 207~460에 상응하는 인접 아미노산을 포함하며, 여기에서 아미노산은 R 또는 K 잔기로 치환되거나, R 또는 K 잔기가 결실된다. 일부 구현예에서, 치환 또는 결실은 위치 423에 있다. 일부 구현예에서, 치환은 극성 아미노산, 예를 들어 H, N, Q, S, T, A, 또는 Y이다. 일부 구현예에서, 치환은 H, N, Q, S, T, 또는 Y이다. 일부 구현예에서, 치환은 S 또는 Q이다. 일부 구현예에서, 치환은 Q이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 아미노산 잔기는 결실된다.

일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 아미노산에서의 치환에 의해, 치환된 아미노산이 R이 아닌 경우, SEQ ID NO: 1의 아미노산 240~454, SEQ ID NO: 1의 아미노산 241~455, 또는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 242~455에 대해 적어도 95%의 동일성, 또는 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 폴리펩티드는 연골발생 활성을 갖는다. 다른 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 240~454, SEQ ID NO: 1의 아미노산 241~455, 또는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 242~455를 포함하고, 각 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 아미노산에서의 치환을 가지며, 상기 치환된 아미노산은 Q 또는 S이다. 다른 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 240~454, SEQ ID NO: 1의 아미노산 241~455, 또는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 242~455를 포함하며, 각 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 아미노산 잔기의 결실을 갖는다.

일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO:1의 아미노산 아미노산 242~455, 또는 242~460; SEQ ID NO:1의 241~455, 또는 241~460; SEQ ID NO:1의 아미노산 233~455 또는 233~460; SEQ ID NO:1의 아미노산 228~455 또는 228~460, SEQ ID NO:1의 아미노산 226~455- 또는 226~260 또는 SEQ ID NO:1의 아미노산 225~455- 또는 225~260에 대해 적어도 95%의 동일성, 또는 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 상기 아미노산은 R 또는 K로 치환된다. 일부 구현예에서, 상기 치환은 위치 423에 있다. 일부 구현예에서, 치환은 극성 아미노산, 예를 들어 H, N, Q, S, T, A, 또는 Y이다. 일부 구현예에서, 치환은 H, N, Q, S, T, 또는 Y이다. 일부 구현예에서, 치환은 S 또는 Q이다. 일부 구현예에서, 치환은 Q이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 아미노산 잔기는 결실된다.

일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 페길화(PEGylated)된다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 이종 펩티드에 융합된다. 특정 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 인간 혈청 알부민(HSA), 면역글로불린 중쇄 불변 영역(Fc), 폴리히스티딘, 글루타티온 S 전이효소(GST), 티오레독신, 단백질 A, 단백질 G, 말토스 결합 단백질(MBP), 또는 상기 이종 폴리펩티드(들) 중 임의의 것의 단편 중 임의의 하나에 융합된다. 특정 구현예에서, 이종 폴리펩티드는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 아미노-말단에서 융합된다. 추가의 또는 대안적인 구현예에서, 이종 폴리펩티드는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 카복실-말단에서 융합된다.

일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 적어도 하나의 비천연 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 1, 2, 3, 4 또는 그 이상의 비천연 아미노산을 포함한다. 비-자연-발생 아미노산을 제조하여 단백질 내로 도입시키는 방법은 공지되어있다. 예를 들어, 미국 특허 제7,083,970호; 및 제7,524,647호를 참고한다. 하나 이상의 원하는 비천연 아미노산을 포함하는 단백질을 제조하기에 적합한 직교 번역 시스템의 제조에 대한 일반적인 원리는 당 분야에 공지되어 있으며, 직교 번역 시스템을 생산하기 위한 일반적인 방법도 알려져있다. 예를 들어, 국제 공보 번호 WO 2002/086075, 발명의 명칭 "METHODS AND COMPOSITION FOR THE PRODUCTION OF ORTHOGONAL tRNA-AMINOACYL-tRNA SYNTHETASE PAIRS;" WO 2002/085923, 발명의 명칭 "IN VIVO INCORPORATION OF UNNATURAL AMINO ACIDS;" WO 2004/094593, 발명의 명칭 "EXPANDING THE EUKARYOTIC GENETIC CODE;" WO 2005/019415, 2004년 7월 7일자; WO 2005/007870, 2004년 7월 7일자; WO 2005/007624, 2004년 7월 7일자; WO 2006/110182, 2005년 10월 27일자, 발명의 명칭 "ORTHOGONAL TRANSLATION COMPONENTS FOR THE VIVO INCORPORATION OF UNNATURAL AMINO ACIDS" 및 WO 2007/103490, 2007년 3월 7일자, 발명의 명칭 "SYSTEMS FOR THE EXPRESSION OF ORTHOGONAL TRANSLATION COMPONENTS IN EUBACTERIAL HOST CELLS"를 참고한다. 비천연 아미노산을 포함하는 직교 번역 시스템, 및 그의 생산 및 사용 방법에 대한 논의는 또한, Wang 및 Schultz, (2005) "유전 코드 확장." Angewandte Chemie Int Ed 44: 34-66; Xie 및 Schultz, (2005) "확장하는 유전 코드." Methods 36: 227-238; Xie 및 Schultz, (2005) "유전자 레퍼토리에 아미노산 부가." Curr Opinion in Chemical Biology 9: 548-554; 및 Wang, 등, (2006) "유전 코드 확장." Annu Rev Biophys Biomol Struct 35: 225-249; Deiters, 등, (2005) "대장균 세포내 단백질로의 알킨의 생체내 혼입." Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 15:1521-1524; Chin, 등, (2002) "대장균의 유전 코드로의 p-아지도-L-페닐알라닌의 부가." J Am Chem Soc 124: 9026-9027; 및 국제 공보 번호 WO2006/034332, 2005년 9월 20일자를 참고한다. 부가적인 세부사항은 하기 미국특허에서 발견된다: 미국 특허 제7,045,337호; 제7,083,970호; 제7,238,510호; 제7,129,333호; 제7,262,040호; 제7,183,082호; 제7,199,222호; 및 제7,217,809호.

"비-자연적으로 코딩된 아미노산"은 일반적인 아미노산 또는 피로라이신, 피롤린-카복시-라이신 또는 셀레노시스테인 중 하나가 아닌 아미노산을 지칭한다. 용어 "비-자연적으로 코딩된 아미노산"과 동의어로 사용될 수 있는 다른 용어는 "비-천연 아미노산", "비천연 아미노산", "비-자연-발생 아미노산" 및 여러 가지 하이픈이 있는, 및 하이픈이 없는 그의 변이형이다. 용어 "비-자연적으로 코딩된 아미노산"은 또한 자연적으로 코딩된 아미노산의 변형(예를 들어, 번역 후 변형)에 의해 발생하는 아미노산(20개의 일반적인 아미노산 또는 피롤라이신, 피롤린-카복시-라이신 및 셀레노시스테인을 포함하지만, 이에 한정되지 않음)을 포함하지만 이에 국한되지는 않으며, 번역 복합체에 의해 성장하는 폴리펩티드 사슬에 자연적으로 혼입되지 않는다. 상기 비-자연-발생 아미노산의 예는 N-아세틸글루코사미닐-L-세린, N-아세틸글루코사미닐-L-트레오닌 및 O-포스포티로신을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

비-자연적으로 코딩된 아미노산은 전형적으로 20개의 천연 아미노산에서 사용된 것 이외의 임의의 치환기 측쇄를 갖는 임의의 구조체이다. 비-자연적으로 코딩된 아미노산은 전형적으로 측쇄의 구조에서만 천연 아미노산과 상이하기 때문에, 비-자연적으로 코딩된 아미노산은 자연적으로 발생하는 폴리펩티드에서 형성되는 것과 동일한 방식으로 자연적 또는 비-자연적으로 코딩된 아미노산을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 다른 아미노산과 아미드 결합을 형성한다. 그러나, 비-자연적으로 코딩된 아미노산은 천연 아미노산과 구별되는 측쇄 기를 갖는다. 예를 들어, R은 선택적으로, 알킬-, 아릴-, 아실-, 케토-, 아지도-, 하이드록실-, 하이드라진, 시아노-, 할로-, 하이드라지드, 알케닐, 알키닐, 에테르, 티올, 셀레노-, 설포닐-, 보레이트, 보로네이트, 포스포, 포스포노, 포스핀, 헤테로사이클릭, 에논, 이민, 알데하이드, 에스테르, 티오애시드, 하이드록실아민, 아미노기 등 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 발명에서 사용하기에 적합할 수 있는 기타 비-자연적으로 발생하는 관심 아미노산은 광활성화가능한 가교결합제를 포함하는 아미노산, 스핀-표지된 아미노산, 형광 아미노산, 금속 결합 아미노산, 금속-함유 아미노산, 방사성 아미노산, 신규한 관능기를 갖는 아미노산, 다른 분자와 공유 또는 비공유적으로 상호작용하는 아미노산, 광경화 및/또는 광이성화가능한 아미노산, 비오틴 또는 비오틴 유사체를 포함하는 아미노산, 글리코실화된 아미노산, 예컨대 당 치환된 세린, 기타 탄수화물 변형된 아미노산, 케토-함유 아미노산, 폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에테르를 포함하는 아미노산, 중원자 치환된 아미노산, 화학적으로 분해가능한 및/또는 광분해가능한 아미노산, 약 5개 초과 또는 약 10개 초과의 탄소를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 폴리에테르 또는 장쇄 탄화수소를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 천연 아미노산과 비교되는 신장된 측쇄를 갖는 아미노산, 탄소-결합된 당-함유 아미노산, 산화환원-활성 아미노산, 아미노 티오애시드 함유 아미노산, 및 하나 이상의 독성 모이어티를 포함하는 아미노산을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

본 발명에 사용하기에 적합할 수 있고 수용성 중합체와의 반응에 유용한 예시적인 비-자연적으로 코딩된 아미노산은 카르보닐, 아미노옥시, 하이드라진, 하이드라지드, 세미카르바지드, 아지드 및 알킨 반응성 기를 갖는 아미노산을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 비-자연적으로 코딩된 아미노산은 사카라이드 모이어티를 포함한다. 상기 아미노산의 예는 N-아세틸-L-글루코사미닐-L-세린, N-아세틸-L-갈락토사미닐-L-세린, N-아세틸-L-글루코사미닐-L-트레오닌, N-아세틸-L-글루코사미닐-L-아스파라긴 및 O-만노사미닐-L-세린을 포함한다. 상기 아미노산의 예는 또한 아미노산과 사카라이드 사이의 자연적으로-발생하는 N- 또는 O-결합이 자연계에서 일반적으로 발견되지 않는 공유 결합, 예를 들어, 알켄, 옥심, 티오에테르, 아미드 등을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 결합으로 치환되는 예를 포함한다. 상기 아미노산의 예는 자연적으로-발생하는 단백질에서 일반적으로 발견되지 않는 당류, 예컨대 2-데옥시-글루코오스, 2-데옥시갈락토스 등을 포함한다.

예를 들어, 생체내 반감기를 연장시키기 위해, (예를 들어, 폴리펩티드 사슬내 또는 N-말단 또는 C-말단 중 어느 하나에서) ANGPTL3 폴리펩티드에 선택적으로 도입될 수 있는 또 다른 유형의 변형은 페길화 또는 장쇄 폴리에틸렌 글리콜 중합체(PEG)의 도입이다. PEG 또는 PEG의 장쇄 중합체의 도입은 본 발명의 폴리펩티드의 유효 분자량을 증가시켜 예를 들어, 소변으로의 신속한 여과를 방지한다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 서열의 라이신 잔기는 PEG에 직접 또는 링커를 통해 접합된다. 상기 링커는, 예를 들어 적절하게 변형된 PEG 사슬과 결합하기 위한 티올 작용기를 함유하는 아실 잔기 또는 Glu 잔기일 수 있다. PEG 사슬을 도입하는 대안적인 방법은 먼저 C-말단에 Cys 잔기를 도입하거나 또는 Arg 또는 Lys 잔기의 치환과 같은 용매 노출된 잔기를 도입하는 것이다. 이 Cys 잔기는 예를 들어 말레이미드 기능을 함유하는 PEG 사슬에 부위-특이적으로 부착된다. PEG 또는 PEG의 장쇄 중합체를 혼입시키는 방법은 당 업계에 잘 알려져 있으며(예를 들어, in Veronese, F. M., 등, Drug Disc. Today 10: 1451-8 (2005); Greenwald, R. B., 등, Adv. Drug Deliv. Rev. 55: 217-50 (2003); Roberts, M. J., 등, Adv. Drug Deliv. Rev., 54: 459-76 (2002)에 기술됨), 이의 내용은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다. 당 업계에 공지된 중합체 접합의 다른 방법이 또한 본 발명에서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리(2-메타크릴로일옥시에틸 포스포릴콜린)(PMPC)은 ANGPTL3 폴리펩티드와 중합체 접합체로서 도입된다(예를 들어, WO2008/098930; Lewis, 등, Bioconjug Chem., 19: 2144-55 (2008) 참고). 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드와의 포스포릴콜린-함유 중합체 접합체가 본 발명에서 사용될 수 있다. 당업자는 다른 생체적합성 중합체 접합체가 이용될 수 있다는 것을 쉽게 인식할 것이다.

(상기 기재된 바와 같은) 비-천연 아미노산의 혼입을 통해 PEG 또는 PEG 중합체를 혼입시키기 위한 보다 최근에 보고된 다른 접근법이 본 발명의 폴리펩티드로 수행될 수 있다. 이 접근법은 진화된 tRNA/tRNA 합성효소 쌍을 이용하고 앰버 억제기 코돈에 의해 발현 플라스미드에서 코딩된다(Deiters,A, 등 (2004). Bio-org. Med. Chem. Lett. 14, 5743-5). 예를 들어, p-아지도페닐알라닌은 본 발명의 폴리펩티드에 혼입된 다음, 환원제 및 구리 이온의 존재하에 아세틸렌 모이어티를 갖는 PEG 중합체와 반응하여 "휘스겐 [3+2] 사이클로부가(Huisgen [3+2] cycloaddition)"로 알려진 유기 반응을 촉진시킬 수 있다.

특정 구현예에서, 본 발명은 또한 폴리펩티드의 글리코실화를 변형시키도록 ANGPTL3 폴리펩티드의 특정 돌연변이를 고려한다. 이러한 돌연변이는 O-결합된 또는 N-결합된 글리코실화 부위를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위를 도입 또는 제거하도록 선택될 수 있다. 특정 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드는 자연적으로-발생하는 ANGPTL3 단백질에 비해 변형되지 않은 글리코실화 부위 및 패턴을 갖는다. 특정 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 변이체는 자연적으로-발생하는 ANGPTL3 단백질에 비해 글리코실화 부위의 수 및/또는 유형이 변형된 글리코실화 변이체를 포함한다. 특정 구현예에서, 폴리펩티드의 변이체는 천연 폴리펩티드에 비해 더 많은 또는 적은 수의 N-결합된 글리코실화 부위를 포함한다. N-결합된 글리코실화 부위는 서열: Asn-X-Ser 또는 Asn-X-Thr을 특징으로 하며, 여기서 X로 표시된 아미노산 잔기는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산 잔기일 수 있다. 이 서열을 생성하기 위한 아미노산 잔기의 치환은 N-결합된 탄수화물 사슬의 첨가를 위한 잠재적인 새로운 부위를 제공한다. 대안적으로, 이 서열을 제거하는 치환은 기존의 N-결합된 탄수화물 사슬을 제거할 것이다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 N-결합된 글리코실화 부위(전형적으로 자연적으로 발생하는 것들)가 제거되고 하나 이상의 새로운 N-결합된 부위가 생성되는, N-결합된 탄수화물 사슬의 재배열이 제공된다.

일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드의 기능적 변이체 또는 변형된 형태는 ANGPTL3 폴리펩티드 및 하나 이상의 융합 도메인의 융합 단백질을 포함한다. 융합 도메인의 잘 알려진 예는 폴리히스티딘, Glu-Glu, 글루타티온 S 전이효소(GST), 티오레독신, 단백질 A, 단백질 G, 면역글로불린 중쇄 불변 영역(Fc), 말토스 결합 단백질(MBP) 및/또는 인간 혈청 알부민(HSA)을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 융합 도메인 또는 그의 단편은 원하는 특성을 부여하도록 선택될 수 있다. 예를 들어, 일부 융합 도메인은 친화도 크로마토그래피에 의한 융합 단백질의 분리에 특히 유용하다. 친화도 정제를 위해, 글루타티온-, 아밀라아제-, 니켈- 또는 코발트-접합 수지와 같은 친화도 크로마토그래피 관련 매트릭스가 사용된다. 상기 매트릭스의 대부분은 (HIS₆(SEQ ID NO: 44)) 융합 파트너와 함께 유용한 Pharmacia GST 정제 시스템 및 QLAexpress^TM 시스템(Qiagen)과 같은 "키트" 형태로 이용가능하다. 또 다른 예로서, 융합 도메인은 ANGPTL3 폴리펩티드의 검출을 용이하게 하도록 선택될 수 있다. 상기 검출 도메인의 예는 일반적으로 특정 항체가 이용가능한 짧은 펩티드 서열인 "에피토프 태그"뿐만 아니라 다양한 형광 단백질(예를 들어, GFP)을 포함한다. 특정 단클론 항체가 쉽게 이용가능한 잘 알려진 에피토프 태그에는 FLAG, 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌(HA) 및 c-myc 태그가 포함된다. 일부 경우에, 융합 도메인은 관련 프로테아제가 융합 단백질을 부분적으로 분해하여 이로부터 재조합 단백질을 유리하게 하는 인자 Xa 또는 트롬빈과 같은 프로테아제 절단 부위를 갖는다. 그 다음, 유리된 단백질은 이후의 크로마토그래피 분리에 의해 융합 도메인으로부터 분리될 수 있다. 특정 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드는 생체내에서 ANGPTL3 폴리펩티드를 안정화시키는 도메인("안정화제" 도메인)과 융합된다. "안정화"란 파괴 감소, 신장에 의한 제거 감소 또는 다른 약동학적 효과 때문인지의 여부와 관계없이 혈장 반감기를 증가시키는 모든 것을 의미한다. 면역글로불린의 Fc 부분과의 융합은 광범위한 단백질에 바람직한 약동학적 특성을 부여하는 것으로 알려져 있다. 마찬가지로, 인간 혈청 알부민과의 융합은 바람직한 성질을 부여할 수 있다. 선택될 수 있는 다른 유형의 융합 도메인은 다량체화(예를 들어, 이합체화, 사량체화) 도메인 및 (원하는 경우 추가의 생물학적 기능을 부여하는) 기능성 도메인을 포함한다. 이종 펩티드가 ANGPTL3 폴리펩티드의 아미노 말단 및/또는 ANGPTL3 폴리펩티드의 카복시 말단에서 융합되도록 융합체가 구성될 수 있다.

치료 방법 및 치료 용도

본원에는 본원에 기술된 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드 또는 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드를 포함하는 조성물의 관절내 투여용량을 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절염 또는 연골 손상을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 대상체는 연골 손상을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 관절염, 예를 들어 골관절염, 외상성 관절염 또는 자가면역 관절염을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 관절염 또는 연골 손상을 갖는다. 일부 구현예에서, 개체는 관절염 또는 연골 손상을 갖지 않지만, 위험할 수 있다.

일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드는 본원에 기재된 투여 요법(dosage regimen)에 따라 투여된다. 투여 요법은 최적의 요망되는 반응(예를 들어, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 본 발명에 사용되는 ANGPTL3 폴리펩티드에 대한 효율적인 용량 및 투여 요법은 치료하려는 질병 또는 질환에 좌우된다.

일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절에 단일 주사로 투여된다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절에 다중 주사로 투여된다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드는 관절염 또는 연골 손상을 치료하기에 충분한 시간 동안 2주마다 1회 투여된다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드는 관절염 또는 연골 손상을 치료하기에 충분한 시간 동안 매달 투여된다. 일부 구현예에서, ANGPTL3 폴리펩티드는 관절염 또는 연골 손상을 치료하기에 충분한 시간 동안 매주 투여된다.

따라서, 본원에 기재된 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드 약 0.2 내지 200 mg의 관절내 투여용량을 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절에 투여함으로써 대상체의 관절염 또는 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 예를 들어, ANGPTL3 폴리펩티드는 약 0.2~200 mg, 약 0.2~150 mg, 약 0.2~120 mg, 약 0.2~100 mg, 약 0.2~90 mg, 약 0.2~80 mg, 약 0.2~70 mg, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~200 mg, 약 2~150 mg, 약 2~120 mg, 약 2~100 mg, 약 2~90 mg, 약 2~80 mg, 약 2~70 mg, 약 2~60 mg, 약 2~50 mg, 약 2~40 mg, 약 2~30 mg, 약 2~20 mg, 약 2~10 mg, 약 10~200 mg, 약 10~150 mg, 약 10~120 mg, 약 10~100 mg, 약 10~90 mg, 약 10~80 mg, 약 10~70 mg, 약 10~60 mg, 약 10~50 mg, 약 10~40 mg, 약 10~30 mg, 약 10~20 mg, 약 20~200 mg, 약 20~150 mg, 약 20~120 mg, 약 20~100 mg, 약 20~90 mg, 약 20~80 mg, 약 20~70 mg, 약 20~60 mg, 약 20~50 mg, 약 20~40 mg, 약 20~30 mg, 약 40~200 mg, 약 40~150 mg, 약 40~120 mg, 약 40~100 mg, 약 40~90 mg, 약 40~80 mg, 약 40~70 mg, 약 40~60 mg, 약 40~50 mg, 약 50~200 mg, 약 50~150 mg, 약 50~120 mg, 약 50~100 mg, 약 50~90 mg, 약 50~80 mg, 약 50~70 mg, 약 50~60 mg, 약 60~200 mg, 약 60~150 mg, 약 60~120 mg, 약 60~100 mg, 약 60~90 mg, 약 60~80 mg, 약 60~70 mg, 약 70~200 mg, 약 70~150 mg, 약 70~120 mg, 약 70~100 mg, 약 70~90 mg, 약 70~80 mg, 약 80~200 mg, 약 80~150 mg, 약 80~120 mg, 약 80~100 mg, 약 80~90 mg, 약 90~200 mg, 약 90~150 mg, 약 90~120 mg, 약 90~100 mg, 약 100~200 mg, 약 100~150 mg, 약 100~120 mg, 약 120~200 mg, 약 120~150 mg, 또는 약 150~200 mg의 투여용량으로 관절내로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드 약 0.2 내지 60 mg의 관절내 투여용량을 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절에 투여함으로써 대상체의 관절염 또는 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 예를 들어, ANGPTL3 폴리펩티드는 약 0.2~60 mg, 약 0.2~55 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~45 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~60 mg, 약 2~55 mg, 약 2~50 mg, 약 2~45 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~60 mg, 약 5~55 mg, 약 5~50 mg, 약 5~45 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~60 mg, 약 10~55 mg, 약 10~50 mg, 약 10~45 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~60 mg, 약 15~55 mg, 약 15~50 mg, 약 15~45 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~60 mg, 약 20~55 mg, 약 20~50 mg, 약 20~45 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~60 mg, 약 30~55 mg, 약 30~50 mg, 약 30~45 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~60 mg, 약 35~55 mg, 약 35~50 mg, 약 35~45 mg, 약 35~40 mg, 약 40~60 mg, 약 40~55 mg, 약 40~50 mg, 약 40~45 mg, 약 45~60 mg, 약 45~55 mg, 약 45~50 mg, 약 50~60 mg, 약 50~55 mg, 약 55~60 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg, 약 41 mg, 약 42 mg, 약 43 mg, 약 44 mg, 약 45 mg, 약 46 mg, 약 47 mg, 약 48 mg, 약 49 mg, 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 또는 약 60 mg의 투여용량으로 관절내로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드 약 0.2 내지 40 mg의 관절내 투여용량을 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절에 투여함으로써 대상체의 관절염 또는 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)을 치료하는 방법이 제공된다. 예를 들어, ANGPTL3 폴리펩티드는 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~40 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 또는 약 40 mg의 투여용량으로 관절내로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 0.2~100 mg이다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 0.2~60 mg이다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 0.2~40 mg이다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 2~40 mg이다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 10~40 mg이다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 20~40 mg이다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 40~60 mg이다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 0.2 mg이다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 2 mg이다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 10 mg이다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 20 mg이다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 40 mg이다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 60 mg이다.

일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 표 1에 열거된 서열 중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 표 1에 열거된 서열 중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열로 구성된다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 17을 포함한다. 일부 구현예에서, 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 17로 구성된다.

일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2~200 mg의 관절내 투여용량을 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절에 투여함으로써 대상체의 관절염 또는 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 예를 들어, SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드는 약 0.2~200 mg, 약 0.2~150 mg, 약 0.2~120 mg, 약 0.2~100 mg, 약 0.2~90 mg, 약 0.2~80 mg, 약 0.2~70 mg, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~200 mg, 약 2~150 mg, 약 2~120 mg, 약 2~100 mg, 약 2~90 mg, 약 2~80 mg, 약 2~70 mg, 약 2~60 mg, 약 2~50 mg, 약 2~40 mg, 약 2~30 mg, 약 2~20 mg, 약 2~10 mg, 약 10~200 mg, 약 10~150 mg, 약 10~120 mg, 약 10~100 mg, 약 10~90 mg, 약 10~80 mg, 약 10~70 mg, 약 10~60 mg, 약 10~50 mg, 약 10~40 mg, 약 10~30 mg, 약 10~20 mg, 약 20~200 mg, 약 20~150 mg, 약 20~120 mg, 약 20~100 mg, 약 20~90 mg, 약 20~80 mg, 약 20~70 mg, 약 20~60 mg, 약 20~50 mg, 약 20~40 mg, 약 20~30 mg, 약 40~200 mg, 약 40~150 mg, 약 40~120 mg, 약 40~100 mg, 약 40~90 mg, 약 40~80 mg, 약 40~70 mg, 약 40~60 mg, 약 40~50 mg, 약 50~200 mg, 약 50~150 mg, 약 50~120 mg, 약 50~100 mg, 약 50~90 mg, 약 50~80 mg, 약 50~70 mg, 약 50~60 mg, 약 60~200 mg, 약 60~150 mg, 약 60~120 mg, 약 60~100 mg, 약 60~90 mg, 약 60~80 mg, 약 60~70 mg, 약 70~200 mg, 약 70~150 mg, 약 70~120 mg, 약 70~100 mg, 약 70~90 mg, 약 70~80 mg, 약 80~200 mg, 약 80~150 mg, 약 80~120 mg, 약 80~100 mg, 약 80~90 mg, 약 90~200 mg, 약 90~150 mg, 약 90~120 mg, 약 90~100 mg, 약 100~200 mg, 약 100~150 mg, 약 100~120 mg, 약 120~200 mg, 약 120~150 mg, 또는 약 150~200 mg의 용량으로 관절내로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2~60 mg의 관절내 투여용량을 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절에 투여함으로써 대상체의 관절염 또는 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 예를 들어, SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드는 약 0.2~60 mg, 약 0.2~55 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~45 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~60 mg, 약 2~55 mg, 약 2~50 mg, 약 2~45 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~60 mg, 약 5~55 mg, 약 5~50 mg, 약 5~45 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~60 mg, 약 10~55 mg, 약 10~50 mg, 약 10~45 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~60 mg, 약 15~55 mg, 약 15~50 mg, 약 15~45 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~60 mg, 약 20~55 mg, 약 20~50 mg, 약 20~45 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~60 mg, 약 30~55 mg, 약 30~50 mg, 약 30~45 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~60 mg, 약 35~55 mg, 약 35~50 mg, 약 35~45 mg, 약 35~40 mg, 약 40~60 mg, 약 40~55 mg, 약 40~50 mg, 약 40~45 mg, 약 45~60 mg, 약 45~55 mg, 약 45~50 mg, 약 50~60 mg, 약 50~55 mg, 약 55~60 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg, 약 41 mg, 약 42 mg, 약 43 mg, 약 44 mg, 약 45 mg, 약 46 mg, 약 47 mg, 약 48 mg, 약 49 mg, 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 또는 약 60 mg의 투여용량으로 관절내로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2~40 mg의 관절내 투여용량을 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절에 투여함으로써 대상체의 관절염 또는 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 예를 들어, SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드는 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~40 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 또는 약 40 mg의 투여용량으로 관절내로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드 약 0.2~200 mg의 관절내 투여용량을 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절에 투여함으로써 대상체의 관절염 또는 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 예를 들어, SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드는 약 0.2~200 mg, 약 0.2~150 mg, 약 0.2~120 mg, 약 0.2~100 mg, 약 0.2~90 mg, 약 0.2~80 mg, 약 0.2~70 mg, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~200 mg, 약 2~150 mg, 약 2~120 mg, 약 2~100 mg, 약 2~90 mg, 약 2~80 mg, 약 2~70 mg, 약 2~60 mg, 약 2~50 mg, 약 2~40 mg, 약 2~30 mg, 약 2~20 mg, 약 2~10 mg, 약 10~200 mg, 약 10~150 mg, 약 10~120 mg, 약 10~100 mg, 약 10~90 mg, 약 10~80 mg, 약 10~70 mg, 약 10~60 mg, 약 10~50 mg, 약 10~40 mg, 약 10~30 mg, 약 10~20 mg, 약 20~200 mg, 약 20~150 mg, 약 20~120 mg, 약 20~100 mg, 약 20~90 mg, 약 20~80 mg, 약 20~70 mg, 약 20~60 mg, 약 20~50 mg, 약 20~40 mg, 약 20~30 mg, 약 40~200 mg, 약 40~150 mg, 약 40~120 mg, 약 40~100 mg, 약 40~90 mg, 약 40~80 mg, 약 40~70 mg, 약 40~60 mg, 약 40~50 mg, 약 50~200 mg, 약 50~150 mg, 약 50~120 mg, 약 50~100 mg, 약 50~90 mg, 약 50~80 mg, 약 50~70 mg, 약 50~60 mg, 약 60~200 mg, 약 60~150 mg, 약 60~120 mg, 약 60~100 mg, 약 60~90 mg, 약 60~80 mg, 약 60~70 mg, 약 70~200 mg, 약 70~150 mg, 약 70~120 mg, 약 70~100 mg, 약 70~90 mg, 약 70~80 mg, 약 80~200 mg, 약 80~150 mg, 약 80~120 mg, 약 80~100 mg, 약 80~90 mg, 약 90~200 mg, 약 90~150 mg, 약 90~120 mg, 약 90~100 mg, 약 100~200 mg, 약 100~150 mg, 약 100~120 mg, 약 120~200 mg, 약 120~150 mg, 또는 약 150~200 mg의 투여용량으로 관절내로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드 약 0.2~60 mg의 관절내 투여용량을 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절에 투여함으로써 대상체의 관절염 또는 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 예를 들어, SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드는 약 0.2~60 mg, 약 0.2~55 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~45 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~60 mg, 약 2~55 mg, 약 2~50 mg, 약 2~45 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~60 mg, 약 5~55 mg, 약 5~50 mg, 약 5~45 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~60 mg, 약 10~55 mg, 약 10~50 mg, 약 10~45 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~60 mg, 약 15~55 mg, 약 15~50 mg, 약 15~45 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~60 mg, 약 20~55 mg, 약 20~50 mg, 약 20~45 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~60 mg, 약 30~55 mg, 약 30~50 mg, 약 30~45 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~60 mg, 약 35~55 mg, 약 35~50 mg, 약 35~45 mg, 약 35~40 mg, 약 40~60 mg, 약 40~55 mg, 약 40~50 mg, 약 40~45 mg, 약 45~60 mg, 약 45~55 mg, 약 45~50 mg, 약 50~60 mg, 약 50~55 mg, 약 55~60 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg, 약 41 mg, 약 42 mg, 약 43 mg, 약 44 mg, 약 45 mg, 약 46 mg, 약 47 mg, 약 48 mg, 약 49 mg, 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 또는 약 60 mg의 투여용량으로 관절내로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드 약 0.2~40 mg의 관절내 투여용량을 대상체(예를 들어, 인간 대상체)의 관절에 투여함으로써 대상체의 관절염 또는 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 예를 들어, SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드는 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~40 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 또는 약 40 mg의 투여용량으로 관절내로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하거나, 이로 구성된 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 0.2~100 mg이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하거나, 이로 구성된 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 0.2~60 mg이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하거나, 이로 구성된 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 0.2~40 mg이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하거나, 이로 구성된 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 2~40 mg이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하거나, 이로 구성된 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 10~40 mg이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하거나, 이로 구성된 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 20~40 mg이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하거나, 이로 구성된 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 40~60 mg이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하거나, 이로 구성된 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 0.2 mg이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하거나, 이로 구성된 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 2 mg이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하거나, 이로 구성된 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 10 mg이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하거나, 이로 구성된 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 20 mg이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하거나, 이로 구성된 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 40 mg이다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하거나, 이로 구성된 폴리펩티드의 관절내 투여용량은 약 60 mg이다.

일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체의 감염된 관절에 외과적 처치를 수행하는 단계를 추가로 포함한다. 폴리펩티드 또는 조성물은 외과적 처치 전, 도중 또는 후에 투여될 수 있다.

또한, 관절염 또는 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)의 치료에 사용하기 위한 본원에 기재된 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드를 포함하는 조성물이 제공된다. 예를 들어, 상기 조성물은 표 1에 열거된 아미노산 서열에 대하여 적어도 95%의 동일성 또는 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 ANGPTL3 폴리펩티드를 포함할 수 있으며, 상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1을 기준으로 결정된 바와 같이, 위치 423에 K 또는 R 이외의 극성 아미노산인 아미노산을 포함하며, 폴리펩티드는 연골발생 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 표 1에 열거된 아미노산 서열에 대하여 적어도 95%의 동일성 또는 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 ANGPTL3 폴리펩티드를 포함하며, 상기 SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 아미노산 잔기는 Q 또는 S이거나, 결실된다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 표 1에 열거된 서열 중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 ANGPTL3 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 표 1에 열거된 서열 중 임의의 하나로부터 선택된 아미노산 서열로 구성된 ANGPTL3 폴리펩티드를 포함한다.

상기 조성물은 본원에 기재된 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드 약 0.2~200 mg(예를 들어, 0.2~200 mg, 약 0.2~150 mg, 약 0.2~120 mg, 약 0.2~100 mg, 약 0.2~90 mg, 약 0.2~80 mg, 약 0.2~70 mg, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~200 mg, 약 2~150 mg, 약 2~120 mg, 약 2~100 mg, 약 2~90 mg, 약 2~80 mg, 약 2~70 mg, 약 2~60 mg, 약 2~50 mg, 약 2~40 mg, 약 2~30 mg, 약 2~20 mg, 약 2~10 mg, 약 10~200 mg, 약 10~150 mg, 약 10~120 mg, 약 10~100 mg, 약 10~90 mg, 약 10~80 mg, 약 10~70 mg, 약 10~60 mg, 약 10~50 mg, 약 10~40 mg, 약 10~30 mg, 약 10~20 mg, 약 20~200 mg, 약 20~150 mg, 약 20~120 mg, 약 20~100 mg, 약 20~90 mg, 약 20~80 mg, 약 20~70 mg, 약 20~60 mg, 약 20~50 mg, 약 20~40 mg, 약 20~30 mg, 약 40~200 mg, 약 40~150 mg, 약 40~120 mg, 약 40~100 mg, 약 40~90 mg, 약 40~80 mg, 약 40~70 mg, 약 40~60 mg, 약 40~50 mg, 약 50~200 mg, 약 50~150 mg, 약 50~120 mg, 약 50~100 mg, 약 50~90 mg, 약 50~80 mg, 약 50~70 mg, 약 50~60 mg, 약 60~200 mg, 약 60~150 mg, 약 60~120 mg, 약 60~100 mg, 약 60~90 mg, 약 60~80 mg, 약 60~70 mg, 약 70~200 mg, 약 70~150 mg, 약 70~120 mg, 약 70~100 mg, 약 70~90 mg, 약 70~80 mg, 약 80~200 mg, 약 80~150 mg, 약 80~120 mg, 약 80~100 mg, 약 80~90 mg, 약 90~200 mg, 약 90~150 mg, 약 90~120 mg, 약 90~100 mg, 약 100~200 mg, 약 100~150 mg, 약 100~120 mg, 약 120~200 mg, 약 120~150 mg, 약 150~200 mg)을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 상기 조성물은 본원에 기재된 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드 약 0.2~60 mg(예를 들어, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~55 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~45 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~60 mg, 약 2~55 mg, 약 2~50 mg, 약 2~45 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~60 mg, 약 5~55 mg, 약 5~50 mg, 약 5~45 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~60 mg, 약 10~55 mg, 약 10~50 mg, 약 10~45 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~60 mg, 약 15~55 mg, 약 15~50 mg, 약 15~45 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~60 mg, 약 20~55 mg, 약 20~50 mg, 약 20~45 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~60 mg, 약 30~55 mg, 약 30~50 mg, 약 30~45 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~60 mg, 약 35~55 mg, 약 35~50 mg, 약 35~45 mg, 약 35~40 mg, 약 40~60 mg, 약 40~55 mg, 약 40~50 mg, 약 40~45 mg, 약 45~60 mg, 약 45~55 mg, 약 45~50 mg, 약 50~60 mg, 약 50~55 mg, 약 55~60 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg, 약 41 mg, 약 42 mg, 약 43 mg, 약 44 mg, 약 45 mg, 약 46 mg, 약 47 mg, 약 48 mg, 약 49 mg, 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 약 60 mg)을 포함한다.

일부 구현예에서, 상기 조성물은 본원에 기재된 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드 약 0.2~40 mg(예를 들어, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~40 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg)을 포함한다.

일부 구현예에서, 관절염 또는 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)의 치료에 사용하기 위한 SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 관절염 또는 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)의 치료에 사용하기 위한 SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드를 포함하는 조성물이 제공된다.

상기 조성물은 SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2~200 mg(예를 들어, 0.2~200 mg, 약 0.2~150 mg, 약 0.2~120 mg, 약 0.2~100 mg, 약 0.2~90 mg, 약 0.2~80 mg, 약 0.2~70 mg, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~200 mg, 약 2~150 mg, 약 2~120 mg, 약 2~100 mg, 약 2~90 mg, 약 2~80 mg, 약 2~70 mg, 약 2~60 mg, 약 2~50 mg, 약 2~40 mg, 약 2~30 mg, 약 2~20 mg, 약 2~10 mg, 약 10~200 mg, 약 10~150 mg, 약 10~120 mg, 약 10~100 mg, 약 10~90 mg, 약 10~80 mg, 약 10~70 mg, 약 10~60 mg, 약 10~50 mg, 약 10~40 mg, 약 10~30 mg, 약 10~20 mg, 약 20~200 mg, 약 20~150 mg, 약 20~120 mg, 약 20~100 mg, 약 20~90 mg, 약 20~80 mg, 약 20~70 mg, 약 20~60 mg, 약 20~50 mg, 약 20~40 mg, 약 20~30 mg, 약 40~200 mg, 약 40~150 mg, 약 40~120 mg, 약 40~100 mg, 약 40~90 mg, 약 40~80 mg, 약 40~70 mg, 약 40~60 mg, 약 40~50 mg, 약 50~200 mg, 약 50~150 mg, 약 50~120 mg, 약 50~100 mg, 약 50~90 mg, 약 50~80 mg, 약 50~70 mg, 약 50~60 mg, 약 60~200 mg, 약 60~150 mg, 약 60~120 mg, 약 60~100 mg, 약 60~90 mg, 약 60~80 mg, 약 60~70 mg, 약 70~200 mg, 약 70~150 mg, 약 70~120 mg, 약 70~100 mg, 약 70~90 mg, 약 70~80 mg, 약 80~200 mg, 약 80~150 mg, 약 80~120 mg, 약 80~100 mg, 약 80~90 mg, 약 90~200 mg, 약 90~150 mg, 약 90~120 mg, 약 90~100 mg, 약 100~200 mg, 약 100~150 mg, 약 100~120 mg, 약 120~200 mg, 약 120~150 mg, 약 150~200 mg)을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 상기 조성물은 SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2~60 mg(예를 들어, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~55 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~45 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~60 mg, 약 2~55 mg, 약 2~50 mg, 약 2~45 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~60 mg, 약 5~55 mg, 약 5~50 mg, 약 5~45 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~60 mg, 약 10~55 mg, 약 10~50 mg, 약 10~45 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~60 mg, 약 15~55 mg, 약 15~50 mg, 약 15~45 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~60 mg, 약 20~55 mg, 약 20~50 mg, 약 20~45 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~60 mg, 약 30~55 mg, 약 30~50 mg, 약 30~45 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~60 mg, 약 35~55 mg, 약 35~50 mg, 약 35~45 mg, 약 35~40 mg, 약 40~60 mg, 약 40~55 mg, 약 40~50 mg, 약 40~45 mg, 약 45~60 mg, 약 45~55 mg, 약 45~50 mg, 약 50~60 mg, 약 50~55 mg, 약 55~60 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg, 약 41 mg, 약 42 mg, 약 43 mg, 약 44 mg, 약 45 mg, 약 46 mg, 약 47 mg, 약 48 mg, 약 49 mg, 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 약 60 mg)을 포함한다.

일부 구현예에서, 상기 조성물은 SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2~40 mg(예를 들어, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~40 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg)을 포함한다.

상기 조성물은 SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드 약 0.2~200 mg(예를 들어, 0.2~200 mg, 약 0.2~150 mg, 약 0.2~120 mg, 약 0.2~100 mg, 약 0.2~90 mg, 약 0.2~80 mg, 약 0.2~70 mg, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~200 mg, 약 2~150 mg, 약 2~120 mg, 약 2~100 mg, 약 2~90 mg, 약 2~80 mg, 약 2~70 mg, 약 2~60 mg, 약 2~50 mg, 약 2~40 mg, 약 2~30 mg, 약 2~20 mg, 약 2~10 mg, 약 10~200 mg, 약 10~150 mg, 약 10~120 mg, 약 10~100 mg, 약 10~90 mg, 약 10~80 mg, 약 10~70 mg, 약 10~60 mg, 약 10~50 mg, 약 10~40 mg, 약 10~30 mg, 약 10~20 mg, 약 20~200 mg, 약 20~150 mg, 약 20~120 mg, 약 20~100 mg, 약 20~90 mg, 약 20~80 mg, 약 20~70 mg, 약 20~60 mg, 약 20~50 mg, 약 20~40 mg, 약 20~30 mg, 약 40~200 mg, 약 40~150 mg, 약 40~120 mg, 약 40~100 mg, 약 40~90 mg, 약 40~80 mg, 약 40~70 mg, 약 40~60 mg, 약 40~50 mg, 약 50~200 mg, 약 50~150 mg, 약 50~120 mg, 약 50~100 mg, 약 50~90 mg, 약 50~80 mg, 약 50~70 mg, 약 50~60 mg, 약 60~200 mg, 약 60~150 mg, 약 60~120 mg, 약 60~100 mg, 약 60~90 mg, 약 60~80 mg, 약 60~70 mg, 약 70~200 mg, 약 70~150 mg, 약 70~120 mg, 약 70~100 mg, 약 70~90 mg, 약 70~80 mg, 약 80~200 mg, 약 80~150 mg, 약 80~120 mg, 약 80~100 mg, 약 80~90 mg, 약 90~200 mg, 약 90~150 mg, 약 90~120 mg, 약 90~100 mg, 약 100~200 mg, 약 100~150 mg, 약 100~120 mg, 약 120~200 mg, 약 120~150 mg, 약 150~200 mg)을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 상기 조성물은 SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드 약 0.2~60 mg(예를 들어, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~55 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~45 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~60 mg, 약 2~55 mg, 약 2~50 mg, 약 2~45 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~60 mg, 약 5~55 mg, 약 5~50 mg, 약 5~45 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~60 mg, 약 10~55 mg, 약 10~50 mg, 약 10~45 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~60 mg, 약 15~55 mg, 약 15~50 mg, 약 15~45 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~60 mg, 약 20~55 mg, 약 20~50 mg, 약 20~45 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~60 mg, 약 30~55 mg, 약 30~50 mg, 약 30~45 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~60 mg, 약 35~55 mg, 약 35~50 mg, 약 35~45 mg, 약 35~40 mg, 약 40~60 mg, 약 40~55 mg, 약 40~50 mg, 약 40~45 mg, 약 45~60 mg, 약 45~55 mg, 약 45~50 mg, 약 50~60 mg, 약 50~55 mg, 약 55~60 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg, 약 41 mg, 약 42 mg, 약 43 mg, 약 44 mg, 약 45 mg, 약 46 mg, 약 47 mg, 약 48 mg, 약 49 mg, 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 약 60 mg)을 포함한다.

일부 구현예에서, 상기 조성물은 SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드 약 0.2~40 mg(예를 들어, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~40 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg)을 포함한다.

본 발명의 폴리펩티드, 조성물 및 방법은 예를 들어 힘줄 또는 인대 파열이나 외상성 사건으로부터 발생하는 손상을 포함하는 임의 유형의 관절 연골 손상(예를 들어, 관절 손상 또는 상해)을 치료하는 데 사용될 수 있음이 고려된다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 조성물 및 방법은 관절 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)을 치료하는데 사용된다. 특정 구현예에서, 관절 손상은 외상성 관절 손상(예를 들어, 외상성 연골 손상)이다. 다른 구현예에서, 관절 손상 또는 관절 연골 손상은 연령 또는 비활동성 또는 유전적 요인에 기인한 손상이다. 또 다른 구현예에서 관절 손상 또는 관절 연골 손상은 자가면역 장애에 기인한 손상이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 본 발명의 폴리펩티드, 조성물 및 방법은 골관절염을 치료하는데 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 폴리펩티드, 조성물 및 방법은 예를 들어 외상성 손상 또는 연골질환으로 인해 손상된 연골 조직에서 연골세포 증식 및/또는 연골 생산을 자극하는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 폴리펩티드, 조성물 및 방법은 예를 들어 관절면, 예를 들어 척추, 어깨, 팔꿈치, 손목, 손가락 관절, 엉덩이, 무릎, 발목, 그리고 발 관절에서 관절의 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)의 치료 등에 유용하다. 치료 효과가 있을 수 있는 질환 또는 장애의 예는 골관절염, 류마티스성 관절염, 다른 자가면역 질환 또는 박리성 골연골염을 포함한다. 또한, 연골 손상 또는 파열은 특정 유전 또는 대사 장애의 결과로서 발생하고, 연골 기형은 종종 인간에서 왜소증의 형태로 나타나며/나타나거나, 연골 손상 또는 파열은 종종 재건 수술의 결과가 되어; 따라서 폴리펩티드, 조성물 및 방법은 단독으로 또는 다른 접근법과 관련하여 이들 환자에서 유용한 치료법이 될 것이다.

본 발명의 폴리펩티드, 조성물 및 방법은 다양한 연골성 장애 및/또는 상기 병태의 관련 증상 또는 효과를 치료하는데 사용될 수 있음이 또한 고려된다. 본 명세서에 기재된 폴리펩티드, 조성물 및 방법에 의해 치료하기 위한 예시적인 병태 또는 장애는 류마티스성 관절염, 소아기 특발성 관절염, 골관절염, 퇴행성 디스크 질환, 척추관절병증, 엘러스-단로스 증후군, 전신 경화증(경피증) 또는 힘줄 질환을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

일부 구현예에서, 본 발명의 폴리펩티드 및 조성물은 관절의 활액으로의 직접 주사에 의해, 또는 연골 결손으로 직접 적용된다. 본 발명의 폴리펩티드, 조성물 및 방법은 또한 감염된 관절에서 외과적 처치와 함께 사용될 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드의 투여는 외과적 처치 전에, 처치 중 또는 처치와 함께, 및/또는 처치 후에 발생할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 폴리펩티드, 조성물 및 방법은 자가 또는 동종 연골세포 이식을 위한 배양물에서 연골세포 군집을 확장시키는데 사용될 수 있다. 연골세포는 본 발명의 폴리펩티드 및 조성물의 투여로 이루어진 동시 치료로 선택적으로 이식될 수 있다. 이러한 절차에서, 예를 들어, 연골세포는 손상된 관절의 손상되지 않은 소수의 하중-부하 영역으로부터 관절경적으로 채취될 수 있고, 선택적으로 본 발명의 폴리펩티드 및 조성물 및/또는 이식 이전에 세포 수를 증가시키기 위한 다른 성장 인자의 존재하에 시험관내에서 배양될 수 있다. 그리고나서, 팽창된 배양물을 본 발명의 폴리펩티드 및 조성물과 선택적으로 혼합하고, 및/또는 관절 공간에, 또는 결함에 직접 넣는다. 특정 구현예에서, (선택적으로 본 발명의 폴리펩티드를 갖는) 팽창된 배양물을 기질 또는 막에 현탁된 관절 공간에 넣는다. 다른 구현예에서, 본 발명의 폴리펩티드 및 조성물은 연골 형성 세포를 함유하는, 및/또는 이식된 연골세포 또는 연골세포 전구 세포를 제 위치에 유지시키는 것을 돕는 하나 이상의 골막 또는 연골 이식편과 조합하여 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 폴리펩티드 및 조성물은 관절 세척, 골수 자극, 마모 관절성형술, 연골하층 드릴링(subchondral drilling), 또는 근위 연골하골의 미세균열을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 다른 절차와 연계하여 연골 손상(예를 들어, 관절 연골 손상)을 치료하는데 사용된다. 선택적으로, 본 발명의 폴리펩티드 및 조성물의 투여 및 연골 성장 후에, 추가의 외과적 치료는 새로 형성된 연골 표면(들)을 적절히 윤곽화하는데 유익할 수 있다.

약제학적 조성물

본원에 기재된 연골발생 활성을 갖는 하나 이상의 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드를 포함하는 조성물, 예를 들어 약제학적 조성물도 또한 이에 제공된다. 상기 조성물은 하나 이상의 부형제 또는 담체, 예를 들어 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 담체를 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 치료적 유효량의 단백질 또는 펩티드를 혼합물 형태로 포함하는 약제학적 조성물은 투여 방식, 전달 형식 및 목적하는 투여용량에 적합한 것으로 선택되는 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 담체와 함께 제형화된다.

일부 구현예에서, 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드를 포함하는 약제학적 조성물은 관절내 투여에 적합하다.

약제학적 조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이들은 예를 들어 액체, 반-고체 또는 고체 형태를 포함한다. 형태는 의도된 투여 방식 및 치료적 용도에 좌우된다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 액체 용액, 예를 들어 주사가능한 용액이다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 분말, 예를 들어, 동결건조물이다. 동결건조된 약제학적 조성물은 전형적으로 저장을 위해 냉동과 같은 특정 조건을 필요로 하지 않는다. 동결건조는 재구성되어 주사에 의해 환자에게 투여되는 의약품을 개발하는데 유용하다. 예를 들어, 동결건조된 약품은 주사 직전에 적합한 투여 희석제(예를 들어, 멸균 수)를 첨가함으로써 재구성될 수 있다.

본원에 기재된 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드 약 0.2~200 mg을 포함하는 조성물, 예를 들어 약제학적 조성물도 본원에 제공된다. 예를 들어, 상기 조성물은 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드 약 0.2~200 mg, 약 0.2~150 mg, 약 0.2~120 mg, 약 0.2~100 mg, 약 0.2~90 mg, 약 0.2~80 mg, 약 0.2~70 mg, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~200 mg, 약 2~150 mg, 약 2~120 mg, 약 2~100 mg, 약 2~90 mg, 약 2~80 mg, 약 2~70 mg, 약 2~60 mg, 약 2~50 mg, 약 2~40 mg, 약 2~30 mg, 약 2~20 mg, 약 2~10 mg, 약 10~200 mg, 약 10~150 mg, 약 10~120 mg, 약 10~100 mg, 약 10~90 mg, 약 10~80 mg, 약 10~70 mg, 약 10~60 mg, 약 10~50 mg, 약 10~40 mg, 약 10~30 mg, 약 10~20 mg, 약 20~200 mg, 약 20~150 mg, 약 20~120 mg, 약 20~100 mg, 약 20~90 mg, 약 20~80 mg, 약 20~70 mg, 약 20~60 mg, 약 20~50 mg, 약 20~40 mg, 약 20~30 mg, 약 40~200 mg, 약 40~150 mg, 약 40~120 mg, 약 40~100 mg, 약 40~90 mg, 약 40~80 mg, 약 40~70 mg, 약 40~60 mg, 약 40~50 mg, 약 50~200 mg, 약 50~150 mg, 약 50~120 mg, 약 50~100 mg, 약 50~90 mg, 약 50~80 mg, 약 50~70 mg, 약 50~60 mg, 약 60~200 mg, 약 60~150 mg, 약 60~120 mg, 약 60~100 mg, 약 60~90 mg, 약 60~80 mg, 약 60~70 mg, 약 70~200 mg, 약 70~150 mg, 약 70~120 mg, 약 70~100 mg, 약 70~90 mg, 약 70~80 mg, 약 80~200 mg, 약 80~150 mg, 약 80~120 mg, 약 80~100 mg, 약 80~90 mg, 약 90~200 mg, 약 90~150 mg, 약 90~120 mg, 약 90~100 mg, 약 100~200 mg, 약 100~150 mg, 약 100~120 mg, 약 120~200 mg, 약 120~150 mg, 약 150~200 mg을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드 약 0.2~60 mg(예를 들어, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~55 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~45 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~60 mg, 약 2~55 mg, 약 2~50 mg, 약 2~45 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~60 mg, 약 5~55 mg, 약 5~50 mg, 약 5~45 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~60 mg, 약 10~55 mg, 약 10~50 mg, 약 10~45 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~60 mg, 약 15~55 mg, 약 15~50 mg, 약 15~45 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~60 mg, 약 20~55 mg, 약 20~50 mg, 약 20~45 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~60 mg, 약 30~55 mg, 약 30~50 mg, 약 30~45 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~60 mg, 약 35~55 mg, 약 35~50 mg, 약 35~45 mg, 약 35~40 mg, 약 40~60 mg, 약 40~55 mg, 약 40~50 mg, 약 40~45 mg, 약 45~60 mg, 약 45~55 mg, 약 45~50 mg, 약 50~60 mg, 약 50~55 mg, 약 55~60 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg, 약 41 mg, 약 42 mg, 약 43 mg, 약 44 mg, 약 45 mg, 약 46 mg, 약 47 mg, 약 48 mg, 약 49 mg, 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 약 60 mg)을 포함하는 조성물, 예를 들어 약제학적 조성물이 본원에 제공된다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 연골발생 활성을 갖는 프로테아제-내성 ANGPTL3 폴리펩티드 약 0.2~40 mg(예를 들어, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~40 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg)을 포함하는 조성물, 예를 들어 약제학적 조성물이 본원에 제공된다.

일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2~60 mg(예를 들어, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~55 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~45 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~60 mg, 약 2~55 mg, 약 2~50 mg, 약 2~45 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~60 mg, 약 5~55 mg, 약 5~50 mg, 약 5~45 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~60 mg, 약 10~55 mg, 약 10~50 mg, 약 10~45 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~60 mg, 약 15~55 mg, 약 15~50 mg, 약 15~45 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~60 mg, 약 20~55 mg, 약 20~50 mg, 약 20~45 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~60 mg, 약 30~55 mg, 약 30~50 mg, 약 30~45 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~60 mg, 약 35~55 mg, 약 35~50 mg, 약 35~45 mg, 약 35~40 mg, 약 40~60 mg, 약 40~55 mg, 약 40~50 mg, 약 40~45 mg, 약 45~60 mg, 약 45~55 mg, 약 45~50 mg, 약 50~60 mg, 약 50~55 mg, 약 55~60 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg, 약 41 mg, 약 42 mg, 약 43 mg, 약 44 mg, 약 45 mg, 약 46 mg, 약 47 mg, 약 48 mg, 약 49 mg, 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 약 60 mg)을 포함하는 조성물, 예를 들어 약제학적 조성물이 본원에 제공된다.

일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드 약 0.2~60 mg(예를 들어, 약 0.2~60 mg, 약 0.2~55 mg, 약 0.2~50 mg, 약 0.2~45 mg, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~60 mg, 약 2~55 mg, 약 2~50 mg, 약 2~45 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~60 mg, 약 5~55 mg, 약 5~50 mg, 약 5~45 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~60 mg, 약 10~55 mg, 약 10~50 mg, 약 10~45 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~60 mg, 약 15~55 mg, 약 15~50 mg, 약 15~45 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~60 mg, 약 20~55 mg, 약 20~50 mg, 약 20~45 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~60 mg, 약 30~55 mg, 약 30~50 mg, 약 30~45 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~60 mg, 약 35~55 mg, 약 35~50 mg, 약 35~45 mg, 약 35~40 mg, 약 40~60 mg, 약 40~55 mg, 약 40~50 mg, 약 40~45 mg, 약 45~60 mg, 약 45~55 mg, 약 45~50 mg, 약 50~60 mg, 약 50~55 mg, 약 55~60 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg, 약 41 mg, 약 42 mg, 약 43 mg, 약 44 mg, 약 45 mg, 약 46 mg, 약 47 mg, 약 48 mg, 약 49 mg, 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 약 60 mg)을 포함하는 조성물, 예를 들어 약제학적 조성물이 본원에 제공된다.

일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2~40 mg(예를 들어, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~40 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg)을 포함하는 조성물, 예를 들어 약제학적 조성물이 본원에 제공된다.

일부 구현예에서, SEQ ID NO: 17로 구성된 폴리펩티드 약 0.2~40 mg(예를 들어, 약 0.2~40 mg, 약 0.2~35 mg, 약 0.2~30 mg, 약 0.2~25 mg, 약 0.2~20 mg, 약 0.2~15 mg, 약 0.2~10 mg, 약 0.2~5 mg, 약 0.2~2 mg, 약 2~40 mg, 약 2~35 mg, 약 2~30 mg, 약 2~25 mg, 약 2~20 mg, 약 2~15 mg, 약 2~10 mg, 약 2~5 mg, 약 5~40 mg, 약 5~35 mg, 약 5~30 mg, 약 5~25 mg, 약 5~20 mg, 약 5~15 mg, 약 5~10 mg, 약 10~40 mg, 약 10~35 mg, 약 10~30 mg, 약 10~25 mg, 약 10~20 mg, 약 10~15 mg, 약 15~40 mg, 약 15~35 mg, 약 15~30 mg, 약 15~25 mg, 약 15~20 mg, 약 20~40 mg, 약 20~35 mg, 약 20~30 mg, 약 20~25 mg, 약 25~60 mg, 약 25~55 mg, 약 25~50 mg, 약 25~45 mg, 약 25~40 mg, 약 25~35 mg, 약 25~30 mg, 약 30~40 mg, 약 30~35 mg, 약 35~40 mg, 약 0.2 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg)을 포함하는 조성물, 예를 들어 약제학적 조성물이 본원에 제공된다.

일부 구현예에서, 상기 조성물은 탄수화물을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 완충액 또는 완충액 성분을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 계면활성제, 예를 들어 폴리소르베이트 80을 추가로 포함한다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 조성물은 완충액 또는 완충액 성분을 함유한다. 완충액은 생리학적으로 호환가능한 pH에서 약물(예를 들어, 폴리펩티드)을 전달하는 (즉, 내약성을 향상시키기 위한) 수단뿐만 아니라 약물(예를 들어, 폴리펩티드)의 화학적 안정성에 유리한 용액 조건을 제공하기 위한 수단으로서 pH 조절에 잘 알려져있다.

본원에 기재된 조성물에 사용될 수 있는 완충액의 비-제한적인 예는 히스티딘 완충액, 인산 완충액, 글리신 완충액, 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 락 테이트 완충액, 타르트레이트 완충액 또는 염산 완충액을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 조성물은 히스티딘 완충액, 인산 완충액, 글리신 완충액 또는 아세테이트 완충액, 또는 이의 성분으로부터 선택된 완충액을 포함한다. 바람직한 완충액은 히스티딘 완충액이고, 바람직한 완충액 성분은 히스티딘이다.

pH는 최적화된 단백질 조성물, 예를 들어 증가된 안정성을 갖는 액체 단백질 조성물을 달성하는데 중요할 수 있다. pH는 단백질의 형태 및/또는 응집 및/또는 분해 및/또는 반응성에 영향을 줌으로써 작용할 수 있다. pH는 바람직하게는 7.0 미만, 보다 바람직하게는 약 5.0 내지 약 7.0의 범위, 보다 바람직하게는 약 5.5 내지 약 6.1, 보다 바람직하게는 약 5.8이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 조성물의 pH는 5.5 내지 6.1, 예를 들어, 약 5.5, 약 5.6, 약 5.7, 약 5.8, 약 5.9, 약 6.0, 약 6.1이다. 바람직하게는, 조성물의 pH는 약 5.8이다.

일부 구현예에서, 탄수화물이 조성물에 포함된다. 탄수화물은 단백질을 보다 콤팩트하게 만들 수 있으며, 예를 들어, 활성 모이어티에 대한 접근을 막거나 방해할 수 있다. 이는 예를 들어 단백질 응집을 감소시킴으로써 단백질 안정성을 증가시킬 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 조성물은 탄수화물을 함유한다. 바람직한 탄수화물은 수크로스이다. 사용하기에 적합한 다른 바람직한 탄수화물은: 트레할로스, 말토스, 라피노스, 글루코스, 소르비톨, 덱스트란, 사이클로덱스트린 또는 만니톨을 포함한다. 단백질을 안정화시키는데 사용될 수 있는 다른 적합한 재료는: 탄수화물, 예컨대 락토스 및 아라비노스; 폴리올, 예컨대 만니톨, 글리세롤 및 자일리톨; 아미노산, 예컨대 글리신, 아르기닌, 라이신, 히스티딘, 알라닌, 메티오닌 및 류신; 및 중합체, 예컨대 PEG, 폴록사머, 덱스트란, 폴리프로필렌 글리콜, 다당류, 메틸셀룰로스, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈(PVP), 가수분해된 젤라틴 및 인간 알부민을 포함한다. 일부 구현예에서, 2개 이상의 상기 탄수화물의 조합(예를 들어, 수크로스 및 트레할로스)이 본 명세서에 기재된 조성물에 사용된다. 조합의 적합성은 후보 탄수화물에 대하여 테스트될 수 있다.

계면 활성제를 조성물에 첨가하여 단백질 안정성을 증가시킬 수 있는데, 예를 들어, 셰이킹/선적시 공기/액체 계면으로 인해, 예를 들어 단백질 분해를 감소시킬 수 있다. 단백질 안정성을 증가시키는, 예를 들어 조성물에서 단백질 분해를 일으키지 않는 계면활성제가 선택된다. 사용하기에 적합한 계면활성제는 예를 들어 폴리소르베이트 80이다.

실시예

본 발명은 하기 실시예에서 추가로 기술되며, 이는 청구범위에 기재된 본 발명의 범위를 제한하지 않는다.

실시예 1: 1차 골관절염 인간 환자에 대한 ANGPTL3 폴리펩티드의 투여

슬관절 전치환술(TKR)이 예정된 1차 골관절염 환자에서 SEQ ID NO: 17의 ANGPTL3 폴리펩티드에 대한 무작위, 위약 대조군, 이중-맹검 1차임상 단일용량상승 연구가 진행중이다.

연구 설계는 도 1에 도시되어 있으며, 이는 슬관절 전치환술(TKR)시에 제거하기 전에 1차 골관절염(OA) 환자의 무릎 관절에 1회의 관절내(i.a.) 주사 후 ANGPTL3 폴리펩티드의 안전성과 내약성을 평가하기 위해 설계되었다. 약 28명의 환자가 7개의 코호트에 등록될 것이다. 각각의 코호트에서, 3명의 환자는 ANGPTL3 폴리펩티드로 치료되고, 1명의 환자는 위약으로 치료된다. 코호트 1 환자는 TKR 약 7일 전에 무릎 당 0.2 mg의 ANGPTL3 폴리펩티드 또는 위약을 관절내로 주사받았다. 코호트 2 환자는 TKR 약 7일 전에 무릎 당 2 mg의 ANGPTL3 폴리펩티드 또는 위약을 관절내로 주사받았다. 코호트 3 환자는 TKR 약 7일 전에 무릎 당 10 mg의 ANGPTL3 폴리펩티드 또는 위약을 관절내로 주사받았다. 코호트 4 환자는 TKR 약 7일 전에 무릎 당 20 mg의 ANGPTL3 폴리펩티드 또는 위약을 관절내로 주사받았다. 코호트 5~7의 수술 전 투여용량과 시간은 코호트 1~4의 분석을 기반으로 선택하였다. 코호트 5 환자는 TKR 약 2시간 전에 무릎 당 20 mg의 ANGPTL3 폴리펩티드 또는 위약을 관절내로 주사받을 것이다. 코호트 6 환자는 TKR 약 21일 전에 무릎 당 20 mg의 ANGPTL3 폴리펩티드 또는 위약을 관절내로 주사받을 것이다. 코호트 7 환자는 TKR 약 7일 전에 무릎 당 40 mg의 ANGPTL3 폴리펩티드 또는 위약을 관절내로 주사받을 것이다. 코호트 1~4에 대한 환자 인구 및 인구통계학적 정보는 표 2 및 표 3에 개시되어 있다.

인간 환자에 대한 무릎 당 0.2 mg의 시작 용량은 래트 및 개 투여 연구로부터 수득된 안전성 및 효능 데이터에 기초하여 선택하였고, 적당한 약리학적 효과를 전달할 것으로 기대된다.

인간 환자에 대한 무릎 당 20 mg의 시작 용량은 관절 활액의 부피 및 SEQ ID NO: 17의 ANGPTL3 폴리펩티드의 관절 활액내 용해도, 및 개 관절내 투여 연구를 기반으로 선택하였다. 개 무릎의 연골 면적은 196　mm²로 추정되는 반면; 인간 무릎 연골 면적은 1215　mm²로 추정된다. 개 관절내 투여 연구를 기반으로, 무릎 당 20 mg 용량이 허용가능한 안전역(safety margin)을 갖는다.

TKR 수술 방문까지 코호트 1 내지 4의 모든 환자를 포함하는 중간 분석을 위해, 모든 안전 종말점(부작용 CTC-AE, 신체 검사, 생체 신호, ECG, 안전 실험실 및 KOOS를 사용하여 측정된 통증 포함)을 투여 후 7일까지 측정하였다. 치료와 관련된 것으로 의심되는 것으로 보고된 부작용은 없었다.

요약하면, 코호트 1~4에서 유의한 안전성 결과는 관찰되지 않았다. SEQ ID NO: 17의 ANGPTL3 폴리펩티드를 투여받은 16명의 환자에서 면역원성은 관찰되지 않았다.

코호트 4에서 무릎 당 20 mg의 시험된 용량이 임의의 특정 안전성에 대한 우려없이 모든 치료받은 환자(N=3)에서 양호하게 관용되었기 때문에, 코호트 7에 대해 무릎 당 40 mg으로의 추가 용량 증가가 계획되어 있다. 무릎 당 40 mg의 용량에서 추정된 전신 노출은 여전히 개와 래트의 독성 연구를 기반으로 한 충분한 안전역과 연관되어 있을 것이다(표 4 참조). 높은 전신 안전역 이외에도, 무릎 당 40 mg을 포함시키기 위한 근거는 또한 (i) SEQ ID NO: 17의 ANGPTL3 폴리펩티드에 대해 잠재적으로 보다 효과적인 용량의 안전성을 조사할 필요성을 정당화하는 전임상 약리학 연구; (ii) 날짜별로 입증된 약물 관련 부작용이 없는, 무릎 당 20 mg 이하의 SEQ ID NO: 17의 ANGPTL3 폴리펩티드의 바람직한 안전성 프로파일; (iii) 개 연구로부터의 국소 연골 안전역에 기반을 두고 있다(표 5 참조).

[표 2]

[표 3]

[표 4]

[표 5]

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야에 친숙한 전문가에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.

달리 나타내지 않는 한, 구체적으로 상세히 기재되지 않은 모든 방법, 단계, 기술 및 조작은, 당업자에게 명백할 바와 같이 그 자체로 공지된 방식으로 수행될 수 있고 수행되어 왔다. 예를 들어 표준 핸드북 및 본원에 언급된 일반적인 배경기술, 및 그에 인용된 추가의 참고문헌을 또한 참조한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 인용된 참고문헌은 각각 그 전문이 참조로 포함된다.

본 발명에 대한 청구범위는 비제한적이며, 하기 제공된다.

특정한 양태 및 청구범위가 본원에 상세히 개시되어 있을지라도, 이는 단지 예시의 목적으로 예로서 행해진 것이며, 첨부된 청구범위의 범위, 또는 임의의 상응하는 추후 출원의 청구범위의 대상의 범위와 관련하여 제한하려는 의도가 아니다. 특히, 본 발명자들은 청구범위에 의해 정의된 바와 같은 본 발명의 정신 및 범위를 벗어나지 않으면서, 본 발명에 다양한 치환, 변경 및 변형이 이루어질 수 있음을 고려한다. 핵산 출발 물질, 관심 클론, 또는 라이브러리 유형의 선택은 본원에 기재된 양태의 지식을 가진 당업자에게는 일상적인 문제인 것으로 여겨진다. 다른 양태, 이점 및 변형이 하기 청구범위의 범위 내에 있는 것으로 간주된다. 당업자는 일상적인 실험 범위를 넘지 않고 이를 사용하여 본원에 기재된 발명의 구체적 양태의 다수의 등가물을 인식하거나 또는 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 하기 청구범위에 포함되는 것으로 의도된다. 다양한 국가의 특허법에 의한 제한으로 인하여 이후 출원되는 상응하는 출원의 청구범위가 고쳐질 수 있으며, 이것은 청구범위의 대상을 포기하는 것으로 해석되어서는 안 된다.

SEQUENCE LISTING <110> NOVARTIS AG <120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATMENT OF CARTILAGE DAMAGE AND ARTHRITIS <130> PAT057513-WO-PCT <140> <141> <150> 62/560,301 <151> 2017-09-19 <150> 62/421,534 <151> 2016-11-14 <160> 44 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 460 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Phe Thr Ile Lys Leu Leu Leu Phe Ile Val Pro Leu Val Ile Ser 1 5 10 15 Ser Arg Ile Asp Gln Asp Asn Ser Ser Phe Asp Ser Leu Ser Pro Glu 20 25 30 Pro Lys Ser Arg Phe Ala Met Leu Asp Asp Val Lys Ile Leu Ala Asn 35 40 45 Gly Leu Leu Gln Leu Gly His Gly Leu Lys Asp Phe Val His Lys Thr 50 55 60 Lys Gly Gln Ile Asn Asp Ile Phe Gln Lys Leu Asn Ile Phe Asp Gln 65 70 75 80 Ser Phe Tyr Asp Leu Ser Leu Gln Thr Ser Glu Ile Lys Glu Glu Glu 85 90 95 Lys Glu Leu Arg Arg Thr Thr Tyr Lys Leu Gln Val Lys Asn Glu Glu 100 105 110 Val Lys Asn Met Ser Leu Glu Leu Asn Ser Lys Leu Glu Ser Leu Leu 115 120 125 Glu Glu Lys Ile Leu Leu Gln Gln Lys Val Lys Tyr Leu Glu Glu Gln 130 135 140 Leu Thr Asn Leu Ile 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ttaaaataag ttcgctgtct ttaaacaaat 2100 ggagatgact actaagtcac attgacttta acatgaggta tcactatacc ttatttgtta 2160 aaatatatac tgtatacatt ttatatattt taacacttaa tactatgaaa acaaataatt 2220 gtaaaggaat cttgtcagat tacagtaaga atgaacatat ttgtggcatc gagttaaagt 2280 ttatatttcc cctaaatatg ctgtgattct aatacattcg tgtaggtttt caagtagaaa 2340 taaacctcgt aacaagttac tgaacgttta aacagcctga caagcatgta tatatgttta 2400 aaattcaata aacaaagacc cagtccctaa attatagaaa tttaaattat tcttgcatgt 2460 ttatcgacat cacaacagat ccctaaatcc ctaaatccct aaagattaga tacaaatttt 2520 ttaccacagt atcacttgtc agaatttatt tttaaatatg attttttaaa actgccagta 2580 agaaatttta aattaaaccc atttgttaaa ggatatagtg cccaagttat atggtgacct 2640 acctttgtca atacttagca ttatgtattt caaattatcc aatatacatg tcatatatat 2700 ttttatatgt cacatatata aaagatatgt atgatctatg tgaatcctaa gtaaatattt 2760 tgttccagaa aagtacaaaa taataaaggt aaaaataatc tataattttc aggaccacag 2820 actaagctgt cgaaattaac gctgattttt ttagggccag aataccaaaa tggctcctct 2880 cttcccccaa aattggacaa tttcaaatgc 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Claims

인간 대상체의 관절염 또는 연골 손상을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 표 1에 열거된 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2 내지 200 mg의 관절내 투여용량을 인간 대상체의 관절에 투여하는 단계를 포함하며, 상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1을 기준으로 결정된 바와 같이 위치 423에 K 또는 R 이외의 극성 아미노산인 아미노산을 포함하며, 상기 폴리펩티드는 연골발생 활성을 갖는, 방법.
제1항에 있어서,
폴리펩티드내 SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 아미노산은 Q 또는 S이거나 결실된, 방법.
제1항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 표 1에 열거된 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
제1항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 표 1에 열거된 아미노산 서열로 구성된, 방법.
제1항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 17을 포함하는, 방법.
제1항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 17로 구성된, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 관절내 투여용량은 약 0.2~60 mg인, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 관절내 투여용량은 약 0.2~40 mg인, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 관절내 투여용량은 약 2~40 mg인, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 관절내 투여용량은 약 10~40 mg인, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 관절내 투여용량은 약 20~40 mg인, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 관절내 투여용량은 약 40~60 mg인, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 관절내 투여용량은 약 0.2 mg인, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 관절내 투여용량은 약 2 mg인, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 관절내 투여용량은 약 10 mg인, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 관절내 투여용량은 약 20 mg인, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 관절내 투여용량은 약 40 mg인, 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 관절내 투여용량은 약 60 mg인, 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 인간 대상체의 관절에 단일 주사로 투여되는, 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 인간 대상체의 관절에 다중 주사로 투여되는, 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 관절염 또는 연골 손상을 치료하기에 충분한 시간 동안 2주마다 1회 인간 대상체의 관절에 투여되는, 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 관절염 또는 연골 손상을 치료하기에 충분한 시간 동안 매달 인간 대상체의 관절에 투여되는, 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 방법은 대상체의 감염된 관절에 외과적 처치를 수행하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제23항에 있어서,
상기 폴리펩티드의 투여는 외과적 처치 전에, 처치 중 또는 처치 후에 발생하는, 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리펩티드의 투여는 골수 자극, 연골 대체, 자가 연골세포 이식(ACI) 또는 기질-유도된 자가 연골세포 이식(MACI) 중 임의의 하나와 함께 발생하는, 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리펩티드의 투여는 자가 연골세포 이식(ACI)과 함께 발생하는, 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 인간 대상체는 골관절염, 외상성 관절염 또는 자가면역 관절염을 갖는, 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 인간 대상체는 연골 손상을 갖는, 방법.
표 1에 열거된 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 약 0.2 내지 200 mg을 포함하는 조성물로서, 상기 폴리펩티드는 인간 대상체의 관절염 또는 연골 손상의 치료에 사용하기 위한, SEQ ID NO: 1을 기준으로 결정된 바와 같이 위치 423에 K 또는 R 이외의 극성 아미노산인 아미노산을 포함하며, 상기 폴리펩티드는 관절내로 투여되는, 조성물.
제29항에 있어서,
폴리펩티드내 SEQ ID NO: 1의 위치 423에 상응하는 아미노산은 Q 또는 S이거나 결실된, 조성물.
제29항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 표 1에 열거된 아미노산 서열을 포함하는, 조성물.
제29항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 표 1에 열거된 아미노산 서열로 구성된, 조성물.
제29항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 17을 포함하는, 조성물.
제29항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 17로 구성된, 조성물.
제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 폴리펩티드 약 0.2~60 mg을 포함하는, 조성물.
제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 폴리펩티드 약 0.2~40 mg을 포함하는, 조성물.
제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 폴리펩티드 약 2~40 mg을 포함하는, 조성물.
제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 폴리펩티드 약 10~40 mg을 포함하는, 조성물.
제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 폴리펩티드 약 20~40 mg을 포함하는, 조성물.
제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 폴리펩티드 약 40~60 mg을 포함하는, 조성물.
제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 폴리펩티드 약 0.2 mg을 포함하는, 조성물.
제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 폴리펩티드 약 2 mg을 포함하는, 조성물.
제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 폴리펩티드 약 10 mg을 포함하는, 조성물.
제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 폴리펩티드 약 20 mg을 포함하는, 조성물.
제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 폴리펩티드 약 40 mg을 포함하는, 조성물.
제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 폴리펩티드 약 60 mg을 포함하는, 조성물.
제29항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 단일 주사로 관절내로 투여되는, 조성물.
제29항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 다중 주사로 관절내로 투여되는, 조성물.
제29항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 관절염 또는 연골 손상을 치료하기에 충분한 시간 동안 2주마다 1회 관절내로 투여되는, 조성물.
제29항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리펩티드는 관절염 또는 연골 손상을 치료하기에 충분한 시간 동안 매달 관절내로 투여되는, 조성물.
제29항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서,
외과적 처치 전에, 처치 중 또는 처치 후에 관절염 또는 연골 손상을 치료하는데 사용하기 위한, 조성물.
제29항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 치료는 골수 자극, 연골 대체, 자가 연골세포 이식(ACI) 또는 기질-유도된 자가 연골세포 이식(MACI)과 함께 발생하는, 조성물.
제29항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 관절염은 골관절염, 외상성 관절염 또는 자가면역 관절염인, 조성물.