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KR20190028534A - 항 gprc5d 항체, gprc5d 및 cd3에 결합하는 이중특이성 항원 결합 분자, 및 이들의 용도 - Google Patents

항 gprc5d 항체, gprc5d 및 cd3에 결합하는 이중특이성 항원 결합 분자, 및 이들의 용도 Download PDF

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KR20190028534A
KR20190028534A KR1020197004695A KR20197004695A KR20190028534A KR 20190028534 A KR20190028534 A KR 20190028534A KR 1020197004695 A KR1020197004695 A KR 1020197004695A KR 20197004695 A KR20197004695 A KR 20197004695A KR 20190028534 A KR20190028534 A KR 20190028534A
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리카도 아타
다이아나 친
수잔느 에다베텔
프랑수아 가뎃
잉져 리
레오폴도 루이스트로
네이슨 마즈스키
마크 멘돈사
콘단다람 필라리세티
알렉세이 테플리야코프
마크 토네타
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얀센 파마슈티카 엔.브이.
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Abstract

GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항체가 본 명세서에 제공된다. 또한, 제공된 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편을 인코딩할 수 있는 관련 폴리뉴클레오티드, 제공된 항체 또는 항원 결합 단편을 발현하는 세포 뿐만 아니라, 관련 벡터 및 검출가능하게 표지된 항체 또는 항원 결합 단편도 기재된다. 게다가, 제공된 항체의 사용 방법이 기재된다. 예를 들어, 제공된 항체는 GPRC5D 발현 암을 진단하거나, 이를 치료하거나, 이의 진행, 퇴행 또는 안정성을 모니터링하기 위해 사용되거나; 환자가 암에 대해 치료되어야 하는지의 여부를 결정하기 위해 사용되거나; 대상이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있고 이에 따라 GPRC5D 특이적 항암 치료제, 예컨대 본 명세서에 기재된 GPRC5D 및 CD3에 대한 다중특이성 항체에 의한 치료에 적합할 수 있는지의 여부를 결정하기 위해 사용될 수 있다.

Description

항 GPRC5D 항체, GPRC5D 및 CD3에 결합하는 이중특이성 항원 결합 분자, 및 이들의 용도
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2016년 7월 20일자로 출원된 미국 가출원 제62/364,811호의 이익을 주장한다. 상기 출원의 전체 내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 서식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 이는 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다. 2017년 6월 28일자로 작성된 상기 ASCII 사본은 파일명이 PRD3422USNP_SL.txt이며, 크기가 57,673 바이트이다.
본 명세서에 제공된 본 발명은 G 단백질 결합 수용체 클래스 C 그룹 5번 구성원 D(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체, GPRC5D 및 클러스터 결정인자(cluster determinant) 3(CD3)에 특이적으로 결합하는 다중특이성 항체, 및 기재된 항체의 생산 및 사용 방법에 관한 것이다.
다발성 골수종(MM)은 두 번째로 많은 혈액학적 악성 종양으로, 모든 암 사망의 2%를 차지한다. MM은 이질적인 질환으로, 주로 염색체 전좌, 특히 t(11;14), t(4;14), t(8;14), del(13), del(17)에 의해 유발된다(문헌[Drach et al., (1998) Blood 92(3):802-809]; 문헌[Gertz et al., (2005) Blood 106(8):2837-2840]; 문헌[Facon et al., (2001) Blood 97(6): 1566-1571]). MM에 걸린 환자는 골수 침윤, 골 파괴, 신부전, 면역결핍, 및 암 진단의 심리 사회적 부담으로 인해 다양한 질환 관련 증상을 겪을 수 있다. 2006년 현재, MM의 5년 상대생존율은 약 34%로, MM은 현재 치료 옵션이 없는 치료가 어려운 질환임을 강조하고 있다.
G 단백질 결합 수용체 클래스 C 그룹 5번 구성원 D(GPRC5D)는 2001년에 최초로 확인된 희소(orphan) 비정형 클래스 C GPCR이다(문헌[
Figure pct00001
Biochim Biophys Acta. 1518(3):237-248, 2001]). GPRC5D 및 다른 그룹 5 GPCR은 클래스 C 수용체의 비정상적으로 짧은 아미노 말단 도메인을 가지며, 따라서 클래스 A 수용체와 구조적으로 유사할 것으로 예측된다. 이와 관련하여, 이들은 독특하며, 클래스 C GPCR에 대한 서열 상동성 및 예측된 구조 토폴로지가 클래스 A 수용체에 비교할 만하다. GPRC5D 활성화의 기능적 결과는 설명되지 않았으며, 리간드는 알려져 있지 않다. 유전자는 3개의 엑손을 가지며, 인간의 염색체 12p13.3 상에 위치한다. GPRC5D 수용체는 다양한 종들 사이에서 고도로 보존되어 있으며, 사이노몰거스 원숭이(cynomolgus monkey) GPRC5D와 92%의 동일성을 공유한다.
GPRC5D mRNA는 주로 MM 환자의 모든 악성 형질세포에서 발현된다(문헌[Atamaniuk JA et al. Eur J Clin Invest 42(9) 953-960; 2012]; 문헌[Frigyesi-blood and Cohen, et al. Hematology 18(6): 348-35; 2013]). GPRC5D 발현은 환자들 사이에서 가변적이며, 형질세포 부담 및 유전자 이상, 예컨대 Rb-1 결실과 상당히 관련되어 있다(문헌[Atamaniuk JA et al. Eur J Clin Invest 42(9) 953-960; 2012]).
형질세포 계통 상에서의 이러한 GPRC5D의 배타적 발현은 이를 항 골수종 항체의 이상적인 표적으로 지정한다.
GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편이 본 명세서에 제공된다. 또한, 제공된 GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편을 인코딩할 수 있는 관련 폴리뉴클레오티드, 제공된 항체 및 항원 결합 단편을 발현하는 세포뿐만 아니라, 관련 벡터 및 검출가능하게 표지된 항체 및 항원 결합 단편도 기재된다. 게다가, 제공된 항체 및 항원 결합 단편의 사용 방법이 기재된다. 예를 들어, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 GPRC5D 발현 암의 진행, 퇴축 또는 안정성을 진단 또는 모니터링하거나; 환자가 암 치료를 받아야 하는지의 여부를 결정하거나; 대상이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있고 이에 따라 GPRC5D 특이적 항암 치료제, 예컨대 본 명세서에 기재된 GPRC5D 및 CD3에 대한 다중특이성 항체에 의한 치료에 적합할 수 있는지의 여부를 결정하기 위해 사용될 수 있다.
GPRC5D 및 CD3에 면역특이적으로 결합하는 다중특이성 항체 및 이의 다중특이성 항원 결합 단편이 본 명세서에 추가로 제공된다. 또한, 제공된 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체를 인코딩할 수 있는 관련 폴리뉴클레오티드, 제공된 항체를 발현하는 세포 뿐만 아니라, 관련 벡터 및 검출가능하게 표지된 다중특이성 항체도 기재된다. 게다가, 제공된 다중특이성 항체의 사용 방법이 기재된다. 예를 들어, GPRC5D × CD3 다중특이성 항체는 GPRC5D 발현 암의 진행, 퇴축 또는 안정성을 진단 또는 모니터링하거나; 환자가 암 치료를 받아야 하는지의 여부를 결정하거나; 대상이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있고 이에 따라 GPRC5D 특이적 항암 치료제, 예컨대 본 명세서에 기재된 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체에 의한 치료에 적합할 수 있는지의 여부를 결정하기 위해 사용될 수 있다.
GPRC5D 특이적 항체
GPRC5D에 대해 특이적인 단리된 항체 및 항원 결합 단편이 본 명세서에 기재된다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 인간 GPRC5D와 결합한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 인간 GPRC5D 및 사이노몰거스 원숭이 GPRC5D와 결합한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드의 하나 이상의 잔기에 결합한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 시험관내에서 28 nM 이하의 EC50로 ADCC를 유발할 수 있다.
표 1은 본 명세서에 기재된 일부 GPRC5D 특이적 항체의 예에 대한 요약을 제공한다:
[표 1]
Figure pct00002
일부 실시 형태에서, 표 1에 기재된 항체들 중 어느 하나의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하는 중쇄를 포함하는 GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다. 일부 실시 형태에서, 표 1에 기재된 항체들 중 어느 하나의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하는 중쇄 및 표 1에 기재된 항체들 중 어느 하나의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하는 경쇄를 포함하는 GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다. 본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 GPRC5D에 결합하기 위하여, 표 1에 기재된 항체들 중 어느 하나의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하는 중쇄 및 표 1에 기재된 항체들 중 어느 하나의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편과 경쟁한다.
IgG 부류는 인간에서 하기의 4가지 동종형으로 분류된다: IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4. 이들은 Fc 영역의 아미노산 서열에서 95% 초과의 상동성을 공유하지만, 힌지 영역의 아미노산 조성 및 구조에서 큰 차이를 나타낸다. Fc 영역은 이펙터 기능, 예컨대 항체 의존성 세포독성(ADCC) 및 보체 의존성 세포독성(CDC)을 매개한다. ADCC에서는, 항체의 Fc 영역이 자연 살해세포 및 대식세포와 같은 면역 이펙터 세포 표면 상의 Fc 수용체(FcgR)에 결합하여, 표적화된 세포의 식세포작용 또는 용해로 이어진다. CDC에서는, 항체가 세포 표면에서 보체 캐스케이드를 촉발시킴으로써 표적화된 세포를 사멸시킨다. 본 명세서에 기재된 항체는, 상이한 이펙터 기능들을 달성하도록 Fc 서열이 변형되어 있는 변형된 버전을 포함한, IgG 동종형들 중 임의의 것과 조합된 가변 도메인의 기재된 특징을 갖는 항체를 포함한다.
치료용 항체의 많은 응용에 있어서, Fc 매개 이펙터 기능은 작용 메커니즘의 일부가 아니다. 이들 Fc 매개 이펙터 기능은 탈메커니즘 독성을 야기함으로써 유해할 수 있고 잠재적으로 안전성 위험을 제기할 수 있다. Fc 영역을 유전자 조작하여 FcgR 또는 보체 인자에 대한 이들의 결합을 감소시킴으로써 이펙터 기능의 변형이 달성될 수 있다. 활성화 FcgR(FcgRI, FcgRIIa, FcgRIIIa 및 FcgRIIIb) 및 억제성 FcgR(FcgRIIb) 또는 제1 보체 성분(C1q)에 대한 IgG의 결합은 힌지 영역 및 CH2 도메인에 위치한 잔기에 좌우된다. Fc 기능성을 감소 또는 침묵시키기 위해 돌연변이가 IgG1, IgG2 및 IgG4에 도입되어 왔다. 본 명세서에 기재된 항체는 이들 변형을 포함할 수 있다.
일 실시 형태에서, 항체는 하기 특성들 중 하나 이상을 갖는 Fc 영역을 포함한다: (a) 모체 Fc와 비교할 때 감소된 이펙터 기능; (b) Fcg RI, Fcg RIIa, Fcg RIIb, Fcg RIIIb 및/또는 Fcg RIIIa에 대한 감소된 친화성; (c) FcgRI에 대한 감소된 친화성; (d) FcgRIIa에 대한 감소된 친화성; (e) FcgRIIb에 대한 감소된 친화성; (f) Fcg RIIIb에 대한 감소된 친화성; 또는 (g) FcgRIIIa에 대한 감소된 친화성.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 IgG 또는 이의 유도체, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 동종형이다. 항체가 IgG1 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 그의 Fc 영역 내에 L234A, L235A, 및/또는 K409R 치환(들)을 함유한다. 항체가 IgG4 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 그의 Fc 영역 내에 S228P, L234A, 및 L235A 치환을 함유한다. 본 명세서에 기재된 항체는 이들 변형을 포함할 수 있다.
기재된 GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편에 더하여, 기재된 항체 및 항원 결합 단편을 인코딩할 수 있는 폴리뉴클레오티드 서열이 또한 제공된다. 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공되며, 마찬가지로 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편을 발현하는 세포도 본 명세서에 제공된다. 개시된 벡터를 발현할 수 있는 세포가 또한 기재된다. 이러한 세포는 포유류 세포(예컨대, 293F 세포, CHO 세포), 곤충 세포(예컨대, Sf7 세포), 효모 세포, 식물 세포 또는 세균 세포(예컨대, 대장균)일 수 있다. 기재된 항체는 또한 하이브리도마 세포에 의해 생성될 수 있다.
GPRC5D 특이적 항체의 사용 방법
기재된 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편의 사용 방법이 또한 개시된다. 이 섹션에서 논의되는 방법에 사용하기 위한 특정 항체는 표 1에서의 항체들에 대해 기재된 CDR들의 세트를 갖는 것들을 포함한다. 예를 들어, 이들 항체 또는 항원 결합 단편은 GPRC5D-수용체 상호작용을 방해하거나, 항체가 독소에 접합되는 경우, 이에 따라 독소가 GPRC5D 발현 암을 표적으로 하게 됨으로써, 암을 치료하는데 유용할 수 있다. 또한, 이들 항체 또는 항원 결합 단편은 생물학적 샘플, 예컨대 혈액 또는 혈청에서 GPRC5D의 존재를 검출하거나; 생물학적 샘플, 예컨대 혈액 또는 혈청 중의 GPRC5D의 양을 정량화하거나; GPRC5D 발현 암을 진단하거나; 암을 앓고 있는 대상의 치료 방법을 결정하거나; 대상에서의 GPRC5D 발현 암의 진행을 모니터링하는데 유용할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 발현 암은 림프종, 예컨대 다발성 골수종(MM)일 수 있다. 기재된 방법은 대상이 GPRC5D 발현 암의 치료, 예컨대 GPRC5D 및 CD3에 대한 다중특이성 항체에 의한 치료를 받기 전에 수행될 수 있다. 더욱이, 기재된 방법은 대상이 GPRC5D 발현 암의 치료, 예컨대 본 명세서에 기재된 GPRC5D 및 CD3에 대한 다중특이성 항체에 의한 치료를 받은 후에 수행될 수 있다.
생물학적 샘플에서 GPRC5D를 검출하는 기재된 방법은 생물학적 샘플을 본 명세서에 기재된 하나 이상의 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편에 노출시키는 단계를 포함한다.
대상에서 GPRC5D 발현 암을 진단하는 기재된 방법은 또한 생물학적 샘플을 본 명세서에 기재된 하나 이상의 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편에 노출시키는 단계를 포함하지만; 본 방법은 또한 상기 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양을 정량화하는 단계; 상기 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양을 알려진 표준 또는 기준 샘플과 비교하는 단계; 및 대상의 GPRC5D 수준이 암과 관련된 GPRC5D의 수준 내에 있는지의 여부를 결정하는 단계를 포함한다.
또한, 대상에서 GPRC5D 발현 암을 모니터링하는 방법이 본 명세서에 기재된다. 기재된 방법은 생물학적 샘플을 본 명세서에 기재된 하나 이상의 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편에 노출시키는 단계; 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 의해 결합된 상기 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양을 정량화하는 단계; 상기 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양을 알려진 표준 또는 기준 샘플 또는 대상으로부터 미리 획득된 유사한 샘플 중의 GPRC5D의 양과 비교하는 단계; 및 대상의 GPRC5D 수준이 비교된 샘플들 중의 GPRC5D의 양의 차이에 기초하여 암의 진행, 퇴축 또는 안정된 질환을 나타내는지의 여부를 결정하는 단계를 포함한다.
대상으로부터 획득되거나 유래된 샘플은 소변, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 복수(ascites), 순환 세포, 순환 종양 세포, 조직과 관련되지 않은 세포, 조직, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검, 미세 바늘 흡인 샘플 또는 조직 프레파라트와 같은 생물학적 샘플이다.
기재된 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 기재된 방법, 또는 당업자에게 알려진 다른 방법과 함께 사용하기 위해 표지화될 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 방사성표지, 형광 표지, 에피토프 태그, 비오틴, 발색단 표지, ECL 표지, 효소, 루테늄, 111In-DOTA, 111In-다이에틸렌트라이아민펜타아세트산(DTPA), 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제 및 베타-갈락토시다제, 또는 폴리-히스티딘 또는 당업계에 알려진 유사한 그러한 표지로 표지화될 수 있다.
GPRC5D 특이적 항체 키트
개시된 GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 키트가 본 명세서에 기재된다. 기재된 키트는 본 명세서에 제공된 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하는 방법, 또는 당업자에게 알려진 다른 방법을 수행하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 키트는 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편 및 생물학적 샘플에서 GPRC5D의 존재를 검출하는데 사용하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 따라서, 기재된 키트는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 항체 또는 이의 항원 결합 단편(들), 및 사용 중이 아닐 때 항체 또는 단편을 담기 위한 용기, 항체 또는 단편, 고체 지지체에 부착된 항체 또는 단편, 및/또는 항체 또는 단편의 검출가능하게 표지된 형태의 사용설명서를 포함할 수 있으며, 이는 본 명세서에 기재된 바와 같다.
GPRC5D × CD3 다중특이성 항체
TCR/CD3 복합체를 통한 GPRC5D를 발현하는 MM 세포로의 T 림프구의 방향전환은 매력적인 대안적 접근법을 나타낸다. T 림프구의 TCR/CD3 복합체는 CD3 표지된 감마(γ), 델타(δ), 엡실론(ε), 제타(ζ) 및 에타(η)의 불변성 서브유닛과 함께 세포 표면에서 공발현되는 TCR 알파(α)/베타(β) 또는 TCR 감마(γ)/델타(δ) 이종이량체로 이루어진다. 인간 CD3ε은 UniProt P07766(CD3E_HUMAN) 하에 기재되어 있다. 당업계에서 최신에 기재된 항 CD3ε 항체는 SP34이다(문헌[Yang SJ, The Journal of Immunology (1986) 137; 1097-1100]). SP34는 영장류 및 인간 CD3 둘 모두와 반응한다. SP34는 파밍겐(Pharmingen)으로부터 입수가능하다. 당업계에서 최신에 기재된 추가의 항 CD3 항체는 UCHT-1이다(국제 특허 출원 공개 WO2000041474호 참조). 당업계에서 최신에 기재된 추가의 항 CD3 항체는 BC-3이다(문헌[Fred Hutchinson Cancer Research Institute; used in Phase I/II trials of GvHD, Anasetti et al., Transplantation 54: 844 (1992)]). SP34는 UCHT-1 및 BC-3와 상이한데, 이는, SP-34는 오로지 CD3의 ε 쇄 상에 존재하는 에피토프만을 인식하고(문헌[Salmeron et al., (1991) J. Immunol. 147: 3047] 참조), 한편 UCHT-1 및 BC-3는 ε 쇄 및 γ 쇄 둘 모두에 의해 기여되는 에피토프를 인식한다는 점에서 그러하다. 항체 SP34와 동일한 서열을 갖는 항체의 서열이 국제 특허 출원 공개 WO2008119565호, WO2008119566호, WO2008119567호, WO2010037836호, WO2010037837호 및 WO2010037838호에 언급되어 있다. 항체 SP34의 VH와 96% 동일한 서열이 미국 특허 제8236308호(국제 특허 출원 공개 WO2007042261호)에 언급되어 있다.
GPRC5D 및 CD3에 결합하는 단리된 다중특이성 항체("GPRC5D × CD3 다중특이성 항체") 및 이의 다중특이성 항원 결합 단편이 본 명세서에 기재된다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D에 면역특이적으로 결합하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 GPRC5D 특이적 아암(arm)은 인간 GPRC5D 및 사이노몰거스 원숭이 GPRC5D와 결합한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 또는 항원 결합 단편의 GPRC5D 특이적 아암은 인간 GPRC5D의 세포외 도메인과 결합한다. 바람직한 실시 형태에서, GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 또는 항원 결합 단편은 이중특이성 항체 또는 항원 결합 단편이다. 일부 실시 형태에서, a) 제1 중쇄(HC1); b) 제2 중쇄(HC2); c) 제1 경쇄(LC1); 및 d) 제2 경쇄(LC2)를 포함하며, HC1과 LC1이 쌍을 이루어서 GPRC5D에 면역특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하고, HC2와 LC2가 쌍을 이루어서 CD3에 면역특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하는, 단리된 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이의 GPRC5D × CD3 이중특이성 결합 단편이 제공된다. 다른 실시 형태에서, 항체 또는 이중특이성 결합 단편을 발현하는 단리된 세포가 제공된다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D × CD3 다중특이성 항체의 GPRC5D 결합 아암(또는 "GPRC5D 특이적 아암")은 본 명세서에 기재된 GPRC5D 항체로부터(예를 들어, 표 1에 열거된 CDR 서열을 갖는 항체로부터) 유래된다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 또는 항원 결합 단편의 GPRC5D 특이적 아암은 IgG 또는 이의 유도체이다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D × CD3 다중특이성 항체의 CD3 결합 아암(또는 "CD3 특이적 아암")은 마우스 IgG3/람다 동종형인 마우스 단일클론 항체 SP34로부터 유래된다. (문헌[K.R. Abhinandan and A. C. Martin, 2008. Mol. Immunol. 45, 3832-3839]). 일부 실시 형태에서, GPRC5D × CD3 다중특이성 항체의 CD3 결합 아암은 표 2로부터 선택되는 하나의 VH 도메인 및 하나의 VL 도메인을 포함한다.
[표 2]
Figure pct00003
IgG 부류는 인간에서 하기의 4가지 동종형으로 분류된다: IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4. 이들은 Fc 영역의 아미노산 서열에서 95% 초과의 상동성을 공유하지만, 힌지 영역의 아미노산 조성 및 구조에서 큰 차이를 나타낸다. Fc 영역은 이펙터 기능, 예컨대 항체 의존성 세포독성(ADCC) 및 보체 의존성 세포독성(CDC)을 매개한다. ADCC에서는, 항체의 Fc 영역이 자연 살해세포 및 대식세포와 같은 면역 이펙터 세포 표면 상의 Fc 수용체(FcgR)에 결합하여, 표적 세포의 식세포작용 또는 용해로 이어진다. CDC에서는, 항체가 세포 표면에서 보체 캐스케이드를 촉발시킴으로써 표적 세포를 사멸시킨다.
치료용 항체의 많은 응용에 있어서, Fc 매개 이펙터 기능은 작용 메커니즘의 일부가 아니다. 이들 Fc 매개 이펙터 기능은 탈메커니즘 독성을 야기함으로써 유해할 수 있고 잠재적으로 안전성 위험을 제기할 수 있다. Fc 영역을 유전자 조작하여 FcgR 또는 보체 인자에 대한 이들의 결합을 감소시킴으로써 이펙터 기능의 변형이 달성될 수 있다. 활성화 FcgR(FcgRI, FcgRIIa, FcgRIIIa 및 FcgRIIIb) 및 억제성 FcgR(FcgRIIb) 또는 제1 보체 성분(C1q)에 대한 IgG의 결합은 힌지 영역 및 CH2 도메인에 위치한 잔기에 좌우된다. Fc 기능성을 감소 또는 침묵시키기 위해 돌연변이가 IgG1, IgG2 및 IgG4에 도입되어 왔다.
일 실시 형태에서, 항체는 하기 특성들 중 하나 이상을 갖는 Fc 영역을 포함한다: (a) 모체 Fc와 비교할 때 감소된 이펙터 기능; (b) Fcg RI, Fcg RIIa, Fcg RIIb, Fcg RIIIb 및/또는 Fcg RIIIa에 대한 감소된 친화성; (c) FcgRI에 대한 감소된 친화성; (d) FcgRIIa에 대한 감소된 친화성; (e) FcgRIIb에 대한 감소된 친화성; (f) Fcg RIIIb에 대한 감소된 친화성; 또는 (g) FcgRIIIa에 대한 감소된 친화성.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 CD3 특이적 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 IgG 또는 이의 유도체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 CD3 특이적 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 IgG1 또는 이의 유도체이다. 일부 실시 형태에서, 예를 들어, CD3 결합 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 IgG1 항체의 Fc 영역은 그의 Fc 영역 내에 L234A, L235A, 및 F405L 치환을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 CD3 특이적 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 IgG4 또는 이의 유도체이다. 일부 실시 형태에서, 예를 들어, CD3 결합 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 IgG4 항체의 Fc 영역은 그의 Fc 영역 내에 S228P, L234A, L235A, F405L, 및 R409K 치환을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 CD3 특이적 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 인간 T 세포 및/또는 1차 사이노몰거스 T 세포 상의 CD3ε과 결합한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 CD3 특이적 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 인간 CD4+ T 세포 및/또는 1차 사이노몰거스 CD4+ T 세포를 활성화한다.
기재된 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체에 더하여, 기재된 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체를 인코딩할 수 있는 폴리뉴클레오티드 서열이 또한 제공된다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편의 HC1, HC2, LC1 또는 LC2를 인코딩하는 단리된 합성 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공되며, 마찬가지로 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체를 발현하는 세포도 본 명세서에 제공된다. 개시된 벡터를 발현할 수 있는 세포가 또한 기재된다. 이러한 세포는 포유류 세포(예컨대, 293F 세포, CHO 세포), 곤충 세포(예컨대, Sf7 세포), 효모 세포, 식물 세포 또는 세균 세포(예컨대, 대장균)일 수 있다. 기재된 항체는 또한 하이브리도마 세포에 의해 생성될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 세포를 배양함으로써 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편을 생성하기 위한 방법이 제공된다.
GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 또는 항원 결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 추가로 제공된다.
GPRC5D × CD3 다중특이성 항체의 사용 방법
기재된 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 및 이의 다중특이성 항원 결합 단편의 사용 방법이 또한 개시된다. 예를 들어, GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 및 이의 다중특이성 항원 결합 단편은 GPRC5D 발현 암의 치료를 필요로 하는 대상에서 GPRC5D 발현 암의 치료에 유용할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 발현 암은 림프종, 예컨대 다발성 골수종이다.
GPRC5D 발현 암의 치료를 필요로 하는 대상에서 GPRC5D 발현 암을 치료하는 기재된 방법은 기재된 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 또는 이의 다중특이성 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 대상은 포유동물, 바람직하게는 인간이다. 바람직한 실시 형태에서, 암을 앓고 있는 대상을 치료하는 방법이 제공되는데, 본 방법은 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하는 것에 의한다.
암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법이 본 명세서에 추가로 제공되는데, 본 방법은 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하여 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 것에 의한다.
T 세포를 GPRC5D 발현 암 세포로 방향전환시키는 방법이 본 명세서에 추가로 제공되는데, 본 방법은 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하여 T 세포를 암으로 방향전환시키는 것에 의한다.
GPRC5D × CD3 특이적 항체 키트
개시된 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체를 포함하는 키트가 본 명세서에 기재된다. 기재된 키트는 본 명세서에 제공된 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체를 사용하는 방법, 또는 당업자에게 알려진 다른 방법을 수행하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 키트는 본 명세서에 기재된 항체 및 GPRC5D 발현 암을 치료하는데 사용하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 따라서, 기재된 키트는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 다중특이성 항체 또는 이의 다중특이성 항원 결합 단편(들), 및 사용 중이 아닐 때 항체 또는 단편을 담기 위한 용기, 및/또는 항체 또는 단편, 고체 지지체에 부착된 항체 또는 단편, 및/또는 항체 또는 단편의 검출가능하게 표지된 형태의 사용설명서를 포함할 수 있으며, 이는 본 명세서에 기재된 바와 같다.
도 1. 인간 GPRC5D 및 비트랜스펙션된 HEK 293 세포에 대한 선택된 항 GPRC5D mAb의 농도 의존성 결합 프로파일. 3개의 mAb, GC5B36, GC5B168 및 GC5B205도 비트랜스펙션된(GPRC5D 널(null)) HEK293 세포에 결합하는 것으로 관찰되었다.
도 2. 인간 GPRC5D HEK293F 세포에 대한 항 GPCR5D × CD3 이중특이성 항체의 용량 의존적 결합.
도 3. MM1R 및 H929 세포에 대한 이중특이성 항체의 결합 프로파일을, FACS를 사용하여, 과발현된 인간 GPCR5D HEK293 세포 및 비트랜스펙션된 HEK293 세포와 비교하였다.
도 4a 및 도 4b. 인간 GPRC5D 발현 세포에 대한 항 GPCR5D × CD3 항체의 T 세포 매개 세포독성 및 T 세포 활성화.
도 5a 및 도 5b. 사이노 GPRC5D 발현 세포에 대한 항 GPCR5D × CD3 항체의 T 세포 매개 세포독성 및 T 세포 활성화.
도 6a 및 도 6b. GPRC5D × CD3 Ab는 예방적 NSG 마우스 모델에서 H929 세포를 효율적으로 사멸시킨다. GCDB32(6a) 및 GCDB35(6b)는 10 ㎍ 용량에서 완전한 종양 성장 억제를 가져오며, 이때 GCDB32는 또한 1 ㎍ 용량에서 100% 종양 성장 억제를 가능하게 하였다.
도 7a 및 도 7b. Fc 차단제의 부재(7a) 및 존재(7b) 하에서의 효력 비교.
도 8a 내지 도 8d. Fcγ 수용체에 대한 GCDB32, GCDB35, GCDB40 및 GCDB43의 결합.
도 9a 및 도 9b. 하이브리도마 유래 mAb의 FACS 결합 평가.
도 10a 및 도 10b. H929 세포에 대한 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체의 T 세포 매개 세포독성.
도 11a 내지 도 11e. GPRC5D 양성(H929, MM1R, LP1, OPM2) 및 음성 세포주(NALM6)에 대한 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 결합.
도 12a 내지 도 12d. GPRC5DxCD3 이중특이성 Ab는 생체내에서 강력한 종양 억제제이다. 모든 GPRC5D × CD3 이중특이성 Ab(도 12a에 나타낸 GCDB32, 도 12b에 나타낸 GCDB53, 도 12c에 나타낸 GCDB61 및 도 12d에 나타낸 GCDB72)는 10 ㎍ 및 1 ㎍ 용량에서 다발성 골수종 세포(H929) 종양 성장을 완전히 억제하였다. 분화는 0.1 ㎍ 용량에서 관찰되었으며, 이때 GCDB72는 80% 종양 성장 억제를 갖는 것으로 관찰되었다.
도 13. GPRC5D+ MM1.R 세포주를 60분간 다양한 농도의 리드(lead) 항체로 염색하여 표면 결합 프로파일을 측정하였다(n=3). 피코에리트린 표지된 인간 IgG4Fc를 이차 항체로서 사용하여 신호를 포획하였다(서던 바이오테크(Southern Biotech), 클론 HP6025). 결합은 FACS에 의해 측정된 정규화된 기하 평균 형광강도로서 표시된다. 데이터의 그래핑 및 피팅(fitting)을 가변 기울기(4개의 파라미터) 및 최소 제곱 적합법(least square fit method)을 이용한 비선형 회귀를 사용하여 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 6에서 행하였다.
도 14a 및 도 14b. GPRC5D+ 세포주를 60분간 다양한 농도의 FAB6300 및 GC5M481 항체로 염색하여 표면 결합 프로파일을 측정하였다. 피코에리트린 표지된 인간 IgG4Fc를 이차 항체로서 사용하여 신호를 포획하였다(서던 바이오테크, 클론 HP6025). 결합은 히스토그램으로 나타낸다(흑색선은 동종형이고, 적색선은 특정 GPRC5D 항체를 나타낸다(도 14a)). 도 14b는 GPRC5D+ 다발성 골수종 세포주에서의 리드 분자의 결합 패턴을 도시한다. 음영 점선은 동종형 대조군을 나타내고, 실선은 리드 분자 결합을 나타낸다.
도 15a 및 도 15b. 2명의 상이한 MM 환자로부터의 동결 골수 유래 단핵세포를 사용하여 IgG4 동종형 대조군, 형질세포 세포독성 및 T 세포 활성화와 비교하여, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 결합을 평가하였다. 세포독성 분석을 위해, 정상적인 건강한 공여자로부터의 T 세포를 외부로부터 환자의 BM MNC 샘플에 첨가하여, 48시간 동안 4개의 리드 분자와 함께 인큐베이션하였다. GPRC5D × CD3 이중특이성 항체는 모든 공여자 샘플에 용량 의존적으로 형질세포에 결합하고, 평균 형광 강도를 Y축 상에 기록하였다. GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 처리에 반응한 T 세포 상에서의 CD25의 동시 상향조절 및 살아있는 형질세포(CD138+)의 소실에 주목한다.
도 16. NSG 마우스에게 0일째에 MM.1S 인간 다발성 골수종 세포를 피하 이식하였다. 인간 PBMC를 연구 7일째에 정맥내에 접종시켰다. PBS, GCDB72(0.1 ㎍, 1 ㎍, 10 ㎍ 및 50 ㎍/동물(각각, 0.005, 0.05, 0.5 및 2.5 mg/㎏에 상당함)) 및 널 대조군 항체를 15, 18, 22, 24, 29, 32 및 36일째에 정맥내 투여하였다. 피하 종양을 주 2회 측정하였으며, 결과는 각각의 그룹의 ㎣ ± SEM으로 나타낸 평균 종양 용적으로 제시되었다. 1 ㎍(0.05 mg/㎏)으로 투여할 때의 GCDB72 항체 치료는 PBS와 비교하여 sc 종양 성장을 유의하게 억제하였다(TGI=64%, p≤0.0001). 10 ㎍/동물(0.5 mg/㎏)및 50 ㎍/동물(2.5 mg/㎏)의 GCDB72 용량이 종양 성장을 완전 퇴축시켰다(p ≤ 0.0001). 널 대조군 항체는 무시해도 될 정도이거나 효과가 없었다. 그래프패드 프리즘 소프트웨어(버전 6)를 사용하여, 터키 다중 비교 시험(Tukey's multiple comparisons test)을 이용한 다중 비교와 함께 이원분산분석(2-way ANOVA)을 사용하여 통계적 유의성을 평가하였다. 확률값(p)이 0.05 이하일 때 그룹 간의 차이가 유의한 것으로 간주되었다.
도 17. NSG에게 0일째에 MM.1S 인간 다발성 골수종 세포를 피하 이식하였다. 인간 PBMC를 연구 7일째에 정맥내에 접종시켰다. PBS, GCDB72(0.1 ㎍, 1 ㎍, 10 ㎍ 및 50 ㎍/동물(각각, 0.005, 0.05, 0.5 및 2.5 mg/㎏에 상당함)) 및 널 대조군 항체를 15, 18, 22, 24, 29, 32 및 36일째에 정맥내 투여하였다. 체중은 치료 개시부터 연구 종료까지의 절대 체중으로 표시된다.
정의
발명을 실시하기 위한 구체적인 내용의 측면과 관련된 다양한 용어가 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용된다. 달리 지시되지 않는 한, 이러한 용어는 본 기술 분야에서의 이의 통상적인 의미로 주어져야 한다. 다른 구체적으로 정의된 용어는 본 명세서에 제공된 정의와 일치하는 방식으로 해석된다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수형("a", "an" 및 "the")은 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "세포"에 대한 언급은 2개 이상의 세포의 조합 등을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 측정가능한 값, 예컨대 양, 시간적 지속기간 등을 지칭할 때 용어 "약"은 지정된 값으로부터 최대 ±10%의 변동을 포함함을 의미하는데, 이러한 변동은 개시된 방법을 수행하기에 적절하기 때문이다. 달리 지시되지 않는 한, 본 명세서 및 청구범위에 사용되는 성분의 양, 특성, 예컨대 분자량, 반응 조건 등을 표현하는 모든 수는 모든 경우에 용어 "약"에 의해 수식된 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 반대로 나타내지 않는 한, 하기의 명세서 및 첨부된 청구범위에 기재된 수치 파라미터는 근사치로, 이는 본 발명에 의해 얻고자 하는 원하는 특성에 따라 변동될 수 있다. 적어도, 그리고 청구범위의 범주와 동등한 원칙의 응용을 제한하려는 시도로서가 아니라, 각각의 수치 파라미터는 적어도, 보고된 유효 숫자의 개수를 고려하여 그리고 통상적인 반올림 기법을 적용함으로써 해석되어야 한다.
본 발명의 넓은 범주를 나타내는 수치 범위 및 파라미터가 근사치임에도 불구하고, 구체적인 실시예에 기재된 수치들은 가능한 한 정확하게 기록하였다. 그러나, 임의의 수치는 그들 각자의 시험 측정에서 발견되는 표준 편차로부터 반드시 유래하는 소정의 오차를 본질적으로 포함한다.
"단리된"은 생물학적 성분(예컨대, 핵산, 펩티드 또는 단백질)이, 그러한 성분이 천연 발생하는 유기체의 다른 생물학적 성분들, 즉 다른 염색체 및 염색체외 DNA 및 RNA, 및 단백질로부터 실질적으로 분리되거나, 따로 생성되거나, 또는 따로 정제되었음을 의미한다. 따라서, "단리된" 핵산, 펩티드 및 단백질은 표준 정제 방법에 의해 정제된 핵산 및 단백질을 포함한다. "단리된" 핵산, 펩티드 및 단백질은 조성물의 일부일 수 있고, 그러한 조성물이 핵산, 펩티드, 또는 단백질의 천연 환경의 일부가 아닌 경우 여전히 단리될 수 있다. 이 용어는 또한 숙주 세포에서의 재조합 발현에 의해 제조된 핵산, 펩티드 및 단백질뿐만 아니라 화학적으로 합성된 핵산도 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "단리된" 항체 또는 항원 결합 단편은 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체 또는 항원 결합 단편이 실질적으로 없는 항체 또는 항원 결합 단편을 지칭하고자 한다(예를 들어, GPRC5D에 특이적으로 결합되는 단리된 항체에는 GPRC5D 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). 그러나, GPRC5D의 에피토프, 아이소형 또는 변이체에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는, 예를 들어 다른 종 유래의 다른 관련 항원(예컨대, GPRC5D 종 상동체)에 대한 교차 반응성을 가질 수 있다.
"폴리뉴클레오티드" - 동의어로 "핵산 분자", "뉴클레오티드" 또는 "핵산"으로 지칭됨 - 는 임의의 폴리리보뉴클레오티드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오티드를 지칭하며, 이는 비변형된 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있다. "폴리뉴클레오티드"는, 제한 없이, 단일- 및 이중-가닥 DNA, 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 DNA, 단일- 및 이중-가닥 RNA, 및 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 RNA, 단일-가닥, 또는 더 전형적으로는 이중-가닥 또는 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하는 혼성(hybrid) 분자를 포함한다. 게다가, "폴리뉴클레오티드"는 RNA 또는 DNA 또는 RNA 및 DNA 둘 모두를 포함하는 삼중-가닥 영역을 지칭한다. 용어 폴리뉴클레오티드는 또한 하나 이상의 변형된 염기를 함유하는 DNA 또는 RNA, 및 안정성 또는 다른 이유로 골격이 변형된 DNA 또는 RNA를 포함한다. "변형된" 염기는, 예를 들어 트리틸화(tritylated) 염기 및 통상이 아닌 염기, 예컨대 이노신을 포함한다. DNA 및 RNA에 대해 다양한 변형이 이루어질 수 있으며; 이에 따라, "폴리뉴클레오티드"는 천연에서 전형적으로 발견되는 바와 같은 화학적으로, 효소적으로 또는 대사적으로 변형된 형태의 폴리뉴클레오티드뿐만 아니라, 바이러스 및 세포에 특징적인 화학적 형태의 DNA 및 RNA도 포함한다. "폴리뉴클레오티드"는, 종종 올리고뉴클레오티드로 지칭되는 비교적 짧은 핵산 쇄를 또한 포함한다.
"실질적으로 동일한"이라는 의미는 그 용어가 사용되는 문맥에 따라 상이할 수 있다. 중쇄 및 경쇄, 그리고 그들을 인코딩하는 유전자 중에서 존재할 가능성이 높은 천연 서열 변이로 인해, 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편을 인코딩하는 아미노산 서열 또는 유전자 내에는 약간의 수준의 변이가 발견될 것으로 예측될 것인데, 이때 이러한 변이는 그들의 고유 결합 특성(예를 들어, 특이성 및 친화도)에 대해 거의 또는 전혀 영향을 주지 않는다. 그러한 예측은 유전자 코드의 축퇴성뿐만 아니라, 보존적 아미노산 서열 변이의 진화적 성공에도 부분적으로 기인되는데, 이때 이는 인코딩된 단백질의 성질을 크게 변경시키지 않는다. 따라서, 핵산 서열과 관련하여, "실질적으로 동일한"은 2개 이상의 서열들 사이의 적어도 65% 동일성을 의미한다. 바람직하게는, 이 용어는 2개 이상의 서열들 사이의 적어도 70% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 75% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 80% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 85% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 90% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 91% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 92% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 93% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 94% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 95% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 96% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 97% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 98% 동일성, 그리고 더 바람직하게는 적어도 99% 또는 그 이상의 동일성을 지칭한다. 2개의 서열들 사이의 퍼센트 동일성은 서열들에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수(즉, % 상동성 = 동일한 위치의 수/위치의 총수 × 100)이며, 이때 2개의 서열의 최적의 정렬을 위해 도입되어야 할 필요가 있는 갭(gap)의 수, 및 각각의 갭의 길이를 고려한다. 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열들 사이의 퍼센트 동일성은, 예를 들어, PAM120 가중치 잔기(weight residue) 표, 12의 갭 길이 페널티 및 4의 갭 페널티를 사용하여, ALIGN 프로그램(버전 2.0) 내로 포함된 문헌[E. Meyers and W. Miller, Comput. Appl. Biosci 4, 11-17 (1988)]의 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다. 게다가, 2개의 아미노산 서열들 사이의 퍼센트 동일성은 문헌[Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48, 444-453 (1970)]의 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다.
단백질 기능에 대해 실질적인 영향을 주지 않고서 단백질의 아미노산 서열 내에서 일어날 수 있는 변이의 정도는 핵산 서열의 변이의 정도보다 훨씬 더 낮은데, 동일한 축퇴성 원리가 아미노산 서열에는 적용되지 않기 때문이다. 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편과 관련하여, "실질적으로 동일한"은 기재된 항체 또는 항원 결합 단편과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 항체 또는 항원 결합 단편을 의미한다. 다른 실시 형태는, 프레임워크, 스캐폴드, 또는 본 명세서에 기재된 항체 및 항원 결합 단편과 상당한 동일성을 공유하지 않고, 본 명세서에 기재된 그러한 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 결합을 제공하는 데 필요한 하나 이상의 CDR 또는 다른 서열을 포함하는 다른 비결합 영역을 갖는 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. "벡터"는 레플리콘, 예컨대 플라스미드, 파지, 코스미드, 또는 바이러스이며, 이것 내에 다른 핵산 절편이 작동가능하게 삽입되어 절편의 복제 또는 발현을 일으키도록 할 수 있다.
"클론"은 단세포 또는 공통된 조상으로부터 유사분열에 의해 유래된 세포들의 집단이다. "세포주"는 많은 세대 동안 시험관내에서 안정한 성장이 가능한 1차 세포의 클론이다. 본 명세서에 제공된 일부 예에서는, 세포를 DNA로 형질감염시킴으로써 세포가 형질전환된다.
용어 "발현하다" 및 "생성하다"는 본 명세서에서 동의어로 사용되고, 유전자 산물의 생합성을 지칭한다. 이들 용어는 RNA로의 유전자의 전사를 포함한다. 이들 용어는 또한 하나 이상의 폴리펩티드로의 RNA의 번역을 포함하고, 모든 천연 발생 전사 후 및 번역 후 변형을 추가로 포함한다. 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 발현 또는 생성은 세포의 세포질 내에서 행해지거나, 또는 세포외 환경, 예컨대 세포 배양의 성장 배지 내로 행해질 수 있다.
용어 "치료하는" 또는 "치료"는 손상, 병리 또는 상태의 약화 또는 개선의 임의의 성공 또는 성공 징후를 지칭하는 것으로, 이에는 증상의 감퇴, 관해, 감소와 같은, 또는 상태를 환자가 더 참을 수 있게 하거나, 퇴화 또는 저하 속도를 늦추거나, 퇴화의 최종점을 덜 쇠약하게 하거나, 대상의 신체적 또는 정신적 웰빙(well-being)을 개선하거나, 생존 기간을 연장시키는, 임의의 객관적 또는 주관적 파라미터가 포함된다. 치료는 신체 검사, 신경학적 검사, 또는 정신 감정의 결과를 포함한 객관적 또는 주관적 파라미터에 의해 평가될 수 있다.
"유효량" 또는 "치료적 유효량"은 필요한 투여량에서 그리고 필요한 시간 동안 원하는 치료적 결과를 달성하는 데 유효한 양을 지칭한다. GPRC5D × CD3 항체의 치료적 유효량은 개체의 질병 상태, 연령, 성별, 및 체중, 그리고 항체가 개체에서 원하는 반응을 유도하는 능력과 같은 인자들에 따라 변동될 수 있다. 또한, 치료적 유효량은 항체 또는 항체 부분의 임의의 독성 효과 또는 유해 효과보다 치료적으로 유익한 효과가 더 큰 것이다.
달리 명시되지 않는 한, "항체"는 다양한 단량체 형태, 중합체 형태 및 키메라 형태를 포함하는 면역글로불린의 모든 동종형(IgG, IgA, IgE, IgM, IgD 및 IgY)을 지칭한다. 구체적으로, 용어 "항체"에는 다중클론 항체, 단일클론 항체(mAb) 및 항체-유사 폴리펩티드, 예컨대 키메라 항체 및 인간화 항체가 포함된다.
"항원 결합 단편"은 특정 항원에 대해 결합 친화성을 나타낼 수 있는 임의의 단백질성 구조(proteinaceous structure)이다. 항원 결합 단편에는 임의의 알려진 기법, 예컨대 효소에 의한 절단, 펩티드 합성 및 재조합 기법에 의해 제공된 것들이 포함된다. 일부 항원 결합 단편은 모 항체 분자의 항원 결합 특이성을 보유하는 손상되지 않은(intact) 항체의 일부분으로 구성된다. 예를 들어, 항원 결합 단편은 특정 항원과 결합하는 것으로 알려진 항체의 적어도 하나의 가변 영역(중쇄 또는 경쇄 가변 영역) 또는 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있다. 적절한 항원 결합 단편의 예에는, 제한 없이, 다이아바디(diabody) 및 단일쇄 분자뿐만 아니라, Fab, F(ab')2, Fc, Fabc, 및 Fv 분자, 단일쇄(Sc) 항체, 개별 항체 경쇄, 개별 항체 중쇄, 항체 쇄 또는 CDR과 다른 단백질, 단백질 스캐폴드 사이의 키메라 융합, 중쇄 단량체 또는 이량체, 경쇄 단량체 또는 이량체, 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄로 이루어진 이량체, VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편, 또는 국제 특허 출원 공개 WO2007059782호에 기재된 바와 같은 1가 항체, 힌지 영역에서 이황화물 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편, VH 및 CH1 도메인으로 본질적으로 이루어진 Fd 단편; 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 본질적으로 이루어진 Fv 단편, dAb 단편(문헌[Ward et al., Nature 341, 544-546 (1989)]) - 이는 VH 도메인으로 본질적으로 이루어지고, 도메인 항체로도 불림(문헌[Holt et al; Trends Biotechnol. 2003 Nov.; 21(11):484-90]); 카멜리드(camelid) 또는 나노바디(nanobody)(문헌[Revets et al; Expert Opin Biol Ther. 2005 Jan.; 5(1):111-24]); 단리된 상보성 결정 영역(CDR) 등도 포함한다. 모든 항체 동종형이 항원 결합 단편을 생성하는 데 사용될 수 있다. 추가적으로, 항원 결합 단편은 주어진 관심 항원에 대해 친화성을 부여하는 배향으로 폴리펩티드 세그먼트를 성공적으로 도입할 수 있는 비항체 단백질성 프레임워크, 예컨대 단백질 스캐폴드를 포함할 수 있다. 항원 결합 단편은 재조합적으로 생성되거나 손상되지 않은 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있다. 어구 "항체 또는 이의 항원 결합 단편"은 주어진 항원 결합 단편이 이 어구에 언급된 항체의 하나 이상의 아미노산 세그먼트를 포함함을 나타내기 위해 사용될 수 있다.
용어 "CDR" 및 이의 복수 "CDRs"는 3개가 경쇄 가변 영역(CDRL1, CDRL2 및 CDRL3)의 결합 특성을 구성하고, 3개가 중쇄 가변 영역(CDRH1, CDRH2 및 CDRH3)의 결합 특성을 구성하는 상보성 결정 영역(CDR)을 말한다. CDR은 항체 분자의 기능 활성에 기여하며, 스캐폴딩 또는 프레임워크 영역을 포함하는 아미노산 서열에 의해 분리된다. 정확한 정의의 CDR 경계 및 길이는 다양한 분류 및 넘버링 시스템에 따른다. 따라서, CDR은 카밧(Kabat), 초티아(Chothia)에 의해, 접촉 또는 임의의 다른 경계 정의로 지칭될 수 있다. 상이한 경계에도 불구하고, 이들 시스템 각각은 가변 서열 내에서 소위 "초가변 영역"을 구성하는 부분에서 어느 정도 중첩된다. 따라서, 이들 시스템에 따른 CDR 정의는 인접한 프레임워크 영역에 대하여 길이 및 경계 영역이 상이할 수 있다. 예를 들어, 각각 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함되는 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed. NIH Publication No. 91-3242 (1991)]; 문헌[Chothia et al., "Canonical Structures For the Hypervariable Regions of Immunoglobulins," J. Mol. Biol. 196:901 (1987)]; 및 문헌[MacCallum et al., "Antibody-Antigen Interactions: Contact Analysis and Binding Site Topography," J. Mol. Biol. 262:732 (1996)]을 참조한다.
전형적으로, CDR은 표준 구조(canonical structure)로서 분류될 수 있는 루프 구조를 형성한다. 용어 "표준 구조"는 항원 결합(CDR) 루프에 의해 채택되는 주쇄 형태를 지칭한다. 비교 구조 연구로부터, 6개의 항원 결합 루프 중 5개가 이용가능한 형태의 제한된 레퍼토리만을 갖는 것으로 밝혀졌다. 각각의 표준 구조는 폴리펩티드 골격의 비틀림각으로 특징지어질 수 있다. 따라서, 항체 사이의 상응하는 루프는 대부분의 루프 부분에서 높은 아미노산 서열 변화에도 불구하고, 매우 유사한 3차원 구조를 가질 수 있다(문헌[Chothia et al., "Canonical Structures For the Hypervariable Regions of Immunoglobulins," J. Mol. Biol. 196:901 (1987)]; 문헌[Chothia et al., "Conformations of Immunoglobulin Hypervariable Regions," I 342:877 (1989)]; 문헌[Martin and Thornton, "Structural Families in Loops of Homologous Proteins: Automatic Classification, Modelling and Application to Antibodies," J. Mol. Biol. 263:800 (1996)], 각각 전체적으로 참고로 포함됨). 또한, 채택된 루프 구조와 이를 둘러싸는 아미노산 서열 사이에는 관계가 있다. 특정 표준 클래스의 형태는 루프의 길이와, 루프 내 뿐만 아니라 보존된 프레임워크(즉, 루프 외부) 내의 주요 위치에 존재하는 아미노산 잔기에 의해 결정된다. 따라서, 특정 표준 클래스에 대한 할당은 이러한 주요 아미노산 잔기의 존재에 기초하여 이루어질 수 있다.
용어 "폴리펩티드"는 용어 "단백질"과 상호교환적으로 사용되며, 이의 가장 넓은 의미에서는 둘 이상의 서브유닛 아미노산, 아미노산 유사체 또는 펩티드 모방체(peptidomimetic)의 화합물을 말한다. 서브유닛은 펩티드 결합에 의해 연결될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 서브유닛은 다른 결합, 예를 들어 에스테르, 에테르 등에 의해 연결될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 용어 "아미노산"은 글리신과 D 및 L 광학 이성질체를 포함하는 천연 및/또는 비천연 또는 합성 아미노산, 아미노산 유사체 및 펩티드 모방체를 지칭한다. 3개 이상의 아미노산의 펩티드는 펩티드 쇄가 짧은 경우 올리고펩티드로 통상 불린다. 펩티드 쇄가 긴 경우, 펩티드는 통상 폴리펩티드 또는 단백질로 불린다.
항체 또는 항체 단편과 관련하여 사용될 때, "특이적으로 결합하는" 또는 "특이적으로 결합한다" 또는 이들의 파생어는, 혼합된 분자 집단을 함유하는 샘플 중의 다른 분자에 우선적으로 결합하지 않고서, 면역글로불린 유전자 또는 면역글로불린 유전자의 단편에 의해 인코딩된 도메인을 통한 관심 단백질의 하나 이상의 에피토프에 대한 결합을 나타낸다. 전형적으로, 항체는 표면 플라즈몬 공명 검정 또는 세포 결합 검정에 의해 측정될 때 약 1×10-8 M 미만의 Kd로 동종 항원에 결합한다. "[항원] 특이적" 항체(예를 들어, GPRC5D 특이적 항체)와 같은 어구는 언급된 항체가 언급된 항원에 특이적으로 결합함을 나타내고자 한다.
"폴리뉴클레오티드" - 동의어로 "핵산 분자", "뉴클레오티드" 또는 "핵산"으로 지칭됨 - 는 임의의 폴리리보뉴클레오티드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오티드를 지칭하며, 이는 비변형된 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있다. "폴리뉴클레오티드"는, 제한 없이, 단일- 및 이중-가닥 DNA, 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 DNA, 단일- 및 이중-가닥 RNA, 및 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 RNA, 단일-가닥, 또는 더 전형적으로는 이중-가닥 또는 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하는 혼성(hybrid) 분자를 포함한다. 게다가, "폴리뉴클레오티드"는 RNA 또는 DNA 또는 RNA 및 DNA 둘 모두를 포함하는 삼중-가닥 영역을 지칭한다. 용어 폴리뉴클레오티드는 또한 하나 이상의 변형된 염기를 함유하는 DNA 또는 RNA, 및 안정성 또는 다른 이유로 골격이 변형된 DNA 또는 RNA를 포함한다. "변형된" 염기는, 예를 들어 트리틸화(tritylated) 염기 및 통상이 아닌 염기, 예컨대 이노신을 포함한다. DNA 및 RNA에 대해 다양한 변형이 이루어질 수 있으며; 이에 따라, "폴리뉴클레오티드"는 천연에서 전형적으로 발견되는 바와 같은 화학적으로, 효소적으로 또는 대사적으로 변형된 형태의 폴리뉴클레오티드뿐만 아니라, 바이러스 및 세포에 특징적인 화학적 형태의 DNA 및 RNA도 포함한다. "폴리뉴클레오티드"는, 종종 올리고뉴클레오티드로 지칭되는 비교적 짧은 핵산 쇄를 또한 포함한다.
"벡터"는 레플리콘, 예컨대 플라스미드, 파지, 코스미드, 또는 바이러스이며, 이것 내에 다른 핵산 절편이 작동가능하게 삽입되어 절편의 복제 또는 발현을 일으키도록 할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 용어 "숙주 세포"는 임의의 유형의 세포, 예를 들어 초대 세포, 배양 세포 또는 세포주 유래 세포일 수 있다. 특정 실시 형태에서, 용어 "숙주 세포"는 핵산 분자로 트랜스펙션된 세포 및 이러한 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 지칭한다. 이러한 세포의 자손은 예를 들어, 후속 세대에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향 또는 숙주 세포 게놈으로의 핵산 분자의 통합으로 인해 핵산 분자로 트랜스펙션된 모세포와 동일하지 않을 수 있다. 용어 "발현" 및 "생성"은 본 명세서에서 동의어로 사용되고, 유전자 산물의 생합성을 지칭한다. 이들 용어는 RNA로의 유전자의 전사를 포함한다. 이들 용어는 또한 하나 이상의 폴리펩티드로의 RNA의 번역을 포함하고, 모든 천연 발생 전사 후 및 번역 후 변형을 추가로 포함한다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 발현 또는 생성은 세포의 세포질 내에서 행해지거나, 또는 세포외 환경, 예컨대 세포 배양의 성장 배지 내로 행해질 수 있다. "실질적으로 동일한"이라는 의미는 그 용어가 사용되는 문맥에 따라 상이할 수 있다. 중쇄 및 경쇄, 그리고 그들을 인코딩하는 유전자 중에서 존재할 가능성이 높은 천연 서열 변이로 인해, 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편을 인코딩하는 아미노산 서열 또는 유전자 내에는 약간의 수준의 변이가 발견될 것으로 예측될 것인데, 이때 이러한 변이는 그들의 고유 결합 특성(예를 들어, 특이성 및 친화도)에 대해 거의 또는 전혀 영향을 주지 않는다. 그러한 예측은 유전자 코드의 축퇴성뿐만 아니라, 보존적 아미노산 서열 변이의 진화적 성공에도 부분적으로 기인되는데, 이때 이는 인코딩된 단백질의 성질을 크게 변경시키지 않는다. 따라서, 핵산 서열과 관련하여, "실질적으로 동일한"은 2개 이상의 서열들 사이의 적어도 65% 동일성을 의미한다. 바람직하게는, 이 용어는 2개 이상의 서열들 사이의 적어도 70% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 75% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 80% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 85% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 90% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 91% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 92% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 93% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 94% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 95% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 96% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 97% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 98% 동일성, 그리고 더 바람직하게는 적어도 99% 또는 그 이상의 동일성을 지칭한다. 2개의 서열들 사이의 퍼센트 동일성은 서열들에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수(즉, % 상동성 = 동일한 위치의 수/위치의 총수 × 100)이며, 이때 2개의 서열의 최적의 정렬을 위해 도입되어야 할 필요가 있는 갭(gap)의 수, 및 각각의 갭의 길이를 고려한다. 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열들 사이의 퍼센트 동일성은, 예를 들어, PAM120 가중치 잔기(weight residue) 표, 12의 갭 길이 페널티 및 4의 갭 페널티를 사용하여, ALIGN 프로그램(버전 2.0) 내로 포함된 문헌[E. Meyers and W. Miller, Comput. Appl. Biosci 4, 11-17 (1988)]의 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다. 게다가, 2개의 아미노산 서열들 사이의 퍼센트 동일성은 문헌[Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48, 444-453 (1970)]의 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다.
단백질 기능에 대해 실질적인 영향을 주지 않고서 단백질의 아미노산 서열 내에서 일어날 수 있는 변이의 정도는 핵산 서열의 변이의 정도보다 훨씬 더 낮은데, 동일한 축퇴성 원리가 아미노산 서열에는 적용되지 않기 때문이다. 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편과 관련하여, "실질적으로 동일한"은 기재된 항체 또는 항원 결합 단편과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 항체 또는 항원 결합 단편을 의미한다. 다른 실시 형태는, 프레임워크, 스캐폴드, 또는 본 명세서에 기재된 항체 및 항원 결합 단편과 상당한 동일성을 공유하지 않고, 본 명세서에 기재된 그러한 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 결합을 제공하는 데 필요한 하나 이상의 CDR 또는 다른 서열을 포함하는 다른 비결합 영역을 갖는 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다.
용어 "대상"은 인간 및 비인간 동물을 지칭하며, 모든 척추동물, 예를 들어 포유동물 및 비포유동물, 예컨대 비인간 영장류, 마우스, 토끼, 양, 개, 고양이, 말, 소, 닭, 양서류, 및 파충류가 포함된다. 기재된 방법의 많은 실시 형태에서, 대상은 인간이다.
본 명세서에 사용되는 용어 "방향전환" 또는 "방향전환시키는"은, GPRC5D × CD3 항체가 그의 고유 동종 특이성으로부터 GPRC5D 발현 세포에 대한 반응성을 향해, T 세포의 활성을 효과적으로 트래픽하는 능력을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "샘플"은 대상으로부터 단리된, 유사한 체액, 세포, 또는 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검 - 미세 바늘 흡인물을 포함함)의 수집물뿐만 아니라, 대상 내에 존재하는 체액, 세포, 또는 조직도 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 체액이다. 체액은 전형적으로 생리적 온도에서 액체이고, 대상 또는 생물학적 공급원에 존재하거나, 그로부터 적출되거나, 발현되거나 달리 추출되는 천연 유래 체액을 포함할 수 있다. 소정의 체액은 특정 조직, 기관 또는 국부 영역으로부터 유래되고, 소정의 다른 체액은 대상 또는 생물학적 공급원 내에 더 전체적으로 또는 전신적으로 위치될 수 있다. 체액의 예에는 혈액, 혈청 및 장막액(serosal fluid), 혈장, 림프, 소변, 타액, 낭액(cystic fluid), 눈물, 대변, 가래, 분비성 조직 및 기관의 점막 분비물, 질 분비물, 복수, 예컨대 비고형 종양과 관련된 것들, 흉막액, 심막액, 복막액, 복부액 및 기타 체강액, 기관지 세척에 의해 수집된 체액 등이 포함된다. 체액은 또한 대상 또는 생물학적 공급원과 접촉된 용액, 예를 들어, 세포 및 기관 배양 배지 - 세포 또는 기관 컨디셔닝된 배지를 포함함 -, 세척액 등을 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 용어 "샘플"은 대상으로부터 적출된 물질 또는 대상에 존재하는 물질을 포함한다.
"기지 표준물"은 기지량 또는 기지 농도의 GPRC5D를 갖는 용액일 수 있으며, 여기서 이 용액은 천연 발생 용액, 예컨대 초기, 중기, 말기, 진행성, 또는 정지(static) 암을 갖는 것으로 알려진 환자로부터의 샘플일 수 있거나, 이 용액은 합성 용액, 예컨대 기지량의 GPRC5D가 희석된 완충수일 수 있다. 본 명세서에 기재된 기지 표준물은 대상으로부터 단리된 GPRC5D, 재조합 또는 정제된 GPRC5D 단백질, 또는 질병 상태와 관련된 GPRC5D 농도의 값을 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 용어 "G 단백질 결합 수용체 패밀리 C 그룹 5번 구성원 D" 및 "GPRC5D"는 구체적으로, 예를 들어, 젠뱅크(GenBank) 수탁 번호 BC069341, NCBI 참조 서열: NP_061124.1 및 UniProtKB/Swiss-Prot 수탁 번호 Q9NZD1에 기재된 바와 같은 인간 GPRC5D 단백질을 포함한다(또한 문헌[Brauner-Osborne, H. et al. 2001, Biochim. Biophys. Acta 1518, 237-248] 참조).
용어 "CD3"는 인간 CD3 단백질 멀티서브유닛(multi-subunit) 복합체를 지칭한다. CD3 단백질 멀티서브유닛 복합체는 6개의 독특한 폴리펩티드 쇄로 구성된다. 이들은 CD3γ 쇄(SwissProt P09693), CD3δ 쇄(SwissProt P04234), 2개의 CD3ε 쇄(SwissProt P07766), 및 하나의 CD3ζ 쇄 동종이량체(SwissProt 20963) - 그리고 이는 T 세포 수용체 α 및 β 쇄와 관련됨 - 를 포함한다. 달리 기재되지 않는 한, 용어 "CD3"는 임의의 CD3 변이체, 아이소형(isoform) 및 종 상동체(species homolog)를 포함하는데, 이는 세포(T 세포를 포함함)에 의해 천연 발현되거나, 이러한 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자 또는 cDNA로 형질감염된 세포 상에서 발현될 수 있다.
"GPRC5D × CD3 항체"는 다중특이성 항체, 임의로 이중특이성 항체이며, 이중특이성 항체는 2개의 상이한 항원 결합 영역을 포함하는데, 이들 중 하나는 항원 GPRC5D에 특이적으로 결합하고, 이들 중 하나는 CD3에 특이적으로 결합한다. 다중특이성 항체는 이중특이성 항체, 다이아바디, 또는 유사한 분자일 수 있다(예를 들어, 다이아바디에 대한 설명에 관해서는 문헌[PNAS USA 90(14), 6444-8 (1993)]을 참조한다). 본 명세서에 제공된 이중특이성 항체, 다이아바디 등은 GPRC5D의 일부분에 더하여 임의의 적절한 표적과 결합할 수 있다. 용어 "이중특이성 항체"는 상이한 항체 서열에 의해 한정된 2개의 상이한 항원 결합 영역을 갖는 항체로서 이해되어야 한다. 이는 상이한 표적 결합으로서 이해될 수 있지만, 하나의 표적 내의 상이한 에피토프들에 대한 결합도 마찬가지로 포함한다.
"참조 샘플"은 다른 샘플, 예컨대 시험 샘플과 대비될 수 있는 샘플인데, 이러한 대비는 비교된 샘플의 특성화를 가능하게 한다. 참조 샘플은 시험 샘플과의 비교를 위한 기초로서의 역할을 하는 일부 특성화된 특성을 가질 것이다. 예를 들어, 참조 샘플은 암을 앓고 있는 대상을 나타내는 GPRC5D 수준에 대한 벤치마크로서 사용될 수 있다. 참조 샘플은 반드시 시험 샘플과 동시에 분석되어야 하는 것은 아니며, 이에 따라 일부 경우에, 참조 샘플은 주어진 조건을 특성화하도록 미리 결정된 수치 또는 수치 범위, 예컨대 대상에서 암을 나타내는 GPRC5D 수준일 수 있다. 이 용어는 또한 생리적 상태 또는 질병 상태, 예컨대 GPRC5D 발현 암과 관련된 것으로 알려져 있지만 미지량의 GPRC5D를 갖는, 비교 목적으로 사용되는 샘플을 포함한다.
GPRC5D 발현 암의 진행과 관련하여 사용되는 용어 "진행"은 덜 심각한 상태로부터 더 심각한 상태로의 암의 변화를 포함한다. 이는 종양의 수 또는 중증도, 전이 정도, 암이 성장하거나 퍼지는 속도 등의 증가를 포함할 수 있다. 예를 들어, "결장암의 진행"은 덜 심각한 상태로부터 더 심각한 상태로의 그러한 암의 진행, 예컨대 I 기로부터 II 기로의 진행, II 기로부터 III 기로의 진행 등을 포함한다.
GPRC5D 발현 암의 퇴행과 관련하여 사용되는 용어 "퇴행"은 더 심각한 상태로부터 덜 심각한 상태로의 암의 변화를 포함한다. 이는 종양의 수 또는 중증도, 전이 정도, 암이 성장하거나 퍼지는 속도 등의 감소를 포함할 수 있다. 예를 들어, "결장암의 퇴행"은 더 심각한 상태로부터 덜 심각한 상태로의 그러한 암의 퇴행, 예컨대 III 기로부터 II 기로의 진행, II 기로부터 I 기로의 진행 등을 포함한다.
안정된 GPRC5D 발현 암과 관련하여 사용되는 용어 "안정된"은 진행성 암 또는 퇴행성 암인 것으로 간주되기까지 임상적으로 관련된 기간에 걸쳐 충분히 상당히 변화되지 않거나 변화되어 오지 않은 질병 상태를 기재하고자 한다.
본 명세서에 기재된 실시 형태는 특정 방법, 시약, 화합물, 조성물 또는 생물학적 시스템으로 제한되지 않으며, 이들은 물론 다양할 수 있다.
GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편
GPRC5D에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편이 본 명세서에 기재된다. 항체 분자의 일반적 구조는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항원 결합 도메인, 및 보체 결합(complement fixation) 및 항체 수용체에 대한 결합을 포함한 다양한 기능을 제공하는 Fc 도메인을 포함한다.
기재된 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 모든 동종형, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM, 및 4쇄 면역글로불린 구조의 합성 다량체를 포함한다. 기재된 항체 또는 항원 결합 단편은 또한 암탉 또는 칠면조 혈청 및 암탉 또는 칠면조 난황에서 일반적으로 발견되는 IgY 동종형을 포함한다.
GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 재조합 수단에 의해 임의의 종으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편은 마우스, 래트, 염소, 말, 돼지, 소, 닭, 토끼, 낙타과, 당나귀, 인간, 또는 이들의 키메라 버전일 수 있다. 인간에 대한 투여에 사용하기 위하여, 비인간 유래 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 환자에게 투여 시 더 적은 항원성을 나타내도록 유전자적으로 또는 구조적으로 변경될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 키메라 항체 또는 항원 결합 단편이다. 본 명세서에 사용되는 용어 "키메라"는 인간 이외의 포유동물, 설치류 또는 파충류의 항체 아미노산 서열로부터 유래되는 적어도 하나의 가변 도메인의 적어도 일부분을 가지면서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 나머지 부분은 인간으로부터 유래되는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 인간화 항체이다. 인간화 항체는 인간 이외의 면역글로불린으로부터 유래되는 최소한의 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이들의 단편(예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 항원 결합 하위서열)일 수 있다. 대부분, 인간화 항체는, 수령자의 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화도, 및 능력(capacity)을 갖는 비인간 종(공여 항체), 예컨대 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기에 의해 대체된 인간 면역글로불린(수령 항체)이다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나, 그리고 전형적으로는 2개의, 실질적으로 모든 가변 도메인을 포함할 것이며, 이때 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 인간 이외의 면역글로불린의 것들에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크 영역은 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로는 인간 면역글로불린의 것의 적어도 일부분을 포함할 수 있다.
본 명세서에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편은 다양한 형태로 존재할 수 있지만, 표 1에 나타낸 항체 CDR들 중 하나 이상을 포함할 것이다.
GPRC5D에 면역특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 항원 결합 단편이 본 명세서에 기재된다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG 또는 이의 유도체이다. 본 명세서에 예시된 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 항체 또는 항원 결합 단편이지만, 예시된 항체 또는 항원 결합 단편은 키메라화될(chimerized) 수 있다.
일부 실시 형태에서는, 표 1에 기재된 항체들 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3를 포함하는 중쇄를 포함하는 GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다. 일부 실시 형태에서는, 표 1에 기재된 항체들 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3를 포함하는 중쇄 및 표 1에 기재된 항체들 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3를 포함하는 경쇄를 포함하는 GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 1을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 5를 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 9를 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 1을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 5를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 9를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 13을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 16을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 19를 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 52와 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 52와 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 56과 실질적으로 동일하거나 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항 GPRC5D 아암인 이중특이성 작제물에 포함시키기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 2를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 6을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 10을 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 2를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 6을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 10을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 13을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 16을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 19를 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 53과 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 53과 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 56과 실질적으로 동일하거나 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항 GPRC5D 아암인 이중특이성 작제물에 포함시키기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 3을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 7을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 11을 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 3을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 7을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 11을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 14를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 17을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 20을 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 54와 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 54와 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 57과 실질적으로 동일하거나 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항 GPRC5D 아암인 이중특이성 작제물에 포함시키기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 4를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 8을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 12를 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 4를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 8을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 12를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 15를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 18을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 21을 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 55와 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 55와 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 58과 실질적으로 동일하거나 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항 GPRC5D 아암인 이중특이성 작제물에 포함시키기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 61을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 67을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 72를 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 61을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 67을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 72를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 13을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 78을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 80을 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 82와 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 82와 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 92와 실질적으로 동일하거나 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항 GPRC5D 아암인 이중특이성 작제물에 포함시키기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 2를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 28을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 30을 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 2를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 28을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 30을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 13을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 16을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 19를 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 83과 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 83과 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 56과 실질적으로 동일하거나 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항 GPRC5D 아암인 이중특이성 작제물에 포함시키기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 27을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 29를 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 73을 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 27을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 29를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 73을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 14를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 17을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 20을 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 84와 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 84와 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 57과 실질적으로 동일하거나 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항 GPRC5D 아암인 이중특이성 작제물에 포함시키기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 27을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 29를 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 11을 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 27을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 29를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 11을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 14를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 17을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 20을 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 85와 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 85와 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 57과 실질적으로 동일하거나 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항 GPRC5D 아암인 이중특이성 작제물에 포함시키기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 62를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 68을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 74를 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 62를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 68을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 74를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 14를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 17을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 20을 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 86과 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 86과 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 57과 실질적으로 동일하거나 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항 GPRC5D 아암인 이중특이성 작제물에 포함시키기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 63을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 69를 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 75를 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 63을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 69를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 75를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 13을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 78을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 80을 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 87과 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 87과 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 92와 실질적으로 동일하거나 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항 GPRC5D 아암인 이중특이성 작제물에 포함시키기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 64를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 70을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 12를 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 64를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 70을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 12를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 15를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 18을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 21을 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 88과 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 88과 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 58과 실질적으로 동일하거나 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항 GPRC5D 아암인 이중특이성 작제물에 포함시키기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 65를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 68을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 76을 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 65를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 68을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 76을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 95를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 79를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 81을 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 89와 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 89과 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 93과 실질적으로 동일하거나 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항 GPRC5D 아암인 이중특이성 작제물에 포함시키기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 66을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 71을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 77을 포함하는 중쇄 CDR3를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 66을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 71을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 77을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 15를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 18를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 21을 포함하는 경쇄 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 91과 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 서열 번호 91과 실질적으로 동일하거나 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 94와 실질적으로 동일하거나 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항 GPRC5D 아암인 이중특이성 작제물에 포함시키기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 IgG 또는 이의 유도체, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 동종형이다. 항체가 IgG4 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 Fc 영역(서열 번호 60)을 포함한다.
서열 번호 60
Figure pct00004
항체가 IgG4 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 이의 Fc 영역(서열 번호 59) 내에 S228P, L234A, 및 L235A 치환을 포함한다.
서열 번호 59
Figure pct00005
상기 단락들에서 논의된 CDR 및/또는 가변 도메인 서열에 의해 한정된 특이적 항체는 이들 변형을 포함할 수 있다.
GPRC5D에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드가 또한 개시된다. 본 명세서에 제공된 가변 도메인 절편을 인코딩할 수 있는 단리된 폴리뉴클레오티드는 동일거나 상이한 벡터 상에 포함되어 항체 또는 항원 결합 단편을 생성할 수 있다. GPRC5D 항체를 인코딩하는 예시적인 폴리뉴클레오티드 서열은 하기에 나타나 있다:
중쇄 서열(서열 번호 96):
Figure pct00006
Figure pct00007
경쇄 서열(서열 번호 90):
Figure pct00008
재조합 항원 결합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 또한 본 발명의 범주 내에 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 폴리뉴클레오티드(및 이것이 인코딩하는 펩티드)는 리더(leader) 서열을 포함한다. 당업계에 알려진 임의의 리더 서열이 사용될 수 있다. 리더 서열은 제한 부위 또는 번역 개시 부위를 포함할 수 있지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 기재된 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 기재된 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편의 생물학적 특성(예를 들어, 결합 친화성 또는 면역 이펙터 활성)을 보유하는 단일 또는 다수의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 갖는 변이체를 포함한다. 본 발명과 관련하여, 달리 지시되지 않는 한, 돌연변이를 기재하기 위해 하기의 표기법이 사용된다: i) 주어진 위치에서의 아미노산의 치환은, 예를 들어 S228P로 표기되는데, 이는 위치 228에서의 세린의 프롤린으로의 치환을 의미하고; ii) 특정 변이체의 경우, 임의의 아미노산 잔기를 나타내기 위해 코드 Xaa 및 X를 포함한, 특정 3 문자 또는 1 문자 코드가 사용된다. 따라서, 위치 228에서의 아르기닌 대신에 세린으로의 치환은 S228P로 표기되거나, 또는 위치 228에서의 세린 대신에 임의의 아미노산 잔기의 치환은 S228P로 표기된다. 위치 228에서 세린이 결실된 경우에, 그것은 S228*로 나타낸다. 당업자는 단일 또는 다수의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 갖는 변이체를 생성할 수 있다.
이들 변이체는 하기를 포함할 수 있다: (a) 하나 이상의 아미노산 잔기가 보존적 또는 비보존적 아미노산으로 치환된 변이체, (b) 하나 이상의 아미노산이 폴리펩티드에 부가되거나 그로부터 결실된 변이체, (c) 하나 이상의 아미노산이 치환기를 포함하는 변이체, 및 (d) 폴리펩티드가, 그 폴리펩티드에 유용한 특성을 부여할 수 있는 다른 펩티드 또는 폴리펩티드, 예컨대 융합 파트너, 단백질 태그 또는 다른 화학적 모이어티, 예컨대 항체에 대한 에피토프, 폴리히스티딘 서열, 비오틴 모이어티(moiety) 등과 융합된 변이체. 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편은, 하나의 종으로부터의 아미노산 잔기가, 보존 또는 비보존된 위치에서, 다른 종에서의 상응하는 잔기 대신 치환된 변이체를 포함할 수 있다. 다른 실시 형태에서, 비보존된 위치에서의 아미노산 잔기가 보존 또는 비보존된 잔기로 치환된다. 유전자적(결실, 돌연변이 등), 화학적, 및 효소적 기법을 포함한 이들 변이체를 얻기 위한 기법은 당업자에게 알려져 있다.
본 명세서에 기재된 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 몇몇 항체 동종형, 예컨대 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE를 구현할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항체 동종형은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 동종형, 바람직하게는 IgG1 또는 IgG4 동종형이다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편 특이성은 CDR의 아미노산 서열, 및 배열에 의해 대체로 결정된다. 따라서, 하나의 동종형의 CDR은 항원 특이성을 변경시키지 않고서 다른 동종형으로 전달될 수 있다. 대안적으로, 하이브리도마가 항원 특이성을 변경시키지 않고서 하나의 항체 동종형을 생성하는 것으로부터 다른 항체 동종형으로 전환(동종형 전환)되게 하기 위한 기법이 확립되어 왔다. 따라서, 그러한 항체 동종형들은 기재된 항체 또는 항원 결합 단편의 범주 내에 있다.
본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공된다. 벡터는 발현 벡터일 수 있다. 따라서, 관심 폴리펩티드를 인코딩하는 서열을 함유하는 재조합 발현 벡터는 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 고려된다. 발현 벡터는 조절 서열(예를 들어, 프로모터, 인핸서), 선택 마커, 및 폴리아데닐화 신호와 같은 그러나 이로 한정되지 않는 하나 이상의 추가의 서열을 함유할 수 있다. 매우 다양한 숙주 세포를 형질전환시키기 위한 벡터는 잘 알려져 있으며, 플라스미드, 파지미드, 코스미드, 배큘로바이러스, 박미드(bacmid), 세균 인공 염색체(BAC), 효모 인공 염색체(YAC)뿐만 아니라, 다른 세균, 효모 및 바이러스 벡터를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 발명의 범주 내의 재조합 발현 벡터는 적합한 조절 요소에 작동가능하게 연결될 수 있는 적어도 하나의 재조합 단백질을 인코딩하는 합성, 게놈, 또는 cDNA-유래 핵산 단편을 포함한다. 그러한 조절 요소는 전사 프로모터, 적합한 mRNA 리보솜 결합 부위를 인코딩하는 서열, 및 전사 및 번역의 종결을 제어하는 서열을 포함할 수 있다. 발현 벡터, 특히 포유류 발현 벡터는 또한 하나 이상의 비전사 요소, 예컨대 복제 기점, 발현시키고자 하는 유전자에 연결된 적합한 프로모터 및 인핸서, 다른 5' 또는 3' 플랭킹(flanking) 비전사 서열, 5' 또는 3' 비번역 서열(예컨대, 필요한 리보솜 결합 부위), 폴리아데닐화 부위, 스플라이스 도너 및 억셉터 부위, 또는 전사 종결 서열을 포함할 수 있다. 숙주에서 복제하는 능력을 부여하는 복제 기점이 또한 포함될 수 있다.
척추동물 세포를 형질전환시키는 데 사용되는 발현 벡터에서의 전사 및 번역 제어 서열은 바이러스 공급원에 의해 제공될 수 있다. 예시적인 벡터가 문헌[Okayama and Berg, 3 Mol. Cell. Biol. 280 (1983)]에 의해 기재된 바와 같이 작제될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 항체- 또는 항원 결합 단편-코딩 서열은 강력한 구성적 프로모터, 예컨대 하기 유전자에 대한 프로모터의 제어 하에 놓여 있다: 하이포잔틴 포스포리보실 트랜스퍼라제(HPRT), 아데노신 데아미나제, 피루베이트 키나제, 베타-액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴, 및 기타. 게다가, 많은 바이러스성 프로모터가 진핵 세포에서 구성적으로 기능하고, 기재된 실시 형태와 함께 사용하기에 적합하다. 그러한 바이러스성 프로모터는, 제한 없이, 거대세포바이러스(CMV) 극초기 프로모터, SV40의 초기 및 후기 프로모터, 마우스 유선 종양 바이러스(MMTV) 프로모터, 말로니(Maloney) 백혈병 바이러스의 긴 말단 반복부(LTR), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 엡스타인 바 바이러스(Epstein Barr Virus)(EBV), 라우스 육종 바이러스(Rous Sarcoma Virus)(RSV), 및 다른 레트로바이러스, 및 단순 헤르페스 바이러스의 티미딘 키나제 프로모터를 포함한다. 일 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편 코딩 서열은 유도성 프로모터, 예컨대 메탈로티오네인 프로모터, 테트라사이클린-유도성 프로모터, 독시사이클린-유도성 프로모터, 하나 이상의 인터페론-자극 반응 요소(ISRE)를 함유하는 프로모터, 예컨대 단백질 키나제 R 2',5'-올리고아데닐레이트 신테타제, Mx 유전자, ADAR1 등의 제어 하에 놓여 있다.
본 명세서에 기재된 벡터는 하나 이상의 내부 리보솜 침입 부위(들)(IRES)를 함유할 수 있다. 융합 벡터 내로의 IRES 서열의 포함은 일부 단백질의 발현을 향상시키는 데 유익할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 벡터 시스템은 하나 이상의 폴리아데닐화 부위(예를 들어, SV40)를 포함할 것이며, 이는 상기 언급된 핵산 서열들 중 임의의 것의 상류 또는 하류에 있을 수 있다. 벡터 성분들은 (즉, ORF들 사이에의 "스페이서" 뉴클레오티드의 도입에 의해) 유전자 산물을 발현시키기 위한 최적의 간격을 제공하는 방식으로 인접하게 연결 또는 배열될 수 있거나, 또는 다른 방식으로 위치될 수 있다. 조절 요소, 예컨대 IRES 모티프는 또한 발현을 위한 최적의 간격을 제공하도록 배열될 수 있다.
벡터는 선택 마커를 포함할 수 있으며, 선택 마커는 당업계에 잘 알려져 있다. 선택 마커는 양성 및 음성 선택 마커, 예를 들어 항생제 저항성 유전자(예를 들어, 네오마이신 저항성 유전자, 하이그로마이신 저항성 유전자, 카나마이신 저항성 유전자, 테트라사이클린 저항성 유전자, 페니실린 저항성 유전자, 퓨로마이신 저항성 유전자, 블라스티사이딘 저항성 유전자), 글루타메이트 신타제 유전자, 간시클로비르 선택을 위한 HSV-TK, HSV-TK 유도체, 또는 6-메틸푸린 선택을 위한 세균성 푸린 뉴클레오시드 포스포릴라제 유전자를 포함한다(문헌[Gadi et al., 7 Gene Ther. 1738-1743 (2000)]). 선택 마커 또는 클로닝 부위를 인코딩하는 핵산 서열은 관심 폴리펩티드 또는 클로닝 부위를 인코딩하는 핵산 서열의 상류 또는 하류에 있을 수 있다.
본 명세서에 기재된 벡터는 기재된 항체 또는 항원 결합 단편을 인코딩하는 유전자로 다양한 세포를 형질전환시키는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 벡터는 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편 생성 세포를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 다른 태양은 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예컨대 본 명세서에 기재되고 예시된 항체 또는 항원 결합 단편을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 특징으로 한다.
세포 내로의 외래 유전자의 도입을 위한 다수의 기법이 당업계에 알려져 있고, 본 명세서에 기재되고 예시된 다양한 실시 형태에 따라, 기재된 방법을 수행하려는 목적을 위하여 재조합 세포를 작제하는 데 사용될 수 있다. 사용되는 기법은 숙주 세포로의 이종 유전자 서열의 안정한 전달을 제공하여, 이종 유전자 서열이 세포의 자손에 의해 상속가능하고 발현가능하도록, 그리고 수령 세포의 필요한 발달 및 생리학적 기능이 파괴되지 않도록 해야 한다. 사용될 수 있는 기법은 염색체 전달(예를 들어, 세포 융합, 염색체 매개 유전자 전달, 마이크로 세포 매개 유전자 전달), 물리적 방법(예를 들어, 형질감염, 스페로플라스트 융합, 현미주사(microinjection), 전기천공, 리포솜 담체), 바이러스성 벡터 전달(예를 들어, 재조합 DNA 바이러스, 재조합 RNA 바이러스) 등(문헌[Cline, 29 Pharmac. Ther. 69-92 (1985)]에 기재됨)을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 인산칼슘 침전 및 세균 프로토플라스트(bacterial protoplast)와 포유류 세포의 폴리에틸렌 글리콜(PEG)-유도 융합이 또한 세포를 형질전환시키는 데 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편의 발현에 사용하기에 적합한 세포는 바람직하게는 진핵 세포, 더 바람직하게는 식물, 설치류, 또는 인간 기원의 세포, 예를 들어, 그러나 제한 없이, 특히 NSO, CHO, CHOK1, perC.6, Tk-ts13, BHK, HEK293 세포, COS-7, T98G, CV-1/EBNA, L 세포, C127, 3T3, HeLa, NS1, Sp2/0 골수종 세포, 및 BHK 세포주이다. 게다가, 항체의 발현은 하이브리도마 세포를 사용하여 달성될 수 있다. 하이브리도마를 생성하기 위한 방법이 당업계에 잘 확립되어 있다.
본 명세서에 기재된 발현 벡터로 형질전환된 세포는 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편의 재조합 발현을 위해 선택되거나 스크리닝될 수 있다. 재조합-양성 세포는 원하는 표현형, 예컨대 고수준 발현, 향상된 성장 특성, 또는, 예를 들어 단백질 변형 또는 변경된 번역 후 변형으로 인해 원하는 생화학적 특성을 갖는 단백질을 산출하는 능력을 나타내는 하위클론을 위해 증폭 및 스크리닝된다. 이들 표현형은 주어진 하위클론의 고유 특성에 기인하거나 돌연변이에 기인할 수 있다. 돌연변이는 화학물질, UV-파장 광, 방사선, 바이러스, 삽입 돌연변이원, DNA 불일치 수복의 억제, 또는 그러한 방법들의 조합의 사용을 통해 달성될 수 있다.
치료를 위해 GPRC5D 특이적 항체를 사용하는 방법
요법에 사용하기 위한 GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 본 명세서에 제공된다. 특히, 이들 항체 또는 항원 결합 단편은 암, 예컨대 GPRC5D 발현 암을 치료하는 데 유용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체, 예컨대 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하는 것을 포함하는 암의 치료 방법을 제공한다. 예를 들어, 이러한 사용은 GPRC5D-수용체 상호작용을 방해하거나, 항체가 독소에 접합되는 경우, 이에 따라 독소가 GPRC5D 발현 암을 표적으로 하게 됨으로써 행해질 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 발현 암은 림프종, 예컨대 다발성 골수종(MM)을 포함한다. 이들 방법에 사용하기 위한 항체는 본 명세서에서 전술된 것들, 예를 들어 표 1에 기재된 특징부, 예를 들어 CDR 또는 가변 도메인 서열을 갖는 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편, 및 이들 항체의 추가의 논의에 기재된 것들을 포함한다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, GPRC5D 특이적 항체의 면역 이펙터 특성이 당업자에게 알려진 기법에 의해 Fc 변형을 통해 향상되거나 또는 침묵될 수 있다. 예를 들어, Fc 이펙터 기능, 예컨대 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC), 항체 의존성 세포 매개 식작용(ADCP), 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등이, 이들 활성을 담당하는 Fc 내의 잔기를 변형시킴으로써 제공 및/또는 제어될 수 있다.
"항체 의존성 세포 매개 세포독성" 또는 "ADCC"는 Fc 수용체(FcR)를 발현하는 비특이적 세포독성 세포(예를 들어, 천연 살해(NK) 세포, 호중구, 및 대식세포)가 표적 세포 상에 결합된 항체를 인식하고 후속적으로 표적 세포의 용해를 야기하는 세포 매개 반응을 지칭한다.
ADCC를 유도하는 단일클론 항체의 능력은 그의 올리고당 성분을 조작함으로써 향상될 수 있다. 인간 IgG1 또는 IgG3는 잘 알려진 바이안테나리(biantennary) G0, G0F, G1, G1F, G2 또는 G2F 형태의 글리칸의 대부분에 의해 Asn297에서 N-글리코실화된다. 조작되지 않은 CHO 세포에 의해 생성된 항체는 전형적으로 약 85% 이상의 글리칸 푸코스 함량을 갖는다. Fc 영역에 부착된 바이안테나리 복합형(complex-type) 올리고당으로부터의 코어(core) 푸코스의 제거는, 항원 결합 또는 CDC 활성을 변경시키지 않고서, 개선된 FcγRIIIa 결합을 통해 항체의 ADCC를 향상시킨다. 그러한 mAb는 바이안테나리 복합형의 Fc 올리고당을 보유하는 비교적 높은 탈푸코실화 항체의 성공적인 발현을 유발하는 것으로 보고된 상이한 방법, 예컨대 배양 삼투압의 제어(문헌[Konno et al., Cytotechnology 64:249-65, 2012]), 숙주 세포주로서의 변이체 CHO 세포주 Lec13의 적용(문헌[Shields et al., J Biol Chem 277:26733-26740, 2002]), 숙주 세포주로서의 변이체 CHO 세포주 EB66의 적용(문헌[Olivier et al., MAbs; 2(4), 2010; Epub ahead of print; PMID:20562582]), 숙주 세포주로서의 래트 하이브리도마 세포주 YB2/0의 적용(문헌[Shinkawa et al., J Biol Chem 278:3466-3473, 2003]), 특히 α-1,6-푸코실트랜스퍼라제(FUT8) 유전자에 대한 저분자 간섭 RNA의 도입(문헌[Mori et al., Biotechnol Bioeng 88:901-908, 2004]), 또는 β-1,4-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III 및 골지(Golgi) α-만노시다제 II 또는 강력한 알파-만노시다제 I 억제제인 키푸넨신의 동시 발현(문헌[Ferrara et al., J Biol Chem 281:5032-5036, 2006, Ferrara et al., Biotechnol Bioeng 93:851-861, 2006; Xhou et al., Biotechnol Bioeng 99:652-65, 2008])을 사용하여 달성될 수 있다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, GPRC5D 항체에 의해 유도되는 ADCC는 또한 항체 Fc 내에서의 소정의 치환에 의해 향상될 수 있다. 예시적인 치환은, 예를 들어 미국 특허 제6,737,056호에 기재된 바와 같은 아미노산 위치 256, 290, 298, 312, 356, 330, 333, 334, 360, 378 또는 430(잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따름)에서의 치환이다.
GPRC5D의 검출 방법
생물학적 샘플에서 GPRC5D를 검출하는 방법이 본 명세서에 제공되는데, 본 방법은 샘플을 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시킴에 의한다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 샘플은 소변, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 복수, 순환 세포, 순환 종양 세포, 조직과 회합되지 않은 세포(즉, 유리 세포), 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검 - 미세 바늘 흡인물을 포함함), 조직 프레파라트 등으로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 방법은 생물학적 샘플을 본 명세서에 기재된 GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 임의의 것과 접촉시킴으로써 샘플에서 GPRC5D를 검출하는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 샘플은 본 명세서에 기재된 하나 초과의 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉될 수 있다. 예를 들어, 샘플은 제1 GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉되고, 이어서 제2 GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉될 수 있으며, 여기서 제1 항체 또는 항원 결합 단편 및 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 동일한 항체 또는 항원 결합 단편이 아니다. 일부 실시 형태에서, 제1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 샘플과 접촉시키기 전에 표면, 예컨대 멀티웰 플레이트, 칩, 또는 유사한 기재에 부착될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 제1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 샘플과 접촉시키기 전에 어떠한 것에도 전혀 고정 또는 부착되지 않을 수 있다.
기재된 GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 검출가능하게 표지될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 표지된 항체 및 항원 결합 단편이 본 명세서에 기재된 방법을 통해 GPRC5D의 검출을 촉진시킬 수 있다. 많은 그러한 표지가 당업자에게 용이하게 알려져 있다. 예를 들어, 적절한 표지는 방사선 표지, 형광 표지, 에피토프 태그, 비오틴, 발색단 표지, ECL 표지, 또는 효소를 포함하지만 이로 한정되는 것으로 여겨져서는 안 된다. 더 구체적으로는, 기재된 표지는 루테늄, 111In-DOTA, 111In-다이에틸렌트라이아민펜타아세트산(DTPA), 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제 및 베타-갈락토시다제, 폴리-히스티딘(HIS 태그), 아크리딘 염료, 시아닌 염료, 플루오론 염료, 옥사진 염료, 페난트리딘 염료, 로다민 염료, 알렉사플루오르(Alexafluor)® 염료 등을 포함한다.
기재된 GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편은 생물학적 샘플에서 GPRC5D를 검출하기 위한 다양한 검정에 사용될 수 있다. 일부 적합한 검정은 웨스턴 블롯(Western blot) 분석, 방사면역검정, 표면 플라즈몬 공명, 면역형광측정(immunofluorimetry), 면역침강, 평형 투석, 면역확산, 전기화학발광(ECL) 면역검정, 면역조직화학, 형광-활성화 세포 분류(FACS) 또는 ELISA 검정을 포함하지만 이로 한정되는 것으로 여겨져서는 안 된다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 대상이 GPRC5D에 대해 유도된 치료제로 치료될 수 있는지를 결정하기 위하여 대상에서의 GPRC5D 발현 암 세포의 검출이 사용될 수 있다.
GPRC5D는 혈액 및 혈청 샘플 중에 검출가능한 수준으로 존재한다. 따라서, 혈액으로부터 유래된 샘플, 예컨대 혈청 샘플에서 GPRC5D를 검출하는 방법이 본 명세서에 제공되는데, 본 방법은 샘플을 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시킴에 의한다. 혈액 샘플 또는 이의 유도체는, 기재된 방법이 수행될 수 있는 샘플을 산출하도록 희석, 분획화, 또는 달리 처리될 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D는 하기와 같은 그러나 이로 한정되지 않는 당업계에 알려진 다수의 검정에 의해 혈액 샘플 또는 이의 유도체에서 검출될 수 있다: 웨스턴 블롯 분석, 방사면역검정, 표면 플라즈몬 공명, 면역형광측정, 면역침강, 평형 투석, 면역확산, 전기화학발광(ECL) 면역검정, 면역조직화학, 형광-활성화 세포 분류(FACS) 또는 ELISA 검정.
암의 진단 방법
대상에서 GPRC5D 발현 암을 진단하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 발현 암은 림프종, 예컨대 다발성 골수종(MM)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 전술된 바와 같이, 생물학적 샘플, 예컨대 혈액 샘플 또는 혈청 샘플에서 GPRC5D를 검출하는 것은 샘플이 획득된 대상에서 암을 진단하는 능력을 제공한다. 대안적으로, 일부 실시 형태에서, 다른 샘플, 예컨대 조직학적 샘플, 미세 바늘 흡인 샘플, 절제된 종양 조직, 순환 세포, 순환 종양 세포 등이 또한 샘플이 획득된 대상이 암을 앓고 있는지의 여부를 평가하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 샘플이 획득된 대상이 암을 앓고 있다는 것이 이미 알려져 있을 수 있지만, 대상이 앓고 있는 암의 유형은 아직 진단되지 않았을 수 있거나, 또는 예비 진단이 불명확할 수 있으며, 이에 따라 대상으로부터 획득된 생물학적 샘플에서 GPRC5D를 검출하는 것은 암의 진단을 가능하게 하거나 명확하게 할 수 있다. 예를 들어, 대상은 암을 앓고 있는 것으로 알려져 있을 수 있지만, 대상의 암이 GPRC5D 발현인지의 여부가 알려져 있지 않을 수 있거나, 또는 불명확할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 기재된 방법은 대상으로부터 유래된 생물학적 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양을 측정함으로써 대상이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있는지의 여부를 평가하는 단계; 및 관찰된 GPRC5D의 양을 대조군 샘플 또는 참조 샘플 중의 GPRC5D의 양과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 대상으로부터 유래되는 샘플 중의 GPRC5D의 양과 대조군 샘플 또는 참조 샘플 중의 GPRC5D의 양 사이의 차이는 대상이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있는지를 나타내는 지표이다. 다른 실시 형태에서, 대상으로부터 획득된 생물학적 샘플에서 관찰되는 GPRC5D의 양은 특정 종류 또는 단계의 암과 관련된 것으로 알려진 GPRC5D의 수준과 대비되어, 대상의 암의 종류 또는 단계를 결정할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대상으로부터 유래된 샘플 중의 GPRC5D의 양은 샘플을 GPRC5D에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 GPRC5D 특이적 항체와 접촉시킴으로써 평가된다. GPRC5D의 존재에 대해 평가되는 샘플은 소변, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 복수, 순환 세포, 순환 종양 세포, 조직과 회합되지 않은 세포(즉, 유리 세포), 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검 - 미세 바늘 흡인물을 포함함), 조직 프레파라트 등으로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 발현 암은 혈액암, 예컨대 다발성 골수종(MM)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 대상은 인간이다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 발현 암의 진단 방법은 대상의 생물학적 샘플을 GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예컨대, 표 1에 제공된 항체 및 단편으로부터 유도가능한 것들)과 접촉시키는 단계, 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 의해 결합된 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양을 정량화하는 단계, 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양을 기지 표준 또는 참조 샘플과 비교하는 단계; 및 대상의 GPRC5D 수준이 암과 관련된 GPRC5D의 수준 내에 있는지의 여부를 결정하는 단계를 포함할 것이다. 추가의 실시 형태에서, 진단 방법 이후에는 암 특이적 치료제를 투여 또는 처방하는 추가 단계가 행해질 수 있다. 다른 실시 형태에서, 진단 방법 이후에는 결정의 결과를 전송하여 암의 치료를 촉진시키는 추가 단계가 행해질 수 있다. 일부 실시 형태에서, 암 특이적 치료제는 GPRC5D 발현 암에 대해 유도될 수 있으며, 예컨대 본 명세서에 기재된 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, 기재된 방법은 대상으로부터 획득된 혈액 또는 혈청 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양을 측정함으로써 대상이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있는지의 여부를 평가하는 단계; 및 관찰된 GPRC5D의 양을 대조군 샘플 또는 참조 샘플 중의 GPRC5D의 양과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 대상으로부터 유래되는 샘플 중의 GPRC5D의 양과 대조군 샘플 또는 참조 샘플 중의 GPRC5D의 양 사이의 차이는 대상이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있다는 징후이다.
일부 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플은 GPRC5D 발현 암을 앓고 있지 않은 대상으로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플은 GPRC5D 발현 암을 앓고 있는 대상으로부터 유래될 수 있다. 대조군 샘플 또는 참조 샘플이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있지 않은 대상으로부터 유래되는 일부 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여, 시험 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양의 증가가 관찰되면, 평가되는 대상이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있다는 징후이다. 대조군 샘플이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있지 않은 대상으로부터 유래되는 일부 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여, 시험 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양의 감소 또는 유사가 관찰되면, 평가되는 대상이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있지 않다는 징후이다. 대조군 샘플 또는 참조 샘플이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있는 대상으로부터 유래되는 일부 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여, 시험 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양의 유사가 관찰되면, 평가되는 대상이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있다는 징후이다. 대조군 샘플 또는 참조 샘플이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있는 대상으로부터 유래되는 일부 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여, 시험 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양의 감소가 관찰되면, 평가되는 대상이 GPRC5D 발현 암을 앓고 있지 않다는 징후이다.
일부 실시 형태에서, 대상으로부터 유래된 샘플 중의 GPRC5D의 양은 샘플을 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 항체와 접촉시킴으로써 평가된다. GPRC5D의 존재에 대해 평가되는 샘플은 혈액 샘플, 혈청 샘플, 순환 세포, 순환 종양 세포, 조직과 회합되지 않은 세포(즉, 유리 세포), 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검 - 미세 바늘 흡인물을 포함함), 조직 프레파라트 등으로부터 유래될 수 있다.
다양한 태양에서, GPRC5D의 양은 샘플을 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시킴으로써 측정된다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 1종류 이상의 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제1 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 의해 접촉되고, 이어서 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 의해 접촉될 수 있다. GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 것들은 이러한 능력에 사용될 수 있다.
GPRC5D 특이적 항체 및 항원 결합 단편의 다양한 조합이 기재된 진단 방법을 수행하도록 "제1" 및 "제2" 항체 또는 항원 결합 단편을 제공하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서 GPRC5D 발현 암은 림프종, 예컨대 다발성 골수종(MM)을 포함한다.
특정 실시 형태에서, GPRC5D의 양은 웨스턴 블롯 분석, 방사면역검정, 면역형광측정, 면역침강, 평형 투석, 면역확산, 전기화학발광(ECL) 면역검정, 면역조직화학, 형광-활성화 세포 분류(FACS) 또는 ELISA 검정에 의해 측정된다.
기재된 진단 방법의 다양한 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플이 사용된다. 이러한 샘플은 사용되는 분석이 적절하게 작동하는 것을 보장하는 양성 또는 음성 분석 대조군일 수 있고; 예를 들어, 이러한 성질의 분석 대조군은 면역조직화학 분석에 일반적으로 사용될 수 있다. 대안적으로, 샘플은 건강한 대상으로부터의 생물학적 샘플 중의 GPRC5D의 양에 대한 표준화된 참조물일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 시험된 대상의 관찰된 GPRC5D 수준은 GPRC5D 발현 암을 갖는 것으로 알려진 대상로부터의 샘플에서 관찰되는 GPRC5D 수준과 비교될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대조군 대상은 대상으로 하는 특정 암을 앓고 있을 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대조군 대상은 초기 암에 걸린 것으로 알려져 있는데, 이는 GPRC5D 발현 암일 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대조군 대상은 중기 암에 걸린 것으로 알려져 있는데, 이는 GPRC5D 발현 암일 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대조군 대상은 말기 암에 걸린 것으로 알려져 있는데, 이는 GPRC5D 발현 암일 수 있거나 그렇지 않을 수 있다.
암의 모니터링 방법
대상에서 GPRC5D 발현 암을 모니터링하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서 GPRC5D 발현 암은 림프종, 예컨대 다발성 골수종(MM)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 기재된 방법은 대상으로부터 유래된 시험 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양을 측정함으로써 GPRC5D 발현 암이 진행 중인지, 퇴행 중인지, 또는 안정되게 유지되고 있는지를 평가하는 단계; 및 관찰된 GPRC5D의 양을, 조기 시점에서 대상으로부터, 유사한 방식으로, 획득된 생물학적 샘플 중의 GPRC5D의 양과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 시험 샘플과 조기 샘플 중의 GPRC5D의 양 사이의 차이는 암이 진행 중인지, 퇴행 중인지, 또는 안정되게 유지되고 있는지의 지표를 제공한다. 이것과 관련하여, 조기 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여 증가된 GPRC5D의 양을 갖는 시험 샘플은 GPRC5D 발현 암의 진행을 나타낼 수 있다. 대조적으로, 조기 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여 감소된 GPRC5D의 양을 갖는 시험 샘플은 GPRC5D 발현 암의 퇴행을 나타낼 수 있다.
따라서, 조기 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여 GPRC5D의 양에 있어서 유의하지 않은 차이를 갖는 시험 샘플은 GPRC5D 발현 암에 대한 안정된 질환의 상태를 나타낼 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대상으로부터 유래된 생물학적 샘플 중의 GPRC5D의 양은 샘플을 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항체 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 항체와 접촉시킴으로써 평가된다. GPRC5D의 존재에 대해 평가되는 샘플은 소변, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 복수, 순환 세포, 순환 종양 세포, 조직과 회합되지 않은 세포(즉, 유리 세포), 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검 - 미세 바늘 흡인물을 포함함), 조직 프레파라트 등으로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대상은 인간이다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 발현 암의 모니터링 방법은 대상의 생물학적 샘플을 GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예컨대, 표 1에 제공된 항체 및 단편으로부터 유도가능한 것들)과 접촉시키는 단계, 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양을 정량화하는 단계, 샘플에 존재하는 GPRC5D의 양을, 조기 시점에서 동일한 대상으로부터, 유사한 방식으로, 획득된 생물학적 샘플 내에 있는 것으로 측정된 GPRC5D의 양과 비교하는 단계; 및 대상의 GPRC5D 수준이 시간 경과에 따라 변화되었는지의 여부를 결정하는 단계를 포함할 것이다. 조기 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여 증가된 GPRC5D의 양을 갖는 시험 샘플은 암의 진행을 나타낼 수 있다. 대조적으로, 조기 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여 감소된 GPRC5D의 양을 갖는 시험 샘플은 GPRC5D 발현 암의 퇴행을 나타낼 수 있다. 따라서, 조기 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여 GPRC5D의 양에 있어서 유의하지 않은 차이를 갖는 시험 샘플은 GPRC5D 발현 암에 대한 안정된 질환의 상태를 나타낼 수 있다. 일부 실시 형태에서, 샘플의 GPRC5D 수준은 기지 표준 또는 참조 샘플과 대비될 수 있는데, 이는 기지 표준 또는 참조 샘플 단독으로 행해지거나, 또는 조기 시점에서 평가된 샘플에 대해 관찰된 GPRC5D 수준에 더하여 행해진다. 추가의 실시 형태에서, 진단 방법 이후에는 암 특이적 치료제를 투여하는 추가 단계가 행해질 수 있다. 일부 실시 형태에서, 암 특이적 치료제는 GPRC5D 발현 암에 대해 유도될 수 있다.
다양한 태양에서, GPRC5D의 양은 샘플을 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시킴으로써 측정된다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 1종류 이상의 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제1 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 의해 접촉되고, 이어서 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 의해 접촉될 수 있다. 항체, 예컨대 본 명세서에 기재된 것들은 이러한 능력에 사용될 수 있다.
표 1에 기재된 항체 및 항원 결합 단편의 다양한 조합이 기재된 모니터링 방법을 수행하도록 "제1" 및 "제2" 항체 또는 항원 결합 단편을 제공하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 발현 암은 혈액암, 예컨대 다발성 골수종(MM)을 포함한다.
특정 실시 형태에서, GPRC5D의 양은 웨스턴 블롯 분석, 방사면역검정, 면역형광측정, 면역침강, 평형 투석, 면역확산, 전기화학발광(ECL) 면역검정, 면역조직화학, 형광-활성화 세포 분류(FACS) 또는 ELISA 검정에 의해 측정된다.
GPRC5D를 검출하기 위한 키트
생물학적 샘플에서 GPRC5D를 검출하기 위한 키트가 본 명세서에 제공된다. 이러한 키트는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 GPRC5D 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 키트의 사용설명서를 포함한다.
제공된 GPRC5D 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 용액 상태로 있을 수 있거나; 동결건조될 수 있거나; 기재, 캐리어 또는 플레이트에 부착될수 있거나; 검출가능하게 표지될 수 있다.
기재된 키트는 또한 본 명세서에 기재된 방법을 수행하기에 유용한 추가 성분을 포함할 수 있다. 예로서, 키트는 대상으로부터 샘플을 획득하기 위한 수단, 대조군 샘플 또는 참조 샘플, 예를 들어 느리게 진행되는 암을 갖는 대상 및/또는 암을 갖지 않는 대상으로부터의 샘플, 하나 이상의 샘플 구획, 및/또는 본 발명의 방법의 수행 및 조직 특이적 대조물 또는 표준물을 설명한 교육용 자료를 포함할 수 있다.
GPRC5D의 수준을 측정하는 수단은 예를 들어, GPRC5D의 수준을 측정하기 위한 분석에서 사용되는 완충액 또는 다른 시약을 추가로 포함할 수 있다. 설명서는, 예를 들어, 검정을 수행하기 위한 인쇄된 설명서 및/또는 GPRC5D의 발현 수준을 평가하기 위한 설명서일 수 있다.
기재된 키트는 또한 대상으로부터 샘플을 단리하기 위한 수단을 포함할 수 있다. 이러한 수단은 대상으로부터 체액 또는 조직을 획득하기 위해 사용될 수 있는 시약 또는 장비 중 하나 이상의 아이템을 포함할 수 있다. 대상으로부터 샘플을 획득하기 위한 수단은 또한 혈액 샘플로부터 혈액 성분, 예컨대 혈청을 단리하기 위한 수단을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 키트는 인간 대상에서의 사용을 위해 설계된다.
다중특이성 항체
본 명세서에 기재된 항 GPRC5D 항체의 결합 도메인은 표면 상에 GPRC5D를 발현하는 세포를 인식한다. 상기에 기재된 바와 같이, GPRC5D 발현은 암 세포를 나타낼 수 있다. 특정 하위세트의 세포들에 대한 더 특이적인 표적화가 GPRC5D 및 다른 표적, 예컨대 CD3 및 BCMA에 결합하는 이중특이성 분자, 예컨대 항체 또는 항체 단편을 제조함으로써 달성될 수 있다. 이는 GPRC5D에 결합하는 제1 영역 및 다른 표적 항원에 결합하는 제2 결합 영역을 포함하는 분자를 제조함으로써 달성된다. 항원 결합 영역은 표적의 특이적 인식을 가능하게 하는 임의의 형태를 취할 수 있으며, 예를 들어 결합 영역은 중쇄 가변 도메인, Fv(중쇄 가변 도메인과 경쇄 가변 도메인의 조합), 피브로넥틴 III형 도메인을 기반으로 한 결합 도메인(예컨대, 피브로넥틴 유래의 것 또는 피브로넥틴으로부터의 III형 도메인의 컨센서스 기반의 것, 또는 테나신 유래의 것 또는 테나신으로부터의 III형 도메인의 컨센서스 기반의 것, 예컨대 얀센 바이오테크, 인코포레이티드(Janssen Biotech, Inc.)로부터의 센티린 분자, 예를 들어 국제 특허 출원 공개 WO2010/051274호 및 WO2010/093627호 참조)일 수 있거나 그를 포함할 수 있다. 따라서, GPRC5D 및 다른 항원에 각각 결합하는 2개의 상이한 항원 결합 영역을 포함하는 이중특이성 분자가 제공된다.
본 명세서에 기재된 다중특이성 항체들 중 일부는 GPRC5D 및 CD3에 각각 결합하는 2개의 상이한 항원 결합 영역을 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, GPRC5D 및 CD3에 결합하는 다중특이성 항체(GPRC5D × CD3 다중특이성 항체) 및 이의 다중특이성 항원 결합 단편이 제공된다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D × CD3 다중특이성 항체는, 쌍을 이루어서 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하는 제1 중쇄(HC1) 및 제1 경쇄(LC1), 및 쌍을 이루어서 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하는 제2 중쇄(HC2) 및 제2 경쇄(LC2)를 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, GPRC5D × CD3 다중특이성 항체는, 쌍을 이루어서 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하는 제1 중쇄(HC1) 및 제1 경쇄(LC1)를 포함하는 GPRC5D 특이적 아암, 및 쌍을 이루어서 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하는 제2 중쇄(HC2) 및 제2 경쇄(LC2)를 포함하는 CD3 특이적 아암을 포함하는 이중특이성 항체이다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 항체는 전장(full length) 항체 구조를 갖는 항체를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 "전장 항체"는 2개의 전장 항체 중쇄 및 2개의 전장 항체 경쇄를 갖는 항체를 지칭한다. 전장 항체 중쇄(HC)는 중쇄 가변 및 불변 도메인 VH, CH1, CH2 및 CH3를 포함한다. 전장 항체 경쇄(LC)는 경쇄 가변 및 불변 도메인 VL 및 CL을 포함한다. 전장 항체는 어느 하나 또는 둘 모두의 중쇄에 C-말단 라이신(K)이 결여되어 있을 수 있다. 용어 "Fab-아암" 또는 "하프 분자(half molecule)"는 항원에 특이적으로 결합하는 하나의 중쇄-경쇄 쌍을 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 항원 결합 도메인들 중 하나는 비항체 기반 결합 도메인, 예를 들어 피브로넥틴 3형 도메인을 기반으로 한 결합 도메인, 예를 들어 센티린이다.
본 명세서에 제공된 다중특이성 항체의 GPRC5D 결합 아암은 전술된 GPRC5D 특이적 항체들 중 임의의 것으로부터 유래될 수 있다. 이러한 GPRC5D 결합 아암의 일부 예시적인 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제1 항원 결합 영역은 표 1에 기재된 바와 같은 항체 클론으로부터 유래되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 결합 아암의 일부 예시적인 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제1 항원 결합 영역은 표 1에 기재된 바와 같은 항체 클론으로부터 유래되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 결합 아암의 일부 예시적인 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제1 항원 결합 영역은 클론 GC5B81, GC5B465, GS5B483, GC5B596, GC5B382, GC5B379, GC5B373, GC5B376, GC5B385, GC5B370, GC5B602, GC5B603, GC5B599, GC5B601, GC5B598 또는 GC5B597의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함한다.
이러한 GPRC5D 결합 아암의 일부 예시적인 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제1 항원 결합 영역은 클론 GC5B81, GC5B465, GS5B483 또는 GC5B596의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함한다. 이러한 GPRC5D 결합 아암의 일부 예시적인 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제1 항원 결합 영역은 표 1에 기재된 바와 같은 항체 클론으로부터 유래되는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 이러한 GPRC5D 결합 아암의 일부 예시적인 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제1 항원 결합 영역은 표 1에 기재된 바와 같은 항체 클론으로부터 유래되는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이러한 GPRC5D 결합 아암의 일부 예시적인 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제1 항원 결합 영역은 클론 GC5B81, GC5B465, GS5B483 또는 GC5B596의 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 이러한 GPRC5D 결합 아암의 일부 예시적인 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제1 항원 결합 영역은 클론 GC5B81, GC5B465, GS5B483, GC5B596, GC5B382, GC5B379, GC5B373, GC5B376, GC5B385, GC5B370, GC5B602, GC5B603, GC5B599, GC5B601, GC5B598 또는 GC5B597의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
표 3은 GPRC5D에 특이적인 하나의 중쇄 및 경쇄 쌍 및 CD3에 특이적인 다른 중쇄 및 경쇄 쌍을 갖는 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체의 목록을 제공하며, 여기서 특정 항체 ID는 기재된 실시 형태를 생성하는데 사용되는 항원 특이적 항체 아암을 설명하기 위해 열거된다.
[표 3]
Figure pct00009
이중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, GPRC5D 결합 아암은 또한 사이노몰거스 GPRC5D, 바람직하게는 이의 세포외 도메인과 결합한다.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 GPRC5D 결합 아암은 IgG 또는 이의 유도체, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4 동종형이다. GPRC5D 결합 아암이 IgG4 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 그것은 그의 Fc 영역 내에 S228P, L234A, 및 L235A 치환(들)을 포함한다.
이중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, 제2 항원 결합 아암은 인간 CD3와 결합한다. 일부 바람직한 실시 형태에서, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체의 CD3 특이적 아암은 인간 1차 T 세포 및/또는 사이노몰거스 원숭이 1차 T 세포와 결합하고 그것을 활성화하는 CD3 특이적 항체로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, CD3 결합 아암은 CD3ε의 N-말단에 있는 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, CD3 결합 아암은 CD3ε의 6개의 N-말단 아미노산을 포함하는 에피토프와 접촉한다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체의 CD3 특이적 결합 아암은 마우스 IgG3/람다 동종형인 마우스 단일클론 항체 SP34로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, CD3 결합 아암은 항체 SP34의 CDR을 포함한다. 이러한 CD3 결합 아암은 5×10-7 M 이하, 예컨대 1×10-7 M 이하, 5×10-8 M 이하, 1×10-8 M 이하, 5×10-9 M 이하, 또는 1×10-9 M 이하의 친화도로 CD3에 결합할 수 있다. CD3 특이적 결합 아암은 마우스 단일클론 항체 SP34의 아암의 인간화 버전일 수 있다. CD3 특이적 아암의 유래가 되는 항 CD3 항체를 인간화하기 위해 인간 프레임워크 적응(Human framework adaptation; HFA)이 사용될 수 있다. 이중특이성 항체의 일부 실시 형태에서, CD3 결합 아암은 표 2로부터 선택되는 중쇄와 경쇄 쌍을 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD3 결합 아암은 IgG 또는 이의 유도체이다. 일부 실시 형태에서, CD3 결합 아암은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4이다. CD3 결합 아암이 IgG4 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 그것은 그의 Fc 영역 내에 S228P, L234A, L235A, F405L, 및 R409K 치환(들)을 함유한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 인간 T 세포 상의 CD3ε과 결합한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 사이노몰거스 T 세포 상의 CD3ε과 결합한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 인간 및 사이노몰거스 T 세포 상의 CD3ε과 결합한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 인간 CD3+ T 세포를 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 사이노몰거스 CD4+ T 세포를 활성화한다.
일부 실시 형태에서, 항체 클론 GC5B81, GC5B465, GS5B483, GC5B596, GC5B382, GC5B379, GC5B373, GC5B376, GC5B385, GC5B370, GC5B602, GC5B603, GC5B599, GC5B601, GC5B598, 또는 GC5B597의 중쇄를 포함하는 GPRC5D 결합 아암을 갖는 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체가 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항체 클론 GC5B81, GC5B465, GS5B483, GC5B596, GC5B382, GC5B379, GC5B373, GC5B376, GC5B385, GC5B370, GC5B602, GC5B603, GC5B599, GC5B601, GC5B598, 또는 GC5B597의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 GPRC5D 결합 아암을 갖는 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체가 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항체 클론 CD3B219의 중쇄를 포함하는 CD3 결합 아암을 갖는 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체가 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항체 클론 CD3B219의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 CD3 결합 아암을 갖는 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체가 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항체 클론 GC5B81, GC5B465, GS5B483, GC5B596, GC5B382, GC5B379, GC5B373, GC5B376, GC5B385, GC5B370, GC5B602, GC5B603, GC5B599, GC5B601, GC5B598 또는 GC5B597의 중쇄를 포함하는 GPRC5D 결합 아암 및 항체 클론 CD3B219의 중쇄를 포함하는 CD3 결합 아암을 갖는 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체가 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항체 클론 GC5B81, GC5B465, GS5B483, GC5B596, GC5B382, GC5B379, GC5B373, GC5B376, GC5B385, GC5B370, GC5B602, GC5B603, GC5B599, GC5B601, GC5B598 또는 GC5B597의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 GPRC5D 결합 아암 및 항체 클론 CD3B219의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 CD3 결합 아암을 갖는 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체가 제공된다.
예시적인 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체가 표 23에 제공되어 있다.
상이한 포맷의 이중특이성 항체들이 기재되어 왔고, 최근에는 문헌[Chames and Baty (2009) Curr Opin Drug Disc Dev 12: 276]에 의해 검토되었다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 항체는 다이아바디, 크로스-바디(cross-body), 또는 본 발명에 기재된 것들로서의 제어된 Fab 아암 교환을 통해 획득된 이중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 이종이량체화를 일으키게 하는 상보적 CH3 도메인을 갖는 IgG 유사 분자; 재조합 IgG 유사 이중 표적화 분자 - 여기서, 상기 분자의 양측은 각각 2개 이상의 상이한 항체의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 부분을 포함함 -; IgG 융합 분자 - 여기서, 전장 IgG 항체가 추가의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 부분에 융합됨 -; Fc 융합 분자 - 여기서, 단일쇄 Fv 분자 또는 안정화된 다이아바디가 중쇄 불변 도
메인, Fc 영역 또는 이들의 부분에 융합됨 -; Fab 융합 분자 - 여기서, 상이한 Fab 단편이 함께 융합됨 -; ScFv- 및 다이아바디-기반 및 중쇄 항체(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디) - 여기서, 상이한 단일쇄 Fv 분자 또는 상이한 다이아바디 또는 상이한 중쇄 항체(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디)가 서로 또는 다른 단백질 또는 담체 분자에 융합됨 - 를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 상보적 CH3 도메인 분자를 갖는 IgG 유사 분자는 트라이오맙(Triomab)/쿼드로마(Quadroma) (Trion Pharma/Fresenius Biotech), 노브-인투-홀(Knob-into-Hole) (Genentech), CrossMAb (Roche) 및 정전기적으로 일치된 항체(electrostatically-matched) (Amgen), LUZ-Y (Genentech), 가닥 교환 조작된 도메인 바디(Strand Exchange Engineered Domain body)(SEEDbody) (EMD Serono), 바이클로닉(Biclonic) (Merus) 및 듀오바디(DuoBody) (Genmab A/S)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 재조합 IgG 유사 이중 표적화 분자는 이중 표적화(Dual Targeting)(DT)-Ig (GSK/Domantis), 투-인-원 항체(Two-in-one Antibody) (Genentech), 가교결합된(Cross-linked) Mab (Karmanos Cancer Center), mAb2 (F-Star) 및 CovX-바디 (CovX/Pfizer)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IgG 융합 분자는 이중 가변 도메인(Dual Variable Domain)(DVD)-Ig (Abbott), IgG 유사 이중특이성 항체(IgG-like Bispecific) (InnClone/Eli Lilly), Ts2Ab (MedImmune/AZ) 및 BsAb (Zymogenetics), HERCULES (Biogen Idec) 및 TvAb (Roche)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, Fc 융합 분자는 ScFv/Fc 융합체(Fusion) (Academic Institution), SCORPION (Emergent BioSolutions/Trubion, Zymogenetics/BMS), 이중 친화성 재표적화 기술(Dual Affinity Retargeting Technology)(Fc-DART) (MacroGenics) 및 이중(Dual)(ScFv)2-Fab (National Research Center for Antibody Medicine--China)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, Fab 융합 이중특이성 항체는 F(ab)2 (Medarex/AMGEN), 이중 작용(Dual-Action) 또는 Bis-Fab (Genentech), 독-앤드-록(Dock-and-Lock)(DNL) (ImmunoMedics), 2가 이중특이성 항체(Bivalent Bispecific) (Biotecnol) 및 Fab-Fv (UCB-Celltech)를 포함한다. ScFv-, 다이아바디-기반 및 도메인 항체는 이중특이성 T 세포 인게이저(Bispecific T Cell Engager)(BiTE) (Micromet), 탠덤 다이아바디(Tandem Diabody)(Tandab) (Affimed), 이중 친화성 재표적화 기술(DART) (MacroGenics), 단일쇄 다이아바디(Single-chain Diabody) (Academic), TCR 유사 항체(TCR-like Antibody) (AIT, ReceptorLogics), 인간 혈청 알부민 ScFv 융합체(Human Serum Albumin ScFv Fusion) (Merrimack) 및 COMBODY (Epigen Biotech), 이중 표적화 나노바디(dual targeting nanobody) (Ablynx), 이중 표적화 중쇄 단독 도메인 항체를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 발명의 전장 이중특이성 항체는, 예를 들어 2개의 단일특이성 2가 항체들 사이에서의 Fab 아암 교환(또는 하프 분자 교환)을 사용하여 생성될 수 있는데, 이는 공발현을 사용하거나 또는 무세포 환경에서의 시험관내에서, 각각의 하프 분자 내의 중쇄 CH3 계면에 치환을 도입하여 별개의 특이성을 갖는 2개의 항체 하프 분자의 이종이량체 형성을 유리하게 함으로써 행해진다. Fab 아암 교환 반응은 이황화-결합 이성질화 반응 및 CH3 도메인의 해리-회합의 결과이다. 모 단일특이성 항체의 힌지 영역 내의 중쇄 이황화물 결합은 환원된다. 모 단일특이성 항체들 중 하나의, 생성된 유리 시스테인은, 제2 모 단일특이성 항체 분자의 시스테인 잔기와 중쇄간 이황화물 결합을 형성하고, 동시에 모 항체의 CH3 도메인이 해리-회합에 의해 방출 및 재형성된다. Fab 아암의 CH3 도메인은 동종이량체화에 비하여 이종이량체화에 유리하도록 조작될 수 있다. 생성된 산물은, 각각이 별개의 에피토프, 즉 GPRC5D 상의 에피토프 및 CD3 상의 에피토프와 결합하는 2개의 Fab 아암 또는 하프 분자를 갖는 이중특이성 항체이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체화"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체화"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
"노브-인-홀(knob-in-hole)" 전략(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 2006/028936호 참조)이 전장 이중특이성 항체를 생성하는데 사용될 수 있다. 간략하게 말해서, 인간 IgG 내에 CH3 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산이 CH3 도메인 상호작용에 영향을 주는 위치에서 돌연변이화되어 이종이량체 형성을 촉진할 수 있다. 작은 측쇄(홀)를 갖는 아미노산이 제1 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입되고, 큰 측쇄(노브)를 갖는 아미노산이 제2 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입된다. 2개의 항체의 공발현 후에, "홀"을 갖는 중쇄와 "노브"를 갖는 중쇄의 우선적인 상호작용의 결과로서 이종이량체가 형성된다. 노브와 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환 쌍은 하기와 같다(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨): T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S_L368A_Y407V.
하나의 CH3 표면에서 양으로 하전된 잔기를, 그리고 또 하나의 CH3 표면에서 음으로 하전된 잔기를 치환함으로써 정전기 상호작용을 사용하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략이 사용될 수 있으며, 이는 미국 특허 출원 공개 제2010/0015133호; 미국 특허 출원 공개 제2009/0182127호; 미국 특허 출원 공개 제2010/028637호 또는 미국 특허 출원 공개 제2011/0123532호에 기재된 바와 같다. 다른 전략에서는, 미국 특허 출원 공개 제2012/0149876호 또는 미국 특허 출원 공개 제2013/0195849호에 기재된 바와 같이 하기의 치환(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨)에 의해 이종이량체화가 촉진될 수 있다: L351Y_F405AY407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V K409F Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W.
전술된 방법에 더하여, 본 발명의 이중특이성 항체는, 2개의 단일특이성 동종이량체성 항체의 CH3 영역 내에 비대칭 돌연변이를 도입시키고, 이황화물 결합 이성질화를 가능하게 하는 환원성 조건에서 2개의 모 단일특이성 동종이량체성 항체로부터 이중특이성 이종이량체성 항체를 형성함으로써 무세포 환경에서 시험관내에서 생성될 수 있는데, 이는 국제 특허 출원 공개 W02011/131746호에 기재된 방법에 따른 것이다. 상기 방법에서, 제1 단일특이성 2가 항체(예를 들어, 항 GPRC5D 항체) 및 제2 단일특이성 2가 항체(예를 들어, 항 CD3 항체)는 이종이량체 안정성을 촉진하는 CH3 도메인에서 특정 치환을 갖도록 조작되며; 이들 항체는 힌지 영역 내의 시스테인이 이황화물 결합 이성질화를 거칠 수 있게 하기에 충분한 환원성 조건 하에서 함께 인큐베이션되어; Fab 아암 교환에 의해 이중특이성 항체를 생성한다. 인큐베이션 조건은 비환원성 상태로 최적으로 회복될 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 환원제는 2-메르캅토에틸아민(2-MEA), 다이티오트레이톨(DTT), 다이티오에리트리톨(DTE), 글루타티온, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), L-시스테인 및 베타-메르캅토에탄올이며, 바람직하게는 환원제는 2-메르캅토에틸아민, 다이티오트레이톨 및 트리스(2-카르복시에틸)포스핀으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예를 들어, pH 5 내지 8에서, 예를 들어 pH 7.0에서 또는 pH 7.4에서 적어도 25 mM 2-MEA의 존재 하에서 또는 적어도 0.5 mM 다이티오트레이톨의 존재 하에서 20℃ 이상의 온도에서 90분 이상 동안의 인큐베이션이 사용될 수 있다.
기재된 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체에 더하여, 기재된 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체를 인코딩할 수 있는 폴리뉴클레오티드 서열이 또한 제공된다. 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공되며, 마찬가지로 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체를 발현하는 세포도 본 명세서에 제공된다. 개시된 벡터를 발현할 수 있는 세포가 또한 기재된다. 이들 세포는 포유류 세포(예컨대, 293F 세포, CHO 세포), 곤충 세포(예컨대, Sf7 세포), 효모 세포, 식물 세포, 또는 세균 세포(예컨대, 대장균)일 수 있다. 기재된 항체는 또한 하이브리도마 세포에 의해 생성될 수 있다.
다중특이성 항체 및 이의 다중특이성 항원 결합 단편을 사용하는 치료적 조성물 및 치료 방법
상기에 논의된 GPRC5D 이중특이성 항체, 예를 들어 상기 논의된 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체는 요법에 유용하다. 특히, GPRC5D 이중특이성 항체는 암을 치료하는 데 유용하다. 또한, 포유동물에서 과다증식성 장애의 치료를 위한 치료적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 본 치료적 조성물은 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체 또는 다중특이성 항원 결합 단편의 치료적 유효량 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 또는 이의 다중특이성 항원 결합 단편, 그리고 더 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항원 결합 단편이다. 일 실시 형태에서, 상기 약제학적 조성물은 하기를 포함하는(그러나 이로 한정되지 않는) GPRC5D 발현 암의 치료를 위한 것이다: GPRC5D 발현 B 세포 암, 예컨대 다발성 골수종(MM); 및 GPRC5D가 발현되는 아직 결정되지 않은 다른 암. 상기에 논의된 특정 암을 포함한 암, 예컨대 혈액암을 치료하기 위해 사용될 수 있는 특정 이중특이성 항체는 항체 GC5B81, GC5B465, GS5B483 또는 GC5B596를 포함한다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 a) 본 발명의 다중특이성 항체 또는 항체 단편의 유효량, 및 b) 약제학적으로 허용되는 담체 - 이는 불활성이거나 생리학적으로 활성일 수 있음 - 를 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 또는 이의 다중특이성 항원 결합 단편, 그리고 더 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항원 결합 단편이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 생리학적으로 적합한 임의의 그리고 모든 용매, 분산 매체, 코팅, 항세균제 및 항진균제 등을 포함한다. 적합한 담체, 희석제 및/또는 부형제의 예에는 물, 식염수, 인산염 완충 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등뿐만 아니라, 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 포함한다. 많은 경우에, 조성물 중에 등장화제, 예컨대 당류, 다가알코올 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 특히, 적합한 담체의 관련 예에는 (1) 약 1 mg/mL 내지 25 mg/mL의 인간 혈청 알부민을 함유하거나 함유하지 않는 둘베코(Dulbecco) 인산염 완충 식염수, pH 약 7.4, (2) 0.9% 식염수(0.9% w/v 염화나트륨(NaCl)), 및 (3) 5% (w/v) 덱스트로스가 포함되고; 또한 산화방지제, 예컨대 트립타민 및 안정제, 예컨대 Tween 20®을 함유할 수 있다.
본 발명에서의 조성물은 또한, 필요하다면 치료되는 특정 장애를 위하여, 추가의 치료제를 함유할 수 있다. 바람직하게는, 다중특이성 항체 또는 항체 단편과 보충적 활성 화합물은 서로에게 불리한 영향을 주지 않는 상보적 활성을 가질 것이다. 바람직한 실시 형태에서, 추가의 치료제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드, 또는 인터류킨 2이다. 바람직한 실시 형태에서, 추가의 치료제는 항암화학요법제이다.
본 발명의 조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이들은, 예를 들어 액체, 반고체, 및 고체 투여형을 포함하지만, 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료적 응용에 좌우된다. 전형적인 바람직한 조성물은 주사가능 또는 주입가능 용액의 형태이다. 바람직한 투여 방식은 비경구(예를 들어, 정맥내, 근육내, 복막내, 피하) 투여이다. 바람직한 실시 형태에서, 본 발명의 조성물은 일정 시간에 걸쳐 연속 주입에 의해 또는 볼루스(bolus)로서 정맥내 투여된다. 다른 바람직한 실시 형태에서, 이들은 국부뿐만 아니라 전신 치료적 효과를 발휘하도록 근육내, 피하, 관절내, 골액낭내, 종양내, 종양 주변, 병변내, 또는 병변 주변 경로에 의해 주사된다.
본 발명의 항체, 항체 단편 또는 항체 복합체를 적절한 용매 중에 필요한 양으로 혼입시킨 후, 미세여과에 의해 멸균함으로써 비경구 투여를 위한 멸균 조성물이 제조될 수 있다. 용매 또는 비히클로서, 물, 식염수, 인산염 완충 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등뿐만 아니라 이들의 조합도 사용될 수 있다. 많은 경우에, 조성물 중에 등장화제, 예컨대 당류, 다가알코올 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 이러한 조성물은 또한 애쥬번트(adjuvant), 특히 습윤제, 등장화제, 유화제, 분산제 및 안정화제를 함유할 수 있다. 비경구 투여용 멸균 조성물은 또한 멸균 고체 조성물 형태로 제조될 수 있는데, 이것은 멸균수 또는 임의의 다른 주사가능한 멸균 매체 중에서 사용 시에 용해될 수 있다.
다중특이성 항체 또는 항체 단편은 또한 경구 투여될 수 있다. 경구 투여를 위한 고체 조성물로서, 정제, 환제, 분말(젤라틴 캡슐, 샤세(sachet)) 또는 과립이 사용될 수 있다. 이들 조성물에서, 본 발명에 따른 활성 성분은 아르곤 스트림 하에서 하나 이상의 불활성 희석제, 예컨대 전분, 셀룰로스, 수크로스, 락토스 또는 실리카와 혼합된다. 이러한 조성물은 또한 희석제 이외의 물질, 예를 들어 하나 이상의 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트 또는 활석, 착색제, 코팅(당-코팅된 정제) 또는 글레이즈를 포함할 수 있다.
경구 투여를 위한 액체 조성물로서, 불활성 희석제, 예컨대 물, 에탄올, 글리세롤, 식물성 오일 또는 파라핀유를 함유하는 약제학적으로 허용되는 용액, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 엘릭서(elixir)가 사용될 수 있다. 이러한 조성물은 희석제 이외의 물질, 예를 들어 습윤, 감미, 증점, 향미 또는 안정화 제품을 포함할 수 있다.
용량은 원하는 효과, 치료 지속시간 및 사용되는 투여 경로에 좌우되며; 이것은 대체로 성인의 경우 경구로 일일 5 mg 내지 1000 mg이며, 이때 단위 용량은 1 mg 내지 250 mg 활성 물질의 범위이다. 일반적으로, 의사는 치료를 받는 대상의 연령, 체중 및 그에 특이적인 임의의 다른 인자에 따라 적절한 투여량을 결정할 것이다.
또한, GPRC5D+ 세포를 사멸하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 본 방법은 GPRC5D+ 세포의 사멸을 필요로 하는 환자에게, 상기 GPRC5D에 결합하고 T 세포를 동원하여 상기 GPRC5D+ 세포를 사멸할 수 있는(즉, T 세포 방향전환) 다중특이성 항체를 투여함에 의한다. 본 발명의 다중특이성 항체 또는 항체 단편 중 임의의 것이 치료적으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 일 실시 형태에서 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체는 대상의 암을 치료하기 위해 치료적으로 사용될 수 있다.
바람직한 실시 형태에서, 본 발명의 다중특이성 항체 또는 항체 단편은 포유동물에서의 과다증식성 장애의 치료에 사용된다. 더 바람직한 실시 형태에서, 상기에 개시되고 본 발명의 다중특이성 항체 또는 항체 단편을 함유하는 약제학적 조성물들 중 하나가 포유동물에서의 과다증식성 장애의 치료에 사용된다. 일 실시 형태에서, 장애는 암이다. 특히, 상기 암은 하기를 포함하는(그러나 이로 한정되지 않는) GPRC5D 발현 암이다: GPRC5D 발현 B 세포 암, 예컨대 다발성 골수종(MM); 및 GPRC5D가 발현되는 아직 결정되지 않은 다른 암. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 또는 이의 다중특이성 항원 결합 단편, 그리고 더 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항원 결합 단편이다.
따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은 GPRC5D 발현 암을 포함하는(그러나 이로 한정되지 않는) 다양한 암의 치료 또는 예방에 유용하며, GPRC5D 발현 암은 하기를 포함한다(그러나 이로 한정되지 않는다): GPRC5D 발현 B/형질세포암, 예컨대 급성 다발성 골수종(MM) 또는 전암성(premalignant) 골수종, 예컨대 MGUS (의미불명의 단클론성 고감마글로불린혈증(Monoclonal Gammopathy of Undetermined Significance)) 및 SMM (무증상 다발성 골수종(Smoldering Multiple myeloma)) 및 형질세포종; 및 GPRC5D가 발현되는 아직 결정되지 않은 다른 암.
유사하게, 선택된 세포 집단의 성장을 억제하기 위한 방법이 본 명세서에 추가로 제공되며, 본 방법은 GPRC5D 발현 표적 세포, 또는 그러한 표적 세포를 함유하는 조직을, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 존재 하에서, 단독으로 또는 다른 세포독성제 또는 치료제와 병용하여 본 발명의 다중특이성 항체 또는 항체 단편의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 또는 이의 다중특이성 항원 결합 단편, 그리고 더 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항원 결합 단편이다. 바람직한 실시 형태에서, 추가의 치료제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드 또는 인터류킨 2이다. 바람직한 실시 형태에서, 추가의 치료제는 항암화학요법제이다. 선택된 세포 집단의 성장을 억제하기 위한 방법은 시험관내, 생체내(in vivo), 또는 생체외(ex vivo)에서 실시될 수 있다.
시험관내 사용의 예에는, 이환된 또는 악성 세포를 사멸하기 위한, 동일한 환자 내로의 이식 전에의 자가 골수의 치료; 컴피턴트(competent) T 세포를 사멸하여 이식편대숙주질환(GVHD)을 예방하기 위한, 이식 전에의 골수의 치료; 표적 항원을 발현하지 않는 원하는 변이체를 제외한 모든 세포를 사멸하기 위한 또는 원치 않는 항원을 발현하는 변이체를 사멸하기 위한, 세포 배양물의 치료가 포함된다. 비임상적 시험관내 사용의 조건은 당업자에 의해 용이하게 결정된다.
임상적 생체외 사용의 예는 암 치료에서 자가 이식 전에 골수로부터 종양 세포를 제거하기 위한 것이다. 치료는 하기와 같이 수행될 수 있다. 골수가 환자 또는 다른 개체로부터 수집되고, 이어서 본 발명의 세포독성제가 첨가된 혈청을 함유하는 배지 중에서 인큐베이션된다. 농도는 약 37℃에서 약 30분 내지 약 48시간 동안 약 10 μM 내지 1 μM의 범위이다. 인큐베이션의 시간 및 농도의 정확한 조건, 즉 용량은 당업자에 의해 용이하게 결정된다. 인큐베이션 후에, 골수 세포를 혈청을 함유하는 배지로 세척하고, 알려진 방법에 따라 i.v. 주입에 의해 환자에게 반환시킨다. 환자가 골수의 수집과 치료된 세포의 재주입의 시간 사이에 다른 치료, 예컨대 일련의 절제 화학요법 또는 전신 방사선 조사를 받는 상황이라면, 치료된 골수 세포는 표준 의료 장비를 사용하여 액체 질소 중에 동결 상태로 저장된다.
임상적 생체내 사용을 위하여, 다중특이성 항체 또는 항원 결합 단편의 치료적 유효량이 이를 필요로 하는 대상에게 투여된다. 예를 들어, GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 및 이의 다중특이성 항원 결합 단편은 GPRC5D 발현 암의 치료를 필요로 하는 대상에서 GPRC5D 발현 암의 치료에 유용할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 발현 암은 B 세포암, 예컨대 다발성 골수종(MM)이다. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 또는 이의 다중특이성 항원 결합 단편, 그리고 더 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항원 결합 단편이다. 일부 실시 형태에서, 대상은 포유동물, 바람직하게는 인간이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체 또는 항원 결합 단편은 멸균성에 대해 시험된 용액으로서 투여될 것이다.
상기의 치료 및 사용 방법에서의 투여 계획은 최적의 원하는 반응(예를 들어, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있거나, 수회 분할 용량이 시간 경과에 따라 투여될 수 있거나, 용량은 치료 상황의 위급성에 따라 비례하여 감소되거나 증가될 수 있다. 비경구 조성물을 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위하여 투여 단위 형태로 제형화할 수 있다.
다중특이성 항체 및 단편에 대한 효율적인 투여량 및 투여 계획은 치료하고자 하는 질병 또는 질환에 좌우되고, 당업자에 의해 결정될 수 있다. 본 발명의 화합물의 치료적 유효량에 대한 예시적인 비제한적인 범위는 약 0.001 내지 10 mg/㎏, 예컨대 약 0.001 내지 5 mg/㎏, 예를 들어 약 0.001 내지 2 mg/㎏, 예컨대 약 0.001 내지 1 mg/㎏, 예를 들어 약 0.001, 약 0.01, 약 0.1, 약 1 또는 약 10 mg/㎏이다.
본 기술분야에서 통상의 기술을 가진 의사 또는 수의사는 필요한 약제학적 조성물의 유효량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 약제학적 조성물에 사용되는 다중특이성 항체 또는 단편의 용량을 원하는 치료적 효과를 달성하기 위해 필요한 수준보다 더 낮은 수준에서 시작해서 원하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점차적으로 증가시킬 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 이중특이성 항체의 적합한 일일 용량은 치료적 효과를 생성하기에 유효한 최저 용량인 화합물의 그러한 양일 것이다. 투여는, 예를 들어 비경구, 예컨대 정맥내, 근육내 또는 피하 투여일 수 있다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 항체 또는 단편은 mg/m2로 계산된 매주 투여량으로 주입에 의해 투여될 수 있다. 그러한 투여량은, 예를 들어, 하기에 따라 상기에 제공된 mg/㎏ 투여량을 기준으로 할 수 있다: 용량(mg/㎏)×70: 1.8. 그러한 투여는, 예를 들어 1 내지 8회, 예컨대 3 내지 5회 반복될 수 있다. 투여는 2 내지 24시간, 예컨대 2 내지 12시간의 기간에 걸쳐 연속 주입에 의해 수행될 수 있다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 항체 또는 단편은 독성 부작용을 감소시키기 위해 장기간, 예컨대 24시간 초과에 걸쳐 느린 연속 주입에 의해 투여될 수 있다.
일 실시 형태에서, 다중특이성 항체 또는 단편은 주 1회 제공될 때 최대 8회, 예컨대 4 내지 6회 동안 고정 용량으로서 계산된 매주 투여량으로 투여될 수 있다. 그러한 계획은, 예를 들어 6개월 또는 12개월 후에, 필요하다면 1회 이상 반복될 수 있다. 그러한 고정 투여량은, 예를 들어, 70 ㎏의 체중 추산치로, 상기에 제공된 mg/㎏ 투여량을 기준으로 할 수 있다. 투여량은, 투여 시에 혈액 중의 본 발명의 이중특이성 항체의 양을 측정함으로써 결정 또는 조정될 수 있는데, 이는, 예를 들어 생물학적 샘플을 취하고, 본 발명의 다중특이성 항체의 GPRC5D 항원 결합 영역을 표적으로 하는 항-이디오타입(anti-idiotypic) 항체를 사용함으로써 행해진다.
일 실시 형태에서, 다중특이성 항체 또는 단편은 유지 요법(maintenance therapy)에 의해, 예를 들어 6개월 이상의 기간 동안 주 1회 투여될 수 있다.
다중특이성 항체 또는 단편은 또한 암 발생 위험을 감소시키고/시키거나, 암 진행에서의 사건의 발생의 개시를 지연시키고/시키거나, 암이 관해기에 있을 때 재발 위험을 감소시키기 위하여 예방적으로 투여될 수 있다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 다중특이성 항체 및 이의 단편은 또한 병용 요법으로 투여될 수 있는데, 즉 치료하고자 하는 질병 또는 질환에 대해 관련된 다른 치료제와 병용되어 투여될 수 있다. 따라서, 일 실시 형태에서, 본 항체 함유 약제는 하나 이상의 추가의 치료제, 예컨대 화학치료제와의 병용을 위한 것이다. 일부 실시 형태에서, 다른 치료제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드 또는 인터류킨 2이다. 그러한 병용 투여는 동시적, 개별적 또는 순차적 - 임의의 순서임 - 일 수 있다. 동시적 투여의 경우, 작용제들은, 필요에 따라, 하나의 조성물로서 또는 개별 조성물들로서 투여될 수 있다.
일 실시 형태에서, 대상에서 GPRC5D를 발현하는 세포를 수반하는 장애를 치료하기 위한 방법이 제공되며, 본 방법은 GPRC5D를 발현하는 세포를 수반하는 장애의 치료를 필요로 하는 대상에 대한 다중특이성 항체 또는 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체의 치료적 유효량의 투여 및 방사선요법을 포함한다. 일 실시 형태에서, 암을 치료 또는 예방하기 위한 방법이 제공되며, 본 방법은 암의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상에 대한 다중특이성 항체 또는 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 GPRC5D × CD3 항체의 치료적 유효량의 투여 및 방사선요법을 포함한다. 방사선요법은 방사선을 포함할 수 있거나, 또는 환자에 대한 방사성 의약품의 관련 투여가 제공된다. 방사선원은 치료받는 환자에 외부 또는 내부에 있을 수 있다(예를 들어, 방사선 치료는 외부 빔 방사선 요법(EBRT) 또는 근접방사선요법(brachytherapy, BT)의 형태일 수 있음). 그러한 방법을 실시하는 데 사용될 수 있는 방사성 원소는, 예를 들어 라듐, 세슘-137, 이리듐-192, 아메리슘-241, 금-198, 코발트-57, 구리-67, 테크네튬-99, 요오다이드-123, 요오다이드-131, 및 인듐-111을 포함한다.
키트
본 명세서에는 키트가 또한 제공되며, 본 키트는, 예를 들어 기재된 다중특이성 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 특정 세포 종류의 사멸을 위한 상기 항체 또는 단편의 사용설명서를 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 또는 이의 다중특이성 항원 결합 단편, 그리고 더 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항원 결합 단편이다. 설명서는 시험관내, 생체내 또는 생체외에서 다중특이성 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하는 것에 대한 지시사항을 포함할 수 있다.
전형적으로, 키트는 다중특이성 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 담긴 구획을 가질 것이다. 다중특이성 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 동결건조된 형태, 액체 형태, 또는 키트에 포함되기에 적합한 다른 형태일 수 있다. 키트는 또한 키트 내의 설명서에 기재된 방법을 실시하는데 필요한 추가 요소들, 예컨대 동결건조된 분말을 재구성하기 위한 멸균 용액, 환자에게 투여하기 전에 다중특이성 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 병용하기 위한 추가 작용제, 및 다중특이성 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 환자에게 투여하는데 도움이 되는 도구를 수용할 수 있다.
진단적 용도
본 명세서에 기재된 다중특이성 항체 및 단편은 또한 진단 목적으로 사용될 수 있다. 따라서, 또한, 본 명세서에 정의된 바와 같은 다중특이성 항체 또는 단편을 포함하는 진단용 조성물이 제공되고, 그의 용도에 대해 제공된다. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 다중특이성 항체 또는 이의 다중특이성 항원 결합 단편, 그리고 더 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항원 결합 단편이다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 암 진단용 키트를 제공하며, 본 키트는 이중특이성 GPRC5D × CD3 항체, 및 GPRC5D에 대한 항체의 결합을 검출하기 위한 하나 이상의 시약을 포함하는 용기를 포함한다. 시약은 예를 들어, 형광 태그, 효소 태그 또는 다른 검출가능한 태그를 포함할 수 있다. 시약은 또한 효소적 반응을 위한 2차 또는 3차 항체 또는 시약을 포함할 수 있으며, 여기서 효소적 반응은 시각화될 수 있는 생성물을 생성한다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 방사성표지, 형광 표지, 에피토프 태그, 비오틴, 발색단 표지, ECL 표지, 효소, 루테늄, 111In-DOTA, 111In-다이에틸렌트라이아민펜타아세트산(DTPA), 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제 및 베타-갈락토시다제, 또는 폴리-히스티딘 또는 당업계에 알려진 유사한 그러한 표지로 표지화될 수 있다.
실시 형태
본 명세서에 제공된 본 발명은 또한 하기의 비제한적인 실시 형태를 제공한다.
1. 하기를 포함하는, GPRC5D에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
a. 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
b. 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
c. 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
d. 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
e. 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
f. 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
g. 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
h. 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
i. 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
j. 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 75의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
k. 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
l. 서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 76의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3; 또는
m. 서열 번호 66의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3.
2. a. 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체가 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
b. 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체가 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
c. 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체가 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
d. 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체가 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
e. 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체가 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
f. 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체가 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
g. 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체가 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
h. 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체가 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
i. 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체가 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
j. 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 75의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체가 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
k. 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체가 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
l. 서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 76의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체가 서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 81의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
m. 서열 번호 66의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체가 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하는, 실시 형태 1의 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
3. GPRC5D에 특이적으로 결합하고, 서열 번호 52, 53, 54, 55, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89 또는 91로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 중(VH)쇄 영역을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
4. 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 서열 번호 56, 57, 58, 92, 93 또는 94로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 경(VL)쇄 영역을 포함하는, 실시 형태 3의 항체.
5. 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 서열 번호 52, 53, 54, 55, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89 또는 91로 이루어진 군으로부터 선택되는 VH 영역 및 서열 번호 56, 57, 58, 92, 93 또는 94로 이루어진 군으로부터 선택되는 VL 영역을 포함하는, 실시 형태 3의 항체.
6. 상기 VH쇄 영역이 서열 번호 56을 포함하는 VL쇄 영역과 쌍을 이룬, 서열 번호 52, 53 또는 83을 포함하는, 실시 형태 5의 항체.
7. 상기 VH쇄 영역이 서열 번호 57을 포함하는 VL쇄 영역과 쌍을 이룬, 서열 번호 54, 84, 85, 86 또는 90을 포함하는, 실시 형태 5의 항체.
8. 상기 VH쇄 영역이 서열 번호 58를 포함하는 VL쇄 영역과 쌍을 이룬, 서열 번호 55 또는 88을 포함하는, 실시 형태 5의 항체.
9. 상기 VH쇄 영역이 서열 번호 92를 포함하는 VL쇄 영역과 쌍을 이룬, 서열 번호 82 또는 87을 포함하는, 실시 형태 5의 항체.
10. 상기 VH쇄 영역이 서열 번호 93을 포함하는 VL쇄 영역과 쌍을 이룬, 서열 번호 89를 포함하는, 실시 형태 5의 항체.
11. 상기 VH쇄 영역이 서열 번호 94를 포함하는 VL쇄 영역과 쌍을 이룬, 서열 번호 91을 포함하는, 실시 형태 5의 항체.
12. 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에 결합하는, 실시 형태 1 내지 실시 형태 11 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편.
13. 인간 항체 또는 항원 결합 단편인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 12 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편.
14. 재조합체인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 13 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편.
15. Fab 단편, Fab2 단편 또는 단일쇄 항체인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 14 중 어느 하나의 항원 결합 단편.
16. IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 동종형을 갖는, 실시 형태 1 내지 실시 형태 15 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편.
17. IgG1 또는 IgG4 동종형인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 9 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편.
18. 상기 IgG1이 Fc 영역 내에 K409R 치환을 갖는, 실시 형태 17의 항체.
19. 상기 IgG1이 Fc 영역 내에 F405L 치환을 갖는, 실시 형태 17의 항체.
20. 상기 IgG4가 Fc 영역 내에 F405L 치환 및 R409K 치환을 갖는, 실시 형태 20의 항체.
21. Fc 영역 내에 S228P 치환, L234A 치환 및 L235A 치환을 추가로 포함하는 실시 형태 16의 항체.
22. 인간 GPRC5D에 특이적으로 결합하고, 사이노몰거스 원숭이(cynomolgus monkey) GPRC5D와 교차 반응하는, 실시 형태 1 내지 실시 형태 14 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편.
23. 약 28 nM 미만의 EC50로 시험관내에서 ADCC를 유도하는, 실시 형태 17의 항체 또는 항원 결합 단편.
24. 실시 형태 1 내지 실시 형태 11 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편을 발현하는 단리된 세포.
25. 하이브리도마인, 실시 형태 24의 세포.
26. 상기 항체가 재조합적으로 생성되는, 실시 형태 24의 세포.
27.
a) 제1 중쇄(HC1);
b) 제2 중쇄(HC2);
c) 제1 경쇄(LC1); 및
d) 제2 경쇄(LC2)를 포함하며,
상기 HC1과 상기 LC1이 쌍을 이루어서 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하고, 상기 HC2와 상기 LC2가 쌍을 이루어서 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하는, 단리된 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이의 GPRC5D × CD3 이중특이성 결합 단편.
28. HC1이 서열 번호 25를 포함하고, LC1이 서열 번호 26을 포함하는, 실시 형태 27의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
29. HC2가 서열 번호 52를 포함하고, LC2가 서열 번호 56을 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
30. HC2가 서열 번호 53을 포함하고, LC2가 서열 번호 56을 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
31. HC2가 서열 번호 54를 포함하고, LC2가 서열 번호 57을 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
32. HC2가 서열 번호 55를 포함하고, LC2가 서열 번호 58을 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
33. HC2가 서열 번호 82를 포함하고, LC2가 서열 번호 92를 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
34. HC2가 서열 번호 83을 포함하고, LC2가 서열 번호 56을 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
35. HC2가 서열 번호 84를 포함하고, LC2가 서열 번호 57을 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
36. HC2가 서열 번호 85를 포함하고, LC2가 서열 번호 57을 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
37. HC2가 서열 번호 86을 포함하고, LC2가 서열 번호 57을 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
38. HC2가 서열 번호 87을 포함하고, LC2가 서열 번호 92를 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
39. HC2가 서열 번호 88을 포함하고, LC2가 서열 번호 58를 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
40. HC2가 서열 번호 89를 포함하고, LC2가 서열 번호 93을 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
41. HC2가 서열 번호 91을 포함하고, LC2가 서열 번호 94를 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
42. HC2가 서열 번호 85를 포함하고, LC2가 서열 번호 57을 포함하는, 실시 형태 28의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
43. IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 동종형을 갖는, 실시 형태 27 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
44. IgG4 동종형인, 실시 형태 43의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
45. 인간 골수종 세포의 표면 상의 GPRC5D에 결합하는, 실시 형태 27 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
46. 인간 다발성 골수종 세포의 표면 상의 GPRC5D에 결합하는, 실시 형태 27 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
47. 약 0.22 nM 미만의 EC50로 시험관내에서 인간 T 세포 활성화를 유도하는, 실시 형태 27 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
48. 약 0.89 nM 미만의 EC50로 시험관내에서 GPRC5D 발현 세포의 T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, 실시 형태 27 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
49. 실시 형태 27 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 항체 또는 이중특이성 결합 단편을 발현하는 단리된 세포.
50. 하이브리도마인, 실시 형태 49의 세포.
51. 상기 항체 또는 이중특이성 결합 단편이 재조합적으로 생성되는, 실시 형태 49의 세포.
52. 실시 형태 27 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편의 치료적 유효량을 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 암을 앓고 있는 대상을 치료하는 방법.
53. 실시 형태 27 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하여 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 단계를 포함하는, 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법.
54. 실시 형태 27 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하여 T 세포를 암으로 방향전환(redirect)시키는 단계를 포함하는, T 세포를 GPRC5D 발현 암 세포로 방향전환시키는 방법.
55. 상기 암이 혈액암인, 실시 형태 52, 실시 형태 53 또는 실시 형태 54의 방법.
56. 상기 혈액암이 GPRC5D 발현 B 세포 암인, 실시 형태 55의 방법.
57. 상기 GPRC5D 발현 B 세포 암이 다발성 골수종인, 실시 형태 56의 방법.
58. 제2 치료제를 투여하는 단계를 포함하는, 실시 형태 52의 방법.
59. 상기 제2 치료제가 화학요법제 또는 표적 항암요법인, 실시 형태 58의 방법.
60. 상기 화학요법제가 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드 또는 인터류킨 2인, 실시 형태 59의 방법.
61. 상기 제2 치료제를 상기 대상에게 상기 이중특이성 항체와 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여하는, 실시 형태 59의 방법.
62. 실시 형태 27 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
63. 실시 형태 49 내지 실시 형태 51 중 어느 하나의 세포를 배양함으로써 실시 형태 27 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편을 생성하는 방법.
64. 실시 형태 27 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편의 HC1, HC2, LC1 또는 LC2를 인코딩하는 단리된 합성 폴리뉴클레오티드.
65. 실시 형태 27 내지 실시 형태 42 중 어느 하나에 정의된 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편 및/또는 제63항에 정의된 폴리뉴클레오티드 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트.
실시예
하기의 실시예는 앞서의 개시내용을 보충하기 위해 그리고 본 명세서에 기재된 발명 요지에 대한 보다 나은 이해를 주기 위해 제공된다. 이들 실시예는 기재된 발명 요지를 한정하는 것으로 여겨져서는 안 된다. 본 명세서에 기재된 실시예 및 실시 형태는 단지 예시적인 목적을 위한 것이고, 그에 비추어 다양한 변형 또는 변화가 당업자에게 명백할 것이고, 이는 본 발명의 진정한 범주 내에 포함되어야 하고 그로부터 벗어나지 않고서 이루어질 수 있음이 이해된다.
실시예 1: 항원
재조합 GPRC5D 항원 생산의 어려움으로 인해, GPRC5D[인간(서열 번호 22), 사이노(서열 번호 23) 및 뮤린(서열 번호 24)]를 나타내는 형질감염된 세포주를 항체 생성 및 특성화 연구를 위한 전세포 항원으로 사용하도록 표준 방법을 사용하여 생성하였다(표 4).
[표 4]
Figure pct00010
실시예 2: 파지 디스플레이를 사용한 GPRC5D 항체의 생성
파지에 의한 GPRC5D 항체의 생성에서 표준 세포 패닝(음성 선택) 및 FACS 세포 파지 패닝(경쟁 선택)과 같은 두 가지 별개의 접근법이 뒤따랐다.
표준 세포 파지 패닝(음성 선택):
사내 드 노보(de novo) 파지 라이브러리가 상세히 기술되어 있다 (문헌[Shi et al (2010) J. Mol. Biol. 397:385-396]; 국제 특허 공개 WO09/085462호). 이러한 라이브러리는 CDR-H3에서 높은 다양성을 갖도록 설계된 3개의 인간 VH 생식세포계열 유전자 (IGHV1-69, 3-23, 5-51) 및 4개의 인간 VL 생식세포계열 유전자 (A27, B3, L6, O12) 상에서 구축되었다. 라운드 1, 3, 5의 경우, 파지 코트 단백질 pIX 상에 Fab 변이체를 표시하는 3개의 드 노보 파지 라이브러리(DNP00004 -169HC/LC 믹스, DNP00005 -323HC/LC 믹스 및 DNP00006 -551HC/LC 믹스)를 GPRC5D 발현 HEK293 G5 안정한 세포(표적 세포)에 대해 패닝하고, 라운드 2 및 4의 경우, 이전 라운드의 증폭된 Fab-pIX 파지를 HEK293 백그라운드 세포(음성 선택)에 적용하였다(표 5 참조). 표적 세포에 결합된 라운드 1의 드 노보 Fab-pIX 파지를 하룻밤 증폭을 위해 회수하였다. 라운드 1의 선택된 파지를 라운드 2의 백그라운드 세포에 적용하였으며, 여기서 비결합 Fab-pIX 파지를 하룻밤 음성 선택된 파지 증폭을 위해 회수하였다. 패닝의 양성 및 음성 라운드의 또 하나의 세트, 즉, 라운드 3 및 4를 수행하였다. 음성 선택된 증폭된 파지의 마지막 라운드를 2개의 패닝 샘플, 즉, 표적 세포의 패닝용 샘플 및 백그라운드 세포의 패닝용 샘플로 분할하여, 최종 라운드를 수행하였다.
[표 5]
Figure pct00011
표준 세포 파지 패닝(백그라운드 선택):
Fab-pIX 파지 디스플레이 라이브러리를 앞서 언급된 표준 세포 패닝 절차로 수행된 것과 유사한 환경 및 인큐베이션 시간 후에 HEK293 세포에 첨가하였다(표 6). 3회 라운드 후에, HEK293 결합된 Fab-pIX 파지에 상응하는 DNA를 사용하여 NGS를 위한 PCR 앰플리콘을 생성하였다. 이러한 NGS 결과를 NGS2.0 소프트웨어 내에서 추가의 동적 감산 분석(dynamic subtractive analysis)에 사용하여, 가능한 표적 특이적 Fab 후보를 구별하는데 도움이 될 것이다.
[표 6]
Figure pct00012
FACS 세포 파지 패닝(경쟁 선택)
Fab-pIX 파지를 표적 세포와 배경 세포의 혼합물에 동시에 적용하여, 3회의 패닝 라운드를 수행하였다(표 7). 라운드 1 및 2의 경우, 부착된 Fab-pIX 파지를 갖는 표적 세포를 GFP 신호를 사용하여 분류하였다. 분류된 세포로부터 결합된 Fab-pIX 파지를 포획하기 위해, 산성 세포 용해, 이어서 대장균 감염을 가하였다. 라운드 2에서 Fab-pIX 파지를 증폭시키고, 세포 혼합물을 최종 라운드에서 2개의 집단으로 분류하고, GFP 표적 세포에 대해 게이팅하고, 비GFP 백그라운드 세포에 대해 게이팅하였다. 두 세포 집단에 대한 결합된 Fab-pIX 파지를 산성 용해 및 대장균 감염에 의해 포획하였다.
[표 7]
Figure pct00013
파지 패닝의 차세대 시퀀싱(NGS)
글루코스 억제 하의 하룻밤 성장을 마지막 라운드 패닝 샘플 6개에 대하여 행하였다. 이러한 배양물을 사용하여 미니프렙(mini-prep) DNA, 퀴아젠(Qiagen) QIAspin DNA 키트를 제조하였다. 6개의 DNA 샘플을 PCR 주형으로 사용하여, HCDR1에서 HCDR3까지 측정된 앰플리콘을 생성하였다. 6개의 앰플리콘을 겔 정제하고, 표준 셀 패닝에 대해 버전 2.1, 3.0을 별도로 유지하여 풀링(pooling)하고, FACS 세포 패닝에 대해 완전히 풀링하였다. 이들 풀링된 겔 정제된 앰플리콘을 제네위즈(Genewiz) NGS 서비스에 제공하여, MiSeq 1×300 기술에 의해 처리하였다. 파일을 제네위즈에 의해 전달하고 로컬 서버(nas2.0)에 업로드하였다. 이 서버 내에서, NGS2.0 소프트웨어 애플리케이션을 사용하여 서열 파일을 로딩, 판독 및 분석하였다. 카피수(>50) 및 표적 세포 (+) 대 백그라운드 세포(-) 서열의 비율(비율 >5:1)에 따른 상위 88개의 서열을 IgG 전환을 위해 선택하였다. 가변 중쇄 서열만이 NGS에 의해 결정되기 때문에, 완전한 중쇄 작제물은 적절한 프레임워크로 전자적으로 구성되어야 했다. 또한, 중쇄 서열 만이 알려져 있기 때문에, 각각의 후보를 4개의 모체 경쇄(A27, B3, L6, O12)와 쌍을 이루었다. 후보에 대한 최종 전환은 인간 IgG4PAA로서 행하였다.
ELISA 스크린 및 표준 시퀀싱
NGS에 사용되는 동일한 DNA 프렙으로부터, 제한효소 소화 및 셀프 라이게이션(self-ligation)을 수행하여 유전자 pIX를 잘라내어 가용성 Fab 발현을 가능하게 하였다. 3개의 패닝 샘플 각각에 대해 채취된 92개의 콜로니를 ELISA에 의한 Fab 발현에 대해 평가하고, 생어법(Sanger method)에 의해 중쇄 및 경쇄를 결정하기 위해 서열을 결정하였다. LCDR 내의 다양한 서열을 갖는 최종 후보를 포유류 발현 플라스미드로 클로닝하였다.
실시예 4: 파지 디스플레이 기술을 통해 얻어진 GPRC5D 항체의 초기 특성화
GPRC5D 결합:
전체 세포 파지 패닝을 상술한 바와 같이 항원으로서 인간 GPRC5D 세포를 사용하여 완료하였다. NGS 분석 후, 각각의 후보에 대해 중쇄 서열 만이 알려져 있었다. 결과적으로, 각각의 중쇄는 4개의 모체 경쇄(A27, B3, L6, O12)와 쌍을 이루어, NGS 를 사용하여 확인된 87개의 Hc 서열로부터 348개의 mAb를 생성해야만 했다. 이들 mAb를 초기에 FACS를 사용하여 사이노 GPRC5D에의 결합에 대해 평가하였다. 사이노 GPRC5D 세포주가 인간 GPRC5D 세포주보다 더 높은 발현 수준을 가지므로 잠재적 결합 신호를 최대화하도록 초기 스크리닝을 위해 사이노 GPRC5D 세포주를 선택하였다. 간략하게, FACS 스크리닝을 단백질 농도를 1 ㎍/ml로 표준화하여 수행하고, 100 μl의 단백질을 200,000개 세포/웰과 혼합하였다. mAb를 4℃에서 1시간 동안 세포와 인큐베이션되게 하였다. 이어서, 세포를 PBS 및 0.2% FBS로 3회 세척하였다. 이어서, PE와 접합된 항 인간 이차 mAb(잭슨(Jackson) 카탈로그 번호 709-116-149)를 검출 시약으로서 첨가하였다. 세포 및 이차 항체를 4℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 PBS 및 0.2% FBS로 3회 세척하였다. 세포를 PBS 및 0.2% FBS를 사용하여 다시 세척한 다음에, FACSarry 상에서 분석하였다.
MFI가 100,000보다 큰 15개의 mAb, MFI가 100,000보다 작지만 10,000보다 큰 23개의 mAb 및 MFI가 10,000보다 작지만 1000보다 큰 63개의 mAb를 비롯하여, 사이노 GPRC5D에 다수의 히트(hit)가 결합하는 것으로 관찰되었다. (표 8).
[표 8]
Figure pct00014
Figure pct00015
가장 높은 결합 친화도를 갖는 40개의 mAb를 추가의 특성화를 위해 선택하였으며, 이는 사이노 GPCR5D 세포에 대한 결합 연구와 FACS를 사용한 인간 GPRC5D 발현 세포에 대한 결합 평가를 반복하는 것으로 구성되었다(표 9). 이들 데이터를 분석하여, 정제 및 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 생성을 위해 17 mAb(강조 표시됨)를 선택하였다. 정제 및 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 생성을 위한 mAb를 선택하는데 사용되는 인자는 인간 GPRC5D에 대한 결합 특이성, 사이노 GPRC5D와의 교차 반응성 및 Hc 서열의 다양성을 포함한다. 예를 들어, GC5H36는 3개의 별개의 경쇄와 쌍을 이루고, 결합에 대하여 분석하였다(GC5B162, GC5B163, GC5B164). GC5B164 만이 진행되었는데, 그 이유는 이러한 mAb가 GC5B162 또는 GC5B163보다 인간 GPRC5D에 대한 MFI가 더 높은 것으로 관찰되었기 때문이었다.
[표 9]
Figure pct00016
HEK293 세포 및 비트랜스펙션된 HEK293 세포를 발현하는 인간 GPRC5D에 대한 각각의 선택된 mAb의 농도 의존성 결합 프로파일을 FACS를 사용하여 측정하였다(도 1). 모든 mAb는 용량 의존적으로 인간 GPRC5D에 결합하는 것으로 관찰되었다. 3개의 mAb, GC5B36, GC5B168 및 GC5B205가 또한 비트랜스펙션된(GPRC5D 널) HEK293 세포에 결합하는 것으로 관찰되었으며, 세포와의 이러한 비특이적 상호작용으로 인해 우선순위를 두지 않았다.
나머지 14개의 mAb를 항 CD3 아암 CD3B219 및 항 RSV 널 아암 B23M46으로 이중특이성 항체 생성을 위해 선택하였다(표 10).
[표 10]
Figure pct00017
하나의 이중특이성 항체, GCDB38은 재조합 시에 침전되었고, 다른 하나 GCDB36는 > 10%의 응집체를 함유하였다. 모든 다른 이중특이성 항체는 표준 방출 기준을 통과하였고, 널 아암 이중특이성 항체를 HEK293 세포를 발현하는 인간 GPRC5D에 대한 농도 의존성 결합에 대해 분석하였다(도 2).
모든 이중특이성 항체는 용량 의존적으로 결합하는 것으로 관찰되었다. GC5B320를 2가 mAb와 1가 이중특이성 항체 사이의 결합차를 추측하기 위해 결합 비교기로서 포함시켰다. GCDB44를 항 CD3 이중특이성 항체와 항 RSV 널 아암 mAb 사이의 결합차를 추측하기 위해 결합 비교기로서 포함시켰다. mAb GC5B320를 이중특이성 항체 GCDB30 및 GCDB44와 비교할 때, 예상된 겉보기 결합 친화도의 감소가 관찰되었다. 또한, GCDB44(항 CD3 이중특이성 Ab)는 GCDB30(항 RSV 널 아암 이중특이성 Ab)와 비교하여 항 인간 GPRC5D 세포에 대해 약간 더 높은 결합 친화도를 갖는 것으로 관찰되었으며, 이는 항 CD3 아암이 이러한 세포주에 대한 결합에 긍정적인 영향을 미치는 것으로 입증된다.
이중특이성 항체의 패널은 또한, GPRC5D를 내인성으로 발현하는 MM1R 및 H929 세포에 대한 결합에 대해 프로파일링되었다(도 3). MM1R 및 H929 세포에 대한 이중특이성 항체의 결합 프로파일을, FACS를 사용하여, 과발현된 인간 GPCR5D HEK293 세포 및 비트랜스펙션된 HEK293 세포와 비교하였다. 이중특이성 항체는 다양한 친화도로 MM1R 및 H929 세포에서 내인성으로 발현된 GPRC5D에 결합하는 것으로 관찰되었다. 가장 높은 결합이 인간 GPRC5D HEK 세포에서 관찰되었는데, 이는 과발현된 안정한 세포주로서 MM1R 또는 H929 세포보다 훨씬 더 높은 수용체 밀도를 갖는다. GCDB37, GCDB38, GCDB39 및 GCDB41은 H929 및 MM1R 세포에 대해 관찰된 낮은 결합 친화도로 인해 진행되지 않았다.
시험관내 T 세포 의존성 세포독성
이어서, 이중특이성 항체의 패널을 H929 및 MM1R 표적 세포를 사용한 T 세포 매개 세포독성 분석에서 효력에 대해 프로파일링하였다(도 4a 및 도 4b, 표 11). 간략하게, 표적 세포(H929, MM1.R, OPM2, LP-1 및 다우디(Daudi) 또는 HEK 모세포 및 HEK+ GPRC5D 세포)를 계수하고, 1천만 개의 세포를 3분간 1350 rpm으로 원심분리하고, 세포 펠릿을 1 ml의 희석된 CFSE 용액(CellTrace CFSE 증식 염색제를 18 μl의 멸균 DMSO 중에 재구성하여, 1 μl의 용액을 10 ml의 멸균 PBS 중에 희석시킴)에 재현탁시켜, 실온에서 8분간 암실에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후에, 1 ml의 HI FBS를 세포 현탁액에 첨가하여 과잉 CFSE를 켄칭(quenching)하였다. 세포를 10% FBS가 함유된 RPMI-1640로 2회 세척하였다. 10 ml의 RPMI 중에서의 재구성 후에, 세포를 계수하고, 세포 생존력을 스프레드시트에 기록하였다. 세포를 2.2 × 105/ml로 희석하고 사용하기 전까지 37℃에서 인큐베이션하였다.
정상 공여자의 팬(pan) T 세포를 37℃ 수욕에서 해동시킨 후, 세포를 4℃에서 3분간 1350 rpm으로 원심분리하였다. 상청액을 버리고, 배지에서 1.1×10^6/ml 농도로 재구성하였다. 2×105 표적 세포를 96-웰 U자형 바닥 플레이트의 웰에 첨가한 후, Fc 차단제(최종 농도 2 mg/ml)를 첨가하였다. 모든 세포주를 실온에서 10분간 인큐베이션하여, Fc 수용체 활성을 차단하였다. 1×105 T 세포를 웰에 첨가하였다(5:1의 이펙터: 표적 비). 표적 세포와 T 세포를 혼합한 후에, 20 μl의 GPRC5D × CD3 이중특이성 Ab 희석물을 각각의 웰에 첨가하였다. GPRC5D × CD3 이중특이성 항체를 PBS 중의 800 ㎍/ml(10X)로 희석하였다. 적정을 96-웰 U자형 바닥 플레이트에서 PBS로 4배 연속 희석하여 준비하였다. 최종 컬럼을 PBS 단독 상태로 두었다(비히클 대조군). 플레이트를 5% CO2로 37℃에서 48시간 동안 인큐베이션하였다.
2일(48 시간) 후에, 플레이트를 원심분리하여, 100 μl의 상청액을 사이토카인 방출 분석을 위해 -80℃에서 보관하였다. 세포를 200 μl의 PBS로 세척하고, 실온에서 20분간 50 μl의 근적외선 라이브/데드(Live/Dead) 염색제(1:200 희석) 및 항 CD25 PE 항체(1:50 희석) 중에서 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 200 μl의 FACS 완충액으로 1회 세척하고, 최종적으로 150 μl의 FACS 완충액으로 재구성하였다. 세포를 표적 세포독성(% 표적) 및 T 세포 활성화 CD25+(% 생존 T 세포)에 대해 FACSCanto II 및 FlowJo 7.6을 사용하여 분석하였다. 데이터의 그래핑 및 피팅을 최소 제곱법을 이용한 가변 기울기(4개의 파라미터) 함수로 비선형 회귀를 사용하여 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism)6에서 행하였다.
[표 11]
Figure pct00018
모든 이중특이성 항체는 T 세포 매개 H929 세포 사멸에서 활성을 나타내며, 다양한 효력이 관찰된다(표 11). 두 세포주에서 유사한 순위가 관찰되었다. 그러나, 더 낮은 EC50이 MM1R 세포에서 관찰되었다. 흥미롭게도, 결합 친화도는 반드시 T 세포 매개 세포독성 분석에서 효력과 상관관계가 있는 것은 아니었다. 예를 들어, GCDB44는 가장 높은 친화성 결합의 이중특이성 항체이었지만, 세포독성 분석에서 가장 효력이 낮았다. GCDB43는 유사하지만, 결합 친화도가 약간 낮아도 세포독성 분석에서 가장 효력이 높았다.
사이노 GPRC5D와의 기능적 교차 반응성을 평가하기 위해, 이어서 이중특이성 항체의 패널을 사이노 GPRC5D HEK293 세포를 사용하여 T 세포 매개 세포독성 및 T 세포 활성화에 대해 프로파일링하였다(도 5a 및 도 5b). 사이노 GPRC5D+ 발현 세포에 대하여 다양한 효력이 관찰되었지만, 모든 이중특이성 항체는 본 분석에서 활성을 나타내었다.
생체내 효능
그 다음에, 이러한 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체의 생체내 효능을 추측하기 위해, 벤치마킹 생체내 연구를 수행하였다. GCDB32 및 GCDB35(도 5a 및 도 5b)를 H929 예방적 종양 모델에서 시험하도록 선택하였다. 인간 PBMC의 주사 1주일 후에, H929 세포를 NSG 마우스에 이식하였다. 이중특이성 항체의 치료를 H929 세포의 이식과 동시에 개시하여, 총 5회의 치료에 대해 10 ㎍, 1 ㎍ 및 0.1 ㎍/동물 용량으로 2일 또는 3일마다(q2d 또는 q3d) 계속하였다. 10 마리의 마우스를 각각의 그룹에 사용하고, PBS를 비히클 대조군으로서 포함시켰다. 치료를 11일째에 중단시키고, 연구를 25일째(도 6a 및 도 6b) 또는 26일째(도 12a 내지 도 12d)에서 종료하였다. 이러한 예방적 모델에서 시험한 모든 GPRC5D × CD3 항체는 1 ㎍/동물 용량에서 약 80% 종양 성장 억제를 나타내는 GCDB35를 제외하고는, 10 및 1 ㎍/동물 용량에서 100% 종양 성장 억제를 나타내었다. 10배 낮은 용량(0.1 ug/동물)에서, 이들 이중특이성 항체는 10 내지 80% 종양 성장 억제 범위의 다양한 효능을 나타내었다.
Fc 차단제의 존재 하에서의 시험관내 T 세포 의존성 세포독성
GPRC5D 표적화 아암의 특이성을 이해하기 위해, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체의 패널을 Fc 차단제의 존재 하에 T 세포 방향전환 세포독성 분석에서 평가하였다. 이중특이성 항체에 대한 표적 세포가 시험관내 분석에서 이중특이성 항체의 Fc 부분과 상호작용하는 Fcγ 수용체를 발현하는 B 세포이기 때문에, 본 실험은 특이성의 이해에 중요하였다. 다수의 이중특이성 항체에 대한 T 세포 매개 세포독성 분석에서 효능의 변화가 관찰되었으며, 이때 가장 큰 변화는 GCDB40 및 GCDB34에 대해 관찰되었다(도 7a 및 도 7b).
이어서, 가장 강력한 4개의 이중특이성 항체(GCDB32, GCDB35, GCDB40 및 GCDB43)와 Fcγ 수용체 사이의 결합 상호작용을 직접 측정하였다(도 8a 내지 도 8d). 상기 열거된 Fcγ 수용체 및 이중특이성 항체 각각에 대해 알파 스크린 분석 1회 라운드를 수행하였다. 모든 샘플을 2회 반복하여 분석하였다. FcγRI에서, 4개의 이중특이성 항체는 B21M hIgG4 PAA와 유사하게 작용한다. 즉, 이들은 매칭된 동종형 대조군보다 더 경쟁적이지 않다. 유사한 차이가 또한 FcγRIIIa에 대한 hIgG1 WT 대조군과 4개의 이중특이성 항체 사이에서 관찰되었으며, 이때 GCD43는 IgG4PAA 동종형 대조군과 가장 유사하고, 다른 이중특이성 항체는 FcγRIIIa에 대해 약간 더 높은 친화도를 가졌다. FcγRIIa 및 FcγRIIb 둘 다에서, 4개의 이중특이성 항체가 하기 순서로 경쟁한다: GCDB40 > GCDB32 > GCDB43 > GCDB35. GCDB40는 FcγRIIa 및 FcγRIIb에 대해 가장 경쟁력이 있거나, 가장 높은 친화도로 결합한다. 실제로, GCDB40는 FcγRIIa 및 FcγRIIb에 대해 hIgG1 WT와 동일한 정도로 경쟁하는데, 이는 Fc 차단제가 포함될 때 T 세포 매개 세포독성 분석에서 관찰된 효능의 관측 변화를 뒷받침한다. FcγRIIa 및 FcγRIIb와의 예상치 못한 상호작용으로 인해, GCDB40는 진행되지 않았다.
경쟁 결합 분석
항 GPRC5D mAb를 인간 GPCR5D 세포에 대한 서로 경쟁 결합에 대하여 평가하였다. 간략하게, 세포를 50 μL의 배지에 50,000개 세포/웰로 플레이팅하여, 37℃에서 90분간 정치시켰다. 그 다음에, 웰을 실온에서 1시간 동안 3% BSA를 사용하여 차단시켰다. mAb를 표준 절차에 따라 루테늄(II) 트리스-바이피리딘, N-하이드록시석신이미드 (Ru 표지)로 표지하였다. 별도의 96웰 플레이트에서, 5 μM의 경쟁자 mAb를 50 nM의 Ru 표지된 mAb와 함께 인큐베이션하였다. 차단 용액을 세포 플레이트로부터 제거하고, 25 μL의 mAb 용액을 첨가하였다. 플레이트를 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척한 후에, 150 μL의 MSD 판독 완충액(계면활성제 없음)을 첨가하고, MSD 플레이트 판독기를 사용하여 Ru 표지된 항체의 결합을 검출하였다.
모든 mAb는 동일한 경쟁 그룹에 속하며, GC5B420 및 GC5B421 만이 GC5B81, GC5B285 및/또는 GC5B332(<70%로 차단됨)에 의해 충분히 경쟁하지 않았다(표 12). mAb의 크기와 비교하여 GPRC5D의 세포외 도메인의 크기가 작으면, 2개의 mAb의 GPRC5D에 대한 동시 결합이 입체적으로 불가능할 수 있는 것으로 가정된다.
[표 12]
Figure pct00019
실시예 4: 하이브리도마 기술을 사용한 GPRC5D 항체의 생성
3마리의 Balb/c 마우스를 0, 10 및 20일째에 전장 인간 GPRC5D를 발현하는 PCMV6-neo(CMV 프로모터) 플라스미드 DNA를 사용하여 꼬리 밑부분의 피부내에 면역화시켰다. 마우스는 전장 인간 GPRC5D를 과발현하는 래트 호염기구성 백혈병(RBL) 세포와 함께 59일째에 최종 복강내 및 정맥내 면역화를 받았다. 63일째에, 림프절과 비장을 채취하여, B 세포의 농축을 행하고, 세포를 사용하여 약 3500개의 mAb 분비 하이브리도마를 생성하였다.
실시예 5: 하이브리도마 기술을 통해 얻어진 GPRC5D 항체의 초기 특성화
GPRC5D 결합
하이브리도마를 RBL과 인간 GPRC5D 발현 RBL 세포 둘 다에 결합시키기 위해 FACS 를 사용하여 스크리닝하였다. 비트랜스펙션된 RBL 세포와 비교하여 GPRC5D_RBL 세포에 대한 각각의 mAb 결합의 백그라운드 조정된 MFI의 비를 계산하였고, 3보다 큰 결합비를 갖는 어떠한 샘플도 잠재적으로 양성인 것으로 간주하였다. 99개의 하이브리도마는 비가 3보다 크고, v 영역 클로닝을 위해 진행되었다. 31개의 mAb 서열을 동정하여, 합성하고, 발현시키고, 정제하였다. 31개의 mAb 중 2개가 백그라운드보다 높은 RBL_GPRC5D 세포에 대한 결합을 나타내었다(도 9a 및 도 8b). 항 CD3 아암 CD3B219을 사용하여 발현, 정제 및 이중특이성 항체 생성을 위해 GCDB390 및 GCDB396를 선택하여, 각각 이중특이성 항체 GCDB46 및 GCDB47을 생성하였다.
T 세포 의존성 세포독성
GCDB46 및 GCDB47을 T 세포 매개 세포독성 분석에서 평가하였다(도 10a 및 도 10b). 두 이중특이성 항체는 모두 강력한 것으로 관찰되었으며, 각각 EC50가 0.67 및 0.1 nM로 보고되었다. 이들 데이터에 기초하여, mAb 둘 다를 3개의 파지 유래의 mAb와 함께 리드 최적화(lead optimization)로 진행시켰다.
실시예 6: 히트 평가, 선택 및 최적화
표 13에 요약된 결합, 기능, 교차 반응성 및 선택성 데이터에 기초하여, 리드 최적화를 위해 5개의 GPRC5D 이중특이성 항체를 선택하였다(GCDB32, GCDB43, GCDB35, GCDB46, GCDB47).
[표 13]
Figure pct00020
리드 최적화는 표 14에 개요된 바와 같이, GCDB32(GC5B81 모 mAb), GCDB43(GC5B285 모 mAb) 및 GCDB35(GC5B164 모 mAb)에 대한 잠재적 번역 후 변형(PTM) 서열 위험을 해결하는 것을 목표로 하였다.
[표 14]
Figure pct00021
GC5B81에 대해 분석된 PTM 변이체는 모두 결합 친화도가 상당히 감소하였는데, 파라토프에 대한 이러한 잔기(HC W102)의 임계성을 입증한다(표 15).
[표 15]
Figure pct00022
결합 연구에 의해, 인간 GPRC5D와의 결합을 유지하는 GC5B285와 GC5B164 둘 다에 대한 다수의 돌연변이를 동정하였다(표 16 및 표 17).
[표 16]
Figure pct00023
Figure pct00024
[표 17]
Figure pct00025
이러한 결합 데이터에 기초하여, 선택된 mAb를 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체로서 생성하고, H929 세포의 T 세포 매개 세포독성에 대해 평가하였다(표 18).
[표 18]
Figure pct00026
관찰된 결합 친화도에 의해 반드시 예측되지는 않았지만, T 세포 매개 세포독성 분석에서 다양한 효능이 관찰되었다. 예를 들어, 인간 GPRC5D와 유사한 친화도로 결합된 GC5B465 및 GC5B463는 2개의 아미노산 서열에서만 상이하며(표 17), GPRC5D × CD3 이중특이성 Ab로서의 효력이 12.5배의 차이가 있는 것으로 관찰되었다(표 18). 기능 데이터에 기초하여, GC5B465 및 GC5B483를 GC5B285(CD3 이중특이성으로서의 GCDB43) 및 GC5B164(CD3 이중특이성으로서의 GCDB35)에 대한 최적화된 서열로서 선택되었다.
또한 뮤린 하이브리도마 유래의 GPCR5D mAb(각각, CD3 이중특이성으로서의 GC5B390 및 GC5B396, 또는 GCDB46 및 47)에 대해 인간 프레임워크 적응을 완료하였다. 결합 연구에 의해, GC5B396에 대한 다수의 프레임워크와 GC5B390에 대한 하나의 프레임워크가 인간 GPRC5D와의 결합을 유지함을 확인하였다(표 19).
[표 19]
Figure pct00027
결합 데이터에 기초하여, 몇몇 항 GPCR5D mAb를 CD3 이중특이성 항체로서 생성하고, H929 세포의 T 세포 매개 세포독성에 대해 평가하였다(표 18). 기능 분석에 의해, GCDB63, GCDB67 및 GCDB69이 강력한 완전 인간화 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체로 확인되었다. 이러한 데이터에 기초하여, 상응하는 항 GPRC5D mAb, GC5B515, GC5B532 및 GC5B540를 GC5B390 및 GC5B391에 대한 완전 인간화 서열로서 선택하였다.
이어서, 완전 인간화 서열의 추가의 리드 최적화를 수행하여, GC5B515, GC5B532 및 GCDB540에 대한 잠재적 번역 후 변형 서열 위험을 해결하는 것을 목표로 하였다. G56S 돌연변이를 중쇄 서열에서 생성하여, GC5B515에 대한 잠재적 탈아미드화 위험을 제거하였다(표 20).
[표 20]
Figure pct00028
GC5B532 및 GC5B540의 중쇄는 잠재적인 이성질체화 및 산화 위험 모두를 포함하였다. M64K 및 G99A 돌연변이를 생성하여, 이러한 위험을 개선시켰다(표 20). G99A 돌연변이를 사용하여 시험한 모든 변이체는 결합 친화도의 상당한 감소를 보인 반면에, M64K 및 G56A 변이체는 영향을 받지 않았다. 결합 데이터에만 기초하여, GC5B596를 기능 평가로 진행하고, T 세포 매개 세포독성 분석에서 CD3 이중특이성(GCDB72)으로서의 효능을 입증하였다.
따라서, 추가의 특성화를 위해 4개의 GPRC5D 이중특이성 mAb를 선택하였다: GCDB32, GCDB53, GCDB61 및 GCDB72. 이중특이성 분자의 생성에 사용되는 GPRC5D mAb의 CDR 및 중쇄 및 경쇄 서열이 하기 표 21 및 표 22에 나타나 있다.
[표 21]
Figure pct00029
[표 22]
Figure pct00030
실시예 7: IgG4 S228P, L234A, L235A에서 이중특이성 포맷의 GPRC5D 및 CD3 항체의 제조
4개의 단일특이성 GPRC5D 항체(표 21 참조)를, Fc 치환 S228P, L234A, 및 L235A 또는 S228P, L234A, L235A, F405L, 및 R409K(CD3 아암)(넘버링은 EU 인덱스에 따름)를 갖는 IgG4로서 발현시켰다. 또한 서열 번호 25의 중쇄 및 서열 번호 26의 경쇄를 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, L234A, L235A, F405L, 및 R409K 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항 CD3 항체 CD3B219을 생성하였다.
이들 단일특이성 항체를 단백질 A 컬럼(HiTrap MabSelect SuRe 컬럼)을 사용하여 표준 방법을 사용하여 정제하였다. 용출 후, 풀(pool)을 D-PBS(pH 7.2) 내로 투석하였다.
(국제 특허 출원 공개 WO2011/131746호에 기재된 바와 같이) 시험관내 Fab 아암 교환으로 단일특이성 CD3 mAb와 단일특이성 GPRC5D mAb를 조합함으로써 이중특이성 GPRC5D × CD3 항체를 생성하였다. 간략하게 말하면, PBS(pH 7 내지 7.4) 및 75 mM 2-메르캅토에탄올아민(2-MEA) 중에서 항 GPRC5D/항 CD3 항체를 약 1 내지 20 mg/mL로 1.08:1 몰비로 함께 혼합하고 2 내지 6시간 동안 25 내지 37℃에서 인큐베이션한 후, 표준 방법을 사용하여 투석, 투석여과, 접선류 여과 및/또는 스핀 세포 여과를 통해 2-MEA를 제거하였다.
GPRC5D × CD3 이중특이성 Ab에 대한 중쇄 및 경쇄가 하기 표 23에 나타나 있다.
[표 23]
Figure pct00031
실시예 8: GCDB32, GCDB53, GCDB61 및 GCDB72의 기능적 특성화
GCDB32, GCDB53, GCDB61 및 GCDB72를 뮤린 GPRC5D에 대한 결합에 대해 평가하였다(표 24). 다양한 결합 친화도로 뮤린 GPRC5D에 결합된 4개의 이중특이성 항체를 모두 관찰하였다.
[표 24]
Figure pct00032
또한, 사이노 GPRC5D와의 교차 반응성을 과발현된 인간 및 사이노 GPRC5D 세포주의 T 세포 방향전환 세포독성 분석을 사용하여 평가하였다(표 25). 하나의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체는 인간 및 사이노 GPRC5D(GCDB32)에 대해 동등한 효능을 나타내지만, 시험된 다른 이중특이성은 세포독성을 유도하는데 인간 GPRC5D보다 사이노 GPRC5D의 효능이 약하였다.
[표 25]
Figure pct00033
추가의 특성화는 시험관내 결합(도 11a 내지 도 11e) 및 효능에 대한 이해를 목표로 하였다(표 26).
[표 26]
Figure pct00034
GCDB61이 가장 강한 결합제이고, GCDB72 및 GCDB32가 가장 약한 결합제로 다양한 결합 친화도가 관찰되었지만, 시험관내 효능은 이중특이성 항체의 패널에 대해 매우 유사하였다. 그러나, 순위 분석에 기초하여, GCDB72는 분석된 다양한 B 세포주에 대하여 가장 강력하였다. 환자 유래 MNC를 사용한 생체외 결합 및 효능 실험은 시험관내 분석과 상당히 유사한 결과를 산출하였다(표 27 및 도 15a 및 도 15b).
[표 27]
Figure pct00035
GCDB61은 환자 MNC에 대한 최고 결합 친화도를 나타내지만, GCDB72 및 GCDB32는 가장 약한 결합제이었다. 또한, 결합 친화도의 차이가 관찰되었지만, 모든 이중특이성 항체는 T 세포 방향전환된 세포독성 분석에서 서브나노몰 효능을 나타냈다. 분자는 시험관내 및 생체외 효능에 기초하여 사실상 구별할 수 없었지만, 생체내 데이터는 차별화를 제공하였다(도 12a 내지 도 12d).
인간 PBMC의 주사 1주일 후에, H929 세포를 NSG 마우스에 이식하였다. 이중특이성 항체의 치료를 H929 세포의 이식과 동시에 개시하여, 총 5회의 치료에 대해 10 ㎍, 1 ㎍ 및 0.1 ㎍/동물 용량으로 2일 또는 3일마다(q2d 또는 q3d) 계속하였다. 10 마리의 마우스를 각각의 그룹에 사용하고, PBS를 비히클 대조군으로서 포함시켰다. 치료를 11일째에 중단시키고, 연구를 26일째(도 12a 내지 도 12d)에서 종료하였다. 이러한 예방적 모델에서 시험한 모든 GPRC5D × CD3 이중특이성 분자는 10 및 1 ㎍/동물 용량에서 100% 종양 성장 억제를 나타내었다. 차별화는 최저 용량, 0.1 ㎍/동물에서 관찰되었는데, 80% 종양 성장 억제가 관찰된 GCDB72는 시험된 다른 이중특이성 항체에 대하여 우위에 있음을 입증하였다.
실시예 9: GPRC5D + MM1.R 세포주에 대한 GPRC5D 항체 결합 프로파일
GPRC5D+ 인간 MM 세포주(ATCC(아메리칸 타입 컬처 컬렉션(American Type Culture Collection))로부터 구입한 MM1.R)에 대한 GPRC5D 항체의 결합 친화도를 FACS를 사용하여 측정하였다. 도 13은 GC5B602를 제외하고 모두 0.10 nM 내지 135 nm 범위의 EC50 값으로 용량 의존적으로 GPRC5D 발현 MM1R 세포에 결합된 모든 리드 항체가 121.7 nM의 EC50 값을 산출한 시판 중인 항체 FAB6300(알앤디 시스템즈(R& D Systems) 카탈로그 번호 FAB6300A, 클론 번호 571961)의 값보다 현저하게 낮은 것을 나타낸다.
GPRC5D+ MM1.R 세포주를 60분간 다양한 농도의 리드 항체로 염색하여 표면 결합 프로파일을 측정하였다(n=3). 피코에리트린 표지된 인간 IgG4Fc를 이차 항체로서 사용하여 신호를 포획하였다(서던 바이오테크, 클론 HP6025, 카탈로그 번호 9200-09). 결합은 FACS에 의해 측정된 정규화된 기하 평균 형광강도로서 표시된다. 데이터의 그래핑 및 피팅을 가변 기울기(4개의 파라미터) 및 최소 제곱 적합법을 이용한 비선형 회귀를 사용하여 그래프패드 프리즘 6에서 행하였다.
또한, GPRC5D mAb GC5M481 결합 프로파일을 3개의 GPRC5D+ (JIM3, OPM-2 및 MM.1R; ATCC로부터 구입한 세포주) 다발성 골수종 세포주를 사용한 시판용 항체와 비교하여 평가하였다(도 14a). 또한, GPRC5D mAb(GC5M481)는 모세포와 비교하여 강한 결합을 나타내는 사이노 GPRC5D 발현 다우디 세포를 사용하여 사이노 교차 반응성에 대해 프로파일링되었다(도 14a). 또한, GPRC5D+ (JIM3, OPM-2 및 MM1.R) 세포주(도 14b)를 사용하여 결합능을 평가 한 경우, 5개의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체(GCDB32, GCDB48, GCDB53, GCDB61 및 GCDB72)는 동종형 대조군(점선, 회색으로 채워진 트레이스)과 비교하여 히스토그램(흑색 실선 트레이스)의 변화에 의해 명백한 바와 같이 유의한 결합을 나타내었다.
실시예 10: PBMC 인간화 NSG 마우스에서의 피하 MM.1S 인간 다발성 골수종 이종이식편에 대한 GCDB72의 항종양 효능.
본 생체내 연구는 PBMC 인간화 NSG 마우스에서의 확립된 MM.1S 인간 다발성 골수종(MM) 이종이식편에 대한 GCDB72의 효능을 측정하기 위해 수행되었다. 연구 0일째에 유사한 체중 및 연령의 암컷 NSG 마우스에게 마우스 우측 등쪽 뒷옆구리에 MM.1S 인간 MM 세포(마우스 당 200 μL PBS 중의 1x107개의 세포)를 피하(sc) 이식하였다 종양 세포 이식후 7일째에, 1x107 인간 PBMC(200 μL PBS 중)를 외측 꼬리 정맥을 통해 정맥내 주사하였다. 평균 종양 용적이 약 72 내지 78 ㎣일때 15일째에 치료를 개시하였는데, 각각의 마우스는 PBS 또는 0.1 ㎍(0.005 mg/㎏), 1 ㎍(0.05 mg/㎏), 10 ㎍(0.5 mg/㎏) 및 50 ㎍(2.5 mg/㎏)의 GCDB72 듀오바디 항체의 정맥내(iv) 투여를 받았다. 널 듀오바디 대조군인 CD3 × Null 및 Null × GPRC5D를 각각 마우스 당 10 ㎍으로 투여하였다. 치료는 총7회의 용량에 대해 대략 3일마다(q3d) 투여하였다. 강력한 항종양 효능이 두 가지의 고용량(10 ㎍ 및 50 ㎍)의 GCDB72에서 관찰되었는데, 여기서 MM.1S sc 종양은 연구가 종료될 때까지 100%의 동물(그룹 당 10마리 중 10마리)에서 완전히 퇴행되었다(도 16). 또한, 마우스 당 1 ㎍의 용량은 PBS 치료된 종양과 비교하여, 종양 성장을 65%로 유의하게 억제하였지만(p≤0.0001), 0.1 ㎍의 용량은 거의 효과가 없었다(TGI=19.3%, p=0.0023). CD3 × Null의 효과는 효과적이지 않는 것으로 간주되고(TGI= 28%, p ≤ 0.0001), Null × GPRC5D는 3.1% TGI, p= 0.9971로 거의 영향을 미치지 않았다. TGI를 그룹 당 적어도 80%의 생존가능한 동물이 있을 때 36일째에 측정하였다. 상당한 체중 감소 및/또는 사망률은 GVHD로 인해 36일 후에 나타나기 시작하였다(도 17). 본 연구는 그룹에 60% 이하의 동물이 남아 있을 때 43일째에 종료되었다.
실시예 11: GPRC5D 항체의 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)
항 인간 GPRC5D mAb의 패널을 IgG1 mAb로서 생성하였다. 또한, 항 인간 GPRC5D mAb의 새로운 패널을 실시예 2에 기재된 바와 같이 생성하였다. 새로운 GPRC5D mAb의 CDR 및 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열이 하기 표 28 및 29에 나타나 있다. 이들 새로운 항체를 실시예 7에 기재된 바와 같이 이중특이성 CD3 분자의 생성에 사용하였으며, 또한 ADCC 활성 평가를 위해 IgG1 mAb로서 혼입하였다.
[표 28]
Figure pct00036
[표 29]
Figure pct00037
H929 세포에 대한 ADCC 활성(표 30 및 표 31). 간략하게 말하면, 다발성 골수종 세포를 실온에서 30분간 칼세인-AM으로 표지하고, 2회의 PBS 세척 후에 RPMI + 10% HI FBS에 0.2×106/ml로 재현탁시켰다. PBMC를 해동시키고, PBS 세척 후에 RPMI 성장 배지에 3×106개 세포/ml로 재현탁시켰다. 10000 또는 50000개의 표적 세포를 항체의 존재 하에 100000 또는 2500000 PBMC와 혼합하고, 37℃에서 CO2 인큐베이터에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 플레이트를 200 g으로 4분간 원심분리한 후에, 100 μl의 상청액을 새로운 96웰 플레이트로 옮기고, 형광 강도를 485/535 nM에서 측정하였다. RFU 값을 플롯하여, 용해율을 계산하였다.
[표 30]
Figure pct00038
[표 31]
Figure pct00039
2 pM 내지 27.7 nM 범위의 다양한 효능이 관찰되었다. 결합 친화도로부터, ADCC 분석에서 효능을 반드시 예측하지는 못하였다. 예를 들어, GC5B382 및 GC5B379은 인간 GPRC5D 세포에 대하여 유사한 결합 친화도를 갖지만, ADCC 분석에서 H929 세포에 대한 세포독성의 차이는 15배이었다. 유사하게, GPRC5D × CD3 이중특이성으로서의 세포독성 유발은 GC5B370 및 GC5B602에 의해 예시된 바와 같이 ADCC 분석에서 효능을 예측하지 못했다. CD3 이중특이성으로서 포맷된 경우, GC5B602(GCDB63)는 H929 세포에 대해 서브나노몰 효능을 나타내는 반면에, CD3 이중특이성으로서의 GC5B370(GCDB41)는 본질적으로 불활성이었다. IgG1 mAb로서 포맷된 경우, 동일한 v-영역은 ADCC 분석에서 정반대의 관찰 결과를 가져 왔는데, GC5B370가 GC5B602에 비해 더 강력한(약 1100배) 것으로 관찰되었다.
서열 목록의 간단한 설명
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
Figure pct00045
Figure pct00046
SEQUENCE LISTING <110> JANSSEN PHARMACEUTICA NV <120> ANTI- GPRC5D ANTIBODIES, BISPECIFIC ANTIGEN BINDING MOLECULES THAT BIND GPRC5D AND CD3, AND USES THEREOF <130> PRD3422WOPCT <140> <141> <150> 62/364,811 <151> 2016-07-20 <160> 100 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Asn Tyr Trp Met Ser 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Ser Tyr Phe Ile Gly 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Gly Tyr Thr Met Asn 1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Gly Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Ser Lys Tyr Tyr Ala Ser Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Ile Ile Tyr Pro Gly Lys Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Ser Asp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Glu Ser Arg Trp Arg Gly Tyr Lys Leu Asp 1 5 10 <210> 10 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Ala Ala Phe Asp Phe Gly Arg Arg Ala Val Arg Leu Asp 1 5 10 <210> 11 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Val Tyr Ser Phe Gly Gly Arg His Lys Ala Leu Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Val Ala Leu Arg Val Ala Leu Asp Tyr 1 5 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Lys Ala Ser Gln Asn Val Ala Thr His Val Gly 1 5 10 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser 1 5 <210> 19 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 22 <211> 345 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Met Tyr Lys Asp Cys Ile Glu Ser Thr Gly Asp Tyr Phe Leu Leu Cys 1 5 10 15 Asp Ala Glu Gly Pro Trp Gly Ile Ile Leu Glu Ser Leu Ala Ile Leu 20 25 30 Gly Ile Val Val Thr Ile Leu Leu Leu Leu Ala Phe Leu Phe Leu Met 35 40 45 Arg Lys Ile Gln Asp Cys Ser Gln Trp Asn Val Leu Pro Thr Gln Leu 50 55 60 Leu Phe Leu Leu Ser Val Leu Gly Leu Phe Gly Leu Ala Phe Ala Phe 65 70 75 80 Ile Ile Glu Leu Asn Gln Gln Thr Ala Pro Val Arg Tyr Phe Leu Phe 85 90 95 Gly Val Leu Phe Ala Leu Cys Phe Ser Cys Leu Leu Ala His Ala Ser 100 105 110 Asn Leu Val Lys Leu Val Arg Gly Cys Val Ser Phe Ser Trp Thr Thr 115 120 125 Ile Leu Cys Ile Ala Ile Gly Cys Ser Leu Leu Gln Ile Ile Ile Ala 130 135 140 Thr Glu Tyr Val Thr Leu Ile Met Thr Arg Gly Met Met Phe Val Asn 145 150 155 160 Met Thr Pro Cys Gln Leu Asn Val Asp Phe Val Val Leu Leu Val Tyr 165 170 175 Val Leu Phe Leu Met Ala Leu Thr Phe Phe Val Ser Lys Ala Thr Phe 180 185 190 Cys Gly Pro Cys Glu Asn Trp Lys Gln His Gly Arg Leu Ile Phe Ile 195 200 205 Thr Val Leu Phe Ser Ile Ile Ile Trp Val Val Trp Ile Ser Met Leu 210 215 220 Leu Arg Gly Asn Pro Gln Phe Gln Arg Gln Pro Gln Trp Asp Asp Pro 225 230 235 240 Val Val Cys Ile Ala Leu Val Thr Asn Ala Trp Val Phe Leu Leu Leu 245 250 255 Tyr Ile Val Pro Glu Leu Cys Ile Leu Tyr Arg Ser Cys Arg Gln Glu 260 265 270 Cys Pro Leu Gln Gly Asn Ala Cys Pro Val Thr Ala Tyr Gln His Ser 275 280 285 Phe Gln Val Glu Asn Gln Glu Leu Ser Arg Ala Arg Asp Ser Asp Gly 290 295 300 Ala Glu Glu Asp Val Ala Leu Thr Ser Tyr Gly Thr Pro Ile Gln Pro 305 310 315 320 Gln Thr Val Asp Pro Thr Gln Glu Cys Phe Ile Pro Gln Ala Lys Leu 325 330 335 Ser Pro Gln Gln Asp Ala Gly Gly Val 340 345 <210> 23 <211> 344 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 23 Met Tyr Lys Asp Cys Ile Glu Ser Thr Gly Asp Tyr Phe Leu Pro Cys 1 5 10 15 Asp Ser Glu Gly Pro Trp Gly Ile Val Leu Glu Ser Leu Ala Ile Leu 20 25 30 Gly Ile Val Val Thr Ile Leu Leu Leu Leu Ala Phe Leu Phe Leu Met 35 40 45 Arg Lys Ile Gln Asp Cys Ser Gln Trp Asn Val Leu Pro Thr Gln Leu 50 55 60 Leu Phe Leu Leu Ser Val Leu Gly Leu Phe Gly Leu Ala Phe Ala Phe 65 70 75 80 Ile Ile Gln Leu Asn Gln Gln Thr Ala Pro Val Arg Tyr Phe Leu Phe 85 90 95 Gly Val Leu Phe Ala Leu Cys Phe Ser Cys Leu Leu Ala His Ala Ser 100 105 110 Asn Leu Val Lys Leu Val Arg Gly Arg Val Ser Phe Ser Trp Thr Thr 115 120 125 Ile Leu Cys Ile Ala Ile Gly Cys Ser Leu Leu Gln Val Ile Ile Ala 130 135 140 Ile Glu Tyr Val Thr Leu Ile Met Thr Arg Gly Met Met Phe Val His 145 150 155 160 Met Thr Pro Tyr Gln Leu Asn Val Asp Phe Val Val Leu Leu Val Tyr 165 170 175 Val Leu Phe Leu Met Ala Leu Thr Phe Phe Val Ser Lys Ala Thr Phe 180 185 190 Cys Gly Pro Cys Glu Asn Trp Lys Gln His Gly Arg Leu Ile Phe Ile 195 200 205 Thr Val Leu Phe Ser Ile Ile Ile Trp Val Val Trp Ile Ser Met Leu 210 215 220 Leu Arg Gly Asn Pro Gln Phe Gln Arg Gln Pro Gln Trp Asp Asp Pro 225 230 235 240 Val Val Cys Ile Ala Leu Val Thr Asn Ala Trp Val Phe Leu Leu Leu 245 250 255 Tyr Ile Val Pro Glu Leu Cys Ile Leu Tyr Arg Ser Cys Arg Gln Glu 260 265 270 Cys Pro Ser Gln Gly His Ala Cys Pro Val Thr Ala Tyr Gln Arg Ser 275 280 285 Phe Gln Val Glu Asn Gln Glu Leu Ser Arg Ala Arg Asp Ser Asp Gly 290 295 300 Ala Glu Glu Asp Val Ala Leu Thr Ser Phe Gly Thr Pro Ile Gln Pro 305 310 315 320 Gln Thr Val Asp Pro Thr Gln Glu Cys Phe Ile Pro Arg Ala Lys Leu 325 330 335 Ser Pro Gln Gln Asp Ala Gly Val 340 <210> 24 <211> 344 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 24 Met Tyr Glu Asp Cys Val Lys Ser Thr Glu Asp Tyr Tyr Leu Phe Cys 1 5 10 15 Asp Asn Glu Gly Pro Trp Ala Ile Val Leu Glu Ser Leu Ala Val Ile 20 25 30 Gly Ile Val Val Thr Ile Leu Leu Leu Leu Ala Phe Leu Phe Leu Met 35 40 45 Arg Lys Val Gln Asp Cys Ser Gln Trp Asn Val Leu Pro Thr Gln Phe 50 55 60 Leu Phe Leu Leu Ala Val Leu Gly Leu Phe Gly Leu Thr Phe Ala Phe 65 70 75 80 Ile Ile Gln Leu Asn His Gln Thr Ala Pro Val Arg Tyr Phe Leu Phe 85 90 95 Gly Val Leu Phe Ala Ile Cys Phe Ser Cys Leu Leu Ala His Ala Ser 100 105 110 Asn Leu Val Lys Leu Val Arg Gly Arg Val Ser Phe Cys Trp Thr Thr 115 120 125 Ile Leu Phe Ile Ala Ile Gly Val Ser Leu Leu Gln Thr Ile Ile Ala 130 135 140 Ile Glu Tyr Val Thr Leu Ile Met Thr Arg Gly Leu Met Phe Glu His 145 150 155 160 Met Thr Pro Tyr Gln Leu Asn Val Asp Phe Val Cys Leu Leu Ile Tyr 165 170 175 Val Leu Phe Leu Met Ala Leu Thr Phe Phe Val Ser Lys Ala Thr Phe 180 185 190 Cys Gly Pro Cys Glu Asn Trp Lys Gln His Gly Arg Leu Ile Phe Ala 195 200 205 Thr Val Leu Val Ser Ile Ile Ile Trp Val Val Trp Ile Ser Met Leu 210 215 220 Leu Arg Gly Asn Pro Gln Leu Gln Arg Gln Pro His Trp Asp Asp Ala 225 230 235 240 Val Ile Cys Ile Gly Leu Val Thr Asn Ala Trp Val Phe Leu Leu Ile 245 250 255 Tyr Ile Ile Pro Glu Leu Ser Ile Leu Tyr Arg Ser Cys Arg Gln Glu 260 265 270 Cys Pro Thr Gln Gly Asn Val Cys Gln Val Pro Val Tyr Gln Arg Ser 275 280 285 Phe Arg Met Asp Thr Gln Glu Pro Thr Arg Ala Arg Asp Ser Asp Gly 290 295 300 Ala Gln Glu Asp Val Ala Leu Thr Ala Tyr Gly Thr Pro Ile Gln Leu 305 310 315 320 Gln Ser Ala Asp Pro Ser Arg Glu Tyr Leu Ile Pro Ser Ala Thr Leu 325 330 335 Ser Pro Gln Gln Asp Ala Gly Leu 340 <210> 25 <211> 125 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe 100 105 110 Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 26 <211> 109 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Ser Tyr Trp Ile Gly 1 5 <210> 28 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Gly Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 29 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 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Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 90 <211> 705 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 90 atgcgggtgc tggcccagct gctgggactg ctgctgctgt gcttccctgg cgccagatgc 60 gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgggtgacc 120 atcacctgca aggccagcca gaacgtggcc acccacgtgg gctggtacca gcagaagccc 180 ggcaaggccc ccaagcggct gatctacagc gccagctacc ggtacagcgg cgtgcccagc 240 cggttcagcg gcagcggcag cggcaccgag ttcaccctga ccatcagcaa cctgcagccc 300 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tacaaccggt acccctacac cttcggccag 360 ggcaccaagc tggagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttga 705 <210> 91 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 91 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr 20 25 30 Asn Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Ala Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Gly Ile Arg Leu Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 92 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 92 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 93 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 93 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Lys Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Phe Arg Ala Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Lys 100 105 <210> 94 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 94 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Ala Thr His 20 25 30 Val Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 95 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 95 Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Lys Ser Leu Ala 1 5 10 <210> 96 <211> 1395 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 96 atggcctggg tctggaccct gctgttcctg atggccgctg cccagagcat ccaggcccag 60 gtgcagctgg tgcagagcgg cgccgaggtg aagaagcccg gcgccagcgt gaaggtgagc 120 tgcaaggcca gcggctacag cttcaccggc tacaccatga actgggtgcg gcaggccccc 180 ggccagggcc tggagtggat gggcctgatc aacccctaca acagcgacac caactacgcc 240 cagaagctgc agggccgggt gaccatgacc accgacacca gcaccagcac cgcctacatg 300 gagctgcgga gcctgcggag cgacgacacc gccgtgtact actgcgcccg ggtggccctg 360 cgggtggccc tggactactg gggccagggc accctggtga ccgtgagcag cgcctccacc 420 aagggcccat ccgtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcc 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacgaaaac ctacacctgc 660 aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagtc caaatatggt 720 cccccatgcc caccatgccc agcacctgag gccgccgggg gaccatcagt cttcctgttc 780 cccccaaaac ccaaggacac tctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 840 gtggacgtga gccaggaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 900 gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagttca acagcacgta ccgtgtggtc 960 agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1020 tccaacaaag gcctcccgtc ctccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1080 cgagagccac aggtgtacac cctgccccca tcccaggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1140 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1200 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1260 ttcttcctct acagcaggct aaccgtggac aagagcaggt ggcaggaggg gaatgtcttc 1320 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cacagaagag cctctccctg 1380 tctctgggta aatga 1395 <210> 97 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97 Ala Ala Phe Asp Phe Gly Arg Arg Ala Val Arg Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 98 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 98 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 99 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 99 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe 100 105 110 Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 130 135 140 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys 195 200 205 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 210 215 220 Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Gly Lys 450 <210> 100 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 100 Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro 100 105 110 Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 115 120 125 Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro 130 135 140 Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala 145 150 155 160 Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 165 170 175 Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg 180 185 190 Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr 195 200 205 Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215

Claims (65)

  1. 하기를 포함하는, GPRC5D에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    a. 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
    b. 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
    c. 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
    d. 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
    e. 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
    f. 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
    g. 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
    h. 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
    i. 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
    j. 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 75의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
    k. 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 70의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3;
    l. 서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 76의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3; 또는
    m. 서열 번호 66의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3.
  2. 제1항에 있어서,
    a. 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체는 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
    b. 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체는 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
    c. 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체는 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
    d. 서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
    e. 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체는 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
    f. 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체는 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 6의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 19의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
    g. 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 73의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체는 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
    h. 서열 번호 27의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 29의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 11의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체는 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
    i. 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체는 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
    j. 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 69의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 75의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체는 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
    k. 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 67의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 72의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체는 서열 번호 13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 78의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
    l. 서열 번호 65의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 76의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체는 서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 81의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하거나;
    m. 서열 번호 66의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR1, 서열 번호 71의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR2 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 갖는 상기 중쇄 CDR3를 포함하는 상기 항체는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 18의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3를 추가로 포함하는, 단리된 항체 또는 항원 결합 단편.
  3. GPRC5D에 특이적으로 결합하고, 서열 번호 52, 53, 54, 55, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89 또는 91로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 중(VH)쇄 영역을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  4. 제3항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 56, 57, 58, 92, 93 또는 94로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 경(VL)쇄 영역을 포함하는 항체.
  5. 제3항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 52, 53, 54, 55, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89 또는 91로 이루어진 군으로부터 선택되는 VH 영역 및 서열 번호 56, 57, 58, 92, 93 또는 94로 이루어진 군으로부터 선택되는 VL 영역을 포함하는 항체.
  6. 제5항에 있어서, 상기 VH쇄 영역은 서열 번호 56을 포함하는 VL쇄 영역과 쌍을 이룬, 서열 번호 52, 53 또는 83을 포함하는 항체.
  7. 제5항에 있어서, 상기 VH쇄 영역은 서열 번호 57을 포함하는 VL쇄 영역과 쌍을 이룬, 서열 번호 54, 84, 85, 86 또는 90을 포함하는 항체.
  8. 제5항에 있어서, 상기 VH쇄 영역은 서열 번호 58을 포함하는 VL쇄 영역과 쌍을 이룬, 서열 번호 55 또는 88을 포함하는 항체.
  9. 제5항에 있어서, 상기 VH쇄 영역은 서열 번호 92를 포함하는 VL쇄 영역과 쌍을 이룬, 서열 번호 82 또는 87을 포함하는 항체.
  10. 제5항에 있어서, 상기 VH쇄 영역은 서열 번호 93을 포함하는 VL쇄 영역과 쌍을 이룬, 서열 번호 89를 포함하는 항체.
  11. 제5항에 있어서, 상기 VH쇄 영역은 서열 번호 94를 포함하는 VL쇄 영역과 쌍을 이룬, 서열 번호 91을 포함하는 항체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에 결합하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체 또는 항원 결합 단편.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합체인, 항체 또는 항원 결합 단편.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, Fab 단편, Fab2 단편 또는 단일쇄 항체인 항원 결합 단편.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 동종형(isotype)을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편.
  17. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, IgG1 또는 IgG4 동종형인, 항체 또는 항원 결합 단편.
  18. 제17항에 있어서, 상기 IgG1은 Fc 영역 내에 K409R 치환을 갖는 항체.
  19. 제17항에 있어서, 상기 IgG1은 Fc 영역 내에 F405L 치환을 갖는 항체.
  20. 제20항에 있어서, 상기 IgG4는 Fc 영역 내에 F405L 치환 및 R409K 치환을 갖는 항체.
  21. 제16항에 있어서, Fc 영역 내에 S228P 치환, L234A 치환 및 L235A 치환을 추가로 포함하는 항체.
  22. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 GPRC5D에 특이적으로 결합하고, 사이노몰거스 원숭이(cynomolgus monkey) GPRC5D와 교차 반응하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
  23. 제17항에 있어서, 약 28 nM 미만의 EC50로 시험관내에서 ADCC를 유도하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
  24. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 발현하는 단리된 세포.
  25. 제24항에 있어서, 하이브리도마인 세포.
  26. 제24항에 있어서, 상기 항체는 재조합적으로 생성되는 세포.
  27. a) 제1 중쇄(HC1);
    b) 제2 중쇄(HC2);
    c) 제1 경쇄(LC1); 및
    d) 제2 경쇄(LC2)를 포함하며,
    상기 HC1과 상기 LC1이 쌍을 이루어서 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하고, 상기 HC2와 상기 LC2가 쌍을 이루어서 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성하는, 단리된 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이의 GPRC5D × CD3 이중특이성 결합 단편.
  28. 제27항에 있어서, HC1은 서열 번호 25를 포함하고, LC1은 서열 번호 26을 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  29. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 52를 포함하고, LC2는 서열 번호 56을 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  30. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 53을 포함하고, LC2는 서열 번호 56을 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  31. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 54를 포함하고, LC2는 서열 번호 57을 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  32. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 55를 포함하고, LC2는 서열 번호 58을 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  33. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 82를 포함하고, LC2는 서열 번호 92를 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  34. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 83을 포함하고, LC2는 서열 번호 56을 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  35. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 84를 포함하고, LC2는 서열 번호 57을 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  36. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 85를 포함하고, LC2는 서열 번호 57을 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  37. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 86을 포함하고, LC2는 서열 번호 57을 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  38. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 87을 포함하고, LC2는 서열 번호 92를 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  39. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 88을 포함하고, LC2는 서열 번호 58을 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  40. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 89를 포함하고, LC2는 서열 번호 93을 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  41. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 91을 포함하고, LC2는 서열 번호 94를 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  42. 제28항에 있어서, HC2는 서열 번호 85를 포함하고, LC2는 서열 번호 57을 포함하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  43. 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 동종형을 갖는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  44. 제43항에 있어서, IgG4 동종형인, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  45. 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 골수종 세포의 표면 상의 GPRC5D에 결합하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  46. 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 다발성 골수종 세포의 표면 상의 GPRC5D에 결합하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  47. 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.22 nM 미만의 EC50로 시험관내에서 인간 T 세포 활성화를 유도하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  48. 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.89 nM 미만의 EC50로 시험관내에서 GPRC5D 발현 세포의 T 세포 의존성 세포독성을 유도하는, GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편.
  49. 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항의 항체 또는 이중특이성 결합 단편을 발현하는 단리된 세포.
  50. 제49항에 있어서, 하이브리도마인 세포.
  51. 제49항에 있어서, 상기 항체 또는 이중특이성 결합 단편은 재조합적으로 생성되는 세포.
  52. 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편의 치료적 유효량을 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 암을 앓고 있는 대상을 치료하는 방법.
  53. 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하여 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 단계를 포함하는, 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 방법.
  54. 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하여 T 세포를 암으로 방향전환(redirect)시키는 단계를 포함하는, T 세포를 GPRC5D 발현 암 세포로 방향전환시키는 방법.
  55. 제52항, 제53항 또는 제54항에 있어서, 상기 암은 혈액암인 방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 혈액암은 GPRC5D 발현 B 세포 암인 방법.
  57. 제56항에 있어서, 상기 GPRC5D 발현 B 세포 암은 다발성 골수종인 방법.
  58. 제52항에 있어서, 제2 치료제를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  59. 제58항에 있어서, 상기 제2 치료제는 화학요법제 또는 표적 항암요법인 방법.
  60. 제59항에 있어서, 상기 화학요법제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드 또는 인터류킨 2인 방법.
  61. 제59항에 있어서, 상기 제2 치료제를 상기 대상에게 상기 이중특이성 항체와 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여하는 방법.
  62. 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  63. 제49항 내지 제51항 중 어느 한 항의 세포를 배양함으로써 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편을 생성하는 방법.
  64. 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항의 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편의 HC1, HC2, LC1 또는 LC2를 인코딩하는 단리된 합성 폴리뉴클레오티드.
  65. 제27항 내지 제42항 중 어느 한 항에 정의된 GPRC5D × CD3 이중특이성 항체 또는 이중특이성 결합 단편 및/또는 제63항에 정의된 폴리뉴클레오티드 및 이를 위한 패키징을 포함하는 키트.
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