[go: up one dir, main page]

KR20160124034A - 트리아졸 화합물 및 이의 용도 - Google Patents

트리아졸 화합물 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20160124034A
KR20160124034A KR1020160047206A KR20160047206A KR20160124034A KR 20160124034 A KR20160124034 A KR 20160124034A KR 1020160047206 A KR1020160047206 A KR 1020160047206A KR 20160047206 A KR20160047206 A KR 20160047206A KR 20160124034 A KR20160124034 A KR 20160124034A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
pyrrolo
methyl
pyrimidine
triazol
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
KR1020160047206A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101859170B1 (ko
Inventor
김용철
한선영
고효진
이선미
Original Assignee
광주과학기술원
경상대학교산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 광주과학기술원, 경상대학교산학협력단 filed Critical 광주과학기술원
Publication of KR20160124034A publication Critical patent/KR20160124034A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101859170B1 publication Critical patent/KR101859170B1/ko
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4192—1,2,3-Triazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/04—1,2,3-Triazoles; Hydrogenated 1,2,3-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

본 발명은 JAK 활성을 억제하는 신규한 트리아졸 유도체 화합물 및 그 용도에 관한 것이다. 본 발명의 조성물을 사용함으로써 효과적으로 JAK1, JAK2, 및 JAK3 활성을 억제할 수 있고, 이에 따라 JAK 활성에 의해 유발되는 질병들을 효과적으로 억제할 수 있다.

Description

트리아졸 화합물 및 이의 용도{Triazol compounds and Use thereof}
본 발명은 JAK 활성을 억제하는 신규한 트리아졸 유도체 화합물 및 그 용도에 관한 것이다.
JAK(Janus kinases)는 세포 생장, 생존, 발달 및 분화와 같은 포유류 세포에서의 시그널링 절차에서, 신호 전달과 관련된 다양한 타입 1/2 싸이토카인 및 성장 인자 호르몬의 바인딩을 통해 리셉터를 활성화 시키는 것에 의해 주요 역할을 하는 세포내 비-리셉터 티로신 키나아제이다[1].
관련 리셉터에 결합하는 것에 의해, 싸이토카인들은 JAK 패밀리 멤버들을 활성화시키고, 신호 전달자 및 전사 활성자(signal transducer and activator of transcription, STAT)의 소집 및 인산화의 결과를 낳는다[2]. JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2로도 불리는 티로신 키나아제 2를 포함하는 네 개의 JAK 이성질체가 발굴되었다[3]. 각각의 JAK 키나아제는 면역-관련 질병의 발병 및 다양한 세포에서의 혈액 암 시그널링에서의 영향에서 주요 역할을 한다[4]. 따라서 JAK 패밀리 및 JAK/STAT는 약물 발굴에 있어서의 치료학적 타겟으로서의 그들의 잠재력에 대해 연구되어져 왔다. JAK1 및 TYK2는 다양한 면역 반응 및 그들의 억제와 연관되어 왔다[5]. JAK1은 전-염증성 싸이토카인 다운스트림 시그널링을 타입 I(IFN-α/β) 및 타입 Ⅱ(IFN-γ) 인터페론 및 IL-2, -4 및 -10 패밀리 멤버를 통해 매개한다[6]. JAK1 및 JAK3이 T 세포의 분화 및 발달 동안의 싸이토카인 시그널링 프로세스를 제어하기 때문에, JAK3 활성화는 전형적으로 자가 면역 질환, 예컨대 류마티스 관절염(RA)에서 관찰된다[7]. 다른 JAK 키나아제들과 대조적으로, JAK2는 혈액성 암 세포의 발달(progression) 및 성장(growth)에 기여하는 경로와 연관되고[8], 돌연변이된 JAK2에 의한 비정상 신호는 혈액암, 예컨대 척수 증식성 종양(myeloproliferative neoplasm, MPN)을 유발시킨다.
MPN은 진성 다혈구증(polycythemia vera, PV), 본태성 혈소판 증가증(essential thrombocytosis, ET), 및 골수 섬유증(myelofibrosis)을 포함한다. MPN의 기저 병인(underlying pathogenic cause)은 JH2 도메인 내의 JAK2 아미노산 617의 발린의 페닐알라닌으로의 돌연변이(JAK2V617F)이다; 상기 돌연변이는 거의 95%의 PV 환자 및 50% 이상의 ET 및 MF 환자들에 존재한다[10]. JAK2V617F 돌연변이는 또한 폐암에서 낮은 대립형질(allele) 빈도로 관찰되고[11], 이러한 발견에 기반하여, Hedvat 및 그의 동료들은 폐암을 억제하기 위한 JAK2 억제자의 능력을 평가하였으며, 시너지 효과에 기인한 폐암 컴비네이션 치료에서의 그들의 잠재성을 보였다[12]. 게다가, 급성 백혈병 및 다른 암종을 포함하는 MPN의 병인에서의 JAK2V627F 돌연변이의 역할은 MPN의 타겟팅된 치료을 위한 JAK2 억제자의 발전을 도왔다[14]. 그러나 JAK2 경로-관련된 병리 현상을 설명하고, 치료학적 전략을 최적화하기 위해 추가 연구가 요구된다. JAK 패밀리 멤버 JAK1, -2 및 -3는 유의한 수고 유사성 및 높은 수준의 서열 상동성을 보이고, 그들 고유의 정상적인 기능ning들의 이해는 JAK 구조-기능 관계를 결정하기 위한 전제이고, 선택적으로 타겟팅된 치료제들을 발전시키고 있다[15].
이들의 구조적 및 기능적 이슈들을 분석하기 위해, 선택적인 JAK2 억제자의 개발이 중요하고, 아직 도전 과제로 남아 있었다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명자들은 JAK(Janus Kinase)에 대한 새로운 억제자를 발굴하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과 트리아졸 화합물을 포함하는 소정의 신규 화합물 군이 JAK의 활성을 억제함을 규명함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 JAK을 억제하는 소정의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 이의 염을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 JAK(Janus kinase) 억제용 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 면역 결핍 질환 또는 골수증식성 종양(MPN)의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 하기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 이의 염을 제공한다:
화학식 1
Figure pat00001
상기 화학식 1 에서,
R3은
Figure pat00002
,
Figure pat00003
및
Figure pat00004
로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나이고,
상기 R2는 수소, C1-4 알킬, 알릴, 메톡시에틸, 5-에톡시-5-옥소펜틸, 3-히드록시프로필, 5-히드록시펜틸, 말단 탄소가 시아노기 치환된 C1-6 직쇄 알킬, tert-부톡시아미노에틸(-CH2CH2N(H)Boc), 2-아미노에틸, 메틸부트-2-인-1-일, 비닐, 4,4,4-트리할로부틸, 및 시클로알킬 치환된 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나이며;
상기 R1은 수소, 메틸, 페닐 및 p-톨릴로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나이다.
본 발명자들은 JAK(Janus Kinase)에 대한 새로운 억제자를 발굴하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과 트리아졸 화합물을 포함하는 소정의 신규 화합물 군이 JAK의 활성을 억제함을 규명하였다.
본 발명의 용어 "C1-4 알킬"은 1 내지 4 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지쇄(straight or branched chain) 알킬을 나타내고, 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸 등을 의미한다. 바람직하게는 직쇄 알킬을 나타내며, 바람직한 예를 들면 메틸이다.
본 발명의 용어 "할로"는 할로겐 치환기를 나타내며, -F, -Cl,-Br 또는 -I 치환기를 나타낸다. 본 발명의 4,4,4-트리할로부틸에 있어서, 할로는 바람직하게 플루오로이다.
본 발명의 용어 "시아노"는 -CN 치환기를 의미한다.
본 발명의 용어 "말단 탄소가 시아노기 치환된 C1-6 직쇄 알킬"은 시아노메틸, 2-시아노에틸, 3-시아노프로필, 4-시아노부틸, 5-시아노펜틸 또는 6-시아노헥실을 의미한다. 바람직하게는 말단 탄소가 시아노기 치환된 C3-5 직쇄 알킬이다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 본 발명의 화합물은 4-(5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 10), 4-(1,4-디메틸-1H-1,2,3-트리아졸-5-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 11), 4-(1-메틸-4-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-5-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 12), 4-(1-(2-메톡시에틸)-4-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-5-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 13), 4-(1,5-디메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 14), 4-(1-메틸-5-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 15), 4-(5-메틸-1-비닐-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 16), 4-(1-알릴-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 17), 4-(5-메틸-1-(2-메틸알릴)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 18), 4-(5-메틸-1-(3-메틸비닐-2-엔-1-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 19), 2-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에탄-1-아민(화합물 20), 4-(1-(2-메톡시에틸)-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 21), 4-(1-(2-메톡시에틸)-5-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 22), 4-(5-메틸-1-(4,4,4-트리플루오로부틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 23), 3-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)프로판-1-올(화합물 24), 5-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)펜탄-1-올(화합물 25), 4-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)부탄니트릴(화합물 26), 5-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)펜탄니트릴(화합물 27), 5-(5-페닐-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)펜탄니트릴(화합물 28), 5-(4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-5-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)펜탄니트릴(화합물 29), 6-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)헥산니트릴(화합물 30), 4-(1-(시클로프로필메틸)-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 31), 4-(1-(시클로부틸메틸)-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 32), 4-(1-(시클로펜틸메틸)-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 33), 4-(1-(시클로헥실메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 34), 4-(2,5-디메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 35), 4-(2-메틸-5-(p-톨릴)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 36), 4-(5-메틸-2-비닐-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 37), 4-(2-알릴-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 38), 4-(5-메틸-2-(2-메틸알릴)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 39), 4-(5-메틸-2-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 40), 2-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)에탄-1-아민(화합물 41), tert-부틸(2-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)에틸)카바메이트(화합물 42), 4-(2-(2-메톡시에틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 43), 4-(2-(2-메톡시에틸)-5-(p-톨릴)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 44), 4-(5-메틸-2-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 45), 3-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)프로판-1-올(화합물 46), 5-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄-1-올(화합물 47), 에틸 5-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜타노에이트(화합물 48), 4-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)부탄니트릴(화합물 49), 5-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄니트릴(화합물 50), 5-(4-페닐-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄니트릴(화합물 51), 5-(4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-5-(p-톨릴)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄니트릴(화합물 52), 6-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)헥산니트릴(화합물 53), 4-(2-(시클로프로필메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 54), 4-(2-(시클로부틸메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 55), 4-(2-(시클로펜틸메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 56), 및 4-(2-(시클로헥실메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 57)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 이의 염을 포함하는 JAK(Janus kinase) 억제용 조성물을 제공한다. 본 발명의 "JAK"은 세포 내 티로신 키나아제의 패밀리로서, 천선성 면역 및 후천성 면역 모두에서 수 많은 싸이토카인의 시그널링에 주요한 역할을 한다. 이러한 JAK의 기능으로 인해, 지금껏 면역, 염증, 암 관련 질환의 타겟으로 이용되어 왔다. 특히 JAK1 및 JAK3는 면역 결핍 질환, JAK2는 골수증식성 종양(MPN)에 관련되어 있어 이들의 활성을 억제하면 상기 질환들을 예방 또는 치료할 수 있는 것으로 알려져 있다. 본 발명자들은 본 발명의 화합물들이 JAK1, JAK2 및 JAK3를 모두 억제하는 효능이 있음을 확인하였다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 JAK은 JAK1, JAK2 및 JAK3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상이다.
본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 이의 염을 유효 성분으로 포함하는 면역 결핍 질환 또는 골수증식성 종양(MPN)의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 면역 결핍 질환은 중증 복합 면역 결핍증(SCID), 비장 비대증, 가려움증(pruritus), 악액질(cachexia), 빈혈(anemia), 자가면역 질환, 류머티스 관절염 및 알러지 질환으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나이다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 골수증식성 종양(MPN)은 진성 적혈구 증가증(polycythemia vera), 본태성 혈소판 증가증(essential thrombocythemia), 골수섬유증(myelofibrosis), 버드-키아리 증후군(Budd-Chiari Syndrome), 골수 섬유증 및 림프 악성종양으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나이다.
JAK의 활성을 억제함으로서 상기 질환들을 유효하게 예방 또는 치료할 수 있음은 종래 알려져 있다[1,2,3].
본 발명의 약제학적 조성물은 상술한 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 한편, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 바람직하게는 1일 당 0.001-1000 mg/kg(체중)이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구로 투여되는 경우, 피부에 국소적으로 도포, 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 화합물은 화학식 1의 R3이
Figure pat00005
인 것이다. 본발명의 화합물들인 2,5-트리아졸, 1,5-트리아졸, 또는 1,4-트리아졸의 형태는 모두 JAK 활성 억제 효과를 나타내지만, 본 발명자들은 특히 2,5-트리아졸 형태의 화합물들의 IC50 값이 현저히 낮다는 결과를 도출하였다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 R2는 말단 탄소가 시아노기 치환된 C1-6 직쇄 알킬, 2-메틸알릴, 4,4,4-트리할로부틸, 시클로알킬 치환된 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나이다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 말단 탄소가 시아노기 치환된 C1-6 알킬은 3-시아노프로필 또는 4-시아노부틸이다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 4,4,4-트리할로부틸은 4,4,4-트리플루오로부틸이다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 시클로알킬 치환된 C1-4 알킬은 시클로프로필메틸, 시클로부틸메틸 또는 시클로펜틸메틸이다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 R1은 메틸이다.
상술한 치환기들로 치환된 화합물의 경우, 더 우수한 JAK 억제 활성을 나타내었다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 본 발명의 화합물은 4-(5-메틸-2-(2-메틸알릴)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 39), 4-(5-메틸-2-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 45), 4-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)부탄니트릴(화합물 49), 5-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄니트릴(화합물 50), 4-(2-(시클로프로필메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 54), 및 4-(2-(시클로부틸메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 55), 4-(2-(시클로펜틸메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 56) 및 4-(2-(시클로헥실메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(화합물 57)으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상이다. 상술한 화합물들은 JAK2 억제에 대한 효소 분석에 있어서 IC50 값이 100 nM 이하 수준으로 관찰되었고, JAK1 및 JAK3의 억제 활성도 뛰어난 것을 확인하였다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 본 명세서 상의 소정의 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 이의 염을 제공한다.
(b) 본 발명은 JAK(Janus kinase) 억제용 조성물을 제공한다.
(c) 본 발명은 면역 결핍 질환 또는 골수증식성 종양(MPN)의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
(d) 본 발명의 화합물을 이용하면 효과적으로 JAK1, JAK2, 및 JAK3 활성을 억제할 수 있다.
(e) 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물을 이용하면 JAK 활성에 의해 유발되는 질병들을 효과적으로 억제할 수 있다.
도 1은 FDA 승인된 JAK 억제자 룩소리티닙 및 소파시티닙의 화학구조식과 JAK 패밀리 멤버에 대한 억제의 IC50 값을 나타낸다.
도 2는 1,5-트리아졸(화합물 21) 및 2,5-트리아졸(화합물 43) 이성질체의 최적화된 구조 정전위 맵을 나타낸다. 파란색이 양 전하를 빨간색이 음 전하를 나타낸다.
도 3은 HCC827 및 HCC827 GR 세포들에서의 화합물 54와 룩소리티닙의 항-증식 효과를 나타낸다.
도 4는 HCC827 및 HCC827 GR 세포에서의 STAT3 인산화(Y705)의 억제를 나타낸다.
도 5는 다양한 알킬 그룹으로 치환된 각각의 트리아졸 레지오이성질체의 합성 개요를 나타낸다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예
1. 일반적인 합성
모든 시약 및 용매를 상업적 공급자(시그마 알드리치, TCI 등)로부터 구입하였고, 추가적인 정제없이 그대로 이용하였다. TLC(Thin layer chromatography)를 형광 실리카겔 플레이트(Merck 사의 60 F254)를 이용하여 수행하였고, 짧은-파장(short wave) UV 광으로 가시화하였다. 크로마토그래피 정제를 Kieselgel 60(Merck) 0.040-0.063 mm 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 실시하였다. 양자 핵 자기 공명 분광법을 JEOL JNM-LA 300WB 분광광도계를 이용하여 300 MHz에서 또는 JEOL JNM-ECX 400P 분광광도계를 이용하여 400 MHz에서 수행하였고, 스펙트럼을 CDCl3 또는 DMSO-d 6에서 수집하였다. 달리 기재하지 않는 한, 캐미컬 시프트가 내부(internal) TMS(tetramethylsilane)로부터의 다운필드 ppm 또는 DMSO(2.5 ppm)로부터의 상대적인 ppm으로 표현되었다. 데이터는 하기와 같이 보고되었다: 캐미컬 쉬프트, 인테그레이션, 멀티플리시티(s, singlet; d, diublet; t, triplet; m, multiplet; br, broad) 및 커플링 상수. MALDI-TOF 및 ESI(electrospray ionization) 기구를 이용하여 질량 분광법을 수행하였다.
제조예 1: 4-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(4)의 제조
4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 H2O 내의 요오드화 수소산(hydriodic acid) 57 중량% 내로 용해시켰다. 용액을 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 고체를 필터링하여 제거하였다. 차가운 물 내의 현탁액을 NH3(aq) 용액으로 pH 8이 되도록 하였다. 고체를 필터링하였고, 물로 세척 후 고체를 건조시켰다.
제조예 2: 4-아이오도-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(5)의 제조.
건조시킨 DMF 내의 4-아이오도-7h-피롤로[2,3-d]피리미딘(4)의 용액에 대해 K2CO3를 첨가한 후, 실온에서 30분간 교반하였다. 30분 후, 2-(트리메틸실릴)에톡시메틸 클로라이드를 용액에 적상하였고(drop-wised), 실온에서 6시간동안 교반하여 반응시켰다. 퀀칭을 위해, 포화 NH4Cl 수용액을 용액에 첨가하였다. 혼합물을 에틸아세테이트로 붇고, 에틸아세테이트로 2회 추출하였다. 결합 유기층(The combined organic layers)을 Na2SO4로 건조시켰고, 필터링하였으며, 농축시켰다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트)로 정제하여 원하는 화합물을 수득하였다.
제조예 3-1: 4-(프로프-1-인-1-일)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(6a)의 제조.
Pd(PPh3)4, CuI(I) 및 TEA를 건조시킨 DMF 내의 4-아이오도-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(5) 용액에 첨가하였다. 혼합물은 실온에서 15분간 N2를 불어넣었다(bubbled). 실온에서 1시간 동안 혼합물 용액에 프로핀(propyne)을 불어넣은 후, 실온에서 밤새도록(over night) 교반하여 반응시켰다. 최종적으로 진공에서 용매를 제거하고, 잔여물을 에틸아세테이트로 2회 추출한 뒤, 물로 세척하였다. 결합된 유기층을 Na2SO4로 건조시켰고, 필터링하였으며, 농축시켰다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트)로 정제하여 원하는 화합물을 수득하였다.
제조예 3-2: 4-(페닐에티닐)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(6b)의 제조
Pd(PPh3)4, CuI(I) 및 TEA를 건조시킨 DMF 내의 4-아이오도-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(5) 용액에 첨가하였다. 혼합물은 실온에서 15분간 N2를 불어넣었다(bubbled). 실온에서 1시간 동안 혼합물 용액에 페닐아세틸렌(phenyl acetylene)을 불어넣은 후, 실온에서 o/n에 대해 교반하여 반응시켰다. 최종적으로 진공에서 용매를 제거하고, 잔여물을 에틸아세테이트로 2회 추출한 뒤, 물로 세척하였다. 결합된 유기층을 Na2SO4로 건조시켰고, 필터링하였으며, 농축시켰다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트)로 정제하여 원하는 화합물을 수득하였다.
제조예 3-3: 4-(p-톨릴에티닐)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3,-d]피리미딘(6c)
Pd(PPh3)4, CuI(I) 및 TEA를 건조시킨 DMF 내의 4-아이오도-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(5) 용액에 첨가하였다. 혼합물은 실온에서 15분간 N2를 불어넣었다(bubbled). 실온에서 1시간 동안 혼합물 용액에 4-에티닐톨루엔(4-ethynyltoluene)을 불어넣은 후, 실온에서 o/n에 대해 교반하여 반응시켰다. 최종적으로 진공에서 용매를 제거하고, 잔여물을 에틸아세테이트로 2회 추출한 뒤, 물로 세척하였다. 결합된 유기층을 Na2SO4로 건조시켰고, 필터링하였으며, 농축시켰다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트)로 정제하여 원하는 화합물을 수득하였다.
제조예 4-1: 4-(5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3,-d]피리미딘(7a)의 제조
4-(프로프-1-인-1-일)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(6a)을 건조된 DMF 내에 용해시키고, NaN3를 첨가하였다. 용액의 혼합물을 95℃에서 5시간 동안 교반하였다. 교반후, 용액을 실온으로 냉각시킨 뒤, 용매를 진공에서 제거하였다. 용액 제조를 위해, 잔여물을 1 N HCl(aq) 용액에 붓고, 에틸아세테이트로 2회 추출하였다. 결합된 유기 층을 Na2SO4로 건조시켰고, 필터링하였으며, 농축시켰다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트)로 정제하여 원하는 화합물을 얻었다.
제조예 4-2: 4-(5-페닐-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3,-d]피리미딘(7b)의 제조
4-(페닐에티닐)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(6b)을 건조된 DMF 내에 용해시키고, NaN3를 첨가하였다. 용액의 혼합물을 95℃에서 7시간 동안 교반하였다. 교반후, 용액을 실온으로 냉각시킨 뒤, 용매를 진공에서 제거하였다. 용액 제조를 위해, 잔여물을 1 N HCl(aq) 용액에 붓고, 에틸아세테이트로 2회 추출하였다. 결합된 유기 층을 Na2SO4로 건조시켰고, 필터링하였으며, 농축시켰다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트)로 정제하여 원하는 화합물을 얻었다.
제조예 4-3: 4-(5-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3,-d]피리미딘(4")의 제조
4-(p-톨릴에티닐)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘을 건조된 DMF 내에 용해시키고, NaN3를 첨가하였다. 용액의 혼합물을 95℃에서 7시간 동안 교반하였다. 교반후, 용액을 실온으로 냉각시킨 뒤, 용매를 진공에서 제거하였다. 용액 제조를 위해, 잔여물을 1 N HCl(aq) 용액에 붓고, 에틸아세테이트로 2회 추출하였다. 결합된 유기 층을 Na2SO4로 건조시켰고, 필터링하였으며, 농축시켰다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트)로 정제하여 원하는 화합물을 얻었다.
제조예 5: 트리아졸의 알킬화(alkylation)를 위한 일반적인 공정(8a-c)
ACN 내의 각각의 트리아졸 화합물(7a-c)의 용액 제조를 위해, K2CO3, KOH 및 TBAB를 첨가하였다. 용액을 실온에서 30분간 교반한 뒤, 알킬 브로마이드를 첨가하고, 실온에서 3-24시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 고체를 필터링하여 제거하고, 디에틸에테르로 세척하였다. 필터링 용매를 진공에서 제거한 뒤, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트)로 정제하여 원하는 화합물을 얻었다.
제조예 6:(2-트리메틸실릴)에톡시 메틸 그룹의 탈보호(deprotection)를 위한 일반적인 공정(9a-c, 10)
건조된 THF 내의 알킬 치환된 트리아졸(8a-c) 또는 비치환된 트리아졸(7a)의 스타팅 용액에 1 M THF 내의 TBAF를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 24-48시간 동안 교반한 뒤, 실온으로 냉각시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물 내로 붓고, 에틸아세테이트로 2회 추출하였다. 결합된 유기 층은 Na2SO4로 건조시켰고, 필터링하였으며, 농축시켰다. 잔여물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트)로 정제하여 원하는 화합물을 얻었다.
2. 제조 화합물
2-1. 4-아이오도-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(4)
제조예 1에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 91.0% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) J(Hz) 12.46(br, 1H) 8.39(s, 1H) 7.63(d, J=4, 1H) 6.29(d, J=4, 1H); MS(ESI): [M]+ =245.6
2-2. 4-아이오도-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(5)
제조예 2에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 74.3% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 8.53(s, 1H) 7.40(d, J=4, 1H) 6.44(d, J=4, 1H) 5.62(s, 2H) 3.52(t, J=8, 2H) 0.91(t, J=8, 2H) -0.06(s, 9H); MS(ESI): [M]+ =377.1
2-3. 4-(프로프-1-인-1-일)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(6a)
제조예 3-1에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 981.3% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 8.81(s, 1H) 7.35(d, J=4, 1H) 6.68(d, J=4, 1H) 5.63(s, 2H) 3.51(t, J=8, 2H) 2.20(s, 3H) 0.89(t, J=8, 2H) -0.07(s, 9H); MS(ESI): [M]+ =288.4
2-4. 4-(페닐에티닐)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(6b)
제조예 3-2에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 98% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 8.90(s, 1H) 7.70(d, J=4, 1H) 7.68(d, J=4, 1H) 7.43(d, J=4, 2H) 7.41(t, J=4, 3H) 6.79(d, J=4, 1H) 5.67(s, 2H) 3.56(t, J=8, 2H) 0.94(t, J=8, 2H) -0.05(s, 9H); MS(ESI): [M]+ =350.1
2-5. 4-(p-톨릴에티닐)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3,-d]피리미딘(6c)
제조예 3-3에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 57.5% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 8.89(s, 1H) 7.59(d, J=8, 2H) 7.41(d, J=4, 1H) 7.23(d, J=8, 2H) 6.78(d, J=4, 1H) 5.67(s, 2H) 3.56(t, J=8, 2H) 2.41(s, 3H) 0.94(t, J=8, 2H) -0.05(s, 9H); MS(ESI): [M]+ =363.9
2-6. 4-(5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3,-d]피리미딘(7a)
제조예 4-1에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 54.3% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 8.96(s, 1H) 7.43(d, J=4, 1H) 7.33(d, J=4, 1H) 5.71(s, 2H) 3.57(t, J=8, 2H) 2.87(s, 3H) 0.93(t, J=8, 2H) -0.05(s, 9H); MS(ESI): [M]+ =332.8
2-7. 4-(5-페닐-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3,-d]피리미딘(7b)
제조예 4-2에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 76% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 8.93(s, 1H) 7.73(d, J=4, 1H) 7.72(d, J=8, 1H) 7.40(d, J=8, 3H) 6.67(d, J=4, 1H) 5.69(s, 2H) 3.58(t, J=8, 2H) 0.95(t, J=8, 2H) -0.05(s, 9H); MS(ESI): [M]+ =394.0
2-8. 4-(5-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(7c)
제조예 4-3에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 79.9% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 8.94(s, 1H) 7.60(d, J=8, 2H) 7.35(d, J=4, 1H) 7.18(d, J=8, 2H) 6.72(br, 1H) 5.69(s, 2H) 3.58(t, J=8, 2H) 2.37(s, 3H) 0.95(t, J=8, 2H) -0.06(s, 9H); MS(ESI): [M]+ =406.9
2-9. 4-(5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(10)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 21.5% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d 6 ) δ(ppm) J(Hz) 12.13(br, 1H) 8.78(s, 1H) 7.58(d, J=4, 1H) 7.13(d, J=4, 1H) 2.72(s, 3H); MS(ESI) : [M]+ =200.9
2-10. 4-(1,4-디메틸-1H-1,2,3-트리아졸-5-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (11)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 12.4% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.65(br, 1H) 9.01(s, 1H) 7.47(d, J=4, 1H) 6.50(d, J=4, 1H) 4.20(s, 3H) 2.43(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =215.0
2-11. 4-(1-메틸-4-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-5-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(12)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 8.6% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.04(br, 1H) 9.07(s, 1H) 7.40(d, J=8, 2H) 7.22(d, J=4, 1H) 7.08(d, J=8, 2H) 5.89(d, J=4, 1H) 4.14(s, 3H) 2.05(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =291.0
2-12. 4-(1-(2-메톡시에틸)-4-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-5-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(13)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 4.0% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.14(br, 1H) 9.06(s, 1H) 7.38(d, J=8, 2H) 7.22(d, J=4, 1H) 7.06(d, J=8, 2H) 5.91(d, J=4, 1H) 4.83(t, J=8, 2H) 3.76(t, J=8, 2H) 3.10(s, 3H) 2.31(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =334.9
2-13. 4-(1,5-디메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(14)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 40.3% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d 6 ) δ(ppm) J(Hz) 12.15(br, 1H) 8.77(s, 1H) 7.57(d, J=4, 1H) 7.00(d, J=4, 1H) 4.20(s, 3H) 2.63(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =215.0
2-14. 4-(1-메틸-5-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(15)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 13.5% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.37(br, 1H) 8.69(s, 1H) 7.36(d, J=8, 2H) 7.35(d, J=4, 1H) 7.32(d, J=8, 2H) 7.20(d, J=4, 1H) 4.03(s, 3H) 2.45(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =290.9
2-15. 4-(5- 메틸 -1-비닐-1H-1,2,3- 트리아졸 -4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(16)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 72.3% 수율로 얻었다. 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm)J(Hz) 9.13(br, 1H) 8.89(s, 1H) 7.49(d, J=4, 1H) 7.39(d, J=4, 1H) 7.20(dd, 1 J=162 J=12, 1H) 6.21(d, J=12, 1H) 5.39(d, J=12, 1H) 2.94(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =227.3
2-16. 4-(1-알릴-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(17)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 77.6% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.66(br, 1H) 8.90(s, 1H) 7.53(dd, 1 J=82 J=4, 1H) 7.41(dd, 1 J=82 J=4, 1H) 6.78(d, J=4, 1H) 6.08(m, 1H) 2.84(s, 3H) 1.95(d, J=4, 2H); MS(ESI): [M]+ =241.4
2-17. 4-(5-메틸-1-(2-메틸알릴)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(18)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 30.9% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 11.20(br, 1H) 8.92(s, 1H) 7.50(d, J=4, 1H) 7.46(d, J=4, 1H) 5.03(s, 1H) 4.96(s, 1H) 4.73(s, 1H) 2.83(s, 3H) 1.78(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =255.2
2-18. 4-(5-메틸-1-(3-메틸비닐-2-엔-1-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(19)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 96.9% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.64(br, 1H) 8.88(s, 1H) 7.48(d, J=4, 1H) 7.38(d, J=4, 1H) 5.38(t, J=8, 1H) 5.01(d, J=4, 2H) 2.84(s, 3H) 1.87(s, 3H) 1.79(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =269.4
2-19. 2-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에탄-1-아민(20)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 18.0% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CD3OD-d 4 ) δ(ppm) J(Hz) 8.77(s, 1H) 7.49(d, J=4, 1H) 7.23(d, J=4, 1H) 4.56(t, J=8, 2H) 3.31(t, J=8, 2H) 2.84(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =244.4
2-20. 4-(1-(2-메톡시에틸)-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(21)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 58.6% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.88(br, 1H) 8.90(s, 1H) 7.49(d, J=4, 1H) 7.40(d, J=4, 1H) 4.54(t, J=8, 2H) 3.88(t, J=8, 2H) 3.34(s, 3H) 2.90(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =259.4
2-21. 4-(1-(2-메톡시에틸)-5-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(22)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 31.8% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.78(br, 1H) 8.67(s, 1H) 7.40(d, J=8, 2H) 7.35(d, J=4, 1H) 7.31(d, J=8, 2H) 7.24(d, J=4, 1H) 4.47(t, J=8, 2H) 3.88(t, J=8, 2H) 3.29(s, 3H) 2.45(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =335.0
2-22. 4-(5-메틸-1-(4,4,4-트리플루오로부틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(23)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 15.6% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.55(br, 1H) 8.90(s, 1H) 7.49(d, J=4, 1H) 7.40(d, J=4, 1H) 4.48(t, J=8, 2H) 2.90(s, 3H) 2.29(m, 4H); MS(ESI): [M]+ =311.2
2-23. 3-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)프로판-1-올(24)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 36.6% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CD3OD-d 4 ) δ(ppm) J(Hz) 8.75(s, 1H) 7.46(d, J=4, 1H) 7.20(d, J=4, 1H) 4.2(t, J=8, 2H) 3.63(t, J=8, 2H) 2.88(s, 3H) 2.16(t, J=8, 2H); MS(ESI): [M]+ =259.5
2-24. 5-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)펜탄-1-올(25)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 47.9% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CD3OD-d 4 ) δ(ppm) J(Hz) 8.76(s, 1H) 7.48(d, J=4, 1H) 7.21(d, J=4, 1H) 4.46(t, J=8, 2H) 3.58(t, J=8, 2H) 2.81(s, 3H) 1.99(m, 2H) 1.65(m, 2H) 1.46(m, 2H); MS(ESI) : [M]+ =287.0
2-25. 4-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)부탄니트릴(26)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 12.1%% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CD3OD-d 4 ) δ(ppm) J(Hz) 12.09(br, 1H) 8.74(s, 1H) 7.55(d, J=4, 1H) 7.15(d, J=4, 1H) 4.45(t, J=8, 2H) 2.79(s, 3H) 2.59(t, J=8, 2H) 2.15(quint, J=8, 2H); MS(ESI) : [M]+ =268.3
2-26. 5-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)펜탄니트릴(27)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 10.5% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CD3OD-d 4 ) δ(ppm) J(Hz) 12.08(br, 1H) 8.74(s, 1H) 7.54(d, J=4, 1H) 7.15(d, J=4, 1H) 4.42(t, J=8, 2H) 2.78(s, 3H) 2.56(t, J=8, 2H) 1.93(m, 2H) 1.60(m, 2H); MS(ESI): [M]+ =282.5
2-27. 5-(5-페닐-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)펜탄니트릴(28)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 9.4% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.62(br, 1H) 8.63(s, 1H) 7.55(m, 3H) 7.46(d, J=4, 1H) 7.44(m, 1H) 7.43(d, J=4, 1H) 7.26(m, 1H) 4.41(t, J=8, 2H) 2.35(t, J=8, 2H) 2.04(m, 2H) 1.72(m, 2H); MS(ESI): [M]+ =343.9
2-28. 5-(4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-5-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)펜탄니트릴(29)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 15.2% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.65(br, 1H) 8.66(s, 1H) 7.38(d, J=8, 2H) 7.26(d, J=4, 1H) 7.20(d, J=8, 2H) 7.07(d, J=4, 1H) 4.40(t, J=8, 2H) 2.47(s, 3H) 2.07(m,2H) 1.71(m, 2H) 0.90(m, 2H); MS(ESI): [M]+ =357.9
2-29. 6-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)헥산니트릴(30)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 11.9% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.07(br, 1H) 8.88(s, 1H) 7.48(d, J=4, 1H) 7.38(d, J=4, 1H) 4.42(t, J=8, 2H) 2.88(s, 3H) 2.40(t, J=8, 2H) 2.04(m, 2H) 1.80(m, 2H) 1.58(m,2H); MS(ESI): [M]+ =296.5
2-30. 4-(1-(시클로프로필메틸)-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(31)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 11.3% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.94(br, 1H) 8.89(s, 1H) 7.51(d, J=4, 1H) 7.40(d, J=4, 1H) 4.27(d, J=8, 2H) 2.91(s, 3H) 1.38(m, 1H) 0.71(q, J=8, 2H) 0.52(m, J=8, 2H); MS(ESI): [M]+ =256.1
2-31. 4-(1-(시클로부틸메틸)-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(32)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 12.3% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.47(br, 1H) 8.90(s, 1H) 7.51(d, J=4, 1H) 7.42(d, J=4, 1H) 4.39(d, J=8, 2H) 2.94(m, 1H) 2.87(s, 3H) 2.15(m, 2H) 1.94(m, 2H); MS(ESI): [M]+ =269.1
2-32. 4-(1-(시클로펜틸메틸)-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(33)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 7.6% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.46(br, 1H) 8.88(s, 1H) 7.50(d, J=4, 1H) 7.38(d, J=4, 1H) 4.30(d, J=8, 2H) 2.88(s, 3H) 1.80(m, 2H) 1.72(m, 2H) 1.42(m, 2H) 0.99(m, 2H); MS(ESI): [M]+ =283.2
2-33. 4-(1-(시클로헥실메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(34)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 14.2% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.38(br, 1H) 8.88(s, 1H) 7.51(d, J=4, 1H) 7.38(d, J=4, 1H) 4.21(d, J=4, 2H) 2.86(s, 3H) 2.64(m, 1H) 2.03(m, 2H) 1.76(m, 2H) 1.55(m, 2H) 1.13(m, 2H) 0.88(m, 2H); MS(ESI): [M]+ =297.1
2-34. 4-(2,5-디메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(35)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 18.4% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d 6 ) δ(ppm) J(Hz) 12.09(br, 1H) 8.73(s, 1H) 7.53(d, J=4, 1H) 7.14(d, J=4, 1H) 4.00(s, 3H) 2.75(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =215.1
2-35. 4-(2-메틸-5-(p-톨릴)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(36)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 27.2% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.52(br, 1H) 8.94(s, 1H) 7.63(d, J=8, 2H) 7.34(d, J=4, 1H) 7.19(d, J=8, 2H) 6.67(d, J=4, 1H) 4.38(s, 3H) 2.38(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =291.0
2-36. 4-(5-메틸-2-비닐-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(37)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 15.1% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.32(br, 1H) 8.95(s, 1H) 7.40(d, J=4, 1H) 7.38(dd, 1 J=82 J=4, 1H) 7.38(dd, 1 J=162 J=8, 1H) 7.26(dd, 1 J=82 J=4, 1H) 6.06(d, J=16, 1H) 5.14(d, J=16, 1H) 2.84(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =227.3
2-37. 4-(2-알릴-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(38)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 83.2% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.16(br, 1H) 8.93(s, 1H) 7.38(d, J=4, 1H) 7.25(d, J=4, 1H) 7.18(m, 1H) 7.40(m, 5H) 7.14(m, 1H) 6.60(dd, 1 J=82 J=4, 1H) 2.81(s, 3H) 1.95(d, J=4, 2H). 13C NMR (DMSO-d 6)δ(ppm) 152.74, 151.14, 149.37, 144.92, 142.95, 142.62, 127.92, 114.70, 101.93, 60.74, 20.27, 12.82; MS(ESI): [M]+ =241.4
2-38. 4-(5-메틸-2-(2-메틸알릴)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(39)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 13.9% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.79(br, 1H) 8.97(s, 1H) 7.44(d, J=4, 1H) 7.22(d, J=4, 1H) 5.06(d, J=32, 2H) 5.05(s, 1H) 2.80(s, 3H) 1.78(s,3H). 13C NMR (DMSO-d 6)δ(ppm) 152.82, 1521.12, 150.26, 142.41, 140.25, 135.52, 127.44, 117.81, 114.31, 113.10, 102.39, 53.18, 20.23, 10.42; MS(ESI): [M]+ =255.2
2-39. 4-(5-메틸-2-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(40)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 59.5% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.85(br, 1H) 8.94(s, 1H) 7.40(d, J=4, 1H) 7.22(d, J=4, 1H) 5.60(t, J=8, 1H) 5.10(d, J=4, 2H) 2.78(s, 3H) 1.88(s, 3H) 1.82(s, 3H). 13C NMR (DMSO-d 6)δ(ppm) 152.75, 151.15, 149.48, 144.73, 142.63, 138.56, 127.85, 118.61, 114.44, 102.00, 52.91, 25.88, 18.49, 12.85; MS(ESI): [M]+ =269.3
2-40. 2-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)에탄-1-아민(41)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 21.2% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CD3OD-d 4 ) δ(ppm) J(Hz) 8.77(s, 1H) 7.47(d, J=4, 1H) 7.13(d, J=4, 1H) 4.61(t, J=8, 2H) 3.31(t, J=8, 2H) 2.71(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =244.4
2-41. tert-부틸(2-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)에틸)카바메이트(42)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 37.4% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CD3OD-d 4 ) δ(ppm) J(Hz) 8.76(s, 1H) 7.46(d, J=4, 1H) 7.16(d, J=4, 1H) 4.58(t, J=8, 2H) 3.64(t, J=8, 2H) 2.70(s, 3H) 1.36(s,9H); MS(ESI): [M]+ =344.3
2-42. 4-(2-(2-메톡시에틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(43)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 71.4% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.12(br, 1H) 8.95(s, 1H) 7.40(d, J=4, 1H) 7.22(d, J=4, 1H) 4.67(t, J=8, 2H) 4.00(t, J=8, 2H) 3.40(s, 3H) 2.79(s, 3H). 13C NMR (DMSO-d 6)δ(ppm) 152.75, 151.14, 149.43, 144.70, 142.73, 127.84, 114.48, 102.01, 70.23, 58.43, 54.74, 12.85; MS(ESI): [M]+ =259.2
2-43. 4-(2-(2-메톡시에틸)-5-(p-톨릴)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(44)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 50.7% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.72(br, 1H) 8.94(s, 1H) 7.66(d, J=8, 2H) 7.35(d, J=4, 1H) 7.19(d, J=8, 2H) 6.70(d, J=4, 1H) 4.78(t, J=8, 2H) 4.07(t, J=8, 2H) 3.42(s, 3H) 2.38(s, 3H); MS(ESI): [M]+ =335.2
2-44. 4-(5-메틸-2-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(45)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 52.7% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.46(br, 1H) 8.97(s, 1H) 7.45(d, J=4, 1H) 7.19(d, J=4, 1H) 4.60(t, J=8, 2H) 2.80(s, 3H) 2.37(m, 2H) 2.27(m 2H). 13C NMR (DMSO-d 6)δ(ppm) 152.73, 151.13, 149.33, 144.91, 142.87, 127.94, 126.53, 114.49, 101.85, 53.43, 30.29, 22.39, 12.85; MS(ESI): [M]+ =311.5
2-45. 3-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)프로판-1-올(46)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 86.9% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CD3OD-d 4 ) δ(ppm) J(Hz) 8.75(s, 1H) 7.45(d, J=4, 1H) 7.12(d, J=4, 1H) 4.59(t, J=8, 2H) 3.66(t, J=8, 2H) 2.69(s, 3H) 2.24(t, J=8, 2H). 13C NMR (DMSO-d 6)δ(ppm) 152.73, 151.14, 149.48, 144.56, 142.56, 127.82, 114.45, 102.02, 58.18, 52.24, 32.90, 12.85; MS(ESI): [M]+ =259.3
2-46. 5-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄-1-올(47)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 25.4% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CD3OD-d 4 ) δ(ppm) J(Hz) 8.77(s, 1H) 7.47(d, J=4, 1H) 7.13(d, J=4, 1H) 4.53(t, J=8, 2H) 3.57(t, J=8, 2H) 2.70(s, 3H) 2.08(m, 2H) 1.62(m, 2H) 1.45(m, 2H); MS(ESI): [M]+ =287.3
2-47. 에틸 5-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜타노에이트(48)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 24.3% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.81(br, 1H) 8.94(s, 1H) 7.40(d, J=4, 1H) 7.21(d, J=4, 1H) 4.51(t, J=8, 2H) 4.16(q, J=8, 2H) 2.78(s, 3H) 2.39(t, J=8, 2H) 2.14(m, 2H) 1.78(m, 2H) 1.27(t, J=8, 2H); MS(ESI): [M]+ =329.3
2-48. 4-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)부탄니트릴(49)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 64.5% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CD3OD-d 4 ) δ(ppm) J(Hz) 12.15(br, 1H) 8.78(s, 1H) 7.57(d, J=4, 1H) 7.02(d, J=4, 1H) 4.56(t, J=8, 2H) 2.64(s, 3H) 2.57(t, J=8, 2H) 2.23(quint, J=8, 2H). 13C NMR (DMSO-d 6)δ(ppm) 152.76, 151.12, 149.33, 144.99, 142.95, 127.90, 120.28, 114.51, 102.00, 53.51, 25.60, 14.49, 12.87; MS(ESI): [M]+ =269.3
2-49. 5-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄니트릴(50)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 39.5% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.20(br, 1H) 8.95(s, 1H) 7.43(d, J=4, 1H) 7.19(d, J=4, 1H) 4.58(t, J=8, 2H) 2.79(s, 3H) 2.46(t, J=8, 2H) 2.27(m, 2H) 1.81(m, 2H), 13C NMR (DMSO-d 6)δ(ppm) 152.75, 151.13, 149.41, 144.74, 142.71, 127.82, 121.25, 120.95, 114.48, 101.99, 54.07, 28.66, 22.61, 16.25, 12.85; MS(ESI): [M]+ =282.3
2-50. 5-(4-페닐-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄니트릴(51)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 37.5% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.19(br, 1H) 8.94(s, 1H) 7.76(m,2H) 7.40(m, 3H) 7.36(d, J=4, 1H) 6.66(d, J=4, 1H) 4.69(t, J=8, 2H) 2.49(t, J=8, 2H) 2.32(m, 2H) 1.87(m, 2H); MS(ESI): [M]+ =344.1
2-51. 5-(4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-5-(p-톨릴)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄니트릴(52)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 25.6% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.97(br, 1H) 8.93(s, 1H) 7.65(d, J=8,2H) 7.34(d, J=4, 1H) 7.20(d, J=8, 2H) 6.68(d, J=4, 1H) 4.67(t, J=8, 2H) 2.48(t, J=8, 2H) 2.39(s, 3H) 2.29(m, 2H) 1.87(m, 2H); MS(ESI): [M]+ =358.1
2-52. 6-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)헥산니트릴(53)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 36.9% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 9.95(br, 1H) 8.94(s, 1H) 7.41(d, J=4, 1H) 7.19(d, J=4, 1H) 4.54(t, J=8, 2H) 2.78(s, 3H) 2.39(t, J=8, 2H) 2.14(m, 2H) 1.79(m, 2H) 1.55(m,2H). 13C NMR (DMSO-d 6)δ(ppm) 152.73, 151.14, 149.46, 144.61, 142.59, 127.84, 121.11, 114.47, 102.02, 54.68, 28.79, 25.68, 24.74, 16.52, 12.86; MS(ESI): [M]+ =296.3
2-53. 4-(2-(시클로프로필메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(54)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 35.7% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.48(br, 1H) 8.96(s, 1H) 7.42(d, J=4, 1H) 7.24(d, J=4, 1H) 4.36(d, J=8, 2H) 2.80(s, 3H) 1.52(m, 1H) 0.71(q, J=8, 2H) 0.53(m, J=8, 2H). 13C NMR (DMSO-d 6)δ(ppm) 152.74, 151.16, 149.53, 144.56, 142.64, 127.81, 114.48, 102.03, 59.36, 12.83, 11.49, 4.19; MS(ESI): [M]+ =255.1
2-54. 4-(2-(시클로부틸메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(55)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 28.9% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.89(br, 1H) 8.96(s, 1H) 7.44(d, J=4, 1H) 7.23(d, J=4, 1H) 4.51(d, J=8, 2H) 3.07(m, 1H) 2.78(s, 3H) 2.19(m, 2H) 1.96(m, 2H). 13C NMR (DMSO-d 6)δ(ppm) 152.73, 151.15, 149.49, 144.47, 142.59, 127.84, 114.47, 101.94, 59.51, 39.43, 35.34, 25.73, 18.25, 12.82; MS(ESI): [M]+ =269.1
2-55. 4-(2-(시클로펜틸메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(56)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 18.6% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 10.10(br, 1H) 8.95(s, 1H) 7.40(d, J=4, 1H) 7.23(d, J=4, 1H) 4.42(d, J=8, 2H) 2.78(s, 3H) 2.68(m, 1H) 1.82(m, 2H) 1.70(m, 2H) 1.67(m, 2H) 1.43(m, 2H). 13C NMR (DMSO-d 6)δ(ppm) 152.72, 151.15, 14951, 144.45, 142.51, 127.85, 114.47, 101.95, 59.39, 40.68, 39.63, 30.13, 25.14, 12.83; MS(ESI): [M]+ =283.2
2-56. 4-(2-(시클로헥실메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(57)
제조예 6에 기재된 방법에 따라, 원하는 화합물을 29.0% 수율로 얻었다. 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ(ppm) J(Hz) 11.18(br, 1H) 8.96(s, 1H) 7.44(d, J=4, 1H) 7.22(d, J=4, 1H) 4.33(d, J=4, 2H) 2.79(s, 3H) 2.18(m, 1H) 1.77(m, 4H) 1.32(m, 4H) 1.14(m, 2H); MS(ESI): [M]+ =297.1
3. 분석
실시예 3-1: JAK1 효소 분석
JAK1 (h)을 20 mM Tris/HCl pH 7.5, 0.2 mM EDTA, 500 μM GEEPLYWSFPAKKK, 10 mM Mg-아세테이트 및 [9-33P-ATP](특이적 활성은 대략 500 cpm/pmol, 요구되는 농도)와 함께 배양하였다. Mg-ATP 혼합물의 첨가에 의해 반응을 시작시켰다. 40분 간의 실온 배양 후, 3% 인산 용액(phosphoric acid solution)의 첨가에 의해 반응을 정지시켰다. 반응의 10 μl 부분 표본(aliquot)을 P30 필터매트(filtermat)으로 점적(spotted)시켰고, 75 mM 인산으로 5분간 3회 세척시켰으며, 메탄올로 1회 세척하였고, 건조시켰으며, 섬광 계수(scintillation counting)하였다.
실시예 3-2: JAK2 효소 분석
재조합 JAK2 단백질 키나아제 활성의 억제를 HTRF(homogeneous time-resolved fluorescence) 분석을 이용하여 측정하였다. 요컨대, 분석은 ATP의 존재하에서의 펩타이드 기질의 인산화에 기반하고, 결과적으로 얻은 인산화된 기질을 TR-FRET(Time Resolved-Fluorescence Resonence Energy Transfer)에 의해 검출하였다. 키나아제 도메인을 함유하는 재조합 단백질을 Millipore 사로부터 구입하였다. HTRF KinEASE 키트(Cisbio)를 이용하여 제조자의 지침에 따라, 최적 효소(optimal enzyme), ATP, 및 기질 농도를 효소에 대해 확립하였다. 분석들은 키나아제 반응 버퍼(50 mM HEPES (pH 7.0), 0.1 mM 오르쏘바나데이트, 0.01% BSA, 0.02% NaN3) 내의 펩타이드 기질 및 순차적으로 희석된 화합물들과 혼합된 효소로 구성된다. JAK2에 대해, 10 mM ATP, 5 mM MgCl2, 및 1 mM DTT를 이용하였다. TR-FRET 신호를 EnVision multi-label reader(Perkin Elmer)를 이용해 측정하였다. IC50 값을 Prism version 5.01(GraphPad)를 이용하여 비선형 회귀(nonlinear regression)에 의해 계산하였다.
실시예 3-3: JAK3 효소 분석
JAK2 효소 분석을 위해 이용된 절차와 동일한 절차를 이용하였다.
실시예 3-4: JAK2V61F 돌연변이 효소 분석
A2X JAK2 JH1 JH2 V617F / Tyr 06 혼합물을 50 mM HEPES pH 7.5, 0.01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA 내에서 준비하였다. 최종 10 μL 키나아제 반응은 50 mM HEPES pH 7.5, 0.01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA 내의 7.38-100 ng JAK2 JH1 JH2 V617F 및 2 μM Tyr 06으로 구성된다. 배양 1시간 후, 1:128 희석된 현상 시약 A(Development Reagent A) 5 μL를 첨가하였다.
4. 세포 증식 분석
실시예 4-1: HEL 92.1.7 세포 내의 WST에 의한 항-증식 활성 분석
트리아졸 화합물의 항-증식 활성을 WST-1 분석에 의해 측정하였다. HEL 92.1.7 세포(인간 백혈병 세포 주)를 96-웰 플레이트로 100 μL의 배지 내에 5×104 세포/웰의 농도로 접종하였다; 각 화합물을 최종 농도 10 μM이 되도록 첨가하였고, 37℃, 5% CO2-95% 공기의 가습 환경(humidified atmosphere)에서 배양시켰다. 배지의 흡광도를 마이크로플레이트 리더를 이용하여 450 nm에서 측정하였다. 데이터를 대조군과 비교하여 생존 세포의 백분율로서 표현하였다.
실시예 4-2: HCC827 야생형 및 제피티닙(gefitinib-저항성 HCC827 세포 주의 세포 독성 효과
MTT 분석에 의해 세포 독성 효과를 측정하였다. 96-웰 플레이트 내의 200 μl 배지 내의 총 2×103 세포를 다양한 농도의 4-(2-(시클로프로필메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 및 룩소리티닙(Ruxolitinib)으로 37℃에서 72시간동안 처리하였다. 생존 세포를 MTT [3-(4,5-디메틸싸이아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드](2 mg/mL)으로 4 시간 동안 염색하였다. 배지를 제거하였고, 각 웰에 대해 200 μL의 DMSO 추가에 의해 수(water)-불용성 포르마잔을 용해시켰다. 흡광도를 570 nm에서 마이크로타이터 플레이트 리더(Berthold Technologies)를 이용하여 측정하였다.
5. 웨스턴 블랏
HCC827 세포를 다양한 농도의 4-(2-(시클로프로필메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘으로 24시간 동안 처리하였다. 그런 뒤, 세포를 획수하였고, 20 mM Tris-Cl(pH 7.5), 1% Triton X-100, 137 mM 소듐 클로라이드, 10% 글리세롤, 2 mM EDTA, 1 mM 소듐 오르쏘바나데이트, 25 mM B-글리세로포스페이트, 2 mM 소듐 피로포스페이트, 1 mM 페닐메틸설포닐플루오라이드 및 1 μg/mL 류펩틴(leupeptin)을 함유하는 EBC 용해(lysis) 버퍼의 첨가로 용해시켰다(lysed). 세포 용해물을 13,000 × g로 15 분간 원심분리 시켜, 비용해성 물질들을 제거하였다. 세포 용해물의 50 μg 샘플을 10% SDS-PAGE, Bio-Rad)에 의해 분리시켰고, 단백질을 니트로셀룰로오스 막으로 이동시켰다. 막들을 5% 탈지유를 함유하는 PBST 내에서 1시간 동안 배양시켜, 비특이적 단백질 결합을 차단시켰다. 그 후, 단백질들을 특이적 항체(1:1000 희석)와 함께 4℃에서 밤새 면역블랏시켰다. 막들을 HRP-컨쥬게이션된 2차 항체(1:5000 희석)와 함께 1시간 동안 실온에서 배양시켰고, ECL 화학발광(chemiluminescence system) 시스템을 이용하여 현상(developed)시켰다. LAS3000-미니 시스템(Fugifilm)를 검출에 이용하였다.
실험 결과
1. 화학(chemistry)
JAK2 억제제의 합성을 위해, 출발 물질 4-클로로-7H-피롤로피리미딘(3)을 요오드화수소산(hydriodic acid)을 이용하여 대응되는 요오드화물(iodide) 화합물 4로 먼저 전환시켰다; 피롤-NH 모이어티를 [2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸(SEM)에 의해 보호되게 하였고, 화합물 5를 얻었다. SEM-보호된 피롤로피리미딘(5)을 TEA, CuI(I) 및 Pd(PPh3)4 및 다양한 알카인 모이어티들, 예컨대 프로핀(propyne), 페닐아세틸렌 및 4-에티닐톨루엔의 존재하에서 Sonogashira 커플링 반응에 이용하였고, 피롤로피리미딘 4-위치(position)의 트리아졸 그룹의 도입을 위한 전구체 화합물들(6a-c)을 얻었다. 그런 뒤 5원 시클릭 트리아졸(7a-c)을 알킨(alkyne) 구조들을 이용하여 클릭 화학(click chemistry)에 의해 생성시켰다. 최종적으로, 다른 트리아졸 레지오이성질체(regioisomer)(8)를 다양한 알킬 할라이드, K2CO3 및 TBAB와의 화합물 7의 치환 반응을 통해 얻었다; 중간체 화합물 7 및 8의 SEM 그룹의 이어지는 탈보호 반응은 화합물 10 및 9를 각각 생성시켰다. 알킬 치환 반응에서 오직 1,5- 및 2,5-트리아졸 이성질체만을 주요 산물 및 부산물로 각각 얻었고, 상기에서 R1은 메틸 그룹(7a)이었으며, R2 위치에서의 메틸화를 제외하고, 모두 세 이성질체가 생성되었다. 그러나, 트리아졸 모이어티의 알킬화 반응에서 1,4-트리아졸 이성질체(11, 12 및 13)를 또한 부산물로서 얻었고, 상기에서 R1 위치는 페닐 및 톨릴(tolyl) 그룹으로 치환되었다(7b 및 7c). 세가지 다른 레지오이성질체(regioisomers) 중에서 오직 2,5-트리아졸 이성질체인 주요 산물 만이 JAK2 효소를 명백한 선택성을 가지고 억제하였다.
2. 1H, NOESY 및 XRD를 포함하는 NMR에 의한 구조 결정
알킬 치환 반응에 있어서, 치환된 트리아졸은 2 주요 레지오이성질체(regioisomer)를 생성한다: 1,5- 및 2,5-트리아졸 화합물. 트리아졸 화합물의 구조를 화합물 21 및 43의 XRD에 의해 결정하였다. 두 이성질체의 1H-NMR 분석은 두 이성질체 사이의 피롤로피리미딘 그룹의 5번 수소(도 2 내의'b') 및 NH 양성자(proton)의 케미컬 쉬프트(chemical shift)에 있어서, 각각 0.264 ppm(1,5-트리아졸에 대해 7.477 ppm 및 2,5-트리아졸에 대해 7.213 ppm) 및 0.556 ppm(1,5-트리아졸에 대해 10.445 ppm 및 2,5-트리아졸에 대해 11.101 ppm)로 현저한 차이를 나타내었다. NOESY 분석에서, 각 트리아졸 이성질체 구조 내의 'b' 양성자의 조사(irradiation)는 다른 양성자들에서의 효과와 유의하게 다른 패턴을 만들어낸다. 오직 'c' 및 NH 양성자가 화합물 21(1,5-트리아졸)에서 영향을 받은 반면에, 화합물 43(2,5-트리아졸)의 'c', 'd', 'e', 'f' 및 'g' 양성자는 강화되었다. 상기 데이터는 1,5-트리아졸 이성질체의 상응하는 그룹에 비해 2,5-트리아졸 이성질체(43)의 메틸 및 메톡시에틸 그룹이 'b' 양성자에 더 가깝다는 것을 보여준다.
1,5-트리아졸(화합물 21) 및 2,5-트리아졸(화합물 43) 유도체에 있어서의 'b'양성자에서의 케미컬 쉬프트의 차이의 가능한 원인을 밝히기 위해, 대칭성 제약(symmetry constraints) 없는 분자 특성에 기반한 일반적인 계산 방법(a general computational calculating method)인 DFT(density functional theory)를 이용하여 정전위(electrostatic potential)를 계산하는 것에 의해 가우시안 09 Rev D.01.[18]에서 각 이성질체의 전자 밀도를 계산하였다. Mulliken 파퓰레이션(population) 분석에서, 상기 트리아졸 이성질체 사이의 정전위(electrostatic potential)에서 어떠한 현저한 차이도 관찰되지 않았다. 그러나 B3LYP(Beck3 Lee-Yang-Parr exchange functions) 방법의 형태에서 더욱 자세한 하이브리드 계산 프로토콜을 Kohn-Sham 오비탈의 확장을 위한 6-31+G(d)* 스탠다드 기저 세트에 적용하였을 때, 도 2에 나타낸 바와 같이 정전위 맵에서 두 트리아졸 이성질체의 전자 밀도의 다른 특성들이 관찰되었다. 2,5-트리아졸(화합물 43)의 'b' 양성자의 정전위는 0.117167로 계산되었고, 1,5-트리아졸(화합물 21)에 대한 0.094112의 값보다 더 높았다. 1,5- 및 2,5-트리아졸 사이의 부분적 전자 밀도의 패턴의 차이는 이성질체 사이의 'b' 양성자의 관찰된 케미컬 쉬프트의 원인일 수 있다. 그러므로, 더 낮은 부분적 전자 밀도를 갖는, 1,5-트리아졸(화합물 21)의 'b' 양성자는 다운필드로 쉬프트되었다. 4.588 및 4.568 eV로 각각 계산된 1,5- 및 2,5-트리아졸 이성질체 사이의 상기 에너지 갭을 계산하기 위해, HOMO 및 LUMO의 비교에 의해 분자 오비탈의 전자 밀도를 또한 시험하였다. 작은 HOMO-LUMO 에너지 갭 값 4.568 eV를 갖는 소프트 분자(soft molecule)가 4.588 eV의 큰 HOMO-LUMO 에너지 갭 값을 갖는 하드 분자(hard molecule)에 비해 더 분극화될 것이기 때문에, 계산된 정전위는 그들의 분극률 및 확산 차이를 충분히 설명한다. 1H-NMR 스펙트럼에서의 'b' 및 NH 양성자의 케미컬 쉬프트로 인해 전자 밀도 분석의 결과는 잔여 유도체들의 레지오이성질체의 구조 결정에 의해 뒷받침된다. 더욱이 본 발명의 1,5-트리아졸 아날로그의 1H-NMR 데이터는 pan-JAK 억제제로서 Gehringer 등[17]에 의해 보고된 1,5-트리아졸 유도체와 일맥상통한다.
3. In vitro 효소 억제 활성
처음으로, 모든 화합물의 JAK 키나아제 패밀리 멤버 JAK1, JAK2 및 JAK3에 대한 그들의 억제 활성을 10 및 1 μM의 농도에서 스크리닝함으로써 측정하였다. 표 1 및 2는 1 μM 농도에서 각 JAK 패밀리 멤버의 백분율 억제를 나타낸다: 선택된 화합물들의 IC50 값을 괄호 안에 나타내었다.
예컨대 화합물 10과 같은, R2 위치에서의 치환 없는 화합물들은 무시할 정도의 JAK1 및 JAK3 키나아제 억제 활성 및 1 μM에서의 26.7% 억제의 약한 JAK2 억제 활성을 보였다. 일반적으로, 1) 모든 트리아졸 화합물들 사이에서, 2,5-트리아졸 레지오이성질체는 R2 위치에서, 상응하는 1,4- 및 2,5-트리아졸(화합물 11 및 화합물 36)보다 더욱 잠재성있는 메틸-치환된 1,5-트리아졸(화합물 14)을 제외한 다양한 알킬 그룹의 치환을 갖는 이성질체에 비해 더 효과적으로 JAK2 키나아제 활성을 억제하였다. 2) 모든 합성된 1,4-이성질체들(화합물 11-13)은 모든 세 JAK 패밀리 멤버들에 대해 불활성화되었다. 3) 상응하는 메틸 치환된 아날로그와 대조적으로, R1 위치에 페닐 또는 톨릴 그룹을 갖는 화합물들(12, 13, 15, 22, 28, 29, 36, 44, 51 및 52)은 완전히 불활성화되었다.
대부분의 1,5-트리아졸 화합물들(화합물 14-34)은 약한 억제 활성을 갖거나, 억제 활성을 갖지 않았지만, R2 위치에서 메틸부테닐(화합물 19), 트리플루오로부틸(화합물 23), 부탄니트릴(화합물 26) 및 펜탄니트릴(화합물 27) 치환기를 갖는 몇몇 유도체들은 JAK1 및 JAK2 모두에 대해 1 μM에서 대략 50% 억제의 보통의 억제 효과를 나타내었다. 이러한 치환기들은 또한 상응하는 2,5-트리아졸 화합물들에 의해 JAK1 및 JAK2 억제를 증진시켰다.
# 레지오이성질체 R 1 R 2 JAK1 a (IC 50 b ) JAK2 a (IC 50 b ) JAK3 a (IC 50 b )
10 NON Me H 11.2 26.7 2.2
11 1,4-트리아졸 Me CH3 -8.9 c 1.7 -0.9
12 1,4-트리아졸 4-MePh CH3 -3.1 0.7 -4.4
13 1,4-트리아졸 4-MePh CH2CH2OCH3 3.0 4.4 -3.8
14 1,5-트리아졸 Me CH3 32.5 39.7 6.1
15 1,5-트리아졸 4-MePh CH3 -3.2 4.0 1.6
16 1,5-트리아졸 Me CH=CH2 13.1 25.1 -11.2
17 1,5-트리아졸 Me CH2CH=CH2 20.3 27.1 -11.6
18 1,5-트리아졸 Me CH2C=(CH2)CH3 18.4 30.2 8.2
19 1,5-트리아졸 Me CH2CH=C(CH3)2 50.6 50.2 -6.9
20 1,5-트리아졸 Me CH2CH2NH2 6.6 3.6 13.0
21 1,5-트리아졸 Me CH2CH2OCH3 4.5 4.8 -7.6
22 1,5-트리아졸 4-MePh CH2CH2OCH3 0.8 3.0 0.5
23 1,5-트리아졸 Me CH2CH2CH2CF3 58.7 51.9 2.1
24 1,5-트리아졸 Me CH2CH2CH2OH 4.8 24.0 -7.1
25 1,5-트리아졸 Me CH2CH2CH2CH2CH2OH 9.8 6.6 1.3
26 1,5-트리아졸 Me CH2CH2CH2CN 45.7 40.6 -0.2
27 1,5-트리아졸 Me CH2CH2CH2CH2CN 45.3 46.0 -6.3
28 1,5-트리아졸 Ph CH2CH2CH2CH2CN 4.9 1.7 -3.19
29 1,5-트리아졸 4-MePh CH2CH2CH2CH2CN 5.4 8.9 3.0
30 1,5-트리아졸 Me CH2CH2CH2CH2CH2CN 30.8 26.1 -4.7
31 1,5-트리아졸 Me CH2(C3H5) 13.2 9.7 -2.60
32 1,5-트리아졸 Me CH2(C4H7) 15.8 0.9 5.6
33 1,5-트리아졸 Me CH2(C5H9) 25.6 10.7 3.4
34 1,5-트리아졸 Me CH2(C6H11) 33.2 -8.9 6.1
35 2,5-트리아졸 Me CH3 11.2 5.6 1.6
# 레지오이성질체 R 1 R 2 JAK1 a ( IC 50 b ) JAK2 a ( IC 50 b ) JAK3 a ( IC 50 b )
36 2,5-트리아졸 4-MePh CH3 9.1 -0.6 4.1
37 2,5-트리아졸 Me CH=CH2 45.4 60.4 -8.7
38 2,5-트리아졸 Me CH2CH=CH2 50.7 82.3 (511) 1.3
39 2,5-트리아졸 Me CH2C=(CH2)CH3 81.1 (142) 95.3 (67.4) 15.6
40 2,5-트리아졸 Me CH2CH=C(CH3)2 53.6 77.9 (786) -4.3
41 2,5-트리아졸 Me CH2CH2NH2 19.1 13.9 4.8
42 2,5-트리아졸 Me CH2CH2NHBOC 5.4 3.2 -3.7
43 2,5-트리아졸 Me CH2CH2OCH3 51.7 88.0 (310) 8.3
44 2,5-트리아졸 4-MePh CH2CH2OCH3 -3.8 2.5 7.1
45 2,5-트리아졸 Me CH2CH2CH2CF3 84.7 (82) 88.1 (96.3) 10.8
46 2,5-트리아졸 Me CH2CH2CH2OH 62.6 86.7 (156) 20.2
47 2,5-트리아졸 Me CH2CH2CH2CH2CH2OH 53.6 60.4 2.0
48 2,5-트리아졸 Me CH2CH2CH2CH2COOCH2CH3 20.2 25.4 -9.0
49 2,5-트리아졸 Me CH2CH2CH2CN 89.0 (72) 96.3 (73.5) 51.1 (1,760)
50 2,5-트리아졸 Me CH2CH2CH2CH2CN 78.4 (138) 96.3 (63.6) 14.7
51 2,5-트리아졸 Ph CH2CH2CH2CH2CN 7.7 11.1 -1.1
52 2,5-트리아졸 4-MePh CH2CH2CH2CH2CN 12.0 13.1 1.2
53 2,5-트리아졸 Me CH2CH2CH2CH2CH2CN 81.6 (186) 90.1 (165) 6.4
54 2,5-트리아졸 Me CH2(C3H5) 68.3 (444) 96.1 (41.9) 21.6 (2,440)
55 2,5-트리아졸 Me CH2(C4H7) 68.9 96.1 (62.7) 22.5
56 2,5-트리아졸 Me CH2(C5H9) 76.8 87.9 (71.8) 11.1
57 2,5-트리아졸 Me CH2(C6H11) 60.6 32.0 6.7
1,4- 및 1,5-트리아졸의 시리즈에서 비록 주목할만한 활성 또는 SAR이 관찰되지 않았지만, 2,5-트리아졸 화합물들의 명확한 SAR을 갖는 잠재적이고 선택적인 JAK2 억제 활성이 관찰되었다. 대부분의 현재의 JAK 억제제들이 니트릴 모이어티를 함유하므로, R2 위치에 전자-풍부 모이어티, 예컨대 니트릴 그룹 뿐만 아니라 알켄(alkene), 아민, 트리플루오로메틸, 히드록실 및 에스터 그룹을 포함하는 다양한 치환기를 도입하고자 하였다. 알켄-치환된 유도체의 시리즈(화합물 37-40)에서, 먼저 R2 위치에서 메틸 치환(화합물 35)과는 대조적으로 비닐 치환(화합물 37)에 대한 JAK1 및 JAK2 키나아제 억제 활성에서의 극적인 증가를 관찰하였다. 아날로그의 시리즈의 억제 활성의 패턴은 다음과 같다: 비닐(화합물 37) < 3-메틸부트-2-에닐(화합물 40) < 알릴 (화합물 38) < 2-메틸알릴(39). 특히, 화합물 38과 대조적으로 알릴 그룹의 2-위치에서의 추가적인 메틸 그룹을 갖는 화합물 39는, 각각 142 nM 및 67.4 nM의 IC50 값을 갖는 JAK1 및 JAK2 억제 활성에서의 극적인 증가(예를 들어, JAK2에 대해 7.6배 증가) 및 JAK3에 대한 높은 선택성을 보였다.
알켄 그룹의 이로운 효과에 기반하여, R2 치환기의 말단에 다양한 전자-풍부 그룹을 갖는 화합물 41-53을 합성하였고 평가하였다. R2 치환기의 비슷한 길이를 갖는 화합물 38 및 41 또는 42의 비교는 아민 또는 NHBOC 그룹은 알릴 치환기(화합물 38)에 비해 JAK 억제 활성을 감소시켰다는 것을 밝혔다. 비슷한 길이의 다른 치환된 알킬 모이어티 및 다양한 전자-풍부 그룹들 가운데, 메톡시(화합물 43), 트리플루오로부틸(화합물 45) 및 프로판올(화합물 46) 모이어티를 갖는 화합물들은 JAK2에 대하여 각각 210, 96.3 및 156 nM의 IC50의 단지 보통의 억제 활성을 나타내었다. 3-트리플루오로메틸-n-프로필-치환된 화합물 45의 경우, 유사한 억제 능력(JAK1에서의 ICS=82 nM)이 관찰되었다. 화합물 46과 히드록실 모이어티를 공유하지만 두 탄소가 연장된 탄소 체인을 갖는 화합물 47은 모든 JAK 키나아제에 대한 감소된 억제를 보였다.
다른 탄소 체인 길이(각각 4, 5, 및 6)를 갖는 니트릴-치환된 화합물 49, 50 및 53은 다른 전자-풍부 치환된 유도체들에 비하여 JAK 패밀리 멤버의 강화된 억제를 보였다. 게다가 JAK1에 대한 억제 활성은 탄소 체인 길이가 증가함에따라 감소하였다: 탄소 체인 길이 4(화합물 49) > 탄소 체인 길이 5(화합물 50) > 탄소 체인 길이 6(화합물 53). 그러나, JAK2에 대한 억제 활성은 탄소 체인 길이 4(화합물 49) 또는 5(화합물 50)에서 최적화되었고, 6 탄소 체인 길이를 갖는 화합물 53은 활성에서 2.4배 감소를 보였다. 특히 화합물 49는 본 발명에서 1 μM에서 50% 보다 더 좋은 억제(IC50=1.76 μM)를 갖는 JAK3의 유일한 억제제였다. 니트릴 유도체들의 시리즈 가운데, 화합물 50은 JAK3에 비해 높은 JAK2 선택성 및 JAK1에 비해 2.2배 높은 선택성을 보였다.
최종적으로, 대표적인 JAK2 억제제 룩소리티닙(화합물 1)이 약물 분자 구조로서 시클로펜탄 그룹을 갖기 때문에 다양한-사이즈의 시클로알칸 모이어티(화합물 54-57)을 평가하였다. 비록 화합물 54-57의 JAK1 억제 활성이 1 μM에서 61-77% 억제로 모두 유사하지만, 시클로알칸 링의 사이즈의 감소에따라 JAK2 억제는 증가되었다. 그러므로, 시클로프로필메틸-치환된 화합물 54가 41.9 nM의 IC50 값 및 JAK1과 JAK3에 대해 각각 10.6 배 및 58.1 배의 선택성을 갖는, 가장 강하고, 선택적인 JAK2 억제자였다.
JAK2V617F 돌연변이가 JAK2 관련된 MPN 발병의 병인 요소인 것으로 보고되어 왔기 때문에[14], 상기 돌연변이 효소를 억제하기 위한 잠재적 JAK2 억제 활성을 갖는 7개 화합물들의 능력을 평가하였다. 일반적으로 상기 화합물들은 야생형 JAK2에 비해 JAK2V617F 돌연변이에 대하여 더 낮은 억제 활성을 보였다; 대부분의 잠재적인 억제자들은 펜탄니트릴 아날로그 화합물 50 및 시클로프로필메틸 아날로그 화합물 54였고, 100 nM의 농도에서 JAK2V617F의 53.5% 및 56.8% 억제를 나타내었다. JAK2 및 JAK2V617F에 대한 억제 활성에 기반하여, 화합물 50 및 54가 가장 선택적이고, 신규한 JAK2 억제자로 간주되었다.
4. 세포 성장 억제
JAK2-연관된 MPN 및 제피티닙-저항성 NSCLC의 세포 모델에서의 추가적인 기능적 연구에 앞서, 화합물 50 및 54의 세포 투과성을 PAMPA(Parallel Artificial Membrane Permeability Assay, 높은 값>-4.07; 중간 값 -4.07~-4.87; 낮은 값 < -4.87)[20]에 의해 측정하였다. 상기 결과들은, 각각 -4.38±0.29 및 -4.05±0.41의 값을 갖는 화합물 50 및 54의 보통 및 높은 투과성을 나타낸다. MPN 적백혈병(erythroleukemia)으로부터 유래되고 JAK2V617F 돌연변이를 수반하는 HEL92.1.7 세포에서, 7개의 대표적인 아날로그(화합물 45 제외)는 10 μM의 농도에서 대략 40-65%의 주목할만한 항-증식 효능을 나타내었다(supporting information); 이는 HEL92.1.7 세포에서 14.7±0.25 μM의 IC50를 갖는 룩소리티닙(화합물 1)과 유사하였다. 비록 이 결과가 효소 활성 및 세포 증식의 억제 사이의 차이를 나타내지만, JAK2에 대한 단일-디지트(single digit) 나노몰 IC50을 갖는 룩소리티닙(화합물 1)은 또한 HEL 92.1.7 세포에서 동일한 농도에서 오직 55% 억제를 나타낸다. 효소 및 세포 사이의 활성 프로파일에서의 이 갭(gap)과 일관되게, HEL92.1.7 에서의 186 nM의 EC50 값이 룩소리티닙(화합물 1)에 대해 보고되어 왔다[21].
5. 웨스턴 블랏
화합물 54의 추가적인 기능 연구를 HCC827 WT 및 HCC827 GR 세포에서 수행하였다. 이러한 세포 주들은 야생형 및 제피티닙-저항성 NSCLC 각각으로부터 유래되었고, 후자는 EGFR 억제자-저항성 NSCLC의 잘 알려진 형태이다. 이러한 세포 유형들은 항암 약물, 예컨대 TKIs 또는 시스플라틴과의 조합에 있어서의 JAK2 억제자에 의해 효과적으로 억제되는 것으로 알려져 왔다[22]. 이러한 세포 주들이 다양한 농도의 룩소리티닙(화합물 1), 잠재적 JAK1/2 억제자 또는 화합물 54와 함께 배양되었을 때, 화합물 1은 HCC827 WT 세포(30 μM에서 16.6%)에 비해 HCC827 GR 세포에서의 증식의 더 높은 억제(30 μM에서 57.1%)를 나타냈다. 화합물 54는 30 μM에서 HCC827 GR 세포의 증식을 억제하였으나, HCC827 WT 세포에 대해서 항-증식 효과를 보이지 않았다. 게다가, SH2 도메인 내의 공동의 포스포티로신 상호작용을 통해 호모다이머화를 자극하는, JAK2 활성화의 다운스트림 시그널링 이벤트인[23] STAT3의 인산화(Y705)는 또한 HCC827 GR 세포 내에서 30 μM의 화합물 54에 의해 억제된다. 흥미롭게도, 룩소리티닙(화합물 1)이 유의하게 양쪽 세포 타입에서 이 시그널링을 유의하게 억제하는 반면, STAT3 인산화의 억제는 HCC827 WT 세포 내에서 관찰되지 않는다.
4-(2,5-트리아졸)-피롤로피리미딘 구조에 기반한 유도체들의 합성적 및 SAR 연구들의 본 발명의 결과들은 잠재적이고 높은 선택성을 갖는 JAK2 억제자들을 발굴하였다. R2 위치에서의 전자-풍부 모이어티를 갖는 다양한 알킬-치환된 그룹들최적화 및 SAR 분석에 따라, 시클로프로필메틸-치환된 화합물 54(IC50=41.9 nM 및 선택성 배율: JAK1/2 10.6 및 JAK3/2 58.1)는 신규 잠재적이고 선택성있는 JAK2 억제자로서 발굴되었다. 화합물 54는 또한 JAK2V617F 돌연변이에 대한 유사한 억제 가능성을 나타낸다. 더욱이 화합물 54는 JAK2 돌연변이를 수반하는 MPN 조혈세포 암으로부터 유래된 HEL 92.1.7 세포 및 제피티닙-저항성 NSCLC 세포의 증식을 억제한다. 화합물 54는 또한 STAT3의 호혜성 상호작용(reciprocal interaction) 사이트인 SH2 도메인 내의 Y705에서의 STAT3 인산화를 억제한다. 본 발명의 신규한 JAK2 선택적 억제자들은, 더욱 강하고 선택적인 JAK2 억제자의 추가적 개발을 통한 새로운 약물 발굴을 위한 잠재적인 리드 화합물이다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
참고문헌
[1] Leonard, W. J.; O'Shea, J. J. JAKS and STATS: Biological Implications. Annu. Rev. Immunol. 16 (1998) 293-322. (b) Ghoreschi, K.; Laurence, A.; O'Shea, J. J. Janus Kinases in Immune Cell Signaling. Immunol. Rev. 228 (2009) 273-287.
[2] Aaronson, D. S.; Horvath, C. M. A Road Map for Those Who Don't Know JAK-STAT. Science 296 (2002) 1653-1655.
[3] Manning, G.; Whyte, D. B.; Martinez, R.; Hunter, T.; Sundarsanam, S. The Protein Kinase Complement of the Human Genome. Science 298 (2002) 1912-1934.
[4] O'Shea, J. J.; Plenge, R. JAK and STAT Signaling Molecules in Immunoregulation and Immune-mediated Disease. Immunity 36 (2012) 542-550.
[5] Flex, E.; Petrangeli, V.; Stella, L.; Chiaretti, S.; Hornakova, T.; Knoops, L.; Ariola, C.; Fodale, V.; Clappier, E.; Paoloni, F.; Martinelli, S.; Fragale, A.; Sanchez, M.; Tavolaro, S.; Messina, M.; Cazzaniga, G.; Camera, A.; Pizzolo, G.; Tornesello, A.; Vignetti, M.; Battistini, A.; Cave, H.; Gelb, B. D.; Renauld, J.-C.; Biondi, A.; Constantinescu, S. N.; Foa, R.; Tartaglia, M. Somatically Acquired JAK1 Mutations in Adult Acute Lymphoblastic Leukemia. J. Exp. Med. 205 (2008) 751-758.
[6] Gadina, M.; Hilton, D.; Johnston, J. A.; Morinobu, A.; Lighvani, A.; Zhou, Y. J.; Visconti, R.; O'Shea, J. J. Signaling by Type I and II Cytokine Receptors: Ten Years After. Curr.Opin.Immunol.13 (2001) 363-373.
[7] O'Shea, J. J.; Husa, M.; Li, D.; Hofmann, S. R.; Watford, W.; Roberts, J. L.; Buckley, R. H.; Changelian, P.; Candotti, F. Jak3 and The Pathogenesis of Severe Combined Immunodeficiency. Mol. Immunol. 41 (2004) 727-737.
[8] Tan, S.-H.; Nevalainen, M. T. Signal Transducer and Activator of Transcription 5A/B in Prostate and Breast Cancers. Endocr.Relat. Cancer 15 (2008) 367-390.
[9] Vainchenker, W.; Dusa, A.; Constantinescu, S. N. JAKs in Pathology: Role of Janus Kinases in Hematopoietic Malignancies and Immunodeficiencies. Semin. Cell Dev. Biol. 19 (2008) 385-393.
[10] Chen, E.; Staudt, L. M.; Green, A. R. Janus Kinase Deregulation in Leukemia and Lymphoma. Immunity 36 (2012) 529-541.
[11] Lipson, D.; Capelletti, M.; Yelensky, R.; Otto, G.; Parker, A.; Jarosz, M.; Curran, J. A.; Balasubramanian, S.; Bloom, T.; Brennan, K. W.; Donahue, A.; Downing, S. R.; Frampton, G. M.; Garcia, L.; Juhn, F.; Mitchell, K. C.; White, E.; White, J.; Zwirko, Z.; Peretz, T.; Nechushtan, H.; Soussan-Gutman, L.; Kim, J.; Sasaki, H.; Kim, H. R.; Park, S. I.; Ercan, D.; Sheehan, C. E.; Ross, J. S.; Cronin, M. T.; Jㅴnne, P. A.; Stephens, P. J. Identification of New ALK and RET Gene Fusions from Colorectal and Lung Cancer Biop-sies. Nat. Med. 18 (2012) 382-384.
[12] Koppikar, P.; Bhagwat, N.; Kilpivaara, O.; Manshouri, T.; Adli, M.; Hricik, T.; Liu, F.; Saunders, L. M.; Mullally, A.; Abdel-Wahab, O.; Leung, L.; Weinstein, A.; Marubayashi, S.; Goel, A.; Gㆆnen, M.; Estrov, Z.; Ebert, B. L.; Chiosis, G.; Nimer, S. D.; Bernstein, B. E.; Verstovsek, S.; Levine, R. L. Heterodimeric JAK-STAT Activation as a Mechanism of Persistence to JAK2 Inhibitor Therapy. Nature 489 (2012) 155-159.
[13] Lu, X.; Levine, R.; Tong, W.; Wernig, G.; Pikman, Y.; Zarnegar, S.; Gilliland, D. G.; Lodish, H. Expression of a Homodimeric Type I Cytokine Receptor is Required for JAK2V617F-mediated Transfor-mation. Proc. Natl. Acad. Sci. 102 (2005) 18962-18967.
[14] Pardanani, A.; Vannucchi, A. M.; Passamonti, F.; Cervantes, F.; Barbui, T.; Tefferi, A. JAK Inhibitor Therapy for Myelofibrosis: Criti-cal Assessment of Value and Limitations. Leukemia 25 (2011) 218-225.
[15] Meyer, S. C.; Levine, R. L. Molecular Pathways: Molecular Basis for Sensitivity and Resistance to JAK Kinase Inhibitors. Clin. Cancer Res. 20 (2014) 2051-2059.
[16] Kubler, P. Janus Kinase Inhibitors: Mechanisms of Action. Exp. and Clin. Pharm. 37 (2014) 154-157.
[17] Gehringer, M.; Forster, M.; Laufer, S. A. Solution-phase Parallel Synthesis of Ruxolitinib-Derived Janus Kinase Inhibitors via Copper-catalyzed Azide-alkyne Cycloaddition. ACS Comb. Sci. 17 (2015) 5-10.
[18] Gaussian 09, Revision D.01, M. J. Frisch, G. W. Trucks, H. B. Schlegel, G. E. Scuseria, M. A. Robb, J. R. Cheeseman, G. Scalmani, V. Barone, B. Mennucci, G. A. Petersson, H. Nakatsuji, M. Caricato, X. Li, H. P. Hratchian, A. F. Izmaylov, J. Bloino, G. Zheng, J. L. Sonnenberg, M. Hada, M. Ehara, K. Toyota, R. Fukuda, J. Hasegawa, M. Ishida, T. Nakajima, Y. Honda, O. Kitao, H. Nakai, T. Vreven, J. A. Montgomery, Jr., J. E. Peralta, F. Ogliaro, M. Bearpark, J. J. Heyd, E. Brothers, K. N. Kudin, V. N. Staroverov, R. Kobayashi, J. Nor-mand, K. Raghavachari, A. Rendell, J. C. Burant, S. S. Iyengar, J. Tomasi, M. Cossi, N. Rega, J. M. Millam, M. Klene, J. E. Knox, J. B. Cross, V. Bakken, C. Adamo, J. Jaramillo, R. Gomperts, R. E. Strat-mann, O. Yazyev, A. J. Austin, R. Cammi, C. Pomelli, J. W. Ochter-ski, R. L. Martin, K. Morokuma, V. G. Zakrzewski, G. A. Voth, P. Salvador, J. J. Dannenberg, S. Dapprich, A. D. Daniels, ㅦ. Farkas, J. B. Foresman, J. V. Ortiz, J. Cioslowski, and D. J. Fox, Gaussian, Inc., Wallingford CT, (2009).
[19] Julian T. R.; William L. J. Performance of B3LYP Density Func-tional Methods for a Large Set of Organic Molecules. J. of Chem. Theory Comput. 4 (2008) 297-306.
[20] Avdeef, A.; Artursson, P.; Neuhoff, S.; Lazorova, L.; Grㅵsjㆆ, J.; Tavelin, S. Caco-2 Permeability of Weakly Basic Drugs Predicted with the Double-sink PAMPA pKa(flux) Method. Eur. J. Pharm. Sci. 4 (2005) 333-349.
[21] Quintㅱs-Cardama, A.; Vaddi, K.; Liu, P.; Manshouri, T.; Li, J.; Scherle, P. A.; Caulder, E.; Wen, X.; Li, Y.; Waeltz, P.; Rupar, M.; Burn, T.; Lo, Y.; Kelley, J.; Covington, M.; Shepard, S.; Rodgers, J. D.; Haley, P.; Kantarjian, H.; Fridman, J. S.; Verstovsek, S. Preclini-cal Characterization of the Selective JAK1/2 Inhibitor INCB018424: Therapeutic Implications for the Treatment of Myeloproliferative Neoplasms. Blood 115 (2010) 3109-3117.
[22] Murakami, T.; Takigawa, N.; Ninomiya, T.; Ochi, N.; Yasugi, M.; Honda, Y.; Kubo, T.; Ichihara, E.; Hotta, K.; Tanimoto, M.; Kiura, K. Effect of AZD1480 in an Epidermal Growth Factor Recep-tor-driven Lung Cancer Model. Lung Cancer 83 (2014) 30-36.
[23] Chang, K. T.; Tsai, C. M.; Chiou, Y. C.; Chiu, C. H.; Jeng, K. S.; Huang, C..Y. IL-6 Induces Neuroendocrine Dedifferentiation and Cell Proliferation in Non-small Cell Lung Cancer Cells. Am. J. Phys-iol. Lung Cell Mol. Physiol. 289 (2005) L446-L453.

Claims (14)

  1. 하기 화학식 1의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 이의 염:
    화학식 1
    Figure pat00006

    상기 화학식 1 에서,
    R3은
    Figure pat00007
    ,
    Figure pat00008
    및
    Figure pat00009
    로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나이고,
    상기 R2는 수소, C1-4 알킬, 알릴, 메톡시에틸, 5-에톡시-5-옥소펜틸, 3-히드록시프로필, 5-히드록시펜틸, 말단 탄소가 시아노기 치환된 C1-6 직쇄 알킬, tert-부톡시아미노에틸(-CH2CH2N(H)Boc), 2-아미노에틸, 메틸부트-2-인-1-일, 비닐, 4,4,4-트리할로부틸, 및 시클로알킬 치환된 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나이며;
    상기 R1은 수소, 메틸, 페닐 및 p-톨릴로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나이다.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 화합물은 4-(5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(1,4-디메틸-1H-1,2,3-트리아졸-5-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(1-메틸-4-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-5-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(1-(2-메톡시에틸)-4-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-5-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(1,5-디메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(1-메틸-5-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(5-메틸-1-비닐-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(1-알릴-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(5-메틸-1-(2-메틸알릴)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(5-메틸-1-(3-메틸비닐-2-엔-1-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 2-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에탄-1-아민, 4-(1-(2-메톡시에틸)-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(1-(2-메톡시에틸)-5-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(5-메틸-1-(4,4,4-트리플루오로부틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 3-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)프로판-1-올, 5-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)펜탄-1-올, 4-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)부탄니트릴, 5-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)펜탄니트릴, 5-(5-페닐-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)펜탄니트릴, 5-(4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-5-(p-톨릴)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)펜탄니트릴, 6-(5-메틸-4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)헥산니트릴, 4-(1-(시클로프로필메틸)-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(1-(시클로부틸메틸)-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(1-(시클로펜틸메틸)-5-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(1-(시클로헥실메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(2,5-디메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(2-메틸-5-(p-톨릴)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(5-메틸-2-비닐-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(2-알릴-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(5-메틸-2-(2-메틸알릴)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(5-메틸-2-(3-메틸부트-2-엔-1-일)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 2-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)에탄-1-아민, tert-부틸(2-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)에틸)카바메이트, 4-(2-(2-메톡시에틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(2-(2-메톡시에틸)-5-(p-톨릴)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(5-메틸-2-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 3-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)프로판-1-올, 5-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄-1-올, 에틸 5-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜타노에이트, 4-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)부탄니트릴, 5-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄니트릴, 5-(4-페닐-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄니트릴, 5-(4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-5-(p-톨릴)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄니트릴, 6-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)헥산니트릴, 4-(2-(시클로프로필메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(2-(시클로부틸메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(2-(시클로펜틸메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 및 4-(2-(시클로헥실메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 이의 염.
  3. 제 1 항에 따른 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 이의 염을 포함하는 JAK(Janus kinase) 억제용 조성물.
  4. 제 3 항에 있어서, 상기 JAK은 JAK1, JAK2 및 JAK3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 조성물.
  5. 제 1 항에 따른 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 이의 염을 유효 성분으로 포함하는 면역 결핍 질환 또는 골수증식성 종양(MPN)의 예방 또는 치료용 조성물.
  6. 제 5 항에 있어서, 상기 면역 결핍 질환은 중증 복합 면역 결핍증(SCID), 비장 비대증, 가려움증(pruritus), 악액질(cachexia), 빈혈(anemia), 자가면역 질환, 류머티스 관절염 및 알러지 질환으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 조성물.
  7. 제 5 항에 있어서, 상기 골수증식성 종양(MPN)은 진성 적혈구 증가증(polycythemia vera), 본태성 혈소판 증가증(essential thrombocythemia), 골수섬유증(myelofibrosis), 버드-키아리 증후군(Budd-Chiari Syndrome), 골수 섬유증 및 림프 악성종양으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 조성물.
  8. 제 5 항에 있어서, 상기 화합물은 상기 R3이
    Figure pat00010
    인 것을 특징으로 하는 조성물.
  9. 제 8 항에 있어서, 상기 R2는 말단 탄소가 시아노기 치환된 C1-6 직쇄 알킬, 2-메틸알릴, 4,4,4-트리할로부틸, 시클로알킬 치환된 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 조성물.
  10. 제 9 항에 있어서, 상기 말단 탄소가 시아노기 치환된 C1-6 직쇄 알킬은 3-시아노프로필 또는 4-시아노부틸인 것을 특징으로 하는 조성물.
  11. 제 9 항에 있어서, 상기 4,4,4-트리할로부틸은 4,4,4-트리플루오로부틸인 것을 특징으로 하는 조성물.
  12. 제 9 항에 있어서, 상기 시클로알킬 치환된 C1-4 알킬은 시클로프로필메틸, 시클로부틸메틸 또는 시클로펜틸메틸인 것을 특징으로 하는 조성물.
  13. 제 8 항에 있어서, 상기 R1은 메틸인 것을 특징으로 하는 조성물.
  14. 제 5 항에 있어서, 상기 화합물은 4-(5-메틸-2-(2-메틸알릴)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(5-메틸-2-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)부탄니트릴, 5-(4-메틸-5-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-2H-1,2,3-트리아졸-2-일)펜탄니트릴, 4-(2-(시클로프로필메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(2-(시클로부틸메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 4-(2-(시클로펜틸메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 및 4-(2-(시클로헥실메틸)-5-메틸-2H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 조성물.

KR1020160047206A 2015-04-17 2016-04-18 트리아졸 화합물 및 이의 용도 Expired - Fee Related KR101859170B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020150054745 2015-04-17
KR20150054745 2015-04-17

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20160124034A true KR20160124034A (ko) 2016-10-26
KR101859170B1 KR101859170B1 (ko) 2018-05-17

Family

ID=57251650

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020160047206A Expired - Fee Related KR101859170B1 (ko) 2015-04-17 2016-04-18 트리아졸 화합물 및 이의 용도

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101859170B1 (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109535164A (zh) * 2017-09-21 2019-03-29 上海华汇拓医药科技有限公司 Jak激酶抑制剂及其制备方法和在医药领域的应用
KR20230040587A (ko) * 2021-09-16 2023-03-23 광주과학기술원 신규한 트리아졸릴피롤로피리미딘 유도체 및 이의 용도

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG10201506912RA (en) * 2005-12-13 2015-10-29 Incyte Corp Heteroaryl substituted pyrrolo[2,3-b]pyridines and pyrrolo[2,3-b]pyrimidines as janus kinase inhibitors

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109535164A (zh) * 2017-09-21 2019-03-29 上海华汇拓医药科技有限公司 Jak激酶抑制剂及其制备方法和在医药领域的应用
CN109535164B (zh) * 2017-09-21 2022-01-18 上海华汇拓医药科技有限公司 Jak激酶抑制剂及其制备方法和在医药领域的应用
KR20230040587A (ko) * 2021-09-16 2023-03-23 광주과학기술원 신규한 트리아졸릴피롤로피리미딘 유도체 및 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
KR101859170B1 (ko) 2018-05-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2616196C (en) A pyridin quinolin substituted pyrrolo [1,2-b] pyrazole monohydrate as tgf-beta inhibitor
EP3023101B1 (en) Therapeutic agent for fgfr inhibitor-resistant cancer
JP5583968B2 (ja) オキソ置換イミダゾ［１，２ｂ］ピリダジン、その調製方法、及び医薬としての使用
CN101952296B (zh) 吡咯并吡嗪激酶抑制剂
KR101792837B1 (ko) 키나아제 억제제로서 사용을 위한 이미다조피라진
KR102577241B1 (ko) 카이네이즈 저해제로서의 아미노-플루오로피페리딘 유도체
JP6084291B2 (ja) Ｆｇｆｒ阻害剤の間歇投与用抗腫瘍剤
EP3313844B1 (en) Heteroaryl substituted aminopyridine compounds
AU2018208231B2 (en) Imidazopyrazine compound, preparation method therefor and use thereof
CN101595110A (zh) 用于免疫抑制的7-取代嘌呤衍生物
KR20150036239A (ko) 바이러스 감염증의 치료를 위한 거대환식 푸린
FR3052452A1 (ko)
EP2331546B1 (fr) Derives de 2-alkyl-6-cycloamino-3-(pyridin-4-yl)imidazo[1,2-ib]-pyridazine, leur preparation et leur application en therapeutique
MX2011006441A (es) Compuesto de amino pirazol.
AU2017364720A1 (en) Novel oxoisoquinoline derivative
WO2013118817A1 (ja) キノリルピロロピリミジン化合物又はその塩
HUE029343T2 (en) Quinolylpyrrolo-pyrimidyl fused ring compounds and salts thereof
US9550796B2 (en) Pyrrolopyrrolone derivatives and their use as BET inhibitors
CA3181209A1 (en) Inhibitors of fibroblast growth factor receptor kinases
KR101859170B1 (ko) 트리아졸 화합물 및 이의 용도
CN101160312A (zh) 三环吡咯衍生物、它们的制备和作为药剂的应用
CA3130049C (en) 7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidine-4-amine derivative
EP2370446A1 (fr) DERIVES DE 6-CYCLOAMINO-3-(1H-PYRROLO[2,3-b]PYRIDIN-4-YL)IMIDAZO[1,2-b]-PYRIDAZINE, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE
TWI875911B (zh) Ｂｒｕｔｏｎ酪胺酸激酶（ＢＴＫ）抑制劑
CN110551103B (zh) 一种jak3选择性抑制剂

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
PA0109 Patent application

Patent event code: PA01091R01D

Comment text: Patent Application

Patent event date: 20160418

PA0201 Request for examination
PG1501 Laying open of application
E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20170808

Patent event code: PE09021S01D

E701 Decision to grant or registration of patent right
PE0701 Decision of registration

Patent event code: PE07011S01D

Comment text: Decision to Grant Registration

Patent event date: 20180508

PR0701 Registration of establishment

Comment text: Registration of Establishment

Patent event date: 20180511

Patent event code: PR07011E01D

PR1002 Payment of registration fee

Payment date: 20180514

End annual number: 3

Start annual number: 1

PG1601 Publication of registration
PR1001 Payment of annual fee

Payment date: 20210401

Start annual number: 4

End annual number: 4

PR1001 Payment of annual fee

Payment date: 20220512

Start annual number: 5

End annual number: 5

PR1001 Payment of annual fee

Payment date: 20230508

Start annual number: 6

End annual number: 6

PC1903 Unpaid annual fee

Termination category: Default of registration fee

Termination date: 20250222