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KR20150127030A - 접합체 화합물 - Google Patents

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KR20150127030A
KR20150127030A KR1020157018087A KR20157018087A KR20150127030A KR 20150127030 A KR20150127030 A KR 20150127030A KR 1020157018087 A KR1020157018087 A KR 1020157018087A KR 20157018087 A KR20157018087 A KR 20157018087A KR 20150127030 A KR20150127030 A KR 20150127030A
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벤쟈민 제이슨 캄튼
콜린 말콤 헤이먼
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데이빗 사무엘 라슨
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캘러헌 이노베이션 리서치 리미티드
콜린 말콤 헤이먼
프랑카 론체스
데이빗 사무엘 라슨
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레건 제임스 앤더슨
벤쟈민 제이슨 캄튼
이안 프란시스 헐먼스
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Abstract

본 발명은 질환, 예컨대, 감염, 아토피성 장애, 자가면역 질환 또는 암과 관련된 질환의 치료 또는 예방에 유용한 스핑고당지질(sphingoglycolipid) 유사체 및 이의 펩티드 유도체에 관한 것이다.

Description

접합체 화합물{CONJUGATE COMPOUNDS}
본 발명은 일반적으로 스핑고당지질(sphingoglycolipid) 유사체 및 이의 펩티드 유도체, 이 화합물들을 포함하는 조성물(약학 조성물 및 항원보강제 조성물을 포함함), 이 화합물들의 제조 방법, 이러한 화합물들을 사용하여 질환 또는 질병, 특히 암, 감염, 아토피성 장애, 자가면역 질환 또는 당뇨병과 관련된 질환 또는 질병을 치료하거나 예방하는 방법에 관한 것이다.
불변 천연 살해 T 세포(NKT)는 광범위한 질환들에 관여하는 T 세포의 하위세트이다. 일부 환경에서 이 세포들은 감염(Kinjo, Illarionov et al. 2011) 및 암(Wu, Lin et al. 2011)에 대한 반응을 향상시킬 수 있을 뿐만 아니라 자가면역 질환(Hong, Wilson et al. 2001) 및 II형 당뇨병을 억제하는 능력도 보유한다. NKT 세포의 활성화는 알레르기(Wingender, Rogers et al. 2011), 자가면역(Zeng, Liu et al. 2003) 및 죽상동맥경화증(Tupin, Nicoletti et al. 2004)과 관련된 바람직하지 않은 면역 반응을 유발할 수도 있다.
펩티드 항원을 제시하는 주조직적합성 복합체(MHC) 분자에 의해 제한되는 보편적인 T 세포와 달리, NKT 세포는 독특하게 CD1d 단백질에 의해 제한된다(Bendelac, Savage et al. 2007). CD1d 단백질은 5개의 구성원인 CD1a 내지 CD1e를 함유하는 CD1 패밀리에 속한다. MHC 분자처럼, CD1 패밀리의 모든 구성원들은 β-시트 위에 놓여 있는 2개의 역평행 α-나선들에 의해 플랭킹되어 있는 항원 결합 영역을 함유한다. MHC 분자와 달리, CD1 단백질의 결합 영역은 펩티드계 항원보다는 오히려 지질 항원에 결합하기에 적합한 2개의 큰 소수성 결합 포켓을 함유한다(Li, Girardi et al. 2010). α-갈락토실세라마이드(α-갈서(GalCer))는 가장 많이 연구된 NKT 세포 항원이고 인간 및 마우스 NKT 세포를 강력히 활성화시킨다(Kawano, Cui et al. 1997). 동물 연구에서, α-갈서는 암(Morita, Motoki et al. 1995; Motoki, Morita et al. 1995) 및 자가면역 질환(Hong, Wilson et al. 2001)을 비롯한 다수의 질환들의 치료에 유용한 것으로 보고되어 있다. 상기 화합물은 암 및 감염성 질환의 치료 및 예방에서 강력한 백신 항원보강제(adjuvant)로서도 작용하는 것으로 밝혀졌다(Silk, Hermans et al. 2004). 이 항원보강제 활성은 활성화된 NKT 세포와 수지상세포(DC)(체내에서 가장 강력한 항원 제시 세포) 사이의 자극 상호작용에 기인하였다. 결과적으로, DC는 강력한 적응 면역 반응을 촉진할 수 있게 된다(Fujii, Shimizu et al. 2003; Hermans, Silk et al. 2003).
암의 치료를 위한 치료 백신에 상당한 관심이 있다. 목적은 정상 조직을 온전한 상태로 남기면서 종양 세포를 인식하고 사멸시킬 수 있는 T 세포의 클론 증폭을 숙주 내에서 자극하는 것이다. 이 특이성은 종양 세포 표면 상에서 주조직적합성 복합체(MHC) 분자에 의해 제시된 독특한 종양 유래의 단백질 단편의 인식에 의존한다. 이와 관련하여 사용되는 백신은 전형적으로 면역 반응을 유도할 수 있는 면역 항원보강제와 함께 한정된 종양 관련 "종양 항원" 또는 이의 펩티드 단편을 주입하는 것을 수반한다. 이러한 항원보강제의 부재 하에서 반대 결과가 발생할 수 있고, 이때 종양 항원은 종양 거부를 유발하기보다는 오히려 면역 시스템에 의해 사실상 "용인된다". 따라서, 이 치료에서의 진보는 항원과 항원보강제의 적절한 조합에 의존한다(Speiser and Romero 2010).
α-갈서는 백신 내로 도입되었을 때 먼저 숙주에서 항원 제시 세포에 의해 획득된 후 국소 환경 내에서 NKT 세포에게 제시되어야 한다(Fujii, Shimizu et al. 2003; Hermans, Silk et al. 2003). 이 과정은 2종의 세포들을 가깝게 회합시킴으로써, 자극 신호가 NKT 세포로부터 항원 제시 세포로 전달되게 한다.
Figure pct00001
중요하게는, 동일한 항원 제시 세포가 백신의 한정된 항원을 획득하는 경우, NKT 세포와의 상호작용을 통해 제공받은 자극 신호는 사멸시키는 능력을 갖는 항원 특이적 T 세포의 클론 증식을 유발하는 보다 더 우수한 능력으로 직접적으로 전환될 수 있다(Hermans, Silk et al. 2003; Semmling, Lukacs-Kornek et al. 2010). 이를 달성하는 한 방법은 생체외에서 항원 제시 세포를 항원성 물질 및 NKT 세포 리간드로 적재하는 것이다(Petersen, Sika-Paotonu et al. 2010). 이것은 기대되는 방법이지만 임상에서 백혈구분리반출법을 요구하고 충분한 항원 제시 세포를 생성하기 위해 고도로 조절된 멸균 시설에서 7일에 걸쳐 말초 혈액 단핵세포(PBMC)를 생체외 배양하는 과정(복잡하고 값비싼 과정임)을 요구한다. 대안은 항원을 동일한 세포 내로의 도입을 보장하는 NKT 세포 리간드에 공유부착시킴으로써 생체내에서 항원 제시 세포를 표적화하는 것이다. TLR2 작용제와 MUC1 펩티드의 공유부착을 포함하는 다른 면역 항원보강제 화합물이 성공적으로 사용되었지만(Cai, Huang et al. 2011), 이 방법은 펩티드의 화학적 부착으로 인해 NKT 세포를 자극하는 능력이 상당히 감소되었거나 없는 접합체가 생성될 것이기 때문에 α-갈서에 용이하게 적용될 수 있는 것으로 간주되지 않았다. 특히, α-갈서의 특정 지질 모이어티(moiety)가 CD1d의 A 및 F 포켓 내로의 최적 결합을 위해 요구되고, 극성 헤드 기가 특히 활성을 위해 전체 당지질 구조를 엄격히 구속하는, NKT 세포의 T 세포 수용체와의 상호작용을 위해 적절하게 위치될 것이 요구된다(Borg, Wun et al. 2007).
α-갈서는 상당한 생물학적 활성을 갖지만, 약한 가용성(Ebensen, Link et al. 2007), 인간 임상시험에서의 효능의 결여(Giaccone, Punt et al. 2002), T 세포 무반응의 촉진(Parekh, Wilson et al. 2005) 및 모델 연구에서 혼합된 결과에 기여할 수 있는 Th1 사이토카인 및 Th2 사이토카인 둘다의 발생과 같은 한계를 갖는다.
본 발명의 목적은 암, 감염, 자가면역 질환, 아토피성 장애 또는 암과 관련된 질환 또는 장애를 치료하기 위한 약제로서 유용한 신규 화합물 및 백신을 제공하거나 적어도 유용한 대안을 제공하는 것이다.
제1 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
[화학식 I]
Figure pct00002
상기 식에서,
A는 자기-희생적 링커 기이고;
D는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되고:
Figure pct00003
[상기 기들에서,
*는 D 기와 A 기의 부착점을 표시하고;
R15는 하기 아미노산들 중 하나의 측쇄이고: L-라이신, L-시트룰린, L-아르기닌, L-글루타민 또는 L-쓰레오닌;
R16은 소수성 아미노산의 측쇄이고;
R19는 알킬렌 기이고;
R32는 알킬렌 기 또는 O-알킬렌 기이고, 이때 O는 D2의 카보닐 기에 부착된다.];
E는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되되, E는 D가 D1, D2 또는 D3일 때만 E18이고, E는 D가 D1, D2, D3 또는 D4일 때만 E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8, E9, E10, E11, E12, E13, E15, E20, E21, E93, E94 또는 E96이고, E는 D가 D5일 때만 E91, E92 또는 E95이고, E는 D가 D2일 때만 E97이고:
Figure pct00004
Figure pct00005
[상기 기들에서,
*는 E 기와 D 기의 부착점을 표시하고;
R20은 H 또는 저급 알킬이고;
R21은 알킬렌 기이고;
g는 R20이 H일 때 0이거나, g는 R20이 저급 알킬일 때 1이다.];
G는 부재하거나, G는 그의 N-말단을 통해 E 기에 부착되어 있고 그의 C-말단을 통해 J 기에 부착되어 있는, 6개 이하의 아미노산으로 구성된 아미노산 서열이고;
J는 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 항원에 대한 천연 플랭킹 잔기들로 구성된 군으로부터 선택된 6개 이하의 아미노산으로 임의적으로 치환되고, C-말단 아미드를 제공하도록 C-말단에서 NH2로 임의적으로 종결되고, 그의 N-말단을 통해 G 기에 부착되어 있거나, G가 부재하는 경우 그의 N-말단을 통해 E 기에 부착되어 있는 펩티드 항원이고;
R1은 H 또는 글리코실이되, R1이 글리코실인 경우 R2 및 R3은 둘다 OH이고 R4는 CH2OH이고;
R2는 H, OH, F 및 OR10으로 구성된 군으로부터 선택되되, R2가 H, F 또는 OR10인 경우 R1은 H이고 R3은 OH이고 R4는 CH2OH이고;
R3은 H, OH, F 및 OR10으로 구성된 군으로부터 선택되되, R3이 H, F 또는 OR10인 경우 R1은 H이고 R2는 OH이고 R4는 CH2OH이고;
R4는 CH3, CH2OH, CH2OCOR11, CH2OR10, CH2OR11, CH2OSO3H, CH2SH, CH2SR11, CH2SOR11, CH2SO2R11, CH2PO3H2, CH2OP(O)(OH)2, CH2OP(O)(OH)(OR11), CH2OP(O)(OR11)2, CO2H, CH2NHCOR11, CH2NHCO2R11, CH2NHCONH2, CH2NHCONHR11, CH2NHCON(R11)2, CH2N(R11)2 또는 CH2NHSO2R11이되, R4가 CH2OH 이외의 기인 경우 R1은 H이고 R2 및 R3은 OH이고;
R6은 OR12, OH 또는 H이고;
R7은 OR12, OH 또는 H이되, R6 및 R7 중 하나 이상은 OR12이고; R6이 OR12일 때, R7은 H이고, R8은 C1-C15 알킬이고, X는 O이고,
Figure pct00006
는 R7에 인접한 탄소를 R8에 인접한 탄소와 연결하는 임의적 이중 결합을 표시하고;
R8은 H, 또는 직선형 또는 분지형 탄소쇄를 갖는 C1-C15 알킬이고, 이때 탄소쇄는 하나 이상의 이중 결합, 하나 이상의 삼중 결합, 하나 이상의 산소 원자 및/또는 말단 또는 비-말단의 임의적으로 치환된 아릴 기를 임의적으로 포함하고;
R10은 글리코실이고;
R11은 저급 알킬, 저급 알케닐 또는 아르알킬이고;
R12는 아실 기의 위치 2 및/또는 3에서 하나 이상의 하이드록시 기로 임의적으로 치환된 직선형 또는 분지형 탄소쇄 및/또는 임의적으로 치환된 쇄 종결 아릴 기를 갖고 하나 이상의 이중 결합, 하나 이상의 삼중 결합 및/또는 하나 이상의 임의적으로 치환된 아릴렌 기를 임의적으로 포함하는 C6-C30 아실이고, 이때 탄소쇄는 하나 이상의 중수소 원자로 임의적으로 치환되고, 아릴 및 아릴렌 기 상의 임의적 치환기는 할로겐, 시아노, 디알킬아미노, C1-C6 아미드, 니트로, C1-C6 알콕시, C1-C6 아실옥시 및 C1-C6 티오알킬로부터 선택될 수 있고;
X는 O, CH2 또는 S이고;
n은 X가 O 또는 S일 때 1이거나, n은 X가 CH2일 때 0 또는 1이고;
이때, X가 CH2인 경우, 하기 사항이 모두 사실이어야 하고: 화학식 I에서 6원 당 고리의 입체화학은 α-D-갈락토이고; R1은 H이고; R2 및 R3은 둘다 OH이고; R4는 CH2OH, CH2OR10 또는 CH2OR11이고; R6은 OH이고 R7은 OR12이고 위치 2, 3 및 4의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S,4R), (2S,3S,4S), (2R,3S,4S), (2R,3S,4R) 또는 (2S,3R,4S)이거나; R6은 OR12이고 R7은 H이고 R8은 C13H27이고 위치 2 및 3의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S)이고;
X가 S인 경우, 하기 사항이 모두 사실이어야 한다: 화학식 I에서 6원 당 고리의 입체화학은 α-D-갈락토이고; R1은 H이고; R2 및 R3은 둘다 OH이고; R4는 CH2OH, CH2OR10, CH2OR11 또는 CO2H이고; R6은 OH이고 R7은 OR12이고 위치 2, 3 및 4의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S,4R)이거나; R6은 OR12이고 R7은 H이고 위치 2 및 3의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S)이다.
바람직하게는, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다:
[화학식 Ia]
Figure pct00007
상기 식에서,
X, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, R10, R11, R12, R15, R16, R19, R20, R21, R32, n, g, A, D, E, G 및 J는 모두 화학식 I에 대해 상기 정의된 바와 같다.
바람직하게는, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 Ib의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다:
[화학식 Ib]
Figure pct00008
상기 식에서,
A는 자기-희생적 링커 기이고;
D는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되고:
Figure pct00009
[상기 기들에서,
*는 D 기와 A 기의 부착점을 표시하고;
R15는 하기 아미노산들 중 하나의 측쇄이고: L-라이신, L-시트룰린, L-아르기닌, L-글루타민 또는 L-쓰레오닌;
R16은 소수성 아미노산의 측쇄이고;
R19는 알킬렌 기이다.];
E는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되되, E는 D가 D1, D2 또는 D3일 때만 E18이고, E는 D가 D1, D2, D3 또는 D4일 때만 E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8, E9, E10, E11, E12, E13, E15, E20, E21, E93, E94 또는 E96이고, E는 D가 D5일 때만 E91, E92 또는 E95이고:
Figure pct00010
Figure pct00011
[상기 기들에서,
*는 E 기와 D 기의 부착점을 표시하고;
R20은 H 또는 저급 알킬이고;
R21은 알킬렌 기이고;
g는 R20이 H일 때 0이거나, g는 R20이 저급 알킬일 때 1이다.];
G는 부재하거나, G는 그의 N-말단을 통해 E 기에 부착되어 있고 그의 C-말단을 통해 J 기에 부착되어 있는, 6개 이하의 아미노산으로 구성된 아미노산 서열이고;
J는 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 항원에 대한 천연 플랭킹 잔기들로 구성된 군으로부터 선택된 6개 이하의 아미노산으로 임의적으로 치환되고, C-말단 아미드를 제공하도록 C-말단에서 NH2로 임의적으로 종결되고, 그의 N-말단을 통해 G 기에 부착되어 있거나, G가 부재하는 경우 그의 N-말단을 통해 E 기에 부착되어 있는 펩티드 항원이고;
R1은 H 또는 글리코실이되, R1이 글리코실인 경우 R2 및 R3은 둘다 OH이고 R4는 CH2OH이고;
R2는 H, OH, F 및 OR10으로 구성된 군으로부터 선택되되, R2가 H, F 또는 OR10인 경우 R1은 H이고 R3은 OH이고 R4는 CH2OH이고;
R3은 H, OH, F 및 OR10으로 구성된 군으로부터 선택되되, R3이 H, F 또는 OR10인 경우 R1은 H이고 R2는 OH이고 R4는 CH2OH이고;
R4는 CH3, CH2OH, CH2OCOR11, CH2OR10, CH2OR11, CH2OSO3H, CH2SH, CH2SR11, CH2SOR11, CH2SO2R11, CH2PO3H2, CH2OP(O)(OH)2, CH2OP(O)(OH)(OR11), CH2OP(O)(OR11)2, CO2H, CH2NHCOR11, CH2NHCO2R11, CH2NHCONH2, CH2NHCONHR11, CH2NHCON(R11)2, CH2N(R11)2 또는 CH2NHSO2R11이되, R4가 CH2OH 이외의 기인 경우 R1은 H이고 R2 및 R3은 OH이고;
R6은 OR12, OH 또는 H이고;
R7은 OR12, OH 또는 H이되, R6 및 R7 중 하나 이상은 OR12이고; R6이 OR12일 때, R7은 H이고, R8은 C1-C15 알킬이고, X는 O이고,
Figure pct00012
는 R7에 인접한 탄소를 R8에 인접한 탄소와 연결하는 임의적 이중 결합을 표시하고;
R8은 H, 또는 직선형 또는 분지형 탄소쇄를 갖는 C1-C15 알킬이고, 이때 탄소쇄는 하나 이상의 이중 결합, 하나 이상의 삼중 결합, 하나 이상의 산소 원자 및/또는 말단 또는 비-말단의 임의적으로 치환된 아릴 기를 임의적으로 포함하고;
R10은 글리코실이고;
R11은 저급 알킬, 저급 알케닐 또는 아르알킬이고;
R12는 아실 기의 위치 2 및/또는 3에서 하나 이상의 하이드록시 기로 임의적으로 치환된 직선형 또는 분지형 탄소쇄 및/또는 임의적으로 치환된 쇄 종결 아릴 기를 갖고 하나 이상의 이중 결합, 하나 이상의 삼중 결합 및/또는 하나 이상의 임의적으로 치환된 아릴렌 기를 임의적으로 포함하는 C6-C30 아실이고, 이때 탄소쇄는 하나 이상의 중수소 원자로 임의적으로 치환되고, 아릴 및 아릴렌 기 상의 임의적 치환기는 할로겐, 시아노, 디알킬아미노, C1-C6 아미드, 니트로, C1-C6 알콕시, C1-C6 아실옥시 및 C1-C6 티오알킬로부터 선택될 수 있고;
X는 O, CH2 또는 S이고;
n은 X가 O 또는 S일 때 1이거나, n은 X가 CH2일 때 0 또는 1이고;
이때, X가 CH2인 경우, 하기 사항이 모두 사실이어야 하고: 화학식 I에서 6원 당 고리의 입체화학은 α-D-갈락토이고; R1은 H이고; R2 및 R3은 둘다 OH이고; R4는 CH2OH, CH2OR10 또는 CH2OR11이고; R6은 OH이고 R7은 OR12이고 위치 2, 3 및 4의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S,4R), (2S,3S,4S), (2R,3S,4S), (2R,3S,4R) 또는 (2S,3R,4S)이거나; R6은 OR12이고 R7은 H이고 R8은 C13H27이고 위치 2 및 3의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S)이고;
X가 S인 경우, 하기 사항이 모두 사실이어야 한다: 화학식 I에서 6원 당 고리의 입체화학은 α-D-갈락토이고; R1은 H이고; R2 및 R3은 둘다 OH이고; R4는 CH2OH, CH2OR10, CH2OR11 또는 CO2H이고; R6은 OH이고 R7은 OR12이고 위치 2, 3 및 4의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S,4R)이거나; R6은 OR12이고 R7은 H이고 위치 2 및 3의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S)이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 II의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
[화학식 II]
Figure pct00013
상기 식에서,
A, D, X, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, R10, R11, R12, R15, R16, R32 및 n은 모두 화학식 I에 대해 상기 정의된 바와 같고;
Z는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되되, Z는 D가 D1, D2, D3 또는 D4일 때만 Z1, Z2, Z3, Z4, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z13, Z15, Z16, Z17 또는 Z18이고, Z는 D가 D1, D2 또는 D3일 때만 Z12이고, Z는 D가 D5일 때만 Z5 또는 Z20이고, Z는 D가 D2일 때만 Z21, Z22 또는 Z23이다:
Figure pct00014
상기 기들에서,
*는 Z23에 대해 정의된 바를 제외하고 Z 기와 D 기의 부착점을 표시하고;
R20은 화학식 I에 대해 상기 정의된 바와 같고;
R23은 아릴, 아르알킬 또는 임의적으로 치환된 알킬이고;
R24는 저급 알킬이고;
R25는 p-C6H4L이고, 이때 L은 H, 메톡시, COOH, C(O)NHCH2COOH 또는 CH2CH2NMe2이고;
R26은 아르알킬이고;
R27은 H 또는 저급 알킬이고;
R28은 알킬렌이고;
R31은 (CH2CH2O)k이고;
k는 2 내지 100의 정수이고;
W는 임의적으로 치환된 사이클로옥티닐 고리이거나, W는 하나 이상의 아릴 기 또는 하나 이상의 사이클로알킬 기에 축합된 임의적으로 치환된 사이클로옥티닐 고리를 포함하는 축합된 이환형 또는 삼환형 고리 시스템이고, 이때 상기 사이클로옥티닐 고리는 고리 내에 N 원자를 임의적으로 함유하고, 이 N 원자는 아실 기로 임의적으로 치환되고, 상기 사이클로옥티닐 고리는 할로겐, 하이드록실, 알콕시 및 아르알킬로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의적으로 치환되고, 이때 이 기의 아릴 부분은 카복실산으로 임의적으로 치환되고, * 또는 임의적 치환기들 중 하나는 Z23과 D 기의 부착점을 포함한다.
바람직하게는, 화학식 II의 화합물은 하기 화학식 IIa의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다:
[화학식 IIa]
Figure pct00015
상기 식에서,
A, D, X, Z, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, R10, R11, R12, R15, R16, R19, R20, R21, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R31, W, k 및 n은 모두 화학식 II에 대해 상기 정의된 바와 같다.
바람직하게는, 화학식 II의 화합물은 하기 화학식 IIb의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다:
[화학식 IIb]
Figure pct00016
상기 식에서,
A, D, X, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, R10, R11, R12, R15, R16, R19 및 n은 모두 화학식 Ib에 대해 상기 정의된 바와 같고;
Z는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되되, Z는 D가 D1, D2, D3 또는 D4일 때만 Z1, Z2, Z3, Z4, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z13, Z15 또는 Z16이고, Z는 D가 D1, D2 또는 D3일 때만 Z12이고, Z는 D가 D5일 때만 Z5이다:
Figure pct00017
Figure pct00018
상기 기들에서,
*는 Z 기와 D 기의 부착점을 표시하고;
R20은 화학식 I에 대해 상기 정의된 바와 같고;
R23은 아릴, 아르알킬 또는 임의적으로 치환된 알킬이고;
R24는 저급 알킬이고;
R25는 p-C6H4L이고, 이때 L은 H, 메톡시, COOH, C(O)NHCH2COOH 또는 CH2CH2NMe2이다.
바람직하게는, A는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되되, A는 D가 D1일 때만 A1이고, A는 D가 D2, D3 또는 D5일 때만 A2이고, A는 D가 D1, D3 또는 D4일 때만 A3이고, A는 D가 D2, D3 또는 D5일 때만 A4이고, A는 D가 D1, D3 또는 D4일 때만 A5이다:
Figure pct00019
상기 기들에서,
*는 A 기와 D 기의 부착점을 표시하고;
동일한 또는 상이한 각각의 Q1은 H, 알킬, 알콕시, 할로겐, 니트로 및 아릴로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 그 자신이 부착되어 있는 고리와 함께 축합된 이환형 아릴 기를 형성하고;
p는 1 내지 4의 정수이고;
Alk1은 C1-C4 직쇄 알킬이고;
R29는 H 또는 저급 알킬이다.
보다 바람직하게는, A는 A1 또는 A2이다. 훨씬 더 바람직하게는, A는 A1이고, 이때 R29는 H이거나; A는 A2이고, 이때 Q1은 H이다.
바람직하게는, A2 또는 A3에서 Q1은 H이다. 보다 바람직하게는, A2 또는 A3에서 Q1은 H이고 p는 4이다. 대안적으로 바람직하게는, A2 또는 A3에서 Q1은 Me 또는 OMe이고 p는 2이고, 이때 Me 또는 OMe 기는 방향족 고리 상의 헤테로원자에 대해 오르토 위치에 위치한다.
바람직하게는, D는 D1이다.
대안적으로 바람직하게는, D는 D2이다.
대안적으로 바람직하게는, D는 D3이다.
대안적으로 바람직하게는, D는 D4이다.
대안적으로 바람직하게는, D는 D5이다.
바람직하게는, R15는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택된다:
Figure pct00020
보다 바람직하게는, R15는
Figure pct00021
및
Figure pct00022
로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, R16은 하기 아미노산들 중 하나의 측쇄이다: L-페닐알라닌, L-발린, L-류신, L-이소류신, L-노르류신, L-메티오닌, L-트립토판 또는 L-티로신. 즉, 바람직하게는 R16은 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택된다:
Figure pct00023
보다 바람직하게는, R16은
Figure pct00024
및
Figure pct00025
로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, E는 E1 내지 E8, E93 및 E94 중 어느 하나이다. 보다 바람직하게는, E는 E1 내지 E4, E93 및 E94 중 어느 하나이다.
바람직하게는, E는 E3이고, 이때 R20은 H이다. 대안적으로 바람직하게는, E는 E4이고, 이때 R20은 메틸이다.
대안적으로 바람직하게는, E는 E7이고, 이때 R20은 H이다.
대안적으로 바람직하게는, E는 E97이다.
바람직하게는, E는 D가 D2일 때 E97이고, 이때 R32는 O-알킬렌, 바람직하게는 OCH2이다.
가장 바람직하게는, E는 하기 기들 중 하나이다:
Figure pct00026
상기 기들에서,
*는 E 기와 D 기의 부착점을 표시한다.
바람직하게는, Z는 Z23, Z22, Z21, Z20, Z19, Z18, Z4, Z3 또는 Z1이다. 가장 바람직하게는, Z는 Z4이다.
바람직하게는, W는 사이클로알킬 고리, 바람직하게는 사이클로프로필 고리에 축합된 사이클로옥티닐 고리이다.
바람직하게는, Z23은
Figure pct00027
이다.
바람직하게는, k는 10 내지 32의 정수이다. 보다 바람직하게는, k는 19 내지 32의 정수이다. 보다 바람직하게는, k는 10이다.
바람직하게는, G는 하기 화학식의 기이다:
Figure pct00028
상기 식에서,
*는 G 기와 E 기의 부착점을 표시한다.
대안적으로 바람직하게는, G는 부재한다.
바람직하게는, J는 MHC 분자에 결합하고 T 세포 반응을 유도하는 하나 이상의 에피토프를 그의 서열 내에 함유하는 펩티드이다.
보다 바람직하게는, J는 하기 펩티드들로 구성된 군으로부터 선택된다: AMLGTHTMEV(서열 번호 1), MLGTHTMEV(서열 번호 2), EAAGIGILTV(서열 번호 3), AAGIGILTV(서열 번호 4), AADHRQLQLSISSCLQQL(서열 번호 5), AAGIGILTVILGVL(서열 번호 6), AARAVFLAL(서열 번호 7), ACDPHSGHFV(서열 번호 8), ACYEFLWGPRALVETS(서열 번호 9), ADHRQLQLSISSCLQQL(서열 번호 10), AEEAAGIGILT(서열 번호 11), AEEAAGIGIL(서열 번호 12), AELVHFLLL(서열 번호 13), AELVHFLLLKYRAR(서열 번호 14), AEPINIQTW(서열 번호 15), AFLPWHRLF(서열 번호 16), AGATGGRGPRGAGA(서열 번호 17), ALCRWGLLL(서열 번호 18), ALDVYNGLL(서열 번호 19), ALFDIESKV(서열 번호 20), ALGGHPLLGV(서열 번호 21), ALIHHNTHL(서열 번호 22), ALKDVEERV(서열 번호 23), ALLAVGATK(서열 번호 24), ALLEIASCL(서열 번호 25), ALNFPGSQK(서열 번호 26), ALPYWNFATG(서열 번호 27), ALSVMGVYV(서열 번호 28), ALWPWLLMAT(서열 번호 29), ALWPWLLMA(서열 번호 30), ALYVDSLFFL(서열 번호 31), ANDPIFVVL(서열 번호 32), APPAYEKLSAEQ(서열 번호 33), APRGPHGGAASGL(서열 번호 34), APRGVRMAV(서열 번호 35), ARGPESRLL(서열 번호 36), ASGPGGGAPR(서열 번호 37), ATGFKQSSKALQRPVAS(서열 번호 38), AVCPWTWLR(서열 번호 39), AWISKPPGV(서열 번호 40), AYVCGIQNSVSANRS(서열 번호 41), CATWKVICKSCISQTPG(서열 번호 42), 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FMVEDETVL(서열 번호 85), FPSDSWCYF(서열 번호 86), FRSGLDSYV(서열 번호 87), FSWAMDLDPKGA(서열 번호 88), GARGPESRLLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQDAPPL(서열 번호 89), GDNQIMPKAGLLIIV(서열 번호 90), GELIGILNAAKVPAD(서열 번호 91), GFKQSSKAL(서열 번호 92), GLASFKSFLK(서열 번호 93), GLCTLVAML(서열 번호 94), GLPPDVQRV(서열 번호 95), GLYDGMEHLI(서열 번호 96), GRAMLGTHTMEVTVY(서열 번호 97), GVALQTMKQ(서열 번호 98), GVGSPYVSRLLGICL(서열 번호 99), AKFVAAWTLKAAA(서열 번호 100), GVLLKEFTVSGNILTIRLT(서열 번호 101), GVLVGVALI(서열 번호 102), GVYDGREHTV(서열 번호 103), HLFGYSWYK(서열 번호 104), HLIRVEGNLRVE(서열 번호 105), HLSTAFARV(서열 번호 106), HLYQGCQVV(서열 번호 107), HQQYFYKIPILVINK(서열 번호 108), HTMEVTVYHR(서열 번호 109), IALNFPGSQK(서열 번호 110), IGRIAECILGMNPSR(서열 번호 111), IISAVVGIL(서열 번호 112), ILAKFLHWL(서열 번호 113), ILDSSEEDK(서열 번호 114), ILDTAGREEY(서열 번호 115), ILHNGAYSL(서열 번호 116), ILSRDAAPLPRPG(서열 번호 117), ILTVILGVL(서열 번호 118), IMDQVPFFS(서열 번호 119), IMDQVPFSV(서열 번호 120), IMIGVLVGV(서열 번호 121), INKTSGPKRGKHAWTHRLRE(서열 번호 122), ISGGPRISY(서열 번호 123), ISPNSVFSQWRVVCDSLEDYD(서열 번호 124), ISQAVHAAHAEINEAGR(서열 번호 125), ITDQVPFSV(서열 번호 126), ITKKVADLVGF(서열 번호 127), KASEKIFYV(서열 번호 128), KAVYNFATM(서열 번호 129), KCDICTDEY(서열 번호 130), KEFTVSGNILT(서열 번호 131), KEFTVSGNILTI(서열 번호 132), KELEGILLL(서열 번호 133), KHAWTHRLRERKQLVVYEEI(서열 번호 134), KIFGSLAFL(서열 번호 135), KIFSEVTLK(서열 번호 136), KIFYVYMKRKYEAM(서열 번호 137), KIFYVYMKRKYEAMT(서열 번호 138), KILDAVVAQK(서열 번호 139), KINKNPKYK(서열 번호 140), KISQAVHAAHAEINEAGRESIINFEKLTEWT(서열 번호 141), KKLLTQHFVQENYLEY(서열 번호 142), KMDAEHPEL(서열 번호 143), KNCEPVVPNAPPAYEKLSAE(서열 번호 144), KRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호 145), KSSEKIVYVYMKLNYEVMTK(서열 번호 146), KTWGQYWQV(서열 번호 147), KVAELVHFL(서열 번호 148), KVHPVIWSL(서열 번호 149), KVLEYVIKV(서열 번호 150), KYDCFLHPF(서열 번호 151), KYVGIEREM(서열 번호 152), LAALPHSCL(서열 번호 153), LAAQERRVPR(서열 번호 154), LAGIGILTV(서열 번호 155), LAMPFATPM(서열 번호 156), LGFKVTLPPFMRSKRAADFH(서열 번호 157), LGPGRPYR(서열 번호 158), LHHAFVDSIF(서열 번호 159), LIYRRRLMK(서열 번호 160), LKEFTVSGNILTIRL(서열 번호 161), LKLSGVVRL(서열 번호 162), LLANGRMPTVLQCVN(서열 번호 163), LLDGTATLRL(서열 번호 164), LLEFYLAMPFATPM(서열 번호 165), LLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQ(서열 번호 166), LLFGLALIEV(서열 번호 167), LLGATCMFV(서열 번호 168), LLGPGRPYR(서열 번호 169), LLGRNSFEV(서열 번호 170), LLKYRAREPVTKAE(서열 번호 171), LLLDDLLVSI(서열 번호 172), LLLLTVLTV(서열 번호 173), LLWSFQTSA(서열 번호 174), LLYKLADLI(서열 번호 175), LMLQNALTTM(서열 번호 176), LPAVVGLSPGEQEY(서열 번호 177), LPHSSSHWL(서열 번호 178), LPRWPPPQL(서열 번호 179), LPSSADVEF(서열 번호 180), LSHLQMHSRKH(서열 번호 181), LSRLSNRLL(서열 번호 182), LTDLQPYMRQFVAHL(서열 번호 183), LWWVNNQSLPVSP(서열 번호 184), LYATVIHDI(서열 번호 185), LYSACFWWL(서열 번호 186), LYVDSLFFL(서열 번호 187), MEVDPIGHLY(서열 번호 188), MIAVFLPIV(서열 번호 189), MIFEKHGFRRTTPP(서열 번호 190), MKLNYEVMTKLGFKVTLPPF(서열 번호 191), MLAVISCAV(서열 번호 192), MLLAVLYCL(서열 번호 193), MLMAQEALAFL(서열 번호 194), MPFATPMEA(서열 번호 195), MPREDAHFIYGYPKKGHGHS(서열 번호 196), MSLQRQFLR(서열 번호 197), MVKISGGPR(서열 번호 198), NLVPMVATV(서열 번호 199), NPPSMVAAGSVVAAV(서열 번호 200), NSIVKSITVSASG(서열 번호 201), NSNHVASGAGEAAIETQSSSSEEIV(서열 번호 202), NSQPVWLCL(서열 번호 203), NTYASPRFK(서열 번호 204), NYARTEDFF(서열 번호 205), NYKRCFPVI(서열 번호 206), NYNNFYRFL(서열 번호 207), PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA(서열 번호 208), PFATPMEAELARR(서열 번호 209), PGSTAPPAHGVT(서열 번호 210), PGTRVRAMAIYKQ(서열 번호 211), PGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR(서열 번호 212), PLLENVISK(서열 번호 213), PLPPARNGGL(서열 번호 214), PLQPEQLQV(서열 번호 215), PLTSIISAV(서열 번호 216), PRALAETSYVKVLEY(서열 번호 217), PVTWRRAPA(서열 번호 218), PYYFAAELPPRNLPEP(서열 번호 219), QCSGNFMGF(서열 번호 220), QCTEVRADTRPWSGP(서열 번호 221), QGAMLAAQERRVPRAAEVPR(서열 번호 222), QGQHFLQKV(서열 번호 223), QLAVSVILRV(서열 번호 224), QNILLSNAPLGPQFP(서열 번호 225), QQITKTEV(서열 번호 226), QRPYGYDQIM(서열 번호 227), QYSWFVNGTF(서열 번호 228), RAGLQVRKNK(서열 번호 229), REPFTKAEMLGSVIR(서열 번호 230), REPVTKAEML(서열 번호 231), RIAECILGM(서열 번호 232), RKVAELVHFLLLKYR(서열 번호 233), RKVAELVHFLLLKYRA(서열 번호 234), RLLEFYLAMPFA(서열 번호 235), RLLQETELV(서열 번호 236), RLMKQDFSV(서열 번호 237), RLPRIFCSC(서열 번호 238), RLSSCVPVA(서열 번호 239), RLVDDFLLV(서열 번호 240), RMPEAAPPV(서열 번호 241), RMPTVLQCVNVSVVS(서열 번호 242), RNGYRALMDKS(서열 번호 243), RNGYRALMDKSLHVGTQCALTRR(서열 번호 244), RPGLLGASVLGLDDI(서열 번호 245), RPHVPESAF(서열 번호 246), RQKRILVNL(서열 번호 247), RSDSGQQARY(서열 번호 248), RTKQLYPEW(서열 번호 249), RVIKNSIRLTL(서열 번호 250), RVRFFFPSL(서열 번호 251), RYQLDPKFI(서열 번호 252), SAFPTTINF(서열 번호 253), SAWISKPPGV(서열 번호 254), SAYGEPRKL(서열 번호 255), SEIWRDIDF(서열 번호 256), SELFRSGLDSY(서열 번호 257), SESIKKKVL(서열 번호 258), SESLKMIF(서열 번호 259), SFSYTLLSL(서열 번호 260), SHETVIIEL(서열 번호 261), SIINFEKL(서열 번호 262), SLADTNSLAV(서열 번호 263), SLFEGIDIYT(서열 번호 264), SLFPNSPKWTSK(서열 번호 265), SLFRAVITK(서열 번호 266), SLGWLFLLL(서열 번호 267), SLLMWITQC(서열 번호 268), SLLMWITQCFLPVF(서열 번호 269), SLLQHLIGL(서열 번호 270), SLPYWNFATG(서열 번호 271), SLSKILDTV(서열 번호 272), SLYKFSPFPL(서열 번호 273), SLYSFPEPEA(서열 번호 274), SNDGPTLI(서열 번호 275), SPRWWPTCL(서열 번호 276), SPSSNRIRNT(서열 번호 277), SQKTYQGSY(서열 번호 278), SRFGGAVVR(서열 번호 279), SSALLSIFQSSPE(서열 번호 280), SSDYVIPIGTY(서열 번호 281), SSKALQRPV(서열 번호 282), SSPGCQPPA(서열 번호 283), STAPPVHNV(서열 번호 284), SVASTITGV(서열 번호 285), SVDYFFVWL(서열 번호 286), SVSESDTIRSISIAS(서열 번호 287), SVYDFFVWL(서열 번호 288), SYLDSGIHF(서열 번호 289), SYLQDSDPDSFQD(서열 번호 290), TFPDLESEF(서열 번호 291), TGRAMLGTHTMEVTVYH(서열 번호 292), TLDSQVMSL(서열 번호 293), TLDWLLQTPK(서열 번호 294), TLEEITGYL(서열 번호 295), TLMSAMTNL(서열 번호 296), TLNDECWPA(서열 번호 297), TLPGYPPHV(서열 번호 298), TLYQDDTLTLQAAG(서열 번호 299), TMKQICKKEIRRLHQY(서열 번호 300), TMNGSKSPV(서열 번호 301), TPRLPSSADVEF(서열 번호 302), TSCILESLFRAVITK(서열 번호 303), TSEKRPFMCAY(서열 번호 304), TSYVKVLHHMVKISG(서열 번호 305), TTEWVETTARELPIPEPE(서열 번호 306), TVSGNILTIR(서열 번호 307), TYACFVSNL(서열 번호 308), TYLPTNASL(서열 번호 309), TYYRPGVNLSLSC(서열 번호 310), VAELVHFLL(서열 번호 311), VFGIELMEVDPIGHL(서열 번호 312), VGQDVSVLFRVTGALQ(서열 번호 313), VIFSKASSSLQL(서열 번호 314), VISNDVCAQV(서열 번호 315), VLDGLDVLL(서열 번호 316), VLFYLGQY(서열 번호 317), VLHWDPETV(서열 번호 318), VLLKEFTVSG(서열 번호 319), VLLQAGSLHA(서열 번호 320), VLPDVFIRCV(서열 번호 321), VLPDVFIRC(서열 번호 322), VLRENTSPK(서열 번호 323), VLYRYGSFSV(서열 번호 324), VPGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR(서열 번호 325), VPLDCVLYRY(서열 번호 326), VRIGHLYIL(서열 번호 327), VSSFFSYTL(서열 번호 328), VVLGVVFGI(서열 번호 329), VVPCEPPEV(서열 번호 330), VVVGAVGVG(서열 번호 331), VYFFLPDHL(서열 번호 332), WEKMKASEKIFYVYMKRK(서열 번호 333), WLPFGFILI(서열 번호 334), WNRQLYPEWTEAQRLD(서열 번호 335), WQYFFPVIF(서열 번호 336), WRRAPAPGA(서열 번호 337), YACFVSNLATGRNNS(서열 번호 338), YFSKKEWEKMKSSEKIVYVY(서열 번호 339), YLEPGPVTA(서열 번호 340), YLEPGPVTV(서열 번호 341), YLNDHLEPWI(서열 번호 342), YLQLVFGIEV(서열 번호 343), YLSGANLNL(서열 번호 344), YLVPQQGFFC(서열 번호 345), YMDGTMSQV(서열 번호 346), YMIMVKCWMI(서열 번호 347), YRPRPRRY(서열 번호 348), YSVYFNLPADTIYTN(서열 번호 349), YSWRINGIPQQHTQV(서열 번호 350), YVDFREYEYY(서열 번호 351), YYWPRPRRY(서열 번호 352), IMDQVPFFS(서열 번호 353), SVDYFFVWL(서열 번호 354), ALFDIESKV(서열 번호 355), NLVPMVATV(서열 번호 356), GLCTLVAML(서열 번호 357), SVASTITGV(서열 번호 358), VMAGDIYSV(서열 번호 359), ALADGVQKV(서열 번호 360), LLGATCMFV(서열 번호 361), SVFAGVVGV(서열 번호 362), ALFDGDPHL(서열 번호 363), YVDPVITSI(서열 번호 364), STAPPVHNV(서열 번호 365), LAALPHSCL(서열 번호 366), SQDDIKGIQKLYGKRS(서열 번호 367), FLPSDFFPSV(서열 번호 368), FLPSDFFPSV(서열 번호 369), TLGEFLKLDRERAKN(서열 번호 370), TFSYVDPVITSISPKYGMET(서열 번호 371), AMTQLLAGV(서열 번호 372), KVFAGIPTV(서열 번호 373), AIIDGVESV(서열 번호 374), GLWHHQTEV(서열 번호 375), NLDTLMTYV(서열 번호 376), KIQEILTQV(서열 번호 377), LTFGDVVAV(서열 번호 378), TMLARLASA(서열 번호 379), IMDQVPFSV(서열 번호 380), MHQKRTAMFQDPQERPRKLPQLCTELQTTIHD(서열 번호 381), LPQLCTELQTTI(서열 번호 382), HDIILECVYCKQQLLRREVY(서열 번호 383), KQQLLRREVYDFAFRDLCIVYRDGN(서열 번호 384), RDLCIVYRDGNPYAVCDKCLKFYSKI(서열 번호 385), DKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTL(서열 번호 386), HYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLLIR(서열 번호 387), YGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINCQKPLCPEEK(서열 번호 388), RCINCQKPLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWT(서열 번호 389), DKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQL(서열 번호 390), MHGDTPTLHEYMLDLQPETTDLYCYEQLNDSSEEE(서열 번호 391), LYCYEQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVT(서열 번호 392), GQAEPDRAHYNIVTFCCKCDSTLRLCVQSTHVDIR(서열 번호 393), TLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP(서열 번호 394), ALPFGFILV(서열 번호 395), TLADFDPRV(서열 번호 396), IMDQVPFSV(서열 번호 397), SIMTYDFHGA(서열 번호 398), AQYIKANSKFIGITEL(서열 번호 399), FLYDDNQRV(서열 번호 400), YLIELIDRV(서열 번호 401), NLMEQPIKV(서열 번호 402), FLAEDALNTV(서열 번호 403), ALMEQQHYV(서열 번호 404), ILDDIGHGV(서열 번호 405), KLDVGNAEV(서열 번호 406), TFEFTSFFY(서열 번호 407), SWPDGAELPF(서열 번호 408), GILGFVFTL(서열 번호 409), ILRGSVAHK(서열 번호 410), SVYDFFVWLKFFHRTCKCTGNFA(서열 번호 411), DLAQMFFCFKELEGW(서열 번호 412), AVGALEGPRNQDWLGVPRQL(서열 번호 413) 및 RAHYNIVTF(서열 번호 414).
훨씬 더 바람직하게는, J는 하기 펩티드들로 구성된 군으로부터 선택된다: IMDQVPFSV, YLEPGPVTV, LAGIGILTV, YMDGTMSQV, SIINFEKL, ISQAVHAAHAEINEAGR, KISQAVHAAHAEINEAGRESIINFEKLTEWT, KAVYNFATM, MLMAQEALAFL, SLLMWITQC, GARGPESRLLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQDAPPL, VPGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR, ESRLLEFYLAMPF, SLLMWITQCFLPVF, ILHNGAYSL, GVGSPYVSRLLGICL, AKFVAAWTLKAAA, IMDQVPFFS, SVDYFFVWL, ALFDIESKV, NLVPMVATV 및 GLCTLVAML.
대안적으로 보다 바람직하게는, J는 하기 펩티드들로 구성된 군으로부터 선택된다: SVASTITGV, VMAGDIYSV, ALADGVQKV, LLGATCMFV, SVFAGVVGV, ALFDGDPHL, YVDPVITSI, STAPPVHNV, LAALPHSCL, SQDDIKGIQKLYGKRS, FLPSDFFPSV, FLPSDFFPSV, TLGEFLKLDRERAKN, TFSYVDPVITSISPKYGMET, AMTQLLAGV, KVFAGIPTV, AIIDGVESV, GLWHHQTEV, NLDTLMTYV, KIQEILTQV, LTFGDVVAV, TMLARLASA, IMDQVPFSV, MHQKRTAMFQDPQERPRKLPQLCTELQTTIHD, LPQLCTELQTTI, HDIILECVYCKQQLLRREVY, KQQLLRREVYDFAFRDLCIVYRDGN, RDLCIVYRDGNPYAVCDKCLKFYSKI, DKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTL, HYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLLIR, YGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINCQKPLCPEEK, RCINCQKPLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWT, DKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQL, MHGDTPTLHEYMLDLQPETTDLYCYEQLNDSSEEE, LYCYEQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVT, GQAEPDRAHYNIVTFCCKCDSTLRLCVQSTHVDIR, TLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP, ALPFGFILV, TLADFDPRV, IMDQVPFSV, SIMTYDFHGA, FLYDDNQRV, YLIELIDRV, NLMEQPIKV, FLAEDALNTV, ALMEQQHYV, ILDDIGHGV 및 KLDVGNAEV.
바람직하게는, Z는 Z1 내지 Z5 중 어느 하나이다. 훨씬 더 바람직하게는, Z는 Z1이다. 훨씬 더 바람직하게는, Z는 Z1이고, 이때 R20은 메틸이다.
바람직하게는, 화학식 I 또는 화학식 II의 6원 당 고리의 입체화학은 α-D-갈락토이다.
바람직하게는, X는 O이다.
바람직하게는, R23은 2-설포에틸이다.
바람직하게는, R12는 C26 아실이다. 대안적으로 바람직하게는, R12는 C11 아실이다.
바람직하게는, R8은 C10-C14 알킬, 가장 바람직하게는 C13 알킬이다.
바람직하게는, 화학식 I 또는 화학식 II에서 n은 1이고, 화학식 I 또는 화학식 II의 6원 당 고리의 입체화학은 α-D-갈락토이고, R6은 OH이고, R7은 OR12이다. 화학식 I 또는 화학식 II에서 n은 1이고, 화학식 I 또는 화학식 II의 6원 당 고리의 입체화학은 α-D-갈락토이고, R6은 OH이고, R7은 OR12이고, 위치 2, 3 및 4의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S,4R)인 것도 바람직하다.
대안적으로 바람직하게는, 화학식 I 또는 화학식 II에서 n은 0이고, X는 CH2이고, 화학식 I 또는 화학식 II의 6원 당 고리의 입체화학은 α-D-갈락토이고, R6은 OH이고, R7은 OR12이다. 화학식 I 또는 화학식 II에서 n은 0이고, 화학식 I 또는 화학식 II의 6원 당 고리의 입체화학은 α-D-갈락토이고, R6은 OH이고, R7은 OR12이고, 위치 2, 3 및 4의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S,4R)인 것도 바람직하다.
바람직하게는, 화학식 I 또는 화학식 II에서 X가 O이고, R6이 OR12이고, R7이 H이고, R8이 C1-C15 알킬이고,
Figure pct00029
가 R7에 인접한 탄소를 R8에 인접한 탄소와 연결하는 이중 결합일 때, 위치 2 및 3의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S)이다.
바람직하게는, R1은 H이다.
R2가 OH인 것도 바람직하다. 보다 바람직하게는, R1은 H이고 R2는 OH이다.
바람직하게는, R3은 OH이다.
바람직하게는, R4는 CH2OH이다. R4가 CH2OH이고 R1이 H인 것도 바람직하다. R4가 CH2OH이고 R2가 OH이고 R1이 H인 것도 바람직하다. 보다 바람직하게는, R4는 CH2OH이고 R1은 H이고 R2 및 R3은 둘다 OH이다.
바람직하게는, R6은 OH이다. 대안적으로, R6이 OR12인 것이 바람직하다.
바람직하게는, R7은 OR12이다. 보다 바람직하게는, R7은 OR12이고 R6은 OH이다. 훨씬 더 바람직하게는, R7은 OR12이고 R6은 OH이고 X는 O이다.
대안적으로, R7이 OH인 것이 바람직하다. 보다 바람직하게는, R6은 OR12이고 R7은 OH이다.
대안적으로, R6 및 R7이 둘다 OR12인 것이 바람직하다.
대안적으로, R7이 H이고 R6이 OR12인 것이 바람직하다.
바람직하게는, R8은 C1-C15 알킬이다. 보다 바람직하게는, R8은 이중 결합, 삼중 결합, 산소 원자 또는 아릴 기를 함유하지 않는 직선형 또는 분지형 탄소쇄를 갖는 C1-C15 알킬이다. 바람직하게는, R8은 C13 알킬이다. 훨씬 더 바람직하게는, R8은 이중 결합, 삼중 결합, 산소 원자 또는 아릴 기를 함유하지 않는 직선형 탄소쇄를 갖는 C13 알킬이다. 대안적으로 바람직하게는, R8은 C5 알킬이다. 보다 바람직하게는, R8은 이중 결합, 삼중 결합, 산소 원자 또는 아릴 기를 함유하지 않는 직선형 탄소쇄를 갖는 C5 알킬이다. 훨씬 더 바람직하게는, R8은 C1-C15 알킬이고, R7은 OR12이고, R6은 OH이다. 훨씬 더 바람직하게는, R8은 C1-C15 알킬이고, R7은 OR12이고, R6은 OH이고, X는 O이다.
바람직하게는, R11은 알킬, 보다 바람직하게는 저급 알킬이다.
바람직하게는, R12는 6개 내지 30개 탄소 원자 길이의 직선형 탄소쇄를 갖는 아실이다. 보다 바람직하게는, R12는 C26 아실이다. 보다 바람직하게는, R12는 이중 결합, 삼중 결합, 산소 원자 또는 아릴 기를 함유하지 않는 직선형 탄소쇄를 갖는 비치환된 C26 아실이다. 보다 바람직하게는, X는 O이고, R12는 6개 내지 30개 탄소 원자 길이의 직선형 탄소쇄를 갖는 아실이다.
대안적으로 바람직하게는, R12는 6개 내지 30개 탄소 원자 길이의 직선형 탄소쇄를 갖고 임의적으로 치환된 쇄 종결 아릴 기를 갖는 아실이다. 보다 바람직하게는, R12는 임의적으로 치환된 쇄 종결 아릴 기를 갖는 C11 아실이다. 훨씬 더 바람직하게는, 임의적으로 치환된 아릴 기는 할로겐, 예를 들면, 불소로 임의적으로 치환된 페닐이고, 예를 들면, 임의적으로 치환된 아릴 기는 p-플루오로페닐이다. 보다 바람직하게는, X는 O이고, R12는 6개 내지 30개 탄소 원자 길이의 직선형 탄소쇄를 갖고 임의적으로 치환된 쇄 종결 아릴 기를 갖는 아실이다.
바람직하게는, R26은 벤질이다.
바람직하게는, 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물에서 임의의 할로겐은 불소이다.
바람직하게는, 화학식 I의 화합물은 하기 화합물들로 구성된 군으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
바람직하게는, 화학식 II의 화합물은 하기 화합물들로 구성된 군으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
또 다른 양태에서, 본 발명은 약학적 유효량의 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물 및 임의적으로 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 희석제, 및 임의적으로 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 희석제, 및 임의적으로 항원을 포함하는 백신을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 백신의 제조에서 사용되기 위한 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물 및 임의적으로 항원을 제공한다.
항원은 세균, 예컨대, 바실러스 칼메트-게랭(Bacillus Calmette -Guerin)(BCG), 바이러스, 단백질 또는 펩티드일 수 있거나 이들의 조합물일 수 있다. 적합한 항원의 예로는 빌름스 종양 1(WT1)(Li, Oka et al. 2008), 종양 관련 항원 MUC1(Brossart, Heinrich et al. 1999), 잠복 막 단백질 2(LMP2)(Lu, Liang et al. 2006), HPV E6E7(Davidson, Faulkner et al. 2004), NY-ESO-1(Karbach, Gnjatic et al. 2010), 티로시나제(tyrosinase) 관련 단백질(Trp)-2(Noppen, Levy et al. 2000; Chang 2006), 서비빈(survivin)(Schmitz, Diestelkoetter et al. 2000; Friedrichs, Siegel et al. 2006; Ciesielski, Kozbor et al. 2008), MART-1 (Bettinotti, Kim et al. 1998; Jager, Hohn et al. 2002), CEA691(Huarte, Sarobe et al. 2002) 및 당단백질 100(gp100)(Levy, Pitcovski et al. 2007), 헬퍼 에피토프(Alexander, Sidney et al 1994), 토포이소머라제(Topoisomerase) II α, 인테그린 β8 서브유닛 전구체, Abl-결합 단백질 C3, TACE/ADAM 17, 정션 플라코글로빈(Junction plakoglobin), EDDR1 및 BAP31(Berinstein, Karkada et al 2012)이 있으나 이들로 한정되지 않는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 다른 화합물, 예를 들면, 제2 약물 화합물, 예를 들면, 항균제 또는 항암제, 예컨대, 베무라페닙(Vemurafenib)(PLX4032), 이마티닙(Imatinib) 또는 카필조밉(Carfilzomib)과 조합되는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 약제로서 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물의 용도를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 감염성 질환, 아토피성 장애, 자가면역 질환, 당뇨병 또는 암을 치료하거나 예방하기 위한 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물의 용도를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 감염성 질환, 아토피성 장애, 자가면역 질환, 당뇨병 또는 암을 치료하거나 예방하기 위한, 약학적 유효량의 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물을 포함하는 약학 조성물의 용도를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 약제의 제조에 사용되기 위한 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물을 포함하는, 감염성 질환, 아토피성 장애, 자가면역 질환, 당뇨병 또는 암을 치료하거나 예방하기 위한 약학 조성물을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 감염성 질환, 아토피성 장애, 자가면역 질환, 당뇨병 또는 암을 치료하거나 예방하기 위한 약제의 제조에 있어서 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물의 용도를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 약학적 유효량의 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물을, 치료를 요구하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 감염성 질환, 아토피성 장애, 자가면역 질환, 당뇨병 또는 암을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 약학적 유효량의 하나 이상의 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물을, 치료를 요구하는 환자에게 순차적으로 투여하는 단계를 포함하는, 감염성 질환, 아토피성 장애, 자가면역 질환, 당뇨병 또는 암을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다. 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물은 별도의 순차적인 투여를 위한 백신으로서 제제화될 수 있다. 순차적인 투여는 2개 이상의 투여 단계들을 포함할 수 있고, 바람직하게는 이때 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물은 1일 내지 90일 간격으로, 바람직하게는 14일 내지 28일 간격으로 투여된다. 순차적인 투여는 화학식 I 또는 화학식 II의 동일한 화합물을 2회 이상 투여하는 것을 포함할 수 있다. 대안적으로, 순차적인 투여는 화학식 I 또는 화학식 II의 상이한 화합물을 2회 이상 투여하는 것을 포함할 수 있다. 대안적으로, 순차적인 투여는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물을 1회 이상 투여하고 α-갈락토실세라마이드를 1회 이상 투여하는 것을 포함할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 감염성 질환, 아토피성 장애, 자가면역 질환, 당뇨병 또는 암을 치료하거나 예방하기 위한, 하나 이상의 다른 화합물, 예를 들면, 제2 약물 화합물, 예를 들면, 항균제 또는 항암제, 예컨대, 베무라페닙(PLX4032), 이마티닙 또는 카필조밉과 조합되는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물의 용도를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 약학적 유효량의 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물을 하나 이상의 다른 화합물, 예를 들면, 제2 약물 화합물, 예를 들면, 항균제 또는 항암제, 예컨대, 베무라페닙(PLX4032), 이마티닙 또는 카필조밉과 함께 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 감염성 질환, 아토피성 장애, 자가면역 질환, 당뇨병 또는 암을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다. 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물 및 상기 다른 화합물은 별도로, 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
질환 또는 질병은 암, 예를 들면, 흑색종, 전립선암종, 유방암종, 폐암종, 신경아교종, 림프종, 결장암종, 두경부암종 및 코인두암종(NPV); 감염성 질환, 예를 들면, HIV; 세균 감염; 아토피성 질환, 예를 들면, 천식; 또는 자가면역 질환을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 약학적 유효량의 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물을, 치료를 요구하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 천식을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 약학적 유효량의 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 천식을 예방하기 위한 백신을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물 및 임의적으로 항원을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 면역 반응을 변경시키는 방법을 제공한다.
바람직하게는, 환자는 인간이다.
바람직하게는, 화합물은 화학식 I의 화합물이다. 화학식 I의 화합물은 상기 정의된 화합물 (a) 내지 (r)로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
대안적으로 바람직하게는, 화합물은 화학식 II의 화합물이다. 화학식 II의 화합물은 상기 정의된 화합물 (aa) 내지 (qq)로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물은 본원에서 "본 발명의 화합물"로서 기재된다. 본 발명의 화합물은 임의의 형태, 예를 들면, 자유 형태, 또는 염 또는 용매화물 형태의 화합물을 포함한다.
예를 들면, X, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, R10, R11, R12, R15, R16, R19, R20, R21, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, R31, R32, n, k, g, W, Alk1, Q1, Z, A, D, E, G 및 J와 관련하여 본원에 개시된 임의의 하위범위는 본원에 개시된 임의의 다른 하위범위와 조합되어 추가 하위범위를 생성할 수 있다는 것을 인식할 것이다.
도 1은 수지상세포 상에서의 CD86 발현을 보여준다. 데이터는 본 발명의 화합물의 주입이 활성화 마커 CD86의 발현의 상향조절에 의해 표시된 바와 같이 iNKT 세포의 활성화 및 수지상세포의 후속 성숙을 유도한다는 것을 보여준다. 0.571 nmol의 표시된 화합물을 C57BL/6 마우스들(n=3)의 군에게 정맥내로 주사한 후, 항체 표지부착 및 유동 세포측정에 의한 CD11c+ 수지상세포 상에서의 CD86 발현의 분석을 위해 20시간 후 비장을 제거하였다. 평균 형광 지수(MFI) ± SEM이 제시되어 있다.
도 2는 백신으로서 본 발명의 화합물을 마우스 내에 정맥내로 투여한 후 펩티드 항원 SIINFEKL에 대한 특이성을 갖는 T 세포의 계수를 보여준다. 각각의 경우 화합물을 주사하여 등가 몰 용량의 SIINFEKL 펩티드를 제공한다. 분석의 민감성을 증가시키기 위해, 모든 마우스들은 백신이 투여되기 1일 전에 세포의 정맥내 주사에 의해 이 항원에 대한 T 세포 수용체를 코딩하는 형질전환 마우스(OT-1 마우스)로부터 10,000개 SIINFEKL 특이적 T 세포의 코호트를 먼저 기증받는다. 기증된 T 세포를 숙주의 T 세포와 구별하기 위해, 기증된 세포는 CD45 분자의 CD45.1 변이체의 유사유전자형(congenic) 발현을 나타낸다. 따라서, 형질전환 T 세포 수용체(Vα2)에 대한 항체와 함께 CD45.1에 대한 항체를 사용하여 유동 세포측정으로 혈액에서 SIINFEKL 특이적 T 세포의 수를 셀 수 있다. 랑게린(langerin) 프로모터로부터 인간 디프테리아 독소 수용체를 발현하는 lang-EGFPDTR 마우스에서 실험을 수행한다. 이것은 화합물이 투여되기 전에 일부 동물에서 디프테리아 독소의 투여에 의한 랑게린+ CD8α+ DC의 선택적 고갈을 가능하게 한다(Farrand, Dickgreber, et al. 2009). 희석제인 인산염 완충 식염수(PBS)를 대조군 동물에게 주입한다. 데이터는 α-갈서-SIINFEKL 접합체(CN152)의 주입이 혼합된 성분들(α-갈서/SIINFEKL) 또는 이들 성분들의 혼합된 유도체들(α-갈서/CN159 또는 CN146/CN159)의 주입보다 더 큰 SIINFEKL 특이적 T 세포 집단을 유도하고, 이 반응이 랑게린+ CD8α+ DC에 의존한다는 것을 보여준다. 각각의 점은 상이한 동물을 나타내고; 처리군 당 평균 ± SEM이 제시되어 있다.
도 3은 백신으로서 본 발명의 화합물을 야생형 마우스, 또는 CD1d의 발현을 결핍한 마우스에게 정맥내로 투여한 후 펩티드 항원 SIINFEKL에 대한 특이성을 갖는 T 세포의 세포독성 능력을 보여준다. 각각의 경우 0.571 nmol의 화합물을 주사하여 등가 몰 용량의 SIINFEKL 펩티드를 제공한다. 유동 세포측정을 이용하여 백신접종으로부터 7일 후 정맥내로 주사된 5 μM SIINFEKL로 생체외에서 적재된 동계(syngeneic) 비장세포로 구성된 표적 세포의 사멸을 평가한다. 표적을 숙주 조직으로부터 구별하기 위해, 주입된 세포를 형광 염료인 카복시플루오레세인 석신이미딜 에스테르(CFSE)로 표지한다. 형광 염료 세포 추적제 오렌지(orange)로 표지된 코호트 동계 비장세포(펩티드를 갖지 않음)도 대조군으로서 사용하기 위해 주입한다. 사멸은 대조군 세포에 비해 사멸된 펩티드-적재된 표적의 백분율로서 정의된다. 각각의 처리군은 5마리의 동물들을 함유하였다. 희석제인 인산염 완충 식염수(PBS)를 대조군 동물들에게 주입한다. 데이터는 접합체(즉, CN152 또는 CN175)의 주입이 혼합된 성분들(α-갈서/SIINFEKL)의 주입보다 더 큰 세포독성 능력을 갖는 SIINFEKL 특이적 T 세포를 유도하고 이 반응이 CD1d 결핍 동물에서 부재하는 NKT 세포에 의존한다는 것을 보여준다. 군 당 사멸의 평균 백분율 ± SEM이 제시되어 있다.
도 4는 백신으로서 본 발명의 화합물을 마우스(처리군 당 n=5)에게 정맥내로 투여한 후 펩티드 항원 SIINFEKL에 대한 특이성을 갖는 T 세포의 세포독성 능력을 보여준다. 세포독성 활성을 도 3에서와 같이 평가한다. 군 당 사멸의 평균 백분율 ± SEM이 제시되어 있다.
도 5는 백신으로서 본 발명의 화합물, 또는 α-갈서와 함께 펩티드 유도체를 마우스(처리군 당 n=5)에게 정맥내로 투여한 후 펩티드 항원 SIINFEKL에 대한 특이성을 갖는 T 세포의 계수를 보여준다. 도 2에 대해 기재된 바와 같이, 백신접종에 반응하여 일어나는 혈액에서의 항원 특이적 T 세포의 축적이 7일 후에 측정된다.
도 6은 본 발명의 화합물을 사용한 사전 백신접종이 2주 후에 자유 α-갈서에 대한 반응에 미치는 영향을 보여준다. NKT 세포 활성의 판독치로서 사용된 200 ng α-갈서의 정맥내 주사 후 유동 세포측정을 이용하여 비장 수지상세포 상에서의 CD86 상향조절을 평가한다. 평균 형광 지수(MFI) ± SEM이 제시되어 있다. 원래의 백신이 α-갈서 접합체(CN152)보다 오히려 자유 α-갈서를 함유하는 각각의 경우, NKT 세포는 고갈되게 되고 후기 용량의 자유 α-갈서에 반응할 수 없는데, 이때 CD86 수준은 인산염 완충 식염수(PBS)를 주입받은 무자극 대조군 동물과 유사한 상태로 머물러 있다. 대조적으로, 접합체 CN152를 사용하여 동물을 처음 백신접종할 때, 고갈은 완전하지 않고, 이때 CD86의 일부 상향조절이 자유 α-갈서에의 후속 노출 시 수지상세포에서 관찰된다. 각각의 점은 상이한 동물을 나타내고; 처리군(n=3) 당 평균 ± SEM이 제시되어 있다. ***p<0.001, **p<0.01, *p<0.05.
도 7은 도 6에 대해 기재된 바와 같이 평가될 때 본 발명의 표시된 전구약물 화합물(CN165 및 CN166)의 투여가 2주 후에 자유 α-갈서에 대한 반응에 미치는 영향을 보여준다.
도 8은 도 2에 대해 기재된 바와 같이 혈액에서 표시된 시간에서 평가될 때 백신으로서 CN175(0.571 nmol), 또는 α-갈서(0.571 nmol)와 함께 펩티드 ISQ-SIINFEKL(0.571 nmol)을 마우스에게 정맥내로 투여한 후 펩티드 항원 SIINFEKL에 대한 특이성을 갖는 T 세포의 계수를 보여준다. 데이터는 두 경우에서 α-갈서-SIINFEKL 접합체 CN175, 또는 α-갈서와 함께ISQ-SIINFEKL을 사용한 프라이밍(0일째 날)이 대조군에 비해 7일째 날 상당한 SIINFEKL 특이적 T 세포 집단을 유도한다는 것을 보여준다. 대조적으로, CN175를 사용한 부스팅(14일째 날)은 21일째 날 2차 T 세포 반응을 유도하지만, 혼합된 ISQ-SIINFEKL/α-갈서를 사용한 부스팅은 이러한 2차 T 세포 반응을 유도하지 않는다. 유사하게, CN175를 사용한 2차 부스팅 단계(42일째 날)는 49일째 날 추가 T 세포 반응을 유도하지만, 혼합된 ISQ-SIINFEKL/α-갈서를 사용한 2차 부스팅 단계는 이러한 추가 T 세포 반응을 유도하지 않는다.
도 9는 α-갈서와 함께 SIINFEKL("비접합체")의 정맥내 투여에 의한 최초 프라이밍에 이어서 본 발명의 표시된 화합물(CN175 또는 CN152) 또는 보다 많은 비접합된 백신을 사용한 반복된 부스팅 후 펩티드 항원 SIINFEKL에 대한 특이성을 갖는 T 세포의 계수를 보여준다. 데이터는 14일째 날 또는 35일째 날 SIINFEKL 및 α-갈서를 사용한 부스팅이 혈액에서 용이하게 측정가능한 T 세포 반응을 유도하지 않는다는 것을 보여준다. 대조적으로, 14일째 날 또는 35일째 날 CN152 또는 CN175를 사용한 부스팅은 21일째 날 또는 42일째 날 측정가능한 T 세포 반응을 유도한다.
도 10은 SIINFEKL 펩티드(0.571 nmol) 및 α-갈서(0.571 nmol)를 함께 사용한 백신접종에 비해 접합체 백신 CN175(0.571 nmol)를 사용한 백신접종의 항종양 효과를 보여준다. 정맥내 CN175, 또는 SIINFEKL 펩티드 및 α-갈서를 사용하거나 PBS를 사용한 종양 챌린지(challenge)로부터 5일 후 처리된 동물에서 피하 B16.OVA 종양의 진행을 모니터링한다. 군(n=5) 당 평균 종양 크기 ± SEM이 제시되어 있다. 이들 데이터는 CN175를 사용한 백신접종이 대조군 또는 혼합군에 비해 더 우수한 항종양 활성을 야기한다는 것을 보여준다.
도 11은 백신으로서 본 발명의 화합물(즉, CN178), 또는 펩티드 항원과 α-갈서의 혼합물을 마우스에게 정맥내로 투여한 후 펩티드 항원 KAVYNFATM에 대한 특이성을 갖는 T 세포의 세포독성 능력을 보여준다. 유동 세포측정을 이용하여 백신접종으로부터 7일 후 정맥내로 주사된 5 μM KAVYNFATM으로 생체외에서 적재된 동계 비장세포로 구성된 표적 세포의 사멸을 평가한다. 데이터는 접합체 CN178의 주입이 혼합군에 비해 증가된 세포독성 능력을 갖는 KAVYNFATM 특이적 T 세포를 유도한다는 것을 보여준다.
도 12는 백신으로서 본 발명의 화합물(즉, CN197), 또는 펩티드 항원과 α-갈서의 혼합물을 마우스에게 정맥내로 투여한 후 gp100으로부터의 펩티드 항원 PRNQDWLGV에 대한 특이성을 갖는 T 세포의 세포독성 능력을 보여준다. 동물들은 백신접종 전에 10,000개 gp100 특이적 T 세포의 코호트를 제공받았다. 유동 세포측정을 이용하여 백신접종으로부터 7일 후 정맥내로 주사된 5 μM PRNQDDWLGV로 생체외에서 적재된 동계 비장세포로 구성된 표적 세포의 사멸을 평가한다. 데이터는 접합체 CN197의 주입이 혼합군에 비해 증가된 세포독성 능력을 갖는 PRNQDWLGV 특이적 T 세포를 유도한다는 것을 보여준다.
도 13은 알레르겐 특이적 전구약물 백신이 감작된 동물에서 알레르기 기도 염증을 감소시킨다는 것을 보여준다. 1일째 날 및 14일째 날 명반 중의 OVA를 사용한 복강내 투여에 의해 먼저 감작된 후 24일째 날 코내 투여에 의해 OVA로 챌린지된 마우스들에서 화합물 CN152 또는 CN178, 혼합된 α-갈서와 OVA257, 또는 시험관내 활성화된 알레르겐 특이적 CTL을 사용한 처리를 평가한다. 대조군 동물들은 챌린지 대신에 코내 PBS를 제공받고, 양성 대조군은 챌린지를 제공받되 처리("OVA")를 제공받지 않는다. 전구약물 백신 및 혼합된 α-갈서와 펩티드는 챌린지 7일 전(17일째 날)에 투여되는 반면, 시험관내 활성화된 OVA257 특이적 CTL은 챌린지 1일 전날(23일째 날)에 투여된다. 챌린지로부터 3일 후에 BAL 체액에서의 세포의 총 수(좌측) 및 호산구의 수(우측)를 유동 세포측정으로 평가한다. 데이터는 항원 특이적 백신 CN152가 BAL 내로의 침윤 세포의 총 수를 감소시키지만 CN178 또는 혼합된 백신은 감소시키지 않는다는 것을 보여준다. 데이터는 CN152가 호산구 침윤을 억제하는 데에 있어서 CN178 및 혼합군 둘다보다 더 우수하다는 것도 보여준다.
도 14는 α-갈서 단독, NLVPMVATV 펩티드 단독, 혼합된 펩티드와 α-갈서, 또는 접합체 화합물 CN188("α-갈서-NLV-접합체")과 함께 1주 동안 배양한 후 인간 말초 혈액 단핵세포에서 NLVPMVATV 특이적 T 세포 집단의 분석을 보여준다. CD8 및 CD3에 대한 항체들과 함께 형광 HLA-A2/NLVPMVATV 오량체를 사용하여 유동 세포측정으로 평가한다. 모든 T 세포들(CD3+ 세포들) 중 펩티드 특이적 CD8+ T 세포의 백분율이 제시되어 있다.
정의
용어 "암" 및 유사한 용어는 전형적으로 비정상적인 또는 조절되지 않은 세포 생장을 특징으로 하는 환자의 질환 또는 질병을 지칭한다. 암 및 암 병리는 예를 들면, 전이, 인접 세포의 정상 기능의 방해, 비정상적인 수준에서 사이토카인 또는 다른 분비 생성물의 방출, 세포 증식, 종양 형성 또는 성장, 염증 또는 면역학적 반응의 억제 또는 악화, 신생물, 전구악성종양, 악성종양, 주변 또는 원거리 조직 또는 장기, 예컨대, 림프절의 침습 등과 관련될 수 있다. 구체적인 암은 본원에 상세히 기재되어 있다. 예로는 폐암종, 신경아교종, 림프종, 결장암종, 두경부암종 및 코인두암종(NPV), 흑색종, 만성 골수성 백혈병(CML), 골수종, 전립선암, 유방암, 신경아교모세포종, 신장세포암종 및 간암이 있다.
"감염성" 및 유사한 용어는 미생물의 내부 및/또는 외부 생장 또는 확립을 포함하는 환자의 질환 또는 질병을 지칭한다. 미생물은 세균, 바이러스, 진균 및 원생동물을 포함하는, 눈으로 보기에는 너무 작은 모든 살아있는 형태들을 포함한다. 호기성 세균, 혐기성 세균, 그람 양성 세균 및 그람 음성 세균, 예컨대, 코커스, 바실러스, 스피로헤타 및 마이코박테리아가 포함된다. 구체적인 감염성 장애는 본원에 상세히 기재되어 있다. 예로는 세균 또는 바이러스 감염, 예를 들면, HIV가 있다.
"아토피성 장애" 및 유사한 용어는 전형적으로 비정상적인 또는 상향조절된 면역 반응, 예를 들면, IgE 매개 면역 반응 및/또는 Th2 세포 면역 반응을 특징으로 하는 환자의 질환 또는 질병을 지칭한다. 이것은 특히 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 아토피성 피부염 및 알레르기성(예를 들면, 외인성) 천식과 관련된 과민성 반응(예를 들면, I형 과민성)을 포함할 수 있다. 전형적으로, 아토피성 장애는 콧물, 재채기, 코 울혈(상부 호흡관), 천명, 호흡곤란(하부 호흡관), 가려움(예를 들면, 눈, 피부), 코선반 부종, 촉진 시 비동 통증, 결막 충혈 및 부종, 피부 태선화, 협착음, 저혈압 및 아나필락시스 중 하나 이상과 관련되어 있다. 구체적인 아토피성 장애는 본원에 상세히 기재되어 있다.
용어 "환자"는 인간 및 비-인간 동물을 포함한다. 비-인간 동물은 조류 및 포유동물, 특히 마우스, 토끼, 고양이, 개, 돼지, 양, 염소, 소, 말 및 주머니쥐를 포함하나 이들로 한정되지 않는다.
"치료" 및 유사한 용어는 의학적 질환, 장애 또는 질병을 예방하거나, 치유하거나 완화하고/하거나, 적어도 이러한 질환 또는 장애의 증상을 감소시키는 방법 및 조성물을 지칭한다. 구체적으로, 이것은 의학적 질환, 장애 또는 질병을 예방하거나 이러한 질환, 장애 또는 질병의 발병을 지연시키고/시키거나; 의학적 질환, 장애 또는 질병의 신체적 또는 발생적 효과를 치유하거나, 바로잡거나, 감소시키거나, 늦추거나 완화하고/하거나; 의학적 질환, 장애 또는 질병에 의해 야기된 통증 또는 고통을 예방하거나, 종결시키거나, 감소시키거나 완화하는 방법 및 조성물을 포함한다.
용어 "아미노산"은 천연 아미노산 및 비-천연 아미노산 둘다를 포함한다.
용어 "항원"은 대상체에게 노출되었을 때 그 항원에 대한 특이성을 나타내는 면역 반응을 유도할 하나 이상의 에피토프(선형, 중첩 또는 입체구조형 에피토프, 또는 이들의 조합물)를 함유하는 분자를 지칭한다.
용어 "자기-희생적 링커"는 제2 화학적 기와 제3 화학적 기를 공유부착으로 가교시키는 임의의 화학적 기를 의미하는데, 이때 자기-희생적 링커와 제2 화학적 기 사이의 공유결합은 생체내에서 대사적으로 절단될 수 있고, 이 공유결합이 생체내에서 절단되었을 때 자기-희생적 링커는 자발적인 화학적 결합 재배열을 통해 제3 화학적 기로부터 탈착된다. 제2 화학적 기 및 제3 화학적 기 중 하나 이상, 바람직하게는 이들 둘다가 생물학적 활성, 예를 들면, 약학적 활성 물질 또는 이의 전구약물이다. 가장 바람직하게는, 제2 화학적 기 및 제3 화학적 기 각각은 독립적으로 면역 자극제(예를 들면, 패턴 인식 수용체 작용제, TLR 작용제 또는 NKT 세포 작용제), 항원(예를 들면, 펩티드, 단백질 또는 탄수화물) 또는 표적화 기(예를 들면, 항체 또는 글리칸)이다. 일부 예에서, 자기-희생적 링커가 제2 화학적 기로부터 탈착되었을 때, 자기-희생적 링커는 해체되고 제3 화학적 기로부터 탈착된다. 자기-희생적 링커의 예는 문헌(Philip L. Carl, Prasun K. Chakravarty, John A. Katzenellenbogen, Journal of Medicinal Chemistry, 1981, Vol. 24, No. 5, pg 479) 및 문헌(Simplicio et al., Molecules, 2008, vol. 13, pg 519)에 기재되어 있다. 자기-희생적 링커와 제2 화학적 기 사이의 공유결합은 예를 들면, 에스터라제(esterase), 펩티다제(peptidase), 포스파타제(phosphatase), 포스포리파제(phospholipase) 또는 하이드롤라제(hydrolase)에 의해, 또는 산화환원 또는 pH 의존적 과정에 의해 절단될 수 있다.
용어 "알킬"은 30개 이하의 탄소 원자를 갖는 임의의 포화된 탄화수소 라디칼을 의미하고 임의의 C1-C25, C1-C20, C1-C15, C1-C10 또는 C1-C6 알킬 기를 포함하고, 환형(축합된 이환형을 포함함) 알킬 기(종종 본원에서 "사이클로알킬"로서 지칭됨), 직쇄 알킬 기 및 분지쇄 알킬 기, 및 환형 알킬 기로 치환된 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기를 포함하기 위한 것이다. 알킬 기의 예로는 메틸 기, 에틸 기, n-프로필 기, 이소-프로필 기, 사이클로프로필 기, n-부틸 기, 이소-부틸 기, sec-부틸 기, t-부틸 기, n-펜틸 기, 1,1-디메틸프로필 기, 1,2-디메틸프로필 기, 2,2-디메틸프로필 기, 1-에틸프로필 기, 2-에틸프로필 기, n-헥실 기, 사이클로헥실 기, 사이클로옥틸 기 및 1-메틸-2-에틸프로필 기가 있다.
용어 "알킬렌"은 알킬 기에 상응하는 이라디칼을 의미한다. 알킬렌 기의 예로는 메틸렌 기, 사이클로헥실렌 기 및 에틸렌 기가 있다. 알킬렌 기는 알킬렌 쇄 내에 하나 이상의 환형 알킬렌 기(들)를 포함할 수 있고, 예를 들면, "알킬렌"은 메틸렌 기에 부착된 사이클로헥실렌 기를 포함할 수 있다. 임의의 알킬렌 기는 하이드록실, 할로겐, 예를 들면, 불소, 알킬, 예를 들면, 메틸, 및 아릴로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의적으로 치환될 수 있다. 임의의 알킬렌은 알킬렌 쇄 내에 하나 이상의 아릴렌 모이어티를 임의적으로 포함할 수 있고, 예를 들면, 페닐렌 기가 알킬렌 쇄 내에 포함될 수 있다.
용어 "저급 알킬"은 1개 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 임의의 포화된 탄화수소 라디칼을 의미하고 직쇄 알킬 기 및 분지쇄 알킬 기 둘다를 포함하기 위한 것이다.
임의의 알킬 기는 SO3H(또는 이의 염), 하이드록시 및 할로겐, 예를 들면, 불소로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의적으로 치환될 수 있다.
용어 "알케닐"은 하나 이상의 이중 결합을 갖고 30개 이하의 탄소 원자를 갖는 임의의 탄화수소 라디칼을 의미하고, 임의의 C2-C25, C2-C20, C2-C15, C2-C10 또는 C2-C6 알케닐 기를 포함하고, 직쇄 알케닐 기 및 분지쇄 알케닐 기 둘다를 포함하기 위한 것이다. 알케닐 기의 예로는 에테닐 기, n-프로페닐 기, 이소-프로페닐 기, n-부테닐 기, 이소-부테닐 기, sec-부테닐 기, t-부테닐 기, n-펜테닐 기, 1,1-디메틸프로페닐 기, 1,2-디메틸프로페닐 기, 2,2-디메틸프로페닐 기, 1-에틸프로페닐 기, 2-에틸프로페닐 기, n-헥세닐 기 및 1-메틸-2-에틸프로페닐 기가 있다.
용어 "저급 알케닐"은 하나 이상의 이중 결합을 갖고 2개 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 임의의 탄화수소 라디칼을 의미하고, 직쇄 알케닐 기 및 분지쇄 알케닐 기 둘다를 포함하기 위한 것이다.
임의의 알케닐 기는 알콕시, 하이드록시 및 할로겐, 예를 들면, 불소로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의적으로 치환될 수 있다.
용어 "아릴"은 4개 내지 18개의 탄소 원자를 갖는 방향족 라디칼을 의미하고 헤테로방향족 라디칼을 포함한다. 예로는 단환형 기뿐만 아니라 축합된 기, 예컨대, 이환형 기 및 삼환형 기도 있다. 예로는 페닐 기, 인데닐 기, 1-나프틸 기, 2-나프틸 기, 아줄레닐 기, 헵탈레닐 기, 비페닐 기, 인다세닐 기, 아세나프틸 기, 플루오레닐 기, 페날레닐 기, 페난쓰레닐 기, 안쓰라세닐 기, 사이클로펜타사이클로옥테닐 기, 벤조사이클로옥테닐 기, 피리딜 기, 피롤릴 기, 피리다지닐 기, 피리미디닐 기, 피라지닐 기, 트리아졸릴 기(1-H-1,2,3-트리아졸-1-일 및 1-H-1,2,3-트리아졸-4-일 기를 포함함), 테트라졸릴 기, 벤조트리아졸릴 기, 피라졸릴 기, 이미다졸릴 기, 벤즈이미다졸릴 기, 인돌릴 기, 이소인돌릴 기, 인돌리지닐 기, 푸리닐 기, 인다졸릴 기, 푸릴 기, 피라닐 기, 벤조푸릴 기, 이소벤조푸릴 기, 티에닐 기, 티아졸릴 기, 이소티아졸릴 기, 벤조티아졸릴 기, 옥사졸릴 기 및 이속사졸릴 기가 있다.
용어 "아릴렌"은 아릴 기에 상응하는 이라디칼을 의미한다. 예로는 페닐렌 기가 있다.
용어 "아르알킬"은 알킬렌 모이어티에 부착된 아릴 기를 의미하고, 이때 아릴 및 알킬렌은 상기 정의된 바와 같다. 예로는 벤질 기가 있다.
임의의 아릴 또는 아르알킬 기는 알킬, 할로겐, 시아노, 디알킬아미노, 아미드(N-연결된 아미드 및 C-연결된 아미드 둘다: -NHC(O)R 및 -C(O)NHR), 니트로, 알콕시, 아실옥시 및 티오알킬로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의적으로 치환될 수 있다.
용어 "알콕시"는 R이 상기 정의된 바와 같은 알킬인 OR 기를 의미한다. 용어 "저급 알콕시"는 R이 상기 정의된 바와 같은 "저급 알킬"인 OR 기를 의미한다.
용어 "아실"은 R'가 상기 정의된 바와 같은 알킬인 C(=O)R' 기를 의미한다.
용어 "아실옥시"는 R"가 상기 정의된 바와 같은 아실인 OR" 기를 의미한다.
용어 "글리코실"은 헤미아세탈 하이드록시 기의 제거에 의해 환형 단당류, 이당류 또는 올리고당류로부터 유도된 라디칼을 의미한다. 예로는 α-D-글루코피라노실, α-D-갈락토피라노실, β-D-갈락토피라노실, α-D-2-데옥시-2-아세트아미도갈락토피라노실이 있다.
용어 "아미드"는 N-연결된(-NHC(O)R) 아미드 및 C-연결된(-C(O)NHR) 아미드 둘다를 포함한다.
용어 "약학적으로 허용가능한 염"은 예를 들면, 하기 산 염들을 포함하는, 무기산 또는 유기산으로부터 유도된 무독성 염에 적용하기 위한 것이다: 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 비설페이트, 부티레이트, 시트레이트, 캄포레이트, 캄포르설포네이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 포르메이트, 푸마레이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 글리콜레이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로요오다이드, 2-하이드록시에탄설포네이트, 락테이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥살레이트, 팔모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, p-톨루엔설포네이트, 살리실레이트, 석시네이트, 설페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트 및 운데카노에이트.
본 발명의 목적을 위해, 개시된 화합물의 임의의 언급은 예를 들면, 자유 형태(예를 들면, 자유 산 또는 염기로서), 염 또는 수화물 형태, 이성질체(예를 들면, 시스/트랜스 이성질체), 입체이성질체, 예컨대, 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 에피머 형태, 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체의 혼합물 형태, 라세미체 또는 라세미체 혼합물 형태, 또는 개별 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체 형태의 모든 가능한 제제, 배열 및 입체구조를 포함한다. 상기 화합물의 구체적인 형태는 본원에 상세히 기재되어 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "포함한다", "포함하는" 및 유사한 용어는 배타적인 또는 소모적인 의미로 해석되어서는 안 된다. 즉, 이 용어들은 "포함하나 한정되지 않는"을 의미하기 위한 것이다.
본 명세서에서 선행기술 문헌의 임의의 언급은 이러한 선행기술이 널리 공지되어 있거나 당분야에서 통상의 일반 지식의 일부를 형성한다는 것을 인정하는 취지로서 간주되어서는 안 된다.
본 발명의 화합물
본 발명의 화합물, 특히 예시된 화합물은 특히 암, 감염, 아토피성 장애 또는 자가면역 질환과 관련된 질환 또는 질병의 치료 또는 예방을 위한 약제로서 유용하다. 본 발명의 화합물은 백신 항원보강제 또는 단순한 백신으로서도 유용하다. 예를 들면, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 항원과 함께 백신으로 제제화될 수 있다.
본 발명의 화합물은 자유 염기 형태, 및 염 및/또는 용매화물 형태 둘다로 유용하다.
화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물의 비환형 모이어티의 탄소 원자들은 하기 제시된 바와 같이 넘버링된다. 이것은 이 탄소 원자들을 표시하기 위해 본원에서 사용된 넘버링이다.
Figure pct00040
본 발명의 화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물(예를 들면, 반응식 1에서 화학식 I'로서 제시된 화합물)은 단순한 합성 백신 또는 백신 항원보강제로서 유용하다는 것을 발견하였다. 이론에 의해 구속받고자 하지 않지만, 본 발명자들은 이러한 화합물들이 화학적으로 안정하지만 생체내에서 효소에 의해 특정 부위에서 절단될 수 있다는 것을 제안한다. 화학식 I의 화합물은 아민(화학식 I")(예를 들면, CN089)에 대한 전구체 및 항원 함유 성분으로서 작용할 수 있는 항원-항원보강제 접합체(AAC)를 구성한다. 그 다음, 항원 성분은 항원 제시 세포에 의해 더 프로세싱될 수 있고 궁극적으로 주조직적합성 복합체(MHC) 분자에 의해 적재될 수 있고 디스플레이될 수 있다. 그 다음, 아민(화학식 I")에서 O→N 아실 이동이 일어나 아미드(화학식 III)(예를 들면, α-갈서)가 생성될 수 있다.
유리하게는, 이 방법은 아미드(화학식 III)(예컨대, α-갈서) 및 펩티드 항원의 방출 속도를 조절할 수 있도록 다양한 "유발제" 기들의 도입을 제공한다.
반응식 1
Figure pct00041
본 발명의 추가 실시양태에서, 화학식 I"의 화합물을 화학적으로 변경시켜, 본 발명의 화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물(예를 들면, 상기 제시되어 있고 반응식 2 및 4에도 제시되어 있는 화합물 (a) 내지 (r) 및 (aa) 내지 (qq))인 일련의 전구약물 화합물들을 생성할 수 있다.
반응식 2
Figure pct00042
반응식 3
Figure pct00043
반응식 4
Figure pct00044
CN152 또는 CN175는 마우스 내로 주입되었을 때, 비장 DC의 표면 상에서의 활성화 마커 CD86의 증가된 발현에 의해 정의된 바와 같이 NKT 세포 의존적 방식으로 DC를 강력히 활성화시킨다(도 1). 이론에 의해 구속받고자 하지 않지만, 본 발명자들은 관찰된 활성이 에스터라제 및/또는 프로테아제의 작용에 이어서 O→N 아실 이동에 의한 α-갈서로의 CD152 또는 CN175의 복귀에 기인한다고 추정한다.
유리하게는, CN152를 사용한 마우스의 백신접종은 개별 성분(α-갈서 및 펩티드)을 사용한 백신접종보다 면역학적으로 더 우수하다. 예를 들면, (펩티드 SIINFEKL(MHC 분자 H-2Kb에 결합하는 닭 오브알부민 단백질의 에피토프)을 함유하는) CN152를 사용한 백신접종은 혼합된 α-갈서 및 SIINFEKL 펩티드, 또는 α-갈서 및 연결을 위해 요구된 N-말단 치환을 갖는 동일한 펩티드(CN159)를 사용한 백신접종에 비해 더 큰 펩티드 특이적 T 세포(유동 세포측정에 의해 Vα2+ CD45.1+ 세포로서 정의됨) 집단을 발생시킨다. 증가된 활성은 랑게린+ CD8α+ DC로서 공지된 비장 항원 제시 세포의 서브세트에 의존한다(도 2).
본 발명의 접합체 화합물에 대한 펩티드 특이적 T 세포의 증가는 생체내에서 펩티드 보유 표적 세포를 사멸시키는 유도된 T 세포의 보다 우수한 능력에 의해 입증된 바와 같이 훨씬 더 강력한 백신이라는 결과를 가져온다. 세포독성이 CD1d 발현을 유전적으로 결핍한 동물에서 관찰되지 않기 때문에, 이 활성은 NKT 세포 및 CD1d에 의존한다(도 3).
CN152의 화학적 특징(즉, 옥심 연결) 및 CN175의 화학적 특징(파라-아미노벤질 링커 기)을 함유하는 본 발명의 접합체 화합물인 CN174도 생체내 분석에서 강력한 세포독성을 보유한다(도 4).
옥심 작용기 및 아실옥시카바메이트 작용기 둘다를 함유하는 본 발명의 접합체 화합물도 CN175보다 덜 강력하지만 혼합된 대조군에 비해 더 큰 T 세포 반응 집단을 유도한다(도 5).
α-갈서에 의한 NKT 세포의 고갈은 잘 보고되어 있다(Parekh, Wilson et al. 2005). 따라서, 자유 α-갈서를 함유한 초기 백신접종 후 α-갈서의 재투여는 DC의 측정가능한 활성화를 야기하지 않는다는 것이 관찰된다. 그러나, CN152, CN165 또는 CN166을 사용한 백신접종 후 α-갈서의 투여가 일부 DC 활성화를 유발한다는 것은 놀랍다(도 6 및 7).
유리하게는, 이것은 본 발명의 화합물, 예컨대, CN152 또는 전구약물 화합물, 예컨대, CN165 또는 CN166이 α-갈서와 달리 NKT 세포를 완전히 고갈시키지 않는다는 것을 시사한다. 반응하는 세포의 집단은 유지되고, 이것은 백신접종 프로토콜에서 본 발명의 접합체 화합물, 예컨대, CN152를 사용할 때 "부스팅 단계"를 포함시키는 것을 가능하게 만든다. 실제로, CN152 또는 CN175의 반복된 투여는 T 세포 증폭을 더 유도하는 반면(도 8), 긴 펩티드 KISQAVHAAHAEINEAGRESIINFEKLTEWT("ISQ-SIINFEKL")와 함께 α-갈서의 반복된 투여의 경우 이러한 결과가 관찰되지 않는다.
α-갈서 + 펩티드를 사용한 프라이밍 후 CN152 또는 CN175를 사용한 마우스의 백신접종도 T 세포 반응을 유발한다(도 9). 이것은 NKT 세포가 이 시점(α-갈서 프라이밍 후 14일째 날)에서 소모될 것으로 예상되고 접합체(즉, CN152 및 CN175)의 경우 관찰된 T 세포 반응이 CD1d 의존적이기 때문에 가장 놀랍다(도 3).
혼합된 투여에 비해 본 발명의 접합체 화합물을 사용한 경우 관찰된 증가된 T 세포 반응도 흑색종에 대한 뮤린 모델인 B16-OVA에 대한 치료로서 증가된 항종양 효과라는 결과를 가져온다(도 10).
CN178에 의해 입증된 바와 같이 본 발명의 접합체 화합물의 경우 관찰된 증가된 세포독성은 림프맥락수막염 바이러스 당단백질("gp33"; KAVYNFATM)로부터의 CD8 에피토프를 함유하고 혼합된 대조군에 비해 강력한 T 세포독성 반응을 유도할 수 있는, N-말단 치환된 펩티드(CN153에 대해 반응식 3에 기재된 바와 같이 제조되는 lev-FFRK-gp33)를 비롯한 CD8 에피토프 SIINFEKL로 한정되지 않는다(도 11).
Figure pct00045
종양 관련 항원 gp100의 변경된 펩티드 서열[gp10025 - 33(27P)]을 함유하는 백신의 경우 세포독성의 관점에서 유의한 T 세포 반응도 관찰될 수 있다. 특히, CN197은 혼합된 대조군에 비해 더 우수한 세포독성을 유도한다(도 12).
알레르겐 특이적 CD4+ T 세포는 IgE 항체 생성을 자극하고 백혈구를 기도 내로 동원함으로써 알레르기성 천식을 촉진한다. 대조적으로, 세포독성 T 림프구(CTL)로 분화된 알레르겐 특이적 CD8+ T 세포는 보호 역할을 수행할 수 있다(Enomoto, Hyde el al. 2012). 그러나, 전체 알레르겐을 사용한 통상의 백신접종 방법이 알레르기성 반응의 발생에 중추적인 알레르겐 특이적 CD4+ T 세포의 활성화를 통해 질환을 악화시킬 위험을 초래할 것이기 때문에, 이 방법들은 일반적으로 알레르겐 특이적 CD8+ T 세포의 양자 전달(adoptive transfer)을 요구한다(Wills-Karp, 1999). 모델 알레르겐으로서 오브알부민을 사용하는 기도 염증 모델에서, 챌린지 1주 전에 CN152를 사용한 감작된 마우스의 백신접종은 폐 내로의 백혈구 침윤을 유의하게 억제하기에 충분한 반면, α-갈서 및 펩티드("비접합체", 도 13)를 사용한 백신접종은 그러하지 않다. 무관한 항원을 함유하는 본 발명의 접합체 화합물인 CN178도 호산구의 침윤에 약간의 영향을 미치지만 백혈구 침윤을 유의하게 방해하지 못한다(도 13).
또한, 사이토메갈로바이러스의 면역우성 HLA-A2 결합 에피토프(NLVPMVATV)를 함유하는 화합물 CN188(즉, α-갈서-NLV-접합체)은 시험관내 분석에서 사이토메갈로바이러스 혈청 양성 공여자로부터의 펩티드 특이적 인간 CD8 T 세포의 증폭에 있어서 혼합된 펩티드 항원 및 α-갈서보다 더 우수하다(도 14).
다른 양태
본 발명의 화합물은 경구, 비경구, 흡입 분무, 국소, 직장, 코, 협측, 정맥내, 근육내, 피내, 피하 또는 이식된 저장소를 포함하는 다양한 경로에 의해, 바람직하게는 정맥내로 환자에게 투여될 수 있다. 투여되는 화합물의 양은 환자의 성질, 및 치료되는 장애의 성질 및 정도에 따라 광범위하게 달라질 것이다. 전형적으로, 성인 인간에 대한 용량은 50 내지 15000 ㎍/m2의 범위 내에 있을 것이다. 임의의 구체적인 환자를 위해 요구된 구체적인 용량은 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 등을 포함하는 다양한 인자들에 의존할 것이다.
경구 투여의 경우, 본 발명의 화합물은 고체 또는 액체 제제, 예를 들면, 정제, 캡슐제, 산제, 용액, 현탁액 및 분산액으로 제제화될 수 있다. 이러한 제제는 여기서 나열되지 않은 다른 경구 투약 요법과 마찬가지로 당분야에서 잘 공지되어 있다. 정제 제형에서, 결합제, 붕해제 및 윤활제와 함께 보편적인 정제 기제, 예컨대, 락토스, 수크로스 및 옥수수 전분을 사용하여 화합물을 타정할 수 있다. 결합제는 예를 들면, 옥수수 전분 또는 젤라틴일 수 있고, 붕해제는 감자 전분 또는 알긴산일 수 있고, 윤활제는 마그네슘 스테아레이트일 수 있다. 캡슐제 형태로 경구 투여하는 경우, 희석제, 예컨대, 락토스 및 건조된 옥수수 전분을 사용할 수 있다. 다른 성분, 예컨대, 착색제, 감미제 또는 풍미제를 첨가할 수 있다.
수성 현탁액이 경구 사용을 위해 요구될 때, 활성 성분을 담체, 예컨대, 물 및 에탄올과 조합할 수 있고, 유화제, 현탁제 및/또는 계면활성제를 사용할 수 있다. 착색제, 감미제 또는 풍미제도 첨가할 수 있다.
생리학적으로 허용가능한 희석제, 예컨대, 물 또는 식염수 중의 화합물을 주사로 투여할 수도 있다. 희석제는 하나 이상의 다른 성분, 예컨대, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 오일 또는 약학적으로 허용가능한 계면활성제를 포함할 수 있다. 한 바람직한 실시양태에서, 화합물을 정맥내 주사로 투여하고, 이때 희석제는 수크로스, L-히스티딘 및 약학적으로 허용가능한 계면활성제, 예를 들면, 트윈 20의 수용액을 포함한다.
화합물을 국소 투여할 수도 있다. 화합물의 국소 투여를 위한 담체는 광물유, 액체 광유, 백색 광유, 프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌 화합물, 유화 왁스 및 물을 포함한다. 화합물은 피부 또는 점막에의 국소 투여를 위해 로션 또는 크림 내의 성분으로서 존재할 수 있다. 이러한 크림은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체에 현탁되거나 용해된 활성 화합물을 함유할 수 있다. 적합한 담체는 광물유, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 세틸 에스테르 왁스, 세테아릴 알코올, 2-옥틸도데칸올, 벤질 알코올 및 물을 포함한다.
화합물은 지속 방출 시스템에 의해 투여될 수도 있다. 예를 들면, 화합물은 서서히 용해되는 정제 또는 캡슐제 내로 도입될 수 있다.
본 발명의 화합물의 합성
본 발명자들은 놀랍게도 α-갈서의 합성에서 Pd(OH)2를 사용한 화합물(1)의 수소첨가분해성 탈보호가 유의한 양의 CN089의 단리에 이르게 한다는 것을 발견하였다(반응식 5). 구체적으로, 화합물(1)을 35℃에서 3:7 CHCl3/MeOH에서 Pd(OH)2-촉매작용된 수소첨가분해시킬 때, 예상된 생성물 이외에 보다 더 높은 극성을 갖는 화합물이 17% 수율로 단리된다. 이 화합물은 C26-아실 쇄에서 1,3 N→O 이동이 일어난 α-갈서의 이성질체인 아민 CN089인 것으로 확인된다. 2D-NMR 기법을 이용하여 측쇄의 O4 상의 아실 기의 위치를 확립한다. 아실 기의 분자내 N→O 이동이 문헌에서 공지되어 있지만, 이 이동은 통상적으로 강산 매질에서 촉진된다(Baadsgaard and Treadwell 1955; Drefahl and Horhold 1961; Butler, O'Regan et al. 1978; Schneider, Hackler et al. 1985; Johansen, Kornø et al. 1999). 이론에 의해 구속받고자 하지 않지만, 본 발명자들은 본 경우에서 일부 양의 HCl이 수소첨가분해성 조건 하에서 용매 CHCl3으로부터 생성되어 관찰된 이동을 유발하는 것으로 보일 것이라고 추정한다.
반응식 5
Figure pct00046
CN089의 형성을 위한 대안적인 조건(반응식 6)은 다음과 같다: α-갈서가 수성 HCl과 함께 1,4-디옥산에서 가열될 때, C26-아실 쇄의 N→O 이동이 일어나고, CN089가 크로마토그래피 후 65% 내지 70%로 단리된다.
반응식 6
Figure pct00047
따라서, 본 발명의 화합물에 대한 전체적인 합성 방법은 산성 조건 하에서 (상기 반응식 1에서 제시된 화학식 III의 화합물인) α-갈서 또는 이의 동종체를 이성질체화하여 자유 아미노 기를 갖는 화합물을 제공하는 단계(이때, 지방산은 스핑고신 쇄(반응식 1에 제시된 화학식 I"의 화합물) 상의 O-원자로 이동됨)에 이어서 자유 아민을 후속적으로 작용화시켜 본 발명의 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물을 제공하는 단계를 포함한다. 일부 표적들은 이 방법에 의해 접근될 수 없다. 반응식 8에 제시된 대안적인 방법은 N-보호된 중간체(6)를 합성하는 단계에 이어서 스핑고신 쇄 하이드록실 기(들)를 R12로 아실화하여 화합물(7)을 제공하는 단계를 포함한다. 다양한 작용기 변환 후, N-보호기를 절단함으로써, 통상적인 방식으로 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물로 전환되는 화학식 I"의 화합물을 제공한다.
화학식 I"의 화합물은 하기 일반 절차에 따라 제조된다.
화학식 I"의 화합물의 합성을 위한 일반 방법(1)
(이때, R4는 Me, CH2OH, CH2OR10, CH2OR11 또는 CO2H이고; R6은 OH이고 R7은 OR12이거나; R6은 H이고 R7은 OR12이거나; R6은 OR12이고 R7은 H이다.)
반응식 7
Figure pct00048
화학식 III의 출발 물질(이때, R4는 Me, CH2OH, CH2OR10, CH2OR11 또는 CO2H이고; R6은 OH이고 R7은 OH이거나; R6은 H이고 R7은 OH이거나; R6은 OH이고 R7은 H임)은 문헌에서 언급된 문헌 방법에 따라 합성되고, 일부 경우 2종 이상의 문헌 방법들의 요소들의 병용에 의해 합성된다. (합성된 α-갈서 유사체의 최근 검토를 위해서는 문헌(Banchet-Cadeddu, Henon et al. 2011)을 참조한다). 예를 들면, α-갈서의 모든 합성의 핵심 단계는 글리코실화 반응에서 적절하게 보호된 공여자와 적절하게 작용화된 수용자의 커플링이다. 매우 다양한 공여자들이 α-갈서 유사체의 합성에 사용되고 있고, 이것은 R1 내지 R4 기의 변경 및 이들 기들의 입체화학을 허용한다. R1이 글리코실이고(Veerapen, Brigl et al. 2009) R2 또는 R3이 O-글리코실이거나(Kawano, Cui et al. 1997) R2 또는 R3이 H 또는 F이고(Raju, Castillo et al. 2009) R4가 Me(Tashiro, Nakagawa et al. 2008), CH2OR10(Uchimura, Shimizu et al. 1997), CH2OR11(Tashiro, Nakagawa et al. 2008) 또는 CO2H(Deng, Mattner et al. 2011)인 공여자의 합성 방법이 보고되어 있다. 마찬가지로 매우 다양한 수용자들도 사용되고 있다. 예를 들면, 보호된 파이토스핑고신 수용자의 모든 8종의 입체이성질체들이 R8 기의 변경도 허용하는 방법에서 합성되었다(Park, Lee et al. 2008; Baek, Seo et al. 2011). 나아가, 3-데옥시(Baek, Seo et al. 2011) 및 4-데옥시 파이토스핑고신(Morita, Motoki et al. 1995; Howell, So et al. 2004; Du, Kulkarni et al. 2007) 유도체도 기재되어 있다. 이 수용자들과 다양한 공여자들의 조합이 보호된 α-갈서 유도체를 생성하고, 이 α-갈서 유도체는 상기 언급된 문헌 방법에 의해 본 일반 방법 1에서 출발 물질(화학식 III)(이때, X는 O임)을 포함하는 비보호된 α-갈서 유사체로 변환된다. X가 CH2이고 R7이 OH인 출발 물질(화학식 III)의 경우, 합성이 기재되어 있다(Chen, Schmieg et al. 2004; Lu, Song et al. 2006; Wipf and Pierce 2006; Pu and Franck 2008). R4 기의 변경은 보고된 절차에서 중간체 XI 및 XII에 대해 사용된 보호기 화학반응을 채택함으로써 이용될 수 있다.
Figure pct00049
X가 CH2이고 R7이 H인 출발 물질(화학식 III)의 경우, 이 물질은 파이토스핑고신 대신에 스핑고신을 출발 물질로서 사용하는 보고된 방법(Chen, Schmieg et al. 2004)에 따라 합성된다. X가 S인 출발 물질(화학식 III)의 경우, 합성은 기재되어 있다(Dere and Zhu 2008; O'Reilly and Murphy 2011).
반응이 약 75% 완료된 것으로 판단될 때까지(TLC) 출발 물질(화학식 III)(약 5 mM)을 적절한 온도(60℃ 내지 100℃)에서 산(예를 들면, 1 M HCl, TFA)과 함께 적합한 용매(예를 들면, 10:1 1,4-디옥산-물)에서 교반한다. 용매를 제거하고 미정제 잔사를 실리카 겔 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제한다.
화학식 I"의 화합물의 합성을 위한 대안적인 일반 방법(2)
(이때, X는 O이고; R1은 H이고; R2 및 R3은 OH이고; R4는 Me, CH2OH, CH2OCOR11, CH2SH, CH2SR11, CH2SOR11, CH2SO2R11, CH2NHCOR11, CH2NHCO2R11, CH2NHCONH2, CH2NHCONHR11, CH2NHCON(R11)2, CH2NHSO2R11, CH2PO3H2, CH2OSO3H 또는 CH2OPO3H이고; R6은 OR12이고 R7은 OH이거나; R6은 OH이고 R7은 OR12이거나; R6 및 R7은 OR12이거나; R6은 H이고 R7은 OR12이거나; R6은 OR12이고 R7은 H이다.)
반응식 8
Figure pct00050
THF 또는 DMF에서 염기로서 NaH를 사용하여 화합물(2a 내지 2c)(Sakurai and Kahne 2010)(반응식 6)의 자유 하이드록실 기를 벤질화하거나 p-메톡시벤질화한다. 상응하는 디벤질 화합물에 대한 보고된 절차에 따라 생성물(3a 내지 3c)을 수용자(4a 내지 4c)로 전환한다(Plettenburg, Bodmer-Narkevitch et al. 2002; Lee, Farrand et al. 2006). 상응하는 Bn 에테르에 대해 보고된 바와 같이 D-리보-파이토스핑고신으로부터 PMB 에테르(4d)를 수득한다(Trappeniers, Goormans et al. 2008; Baek, Seo et al. 2011). a) 트리플루오로메탄설포닐 아지드를 사용한 아지드로의 아미노 기의 전환; b) 1차 하이드록실 기의 TBDPS-보호; c) 2차 하이드록실 기의 PMB-보호; 또는 d) 데실릴화로 스핑고신으로부터 PMB 에테르(4e)를 수득한다. 무수 THF/에테르에서 활성화제로서 적절하게 보호된 글리코실 트리클로로아세트이미데이트 공여자(1.5 당량) 및 TMSOTf(0.1 당량)를 사용하여 글리코실화를 수행한다. 적절한 보호기는 벤질 및 디-tert-부틸실릴렌을 포함한다. 화합물(5a 내지 5e)의 아지도 기를 스타우딩거(Staudinger) 조건(PMe3 및 THF에 이어서 수성 NaOH) 하에서 환원시킨 후 CH2Cl2에서 Boc2O로 아민 보호한다. 화합물(6a 내지 6e)의 PMB 기를 CH2Cl2-물에서 CAN 또는 DDQ로 절단하고 자유 하이드록실 기를 DCC 또는 DMAP의 존재 하에서 적절한 카복실산(R12OH)으로 에스테르화하여 에스테르(7a 내지 7e)를 제공한다. 디-tert-부틸실릴 기를 TBAF로 절단하여 중간체(8a 내지 8e)를 제공하고, 이 중간체들을 다양한 방식으로 처리하여 다양한 상이한 R4 기를 갖는 화학식 I"의 화합물을 제공할 수 있다. 예를 들면, 수소첨가분해에 이어서 N-Boc 탈보호는 R4가 CH2OH인 화학식 I"의 화합물을 제공한다. 대안적으로, 중간체(8)의 1차 하이드록실 기를 유사한 방식으로 에스테르화하거나, 설페이트화하거나 인산화한 후 탈보호하여 R4가 CH2OCOR11, CH2OSO3H 또는 CH2OPO3H2인 화학식 I"의 화합물을 제공한다. 중간체(8)의 1차 하이드록실 기를 이탈기(예를 들면, 요오다이드, 토실레이트, 화합물(9a 내지 9e))로 전환시킨 후 친핵 치환을 수행하여 티오에테르 및 관련 유도체, 아미드, 카바메이트, 우레아, N-설포네이트 및 포스포네이트를 제공하는데, 이들은 보호기의 제거 후 화학식 I"의 추가 화합물을 생성한다.
하기 일반 절차에 따라 아민(화학식 I")을 화학식 II의 화합물(하기 일반 방법 3에 제시됨)로 더 변환시킨다.
화학식 II의 화합물의 합성을 위한 일반 방법(3)
반응식 9
Figure pct00051
화학식 II의 화합물의 제조(반응식 9)를 위해, 반응이 본질적으로 완료될 때까지(TLC) 아민(화학식 I")(0.05 내지 0.1 M), 활성화된 카보네이트 또는 에스테르(10-18)(이때, D(PG)는 화학식 I 및 화학식 II에 대해 본원에서 정의된 바와 같은 D일 수 있거나 D의 보호된 형태일 수 있고, Z(PG)는 화학식 II에 대해 본원에서 정의된 바와 같은 Z일 수 있거나, Z의 보호된 형태일 수 있음)(1.05 내지 2 당량) 및 NEt3(0 내지 10 당량)의 혼합물을 주위 온도에서 적합한 용매(예를 들면, 피리딘, 피리딘-CHCl3, CHCl3-MeOH, DMF, DMSO)에서 교반한다. 디에틸아민을 첨가하여 과량의 시약을 급랭시킬 수 있다. 상기 혼합물의 농축 후, 잔사를 실리카 겔 및/또는 C18 실리카 겔 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제한다. 그 후, D(PG) 및/또는 Z(PG)에서 임의의 보호기를 표준 방법으로 제거한다(Isidro-Llobet, Alvarez et al. 2009). 탈보호된 생성물을 실리카 겔 및/또는 C18 실리카 겔 상에서 크로마토그래피로 정제한다.
반응식 9a
Figure pct00052
대안적으로(반응식 9a), 아민(화학식 I")(0.05 내지 0.1 M)을 반응식 9에 제시된 반응과 유사한 조건 하에서 활성화된 카보네이트 또는 에스테르(39)(Dubowchik, Firestone et al. 2002)(이때, PG'는 아민 보호기, 예를 들면, Fmoc, Boc, Alloc, 바람직하게는 Fmoc로서 정의됨)와 반응시킨다. PG'를 표준 방법(Isidro-Llobet, Alvarez et al. 2009)(예를 들면, Fmoc 기의 제거를 위해서는 피페리딘/DMF)으로 제거하고, 생성된 아민을 성분 Z(PG)(이때, Z(PG)는 화학식 II에 대해 본원에서 정의된 바와 같은 Z일 수 있거나 Z의 보호된 형태일 수 있음) 함유 시약과 커플링시킨다. 상기 시약은 a) 카복실산(2O)일 수 있거나(이 경우, 표준 펩티드 커플링 활성화제(예를 들면, HBTU, HATU)가 사용됨); b) 표준 방법에 의해 카복실산(20)으로부터 유도된 활성화된 에스테르(예를 들면, NHS 에스테르, pNP 에스테르, 혼합된 탄소 무수물)일 수 있거나; c) 상응하는 알코올로부터 유도된 활성화된 카보네이트(49)(바람직하게는 pNP 카보네이트)일 수 있다. 그 후, D(PG) 및/또는 Z(PG)에서 임의의 보호기를 표준 방법(Isidro-Llobet, Alvarez et al. 2009)으로 제거한다. 탈보호된 생성물을 실리카 겔 및/또는 C18 실리카 겔 상에서 크로마토그래피로 정제한다.
시약(10)의 합성을 위한 일반 방법(4)
반응식 10
Figure pct00053
문헌 절차(Greenwald, Pendri et al. 1999)에 따라 또는 문헌 절차를 채택함으로써 4-하이드록시벤질 알코올(19)을 카복실산(20) 또는 이의 활성화된 에스테르와 반응시켜 에스테르(10)(이때, Z(PG)는 화학식 II에 대해 본원에서 정의된 바와 같은 Z일 수 있거나 Z의 보호된 형태일 수 있음)를 합성한다. 일부 경우, 화합물(19)의 보호된 형태, 예를 들면, 4-하이드록시벤질 THF 에테르 또는 4-하이드록시벤질알데하이드를 사용하는 것이 유리할 수 있다. 그 후, 벤질 알코올 생성물을 DMF에서 비스(p-니트로페닐 카보네이트) 및 후니그 염기와 반응시켜 상응하는 p-니트로페닐 카보네이트(10)로 전환시킨다(Dubowchik, Firestone et al. 2002). 벤질 알코올(19)은 상업적으로 입수될 수 있거나, 상업적으로 입수될 수 있는 4-하이드록시벤질 알코올의 단순한 유도체화에 의해 수득된다. 산(20)은 상업적으로 입수될 수 있거나, 통상의 출발 물질(예를 들면, 말단 알켄산, 하이드록시알칸산, 할로알칸산, 아미노알칸산, 알칸디오산)의 표준 화학적 변환 또는 하기 문헌 방법에 의해 수득된다: Z가 Z8인 경우 문헌(Iha, van Horn et al. 2010)의 방법; Z가 Z12인 경우 문헌(Hudlicky, Koszyk et al. 1980)의 방법; Z가 Z14인 경우 문헌(Saxon and Bertozzi 2000)의 방법; Z가 Z15인 경우 문헌(Tam, Soellner et al. 2007)의 방법. 케토 기(Z = Z1)를 함유하는 산(20)은 2-메탈화된 알케닐 시약과 할로알칸산 에스테르의 커플링 후(Hatakeyama, Nakagawa et al. 2009), 이중 결합의 오존분해에 의해 수득될 수도 있다. 일부 경우, 산(20)에서 Z 기는 보호된 형태 Z(PG)(예를 들면, Z8 및 Z9의 경우 프탈이미드, Z10의 경우 티오에스테르 또는 디설파이드, Z16의 경우 아세탈 또는 알켄, Z17의 경우 Tbeoc-Thz)로 사용될 수 있다(Fang, Wang et al. 2012).
시약(11)의 합성을 위한 일반 방법(5)
반응식 11
Figure pct00054
클로로포르메이트 방법(Chaudhary, Girgis et al. 2003)을 이용하여 아민(21)(Dubowchik, Firestone et al. 2002)을 적절한 산(20)과 반응시켜 아미드 생성물을 제공함으로써 디펩티드(11)(이때, R15(PG)는 화학식 I에 대해 본원에서 정의된 바와 같은 R15일 수 있거나 R15의 보호된 형태일 수 있고, Z(PG)는 화학식 II에 대해 본원에서 정의된 바와 같은 Z일 수 있거나 Z의 보호된 형태일 수 있음)를 제조한다. 요약하건대, 산(20)(1.3 당량)을 용매(예를 들면, CH2Cl2, THF, 에테르)에 용해시키고 0℃에서 NEt3(1.4 당량)에 이어서 이소부틸 클로로포르메이트(1.25 당량)로 처리하고, 약 30분 후, 생성된 용액을 CH2Cl2/MeOH 중의 아민(21) 용액으로 옮긴다. 반응은 일반적으로 실온에서 2시간 이내에 완결된다. 대안적인 방법은 극성 비양자성 용매(예를 들면, DMF, NMP)에서 아민(21)을 산(20)의 NHS 에스테르와 반응시키는 단계를 포함한다(Dubowchik, Firestone et al. 2002). 아민(21)은 상응하는 알코올로부터 유도된 활성화된 카보네이트(49)(바람직하게는 pNP 카보네이트)와 반응하여 카바메이트 생성물을 제공할 수도 있다. 그 후, 생성된 아미드 또는 카바메이트 생성물의 하이드록실 기를 DMF에서 비스(p-니트로페닐 카보네이트) 및 후니그 염기와 반응시켜 상응하는 p-니트로페닐 카보네이트(11)로 전환시킨다(Dubowchik, Firestone et al. 2002).
카보네이트 및 카바메이트 시약(12 내지 15)의 합성을 위한 일반 방법(6)
반응식 12
Figure pct00055
4-하이드록시벤질 알코올(19) 또는 4-아미노벤질 알코올(22)을 보고된 바와 같이(Greenwald, Pendri et al. 1999) 이소시아네이트 또는 활성화된 NHS 카보네이트와 반응시켜 카바메이트(12) 및 카보네이트(13)(이때, Z(PG)는 화학식 II에 대해 본원에서 정의된 바와 같은 Z일 수 있거나 Z의 보호된 형태일 수 있음)를 제조한다. 일부 경우, 4-하이드록시벤질 알코올(19)의 보호된 형태, 예를 들면, 4-하이드록시벤질 THP 에테르 또는 4-하이드록시벤질알데하이드를 사용하는 것이 유리할 수 있다. 그 다음, 벤질 알코올 생성물을 DMF에서 비스(p-니트로페닐 카보네이트) 및 후니그 염기와 반응시켜 상응하는 p-니트로페닐 카보네이트(12 및 13)로 전환시킨다(Dubowchik, Firestone et al. 2002).
활성 에스테르로의 실릴 에테르 기의 전환을 위한 표준 절차를 이용하여 카바메이트(14) 및 카보네이트(15)를 페놀(23) 또는 아닐린(24)으로부터 유사한 방식으로 제조한다(일반 방법 8 및 9 참조).
시약(16)의 합성을 위한 일반 방법(7)
반응식 13
Figure pct00056
20℃ 내지 80℃의 온도에서 무수 용매(예를 들면, MeCN, 톨루엔, 디옥산, DMF)에서 α-할로알킬 4-니트로페닐 카보네이트(25), 예를 들면, 요오도메틸 4-니트로페닐 카보네이트(Gangwar, Pauletti et al. 1997) 또는 α-클로로에틸 4-니트로페닐 카보네이트)(Alexander, Cargill et al. 1988)를 Ag2O 또는 Cs2CO3의 존재 하에서 또는 미리 형성된 염으로서 카복실산(20)과 반응시켜 에스테르(16)(이때, Z(PG)는 화학식 II에 대해 본원에서 정의된 바와 같은 Z일 수 있거나 Z의 보호된 형태일 수 있음)를 제조한다.
시약(17)의 합성을 위한 일반 방법(8)
반응식 14
Figure pct00057
에스테르(17)(이때, Z(PG)는 화학식 II에 대해 본원에서 정의된 바와 같은 Z일 수 있거나 Z의 보호된 형태일 수 있음)를 문헌 절차에 따라 또는 문헌 절차를 채택함으로써 페놀(23)로부터 합성한다(Carpino, Triolo et al. 1989; Amsberry and Borchardt 1991; Amsberry, Gerstenberger et al. 1991; Nicolaou, Yuan et al. 1996; Greenwald, Choe et al. 2000).
시약(18)의 합성을 위한 일반 방법(9)
반응식 15
Figure pct00058
디펩티드(18)(이때, Z(PG)는 화학식 II에 대해 본원에서 정의된 바와 같은 Z일 수 있거나 Z의 보호된 형태일 수 있음)를 o-니트로페닐아세트산 에스테르(26)로부터 합성하거나(반응식 15), 상업적 공급원으로부터 수득하거나, 공지된 절차로 수득하거나, 상응하는 6-니트로벤조산 에스테르의 아른트-에이스터트(Ardnt-Eistert) 호몰로게이션(homologation)(Atwell, Sykes et al. 1994)으로 수득한다. 에스테르(26)를 임의적으로 18-크라운-6의 존재 하에서 알킬 요오다이드 및 적합한 염기(예를 들면, NaH, KO t Bu, n-BuLi)로 gem-디알킬화한다. 디알킬화된 생성물을 산 클로라이드를 통해 아른트-에이스터트 호몰로게이션시킨다(CH2N2; 그 다음, 열 또는 Ag(II)). 카복실 기를 알코올 산화 수준으로 환원시켜 조기 락탐화를 방지하고, 생성된 알코올을 TBDMS 에테르로서 보호한다. 니트로 기의 환원 후, 생성된 아민(24)을 디펩티드(27)와 커플링시킨다(Dubowchik, Firestone et al. 2002). Fmoc 절단에 이어서 아미드 또는 카바메이트 형성을 수행한다(일반 방법 5 참조). 마지막으로, 표준 방법에 의한 생성된 카복실산의 탈실릴화, 산화 및 활성화는 시약(18)을 제공한다.
티올렌 연결에 의한 항원과 화학식 II의 화합물의 커플링을 위한 일반 방법(10)(이때, Z는 Z2, Z10 또는 Z17이다.)
반응식 16
Figure pct00059
Z가 Z2인 경우: 화학식 II의 화합물 및 펩티드-티올(28a) 또는 N-말단 시스테이닐 펩티드(28b)를 적절한 용매에 용해시킨다. 적합한 용매 시스템은 클로로포름, THF, 메탄올, DMF, DMSO, tert-부탄올, 물 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. Ar으로 퍼징한 후, 혼합물을 광화학 조건(Campos, Killops et al. 2008) 또는 대안적으로 열적 조건(Dondoni 2008) 하에서 라디칼 개시제의 존재 하에서 교반한다. 반응의 완료 후, 생성물을 적절한 고체상(예를 들면, 실리카 겔, C4 및/또는 C18 실리카)에서 크로마토그래피로 정제한다.
반응식 17
Figure pct00060
Z가 Z10 또는 Z17인 경우: 화학식 II의 화합물을 전술된 조건 하에서 N-말단 알케노일 펩티드(29)와 반응시킨다.
아지드-알킨 사이클로첨가에 의한 항원과 화학식 II의 화합물의 커플링을 위한 일반 방법(11)(이때, Z는 Z4, Z7 또는 Z23이다.)
반응식 18
Figure pct00061
Z가 Z4인 경우: 탈산소화된 수성-유기 용매 시스템에서 화학식 II의 화합물 및 N-말단 알키노일 펩티드(30)를 황화구리(II)(0.1 mM 이하), 배위 리간드(예를 들면, TBTA, THPTA 또는 Bim(Py)2, 바람직하게는 TBTA)(Presolski, Hong et al. 2010) 및 환원제(예를 들면, 구리 금속, 아스코르브산 또는 TCEP, 바람직하게는 구리 금속)와 함께 교반한다(Rostovtsev, Green et al. 2002). 적합한 유기 용매는 클로로포름, THF, 메탄올, DMF, DMSO, tert-부탄올, 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 반응의 완료 후, 수성 EDTA(pH 7.7) 내로의 침전 및 원심분리에 의한 펠렛의 분리를 통해 미정제 생성물을 촉매로부터 단리할 수 있다. 대안적으로, 펜타메틸사이클로펜타디에닐 루테늄 촉매를 사용하여 위치이성질체 생성물을 제공할 수 있다(Zhang, Chen et al. 2005; Majireck and Weinreb 2006). 생성물을 적절한 고체상(예를 들면, 실리카 겔, C4 및/또는 C18 실리카)에서 크로마토그래피로 정제한다.
반응식 19
Figure pct00062
Z가 Z7인 경우: 전술된 조건 하에서 화학식 II의 화합물을 아지도-작용화된 펩티드(31)와 반응시킨다.
Z가 Z23인 경우: 실온에서 적절한 용매에서 화학식 II의 화합물을 아지도-작용화된 펩티드(31)와 혼합한다. 반응의 완료 후, 용매를 제거하고, 생성물을 적절한 고체상(예를 들면, 실리카 겔, C4 및/또는 C18 실리카)에서 크로마토그래피로 정제한다.
티올-말레이미드 접합체 첨가에 의한 항원과 화학식 II의 화합물의 커플링을 위한 일반 방법(12)(이때, Z는 Z3, Z10 또는 Z17이다.)
반응식 20
Figure pct00063
Z가 Z3인 경우: 티올이 환원된 상태로 유지되도록 임의적으로 과량의 TCEP의 존재 하에서 화학식 II의 화합물 및 펩티드-티올(28a) 또는 N-말단 시스테이닐 펩티드(28b)를 적절한 용매 시스템에 용해시킨다. 적합한 용매는 클로로포름, THF, 메탄올, DMF, DMSO, tert-부탄올, 물 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 혼합물을 4℃ 내지 실온에서 교반한다. 반응의 완료 후, 생성물을 적절한 고체상(예를 들면, 실리카 겔, C4 및/또는 C18 실리카)에서 크로마토그래피로 정제한다.
반응식 21
Figure pct00064
Z가 Z10 또는 Z17인 경우: 전술된 조건 하에서 화학식 II의 화합물을 말레이미도-작용화된 펩티드(32)와 반응시킨다.
옥심 또는 하이드라존 형성에 의한 항원과 화학식 II의 화합물의 커플링을 위한 일반 방법(13)(이때, Z는 Z1, Z8 또는 Z9이다.)
반응식 22
Figure pct00065
Z가 Z1인 경우: 실온에서 화학식 II의 화합물 및 아미노옥시-작용화된 펩티드(33) 또는 하이드라자이드 유도체(34)를, 이 두 성분들의 용해를 위해 요구된 최소량의 수성-유기 용매 시스템에서 교반하였다. 적합한 유기 용매는 클로로포름, THF, 메탄올, DMF, DMSO, tert-부탄올 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 아닐리늄 아세테이트(Dirksen, Hackeng et al. 2006) 또는 아닐리늄 트리플루오로아세테이트(200 mM 이하)를, 반응을 위한 완충제(pH 3.5 내지 5.0) 및 촉매로서 도입할 수 있다. 반응의 완료 후, 생성물을 적절한 고체상(예를 들면, 실리카 겔, C4 및/또는 C18 실리카)에서 크로마토그래피로 정제한다.
반응식 23
Figure pct00066
Z가 Z8 또는 Z9인 경우: 전술된 조건 하에서 화학식 II의 화합물을 전구체 N-말단 세린 펩티드의 페리오데이트 처리에 의해 수득된 알데하이도-작용화된 펩티드(35)(Geoghegan and Stroh 1992) 또는 케토-작용화된 펩티드(36)와 반응시킨다.
디설파이드 교환에 의한 항원과 화학식 II의 화합물의 커플링을 위한 일반 방법(14)(이때, Z는 Z10 또는 Z11이다.)
반응식 24
Figure pct00067
Z가 Z11인 경우: pH 6.5 내지 7.5까지 완충된 적절한 용매 시스템에서 불활성 대기 하에서 실온에서 화학식 II의 화합물(전구체 티올과 디피리딜 디설파이드의 반응에 의해 제조됨)을 펩티드 티올(28a) 또는 N-말단 시스테이닐 펩티드(28b)와 반응시킨다(Widdison, Wilhelm et al. 2006). 적합한 용매는 클로로포름, THF, 메탄올, DMF, DMSO, tert-부탄올, 물 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.
반응식 25
Figure pct00068
Z가 Z10인 경우: 전술된 조건 하에서 화학식 II의 화합물을 디설파이드-작용화된 펩티드(37)와 반응시킨다.
디엘스 - 알더 (Diels-Alder) 사이클로첨가에 의한 항원과 화학식 II의 화합물의 커플링을 위한 일반 방법(15)(이때, Z는 Z12이다.)
반응식 26
Figure pct00069
Z가 Z12인 경우: 6.5 이하의 pH에서 적절한 용매 시스템(예를 들면, 클로로포름, THF, 메탄올, DMF, DMSO, tert-부탄올, 물 또는 이들의 혼합물)에서 화학식 II의 화합물(이의 디엔 모이어티는 상업적으로 입수될 수 있거나 문헌 방법(Hudlicky, Koszyk et al. 1980; Choi, Ha et al. 1989)에 따라 수득됨)을 말레이미도-작용화된 펩티드(32)와 반응시킨다(de Araujo, Palomo et al. 2006).
천연 화학적 연결에 의한 항원과 화학식 II의 화합물의 커플링을 위한 일반 방법(16)(이때, Z는 Z13이다.)
반응식 27
Figure pct00070
문헌 프로토콜(Hackenberger and Schwarzer 2008)에 따라 적절한 용매 시스템(예를 들면, 클로로포름, THF, 메탄올, DMF, DMSO, tert-부탄올, 물 또는 이들의 혼합물)에서 화학식 II의 화합물을 N-말단 시스테이닐 펩티드(28b)와 반응시킨다.
스타우딩거 연결에 의한 항원과 화학식 II의 화합물의 커플링을 위한 일반 방법(17)(이때, Z는 Z14 또는 Z4이다.)
반응식 28
Figure pct00071
Z가 Z14인 경우: 문헌 프로토콜(Saxon and Bertozzi 2000)에 따라 적절한 용매 시스템(예를 들면, 클로로포름, THF, 메탄올, DMF, DMSO, tert-부탄올, 물 또는 이들의 혼합물)에서 화학식 II의 화합물을 아지도 펩티드(31)와 반응시킨다.
반응식 29
Figure pct00072
Z가 Z4인 경우: 화학식 II의 화합물을 펩티드(38)(문헌 프로토콜에 따라 제조됨)(Kiick, Saxon et al. 2002)와 전술된 바와 같이 반응시킨다.
흔적 없는 스타우딩거 연결에 의한 항원과 화학식 II의 화합물의 커플링을 위한 일반 방법(18)(이때, Z는 Z15 또는 Z4이다.)
반응식 30
Figure pct00073
Z가 Z15인 경우: 문헌 프로토콜(Soellner, Tam et al. 2006; Tam, Soellner et al. 2007)에 따라 적절한 용매 시스템(예를 들면, 클로로포름, THF, 메탄올, DMF, DMSO, tert-부탄올, 물 또는 이들의 혼합물)에서 화학식 II의 화합물(이때, 티오에스테르 기 Z15는 문헌 절차(Soellner, Tam et al. 2006)에 따라 제조됨)을 아지도 펩티드(31)와 반응시킨다.
항원과 화학식 II의 화합물의 커플링을 위한 일반 방법(19)(이때, Z는 Z16 또는 Z17이다.)
반응식 31
Figure pct00074
Z가 Z16인 경우: 문헌 프로토콜(Liu and Tam 1994; Liu, Rao et al. 1996)에 따라 pH 5 내지 7의 적절한 용매 시스템(예를 들면, 클로로포름, THF, 메탄올, DMF, DMSO, tert-부탄올, 물 또는 이들의 혼합물)에서 화학식 II의 화합물(이때, 알데하이드 기 Z16은 전구체 알켄의 오존분해 절단 또는 전구체 아세탈의 산성 탈보호로부터 수득됨)을 N-말단 시스테이닐 펩티드(28b)와 반응시킨다.
반응식 32
Figure pct00075
Z가 Z17인 경우: 화학식 II의 화합물과 알데하이드-종결된 펩티드(35)를 전술된 바와 같이 반응시킨다.
펩티드 항원 G 내지 J의 합성을 위한 일반 방법(20)
고체상 펩티드 합성(SPPS)을 이용하는 보고된 방법(Amblard, Fehrentz et al. 2006)에 따라 작용화된 펩티드를 합성한다. 구체적으로, 작용화된 펩티드의 합성을 위해 적절하게 작용화된 수지(예를 들면, 트리틸 클로라이드 수지, 2-클로로트리틸 클로라이드 수지, 왕(Wang) 수지, 사스린(Sasrin) 수지, HMPB 수지)에 대해 Fmoc 보호 방법(Atherton, Fox et al. 1978; Fields and Noble 1990)을 이용할 수 있다. 링크(Rink) 아미드, Pal, MBHA 또는 시에버(Sieber) 수지 상에서 C-말단 아미드를 갖는 펩티드를 구축한다. 트리틸 클로라이드 수지를 사용하는 간단한 설명은 다음과 같다:
트리틸 클로라이드 수지(1 g)를 30분 동안 무수 DCM에서 팽윤시킨다. 이 시간 후, 아르곤 대기 하에서 Fmoc-AA-OH(1.131 g, 3.20 mmol) 및 DIPEA(0.669 ㎖, 3.84 mmol)를 무수 DCM과 함께 첨가하고 반응물을 1시간 동안 교반한다. 수지를 소결된 반응 용기로 옮기고 DCM으로 세척한다. 무수 DMF(50 ㎖) 중에 HBTU(7.59 g) 및 4.18 ㎖ DIPEA(4.18 ㎖)를 함유하는 용액을 제조하고, 각각의 커플링을 위해 8 ㎖의 이 용액을 사용한다. 커플링을 위한 반응 순서는 다음과 같다: (i) 각각의 반복에 대해 30분 동안 수지를 DCM에서 팽윤시키고, (ii) DMF로 철저히 세척하고, (iii) 5분 동안 DMF에서 20% 피페리딘으로 탈보호하고(2회), (iv) DMF로 세척하고, (v) DCM으로 팽윤시키고, (vi) DMF로 세척하고, 아미노산 및 8 ㎖의 커플링 용액을 첨가하고 30분 동안 진탕한다. 단계 (i) 내지 (vi)를 펩티드의 말단에 대해 반복한다. 마지막으로, 펩티드가 수지에 여전히 부착되어 있는 동안, 적절하게 작용화된 산을 자유 N-말단에 커플링시킴으로써, 전체적으로 보호되고 수지-결합되고 작용화된 펩티드들(28 내지 38)을 제공한다.
수지로부터의 절단: 비드를 3시간 동안 95:2.5:2.5 TFA:TIS:물로 처리하는데, 이 시간 동안 상기 비드는 밝은 적색을 띤다). 3시간 후, 상기 비드를 여과하고 TFA로 세척한다. TFA를 증발시키고 펩티드를 침전시키고 에테르로 세척하여 미정제 펩티드를 제공한다. 0.1 % TFA와 함께 10% 내지 50% 아세토니트릴 물로 용출하는 역상 분취 HPLC를 통해 물질을 정제한다. 상기 물질을 LC-MS로 특징규명한다.
약어
Figure pct00076
실시예
본원에 기재된 실시예는 본 발명의 실시양태를 예시하기 위한 것이다. 다른 실시양태, 방법 및 분석 종류가 당분야에서 통상의 기술을 가진 자의 능력 내에 있고 본원에 상세히 기재될 필요가 없다. 당분야의 범위 내에 있는 다른 실시양태는 본 발명의 일부인 것으로 간주된다.
무수 용매는 상업적으로 입수된다. 공기 민감성 반응은 Ar 하에서 수행된다. 박층 크로마토그래피(TLC)는 60 F254 실리카로 코팅된 알루미늄 시트 상에서 수행된다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피는 머크(Merck) 또는 실리사이클(SiliCycle) 실리카 겔(40 내지 63 ㎛) 또는 실리사이클 역상(C18) 실리카 겔(40 내지 63 ㎛) 상에서 수행된다. NMR 스펙트럼은 브루커(Bruker) 500 MHz 분광계 상에서 기록된다. 1H NMR 스펙트럼은 0 ppm에서의 테트라메틸실란(내부 표준물) 또는 잔류 용매 피크(CHCl3 7.26 ppm, CHD2OD 3.31 ppm, CHD2S(O)CD3 2.50 ppm)로 표준화된다. 13C NMR 스펙트럼은 0 ppm에서의 테트라메틸실란(내부 표준물) 또는 중수소로 치환된 용매 피크(CDCl3 77.0 ppm, CD3OD 49.0 ppm, CD3S(O)CD3 39.52 ppm)로 표준화된다. CDCl3-CD3OD 용매 혼합물은 항상 메탄올 피크로 표준화된다. 고해상 전기분무 이온화 질량 스펙트럼은 Q-Tof 프리미어(Premier) 질량 분광계 상에서 기록된다.
실시예 1.1 - 화합물(1)의 수소첨가분해를 통한 ( 2 S ,3 S ,4 R )-2-아미노-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일 옥타데칸 -1,3,4- 트리올(CN089)의 합성
Figure pct00077
3:7 CHCl3/MeOH(30 ㎖) 중의 화합물(1)(324 mg, 0.303 mmol)과 20% Pd(OH)2/C(300 mg)의 혼합물을 35℃에서 수소 풍선 하에서 21시간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 3:1 CHCl3/MeOH(2 x 100 ㎖)로 세척하고 여과액을 농축한다. 미정제 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(1:4 i-PrOH/CHCl3에 이어서 1:4 EtOH/CHCl3)로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 CN089(45 mg, 17%)를 제공한다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3/CD3OD 2:1) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 1.22-1.36 (m, 68 H), 1.54-1.67 (m, 3 H), 1.79-1.84 (m, 1 H), 2.35-2.38 (m, 2 H), 3.27-3.30 (m, 1 H), 3.51-3.55 (m, 1 H), 3.70-3.72 (m, 1 H), 3.75 (dd, J = 3.3, 10.0 Hz, 1 H), 3.79-3.81 (m, 2 H), 3.83-3.86 (m, 2 H), 3.97 (d, J = 3.3 Hz, 1 H), 4.11 (dd, J = 2.9, 10.8 Hz, 1 H), 4.87 (d, J = 3.8 Hz, 1 H), 4.92 (dt, J = 2.8, 8.8 Hz, 1 H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3/CD3OD 2:1) δ 14.2, 23.0, 25.3, 25.4, 29.5, 29.65, 29.66, 29.68, 29.74, 29.9, 29.96, 29.99, 30.03, 31.5, 32.3, 34.8, 53.2, 62.2, 64.9, 69.3, 70.1, 70.3, 71.15, 71.18, 73.5, 99.9, 174.6; C50H100NO9에 대한 HRMS-ESI m/z [M+H]+: 계산치 858.7398, 실측치 858.7396.
실시예 1.2 - α- 갈서의 이성질체화를 통한 ( 2 S ,3 S ,4 R )-2-아미노-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일 옥타데칸 -1,3,4- 트리올(CN089)의 합성
Figure pct00078
α-갈서(195 mg, 0.227 mmol)를 85℃에서 10:1:2 1,4-디옥산/물/1 M HCl(61 ㎖)에서 Ar 하에서 35분 동안 가열한 후 5℃까지 냉각시킨다. 모은 침전물을 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 10:90 내지 20:80) 상에서 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 CN089(121 mg, 62%)를 제공한다.
실시예 2 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- 헥사코사노일 -2-((4- 옥소펜타노일옥시 )메톡시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN146)의 합성
Figure pct00079
실시예 2.1 - (4-니트로페녹시)카보닐옥시메틸 4-옥소펜타노에이트(41)
Figure pct00080
물(10 ㎖) 중의 AgNO3(700 mg, 4.1 mmol) 용액을 레불린산의 나트륨 염(약 10 ㎖ 물 중의 4.3 mmol, 레불린산을 1 M 수성 NaOH로 pH 7 내지 8까지 염기성화함으로써 제조됨)에 첨가함으로써 레불린산의 은 염을 제조한다. 30분 후, 생성된 침전물을 여과로 단리하고 냉각수에 이어서 Et2O로 세척한다. 생성물을 진공 하에서 건조하여 백색 고체로서 은 염(636 mg, 69%)을 제공한다. 무수 톨루엔(1.5 ㎖) 중의 요오도메틸 4-니트로페닐 카보네이트(40)(Gangwar, Pauletti et al. 1997)(105 mg, 0.325 mmol, 톨루엔을 사용한 공비 증류에 의해 건조됨), 4Å 분자체(약 250 mg) 및 은 레불리네이트(89 mg, 0.40 mmol)의 혼합물을 광으로부터 보호하고 40℃에서 교반한다. 4시간 후, 상기 혼합물을 Et2O로 희석하고 셀라이트를 통해 여과하고 감압 하에서 농축한다. 미정제 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(30% 내지 40% EtOAc/석유 에테르)로 정제하여 무색 오일로서 표제 화합물(41)(85 mg, 84%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2.20 (s, 3 H), 2.67-2.70 (m, 2 H), 2.80-2.83 (m, 2 H), 5.88 (s, 2 H), 7.38-7.48 (m, 2 H), 8.24-8.34 (m, 2 H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 27.7, 29.7, 37.6, 82.5, 121.8, 125.4, 145.7, 151.5, 155.1, 171.2, 206.0; C13H13NO8Na에 대한 HRMS (ESI) m/z [M+Na]+: 계산치 334.0539, 실측치 334.0544.
실시예 2.2 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- 헥사코사노일 -2-((4- 옥소펜타노일옥시 )메톡시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN146)
Figure pct00081
CDCl3(0.15 ㎖) 중의 (4-니트로페녹시)카보닐옥시메틸 4-옥소펜타노에이트(41)(8.0 mg, 0.026 mmol) 용액을 d 5 -피리딘(0.30 ㎖) 중의 아민 CN089(22 mg, 0.026 mmol) 용액에 첨가한다. 반응을 NMR 튜브에서 진행시킨다. 실온에서 3시간 후, NEt3(2.5 mg, 0.025 mmol)을 첨가하고, 반응을 추가 2.25시간 동안 계속 수행하고, 이 시간 후 95% 초과의 아민 CN089가 소비되었다. 휘발성 물질을 감압 하에서 농축하고, 미정제 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(1.5:40:60 내지 1.5:45:55 MeOH/디옥산/CHCl3)로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 CN146(14.1 mg, 53%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.88-0.90 (m, 6 H), 1.24-1.34 (m, 68 H), 1.60-1.72 (m, 4 H), 2.21 (s, 3 H), 2.31-2.42 (m, 2 H), 2.62-2.64 (m, 2 H), 2.80-2.83 (m, 2 H), 3.71-3.83 (m, 8 H), 3.88 (br d, J = 10.1 Hz, 1 H), 3.95 (br d, J = 2.2 Hz, 1 H), 4.86 (d, J = 3.2 Hz, 1 H) 4.94-4.98 (m, 1 H), 5.68-5.76 (m, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 1:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.3, 23.2, 25.6, 25.9, 28.3, 29.3, 29.7, 29.79, 28.84, 29.86, 29.92, 30.0, 30.1, 30.15, 30.18, 30.21, 32.43, 32.44, 35.1, 38.1, 53.0, 62.3, 68.1, 69.7, 70.4, 70.8, 71.4, 72.1, 75.2, 80.7, 100.5, 155.6, 172.7, 175.0, 208.5; C57H107NO14Na에 대한 HRMS (ESI) m/z [M+Na]+: 계산치 1052.7589, 실측치 1052.7578.
실시예 3 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- 헥사코사노일 -2-(6-( 아지도 )헥사노일메톡시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN215)의 합성
실시예 3.1 - (4-니트로페녹시)카보닐옥시메틸 6-아지도헥사노에이트(50)
Figure pct00082
무수 아세토니트릴(5 ㎖) 중의 요오도메틸 4-니트로페닐 카보네이트(40)(Gangwar, Pauletti et al. 1997)(340 mg, 1.05 mmol), 6-아지도헥산산(210 mg, 1.34 mmol), 산화은(100 mg, 0.43 mmol) 및 4Å 분자체(약 500 mg)의 혼합물을 광으로부터 보호하고 실온에서 교반한다. 24시간 후, 상기 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 EtOAc(20 ㎖)로 세척하고 감압 하에서 농축한다. 미정제 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(EtOAc/톨루엔 0:10 내지 1:4)로 정제하여 무색 오일로서 표제 화합물(50)(150 mg, 40%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1.42-1.48 (m, 2 H), 1.60-1.66 (m, 2 H), 1.68-1.74 (m, 2 H), 2.45 (dd, J = 7.4, 7.4 Hz, 2 H), 3.28 (dd, 6.8, 6.8 Hz, 2 H), 7.41 (dd, J = 2.2, 9.2 Hz, 2 H), 8.29 (dd, J = 2.2, 9.2 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 23.9, 26.0, 28.4, 33.5, 51.6, 82.5, 121.6, 125.3, 145.6, 151.4, 155.0, 171.6; C14H16N4O7Na에 대한 HRMS-ESI m/z [M+Na]+: 계산치 375.0917, 실측치 375.0917.
실시예 3.2 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- 헥사코사노일 -2-(6-( 아지도 )헥사노일옥시메톡시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN215)
Figure pct00083
CH2Cl2(0.15 ㎖) 중의 (4-니트로페녹시)카보닐옥시메틸 6-아지도헥사노에이트(50)(20 mg, 0.056 mmol)에 이어서 Et3N(1 ㎖)을 피리딘(1 ㎖) 중의 아민 CN089(25 mg, 0.029 mmol) 용액에 첨가한다. 실온에서 0.5시간 후, 상기 혼합물을 MeOH로 희석하고 감압 하에서 농축한다. 미정제 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(MeOH/CHCl3 0:10 내지 2:8)로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 CN215(21 mg, 67%)를 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 3:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 1.23-1.35 (m, 68 H), 1.40-1.46 (m, 2 H), 1.60-1.71 (m, 8 H), 2.33-2.37 (m, 2 H), 2.40 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 2 H), 3.29 (dd, J = 6.7, 6.7 Hz, 2 H), 3.72-3.80 (m, 8 H), 3.87 (dd, J = 2.3, 10.3 Hz, 1 H), 3.96 (d, J = 2.9 Hz, 1 H), 4.86 (d, J = 3.7 Hz, 1 H), 4.91-4.94 (m, 1 H), 5.73 (s, 2 H), 6.78 (d, J = 8.5 Hz, 1 H); 13C NMR (126 MHz, 3:1 CDCl3/CD3OD) δ 13.6, 22.3, 23.7, 24.7, 25.0, 25.8, 28.2, 28.5, 28.9, 29.0, 29.1, 29.2, 29.3, 31.6, 33.4, 34.3, 50.9, 51.8, 61.5, 67.5, 68.7, 69.5, 70.0, 70.3, 71.3, 74.3, 79.8, 99.5, 154.5, 172.5, 174.2; C58H110N4O13Na에 대한 HRMS-ESI m/z [M+Na]+: 계산치 1093.7967, 실측치 1093.7972.
실시예 4 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- 헥사코사노일 -2-(6-( 말레이미도 )헥사노일메톡시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN157)의 합성
실시예 4.1 - (4-니트로페녹시)카보닐옥시메틸 6-말레이미도헥사노에이트(51)
Figure pct00084
Ag2O(25 mg, 0.11 mmol)을 무수 아세토니트릴(5 ㎖) 중의 요오도메틸 4-니트로페닐 카보네이트(40)(Gangwar, Pauletti et al. 1997)(70 mg, 0.22 mmol), 6-말레이미도헥산산(40 mg, 0.19 mmol) 및 4Å 분자체(약 500 mg)의 혼합물에 첨가하고, 반응물을 교반하고 광으로부터 보호한다. 3시간 후, 혼합물을 EtOAc로 희석하고 셀라이트를 통해 여과하고 감압 하에서 농축한다. 미정제 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(EtOAc/석유 에테르 = 0:1 내지 4:6)로 정제하여 무색 오일로서 표제 화합물(51)(25 mg, 33%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 1.32-1.38 (m, 2 H), 1.59-1.65 (m, 2 H), 1.67-1.73 (m, 2 H), 2.42 (dd, J = 7.3, 7.3 Hz, 2 H), 3.52 (dd, J = 7.3, 7.3 Hz, 2 H), 5.88 (s, 2 H), 6.69 (s, 2 H), 7.40-7.44 (m, 2 H), 8.28-8.31 (m, 2 H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 23.9, 26.0, 28.1, 29.7, 33.6, 37.5, 82.5, 121.7, 122.4, 125.4, 134.1, 145.7, 151.5, 155.1, 107.8, 171.7; C18H18N2O9Na에 대한 HRMS (ESI) m/z [M+Na]+: 계산치 429.0910, 실측치 429.0905.
실시예 4.2 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- 헥사코사노일 -2-(6-( 말레이미도 )헥사노일메톡시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN157)
Figure pct00085
CH2Cl2(3 ㎖) 중의 (4-니트로페녹시)카보닐옥시메틸 6-말레이미도헥사노에이트(51)(8.0 mg, 0.026 mmol) 용액에 이어서 Et3N(2 ㎖)을 무수 피리딘(3 ㎖) 중의 아민 CN089(21 mg, 0.024 mmol) 용액에 첨가한다. 2시간 후, 휘발성 물질을 감압 하에서 농축하고 미정제 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(MeOH/CHCl3 = 0:1 내지 2:8)로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 CN157(14 mg, 23%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 3:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 1.23-1.34 (m, 70 H), 1.58-1.70 (m, 8 H), 2.33-2.39 (m, 4 H), 3.52 (dd, J = 7.3, 7.3 Hz, 2 H), 3.71-3.79 (m, 8 H), 3.88 (dd, J = 2.5, 10.3 Hz, 1 H), 3.96 (d, J = 3.0 Hz, 1 H), 4.86 (d, J = 3.6 Hz, 1 H), 4.93 (m, 1 H), 5.70-5.75 (m, 1 H), 6.73 (s, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 3:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.2, 22.9, 24.2, 25.3, 25.6, 26.3, 28.4, 29.1, 29.4, 29.6, 29.7, 29.9, 32.2, 33.9, 34.8, 37.8, 52.4, 62.1, 68.1, 69.3, 70.1, 70.5, 70.9, 72.0, 74.9, 80.4, 100.1, 134.4, 155.1, 171.4, 173.1, 174.8; C62H112N2O15Na에 대한 HRMS (ESI) m/z [M+Na]+: 계산치 1147.7960, 실측치 1147.7960.
실시예 5 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- O - 헥사코사노일 -2-( N -Cbz-Phe-Lys-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN166)의 합성
실시예 5.1 - N - Cbz - Phe - Lys(Alloc)OH(42)
Figure pct00086
문헌 절차(Dubowchik, Firestone et al. 2002)에 따라 표제 화합물을 59% 수율로 합성한다. 1H NMR (500 MHz, d6-DMSO) δ 1.26-1.45 (m, 4 H), 1.57-1.65 (m, 1 H), 1.69-1.77 (m, 1 H), 2.73 (dd, J = 11.1, 13.7 Hz, 1 H), 2.92-3.04 (m, 3 H), 4.16-4.20 (m, 1 H), 4.28-4.33 (m, 1 H), 4.44-4.49 (m, 2 H), 4.94 (s, 2 H), 5.15 (app dq, J = 1.4, 10.4 Hz, 1 H), 5.25 (app dq, J = 1.7, 17.2 Hz, 1 H), 5.85-5.93 (m, 1 H), 7.13-7.34 (10 H), 7.43 (d, J = 8.9 Hz, 1 H), 8.16-8.21 (m, 1 H); 13C NMR (126 MHz, d6-DMSO) δ 22.6, 29.0, 30.8, 37.4, 39.8(용매에 의해 모호함), 52.0, 55.9, 64.1, 65.2, 116.8, 126.2, 127.4, 127.6, 128.0, 128.2, 129.2, 133.8, 137.0, 138.1, 155.8, 155.9, 171.6, 173.5; C27H33N3NaO7에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 534.2216, 실측치 534.2209.
실시예 5.2 - N - Cbz - Phe - Lys ( Alloc )-4- 아미노벤질 알코올(43)
Figure pct00087
디펩티드(42)(243 mg, 0.475 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 수화물(74 mg, 0.54 mmol) 및 4-아미노벤질 알코올(118 mg, 0.958 mmol)의 혼합물을 Ar 하에서 THF(5 ㎖)에 용해시키고 빙수조에서 냉각시킨다. N-메틸 모르폴린(54 ㎕, 0.49 mmol)을 첨가한 후, EDCI(97 mg, 0.51 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 얼음 위에서 교반한 후 2시간 동안 실온에서 교반한다. 상기 혼합물을 수성 시트르산으로 pH 약 3까지 산성화하고 EtOAc로 추출하고, 추출물을 건조하고(염수, MgSO4) 감압 하에서 농축한다. 고체 잔사를 디에틸 에테르로 분쇄한 후 실리카 겔(제1 컬럼: MeOH/CH2Cl2 = 2:98 내지 7:93; 제2 컬럼: EtOAc/석유 에테르 = 8:2 내지 1:0) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 2회 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물(43)(70 mg, 24%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3 + 3 방울의 CD3OD) δ 1.28-1.36 (m, 2 H), 1.47-1.53 (m, 2 H), 1.61-1.70 (m, 1 H), 1.82-1.89 (m, 1 H), 2.96-3.00 (m, 1 H), 3.08-3.13 (m, 3 H), 4.41-4.45 (m, 2 H), 4.50-4.54 (m, 2 H), 4.62 (s, 2 H), 5.03-5.10 (m, 2 H), 5.17-5.19 (m, 1 H), 5.25-5.29 (m, 1 H), 5.84-5.92 (m, 1 H), 7.13-7.19 (m, 5 H), 7.27-7.35 (m, 7 H), 7.51 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3 + 3 방울의 CD3OD) δ 22.0, 28.8, 30.9, 37.9, 39.8, 53.2, 55.9, 64.1, 65.2, 66.8, 117.2, 119.9, 126.7, 127.3, 127.5, 127.6, 127.9, 128.2, 128.3, 128.8, 132.5, 135.7, 136.7, 136.9, 155.9, 156.5, 169.4, 171.5; C34H40N4NaO7에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 639.2795, 실측치 639.2786.
실시예 5.3 - N - Cbz - Phe - Lys ( Alloc )-4- 아미노벤질 4- 니트로페닐 카보네이 트(44)
Figure pct00088
피리딘(46 ㎕, 0.57 mmol)에 이어서 4-니트로페닐 클로로포르메이트(46 mg, 0.23 mmol)를 무수 THF(5 ㎖) 중의 알코올(43)(70 mg, 0.11 mmol)의 빙냉 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반한다. EtOAc로 희석한 후, 유기층을 10% 수성 시트르산 및 물로 세척한 후 건조하고(염수, MgSO4) 감압 하에서 농축한다. 고체 잔사를 톨루엔으로 분쇄한 후 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 0:100 내지 5:95) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물(44)(63 mg, 71%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3 + 3 방울의 CD3OD) δ 1.27-1.37(m, 2 H), 1.48-1.54 (m, 2 H), 1.61-1.70 (m, 1 H), 1.83-1.91 (m, 1 H), 2.98-3.03 (dd, J = 7.2, 13.3 Hz, 1 H), 3.09-3.16 (m, 3 H), 4.41-4.46 (m, 2 H), 4.50-4.57 (m, 2 H), 5.07 (s, 2 H), 5.18 (d, J = 10.5 Hz, 1 H), 5.25-5.29 (m, 3 H), 5.84-5.92 (m, 1 H), 7.13-7.19 (m, 5 H), 7.27-7.42 (m, 9 H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 2 H), 8.27 (d, J = 9.1 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3 + 3 방울의 CD3OD) δ 22.0, 28.8, 30.7, 37.8, 39.8, 53.2, 55.8, 65.2, 66.8, 70.3, 117.2, 119.8, 121.4, 124.9, 126.7, 127.6, 127.9, 128.2, 128.3, 128.8, 129.2, 129.6, 132.5, 135.6, 135.7, 138.3, 145.1, 152.1, 155.2, 155.9, 156.5, 169.5, 171.5; C41H43N5NaO11에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 804.2857, 실측치 804.2852.
실시예 5.4 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일-2-[ N -Cbz-Phe-Lys(ε- N -Alloc)-4-아미노벤질옥시카보닐아미노]옥타데칸-1,3,4-트리올(45)
Figure pct00089
17:1 CHCl3-MeOH(0.53 ㎖)에 현탁된 pNP-카보네이트(44)(18 mg, 0.023 mmol)에 이어서 Et3N(4.5 ㎕, 0.032 mmol)을 Ar 하에서 피리딘(0.25 ㎖) 중의 CN089(18 mg, 0.021 mmol) 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반한다. 18시간 후, 추가 분량의 Et3N(6 ㎕, 0.043 mmol)을 첨가한다. 추가 16시간 후, 휘발성 물질을 회전 증발기 상에서 약하게 농축하고 보다 많은 피리딘(0.25 ㎖)을 첨가한 후, Et3N(4 ㎕, 0.029 mmol)을 첨가한다. 24시간 후, 과량의 카보네이트 시약을 Et2NH(10 ㎕, 10분)로 급랭시키고 혼합물을 농축하여 건조한다. 미정제 잔사를 실리카 겔(MeOH/CHCl3 = 0:1 내지 1:9) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물(45)(16.4 mg, 52%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 1.15-1.42 (m, 70 H), 1.48-1.55 (m, 2 H), 1.60-1.74 (m, 5 H), 1.84-1.91 (m, 1 H), 2.31-2.41 (m, 2 H), 2.94 (dd, J = 8.4, 13.7 Hz, 1 H), 3.10-3.16 (m, 3 H), 3.68-3.81 (m, 8 H), 3.86 (dd, J = 2.2, 10.4 Hz, 1 H), 3.89 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.42-4.46 (m, 2 H), 4.50-4.51 (m, 2 H), 4.85 (d, J = 3.7 Hz, 1 H), 4.96-5.00 (m, 1 H), 5.03-5.10 (m, 4 H), 5.15-5.18 (m, 1 H), 5.25-5.29 (m, 1 H), 5.85-5.92 (m, 1 H), 7.14-7.23 (m, 5 H), 7.27-7.35 (m, 7 H), 7.56 (d, J = 8.1 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 1:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.30, 14.32, 23.2, 25.6, 25.9, 29.2, 29.7, 29.88, 29.91, 29.93, 30.08, 30.13, 30.19, 30.22, 30.3, 32.2, 32.46, 32.48, 35.1, 38.6, 40.9, 52.9, 54.4, 57.1, 62.4, 65.9, 67.0, 67.4, 68.5, 69.7, 70.4, 70.9, 71.4, 72.3, 75.3, 100.6, 117.6, 120.8, 120.9, 127.4, 128.3, 128.6, 128.98, 129.02, 129.2, 129.3, 129.8, 133.3, 133.6, 137.0, 137.1, 138.4, 157.4, 158.0, 171.1, 173.0, 175.1; C85H137N5NaO17에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 1522.9907, 실측치 1522.9888.
실시예 5.5 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- O - 헥사코사노일 -2-( N -Cbz-Phe-Lys-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN166)
촉매량의 Pd(PPh3)4(대략 0.5 mg, 0.4 μmol)를 새로 탈기된 14:1 CH2Cl2-MeOH(0.16 ㎖)에 용해된 화합물(45)(16 mg, 0.011 mmol)과 보란-디메틸아민 착물(3.4 mg, 0.058 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 Ar 하에서 실온에서 교반한다. 80분 후, 반응 혼합물을 짧은 실리카 플러그(0.15 g)를 통해 여과하고 50% 내지 75% MeOH/CH2Cl2(각각 12 ㎖)로 세척한다. 세척물을 농축하고 C18 실리카 겔(MeOH + 0.5% TFA) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 무색 유리로서 표제 화합물 CN166의 TFA 염(15.4 mg, 94%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 1:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 1.15-1.51 (m, 70 H), 1.60-1.75 (m, 7 H), 1.87-1.94 (m, 1 H), 2.31-2.41 (m, 2 H), 2.86-2.90 (br m, 2 H), 2.95 (dd, J = 8.4, 13.8 Hz, 1 H), 3.13 (dd, J = 6.1, 13.8 Hz, 1 H), 3.67-3.80 (m, 8 H), 3.85-3.87 (m, 2 H), 4.38-4.41 (m, 1 H), 4.46-4.49 (m, 1 H), 4.85 (d, J = 3.6 Hz, 1 H), 4.97-5.13 (m, 5 H), 7.12-7.16 (m, 1 H), 7.19-7.20 (m, 4 H), 7.28-7.36 (m, 7 H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 1:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.31, 14.33, 22.9, 23.23, 23.24, 25.7, 26.0, 27.4, 29.3, 29.8, 29.9, 30.0, 30.1, 30.18, 30.24, 30.26, 30.28, 30.31, 31.9, 32.52, 32.54, 35.2, 38.5, 40.0, 53.1, 54.2, 57.3, 62.4, 67.0, 67.4, 68.6, 69.7, 70.5, 70.9, 71.4, 72.4, 75.4, 100.8, 120.9, 127.5, 128.2, 128.7, 129.05, 129.10, 129.2, 129.8, 133.6, 137.0, 137.1, 138.4, 157.5, 157.6, 171.0, 173.3, 175.2; C81H133N5NaO15에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 1438.9696, 실측치 1438.9686.
실시예 6 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- O - 헥사코사노일 -2-( N -Cbz-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN165)의 합성
실시예 6.1 - N - Cbz - Val - Cit -4- 아미노벤질 알코올(47)
Figure pct00090
출발 물질이 거의 용해될 때까지(1시간) 산(46)(Dubowchik, Firestone et al. 2002)(200 mg, 0.49 mmol)과 4-아미노벤질 알코올(64 mg, 0.52 mmol)의 혼합물을 1:1 MeOH/1,4-디옥산(6 ㎖)에서 20℃에서 Ar 하에서 교반한다. EEDQ(242 mg, 0.98 mmol)를 첨가하고, 교반을 3.5일 동안 20℃에서 계속 수행한다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 고체 잔사를 EtOAc로 분쇄한 후 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 5:95 내지 15:85) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물(47)(106 mg, 42%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 0.95 (d J = 6.8 Hz, 3 H), 0.97 (d J = 6.8 Hz, 3 H), 1.52-1.63 (m, 2 H), 1.71-1.78 (m, 1 H), 1.87-1.94 (m, 1 H), 2.03-2.11 (m, 1 H), 3.07-3.12 (m, 1 H), 3.15-3.21 (m, 1 H), 3.98 (d, J = 6.8 Hz, 1 H), 4.50-4.52 (m, 1 H), 4.55 (s, 2 H), 5.10 (s, 2 H), 7.26-7.36 (m, 7 H), 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, CD3OD) δ 18.6, 19.7, 27.8, 30.5, 31.9, 40.3, 55.0, 62.3, 64.8, 67.8, 121.3, 128.6, 128.8, 129.0, 129.5, 138.2, 138.6, 138.8, 158.8, 162.3, 172.2, 174.4; C26H35N5NaO6에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 536.2485, 실측치 536.2495.
실시예 6.2 - N - Cbz - Val - Cit -4- 아미노벤질 4- 니트로페닐 카보네이트 (48)
Figure pct00091
Ar 하에서 피리딘(0.10 ㎖)에 이어서 i-Pr2NEt(10.5 ㎕, 0.060 mmol)를 무수 DMF(0.5 ㎖) 중의 알코올(47)(30 mg, 0.058 mmol) 및 비스(4-니트로페닐)카보네이트(23 mg, 0.076 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응물을 실온에서 교반한다. 16시간 후, 혼합물을 감압 하에서 농축하고 미정제 잔사를 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 0:1 내지 1:9) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물(48)(30 mg, 76%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 5:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.94 (d J = 6.8 Hz, 3 H), 0.98 (d J = 6.8 Hz, 3 H), 1.51-1.57 (m, 2 H), 1.67-1.74 (m, 1 H), 1.88-1.95 (m, 1 H), 2.05-2.13 (m, 1 H), 3.09-3.14 (m, 1 H), 3.20-3.26 (m, 1 H), 4.01 (d, J = 6.4 Hz, 1 H), 4.56 (dd, J = 4.9, 9.0 Hz, 1 H), 5.08-5.14 (m, 2 H), 5.26 (s, 2 H), 7.29-7.41 (m, 9 H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 2 H), 8.26-8.29 (m, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 5:1 CDCl3/CD3OD) δ 17.8, 19.2, 26.3, 29.3, 31.0, 39.1, 53.3, 60.8, 67.2, 70.8, 120.2, 121.9, 125.4, 127.9, 128.3, 128.6, 129.7, 130.1, 136.3, 138.8, 145.5, 152.6, 155.7, 157.1, 160.5, 170.6, 172.6; C33H38N6NaO10에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 701.2536, 실측치 701.2540.
실시예 6.3 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- O - 헥사코사노일 -2-( N -Cbz-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN165)
Figure pct00092
피리딘(0.25 ㎖)에 용해된 pNP-카보네이트(48)(15 mg, 0.022 mmol)에 이어서 Et3N(4.5 ㎕, 0.032 mmol)을 Ar 하에서 피리딘(0.25 ㎖) 중의 CN089(17 mg, 0.020 mmol) 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반한다. 18시간 후, 추가 분량의 Et3N(3 ㎕, 0.022 mmol)을 첨가하고, 반응물을 추가 4시간 동안 교반한 후, 과량의 카보네이트 시약을 Et2NH(10 ㎕, 10분)로 급랭시킨다. 혼합물을 농축하여 건조하고, 미정제 잔사를 실리카 겔(MeOH/CHCl3 = 5:95 내지 15:85) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제한 후, C18 실리카 겔(MeOH) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 마지막으로 분취 HPLC(페노메넥스 루나(Phenomenex Luna) C18(2), 5 ㎛, 30 x 250 mm, 35℃, 50 ㎖/분; 이동상 A = 80:20:0.05 MeOH/물/TFA; 이동상 B = 100:0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 10분: 0% 내지 100% B; 10분 내지 34분: 100% B; 34분 내지 35분: 100% 내지 0% B; 35분 내지 37분: 100% A)로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 CN165(21 mg, 76%)를 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 0.94 (d J = 6.7 Hz, 3 H), 0.98 (d J = 6.5 Hz, 3 H), 1.20-1.40 (m, 68 H), 1.50-1.76 (m, 7 H), 1.87-1.96 (m, 1 H), 2.05-2.13 (m, 1 H), 2.29-2.41 (m, 2 H), 3.07-3.15 (m, 1 H), 3.18-3.26 (m, 1 H), 3.63-3.81 (m, 8 H), 3.83-3.90 (m, 2 H), 4.01 (d, J = 6.4 Hz, 1 H), 4.52-4.57 (m, 1 H), 4.80-4.86 (m, 1 H), 4.91-5.00 (m, 2 H), 5.04-5.16 (m, 3 H), 7.27-7.37 (m, 7 H), 7.57 (d, J = 8.0 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.2, 18.1, 19.4, 23.0, 25.4, 25.6, 26.7, 29.2, 29.5, 29.65, 29.67, 29.7, 29.86, 29.88, 29.92, 29.95, 29.98, 30.02, 31.2, 32.2, 34.9, 39.3, 52.5, 53.7, 61.1, 62.3, 66.7, 67.4, 68.4, 69.3, 70.3, 70.6, 70.8, 72.3, 75.0, 100.3, 120.5, 128.2, 128.5, 128.8, 129.0, 133.0, 136.6, 138.1, 157.0, 157.6, 161.3, 171.0, 173.1, 174.9; C77H132N6NaO16에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 1419.9598, 실측치 1419.9584.
실시예 7 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일-2-( N -(6-아지도헥사노일)-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN172)의 합성
실시예 7.1 - N -(6- 아지도헥사노일 )- Val - Cit -4- 아미노벤질 알코올(53)
Figure pct00093
Et3N(80 ㎕, 0.57 mmol)에 이어서 이소부틸 클로로포르메이트(68 ㎕, 0.52 mmol)를 0℃에서 무수 CH2Cl2(3.3 ㎖) 중의 6-아지도헥산산(85.0 mg, 0.541 mmol) 교반 용액에 첨가한다. 30분 후, 0℃에서 캐눌라를 통해 용액을, 3:1 CH2Cl2-MeOH(4 ㎖)에 용해된 아민(52)(Dubowchik, Firestone et al. 2002)(166 mg, 0.438 mmol)을 함유하는 별도의 플라스크로 옮긴다. 원래의 플라스크를 CH2Cl2(2 x 0.5 ㎖)로 린싱하고, 이것을 제2 플라스크로 옮긴다. 5분 후, 반응 혼합물을 실온까지 가온하고 2.5시간 동안 교반한다. 감압 하에서 용매를 농축한 후, 생성된 고체를 톨루엔, 디에틸 에테르, 아세톤 및 MeCN으로 연속적으로 분쇄하고 실리카 겔(MeOH/CHCl3 = 10:90 내지 14:86) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물(53)(160 mg, 71%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.95-97 (m, 6 H), 1.39-1.45 (m, 2 H), 1.53-1.77 (m, 7 H), 1.88-1.95 (m, 1 H), 2.04-2.11 (m, 1 H), 2.29 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 3.09-3.15 (m, 1 H), 3.20-3.26 (1 H), 3.28 (t, J = 6.9 Hz, 2 H), 4.19 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 4.54 (dd, J = 5.0, 8.8 Hz, 1 H), 4.59 (s, 2 H), 7.31 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 7.54 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 18.4, 19.4, 25.6, 26.6, 28.9, 29.6, 31.0, 36.2, 39.4, 51.6, 53.6, 59.4, 64.3, 120.5, 127.9, 137.4, 137.7, 161.0, 170.9, 172.8, 174.9; C24H38N8NaO5에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 541.2863, 실측치 541.2860.
실시예 7.2 - N -(6- 아지도헥사노일 )- Val - Cit -4- 아미노벤질 4- 니트로페닐 카보네이트 (54)
Figure pct00094
N,N-디이소프로필에틸아민(66 ㎕, 0.38 mmol)에 이어서 비스(4-니트로페닐) 카보네이트(116 mg, 0.381 mmol)를 무수 DMF(2.5 ㎖) 중의 알코올(53)(158 mg, 0.305 mmol) 혼합물에 첨가하고, 반응물을 실온에서 Ar 하에서 41시간 동안 교반한다. 혼합물을 고진공 하에서 농축한 후, 미정제 생성물을 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 6:94 내지 11:89) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 회백색 고체로서 표제 화합물(54)(206 mg, 99%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, d6-DMSO) δ 0.84 (d, J = 6.8 Hz, 3 H), 0.87 (d, J = 6.7 Hz, 3 H), 1.27-1.33 (m, 2 H), 1.34-1.64 (m, 7 H), 1.68-1.75 (m, 1 H), 1.95-2.02 (m, 1 H), 2.13-2.24 (m, 2 H), 2.92-2.98 (m, 1 H), 3.00-3.06 (m, 1 H), 4.18-4.21 (m, 1 H), 4.38-4.42 (m, 1 H), 5.24 (s, 2 H), 5.39 (s, 2 H), 5.96 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.55-7.58 (m, 2 H), 7.65 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.81 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 8.06 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 8.29-8.33 (m, 2 H), 10.03 (s, 1 H); 13C NMR (126 MHz, d6-DMSO) δ 18.2, 19.2, 24.8, 25.7, 26.8, 27.9, 29.2, 30.3, 34.9, 38.5, 50.5, 53.1, 57.6, 70.2, 119.0, 122.5, 125.3, 129.3, 129.4, 139.3, 145.1, 151.9, 155.3, 158.8, 170.7, 171.3, 172.3; C31H41N9NaO9에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 706.2925, 실측치 706.2913.
실시예 7.3 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일-2-( N -(6-아지도헥사노일)-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN172)
Figure pct00095
Et3N(20 ㎕, 0.14 mmol)을 Ar 하에서 무수 피리딘(1.0 ㎖) 중의 CN089(61 mg, 0.071 mmol)와 pNP-카보네이트(54)(54 mg, 0.079 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반한다. 26시간 후, 혼합물을 고진공 하에서 농축하여 건조하고, 미정제 잔사를 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 5:95 내지 20:80) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제한 후, C18 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 100:0 내지 90:10) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 CN172(57 mg, 57%)를 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 0.95-0.98 (m, 6 H), 1.24-1.37 (m, 68 H), 1.39-1.45 (m, 2 H), 1.53-1.77 (m, 11 H), 1.87-1.94 (m, 1 H), 2.04-2.11 (m, 1 H), 2.27-2.32 (m, 2 H), 2.33-2.40 (m, 2 H), 3.09-3.14 (m, 1 H), 3.21-3.26 (m, 1 H), 3.28 (t, J = 6.8 Hz, 2 H), 3.66-3.80 (m, 8 H), 3.85-3.87 (m, 2 H), 4.18 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 4.53 (dd, J = 5.1, 8.6 Hz, 1 H), 4.85 (d, J = 3.7 Hz, 1 H), 4.93-4.99 (m, 2 H), 5.10-5.18 (m, 1 H), 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 7.57 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.2, 18.5, 19.4, 23.0, 25.4, 25.6, 25.7, 26.7, 28.9, 29.2, 29.6, 29.69, 29.72, 29.8, 29.90, 29.92, 29.96, 30.02, 30.06, 31.0, 32.3, 35.0, 36.2, 39.4, 51.6, 52.6, 53.7, 59.4, 62.3, 66.8, 68.4, 69.4, 70.2, 70.7, 71.0, 72.3, 75.1, 100.4, 120.5, 129.1, 133.0, 138.3, 157.1, 161.1, 171.0, 172.9, 175.0; C75H135N9NaO15에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 1424.9941, 실측치 1424.9940.
실시예 8 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- O - 헥사코사노일 -2-( N -(5-헥세노일)-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN173)의 합성
실시예 8.1 - N -(5- 헥세노일 )- Val - Cit -4- 아미노벤질 알코올(55)
Figure pct00096
Et3N(50 ㎕, 0.36 mmol)에 이어서 이소부틸 클로로포르메이트(43 ㎕, 0.33 mmol)를 0℃에서 무수 CH2Cl2(2 ㎖) 중의 5-헥센산(39 mg, 0.34 mmol) 교반 용액에 첨가한다. 용액을 실온까지 가온하고 45분 동안 교반한 후, 0℃에서 캐눌라를 통해 5:1 CH2Cl2-MeOH(2.4 ㎖) 중에 아민(52)(Dubowchik, Firestone et al. 2002)(100 mg, 0.264 mmol)을 함유하는 별도의 플라스크로 옮긴다. 원래의 플라스크를 CH2Cl2(0.5 ㎖)로 린싱하고, 이것을 제2 플라스크로 옮긴다. 10분 후, 반응 혼합물을 실온까지 가온하고, MeOH(1 ㎖)를 첨가하여 불균질한 혼합물의 교반을 돕는다. 실온에서 85분 후, 반응물을 Et2NH(25 ㎕)로 급랭시키고, 용매를 감압 하에서 농축한다. 생성된 고체를 디에틸 에테르 및 CH2Cl2로 연속적으로 분쇄하여 회백색 고체로서 표제 화합물(55)(114 mg, 91%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, d6-DMSO) δ 0.84 (d, J = 6.7 Hz, 3 H), 0.86 (d, J = 6.7 Hz, 3 H), 1.32-1.48 (m, 2 H), 1.53-1.64 (m, 3 H), 1.67-1.74 (m, 1 H), 1.95-2.02 (m, 3 H), 2.13-2.24 (m, 2 H), 2.91-2.97 (m, 1 H), 2.99-3.05 (m, 1 H), 4.19 (dd, J = 6.9, 8.5 Hz, 1 H), 4.36-4.41 (m, 1 H), 4.42 (d, J = 5.7 Hz, 2 H), 4.93-4.96 (m, 1 H), 4.98-5.02 (m, 1 H), 5.07 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 5.38 (s, 2 H), 5.74-5.84 (m, 1 H), 5.97 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.81 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 8.03 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 9.88 (s, 1 H); 13C NMR (126 MHz, d6-DMSO) δ 18.2, 19.2, 24.6, 26.7, 29.3, 30.3, 32.7, 34.6, 38.6, 53.0, 57.7, 62.6, 115.0, 118.9, 126.9, 137.4, 137.5, 138.3, 158.8, 170.3, 171.2, 172.3; C24H37N5NaO5에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 498.2692, 실측치 498.2699.
실시예 8.2 - N -(5- 헥세노일 )- Val - Cit -4- 아미노벤질 4- 니트로페닐 카보네이트 (56)
Figure pct00097
비스(4-니트로페닐) 카보네이트(95 mg, 0.31 mmol)에 이어서 N,N-디이소프로필에틸아민(48 ㎕, 0.28 mmol)을 무수 DMF(2.0 ㎖) 중의 알코올(55)(110 mg, 0.231 mmol) 용액에 첨가하고, 반응물을 실온에서 Ar 하에서 7시간 동안 교반한다. 디에틸 에테르를 첨가하여 생성물을 침전시키고 여과하고 디에틸 에테르 및 CH2Cl2로 세척한다. 미정제 생성물을 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 2:98 내지 6:94) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물(56)(80 mg, 54%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, d6-DMSO) δ 0.84 (d, J = 6.8 Hz, 3 H), 0.87 (d, J = 6.7 Hz, 3 H), 1.33-1.49 (m, 2 H), 1.55-1.64 (m, 3 H), 1.68-1.75 (m, 1 H), 1.95-2.02 (m, 3 H), 2.13-2.24 (m, 2 H), 2.91-2.98 (m, 1 H), 3.00-3.06 (m, 1 H), 4.19 (dd, J = 6.8, 8.6 Hz, 1 H), 4.37-4.41 (m, 1 H), 4.93-4.96 (m, 1 H), 4.98-5.02 (m, 1 H), 5.24 (s, 2 H), 5.39 (s, 2 H), 5.75-5.84 (m, 1 H), 5.97 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 7.41 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 7.55-7.58 (m, 2 H), 7.65 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 7.81 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 8.07 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 8.29-8.32 (m, 2 H), 10.04 (s, 1 H); 13C NMR (126 MHz, d6-DMSO) δ 18.2, 19.2, 24.6, 26.8, 29.2, 30.3, 32.7, 34.6, 38.5, 53.1, 57.7, 70.2, 114.9, 119.0, 122.6, 125.4, 129.3, 129.4, 138.3, 139.3, 145.2, 151.9, 155.3, 158.9, 170.7, 171.3, 172.3; C31H40N6NaO9에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 663.2754, 실측치 663.2764.
실시예 8.3 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일-2-( N -(5-헥세노일)-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN173)
Figure pct00098
pNP-카보네이트(56)(16 mg, 0.025 mmol), Et3N(9 ㎕, 0.065 mmol) 및 MeOH(0.1 ㎖)를 무수 피리딘(0.3 ㎖) 중의 CN089(17 mg, 0.020 mmol) 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반한다. 22시간 후, 추가 Et3N(5 ㎕, 0.036 mmol)을 첨가하고 교반을 추가 19시간 동안 계속 수행한다. 반응물을 Et2NH(15 ㎕)로 급랭시키고, 혼합물을 고진공 하에서 농축하여 건조한다. 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 10:90 내지 14:86) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제한 후, 생성물을 물로 분쇄하여 백색 고체로서 표제 화합물 CN173(14.8 mg, 55%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 0.95-0.97 (m, 6 H), 1.22-1.39 (m, 68 H), 1.52-1.76 (m, 9 H), 1.87-1.95 (m, 1 H), 2.03-2.12 (m, 3 H), 2.27-2.30 (m, 2 H), 2.33-2.38 (m, 2 H), 3.08-3.13 (m, 1 H), 3.21-3.26 (m, 1 H), 3.66-3.80 (m, 8 H), 3.85-3.87 (m, 2 H), 4.19 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 4.54 (dd, J = 5.0, 8.7 Hz, 1 H), 4.85 (d, J = 3.7 Hz, 1 H), 4.93-5.05 (m, 4 H), 5.10-5.19 (m, 1 H), 5.75-5.83 (m, 1 H), 7.32 (d, J = 8.1 Hz, 2 H), 7.56 (d, J = 8.1 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.2, 18.5, 19.4, 23.0, 25.2, 25.4, 25.7, 26.6, 29.2, 29.5, 29.66, 29.69, 29.8, 29.87, 29.89, 29.93, 29.96, 29.99, 30.04, 31.0, 32.3, 33.5, 34.9, 35.7, 39.3, 52.6, 53.7, 59.4, 62.3, 66.8, 68.4, 69.4, 70.2, 70.6, 70.9, 72.3, 75.0, 100.4, 115.5, 120.4, 129.1, 132.9, 138.1, 138.2, 157.0, 161.1, 171.0, 172.8, 174.9, 175.0; C75H134N6NaO15에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 1381.9829, 실측치 1381.9825.
실시예 9 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- O - 헥사코사노일 -2-( N - 레불리노일 -Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN171)의 합성
실시예 9.1 - N - 레불리노일 - Val - Cit -4- 아미노벤질 알코올(57)
Et3N(50 ㎕, 0.36 mmol)에 이어서 이소부틸 클로로포르메이트(43 ㎕, 0.33 mmol)를 0℃에서 무수 CH2Cl2(2.0 ㎖) 중의 레불린산(40 mg, 0.34 mmol) 교반 용액에 첨가한다. 용액을 실온까지 가온하고 45분 동안 교반한 후, 0℃에서 캐눌라를 통해 5:1 CH2Cl2-MeOH(2.4 ㎖) 중에 아민(52)(Dubowchik, Firestone et al. 2002)(100 mg, 0.264 mmol)을 함유하는 별도의 플라스크로 옮긴다. 원래의 플라스크를 CH2Cl2(0.5 ㎖)로 린싱하고, 이것을 제2 플라스크로 옮긴다. 5분 후, 반응 혼합물을 실온까지 가온하고 MeOH(1 ㎖)를 첨가하여 불균질한 혼합물의 교반을 돕는다. 실온에서 85분 후, 반응물을 Et2NH(25 ㎕)로 급랭시키고 용매를 감압 하에서 농축한다. 생성된 고체를 디에틸 에테르 및 CH2Cl2로 연속적으로 분쇄하고 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 10:90 내지 18:82) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물(57)(94 mg, 75%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, d6-DMSO) δ 0.84 (d, J = 6.8 Hz, 3 H), 0.86 (d, J = 6.8 Hz, 3 H), 1.32-1.48 (m, 2 H), 1.56-1.63 (m, 1 H), 1.68-1.75 (m, 1 H), 1.94-2.03 (m, 1 H), 2.07 (s, 3 H), 2.35-2.46 (m, 2 H), 2.59-2.70 (m, 2 H), 2.91-2.98 (m, 1 H), 2.99-3.05 (m, 1 H), 4.16 (dd, J = 6.6, 8.4 Hz, 1 H), 4.35-4.39 (m, 1 H), 4.43 (d, J = 5.7 Hz, 2 H), 5.07 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 5.38 (s, 2 H), 5.95 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.88 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 7.98 (d, J = 7.7 Hz, 1 H), 9.79 (s, 1 H); 13C NMR (126 MHz, d6-DMSO) δ 18.1, 19.2, 26.8, 29.0, 29.3, 29.6, 30.3, 38.1, 38.6, 53.1, 57.8, 62.6, 118.8, 126.9, 137.4, 137.5, 158.8, 170.3, 171.1, 171.7, 207.5; C23H35N5NaO6에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 500.2485, 실측치 500.2485.
실시예 9.2 - N - 레불리노일 - Val - Cit -4- 아미노벤질 4- 니트로페닐 카보네이트 (58)
Figure pct00100
비스(4-니트로페닐) 카보네이트(67 mg, 0.22 mmol)에 이어서 N,N-디이소프로필에틸아민(39 ㎕, 0.22 mmol)을 무수 DMF(1.7 ㎖) 중의 알코올(57)(89 mg, 0.19 mmol) 용액에 첨가하고, 반응물을 실온에서 Ar 하에서 7시간 동안 교반한다. 디에틸 에테르를 첨가하여 생성물을 침전시키고 여과하고 디에틸 에테르 및 CH2Cl2로 세척한다. 미정제 생성물을 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 4:96 내지 8:92) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물(58)(70 mg, 58%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 2:3 CDCl3/CD3OD) δ 1.00-1.03 (m, 6 H), 1.53-1.69 (m, 2 H), 1.78-1.86 (m, 1 H), 1.98-2.05 (m, 1 H), 2.08 (s, 3 H), 2.15-2.23 (m, 1 H), 2.44-2.50 (m, 1 H), 2.61 (ddd, J = 5.1, 8.7, 15.6 Hz, 1 H), 2.76-2.82 (m, 1 H), 2.88 (ddd, J = 5.4, 8.7, 18.6 Hz, 1 H), 3.13-3.23 (m, 1 H), 4.16 (d, J = 6.1 Hz, 1 H), 4.52 (dd, J = 4.7, 9.7 Hz, 1 H), 5.27 (s, 2 H), 7.40-7.44 (m, 4 H), 7.69 (d, J = 8.6 Hz, 2 H), 8.21-8.31 (m, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 2:3 CDCl3/CD3OD) δ 18.3, 19.5, 27.3, 29.6, 29.76, 29.83, 30.7, 39.0, 39.9, 54.4, 60.6, 71.3, 120.9, 122.7, 125.9, 130.1, 131.1, 139.6, 146.3, 153.4, 156.5, 161.5, 171.7, 173.3, 175.2, 210.3; C30H38N6NaO10에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 665.2547, 실측치 665.2553.
실시예 9.3 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- O - 헥사코사노일 -2-( N -레불리노일-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN171)
Figure pct00101
Et3N(5 ㎕, 0.036 mmol)을 10:3.5:1 피리딘/MeOH/CHCl3(0.58 ㎖) 중의 CN089(16 mg, 0.019 mmol)와 pNP-카보네이트(58)(14 mg, 0.022 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반한다. 6시간 후, 추가 Et3N(5 ㎕, 0.036 mmol)을 첨가하고 교반을 추가 15시간 동안 계속 수행한다. 반응물을 Et2NH(5 ㎕)로 급랭시키고, 혼합물을 고진공 하에서 농축하여 건조한다. 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 10:90 내지 20:80) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제한 후, 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(2), 5 ㎛, 30 x 250 mm, 40℃, 50 ㎖/분; 이동상 A = 80:20:0.05 MeOH/물/TFA; 이동상 B = 100:0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 10분: 0% 내지 100% B; 10분 내지 29분: 100% B; 29분 내지 30분: 100% 내지 0% B; 30분 내지 31분: 100% A)로 정제하여 3-O-아실 위치이성질체 CN217(3.2 mg, 13%)에 이어서 표제 화합물 CN171을 제공한다. 물을 사용하여 최종 분쇄하여 백색 고체로서 생성물(6.4 mg, 25%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 0.99-1.01 (m, 6 H), 1.22-1.40 (m, 68 H), 1.52-1.73 (m, 6 H), 1.76-1.84 (m, 1 H), 1.95-2.03 (m, 1 H), 2.08 (s, 3 H), 2.15-2.24 (m, 1 H), 2.31-2.41 (m, 2 H), 2.43-2.48 (m, 1 H), 2.57-2.62 (m, 1 H), 2.74-2.80 (m, 1 H), 2.89 (ddd, J = 5.3, 8.8, 18.7 Hz, 1 H), 3.12-3.24 (m, 2 H), 3.66-3.81 (m, 8 H), 3.85-3.88 (m, 2 H), 4.16 (d, J = 6.1 Hz, 1 H), 4.51 (dd, J = 4.6, 9.4 Hz, 1 H), 4.85 (d, J = 3.6 Hz, 1 H), 4.93-5.00 (m, 2 H), 5.09-5.16 (m, 1 H), 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 7.61 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.2, 18.1, 19.4, 23.0, 25.4, 25.7, 26.8, 29.2, 29.56, 29.60, 29.69, 29.71, 29.74, 29.8, 29.90, 29.92, 29.95, 29.98, 30.01, 30.1, 30.4, 32.27, 32.29, 35.0, 38.8, 39.5, 52.6, 53.9, 60.1, 62.3, 66.8, 68.4, 69.4, 70.2, 70.7, 71.0, 72.3, 75.1, 100.4, 120.5, 129.0, 133.0, 138.3, 157.1, 161.0, 171.1, 172.9, 174.7, 175.0, 210.0; C74H132N6NaO16에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 1383.9598, 실측치 1383.9594.
Figure pct00102
CN217에 대한 데이터: 1H NMR (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 0.99-1.01 (m, 6 H), 1.23-1.42 (m, 68 H), 1.48-1.71 (m, 6 H), 1.77-1.85 (m, 1 H), 1.96-2.03 (m, 1 H), 2.08 (s, 3 H), 2.16-2.23 (m, 1 H), 2.30-2.38 (m, 2 H), 2.42-2.47 (m, 1 H), 2.57-2.63 (m, 1 H), 2.74-2.80 (m, 1 H), 2.87-2.93 (m, 1 H), 3.13-3.25 (m, 2 H), 3.53-3.57 (m, 1 H), 3.62-3.79 (m, 6 H), 3.84 (d, J = 2.7 Hz, 1 H), 3.88 (dd, J = 4.8, 10.8 Hz, 1 H), 4.14-4.17 (m, 1 H), 4.18-4.21 (m, 1 H), 4.49-4.53 (m, 1 H), 4.84-4.87 (m, 1 H), 4.91-4.97 (m, 2 H), 5.12-5.17 (m, 1 H), 7.31 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 7.60 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 선택된 피크: 14.2, 18.1, 19.4, 23.0, 25.3, 25.8, 26.8, 29.6, 29.7, 30.0, 30.3, 32.3, 33.5, 34.7, 38.8, 39.4, 52.1, 54.0, 60.2, 62.3, 66.8, 69.3, 70.3, 70.6, 71.1, 76.6, 100.2, 120.5, 129.0; C74H132N6NaO16에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 1383.9598, 실측치 1383.9586.
실시예 10 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일-2-( N -말레이미도헥사노일-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN211)의 합성
실시예 10.1 - N - 플루오레닐메톡시카보닐 - Val - Cit -4- 아미노벤질 4- 니트로페닐 카보네이트 ( BJC209 )
Figure pct00103
비스(4-니트로페닐) 카보네이트(220 mg, 0.72 mmol)에 이어서 i-Pr2NEt(90 ㎕, 0.51 mmol)를 Ar 하에서 DMF(4 ㎖) 중의 알코올(59)(Dubowchik, Firestone et al. 2002)(270 mg, 0.45 mmol) 용액에 첨가하고, 반응물을 실온에서 교반한다. 18시간 후, 혼합물을 MeOH(10 ㎖)로 희석한 후 감압 하에서 농축하고, 잔사를 톨루엔(4 x 10 ㎖)으로 공비혼합시킨다. 미정제 생성물을 실리카 겔(MeOH/CHCl3 = 0:1 내지 1:4) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 황색 고체로서 표제 화합물(60)(219 mg, 64%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 3:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.95 (d, J = 6.8 Hz, 3 H), 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 3 H), 1.50-1.60 (m, 2 H), 1.68-1.75 (m, 1 H), 1.89-1.96 (m, 1 H), 2.06-2.13 (m, 1 H), 3.08-3.13 (m, 1 H), 3.21-3.26 (m, 1 H), 4.00 (d, J = 6.5 Hz, 1 H), 4.22 (dd, J = 6.5, 6.5 Hz, 1 H), 4.35-4.38 (m, 1 H), 4.45-4.49 (m, 1 H), 4.56-4.58 (m, 1 H), 5.25 (s, 2 H), 7.31 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 2 H), 7.38-7.41 (m, 6 H), 7.61-7.64 (m, 4 H), 7.77 (d, J = 7.7 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 3:1 CDCl3/CD3OD) δ 18.1, 19.3, 26.6, 29.5, 31.2, 39.2, 53.5, 61.0, 67.3, 70.9, 120.2, 120.4, 122.1, 125.2, 125.3, 125.5, 127.3, 128.0, 129.8, 139.0, 141.6, 144.0, 144.1, 145.7, 152.8, 155.9, 157.4, 160.8, 170.9, 172.9; C40H42N6O10Na에 대한 HRMS-ESI m/z [M+Na]+: 계산치 789.2860, 실측치 789.2853.
실시예 10.2 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4-O-헥사코사노일-2-( N -플루오레닐메톡시카보닐-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(61)
Figure pct00104
Et3N(24 ㎕, 0.17 mmol)을 Ar 하에서 무수 피리딘(1.8 ㎖) 중의 CN089(112 mg, 0.131 mmol)와 pNP-카보네이트(60)(138 mg, 0.180 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반한다. 23시간 후, 혼합물을 고진공 하에서 농축하여 건조하고, 미정제 잔사를 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 5:95 내지 13:87) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물(61)(122 mg, 63%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 2:3 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 0.95-0.98 (m, 6 H), 1.24-1.37 (m, 68 H), 1.51-1.78 (m, 7 H), 1.89-1.96 (m, 1 H), 2.07-2.13 (m, 1 H), 2.32-2.42 (m, 2 H), 3.07-3.13 (m, 1 H), 3.20-3.25 (m, 1 H), 3.66-3.81 (m, 8 H), 3.84-3.87 (m, 2 H), 3.99 (d, J = 6.7 Hz, 1 H), 4.24 (t, J = 6.9 Hz, 1 H), 4.37 (dd, J = 6.9, 10.5 Hz, 1 H), 4.45 (dd, J = 6.9, 10.5 Hz, 1 H), 4.54 (dd, J = 5.2, 8.6 Hz, 1 H), 4.84 (d, J = 3.7 Hz, 1 H), 4.97-5.03 (m, 2 H), 5.06-5.10 (m, 1 H), 7.30-7.33 (m, 4 H), 7.38-7.41 (m, 2 H), 7.58 (d, J = 8.1 Hz, 2 H), 7.63-7.65 (m, 2 H), 7.78 (d, J = 7.6 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.3, 18.2, 19.4, 23.0, 25.5, 25.7, 26.7, 29.2, 29.6, 29.27, 29.74, 29.8, 29.93, 29.95, 29.98, 30.02, 30.05, 30.08, 30.10, 31.4, 32.3, 35.0, 39.4, 47.6, 52.7, 53.8, 61.2, 62.3, 66.8, 67.4, 68.4, 69.4, 70.2, 70.7, 71.0, 72.3, 75.1, 100.4, 120.3, 120.5, 125.40, 125.44, 127.5, 128.2, 129.1, 133.0, 138.2, 141.7, 144.2, 144.3, 157.1, 157.6, 161.1, 171.1, 173.2, 175.0; C84H137N6O16에 대한 HRMS-ESI m/z [M+H]+: 계산치 1486.0091, 실측치 1486.0099.
실시예 10.3 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- O - 헥사코사노일 -2-(Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(62)
Figure pct00105
피페리딘(0.2 ㎖)을 0℃에서 DMF(2 ㎖) 중의 화합물(61)(125 mg, 0.0841 mmol) 혼합물에 첨가한다. 혼합물을 0℃에서 5분 동안 교반한 후, 실온에서 40분 동안 교반한다. 용매를 고진공 하에서 농축하여 건조하고, 미정제 잔사를 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 15:85 내지 35:65) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물(62)(95 mg, 89%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.91 (m, 9 H), 1.00 (d, J = 6.9 Hz, 3 H), 1.23-1.35 (m, 68 H), 1.49-1.77 (m, 7 H), 1.87-1.94 (m, 1 H), 2.07-2.13 (m, 1 H), 2.32-2.39 (m, 2 H), 3.10-3.16 (m, 1 H), 3.21 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 3.24-3.29 (m, 1 H), 3.65-3.80 (m, 8 H), 3.85-3.87 (m, 2 H), 4.57 (dd, J = 5.3, 8.5 Hz, 1 H), 4.85 (d, J = 3.7 Hz, 1 H), 4.92-4.99 (m, 2 H), 5.10-5.15 (m, 1 H), 7.33 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 7.56 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 13C NMR (75 MHz, 3:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.1, 16.8, 19.5, 22.8, 25.2, 25.5, 26.4, 29.0, 29.4, 29.5, 29.6, 29.7, 29.8, 29.9, 30.0, 31.9, 32.1, 34.8, 39.2, 52.3, 53.1, 60.4, 62.1, 66.6, 68.2, 69.2, 70.0, 70.5, 70.6, 72.2, 74.9, 100.1, 120.3, 128.9, 132.9, 138.0, 156.8, 160.8, 171.1, 174.8, 175.7; C69H127N6O14에 대한 HRMS-ESI m/z [M+H]+: 계산치 1263.9410, 실측치 1263.9419.
실시예 10.4 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일-2-( N -말레이미도헥사노일-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN211)
Figure pct00106
Et3N(0.9 mg, 0.009 mmol)을 DMF(80 ㎕) 중의 아민(62)(10.4 mg, 0.00823 mmol) 및 6-말레이미도헥산산 NHS 에스테르(Leonard and Brunckova 2010)(3.3 mg, 0.011 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반한다. 4시간 후, 혼합물을 고진공 하에서 농축하고, 미정제 잔사를 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 8:92 내지 14:86) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 CN211(11.2 mg, 93%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 0.94-0.97 (m, 6 H), 1.23-1.36 (m, 70 H), 1.49-1.77 (m, 11 H), 1.87-1.94 (m, 1 H), 2.03-2.10 (m, 1 H), 2.24-2.30 (m, 2 H), 2.31-2.41 (m, 2 H), 3.09-3.14 (m, 1 H), 3.20-3.26 (m, 1 H), 3.51 (t, J = 7.2 Hz, 2 H), 3.66-3.81 (m, 8 H), 3.85-3.87 (m, 2 H), 4.17 (d, J = 7.4 Hz, 1 H), 4.53 (dd, J = 5.1, 8.6 Hz, 1 H), 4.85 (d, J = 3.8 Hz, 1 H), 4.92-4.98 (m, 2 H), 5.10-5.15 (m, 1 H), 6.74 (s, 2 H), 7.31 (d, J = 8.1 Hz, 2 H), 7.56 (d, J = 8.1 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.2, 18.5, 19.4, 23.0, 25.4, 25.5, 25.6, 26.6, 28.5, 29.2, 29.5, 29.58, 29.63, 29.65, 29.73, 29.84, 29.86, 29.90, 29.93, 29.97, 30.01, 31.0, 32.2, 34.9, 36.2, 37.9, 39.3, 52.5, 53.7, 59.4, 62.3, 66.7, 68.4, 69.4, 70.2, 70.6, 70.8, 72.3, 75.0, 100.3, 120.4, 129.0, 132.9, 134.5, 138.2, 157.0, 161.0, 171.0, 171.5, 172.8, 174.9; C79H137N7NaO17에 대한 HRMS-ESI m/z [M+Na]+: 계산치 1478.9969, 실측치 1478.9971.
실시예 11 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일-2-( N -(비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메톡시카보닐)-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN209)의 합성
Figure pct00107
비사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 4-니트로페닐 카보네이트(Dommerholt, Schmidt et al. 2010)(2.0 mg, 0.0063 mmol)에 이어서 Et3N(1.5 ㎕, 0.011 mmol)을 DMF(50 ㎕) 중의 아민(62)(6.5 mg, 0.0051 mmol) 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반한다. 20시간 후, 혼합물을 고진공 하에서 농축하고, 미정제 잔사를 실리카 겔(MeOH/CH2Cl2 = 5:95 내지 15:85) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 CN209(6.4 mg, 86%)를 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 2:3 CDCl3/CD3OD) δ 0.68-0.78 (m, 3 H), 0.88-0.90 (m, 6 H), 0.95 (d, J = 6.8 Hz, 3 H), 0.99 (d, J = 6.8 Hz, 3 H), 1.23-1.41 (m, 70 H), 1.50-1.78 (m, 7 H), 1.89-1.96 (m, 1 H), 2.08-2.14 (m, 3 H), 2.22-2.30 (m, 2 H), 2.32-2.42 (m, 4 H), 3.09-3.14 (m, 1 H), 3.20-3.26 (m, 1 H), 3.66-3.81 (m, 8 H), 3.84-3.87 (m, 2 H), 3.95-4.03 (m, 3 H), 4.55 (dd, J = 5.3, 8.3 Hz, 1 H), 4.84 (d, J = 3.7 Hz, 1 H), 4.97-5.03 (m, 2 H), 5.06-5.11 (m, 1 H), 7.30-7.33 (m, 2 H), 7.58 (d, J = 8.2 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 2:3 CDCl3/CD3OD) δ 14.34, 14.36, 18.3, 19.6, 21.7, 23.29, 23.31, 23.7, 23.8, 24.4, 25.8, 26.0, 27.2, 29.3, 29.9, 30.00, 30.03, 30.2, 30.25, 30.31, 30.34, 30.4, 31.6, 32.59, 32.62, 33.9, 35.2, 39.8, 53.2, 54.2, 61.5, 62.5, 67.0, 68.6, 69.8, 70.2, 70.6, 71.0, 71.6, 72.4, 75.4, 99.3, 100.8, 120.8, 129.3, 133.4, 138.7, 157.6, 158.5, 161.6, 171.5, 173.7, 175.2; C80H138N6NaO16에 대한 HRMS-ESI m/z [M+Na]+: 계산치 1462.0067, 실측치 1462.0061.
실시예 12 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일-2-( N -(바이오티노일)-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN201)의 합성
Figure pct00108
D-(+)-바이오틴 NHS 에스테르(5.4 mg, 0.016 mmol)에 이어서 Et3N(3.2 mg, 0.032 mmol)을 DMF(0.10 ㎖) 중의 아민(62)(10.9 mg, 0.00862 mmol) 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반한다. 불균질한 혼합물을 MeOH(1 ㎖) 및 물(0.2 ㎖)로 희석하고 여과하고 MeOH로 세척한다. 모은 침전물을 실리카 겔(MeOH/CHCl3 = 10:90 내지 30:70) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 CN201(8.3 mg, 64%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 0.95-0.98 (m, 6 H), 1.23-1.35 (m, 68 H), 1.41-1.47 (m, 2 H), 1.50-1.79 (m, 11 H), 1.87-1.94 (m, 1 H), 2.06-2.13 (m, 1 H), 2.24-2.41 (m, 4 H), 2.74 (d, J = 12.8 Hz, 1 H), 2.93 (dd, J = 5.0, 12.8 Hz, 1 H), 3.10-3.22 (m, 3 H), 3.66-3.80 (m, 8 H), 3.84-3.87 (m, 2 H), 4.18 (d, J = 6.8 Hz, 1 H), ~4.30 (m, 1 H), 4.48-4.53 (m, 2 H), 4.85 (d, J = 3.7 Hz, 1 H), 4.93-4.98 (m, 2 H), 5.12-5.16 (m, 1 H), 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 7.58 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.2, 18.4, 19.5, 23.0, 25.4, 25.7, 26.0, 26.7, 28.34, 28.37, 29.2, 29.5, 29.6, 29.70, 29.72, 29.79, 29.91, 29.93, 29.96, 30.02, 30.8, 32.3, 35.0, 35.8, 39.5, 40.6, 52.6, 54.0, 55.8, 59.5, 60.6, 62.2, 62.3, 66.8, 68.4, 69.4, 70.3, 70.7, 70.9, 72.3, 75.1, 100.4, 120.5, 129.1, 133.0, 138.3, 157.1, 161.1, 164.9, 171.1, 173.0, 175.0, 175.3; C79H140N8NaO16S에 대한 HRMS-ESI m/z [M+Na]+: 계산치 1512.0006, 실측치 1512.0006.
실시예 13 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일-2-( N -(ω-머캡토(폴리(에틸렌옥시))아세틸)-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN200)의 합성
실시예 13.1 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일-2-( N -(ω-(이소부톡시카보닐티오)(폴리(에틸렌옥시))아세틸)-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(63)
Figure pct00109
i-Pr2NEt(7.4 mg, 0.057 mmol)에 이어서 이소부틸 클로로포르메이트(6.2 ㎕, 0.048 mmol)를 0℃에서 무수 CH2Cl2(0.2 ㎖) 중의 ω-머캡토폴리(에틸렌옥시)아세트산(평균 Mw 1,000)(5.9 mg, 0.0053 mmol) 용액에 첨가한다. 용액을 0℃에서 45분 동안 교반하고 이어서 실온에서 15분 동안 교반한 후, 농축하여 건조한다. 잔사를 톨루엔으로 2회 공증발시켜 과량의 이소부틸 클로로포르메이트 시약을 제거한다. 혼합된 무수물 중간체를 18:1 클로로포름/MeOH(0.95 ㎖)에 용해시키고 실온에서 i-Pr2NEt(2.0 ㎕, 0.012 mmol) 및 아민(62)(3.1 mg, 0.0025 mmol)과 함께 2일 동안 교반한다. 감압 하에서 용매를 농축한 후, 200 mg의 말단-캡핑된 사이클로헥실-결합된 실리카 겔(이솔루트(Isolute) CH(EC))을 함유하는 카트리지 상에 잔사를 (1:1 MeOH/물 용액으로서) 적재한다. 더 높은 극성을 갖는 성분을 제거한 후, 생성물을 MeOH/물(9:1 내지 1:0)로 용출한다. 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(1), 5 ㎛, 250 x 10 mm; 40℃; 2.8 ㎖/분; 이동상 = 80:20 IPA/MeOH)로 더 정제하여 무색 유리로서 표제 화합물(63)(3.2 mg, 53%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 0.95 (d, J = 6.7 Hz, 6 H), 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 3 H), 0.99 (d, J = 6.8 Hz, 3 H), 1.23-1.35 (m, 68 H), 1.49-1.77 (m, 7 H), 1.88-2.02 (m, 2 H), 2.11-2.18 (m, 1 H), 2.31-2.40 (m, 2 H), 3.07 (t, J = 6.5 Hz, 2 H), 3.10-3.15 (m, 1 H), 3.21-3.26 (m, 1 H), 3.61-3.81 (m, ~110 H), 3.85-3.88 (m, 2 H), 4.01 (d, J = 6.6 Hz, 1 H), 4.07 (s, 2 H), 4.25 (d, J = 7.0 Hz, 1 H), 4.55 (dd, J = 5.1, 8.8 Hz, 1 H), 4.85 (d, J = 3.7 Hz, 1 H), 4.93-4.99 (m, 2 H), 5.10-5.15 (m, 1 H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.2, 18.4, 19.1, 19.5, 23.0, 25.4, 25.7, 26.7, 28.3, 29.2, 29.6, 29.7, 29.8, 29.9, 30.0, 30.8, 31.3, 32.3, 35.0, 39.3, 52.6, 53.7, 58.9, 62.3, 66.8, 68.4, 69.4, 70.2, 70.3, 70.5, 70.6, 70.7, 70.8, 70.9, 71.3, 72.3, 74.0, 75.0, 100.4, 120.5, 129.1, 133.0, 138.3, 157.1, 161.1, 171.1, 171.4, 171.6, 172.1, 174.9; C126H236N6Na2O42S에 대한 HRMS-ESI m/z [M(n=24)+2Na]2+: 계산치 1291.8016, 실측치 1291.7981.
실시예 13.2 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일-2-( N -(ω-머캡토(폴리(에틸렌옥시))아세틸)-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN200)
Figure pct00110
완충된 하이드록실아민(0.5 ㎖, 0.5 M NH2OH.HCl, 25 mM EDTA; PBS에 용해되어 있고 3.0 M NaOH에 의해 pH 7.4로 조절됨)을 MeOH(0.5 ㎖) 중의 티오카보네이트(63) 용액에 첨가한다. 반응 바이알을 40℃에서 Ar 하에서 42시간 동안 항온처리한다. 1 g의 말단-캡핑된 C18 실리카(MeOH/IPA = 1:0 내지 1:1)를 함유하는 카트리지에 통과시켜 혼합물을 정제함으로써 표제 화합물 CN200과 비반응된 출발 물질의 혼합물을 제공한다. C121H228N6Na2O40S에 대한 HRMS-ESI m/z [M(n=24)+2Na]2+: 계산치 1241.7754, 실측치 1241.7739.
실시예 14 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -(4-플루오로페닐운데카노일)-2-( N -(6-아지도헥사노일)-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN213)의 합성
실시예 14.1 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-2-아미노-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- O -(4- 플루오로페닐운데카노일 )옥타데칸-1,3,4-트리올(65)
Figure pct00111
1,4-디옥산(3 ㎖) 및 1 M HCl(0.6 ㎖) 중의 화합물(64)(20 mg, 0.027 mmol)(Li, X., Fujio, M. et al. 2010) 용액을 80℃에서 1시간 동안 가열한다. 혼합물을 CHCl3/MeOH(1:1, 30 ㎖)로 희석하고 감압 하에서 농축한다. 미정제 잔사를 실리카 겔(MeOH/CHCl3 = 0:10 내지 3:7) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물(65)(14 mg, 70%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3/CD3OD 5:1) δ 0.88 (t, J = 6.9, 6.9 Hz, 3 H), 1.24-1.32 (m, 38 H), 1.54-1.64 (m, 5 H), 1.76-1.83 (m, 1 H), 2.34 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 2 H), 2.57 (dd, J = 7.7, 7.7 Hz, 2 H), 3.24-3.27 (m, 1 H), 3.54 (dd, J = 9.7, 9.7 Hz, 2 H), 3.76-3.87 (m, 6 H), 3.97 (br d, J = 2.8 Hz), 4.09 (dd, J = 2.8, 10.6 Hz), 4.88 (d, J = 3.7 Hz), 6.92-6.96 (m, 2 H), 7.10-7.14 (m, 2 H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3/CD3OD 5:1) δ 13.0, 21.9, 24.2, 24.4, 28.4, 28.58, 28.63, 28.67, 28.73, 28.77, 28.82, 29.0, 30.4, 30.9, 31.2, 33.7, 34.3, 52.2, 61.0, 64.1, 68.3, 68.6, 69.1, 69.3, 70.2, 70.4, 72.5, 99.0, 113.9, 114.1, 128.9, 129.0, 137.8, 159.6, 161.5, 173.4; 19F NMR (470 MHz CDCl3/CD3OD 5:1) δ -118.68; C41H73NO9F에 대한 HRMS-ESI m/z [M+H]+: 계산치 742.5266, 실측치 742.5269.
실시예 14.2 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -(4-플루오로페닐운데카노일)-2-( N -(6-아지도헥사노일)-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN213)
Figure pct00112
Et3N(3.6 ㎕, 0.026 mmol)을 Ar 하에서 무수 피리딘(0.26 ㎖) 중의 아민(65)(14 mg, 0.018 mmol)과 pNP-카보네이트(54)(20 mg, 0.029 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반한다. 24시간 후, 추가 분량의 Et3N(1.6 ㎕, 0.012 mmol)을 첨가한다. 추가 8시간 후, 휘발성 물질을 감압 하에서 제거한다. 미정제 잔사를 실리카 겔(MeOH/CHCl3 = 0:1 내지 3:7) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 CN213(17 mg, 71%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 5:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.88 (t, J = 6.9, 6.9 Hz, 3 H), 0.94-0.97 (m, 6 H), 1.25-1.35 (m, 38 H), 1.39-1.45 (m, 2 H), 1.52-1.76 (m, 12 H), 1.86-1.93 (m, 1 H), 2.03-2.10 (m, 1 H), 2.29 (ddd, J = 1.3, 7.5. 7.5 Hz, 2 H), 2.33-2.37 (m, 2 H), 2.57 (dd, J = 7.6, 7.6 Hz, 2 H), 3.08-3.13 (m, 1 H), 3.20-3.24 (m, 1 H), 3.28 (dd, J = 7.0, 7.0 Hz, 2 H), 3.65-3.77 (m, 8 H), 3.84-3.87 (m, 2 H), 4.52-4.55 (m, 1 H), 4.84 (d, 3.8 Hz, 1 H), 4.94-4.97 (m, 2 H), 5.13-5.15 (m, 1 H), 6.93-6.97 (m, 2 H), 7.10-7.14 (m, 2 H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3/CD3OD 5:1) δ 13.6, 17.8, 18.8, 22.3, 24.7, 24.9, 25.0, 26.0, 28.2, 28.6, 28.8, 28.9, 29.0, 29.1, 29.17, 29.23, 29.3, 30.4, 31.3, 31.6, 34.2, 34.7, 35.5, 38.6, 50.9, 51.8, 53.0, 58.7, 61.6, 66.1, 67.7, 68.7, 69.5, 69.9, 70.2, 71.7, 74.3, 99.7, 114.4, 114.5, 119.8, 128.4, 129.27, 129.33, 132.3, 137.5, 138.2, 156.3, 159.9, 160.3, 161.8, 170.3, 172.1, 174.1, 174.2; 19F NMR (470 MHz CDCl3/CD3OD 5:1) δ -118.86; C66H109N9O15F에 대한 HRMS-ESI m/z [M+H]+: 계산치 1286.8022, 실측치 1286.8027.
실시예 15 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-2-아미노-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- O - 헥사코사노일 노난 -1,3,4- 트리올(CN214)의 합성
실시예 15.1 - ( 2 S ,3 S ,4 R )-2-아미노-1- O -α-D- 갈락토피라노실 -4- O - 헥사코사노일 노난 -1,3,4-트리올(67)
Figure pct00113
화합물(66)(엔조 라이프 사이언시스(Enzo Life Sciences), 10.2 mg, 0.014 mmol)을 83℃에서 10:1:1.3 1,4-디옥산/물/1 M HCl(3.57 ㎖)에서 Ar 하에서 30분 동안 가열한 후, 실온까지 냉각시킨다. 동결건조 후, 생성된 고체를 실리카 겔(MeOH/CHCl3 = 15:85 내지 25:75) 상에서 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물(67)(6.1 mg, 60%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3/CD3OD 2:1) δ 0.87-0.91 (m, 6 H), 1.22-1.40 (m, 50 H), 1.54-1.67 (m, 3 H), 1.78-1.84 (m, 1 H), 2.35-2.38 (m, 2 H), 3.26-3.29 (m, 1 H), 3.51-3.55 (m, 1 H), 3.71-3.73 (m, 1 H), 3.76 (dd, J = 3.3, 10.0 Hz, 1 H), 3.79-3.81 (m, 2 H), 3.83-3.86 (m, 2 H), 3.97 (d, J = 3.3 Hz, 1 H), 4.11 (dd, J = 3.0, 10.7 Hz, 1 H), 4.88 (d, J = 3.8 Hz, 1 H), 4.93 (dt, J = 3.0, 8.7 Hz, 1 H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3/CD3OD 2:1) δ 14.1, 14.2, 22.8, 23.0, 25.0, 25.4, 29.5, 29.68, 29.71, 29.9, 30.00, 30.03, 30.05, 31.4, 31.9, 32.3, 34.8, 53.1, 62.2, 65.4, 69.4, 70.2, 70.4, 71.2, 71.6, 73.7, 100.0, 174.6; C41H82NO9에 대한 HRMS-ESI [M+H]+: 계산치 732.5990, 실측치 732.5984.
실시예 15.2 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4- O -헥사코사노일-2-( N -(6-아지도헥사노일)-Val-Cit-4-아미노벤질옥시카보닐아미노)노난-1,3,4-트리올(CN214)
Et3N(0.7 ㎕, 0.012 mmol)을 Ar 하에서 무수 피리딘(0.12 ㎖) 중의 아민(67)(6.1 mg, 0.0083 mmol)과 pNP-카보네이트(54)(10 mg, 0.015 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반한다. 24시간 후, 추가 Et3N(0.7 ㎕, 0.005 mmol)을 첨가하고 교반을 추가 8시간 동안 계속 수행한다. 혼합물을 고진공 하에서 농축하여 건조하고, 미정제 잔사를 실리카 겔(MeOH/CHCl3 = 2:98 내지 20:80) 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물 CN214(7.0 mg, 66%)를 제공한다. 1H NMR (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.87-0.90 (m, 6 H), 0.95-0.97 (m, 6 H), 1.23-1.35 (m, 50 H), 1.39-1.46 (m, 2 H), 1.52-1.77 (m, 11 H), 1.87-1.94 (m, 1 H), 2.04-2.11 (m, 1 H), 2.27-2.32 (m, 2 H), 2.33-2.40 (m, 2 H), 3.09-3.14 (m, 1 H), 3.21-3.26 (m, 1 H), 3.28 (t, J = 6.9 Hz, 2 H), 3.66-3.80 (m, 8 H), 3.84-3.87 (m, 2 H), 4.19 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 4.54 (dd, J = 5.1, 8.7 Hz, 1 H), 4.85 (d, J = 3.8 Hz, 1 H), 4.94-5.01 (m, 2 H), 5.10-5.18 (m, 1 H), 7.32 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 7.57 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 13C NMR (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) δ 14.1, 14.2, 18.5, 19.4, 22.8, 23.0, 25.3, 25.4, 25.6, 26.6, 28.9, 29.0, 29.5, 29.59, 29.63, 29.65, 29.8, 29.95, 29.98, 31.00, 31.9, 32.2, 34.9, 36.2, 39.3, 51.5, 52.5, 53.7, 59.4, 62.3, 66.7, 68.4, 69.4, 70.2, 70.6, 70.9, 72.2, 75.0, 100.3, 120.4, 129.0, 132.9, 138.2, 157.0, 161.0, 171.0, 172.8, 174.91, 174.95; C66H117N9NaO15에 대한 HRMS-ESI [M+Na]+: 계산치 1298.8567, 실측치 1298.8553.
실시예 16 - (2 S ,3 S ,4 R )-1- O -α-D-갈락토피라노실-4-헥사코사노일-2-((4-(2-(FFRKSIINFEKL)-2-옥소에톡시)이미노)펜타노일옥시)메톡시카보닐아미노)옥타데칸-1,3,4-트리올(CN152)
Figure pct00115
물/아닐린/TFA(200:6:4, 300 ㎕)의 수성 혼합물을 THF/MeOH(2:1, 600 ㎕) 중의 펩티드 2-(아미노옥시)아세틸-FFRKSIINFEKL(5.1 mg, 3.16 mmol) 교반 현탁액에 첨가한다. 일단 용해되면, THF/MeOH(1:1, 600 ㎕)에 용해된 케톤 CN146(2.5 mg, 2.4 mmol) 용액을 첨가하고 반응 혼합물을 25℃에서 48시간 동안 교반한다. 용매를 제거하고 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(2), 5 ㎛, 250 x 30 mm, 30℃, 40 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.1 물/TFA; 이동상 B = 100:0.1 MeOH/TFA; 0분 내지 15분: 50% 내지 100% B; 15분 내지 23분: 100% B; 23분 내지 25분: 100% 내지 50% B; 25분 내지 26분: 50% B)로 정제하여 표제 화합물 CN152(2.1 mg, 33%)를 제공한다. 1H NMR (500 MHz, d6-DMSO) δ 0.68-0.95 (m, 24 H), 1.02-1.45 (m, 74 H), 1.70-1.50 (m, 27 H), 1.80 (s, 3 H), 2.5-2.3 (m, 6 H), 2.90-2.71 (m, 8 H), 3.21-2.92 (m, 6 H), 3.69-3.42 (m, 12 H), 4.60-4.08 (m, 18 H), 4.63 (s, 1 H), 4.76 (brs, 1 H), 5.02 (brs, 1 H), 5.06 (brs, 1 H), 5.68-5.61 (m, 2 H), 8.39-7.32 (m, 22 H), 7.42 (m, 15 H), 6.92 (s, 1 H); 13C NMR (126 MHz, d6-DMSO) δ 73.1 (C-5'), 79.8 (C-2"), 99.5 (H-1); C134H226N20O32에 대한 HRMS (ESI) m/z [M+2H]2+: 계산치 1313.8336, 실측치 1313.8358.
실시예 17 - CN178
Figure pct00116
물/아닐린/TFA(200:6:4, 300 ㎕)의 수성 혼합물을 THF/MeOH(2:1, 600 ㎕) 중의 펩티드 2-(아미노옥시)아세틸-FFRKKAVYNFATM(2 mg, 1.17 μmol) 교반 현탁액에 첨가한다. 일단 용해되면, THF/MeOH(1:1, 600 ㎕) 중의 케톤 CN146(1 mg, 0.97 μmol) 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 48시간 동안 교반한다. 용매를 제거하고 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(2), 5 ㎛, 250 x 30 mm, 30℃, 40 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.1 물/TFA; 이동상 B = 100:0.1 MeOH/TFA; 0분 내지 15분: 50% 내지 100% B; 15분 내지 23분: 100% B; 23분 내지 25분: 100% 내지 50% B; 25분 내지 26분: 50% B)로 정제하여 표제 화합물 CN178(2.0 mg, 0.74 μmol, 76%, HPLC에 의해 측정된 순도 94.0%)을 제공한다. 1H NMR (500 MHz, d6-DMSO) δ 0.66-0.78 (m, 6 H), 0.78-0.95 (m, 9 H), 0.95-1.42 (m, 79 H), 1.42-1.73 (m, 17 H), 1.73-1.82 (m, 3 H), 1.82-1.93 (m, 2 H), 1.93-2.06(m, 5 H), 2.23-2.33 (m, 2 H), 2.33-2.39 (m, 1 H), 2.70-2.89 (m, 6 H), 3.08-3.15 (m, 2 H), 3.40-3.73 (m, 14 H), 3.75-3.82 (m, 1 H), 3.88 (t, J = 8.1 Hz, 1 H), 3.97-4.16 (m, 3 H), 4.17-4.40 (m, 9 H), 4.40-4.55 (m, 5 H), 4.55-4.63 (m, 1 H), 4.65 (d, J = 3.1 Hz, 1 H), 4.70-4.74 (m, 2 H), 4.77 (t, J = 6.4 Hz, 1 H), 4.83-4.89 (m, 1 H), 5.01 (d, J = 6.2 Hz, 1 H), 5.04-5.09 (m, 1 H), 5.15 (d, J = 5.6 Hz, 1 H), 5.18 (d, J = 3.6 Hz, 1 H), 5.60-5.69 (m, 2 H), 6.60 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 6.91-6.95 (m, 1 H), 6.98 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 7.05-7.32 (m, 15 H), 7.31-8.27 (m, 23 H), 9.12 (br, s, 1 H); C137H225N21O32S에 대한 HRMS-ESI m/z [M+2H]2+: 계산치 1354.3173, 실측치 1354.3180.
실시예 18 - CN185
Figure pct00117
CHCl3(280 ㎕) 중의 TBTA(0.33 mg, 0.6 μmol)에 이어서 0.25 mM CuSO4(100 ㎕)의 수용액을 DMSO(600 ㎕) 및 MeOH(280 ㎕) 중의 펩티드 4-펜티노일-FFRKSIINFEKL(4.5 mg, 2.80 μmol) 및 CN215(3.03 mg, 2.16 μmol)의 교반 용액에 첨가한다. 소량의 구리 포일(5 mm x 2 mm)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한다. 반응 혼합물 상에 Ar 스트림을 통과시켜 반응 혼합물을 농축하고 잔사를 0.05 M EDTA의 수용액(pH 7.7)(2 x 10 ㎖) 및 물(2 x 10 ㎖)과 함께 원심분리하고 남은 펠렛을 물(3 ㎖)로부터 동결건조한다, 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(1), 5 ㎛, 250 x 10 mm, 40℃, 2.1 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.05 물/TFA; 이동상 B = 100:0.0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 7분: 80% 내지 100% B; 7분 내지 14분: 100% B; 14분 내지 15분: 100% 내지 80% B; 15분 내지 20분: 80% B)로 정제하여 표제 화합물 CN185(2.55 mg, 44%, HPLC에 의해 측정된 순도 97.8%)를 제공한다. C138H232N22O31에 대한 HRMS-ESI m/z [M+2H]2+: 계산치 1347.3548, 실측치 1347.3610.
실시예 19 - CN174
Figure pct00118
물/아닐린/TFA(200:6:4, 300 ㎕)의 수성 혼합물을 THF/MeOH(2:1, 600 ㎕) 중의 펩티드 2-(아미노옥시)아세틸-FFRKSIINFEKL(9 mg, 5.57 μmol) 교반 현탁액에 첨가한다. 일단 용해되면, THF/MeOH(1:1, 600 ㎕) 중의 케톤 CN171(5.7 mg, 4.2 μmol) 용액을 반응 혼합물에 첨가한 후, 추가 분량의 물/아닐린/TFA(200:6:4, 100 ㎕)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 48시간 동안 교반한다. 용매를 제거하고, 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(1), 5 ㎛, 250 x 10 mm, 40℃, 1.8 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.05 물/TFA; 이동상 B = 100:0.0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 5분: 80% 내지 100% B; 5분 내지 15분: 100% B; 15분 내지 16분: 100% 내지 80% B; 16분 내지 20분: 80% B)로 정제하여 표제 화합물 CN174(0.3 mg, 2.5%, HPLC에 의해 측정된 순도 95.1%)를 제공한다. C151H251N25O34에 대한 HRMS-ESI m/z [M+2H]2+: 계산치 1479.9262, 실측치 1479.9421.
실시예 20 - CN175
Figure pct00119
CHCl3(280 ㎕) 및 MeOH(280 ㎕)에 이어서 0.25 mM CuSO4의 수용액(107 ㎕)을 DMSO(280 ㎕) 중의 펩티드 4-펜티노일-FFRKSIINFEKL(5.03 mg, 3.10 μmol), CN172(3.03 mg, 2.16 μmol) 및 TBTA(0.80 mg, 1.5 μmol)의 교반 용액에 첨가한다. 소량의 구리 포일(5 mm x 2 mm)을 첨가하고 반응 혼합물을 20℃에서 48시간 동안 교반한다. 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하여 잔사를 제공하고, 이 잔사를 0.1 M EDTA의 수용액(pH 7.7)(2 x 10 ㎖) 및 물(2 x 10 ㎖)과 함께 원심분리하고, 남은 펠렛을 고진공 하에서 건조한다. 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(1), 5 ㎛, 250 x 10 mm, 40℃, 1.8 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.05 물/TFA; 이동상 B = 100:0.0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 5분: 80% 내지 100% B; 5분 내지 15분: 100% B; 15분 내지 16분: 100% 내지 80% B; 16분 내지 20분: 80% B)로 정제하여 표제 화합물 CN175(1.6 mg, 25%, HPLC에 의해 측정된 순도 97.9%)를 제공한다. C155H257N27O33에 대한 HRMS-ESI m/z [M+2H]2+: 계산치 1512.9553, 실측치 1512.9609.
실시예 21 - CN194
Figure pct00120
CHCl3(93 ㎕) 및 MeOH(93 ㎕)에 이어서 0.25 mM CuSO4의 수용액(31 ㎕)을 DMSO(93 ㎕) 중의 펩티드 4-펜티노일-FFRKNLVPMVATV(2.0 mg, 1.25 μmol), CN172(1.0 mg, 0.71 μmol) 및 TBTA(0.29 mg, 0.55 μmol)의 교반 용액에 첨가한다. 소량의 구리 포일(5 mm x 2 mm)을 첨가하고 반응 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반한다. 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하여 잔사를 제공하고, 이 잔사를 0.025 M EDTA의 수용액(pH 7.7)(2 x 10 ㎖) 및 물(2 x 10 ㎖)과 함께 원심분리하고, 남은 펠렛을 고진공 하에서 건조한다. 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(2), 5 ㎛, 250 x 30 mm, 30℃, 40 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.1 물/TFA; 이동상 B = 100:0.1 MeOH/TFA; 0분 내지 15분: 50% 내지 100% B; 15분 내지 23분: 100% B; 23분 내지 25분: 100% 내지 50% B; 25분 내지 26분: 50% B)로 정제하여 표제 화합물 CN194(1.65 mg, 77%, HPLC에 의해 측정된 순도 94.2%)를 제공한다. C152H256N27O32SNa에 대한 HRMS-ESI m/z [M+H+Na]2+: 계산치 1513.9439, 실측치 1513.9397.
실시예 22 - CN188
Figure pct00121
CHCl3(93 ㎕) 및 MeOH(93 ㎕)에 이어서 0.25 mM CuSO4의 수용액(31 ㎕)을 DMSO(93 ㎕) 중의 펩티드 4-펜티노일-ILARNLVPMVATV(2.12 mg, 1.44 μmol), CN172(0.99 mg, 0.71 μmol) 및 TBTA(0.22 mg, 0.41 μmol)의 교반 용액에 첨가한다. 소량의 구리 포일(5 mm x 2 mm)을 첨가하고 반응 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반한다. 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하여 잔사를 제공하고, 이 잔사를 0.025 M EDTA의 수용액(pH 7.7)(2 x 10 ㎖) 및 물(2 x 10 ㎖)과 함께 원심분리하고, 남은 펠렛을 고진공 하에서 건조한다. 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(2), 5 ㎛, 250 x 30 mm, 30℃, 40 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.1 물/TFA; 이동상 B = 100:0.1 MeOH/TFA; 0분 내지 15분: 50% 내지 100% B; 15분 내지 23분: 100% B; 23분 내지 25분: 100% 내지 50% B; 25분 내지 26분: 50% B)로 정제하여 표제 화합물 CN194(1.00 mg, 50%, HPLC에 의해 측정된 순도 94.8%)를 제공한다. C143H253N26O32SNa에 대한 HRMS-ESI m/z [M+H+Na]2+: 계산치 1451.4306, 실측치 1451.4269.
실시예 23 - CN197
Figure pct00122
CHCl3(186 ㎕) 및 MeOH(186 ㎕)에 이어서 0.25 mM CuSO4의 수용액(62 ㎕)을 DMSO(186 ㎕) 중의 펩티드 4-펜티노일-FFRKAVGALEGPRNQDWLGVPRQL(7.72 mg, 2.73 μmol), CN172(2.02 mg, 1.44 μmol) 및 TBTA(0.42 mg, 0.79 μmol)의 교반 용액에 첨가한다. 소량의 구리 포일(5 mm x 2 mm)을 첨가하고 반응 혼합물을 20℃에서 13시간 동안 교반한다. 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하여 잔사를 제공하고, 이 잔사를 0.05 M EDTA의 수용액(pH 7.7)(2 x 10 ㎖) 및 물(3 x 10 ㎖)과 함께 원심분리하고, 남은 펠렛을 고진공 하에서 건조한다. 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(1), 5 ㎛, 250 x 10 mm, 40℃, 2.0 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.05 물/TFA; 이동상 B = 100:0.0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 8분: 80% 내지 100% B; 8분 내지 15분: 100% B; 15분 내지 16분: 100% 내지 80% B; 16분 내지 20분: 80% B)로 정제하여 표제 화합물 CN197(4.90 mg, 80%, HPLC에 의해 측정된 순도 95.1%)을 제공한다. C206H338N47O48에 대한 HRMS-ESI m/z [M+3H]3+: 계산치 1413.5073, 실측치 1413.4989.
실시예 24 - CN196
Figure pct00123
CHCl3(186 ㎕) 및 MeOH(186 ㎕)에 이어서 0.25 mM CuSO4의 수용액(62 ㎕)을 DMSO(186 ㎕) 중의 펩티드 4-펜티노일-FFRKDLAQMFFCFKELEGW(7.07 mg, 2.80 μmol), CN172(2.02 mg, 1.44 μmol) 및 TBTA(0.40 mg, 0.75 μmol)의 교반 용액에 첨가한다. 소량의 구리 포일(5 mm x 2 mm)을 첨가하고 반응 혼합물을 20℃에서 48시간 동안 교반한다. 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하여 잔사를 제공하고, 이 잔사를 0.05 M EDTA의 수용액(pH 7.7)(2 x 10 ㎖) 및 물(2 x 10 ㎖)과 함께 원심분리하고, 남은 펠렛을 고진공 하에서 건조한다. 미정제 생성물을 DMSO(500 ㎕)에 용해시키고 TCEP-HCl(6 mg, 0.021 mmol)로 18시간 동안 처리한 후, 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(1), 5 ㎛, 250 x 10 mm, 40℃, 2.0 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.05 물/TFA; 이동상 B = 100:0.0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 8분: 80% 내지 100% B; 8분 내지 15분: 100% B; 15분 내지 16분: 100% 내지 80% B; 16분 내지 20분: 80% B)로 정제하여 표제 화합물 CN197(2.03 mg, 36%, HPLC에 의해 측정된 순도 96.2%)을 제공한다. C198H306N35O43S2에 대한 HRMS-ESI m/z [M+3H]3+: 계산치 1309.0680, 실측치 1309.0685.
실시예 25 - CN203
Figure pct00124
CHCl3(90 ㎕) 및 MeOH(90 ㎕)에 이어서 0.25 mM CuSO4의 수용액(30 ㎕)을 DMSO(90 ㎕) 중의 펩티드 4-펜티노일-FFFRKSVYDFFVWLKFFHRTCKCTGNFA(5.1 mg, 1.5 μmol), CN172(1.02 mg, 0.73 μmol) 및 TBTA(0.21 mg, 0.40 μmol)의 교반 용액에 첨가한다. 소량의 구리 포일(5 mm x 2 mm)을 첨가하고 반응 혼합물을 20℃에서 20시간 동안 교반한다. 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하여 잔사를 제공하고, 이 잔사를 0.05 M EDTA의 수용액(pH 7.7)(2 x 10 ㎖) 및 물(10 ㎖)과 함께 원심분리하고, 남은 펠렛을 고진공 하에서 건조한다. K2CO3(5 mg)으로 중화된 물(90 ㎕) 중의 TCEP-HCl(4.5 mg, 0.016 mmol) 수용액을 HFIP(1.2 ㎖) 및 Et3N(60 ㎕) 중의 미정제 생성물 용액에 첨가한다. 11시간 후, 환원된 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(1), 5 ㎛, 250 x 10 mm, 40℃, 2.0 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.05 물/TFA; 이동상 B = 100:0.0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 10분: 80% 내지 100% B; 10분 내지 13분: 100% B; 13분 내지 13.5분: 100% 내지 80% B; 13.5분 내지 17.5분: 80% B)로 정제하여 표제 화합물 CN203(1.1 mg, 31%, HPLC에 의해 측정된 순도 94.8%)을 제공한다. C245H370N49O51S2에 대한 HRMS-ESI m/z [M+3H]3+: 계산치 1626.9024, 실측치 1626.9104.
실시예 26 - CN189
Figure pct00125
MeOH(60 ㎕) 및 CHCl3(45 ㎕)에 이어서 0.25 mM CuSO4의 수용액(15 ㎕)을 DMSO(30 ㎕) 중의 펩티드 4-펜티노일-SVYDFFVWLKFFHRTCKCTGNFA(1.8 mg, 0.62 μmol), CN172(0.51 mg, 0.36 μmol) 및 TBTA(0.38 mg, 0.72 μmol)의 교반 용액에 첨가한다. 소량의 구리 포일(5 mm x 2 mm)을 첨가하고 반응 혼합물을 20℃에서 48시간 동안 교반한다. 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하여 잔사를 제공하고, 이 잔사를 0.05 M EDTA의 수용액(pH 7.7)(2 x 10 ㎖) 및 물(10 ㎖)과 함께 원심분리하고, 남은 펠렛을 고진공 하에서 건조한다. 미정제 생성물을 DMSO(900 ㎕)에 용해시키고 TCEP-HCl(10 mg, 0.034 mmol)로 18시간 동안 처리한 후, 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(1), 5 ㎛, 250 x 10 mm, 40℃, 2.0 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.05 물/TFA; 이동상 B = 100:0.0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 8분: 80% 내지 100% B; 8분 내지 15분: 100% B; 15분 내지 16분: 100% 내지 80% B; 16분 내지 20분: 80% B)로 정제하여 표제 화합물 CN189(0.5 mg, 33%, HPLC에 의해 측정된 순도 82%)를 제공한다. C215H328N41O47S2에 대한 HRMS-ESI m/z [M+3H]3+: 계산치 1434.1248, 실측치 1434.1223.
실시예 27 - CN191
Figure pct00126
CHCl3(140 ㎕) 중의 TBTA(0.26 mg, 0.49 μmol)에 이어서 0.25 mM CuSO4의 수용액(50 ㎕)을 DMSO(140 ㎕) 및 MeOH(140 ㎕) 중의 펩티드 4-펜티노일-FFRKKISQAVHAAHAEINEAGRESIINFEKLTEWT(5.3 mg, 1.3 μmol) 및 CN172(1 mg, 0.71 μmol)의 교반 용액에 첨가한다. 소량의 구리 포일(5 mm x 2 mm)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한다. 반응 혼합물 상에서 Ar 스트림을 통과시켜 반응 혼합물을 농축하고 잔사를 0.05 M EDTA의 수용액(pH 7.7)(2 x 10 ㎖) 및 물(10 ㎖)과 함께 원심분리하고, 남은 펠렛을 물(3 ㎖)로부터 동결건조한다. 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(2), 5 ㎛, 250 x 30 mm, 30℃, 40 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.1 물/TFA; 이동상 B = 100:0.1 MeOH/TFA; 0분 내지 15분: 50% 내지 100% B; 15분 내지 23분: 100% B; 23분 내지 25분: 100% 내지 50% B; 25분 내지 26분: 50% B)로 정제하여 표제 화합물 CN191(2.7 mg, 69%, HPLC에 의해 측정된 순도 97.6%)을 제공한다. C264H426N61O69에 대한 HRMS-ESI m/z [M+3H]3+: 계산치 1852.3822, 실측치 1852.3904.
실시예 28 - CN206
Figure pct00127
CHCl3(200 ㎕) 중의 TBTA(0.74 mg, 1.4 μmol)에 이어서 0.25 mM CuSO4의 수용액(50 ㎕)을 DMSO(200 ㎕) 및 MeOH(200 ㎕) 중의 펩티드 4-펜티노일-FFRKSIINFEKL(6.2 mg, 3.8 μmol) 및 CN213(2.5 mg, 1.9 μmol)의 교반 용액에 첨가한다. 소량의 구리 포일(5 mm x 2 mm)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한다. 반응 혼합물 상에서 Ar 스트림을 통과시켜 반응 혼합물을 농축하고 잔사를 0.05 M EDTA의 수용액(pH 7.7)(2 x 10 ㎖) 및 물(10 ㎖)과 함께 원심분리하고, 남은 펠렛을 물(3 ㎖)로부터 동결건조한다. 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(2), 5 ㎛, 250 x 30 mm, 30℃, 40 ㎖/분; 이동상 A = 40:60:0.05 물/MeOH/TFA; 이동상 B = 100:0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 14분: 0% 내지 100% B; 14분 내지 16분: 100% B; 16분 내지 16.5분: 100% 내지 0% B; 16.5분 내지 18분: 0% B)로 정제하여 표제 화합물 CN206(1.24 mg, 22%, HPLC에 의해 측정된 순도 95.8%)을 제공한다. C146H230FN27O33에 대한 HRMS-ESI m/z [M+2H]2+: 계산치 1454.8488, 실측치 1454.8557.
실시예 29 - CN207
Figure pct00128
CHCl3(200 ㎕) 중의 TBTA(0.59 mg, 1.1 μmol)에 이어서 0.25 mM CuSO4의 수용액(50 ㎕)을 DMSO(200 ㎕) 및 MeOH(200 ㎕) 중의 펩티드 4-펜티노일-FFRKSIINFEKL(4.8 mg, 3.0 μmol) 및 CN214(2.0 mg, 1.6 μmol)의 교반 용액에 첨가한다. 소량의 구리 포일(5 mm x 2 mm)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한다. 반응 혼합물 상에서 Ar 스트림을 통과시켜 반응 혼합물을 농축하고 잔사를 0.05 M EDTA의 수용액(pH 7.7)(2 x 10 ㎖) 및 물(10 ㎖)과 함께 원심분리하고, 남은 펠렛을 물(3 ㎖)로부터 동결건조한다. 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(2), 5 ㎛, 250 x 30 mm, 30℃, 40 ㎖/분; 이동상 A = 40:60:0.05 물/MeOH/TFA; 이동상 B = 100:0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 14분: 0% 내지 100% B; 14분 내지 17분: 100% B; 17분 내지 17.5분: 100% 내지 0% B; 17.5분 내지 19분: 0% B)로 정제하여 표제 화합물 CN207(2.22 mg, 49%, HPLC에 의해 측정된 순도 94.9%)을 제공한다. C146H239N27O33에 대한 HRMS-ESI m/z [M+2H]2+: 계산치 1449.8849, 실측치 1449.8951.
실시예 30 - CN212
Figure pct00129
Ar 하에서 펩티드 CFFRKSIINFEKL(1.4 mg, 0.85 μmol) 및 CN211(0.85 mg, 0.58 μmol)을 탈산소화된 DMF(75 ㎕)에 용해시키고 실온에서 4시간 동안 교반한다. 용매의 농축 후, 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(1), 5 ㎛, 250 x 10 mm, 40℃, 1.8 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.05 물/TFA; 이동상 B = 100:0.0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 5분: 80% 내지 100% B; 5분 내지 15분: 100% B; 15분 내지 16분: 100% 내지 80% B; 16분 내지 20분: 80% B)로 정제하여 표제 화합물 CN212를 제공한다. C157H260N26O35S에 대한 HRMS-ESI m/z [M+2H]2+: 계산치 1550.9542, 실측치 1550.9521.
실시예 31 - CN210
Figure pct00130
CHCl3/MeOH(1:1, 45 ㎕) 중의 CN209(0.25 mg, 0.17 μmol) 용액에 이어서 물(8.6 ㎕)을 DMSO(22 ㎕) 중의 펩티드 5-아지도펜타노일-FFRKSIINFEKL(0.43 mg, 0.26 μmol) 교반 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반한다. 용매의 농축 후, 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(1), 5 ㎛, 250 x 10 mm, 40℃, 1.8 ㎖/분; 이동상 A = 100:0.05 물/TFA; 이동상 B = 100:0.0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 5분: 80% 내지 100% B; 5분 내지 15분: 100% B; 15분 내지 16분: 100% 내지 80% B; 16분 내지 20분: 80% B)로 정제하여 표제 화합물 CN210을 제공한다. C160H263N27O34에 대한 HRMS-ESI m/z [M+2H]2+: 계산치 1553.4840, 실측치 1553.4850.
실시예 32 - CN205
Figure pct00131
CHCl3(140 ㎕) 중의 TBTA(0.54 mg, 0.99 μmol) 용액에 이어서 0.25 mM CuSO4의 수용액(50 ㎕)을 DMSO(140 ㎕) 및 MeOH(140 ㎕) 중의 펩티드 4-펜티노일-FFRKRAHYNIVTF(4.6 mg, 2.6 μmol) 및 CN172(2 mg, 1.4 μmol)의 교반 용액에 첨가한다. 소량의 구리 포일(5 mm x 2 mm)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한다. 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하여 잔사를 제공하고, 이 잔사를 0.05 M EDTA의 수용액(pH 7.7)(2 x 10 ㎖) 및 물(10 ㎖)과 함께 원심분리하고, 남은 펠렛을 고진공 하에서 건조한다. 미정제 생성물을 분취 HPLC(페노메넥스 루나 C18(2), 5 ㎛, 250 x 30 mm, 30℃, 40 ㎖/분; 이동상 A = 40:60:0.05 물/MeOH/TFA; 이동상 B = 100:0.05 MeOH/TFA; 0분 내지 10분: 0% 내지 100% B; 10분 내지 16분: 100% B; 16분 내지 16.5분: 100% 내지 0% B; 16.5분 내지 18분: 0% B)로 정제하여 표제 화합물 CN205(2.5 mg, 56%, HPLC에 의해 측정된 순도 96.7%)를 제공한다. C162H258N32O33에 대한 HRMS-ESI m/z [M+2H]2+: 계산치 1591.4747, 실측치 1591.4823.
실시예 33 - 정맥내 주사를 위한 본 발명의 화합물의 제제화
본 발명의 화합물을 α-갈서에 대해 보고된 방법과 유사하게 제제화한다. 요약하건대, α-갈서의 가용화는 문헌(Giaccone, Punt et al. 2002)에 기재된 부형제 비율에 기초한다. 따라서, 9:1 THF/MeOH 중의 α-갈서 또는 본 발명의 화합물의 10 mg/㎖ 용액 100 ㎕를 트윈 20(15.9 mg), 수크로스(177 mg) 및 L-히스티딘(23.8 mg)으로 구성된 수용액 1.78 ㎖에 첨가한다. 이 균질한 혼합물을 동결건조하고, 생성된 포말을 -18℃에서 Ar 하에서 저장한다. 이 물질을 PBS에서의 일련의 희석 전에 1.0 ㎖의 PBS 또는 물로 재구성하여 α-갈서 또는 본 발명의 화합물의 최종 주사가능한 용액을 달성한다.
실시예 34 - α- 갈서의 HPLC - ESI - MSMS 정량
워터스(Waters) 2795 HPLC 및 워터스 Q-TOF 프리미어™ 직렬 질량 분광계를 이용하여 HPLC-ESI-MSMS로 본 발명의 화합물의 다양한 시험 샘플들에서의 α-갈서의 양을 정량한다. 크로마토그래피는 0.2 ㎖/분의 유속으로 10 mM 암모늄 포르메이트 + 0.5% 포름산을 함유하는 등용매 메탄올로 용출하는 페노메넥스 키네텍스(Kinetex) C18(2.6 mm 3.0 x 50 mm) 컬럼을 이용한다. α-갈서를 898.7 내지 696.7 Da의 선택적 반응물 모니터링으로 모니터링한다. 이온 카운트 적분을 동일한 날에 작성된 표준 곡선과 비교하거나 공지된 양의 α-갈서와 혼합된 시험 샘플과 비교하여 α-갈서의 양을 추정한다.
달리 언급되어 있지 않은 한, 새로 재구성된 제제화된 샘플에 대한 α-갈서의 수준을 측정한다.
Figure pct00132
실시예 35 - 생물학적 연구
마우스. 번식 쌍의 근친교배된 혈통 C57BL/6(CD45.2+) 및 B6.SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ(CD45.1+)를 잭슨 라보라토리스(Jackson Laboratories)(미국 메인주 바 하버 소재) 및 애니멀 리소스 센터(Animal Resource Centre)(호주 웨스턴 오스트랄리아주 캐닝 베일 소재)로부터 입수한다. 랑게린 프로모터의 조절 하에서 인간 디프테리아 독소(DT) 수용체 및/또는 증강된 녹색 형광 단백질(EGFP)을 발현하는 lang-DTREGFP 및 lang-EGFP 넉아웃 마우스, Vα14 iNKT 세포를 결여하는 CD1d-/- 마우스, TLR2-/- 마우스(17), 닭 OVA의 H-2Kb-제한된 에피토프(OVA257-264)를 인식하는 TCR에 대한 형질전환 마우스인 OT-I 마우스, 및 I-Ab-제한된 에피토프 OVA323 -339를 인식하는 TCR을 갖는 OT-II 마우스도 사용한다. 양자 전달 실험을 위해, 유사유전자형 마커 CD45.1을 사용하여 전달받은 세포를 구별할 수 있도록 OT-I 동물을 B6.SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ 동물과 교배한다. 모든 마우스들을 말라간(Malaghan) 의학연구소의 생체의학연구 시설 내에서 유지한다. 실험을 국립 동물 윤리위원회로부터 승인받고 확립된 국가 지침에 따라 수행한다.
본 발명의 화합물의 투여. 본 발명의 각각의 화합물을 제제화된 제품(실시예 33 참조)으로서 공급받고 측면 꼬리 정맥 내로의 정맥내 주사에 의한 주입(0 내지 2.0 nmol/마우스)을 위해 인산염 완충 식염수(PBS)로 희석한다. 인간에서 예상된 치료 용량은 50 내지 4800 ㎍/m2 범위 내에 있다(Giaccone, Punt et al. 2002). α-갈서의 경우 마우스에서 0.23 nmol은 30 ㎍/m2의 인간 등가 용량임을 인지한다. 다른 투여 경로의 경우 보다 높은 용량이 가능할 것이다.
모든 항체 표지부착을 얼음 상의 FACS 완충제(1% FCS, 0.05% 나트륨 아지드 및 2 mM EDTA로 보충된 PBS)에서 수행한다. 항-CD16/32 Ab(24G2, 하이브리도마 상청액으로부터 사내 제조됨)와 함께 10분 동안 항온처리하여 비-특이적 FcR 매개 항체 염색을 차단한다. 플로우조(FlowJo) 소프트웨어(트리 스타 인코포레이티드(Tree Star, Inc.), 미국 오레곤주 소재)를 이용하여 데이터를 분석하면서 유동 세포측정을 비디 사이언시스(BD Biosciences) FACSCalibur 또는 BD LSRII SORP 유동 세포측정기 상에서 수행한다.
비장으로부터의 DC 표현형분석. 항체 염색 및 유동 세포측정을 이용하여 본 발명의 화합물의 주입 후 비장에서 수지상세포 상에서의 성숙 마커의 발현을 조사한다. 2 mM 글루타민, 1% 페니실린-스트렙토마이신, 5 x 10-5 M 2-머캡토-에탄올 및 5% 태아 소 혈청을 갖는 이스코브 변경 둘베코 배지(Iscove's Modified Dulbecco's Medium)(모두 인비트론겐(Invitrogen)(뉴질랜드 오클랜드 소재)로부터 입수됨)에서 비장 조직을 거즈를 통해 약하게 분쇄한 후 적혈구 세포를 RBC 용해 완충제(퓨어진(Puregene), 젠트라 시스템스(Gentra Systems), 미국 미네소타주 미네아폴리스 소재)로 용해시킴으로써 비장세포 제제를 제조한다. 항체 염색을 PBS 2% 태아 소 혈청 및 0.01% 나트륨 아지드에서 수행한다. 10 mg/㎖의 항-FcgRII 단일클론 항체 2.4G2를 사용하여 비-특이적 염색을 억제한다. 단일클론 항체들(모두 비디 바이오사이언시스 파밍겐(BD Biosciences Pharmingen)(미국 캘리포니아주 산 호세 소재)으로부터 입수됨)을 사용하여 CD11c+ 수지상세포 상에서의 성숙 마커 CD40, CD80 및 CD86의 발현을 조사한다.
생체내에서의 펩티드 특이적 T 세포 증식의 분석
H-2Kb 분자 내의 오브알부민 에피토프 SIINFEKL에 대한 특이성을 나타내는 형질전환 T 세포 수용체(TCR)를 발현하는 OT-I 마우스와, CD45.1+ 마커에 대해 C57BL/6 마우스와 유사한 유전자형을 갖는 B6.SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ 마우스 사이의 교배 동물로부터 풀링된 림프절 세포 현탁액을 제조한다. 항체로 코팅된 자성 비드(밀테니이(Miltenyi))를 사용하여 CD8+ 세포가 샘플에 풍부하게 존재하게 한 후, 샘플을 수용자 마우스 내로 옮긴다(마우스 당 1 x 104). 수용자 동물(n=5)의 군을 1일 후 본 발명의 화합물로 면역화시킨다. 등가 몰 값의 SIINFEKL 펩티드를 제공하도록 용량을 선택한다. 대조군 동물은 인산염 완충 식염수를 제공받는다. 7일 후, 측면 꼬리 정맥으로부터 혈액 샘플을 채취하고 TCR Vα2, CD45.1 및 CD8에 대한 항체들을 사용하여 생체외에서 직접적으로 염색함으로써 유동 세포측정으로 SIINFEKL 특이적 CD8+ T 세포를 검출한다.
생체내에서 펩티드 특이적 T 세포 매개 세포독성의 분석
유도된 CD8+ T 세포 반응의 세포독성 능력을 VITAL 분석(Hermans, Silk et al. 2004)으로 측정한다. 마우스를 본 발명의 화합물 또는 PBS로 면역화시킨 다음, 7일 후 2개의 동계 비장세포 집단들(이들은 500 nM의 SIINFEKL-펩티드로 적재되고 1.65 nM의 카복시플루오레세인 석신이미딜 에스테르(CFSE)로 표지되거나, 펩티드로 적재되고 10 μM의 세포 추적자 오렌지(CTO)로 표지됨)을 정맥내로 주사한다. 24시간 후, 펩티드-적재된 표적의 특이적 용해를 혈액 또는 비장 샘플의 유동 세포측정으로 모니터링한다. 대조군 집단(CTO+)의 평균 % 생존율을 기준으로 펩티드-펄싱된(CFSE+) 표적의 평균 % 생존율을 계산하고, 세포독성 활성을 % 특이적 용해(100 - 펩티드-펄싱된 표적의 평균 % 생존율)로서 표현한다.
항종양 활성의 분석. C57BL/6 마우스들(n=5)의 군은 옆구리 내로의 피하 주사를 통해 닭 오브알부민(OVA) 서열을 코딩하는 cDNA를 발현하는 1 x 105개의 B16.OVA 흑색종 세포를 제공받는다. 종양이 완전히 이식되는 때인 7일 후에 상이한 군들을 하기 물질들 중 하나의 정맥내 주사로 처리한다: 200 ng의 α-갈서와 함께 200 ㎍의 OVA 단백질, 200 ng의 본 발명의 화합물과 함께 200 ㎍의 OVA 단백질, 또는 PBS. 마우스를 3일 또는 4일마다 종양 성장에 대해 모니터링하고, 각각의 군에 대한 종양 크기를 이등분 직경의 곱의 평균(± SEM)으로서 계산한다. 첫 번째 동물이 200 mm2를 초과하는 종양을 발생시킬 때 각각의 군에 대한 측정을 종결한다.
인간 T 세포의 평가. CMV 혈청 양성 공여자로부터의 말초 혈액 단핵세포를 α-갈서, NLVPMVATV 펩티드, 혼합된 α-갈서 및 펩티드, 또는 접합체 CN188의 존재 하에서 완전한 배지(5% 인간 AB 혈청으로 보충된 IMDM)에서 8일 동안 배양한다. α-갈서 500 ng/㎖(= 582.5 nM), CN188 및 NLVPMVATV는 582.5 nM의 몰 당량으로 사용된다.
형광 HLA-A2/NLVPMVATV 사량체(PE-접합체, 이뮤덱스(Immudex)), CD3에 대한 항체(알렉사 플루오르 700 CD3, 바이오레전드(Biolegend)) 및 CD8에 대한 항체(APC-H7 CD8, BD)를 사용한 유동 세포측정을 이용하여 펩티드 특이적 T 세포를 검출한다. 이중체 및 사멸된 세포(DAPI를 가짐)를 게이팅 아웃(gating out)하고 정방향 및 측방향 산란(scatter)으로 림프구 집단을 게이팅 온(gating on)한 후 CD3 양성 및 CD19(FITC CD19, BD) 음성 세포에 대해 선택함으로써 NLVPMVATV 특이적 CD8+ T 세포의 비율을 측정한다. PE-접합된 적재된 CD1d 사량체를 갖는 별도의 염색 패널을 이용하여 iNKT 세포를 검출한다.
상기 설명이 그의 공지된 등가물들을 갖는 완전체를 언급하고 있는 경우, 이 등가물들은 개별적으로 기재된 것처럼 본원에 도입된다.
본 발명이 특정 바람직한 실시양태들과 관련하여 기재되어 있지만, 특허청구된 본 발명이 이러한 특정 실시양태들로 과도하게 한정되지 않아야 한다는 것을 이해해야 한다.
본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 본원에 기재된 본 발명을 더 변경시킬 수 있다는 것이 인식된다.
산업상 이용가능성
본 발명은 질환, 예컨대, 감염, 아토피성 장애, 자가면역 질환 또는 암과 관련된 질환의 치료 또는 예방에 유용한 스핑고당지질 유사체 및 이의 펩티드 유도체에 관한 것이다.
참고문헌
Figure pct00133
Figure pct00134
Figure pct00135
Figure pct00136
Figure pct00137
Figure pct00138
Figure pct00139
SEQUENCE LISTING <110> Callaghan Innovation Research Limited <120> Conjugate Compounds <130> IRL1034PC <150> NZ604085 <151> 2012-12-06 <160> 414 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 1 Ala Met Leu Gly Thr His Thr Met Glu Val 1 5 10 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 2 Met Leu Gly Thr His Thr Met Glu Val 1 5 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 3 Glu Ala Ala Gly Ile Gly Ile Leu Thr Val 1 5 10 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 4 Ala Ala Gly Ile Gly Ile Leu Thr Val 1 5 <210> 5 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 5 Ala Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln 1 5 10 15 Gln Leu <210> 6 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 6 Ala Ala Gly Ile Gly Ile Leu Thr Val Ile Leu Gly Val Leu 1 5 10 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 7 Ala Ala Arg Ala Val Phe Leu Ala Leu 1 5 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 8 Ala Cys Asp Pro His Ser Gly His Phe Val 1 5 10 <210> 9 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 9 Ala Cys Tyr Glu Phe Leu Trp Gly Pro Arg Ala Leu Val Glu Thr Ser 1 5 10 15 <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 10 Ala Asp His Arg Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln 1 5 10 15 Leu <210> 11 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 11 Ala Glu Glu Ala Ala Gly Ile Gly Ile Leu Thr 1 5 10 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 12 Ala Glu Glu Ala Ala Gly Ile Gly Ile Leu 1 5 10 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 13 Ala Glu Leu Val His Phe Leu Leu Leu 1 5 <210> 14 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 14 Ala Glu Leu Val His Phe Leu Leu Leu Lys Tyr Arg Ala Arg 1 5 10 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 15 Ala Glu Pro Ile Asn Ile Gln Thr Trp 1 5 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 16 Ala Phe Leu Pro Trp His Arg Leu Phe 1 5 <210> 17 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 17 Ala Gly Ala Thr Gly Gly Arg Gly Pro Arg Gly Ala Gly Ala 1 5 10 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 18 Ala Leu Cys Arg Trp Gly Leu Leu Leu 1 5 <210> 19 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 19 Ala Leu Asp Val Tyr Asn Gly Leu Leu 1 5 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 20 Ala Leu Phe Asp Ile Glu Ser Lys Val 1 5 <210> 21 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 21 Ala Leu Gly Gly His Pro Leu Leu Gly Val 1 5 10 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 22 Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu 1 5 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 23 Ala Leu Lys Asp Val Glu Glu Arg Val 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 24 Ala Leu Leu Ala Val Gly Ala Thr Lys 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 25 Ala Leu Leu Glu Ile Ala Ser Cys Leu 1 5 <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 26 Ala Leu Asn Phe Pro Gly Ser Gln Lys 1 5 <210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 27 Ala Leu Pro Tyr Trp Asn Phe Ala Thr Gly 1 5 10 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 28 Ala Leu Ser Val Met Gly Val Tyr Val 1 5 <210> 29 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 29 Ala Leu Trp Pro Trp Leu Leu Met Ala Thr 1 5 10 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 30 Ala Leu Trp Pro Trp Leu Leu Met Ala 1 5 <210> 31 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 31 Ala Leu Tyr Val Asp Ser Leu Phe Phe Leu 1 5 10 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 32 Ala Asn Asp Pro Ile Phe Val Val Leu 1 5 <210> 33 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 33 Ala Pro Pro Ala Tyr Glu Lys Leu Ser Ala Glu Gln 1 5 10 <210> 34 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 34 Ala Pro Arg Gly Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Gly Leu 1 5 10 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 35 Ala Pro Arg Gly Val Arg Met Ala Val 1 5 <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 36 Ala Arg Gly Pro Glu Ser Arg Leu Leu 1 5 <210> 37 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 37 Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ala Pro Arg 1 5 10 <210> 38 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 38 Ala Thr Gly Phe Lys Gln Ser Ser Lys Ala Leu Gln Arg Pro Val Ala 1 5 10 15 Ser <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 39 Ala Val Cys Pro Trp Thr Trp Leu Arg 1 5 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 40 Ala Trp Ile Ser Lys Pro Pro Gly Val 1 5 <210> 41 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 41 Ala Tyr Val Cys Gly Ile Gln Asn Ser Val Ser Ala Asn Arg Ser 1 5 10 15 <210> 42 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 42 Cys Ala Thr Trp Lys Val Ile Cys Lys Ser Cys Ile Ser Gln Thr Pro 1 5 10 15 Gly <210> 43 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 43 Cys Glu Phe His Ala Cys Trp Pro Ala Phe Thr Val Leu Gly Glu 1 5 10 15 <210> 44 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 44 Cys Leu Ser Arg Arg Pro Trp Lys Arg Ser Trp Ser Ala Gly Ser Cys 1 5 10 15 Pro Gly Met Pro His Leu 20 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 45 Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 46 Cys Gln Trp Gly Arg Leu Trp Gln Leu 1 5 <210> 47 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 47 Cys Thr Ala Cys Arg Trp Lys Lys Ala Cys Gln Arg 1 5 10 <210> 48 <211> 9 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Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala Thr Glu Lys 1 5 10 15 Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln Phe Glu Gln Leu Ser 20 25 <210> 55 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 55 Glu Glu Ala Ala Gly Ile Gly Ile Leu Thr Val Ile 1 5 10 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 56 Glu Glu Lys Leu Ile Val Val Leu Phe 1 5 <210> 57 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 57 Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met 1 5 10 <210> 58 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 58 Glu Gly Asp Cys Ala Pro Glu Glu Lys 1 5 <210> 59 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 59 Glu Ile Ile Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn 1 5 10 <210> 60 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 60 Glu Lys Ile Gln Lys Ala Phe Asp Asp Ile Ala Lys Tyr Phe Ser Lys 1 5 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PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 317 Val Leu Phe Tyr Leu Gly Gln Tyr 1 5 <210> 318 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 318 Val Leu His Trp Asp Pro Glu Thr Val 1 5 <210> 319 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 319 Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly 1 5 10 <210> 320 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 320 Val Leu Leu Gln Ala Gly Ser Leu His Ala 1 5 10 <210> 321 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 321 Val Leu Pro Asp Val Phe Ile Arg Cys Val 1 5 10 <210> 322 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 322 Val Leu Pro Asp Val Phe Ile Arg Cys 1 5 <210> 323 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 323 Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys 1 5 <210> 324 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 324 Val Leu Tyr Arg Tyr Gly Ser Phe Ser Val 1 5 10 <210> 325 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 325 Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val Ser Gly Asn Ile Leu 1 5 10 15 Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg 20 25 <210> 326 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 326 Val Pro Leu Asp Cys Val Leu Tyr Arg Tyr 1 5 10 <210> 327 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 327 Val Arg Ile Gly His Leu Tyr Ile Leu 1 5 <210> 328 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 328 Val Ser Ser Phe Phe Ser Tyr Thr Leu 1 5 <210> 329 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 329 Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly Ile 1 5 <210> 330 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 330 Val Val Pro Cys Glu Pro Pro Glu Val 1 5 <210> 331 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 331 Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly 1 5 <210> 332 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 332 Val Tyr Phe Phe Leu Pro Asp His Leu 1 5 <210> 333 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 333 Trp Glu Lys Met Lys Ala Ser Glu Lys Ile Phe Tyr Val Tyr Met Lys 1 5 10 15 Arg Lys <210> 334 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 334 Trp Leu Pro Phe Gly Phe Ile Leu Ile 1 5 <210> 335 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 335 Trp Asn Arg Gln Leu Tyr Pro Glu Trp Thr Glu Ala Gln Arg Leu Asp 1 5 10 15 <210> 336 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 336 Trp Gln Tyr Phe Phe Pro Val Ile Phe 1 5 <210> 337 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 337 Trp Arg Arg Ala Pro Ala Pro Gly Ala 1 5 <210> 338 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 338 Tyr Ala Cys Phe Val Ser Asn Leu Ala Thr Gly Arg Asn Asn Ser 1 5 10 15 <210> 339 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 339 Tyr Phe Ser Lys Lys Glu Trp Glu Lys Met Lys Ser Ser Glu Lys Ile 1 5 10 15 Val Tyr Val Tyr 20 <210> 340 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 340 Tyr Leu Glu Pro Gly Pro Val Thr Ala 1 5 <210> 341 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 341 Tyr Leu Glu Pro Gly Pro Val Thr Val 1 5 <210> 342 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 342 Tyr Leu Asn Asp His Leu Glu Pro Trp Ile 1 5 10 <210> 343 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 343 Tyr Leu Gln Leu Val Phe Gly Ile Glu Val 1 5 10 <210> 344 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 344 Tyr Leu Ser Gly Ala Asn Leu Asn Leu 1 5 <210> 345 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 345 Tyr Leu Val Pro Gln Gln Gly Phe Phe Cys 1 5 10 <210> 346 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 346 Tyr Met Asp Gly Thr Met Ser Gln Val 1 5 <210> 347 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 347 Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met Ile 1 5 10 <210> 348 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 348 Tyr Arg Pro Arg Pro Arg Arg Tyr 1 5 <210> 349 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 349 Tyr Ser Val Tyr Phe Asn Leu Pro Ala Asp Thr Ile Tyr Thr Asn 1 5 10 15 <210> 350 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 350 Tyr Ser Trp Arg Ile Asn Gly Ile Pro Gln Gln His Thr Gln Val 1 5 10 15 <210> 351 <211> 10 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<223> Synthetic Immunogen <400> 358 Ser Val Ala Ser Thr Ile Thr Gly Val 1 5 <210> 359 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 359 Val Met Ala Gly Asp Ile Tyr Ser Val 1 5 <210> 360 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 360 Ala Leu Ala Asp Gly Val Gln Lys Val 1 5 <210> 361 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 361 Leu Leu Gly Ala Thr Cys Met Phe Val 1 5 <210> 362 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 362 Ser Val Phe Ala Gly Val Val Gly Val 1 5 <210> 363 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 363 Ala Leu Phe Asp Gly Asp Pro His Leu 1 5 <210> 364 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 364 Tyr Val Asp Pro Val Ile Thr Ser Ile 1 5 <210> 365 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 365 Ser Thr Ala Pro Pro Val His Asn Val 1 5 <210> 366 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 366 Leu Ala Ala Leu Pro His Ser Cys Leu 1 5 <210> 367 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 367 Ser Gln Asp Asp Ile Lys Gly Ile Gln Lys Leu Tyr Gly Lys Arg Ser 1 5 10 15 <210> 368 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 368 Phe Leu Pro Ser Asp Phe Phe Pro Ser Val 1 5 10 <210> 369 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 369 Phe Leu Pro Ser Asp Phe Phe Pro Ser Val 1 5 10 <210> 370 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 370 Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala Lys Asn 1 5 10 15 <210> 371 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 371 Thr Phe Ser Tyr Val Asp Pro Val Ile Thr Ser Ile Ser Pro Lys Tyr 1 5 10 15 Gly Met Glu Thr 20 <210> 372 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 372 Ala Met Thr Gln Leu Leu Ala Gly Val 1 5 <210> 373 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 373 Lys Val Phe Ala Gly Ile Pro Thr Val 1 5 <210> 374 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 374 Ala Ile Ile Asp Gly Val Glu Ser Val 1 5 <210> 375 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 375 Gly Leu Trp His His Gln Thr Glu Val 1 5 <210> 376 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 376 Asn Leu Asp Thr Leu Met Thr Tyr Val 1 5 <210> 377 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 377 Lys Ile Gln Glu Ile Leu Thr Gln Val 1 5 <210> 378 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 378 Leu Thr Phe Gly Asp Val Val Ala Val 1 5 <210> 379 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 379 Thr Met Leu Ala Arg Leu Ala Ser Ala 1 5 <210> 380 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 380 Ile Met Asp Gln Val Pro Phe Ser Val 1 5 <210> 381 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 381 Met His Gln Lys Arg Thr Ala Met Phe Gln Asp Pro Gln Glu Arg Pro 1 5 10 15 Arg Lys Leu Pro Gln Leu Cys Thr Glu Leu Gln Thr Thr Ile His Asp 20 25 30 <210> 382 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 382 Leu Pro Gln Leu Cys Thr Glu Leu Gln Thr Thr Ile 1 5 10 <210> 383 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 383 His Asp Ile Ile Leu Glu Cys Val Tyr Cys Lys Gln Gln Leu Leu Arg 1 5 10 15 Arg Glu Val Tyr 20 <210> 384 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 384 Lys Gln Gln Leu Leu Arg Arg Glu Val Tyr Asp Phe Ala Phe Arg Asp 1 5 10 15 Leu Cys Ile Val Tyr Arg Asp Gly Asn 20 25 <210> 385 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 385 Arg Asp Leu Cys Ile Val Tyr Arg Asp Gly Asn Pro Tyr Ala Val Cys 1 5 10 15 Asp Lys Cys Leu Lys Phe Tyr Ser Lys Ile 20 25 <210> 386 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 386 Asp Lys Cys Leu Lys Phe Tyr Ser Lys Ile Ser Glu Tyr Arg His Tyr 1 5 10 15 Cys Tyr Ser Leu Tyr Gly Thr Thr Leu 20 25 <210> 387 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 387 His Tyr Cys Tyr Ser Leu Tyr Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn 1 5 10 15 Lys Pro Leu Cys Asp Leu Leu Ile Arg 20 25 <210> 388 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 388 Tyr Gly Thr Thr Leu Glu Gln Gln Tyr Asn Lys Pro Leu Cys Asp Leu 1 5 10 15 Leu Ile Arg Cys Ile Asn Cys Gln Lys Pro Leu Cys Pro Glu Glu Lys 20 25 30 <210> 389 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 389 Arg Cys Ile Asn Cys Gln Lys Pro Leu Cys Pro Glu Glu Lys Gln Arg 1 5 10 15 His Leu Asp Lys Lys Gln Arg Phe His Asn Ile Arg Gly Arg Trp Thr 20 25 30 <210> 390 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 390 Asp Lys Lys Gln Arg Phe His Asn Ile Arg Gly Arg Trp Thr Gly Arg 1 5 10 15 Cys Met Ser Cys Cys Arg Ser Ser Arg Thr Arg Arg Glu Thr Gln Leu 20 25 30 <210> 391 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 391 Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln 1 5 10 15 Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser 20 25 30 Glu Glu Glu 35 <210> 392 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 392 Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Glu Asp Glu 1 5 10 15 Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn 20 25 30 Ile Val Thr 35 <210> 393 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 393 Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys 1 5 10 15 Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val 20 25 30 Asp Ile Arg 35 <210> 394 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 394 Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu 1 5 10 15 Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser 20 25 30 Gln Lys Pro 35 <210> 395 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 395 Ala Leu Pro Phe Gly Phe Ile Leu Val 1 5 <210> 396 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 396 Thr Leu Ala Asp Phe Asp Pro Arg Val 1 5 <210> 397 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 397 Ile Met Asp Gln Val Pro Phe Ser Val 1 5 <210> 398 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 398 Ser Ile Met Thr Tyr Asp Phe His Gly Ala 1 5 10 <210> 399 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 399 Ala Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu 1 5 10 15 <210> 400 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 400 Phe Leu Tyr Asp Asp Asn Gln Arg Val 1 5 <210> 401 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 401 Tyr Leu Ile Glu Leu Ile Asp Arg Val 1 5 <210> 402 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 402 Asn Leu Met Glu Gln Pro Ile Lys Val 1 5 <210> 403 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 403 Phe Leu Ala Glu Asp Ala Leu Asn Thr Val 1 5 10 <210> 404 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 404 Ala Leu Met Glu Gln Gln His Tyr Val 1 5 <210> 405 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 405 Ile Leu Asp Asp Ile Gly His Gly Val 1 5 <210> 406 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 406 Lys Leu Asp Val Gly Asn Ala Glu Val 1 5 <210> 407 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 407 Thr Phe Glu Phe Thr Ser Phe Phe Tyr 1 5 <210> 408 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 408 Ser Trp Pro Asp Gly Ala Glu Leu Pro Phe 1 5 10 <210> 409 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 409 Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu 1 5 <210> 410 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 410 Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu 1 5 <210> 411 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 411 Ser Val Tyr Asp Phe Phe Val Trp Leu Lys Phe Phe His Arg Thr Cys 1 5 10 15 Lys Cys Thr Gly Asn Phe Ala 20 <210> 412 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 412 Asp Leu Ala Gln Met Phe Phe Cys Phe Lys Glu Leu Glu Gly Trp 1 5 10 15 <210> 413 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 413 Ala Val Gly Ala Leu Glu Gly Pro Arg Asn Gln Asp Trp Leu Gly Val 1 5 10 15 Pro Arg Gln Leu 20 <210> 414 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Immunogen <400> 414 Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5

Claims (37)

  1. 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 I]
    Figure pct00140

    상기 식에서,
    A는 자기-희생적 링커(self-immolative linker) 기이고;
    D는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00141

    [상기 기들에서,
    *는 D 기와 A 기의 부착점을 표시하고;
    R15는 하기 아미노산들 중 하나의 측쇄이고: L-라이신, L-시트룰린, L-아르기닌, L-글루타민 또는 L-쓰레오닌;
    R16은 소수성 아미노산의 측쇄이고;
    R19는 알킬렌 기이고;
    R32는 알킬렌 기 또는 O-알킬렌 기이고, 이때 O는 D2의 카보닐 기에 부착된다.];
    E는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되되, E는 D가 D1, D2 또는 D3일 때만 E18이고, E는 D가 D1, D2, D3 또는 D4일 때만 E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8, E9, E10, E11, E12, E13, E15, E20, E21, E93, E94 또는 E96이고, E는 D가 D5일 때만 E91, E92 또는 E95이고, E는 D가 D2일 때만 E97이고:
    Figure pct00142

    Figure pct00143

    [상기 기들에서,
    *는 E 기와 D 기의 부착점을 표시하고;
    R20은 H 또는 저급 알킬이고;
    R21은 알킬렌 기이고;
    g는 R20이 H일 때 0이거나, g는 R20이 저급 알킬일 때 1이다.];
    G는 부재하거나, G는 그의 N-말단을 통해 E 기에 부착되어 있고 그의 C-말단을 통해 J 기에 부착되어 있는, 6개 이하의 아미노산의 아미노산 서열이고;
    J는 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 항원에 대한 천연 플랭킹 잔기들의 군으로부터 선택된 6개 이하의 아미노산으로 임의적으로 치환되고, C-말단 아미드를 제공하도록 C-말단에서 NH2로 임의적으로 종결되고, 그의 N-말단을 통해 G 기에 부착되어 있거나, G가 부재하는 경우 그의 N-말단을 통해 E 기에 부착되어 있는 펩티드 항원이고;
    R1은 H 또는 글리코실이되, R1이 글리코실인 경우 R2 및 R3은 둘다 OH이고 R4는 CH2OH이고;
    R2는 H, OH, F 및 OR10으로 구성된 군으로부터 선택되되, R2가 H, F 또는 OR10인 경우 R1은 H이고 R3은 OH이고 R4는 CH2OH이고;
    R3은 H, OH, F 및 OR10으로 구성된 군으로부터 선택되되, R3이 H, F 또는 OR10인 경우 R1은 H이고 R2는 OH이고 R4는 CH2OH이고;
    R4는 CH3, CH2OH, CH2OCOR11, CH2OR10, CH2OR11, CH2OSO3H, CH2SH, CH2SR11, CH2SOR11, CH2SO2R11, CH2PO3H2, CH2OP(O)(OH)2, CH2OP(O)(OH)(OR11), CH2OP(O)(OR11)2, CO2H, CH2NHCOR11, CH2NHCO2R11, CH2NHCONH2, CH2NHCONHR11, CH2NHCON(R11)2, CH2N(R11)2 또는 CH2NHSO2R11이되, R4가 CH2OH 이외의 기인 경우 R1은 H이고 R2 및 R3은 OH이고;
    R6은 OR12, OH 또는 H이고;
    R7은 OR12, OH 또는 H이되, R6 및 R7 중 하나 이상은 OR12이고; R6이 OR12일 때, R7은 H이고, R8은 C1-C15 알킬이고, X는 O이고,
    Figure pct00144
    는 R7에 인접한 탄소를 R8에 인접한 탄소와 연결하는 임의적 이중 결합을 표시하고;
    R8은 H, 또는 직선형 또는 분지형 탄소쇄를 갖는 C1-C15 알킬이고, 이때 탄소쇄는 하나 이상의 이중 결합, 하나 이상의 삼중 결합, 하나 이상의 산소 원자 및/또는 말단 또는 비-말단의 임의적으로 치환된 아릴 기를 임의적으로 포함하고;
    R10은 글리코실이고;
    R11은 저급 알킬, 저급 알케닐 또는 아르알킬이고;
    R12는 아실 기의 위치 2 및/또는 3에서 하나 이상의 하이드록시 기로 임의적으로 치환된 직선형 또는 분지형 탄소쇄 및/또는 임의적으로 치환된 쇄 종결 아릴 기를 갖고 하나 이상의 이중 결합, 하나 이상의 삼중 결합 및/또는 하나 이상의 임의적으로 치환된 아릴렌 기를 임의적으로 포함하는 C6-C30 아실이고, 이때 탄소쇄는 하나 이상의 중수소 원자로 임의적으로 치환되고, 아릴 및 아릴렌 기 상의 임의적 치환기는 할로겐, 시아노, 디알킬아미노, C1-C6 아미드, 니트로, C1-C6 알콕시, C1-C6 아실옥시 및 C1-C6 티오알킬로부터 선택될 수 있고;
    X는 O, CH2 또는 S이고;
    n은 X가 O 또는 S일 때 1이거나, n은 X가 CH2일 때 0 또는 1이고;
    이때, X가 CH2인 경우, 하기 사항이 모두 사실이어야 하고: 화학식 I에서 6원 당 고리의 입체화학은 α-D-갈락토이고; R1은 H이고; R2 및 R3은 둘다 OH이고; R4는 CH2OH, CH2OR10 또는 CH2OR11이고; R6은 OH이고 R7은 OR12이고 위치 2, 3 및 4의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S,4R), (2S,3S,4S), (2R,3S,4S), (2R,3S,4R) 또는 (2S,3R,4S)이거나; R6은 OR12이고 R7은 H이고 R8은 C13H27이고 위치 2 및 3의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S)이고;
    X가 S인 경우, 하기 사항이 모두 사실이어야 한다: 화학식 I에서 6원 당 고리의 입체화학은 α-D-갈락토이고; R1은 H이고; R2 및 R3은 둘다 OH이고; R4는 CH2OH, CH2OR10, CH2OR11 또는 CO2H이고; R6은 OH이고 R7은 OR12이고 위치 2, 3 및 4의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S,4R)이거나; R6은 OR12이고 R7은 H이고 위치 2 및 3의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S)이다.
  2. 하기 화학식 Ib의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 Ib]
    Figure pct00145

    상기 식에서,
    A는 자기-희생적 링커 기이고;
    D는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00146

    [상기 기들에서,
    *는 D 기와 A 기의 부착점을 표시하고;
    R15는 하기 아미노산들 중 하나의 측쇄이고: L-라이신, L-시트룰린, L-아르기닌, L-글루타민 또는 L-쓰레오닌;
    R16은 소수성 아미노산의 측쇄이고;
    R19는 알킬렌 기이다.];
    E는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되되, E는 D가 D1, D2 또는 D3일 때만 E18이고, E는 D가 D1, D2, D3 또는 D4일 때만 E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8, E9, E10, E11, E12, E13, E15, E20, E21, E93, E94 또는 E96이고, E는 D가 D5일 때만 E91, E92 또는 E95이고:
    Figure pct00147

    Figure pct00148

    [상기 기들에서,
    *는 E 기와 D 기의 부착점을 표시하고;
    R20은 H 또는 저급 알킬이고;
    R21은 알킬렌 기이고;
    g는 R20이 H일 때 0이거나, g는 R20이 저급 알킬일 때 1이다.];
    G는 부재하거나, G는 그의 N-말단을 통해 E 기에 부착되어 있고 그의 C-말단을 통해 J 기에 부착되어 있는, 6개 이하의 아미노산의 아미노산 서열이고;
    J는 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 항원에 대한 천연 플랭킹 잔기들의 군으로부터 선택된 6개 이하의 아미노산으로 임의적으로 치환되고, C-말단 아미드를 제공하도록 C-말단에서 NH2로 임의적으로 종결되고, 그의 N-말단을 통해 G 기에 부착되어 있거나, G가 부재하는 경우 그의 N-말단을 통해 E 기에 부착되어 있는 펩티드 항원이고;
    R1은 H 또는 글리코실이되, R1이 글리코실인 경우 R2 및 R3은 둘다 OH이고 R4는 CH2OH이고;
    R2는 H, OH, F 및 OR10으로 구성된 군으로부터 선택되되, R2가 H, F 또는 OR10인 경우 R1은 H이고 R3은 OH이고 R4는 CH2OH이고;
    R3은 H, OH, F 및 OR10으로 구성된 군으로부터 선택되되, R3이 H, F 또는 OR10인 경우 R1은 H이고 R2는 OH이고 R4는 CH2OH이고;
    R4는 CH3, CH2OH, CH2OCOR11, CH2OR10, CH2OR11, CH2OSO3H, CH2SH, CH2SR11, CH2SOR11, CH2SO2R11, CH2PO3H2, CH2OP(O)(OH)2, CH2OP(O)(OH)(OR11), CH2OP(O)(OR11)2, CO2H, CH2NHCOR11, CH2NHCO2R11, CH2NHCONH2, CH2NHCONHR11, CH2NHCON(R11)2, CH2N(R11)2 또는 CH2NHSO2R11이되, R4가 CH2OH 이외의 기인 경우 R1은 H이고 R2 및 R3은 OH이고;
    R6은 OR12, OH 또는 H이고;
    R7은 OR12, OH 또는 H이되, R6 및 R7 중 하나 이상은 OR12이고; R6이 OR12일 때, R7은 H이고, R8은 C1-C15 알킬이고, X는 O이고,
    Figure pct00149
    는 R7에 인접한 탄소를 R8에 인접한 탄소와 연결하는 임의적 이중 결합을 표시하고;
    R8은 H, 또는 직선형 또는 분지형 탄소쇄를 갖는 C1-C15 알킬이고, 이때 탄소쇄는 하나 이상의 이중 결합, 하나 이상의 삼중 결합, 하나 이상의 산소 원자 및/또는 말단 또는 비-말단의 임의적으로 치환된 아릴 기를 임의적으로 포함하고;
    R10은 글리코실이고;
    R11은 저급 알킬, 저급 알케닐 또는 아르알킬이고;
    R12는 아실 기의 위치 2 및/또는 3에서 하나 이상의 하이드록시 기로 임의적으로 치환된 직선형 또는 분지형 탄소쇄 및/또는 임의적으로 치환된 쇄 종결 아릴 기를 갖고 하나 이상의 이중 결합, 하나 이상의 삼중 결합 및/또는 하나 이상의 임의적으로 치환된 아릴렌 기를 임의적으로 포함하는 C6-C30 아실이고, 이때 탄소쇄는 하나 이상의 중수소 원자로 임의적으로 치환되고, 아릴 및 아릴렌 기 상의 임의적 치환기는 할로겐, 시아노, 디알킬아미노, C1-C6 아미드, 니트로, C1-C6 알콕시, C1-C6 아실옥시 및 C1-C6 티오알킬로부터 선택될 수 있고;
    X는 O, CH2 또는 S이고;
    n은 X가 O 또는 S일 때 1이거나, n은 X가 CH2일 때 0 또는 1이고;
    이때, X가 CH2인 경우, 하기 사항이 모두 사실이어야 하고: 화학식 I에서 6원 당 고리의 입체화학은 α-D-갈락토이고; R1은 H이고; R2 및 R3은 둘다 OH이고; R4는 CH2OH, CH2OR10 또는 CH2OR11이고; R6은 OH이고 R7은 OR12이고 위치 2, 3 및 4의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S,4R), (2S,3S,4S), (2R,3S,4S), (2R,3S,4R) 또는 (2S,3R,4S)이거나; R6은 OR12이고 R7은 H이고 R8은 C13H27이고 위치 2 및 3의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S)이고;
    X가 S인 경우, 하기 사항이 모두 사실이어야 한다: 화학식 I에서 6원 당 고리의 입체화학은 α-D-갈락토이고; R1은 H이고; R2 및 R3은 둘다 OH이고; R4는 CH2OH, CH2OR10, CH2OR11 또는 CO2H이고; R6은 OH이고 R7은 OR12이고 위치 2, 3 및 4의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S,4R)이거나; R6은 OR12이고 R7은 H이고 위치 2 및 3의 탄소 원자에서의 입체화학은 (2S,3S)이다.
  3. 하기 화학식 II의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 II]
    Figure pct00150

    상기 식에서,
    A, D, X, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, R10, R11, R12, R15, R16, R32 및 n은 모두 제1항에서 정의된 바와 같고;
    Z는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되되, Z는 D가 D1, D2, D3 또는 D4일 때만 Z1, Z2, Z3, Z4, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z13, Z15, Z16, Z17 또는 Z18이고, Z는 D가 D1, D2 또는 D3일 때만 Z12이고, Z는 D가 D5일 때만 Z5 또는 Z20이고, Z는 D가 D2일 때만 Z21, Z22 또는 Z23이다:
    Figure pct00151

    상기 기들에서,
    *는 Z23에 대해 정의된 바를 제외하고 Z 기와 D 기의 부착점을 표시하고;
    R20은 화학식 I에 대해 상기 정의된 바와 같고;
    R23은 아릴, 아르알킬 또는 임의적으로 치환된 알킬이고;
    R24는 저급 알킬이고;
    R25는 p-C6H4L이고, 이때 L은 H, 메톡시, COOH, C(O)NHCH2COOH 또는 CH2CH2NMe2이고;
    R26은 아르알킬이고;
    R27은 H 또는 저급 알킬이고;
    R28은 알킬렌이고;
    R31은 (CH2CH2O)k이고;
    k는 2 내지 100의 정수이고;
    W는 임의적으로 치환된 사이클로옥티닐 고리이거나, W는 하나 이상의 아릴 기 또는 하나 이상의 사이클로알킬 기에 축합된 임의적으로 치환된 사이클로옥티닐 고리를 포함하는 축합된 이환형 또는 삼환형 고리 시스템이고, 이때 상기 사이클로옥티닐 고리는 고리 내에 N 원자를 임의적으로 함유하고, 이 N 원자는 아실 기로 임의적으로 치환되고, 상기 사이클로옥티닐 고리는 할로겐, 하이드록실, 알콕시 및 아르알킬로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의적으로 치환되고, 이때 이 기의 아릴 부분은 카복실산으로 임의적으로 치환되고, * 또는 임의적 치환기들 중 하나는 Z23과 D 기의 부착점을 포함한다.
  4. 하기 화학식 IIb의 화합물:
    Figure pct00152

    상기 식에서,
    A, D, X, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, R10, R11, R12, R15, R16, R19 및 n은 모두 제1항에서 정의된 바와 같고;
    Z는 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되되, Z는 D가 D1, D2, D3 또는 D4일 때만 Z1, Z2, Z3, Z4, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z13, Z15 또는 Z16이고, Z는 D가 D1, D2 또는 D3일 때만 Z12이고, Z는 D가 D5일 때만 Z5이다:
    Figure pct00153

    Figure pct00154

    상기 기들에서,
    *는 Z 기와 D 기의 부착점을 표시하고;
    R20은 제1항에서 정의된 바와 같고;
    R23은 아릴, 아르알킬 또는 임의적으로 치환된 알킬이고;
    R24는 저급 알킬이고;
    R25는 p-C6H4L이고, 이때 L은 H, 메톡시, COOH, C(O)NHCH2COOH 또는 CH2CH2NMe2이다.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, A가 하기 기들로 구성된 군으로부터 선택되되, D가 D1일 때만 A가 A1이고, D가 D2, D3 또는 D5일 때만 A가 A2이고, D가 D1, D3 또는 D4일 때만 A가 A3이고, D가 D2, D3 또는 D5일 때만 A가 A4이고, D가 D1, D3 또는 D4일 때만 A가 A5인 화합물:
    Figure pct00155

    상기 기들에서,
    *는 A 기와 D 기의 부착점을 표시하고;
    동일한 또는 상이한 각각의 Q1은 H, 알킬, 알콕시, 할로겐, 니트로 및 아릴로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 그 자신이 부착되어 있는 고리와 함께 축합된 이환형 아릴 기를 형성하고;
    p는 1 내지 4의 정수이고;
    Alk1은 C1-C4 직쇄 알킬이고;
    R28은 H 또는 저급 알킬이다.
  6. 제5항에 있어서, A가 A1 또는 A2인 화합물.
  7. 제6항에 있어서, A가 A1이고, 이때 R28이 H이거나; A가 A2이고, 이때 Q1이 H인 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, D가 D1인 화합물.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, D가 D2인 화합물.
  10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, D가 D5인 화합물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R15가
    Figure pct00156
    및
    Figure pct00157
    로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, R16이
    Figure pct00158
    및
    Figure pct00159
    로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
  13. 제1항, 제2항, 제5항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, E가 E1 내지 E8, E93 및 E94 중 어느 하나인 화합물.
  14. 제1항, 제2항, 제5항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, G가 하기 화학식인 화합물:
    Figure pct00160

    상기 식에서,
    *는 G 기와 E 기의 부착점을 표시한다.
  15. 제1항, 제2항, 제5항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, J가 하기 펩티드들로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 화합물:
    AMLGTHTMEV(서열 번호 1), MLGTHTMEV(서열 번호 2), EAAGIGILTV(서열 번호 3), AAGIGILTV(서열 번호 4), AADHRQLQLSISSCLQQL(서열 번호 5), AAGIGILTVILGVL(서열 번호 6), AARAVFLAL(서열 번호 7), ACDPHSGHFV(서열 번호 8), ACYEFLWGPRALVETS(서열 번호 9), ADHRQLQLSISSCLQQL(서열 번호 10), AEEAAGIGILT(서열 번호 11), AEEAAGIGIL(서열 번호 12), AELVHFLLL(서열 번호 13), AELVHFLLLKYRAR(서열 번호 14), AEPINIQTW(서열 번호 15), AFLPWHRLF(서열 번호 16), AGATGGRGPRGAGA(서열 번호 17), ALCRWGLLL(서열 번호 18), ALDVYNGLL(서열 번호 19), ALFDIESKV(서열 번호 20), ALGGHPLLGV(서열 번호 21), ALIHHNTHL(서열 번호 22), ALKDVEERV(서열 번호 23), ALLAVGATK(서열 번호 24), ALLEIASCL(서열 번호 25), ALNFPGSQK(서열 번호 26), ALPYWNFATG(서열 번호 27), ALSVMGVYV(서열 번호 28), ALWPWLLMAT(서열 번호 29), ALWPWLLMA(서열 번호 30), ALYVDSLFFL(서열 번호 31), ANDPIFVVL(서열 번호 32), APPAYEKLSAEQ(서열 번호 33), APRGPHGGAASGL(서열 번호 34), APRGVRMAV(서열 번호 35), ARGPESRLL(서열 번호 36), ASGPGGGAPR(서열 번호 37), ATGFKQSSKALQRPVAS(서열 번호 38), AVCPWTWLR(서열 번호 39), AWISKPPGV(서열 번호 40), AYVCGIQNSVSANRS(서열 번호 41), CATWKVICKSCISQTPG(서열 번호 42), CEFHACWPAFTVLGE(서열 번호 43), CLSRRPWKRSWSAGSCPGMPHL(서열 번호 44), CMTWNQMNL(서열 번호 45), CQWGRLWQL(서열 번호 46), CTACRWKKACQR(서열 번호 47), DPARYEFLW(서열 번호 48), DTGFYTLHVIKSDLVNEEATGQFRV(서열 번호 49), DVTFNIICKKCG(서열 번호 50), EAAGIGILTV(서열 번호 51), EADPTGHSY(서열 번호 52), EAFIQPITR(서열 번호 53), EDLTVKIGDFGLATEKSRWSGSHQFEQLS(서열 번호 54), EEAAGIGILTVI(서열 번호 55), EEKLIVVLF(서열 번호 56), EFYLAMPFATPM(서열 번호 57), EGDCAPEEK(서열 번호 58), EIIYPNASLLIQN(서열 번호 59), EKIQKAFDDIAKYFSK(서열 번호 60), ELTLGEFLKL(서열 번호 61), ELVRRILSR(서열 번호 62), ESRLLEFYLAMPF(서열 번호 63), ETVSEQSNV(서열 번호 64), EVDPASNTY(서열 번호 65), EVDPIGHLY(서열 번호 66), EVDPIGHVY(서열 번호 67), EVISCKLIKR(서열 번호 68), EVYDGREHSA(서열 번호 69), EYLQLVFGI(서열 번호 70), EYLSLSDKI(서열 번호 71), EYSKECLKEF(서열 번호 72), EYVIKVSARVRF(서열 번호 73), FIASNGVKLV(서열 번호 74), FINDEIFVEL(서열 번호 75), FLDEFMEGV(서열 번호 76), FLEGNEVGKTY(서열 번호 77), FLFLLFFWL(서열 번호 78), FLIIWQNTM(서열 번호 79), FLLHHAFVDSIFEQWLQRHRP(서열 번호 80), FLLLKYRAREPVTKAE(서열 번호 81), FLTPKKLQCV(서열 번호 82), FLWGPRALV(서열 번호 83), FMNKFIYEI(서열 번호 84), FMVEDETVL(서열 번호 85), FPSDSWCYF(서열 번호 86), FRSGLDSYV(서열 번호 87), FSWAMDLDPKGA(서열 번호 88), GARGPESRLLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQDAPPL(서열 번호 89), GDNQIMPKAGLLIIV(서열 번호 90), GELIGILNAAKVPAD(서열 번호 91), GFKQSSKAL(서열 번호 92), GLASFKSFLK(서열 번호 93), GLCTLVAML(서열 번호 94), GLPPDVQRV(서열 번호 95), GLYDGMEHLI(서열 번호 96), GRAMLGTHTMEVTVY(서열 번호 97), GVALQTMKQ(서열 번호 98), GVGSPYVSRLLGICL(서열 번호 99), AKFVAAWTLKAAA(서열 번호 100), GVLLKEFTVSGNILTIRLT(서열 번호 101), GVLVGVALI(서열 번호 102), GVYDGREHTV(서열 번호 103), HLFGYSWYK(서열 번호 104), HLIRVEGNLRVE(서열 번호 105), HLSTAFARV(서열 번호 106), HLYQGCQVV(서열 번호 107), HQQYFYKIPILVINK(서열 번호 108), HTMEVTVYHR(서열 번호 109), IALNFPGSQK(서열 번호 110), IGRIAECILGMNPSR(서열 번호 111), IISAVVGIL(서열 번호 112), ILAKFLHWL(서열 번호 113), ILDSSEEDK(서열 번호 114), ILDTAGREEY(서열 번호 115), ILHNGAYSL(서열 번호 116), ILSRDAAPLPRPG(서열 번호 117), ILTVILGVL(서열 번호 118), IMDQVPFFS(서열 번호 119), IMDQVPFSV(서열 번호 120), IMIGVLVGV(서열 번호 121), INKTSGPKRGKHAWTHRLRE(서열 번호 122), ISGGPRISY(서열 번호 123), ISPNSVFSQWRVVCDSLEDYD(서열 번호 124), ISQAVHAAHAEINEAGR(서열 번호 125), ITDQVPFSV(서열 번호 126), ITKKVADLVGF(서열 번호 127), KASEKIFYV(서열 번호 128), KAVYNFATM(서열 번호 129), KCDICTDEY(서열 번호 130), KEFTVSGNILT(서열 번호 131), KEFTVSGNILTI(서열 번호 132), KELEGILLL(서열 번호 133), KHAWTHRLRERKQLVVYEEI(서열 번호 134), KIFGSLAFL(서열 번호 135), KIFSEVTLK(서열 번호 136), KIFYVYMKRKYEAM(서열 번호 137), KIFYVYMKRKYEAMT(서열 번호 138), KILDAVVAQK(서열 번호 139), KINKNPKYK(서열 번호 140), KISQAVHAAHAEINEAGRESIINFEKLTEWT(서열 번호 141), KKLLTQHFVQENYLEY(서열 번호 142), KMDAEHPEL(서열 번호 143), KNCEPVVPNAPPAYEKLSAE(서열 번호 144), KRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호 145), KSSEKIVYVYMKLNYEVMTK(서열 번호 146), KTWGQYWQV(서열 번호 147), KVAELVHFL(서열 번호 148), KVHPVIWSL(서열 번호 149), KVLEYVIKV(서열 번호 150), KYDCFLHPF(서열 번호 151), KYVGIEREM(서열 번호 152), LAALPHSCL(서열 번호 153), LAAQERRVPR(서열 번호 154), LAGIGILTV(서열 번호 155), LAMPFATPM(서열 번호 156), LGFKVTLPPFMRSKRAADFH(서열 번호 157), LGPGRPYR(서열 번호 158), LHHAFVDSIF(서열 번호 159), LIYRRRLMK(서열 번호 160), LKEFTVSGNILTIRL(서열 번호 161), LKLSGVVRL(서열 번호 162), LLANGRMPTVLQCVN(서열 번호 163), LLDGTATLRL(서열 번호 164), LLEFYLAMPFATPM(서열 번호 165), LLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQ(서열 번호 166), LLFGLALIEV(서열 번호 167), LLGATCMFV(서열 번호 168), LLGPGRPYR(서열 번호 169), LLGRNSFEV(서열 번호 170), LLKYRAREPVTKAE(서열 번호 171), LLLDDLLVSI(서열 번호 172), LLLLTVLTV(서열 번호 173), LLWSFQTSA(서열 번호 174), LLYKLADLI(서열 번호 175), LMLQNALTTM(서열 번호 176), LPAVVGLSPGEQEY(서열 번호 177), LPHSSSHWL(서열 번호 178), LPRWPPPQL(서열 번호 179), LPSSADVEF(서열 번호 180), LSHLQMHSRKH(서열 번호 181), LSRLSNRLL(서열 번호 182), LTDLQPYMRQFVAHL(서열 번호 183), LWWVNNQSLPVSP(서열 번호 184), LYATVIHDI(서열 번호 185), LYSACFWWL(서열 번호 186), LYVDSLFFL(서열 번호 187), MEVDPIGHLY(서열 번호 188), MIAVFLPIV(서열 번호 189), MIFEKHGFRRTTPP(서열 번호 190), MKLNYEVMTKLGFKVTLPPF(서열 번호 191), MLAVISCAV(서열 번호 192), MLLAVLYCL(서열 번호 193), MLMAQEALAFL(서열 번호 194), MPFATPMEA(서열 번호 195), MPREDAHFIYGYPKKGHGHS(서열 번호 196), MSLQRQFLR(서열 번호 197), MVKISGGPR(서열 번호 198), NLVPMVATV(서열 번호 199), NPPSMVAAGSVVAAV(서열 번호 200), NSIVKSITVSASG(서열 번호 201), NSNHVASGAGEAAIETQSSSSEEIV(서열 번호 202), NSQPVWLCL(서열 번호 203), NTYASPRFK(서열 번호 204), NYARTEDFF(서열 번호 205), NYKRCFPVI(서열 번호 206), NYNNFYRFL(서열 번호 207), PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA(서열 번호 208), PFATPMEAELARR(서열 번호 209), PGSTAPPAHGVT(서열 번호 210), PGTRVRAMAIYKQ(서열 번호 211), PGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR(서열 번호 212), PLLENVISK(서열 번호 213), PLPPARNGGL(서열 번호 214), PLQPEQLQV(서열 번호 215), PLTSIISAV(서열 번호 216), PRALAETSYVKVLEY(서열 번호 217), PVTWRRAPA(서열 번호 218), PYYFAAELPPRNLPEP(서열 번호 219), QCSGNFMGF(서열 번호 220), QCTEVRADTRPWSGP(서열 번호 221), QGAMLAAQERRVPRAAEVPR(서열 번호 222), QGQHFLQKV(서열 번호 223), QLAVSVILRV(서열 번호 224), QNILLSNAPLGPQFP(서열 번호 225), QQITKTEV(서열 번호 226), QRPYGYDQIM(서열 번호 227), QYSWFVNGTF(서열 번호 228), RAGLQVRKNK(서열 번호 229), REPFTKAEMLGSVIR(서열 번호 230), REPVTKAEML(서열 번호 231), RIAECILGM(서열 번호 232), RKVAELVHFLLLKYR(서열 번호 233), RKVAELVHFLLLKYRA(서열 번호 234), RLLEFYLAMPFA(서열 번호 235), RLLQETELV(서열 번호 236), RLMKQDFSV(서열 번호 237), RLPRIFCSC(서열 번호 238), RLSSCVPVA(서열 번호 239), RLVDDFLLV(서열 번호 240), RMPEAAPPV(서열 번호 241), RMPTVLQCVNVSVVS(서열 번호 242), RNGYRALMDKS(서열 번호 243), RNGYRALMDKSLHVGTQCALTRR(서열 번호 244), RPGLLGASVLGLDDI(서열 번호 245), RPHVPESAF(서열 번호 246), RQKRILVNL(서열 번호 247), RSDSGQQARY(서열 번호 248), RTKQLYPEW(서열 번호 249), RVIKNSIRLTL(서열 번호 250), RVRFFFPSL(서열 번호 251), RYQLDPKFI(서열 번호 252), SAFPTTINF(서열 번호 253), SAWISKPPGV(서열 번호 254), SAYGEPRKL(서열 번호 255), SEIWRDIDF(서열 번호 256), SELFRSGLDSY(서열 번호 257), SESIKKKVL(서열 번호 258), SESLKMIF(서열 번호 259), SFSYTLLSL(서열 번호 260), SHETVIIEL(서열 번호 261), SIINFEKL(서열 번호 262), SLADTNSLAV(서열 번호 263), SLFEGIDIYT(서열 번호 264), SLFPNSPKWTSK(서열 번호 265), SLFRAVITK(서열 번호 266), SLGWLFLLL(서열 번호 267), SLLMWITQC(서열 번호 268), SLLMWITQCFLPVF(서열 번호 269), SLLQHLIGL(서열 번호 270), SLPYWNFATG(서열 번호 271), SLSKILDTV(서열 번호 272), SLYKFSPFPL(서열 번호 273), SLYSFPEPEA(서열 번호 274), SNDGPTLI(서열 번호 275), SPRWWPTCL(서열 번호 276), SPSSNRIRNT(서열 번호 277), SQKTYQGSY(서열 번호 278), SRFGGAVVR(서열 번호 279), SSALLSIFQSSPE(서열 번호 280), SSDYVIPIGTY(서열 번호 281), SSKALQRPV(서열 번호 282), SSPGCQPPA(서열 번호 283), STAPPVHNV(서열 번호 284), SVASTITGV(서열 번호 285), SVDYFFVWL(서열 번호 286), SVSESDTIRSISIAS(서열 번호 287), SVYDFFVWL(서열 번호 288), SYLDSGIHF(서열 번호 289), SYLQDSDPDSFQD(서열 번호 290), TFPDLESEF(서열 번호 291), TGRAMLGTHTMEVTVYH(서열 번호 292), TLDSQVMSL(서열 번호 293), TLDWLLQTPK(서열 번호 294), TLEEITGYL(서열 번호 295), TLMSAMTNL(서열 번호 296), TLNDECWPA(서열 번호 297), TLPGYPPHV(서열 번호 298), TLYQDDTLTLQAAG(서열 번호 299), TMKQICKKEIRRLHQY(서열 번호 300), TMNGSKSPV(서열 번호 301), TPRLPSSADVEF(서열 번호 302), TSCILESLFRAVITK(서열 번호 303), TSEKRPFMCAY(서열 번호 304), TSYVKVLHHMVKISG(서열 번호 305), TTEWVETTARELPIPEPE(서열 번호 306), TVSGNILTIR(서열 번호 307), TYACFVSNL(서열 번호 308), TYLPTNASL(서열 번호 309), TYYRPGVNLSLSC(서열 번호 310), VAELVHFLL(서열 번호 311), VFGIELMEVDPIGHL(서열 번호 312), VGQDVSVLFRVTGALQ(서열 번호 313), VIFSKASSSLQL(서열 번호 314), VISNDVCAQV(서열 번호 315), VLDGLDVLL(서열 번호 316), VLFYLGQY(서열 번호 317), VLHWDPETV(서열 번호 318), VLLKEFTVSG(서열 번호 319), VLLQAGSLHA(서열 번호 320), VLPDVFIRCV(서열 번호 321), VLPDVFIRC(서열 번호 322), VLRENTSPK(서열 번호 323), VLYRYGSFSV(서열 번호 324), VPGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR(서열 번호 325), VPLDCVLYRY(서열 번호 326), VRIGHLYIL(서열 번호 327), VSSFFSYTL(서열 번호 328), VVLGVVFGI(서열 번호 329), VVPCEPPEV(서열 번호 330), VVVGAVGVG(서열 번호 331), VYFFLPDHL(서열 번호 332), WEKMKASEKIFYVYMKRK(서열 번호 333), WLPFGFILI(서열 번호 334), WNRQLYPEWTEAQRLD(서열 번호 335), WQYFFPVIF(서열 번호 336), WRRAPAPGA(서열 번호 337), YACFVSNLATGRNNS(서열 번호 338), YFSKKEWEKMKSSEKIVYVY(서열 번호 339), YLEPGPVTA(서열 번호 340), YLEPGPVTV(서열 번호 341), YLNDHLEPWI(서열 번호 342), YLQLVFGIEV(서열 번호 343), YLSGANLNL(서열 번호 344), YLVPQQGFFC(서열 번호 345), YMDGTMSQV(서열 번호 346), YMIMVKCWMI(서열 번호 347), YRPRPRRY(서열 번호 348), YSVYFNLPADTIYTN(서열 번호 349), YSWRINGIPQQHTQV(서열 번호 350), YVDFREYEYY(서열 번호 351), YYWPRPRRY(서열 번호 352), IMDQVPFFS(서열 번호 353), SVDYFFVWL(서열 번호 354), ALFDIESKV(서열 번호 355), NLVPMVATV(서열 번호 356), GLCTLVAML(서열 번호 357), SVASTITGV(서열 번호 358), VMAGDIYSV(서열 번호 359), ALADGVQKV(서열 번호 360), LLGATCMFV(서열 번호 361), SVFAGVVGV(서열 번호 362), ALFDGDPHL(서열 번호 363), YVDPVITSI(서열 번호 364), STAPPVHNV(서열 번호 365), LAALPHSCL(서열 번호 366), SQDDIKGIQKLYGKRS(서열 번호 367), FLPSDFFPSV(서열 번호 368), FLPSDFFPSV(서열 번호 369), TLGEFLKLDRERAKN(서열 번호 370), TFSYVDPVITSISPKYGMET(서열 번호 371), AMTQLLAGV(서열 번호 372), KVFAGIPTV(서열 번호 373), AIIDGVESV(서열 번호 374), GLWHHQTEV(서열 번호 375), NLDTLMTYV(서열 번호 376), KIQEILTQV(서열 번호 377), LTFGDVVAV(서열 번호 378), TMLARLASA(서열 번호 379), IMDQVPFSV(서열 번호 380), MHQKRTAMFQDPQERPRKLPQLCTELQTTIHD(서열 번호 381), LPQLCTELQTTI(서열 번호 382), HDIILECVYCKQQLLRREVY(서열 번호 383), KQQLLRREVYDFAFRDLCIVYRDGN(서열 번호 384), RDLCIVYRDGNPYAVCDKCLKFYSKI(서열 번호 385), DKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTL(서열 번호 386), HYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLLIR(서열 번호 387), YGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINCQKPLCPEEK(서열 번호 388), RCINCQKPLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWT(서열 번호 389), DKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQL(서열 번호 390), MHGDTPTLHEYMLDLQPETTDLYCYEQLNDSSEEE(서열 번호 391), LYCYEQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVT(서열 번호 392), GQAEPDRAHYNIVTFCCKCDSTLRLCVQSTHVDIR(서열 번호 393), TLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP(서열 번호 394), ALPFGFILV(서열 번호 395), TLADFDPRV(서열 번호 396), IMDQVPFSV(서열 번호 397), SIMTYDFHGA(서열 번호 398), AQYIKANSKFIGITEL(서열 번호 399), FLYDDNQRV(서열 번호 400), YLIELIDRV(서열 번호 401), NLMEQPIKV(서열 번호 402), FLAEDALNTV(서열 번호 403), ALMEQQHYV(서열 번호 404), ILDDIGHGV(서열 번호 405), KLDVGNAEV(서열 번호 406),TFEFTSFFY(서열 번호 407), SWPDGAELPF(서열 번호 408), GILGFVFTL(서열 번호 409), ILRGSVAHK(서열 번호 410), SVYDFFVWLKFFHRTCKCTGNFA(서열 번호 411), DLAQMFFCFKELEGW(서열 번호 412), AVGALEGPRNQDWLGVPRQL(서열 번호 413) 및 RAHYNIVTF(서열 번호 414).
  16. 제3항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, Z가 Z1 내지 Z5 중 어느 하나인 화합물.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I 또는 화학식 II의 6원 당 고리의 입체화학이 α-D-갈락토인 화합물.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, X가 O인 화합물.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, n이 1이고, 화학식 I의 6원 당 고리의 입체화학이 α-D-갈락토이고, R6이 OH이고, R7이 OR12인 화합물.
  20. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, n이 0이고, X가 CH2이고, 6원 당 고리의 입체화학이 α-D-갈락토이고, R6이 OH이고, R7이 OR12인 화합물.
  21. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, X가 O이고, R6이 OR12이고, R7이 H이고, R8이 C1-C15 알킬이고,
    Figure pct00161
    가 R7에 인접한 탄소를 R8에 인접한 탄소와 연결하는 이중 결합이고, 위치 2 및 3의 탄소 원자들에서의 입체화학이 (2S,3S)인 화합물.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 H인 화합물.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 OH인 화합물.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 OH인 화합물.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 CH2OH인 화합물.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, R6이 OH인 화합물.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, R7이 OR12인 화합물.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, R7이 OH인 화합물.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, R8이 C1-C15 알킬인 화합물.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, R11이 알킬인 화합물.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, R12가 6개 내지 30개 탄소 원자 길이의 직선형 탄소쇄를 갖는 아실인 화합물.
  32. 제1항에 있어서, 하기 화합물들로 구성된 군으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00162

    Figure pct00163

    Figure pct00164

    Figure pct00165

    Figure pct00166
  33. 제3항에 있어서, 하기 화합물들로 구성된 군으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00167

    Figure pct00168

    Figure pct00169

    Figure pct00170

    Figure pct00171
  34. 약학적 유효량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 화합물 및 임의적으로 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  35. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 희석제, 및 임의적으로 항원을 포함하는 백신.
  36. 감염성 질환, 아토피성 장애, 자가면역 질환, 당뇨병 또는 암의 치료 또는 예방 방법으로서, 약학적 유효량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 화합물을 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  37. 제36항에 있어서, 아토피성 장애가 천식인 방법.
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