[go: up one dir, main page]

KR20150088433A - c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1 - Google Patents

c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1 Download PDF

Info

Publication number
KR20150088433A
KR20150088433A KR1020140008733A KR20140008733A KR20150088433A KR 20150088433 A KR20150088433 A KR 20150088433A KR 1020140008733 A KR1020140008733 A KR 1020140008733A KR 20140008733 A KR20140008733 A KR 20140008733A KR 20150088433 A KR20150088433 A KR 20150088433A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
leu
thr
val
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
KR1020140008733A
Other languages
English (en)
Inventor
김보규
이은진
김경아
안태진
Original Assignee
삼성전자주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 삼성전자주식회사 filed Critical 삼성전자주식회사
Priority to KR1020140008733A priority Critical patent/KR20150088433A/ko
Priority to US14/604,361 priority patent/US9850537B2/en
Publication of KR20150088433A publication Critical patent/KR20150088433A/ko
Priority to KR1020210007460A priority patent/KR102291465B1/ko
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3023—Lung
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3046—Stomach, Intestines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/32—Fusion polypeptide fusions with soluble part of a cell surface receptor, "decoy receptors"
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1, TFF1의 검출 물질을 포함하는 c-Met 저해제의 효능 예측 및/또는 효능 검정을 위한 조성물, TFF1의 검출 물질을 포함하는 c-Met 저해제의 적용 대상 선별용 조성물, TFF1를 이용하는 c-Met 저해제의 효능 예측 및/또는 효능 검정 방법, TFF1를 이용하는 c-Met 저해제의 적용 대상 선별 방법, 및 상기 선별된 적용 대상에 c-Met 저해제를 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방 및/또는 치료 방법이 제공된다.

Description

c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1{Biomarker TFF1 for predicting effect of a c-Met inhibitor}
c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1, TFF1의 검출 물질을 포함하는 c-Met 저해제의 효능 예측 및/또는 효능 검정을 위한 조성물, TFF1의 검출 물질을 포함하는 c-Met 저해제의 적용 대상 선별용 조성물, TFF1를 이용하는 c-Met 저해제의 효능 예측 및/또는 효능 검정 방법, TFF1를 이용하는 c-Met 저해제의 적용 대상 선별 방법, 및 상기 선별된 적용 대상에 c-Met 저해제를 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방 및/또는 치료 방법이 제공된다.
바이오마커(Biomarker)란 외부적인 영향으로 인해 생명체 내부에서 유발된 변화를 알아낼 수 있는 지표를 의미하며, 암, 뇌졸중, 치매 등 각종 질병을 진단하거나 특정 치료제의 효능을 예측하거나 모니터링하기 위한 용도로 연구가 활발해 지고 있다. 약물 개발과 관련한 바이오마커로는 약물의 생체 내 작용여부를 확인하기 위한 효능 검정 마커 (Pharmacodynamic marker; PD 마커), 생체 내 투여이전에 약물의 반응성을 미리 예측하여 투여할 수 있는 효능 예측 마커(Predictive marker) 등이 있다. 이러한 marker의 활용은 약물의 임상전략을 수립하는데 도움이 되는데, 가령 약물의 작용을 통해 효능이 예상되는 효능 예측 마커의 경우에는 환자 선별 과정에 활용하여 보다 효과적인 약물 치료가 가능하게 하며, 효능 검증 마커의 경우에는 약물이 개별 환자에서 잘 작용하고 있는지 모니터링하여 보다 효과적인 치료 전략을 수립할 수 있도록 한다. 또한, 효능 예측 마커가 없는 경우라도, 효능 검정 마커가 존재한다면 약물 치료에 있어서 개별 환자의 약물에 대한 반응을 좀 더 초기에 모니터링 가능하기 때문에, 약물의 효능이 나타나는 군과 그렇지 않은 군의 조기 선별을 가능하게 하여, 결론적으로 보다 효과적이고 성공적인 약물 치료가 가능하게 한다. 또한, 효과 검증 마커는 투여농도에 따른 약물 반응성 정도를 모니터링 하여 약물의 적정 투여량 산정의 지표로도 이용 가능하다.
한편, 암은 현재까지 주요 사망원인중의 하나이다. 의료기술의 발달로 암의 치료 기술에 눈에 뛰는 변화가 오고 있지만, 5년 생존률 수치는 지난 20년 동안 10%정도 향상에 그쳤을 뿐이다. 이는 암의 급속한 성장, 전이 등의 특성으로 적정시기의 진단과 치료가 어렵기 때문이라고 할 수 있다. 적절한 바이오마커를 암 치료에 도입함으로써, 암의 특성을 파악하여 적절한 치료제를 적기에 사용할 수 있는 기회를 증대시켜 암 치료의 성공률을 크게 높일 수 있다. 가령, 동일한 폐암 환자라도 폐암 분류별, 유전자별, 분비하는 단백질별 특성이 상이하고 이에 따른 적합한 치료제도 상이하다. 따라서 특정 치료제를 사용하는 화학요법에 있어서, 상기 치료제에 상응하는 바이오마커가 존재한다면, 시행착오를 줄이고 성공 확률을 보다 높일 수 있다. 이러한 취지로 항암 치료제의 효능 예측 또는 검정을 위한 바이오마커 탐색이 매우 중요하며, 적합한 바이오마커가 성공적으로 도출된다면, 항암제의 효용과 가치 및 이를 사용하는 치료의 성공률을 크게 상승시킬 수 있을 것이다.
한편, c-Met은 간세포 성장 인자 (hepatocyte growth factor, HGF)의 수용체이며, HGF는 c-Met 수용체 티로신 키나제의 세포외 부위에 결합하여 다양한 정상세포와 종 양세포에서 분열, 운동, 형태발생, 혈관형성을 유발하는 사이토카인의 일종이다. c-Met은 세포 표면에 존재하는 대표적인 수용체 티로신 키나제(receptor tyrosine kinase)로, 그 자체가 암유발 유전자이며, 때로는 리간드인 HGF와 상관 없이도 암발생, 암전이, 암세포 이동, 암세포 침습, 신생혈관 생성 등과 같은 종양과 관련된 여러 가지 기작에 관여하기 때문에 최근 항암 치료의 타겟으로 주목받는 단백질이며, c-Met의 작용을 저해하는 항체 등의 표적 치료제의 개발이 진행되고 있다.
이와 같이 개발된 c-Met 표적 치료제를 이용한 치료의 효능을 보다 증진시키고 성공 가능성을 높이기 위하여, 상기 치료제의 효능을 예측 또는 검정하여 상기 치료제의 적용이 적합한 환자의 선별하고 치료제 투여후의 반응성을 모니터링하여 보다 효과적인 치료 전략을 수립하는데 적용 가능한 바이오마커의 개발이 요구된다.
일 예는 TFF1 및 이들을 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 c-Met 저해제의 효능 예측 및/또는 효능 검정을 위한 바이오마커를 제공한다.
다른 예는 TFF1 및 이들을 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 c-Met 저해제의 적용 대상 선별을 위한 바이오마커를 제공한다.
다른 예는 TFF1 및 이들을 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상과 상호작용하는 물질을 포함하는 c-Met 저해제의 효능 예측 및/또는 효능 검정을 위한 조성물 및 키트를 제공한다.
다른 예는 TFF1 및 이들을 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상과 상호작용하는 물질을 포함하는 c-Met 저해제의 적용 대상 선별용 조성물 및 키트를 제공한다.
다른 예는 생물 시료 내의 TFF1 및 이들을 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 존재 여부, 수준, 및/또는 변이 여부를 측정하는 단계를 포함하는 c-Met 저해제의 효능 예측 및/또는 효능 검정 방법을 제공한다.
다른 예는 생물 시료 내의 TFF1 및 이들을 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 존재 여부, 수준, 및/또는 변이 여부를 측정하는 단계를 포함하는 c-Met 저해제의 적용 대상의 선별 방법을 제공한다.
다른 예는 상기 선별된 c-Met 저해제 및 TFF1 저해제를 포함하는 암의 예방 및/또는 치료를 위한 병용 투여용 약학 조성물을 제공한다.
TFF1 및 이들을 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 c-Met 저해제의 효능을 미리 예측하거나 및/또는 투여된 c-Met 저해제로 인한 저항성 유발 여부를 모니터링하기 위한 용도가 제공된다.
본 명세서에서, c-Met 저해제의 효능은 c-Met 저해제의 c-Met 관련 질병, 예컨대 암의 예방, 개선, 경감, 또는 치료 효과를 의미하는 것으로, 암의 경우, 암세포 또는 암조직의 감소, 암세포 또는 암조직의 사멸, 암전이와 관련된 암세포의 이동 및/또는 침투의 억제 등의 효과를 의미한다.
TFF1 (Trefoil factor 1)는 소화기관에서 발현되어 분비되는 물질로서, 대장암, 폐암, 췌장암, 전립선암, 유방암 등에서 발현 증가 보고되어 있지만, 현재까지 c-Met 단백질과 TFF1과의 관계가 보고된 바 없다.
본 발명의 일 예에서는 TFF1의 발현 수준에 따라서 c-Met 저해제에 대한 반응성이 달라지고, c-Met 저해제 처리 여부 또는 처리 전 후의 TFF1의 발현 수준 차이가 상기 c-Met 저해제에 대한 반응성 여부에 따라서 달라짐을 밝혔다. 보다 구체적으로, 생물 시료의 TFF1 또는 이를 암호화하는 유전자의 수준이 낮은 경우, 상기 생물 시료 또는 상기 생물 시료가 유래하는 환자에 c-Met 저해제, 예컨대 항 c-Met 항체를 적용시 그 효능이 잘 발휘됨을 확인할 수 있다. 또한, c-Met 저해제, 예컨대 항 c-Met 항체에 대하여 저항성이 유도된 경우, TFF1 또는 이를 암호화하는 유전자의 수준이 증가하는 것을 확인할 수 있다.
즉, TFF1의 발현 수준을 측정함으로써 c-Met 저해제의 효능을 예측하여 c-Met 저해제를 적용하기에 적합한 대상을 선별하거나, c-Met 저해제 처리 여부 또는 처리 전후에 따른 TFF1의 발현 수준 변화를 측정함으로써 c-Met 저해제에 대한 저항성 획득 여부 및/또는 상기 저해제의 효능을 모니터링하여 c-Met 저해제의 계속적인 적용 여부를 결정하는데 유용하게 사용될 수 있다. 이를 기초로, TFF1의 c-Met 저해제의 효능 예측 및/또는 효능 검정용 바이오마커로서의 유용성을 최초로 제안한다.
상기 TFF1은 마우스, 래트 등의 설치류, 인간, 원숭이 등의 영장류 등을 포함하는 포유류에서 유래하는 것일 수 있으며, 예컨대, 인간 TFF1 (예컨대, NP_003216 등), 마우스 TFF1 (예컨대, NP_033388.1 등), 래트 TFF1 (예컨대, NP_476470.1 등) 등으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다. TFF1를 암호화하는 유전자(mRNA)는, 예컨대 인간 TFF1 (예컨대, NM_003225 등), 마우스 TFF1 (예컨대, NM_009362.2 등), 래트 TFF1 (예컨대, NM_057129.1 등) 등으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다.
일 구체예는 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 c-Met 저해제의 효능 예측 및/또는 효능 검정을 위한 바이오마커를 제공한다.
다른 예는 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 c-Met 저해제의 적용 대상 선별을 위한 바이오마커를 제공한다.
다른 예는 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상과 상호작용하는 물질을 포함하는 c-Met 저해제의 효능 예측 및/또는 효능 검정용 조성물 및 키트를 제공한다.
다른 예는 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상과 상호작용하는 물질을 포함하는 c-Met 저해제의 적용 대상 선별용 조성물 및 키트를 제공한다.
다른 예는 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준을 측정하는 단계를 포함하는 c-Met 저해제의 효능 예측 및/또는 효능 검정 방법 또는 c-Met 저해제의 효능 예측 및/또는 효능 검정을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공한다. 다른 예는 생물 시료 내의 TFF1 및 이들을 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준을 측정하는 단계를 포함하는 c-Met 저해제의 적용 대상의 선별 방법 또는 c-Met 저해제의 적용 대상의 선별을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.
본 명세서에서 c-Met 저해제의 효능 검정은 c-Met 저해제가 효능을 잘 발휘하고 있는지 여부 및/또는 c-Met 저해제 투여에 의하여 저항성이 유도되었는지 여부를 모니터링하는 것을 의미한다.
일 구체예에서, 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준을 측정하는 단계를 포함하는 c-Met 저해제의 효능 예측 방법, c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 정보를 제공하는 방법, c-Met 저해제의 적용 대상의 선별 방법 또는 c-Met 저해제의 적용 대상의 선별을 위한 정보를 제공하는 방법이 제공된다. 상기 c-Met 저해제의 효능 예측 또는 c-Met 저해제의 적용 대상 선별 방법에 있어서, 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준이 낮은 경우, 상기 생물 시료 또는 상기 생물 시료가 유래하는 환자에서 상기 c-Met 저해제가 효능을 발휘할 것으로 판단(예측)하거나, 상기 생물 시료 또는 상기 생물 시료가 유래하는 환자를 c-Met 저해제의 적용 대상으로 판단할 수 있다.
따라서, 상기 c-Met 저해제의 효능 예측 또는 효능 예측을 위한 정보를 제공하는 방법은 상기 측정하는 단계 이후에 상기 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준이 낮은 경우, 상기 생물 시료 또는 상기 생물 시료가 유래하는 환자에서 상기 c-Met 저해제가 효능을 발휘할 것으로 판단(예측)하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 c-Met 저해제의 적용 대상의 선별 방법 또는 c-Met 저해제의 적용 대상의 선별을 위한 정보를 제공하는 방법은 상기 측정하는 단계 이후에 상기 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준이 낮은 경우, 상기 생물 시료 또는 상기 생물 시료가 유래하는 환자를 상기 c-Met 저해제의 적용 대상으로 판단하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준이 낮다 함은, 예컨대, TFF1 및 이를 암호화하는 유전자가 존재하지 않거나, 적용하고자 하는 c-Met 저해제가 효능을 발휘하지 못하는 환자로부터 분리된 생물 시료(비교 기준 시료)와 비교하여 TFF1 단백질 양 및/또는 이를 암호화하는 유전자 (DNA, cDNA 또는 mRNA)의 양이 적은 경우를 의미하는 것일 수 있다. TFF1 유전자의 mRNA 발현을 Affymetrix U133 Plus 2.0 어레이로 측정하였을 때 mRNA 발현 수준이 약 8.41 이하인 경우, 예컨대 0 내지 약 8.41 정도인 경우, 상기 c-Met 저해제가 상기 생물 시료 또는 상기 생물 시료가 유래하는 환자에서 효과를 나타낼 수 있을 것으로 예측할 수 있다. 또한 TFF1 유전자의 mRNA 발현 수준을 다른 유전자의 mRNA 발현 수준 대비하여 나타내어, 상기 c-Met 저해제의 효과를 예측 할 수 있다. 예컨대,
i) GAPDH 유전자의 평균 mRNA 발현 수준 대비 TFF1 유전자의 mRNA 발현 수준(TFF1 유전자의 mRNA 발현 수준/GAPDH 유전자의 평균 mRNA 발현 수준)이 약 0.59 이하(예컨대, 0 내지 0.59)이면, c-Met 저해제가 상기 생물 시료 또는 상기 생물 시료가 유래하는 환자에서 효과를 나타낼 수 있을 것으로 예측하거나;
ii) HPRT1 유전자의 평균 mRNA 발현 수준 대비 TFF1 유전자의 mRNA 발현 수준(TFF1 유전자의 mRNA 발현 수준/HPRT1 유전자의 평균 mRNA 발현 수준)이 약 1.24 이하(예컨대, 0 내지 1.24)이면, c-Met 저해제가 상기 생물 시료 또는 상기 생물 시료가 유래하는 환자에서 효과를 나타낼 수 있을 것으로 예측하거나;
iii) 10개 유전자 (EEF1A1, RPL23A, TPT1, HUWE1, MATR3, SRSF3, HNRNPC, SMARCA4, WDR90, 및 TUT1)-의 mRNA 발현 수준의 평균 대비 TFF1 유전자의 mRNA 발현 수준(TFF1 유전자의 mRNA 발현 수준/상기 10개 유전자 mRNA 발현 수준의 평균)이 약 0.72 이하(예컨대, 0 내지 0.72)이면 c-Met 저해제가 상기 생물 시료 또는 상기 생물 시료가 유래하는 환자에서 효과를 나타낼 수 있을 것으로 예측할 수 있다.
상기 기재된 유전자의 mRNA 발현 수준은 모두 Affymetrix U133 Plus 2.0 어레이로 측정한 결과이다. 상기 Affymetrix U133 Plus 2.0 어레이로 측정한 결과는 예시적으로 제공되는 것일 뿐이며, 다른 유전자 발현 측정 수단 (예컨대, RT-PCR, RT-qPCR, Northern blotting, SAGE, Illumina BeadArray microarray, RNA-seq 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상)으로 측정된 결과를 사용하는 것도 무방하다. 예컨대, 상기 다른 유전자 발현 측정 수단으로 측정된 결과를 상기 Affymetrix U133 Plus 2.0 어레이로 측정한 결과에 상응하도록 환산하여 상기 기준을 적용할 수 있다. 이 때, "Affymetrix U133 Plus 2.0 어레이로 측정한 결과에 상응하도록 환산"하는 것은 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자라면 명확하게 알 수 있는 사항이다.
다른 구체예에서, 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준을 측정하는 단계를 포함하는 c-Met 저해제의 효능 검정 방법 또는 c-Met 저해제의 효능 검정을 위한 정보를 제공하는 방법이 제공된다. 앞서 설명한 바와 같이, 상기 효능 검정 방법은 저항성 유도 여부를 확인하는 것을 포함한다.
일 구체예에서, 상기 c-Met 저해제의 효능 검정 방법 또는 c-Met 저해제의 효능 검정을 위한 정보를 제공하는 방법에 있어서, 상기 c-Met 저해제를 처리하기 전에 환자로부터 얻어진 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준과 상기 c-Met 저해제를 처리한 후에 환자로부터 얻어진 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준을 각각 측정하고 비교하여, 상기 c-Met 저해제를 처리한 후에 환자로부터 얻어진 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준이 상기 c-Met 저해제를 처리하기 전보다 감소하거나 처리전 수준을 유지하는 경우, 상기 생물 시료가 유래하는 환자에서 상기 c-Met 저해제가 효능을 발휘하는 것으로 판단할 수 있다. 따라서, 상기 c-Met 저해제의 효능 검정 방법 또는 c-Met 저해제의 효능 검정을 위한 정보를 제공하는 방법은, 상기 측정하는 단계 이후에, 상기 c-Met 저해제 무처리군 및 처리군의 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준을 비교하는 단계 및/또는 상기 c-Met 저해제 처리군의 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준이 상기 c-Met 저해제 무처리군보다 감소한 경우, 상기 생물 시료가 유래하는 환자에서 상기 c-Met 저해제가 효능을 발휘하는 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 c-Met 저해제는 항 c-Met 항체일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 c-Met 저해제의 효능 검정 방법 또는 c-Met 저해제의 효능 검정을 위한 정보를 제공하는 방법에 있어서, 상기 c-Met 저해제를 처리하기 전에 환자로부터 얻어진 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준과 상기 c-Met 저해제를 처리한 후에 환자로부터 얻어진 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준을 각각 측정하고 비교하여, 상기 c-Met 저해제를 처리한 후에 환자로부터 얻어진 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준이 상기 c-Met 저해제를 처리하기 전보다 증가하는 경우, 상기 생물 시료가 유래하는 환자에서 상기 c-Met 저해제에 대한 저항성이 유도된 것으로 판단할 수 있다. 따라서, 상기 c-Met 저해제의 효능 검정 방법 또는 c-Met 저해제의 효능 검정을 위한 정보를 제공하는 방법은, 상기 측정하는 단계 이후에, 상기 c-Met 저해제 무처리군 및 처리군의 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준을 비교하는 단계 및/또는 상기 c-Met 저해제 처리군의 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준이 상기 c-Met 저해제 무처리군보다 증가한 경우, 상기 생물 시료가 유래하는 환자에서 상기 c-Met 저해제에 대한 저항성이 유도된 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 c-Met 저해제는 항 c-Met 항체일 수 있다.
상기 상기 c-Met 저해제의 효능 검정 방법 또는 c-Met 저해제의 효능 검정을 위한 정보를 제공하는 방법에 있어서, 상기 c-Met 저해제 무처리군과 처리군은 각각 동일한 생물 시료에 전체에 대하여 c-Met 저해제를 처리하기 전과 처리한 후의 상태를 의미하거나, 동일한 생물 시료를 분량하여 c-Met 저해제를 처리하지 않은 군(예컨대 vehicle만 처리)과 c-Met 저해제를 처리한 군을 의미할 수 있다. 본 명세서에서, 별도의 언급이 없는 한, c-Met 저해제 무처리군과 c-Met 저해제 처리 전의 생물 시료, c-Met 저해제 처리군과 c-Met 저해제 처리 후의 생물 시료는 서로 동일한 의미로 사용되는 것일 수 있다.
상기 효능 검정 방법은 상기 c-Met 저해제의 계속적인 사용 여부 판단 및/또는 상기 c-Met 저해제의 적절한 투여 조건 (예컨대, 투여량, 투여 간격, 투여 회수 등) 결정에 활용될 수 있다. 예컨대, 상기 c-Met 저해제 처리군 또는 처리 후의 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준이 상기 c-Met 저해제 무처리군 또는 처리 전보다 감소한 경우, 예컨대, 상기 c-Met 저해제 처리군 또는 처리 후의 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준이 상기 c-Met 저해제 무처리군 또는 처리 전의 약 0 내지 약 80중량%, 약 0 내지 약 70중량%, 약 0 내지 약 60중량%, 약 0 내지 약 50중량%, 약 0 내지 약 40중량%, 약 0 내지 약 30중량%, 약 0 내지 약 20중량%, 또는 약 0 내지 약 10중량%인 경우, 상기 c-Met 저해제를 계속 사용할 수 있는 것으로 판단할 수 있다. 또한, 상기 c-Met 저해제 처리군 또는 처리 후의 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준이 상기 c-Met 저해제 무처리군 또는 처리 전보다 감소한 경우, 예컨대, 상기 c-Met 저해제 처리군 또는 처리 후의 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준이 상기 c-Met 저해제 무처리군 또는 처리 전의 약 0 내지 약 80중량%, 약 0 내지 약 70중량%, 약 0 내지 약 60중량%, 약 0 내지 약 50중량%, 약 0 내지 약 40중량%, 약 0 내지 약 30중량%, 약 0 내지 약 20중량%, 또는 약 0 내지 약 10중량%인 경우의 c-Met 저해제의 투여 조건을 상기 c-Met 저해제의 적절한 투여 조건으로 판단할 수 있다. 상기 투여 조건은 투여 용량, 투여 간격, 투여 회수 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
상기 상기 c-Met 저해제의 효능 예측 방법, c-Met 저해제의 적용 대상의 선별 방법, 및/또는 c-Met 저해제의 효능 검정 방법에 있어서, 상기 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준을 측정하는 단계는 i) 생물 시료를 준비하는 단계; ii) 상기 생물 시료에 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상과 상호작용하는 물질을 처리(첨가)하여 반응시키는 단계; 및 iii) 상기 얻어진 반응물을 분석하여 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 정량하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 단계 i)의 생물 시료를 준비하는 단계는 환자로부터 생물 시료를 얻는(분리하는) 단계를 포함하는 것일 수 있다. 상기 단계 ii)에서 상기 상호작용하는 물질은 TFF1에 특이적으로 결합하는 화합물 (small molecule), 항체, 앱타머, 또는 TFF1를 암호화하는 유전자의 일부 또는 전부에 결합하는 폴리뉴클레오타이드 (예컨대, 프라이머, 프로브, 앱타머 등), 화합물 등일 수 있으며, 이들은 형광 물질, 발색 물질 등의 표지 물질로 표지되거나 표지되지 않은 것일 수 있다. 상기 단계 iii)에서, 상기 반응물은 단계 ii)에서 얻어진 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상 및 이와 상호작용하는 물질이 상호작용(결합)하여 생성된 복합체(complex)일 수 있으며, 상기 정량하는 단계는 상기 생성된 복합체를 정량하거나, 상기 복합체에 표지된 표지 물질을 측정하거나, 상기 복합체를 시료로부터 분리한 후, 이로부터 TFF1 또는 이를 암호화하는 유전자를 다시 분리하여 분리된 TFF1 또는 이를 암호화하는 유전자를 정량하는 단계를 포함하는 것일 수 있다. 상기 TFF1의 정량은 ELISA 등의 통상적인 단백질 정량 방법에 의하여 수행될 수 있으며, TFF1 유전자의 정량은 qPCR 또는 mRNA 마이크로 어레이 등의 통상적인 유전자 (DNA 또는 RNA) 정량 방법에 의하여 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 TFF1 및 이들을 암호화하는 유전자의 수준은 상기 단백질 또는 유전자와 상호작용하는 물질을 이용하는 통상적인 모든 단백질 분석 방법에 의하여 측정될 수 있다. 상기 TFF1 또는 이들을 암호화하는 유전자와 상호작용하는 물질은 TFF1 단백질에 특이적으로 결합하는 화합물, 항체, 압타머, 및 TFF1을 암호화하는 유전자의 전부 또는 일부에 결합하는 폴리뉴클레오타이드 (예컨대, 프라이머, 프로브, 앱타머 등) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 예컨대, 상기 TFF1 단백질의 수준은 상기 TFF1 단백질에 특이적으로 결합하는 화합물, 항체, 압타머 등을 이용하는 통상적인 효소 반응, 형광, 발광 및/또는 방사선 검출을 통하여 하여 측정될 수 있으며, 구체적으로, 면역크로마토그래피(Immunochromatography), 면역조직화학염색, 효소결합 면역흡착 분석(enzyme linked immunosorbent assay: ELISA), 방사선 면역측정법(radioimmunoassay: RIA), 효소 면역분석(enzyme immunoassay: EIA), 형광면역분석(Floresence immunoassay: FIA), 발광면역분석(luminescence immunoassay: LIA), 웨스턴블라팅(Western blotting) 등으로 이루어진 군으로부터 선택된 방법에 의하여 측정될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한 상기 TFF1를 암호화하는 유전자 (DNA, cDNA 또는 mRNA)의 수준은 통상의 유전자 분석 방법을 이용하여 측정할 수 있으며, 예컨대 상기 유전자와 혼성화 가능한 프라이머, 프로브, 또는 앱타머를 사용하는 통상적인 유전자 분석 방법, 예컨대, 폴리머레이즈 연쇄 반응법 (PCR), FISH(fluorescent in situ hybridization), 마이크로어레이법, 등을 이용하여 측정할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 일 구체예에서, 상기 프라이머는 TFF1을 암호화하는 유전자 (전장 DNA, cDNA, 또는 mRNA)의 염기서열 중 연속하는 5 내지 1000bp 예컨대 10 내지 500bp, 20 내지 200bp, 또는 50 내지 200bp의 유전자 단편을 검출할 수 있는 것으로, 상기 유전자 단편의 3'-말단 및 5'-말단 각각의 연속하는 5 내지 100bp, 예컨대, 5 내지 50bp, 5 내지 30bp, 또는 10 내지 25bp 부위와 혼성화 가능한 (예컨대, 상보적인) 염기서열을 포함하는 프라이머쌍일 수 있다. 상기 프로브 또는 앱타머는 TFF1을 암호화하는 유전자 (전장 DNA, cDNA, 또는 mRNA)의 염기서열 중 연속하는 5 내지 100 bp, 5 내지 50bp, 5 내지 30bp, 또는 5 내지 25bp의 유전자 단편과 혼성화 가능한 (예컨대, 상보적) 염기서열을 갖는 것일 수 있다. 상기 '혼성화 가능'하다 함은 상기 유전자 부위의 염기서열과 80% 이상, 예컨대 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 또는 100%의 서열 상보성을 가짐으로써 상보적 결합이 가능함을 의미할 수 있다.
한편, 항 c-Met 항체와 같은 c-Met 저해제를 사용하는 치료의 특성상, 적용되는 암세포의 c-Met 발현량이 일정 수준 이상인 것이 상기 c-Met 저해제가 효능을 발휘할 수 있는 전제될 수 있다 (도 10 참조). 그러므로, c-Met 또는 이를 암호화하는 유전자는 단독 또는 상기한 TFF1 또는 이를 암호화하는 유전자와 조합하여, c-Met 저해제의 효능 예측, 효능 검정, 또는 c-Met 저해제의 적용 대상 선별에 있어서 마커로 사용될 수 있다.
따라서, 상기 c-Met 저해제의 효능 예측 및/또는 효능 검정용 조성물 및 키트, 또는 c-Met 저해제의 적용 대상 선별용 조성물 및 키트는 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상과 상호작용하는 물질 이외에, c-Met 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상과 상호작용하는 물질을 추가로 포함할 수 있다. 상기 "상호작용하는 물질"은 c-Met에 특이적으로 결합하는 화합물, 항체, 앱타머, 또는 TFF1를 암호화하는 유전자의 일부 또는 전부에 결합하는 폴리뉴클레오타이드 (예컨대, 프라이머, 프로브, 앱타머 등), 화합물 등일 수 있으며, 이들은 형광 물질, 발색 물질 등의 표지 물질로 표지되거나 표지되지 않은 것일 수 있다.
또한, 상기 c-Met 저해제의 효능 예측 방법 (또는 효능 예측을 위한 정보를 제공하는 방법), 효능 검정 방법 (또는 효능 검정을 위한 정보를 제공하는 방법), 또는 적용 대상 선별 방법 (또는 적용 대상 선별을 위한 정보를 제공하는 방법)은 환자로부터 얻어진 생물 시료의 c-Met 단백질 수준 또는 이를 암호화하는 유전자 (예컨대, 전장 DNA, cDNA, mRNA 등)의 수준을 측정하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 시료의 c-Met 단백질 수준 또는 이를 암호화하는 유전자 (예컨대, 전장 DNA, cDNA, mRNA 등)의 수준을 측정하는 단계는 단계는 앞서 설명한 TFF1 및/또는 이를 암호화하는 유전자의 수준을 측정하는 단계와의 순서에 있어서 제한이 없으며, 상기 두 측정 단계는 동시에 또는 순서에 관계없이 순차적으로 수행될 수 있다. 그 구체적인 측정 단계는 앞서 기재한 바와 같다. 예컨대, 통상적인 웨스턴 블라팅 방법을 사용하여, 상기 생물시료 (예컨대, 암세포 또는 암조직)으로부터 얻어진 전체 세포내 단백질 일정량 (예컨대, 10ug(microgram))을 로딩하고, 멤브레인에 일정시간 (예컨대, 30초 정도) 노출시 band가 검출되는 경우, c-Met 저해제를 사용하는 치료가 효능을 나타낼 수 있는 전제 요건이 충족되었다고 판단할 수 있다. 또 다른 구체예에서, Affymetrix array을 사용하여 제조자 설명서에 따라서 mRNA 수준을 측정한 결과, 생물 시료 내 c-Met의 mRNA 수준이 약 13.5 이상, 약 13.6 이상 또는 약 13.78 이상인 경우, c-Met 저해제를 사용하는 치료가 효능을 나타낼 수 있는 전제 요건이 충족되었다고 판단할 수 있다. 이와 같은 c-Met의 고발현 특성을 갖는 암세포는 주로 폐암, 유방암, 뇌암, 위암, 간암, 신장암 등의 암세포일 수 있으나, 다른 종류의 암세포라도 하여도 환자 개개인의 특성에 따라서 c-Met 발현량이 높은 경우도 c-Met 저해제를 이용하는 치료 대상에 포함될 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 c-Met 저해제의 효능 예측 또는 검정 방법 (또는 효능 예측 또는 검정에 정보를 제공하는 방법) 또는 c-Met 저해제의 적용 대상 선별 방법 (또는 대상 선별에 정보를 제공하는 방법)에서 사용된 생물 시료는 c-Met 발현량이 높은, 예컨대, Affymetrix array를 이용한 측정 결과 (예컨대, log2 기준), c-Met 수준이 약 13.5 이상, 약 13.6 이상 또는 약 13.78 이상인 조직, 세포, 또는 체액 (혈액, 혈청, 소변, 타액 등)일 수 있다.
본 명세서에서, 상기 c-Met 저해제의 적용 대상은 c-Met 저해제를 사용하는 치료법을 적용하기에 적합한 환자를 의미하는 것으로, 모든 포유류, 예컨대 인간, 원숭이 등의 영장류, 마우스, 래트 등의 설치류일 수 있고, 예컨대 암환자일 수 있다. 상기 생물 시료는 환자(예컨대, 인간, 원숭이 등의 영장류, 마우스, 래트 등의 설치류 등을 포함하는 포유류), 또는 상기 환자로부터 분리되거나 인공적으로 배양된 세포, 조직, 체액 (예컨대, 혈액, 혈청, 소변, 타액 등) 등일 수 있으며, 예컨대 혈액 또는 혈청일 수 있다.
다른 예는 상기 선별된 c-Met 저해제의 적용 대상에게 c-Met 저해제를 투여하는 단계를 포함하는 c-Met 억제 방법을 제공한다.
다른 예는 상기 선별된 c-Met 저해제의 적용 대상에게 c-Met 저해제를 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다.
상기 c-Met 억제 방법 또는 암의 예방 및/또는 치료 방법은 상기 투여 단계 이전에 상기 항 c-Met 항체 적용 대상을 선별하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 그 구체적 방법 및 단계를 앞서 설명한 바와 같다. 상기 c-Met 저해제는 항 c-Met 항체일 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 c-Met 억제 방법 또는 암의 예방 및/또는 치료 방법은,
c-Met 저해제의 적용 대상을 확인하는 단계; 및
상기 c-Met 저해제의 적용 대상에게 c-Met 저해제의 약학적 유효량을 투여하는 단계
를 포함할 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 c-Met 억제 방법 또는 암의 예방 및/또는 치료 방법은,
생물 시료 내의 TFF1 및/또는 이를 암호화하는 유전자의 수준을 측정하여 c-Met 저해제의 적용 대상을 선별하는 단계;
상기 선별된 c-Met 저해제의 적용 대상에게 c-Met 저해제의 약학적 유효량을 투여하는 단계
를 포함할 수 있다.
이 때, 상기 c-Met 저해제의 투여 조건 예컨대, 투여량, 투여 간격, 및/또는 투여 회수는 상기 c-Met 저해제의 효능 검정 방법에서 판단된 c-Met 저해제의 적절한 투여 조건일 수 있다.
한편, c-Met과 TFF1를 함께 저해하는 경우, c-Met만 저해하는 경우와 비교하여, 암 치료 효능, 예컨대, c-Met 저해제에 대하여 저항성을 갖는 암에 대한 치료 효능이 현저하게 증진됨을 확인하였다 (도 5 및 도 8 참조).
따라서, 본 발명의 다른 예는 c-Met 저해제 및 TFF1 저해제를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 및/또는 치료를 위한 병용 투여용 약학 조성물을 제공한다.
일 구체예에서, 상기 병용 투여용 약학 조성물은 c-Met 저해제의 약학적 유효량 및 TFF1 저해제의 약학적 유효량이 혼합된 혼합제를 포함하는 두 약물의 동시 투여를 위한 형태일 수 있다. 다른 구체예에서, 상기 병용 투여용 약학 조성물은 c-Met 저해제의 약학적 유효량 및 TFF1 저해제의 약학적 유효량이 각각 제제화되어 동시적 또는 순차적으로 투여되기 위한 형태일 수 있다. 이 경우, 상기 병용 투여용 약학 조성물은 유효 성분으로 c-Met 저해제의 약학적 유효량을 포함하는 제1 약학 조성물 및 유효성분으로 TFF1 저해제의 약학적 유효량을 포함하는 제2 약학 조성물을 포함하는 동시적 또는 순차적 투여를 위한 병용 투여용 약학 조성물일 수 있다. 순차적 투여의 경우 그 순서는 서로 바뀌어도 무방하다.
다른 예는 c-Met 저해제의 약학적 유효량을 포함하는 제1 약학 조성물, TFF1 저해제의 약학적 유효량을 포함하는 제2 약학 조성물, 및 포장 용기를 포함하는, 암의 예방 및/또는 치료용 키트를 제공한다.
또 다른 예는 c-Met 저해제 및 TFF1 저해제를 암의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자에게 병용 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다. 상기 방법은 투여하는 단계 이전에 암의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 환자를 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
한 구체예에서, 상기 병용 투여는 c-Met 저해제와 TFF1 저해제를 혼합한 혼합제를 투여함으로써 수행될 수 있다. 다른 구체예에서, 상기 병용 투여는 c-Met 저해제를 투여하는 제1 단계 및 TFF1 저해제를 투여하는 제2 단계를 동시에 또는 순차적으로 수행하는 것일 수 있다. 순차적으로 투여하는 경우 그 순서는 서로 바뀌어도 무방하다.
일 구체예에서, 상기 TFF1 저해제는 TFF1 단백질 및/또는 TFF1를 암호화하는 유전자의 발현 및/또는 기능을 억제하는 모든 물질일 수 있으며, 예컨대, TFF1 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 압타머, 화합물 (small molecule), TFF1를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA (small interfering RNA), shRNA (small hairpin RNA), miRNA (microRNA), 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 c-Met 저해제는 항 c-Met 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다. 상기 항 c-Met 항체는 c-Met을 항원으로 인식하는 모든 항체 또는 그의 항원 결합 단편일 수 있다. 예컨대, 상기 항 c-Met 항체는 c-Met에 특이적으로 결합하여 세포내 이동(internalization) 및 분해(degradation)를 유도하는 모든 항체 또는 그의 항원 결합 단편일 수 있다. 상기 항 c-Met 항체는 c-Met의 특정 부위, 예컨대 SEMA 도메인 내의 특정 부위를 에피토프로 인식하는 것일 수 있다.
본 명세서에서, 별도의 언급이 없는 한, 항 c-Met 항체는 완전한 형태의 항 c-Met 항체뿐 아니라 상기 항체의 항원 결합 부위도 포함하기 위하여 사용된다.
상기 "c-Met 단백질"은 간세포 성장 인자와 결합하는 수용체 티로신 카이네이즈를 의미한다. 상기 c-Met 단백질은 모든 종에서 유래하는 것일 수 있으며, 예컨대, 인간 c-Met (예컨대, NP_000236), 원숭이 c-Met (예컨대, Macaca mulatta, NP_001162100) 등과 같은 영장류 유래의 것, 또는 마우스 c-Met (예컨대, NP_032617.2), 래트 c-Met (예컨대, NP_113705.1) 등과 같은 설치류 유래의 것 등일 수 있다. 상기 단백질은 예를 들면, GenBank Aceession Number NM_000245에 제공된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 폴리펩티드, 또는 GenBank Aceession Number NM_000236에 제공된 폴리펩티드 서열에 의해 암호화된 단백질, 또는 그의 세포외 도메인을 포함한다. 수용체 티로신 키나제 c-Met은 예를 들면, 암발생, 암전이, 암세포 이동, 암세포 침투, 신생혈관 생성 과정 등의 여러 가지 기작에 관여한다.
HGF(Hepatocyte growth factor)의 수용체인 c-Met은 세포외 부위, 막투과 부위, 세포내 부위의 세 부분으로 구분되며, 세포외 부위의 경우, 이황화 결합에 의해 α-소단위체와 β-소단위체가 연결된 형태로 HGF 결합 도메인인 SEMA 도메인, PSI 도메인(plexin-semaphorins-integrin homology domain) 및 IPT 도메인(immunoglobulin-like fold shared by plexins and transcriptional factors domain)으로 이루어진다. c-Met 단백질의 SEMA 도메인은 서열번호 79의 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있으며, c-Met의 세포외 부위에 존재하는 도메인으로서, HGF가 결합하는 부위에 해당한다. SEMA 도메인 중에서 특정 부위, 예컨대, 106번째부터 124번째까지에 해당하는 서열번호 71의 아미노산 서열을 갖는 영역은 c-Met 단백질의 SEMA 도메인 내의 에피토프 중 2번과 3번 프로펠러 도메인 사이의 루프(loop) 부위에 해당하며, 본 발명에서 제안되는 항 c-Met 항체의 에피토프로 작용할 수 있다.
용어, "에피토프(epitope)"는 항원 결정 부위(antigenic determinant)로서, 항체에 의해 인지되는 항원의 일부분을 의미하는 것으로 해석된다. 일 구체예에 따르면, 상기 에피토프는 c-Met 단백질의 SEMA 도메인(서열번호 79) 내의 연속하는 5개 이상의 아미노산을 포함하는 부위, 예컨대, c-Met 단백질의 SEMA 도메인(서열번호 79) 내의 106번째부터 124번째까지에 해당하는 서열번호 71 내에 위치하는 연속하는 5개 내지 19개의 아미노산을 포함하는 것일 수 있다. 예컨대, 상기 에피토프는 서열번호 71의 아미노산 서열 중 서열번호 73(EEPSQ)을 포함하여 연속하는 5 내지 19개의 아미노산으로 이루어진 것일 수 있으며, 예컨대, 서열번호 71, 서열번호 72 또는 서열번호 73의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드일 수 있다.
상기 서열번호 72의 아미노산 서열을 갖는 에피토프는 c-Met 단백질의 SEMA 도메인 내의 2번과 3번 프로펠러 구조의 도메인 사이의 루프 부위 중 가장 바깥으로 위치한 부위에 해당하며, 상기 서열번호 73의 아미노산 서열을 갖는 에피토프는 일 구체예에 따른 항체 또는 항원 결합 단편이 가장 특이적으로 결합하는 부위이다.
따라서, 항 c-Met 항체는 서열번호 서열번호 71의 아미노산 서열 중 서열번호 73(EEPSQ)을 포함하는 연속하는 5 내지 19개의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 것일 수 있으며, 예컨대, 서열번호 71, 서열번호 72, 또는 서열번호 73의 아미노산 서열을 갖는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편일 수 있다.
일 구체예에 따르면, 상기 항 c-Met 항체는,
서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1, 서열번호 5의 아미노산 서열, 서열번호 2의 아미노산 서열, 또는 서열번호 2의 아미노산 서열 내의 3번째부터 10번째까지의 아미노산을 포함하는 연속하는 8 내지 19개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2, 및 서열번호 6의 아미노산 서열, 서열번호 85의 아미노산 서열, 또는 서열번호 85의 아미노산 서열 내의 1번째부터 6번째까지의 아미노산을 포함하는 연속하는 6 내지 13개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR), 또는 상기 하나 이상의 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는 중쇄 가변 부위;
서열번호 7의 아미노산 서열의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1, 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2, 및 서열번호 9의 아미노산 서열, 서열번호 86의 아미노산 서열, 또는 서열번호 89의 아미노산 서열 내의 1번째부터 9번째까지의 아미노산을 포함하는 9 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 경쇄 상보성 결정 영역 또는 상기 하나 이상의 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하는 경쇄 가변 부위;
상기 중쇄 상보성 결정영역 및 경쇄 상보성 결정영역의 조합; 또는
상기 중쇄 가변 부위 및 경쇄 가변 부위의 조합
을 포함하는 것일 수 있다.
상기 서열번호 4 내지 서열번호 9는 각각 하기 일반식 Ⅰ 내지 일반식 Ⅵ으로 표시되는 아미노산 서열이다:
일반식 Ⅰ
Xaa1-Xaa2-Tyr-Tyr-Met-Ser (서열번호 4),
일반식 Ⅱ
Arg-Asn-Xaa3-Xaa4-Asn-Gly-Xaa5-Thr (서열번호 5),
일반식 Ⅲ
Asp-Asn-Trp-Leu-Xaa6-Tyr (서열번호 6),
일반식 Ⅳ
Lys-Ser-Ser-Xaa7-Ser-Leu-Leu-Ala-Xaa8-Gly-Asn-Xaa9-Xaa10-Asn-Tyr-Leu-Ala (서열번호 7)
일반식 Ⅴ
Trp-Xaa11-Ser-Xaa12-Arg-Val-Xaa13 (서열번호 8)
일반식 Ⅵ
Xaa14-Gln-Ser-Tyr-Ser-Xaa15-Pro-Xaa16-Thr (서열번호 9)
상기 일반식 Ⅰ에서, Xaa1은 존재하지 않거나 Pro 또는 Ser이고, Xaa2는 Glu 또는 Asp이며,
상기 일반식 Ⅱ에서, Xaa3은 Asn 또는 Lys이며, Xaa4는 Ala 또는 Val이고, Xaa5는 Asn 또는 Thr이며,
상기 일반식 Ⅲ에서, Xaa6은 Ser 또는 Thr이고,
상기 일반식 Ⅳ에서, Xaa7은 His, Arg, Gln 또는 Lys이고, Xaa8은 Ser 또는 Trp이고, Xaa9은 His 또는 Gln이며, Xaa10는 Lys 또는 Asn이고,
상기 일반식 Ⅴ에서, Xaa11은 Ala 또는 Gly이며, Xaa12은 Thr 또는 Lys이고, Xaa13는 Ser 또는 Pro이며,
상기 일반식 Ⅵ에서, Xaa14은 Gly, Ala 또는 Gln이고, Xaa15는 Arg, His, Ser, Ala, Gly 또는 Lys이며, Xaa16는 Leu, Tyr, Phe 또는 Met이다.
일 구체예에서, 상기 CDR-H1은 서열번호 1, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다. 상기 CDR-H2는 서열번호 2, 서열번호 25, 및 서열번호 26으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다. 상기 CDR-H3는 서열번호 3, 서열번호 27, 서열번호 28, 및 서열번호 85로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다.
상기 CDR-L1은 서열번호 10, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 106으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다. 상기 CDR-L2는 서열번호 11, 서열번호 34, 서열번호 35, 및 서열번호 36으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다. 상기 CDR-L3은 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 37, 서열번호 86, 및 서열번호 89로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 1, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드(CDR-H1), 서열번호 2, 서열번호 25, 및 서열번호 26으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드(CDR-H2), 및 서열번호 3, 서열번호 27, 서열번호 28, 및 서열번호 85으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드(CDR-H3)를 포함하는 중쇄 가변 부위; 및 서열번호 10, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 106으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드(CDR-L1), 서열번호 11, 서열번호 34, 서열번호 35, 및 서열번호 36으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드(CDR-L2), 및 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 37, 서열번호 86, 및 서열번호 89로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드(CDR-L3)를 포함하는 경쇄 가변 부위를 포함하는 것일 수 있다.
일 구체예에 따르면, 항 c-Met 항체 또는 항원 결합 단편에서, 상기 중쇄 가변 부위는 서열번호 17, 서열번호 74, 서열번호 87, 서열번호 90, 서열번호 91, 서열번호 92, 서열번호 93 또는 서열번호 94의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 부위는 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 75, 서열번호 88, 서열번호 95, 서열번호 96, 서열번호 97, 서열번호 98, 서열번호 99 또는 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.
원하는 항원을 피면역 동물에게 면역시켜 생산하는 동물 유래 항체는 일반적으로 치료 목적으로 인간에 투여 시 면역거부반응이 일어날 수 있으며, 이러한 면역거부반응을 억제하고자 키메릭 항체(chimeric antibody)가 개발되었다. 키메릭 항체는 유전공학적 방법을 이용하여 항-아이소타입(anti-isotype) 반응의 원인이 되는 동물 유래 항체의 불변영역을 인간 항체의 불변영역으로 치환한 것이다. 키메릭 항체는 동물 유래 항체에 비하여 항-아이소타입 반응에 있어서 상당 부분 개선되었으나, 여전히 동물 유래 아미노산들이 가변 부위에 존재하고 있어 잠재적인 항-이디오타입(anti-idiotypic) 반응에 대한 부작용을 내포하고 있다. 이러한 부작용을 개선하고자 개발된 것이 인간화 항체(humanized antibody)이다. 이는 키메릭 항체의 가변 부위 중 항원의 결합에 중요한 역할을 하는 CDR(complementaritiy determining regions) 부위를 인간 항체 골격(framework)에 이식하여 제작된다.
인간화 항체를 제작하기 위한 CDR 이식(grafting) 기술에 있어서 가장 중요한 것은 동물 유래 항체의 CDR 부위를 가장 잘 받아들일 수 있는 최적화된 인간 항체를 선정하는 것이며, 이를 위하여 항체 데이터베이스의 활용, 결정구조(crystal structure)의 분석, 분자모델링 기술 등이 활용된다. 그러나, 최적화된 인간 항체 골격에 동물 유래 항체의 CDR 부위를 이식할지라도 동물 유래 항체의 골격에 위치하면서 항원 결합에 영향을 미치는 아미노산이 존재하는 경우가 있기 때문에, 항원 결합력이 보존되지 못하는 경우가 상당수 존재하므로, 항원 결합력을 복원하기 위한 추가적인 항체 공학 기술의 적용은 필수적이라고 할 수 있다.
일 구체예에 따르면, 상기 항체는 마우스 유래 항체, 마우스-인간 키메릭 항체, 인간화 항체, 또는 인간 유래 항체일 수 있다. 상기 항체는 생체에서 분리된 것일 수 있다.
완전한 항체는 2개의 전장(full length) 경쇄 및 2개의 전장 중쇄를 가지는 구조이며 각각의 경쇄는 중쇄와 이황화 결합으로 연결되어 있다. 항체의 불변영역은 중쇄 불변영역과 경쇄 불변영역으로 나뉘어지며, 중쇄 불변영역은 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 및 엡실론(ε) 타입을 가지고, 서브클래스로 감마1(γ1), 감마2(γ2), 감마3(γ3), 감마4(γ4), 알파1(α1) 및 알파2(α2)를 가진다. 경쇄의 불변영역은 카파(κ) 및 람다(λ) 타입을 가진다.
용어, "중쇄(heavy chain)"는 항원에 특이성을 부여하기 위해 충분한 가변 부위 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 부위 도메인 VH 및 3개의 불변영역 도메인 CH1, CH2 및 CH3과 힌지(hinge)를 포함하는 전장 중쇄 및 이의 단편을 모두 포함하는 의미로 해석된다. 또한, 용어 "경쇄(light chain)"는 항원에 특이성을 부여하기 위한 충분한 가변 부위 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 부위 도메인 VL 및 불변영역 도메인 CL을 포함하는 전장 경쇄 및 이의 단편을 모두 포함하는 의미로 해석된다.
용어, "CDR(complementarity determining region)"은 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄의 고가변 부위(hypervariable region)의 아미노산 서열을 의미한다. 중쇄 및 경쇄는 각각 3개의 CDR을 포함할 수 있다(CDRH1, CDRH2, CDRH3 및 CDRL1, CDRL2, CDRL3). 상기 CDR은 항체가 항원 또는 에피토프에 결합하는 데 있어서 주요한 접촉 잔기를 제공할 수 있다. 한편, 본 명세서에 있어서, 용어, "특이적으로 결합" 또는 "특이적으로 인식"은 당업자에게 통상적으로 공지되어 있는 의미와 동일한 것으로서, 항원 및 항체가 특이적으로 상호작용하여 면역학적 반응을 하는 것을 의미한다.
용어, "항원 결합 단편"은 면역글로불린 전체 구조에 대한 그의 단편으로, 항원이 결합할 수 있는 부분을 포함하는 폴리펩타이드의 일부를 의미한다. 일 구체예에서, 상기 항원 결합 단편은 scFv, (scFv)2, Fab, Fab' 또는 F(ab')2일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 상기 항원 결합 단편 중 Fab는 경쇄 및 중쇄의 가변 부위와 경쇄의 불변영역 및 중쇄의 첫 번째 불변영역(CH1)을 가지는 구조로 1개의 항원 결합 부위를 가진다.
Fab'는 중쇄 CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 힌지 영역(hinge region)을 가진다는 점에서 Fab와 차이가 있다.
F(ab')2 항체는 Fab'의 힌지 영역의 시스테인 잔기가 디설파이드 결합을 이루면서 생성된다. Fv는 중쇄 가변 부위 및 경쇄 가변 부위만을 가지고 있는 최소의 항체조각으로 Fv 단편을 생성하는 재조합 기술은 당업계에 널리 공지되어 있다.
이중쇄 Fv(two-chain Fv)는 비공유 결합으로 중쇄 가변 부위와 경쇄 가변 부위가 연결되어 있고 단쇄 Fv(single-chain Fv)는 일반적으로 펩타이드 링커를 통하여 중쇄의 가변 부위와 단쇄의 가변 부위가 공유 결합으로 연결되거나 또는 C-말단에서 바로 연결되어 있어서 이중쇄 Fv와 같이 다이머와 같은 구조를 이룰 수 있다. 상기 펩타이드 링커는 1 내지 100개 또는 2 내지 50개의 임의의 아미노산으로 이루어진 폴리펩타이드일 수 있으며, 그 포함된 아미노산 종류는 제한이 없다.
상기 항원 결합 단편은 단백질 가수분해 효소를 이용해서 얻을 수 있고(예를 들어, 전체 항체를 파파인으로 제한 절단하면 Fab를 얻을 수 있고 펩신으로 절단하면 F(ab')2 단편을 얻을 수 있다), 유전자 재조합 기술을 통하여 제작할 수 있다.
상기 항 c-Met 항체의 앞서 정의된 CDR 부위 또는 경쇄 가변 부위와 중쇄 가변 부위를 제외한 경쇄 불변영역과 중쇄 불변영역은 모든 서브타입의 면역글로불린(예컨대, IgA, IgD, IgE, IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM 등)의 경쇄 불변영역과 중쇄 불변영역일 수 있다.
용어 "힌지 영역(hinge region)"은 항체의 중쇄에 포함되어 있는 영역으로서, CH1 및 CH2 영역 사이에 존재하며, 항체 내 항원 결합 부위의 유연성(flexibility)를 제공하는 기능을 하는 영역을 의미한다.
동물 유래 항체가 키메릭화(chimerization) 과정을 거치게 되면, 동물 유래의 IgG1 힌지는 인간 IgG1 힌지로 치환되지만, 동물 유래 IgG1 힌지는 인간 IgG1 힌지에 비하여 그 길이가 짧고, 두 개의 중쇄 사이의 이황화결합(disulfide bond)이 3개에서 2개로 감소하여 힌지의 경직성(rigidity)이 서로 상이한 효과를 보이게 된다. 따라서, 힌지 영역의 변형(modification)은 인간화 항체의 항원 결합 효율성을 증가시킬 수 있다. 상기 힌지 영역의 아미노산 서열을 변형시키기 위한 아미노산의 결실, 부가 또는 치환 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다.
이에, 본 발명의 일 구체예에서, 항원 결합 효율성을 증진시키기 위하여, 상기 항 c-Met 항체 또는 항원 결합 단편은 하나 이상의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환되어 아미노산 서열이 변형된 힌지 영역을 포함하는 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 항체는 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 102, 서열번호 103 또는 서열번호 104의 아미노산 서열을 갖는 힌지 영역, 또는 서열번호 105의 아미노산 서열을 갖는 힌지 영역(비변형 인간 힌지 영역)을 포함하는 것일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 힌지 영역은 서열번호 100 또는 서열번호 101의 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다.
일 구체예에서, 항 c-Met 항체는 수탁번호 KCLRF-BP-00220인 하이브리도마 세포에서 생산되는, c-Met 단백질의 세포외 부위(extracellular region)에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체일 수 있다 (대한민국 공개특허 제2011-0047698호 참조; 상기 문헌은 본 명세서에 참조로서 포함됨). 상기의 항 c-Met 항체는 대한민국 공개특허 제2011-0047698호에 정의된 항체를 모두 포함할 수 있다.
상기 항 c-Met 항체의 앞서 정의된 CDR 부위 또는 경쇄 가변 부위와 중쇄 가변 부위를 제외한 경쇄 불변영역과 중쇄 불변영역은 모든 서브타입의 면역글로불린의 경쇄 불변영역과 중쇄 불변영역일 수 있다.
일 구체예에 따르면, 상기 항 c-Met 항체는,
서열번호 62의 아미노산 서열 (이 중에서 1번째부터 17번째까지의 아미노산 서열은 시그널 펩타이드임), 서열번호 62의 18번째부터 462번째까지의 아미노산 서열, 서열번호 64의 아미노산 서열 (이 중에서 1번째부터 17번째까지의 아미노산 서열은 시그널 펩타이드임) 또는 서열번호 64의 18번째부터 461번째까지의 아미노산 서열, 서열번호 66의 아미노산 서열 (이 중에서 1번째부터 17번째까지의 아미노산 서열은 시그널 펩타이드임), 및 서열번호 66의 18번째부터 460번째까지의 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및
서열번호 68의 아미노산 서열 (이 중에서 1번째부터 20번째까지의 아미노산 서열은 시그널 펩타이드임), 서열번호 68의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열, 서열번호 70의 아미노산 서열 (이 중에서 1번째부터 20번째까지의 아미노산 서열은 시그널 펩타이드임), 서열번호 70의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열, 및 서열번호 108의 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄
를 포함하는 것일 수 있다.
예컨대, 상기 항-c-Met 항체는,
서열번호 62의 아미노산 서열 또는 서열번호 62의 18번째부터 462번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열 또는 서열번호 68의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;
서열번호 64의 아미노산 서열 또는 서열번호 64의 18번째부터 461번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열 또는 서열번호 68의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;
서열번호 66의 아미노산 서열 또는 서열번호 66의 18번째부터 460번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열 또는 서열번호 68의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;
서열번호 62의 아미노산 서열 또는 서열번호 62의 18번째부터 462번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 70의 아미노산 서열 또는 서열번호 70의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;
서열번호 64의 아미노산 서열 또는 서열번호 64의 18번째부터 461번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 70의 아미노산 서열 또는 서열번호 70의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체; 또는
서열번호 66의 아미노산 서열 또는 서열번호 66의 18번째부터 460번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 70 또는 서열번호 70의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체
서열번호 62의 아미노산 서열 또는 서열번호 62의 18번째부터 462번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;
서열번호 64의 아미노산 서열 또는 서열번호 64의 18번째부터 461번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체; 및
서열번호 66의 아미노산 서열 또는 서열번호 66의 18번째부터 460번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체
로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다.
한편, 상기 서열번호 70의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드는 인간의 카파 불변영역으로 이루어진 경쇄이며, 서열번호 68의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드는 상기 서열번호 70의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에서 36번 (kabat numbering에 따름, 서열번호 68 내의 62번째 아미노산 위치) 히스티딘 (histidine)이 티로신 (tyrosine)으로 치환된 형태의 폴리펩티드이다. 상기 치환으로 인하여, 일 구체예에 따른 항체의 생산량이 증가될 수 있다. 또한 상기 서열번호 108의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드는 상기 서열번호 68의 아미노산 서열 중 1번째부터 20번째까지의 시그널 펩타이드를 제외한 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에서 kabat numbering에 의한 27e 위치(kabat numbering에 따름, 서열번호 108 내 32번째 위치; CDR-L1 내부)의 세린(Ser)이 트립토판(Trp)으로 치환된 것으로, 상기 치환으로 인하여, 일 구체예에 따른 항체의 활성(예컨대, c-Met에 대한 결합친화도, c-Met 분해 활성 및 Akt 인산화 억제 활성 등)이 보다 증진될 수 있다.
일 구체예에서, 상기 항 c-Met 항체는 서열번호 106의 경쇄 상보성결정영역, 서열번호 107의 경쇄 가변 부위, 또는 서열번호 108의 경쇄를 포함하는 항 c-Met 항체일 수 있다.
상기 c-Met 저해제는 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 적용 (투여)될 수 있으며, 상기 약학적으로 허용 가능한 담체는, 약물의 제제화에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 c-Met 저해제는 상기 성분들 이외에 약학 조성물 제조에 통상적으로 사용되는 희석제, 부형제, 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 추가로 포함할 수 있다.
상기 c-Met 저해제는 경구 또는 비경구로 투여할 수 있다. 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 내피 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여 또는 직장내 투여 등으로 투여할 수 있다. 경구 투여시, 단백질 또는 펩타이드는 소화가 되기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화 되어야 한다. 또한, 상기 c-Met 저해제는 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
본 명세서에 있어서 "약학적 유효량"은 약물이 약학적으로 의미있는 효과를 나타낼 수 있는 양을 의미한다. 1회 투여를 위한 c-Met 저해제의 약학적 유효량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 간격, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 따라서 다양하게 처방될 수 있다. 예컨대, 1회 투여를 위한 상기 c-Met 저해제의 약학적 유효량은 0.001 내지 100mg/kg, 또는 0.02 내지 10mg/kg 범위일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 1회 투여를 위한 약학적 유효량은 단위 용량 형태로 하나의 제제로 제제화되거나, 적절하게 분량하여 제제화되거나, 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다.
본 발명에서 c-Met 저해제는 암 및/또는 암전이의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다. 상기 암은 c-Met의 과발현 및/또는 비정상적인 활성화와 관련된 것일 수 있으며, 고형암 또는 혈액암일 수 있다. 예컨대, 상기 암은 편평상피세포암, 소세포폐암, 비소세포폐암, 폐의 선암, 폐의 편평상피암, 복막암, 피부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 직장암, 항문부근암, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 간세포암, 위장암, 위암, 췌장암, 교아종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁암, 침샘암, 신장암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 두경부암, 뇌암, 골육종 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 암은 원발성 암뿐 아니라 전이성 암도 포함한다. 또한 상기 암은 기존의 c-Met 저해제, 예컨대 항 c-Met 항체에 대하여 저항성을 갖는 암 (예컨대, 위암, 폐암 등의 고형암)일 수 있다.
상기 암의 예방 및/또는 치료 효과는 암세포의 성장을 억제하는 효과뿐 아니라, 이동(migration), 침습(invasion), 전이(metastasis) 등으로 인한 암의 악화를 억제하는 효과를 포함한다.
본 발명은 TFF1 발현을 이용한 항 c-Met 항체의 효능 예측 방법 개발에 관한 내용이다. 본 발명을 통해 다음과 같은 효과를 기대할 수 있다.
1) 항 c-Met 항체가 효능을 나타낼지를 환자의 암조직에서 TFF1 유전자 발현을 확인함으로써 예측할 수 있다. 이는 predictive marker로 사용되어 적용 가능한 환자군 선별에 기여하여 임상 성공률을 증대시킬 수 있다. 궁극적으로는 개인 맞춤 의학의 개념에서 c-Met targeting therapy에서 환자에게 불필요한 치료를 최소화하고 효과가 극대화되는 치료를 가능하게 할 수 있다.
2) 항 c-Met 항체가 효능을 나타낼지 아닐지를 혈액 내에 있는 TFF1 level을 측정함으로써 예측 할 수 있다. TFF1은 secretory protein임으로 혈액 채취로 측정이 가능하다.
3) TFF1의 주기적인 측정을 통해 항 c-Met 항체의 저항성이 유도되는지를 확인할 수 있다. 이러한 저항성 모니터링을 통해 항 c-Met 항체 처리의 주기 및 방법을 조절하여 치료 가능성을 높일 수 있다. TFF1은 secretory protein이므로 혈액 내에서 측정이 가능하여 biopsy 이외의 방안으로 손쉽게 모니터링 가능하다는 장점이 있다.
4) 항 c-Met 항체의 저항성이 유도되어 항 c-Met 항체 단독으로 효과를 보이지 못하는 암 종류에서, 항 c-Met 항체와 함께 TFF1 저해제를 병용투여하면 현저한 항암 효과를 볼 수 있어서, 항 c-Met 항체 효능 증진 또는 저항성 극복 방안을 제시할 수 있다.
도 1은 폐암 세포주에 항 c-Met 항체 처리시의 세포 증식 정도를 보여주는 그래프이다.
도 2는 폐암 세포주에서의 TFF1 전사체 수준을 qPCR로 측정하여 TFF1과 HPRT1과의 CT 값 차이로 나타낸 그래프이다.
도 3은 MKN45 세포와 항 c-Met 항체에 대하여 저항성이 유발된 MKN45 세포에 항 c-Met 항체 처리시의 세포 증식 정도를 보여주는 그래프이다.
도 4는 MKN45 세포와 항 c-Met 항체에 대하여 저항성이 유발된 MKN45 세포에서의 TFF1 전사체 수준을 보여주는 그래프이다.
도 5는 항 c-Met 항체에 대하여 저항성이 유발된 MKN45세포에서 TFF1 발현 억제시의 세포 증식 정도를 보여주는 그래프이다.
도 6은 항 c-Met 항체에 대하여 저항성이 유발된 EBC1 세포에 항 c-Met 항체 처리시의 세포 증식 정도를 보여주는 그래프이다.
도 7은 EBC1 세포와 항 c-Met 항체에 대하여 저항성이 유발된 EBC1 세포에서의 TFF1 전사체 수준을 보여주는 그래프이다.
도 8은 항 c-Met 항체에 대하여 저항성이 유발된 EBC1세포에서 TFF1 발현 억제시의 세포 증식 정도를 보여주는 그래프이다.
도 9는 마우스 xenograft model의 serum에서 TFF1 protein 발현을 측정한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 10은 항 c-Met 항체의 효능군(푸른색 점)과 비효능군(검은색 점 및 붉은색 점)에서의 c-Met mRNA 수준 (Y축) 및 TFF1의 mRNA 수준(X축)을 보여주는 그래프이다.
이하 본 발명을 실시예 및 시험예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 이들 실시예 및 시험예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.
참고예 1: 항 c- Met 항체의 제작
1.1. c- Met 에 대한 마우스 항체 ' AbF46' 의 생산
1.1.1. 마우스의 면역화
하이브리도마 세포주의 개발에 필요한 면역화 된 마우스를 얻기 위하여, 5마리의 마우스에 한 마리당 100 ㎍의 인간의 c-Met/Fc 융합 단백질(R&D Systems)과 동량의 완전 프로인드 어주번트(Freund's adjuvant)를 혼합하여 4-6 주된 BALB/c 마우스(Japan SLC, Inc.)의 복강 내에 주사하였다. 2주 후에 상기와 동일한 방법으로 상기 항원으로 사용된 인간의 c-Met/Fc 융합 단백질을 앞서 주사한 양의 절반인 50 ㎍을 동량의 불완전 프로인드 어주번트(incomplete Freund's adjuvant)과 혼합하여 마우스의 복강 내에 주사하였다. 일주일 후 마지막 부스팅(boosting)이 수행되고 3일 후에 상기 마우스의 꼬리에서 채혈하여 혈청을 얻은 뒤 1/1000로 PBS에 희석하여 ELISA로 c-Met을 인지하는 항체의 역가가 증가됨을 확인하였다. 상기의 결과로 항체의 양이 충분하게 얻어지는 마우스를 선별하여 하기의 세포융합과정을 수행하였다.
1.1.2. 세포 융합 및 하이브리도마의 제조
세포융합 실험 3일 전에 50 ㎍의 PBS에 인간의 c-Met/Fc 융합 단백질 혼합물을 BALB/c 마우스(Japan SLC, Inc.)의 복강 내에 주사하고, 면역화 된 마우스를 마취한 후 몸통의 좌측에 위치한 비장(spleen)을 적출하였다. 적출한 비장을 메쉬로 갈아서 세포를 분리하고, 배양 배지(DMEM, GIBCO, Invitrogen)와 혼합하여 비장세포 현탁액을 만들었다. 상기 현탁액을 원심분리하여 세포층을 회수하였다. 상기 얻어진 비장세포 1x108 개와 골수종세포(Sp2/0) 1x108 개를 혼합한 다음, 원심분리하여 세포를 침전시켰다. 상기 원심분리된 침전물을 천천히 분산시키고, 배양 배지(DMEM)에 들어있는 45%(w/v) 폴리에틸렌글리콜(PEG)(1 ㎖)을 처리하고, 37 ℃에서 1분 동안 유지시킨 후, 배양 배지(DMEM) 1 ㎖을 첨가하였다. 이후 배양배지(DMEM) 10 ㎖을 1분 동안 첨가하고, 37℃의 물에서 5분 동안 방치한 후 50 ㎖로 맞추어 다시 원심분리하였다. 세포 침전물을 분리 배지(HAT 배지)에 1~2x105/㎖ 정도로 재현탁시키고, 96-웰(well) 플레이트에 0.1 ㎖씩 분주한 후 37℃ 이산화탄소 배양기에서 배양하여 하이브리도마 세포군을 제작하였다.
1.1.3. c- Met 단백질에 대한 단일클론 항체를 생산하는 하이브리도마 세포의 선별
상기 참고예 1.1.2에서 제조된 하이브리도마 세포군 중에서 c-Met 단백질에만 특이적으로 반응하는 하이브리도마 세포를 선별하기 위하여 인간의 c-Met/Fc 융합 단백질과 인간의 Fc 단백질을 항원으로 이용한 ELISA 분석 방법을 통하여 스크리닝하였다.
마이크로타이터 플레이트에 인간의 c-Met/Fc 융합 단백질을 한 웰당 각각 50 ㎕ (2 ug/㎖)씩 가하여 플레이트 표면에 부착시키고, 반응하지 않은 항원은 세척하여 제거하였다. c-Met이 아닌 Fc에 결합되는 항체를 선별하여 제외시키기 위하여 인간의 Fc 단백질을 위와 동일한 방법으로 플레이트 표면에 부착시켰다.
상기 참고예 1.1.2에서 얻어진 하이브리도마 세포의 배양액을 상기 준비된 각각 웰에 50 ㎕씩을 가하여 1 시간 동안 반응시킨 후 인산 완충용액-트윈 20(TBST) 용액으로 충분히 세척하여 반응하지 않은 배양액을 제거하였다. 여기에 염소 항-마우스 IgG-호스래디쉬 퍼옥시다제(goat anti-mouse IgG-HRP)를 가하여 1 시간 동안 실온에서 반응시킨 다음, TBST 용액으로 충분히 세척하였다. 이어서 퍼옥시다제의 기질용액(OPD)을 가하여 반응시키고, 그 반응 정도는 ELISA Reader로 450 nm에서 흡광도를 측정하여 확인하였다.
위와 같은 반응 정도 확인에 의하여, 인간의 Fc에는 결합되지 않고, 인간의 c-Met 단백질에만 특이적으로 높은 결합력을 갖는 항체를 분비하는 하이브리도마 세포주들을 반복하여 선별하였다. 반복 선별을 통해 얻은 하이브리도마 세포주를 제한 희석(limiting dilution)하여 단일클론 항체를 생성하는 하이브리도마 세포주 1개의 클론을 최종적으로 얻었다. 최종 선별된 단일클론 항체 생산 하이브리도마를 2009년 10월 6일자로 부다페스트 조약 하의 국제기탁기관인 대한민국 서울 종로구 연건동에 소재하는 한국 세포주연구재단에 기탁하여 수탁번호 KCLRF-BP-00220를 부여받았다 (한국 공개특허 제2011-0047698 참조).
1.1.4. 단일클론 항체의 생산 및 정제
상기 참고예 1.1.3에서 얻은 하이브리도마 세포를 무혈청 배지에서 배양하고 배양액으로부터 단일클론 항체를 생산 정제하였다.
먼저 10%(v/v) FBS가 포함된 배양 배지(DMEM) 배지 50 ㎖에서 배양된 상기 하이브리도마 세포를 원심분리하여 세포 침전물을 20 ㎖ PBS로 2회 이상 세척하여 FBS가 제거된 상태에서, 상기 세포 침전물을 배양 배지(DMEM) 배지 50 ㎖에 재현탁시킨 후, 3일 동안 37℃ 이산화탄소 배양기에서 배양하였다.
이후, 원심분리하여, 항체를 생산하는 세포를 제거하고 항체들이 분비된 배양액을 분리하여, 4℃에 보관하거나 바로 모아서 항체의 분리 정제에 사용하였다. 친화성 칼럼(Protein G agarose column; Pharmacia, USA)을 장착한 AKTA 정제 기기(GE Healthcare)를 이용하여 상기 준비된 배양액 50 ㎖ 내지 300 ㎖로부터 항체를 순수 정제한 후, 단백질 응집용 필터(Amicon)를 사용하여 PBS로 상층액을 치환하여 정제된 항체를 보관하고, 이후의 실시예에 사용하였다.
1.2. c- Met 에 대한 키메릭 항체 chAbF46 의 제작
일반적으로 마우스 항체는 치료 목적으로 인간에게 주입되었을 때 면역거부반응(immunogenicity)을 보일 가능성이 높으므로, 이를 해결하기 위하여, 상기 실시예 1에서 제작된 마우스 항체 AbF46으로부터, 항원 결합에 관련된 변이 영역(variable region)을 제외한 불변영역(constant region)을 인간 IgG1 항체의 서열로 치환하는 키메릭 항체 chAbF46을 제작하였다.
중쇄에 해당하는 뉴클레오타이드 서열은 'EcoRI-signal sequence-VH-NheI-CH-TGA-XhoI'(서열번호 38)로, 경쇄에 해당하는 뉴클레오타이드 서열은 'EcoRI-signal sequence-VL- BsiWI-CL-TGA-XhoI'(서열번호 39)로 구성되도록 각각 디자인하여 유전자를 합성하였다. 이후, Invitrogen 사의 OptiCHOTM Antibody Express Kit (Cat no. 12762-019)에 포함되어 있는 pOptiVECTM-TOPO TA Cloning Kit에 상기 중쇄에 해당하는 뉴클레오타이드 서열을 갖는 DNA 절편(서열번호 38)을, pcDNATM3.3-TOPO TA Cloning Kit(Cat no. 8300-01)에 상기 경쇄에 해당하는 뉴클레오타이드 서열을 갖는 DNA 절편(서열번호 39)을 각각 EcoRI(NEB, R0101S)과 XhoI(NEB, R0146S) 제한 효소를 사용하여 클로닝함으로써, 키메릭 항체의 발현을 위한 중쇄를 포함하는 벡터 및 경쇄를 포함하는 벡터를 각각 구축하였다.
상기 구축된 벡터는 각각 Qiagen Maxiprep kit (Cat no. 12662)을 이용하여 증폭되었으며, 임시발현은 FreestyleTM MAX 293 Expression System (invitrogen)을 이용하여 진행 되었다. 사용된 세포주는 293 F cell 이며, FreeStyle™ 293 Expression Medium를 배지로 사용하여 부유배양방식으로 배양되었다. 임시발현 하루 전 세포를 5x105cells/ml의 농도로 준비한 후, 24시간이 지난 뒤 cell수가 1x106cells/ml이 되었을 때 임시발현을 진행하였다. FreestyleTM MAX reagent (invitrogen)을 사용한 liposomal reagent법으로 형질도입(transfection)을 진행 하였으며, 15ml tube에 중쇄 DNA: 경쇄 DNA=1:1 의 비율로 DNA를 준비하여 OptiPro™ SFM (invtrogen) 2ml과 mix하고(A), 또 다른 15ml tube에 FreestyleTM MAX reagent 100㎕와 OptiPro™ SFM 2ml을 mix(B)한 후, (A)와 (B)을 mix하여 15분간 incubation 한 후, 하루 전에 준비한 세포에 혼합액을 천천히 섞어주었다. 형질도입 완료 후, 37 ℃, 80% humidity, 8% CO2 , 130 rpm incubator에서 5일간 배양하였다.
이후, 10%(v/v) FBS가 첨가된 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 5시간 동안 배양한 다음, FBS가 첨가되지 않은 DMEM 배지로 48시간 동안 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다.
상기 배양된 세포를 원심분리하여 상등액을 각각 100 ml 취하고, AKTA Prime (GE healthcare)를 이용하여 정제하였다. AKTA Prime에 Protein A 컬럼(GE healthcare, 17-0405-03)을 설치하고 배양액을 5 ml/min의 유속으로 흘려준 후, IgG elution buffer(Thermo Scientific, 21004)로 용출시켰다. 얻어진 용출물을 PBS 버퍼로 교환하여 최종적으로 키메릭 항체 AbF46(이하, chAbF46로 명명함)을 정제하였다.
1.3. 키메릭 항체 chAbF46 으로부터 인간화 항체 huAbF46 의 제작
1.3.1. 중쇄의 인간화( Heavy chain humanization )
H1-heavy 및 H3-heavy 2종의 디자인을 위하여, 우선 Ig Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)를 통하여 상기 참고예 1.2에서 정제된 마우스 항체 AbF46의 VH 유전자와 가장 상동성이 높은 인간의 생식선(germline) 유전자를 분석하였다. 그 결과, VH3-71이 아미노산 레벨에서 83%의 상동성을 가짐을 확인하였으며, 마우스 항체 AbF46의 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3를 Kabat numbering으로 정의하고, 마우스 항체 AbF46의 CDR 부분이 VH3-71의 골격(framework)에 도입되도록 디자인하였다. 이때, 30번(S→T), 48번(V→L), 73번(D→N), 78번(T→L) 아미노산은 원래 마우스 AbF46 항체의 아미노산 서열로 back-mutation 하였다. 이후, H1은 추가로 83번(R→K)과 84번(A→T) 아미노산에 돌연변이를 주어 최종적으로 H1-heavy(서열번호 40)와 H3-heavy(서열번호 41)를 구축하였다.
H4-heavy의 디자인을 위하여 인간항체의 골격(framework) 서열을 찾아 본 결과, AbF46 항체의 마우스 골격 서열과 서열이 매우 유사함과 동시에, 기존의 가장 안정하다고 알려진 VH3 subtype을 사용하여 Kabat numbering으로 정의된 마우스 항체 AbF46의 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3를 도입하였다. 이를 통하여 H4-heavy (서열번호 42)를 구축하였다.
1.3.2. 경쇄의 인간화( Light chain humanization )
H1-light(서열번호 43) 및 H2-light(서열번호 44) 2종의 디자인을 위하여, Ig Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)를 통하여, 마우스 항체 AbF46의 VL 유전자와 가장 상동성이 높은 인간 생식선 유전자를 분석하였다. 그 결과, VK4-1이 아미노산 레벨에서 75%의 상동성을 가짐을 확인하였으며, 마우스 항체 AbF46의 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3를 Kabat numbering으로 정의하고, 마우스 항체 AbF46의 CDR부분이 VK4-1의 골격에 도입되도록 디자인하였다. 이때, H1-light는 36번(Y→H), 46번(L→M), 49번(Y→I) 3개의 아미노산을 back-mutation 하였으며, H2-light는 49번 아미노산(Y→I) 1개만을 back-mutation 하여 구축하였다.
H3-light(서열번호 45)의 디자인을 위하여, Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)를 통하여 마우스 항체 AbF46의 VL 유전자와 가장 상동성이 높은 인간 생식선 유전자를 분석한 결과 중, 상기 VK4-1 이외에 VK2-40을 선정하였다. 마우스 항체 AbF46 VL과 VK2-40은 아미노산 레벨에서 61%의 상동성을 가짐을 확인하였으며, 마우스 항체 AbF46의 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3를 Kabat numbering으로 정의하고, 마우스 항체 AbF46의 CDR부분이 VK4-1의 골격에 도입되도록 디자인하였다. 이때, H3-light는 36번(Y→H), 46번(L→M), 49번(Y→I) 3개의 아미노산을 back-mutation 하여 구축하였다.
H4-light(서열번호 46)의 디자인을 위하여, 인간항체의 골격(framework) 서열을 찾아 본 결과, 기존의 가장 안정하다고 알려진 Vk1 subtype을 사용하여 Kabat numbering으로 정의된 마우스 항체 AbF46의 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3를 도입하였다. 이때, H4-light는 36번(Y→H), 46번(L→M), 49번(Y→I) 3개의 아미노산을 추가로 back-mutation 하여 구축하였다.
이후, Invitrogen 사의 OptiCHOTM Antibody Express Kit (Cat no. 12762-019)에 포함되어 있는 pOptiVECTM-TOPO TA Cloning Kit에 상기 중쇄에 해당하는 뉴클레오타이드 서열을 갖는 DNA 절편(H1-heavy; 서열번호 47, H3-heavy; 서열번호 48, H4-heavy; 서열번호 49)을 pcDNATM3.3-TOPO TA Cloning Kit 에 상기 경쇄에 해당하는 뉴클레오타이드 서열을 갖는 DNA 절편(H1-light; 서열번호 50, H2-light; 서열번호 51, H3-light; 서열번호 52, H4-light; 서열번호 53)을 각각 EcoRI(NEB, R0101S)과 XhoI(NEB, R0146S) 제한 효소를 사용하여, 클로닝함으로써, 인간화 항체의 발현을 위한 벡터를 구축하였다.
상기 구축된 벡터는 각각 Qiagen Maxiprep kit (Cat no. 12662)을 이용하여 증폭되었으며, 임시발현은 FreestyleTM MAX 293 Expression System (invitrogen)을 이용하여 진행 되었다. 사용된 세포주는 293 F cell 이며, FreeStyle™ 293 Expression Medium를 배지로 사용하여 부유배양방식으로 배양되었다. 임시발현 하루 전 세포를 5x105cells/ml의 농도로 준비한 후, 24시간이 지난 뒤 cell수가 1x106cells/ml이 되었을 때 임시발현을 진행하였다. FreestyleTM MAX reagent (invitrogen)을 사용한 liposomal reagent법으로 형질도입(transfection)을 진행 하였으며, 15ml tube에 중쇄 DNA: 경쇄 DNA=1:1 의 비율로 DNA를 준비하여 OptiPro™ SFM (invtrogen) 2ml과 mix하고(A), 또 다른 15ml tube에 FreestyleTM MAX reagent 100㎕와 OptiPro™ SFM 2ml을 mix(B)한 후, (A)와 (B)을 mix하여 15분간 incubation 한 후, 하루 전에 준비한 세포에 혼합액을 천천히 섞어주었다. 형질도입 완료 후, 37 ℃, 80% humidity, 8% CO2 , 130 rpm incubator에서 5일간 배양하였다.
상기 배양된 세포를 원심분리하여 상등액 각 100 ml을 취하고, AKTA Prime (GE healthcare)를 이용하여 정제하였다. AKTA Prime에 Protein A 컬럼(GE healthcare, 17-0405-03)을 설치하고 배양액을 5 ml/min의 유속으로 흘려준 후, IgG elution buffer(Thermo Scientific, 21004)로 용출하였다. 이를 PBS buffer로 교환하여 최종적으로 인간화 항체 AbF46(이하, huAbF46로 명명함)을 정제하였다. 한편, 이후 실시예에서 사용한 인간화 항체 huAbF46의 중쇄, 경쇄 조합은 H4-heavy (서열번호 42) 및 H4-light(서열번호 46)이다.
1.4. huAbF46 항체의 scFv 라이브러리 제작
huAbF46 항체의 중쇄 가변 부위 및 경쇄 가변 부위를 이용하여 huAbF46 항체의 scFv를 제작하기 위한 유전자를 디자인하였다. 각각의 중쇄 가변 부위 및 경쇄 가변 부위를 'VH-링커-VL'의 형태가 되도록 하고, 상기 링커는 'GLGGLGGGGSGGGGSGGSSGVGS'(서열번호 54)의 아미노산 서열을 가지도록 디자인하였다. 이렇게 디자인된 huAbF46 항체의 scFv를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드(서열번호 55)를 바이오니아에 의뢰하여 합성하였으며, 이를 발현시키기 위한 벡터를 서열번호 56에 나타내었다.
이후, 상기 벡터로부터 발현된 결과물을 분석하여, c-Met에 특이적인 결합력을 보임을 확인하였다.
　
1.5. 친화도 성숙( affinity maturation )을 위한 라이브러리 유전자의 제작
1.5.1. 표적 CDR 의 선정 및 프라이머 제작
huAbF46 항체의 친화도 성숙(affinity maturation)을 위하여 6개의 상보성 결정 부위(complementary determining region, CDR)를 상기 제작된 마우스 항체 AbF46으로부터 'Kabat numbering'에 의하여 정의하였으며, 각각의 CDR은 하기 표 1과 같다.
CDR 아미노산 서열
CDR-H1 DYYMS(서열번호 1)
CDR-H2 FIRNKANGYTTEYSASVKG(서열번호 2)
CDR-H3 DNWFAY(서열번호 3)
CDR-L1 KSSQSLLASGNQNNYLA(서열번호 10)
CDR-L2 WASTRVS(서열번호 11)
CDR-L3 QQSYSAPLT(서열번호 12)
항체 CDR의 무작위 서열 도입을 위하여 다음과 같이 프라이머를 제작하였다. 기존의 무작위 서열 도입 방식은 돌연변이를 주고자 하는 부위에 동일한 비율의 염기 (25% A, 25% G, 25% C, 25% T)가 도입되도록 N 코돈을 이용하였으나, 본 실시예에서는 huAbF46 항체의 CDR에 무작위 염기를 도입하기 위하여, 각 CDR의 아미노산을 코딩하는 3개의 야생형(wild-type) 뉴클레오타이드 중 첫번째와 두번째 뉴클레오타이드의 85%는 그대로 보존하고, 나머지 3개의 염기를 각각 5%씩 도입하는 방식을 취하였다. 또한, 세 번째 뉴클레오타이드는 동일하게(33% G, 33% C, 33% T)가 도입되도록 프라이머를 디자인하였다.
　
1.5.2. huAbF46 항체의 라이브러리 제작 및 c- Met 에 대한 결합력 확인
CDR의 무작위 서열 도입을 통한 항체 라이브러리 유전자의 구축은 상기 참고예 1.5.1과 같은 방법으로 제작된 프라이머를 이용하여 수행하였다. 주형으로 huAbF46 항체의 scFv를 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 이용하여, 2개의 PCR 절편을 제작하고, 이를 중복 확장 중합효소연쇄반응(overlap extension PCR) 방법을 통하여, 원하는 CDR만 각각 돌연변이된 huAbF46 항체의 scFv 라이브러리 유전자를 확보하여 제작된 6개의 CDR을 각각 표적으로 하는 라이브러리들을 구축하였다.
이렇게 제작된 라이브러리는 야생형과 각 라이브러리의 c-Met에 대한 결합력을 확인하였으며,　각각의 라이브러리는 야생형에 비하여 c-Met에 대한 결합력이 대부분 낮아지는 경향을 보였으나, 일부 c-Met에 대한 결합력이 유지되는 돌연변이들을 확인하였다.
　
1.6. 제작된 라이브러리로부터 친화도가 개선된 항체의 선별
상기 구축된 라이브러리로부터 c-Met에 대한 라이브러리의 결합력을 향상시킨 후, 각각의 개별 클론으로부터 scFv의 유전자 서열을 분석하였다. 확보된 유전자 서열은 각각 하기 표 2와 같으며, 이를 IgG 형태로 변환하였다. 하기 클론 중에서, L3-1, L3-2, L3-3, L3-5으로부터 생산된 4종의 항체를 선별하여 후속 실험을 수행하였다.
클론 이름 도출된 라이브러리 CDR 서열
H11-4 CDR-H1 PEYYMS(서열번호 22)
YC151 CDR-H1 PDYYMS(서열번호 23)
YC193 CDR-H1 SDYYMS(서열번호 24)
YC244 CDR-H2 RNNANGNT(서열번호 25)
YC321 CDR-H2 RNKVNGYT(서열번호 26)
YC354 CDR-H3 DNWLSY(서열번호 27)
YC374 CDR-H3 DNWLTY(서열번호 28)
L1-1 CDR-L1 KSSHSLLASGNQNNYLA(서열번호 29)
L1-3 CDR-L1 KSSRSLLSSGNHKNYLA(서열번호 30)
L1-4 CDR-L1 KSSKSLLASGNQNNYLA(서열번호 31)
L1-12 CDR-L1 KSSRSLLASGNQNNYLA(서열번호 32)
L1-22 CDR-L1 KSSHSLLASGNQNNYLA(서열번호 33)
L2-9 CDR-L2 WASKRVS(서열번호 34)
L2-12 CDR-L2 WGSTRVS(서열번호 35)
L2-16 CDR-L2 WGSTRVP(서열번호 36)
L3-1 CDR-L3 QQSYSRPYT(서열번호 13)
L3-2 CDR-L3 GQSYSRPLT(서열번호 14)
L3-3 CDR-L3 AQSYSHPFS(서열번호 15)
L3-5 CDR-L3 QQSYSRPFT(서열번호 16)
L3-32 CDR-L3 QQSYSKPFT(서열번호 37)
1.7. 선별된 항체의 IgG 로의 변환
선별된 4종의 항체의 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 'EcoRI-signal sequence-VH-NheI-CH-XhoI'(서열번호 38)로 구성되며, 중쇄의 경우 친화도 성숙 후에 항체의 아미노산이 변경되지 않았으므로, huAbF46 항체의 중쇄를 그대로 사용하였다. 다만, 힌지 영역(hinge region)은 인간 IgG1의 힌지가 아닌 U6-HC7 힌지(서열번호 57) 로 치환하였다. 경쇄는 'EcoRI-signal sequence-VL-BsiWI-CL-XhoI'로 구성되도록 각각 디자인하여 유전자를 합성하였으며, 친화도 성숙 후에 선별된 상기 4종 항체의 경쇄 가변 부위를 포함하여 코딩하는 폴리뉴클레오타이드(서열번호 58 내지 서열번호 61)를 바이오니아에 의뢰하여 합성하였다. 이후, Invitrogen 사의 OptiCHOTM Antibody Express Kit (Cat no. 12762-019)에 포함되어 있는 pOptiVECTM-TOPO TA Cloning Kit에 상기 중쇄에 해당하는 뉴클레오타이드 서열을 갖는 DNA 절편(서열번호 38)을, pcDNATM3.3-TOPO TA Cloning Kit(Cat no. 8300-01)에 상기 경쇄에 해당하는 뉴클레오타이드 서열을 갖는 DNA 절편(L3-1 유래 CDR-L3를 포함하는 DNA 절편: 서열번호 58, L3-2 유래 CDR-L3를 포함하는 DNA 절편: 서열번호 59, L3-3 유래 CDR-L3를 포함하는 DNA 절편: 서열번호 60, L3-5 유래 CDR-L3를 포함하는 DNA 절편: 서열번호 61)을 각각 EcoRI(NEB, R0101S)과 XhoI(NEB, R0146S) 제한 효소를 사용하여 클로닝함으로써, 친화력 성숙된 항체의 발현을 위한 벡터를 구축하였다.
상기 구축된 벡터는 각각 Qiagen Maxiprep kit (Cat no. 12662)을 이용하여 증폭되었으며, 임시발현은 FreestyleTM MAX 293 Expression System (invitrogen)을 이용하여 진행 되었다. 사용된 세포주는 293 F cell 이며, FreeStyle™ 293 Expression Medium를 배지로 사용하여 부유배양방식으로 배양되었다. 임시발현 하루 전 세포를 5x105cells/ml의 농도로 준비한 후, 24시간이 지난 뒤 cell수가 1x106cells/ml이 되었을 때 임시발현을 진행하였다. FreestyleTM MAX reagent (invitrogen)을 사용한 liposomal reagent법으로 형질도입(transfection)을 진행 하였으며, 15ml tube에 중쇄 DNA: 경쇄 DNA=1:1 의 비율로 DNA를 준비하여 OptiPro™ SFM (invtrogen) 2ml과 mix하고(A), 또 다른 15ml tube에 FreestyleTM MAX reagent 100㎕와 OptiPro™ SFM 2ml을 mix(B)한 후, (A)와 (B)을 mix하여 15분간 incubation 한 후, 하루 전에 준비한 세포에 혼합액을 천천히 섞어주었다. 형질도입 완료 후, 37 ℃, 80% humidity, 8% CO2 , 130 rpm incubator에서 5일간 배양하였다.
상기 배양된 세포를 원심분리하여 상등액 각 100 ml을 취하고, AKTA Prime (GE healthcare)를 이용하여 정제하였다. AKTA Prime에 Protein A 컬럼(GE healthcare, 17-0405-03)을 설치하고 배양액을 5 ml/min의 유속으로 흘려준 후, IgG elution buffer(Thermo Scientific, 21004)로 용출하였다. 이를 PBS buffer로 교환하여 최종적으로 친화력 성숙된 4종의 항체(이하, huAbF46-H4-A1(L3-1 유래), huAbF46-H4-A2 (L3-2 유래), huAbF46-H4-A3 (L3-3 유래), 및 huAbF46-H4-A5(L3-5 유래)로 명명함)를 정제하였다.
1.8. 불변영역 및/또는 힌지영역이 치환된 huAbF46 - H4 -A1의 제조
상기 참고예 1.7에서 선별된 4종의 항체 중에서, c-Met과의 결합친화도가 가장 높고, Akt 인산화 및 c-Met 분화 정도가 가장 낮은 것으로 측정된 huAbF46-H4-A1을 대상으로, 힌지영역 또는 불변영역 및 힌지영역이 치환된 항체를 제작하였다.
huAbF46-H4-A1의 중쇄 가변 부위, U6-HC7 힌지 및 인간의 IgG1 불변영역으로 이루어진 중쇄 및 huAbF46-H4-A1의 경쇄 가변 부위 및 인간의 카파(kappa) 불변영역으로 이루어진 경쇄로 이루어진 항체를 huAbF46-H4-A1(U6-HC7)으로; huAbF46-H4-A1의 중쇄 가변 부위, 인간의 IgG2 힌지 및 인간의 IgG1 불변영역으로 이루어진 중쇄 및 huAbF46-H4-A1의 경쇄 가변 부위 및 인간의 카파 불변영역으로 이루어진 경쇄로 이루어진 항체를 huAbF46-H4-A1(IgG2 hinge)로; huAbF46-H4-A1의 중쇄 가변 부위, 인간의 IgG2 힌지 및 인간의 IgG2 불변영역으로 이루어진 중쇄 및 huAbF46-H4-A1의 경쇄 가변 부위 및 인간의 카파 불변영역으로 이루어진 경쇄로 이루어진 항체를 huAbF46-H4-A1(IgG2 Fc)로 각각 명명하였다. 또한, 한편, 상기 3종의 항체는 생산량 증대를 위하여 인간의 카파 불변영역으로 이루어진 경쇄의 36번 히스티딘 (histidine)을 모두 티로신 (tyrosine)으로 치환하였다.
상기 3종 항체를 제작하기 위해, huAbF46-H4-A1의 중쇄 가변 부위, U6-HC7힌지 및 인간의 IgG1 불변영역으로 이루어진 폴리펩티드(서열번호 62)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드(서열번호 63), huAbF46-H4-A1의 중쇄 가변 부위, 인간의 IgG2 힌지 및 인간의 IgG1 불변영역으로 이루어진 폴리펩티드(서열번호 64)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드(서열번호 65), huAbF46-H4-A1의 중쇄 가변 부위, 인간의 IgG2 힌지 및 인간의 IgG2 불변영역으로 이루어진 폴리펩티드(서열번호 66)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드(서열번호 67), 36번 히스티틴이 티로신으로 치환된 huAbF46-H4-A1의 경쇄 가변 부위 및 인간의 카파 불변영역으로 이루어진 폴리펩티드(서열번호 68)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드(서열번호 69)를 바이오니아에 의뢰하여 합성하였다. 이후, Invitrogen 사의 OptiCHOTM Antibody Express Kit (Cat no. 12762-019)에 포함되어 있는 pOptiVECTM-TOPO TA Cloning Kit에 상기 중쇄에 해당하는 염기서열을 갖는 DNA 절편을, pcDNATM3.3-TOPO TA Cloning Kit(Cat no. 8300-01)에 상기 경쇄에 해당하는 염기서열을 갖는 DNA 절편을 삽입하여, 상기 항체의 발현을 위한 벡터를 구축하였다.
상기 구축된 벡터는 각각 Qiagen Maxiprep kit (Cat no. 12662)을 이용하여 증폭되었으며, 임시발현은 FreestyleTM MAX 293 Expression System (invitrogen)을 이용하여 진행 되었다. 사용된 세포주는 293 F cell 이며, FreeStyle™ 293 Expression Medium를 배지로 사용하여 부유배양방식으로 배양되었다. 임시발현 하루 전 세포를 5x105cells/ml의 농도로 준비한 후, 24시간이 지난 뒤 cell수가 1x106cells/ml이 되었을 때 임시발현을 진행하였다. FreestyleTM MAX reagent (invitrogen)을 사용한 liposomal reagent법으로 형질도입(transfection)을 진행 하였으며, 15ml tube에 중쇄 DNA: 경쇄 DNA=1:1 의 비율로 DNA를 준비하여 OptiPro™ SFM (invtrogen) 2ml과 mix하고(A), 또 다른 15ml tube에 FreestyleTM MAX reagent 100㎕와 OptiPro™ SFM 2ml을 mix(B)한 후, (A)와 (B)을 mix하여 15분간 incubation 한 후, 하루 전에 준비한 세포에 혼합액을 천천히 섞어주었다. 형질도입 완료 후, 37 ℃, 80% humidity, 8% CO2 , 130 rpm incubator에서 5일간 배양하였다.
상기 배양된 세포를 원심분리하여 상등액 각 100 ml을 취하고, AKTA Prime (GE healthcare)를 이용하여 정제하였다. AKTA Prime에 Protein A 컬럼(GE healthcare, 17-0405-03)을 설치하고 배양액을 5 ml/min의 유속으로 흘려준 후, IgG elution buffer(Thermo Scientific, 21004)로 용출하였다. 이를 PBS buffer로 교환하여 최종적으로 3종의 항체(huAbF46-H4-A1(U6-HC7), huAbF46-H4-A1(IgG2 hinge), huAbF46-H4-A1(IgG2 Fc))를 정제하였다. 이 중에서 본 발명에 따른 항 c-Met 항체를 대표하여 huAbF46-H4-A1(IgG2 Fc)을 선택하여 하기의 실시예에 사용하였으며, 편의상 상기 항체를 L3-1Y/IgG2로 명명하였다.
실시예 1: 폐암 세포주에서 TFF1 발현량 측정 및 항 c- Met 항체에 대한 항암 효능 측정
폐암 세포주에서 TFF1 발현량과 항 c-Met 항체 효능 사이에 연관성이 있는지 확인하기 위해 CCLE database를 분석하여 TFF1 발현량이 높은 폐암 세포주를 선정하였다. 이렇게 선정된 폐암 세포주는 NCI-H1437, NCI-H1395, NCI-H2110, NCI-H2122, 및 NCI-H2126이다. 이 세포주들에서 항 c-Met 항체에 대한 항암 효능 측정을 위해 5000개의 NCI-H1395 (ATCC, CRL-5868), NCI-H1437 (ATCC, CRL-5872), HCI-H2110 (ATCC, CRL-5924), NCI-H2122 (ATCC, CRL-5985), NCI-H2126 (ATCC, CCL-256), 및 항 c-Met 항체가 효능을 보이는 EBC1 (JCRB, JCRB0820) 세포 - 를 96-well plate에 각각 분주하고, 24시간 후 항체(L3-1Y/IgG2)를 0 ug/ml, 0.016 ug/ml, 0.08 ug/ml, 0.4 ug/ml, 또는 2 ug/ml의 양으로 처리하였다. 항체 처리 후 72시간에 CellTiter Glo assay(Promega, G7573)를 통해 세포수 변화를 측정하였다. 이 방법은 살아있는 세포의 대사를 반영하는 ATP 양을 측정하는 방식이다. CellTiter Glo assay 내에는 세포 내의 ATP와 반응하면 luminoscence를 방출하는 기질이 첨가되어 있다. 이 luminoscence를 측정함으로써 살아있는 세포의 수를 정량할 수 있다. 상기 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에서와 같이 EBC1을 제외한 상기 시험된 폐암 세포주들 모두 L3-1Y/IgG2에 의한 암세포 성장 억제 효능이 나타나지 않음을 확인할 수 있다.
이와 같은 TFF1 발현량의 차이와 항 c-Met 항체 효능과의 연관성이 있는지 확인하기 위해 이미 L3-1Y/IgG2에 효능이 있는 것으로 알려진 EBC1 세포주와 효능이 나타나지 않았던 5종의 폐암 세포주(NCI-H1395, NCI-H1437, NCI-H2110, NCI-H2122 및 NCI-H2126)에서의 TFF1 발현량을 측정해 보았다. 발현량 측정은 mRNA level을 측정하는 것으로 이루어 졌으며, 다음의 primer를 이용하여 발현량을 측정하였다.
sense, 5'-cccctggtgcttctatccta-3' (서열번호 109);
antisense, 5'-gatccctgcagaagtgtctaaaa-3' (서열번호 110).
발현량 측정을 위한 qPCR은 cell seeding, RNA 추출, cDNA synthesis, qPCR reaction의 과정으로 이루어진다. 먼저 RNA를 추출하기 위해 세포를 60 mm dish에 10^6 cells/plate의 농도로 분주하고 2일간 배양하였다. 2일 후 RNeasy Mini kit (Qiagen, #74106)을 사용하여 RNA를 추출하며, RNA 추출시 RNase free DW 50 ul에 추출하도록 하였다. 이 중 2~3 ug의 RNA를 Transcriptor First Strand cDNA synthesis kit (Roche, #04 896 866 001)를 이용하여 cDNA로 합성한다. 이 때 manufacture's protocol을 따른다. pPCR reaction은 LC480 SYBR Green I Master (Roche, #04　887　352　001)와 LightCycler® 480 Real-Time PCR System (Roche)을 사용하였다. 샘플의 RNA 양을 보정하기 위한 internal control로는 GAPDH를 사용하며 qPCR은 모든 primer에 대해 다음 과정을 따라 수행하였다. Step1: 95℃, 10 min; Step2 (45 cycles): Step 2-1: 95℃, 10 sec; Step 2-2: 60℃, 20 sec; Step 2-3: 72℃, 20 sec; Step3: 95℃, 5 sec; Step4: 65℃, 1 min; Step5: 95℃, continuous (every 5℃); Step6: 40℃, 10 sec.
상기 얻어진 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2는 qPCR을 통해 TFF1 level을 측정한 결과로서, TFF1과 HPRT1의 Ct value의 차로 표현하였을 때 값이 클수록 발현량이 낮음을 의미한다. 도 2에서 보는 바와 같이 L3-1Y/IgG2 효능이 나타나지 않았던 폐암 세포주의 경우 효능이 있는 EBC1에 비해 TFF1 level이 현저히 높음을 알 수 있다.
실시예 2.　항 c- Met 항체에 대한 저항성이 유도된 위암 세포주에서 TFF1 발현량 측정 및 항 c- Met 항체에 대한 암세포 성장 억제 측정
항 c-Met 항체의 반복 투여로 저항성이 유도된 경우에 TFF1 발현량이 어떻게 변화하는지 측정하기 위해, L3-1Y/IgG2의 반복 투여로 L3-1Y/IgG2 항체에 대해 저항성이 유도된 MKN45 위암 세포주를 이용하였다 상기 저항성 획득 MKN45 위암 세포주의 제작 과정은 다음과 같다: MKN45 세포(JCRB, JCRB0254)에 L3-1Y 항체를 처리량을 늘리면서 3개월 이상 처리하였다. L3-1Y/IgG2 항체의 처리량은 초기 처리 농도 1 ug/ml부터 시작하여 저항성이 나타날 때까지 10 ug/ml까지 증가시켰다. L3-1Y/IgG2 항체 저항성 획득을 확인하기 위하여, 저항성 획득 클론에 L3-1Y/IgG2 항체를 0 ug/ml, 0.016 ug/ml, 0.08 ug/ml, 0.4 ug/ml, 또는 2 ug/ml의 양으로 처리하고, 항체 처리 72시간 후에 CellTiter Glo assay(Promega, G7573)를 통해 세포수 변화를 측정하였다.
상기 얻어진 결과를 도 3에 나타내었다. 도 3은 MKN45와 저항성이 유도된 L3-1Y/IgG2 resistant MKN45 clone #6과 #7 (이후 MKN45-re#6, #7으로 표시) 및 #1과 #24 (이후 MKN45-re#1, #24으로 표시)의 L3-1Y/IgG2에 대한 반응성을 나타내는 그래프로서, L3-1Y/IgG2 항체가 MKN45 세포에는 효능을 보이는 반면, 저항성이 유도된 세포에서 효능을 나타내지 않음을 확인할 수 있다.
MKN45 세포와 MKN45-resistant clone 간의 TFF1 level의 차이를 보고자 qPCR 실험을 수행하였다. 실험 방법은 상기 실시예 1과 동일하다.
상기 얻어진 결과를 도 4에 나타내었다. 도 4는 TFF1 전사체 수준을 나타낸 것으로, MKN45 세포에 대한 상대적인 양으로 나타내었다. 도 4에서 확인할 수 있듯이, 저항성이 유도된 MKN45-#6, #7, #1, #24에서는 TFF1 수준이 현저히 증가해 있음을 알 수 있다. 이는 TFF1이 L3-1Y/IgG2의 반응성을 예측하게 함을 시사한다.
또한 TFF1 siRNA 처리가 항체의 반복 처리로 인해 얻어진 저항성을 극복할 수 있는지 확인하기 위해, MKN45-re#24 세포에 siRNA를 처리하는 실험을 진행하였다. 대조군으로는 GAPDH siRNA (Dharmacon, Cat.No. D-001830-01)를 사용하였고, 타겟 siRNA는 TFF1 siRNA (Dharmacon, Cat.No. L-003715-01-0005)을 사용하였다. 먼저 96 well plate에 0.3 ul RNAiMax와 40 nM의 siRNA를 넣고 15분간 상온에서 incubation 하였다. 이 때 RNAiMax와 siRNA는 Opti-MEM에 희석하며 섞은 총 volume은 25 ul가 되도록 하였다. 이 96 well에 웰당 5000개의 세포가 들어가도록 10% FBS가 들어있는 RPMI1640 배지(GIBCO)로 희석한 MKN45-re#24 세포를 80 ul씩 시딩하였다. Transfection을 한 지 24시간 지나서 기존 medium을 제거하고 L3-1Y/IgG 항체를 희석한 100 ul의 배지를 첨가해 주는 것으로 항체를 처리하였다. 이 때, 항체 처리량은 0, 0.016, 0.08, 0.4 또는 2ug/ml가 되도록 하였다. 항체 처리 72시간 후에 CellTiter Glo assay(Promega, G7573)를 통해 세포수 변화를 측정하였다.
상기 얻어진 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에서와 같이, L3-1Y/IgG2 항체와 TFF1 siRNA를 병용 처리시, L3-1Y/IgG2 항체 단독 처리에서는 볼 수 없었던 암세포 성장 억제 효능이 나타남을 확인할 수 있었다. 이는 TFF1 억제를 통해 항 c-Met 항체의 획득 저항성(acquired resistance)을 극복할 수 있음을 시사한다.
실시예 3. 항 c- Met 항체에 대한 저항성이 유도된 폐암 세포주에서 TFF1 발현량 측정 및 항 c- Met 항체의 암세포 성장 억제 효과 측정
폐암 세포주에서 저항성이 유도된 경우 TFF1 발현 변화를 측정하기 위해 EBC1 폐암 세포주(JCRB, JCRB0820)에 3개월 이상 L3-1Y/IgG2 항체를 처리하여 L3-1Y/IgG2 항체에 대한 저항성을 획득한 세포주를 이용하였다. 상기 L3-1Y 항체에 대하여 저항성을 획득한 EBC1 폐암 세포주는 상기 실시예 2를 참조하여 제작하였다. L3-1Y/IgG2 항체 저항성 획득을 확인하기 위하여, 저항성 획득 클론에 L3-1Y/IgG2 항체를 0 ug/ml, 0.016 ug/ml, 0.08 ug/ml, 0.4 ug/ml, 또는 2 ug/ml의 양으로 처리하고, 항체 처리 72시간 후에 CellTiter Glo assay(Promega, G7573)를 통해 세포수 변화를 측정하였다.
상기 얻어진 결과를 도 6에 나타내었다. 도 6은 저항성이 유도된 L3-1Y/IgG2 resistant EBC1 clone #14과 #20 (이후 EBC1-re#14, #20으로 표시)의 L3-1Y/IgG2에 대한 반응성을 나타내는 그래프로서, EBC1 세포와는 달리 저항성이 유도된 EBC1 세포에서는 L3-1Y/IgG2 항체가 효능을 나타내지 않음을 확인할 수 있다.
또한, 실시예 1 및 실시예 2의 방법을 참조하여 EBC1 세포 및 EBC1-re#14, #20로부터 TFF1의 mRNA를 추출하여 TFF1 level을 확인하였다. 그 결과를 도 7에 나타내었다. 도 7는 TFF1 전사체 수준을 나타낸 것으로, EBC1 세포에 대한 상대적인 양으로 나타내었다. 도 7에서 확인되는 바와 같이, 실시예 2에서의 위암 세포주와 마찬가지로 폐암 세포주 EBC1에서도 L3-1Y/IgG2에 대한 저항성 획득시 TFF1 level이 증가함을 알 수 있다.
또한 TFF1 siRNA 처리가 항체의 반복 처리로 인해 얻어진 저항성을 극복할 수 있는지 확인하기 위해, EBC1-re#20 세포에 siRNA를 항체와 함께 병용 처리하는 실험을 진행하였다. 실시예 2의 방법을 참조하여 TFF1 siRNA를 처리하여 세포수를 측정한 결과를 도 8에 나타내었다. 실시예 2에서 얻어진 결과와 유사하게, 저항성이 유도된 EBC1 폐암 세포주에서도 L3-1Y/IgG2 항체와 TFF1 siRNA를 병용 처리시, L3-1Y/IgG2 항체 단독 처리에서는 볼 수 없었던 암세포 성장 억제 효능이 나타남을 확인할 수 있었다. 이는 TFF1 억제를 통해 항 c-Met 항체의 acquired resistance를 극복할 수 있음을 시사한다.
실시예 4. Xenograft mouse model 을 이용한 serum 내 TFF1 단백질 수준 측정
TFF1이 단백질 수준에서도 항 c-Met 항체에 대한 마커로서 기능을 할 수 있음을 보이기 위하여, serum 내 TFF1 단백질 수준을 측정하였다.
이를 위하여, 환자 유래 폐암 세포를 이식한 xenograft model을 이용하였다. 각 환자 유래 폐암 세포를 마우스에 이식하여 환자 유래 암세포(폐암세포)가 이식된 xenograft 마우스 모델을 제작하였다(Oncotest GmbH, Freibrug Germany에 의뢰). 환자유래 폐암세포(비소세포성폐암 (NSCLC))인 LXFA289, LXFA 400, LXFA 1848, 및 LXFA 2158 세포를 NMRI nude 마우스 (4-6주령, female; Harlan)에 s.c로 주입하여 xenograft 마우스 모델을 제작하였다. 상기 제작 방법은 Oncotest SOP "Subcutaneous implantation" 방법을 따랐다. 마우스는 그룹당 10 마리씩을 사용하였다.
종양 크기가 ~2000 mm3 정도가 되면 mouse serum을 얻고, 여기서 TFF1 단백질 수준을 측정하였다. 마우스 간의 개체 차이를 최소화 하기 위해 각 그룹에서 tumor size가 median에 속하는 개체의 serum을 이용하여 ELISA를 수행하였다. ELISA는 Human Trefoil factor 1 ELISA kit (EIAab, E1049h)를 이용하였다. 먼저 Standard에 1 ml의 Sample Diluent를 첨가하여 10.0 ng/ml stock standard 용액을 만든 후, 이를 1/2로 희석하여 standard를 준비하였다. 마우스 serum 또한 Sample Dilent로 1/2씩 희석하였다. Standard, Blank, 희석한 serum을 각 50 ul씩 웰에 넣고 거기에 Detection A solution을 50 ul 첨가하였다. 잘 섞이도록 플레이트를 흔들어준 다음 37℃에서 1시간동안 incubation하였다. 1시간 후, 안의 용액을 버리고 Wash Buffer(ELISA kit (EIAab, E1049h) 내에 포함)로 3번 세척하였다. 세척 과정은 Wash Buffer를 300~400 ul의 양으로 첨가하고 1~2분 둔 다음 용액을 제거하는 방식으로 수행하였다. Detection Reagent B 용액을 100 ul 넣고 37℃에서 45분동안 둔 후, Wash Buffer로 5번 세척하였다. 세척이 끝난 후, 90 ul의 Substrate Solution을 넣고 37℃에서 15~30분동안 두었다. 이 때 빛이 들어가지 않도록 하였다. 적당한 색깔이 나오면 50 ul Stop Solution을 첨가하고 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.
측정한 흡광도를 Standard에 대입하여 결정한 농도를 도 9에 나타내었다. 환자 유래 폐암 세포를 이식한 xenograft model의 마우스 serum에서 TFF1은 detection 가능한 범위(0.15~10.0 ng/ml)로 측정됨을 확인할 수 있으며, 이는 TFF1 단백질이 soluble marker로 적용 가능함을 시사한다. 도 9에 있어서, LXFA2158는 c-Met 저해제(L3-1Y/IgG2) 효능군이고 나머지는 비효능군이며, 이러한 결과로 볼 때, 상기 실험 조건 하에서 TFF1 단백질이 마커로 사용되는 경우의 효능군과 비효능군을 구별할 수 있는 TFF1 단백질의 농도 기준은 약 3 내지 약 3.5 ng/ml로 정할 수 있다 TFF1 단백질 (예컨대, TFF1 단백질이 약 3 내지 약 3.5 ng/ml 이하인 경우에 효능군, 상기 범위보다 높은 경우 비효능군).
실시예 5. c- Met 수준과 TFF1 의 수준을 조합한 대상 환자 확인 방법
TFF1 이외에도 c-Met의 mRNA 수준 및/또는 단백질 수준이 독립 또는 TFF1와 함께 c-Met 저해제 적용 환자 선별에 사용될 수 있음을 시험하였다.
8개의 폐선암(Lung adenocarcinoma)의 Xenograft tumor 샘플(Oncotest GmbH, Freibrug Germany에 의뢰)에 대하여 affymetrix U133Plus 2.0를 사용하여 실험하였다.
mRNA의 capture및 prep은 U133 Plus 2.0 표준 프로토콜에 따랐다 (http://www.affymetrix.com/estore/browse/products.jsp?productId=131455#1_3/3'; IVT Express Kit User Manual (pdf, 1.17 MB)). 실험후 DNA chip에서 얻어진 데이터를 quantile normalization (Bolstad, B. M., Irizarry R. A., Astrand, M, and Speed, T. P. (2003) A Comparison of Normalization Methods for High Density Oligonucleotide Array Data Based on Bias and Variance. Bioinformatics 19(2), pp 185-193)하여 발현값을 보정한 후, TFF1의 유전자의 발현값을 얻었다(Affymetrix probe id: 205009_at). TFF1의 유전자 발현은 본 실시예에서 사용한 DNA chip 이외에도 이 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 지닌 자에 의하여 다른 실험 방법으로 대체될 수 있다.
상기 얻어진 결과를 도 10에 나타내었다. 도 10에서 각 점은 환자를 의미하며, x축은 c-Met 유전자의 mRNA 발현량, y축은 TFF1 유전자의 mRNA 발현량을 의미한다. 푸른색 점은 항 c-Met 저해제 (L3-1Y/IgG2) 효능군을, 검은색 점과 붉은색 점은 항 c-Met 저해제 (L3-1Y/IgG2) 비효능군을 나타내며, 회색 점은 데이터 부재의 경우를 나타낸다 (n=1163). c-Met의 발현량이 높은 경우 c-Met 저해제의 효능이 예상되나, 효능군과 비효능군의 경계가 환자군, 실험장비 등의 변인으로 인하여 뚜렷한 변별이 어려운 경우, TFF1의 발현량에 대한 정보를 함께 사용하여 더욱 정확한 환자군 변별을 기대할 수 있다.
한국세포주연구재단 KCLRFBP00220 20091006
<110> Samsung Electronics Co. Ltd <120> Biomarker TFF1 for predicting effect of a c-Met inhibitor <130> DPP20133928KR <160> 110 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR1 of AbF46 <400> 1 Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 2 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR2 of AbF46 <400> 2 Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR3 of AbF46 <400> 3 Asp Asn Trp Phe Ala Tyr 1 5 <210> 4 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR1 of c-Met antibody <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> X is Pro or Ser or absent <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is Glu or Asp <400> 4 Xaa Xaa Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR2 of c-Met antibody <220> <221> VARIANT <222> (3) <223> X is Asn or Lys <220> <221> VARIANT <222> (4) <223> X is Ala or Val <220> <221> VARIANT <222> (7) <223> X is Asn or Thr <400> 5 Arg Asn Xaa Xaa Asn Gly Xaa Thr 1 5 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR3 of c-Met antibody <220> <221> VARIANT <222> (5) <223> X is Ser or Thr <400> 6 Asp Asn Trp Leu Xaa Tyr 1 5 <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR1 of c-Met antibody <220> <221> VARIANT <222> (4) <223> X is His, Arg, Gln or Lys <220> <221> VARIANT <222> (12) <223> X is His or Gln <220> <221> VARIANT <222> (13) <223> X is Lys or Asn <220> <221> VARIANT <222> (9) <223> X is Ser or Trp <400> 7 Lys Ser Ser Xaa Ser Leu Leu Ala Xaa Gly Asn Xaa Xaa Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR2 of c-Met antibody <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> X is Ala or Gly <220> <221> VARIANT <222> (4) <223> X is Thr or Lys <220> <221> VARIANT <222> (7) <223> X is Ser or Pro <400> 8 Trp Xaa Ser Xaa Arg Val Xaa 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR3 of c-Met antibody <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> X is Gly, Ala or Gln <220> <221> VARIANT <222> (6) <223> X is Arg, His, Ser, Ala, Gly or Lys <220> <221> VARIANT <222> (8) <223> X is Leu, Tyr, Phe or Met <400> 9 Xaa Gln Ser Tyr Ser Xaa Pro Xaa Thr 1 5 <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR1 of AbF46 <400> 10 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR2 of AbF46 <400> 11 Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser 1 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR3 of AbF46 <400> 12 Gln Gln Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L3 derived from L3-1 clone <400> 13 Gln Gln Ser Tyr Ser Arg Pro Tyr Thr 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L3 derived from L3-2 clone <400> 14 Gly Gln Ser Tyr Ser Arg Pro Leu Thr 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L3 derived from L3-3 clone <400> 15 Ala Gln Ser Tyr Ser His Pro Phe Ser 1 5 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L3 derived from L3-5 clone <400> 16 Gln Gln Ser Tyr Ser Arg Pro Phe Thr 1 5 <210> 17 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region of anti c-Met humanized antibody(huAbF46-H4) <400> 17 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of anti c-Met humanized antibody(huAbF46-H4) <400> 18 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Arg Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 19 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of anti c-Met humanized antibody(huAbF46-H4) <400> 19 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Arg Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 20 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of anti c-Met humanized antibody(huAbF46-H4) <400> 20 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser His Pro Phe Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 21 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of anti c-Met humanized antibody(huAbF46-H4) <400> 21 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Arg Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 22 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-H1 derived from H11-4 clone <400> 22 Pro Glu Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-H1 derived from YC151 clone <400> 23 Pro Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 24 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-H1 derived from YC193 clone <400> 24 Ser Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 25 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-H2 derived from YC244 clone <400> 25 Arg Asn Asn Ala Asn Gly Asn Thr 1 5 <210> 26 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-H2 derived from YC321 clone <400> 26 Arg Asn Lys Val Asn Gly Tyr Thr 1 5 <210> 27 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-H3 derived from YC354 clone <400> 27 Asp Asn Trp Leu Ser Tyr 1 5 <210> 28 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-H3 derived from YC374 clone <400> 28 Asp Asn Trp Leu Thr Tyr 1 5 <210> 29 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L1 derived from L1-1 clone <400> 29 Lys Ser Ser His Ser Leu Leu Ala Ser Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 30 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L1 derived from L1-3 clone <400> 30 Lys Ser Ser Arg Ser Leu Leu Ser Ser Gly Asn His Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 31 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L1 derived from L1-4 clone <400> 31 Lys Ser Ser Lys Ser Leu Leu Ala Ser Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 32 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L1 derived from L1-12 clone <400> 32 Lys Ser Ser Arg Ser Leu Leu Ala Ser Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 33 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L1 derived from L1-22 clone <400> 33 Lys Ser Ser His Ser Leu Leu Ala Ser Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 34 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L2 derived from L2-9 clone <400> 34 Trp Ala Ser Lys Arg Val Ser 1 5 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L2 derived from L2-12 clone <400> 35 Trp Gly Ser Thr Arg Val Ser 1 5 <210> 36 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L2 derived from L2-16 clone <400> 36 Trp Gly Ser Thr Arg Val Pro 1 5 <210> 37 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L3 derived from L3-32 clone <400> 37 Gln Gln Ser Tyr Ser Lys Pro Phe Thr 1 5 <210> 38 <211> 1416 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of heavy chain of chAbF46 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(6) <223> EcoRI restriction site <220> <221> misc_feature <222> (7)..(66) <223> signal sequence <220> <221> misc_feature <222> (67)..(417) <223> VH - heavy chain variable region <220> <221> misc_feature <222> (418)..(423) <223> NdeI restriction site <220> <221> misc_feature <222> (418)..(1407) <223> CH - heavy chain constant region <220> <221> misc_feature <222> (1408)..(1410) <223> TGA - stop sodon <220> <221> misc_feature <222> (1411)..(1416) <223> XhoI restriction site <400> 38 gaattcgccg ccaccatgga atggagctgg gtttttctcg taacactttt aaatggtatc 60 cagtgtgagg tgaagctggt ggagtctgga ggaggcttgg tacagcctgg gggttctctg 120 agactctcct gtgcaacttc tgggttcacc ttcactgatt actacatgag ctgggtccgc 180 cagcctccag gaaaggcact tgagtggttg ggttttatta gaaacaaagc taatggttac 240 acaacagagt acagtgcatc tgtgaagggt cggttcacca tctccagaga taattcccaa 300 agcatcctct atcttcaaat ggacaccctg agagctgagg acagtgccac ttattactgt 360 gcaagagata actggtttgc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgcagct 420 agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 660 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 720 tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 780 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 840 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 900 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 960 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 1020 tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1080 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1140 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1200 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1260 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1320 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1380 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga ctcgag 1416 <210> 39 <211> 759 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of light chain of chAbF46 <220> <221> misc_difference <222> (1)..(6) <223> EcoRI restriction site <220> <221> misc_difference <222> (7)..(90) <223> signal sequence <220> <221> misc_difference <222> (91)..(432) <223> VL - light chain variable region <220> <221> misc_difference <222> (430)..(435) <223> BsiWI restriction site <220> <221> misc_difference <222> (433)..(750) <223> CL - light chain constant region <220> <221> misc_difference <222> (751)..(753) <223> stop codon <220> <221> misc_difference <222> (754)..(759) <223> XhoI restriction site <400> 39 gaattcacta gtgattaatt cgccgccacc atggattcac aggcccaggt cctcatgttg 60 ctgctgctat cggtatctgg tacctgtgga gacattttga tgacccagtc tccatcctcc 120 ctgactgtgt cagcaggaga gaaggtcact atgagctgca agtccagtca gagtctttta 180 gctagtggca accaaaataa ctacttggcc tggcaccagc agaaaccagg acgatctcct 240 aaaatgctga taatttgggc atccactagg gtatctggag tccctgatcg cttcataggc 300 agtggatctg ggacggattt cactctgacc atcaacagtg tgcaggctga agatctggct 360 gtttattact gtcagcagtc ctacagcgct ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg 420 gagctgaaac gtacggtggc tgcaccatct gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag 480 ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc 540 aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc caatcgggta actcccagga gagtgtcaca 600 gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca 660 gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc 720 gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt tgactcgag 759 <210> 40 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of H1-heavy <400> 40 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 41 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of H3-heavy <400> 41 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 42 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of H4-heavy <400> 42 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 43 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of H1-light <400> 43 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 44 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of H2-light <400> 44 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Leu Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Gln Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 65 70 75 80 Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 45 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of H3-light <400> 45 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 46 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of H4-light <400> 46 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu 210 215 <210> 47 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of H1-heavy <400> 47 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcact gactactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg gttgggcttt attagaaaca aagctaacgg ttacaccaca 180 gaatacagtg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagataattc aaagaactca 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgctaga 300 gataactggt ttgcttactg gggtcaagga accctggtca ccgtctcctc ggctagcacc 360 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ctccgggtaa atgactcgag 1350 <210> 48 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of H3-heavy <400> 48 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcact gactactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg gttgggcttt attagaaaca aagctaacgg ttacaccaca 180 gaatacagtg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagataattc aaagaactca 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgcgtgct gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgctaga 300 gataactggt ttgcttactg gggtcaagga accctggtca ccgtctcctc ggctagcacc 360 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ctccgggtaa atgactcgag 1350 <210> 49 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of H4-heavy <400> 49 gaggttcagc tggtggagtc tggcggtggc ctggtgcagc cagggggctc actccgtttg 60 tcctgtgcag cttctggctt caccttcact gattactaca tgagctgggt gcgtcaggcc 120 ccgggtaagg gcctggaatg gttgggtttt attagaaaca aagctaatgg ttacacaaca 180 gagtacagtg catctgtgaa gggtcgtttc actataagca gagataattc caaaaacaca 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgcgtgct gaggacactg ccgtctatta ttgtgctaga 300 gataactggt ttgcttactg gggccaaggg actctggtca ccgtctcctc ggctagcacc 360 aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480 ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600 aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ctccgggtaa atgactcgag 1350 <210> 50 <211> 669 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of H1-light <400> 50 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtctttta gctagcggca accaaaataa ctacttagct 120 tggcaccagc agaaaccagg acagcctcct aagatgctca ttatttgggc atctacccgg 180 gtatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaatc ctatagtgct 300 cctctcacgt tcggaggcgg taccaaggtg gagatcaaac gtacggtggc tgcaccatct 360 gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420 ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480 caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540 ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600 gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660 tgactcgag 669 <210> 51 <211> 669 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of H2-light <400> 51 gatattgtga tgacccagac tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca agtccagtca gagtctttta gctagtggca accaaaataa ctacttggcc 120 tggcacctgc agaagccagg gcagtctcca cagatgctga tcatttgggc atccactagg 180 gtatctggag tcccagacag gttcagtggc agtgggtcag gcactgattt cacactgaaa 240 atcagcaggg tggaggctga ggatgttgga gtttattact gccagcagtc ctacagcgct 300 ccgctcacgt tcggacaggg taccaagctg gagctcaaac gtacggtggc tgcaccatct 360 gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420 ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480 caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540 ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600 gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660 tgactcgag 669 <210> 52 <211> 669 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of H3-light <400> 52 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtctttta gctagcggca accaaaataa ctacttagct 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca ttatttgggc atctacccgg 180 gtatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaatc ctatagtgct 300 cctctcacgt tcggaggcgg taccaaggtg gagatcaaac gtacggtggc tgcaccatct 360 gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420 ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480 caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540 ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600 gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660 tgactcgag 669 <210> 53 <211> 669 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of H4-light <400> 53 gatatccaga tgacccagtc cccgagctcc ctgtccgcct ctgtgggcga tagggtcacc 60 atcacctgca agtccagtca gagtctttta gctagtggca accaaaataa ctacttggcc 120 tggcaccaac agaaaccagg aaaagctccg aaaatgctga ttatttgggc atccactagg 180 gtatctggag tcccttctcg cttctctgga tccgggtctg ggacggattt cactctgacc 240 atcagcagtc tgcagccgga agacttcgca acttattact gtcagcagtc ctacagcgct 300 ccgctcacgt tcggacaggg taccaaggtg gagatcaaac gtacggtggc tgcaccatct 360 gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420 ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480 caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540 ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600 gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660 tgactcgag 669 <210> 54 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> linker between VH and VL <400> 54 Gly Leu Gly Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Ser Ser Gly Val Gly Ser 20 <210> 55 <211> 1088 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding scFv of huAbF46 antibody <400> 55 gctagcgttt tagcagaagt tcaattggtt gaatctggtg gtggtttggt tcaaccaggt 60 ggttctttga gattgtcttg tgctgcttct ggttttactt tcaccgatta ttacatgtcc 120 tgggttagac aagctccagg taaaggtttg gaatggttgg gtttcattag aaacaaggct 180 aacggttaca ctaccgaata ttctgcttct gttaagggta gattcaccat ttctagagac 240 aactctaaga acaccttgta cttgcaaatg aactccttga gagctgaaga tactgctgtt 300 tattactgcg ctagagataa ttggtttgct tattggggtc aaggtacttt ggttactgtt 360 tcttctggcc tcgggggcct cggaggagga ggtagtggcg gaggaggctc cggtggatcc 420 agcggtgtgg gttccgatat tcaaatgacc caatctccat cttctttgtc tgcttcagtt 480 ggtgatagag ttaccattac ttgtaagtcc tcccaatctt tgttggcttc tggtaatcag 540 aacaattact tggcttggca tcaacaaaaa ccaggtaaag ctccaaagat gttgattatt 600 tgggcttcta ccagagtttc tggtgttcca tctagatttt ctggttctgg ttccggtact 660 gattttactt tgaccatttc atccttgcaa ccagaagatt tcgctactta ctactgtcaa 720 caatcttact ctgctccatt gacttttggt caaggtacaa aggtcgaaat caagagagaa 780 ttcggtaagc ctatccctaa ccctctcctc ggtctcgatt ctacgggtgg tggtggatct 840 ggtggtggtg gttctggtgg tggtggttct caggaactga caactatatg cgagcaaatc 900 ccctcaccaa ctttagaatc gacgccgtac tctttgtcaa cgactactat tttggccaac 960 gggaaggcaa tgcaaggagt ttttgaatat tacaaatcag taacgtttgt cagtaattgc 1020 ggttctcacc cctcaacaac tagcaaaggc agccccataa acacacagta tgttttttga 1080 gtttaaac 1088 <210> 56 <211> 5597 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> expression vector including polynucleotide encoding scFv of huAbF46 antibody <220> <221> misc_difference <222> (573)..(578) <223> NheI restriction site <220> <221> misc_difference <222> (588)..(938) <223> huAbF46 VH <220> <221> misc_difference <222> (939)..(1007) <223> linker <220> <221> misc_difference <222> (1008)..(1349) <223> huAbF46 VL <220> <221> misc_difference <222> (1350)..(1355) <223> EcoRI restriction site <220> <221> misc_difference <222> (1356)..(1397) <223> V5 epitope <220> <221> misc_difference <222> (1398)..(1442) <223> (G4S)3 linker <220> <221> misc_difference <222> (1443)..(1649) <223> Aga2 <220> <221> misc_difference <222> (1650)..(1652) <223> TGA(stop codon) <220> <221> misc_difference <222> (1653)..(1660) <223> PmeI restriction site <400> 56 acggattaga agccgccgag cgggtgacag ccctccgaag gaagactctc ctccgtgcgt 60 cctcgtcttc accggtcgcg ttcctgaaac gcagatgtgc ctcgcgccgc actgctccga 120 acaataaaga ttctacaata ctagctttta tggttatgaa gaggaaaaat tggcagtaac 180 ctggccccac aaaccttcaa atgaacgaat caaattaaca accataggat gataatgcga 240 ttagtttttt agccttattt ctggggtaat taatcagcga agcgatgatt tttgatctat 300 taacagatat ataaatgcaa aaactgcata accactttaa ctaatacttt caacattttc 360 ggtttgtatt acttcttatt caaatgtaat aaaagtatca acaaaaaatt gttaatatac 420 ctctatactt taacgtcaag gagaaaaaac cccggatcgg actactagca gctgtaatac 480 gactcactat agggaatatt aagctaattc tacttcatac attttcaatt aagatgcagt 540 tacttcgctg tttttcaata ttttctgtta ttgctagcgt tttagcagaa gttcaattgg 600 ttgaatctgg tggtggtttg gttcaaccag gtggttcttt gagattgtct tgtgctgctt 660 ctggttttac tttcaccgat tattacatgt cctgggttag acaagctcca ggtaaaggtt 720 tggaatggtt gggtttcatt agaaacaagg ctaacggtta cactaccgaa tattctgctt 780 ctgttaaggg tagattcacc atttctagag acaactctaa gaacaccttg tacttgcaaa 840 tgaactcctt gagagctgaa gatactgctg tttattactg cgctagagat aattggtttg 900 cttattgggg tcaaggtact ttggttactg tttcttctgg cctcgggggc ctcggaggag 960 gaggtagtgg cggaggaggc tccggtggat ccagcggtgt gggttccgat attcaaatga 1020 cccaatctcc atcttctttg tctgcttcag ttggtgatag agttaccatt acttgtaagt 1080 cctcccaatc tttgttggct tctggtaatc agaacaatta cttggcttgg catcaacaaa 1140 aaccaggtaa agctccaaag atgttgatta tttgggcttc taccagagtt tctggtgttc 1200 catctagatt ttctggttct ggttccggta ctgattttac tttgaccatt tcatccttgc 1260 aaccagaaga tttcgctact tactactgtc aacaatctta ctctgctcca ttgacttttg 1320 gtcaaggtac aaaggtcgaa atcaagagag aattcggtaa gcctatccct aaccctctcc 1380 tcggtctcga ttctacgggt ggtggtggat ctggtggtgg tggttctggt ggtggtggtt 1440 ctcaggaact gacaactata tgcgagcaaa tcccctcacc aactttagaa tcgacgccgt 1500 actctttgtc aacgactact attttggcca acgggaaggc aatgcaagga gtttttgaat 1560 attacaaatc agtaacgttt gtcagtaatt gcggttctca cccctcaaca actagcaaag 1620 gcagccccat aaacacacag tatgtttttt gagtttaaac ccgctgatct gataacaaca 1680 gtgtagatgt aacaaaatcg actttgttcc cactgtactt ttagctcgta caaaatacaa 1740 tatacttttc atttctccgt aaacaacatg ttttcccatg taatatcctt ttctattttt 1800 cgttccgtta ccaactttac acatacttta tatagctatt cacttctata cactaaaaaa 1860 ctaagacaat tttaattttg ctgcctgcca tatttcaatt tgttataaat tcctataatt 1920 tatcctatta gtagctaaaa aaagatgaat gtgaatcgaa tcctaagaga attgggcaag 1980 tgcacaaaca atacttaaat aaatactact cagtaataac ctatttctta gcatttttga 2040 cgaaatttgc tattttgtta gagtctttta caccatttgt ctccacacct ccgcttacat 2100 caacaccaat aacgccattt aatctaagcg catcaccaac attttctggc gtcagtccac 2160 cagctaacat aaaatgtaag ctctcggggc tctcttgcct tccaacccag tcagaaatcg 2220 agttccaatc caaaagttca cctgtcccac ctgcttctga atcaaacaag ggaataaacg 2280 aatgaggttt ctgtgaagct gcactgagta gtatgttgca gtcttttgga aatacgagtc 2340 ttttaataac tggcaaaccg aggaactctt ggtattcttg ccacgactca tctccgtgca 2400 gttggacgat atcaatgccg taatcattga ccagagccaa aacatcctcc ttaggttgat 2460 tacgaaacac gccaaccaag tatttcggag tgcctgaact atttttatat gcttttacaa 2520 gacttgaaat tttccttgca ataaccgggt caattgttct ctttctattg ggcacacata 2580 taatacccag caagtcagca tcggaatcta gagcacattc tgcggcctct gtgctctgca 2640 agccgcaaac tttcaccaat ggaccagaac tacctgtgaa attaataaca gacatactcc 2700 aagctgcctt tgtgtgctta atcacgtata ctcacgtgct caatagtcac caatgccctc 2760 cctcttggcc ctctcctttt cttttttcga ccgaatttct tgaagacgaa agggcctcgt 2820 gatacgccta tttttatagg ttaatgtcat gataataatg gtttcttagg acggatcgct 2880 tgcctgtaac ttacacgcgc ctcgtatctt ttaatgatgg aataatttgg gaatttactc 2940 tgtgtttatt tatttttatg ttttgtattt ggattttaga aagtaaataa agaaggtaga 3000 agagttacgg aatgaagaaa aaaaaataaa caaaggttta aaaaatttca acaaaaagcg 3060 tactttacat atatatttat tagacaagaa aagcagatta aatagatata cattcgatta 3120 acgataagta aaatgtaaaa tcacaggatt ttcgtgtgtg gtcttctaca cagacaagat 3180 gaaacaattc ggcattaata cctgagagca ggaagagcaa gataaaaggt agtatttgtt 3240 ggcgatcccc ctagagtctt ttacatcttc ggaaaacaaa aactattttt tctttaattt 3300 ctttttttac tttctatttt taatttatat atttatatta aaaaatttaa attataatta 3360 tttttatagc acgtgatgaa aaggacccag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa 3420 cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac 3480 cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg 3540 tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc 3600 tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg 3660 atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga 3720 gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg tgttgacgcc gggcaagagc 3780 aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga atgacttggt tgagtactca ccagtcacag 3840 aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga 3900 gtgataacac tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg 3960 cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga 4020 atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt 4080 tgcgcaaact attaactggc gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact 4140 ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt 4200 ttattgctga taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg 4260 ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac gacgggcagt caggcaacta 4320 tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac 4380 tgtcagacca agtttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta 4440 aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt 4500 tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt 4560 tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt 4620 gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc 4680 agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg 4740 tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg 4800 ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt 4860 cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac 4920 tgagatacct acagcgtgag cattgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg 4980 acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg 5040 ggaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat 5100 ttttgtgatg ctcgtcaggg gggccgagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt 5160 tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg 5220 attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa 5280 cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcccaata cgcaaaccgc 5340 ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt cccgactgga 5400 aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg tgagttacct cactcattag gcaccccagg 5460 ctttacactt tatgcttccg gctcctatgt tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc 5520 acacaggaaa cagctatgac catgattacg ccaagctcgg aattaaccct cactaaaggg 5580 aacaaaagct ggctagt 5597 <210> 57 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> U6-HC7 hinge <400> 57 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 58 <211> 435 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding CDR-L3 derived from L3-1 clone <400> 58 gaattcacta gtgattaatt cgccgccacc atggattcac aggcccaggt cctcatgttg 60 ctgctgctat cggtatctgg tacctgtgga gatatccaga tgacccagtc cccgagctcc 120 ctgtccgcct ctgtgggcga tagggtcacc atcacctgca agtccagtca gagtctttta 180 gctagtggca accaaaataa ctacttggcc tggcaccaac agaaaccagg aaaagctccg 240 aaaatgctga ttatttgggc atccactagg gtatctggag tcccttctcg cttctctgga 300 tccgggtctg ggacggattt cactctgacc atcagcagtc tgcagccgga agacttcgca 360 acttattact gtcagcagtc ctacagccgc ccgtacacgt tcggacaggg taccaaggtg 420 gagatcaaac gtacg 435 <210> 59 <211> 435 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding CDR-L3 derived from L3-2 clone <400> 59 gaattcacta gtgattaatt cgccgccacc atggattcac aggcccaggt cctcatgttg 60 ctgctgctat cggtatctgg tacctgtgga gatatccaga tgacccagtc cccgagctcc 120 ctgtccgcct ctgtgggcga tagggtcacc atcacctgca agtccagtca gagtctttta 180 gctagtggca accaaaataa ctacttggcc tggcaccaac agaaaccagg aaaagctccg 240 aaaatgctga ttatttgggc atccactagg gtatctggag tcccttctcg cttctctgga 300 tccgggtctg ggacggattt cactctgacc atcagcagtc tgcagccgga agacttcgca 360 acttattact gtgggcagtc ctacagccgt ccgctcacgt tcggacaggg taccaaggtg 420 gagatcaaac gtacg 435 <210> 60 <211> 435 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding CDR-L3 derived from L3-3 clone <400> 60 gaattcacta gtgattaatt cgccgccacc atggattcac aggcccaggt cctcatgttg 60 ctgctgctat cggtatctgg tacctgtgga gatatccaga tgacccagtc cccgagctcc 120 ctgtccgcct ctgtgggcga tagggtcacc atcacctgca agtccagtca gagtctttta 180 gctagtggca accaaaataa ctacttggcc tggcaccaac agaaaccagg aaaagctccg 240 aaaatgctga ttatttgggc atccactagg gtatctggag tcccttctcg cttctctgga 300 tccgggtctg ggacggattt cactctgacc atcagcagtc tgcagccgga agacttcgca 360 acttattact gtgcacagtc ctacagccat ccgttctctt tcggacaggg taccaaggtg 420 gagatcaaac gtacg 435 <210> 61 <211> 435 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding CDR-L3 derived from L3-5 clone <400> 61 gaattcacta gtgattaatt cgccgccacc atggattcac aggcccaggt cctcatgttg 60 ctgctgctat cggtatctgg tacctgtgga gatatccaga tgacccagtc cccgagctcc 120 ctgtccgcct ctgtgggcga tagggtcacc atcacctgca agtccagtca gagtctttta 180 gctagtggca accaaaataa ctacttggcc tggcaccaac agaaaccagg aaaagctccg 240 aaaatgctga ttatttgggc atccactagg gtatctggag tcccttctcg cttctctgga 300 tccgggtctg ggacggattt cactctgacc atcagcagtc tgcagccgga agacttcgca 360 acttattact gtcagcagtc ctacagccgc ccgtttacgt tcggacaggg taccaaggtg 420 gagatcaaac gtacg 435 <210> 62 <211> 462 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> polypeptide consisting of heavy chain of huAbF46-H4-A1, U6-HC7 hinge and constant region of human IgG1 <400> 62 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Val Thr Leu Leu Asn Gly Ile Gln 1 5 10 15 Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 20 25 30 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp 35 40 45 Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 50 55 60 Leu Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser 65 70 75 80 Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 115 120 125 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 130 135 140 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 145 150 155 160 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 165 170 175 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 180 185 190 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 195 200 205 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 210 215 220 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His 225 230 235 240 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 245 250 255 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 260 265 270 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 275 280 285 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 290 295 300 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 305 310 315 320 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 325 330 335 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 340 345 350 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 355 360 365 Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 370 375 380 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 385 390 395 400 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 405 410 415 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 420 425 430 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 435 440 445 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 63 <211> 1410 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding polypeptide consisting of heavy chain of huAbF46-H4-A1, U6-HC7 hinge and constant region of human IgG1 <400> 63 gaattcgccg ccaccatgga atggagctgg gtttttctcg taacactttt aaatggtatc 60 cagtgtgagg ttcagctggt ggagtctggc ggtggcctgg tgcagccagg gggctcactc 120 cgtttgtcct gtgcagcttc tggcttcacc ttcactgatt actacatgag ctgggtgcgt 180 caggccccgg gtaagggcct ggaatggttg ggttttatta gaaacaaagc taatggttac 240 acaacagagt acagtgcatc tgtgaagggt cgtttcacta taagcagaga taattccaaa 300 aacacactgt acctgcagat gaacagcctg cgtgctgagg acactgccgt ctattattgt 360 gctagagata actggtttgc ttactggggc caagggactc tggtcaccgt ctcctcggct 420 agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 660 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 720 agctgcgatt gccactgtcc tccatgtcca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 780 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 840 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 900 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 960 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 1020 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1080 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1140 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1200 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1260 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1320 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1380 ctctccctgt ctccgggtaa atgactcgag 1410 <210> 64 <211> 461 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> polypeptide consisting of heavy chain of huAbF46-H4-A1, human IgG2 hinge and constant region of human IgG1 <400> 64 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Val Thr Leu Leu Asn Gly Ile Gln 1 5 10 15 Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 20 25 30 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp 35 40 45 Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 50 55 60 Leu Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser 65 70 75 80 Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 115 120 125 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 130 135 140 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 145 150 155 160 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 165 170 175 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 180 185 190 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 195 200 205 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 210 215 220 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys 225 230 235 240 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 245 250 255 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 260 265 270 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 275 280 285 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 300 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 305 310 315 320 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 325 330 335 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 340 345 350 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 355 360 365 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 370 375 380 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 385 390 395 400 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 405 410 415 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 420 425 430 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 435 440 445 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 65 <211> 1407 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding polypeptide consisting of heavy chain of huAbF46-H4-A1, human IgG2 hinge and constant region of human IgG1 <400> 65 gaattcgccg ccaccatgga atggagctgg gtttttctcg taacactttt aaatggtatc 60 cagtgtgagg ttcagctggt ggagtctggc ggtggcctgg tgcagccagg gggctcactc 120 cgtttgtcct gtgcagcttc tggcttcacc ttcactgatt actacatgag ctgggtgcgt 180 caggccccgg gtaagggcct ggaatggttg ggttttatta gaaacaaagc taatggttac 240 acaacagagt acagtgcatc tgtgaagggt cgtttcacta taagcagaga taattccaaa 300 aacacactgt acctgcagat gaacagcctg cgtgctgagg acactgccgt ctattattgt 360 gctagagata actggtttgc ttactggggc caagggactc tggtcaccgt ctcctcggct 420 agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 660 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagaggaag 720 tgctgtgtgg agtgcccccc ctgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 780 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 840 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 900 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 960 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 1020 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1080 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1140 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1200 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1260 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1320 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1380 tccctgtctc cgggtaaatg actcgag 1407 <210> 66 <211> 460 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> polypeptide consisting of heavy chain of huAbF46-H4-A1, human IgG2 hinge and constant region of human IgG2 <400> 66 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Val Thr Leu Leu Asn Gly Ile Gln 1 5 10 15 Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 20 25 30 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp 35 40 45 Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 50 55 60 Leu Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser 65 70 75 80 Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 115 120 125 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 130 135 140 Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 145 150 155 160 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 165 170 175 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 180 185 190 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 195 200 205 Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 210 215 220 Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys 225 230 235 240 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 245 250 255 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 260 265 270 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe 275 280 285 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 290 295 300 Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr 305 310 315 320 Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 325 330 335 Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr 340 345 350 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 355 360 365 Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 370 375 380 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 385 390 395 400 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser 405 410 415 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 420 425 430 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 435 440 445 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 67 <211> 1404 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding polypeptide consisting of heavy chain of huAbF46-H4-A1, human IgG2 hinge and constant region of human IgG2 <400> 67 gaattcgccg ccaccatgga atggagctgg gtttttctcg taacactttt aaatggtatc 60 cagtgtgagg ttcagctggt ggagtctggc ggtggcctgg tgcagccagg gggctcactc 120 cgtttgtcct gtgcagcttc tggcttcacc ttcactgatt actacatgag ctgggtgcgt 180 caggccccgg gtaagggcct ggaatggttg ggttttatta gaaacaaagc taatggttac 240 acaacagagt acagtgcatc tgtgaagggt cgtttcacta taagcagaga taattccaaa 300 aacacactgt acctgcagat gaacagcctg cgtgctgagg acactgccgt ctattattgt 360 gctagagata actggtttgc ttactggggc caagggactc tggtcaccgt ctcctcggct 420 agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac accttcccag ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca acttcggcac ccagacctac 660 acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagacagt tgagcgcaaa 720 tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc agtcttcctc 780 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 840 gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg 900 gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gttccgtgtg 960 gtcagcgtcc tcaccgttgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 1020 gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag 1080 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag 1140 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1200 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccatgctgga ctccgacggc 1260 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1320 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1380 ctgtctccgg gtaaatgact cgag 1404 <210> 68 <211> 240 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> polypeptide consisting of light chain of huAbF46-H4-A1(H36Y) and human kappa constant region <400> 68 Met Asp Ser Gln Ala Gln Val Leu Met Leu Leu Leu Leu Ser Val Ser 1 5 10 15 Gly Thr Cys Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser 35 40 45 Leu Leu Ala Ser Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln 50 55 60 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg 65 70 75 80 Val Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 85 90 95 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 100 105 110 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Arg Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr 115 120 125 Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe 130 135 140 Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys 145 150 155 160 Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val 165 170 175 Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln 180 185 190 Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser 195 200 205 Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His 210 215 220 Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 240 <210> 69 <211> 758 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding polypeptide consisting of light chain of huAbF46-H4-A1(H36Y) and human kappa constant region <400> 69 aattcactag tgattaattc gccgccacca tggattcaca ggcccaggtc ctcatgttgc 60 tgctgctatc ggtatctggt acctgtggag atatccagat gacccagtcc ccgagctccc 120 tgtccgcctc tgtgggcgat agggtcacca tcacctgcaa gtccagtcag agtcttttag 180 ctagtggcaa ccaaaataac tacttggcct ggtaccaaca gaaaccagga aaagctccga 240 aaatgctgat tatttgggca tccactaggg tatctggagt cccttctcgc ttctctggat 300 ccgggtctgg gacggatttc actctgacca tcagcagtct gcagccggaa gacttcgcaa 360 cttattactg tcagcagtcc tacagccgcc cgtacacgtt cggacagggt accaaggtgg 420 agatcaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct gatgagcagt 480 tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc agagaggcca 540 aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag agtgtcacag 600 agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg agcaaagcag 660 actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg agctcgcccg 720 tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt gactcgag 758 <210> 70 <211> 240 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> polypeptide consisting of light chain of huAbF46-H4-A1 and human kappa constant region <400> 70 Met Asp Ser Gln Ala Gln Val Leu Met Leu Leu Leu Leu Ser Val Ser 1 5 10 15 Gly Thr Cys Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser 35 40 45 Leu Leu Ala Ser Gly Asn Gln Asn Asn His Leu Ala Trp Tyr Gln Gln 50 55 60 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg 65 70 75 80 Val Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 85 90 95 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 100 105 110 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Arg Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr 115 120 125 Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe 130 135 140 Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys 145 150 155 160 Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val 165 170 175 Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln 180 185 190 Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser 195 200 205 Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His 210 215 220 Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 240 <210> 71 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> epitope in SEMA domain of c-Met <400> 71 Phe Ser Pro Gln Ile Glu Glu Pro Ser Gln Cys Pro Asp Cys Val Val 1 5 10 15 Ser Ala Leu <210> 72 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> epitope in SEMA domain of c-Met <400> 72 Pro Gln Ile Glu Glu Pro Ser Gln Cys Pro 1 5 10 <210> 73 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> epitope in SEMA domain of c-Met <400> 73 Glu Glu Pro Ser Gln 1 5 <210> 74 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region of anti-c-Met antibody (AbF46 or huAbF46-H1) <400> 74 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 75 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of anti-c-Met antibody (AbF46 or huAbF46-H1) <400> 75 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 76 <211> 1416 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of heavy chain of anti-c-Met antibody (AbF46 or huAbF46-H1) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(6) <223> EcoRI restriction site <220> <221> misc_feature <222> (7)..(66) <223> signal sequence <220> <221> misc_feature <222> (67)..(417) <223> VH - heavy chain variable region <220> <221> misc_feature <222> (418)..(423) <223> NdeI restriction site <220> <221> misc_feature <222> (418)..(1407) <223> CH - heavy chain constant region <220> <221> misc_feature <222> (1408)..(1410) <223> TGA - stop sodon <220> <221> misc_feature <222> (1411)..(1416) <223> XhoI restriction site <400> 76 gaattcgccg ccaccatgga atggagctgg gtttttctcg taacactttt aaatggtatc 60 cagtgtgagg tgaagctggt ggagtctgga ggaggcttgg tacagcctgg gggttctctg 120 agactctcct gtgcaacttc tgggttcacc ttcactgatt actacatgag ctgggtccgc 180 cagcctccag gaaaggcact tgagtggttg ggttttatta gaaacaaagc taatggttac 240 acaacagagt acagtgcatc tgtgaagggt cggttcacca tctccagaga taattcccaa 300 agcatcctct atcttcaaat ggacaccctg agagctgagg acagtgccac ttattactgt 360 gcaagagata actggtttgc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgcagct 420 agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 660 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 720 tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 780 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 840 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 900 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 960 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 1020 tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1080 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1140 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1200 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1260 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1320 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1380 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga ctcgag 1416 <210> 77 <211> 759 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of light chain of anti-c-Met antibody (AbF46 or huAbF46-H1) <220> <221> misc_difference <222> (1)..(6) <223> EcoRI restriction site <220> <221> misc_difference <222> (7)..(90) <223> signal sequence <220> <221> misc_difference <222> (91)..(432) <223> VL - light chain variable region <220> <221> misc_difference <222> (430)..(435) <223> BsiWI restriction site <220> <221> misc_difference <222> (433)..(750) <223> CL - light chain constant region <220> <221> misc_difference <222> (751)..(753) <223> stop codon <220> <221> misc_difference <222> (754)..(759) <223> XhoI restriction site <400> 77 gaattcacta gtgattaatt cgccgccacc atggattcac aggcccaggt cctcatgttg 60 ctgctgctat cggtatctgg tacctgtgga gacattttga tgacccagtc tccatcctcc 120 ctgactgtgt cagcaggaga gaaggtcact atgagctgca agtccagtca gagtctttta 180 gctagtggca accaaaataa ctacttggcc tggcaccagc agaaaccagg acgatctcct 240 aaaatgctga taatttgggc atccactagg gtatctggag tccctgatcg cttcataggc 300 agtggatctg ggacggattt cactctgacc atcaacagtg tgcaggctga agatctggct 360 gtttattact gtcagcagtc ctacagcgct ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg 420 gagctgaaac gtacggtggc tgcaccatct gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag 480 ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc 540 aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc caatcgggta actcccagga gagtgtcaca 600 gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca 660 gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc 720 gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt tgactcgag 759 <210> 78 <211> 4170 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding c-Met protein <400> 78 atgaaggccc ccgctgtgct tgcacctggc atcctcgtgc tcctgtttac cttggtgcag 60 aggagcaatg gggagtgtaa agaggcacta gcaaagtccg agatgaatgt gaatatgaag 120 tatcagcttc ccaacttcac cgcggaaaca cccatccaga atgtcattct acatgagcat 180 cacattttcc ttggtgccac taactacatt tatgttttaa atgaggaaga ccttcagaag 240 gttgctgagt acaagactgg gcctgtgctg gaacacccag attgtttccc atgtcaggac 300 tgcagcagca aagccaattt atcaggaggt gtttggaaag ataacatcaa catggctcta 360 gttgtcgaca cctactatga tgatcaactc attagctgtg gcagcgtcaa cagagggacc 420 tgccagcgac atgtctttcc ccacaatcat actgctgaca tacagtcgga ggttcactgc 480 atattctccc cacagataga agagcccagc cagtgtcctg actgtgtggt gagcgccctg 540 ggagccaaag tcctttcatc tgtaaaggac cggttcatca acttctttgt aggcaatacc 600 ataaattctt cttatttccc agatcatcca ttgcattcga tatcagtgag aaggctaaag 660 gaaacgaaag atggttttat gtttttgacg gaccagtcct acattgatgt tttacctgag 720 ttcagagatt cttaccccat taagtatgtc catgcctttg aaagcaacaa ttttatttac 780 ttcttgacgg tccaaaggga aactctagat gctcagactt ttcacacaag aataatcagg 840 ttctgttcca taaactctgg attgcattcc tacatggaaa tgcctctgga gtgtattctc 900 acagaaaaga gaaaaaagag atccacaaag aaggaagtgt ttaatatact tcaggctgcg 960 tatgtcagca agcctggggc ccagcttgct agacaaatag gagccagcct gaatgatgac 1020 attcttttcg gggtgttcgc acaaagcaag ccagattctg ccgaaccaat ggatcgatct 1080 gccatgtgtg cattccctat caaatatgtc aacgacttct tcaacaagat cgtcaacaaa 1140 aacaatgtga gatgtctcca gcatttttac ggacccaatc atgagcactg ctttaatagg 1200 acacttctga gaaattcatc aggctgtgaa gcgcgccgtg atgaatatcg aacagagttt 1260 accacagctt tgcagcgcgt tgacttattc atgggtcaat tcagcgaagt cctcttaaca 1320 tctatatcca ccttcattaa aggagacctc accatagcta atcttgggac atcagagggt 1380 cgcttcatgc aggttgtggt ttctcgatca ggaccatcaa cccctcatgt gaattttctc 1440 ctggactccc atccagtgtc tccagaagtg attgtggagc atacattaaa ccaaaatggc 1500 tacacactgg ttatcactgg gaagaagatc acgaagatcc cattgaatgg cttgggctgc 1560 agacatttcc agtcctgcag tcaatgcctc tctgccccac cctttgttca gtgtggctgg 1620 tgccacgaca aatgtgtgcg atcggaggaa tgcctgagcg ggacatggac tcaacagatc 1680 tgtctgcctg caatctacaa ggttttccca aatagtgcac cccttgaagg agggacaagg 1740 ctgaccatat gtggctggga ctttggattt cggaggaata ataaatttga tttaaagaaa 1800 actagagttc tccttggaaa tgagagctgc accttgactt taagtgagag cacgatgaat 1860 acattgaaat gcacagttgg tcctgccatg aataagcatt tcaatatgtc cataattatt 1920 tcaaatggcc acgggacaac acaatacagt acattctcct atgtggatcc tgtaataaca 1980 agtatttcgc cgaaatacgg tcctatggct ggtggcactt tacttacttt aactggaaat 2040 tacctaaaca gtgggaattc tagacacatt tcaattggtg gaaaaacatg tactttaaaa 2100 agtgtgtcaa acagtattct tgaatgttat accccagccc aaaccatttc aactgagttt 2160 gctgttaaat tgaaaattga cttagccaac cgagagacaa gcatcttcag ttaccgtgaa 2220 gatcccattg tctatgaaat tcatccaacc aaatctttta ttagtggtgg gagcacaata 2280 acaggtgttg ggaaaaacct gaattcagtt agtgtcccga gaatggtcat aaatgtgcat 2340 gaagcaggaa ggaactttac agtggcatgt caacatcgct ctaattcaga gataatctgt 2400 tgtaccactc cttccctgca acagctgaat ctgcaactcc ccctgaaaac caaagccttt 2460 ttcatgttag atgggatcct ttccaaatac tttgatctca tttatgtaca taatcctgtg 2520 tttaagcctt ttgaaaagcc agtgatgatc tcaatgggca atgaaaatgt actggaaatt 2580 aagggaaatg atattgaccc tgaagcagtt aaaggtgaag tgttaaaagt tggaaataag 2640 agctgtgaga atatacactt acattctgaa gccgttttat gcacggtccc caatgacctg 2700 ctgaaattga acagcgagct aaatatagag tggaagcaag caatttcttc aaccgtcctt 2760 ggaaaagtaa tagttcaacc agatcagaat ttcacaggat tgattgctgg tgttgtctca 2820 atatcaacag cactgttatt actacttggg tttttcctgt ggctgaaaaa gagaaagcaa 2880 attaaagatc tgggcagtga attagttcgc tacgatgcaa gagtacacac tcctcatttg 2940 gataggcttg taagtgcccg aagtgtaagc ccaactacag aaatggtttc aaatgaatct 3000 gtagactacc gagctacttt tccagaagat cagtttccta attcatctca gaacggttca 3060 tgccgacaag tgcagtatcc tctgacagac atgtccccca tcctaactag tggggactct 3120 gatatatcca gtccattact gcaaaatact gtccacattg acctcagtgc tctaaatcca 3180 gagctggtcc aggcagtgca gcatgtagtg attgggccca gtagcctgat tgtgcatttc 3240 aatgaagtca taggaagagg gcattttggt tgtgtatatc atgggacttt gttggacaat 3300 gatggcaaga aaattcactg tgctgtgaaa tccttgaaca gaatcactga cataggagaa 3360 gtttcccaat ttctgaccga gggaatcatc atgaaagatt ttagtcatcc caatgtcctc 3420 tcgctcctgg gaatctgcct gcgaagtgaa gggtctccgc tggtggtcct accatacatg 3480 aaacatggag atcttcgaaa tttcattcga aatgagactc ataatccaac tgtaaaagat 3540 cttattggct ttggtcttca agtagccaaa ggcatgaaat atcttgcaag caaaaagttt 3600 gtccacagag acttggctgc aagaaactgt atgctggatg aaaaattcac agtcaaggtt 3660 gctgattttg gtcttgccag agacatgtat gataaagaat actatagtgt acacaacaaa 3720 acaggtgcaa agctgccagt gaagtggatg gctttggaaa gtctgcaaac tcaaaagttt 3780 accaccaagt cagatgtgtg gtcctttggc gtgctcctct gggagctgat gacaagagga 3840 gccccacctt atcctgacgt aaacaccttt gatataactg tttacttgtt gcaagggaga 3900 agactcctac aacccgaata ctgcccagac cccttatatg aagtaatgct aaaatgctgg 3960 caccctaaag ccgaaatgcg cccatccttt tctgaactgg tgtcccggat atcagcgatc 4020 ttctctactt tcattgggga gcactatgtc catgtgaacg ctacttatgt gaacgtaaaa 4080 tgtgtcgctc cgtatccttc tctgttgtca tcagaagata acgctgatga tgaggtggac 4140 acacgaccag cctccttctg ggagacatca 4170 <210> 79 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEMA domain of c-Met <400> 79 Leu His Glu His His Ile Phe Leu Gly Ala Thr Asn Tyr Ile Tyr Val 1 5 10 15 Leu Asn Glu Glu Asp Leu Gln Lys Val Ala Glu Tyr Lys Thr Gly Pro 20 25 30 Val Leu Glu His Pro Asp Cys Phe Pro Cys Gln Asp Cys Ser Ser Lys 35 40 45 Ala Asn Leu Ser Gly Gly Val Trp Lys Asp Asn Ile Asn Met Ala Leu 50 55 60 Val Val Asp Thr Tyr Tyr Asp Asp Gln Leu Ile Ser Cys Gly Ser Val 65 70 75 80 Asn Arg Gly Thr Cys Gln Arg His Val Phe Pro His Asn His Thr Ala 85 90 95 Asp Ile Gln Ser Glu Val His Cys Ile Phe Ser Pro Gln Ile Glu Glu 100 105 110 Pro Ser Gln Cys Pro Asp Cys Val Val Ser Ala Leu Gly Ala Lys Val 115 120 125 Leu Ser Ser Val Lys Asp Arg Phe Ile Asn Phe Phe Val Gly Asn Thr 130 135 140 Ile Asn Ser Ser Tyr Phe Pro Asp His Pro Leu His Ser Ile Ser Val 145 150 155 160 Arg Arg Leu Lys Glu Thr Lys Asp Gly Phe Met Phe Leu Thr Asp Gln 165 170 175 Ser Tyr Ile Asp Val Leu Pro Glu Phe Arg Asp Ser Tyr Pro Ile Lys 180 185 190 Tyr Val His Ala Phe Glu Ser Asn Asn Phe Ile Tyr Phe Leu Thr Val 195 200 205 Gln Arg Glu Thr Leu Asp Ala Gln Thr Phe His Thr Arg Ile Ile Arg 210 215 220 Phe Cys Ser Ile Asn Ser Gly Leu His Ser Tyr Met Glu Met Pro Leu 225 230 235 240 Glu Cys Ile Leu Thr Glu Lys Arg Lys Lys Arg Ser Thr Lys Lys Glu 245 250 255 Val Phe Asn Ile Leu Gln Ala Ala Tyr Val Ser Lys Pro Gly Ala Gln 260 265 270 Leu Ala Arg Gln Ile Gly Ala Ser Leu Asn Asp Asp Ile Leu Phe Gly 275 280 285 Val Phe Ala Gln Ser Lys Pro Asp Ser Ala Glu Pro Met Asp Arg Ser 290 295 300 Ala Met Cys Ala Phe Pro Ile Lys Tyr Val Asn Asp Phe Phe Asn Lys 305 310 315 320 Ile Val Asn Lys Asn Asn Val Arg Cys Leu Gln His Phe Tyr Gly Pro 325 330 335 Asn His Glu His Cys Phe Asn Arg Thr Leu Leu Arg Asn Ser Ser Gly 340 345 350 Cys Glu Ala Arg Arg Asp Glu Tyr Arg Thr Glu Phe Thr Thr Ala Leu 355 360 365 Gln Arg Val Asp Leu Phe Met Gly Gln Phe Ser Glu Val Leu Leu Thr 370 375 380 Ser Ile Ser Thr Phe Ile Lys Gly Asp Leu Thr Ile Ala Asn Leu Gly 385 390 395 400 Thr Ser Glu Gly Arg Phe Met Gln Val Val Val Ser Arg Ser Gly Pro 405 410 415 Ser Thr Pro His Val Asn Phe Leu Leu Asp Ser His Pro Val Ser Pro 420 425 430 Glu Val Ile Val Glu His Thr Leu Asn Gln Asn Gly 435 440 <210> 80 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PSI-IPT domain of c-Met <400> 80 Tyr Thr Leu Val Ile Thr Gly Lys Lys Ile Thr Lys Ile Pro Leu Asn 1 5 10 15 Gly Leu Gly Cys Arg His Phe Gln Ser Cys Ser Gln Cys Leu Ser Ala 20 25 30 Pro Pro Phe Val Gln Cys Gly Trp Cys His Asp Lys Cys Val Arg Ser 35 40 45 Glu Glu Cys Leu Ser Gly Thr Trp Thr Gln Gln Ile Cys Leu Pro Ala 50 55 60 Ile Tyr Lys Val Phe Pro Asn Ser Ala Pro Leu Glu Gly Gly Thr Arg 65 70 75 80 Leu Thr Ile Cys Gly Trp Asp Phe Gly Phe Arg Arg Asn Asn Lys Phe 85 90 95 Asp Leu Lys Lys Thr Arg Val Leu Leu Gly Asn Glu Ser Cys Thr Leu 100 105 110 Thr Leu Ser Glu Ser Thr Met Asn Thr Leu Lys Cys Thr Val Gly Pro 115 120 125 Ala Met Asn Lys His Phe Asn Met Ser Ile Ile Ile Ser Asn Gly His 130 135 140 Gly Thr Thr Gln Tyr Ser Thr Phe Ser Tyr Val Asp Pro Val Ile Thr 145 150 155 160 Ser Ile Ser Pro Lys Tyr Gly Pro Met Ala Gly Gly Thr Leu Leu Thr 165 170 175 Leu Thr Gly Asn Tyr Leu Asn Ser Gly Asn Ser Arg His Ile Ser Ile 180 185 190 Gly Gly Lys Thr Cys Thr Leu Lys Ser Val Ser Asn Ser Ile Leu Glu 195 200 205 Cys Tyr Thr Pro Ala Gln Thr Ile Ser Thr Glu Phe Ala Val Lys Leu 210 215 220 Lys Ile Asp Leu Ala Asn Arg Glu Thr Ser Ile Phe Ser Tyr Arg Glu 225 230 235 240 Asp Pro Ile Val Tyr Glu Ile His Pro Thr Lys Ser Phe Ile Ser Thr 245 250 255 Trp Trp Lys Glu Pro Leu Asn Ile Val Ser Phe Leu Phe Cys Phe Ala 260 265 270 Ser Gly Gly Ser Thr Ile Thr Gly Val Gly Lys Asn Leu Asn Ser Val 275 280 285 Ser Val Pro Arg Met Val Ile Asn Val His Glu Ala Gly Arg Asn Phe 290 295 300 Thr Val Ala Cys Gln His Arg Ser Asn Ser Glu Ile Ile Cys Cys Thr 305 310 315 320 Thr Pro Ser Leu Gln Gln Leu Asn Leu Gln Leu Pro Leu Lys Thr Lys 325 330 335 Ala Phe Phe Met Leu Asp Gly Ile Leu Ser Lys Tyr Phe Asp Leu Ile 340 345 350 Tyr Val His Asn Pro Val Phe Lys Pro Phe Glu Lys Pro Val Met Ile 355 360 365 Ser Met Gly Asn Glu Asn Val Leu Glu Ile Lys Gly Asn Asp Ile Asp 370 375 380 Pro Glu Ala Val Lys Gly Glu Val Leu Lys Val Gly Asn Lys Ser Cys 385 390 395 400 Glu Asn Ile His Leu His Ser Glu Ala Val Leu Cys Thr Val Pro Asn 405 410 415 Asp Leu Leu Lys Leu Asn Ser Glu Leu Asn Ile Glu Trp Lys Gln Ala 420 425 430 Ile Ser Ser Thr Val Leu Gly Lys Val Ile Val Gln Pro Asp Gln Asn 435 440 445 Phe Thr Gly 450 <210> 81 <211> 313 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TyrKc domain of c-Met <400> 81 Val His Phe Asn Glu Val Ile Gly Arg Gly His Phe Gly Cys Val Tyr 1 5 10 15 His Gly Thr Leu Leu Asp Asn Asp Gly Lys Lys Ile His Cys Ala Val 20 25 30 Lys Ser Leu Asn Arg Ile Thr Asp Ile Gly Glu Val Ser Gln Phe Leu 35 40 45 Thr Glu Gly Ile Ile Met Lys Asp Phe Ser His Pro Asn Val Leu Ser 50 55 60 Leu Leu Gly Ile Cys Leu Arg Ser Glu Gly Ser Pro Leu Val Val Leu 65 70 75 80 Pro Tyr Met Lys His Gly Asp Leu Arg Asn Phe Ile Arg Asn Glu Thr 85 90 95 His Asn Pro Thr Val Lys Asp Leu Ile Gly Phe Gly Leu Gln Val Ala 100 105 110 Lys Gly Met Lys Tyr Leu Ala Ser Lys Lys Phe Val His Arg Asp Leu 115 120 125 Ala Ala Arg Asn Cys Met Leu Asp Glu Lys Phe Thr Val Lys Val Ala 130 135 140 Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Met Tyr Asp Lys Glu Tyr Tyr Ser Val 145 150 155 160 His Asn Lys Thr Gly Ala Lys Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Leu Glu 165 170 175 Ser Leu Gln Thr Gln Lys Phe Thr Thr Lys Ser Asp Val Trp Ser Phe 180 185 190 Gly Val Leu Leu Trp Glu Leu Met Thr Arg Gly Ala Pro Pro Tyr Pro 195 200 205 Asp Val Asn Thr Phe Asp Ile Thr Val Tyr Leu Leu Gln Gly Arg Arg 210 215 220 Leu Leu Gln Pro Glu Tyr Cys Pro Asp Pro Leu Tyr Glu Val Met Leu 225 230 235 240 Lys Cys Trp His Pro Lys Ala Glu Met Arg Pro Ser Phe Ser Glu Leu 245 250 255 Val Ser Arg Ile Ser Ala Ile Phe Ser Thr Phe Ile Gly Glu His Tyr 260 265 270 Val His Val Asn Ala Thr Tyr Val Asn Val Lys Cys Val Ala Pro Tyr 275 280 285 Pro Ser Leu Leu Ser Ser Glu Asp Asn Ala Asp Asp Glu Val Asp Thr 290 295 300 Arg Pro Ala Ser Phe Trp Glu Thr Ser 305 310 <210> 82 <211> 1332 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding SEMA domain of c-Met <400> 82 ctacatgagc atcacatttt ccttggtgcc actaactaca tttatgtttt aaatgaggaa 60 gaccttcaga aggttgctga gtacaagact gggcctgtgc tggaacaccc agattgtttc 120 ccatgtcagg actgcagcag caaagccaat ttatcaggag gtgtttggaa agataacatc 180 aacatggctc tagttgtcga cacctactat gatgatcaac tcattagctg tggcagcgtc 240 aacagaggga cctgccagcg acatgtcttt ccccacaatc atactgctga catacagtcg 300 gaggttcact gcatattctc cccacagata gaagagccca gccagtgtcc tgactgtgtg 360 gtgagcgccc tgggagccaa agtcctttca tctgtaaagg accggttcat caacttcttt 420 gtaggcaata ccataaattc ttcttatttc ccagatcatc cattgcattc gatatcagtg 480 agaaggctaa aggaaacgaa agatggtttt atgtttttga cggaccagtc ctacattgat 540 gttttacctg agttcagaga ttcttacccc attaagtatg tccatgcctt tgaaagcaac 600 aattttattt acttcttgac ggtccaaagg gaaactctag atgctcagac ttttcacaca 660 agaataatca ggttctgttc cataaactct ggattgcatt cctacatgga aatgcctctg 720 gagtgtattc tcacagaaaa gagaaaaaag agatccacaa agaaggaagt gtttaatata 780 cttcaggctg cgtatgtcag caagcctggg gcccagcttg ctagacaaat aggagccagc 840 ctgaatgatg acattctttt cggggtgttc gcacaaagca agccagattc tgccgaacca 900 atggatcgat ctgccatgtg tgcattccct atcaaatatg tcaacgactt cttcaacaag 960 atcgtcaaca aaaacaatgt gagatgtctc cagcattttt acggacccaa tcatgagcac 1020 tgctttaata ggacacttct gagaaattca tcaggctgtg aagcgcgccg tgatgaatat 1080 cgaacagagt ttaccacagc tttgcagcgc gttgacttat tcatgggtca attcagcgaa 1140 gtcctcttaa catctatatc caccttcatt aaaggagacc tcaccatagc taatcttggg 1200 acatcagagg gtcgcttcat gcaggttgtg gtttctcgat caggaccatc aacccctcat 1260 gtgaattttc tcctggactc ccatccagtg tctccagaag tgattgtgga gcatacatta 1320 aaccaaaatg gc 1332 <210> 83 <211> 1299 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding PSI-IPT domain of c-Met <400> 83 tacacactgg ttatcactgg gaagaagatc acgaagatcc cattgaatgg cttgggctgc 60 agacatttcc agtcctgcag tcaatgcctc tctgccccac cctttgttca gtgtggctgg 120 tgccacgaca aatgtgtgcg atcggaggaa tgcctgagcg ggacatggac tcaacagatc 180 tgtctgcctg caatctacaa ggttttccca aatagtgcac cccttgaagg agggacaagg 240 ctgaccatat gtggctggga ctttggattt cggaggaata ataaatttga tttaaagaaa 300 actagagttc tccttggaaa tgagagctgc accttgactt taagtgagag cacgatgaat 360 acattgaaat gcacagttgg tcctgccatg aataagcatt tcaatatgtc cataattatt 420 tcaaatggcc acgggacaac acaatacagt acattctcct atgtggatcc tgtaataaca 480 agtatttcgc cgaaatacgg tcctatggct ggtggcactt tacttacttt aactggaaat 540 tacctaaaca gtgggaattc tagacacatt tcaattggtg gaaaaacatg tactttaaaa 600 agtgtgtcaa acagtattct tgaatgttat accccagccc aaaccatttc aactgagttt 660 gctgttaaat tgaaaattga cttagccaac cgagagacaa gcatcttcag ttaccgtgaa 720 gatcccattg tctatgaaat tcatccaacc aaatctttta ttagtggtgg gagcacaata 780 acaggtgttg ggaaaaacct gaattcagtt agtgtcccga gaatggtcat aaatgtgcat 840 gaagcaggaa ggaactttac agtggcatgt caacatcgct ctaattcaga gataatctgt 900 tgtaccactc cttccctgca acagctgaat ctgcaactcc ccctgaaaac caaagccttt 960 ttcatgttag atgggatcct ttccaaatac tttgatctca tttatgtaca taatcctgtg 1020 tttaagcctt ttgaaaagcc agtgatgatc tcaatgggca atgaaaatgt actggaaatt 1080 aagggaaatg atattgaccc tgaagcagtt aaaggtgaag tgttaaaagt tggaaataag 1140 agctgtgaga atatacactt acattctgaa gccgttttat gcacggtccc caatgacctg 1200 ctgaaattga acagcgagct aaatatagag tggaagcaag caatttcttc aaccgtcctt 1260 ggaaaagtaa tagttcaacc agatcagaat ttcacagga 1299 <210> 84 <211> 939 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding TyrKc domain of c-Met <400> 84 gtgcatttca atgaagtcat aggaagaggg cattttggtt gtgtatatca tgggactttg 60 ttggacaatg atggcaagaa aattcactgt gctgtgaaat ccttgaacag aatcactgac 120 ataggagaag tttcccaatt tctgaccgag ggaatcatca tgaaagattt tagtcatccc 180 aatgtcctct cgctcctggg aatctgcctg cgaagtgaag ggtctccgct ggtggtccta 240 ccatacatga aacatggaga tcttcgaaat ttcattcgaa atgagactca taatccaact 300 gtaaaagatc ttattggctt tggtcttcaa gtagccaaag gcatgaaata tcttgcaagc 360 aaaaagtttg tccacagaga cttggctgca agaaactgta tgctggatga aaaattcaca 420 gtcaaggttg ctgattttgg tcttgccaga gacatgtatg ataaagaata ctatagtgta 480 cacaacaaaa caggtgcaaa gctgccagtg aagtggatgg ctttggaaag tctgcaaact 540 caaaagttta ccaccaagtc agatgtgtgg tcctttggcg tgctcctctg ggagctgatg 600 acaagaggag ccccacctta tcctgacgta aacacctttg atataactgt ttacttgttg 660 caagggagaa gactcctaca acccgaatac tgcccagacc ccttatatga agtaatgcta 720 aaatgctggc accctaaagc cgaaatgcgc ccatcctttt ctgaactggt gtcccggata 780 tcagcgatct tctctacttt cattggggag cactatgtcc atgtgaacgc tacttatgtg 840 aacgtaaaat gtgtcgctcc gtatccttct ctgttgtcat cagaagataa cgctgatgat 900 gaggtggaca cacgaccagc ctccttctgg gagacatca 939 <210> 85 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR3 of anti-c-Met antibody <400> 85 Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 1 5 10 <210> 86 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR3 of anti-c-Met antibody <400> 86 Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 <210> 87 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region of monoclonal antibody AbF46 <400> 87 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Ser Ile 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asp Thr Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 88 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of anti-c-Met antibody <400> 88 Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Arg 35 40 45 Ser Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asn Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu 100 105 110 Lys Arg <210> 89 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR3 of anti-c-Met antibody <400> 89 Gln Gln Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu 1 5 10 15 Glu <210> 90 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region of AT-VH1 <400> 90 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 91 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region of AT-VH2 <400> 91 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 92 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region of AT-VH3 <400> 92 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 93 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region of AT-VH4 <400> 93 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 94 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region of AT-VH5 <400> 94 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 95 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of anti c-Met humanized antibody(huAbF46-H4) <400> 95 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 96 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of AT-Vk1 <400> 96 Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 97 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of AT-Vk2 <400> 97 Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 98 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of AT-Vk3 <400> 98 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 99 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of AT-Vk4 <400> 99 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 100 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> modified hinge region(U7-HC6) <400> 100 Glu Pro Ser Cys Asp Lys His Cys Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 101 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> modified hinge region(U6-HC7) <400> 101 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 102 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> modified hinge region(U3-HC9) <400> 102 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 103 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> modified hinge region(U6-HC8) <400> 103 Glu Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 104 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> modified hinge region(U8-HC5) <400> 104 Glu Lys Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 105 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> human hinge region <400> 105 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 106 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L1 of antibody L3-11Y <400> 106 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Trp Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 107 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of light chain variable region of antibody L3-11Y <400> 107 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Trp 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Arg Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 108 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of light chain of antibody L3-11Y <400> 108 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Trp 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Arg Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 109 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TFF1 sense primer <400> 109 cccctggtgc ttctatccta 20 <210> 110 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TFF1 antisense primer <400> 110 gatccctgca gaagtgtcta aaa 23

Claims (19)

  1. TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상과 상호작용하는 물질을 포함하는 c-Met 저해제의 효능 예측용 조성물.
  2. TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상과 상호작용하는 물질을 포함하는 c-Met 저해제의 효능 검정용 조성물.
  3. TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상과 상호작용하는 물질을 포함하는 c-Met 저해제의 적용 대상 선별용 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 상호작용하는 물질은 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상과 결합하는 화합물, 항체, 앱타머, 프라이머, 및 프로브로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인, 조성물.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, c-Met 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상과 상호작용하는 물질을 추가로 포함하는, 조성물.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 c-Met 저해제는 c-Met의 SEMA 도메인(서열번호 79) 내의 연속하는 5개 이상의 아미노산을 인식 또는 결합하는 항 c-Met 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 항 c-Met 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
    서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1, 서열번호 5의 아미노산 서열, 서열번호 2의 아미노산 서열, 또는 서열번호 2의 아미노산 서열 내의 3번째부터 10번째까지의 아미노산을 포함하는 연속하는 8 내지 19개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2, 및 서열번호 6의 아미노산 서열, 서열번호 85의 아미노산 서열, 또는 서열번호 85의 아미노산 서열 내의 1번째부터 6번째까지의 아미노산을 포함하는 연속하는 6 내지 13개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR), 또는 상기 하나 이상의 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는 중쇄 가변 부위;
    서열번호 7의 아미노산 서열의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1, 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2, 및 서열번호 9의 아미노산 서열, 서열번호 86의 아미노산 서열, 또는 서열번호 89의 아미노산 서열 내의 1번째부터 9번째까지의 아미노산을 포함하는 9 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 경쇄 상보성 결정 영역 또는 상기 하나 이상의 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하는 경쇄 가변 부위;
    상기 중쇄 상보성 결정영역 및 경쇄 상보성 결정영역의 조합; 또는
    상기 중쇄 가변 부위 및 경쇄 가변 부위의 조합
    을 포함하는 것인, 조성물.
  8. 환자로부터 얻은 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준을 측정하는 단계를 포함하는, c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 정보를 제공하는 방법.
  9. 환자로부터 얻은 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준을 측정하는 단계를 포함하는, c-Met 저해제의 효능 검정을 위한 정보를 제공하는 방법.
  10. 환자로부터 얻은 생물 시료 내의 TFF1 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준을 측정하는 단계를 포함하는, c-Met 저해제의 적용 대상 선별을 위한 정보를 제공하는 방법.
  11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, c-Met 및 이를 암호화하는 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 수준을 측정하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  12. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 c-Met 저해제는 c-Met의 SEMA 도메인(서열번호 79) 내의 연속하는 5개 이상의 아미노산을 인식 또는 결합하는 항 c-Met 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 항 c-Met 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
    서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1, 서열번호 5의 아미노산 서열, 서열번호 2의 아미노산 서열, 또는 서열번호 2의 아미노산 서열 내의 3번째부터 10번째까지의 아미노산을 포함하는 연속하는 8 내지 19개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2, 및 서열번호 6의 아미노산 서열, 서열번호 85의 아미노산 서열, 또는 서열번호 85의 아미노산 서열 내의 1번째부터 6번째까지의 아미노산을 포함하는 연속하는 6 내지 13개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR), 또는 상기 하나 이상의 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는 중쇄 가변 부위;
    서열번호 7의 아미노산 서열의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1, 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2, 및 서열번호 9의 아미노산 서열, 서열번호 86의 아미노산 서열, 또는 서열번호 89의 아미노산 서열 내의 1번째부터 9번째까지의 아미노산을 포함하는 9 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 경쇄 상보성 결정 영역 또는 상기 하나 이상의 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하는 경쇄 가변 부위;
    상기 중쇄 상보성 결정영역 및 경쇄 상보성 결정영역의 조합; 또는
    상기 중쇄 가변 부위 및 경쇄 가변 부위의 조합
    을 포함하는 것인, 방법.
  14. c-Met 저해제 및 TFF1 저해제를 포함하는, 암의 예방 또는 치료를 위한 병용 투여용 약학 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 c-Met 저해제는 c-Met의 SEMA 도메인(서열번호 79) 내의 연속하는 5개 이상의 아미노산을 인식 또는 결합하는 항 c-Met 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 암의 예방 또는 치료를 위한 병용 투여용 약학 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 항 c-Met 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
    서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1, 서열번호 5의 아미노산 서열, 서열번호 2의 아미노산 서열, 또는 서열번호 2의 아미노산 서열 내의 3번째부터 10번째까지의 아미노산을 포함하는 연속하는 8 내지 19개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2, 및 서열번호 6의 아미노산 서열, 서열번호 85의 아미노산 서열, 또는 서열번호 85의 아미노산 서열 내의 1번째부터 6번째까지의 아미노산을 포함하는 연속하는 6 내지 13개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR), 또는 상기 하나 이상의 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는 중쇄 가변 부위;
    서열번호 7의 아미노산 서열의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1, 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2, 및 서열번호 9의 아미노산 서열, 서열번호 86의 아미노산 서열, 또는 서열번호 89의 아미노산 서열 내의 1번째부터 9번째까지의 아미노산을 포함하는 9 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 경쇄 상보성 결정 영역 또는 상기 하나 이상의 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하는 경쇄 가변 부위;
    상기 중쇄 상보성 결정영역 및 경쇄 상보성 결정영역의 조합; 또는
    상기 중쇄 가변 부위 및 경쇄 가변 부위의 조합
    을 포함하는 것인, 암의 예방 또는 치료를 위한 병용 투여용 약학 조성물.
  17. 제14항에 있어서, 상기 TFF1 저해제는
    TFF1 단백질에 결합하는 항체, 압타머, 및 화합물 (small molecule), 및
    TFF1를 암호화하는 유전자에 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA (small interfering RNA), shRNA (small hairpin RNA), 및 miRNA (microRNA)
    로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인,
    암의 예방 또는 치료를 위한 병용 투여용 약학 조성물.
  18. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 편평상피세포암, 소세포폐암, 비소세포폐암, 폐의 선암, 폐의 편평상피암, 복막암, 피부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 직장암, 항문부근암, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 간세포암, 위장암, 위암, 췌장암, 교아종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁암, 침샘암, 신장암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 두경부암, 뇌암, 또는 골육종인, 암의 예방 또는 치료를 위한 병용 투여용 약학 조성물.
  19. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 c-Met 저해제에 대하여 저항성을 갖는 암인, 암의 예방 또는 치료를 위한 병용 투여용 약학 조성물.

KR1020140008733A 2014-01-24 2014-01-24 c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1 Ceased KR20150088433A (ko)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020140008733A KR20150088433A (ko) 2014-01-24 2014-01-24 c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1
US14/604,361 US9850537B2 (en) 2014-01-24 2015-01-23 Biomarker TFF1 for predicting effect of C-MET inhibitor
KR1020210007460A KR102291465B1 (ko) 2014-01-24 2021-01-19 c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020140008733A KR20150088433A (ko) 2014-01-24 2014-01-24 c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020210007460A Division KR102291465B1 (ko) 2014-01-24 2021-01-19 c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20150088433A true KR20150088433A (ko) 2015-08-03

Family

ID=53678795

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020140008733A Ceased KR20150088433A (ko) 2014-01-24 2014-01-24 c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1

Country Status (2)

Country Link
US (1) US9850537B2 (ko)
KR (1) KR20150088433A (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017116064A1 (ko) * 2015-12-28 2017-07-06 삼성전자 주식회사 C-met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 dkk

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112979753B (zh) * 2019-12-16 2022-06-07 中国药科大学 一种靶向c-Met的多肽及其应用
CN111455103A (zh) * 2020-03-19 2020-07-28 申联生物医药（上海）股份有限公司 用于呼吸道rna病毒pcr检测的内参基因及其检测产品

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090269736A1 (en) 2002-10-01 2009-10-29 Epigenomics Ag Prognostic markers for prediction of treatment response and/or survival of breast cell proliferative disorder patients
US20040231909A1 (en) 2003-01-15 2004-11-25 Tai-Yang Luh Motorized vehicle having forward and backward differential structure
US20050064455A1 (en) 2003-05-28 2005-03-24 Baker Joffre B. Gene expression markers for predicting response to chemotherapy
WO2007109809A1 (en) 2006-03-23 2007-09-27 Invitrogen Corporation Methods and reagents for in vivo imaging of cancer cell lines

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017116064A1 (ko) * 2015-12-28 2017-07-06 삼성전자 주식회사 C-met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 dkk

Also Published As

Publication number Publication date
US20150212077A1 (en) 2015-07-30
US9850537B2 (en) 2017-12-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101985297B1 (ko) 항 ｃ―ｍｅｔ 항체 및 그의 용도
KR102049990B1 (ko) c-Met 항체 및 VEGF 결합 단편이 연결된 융합 단백질
KR20150090761A (ko) 항 Her3 scFv 단편 및 이를 포함하는 항 c-Met/항 Her3 이중 특이 항체
KR102049991B1 (ko) 항 c-Met/항 Her2 이중 특이 항체
KR102029137B1 (ko) EGFR 길항제 및 항 c-Met 항체를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물
KR101938699B1 (ko) Ｌｒｉｇ１의 항 ｃ―ｍｅｔ 항체 적용 대상 환자 선별을 위한 용도
KR102186363B1 (ko) c-Met 저해제 및 베타-카테닌 저해제를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물
KR101938698B1 (ko) Ｃｂｌ의 항 ｃ－ｍｅｔ 항체 적용 대상 환자 선별을 위한 바이오마커로서의 용도
KR102390359B1 (ko) 폴리펩타이드, 이를 포함하는 항 VEGF 항체 및 항 c-Met/항 VEGF 이중 특이 항체
KR20150128367A (ko) 항 c-Met/항 EGFR/항 Her3 다중 특이 항체 및 이의 이용
KR102089766B1 (ko) 혈관신생 저해제 및 항 c-Met 항체를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물
KR102192591B1 (ko) c-Met 저해제 및 c-Myc 저해제를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물
KR102309881B1 (ko) c-Met 및 EGFR의 이중 저해제 및 IGF-1R 저해제를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물
KR20150088433A (ko) c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1
KR20160015076A (ko) c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 Hsp90
KR101985299B1 (ko) 항-c-Met/항-Nrp1 이중 특이 항체
KR102338678B1 (ko) 항 c-Met 항체 효과 예측을 위한 바이오마커
KR102309882B1 (ko) c-Met 저해제 및 IGF-1R 저해제를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물
KR102272788B1 (ko) c-Met 저해제의 효능 예측 또는 효능 검증을 위한 바이오마커
KR102067613B1 (ko) 항 c-Met 항체 및 항 her2 항체를 포함하는 병용 투여용 조성물
KR102291465B1 (ko) c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1
KR102110521B1 (ko) 항 c-Met 항체 적용 대상 선별을 위한 바이오마커
KR102306656B1 (ko) 항 c-Met 항체를 이용하는 암의 병용 치료
KR102553879B1 (ko) c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 DKK
KR102177785B1 (ko) c-Met 항체의 효능 검사용 마커 및 이를 이용하는 c-Met 항체의 효능 검사 방법

Legal Events

Date Code Title Description
PA0109 Patent application

Patent event code: PA01091R01D

Comment text: Patent Application

Patent event date: 20140124

PG1501 Laying open of application
PA0201 Request for examination

Patent event code: PA02012R01D

Patent event date: 20190111

Comment text: Request for Examination of Application

Patent event code: PA02011R01I

Patent event date: 20140124

Comment text: Patent Application

E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20200220

Patent event code: PE09021S01D

AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
PE0601 Decision on rejection of patent

Patent event date: 20201028

Comment text: Decision to Refuse Application

Patent event code: PE06012S01D

Patent event date: 20200220

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event code: PE06011S01I

AMND Amendment
PX0901 Re-examination

Patent event code: PX09011S01I

Patent event date: 20201028

Comment text: Decision to Refuse Application

Patent event code: PX09012R01I

Patent event date: 20200420

Comment text: Amendment to Specification, etc.

PX0601 Decision of rejection after re-examination

Comment text: Decision to Refuse Application

Patent event code: PX06014S01D

Patent event date: 20201222

Comment text: Amendment to Specification, etc.

Patent event code: PX06012R01I

Patent event date: 20201127

Comment text: Decision to Refuse Application

Patent event code: PX06011S01I

Patent event date: 20201028

Comment text: Amendment to Specification, etc.

Patent event code: PX06012R01I

Patent event date: 20200420

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event code: PX06013S01I

Patent event date: 20200220

X601 Decision of rejection after re-examination
A107 Divisional application of patent
PA0107 Divisional application

Comment text: Divisional Application of Patent

Patent event date: 20210119

Patent event code: PA01071R01D