KR20150056208A - A novel Lactobacillus fermentum SJ8256 and use thereof - Google Patents
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Abstract
본 발명은 신규 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256(Lactobacillus fermentum SJ8256; 기탁번호: KCTC 12516BP) 균주, 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 축산병원성 세균 방제용 미생물 제제에 관한 것으로, 구체적으로 자연으로부터 분리된 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256을 다재내성 병원성균인 살모넬라속(Salmonella sp.) 및 대장균(E. coli)과 함께 혼용 배양하였을 때, 상기 락토바실러스 균주는 상기 다재내성 병원균에 대하여 강력한 항균효과를 나타내고, 이는 현재 사용되고 있는 다양한 항생제와 비교하였을 때 현저하게 상승되는 효과를 나타내므로, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물은 축산병원성 세균 방제용 미생물 제제의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to novel Lactobacillus buffer momentum SJ8256 (Lactobacillus fermentum SJ8256; (KCTC 12516BP), a culture of the above-mentioned strain, or a mixture thereof as an active ingredient. More particularly, the present invention relates to a microbial preparation for controlling bacterial pathogen in an animal husbandry pathogen. More specifically, Lactobacillus fermentum SJ8256 isolated from nature is used as a salmonella When mixed with Salmonella sp. And E. coli , the Lactobacillus strain exhibited a strong antimicrobial effect against the above-mentioned multi-resistant pathogens, which was remarkably elevated as compared with various antibiotics currently used Therefore, the Lactobacillus perfumant SJ8256 strain, a culture solution thereof, or a mixture thereof can be usefully used as an effective ingredient of a microbial preparation for controlling an animal pathogenic bacterium.
Description
본 발명은 신규 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256(Lactobacillus fermentum SJ8256) 균주 및 상기 균주를 이용한 미생물 제제에 관한 것이다.
The present invention relates to a novel Lactobacillus fermentum SJ8256 strain and a microorganism preparation using the strain.
산업과 경제의 급속한 발전에 따라 국민 식생활이 서구화되고 있으며, 이로 인해 축산물의 섭취가 증가하여, 축산업계에서는 가축에 대한 예방 및 치료뿐만 아니라, 가축 성장의 촉진 및 사료 효율 개선을 통한 가축의 생산성 향상을 목적으로 다양한 항생제를 사용하고 있다. 2000 년을 기준으로 가축성장의 촉진을 목적으로 한 사료첨가용 항생제 사용량은 전 세계적으로 약 12,000 톤으로 집계되었으며, 질병 치료용 항생제 또한 약 900 톤이 사용된 것으로 보고되었다.Due to the rapid development of industry and economy, the national diet has been westernized, and as a result, the consumption of livestock products has increased, and in the livestock industry, not only the prevention and treatment of livestock, but also the improvement of livestock productivity by promoting livestock growth and improving feed efficiency The use of various antibiotics for the purpose of. As of 2000, about 12,000 tons of antibiotics were added to feed for the purpose of promoting livestock growth, and about 900 tons of antibiotics for the treatment of diseases were also reported.
그러나, 가축 사료 내의 항생제 첨가로 인하여 인체에 여러 가지 부작용의 가능성이 제시됨에 따라, 소비자의 소비심리 역시 항생제 사용 식재료의 소비량 축소로 변화하였고, 현재 전 세계적으로 질병의 직접적인 치료 목적 이외의 질병 예방 및 성장 촉진의 목적으로 사료에 첨가되는 항생제의 사용이 전면 금지 또는 규제되고 있다. 구체적으로, 유럽의 경우 2006 년 1 월부터 사료에 첨가되는 항생제의 사용이 전면 금지되었으며, 한국은 2011 년 7 월부터 가축에 대한 성장촉진제로서의 항생제 사용을 전면 금지하고 있다. However, as the antibiotics in livestock feeds have presented various possible side effects to the human body, consumer sentiment has also changed due to the consumption of antibiotics consumed, and nowadays, The use of antibiotics added to feed for the purpose of promoting growth is totally prohibited or regulated. Specifically, in Europe, the use of antibiotics added to feeds has been banned since January 2006, and Korea has banned the use of antibiotics as a growth promoter for livestock since July 2011.
따라서, 상기 항생제를 대체할 수 있는 안전하고 친환경적인 대체물질이 첨가된 새로운 사료첨가제의 개발이 요구됨에 따라, 생균제 사료, 즉 프로바이오틱스(probiotics)로서 항균 효과를 나타내는 미생물에 관심이 집중되고 있다. 프로바이오틱스는 장내 미생물의 균형에 도움을 주는 미생물, 항균 활성 및 효소 활성을 나타내는 미생물, 및 상기 미생물들이 생산하는 대사 산물을 포함하며, 사람 또는 동물에 건조된 세포의 형태 또는 발효 산물의 형태로 급여되어, 사람 또는 동내의 장내 균통을 개선하는 효과를 나타내는 단일 또는 복합 균주 형태의 생균으로 정의된다.
Accordingly, as a new feed additive to which a safe and environmentally-friendly alternative substance capable of replacing the antibiotic has been required, attention has been focused on a probiotics, i.e., a microorganism exhibiting an antibacterial effect as probiotics. The probiotics include microorganisms that help balance intestinal microorganisms, microorganisms that exhibit antimicrobial activity and enzyme activities, and metabolites produced by the microorganisms, and are fed to humans or animals in the form of dried cells or fermented products , And live bacteria in the form of single or multiple strains showing the effect of improving intestinal blight in a person or a house.
유산균(Lactic acid bacteria, LAB)은 젖산, 아세트산 등의 유기산 또는 박테리오신(bacteriocin)과 같은 다양한 항균 물질을 생산함을 통해 항균 효과를 나타내는 프로바이오틱스로서 알려지고 있으며, 식품 또는 가축 사료의 중요한 생물학적 보존제가 될 수 있다고 알려진 바 있다. 또한 각종의 생리활성물질, 항균물질, 항암물질을 생산함으로써 식물체의 자기방어능력을 향상시키며, 가축의 경우 장내 미생물의 안정화, 사료 효율증가 및 내병성의 증가 효과를 나타낸다. 현재 사용되고 있는 유산균 관련 종균제의 범위는 비피더스(Bifidus), 바실러스(Bacillus), 락토바실러스(Lactobacillus), 락토코커스(Lactococcus), 포도상구균(Staphylococcus) 및 루코노스톡(Leuconostoc) 등이 있으며, 상기 유산균을 산업적으로 올바르게 사용하기 위하여 사용 용도에 따른 적합한 특성을 판단하는 과정을 필요로 한다.
Lactic acid bacteria (LAB) is known as an antibacterial probiotics through the production of various antibacterial substances such as lactic acid, acetic acid, and other organic acids or bacteriocin, and it is an important biological preservative of food or livestock feed It is known to be possible. In addition, it enhances the self-defense ability of plants by producing various physiologically active substances, antimicrobial substances and anticancer substances, and in the case of livestock, stabilizes intestinal microorganisms, increases feed efficiency and increases disease resistance. The scope of the current lactic acid-related microorganisms used agents include Bifidobacterium (Bifidus), Bacillus (Bacillus), Lactobacillus bacteria (Lactobacillus), Lactococcus (Lactococcus), Staphylococcus aureus (Staphylococcus) and a base Kono and the like stock (Leuconostoc), the lactic acid bacteria In order to properly use it industrially, it is necessary to judge the proper characteristics according to the use purpose.
지금까지 보고된 프로바이오틱스의 예로서, 대한민국 공개특허 10-2012-0118570호에는 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) ET45 균주 및 이로부터 생산되는 박테리오신의 항균 활성에 대하여 개시되어있고, 대한민국 공개특허 10-2012-0089530호에는 락토바실러스 플라타룸(Lactobacillus plantarum) SY99 균주 및 이로부터 생산되는 박테리오신의 항균 활성에 대하여 개시되어 있다. 또한, 대한민국 공개특허 10-2007-0018138호에는 양돈용 일반 항생제를 대체하여 사용될 수 있는 락토바실러스 퍼멘텀 IB261(Lactobacillus fermentum IB261) 균주(KCTC 18107P)에 대하여 개시되어 있고, 대한민국 공개특허 10-2010-0076263호에는 송아지 분변으로부터 분리되어 소의 장질환을 예방하기 위한 프로바이오틱스로서 락토바실러스 BLAB19(Lactobacillus fermentum BLAB19) 균주에 대하여 개시되어 있다. 그러나, 산업적으로 이용하기 위한 프로바이오틱스 균주로, 일반적으로 사용되고 있는 항생제에 대하여 넓은 대체 가능성 및 다양한 균주에 대한 동시 적용이 가능한 균주 또는 이로부터 생산되는 천연물질에 대한 개발이 계속적으로 요구되고 있다.
As an example of the probiotics reported so far, Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2012-0118570 discloses a Lactococcus lactis ET 45 strain and the bacteriocin produced therefrom have been disclosed in Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-89530, and lactic acid bacteria such as Lactobacillus plantarum ) SY99 strain and the bacteriocin produced therefrom. Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2007-0018138 discloses Lactobacillus fermentum IB261 ( Lactobacillus < RTI ID = 0.0 > fermentum IB261) strain KCTC 18107P, Korean Patent Laid-Open No. 10-2010-0076263 discloses a probiotic which is isolated from calf feces and prevents bowel disease in cattle, and Lactobacillus BLAB19 fermentum BLAB19). However, as a probiotic strain for industrial use, there is a continuing demand for the development of a strain capable of broadly replacing commonly used antibiotics and capable of simultaneous application to various strains or a natural substance produced therefrom.
이에, 본 발명자들은 다양한 축산병원성 세균에 대하여 항균 효과를 나타내면서, 기존에 사용되는 항생제를 대체하기 위한 신규한 축산병원성 세균 방제용 미생물 제제를 발굴하기 위하여 노력한 결과, 자연으로부터 분리된 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256(Lactobacillus fermentum SJ8256, 기탁번호: KCTC 12516BP)을 다재내성 병원성균인 살모넬라속(Salmonella sp.) 및 대장균(E. coli)과 함께 혼용 배양하였을 때, 상기 락토바실러스 균주는 상기 다재내성 병원균에 대하여 강력한 항균효과를 나타내고, 이는 현재 사용되고 있는 다양한 항생제와 비교하였을 때 현저하게 상승되는 효과인 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the present inventors have made efforts to discover new microbial preparations for controlling livestock pathogenic microbes to replace antibiotics used in the past, while exhibiting antimicrobial effects against a variety of livestock pathogenic bacteria. As a result, Lactobacillus fermentum SJ8256 ( Lactobacillus fermentum SJ8256, Accession No .: KCTC 12516BP) was mixed with Salmonella sp. and E. coli , which are highly resistant pathogenic strains, the Lactobacillus strain has a strong antimicrobial effect against the above-mentioned multi-resistant pathogens And that this is a remarkably elevated effect when compared with various antibiotics currently used, thereby completing the present invention.
본 발명의 목적은 축산병원성 세균에 대하여 항균 효과를 나타내는 신규한 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256(Lactobacillus fermentum SJ8256)를 제공하는 것이다.The object of the present invention is to provide a novel Lactobacillus fermentum SJ8256 ( Lactobacillus fermentum SJ8256).
본 발명의 또 다른 목적은 다양한 축산병원성 세균에 대하여 항균 효과를 나타내면서, 기존에 사용되는 항생제를 대체하기 위한 미생물 제제를 제공하는 것이다.
It is another object of the present invention to provide a microbial preparation for replacing antibiotics used in the past while exhibiting an antimicrobial effect against various livestock pathogenic bacteria.
상기 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 수탁번호 KCTC 12516BP로 기탁된 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256(Lactobacillus fermentum SJ8256) 균주를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention has been deposited with accession number of KCTC 12516BP Lactobacillus buffer momentum SJ8256 (Lactobacillus fermentum SJ8256).
또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 미생물 제제를 제공한다.In addition, the present invention provides a microorganism preparation containing the Lactobacillus perfumant SJ8256 strain, a culture thereof or a mixture thereof as an active ingredient.
또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 축산병원성 세균 방제용 미생물 제제를 제공한다.
In addition, the present invention provides a microbial preparation for controlling an animal pathogenic bacterium containing the Lactobacillus perfumant SJ8256 strain, a culture thereof or a mixture thereof as an active ingredient.
본 발명의 자연으로부터 분리된 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256(Lactobacillus fermentum SJ8256, 기탁번호: KCTC 12516BP)을 다재내성 병원성균인 살모넬라속(Salmonella sp.) 및 대장균(E. coli)과 함께 혼용 배양하였을 때, 상기 락토바실러스 균주는 상기 다재내성 병원균에 대하여 강력한 항균효과를 나타내고, 이는 현재 사용되고 있는 다양한 항생제와 비교하였을 때 현저하게 상승되는 효과를 나타내므로, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주는 축산병원성 세균 방제용 미생물 제제의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
When mixed cultures of Salmonella sp. And E. coli , which are highly resistant pathogenic bacteria, Lactobacillus fermentum SJ8256 ( Lactobacillus fermentum SJ8256, Accession No .: KCTC 12516BP) isolated from nature of the present invention, Lactobacillus strain SJ8256 exhibits a potent antimicrobial effect against the above-mentioned multi-resistant pathogens and exhibits a remarkably elevated effect when compared with various antibiotics currently used. Therefore, the Lactobacillus perfumant SJ8256 strain is a microorganism preparation for controlling livestock pathogenic bacteria Can be usefully used as an active ingredient.
도 1은 대장균(E. coli) 및 살모넬라 속(Salmonella sp.) 균주에 대한 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256(Lactobacillus fermentum SJ8256)의 항균 활성(antibacterial activity)을 나타낸다.Figure 1 is a graph showing the effect of Lactobacillus fermentum SJ8256 ( Lactobacillus sp.) Against E. coli and Salmonella sp. fermentum SJ8256). < / RTI >
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 수탁번호 KCTC 12516BP로 기탁된 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256(Lactobacillus fermentum SJ8256) 균주를 제공한다.The present invention provides a Lactobacillus fermentum SJ8256 strain deposited with accession number KCTC 12516BP.
또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 축산병원성 세균 방제용 미생물 제제를 제공한다.In addition, the present invention provides a microbial preparation for controlling an animal pathogenic bacterium containing the Lactobacillus perfumant SJ8256 strain, a culture thereof or a mixture thereof as an active ingredient.
상기 균주는 살모넬라 속(Salmonella sp.) 및 대장균(E. coli) 둘 중 어느 하나 또는 둘 다에 대하여 길항성을 나타내는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.Preferably, the strain exhibits antagonism to either or both of Salmonella sp. And E. coli , but is not limited thereto.
상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물은 10 내지 20 중량부로 포함되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
Preferably, the strain, the culture or the mixture thereof is contained in an amount of 10 to 20 parts by weight, but is not limited thereto.
본 발명의 구체적인 실시예에 있어서, 본 발명자들은 축산병원성 세균에 대하여 항균 활성을 나타내는 항균 활성 균주를 분리하기 위해, 자연에서 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주를 분리하여 서열번호 1로 기재되는 16s rRNA의 염기서열을 포함하며, 이는 락토바실러스 퍼멘텀 종과 99% 이상의 상동성을 나타내는 것을 확인하여, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256은 락토바실러스 퍼멘텀 종 균주와 가장 근연한 관계에 있는 신규한 균주임을 확인하였고(도 1 참조), 2013년 11 월 7 일 한국생명공학연구원 생물자원센터에 기탁하였다(기탁번호 KCTC 12516BP). 또한, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256이 대장균 및 살모넬라 속 균주에 대하여 병원성 미생물의 생장을 저해하는 항균력을 지니고 있음을 확인하였다(도 2 참조).In a specific example of the present invention, in order to isolate an antimicrobial activity strain exhibiting an antimicrobial activity against an animal pathogenic bacterium, the present inventors isolated the Lactobacillus perfumant SJ8256 strain from nature and isolated the base of 16s rRNA described in SEQ ID NO: 1 Sequence, which is 99% or more homologous to the Lactobacillus perfumant species, the Lactobacillus perfumant SJ8256 was found to be a novel strain most closely related to the lactobacillus fermentum species strain ( 1), and deposited on Nov. 7, 2013 with the Korean Agency of Bioscience and Biotechnology (Accession No. KCTC 12516BP). In addition, it was confirmed that Lactobacillus perfumant SJ8256 has antibacterial activity against E. coli and Salmonella spp., Which inhibits the growth of pathogenic microorganisms (see FIG. 2).
따라서, 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주는 다재내성 병원균인 대장균 및 살모넬라 속 균주와 함께 혼용 배양하였을 때, 상기 다재내성 병원균에 대하여 강력한 항균 효과를 나타내므로, 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물은 축산병원성 세균 방제용 미생물 제제의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
Therefore, the lactobacillus fermentum SJ8256 strain of the present invention exhibits a strong antimicrobial effect against the above-mentioned multi-resistant pathogens when cultivated together with Escherichia coli and Salmonella spp., Which are highly resistant pathogens, and thus the Lactobacillus perfumant SJ8256 strain of the present invention , A culture solution thereof, or a mixture thereof can be usefully used as an effective ingredient of a microorganism preparation for controlling an animal pathogenic bacterium.
본 발명의 미생물 제제는 통상적인 생균제 조성물 제조방법에 따라 제조될 수 있으며, 일반적으로, 배양현탁액이나 건조분말 형태일 수 있다. 또한, 주성분인 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주, 또는 이의 배양액의 유효량에 1종 또는 2종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 통상적인 담체 또는 1종 또는 2종 이상의 첨가제를 선택하여 통상적인 제형의 조성물로 제조할 수 있다.The microorganism preparation of the present invention can be produced according to a conventional method for producing a probiotic composition, and can be generally in the form of a culture suspension or a dry powder. In addition, one or two or more pharmaceutically acceptable conventional carriers or one or two or more additives may be selected from the above-mentioned lactobacillus fermentum SJ8256 strain as a main component or an effective amount of the culture solution thereof to prepare a composition of a conventional formulation can do.
담체는 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제, 감미제, 안정제, 방부제 중에서 1종 또는 2종 이상을 선택하여 사용할 수 있으며, 첨가제로는 향료, 비타민류, 항산화제 중에서 1종 또는 2종 이상을 선택하여 사용할 수 있다.The carrier may be selected from one or more selected from among diluents, lubricants, binders, disintegrants, sweeteners, stabilizers and preservatives. Examples of the additives include one or more of flavorings, vitamins and antioxidants Can be used.
본 발명에 있어서, 담체 및 첨가제는 약제학적으로 허용 가능한 것은 모두 사용이 가능하며, 구체적으로는 희석제로는 유당(lactose monohydrate), 트레할로스(Trehalose), 옥수수 전분(cornstarch), 콩기름(soybean oil), 미결정 셀룰로오스(microcrystalline cellulose) 또는 만니톨(D-mannitorl)이 좋고, 활택제로는 스테아린산 마그네슘(magnesiumstearate) 또는 탈크(talc)가 바람직하며, 결합제로는 폴리비닐피롤리돈(PVP: polyvinyipyrolidone) 또는 하이드록시프로필셀룰로오스(HPC: hydroxypropylcellulose) 중에서 선택함이 바람직하다. 또한, 붕해제로는 카르복시메칠셀룰로오스칼슘(Ca-CMC: carboxymethylcellulose calcium), 전분글리콜산나트륨(sodium starchglycolate), 폴라크릴린칼륨(polacrylin potassium) 또는 크로스포비돈(cross-linked polyvinylpyrrolidone)중에서 선택함이 바람직하고, 감미제로는 백당, 과당, 소르비톨(sorbitol) 또는 아스파탐(aspartame) 중에서 선택되고, 안정제로는 카르복시메칠셀룰로오스나트륨(Na-CMC: carboxymethylcellulose sodium), 베타-싸이크로덱스트린(β-cyclodextrin), 백납(white bee's wax) 또는 잔탄검(xanthan gum) 중에서 선택되며, 방부제로는 파라옥시안식향산메칠(methyl p-hydroxy benzoate, methlparaben), 파라옥시안식향산프로필(propyl p-hydroxybenzoate, propylparaben), 또는 소르빈산칼륨(potassium sorbate) 중에서 선택하는 것이 바람직하다.
In the present invention, the carrier and additives may be any pharmaceutically acceptable ones. Specific examples of the diluent include lactose monohydrate, trehalose, cornstarch, soybean oil, Microcrystalline cellulose or mannitol may be preferably used and the lubricant may be magnesium stearate or talc. The binder may be polyvinylpyrrolidone (PVP) or hydroxypropyl It is preferable to select from hydroxypropylcellulose (HPC). The disintegrant is preferably selected from carboxymethylcellulose calcium (Ca-CMC), sodium starch glycollate, polacrylin potassium or cross-linked polyvinylpyrrolidone And the sweetening agent is selected from white sugar, fructose, sorbitol or aspartame. Examples of the stabilizer include sodium carboxymethylcellulose sodium (Na-CMC), beta-cyclodextrin (beta -cyclodextrin) white bee's wax or xanthan gum and the preservative is selected from the group consisting of methyl p-hydroxy benzoate, methlparaben, propyl p-hydroxybenzoate, propylparaben, or potassium sorbate potassium sorbate).
또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 축산병원성 세균 방제용 미생물 제제를 제공한다.In addition, the present invention provides a microbial preparation for controlling an animal pathogenic bacterium containing the Lactobacillus perfumant SJ8256 strain, a culture thereof or a mixture thereof as an active ingredient.
또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 사료 첨가제를 제공한다.The present invention also provides a feed additive comprising the Lactobacillus perfumant SJ8256 strain, a culture thereof or a mixture thereof as an active ingredient.
상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물은 살모넬라속(Salmonella sp.) 및 대장균(E. coli) 둘 중 어느 하나 또는 둘 다에 대하여 길항성을 나타내는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.It is preferable, but not limited, that the strain, the culture solution thereof, or a mixture thereof exhibit antagonism to either or both of Salmonella sp. And E. coli .
상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물은 10 내지 20 중량부로 포함되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 배양액은 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주를 배양한 배양원액 및 상기 균주를 제거한 배양 상등액의을 희석하여 포함하는 것이 바람직하며, 구체적으로 0.5 내지 500 배로 희석하여 포함하는 것이 더욱 바람직하다. 상기 배양액의 조성은 통상의 락토바실러스 균주에 필요한 성분뿐만 아니라, 락토바실러스의 생장에 상승적으로 작용하는 모든 성분을 추가적으로 포함되는 것이 바람직하다.Preferably, the strain, the culture or the mixture thereof is contained in an amount of 10 to 20 parts by weight, but is not limited thereto. It is preferable that the culture solution contains the culture supernatant obtained by culturing the lactobacillus fermentum SJ8256 strain of the present invention and the culture supernatant from which the strain has been diluted, more preferably 0.5 to 500 times diluted. It is preferable that the composition of the culture liquid further includes not only the components required for a conventional Lactobacillus strain, but also all the components synergistically acting on the growth of Lactobacillus.
상기 축산병원성 세균은 감염성 설사, 위장염, 염증성 장질환, 신경성 장염 증후군, 소장 미생물 과성장증 및 장 급이성 설사로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나를 유발하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The livestock pathogenic bacterium is preferably, but not limited to, one selected from the group consisting of infectious diarrhea, gastroenteritis, inflammatory bowel disease, neurodegenerative inflammatory syndromes, small intestine microbial growth and intestinal diarrhea.
상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물은 아미카신(amikacin), 아목시실린-클라불란 산(amoxicillin/clavulanic acid), 암피실린(ampicillin), 세파로신(cephalothin), 시프로플록사신(ciprofloxacin), 겐타마이신(gentamycin), 네오마이신(neomycin), 페니실린(penicillin), 설파메톡사졸/트리메토프림(sulfamethoxazole/trimethoprim), 스트렙토마이신(streptomycin), 테트라사이클린(tetracycline), 반코마이신(vancomycin), 카나마이신(kanamycin), 에리스로마이신(erythromycin), 클린다마이신(clindamycin), 클로람페니콜(chloramphenicol), 시너시드(synercid, quinupristin and dalfopristin combination), 리네졸리드(linezolid), 트리메소프림(trimethoprim), 시프로플록사신(ciprofloxacin) 및 스펙티노마이신(spectinomycin)를 포함하는 당업계에 축산병원성 세균에 대하여 사용되는 모든 항생제를 대체할 수 있는 것이 바람직하며, 구체적으로 아미카신, 아목시실린-클라불란 산, 암피실린, 세파로신, 시프로플록사신, 겐타마이신, 네오마이신, 페니실린, 설파메톡사졸/트리메토프림, 스트렙토마이신 및 테트라사이클린으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 또는 둘 이상에 대하여 대체할 수 있는 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
The strain, its culture or a mixture thereof may be selected from the group consisting of amikacin, amoxicillin / clavulanic acid, ampicillin, cephalothin, ciprofloxacin, gentamycin ), Neomycin, penicillin, sulfamethoxazole / trimethoprim, streptomycin, tetracycline, vancomycin, kanamycin, erythromycin erythromycin, clindamycin, chloramphenicol, synercid, quinupristin and dalfopristin combination, linezolid, trimethoprim, ciprofloxacin and spectinomycin. Which is capable of replacing all antibiotics used in livestock pathogenic bacteria in the art, Substitution of one or more selected from the group consisting of carcin, amoxicillin-clavulanic acid, ampicillin, cephalosin, ciprofloxacin, gentamicin, neomycin, penicillin, sulfamethoxazole / trimethoprim, streptomycin and tetracycline But is not limited thereto.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에 있어서, 본 발명자들은 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주의 항균능을 확인하기 위하여 기존 상용되고 있는 항생제와 비교한 결과, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주는 대장균 및 살모넬라 속 균주 모두에 대하여 강력한 항균효과를 나타내고, 이는 현재 사용되고 있는 다양한 항생제와 비교하였을 때 현저하게 상승되는 효과를 나타내는 것을 확인하였다(표 1 참조).In another specific embodiment of the present invention, the present inventors have found that the Lactobacillus perfumant SJ8256 strain is in the form of Escherichia coli and Salmonella spp. (Table 1). It was confirmed that the antimicrobial effect was remarkably enhanced when compared with various antibiotics currently used.
또한, 본 발명자들은 실제로 생체 내에서 병원성 미생물에 대하여 나타내는 항균 효과를 확인하기 위해, 대장균 및 살모넬라의 공격적 접종으로 설사질환을 유발한 자돈에 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주를 첨가한 사료첨가제를 급여하여 지사효과를 확인한 결과, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256이 생체 내에서 대장균 및 살모넬라 속 균주의 생육을 동시에 억제함으로써, 복합적인 병원성 미생물의 감염에도 간단하게 지사효과를 나타내는 것을 확인하였다(표 2 참조).In order to confirm the antimicrobial activity of the pathogenic microorganisms in vivo, the inventors of the present invention, in order to confirm the antimicrobial effect in vivo, were fed a feed additive to which lactobacillus fermentum SJ8256 strain was added to pigs that caused diarrheal diseases by aggressive inoculation of Escherichia coli and Salmonella, As a result, it was confirmed that Lactobacillus perfumant SJ8256 suppresses the growth of Escherichia coli and Salmonella spp. In vivo, and thus, it can be easily applied to multiple pathogenic microorganisms.
따라서, 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주는 상기 다재내성 병원균에 대하여 강력한 항균효과를 나타내고, 이는 현재 사용되고 있는 다양한 항생제와 비교하였을 때 현저하게 상승되는 효과를 나타내므로, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물은 축산병원성 세균 방제용 미생물 제제의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
Therefore, the Lactobacillus perfumant SJ8256 strain of the present invention exhibits a strong antimicrobial effect against the above-mentioned multi-resistant pathogens and exhibits a remarkably elevated effect as compared with various antibiotics currently used. Therefore, the Lactobacillus perfumant SJ8256 strain , A culture solution thereof, or a mixture thereof can be usefully used as an effective ingredient of a microorganism preparation for controlling an animal pathogenic bacterium.
상기 사료 조성물은 균체가 제거된 배양물 만을 포함할 수도 있으며, 균체가 혼합되거나 균체만을 함유하도록 제조할 수 있다. The feed composition may contain only cultures from which the cells have been removed, and may be prepared so that the cells are mixed or contain only cells.
본 발명의 사료 조성물은 기존의 항생제를 대체하고 유해한 식품 병원성균의 생장을 억제하여 동물체의 건강상태를 양호하게 하고, 가축의 증체량과 육질을 개선시키며, 산유량 및 면역력을 증가시키는 효과가 있다. 본 발명의 사료 조성물은 발효사료, 배합사료, 펠렛 형태 및 사일레지 등의 형태로 제조될 수 있다. 상기 사료에 첨가되는 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주의 유효량은 약 105 cfu/g 내지 약 1011 cfu/g일 수 있으며, 구체적으로 약 106 cfu/g 내지 약 1010 cfu/g인 것이 보다 바람직하고, 더욱 구체적으로 약 107 cfu/g 내지 약 109 cfu/g인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.The feed composition of the present invention has the effect of replacing existing antibiotics and inhibiting the growth of harmful food pathogenic bacteria to improve the health condition of the animal, improve the weight gain and meat quality of the livestock, increase the milk yield and immunity. The feed composition of the present invention can be produced in the form of a fermented feed, a compound feed, a pellet form, a silage reed, or the like. The effective amount of the lactobacillus fermentum SJ8256 strain of the present invention added to the feed can be about 10 5 cfu / g to about 10 11 cfu / g, and specifically about 10 6 cfu / g to about 10 10 cfu / g And most specifically about 10 7 cfu / g to about 10 9 cfu / g, but is not limited thereto.
상기 발효사료는 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주 이외의 여러 가지 미생물군 또는 효소들을 첨가함으로서 유기물을 발효시켜 제조할 수 있으며, 배합사료는 여러 종류의 일반사료와 본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주를 혼합하여 제조할 수 있다. 펠렛 형태의 사료는 상기 배합사료 등을 펠렛기에서 열과 압력을 가하여 제조할 수 있으며, 사일레지는 청예사료를 본 발명에 따른 미생물로 발효시킴으로써 제조할 수 있다. 습식발효사료는 음식물 쓰레기 등과 같은 유기물을 수집 및 운반하여 살균과정과 수분조절을 위한 부형제를 일정비율로 혼합한 후, 발효에 적당한 온도에서 24시간 이상 발효하여, 수분함량이 약 70%으로 포함되도록 조절하여 제조할 수 있다. 발효건조사료는 습식발효사료를 건조과정을 추가로 거쳐 수분함량이 30% 내지 40% 정도 함유되도록 조절하여 제조할 수 있다.
The fermented feed can be prepared by fermenting an organic material by adding various microbial groups or enzymes other than the lactobacillus fermentum SJ8256 strain of the present invention, and the compound feed can be prepared by mixing various kinds of general feeds and lactobacillus fermentum SJ8256 Can be produced by mixing strains. The pellet-shaped feed can be produced by applying heat and pressure to the compound feed or the like in a pelletizer, and the silage can be produced by fermenting a chewing feed with the microorganism according to the present invention. The wet fermented feed is prepared by collecting and transporting organic matter such as food waste, mixing the excipient and the excipient for moisture control at a certain ratio, fermenting at a suitable temperature for fermentation for more than 24 hours, And the like. The fermented dried feed can be prepared by adjusting the wet fermented feed so that the moisture content is 30% to 40%.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
However, the following examples are illustrative of the present invention, and the contents of the present invention are not limited by the following examples.
<< 실시예Example 1> 항균 활성 균주의 분리 및 동정 1> Isolation and Identification of Antimicrobial Activity Strains
<1-1> 항균 활성 균주의 분리<1-1> Isolation of an antibacterial activity strain
장내 병원성 미생물에 대하여 항균활성을 나타내는 신규한 균주를 분리하기 위해서, 락토바실러스 속 미생물의 분리를 수행하였다.In order to isolate a novel strain exhibiting an antimicrobial activity against a pathogenic microorganism in the intestine, the microorganism of the genus Lactobacillus was isolated.
구체적으로, MRS 액체 배지(Man, Rogosa 및 Sharpes broth; 제품명: DifcoTM Lactobacilli MRS broth, Becto 사, 미국)에 아세트산(acetic acid)를 첨가하여 락토바실러스 분리 배지를 제조하였다. 그런 다음, 상기 제조한 배지에 다양한 시료를 10%(v/v)로 접종하고, 37℃에서 48 시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배양액을 수득하여 0.85% 멸균 생리식염수(saline solution)로 단계 희석(serial dilution)하여 10-6 내지 10-7 배로 희석된 희석 배양액을 준비하여, 상기 희석 배양액 0.1 ㎖을 0.1%(w/v) 탄산칼슘(CaCO3)을 포함하는 MRS 고체 배지(MRS agar media)에 도말하고, 37℃에서 3 일간 정치배양 하여, 산 생성에 의하여 투명환을 형성하는 집락(colony)를 선별하고, 새로운 MRS 고체 배지에 계대 배양하여 순수분리하였다. 순수분리된 균주는 MRS 액체 배지에서 배양한 후, 20% 글리세롤(glycerol)로 조성하여 -70℃에서 보관하였다.
Specifically, MRS broth;: by the addition of acetic acid (acetic acid) to (Man, Rogosa and Sharpes broth product name Lactobacilli MRS broth Difco TM, Becto, USA) was prepared in Lactobacillus separation medium. Then, the prepared medium was inoculated with various samples at 10% (v / v) and cultured at 37 DEG C for 48 hours. After the incubation, a culture medium was obtained and serial dilution was performed with 0.85% sterile saline solution to prepare a diluted culture medium diluted to 10 -6 to 10 -7 times. 0.1 ml of the diluted culture medium was added to 0.1% (w / v) calcium carbonate (CaCO 3 ), cultured at 37 ° C for 3 days, and colony forming a transparent ring by acid production was selected, The cells were subcultured in a fresh MRS solid medium and purified. The pure isolates were cultured in MRS liquid medium and then stored at -70 ° C in 20% glycerol.
<1-2> 항균 활성 균주의 동정<1-2> Identification of antimicrobial active strains
항균 활성을 나타내는 것으로 분리한 균주가 신규한 균주인지 확인하기 위하여, 분리한 락토바실러스 속 균주를 동정하였다.In order to confirm whether the strain isolated with the antimicrobial activity is a novel strain, the isolated Lactobacillus sp. Strain was identified.
구체적으로, 상기 실시예 <1-1>에서 분리한 균주에서 유전체 DNA(genomic DNA)를 추출하고, 염기서열을 분석하여 16S rRNA의 유전자 전체 염기서열을 확보하였다. 상기 16S rRNA의 염기서열은 미국 국립생물정보센터(National Center for Biotechnology Information, NCBI)의 블라스트 N 프로그램(blast N program)을 이용하여 배열(alignment)하여 99% 이상의 상동성을 나타내는 균주로 동정하였다. 또한, 상기 16s rRNA 유전자 서열을 바탕으로 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.)으로 보고된 균주들과의 유전계통학적 위치를 근연접합법(neighbor-joining)을 사용하여 계통수(phylogenetic tree)를 그려, 상기 동정한 균주와 가장 근연한 관계에 있는 락토바실러스 균주를 확인하였다.Specifically, the genomic DNA was extracted from the strain isolated in Example <1-1>, and the nucleotide sequence was analyzed to obtain the entire nucleotide sequence of 16S rRNA. The nucleotide sequence of the 16S rRNA was aligned using a blast N program of the National Center for Biotechnology Information (NCBI), and was identified as a strain having 99% or more homology. In addition, based on the 16s rRNA gene sequence, phylogenetic positions with strains reported as Lactobacillus sp. Were plotted using a phylogenetic tree using neighbor-joining, Lactobacillus strains with the closest relationship to one strain were identified.
그 결과, 도 1에서 나타난 바와 같이 상기 항균 활성 균주는 총 1,568bp크기의 서열번호 1로 나타나는 16r rRNA 염기서열을 가지며, 이는 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum)과 99% 이상의 상동성을 나타내므로, 본 발명의 항균 활성 균주는 신규한 균주인 것을 확인하였다. 또한, 상기 신규한 균주를 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256로 명명하여, 전체 유전체 서열(genomic sequence)를 NCBI 유전자은행(GeneBank, www.ncbi.nlm.nih.gov/genbam)에 등록하여 accession no. KC759437의 등록번호를 부여받았고, 2013년 11 월 7 일 한국생명공학연구원 생물자원센터에 기탁하였다(기탁번호 KCTC 12516BP). 아울러, 상기 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8265 균주는 락토바실러스 속 균주들과 유전계통학적으로 매우 가까운 거리에 위치한 균주인 것을 확인하였고, 그 중에서도 특히 락토바실러스 퍼멘텀 종(L. fermentum sp.)에 속하는 균주들과 가장 근연한 관계에 있는 균주인 것을 확인하였다(도 1).
As a result, as shown in FIG. 1, the antimicrobial active strain has a 16r rRNA nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 with a total size of 1,568 bp, which is 99% or more homologous to Lactobacillus fermentum , The antimicrobial activity strain of the present invention was confirmed to be a novel strain. Further, the novel strain was designated as Lactobacillus perfumant SJ8256, and the entire genomic sequence was registered in the NCBI gene bank (GeneBank, www.ncbi.nlm.nih.gov/genbam), and the accession no. It has been granted the registration number of KC759437 and deposited on November 7, 2013 with the Korea Biotechnology Research Institute (KCTC 12516BP). In addition, it was confirmed that the Lactobacillus fermentum SJ8265 strain was a strain located very close to the genus Lactobacillus strains genetically and systemically. Among them, strains belonging to Lactobacillus fermentum sp. (Fig. 1). ≪ tb >< TABLE >
<< 실시예Example 2> 2> 락토바실러스Lactobacillus 퍼멘텀Fermantum SJ8256SJ8256 의 항균활성 확인Identification of antimicrobial activity
신규한 락토바실러스 퍼멘템 SJ8256가 장내 병원성 미생물에 대하여 항균활성을 나타내는지 확인하기 위하여, 지시균주(indicator)로서 장내 병원성 미생물인 대장균(E. coli) 및 살모넬라(Salmonella)에 대한 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256의 항균활성능을 웰 확산 분석(well diffusion assay)를 수행하여 확인하였다.In order to confirm whether the novel Lactobacillus fermentum SJ8256 exhibits antibacterial activity against pathogenic microorganisms in the intestines, it is recommended that Lactobacillus fermentum SJ8256 ( E. coli ) and E. coli ( Salmonella ) Was confirmed by performing a well diffusion assay.
구체적으로, 0.8% 한천(agar)을 포함하는 NB 연한천배지(Nutrient broth soft agar medium)을 제조하고, 멸균한 코르크 보어(cork borer)를 이용하여 상기 배지에 웰(well)을 만든 다음, 1%(v/v) 대장균(한국유전자은행, KCTC에서 분양), 살모넬라 속(Salmonella sp.; KCTC에서 분양), 살모넬라 타이피리움 KCTC1925(S. typhimurium KCTC1925; KCTC에서 분양) 또는 S. 타이피리움 KCTC1926(KCTC에서 분양)을 각각 도말하여 지시 배지(indicator plate)를 준비하였다. 그런 다음, 상기 <실시예 1>에서 배양한 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 100 ㎕을 접종하고, 37℃에서 24 시간 배양하여 대장균 및 살모넬라에 대한 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256의 생장 억제능을 확인하였다. 양성 대조군으로 유산균인 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium), 락토바실러스 퍼멘텀 속(Lactobacillus fermentum sp.) 및 페디오코커스 액시딜락티스 속(Pediococcus acidilactici sp.)을 사용하였고, 음성 대조군으로는 증류수를 사용하여, 상기와 동일한 방법으로 대장균 및 살모넬라에 대한 생장 억제능을 확인하였다.Specifically, a NB broth soft agar medium containing 0.8% agar was prepared, a well was prepared in the medium using a sterilized cork borer, % (v / v) Escherichia coli (Korean Gene Bank, sale from KCTC), Salmonella sp .; An indicator plate was prepared by streaking Salmonella typhimurium KCTC1925 (sold in KCTC) or S. typhimurium KCTC1926 (sold in KCTC), respectively. Then, 100 쨉 L of Lactobacillus perfumant SJ8256 cultured in Example 1 was inoculated and cultured at 37 째 C for 24 hours to confirm growth inhibition of Lactobacillus perfumant SJ8256 against E. coli and Salmonella. As a positive control, enterococcus paclum ( Enterococcus faecium), Lactobacillus putting momentum into (Lactobacillus fermentum sp.) and Pediococcus acidilactici sp. were used. As a negative control, distilled water was used to inhibit the growth inhibition against E. coli and Salmonella in the same manner as above.
그 결과, 도 2에서 나타난 바와 같이 음성 대조군에서는 생육 저지환을 생성하지 않는 것에 비하여, 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 및 양성 대조군 균주 모두에서 웰 사이로 대장균 및 살모넬라의 생장을 억제하여 생육저지환을 나타내는 것을 통해, 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256가 병원성 미생물의 종류에 상관없이 병원성 미생물의 생장을 저해하는 항균력을 지니고 있음을 확인하였다(도 2).
As a result, as shown in Fig. 2, it was found that both the Lactobacillus fermentum SJ8256 and the positive control strain inhibited the growth of Escherichia coli and Salmonella between the wells, , Lactobacillus perfumant SJ8256 has antibacterial activity against the growth of pathogenic microorganisms irrespective of the kinds of pathogenic microorganisms (FIG. 2).
<< 실시예Example 3> 락토바실러스 3> Lactobacillus 퍼멘텀Fermantum SJ8256SJ8256 및 상용 항생제( And commercial antibiotics ( antibioticsantibiotics )의 )of 항균능Antimicrobial activity 비교 compare
장내 병원성 미생물에 대하여 항균활성을 나타내는 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256의 항균능을 확인하기 위하여, 디스크 확산 분석(disc diffusion assay) 방법으로 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256이 나타내는 항균능을 기존 상용되고 있는 항생제와 비교하였다.In order to confirm the antimicrobial activity of Lactobacillus perfumant SJ8256, which shows antimicrobial activity against intestinal pathogenic microorganisms, antimicrobial activity of Lactobacillus perfumant SJ8256 was compared with conventional antibiotics by disc diffusion assay .
구체적으로, 0.8% 한천을 포함하는 NB 연한천배지을 제조하고, 1%(v/v) 대장균, 살모넬라 속, S. 타이피리움 KCTC1925 또는 S. 타이피리움 KCTC1926을 각각 도말하여 지시 배지를 준비하였다. 그런 다음, 하기 [표 1]에 나타난 항생제 및 상기 <실시예 1>에서 배양한 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 100 ㎕을 각 종이 디스크에 흡수시켜 건조하였고, 상기 준비한 지시 배지 위에 밀착시킨 상태로 37℃의 배양기에서 24 시간 배양하여 디스크 주변에 나타난 생육 저지환의 크기를 측정하여 항균능을 비교하였다.Specifically, an NB soft cloth containing 0.8% agar was prepared, and an instruction medium was prepared by dissolving 1% (v / v) Escherichia coli, Salmonella genus, S. typhimurium KCTC1925 or S. typhimurium KCTC1926 . Then, 100 μl of Lactobacillus fermentum SJ8256 cultured in the above <Example 1> was absorbed and dried on each paper disk, and the microorganism was cultured at 37 ° C And incubated in an incubator for 24 hours to measure the size of the growth inhibition rings around the disc.
농도Antibiotic treatment
density
(amoxicillin/clavulanic acid)Amoxicillin-clavulanic acid
(amoxicillin / clavulanic acid)
(sulfamethoxazole/trimethoprim)Sulfamethoxazole / trimethoprim
(sulfamethoxazole / trimethoprim)
그 결과, 상기 [표 1]에서 나타난 바와 같이, 아미카신, 아목시실린-클라불란 산, 겐타마이신, 네오마이신 및 테트라사이클린은 대장균 및 살모넬라의 두 병원성 미생물의 지시 배지 모두에서 7 내지 17 ㎜의 생육 저지환을 형성한 반면, 암피실린, 세파로신, 페니실린 및 설파메콕사졸/트리메토프림은 대장균 및 살모넬라에 대한 항균능이 나타나지 않는 것을 확인하였고, 시프로플로사신은 살모넬라 속 균주에 대하여만 생육 저지환을 형성하며, 스트렙토마이신은 대장균에 대하여만 생육 저지환을 형성하는 것을 확인하였다. 이에 비해, 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256은 대장균 및 살모넬라 속 균주 모두에서 18 ㎜의 생육 저지환을 형성하여, 기존의 상용 항생제가 나타내는 대장균 및 살모넬라 속 균주에 대한 항균능보다 현저한 효과를 나타내는 것을 확인하였다(표 1).
As a result, as shown in the above Table 1, amikacin, amoxicillin-clavulanic acid, gentamicin, neomycin and tetracycline exhibited growth of 7 to 17 mm in both the indicator medium of both pathogenic microorganisms of Escherichia coli and Salmonella Aminopterin, penicillin, and sulfamethoxazole / trimethoprim showed no antimicrobial activity against E. coli and Salmonella, while ciprofloxacin showed only a low inhibitory effect against Salmonella spp. , And it was confirmed that streptomycin forms a growth inhibitory ring only against E. coli. On the other hand, Lactobacillus perfumant SJ8256 formed 18 ㎜ inhibition of growth in both Escherichia coli and Salmonella spp., Indicating that the antibiotic activity against Escherichia coli and Salmonella spp. Exhibited by conventional commercial antibiotics was more remarkable than that of Escherichia coli and Salmonella spp. Table 1).
<< 실시예Example 4> 락토바실러스 4> Lactobacillus 퍼멘텀Fermantum SJ8256SJ8256 의 생체 내(In vivo ( InIn vivovivo ) 항균 효과의 확인) Confirmation of antibacterial effect
락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256이 실제로 생체 내에서 병원성 미생물에 대하여 나타내는 항균 효과를 확인하기 위해, 살모넬라 속 균주의 공격적 감염으로 설사질환을 유발한 자돈에서 베타글루칸(β-glucan)으로 인한 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256의 지사효과를 확인하였다.In order to confirm the antimicrobial effect of Lactobacillus fermentum SJ8256 on pathogenic microorganisms in vivo, the lactobacillus fermentum SJ8256 caused by beta-glucan in piglets causing diarrheal disease as an aggressive infection of Salmonella spp. The effect of the branch office was confirmed.
구체적으로, 상기 <실시예 1>에서 분리한 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주를 106 cfu/㎏의 농도로 일반 사료 첨가한 다음, 이를 실험군인 자돈 10 마리에 공급하였다. 대조군으로 사용하기 위하여, 균주를 첨가하지 않은 일반 사료를 대조군인 자돈 10 마리에 공급하였다. 공급 개시 2 주 후에 상기 실험군 및 대조군 자돈에 살모넬라 균주를 공격적 감염하여 설사질환을 유발하였고, 실험군에는 공격적 감염 전에 공급한 것과 동일한 농도의 균주를 첨가한 사료를 공급하며, 대조군에는 일반 사료를 공급하면서 10 일 동안 관찰하여 설사질환 발병 유뮤의 유무의 비교를 통하여 항균 효과를 확인하였다.Specifically, Lactobacillus fermentum SJ8256 strain isolated in Example 1 was added to a general feed at a concentration of 10 6 cfu / kg, and then fed to 10 experimental piglets. For use as a control group, 10 litter pigs were fed with the control diet without the strain. Two weeks after the start of feeding, Salmonella strains were aggressively infected with the above-mentioned experimental group and control group pigs to induce diarrheal disease. In the experimental group, feeds supplemented with strains having the same concentrations as those supplied before the aggressive infection were fed, The antimicrobial effect was confirmed by comparing the presence or absence of diarrheal disease.
그 결과, 하기 [표 2]에서 나타난 바와 같이 대조군에서 살모넬라 균주의 공격적 감염 2 일후부터 설사질환이 나타나기 시작하여, 4 일후에는 대조군 10 마리 모두에서 설사질환을 유발하여 5 일후까지 설사질환이 계속되어 시간이 지남에 따라 완화되는 것을 확인하였다. 이에 반해, 살모넬라 균주의 공격적 감염 후 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 균주를 처리한 사료를 급여한 실험군에서는 설사질환이 유발되지 않는 것을 통해, 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256이 생체 내에서 살모넬라 속 균주의 생육을 효과적으로 억제함으로써, 소화기 병원성 미생물의 감염에도 간단하게 지사효과를 나타내는 것을 확인하였다(표 2).As a result, as shown in the following Table 2, diarrheal disease started to appear from 2 days after aggressive infection of Salmonella strain in the control group, and 4 days later, all 10 mice in the control group developed diarrheal disease, And it was confirmed that it was alleviated over time. In contrast, in the experimental group fed with the Lactobacillus perfumant SJ8256 strain after the aggressive infection of the Salmonella strain, Lactobacillus perfumant SJ8256 effectively inhibited the growth of Salmonella spp. In vivo (Table 2). As shown in FIG.
대조군* Experimental group and
Control group *
* 비실험군: 살모넬라의 공격적 감염을 하지 않은 일반사료 급여군; * Non-test group: general feed group without Salmonella aggressive infection;
실험군 : 살모넬라의 공격적 감염 후, 락토바실러스 퍼멘텀 SJ8256 처리된 사료 급여군; 및 Experimental group: Lactobacillus fermentum SJ8256 treated feedstuff group after aggressive infection of Salmonella; And
대조군 : 살모넬라의 공격적 감염 후, 일반사료 급여군. Control group: General feed group after salmonella aggressive infection.
** 대장균 및 살모넬라의 공격적 접종 이후, 각 실험군 및 대조군의 10 마리 중에서 설사질환이 나타난 자돈의 마리수를 나타낸다.
** Indicates the number of piglets in which the diarrheal disease was present in 10 of the experimental and control groups after aggressive inoculation of E. coli and Salmonella.
<110> Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology <120> A novel Lactobacillus fermentum SJ8256 and use thereof <130> 13P-08-011/P2013-166-KR <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1568 <212> DNA <213> Lactobacillus fermentum <400> 1 aaggaggtga tccatccaca ggttctccta cggctacctt gttacgactt caccctaatc 60 atctgtccca ccttaggcgg ctggctccta aaaggttacc ccaccgactt tgggtgttac 120 aaactctcat ggtgtgacgg gcggtgtgta caaggcccgg gaacgtattc accgcggcat 180 gctgatccgc gattactagc gattccgact tcgtgcaggc gagttgcagc ctgcagtccg 240 aactgagaac ggttttaaga gatttgcttg ccctcgcgag tttgcgactc gttgtaccgt 300 ccattgtagc acgtgtgtag cccgggtcat aaggggcatg atgatctgac gtcgtcccca 360 ccttcctccg gtttgtcacc ggcagtctca ctagagtgcc caacttaatg ctggcaacta 420 gtaacaaggg ttgcgctcgt tgcgggactt aacccaacat ctcacgacac gagctgacga 480 cgaccatgca ccacctgtca ttgcgttccc gaaggaaacg ccctatctct agggttggcg 540 caagatgtca agacctggta aggttcttcg cgtagcttcg aattaaacca catgctccac 600 cgcttgtgcg ggcccccgtc aattcctttg agtttcaacc ttgcggtcgt actccccagg 660 cggagtgctt aatgcgttag ctccggcact gaaagggcgg aaaccctcca acacctagca 720 ctcatcgttt acggcatgga ctaccagggt atctaatcct gttcgctacc catgctttcg 780 agtctcagcg tcagttgcag accaggtagc cgccttcgcc actggtgttc ttccatatat 840 ctacgcattc caccgctaca catggagttc cactaccctc ttctgcactc aagttatcca 900 gtttccgatg cacttctccg gttaagccga aggctttcac atcagactta gaaaaccgcc 960 tgcactctct ttacgcccaa taaatccgga taacgcttgc cacctacgta ttaccgcggc 1020 tgctggcacg tagttagccg tgactttctg gttaaatacc gtcaacgtat gaacagttaa 1080 tctcatacgt gttcttcttt aacaacagag ctttacgagc cgaaaccctt cttcactcac 1140 gcggtgttgc tccatcaggc ttgcgcccat tgtggaagat tccctactgc tgcctcccgt 1200 aggagtatgg gccgtgtctc agtcccattg tggccgatca gtctctcaac tcggctatgc 1260 atcatcgcct tggtaggccg ttaccccacc aacaagctaa tgcaccgcag gtccatccag 1320 aagtgatagc aagaagccat cttttaagcg ttgttcatgc gaacaacgct gttatgcggt 1380 attagcatct gtttccaaat gttgtccccc gcttctgggc aggttaccta cgtgttactc 1440 acccgtccgc cactcgttgg cgaccaaaat caatcaggtg caagcaccat caatcgattg 1500 ggccaacgcg ttcgacttgc atgtattagg cacaccgccg gcattcatcc tgagccatga 1560 tcaactct 1568 <110> Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology <120> A novel Lactobacillus fermentum SJ8256 and use thereof <130> 13P-08-011 / P2013-166-KR <160> 1 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 1568 <212> DNA <213> Lactobacillus fermentum <400> 1 aaggaggtga tccatccaca ggttctccta cggctacctt gttacgactt caccctaatc 60 atctgtccca ccttaggcgg ctggctccta aaaggttacc ccaccgactt tgggtgttac 120 aaactctcat ggtgtgacgg gcggtgtgta caaggcccgg gaacgtattc accgcggcat 180 gctgatccgc gattactagc gattccgact tcgtgcaggc gagttgcagc ctgcagtccg 240 aactgagaac ggttttaaga gatttgcttg ccctcgcgag tttgcgactc gttgtaccgt 300 ccattgtagc acgtgtgtag cccgggtcat aaggggcatg atgatctgac gtcgtcccca 360 ccttcctccg gtttgtcacc ggcagtctca ctagagtgcc caacttaatg ctggcaacta 420 gtaacaaggg ttgcgctcgt tgcgggactt aacccaacat ctcacgacac gagctgacga 480 cgaccatgca ccacctgtca ttgcgttccc gaaggaaacg ccctatctct agggttggcg 540 caagatgtca agacctggta aggttcttcg cgtagcttcg aattaaacca catgctccac 600 cgcttgtgcg ggcccccgtc aattcctttg agtttcaacc ttgcggtcgt actccccagg 660 cggagtgctt aatgcgttag ctccggcact gaaagggcgg aaaccctcca acacctagca 720 ctcatcgttt acggcatgga ctaccagggt atctaatcct gttcgctacc catgctttcg 780 agtctcagcg tcagttgcag accaggtagc cgccttcgcc actggtgttc ttccatatat 840 ctacgcattc caccgctaca catggagttc cactaccctc ttctgcactc aagttatcca 900 gtttccgatg cacttctccg gttaagccga aggctttcac atcagactta gaaaaccgcc 960 tgcactctct ttacgcccaa taaatccgga taacgcttgc cacctacgta ttaccgcggc 1020 tgctggcacg tagttagccg tgactttctg gttaaatacc gtcaacgtat gaacagttaa 1080 tctcatacgt gttcttcttt aacaacagag ctttacgagc cgaaaccctt cttcactcac 1140 gcggtgttgc tccatcaggc ttgcgcccat tgtggaagat tccctactgc tgcctcccgt 1200 aggagtatgg gccgtgtctc agtcccattg tggccgatca gtctctcaac tcggctatgc 1260 atcatcgcct tggtaggccg ttaccccacc aacaagctaa tgcaccgcag gtccatccag 1320 aagtgatagc aagaagccat cttttaagcg ttgttcatgc gaacaacgct gttatgcggt 1380 attagcatct gtttccaaat gttgtccccc gcttctgggc aggttaccta cgtgttactc 1440 acccgtccgc cactcgttgg cgaccaaaat caatcaggtg caagcaccat caatcgattg 1500 ggccaacgcg ttcgacttgc atgtattagg cacaccgccg gcattcatcc tgagccatga 1560 tcaactct 1568
Claims (11)
Lactobacillus fermentum SJ8256 strain deposited with accession number KCTC 12516BP.
The Lactobacillus fermentum SJ8256 strain according to claim 1, wherein the strain has the 16S rRNA base sequence set forth in SEQ ID NO: 1.
The Lactobacillus fermentum SJ8256 strain according to claim 1, wherein the strain exhibits antagonism against E. coli or Salmonella sp. Strain.
A microorganism preparation containing the lactobacillus fermentum SJ8256 strain of claim 1, a culture thereof or a mixture thereof as an active ingredient.
The microbial preparation according to claim 3, wherein the strain, the culture solution thereof, or the mixture thereof is contained in an amount of 10 to 20 parts by weight.
Lactobacillus fermentum SJ8256 strain deposited with accession number KCTC 12516BP, a culture thereof, or a mixture thereof as an active ingredient, and a microorganism preparation for controlling an animal pathogenic bacterium.
[Claim 7] The microorganism preparation for controlling an animal pathogenic bacterium according to claim 6, wherein the strain, a culture solution thereof or a mixture thereof exhibits antagonism to E. coli or a Salmonella sp. Strain.
[7] The microbial preparation for controlling bacterial pathogenic bacteria according to claim 6, wherein the strain, the culture solution thereof or a mixture thereof is contained in an amount of 10 to 20 parts by weight.
[Claim 7] The microorganism preparation for controlling bacterial pathogenic bacteria according to claim 6, wherein the strain, the culture solution thereof, or the mixture thereof is diluted to 0.5 to 500 times.
The method according to claim 6, wherein the livestock pathogenic bacterium induces any one selected from the group consisting of infectious diarrhea, gastroenteritis, inflammatory bowel disease, neurodegenerative inflammatory syndromes, small intestine microbial growth and intestinal diarrhea, Microorganism preparation for the control of pathogenic bacteria.
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