KR20140083036A

KR20140083036A - 인자 ｖｉｉｉ의 생체이용률을 향상시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸의 용도

Info

Publication number: KR20140083036A
Application number: KR1020147013300A
Authority: KR
Inventors: 후베르트 메츠너; 자비네 촐너
Original assignee: 체에스엘 베링 게엠베하
Priority date: 2011-10-18
Filing date: 2012-10-18
Publication date: 2014-07-03
Also published as: EP2768522A1; JP6072810B2; CA2852397A1; DK2768522T3; JP2014530246A; US20140315815A1; WO2013057167A1; US9393289B2; EP2768522B1; ES2600081T3; CN103889445A; AU2012318279A1; AU2012318279B2

Abstract

본 발명은, 한 가지 이상의 인자 VIII과 비정맥내 투여시 인자 VIII의 생체이용률을 증가시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸을 포함하는 약제에 관한 것이다. 추가로, 본 발명은, 출혈성 장애의 치료 및 예방에 사용하기 위한, 인자 VIII과 황산화 글리코사미노글리칸의 병용 사용에 관한 것이고, 이에 의해, 인자 VIII의 생체이용률은 증가되며, 또한 본 발명은, 황산화 글리코사미노글리칸의 공동 투여에 의해, 인자 VIII의 비정맥내 투여 후의 생체이용률을 증가시키는 방법에 관한 것이다.

Description

인자 ＶＩＩＩ의 생체이용률을 향상시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸의 용도{USE OF SULFATED GLYCOSAMINOGLYCANS FOR IMPROVING THE BIOAVAILABILITY OF FACTOR VIII}

본 발명은, 한 가지 이상의 인자(Factor) VIII과 비정맥내 투여시 인자 VIII의 생체이용률을 증가시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸(sulfated glycosaminoglycan)을 포함하는 약제학적 제제에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 인자 VIII의 생체이용률이 증가되도록 하는, 출혈성 장애의 치료 및 예방을 위한, 인자 VIII과 황산화 글리코사미노글리칸의 병용 사용, 및 황산화 글리코사미노글리칸의 공동 투여에 의해, 인자 VIII의 비정맥내 투여 후의 생체이용률을 증가시키는 방법에 관한 것이다.

인자 VIII(FVIII)

FVIII은 포유동물의 간에서 생성되는 분자량 약 280 kDa의 혈장 당단백질이다. 이 물질은 혈액 응고를 유도하는 연속 단계(cascade)의 응고 반응에서 중요한 성분이다. 이러한 연속 단계에서 인자 IXa(FIXa)가 활성화 인자 VIII(FVIIIa)와 공동으로 인자 X(FX)를 활성화 형태 FXa로 전환시키는 단계가 있다. 이 단계에서 FVIIIa는 보조인자로서 작용하며 칼슘 이온 및 인지질과 함께 FIXa의 활성을 최대로 하는데 필요하다. 가장 일반적인 혈우병은 A형 혈우병이라 불리는 기능성 FVIII의 결핍으로 야기된다.

A형 혈우병의 치료에서 중요한 진보는 사람 FVIII의 전체 2,351개 아미노산 서열을 암호화한 cDNA 클론의 분리(미국 특허 제4,757,006호) 및 사람 FVIII 유전자(DNA 서열 및 이의 생산을 위한 재조합 방법)의 제공이었다.

클로닝된 cDNA로부터 결정된 사람 FVIII의 유추된 일차 아미노산 서열은 분석 결과, 보다 큰 전구체 폴리펩타이드로부터 프로세싱된 헤테로이량체인 것으로 나타났다. 헤테로이량체는 약 80 kDa의 C-말단 경쇄 및 이와 금속 이온-의존적으로 결합하고 있는 약 200 kDa N-말단 중쇄로 이루어진다[참조: Kaufman, Transfusion Med. Revs. 6:235(1992)]. 헤테로 이량체는 단백질쇄가 트롬빈에 의해 단백질분해 절단(proteolytic cleavage)되어 생리적으로 활성화된다. 트롬빈은 중쇄를 90 kDa 단백질로 절단한 다음 54 kDa와 44 kDa 절편으로 절단한다. 또한, 트롬빈은 80 kDa 경쇄를 72 kDa 단백질로 절단한다. 72 kDa 단백질과 두 개의 중쇄 절편(54 kDa 및 44 kDa)은 칼슘 이온에 의해 함께 결합되어 활성 FVIII을 구성한다. FVIII 분자는 이로부터 44 kDa A2 중쇄 절편이 분리되거나 72 kDa 및 54 kDa 도메인이 트롬빈, 활성화 단백질 C 또는 FXa에 의해 추가 절단될 때 불활성화된다. 혈장에서 FVIII은 상기한 바와 같은 FVIII의 단백질분해 파괴(proteolytic destruction)를 억제하는 것으로 보이는 폰빌레브란트 인자 단백질("VWF") 50배 몰 과량과 결합되어 안정화된다.

FVIII의 아미노산 서열은 3종의 도메인 구조로 구성된다: 330개 아미노산의 삼중 A 도메인, 980개 아미노산의 단일 B 도메인 및 150개 아미노산의 이중 C 도메인. B 도메인은 다른 단백질과 상동성을 보이지 않으며 이러한 단백질의 25개 잠재적 아스파라긴(N)-연결된 당화 부위중 18개를 제공한다. B 도메인은 응고과정에서 뚜렷한 기능은 없으며 결실될 수 있고, 이러한 B-도메인 결실된 FVIII 분자는 여전히 응고촉진활성을 나타낸다.

폰빌레브란트 인자(VWF)

VWF는 포유류의 혈장에 존재하는 다량체 부착성 당단백질로서 다수의 생리학적 기능을 나타낸다. 1차 지혈 동안 VWF는 혈소판 표면상의 특정 수용체와 콜라겐과 같은 세포외 기질의 성분간의 매개체로서 작용한다. 게다가, VWF는 응고촉진제 FVIII을 위한 담체 및 안정화 단백질로서 작용한다. VWF는 2813개 아미노산 전구체 분자로서 내피세포 및 거핵세포내에서 합성된다. 전구체 폴리펩타이드인 프리-프로-VWF는 22개 잔기 시그널 펩타이드, 741개 잔기 프로-펩타이드와 성숙 혈장 VWF에서 발견되는 2050개 잔기 폴리펩타이드로 이루어진다[참조: Fischer et al., FEBS Lett. 351: 345-348, 1994]. 혈장으로 분비될 때 VWF는 분자 크기가 다른 여러 종류의 형태로 순환한다. 이들 VWF 분자는 2050개 아미노산 잔기의 성숙 아단위의 올리고머 및 다량체로 이루어진다. VWF는 보통 혈장에서 하나의 이량체 내지 50-100개의 이량체로 이루어진 다량체로서 발견될 수 있다[참조: Ruggeri et al., Thromb. Haemost. 82: 576-584, 1999]. 인체 순환에서 사람 VWF의 생체내 반감기는 약 12시간이다.

사람에게서 가장 빈번한 유전적 출혈성 장애는 폰빌레브란트병(VWD)이다. 출혈 증상의 정도에 따라 VWD는 일반적으로 사람 혈장으로부터 유래된 VWF 함유 농축제로 대체 요법으로 치료할 수 있으나 재조합 VWF가 또한 개발중에 있다. VWF는, 예를 들면, EP 0503991에 기술된 바와 같이 사람 혈장으로부터 제조할 수 있다. 특허 EP 0784632에는 재조합 VWF를 분리하는 방법이 기술되어 있다.

VWF는 생체내에서 FVIII을 안정화시키는 것으로 알려져 있고, 이에 따라 FVIII의 혈장 농도(plasma level)를 조절하는데 중요한 역할을 하며, 결과적으로 1차 및 2차 지혈을 제어하는데 핵심적인 인자이다. 또한, VWD 환자에서 VWF 함유 약제학적 제제의 정맥내 투여 후 24시간내에 1ml당 1 내지 3 단위로 내인성 FVIII:C의 증가를 관찰할 수 있는 것으로 알려져 있으며, 이것은 VWF가 FVIII에 미치는 생체내 안정화 효과를 증명한다.

일반적으로 환자들은 활성 성분의 특정 작용 방식에 의해 이익을 보고 있지만 현재 시판되고 있는 모든 인자 VIII 제제는 정맥내로 투여되고 있는데, 정맥내 투여는 주사 부위에 감염 위험을 수반하며 일반적으로 환자가 피하고 싶어하는 치료 과정으로, 특히 응고체계에 결함이 있는 아동의 치료 과정에서 그러하다.

현재까지 A형 혈우병과 VWD의 표준 치료법은 FVIII 및 VWF 농축제 제제의 빈번한 정맥내 주입을 포함한다. B형 혈우병의 치료는 인자 IX를 격주로 투여해야 하며, FVIIa로 억제제 환자를 치료하는 경우에는 출혈을 피하기 위해 FVIIa를 주당 수회 투여한다.

그러나, 이들 대체 요법은 인자 VIII의 혈장 반감기가 약 12시간 정도로 짧기 때문에, 예를 들면, 인자 VIII을 주당 약 3회 정맥내(i.v.) 투여함으로써 예방적 치료를 받고 있는 중증의 A형 혈우병 환자에서 대체적으로 효과적이다. 이미 0.01 U/ml의 FVIII 농도 상승에 해당하는 정상 사람 FVIII 혈장 농도의 1% 이상으로 FVIII 혈장 농도가 성취되어 중증의 A형 혈우병은 중간 정도의 A형 혈우병으로 호전된다. 예방적 요법에서 투약 용법은 FVIII 활성의 최저 농도(trough level)가 비혈우병환자의 FVIII 활성의 2 내지 3% 수준 이하로 떨어지지 않도록 설정한다.

인자 VIII의 정맥내 투여는 통증 동반과 함께 번거롭고, 특히 이러한 투여가 대부분 가정 치료로 환자 자신에 의해 또는 A형 혈우병으로 진단받은 아동의 부모에 의해 진행되기 때문에 감염 위험이 따른다. 게다가, 빈번한 정맥내 주사는 불가피하게 반흔을 형성함에 따라 향후의 주입을 어렵게 한다. 흔히 생후 2년 미만인 중증 혈우병 유아의 경우 출생 초기부터 예방적 치료가 개시됨에 따라, 이러한 유아 환자의 정맥내로 FVIII을 주 3회 주사하는 것은 훨씬 더 어렵다. 한정된 기간 동안 포트 시스템을 이식하는 것이 대안이 될 수 있다. 그러나, 이러한 경우 감염이 반복적으로 발생할 수 있고 신체적 운동 동안 포트 때문에 불편함을 느낄 수 있다.

따라서, 인자 VIII의 정맥내 주입할 필요를 없애는 것이 의학적으로 매우 필요하다.

인자 VIII의 피하 투여가 제안된 바 있으며, 예를 들면, WO 95/01804 A1 및 WO 95/026750에 기술되어 있다. 그러나, 인자 VIII의 생체이용률이 허용가능한 정도로 도달하기 위해서는 인자 VIII은 상당히 고용량으로 투여되어야 한다.

비정맥내 투여로 생체이용률을 향상시키는 다른 접근법으로 알부민-융합된 인자 VIII이 이용된다(WO 2011/020866 A2).

인자 VIII의 비정맥내 투여시 생체이용률을 향상시키는 것은 매우 절실하다. 본원의 발명자들은 놀랍게도, 인자 VIII의 생체이용률이, 인자 VIII이 황산화 글리코사미노글리칸과 함께 투여될 때 상당히 증가함을 발견하였다.

발명의 요지

따라서, 첫 번째 측면에서, 본 발명은, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII에 관한 것으로서, 상기 치료 또는 예방은, 인자 VIII의 비정맥내 주사 및 황산화 글리코사미노글리칸의 비정맥내 주사를 포함한다.

따라서, 추가의 측면에서, 본 발명은, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII에 관한 것이고, 상기 치료 또는 예방이, 상기 인자 VIII의 비정맥내 주사 및 황산화 글리코사미노글리칸의 비정맥내 주사를 포함하고, 인자 VIII을 치료 대상자에게 50 내지 1000 IU/체중 kg의 용량으로 피하 주사하였을 때, 주사 후 2시간부터 주사 후 48시간까지의 기간 동안 상기 치료 대상자의 인자 VIII 혈장 농도가, 건강한 대상자의 정상적인 인자 VIII 혈장 농도의 2% 이상으로 지속된다.

이러한 측면의 바람직한 양태는 A형 혈우병 환자의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII이고, 상기 치료 또는 예방이, 상기 인자 VIII과 황산화 글리코사미노글리칸의 피하, 피내 또는 근육내 주사를 포함하고, 인자 VIII을 사람 개체에게 50 내지 1000 IU/체중 kg의 용량으로 피하 주사하였을 때, 주사 후 2시간부터 주사 후 48시간까지의 기간 동안 상기 사람 개체에서 인자 VIII 혈장 농도가 건강한 사람 개체의 정상적인 인자 VIII 혈장 농도의 2% 이상으로 지속된다.

본 발명의 다른 관점은 사람 개체에서의 출혈성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII이고, 상기 치료 또는 예방이, 상기 인자 VIII과 황산화 글리코사미노글리칸의 피하, 피내 또는 근육내 주사에 의한 투여를 포함하고, 상기 사람 개체에서의 인자 VIII의 상대적 생체 이용률이 황산화 글리코사미노글리칸 없이 동일한 방식으로 투여된 인자 VIII의 생체이용률보다 20% 이상 더 높다.

이러한 측면의 바람직한 양태는 사람에서의 A형 혈우병의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII이고, 상기 치료 또는 예방이, 상기 인자 VIII과 황산화 글리코사미노글리칸의 피하, 피내 또는 근육내 주사에 의한 투여를 포함하고, 상기 사람 개체에서의 인자 VIII의 상대적 생체 이용률이 황산화 글리코사미노글리칸 없이 동일한 방식으로 투여된 인자 VIII의 생체이용률보다 20% 이상 더 높다.

세 번째 측면에서, 본 발명은, 인자 VIII의 생체이용률을 향상시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸에 관한 것이다.

추가의 측면에서, 본 발명은, 인자 VIII의 생체이용률을 향상시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸에 관한 것으로서, 상기 황산화 글리코사미노글리칸과 인자 VIII은 피하, 경피 또는 근육내 주사에 의해 투여된다.

본 발명의 추가의 측면은, 인자 VIII과 황산화 글리코사미노글리칸을 포함하는 출혈성 장애의 치료 또는 예방을 위한 약제학적 키트이다.

본 발명의 추가의 측면은, 치료학적 유효량의 인자 VIII과 인자 VIII의 생체이용률을 증가시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸을 이를 필요로 하는 대상자에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 투여는 피하, 경피 또는 근육내 주사를 포함하는 출혈성 장애의 치료 또는 예방 방법이다.

본 발명의 추가 측면은, 황산화 글리코사미노글리칸을 인자 VIII과 함께 피하, 피내 또는 근육내 주사에 의해 공동투여하여, 인자 VIII의 생체이용률을 증가시키는 방법이다.

본 발명의 모든 측면에서, 인자 VIII은 바람직하게는 사람 인자 VIII이다. 바람직한 황산화 글리코사미노글리칸은 헤파린이고, 가장 바람직하게는 헤파린은 미분획화(unfractionated) 헤파린이다.

도 1은 실시예 1의 결과를 보여준다. FVIII의 생체이용률은 황산화 글리코사미노글리칸이 공동 투여될 때 증가한다. 확인할 수 있는 바와 같이, 덱스트란 설페이트는 양성 효과가 전혀 없다.

본 발명은 출혈성 장애의 치료 및 예방에 관한 것이다.

본원에 사용된 용어 "출혈성 장애"는 가족성 및 후천성 A형 혈우병을 포함한다.

본 발명의 첫 번째 측면에 따르면, 황산화 글리코사미노글리칸의 공동 투여를 포함하는 인자 VIII의 비정맥내 치료학적 용도가 제공된다.

인자 VIII은 야생형 인자 VIII 폴리펩타이드일 수 있거나 돌연변이를 함유할 수 있는 인자 VIII 폴리펩타이드일 수 있다. 당화 또는 다른 해독 후 변형의 정도 및 위치는 선택된 숙주 세포 및 숙주 세포 환경의 특성에 따라 다양할 수 있다. 특정 아미노산 서열을 언급한 경우 이러한 서열의 해독 후 변형은 본원에 속한다.

용어 "인자 VIII" 및 "FVIII"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. "인자 VIII"은 야생형 인자 VIII 뿐만 아니라 인자 VIII의 응고촉진 활성을 갖는 야생형 인자 VIII의 유도체를 포함한다. 유도체는 야생형 인자 VIII의 아미노산 서열과 비교하여 결실, 삽입 및/또는 부가를 가질 수 있다. 용어 인자 VIII은 인자 VIII의 단백질분해에 의해 프로세싱된 형태, 예를 들면, 중쇄와 경쇄를 포함하는 활성화 이전의 형태를 포함한다.

용어 "인자 VIII"은 야생형 인자 VIII의 생물학적 활성을 10% 이상, 바람직하게는 25% 이상, 보다 바람직하게는 50% 이상, 가장 바람직하게는 75% 이상 나타내는 모든 인자 VIII 변이체 또는 돌연변이체를 포함한다. 인자 VIII의 생물학적 활성을 측정하는데 적합한 검사는 1 단계 또는 2 단계 응고 분석[참조: Rizza et al. 1982. Coagulation assay of FVIII:C and FIXa in Bloom ed. The Hemophilias. NY Churchchill Livingston 1992] 또는 발색 기질 FVIII 활성 분석[참조: S. Rosen, 1984. Scand J Haematol 33: 139-145, suppl.]이다. 이들 문헌의 내용은 본원에 인용에 의해 포함된다.

비제한적인 예로서, 인자 VIII 분자는 APC 절단을 방지 또는 감소시키는 인자 VIII 돌연변이체[참조: Amano 1998. Thromb. Haemost. 79:557-563], 알부민-융합된 FVIII 분자(WO 2011/020866 A2), FVIII-Fc 융합 분자(WO 04/101740 A), A2 도메인을 추가로 안정화하는 인자 VIII 돌연변이체(WO 97/40145), 발현 증가를 야기하는 FVIII 돌연변이체[참조: Swaroop et al. 1997. JBC 272:24121-24124], 면역원성이 감소된 인자 VIII 돌연변이체[참조: Lollar 1999. Thromb. Haemost. 82:505-508], 상이하게 발현된 중쇄와 경쇄로부터 재구성된 FVIII[참조: Oh et al. 1999. Exp. Mol. Med. 31:95-100], HSPG(헤파란 설페이트 프로테오글리칸) 및/또는 LRP(저밀도 지질단백질 수용체 관련 단백질)와 같이 FVIII의 이화작용을 유도하는 수용체와의 결합을 감소시키는 FVIII 돌연변이체[참조: Ananyeva et al. 2001. TCM, 11:251-257], 디설파이드 결합-안정화된 FVIII 변이체[참조: Gale et al., 2006. J. Thromb. Hemost. 4:1315-1322], 분비 특성이 향상된 FVIII 돌연변이체[참조: Miao et al., 2004. Blood 103:3412-3419], 보조인자 특이 활성이 증가된 FVIII 돌연변이체[참조: Wakabayashi et al., 2005. Biochemistry 44:10298-304], 향상된 생합성 및 분비, 감소된 ER 차페론(chaperon) 상호작용, 향상된 ER-골지 수송, 증가된 활성화 또는 불활성화에 대한 저항성(resistance to inactivation) 및 향상된 반감기를 갖는 FVIII 돌연변이체[참조 문헌에 요약됨: Pipe 2004. Sem. Thromb. Hemost. 30:227-237] 및 B-도메인의 전부 또는 일부가 결실된 FVIII 돌연변이체[참조: WO　2004/067566　A1, WO　02/102850　A2, WO　00/24759　A1 및 미국 특허 제4,868,112호]를 포함한다. 특히 바람직한 것은 "단일쇄" FVIII 분자인 FVIII 분자이다. 단일쇄 FVIII은 B-도메인의 전부 또는 일부 및 산성 a3 영역의 전부 또는 일부가 결실된 것으로, Arg1648의 절단 부위(보통 분비 동안 절단됨)가 결실된다. 단일쇄 FVIII 분자는, 예를 들면, 문헌[참조: WO　2004/067566　A1; US　2002/132306 A1; Krishnan et al. (1991) European Journal of Biochemistry vol. 195, no. 3, pages 637-644; Herlitschka et al. (1998) Journal of Biotechnology, vol. 61, no. 3, pages 165-173; 및 Donath et al. (1995) Biochem. J., vol. 312, pages 49-55]에 기술되어 있다.

이들 인자 VIII 돌연변이체 및 변이체에 관한 모든 문헌은 이의 전체 내용이 본원에 인용에 의해 포함된다.

사람 인자 VIII의 성숙 야생형 형태의 아미노산 서열은 서열번호 2에 나타낸다. 특정 서열의 아미노산 위치에 대한 참조 번호는 FVIII 야생형 단백질내에서의 해당 아미노산 위치를 의미하며 언급되는 서열내의 다른 위치에서 돌연변이(예: 결실, 삽입 및/또는 치환)의 존재를 배제하지 않는다. 예를 들면, 서열번호 2에서 참조된 "Glu2004"에서의 돌연변이는 변형 동족체의 경우 서열번호 2의 위치 1 내지 2332에서 1개 이상의 아미노산이 결실됨을 배제하지 않는다. 서열번호 2의 암호화 DNA 서열은 서열번호 1에 해당한다.

본원에 사용된 용어 "글리코사미노글리칸"은 특히 아미노헥소스 단위를 포함하는 올리고당류 또는 다당류를 가리킨다. 황산화 글리코사미노글리칸은, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 콘드로이틴 설페이트, 데르마탄 설페이트, 케라탄 설페이트, 헤파린 및 헤파란 설페이트를 포함한다. 바람직한 황산화 글리코사미노글리칸은 헤파린이고, 가장 바람직한 황산화 글리코사미노글리칸은 미분획화 헤파린이다.

용어 "헤파린"은 미분획화 헤파린 및 저분자량의 헤파린을 포함한다. 한 가지 양태에서, 본 발명에 따라 사용된 헤파린은 평균 분자량이 약 8 kDa 내지 약 30 kDa, 바람직하게는 약 10 kDa 내지 약 20 kDa, 가장 바람직하게는 약 12 kDa 내지 약 16 kDa(예: 약 15 kDa)일 수 있는 "미분획화 헤파린"이다. 또다른 양태에서, 본 발명에 따라 사용된 헤파린은 저분자량 헤파린(LMWH)이다. LMWH는 평균 분자량이 8000 Da 미만이고 모든 쇄의 60% 이상이 8000 Da 미만의 분자량을 갖는 헤파린 또는 헤파린 염이다. 본 발명에 따라 사용된 LMWH의 분자량은 바람직하게는 약 2 kDa 내지 약 8 kDa, 보다 바람직하게는 약 3 kDa 내지 약 6 kDa, 가장 바람직하게는 약 4 kDa 내지 약 5 kDa(예: 약 4.5 kDa)이다. LMWH는 고분자 헤파린의 다양한 분획화 또는 해중합 방법에 의해 수득할 수 있다. LMWH의 예로는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 아르데파린(Normiflo), 세르토파린(Sandoparin), 에녹사파린(Lovenox 및 Clexane), 파르나파린(Fluxum), 틴자파린(Innohep 및 Logiparin), 달테파린(Fragmin), 레비파린(Clivarin) 및 나드로파린(Fraxiparin)이 포함된다.

용어 "헤파린"은 또한 천연 헤파린으로부터 절단 및 분리에 의해 유도되거나 합성 경로에 의해 유도된 저분자량의 헤파린 단편을 포함한다. 예를 들면, 합성에 의해 제조되어 헤파린으로부터 유도된 구조를 갖는 황산화 5당류 시판품이 있다. 이 제품은 폰다파리눅스 나트륨(Fondaparinux sodium)으로서 구입가능하다.

콘드로이틴 설페이트는, 예를 들면, 콘드로이틴 설페이트 A(콘드로이틴-4-설페이트), 콘드로이틴 설페이트 C(콘드로이틴-6-설페이트), 콘드로이틴 설페이트 D(콘드로이틴-2,6-설페이트) 및 콘드로이틴 설페이트 E(콘드로이틴-4,6-설페이트)가 포함된다.

데르마탄 설페이트(이전에는 콘드로이틴 설페이트 B로도 명명되었다)는 시판중에 있는 또다른 황산화 글리코사미노글리칸이다.

케라탄 설페이트는 또다른 황산화 글리코사미노글리칸이다. 케라탄 설페이트의 구조는, 예를 들면, 문헌[참조: Funderburgh (2000) Glycobiology vol. 10 no. 10 pp. 951-958]에 기술되어 있다.

헤파란 설페이트는 헤파린과 다른 N-황산화 다당류이다[참조: Gallagher, J.T., Lyon, M. (2000). "Molecular structure of Heparan Sulfate and interactions with growth factors and morphogens". In Iozzo, M, V.. Proteoglycans: structure, biology and molecular interactions. Marcel Dekker Inc. New York, New York. pp. 27-59; and Gallagher, J. T. Walker, A. (1985). "Molecular distinctions between Heparan Sulphate and Heparin: Analysis of sulphation patterns indicates Heparan Sulphate and Heparin are separate families of N-sulphated polysaccharides". Biochem. J. 230 (3): 665-74].

본 발명의 한 가지 양태에서, 치료 대상자의 인자 VIII 혈장 농도는 주사 후 5시간부터 주사 후 8시간까지의 기간 동안 건강한 대상자의 정상적인 인자 VIII 혈장 농도의 2% 이상, 바람직하게는 5% 이상, 보다 바람직하게는 8% 이상, 가장 바람직하게는 10% 이상으로 지속된다. 혈장 농도는 아래 실시예 1에 기술된 바와 같이 측정되어야 한다.

본 발명의 한 가지 양태에서, 치료 대상자의 인자 VIII 혈장 농도는 주사 후 4시간부터 주사 후 16시간까지의 기간 동안 건강한 대상자의 정상적인 인자 VIII 혈장 농도의 2% 이상, 바람직하게는 5% 이상, 보다 바람직하게는 8% 이상, 가장 바람직하게는 10% 이상으로 지속된다.

본 발명의 다른 양태에서, 치료 대상자의 인자 VIII 혈장 농도는 주사 후 3시간부터 주사 후 24시간까지의 기간 동안 건강한 대상자의 정상적인 인자 VIII 혈장 농도의 2% 이상, 바람직하게는 4% 이상, 보다 바람직하게는 6% 이상, 가장 바람직하게는 8% 이상으로 지속된다.

본 발명의 또다른 양태에서, 치료 대상자의 인자 VIII 혈장 농도는 주사 후 2시간부터 주사 후 32시간까지의 기간 동안 건강한 대상자의 정상적인 인자 VIII 혈장 농도의 2% 이상, 바람직하게는 3% 이상, 보다 바람직하게는 4% 이상, 가장 바람직하게는 5% 이상으로 지속된다.

본 발명의 또한 또다른 양태에서, 치료 대상자의 인자 VIII 혈장 농도는 주사 후 1시간부터 주사 후 48시간까지의 기간 동안 건강한 대상자의 정상적인 인자 VIII 혈장 농도의 2% 이상, 바람직하게는 3% 이상, 보다 바람직하게는 4% 이상, 가장 바람직하게는 5% 이상으로 지속된다.

상기된 혈장 농도는 바람직하게는 인자 VIII(예: FVIII)이 피하 주사에 의해 1,000 IU/체중 kg 미만 또는 800 IU/체중 kg 미만 또는 600 IU/체중 kg 미만 또는 400 IU/체중 kg 미만의 용량으로, 예를 들면, 약 10 IU/체중 kg 내지 약 1,000 IU/체중 kg 또는 약 20 IU/체중 kg 내지 약 800 IU/체중 kg 또는 약 30 IU/체중 kg 내지 약 700 IU/체중 kg 또는 약 40 IU/체중 kg 내지 약 600 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 500 IU/체중 kg 또는 약 75 IU/체중 kg 내지 약 400 IU/체중 kg 또는 약 100 IU/체중 kg 내지 약 300 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 1,000 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 800 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 700 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 600 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 500 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 400 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 300 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 200 IU/체중 kg의 용량으로 투여될 때 수득된다.

한 가지 양태에서, 인자 VIII과 황산화 글리코사미노글리칸은 동일한 조성물에 함유된다. 이들 두 가지 성분을 포함하는 조성물은 환자에게 단일 주사 등에 의해 투여될 수 있다.

또다른 양태에서, 인자 VIII과 황산화 글리코사미노글리칸은 동일한 조성물에 존재하지 않는다. 예를 들면, 각각의 성분은 약제학적 제제에서 개별적인 용량형으로 제공될 수 있다.

만일 두 가지 성분이 동일한 조성물에 존재하지 않는 경우, 개별적인 조성물은 별도로 투여하거나, 인자 VIII과 황산화 글리코사미노글리칸이 동시에 투여될 수 있도록 투여 직전에 혼합할 수 있다. 만일 개별적으로 투여되는 경우, 투여는, 예를 들면, 시차 방식으로 순차적으로 진행할 수 있다. 일반적으로, 두 가지 성분은 단일 투여(예: 주사)에 의해 동시 투여하는 것이 바람직하다. 여러 가지 투여 경로가 아래에서 논의된다. 이들 경로는 필요한 부분만 약간 수정하여 적용한다.

약제학적 제제의 성분은 통상적인 생리학적으로 적합한 완충수용액 중에 용해시킬 수 있고, 여기에 임의로 약제학적 부형제를 첨가하여 약제학적 제제를 생성할 수 있다. 약제학적 제제의 성분은 이미 모든 필요한 생리학적으로 적합한 약제학적 부형제를 함유할 수 있고, 주사용수에 용해시켜 약제학적 제제를 형성할 수 있다.

이와 같은 약제학적 담체 및 부형제 뿐만 아니라 적합한 약제학적 제형의 제법은 당해 기술 분야에 잘 알려져 있다[참조: "Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins", Frokjaer et al., Taylor & Francis (2000) or "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 3^rd edition, Kibbe et al., Pharmaceutical Press (2000)]. 특정 양태에서, 약제학적 조성물은 충전제, 증량제, 완충제, 안정화제 또는 부형제와 같은 첨가제를 한 가지 이상 포함할 수 있다. 표준 약제학적 제형화 기술은 당해 기술 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다[참조: 2005 Physicians' Desk Reference®, Thomson Healthcare: Montvale, NJ, 2004; Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th ed., Gennaro et al., Eds. Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2000]. 적합한 약제학적 첨가제로는, 예를 들면, 만니톨, 솔비톨, 락토즈, 수크로즈, 트레할로즈 등과 같은 당, 히스티딘, 아르기닌, 라이신, 글리신, 알라닌, 류신, 세린, 트레오닌, 글루탐산, 아스파르트산, 글루타민, 아스파라긴, 페닐알라닌 등과 같은 아미노산, 염화나트륨 또는 다른 염과 같은 등장조건 부여 첨가제, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 염화칼슘 등과 같은 안정화제, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 등과 같은 생리학적 pH 완충제가 포함된다. 특정 양태에서, 약제학적 조성물은 pH 완충제 및 습윤제 또는 유화제를 함유할 수 있다. 추가의 양태에서, 조성물은 보존제 또는 안정화제를 함유할 수 있다. 특히, 인자 VIII을 포함하는 약제학적 제제는 동결건조 또는 안정한 가용성 형태로 제형화될 수 있다. 인자 VIII은 당해 기술 분야에 공지된 다양한 방법에 의해 동결건조될 수 있다. 또한 만일 황산화 글리코사미노글리칸과 인자 VIII이 동일한 조성물에 함유되는 경우, 이러한 조성물은 동결건조 형태 또는 안정한 가용성 형태로 제공될 수도 있다. 동결건조 제형은 사용전에 멸균주사용수 또는 멸균생리식염수 또는 적합한 완충액과 같은 한 가지 이상의 약제학적으로 허용되는 희석제의 첨가에 의해 재구성된다.

본 발명의 약제학적 제제에 함유된 조성물(들)은 임의의 약제학적으로 적합한 수단에 의해 개체에게 전달될 수 있다. 편리한 임의 경로에 의해 조성물을 투여할 수 있는 여러 가지 전달 시스템이 알려져 있고 이용될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 약제학적 제제에 함유된 조성물(들)은 비정맥내 주사에 의해 개체에게 전달된다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 조성물(들)은 피하, 근육내, 복강내, 뇌내, 폐내, 비내, 피내 또는 경피 투여용으로 제형화되고, 가장 바람직하게는 통상적인 방법에 따른 피하, 근육내 또는 경피 투여용으로 제형화된다. 제형은 주입 또는 볼러스(bolus) 주사에 의해 연속적으로 투여될 수 있다. 일부 제형은 서방출 시스템을 포함할 수 있다.

본 발명의 약제학적 제제의 조성물(들)은 치료학적 유효 용량으로 환자에게 투여되는데, 이러한 치료학적 유효량은 목적하는 효과를 제공하기에 충분하고, 견딜수 없는 유해한 부작용을 유발하는 용량에 이르지 않고 치료되는 상태 또는 징후의 중증 또는 확산을 예방 또는 경감시키는 용량을 의미한다. 정확한 용량은 징후, 제형, 투여방식 등과 같은 많은 인자에 의해 좌우되며 각 개별 징후에 대해 임상전 시험 및 임상 시험으로 측정되어야 한다.

인자 VIII의 경우, 1회 투여 용량은 치료 대상자의 인자 VIII 혈장 농도가 주사 후 2시간부터 주사 후 48시간까지의 기간 동안 건강한 대상자의 정상적인 인자 VIII 혈장 농도의 2% 이상, 바람직하게는 3% 이상, 보다 바람직하게는 4% 이상, 가장 바람직하게는 5% 이상으로 지속되도록 선택할 수 있다.

바람직하게는, 인자 VIII의 1회 투여 용량은 1,000 IU/체중 kg 미만 또는 800 IU/체중 kg 미만 또는 600 IU/체중 kg 미만 또는 400 IU/체중 kg 미만의 용량이고, 예를 들면, 약 10 IU/체중 kg 내지 약 1,000 IU/체중 kg 또는 약 20 IU/체중 kg 내지 약 800 IU/체중 kg 또는 약 30 IU/체중 kg 내지 약 700 IU/체중 kg 또는 약 40 IU/체중 kg 내지 약 600 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 500 IU/체중 kg 또는 약 75 IU/체중 kg 내지 약 400 IU/체중 kg 또는 약 100 IU/체중 kg 내지 약 300 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 1,000 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 800 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 700 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 600 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 500 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 400 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 300 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 200 IU/체중 kg이다.

인자 VIII은 그 자체로 황산화 글리코사미노글리칸과 함께 투여될 수 있다. 대안적으로, 인자 VIII은 vWF와 결합되어(즉, FVIII/vWF 복합체로서) 황산화 글리코사미노글리칸과 함께 투여될 수 있다.

황산화 글리코사미노글리칸의 투여량은 적용되는 제품 1ml당 약 0.001 내지 약 100 mg, 적용되는 제품 1ml당 약 0.01 내지 약 10 mg 또는 적용되는 제품 1ml당 약 0.05 내지 약 1 mg이다.

본원에 사용된 용어 "생체이용률"은 피하, 정맥내 또는 피내 투여 후 최종 시점까지 소정의 시간대에 혈장 중에서 검출될 수 있는 인자 VIII(예: 인자 VIII 또는 FVIII-관련 제제)의 투여 용량의 비율을 가리킨다. 전형적으로, 생체이용률은 시험 동물에 10 IU/kg 내지 1000 IU/kg 용량의 제제(예: 체중 kg 당 400 IU)를 투여하고, 투여 후, 예정된 시점에 혈장 시료를 획득하며, 발색 또는 응고 분석(또는 모든 생물학적 분석), 면역분석 또는 이의 균등분석중 하나 이상을 이용하여 상기 혈장 시료 중의 인자 VIII 또는 인자 VIII-관련 폴리펩타이드와 같은 인자 VIII의 함량을 결정하여 측정한다. 생체이용률은 혈장 중의 인자 VIII의 농도 또는 활성의 y축과 투여 후 예정된 최종 시점까지의 투여 후 경과 시간의 x축에 의한 곡선하면적(AUC)으로 산출된다. 바람직하게는, 예정된 최종 시점은 투여 후 48시간이다. 가장 바람직하게는, 생체이용률은 아래 실시예 1에 기술된 바와 같이 측정한다. 시험 제제의 상대적 생체이용률은 시험 제제(예: 인자 VIII + 황산화 글리코사미노글리칸)의 AUC와 시험 제제와 동일한 용량과 방식(예: 정맥내, 피하 또는 피내)으로 투여되는 기준 제제(예: 인자 VIII 단독)의 AUC간의 비율을 가리킨다.

본 발명에 따르면, 인자 VIII의 생체이용률(황산화 글리코사미노글리칸과 공동 투여될 때)은 단독으로 투여된 인자 VIII의 생체이용률보다 더 높다. 바람직하게는, 상기 생체이용률은 20% 이상, 보다 바람직하게는 50% 이상, 보다 더 바람직하게는 75% 이상, 가장 바람직하게는 100% 이상 증가한다. 생체이용률 증가는 바람직하게는 인자 VIII이 피하 주사에 의해 1,000 IU/체중 kg 미만 또는 800 IU/체중 kg 미만 또는 600 IU/체중 kg 미만 또는 400 IU/체중 kg 미만의 용량으로, 예를 들면, 약 10 IU/체중 kg 내지 약 1,000 IU/체중 kg 또는 약 20 IU/체중 kg 내지 약 800 IU/체중 kg 또는 약 30 IU/체중 kg 내지 약 700 IU/체중 kg 또는 약 40 IU/체중 kg 내지 약 600 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 500 IU/체중 kg 또는 약 75 IU/체중 kg 내지 약 400 IU/체중 kg 또는 약 100 IU/체중 kg 내지 약 300 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 1,000 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 800 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 700 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 600 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 500 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 400 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 300 IU/체중 kg 또는 약 50 IU/체중 kg 내지 약 200 IU/체중 kg의 용량으로 투여될 때 수득된다.

본 발명의 약제학적 조성물(들)은 단독으로 투여되거나 다른 치료제와 함께 투여될 수 있다. 이러한 다른 치료제들은 동일한 약제의 일부로서 혼입될 수 있다.

실시예

실시예 1: A형 혈우병 모델에 피하 적용된 FVIII과 여러 첨가제의 생체이용률 평가

재료 및 동물 모델

본 실험에 사용된 인자 VIII는 B-도메인 절두된 단일쇄 재조합 인자 VIII(이하, "rFVIII"이라고 한다)이었다. 인자 VIII은 Asn764를 Thr1653과 직접 융합시켜 수득되었다. 인자 VIII은 세포 배양을 통해 발현되어 세포 배양 배지로부터 정제되었다.

사용된 추가의 제제는 표 1에 요약되어 있다.

표 1

A형 혈우병 동물 모델로서 인자 VIII 넉아웃(knockout) 마우스를 사용하였다. 이들 마우스는 엑손 16 및 17이 결실되어 FVIII을 발현하지 못한다[참조: Bi L. et al, Nature genetics, 1995, Vol 10(1), 119-121; Bi L. et al, Blood, 1996, Vol 88(9), 3446-3450]. 이는 ko 마우스의 혈장 중 FVIII 활성을 정량하여 처치 후 FVIII 농도를 분석할 수 있도록 한다.

방법

rFVIII(사람)의 혈관외 주사가 치료법을 개선할 수 있는 대안이 될 수 있는 지를 평가하기 위해, 혈관외 요법의 대표적인 전형인 피하 주사를 선택하였다. 실시된 비임상 약동학 연구에 대한 설계는 아래 표 2 및 3에 상세히 기술되어 있다. A형 혈우병 모델에 여러 첨가제(표 2에 기술된 처치 그룹)와 함께 rFVIII의 단일 정맥내 또는 피하 주사 후 인자 VIII 활성의 혈장 농도를 측정하였다.

상응하는 그룹들은 여러 가지 다른 첨가제의 존재하에 동일 용량의 FVIII(발색 기질 (CS) 활성 분석)으로 처치되었다. 단일 투여를 위해 체중이 약 25 g인 FVIII 넉아웃(ko) 마우스에 피하 적용하기 전에 각 처치 그룹마다 각종 다른 성분들을 200 μL의 용적(모든 그룹에 대해 동일한 용량)으로 함께 혼합하였다. 처치 그룹들은 표 2에 요약되어 있다.

단기간 마취하에 채혈하고 나트륨 시트레이트로 항응고처리하여 10% 시트레이트 혈액을 수득하고 이로부터 혈장 처리하여 FVIII 활성 분석을 위해 -70℃에 저장하였다. 시료추출 시점은 표 3에 기술되어 있다. FVIII 혈장 중 활성의 정량화는 표준 aPTT 기반 접근법(Behring Coagulation Timer)으로 수행하였다. 동물들은 표준 사육 환경에서 관리되었다.

표 2: 처치 그룹

결과

결과는 표 3 및 도 1에 요약되어 있다. FVIII ko 마우스에 여러 황산화 글리코사미노글리칸의 존재하에 400 IU/kg rFVIII의 피하 주사는 FVIII의 단독 또는 FVIII + 덱스트란 설페이트의 투여에 비하여 FVIII 혈장 중 활성 수준에서 유의적인 증가를 나타냈다. 헤파린 공동투여의 경우 증가가 특히 높았다.

표 3. 사람의 정상적인 FVIII 혈장 중 활성에 대한 %로 표시된 FVIII 활성

피크값은 회색 음영 처리되었다.

피크값은 회색 음영 처리되었다.

SEQUENCE LISTING <110> CSL BEHRING GMBH <120> USE OF SULFATED GLYCOSAMINOGLYCANS FOR IMPROVING THE BIOAVAILABILITY OF FACTOR VIII <130> A182 <150> EP 11185648.0 <151> 2011-10-18 <150> US 61/548606 <151> 2011-10-18 <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 6996 <212> DNA <213> homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(6996) <400> 1 gcc acc aga aga tac tac ctg ggt gca gtg gaa ctg tca tgg gac tat 48 Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser Trp Asp Tyr 1 5 10 15 atg caa agt gat ctc ggt gag ctg cct gtg gac gca aga ttt cct cct 96 Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg Phe Pro Pro 20 25 30 aga gtg cca aaa tct ttt cca ttc aac acc tca gtc gtg tac aaa aag 144 Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val Tyr Lys Lys 35 40 45 act ctg ttt gta gaa ttc acg gat cac ctt ttc aac atc gct aag cca 192 Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile Ala Lys Pro 50 55 60 agg cca ccc tgg atg ggt ctg cta ggt cct acc atc cag gct gag gtt 240 Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly 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ttg cat gag gtg gca tac tgg tac att cta 1920 Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp Tyr Ile Leu 625 630 635 640 agc att gga gca cag act gac ttc ctt tct gtc ttc ttc tct gga tat 1968 Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe Ser Gly Tyr 645 650 655 acc ttc aaa cac aaa atg gtc tat gaa gac aca ctc acc cta ttc cca 2016 Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr Leu Phe Pro 660 665 670 ttc tca gga gaa act gtc ttc atg tcg atg gaa aac cca ggt cta tgg 2064 Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro Gly Leu Trp 675 680 685 att ctg ggg tgc cac aac tca gac ttt cgg aac aga ggc atg acc gcc 2112 Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly Met Thr Ala 690 695 700 tta ctg aag gtt tct agt tgt gac aag aac act ggt gat tat tac gag 2160 Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp Tyr Tyr Glu 705 710 715 720 gac agt tat gaa gat att tca gca tac ttg ctg agt aaa aac aat gcc 2208 Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys Asn Asn Ala 725 730 735 att gaa cca aga agc ttc tcc cag aat tca aga cac cgt agc act agg 2256 Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Ser Arg His Arg Ser Thr Arg 740 745 750 caa aag caa ttt aat gcc acc aca att cca gaa aat gac ata gag aag 2304 Gln Lys Gln Phe Asn Ala Thr Thr Ile Pro Glu Asn Asp Ile Glu Lys 755 760 765 act gac cct tgg ttt gca cac aga aca cct atg cct aaa ata caa aat 2352 Thr Asp Pro Trp Phe Ala His Arg Thr Pro Met Pro Lys Ile Gln Asn 770 775 780 gtc tcc tct agt gat ttg ttg atg ctc ttg cga cag agt cct act cca 2400 Val Ser Ser Ser Asp Leu Leu Met Leu Leu Arg Gln Ser Pro Thr Pro 785 790 795 800 cat ggg cta tcc tta tct gat ctc caa gaa gcc aaa tat gag act ttt 2448 His Gly Leu Ser Leu Ser Asp Leu Gln Glu Ala Lys Tyr Glu Thr Phe 805 810 815 tct gat gat cca tca cct gga gca ata gac agt aat aac agc ctg tct 2496 Ser Asp Asp Pro Ser Pro Gly Ala Ile Asp Ser Asn Asn Ser Leu Ser 820 825 830 gaa atg aca cac ttc agg cca cag ctc cat cac agt ggg gac atg gta 2544 Glu Met Thr His Phe Arg Pro Gln Leu His His Ser Gly Asp Met Val 835 840 845 ttt acc cct gag tca ggc ctc caa tta aga tta aat gag aaa ctg ggg 2592 Phe Thr Pro Glu Ser Gly Leu Gln Leu Arg Leu Asn Glu Lys Leu Gly 850 855 860 aca act gca gca aca gag ttg aag aaa ctt gat ttc aaa gtt tct agt 2640 Thr Thr Ala Ala Thr Glu Leu Lys Lys Leu Asp Phe Lys Val Ser Ser 865 870 875 880 aca tca aat aat ctg att tca aca att cca tca gac aat ttg gca gca 2688 Thr Ser Asn Asn Leu Ile Ser Thr Ile Pro Ser Asp Asn Leu Ala Ala 885 890 895 ggt act gat aat aca agt tcc tta gga ccc cca agt atg cca gtt cat 2736 Gly Thr Asp Asn Thr Ser Ser Leu Gly Pro Pro Ser Met Pro Val His 900 905 910 tat gat agt caa tta gat acc act cta ttt ggc aaa aag tca tct ccc 2784 Tyr Asp Ser Gln Leu Asp Thr Thr Leu Phe Gly Lys Lys Ser Ser Pro 915 920 925 ctt act gag tct ggt gga cct ctg agc ttg agt gaa gaa aat aat gat 2832 Leu Thr Glu Ser Gly Gly Pro Leu Ser Leu Ser Glu Glu Asn Asn Asp 930 935 940 tca aag ttg tta gaa tca ggt tta atg aat agc caa gaa agt tca tgg 2880 Ser Lys Leu Leu Glu Ser Gly Leu Met Asn Ser Gln Glu Ser Ser Trp 945 950 955 960 gga aaa aat gta tcg tca aca gag agt ggt agg tta ttt aaa ggg aaa 2928 Gly Lys Asn Val Ser Ser Thr Glu Ser Gly Arg Leu Phe Lys Gly Lys 965 970 975 aga gct cat gga cct gct ttg ttg act aaa gat aat gcc tta ttc aaa 2976 Arg Ala His Gly Pro Ala Leu Leu Thr Lys Asp Asn Ala Leu Phe Lys 980 985 990 gtt agc atc tct ttg tta aag aca aac aaa act tcc aat aat tca gca 3024 Val Ser Ile Ser Leu Leu Lys Thr Asn Lys Thr Ser Asn Asn Ser Ala 995 1000 1005 act aat aga aag act cac att gat ggc cca tca tta tta att gag 3069 Thr Asn Arg Lys Thr His Ile Asp Gly Pro Ser Leu Leu Ile Glu 1010 1015 1020 aat agt cca tca gtc tgg caa aat ata tta gaa agt gac act gag 3114 Asn Ser Pro Ser Val Trp Gln Asn Ile Leu Glu Ser Asp Thr Glu 1025 1030 1035 ttt aaa aaa gtg aca cct ttg att cat gac aga atg ctt atg gac 3159 Phe Lys Lys Val Thr Pro Leu Ile His Asp Arg Met Leu Met Asp 1040 1045 1050 aaa aat gct aca gct ttg agg cta aat cat atg tca aat aaa act 3204 Lys Asn Ala Thr Ala Leu Arg Leu Asn His Met Ser Asn Lys Thr 1055 1060 1065 act tca tca aaa aac atg gaa atg gtc caa cag aaa aaa gag ggc 3249 Thr Ser Ser Lys Asn Met Glu Met Val Gln Gln Lys Lys Glu Gly 1070 1075 1080 ccc att cca cca gat gca caa aat cca gat atg tcg ttc ttt aag 3294 Pro Ile Pro Pro Asp Ala Gln Asn Pro Asp Met Ser Phe Phe Lys 1085 1090 1095 atg cta ttc ttg cca gaa tca gca agg tgg ata caa agg act cat 3339 Met Leu Phe Leu Pro Glu Ser Ala Arg Trp Ile Gln Arg Thr His 1100 1105 1110 gga aag aac tct ctg aac tct ggg caa ggc ccc agt cca aag caa 3384 Gly Lys Asn Ser Leu Asn Ser Gly Gln Gly Pro Ser Pro Lys Gln 1115 1120 1125 tta gta tcc tta gga cca gaa aaa tct gtg gaa ggt cag aat ttc 3429 Leu Val Ser Leu Gly Pro Glu Lys Ser Val Glu Gly Gln Asn Phe 1130 1135 1140 ttg tct gag aaa aac aaa gtg gta gta gga aag ggt gaa ttt aca 3474 Leu Ser Glu Lys Asn Lys Val Val Val Gly Lys Gly Glu Phe Thr 1145 1150 1155 aag gac gta gga ctc aaa gag atg gtt ttt cca agc agc aga aac 3519 Lys Asp Val Gly Leu Lys Glu Met Val Phe Pro Ser Ser Arg Asn 1160 1165 1170 cta ttt ctt act aac ttg gat aat tta cat gaa aat aat aca cac 3564 Leu Phe Leu Thr Asn Leu Asp Asn Leu His Glu Asn Asn Thr His 1175 1180 1185 aat caa gaa aaa aaa att cag gaa gaa ata gaa aag aag gaa aca 3609 Asn Gln Glu Lys Lys Ile Gln Glu Glu Ile Glu Lys Lys Glu Thr 1190 1195 1200 tta atc caa gag aat gta gtt ttg cct cag ata cat aca gtg act 3654 Leu Ile Gln Glu Asn Val Val Leu Pro Gln Ile His Thr Val Thr 1205 1210 1215 ggc act aag aat ttc atg aag aac ctt ttc tta ctg agc act agg 3699 Gly Thr Lys Asn Phe Met Lys Asn Leu Phe Leu Leu Ser Thr Arg 1220 1225 1230 caa aat gta gaa ggt tca tat gac ggg gca tat gct cca gta ctt 3744 Gln Asn Val Glu Gly Ser Tyr Asp Gly Ala Tyr Ala Pro Val Leu 1235 1240 1245 caa gat ttt agg tca tta aat gat tca aca aat aga aca aag aaa 3789 Gln Asp Phe Arg Ser Leu Asn Asp Ser Thr Asn Arg Thr Lys Lys 1250 1255 1260 cac aca gct cat ttc tca aaa aaa ggg gag gaa gaa aac ttg gaa 3834 His Thr Ala His Phe Ser Lys Lys Gly Glu Glu Glu Asn Leu Glu 1265 1270 1275 ggc ttg gga aat caa acc aag caa att gta gag aaa tat gca tgc 3879 Gly Leu Gly Asn Gln Thr Lys Gln Ile Val Glu Lys Tyr Ala Cys 1280 1285 1290 acc aca agg ata tct cct aat aca agc cag cag aat ttt gtc acg 3924 Thr Thr Arg Ile Ser Pro Asn Thr Ser Gln Gln Asn Phe Val Thr 1295 1300 1305 caa cgt agt aag aga gct ttg aaa caa ttc aga ctc cca cta gaa 3969 Gln Arg Ser Lys Arg Ala Leu Lys Gln Phe Arg Leu Pro Leu Glu 1310 1315 1320 gaa aca gaa ctt gaa aaa agg ata att gtg gat gac acc tca acc 4014 Glu Thr Glu Leu Glu Lys Arg Ile Ile Val Asp Asp Thr Ser Thr 1325 1330 1335 cag tgg tcc aaa aac atg aaa cat ttg acc ccg agc acc ctc aca 4059 Gln Trp Ser Lys Asn Met Lys His Leu Thr Pro Ser Thr Leu Thr 1340 1345 1350 cag ata gac tac aat gag aag gag aaa ggg gcc att act cag tct 4104 Gln Ile Asp Tyr Asn Glu Lys Glu Lys Gly Ala Ile Thr Gln Ser 1355 1360 1365 ccc tta tca gat tgc ctt acg agg agt cat agc atc cct caa gca 4149 Pro Leu Ser Asp Cys Leu Thr Arg Ser His Ser Ile Pro Gln Ala 1370 1375 1380 aat aga tct cca tta ccc att gca aag gta tca tca ttt cca tct 4194 Asn Arg Ser Pro Leu Pro Ile Ala Lys Val Ser Ser Phe Pro Ser 1385 1390 1395 att aga cct ata tat ctg acc agg gtc cta ttc caa gac aac tct 4239 Ile Arg Pro Ile Tyr Leu Thr Arg Val Leu Phe Gln Asp Asn Ser 1400 1405 1410 tct cat ctt cca gca gca tct tat aga aag aaa gat tct ggg gtc 4284 Ser His Leu Pro Ala Ala Ser Tyr Arg Lys Lys Asp Ser Gly Val 1415 1420 1425 caa gaa agc agt cat ttc tta caa gga gcc aaa aaa aat aac ctt 4329 Gln Glu Ser Ser His Phe Leu Gln Gly Ala Lys Lys Asn Asn Leu 1430 1435 1440 tct tta gcc att cta acc ttg gag atg act ggt gat caa aga gag 4374 Ser Leu Ala Ile Leu Thr Leu Glu Met Thr Gly Asp Gln Arg Glu 1445 1450 1455 gtt ggc tcc ctg ggg aca agt gcc aca aat tca gtc aca tac aag 4419 Val Gly Ser Leu Gly Thr Ser Ala Thr Asn Ser Val Thr Tyr Lys 1460 1465 1470 aaa gtt gag aac act gtt ctc ccg aaa cca gac ttg ccc aaa aca 4464 Lys Val Glu Asn Thr Val Leu Pro Lys Pro Asp Leu Pro Lys Thr 1475 1480 1485 tct ggc aaa gtt gaa ttg ctt cca aaa gtt cac att tat cag aag 4509 Ser Gly Lys Val Glu Leu Leu Pro Lys Val His Ile Tyr Gln Lys 1490 1495 1500 gac cta ttc cct acg gaa act agc aat ggg tct cct ggc cat ctg 4554 Asp Leu Phe Pro Thr Glu Thr Ser Asn Gly Ser Pro Gly His Leu 1505 1510 1515 gat ctc gtg gaa ggg agc ctt ctt cag gga aca gag gga gcg att 4599 Asp Leu Val Glu Gly Ser Leu Leu Gln Gly Thr Glu Gly Ala Ile 1520 1525 1530 aag tgg aat gaa gca aac aga cct gga aaa gtt ccc ttt ctg aga 4644 Lys Trp Asn Glu Ala Asn Arg Pro Gly Lys Val Pro Phe Leu Arg 1535 1540 1545 gta gca aca gaa agc tct gca aag act ccc tcc aag cta ttg gat 4689 Val Ala Thr Glu Ser Ser Ala Lys Thr Pro Ser Lys Leu Leu Asp 1550 1555 1560 cct ctt gct tgg gat aac cac tat ggt act cag ata cca aaa gaa 4734 Pro Leu Ala Trp Asp Asn His Tyr Gly Thr Gln Ile Pro Lys Glu 1565 1570 1575 gag tgg aaa tcc caa gag aag tca cca gaa aaa aca gct ttt aag 4779 Glu Trp Lys Ser Gln Glu Lys Ser Pro Glu Lys Thr Ala Phe Lys 1580 1585 1590 aaa aag gat acc att ttg tcc ctg aac gct tgt gaa agc aat cat 4824 Lys Lys Asp Thr Ile Leu Ser Leu Asn Ala Cys Glu Ser Asn His 1595 1600 1605 gca ata gca gca ata aat gag gga caa aat aag ccc gaa ata gaa 4869 Ala Ile Ala Ala Ile Asn Glu Gly Gln Asn Lys Pro Glu Ile Glu 1610 1615 1620 gtc acc tgg gca aag caa ggt agg act gaa agg ctg tgc tct caa 4914 Val Thr Trp Ala Lys Gln Gly Arg Thr Glu Arg Leu Cys Ser Gln 1625 1630 1635 aac cca cca gtc ttg aaa cgc cat caa cgg gaa ata act cgt act 4959 Asn Pro Pro Val Leu Lys Arg His Gln Arg Glu Ile Thr Arg Thr 1640 1645 1650 act ctt cag tca gat caa gag gaa att gac tat gat gat acc ata 5004 Thr Leu Gln Ser Asp Gln Glu Glu Ile Asp Tyr Asp Asp Thr Ile 1655 1660 1665 tca gtt gaa atg aag aag gaa gat ttt gac att tat gat gag gat 5049 Ser Val Glu Met Lys Lys Glu Asp Phe Asp Ile Tyr Asp Glu Asp 1670 1675 1680 gaa aat cag agc ccc cgc agc ttt caa aag aaa aca cga cac tat 5094 Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe Gln Lys Lys Thr Arg His Tyr 1685 1690 1695 ttt att gct gca gtg gag agg ctc tgg gat tat ggg atg agt agc 5139 Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp Asp Tyr Gly Met Ser Ser 1700 1705 1710 tcc cca cat gtt cta aga aac agg gct cag agt ggc agt gtc cct 5184 Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln Ser Gly Ser Val Pro 1715 1720 1725 cag ttc aag aaa gtt gtt ttc cag gaa ttt act gat ggc tcc ttt 5229 Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr Asp Gly Ser Phe 1730 1735 1740 act cag ccc tta tac cgt gga gaa cta aat gaa cat ttg gga ctc 5274 Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu His Leu Gly Leu 1745 1750 1755 ctg ggg cca tat ata aga gca gaa gtt gaa gat aat atc atg gta 5319 Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp Asn Ile Met Val 1760 1765 1770 act ttc aga aat cag gcc tct cgt ccc tat tcc ttc tat tct agc 5364 Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser Ser 1775 1780 1785 ctt att tct tat gag gaa gat cag agg caa gga gca gaa cct aga 5409 Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly Ala Glu Pro Arg 1790 1795 1800 aaa aac ttt gtc aag cct aat gaa acc aaa act tac ttt tgg aaa 5454 Lys Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr Tyr Phe Trp Lys 1805 1810 1815 gtg caa cat cat atg gca ccc act aaa gat gag ttt gac tgc aaa 5499 Val Gln His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu Phe Asp Cys Lys 1820 1825 1830 gcc tgg gct tat ttc tct gat gtt gac ctg gaa aaa gat gtg cac 5544 Ala Trp Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys Asp Val His 1835 1840 1845 tca ggc ctg att gga ccc ctt ctg gtc tgc cac act aac aca ctg 5589 Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Val Cys His Thr Asn Thr Leu 1850 1855 1860 aac cct gct cat ggg aga caa gtg aca gta cag gaa ttt gct ctg 5634 Asn Pro Ala His Gly Arg Gln Val Thr Val Gln Glu Phe Ala Leu 1865 1870 1875 ttt ttc acc atc ttt gat gag acc aaa agc tgg tac ttc act gaa 5679 Phe Phe Thr Ile Phe Asp Glu Thr Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu 1880 1885 1890 aat atg gaa aga aac tgc agg gct ccc tgc aat atc cag atg gaa 5724 Asn Met Glu Arg Asn Cys Arg Ala Pro Cys Asn Ile Gln Met Glu 1895 1900 1905 gat ccc act ttt aaa gag aat tat cgc ttc cat gca atc aat ggc 5769 Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn Tyr Arg Phe His Ala Ile Asn Gly 1910 1915 1920 tac ata atg gat aca cta cct ggc tta gta atg gct cag gat caa 5814 Tyr Ile Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val Met Ala Gln Asp Gln 1925 1930 1935 agg att cga tgg tat ctg ctc agc atg ggc agc aat gaa aac atc 5859 Arg Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly Ser Asn Glu Asn Ile 1940 1945 1950 cat tct att cat ttc agt gga cat gtg ttc act gta cga aaa aaa 5904 His Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe Thr Val Arg Lys Lys 1955 1960 1965 gag gag tat aaa atg gca ctg tac aat ctc tat cca ggt gtt ttt 5949 Glu Glu Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly Val Phe 1970 1975 1980 gag aca gtg gaa atg tta cca tcc aaa gct gga att tgg cgg gtg 5994 Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile Trp Arg Val 1985 1990 1995 gaa tgc ctt att ggc gag cat cta cat gct ggg atg agc aca ctt 6039 Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu His Ala Gly Met Ser Thr Leu 2000 2005 2010 ttt ctg gtg tac agc aat aag tgt cag act ccc ctg gga atg gct 6084 Phe Leu Val Tyr Ser Asn Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Met Ala 2015 2020 2025 tct gga cac att aga gat ttt cag att aca gct tca gga caa tat 6129 Ser Gly His Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala Ser Gly Gln Tyr 2030 2035 2040 gga cag tgg gcc cca aag ctg gcc aga ctt cat tat tcc gga tca 6174 Gly Gln Trp Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser 2045 2050 2055 atc aat gcc tgg agc acc aag gag ccc ttt tct tgg atc aag gtg 6219 Ile Asn Ala Trp Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile Lys Val 2060 2065 2070 gat ctg ttg gca cca atg att att cac ggc atc aag acc cag ggt 6264 Asp Leu Leu Ala Pro Met Ile Ile His Gly Ile Lys Thr Gln Gly 2075 2080 2085 gcc cgt cag aag ttc tcc agc ctc tac atc tct cag ttt atc atc 6309 Ala Arg Gln Lys Phe Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe Ile Ile 2090 2095 2100 atg tat agt ctt gat ggg aag aag tgg cag act tat cga gga aat 6354 Met Tyr Ser Leu Asp Gly Lys Lys Trp Gln Thr Tyr Arg Gly Asn 2105 2110 2115 tcc act gga acc tta atg gtc ttc ttt ggc aat gtg gat tca tct 6399 Ser Thr Gly Thr Leu Met Val Phe Phe Gly Asn Val Asp Ser Ser 2120 2125 2130 ggg ata aaa cac aat att ttt aac cct cca att att gct cga tac 6444 Gly Ile Lys His Asn Ile Phe Asn Pro Pro Ile Ile Ala Arg Tyr 2135 2140 2145 atc cgt ttg cac cca act cat tat agc att cgc agc act ctt cgc 6489 Ile Arg Leu His Pro Thr His Tyr Ser Ile Arg Ser Thr Leu Arg 2150 2155 2160 atg gag ttg atg ggc tgt gat tta aat agt tgc agc atg cca ttg 6534 Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys Ser Met Pro Leu 2165 2170 2175 gga atg gag agt aaa gca ata tca gat gca cag att act gct tca 6579 Gly Met Glu Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala Gln Ile Thr Ala Ser 2180 2185 2190 tcc tac ttt acc aat atg ttt gcc acc tgg tct cct tca aaa gct 6624 Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser Lys Ala 2195 2200 2205 cga ctt cac ctc caa ggg agg agt aat gcc tgg aga cct cag gtg 6669 Arg Leu His Leu Gln Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg Pro Gln Val 2210 2215 2220 aat aat cca aaa gag tgg ctg caa gtg gac ttc cag aag aca atg 6714 Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gln Val Asp Phe Gln Lys Thr Met 2225 2230 2235 aaa gtc aca gga gta act act cag gga gta aaa tct ctg ctt acc 6759 Lys Val Thr Gly Val Thr Thr Gln Gly Val Lys Ser Leu Leu Thr 2240 2245 2250 agc atg tat gtg aag gag ttc ctc atc tcc agc agt caa gat ggc 6804 Ser Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gln Asp Gly 2255 2260 2265 cat cag tgg act ctc ttt ttt cag aat ggc aaa gta aag gtt ttt 6849 His Gln Trp Thr Leu Phe Phe Gln Asn Gly Lys Val Lys Val Phe 2270 2275 2280 cag gga aat caa gac tcc ttc aca cct gtg gtg aac tct cta gac 6894 Gln Gly Asn Gln Asp Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp 2285 2290 2295 cca ccg tta ctg act cgc tac ctt cga att cac ccc cag agt tgg 6939 Pro Pro Leu Leu Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gln Ser Trp 2300 2305 2310 gtg cac cag att gcc ctg agg atg gag gtt ctg ggc tgc gag gca 6984 Val His Gln Ile Ala Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala 2315 2320 2325 cag gac ctc tac 6996 Gln Asp Leu Tyr 2330 <210> 2 <211> 2332 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 2 Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser Trp Asp Tyr 1 5 10 15 Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg Phe Pro Pro 20 25 30 Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val Tyr Lys Lys 35 40 45 Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile Ala Lys Pro 50 55 60 Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln Ala Glu Val 65 70 75 80 Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser His Pro Val 85 90 95 Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser Glu Gly Ala 100 105 110 Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp Asp Lys Val 115 120 125 Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu Lys Glu Asn 130 135 140 Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser Tyr Leu Ser 145 150 155 160 His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile Gly Ala Leu 165 170 175 Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr Gln Thr Leu 180 185 190 His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly Lys Ser Trp 195 200 205 His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp Ala Ala Ser 210 215 220 Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr Val Asn Arg 225 230 235 240 Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val Tyr Trp His 245 250 255 Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile Phe Leu Glu 260 265 270 Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser Leu Glu Ile 275 280 285 Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met Asp Leu Gly 290 295 300 Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His Asp Gly Met 305 310 315 320 Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro Gln Leu Arg 325 330 335 Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp Leu Thr Asp 340 345 350 Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser Pro Ser Phe 355 360 365 Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr Trp Val His 370 375 380 Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro Leu Val Leu 385 390 395 400 Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn Asn Gly Pro 405 410 415 Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met Ala Tyr Thr 420 425 430 Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu Ser Gly Ile 435 440 445 Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu Leu Ile Ile 450 455 460 Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro His Gly Ile 465 470 475 480 Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys Gly Val Lys 485 490 495 His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe Lys Tyr Lys 500 505 510 Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp Pro Arg Cys 515 520 525 Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg Asp Leu Ala 530 535 540 Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu Ser Val Asp 545 550 555 560 Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val Ile Leu Phe 565 570 575 Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu Asn Ile Gln 580 585 590 Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp Pro Glu Phe 595 600 605 Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val Phe Asp Ser 610 615 620 Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp Tyr Ile Leu 625 630 635 640 Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe Ser Gly Tyr 645 650 655 Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr Leu Phe Pro 660 665 670 Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro Gly Leu Trp 675 680 685 Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly Met Thr Ala 690 695 700 Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp Tyr Tyr Glu 705 710 715 720 Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys Asn Asn Ala 725 730 735 Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Ser Arg His Arg Ser Thr Arg 740 745 750 Gln Lys Gln Phe Asn Ala Thr Thr Ile Pro Glu Asn Asp Ile Glu Lys 755 760 765 Thr Asp Pro Trp Phe Ala His Arg Thr Pro Met Pro Lys Ile Gln Asn 770 775 780 Val Ser Ser Ser Asp Leu Leu Met Leu Leu Arg Gln Ser Pro Thr Pro 785 790 795 800 His Gly Leu Ser Leu Ser Asp Leu Gln Glu Ala Lys Tyr Glu Thr Phe 805 810 815 Ser Asp Asp Pro Ser Pro Gly Ala Ile Asp Ser Asn Asn Ser Leu Ser 820 825 830 Glu Met Thr His Phe Arg Pro Gln Leu His His Ser Gly Asp Met Val 835 840 845 Phe Thr Pro Glu Ser Gly Leu Gln Leu Arg Leu Asn 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Lys Thr 1055 1060 1065 Thr Ser Ser Lys Asn Met Glu Met Val Gln Gln Lys Lys Glu Gly 1070 1075 1080 Pro Ile Pro Pro Asp Ala Gln Asn Pro Asp Met Ser Phe Phe Lys 1085 1090 1095 Met Leu Phe Leu Pro Glu Ser Ala Arg Trp Ile Gln Arg Thr His 1100 1105 1110 Gly Lys Asn Ser Leu Asn Ser Gly Gln Gly Pro Ser Pro Lys Gln 1115 1120 1125 Leu Val Ser Leu Gly Pro Glu Lys Ser Val Glu Gly Gln Asn Phe 1130 1135 1140 Leu Ser Glu Lys Asn Lys Val Val Val Gly Lys Gly Glu Phe Thr 1145 1150 1155 Lys Asp Val Gly Leu Lys Glu Met Val Phe Pro Ser Ser Arg Asn 1160 1165 1170 Leu Phe Leu Thr Asn Leu Asp Asn Leu His Glu Asn Asn Thr His 1175 1180 1185 Asn Gln Glu Lys Lys Ile Gln Glu Glu Ile Glu Lys Lys Glu Thr 1190 1195 1200 Leu Ile Gln Glu Asn Val Val Leu Pro Gln Ile His Thr Val Thr 1205 1210 1215 Gly Thr Lys Asn Phe Met Lys Asn Leu Phe Leu Leu Ser Thr Arg 1220 1225 1230 Gln Asn Val Glu Gly Ser Tyr Asp Gly Ala Tyr Ala Pro Val Leu 1235 1240 1245 Gln Asp Phe Arg Ser Leu Asn Asp Ser Thr Asn Arg Thr Lys Lys 1250 1255 1260 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Ser Gln Asp Gly 2255 2260 2265 His Gln Trp Thr Leu Phe Phe Gln Asn Gly Lys Val Lys Val Phe 2270 2275 2280 Gln Gly Asn Gln Asp Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp 2285 2290 2295 Pro Pro Leu Leu Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gln Ser Trp 2300 2305 2310 Val His Gln Ile Ala Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala 2315 2320 2325 Gln Asp Leu Tyr 2330

Claims

출혈성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자(Factor) VIII로서,
상기 치료 또는 예방이, 상기 인자 VIII의 비정맥내 주사 및 황산화 글리코사미노글리칸의 비정맥내 주사를 포함하는, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII.
출혈성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII로서,
상기 치료 또는 예방이, 상기 인자 VIII의 비정맥내 주사 및 황산화 글리코사미노글리칸의 비정맥내 주사를 포함하고, 상기 인자 VIII을 치료 대상자에게 50 IU/체중 kg 내지 1000 IU/체중 kg의 용량으로 피하 주사하였을 때, 주사 후 2시간부터 주사 후 48시간까지의 기간 동안 상기 치료 대상자의 인자 VIII 혈장 농도가, 건강한 대상자의 정상적인 인자 VIII 혈장 농도의 2% 이상으로 지속되는, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 인자 VIII과 상기 황산화 글리코사미노글리칸이 동시에 투여되는, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 인자 VIII과 상기 황산화 글리코사미노글리칸이 개별적으로 투여되는, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 황산화 글리코사미노글리칸이 헤파린인, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 VIII이 폰빌레브란트 인자와 결합되어 있고, 상기 황산화 글리코사미노글리칸이 헤파린인, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 대상자가 사람 개체이고, 상기 1회 투여 용량이 500 IU/체중 kg 미만인, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비정맥내 주사가 피하, 경피 또는 근육내 주사인, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 인자 VIII.
황산화 글리코사미노글리칸과 인자 VIII이 피하, 경피 또는 근육내 주사에 의해 투여되는, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에서 인자 VIII의 생체이용률을 향상시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸.
제9항에 있어서, 상기 황산화 글리코사미노글리칸이 헤파린인, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에서 인자 VIII의 생체이용률을 향상시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸.
제9항 또는 제10항에 있어서, 상기 출혈성 장애가 A형 혈우병인, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에서 인자 VIII의 생체이용률을 향상시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸.
제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 VIII과 상기 황산화 글리코사미노글리칸이 동시에 투여되는, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에서 인자 VIII의 생체이용률을 향상시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸.
제9항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 VIII과 상기 황산화 글리코사미노글리칸이 개별적으로 투여되는, 출혈성 장애의 치료 또는 예방에서 인자 VIII의 생체이용률을 향상시키기 위한 황산화 글리코사미노글리칸.
인자 VIII과 황산화 글리코사미노글리칸을 포함하는, 출혈성 장애의 치료 또는 예방을 위한 약제학적 키트.
제14항에 있어서, 상기 황산화 글리코사미노글리칸이 헤파린인, 약제학적 키트.