KR20140007443A

KR20140007443A - Ｆｌｇ의 합성

Info

Publication number: KR20140007443A
Application number: KR1020137024651A
Authority: KR
Inventors: 게나디 칼라야노브
Original assignee: 메디비르 아베
Priority date: 2011-02-21
Filing date: 2012-02-20
Publication date: 2014-01-17
Also published as: WO2012115578A1; JP2014506593A; CN103347871A

Abstract

본 발명은, 아노머적으로 상당히 순수한 2,3-디데옥시-3-플루오로-5-0-(4-페닐벤조일)-α-D-에리트로펜토푸라노실 클로라이드를, 상응하는 메틸 글리코시드의 α/β-혼합물로부터 합성하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 아노머 분리가 필요 없이 순수한 α-클로라이드를 제공한다. 이렇게 수득된 α-클로라이드는 2',3'-디데옥시-3'-플루오로 뉴클레오사이드의 제조에서 글리코실 공여체로서 사용하기에 적합하다. 특히, 아노머 분리가 필요 없이 메틸 글리코시드의 α/β-혼합물을 사용한 2',3'-디데옥시-3'-플루오로 구아노신(FLG)의 제조가 교시된다.

Description

ＦＬＧ의 합성{SYNTHESIS OF FLG}

본 발명은 뉴클레오사이드 합성 분야 및 특히 항바이러스성 2',3'-디데옥시-3'-플루오로구아노신 및 이의 전구약물의 제조에 유용한 2',3'-디데옥시-3'-플루오로리보시드의 합성에 관한 것이다.

국제 공개공보 제WO 88/00050호는 2',3'-디데옥시뉴클레오사이드 부류, 특히 2',3'-디데옥시-3'-플루오로티미딘(FLT) 및 2',3'-디데옥시-3'-플루오로구아노신(FLG)의 항바이러스 특성을 개시하고 있다. 국제 공개공보 제WO 99/09031호 및 국제 공개공보 제WO 99/41268호는 FLG의 전구약물, 및 B형 간염 및 HIV 감염 치료에서의 이의 용도를 개시하고 있다. 바람직한 전구약물은 L-아미노산 및 L-락트산 전구약물 잔기를 포함하는 2',3'-디데옥시-3'-플루오로-5'-0-[S-2-(L-발릴옥시)프로피오닐]구아노신이다.

기본적으로, 2',3'-디데옥시-3'-플루오로뉴클레오사이드, 예를 들면, FLG를 수득하기 위한 두 개의 상이한 접근법, 즉, 하기 방법 (a) 또는 (b)를 사용할 수 있다:

(a) 하기 도식적으로 나타낸 바와 같이, 적합하게 5'-0-보호된 2'-데옥시푸라노실 뉴클레오사이드 또는 푸라노실 뉴클레오사이드의 3'-위치에서의 플루오르화 및, 필요하다면, 2'-위치에서의 탈산소화 이후, 임의로 염기를 원하는 것으로 변환시키는 방법:

방법 a

i) 탈산소화; ii) 임의로, 염기의 변환; iii) 탈보호

(b) 하기에 일반적으로 도시된 바와 같이, 원하는 당 중간체, 적합하게 5-O-보호된 3-플루오로-2,3-디데옥시펜토푸라노스를 제조하고, 이어서, 화학적 방법 및/또는 효소적 방법을 사용하여 적합한 구아노신 유도체와의 축합 반응을 수행하는 방법:

방법 b

Herdiwijn 등은 문헌[참조: J. Med. Chem. 1988, 31, 2040-2048]에서 2',3'-디데옥시-3'-플루오로구아노신을, 방법 (a)에 따라 디클로로메탄 중에서 상응하는 아라비노뉴클레오사이드(3-OH)의 (디에틸아미도)황 트리플루오라이드(DAST)로의 처리에 의해 제조하는 것에 대해 기술하고 있다.

비록 상기 반응이 3'-하이드록시 화합물(3'-OH)의 아노머성 β-배열(configuration)을 보존하고 있다고 할지라도, 2'-위치에서의 F-치환체의 도입은 낮은 수율을 초래하며(35%), 순수한 2'-플루오로 화합물(3'-F)을 수득하기 위해, 생산 규모로는 실행불가능한, 컬럼 크로마토그래피를 필요로 한다. 따라서, 상기 반응 순서는 대규모 제조에는 적합하지 않다.

유럽 특허 공보 제EP 450 585호는, 2-데옥시-트레오펜토푸라노시드 및 3'-치환된-2-데옥시에리트로펜토푸라노시드를 제조하는 광범위한 일련의 반응식을 기술하고 있다. 상기 특허는 그중에서도 염기와 화학식 i의 중간체와의 축합을 개시하고 있다.

[화학식 i]

상기 화학식 i에서, R₇은 피발로일, 트리페닐메틸, 3급-부틸디메틸실릴, 이소부틸옥시카보닐 또는 테트라하이드로피라닐이며, X는 할로겐, 아지도, 시아노 또는 티오시아네이토이며, X는 할로이다. 피발로일이 선호되는 R₇ 그룹이다. 비록 유럽 특허 공보 제EP 450 585호의 기술이 피리미딘 및 푸린 염기 둘다에 적용가능하다고 기재되어 있더라도, 구체적인 기재 내용 모두는 피리미딘 뉴클레오사이드 유사체, 예를 들면, 5-클로로-2',3'-디데옥시우리딘, FLT 및 2',3'-디데옥시-3-아지도티미딘에 관한 것이다. 이러한 접근법에서의 주요 문제는 당 중간체의 1-α-메틸 글리코시드의 제공에도 불구하고 생성된 축합 생성물에서 아노머성 α/β-혼합물을 초래하는 비-입체특이적 글리코실화 단계를 포함한다는 것이다. 따라서, 낭비가 심하고 시간이 소모되는 아노머의 분리를 필요로 한다. 또한, 이러한 공정에서 예상되는 보호 그룹, 예를 들면, 피발로일은 결정화하기 매우 어려운 뉴클레오사이드를 생성한다. 따라서, 2',3'-디데옥시-3'-플루오로-뉴클레오사이드를 제조하는 상기 방법은 생산 규모로는 실시불가능한 컬럼 크로마토그래피에 대한 바람직하지 않은 의존을 필요로 한다.

유럽 특허 공보 제EP 625 158호는 2',3'-디데옥시-3'-플루오로구아노신 유사체의 합성 동안에 1'-위치에서의 입체특이성을 증진시키고, 그럼으로써 푸린 뉴클레오사이드 포스포릴라제 및 티미딘 포스포릴라제의 작용하에 구아닌 염기가 2'3'-디데옥시-3'-플루오로우리딘의 우라실 염기를 대체하는 시도를 개시하고 있다. 반응 시간이 통상적으로 약 30일인 이러한 공정은 대규모 제조에는 적합하지 않으며, 후자의 단계에서 효소의 사용은 생성물 정제 및 피로게네시스(pyrogenesis) 관점에서 문제가 된다.

제JP 2002-293790호는 두 단계 과정을 사용하여 2,3-디데옥시-3-플루오로-5-0-(4-페닐벤조일)-α-D-에리트로펜토푸라노실 클로라이드를 제조하는 경로를 개시하고 있다. 합성은 메틸 2,3-디데옥시-3-플루오로-5-0-(4-페닐벤조일)-에리트로펜토푸라노시드를 아세트산 첨가분해(acetolys)하는 것으로 시작하여 상응하는 1-OAc 유도체의 α/β-혼합물을 산출하고, 이어서 상응하는 1-클로로 유도체로 변환시키는데, 이 화합물도 또한 α/β-혼합물로서 수득된다. 이렇게 생성된 1-클로로 당은 이어서 추가로 또 다른 글리코실 공여체로 변환되고, 이후 원하는 염기에 커플링되거나 또는 염기와의 커플링에 직접적으로 사용될 수 있다. 따라서, 제JP 2002-293790호에 개시된 방법은 아노머적으로(anomerically) 순수한 3'-플루오로뉴클레오사이드, 예를 들면, FLG의 합성에서 두 개의 아노머들의 분리 없이 사용될 수 있는 아노머적으로 순수한 글리코실 공여체를 산출하지 않는다.

문헌[Tetrahedron Letters 44 (2003) 2899-2901]에서 H. Komatsu 및 T. Araki는 화학-효소적 글리코실화 반응에서 푸린 포스포릴라제의 존재하에 2,3-디데옥시-3-플루오로-α-D-리보즈 1-포스파타제 글리코실 공여체를 사용하여 2',3'-디데옥시-3'-플루오로-β-D-구아노신을 제조하는 방법을 기술하고 있다. 이러한 방법은 글리코실 공여체의 순수한 α-아노머를 필요로 하는데, 이는 단지 α-아노머만이 효소에 의해 인지되어 원하는 뉴클레오사이드 생성물로 생성되기 때문이다. 결과적으로, 인산화 단계에서의 높은 입체선택도는 고수율의 원하는 뉴클레오사이드를 위해 필요하다. 이 방법에 따르는 인산화 단계의 보고된 입체선택도는 50:50 내지 80:20으로 다양하며, 이는 축합 단계에서 효소가 사용된다는 사실과 함께 이 방법을 대규모 합성에 적합하지 못하게 한다.

방법 b에 따르는 2',3'-디데옥시-3'-플루오로뉴클레오사이드의 합성을 위한 선행 기술 방법의 일반 개요는 하기 반응식 1에 나타나 있다.

반응식 1

상기 경로 b에 따르는 FLG와 같은 β-연결된 2',3'-디데옥시-3'-플루오로 뉴클레오사이드의 제조를 위한 선행 기술 방법에서의 공통의 논점 및 주요 도전은 생성된 뉴클레사이드의 아노머성 생성물의 조절에 관한 과제이며, 이러한 논점은 대규모 컬럼 크로마토그래피가 매우 실행불가능하고 많은 경우에 전혀 실현가능하지 않기 때문에 제조 규모에 있어서 더욱 더 중요하다. 따라서, 높은 비의 원하는 아노머 또는 바람직하게 배타적으로 원하는 아노머를 제조하는 합성 방법이 대규모 합성에서 매우 요구되고 있다.

생성된 뉴클레오사이드에서 원하는 아노머성 배열을 달성하기 위한 주요 논제는 당의 α-클로라이드와 같은 아노머적으로 순수한 글리코실 공여체를 사용한다는 요건에 있다. 선행 기술 방법에서, 이러한 요건은 순수한 α-메틸 글리코시드와 같은 아노머적으로 순수한 당 중간체의 사용에 좌우되는 것으로 알려져 있으며, 이것은 결국, 통상적으로 2,3-디데옥시-3-플루오로 당 중간체의 α/β-혼합물의 크로마토그래피에 의한 지루하고 재료 소비적인 분리가 글리코실 공여체의 생성 전에 필요하다는 것을 의미하고, 이러한 분리에서 원하지 않는 아노머성 배열을 갖는 화합물은 폐기된다. 2,3-디데옥시-3-플루오로 당 중간체를 수득하기 위한 길고 지루한 합성 경로를 고려할 때, 2',3'-디데옥시-3'-플루오로 뉴클레오사이드의 제조를 위한 개선된 방법의 필요성이 분명하다.

지금까지 2',3'-디데옥시-3'-플루오로 뉴클레오사이드, 예를 들면, 2',3'-디데옥시-3'-플루오로구아니딘의 제조를 위한 간단하고 고수율의 방법은 존재하지 않았다. 따라서, 본 발명의 목적은 2',3'-디데옥시-3-플루오로뉴클레오사이드, 특히 2',3'-디데옥시-3'-플루오로구아니딘의 제조를 위한 개선된 방법을 제공하는 것이다. 특히, 본 발명은, 중간체 메틸 글리코시드의 α/β-아노머 혼합물이, α/β-아노머 혼합물의 분리가 필요 없이, 아노머적으로 순수한 글리코실 공여체의 생성에 사용되는 아노머적으로 순수한 글리코실 공여체의 제조방법을 제공한다. 이렇게 제공된 글리코실 공여체는 이어서 아노머적으로 순수한 2',3'-디데옥시-3'-플루오로뉴클레오사이드, 예를 들면, 2',3'-디데옥시-3-플루오로구아니딘의 생성에 사용될 수 있다.

본 발명에 이르러, 본 발명자들은 선행 기술에서 기술된 바와 같이 글리코시드 공여체의 생성에 아노머적으로 순수한 플루오르화 당 중간체를 사용하는 요건이 아노머적으로 순수한 α-결합된 글리코시드 공여체의 생성을 위해 필수적이지 않다는 것을 발견하였다. 사실상, 본 발명자들은 적절한 5-O-보호 그룹 및 적절한 용매를 사용함으로써 플루오르화된 당 중간체의 α/β-혼합물이 순수한 α-클로라이드로 변환될 수 있다는 것을 발견하였다. 이렇게 수득된 순수한 α-클로라이드는 이어서 보호된 구아닌 염기와 커플링되어 순수한 β-뉴클레오사이드를 제공하는데 사용된다. 이러한 목적을 위한 적절한 5-O-보호 그룹은 4-페닐-벤조일 그룹이다. 이러한 발견은, 선행 기술 방법에 따라 필수적인 α/β-혼합물의 분리가 뉴클레오사이드의 순수한 β-아노머의 생성에 더 이상 필요하지 않기 때문에 FLG를 특히 대규모로 합성하는데 획기적이다.

따라서, 본 발명의 제1 측면은 아노머적으로 상당히 순수한 2,3-디데옥시-3-플루오로-5-0-(4-페닐벤조일)-α-D-에리트로펜토푸라노실 클로라이드(1b)를, 상응하는 메틸 글리코시드, 즉, 메틸 2,3-디데옥시-3-플루오로-5-0-(4-페닐벤조일)-α-D-에리트로펜토푸라노시드(1a)를 출발 화합물로서 사용하여 합성하는 방법을 제공하는 것으로, 상기 메틸 글리코시드(1a)의 α- 및 β-아노머의 혼합물을 사용함을 특징으로 한다. 통상적으로, 본 발명에 따라, 하기 반응식 2에 도시된 바와 같이 α-클로라이드가 생성된다:

반응식 2

이러한 예에서 아노머적으로 상당히 순수한은 ＞90% 또는 바람직하게는 ＞95%, 예를 들면, 99% 아노머 순도, 즉, >90:10 또는 바람직하게는 >95:5, 예를 들면, >99:1의 α- 및 β-아노머 비(α:β)를 의미한다.

통상적으로, 본 발명의 방법에서, 메틸 글리코시드(1a)의 α- 및 β-아노머 비(α:β)는 30:70 내지 70:30이다.

통상적으로, 메틸 글리코시드의 상응하는 α-클로라이드로의 전환은 에테르 용매, 예를 들면, 디에틸 에테르 또는 디이소프로필 에테르 등 중에서 수행된다. 바람직하게는, 상기 전환은 디이소프로필 에테르 중에서 수행된다.

염소화를 위한 적합한 시약에는 HCl, Cl₂, 염화붕소, 염화마그네슘, 염화알루미늄, 트리알킬실릴 클로라이드, 삼염화인, 오염화인, 포스포러스 옥시클로라이드, 티오닐 클로라이드, 설푸릴 클로라이드, 사염화티탄, 염화아연, 아세틸 클로라이드 및 이들의 혼합물이 포함된다.

바람직하게는, 메틸 글리코시드(1a)를 HCl(g)로 처리함으로써 염소화가 수행된다.

본 발명의 방법은 어떠한 컬럼 크로마토그래피도 필요 없이 결정성 2,3-디데옥시-3-플루오로-5-0-(4-페닐벤조일)-α-D-에리트로펜토푸라노실 클로라이드(1b)의 생성을 가능하게 하여 수율, 합성 시간 및 전반적인 경제 면에서 개선을 초래한다.

더욱이, 본 발명의 방법은, 일반적으로 반응식 3에 도시된 바와 같이, 선행 기술 방법에서 필요로 하는 아노머의 분리가 필요 없이 2',3'-디데옥시-3'-플루오로 뉴클레오사이드에 대한 경로를 제공한다.

반응식 3

특히, 본 발명은 당 중간체 메틸 2,3-디데옥시 -3-플루오로-5-0-(4-페닐벤조일)-α-D-에리트로펜토푸라노시드(1a)의 아노머성 혼합물로부터 출발하고, 추가로, 임의로 보호된 구아닌 염기를 2,3-디데옥시-3-플루오로-5-0-(4-페닐벤조일)-α-D-에리트로펜토푸라노실 클로라이드(1b)와 커플링시켜 2-아세트아미노-6-클로로-9-(2',3'-디데옥시-3'-플루오로-5'-0-(4-페닐벤조일)-β-D-에리트로펜타푸라노실)-9H-푸린(1c)을 제공한 후, 이어서 탈보호 및 산화하는 단계를 포함하는, FLG의 제조방법을 제공하는 것으로, 상기 커플링 단계는 비효소적 방법에 의해 수행된다.

통상적으로, 구아닌 염기의 2-아민 관능기는 통상적인 아민 보호 그룹, 가장 바람직하게는 아세틸로 보호된다. 구아닌 유도체의 6-위치에는 바람직하게는 탈보호와 동시에 구아닌 케토 관능기로 산화되는 클로로 잔기를 포함한다. 바람직하게는, 구아닌 염기는 2-아세트아미도-6-클로로-9H-푸린이다.

상기 방법은 반응식 4에 도시되어 있으며, 실시예 1에 상세하게 기재되어 있다.

반응식 4

당 중간체 1a는 예를 들면, 상응하는 3-하이드록시 화합물로부터 문헌[참조: C. Bull. Soc. Chim. Fr., 1995, 132, 149]에 기술된 방법에 따라 3-위치에서의 플루오르화에 의해 제조될 수 있다. 대안적으로, 3-플루오로 화합물 1a는 유럽 특허 공보 제EP 625158호에 기재된 상응하는 5-0-피발로일 보호된 화합물로부터 표준 기술에 따라 5-0-피발로일 그룹을 원하는 4-페닐벤조일로 간단하게 대체함으로써 달성될 수 있다. 예를 들면, 상기 피발로일 그룹을, 메탄올 중의 나트륨 메톡사이드 또는 등가물과 같은 염기로 처리한 후, 5-하이드록시 그룹을 4-페닐벤조일의 활성화된 유도체, 예를 들면, 클로라이드 등으로 아실화시킴으로써 제거할 수 있다.

약간 용해가능한 푸린 염기를 뉴클레오사이드 기술 분야에서 통상적인 것과 같이 커플링(예를 들면, N₂하의 환류하에 디옥산 중의 헥사메틸디실라잔/NH₄SO₄와의 반응에 의해) 전에 트리메틸실릴 유도체로 전처리할 수 있다. 그러나, 바람직하게는, 푸린 염기를, 염, 예를 들면, 나트륨 염, 더욱 바람직하게는 칼륨 염으로서 반응시킨다. 대안적인 것은 국제 공개공보 제WO 00/08025호에 나타난 바와 같은 포스파조늄 염일 것이다.

커플링 반응을 위한 적합한 용매에는 유기 용매, 예를 들면, 아세토니트릴, 디옥산/CH₂Cl₂, DMSO, THF가 포함된다. 바람직한 용매는 DMF이다.

통상적으로, 본 발명의 방법에 따라 수득된 생성물 2-아미노-6-클로로-9-(2',3'-디데옥시-3'-플루오로-5'-0-(4-페닐벤조일)-β-D-에리트로펜타푸라노실)-9H-푸린은 컬럼 크로마토그래피의 개입 없이 다음 단계에서 사용가능하다.

본 발명의 방법은 추가로 커플링 후 후처리 동안에 하나 이상의 결정화를 포함할 수 있다. 이러한 결정화를 위한 통상적인 용매에는, 임의로 통상적인 필터 보조제와 함께, 아세트산, 에틸 아세테이트, 메탄올 및 아세톤이 포함된다.

본 발명의 방법에 의해 제조된 N-보호된-2-아미노-6-클로로-9-(2',3'-디데옥시-3'-플루오로-5'-0-(4-페닐벤조일)-β-D-에리트로펜타푸라노실)-9H-푸린은 나트륨 메틸레이트와의 반응과 같이 통상적인 기술에 의해 2 및 5' 위치에서 탈보호되어 FLG를 방출한다. 이후, FLG는 통상적인 기술, 예를 들면, 카르복실산과 함께 DCC/DMAP 커플링제를 사용하여 FLG 전구약물을 형성하기 위해 5'-위치에서 에스테르화될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 에스테르화는 국제 공개공보 제WO 99/09031호에 나타난 바와 같이 활성화된 L-락트산 유도체, 예를 들면, S-2-0-(N-보호된-L-발릴옥시)프로피온산과의 반응을 포함한다. 최종적으로, 탈보호에 의해 2',3'-디데옥시-3'-플루오로-5'-0-[2-L-발릴옥시)프로피오닐]-구아노신을 산출한다.

본 발명의 여러 양태들이 단지 예시적인 방식으로서 하기 실시예를 참조하여 이제 기술될 것이다.

실시예 1

2,3- 디데옥시 -3- 플루오로 -5-0-(4- 페닐벤조일 )-α-D- 에리트로 - 펜토푸라노 실 클로라이드(1b)

디이소프로필 에테르(8㎖)를 반응기에 충전시키고, -20℃로 냉각시키고, 메틸 2,3-디데옥시-3-플루오로-5-0-(4-페닐벤조일)-에리트로-펜토푸라노시드 1a(1g)의 1:1 α:β-혼합물을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 교반시키고, 내부 반응 혼도가 -1℃를 넘지 않도록 하는 속도로 HCl 가스를 공급하였다. 모든 고체가 용해되었을 때, HCl의 공급을 중단하였고, 약 15분 내에 생성물이 반응 용액으로부터 결정화되기 시작하였다. 이어서, 반응 혼합물을 2시간 동안 -20℃로 유지시켜 결정화를 완결하였다. 냉각된 반응 혼합물을 무수 대기하에서 여과하고, 수 개의 작은 분획(3 x 1.5㎖)의 차가운(-20℃) 디이소프로필 에테르로 세척하였다. 생성물을 실온에서 약간의 질소 스트림의 진공하에 건조시켰다. 수율은 0.91 g(90%)의 백색 결정성 고체였다.

2- 아세틸아미노 -6- 클로로 -9-(2',3'- 디데옥시 -3'- 플루오로 -5'-0-(4- 페닐벤조 일)-베타-D- 에리트로펜토푸라노실 )-9H- 푸린 (1c)

2-아세틸아미노-6-클로로-푸린(0.696g, 1.1당량) 및 칼륨 3급-부톡사이드(0.36g, 1.07당량)를 -25℃에서 DMF(12.5㎖) 용액을 함유한 반응기에 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 45분 동안 교반시키고, 이후 펜토푸라노실클로라이드 1b(1g, 1당량)를 고체로서 반응기에 첨가하고, -25℃에서 교반을 계속하였다. 1시간 후에, 차가운 반응 혼합물을 30㎖ 에틸 아세테이트로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과했다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트(11㎖)로 세척하고, 합해진 유기 상을 물(2 x 22㎖)로 세척하였다. 유기 상을 진공하에 최소 교반 용적으로 농축시키고, 아세트산(3.5㎖)을 30℃에서 첨가하고, 모든 에틸 아세테이트가 증발될 때까지 생성된 혼합물을 30℃에서 농축시켰다. 메탄올(3.7㎖)을 첨가하고, 생성된 현탁액을 -5℃로 냉각시키고, 수 시간 동안 교반시켜 결정화를 완결하였다. 결정을 여과하고, 작은 분획의 디이소프로필 에테르(총 용적 10㎖)로 수회 세척하였다. 생성물을 진공하에 45℃에서 12시간 동안 건조시켜 표제 화합물 1.07g(70%)을 수득하였다.

2',3'- 디데옥시 -3'- 플루오로구아노신 (1e)

방법 A.

단계 1

뉴클레오사이드 1c(1g, 1당량)를 고체로서 EtOH(95%, 8㎖) 중의 수산화나트륨(0.314g, 4당량) 용액에 첨가하고, 상기 혼합물을 70℃에서 교반시켰다. 2시간 후에 반응 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 디클로로메탄(30㎖)으로 희석했다. 생성된 현탁액을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터 케이크를 디클로로메탄(30㎖)으로 세척하였다. 합해진 유기 상을 수돗물로 2회 세척하고, 이후 유기 용매를 진공하에 증발시켜 중간체인 2-아미노-6-에톡시-9-(2',3'-디데옥시-3'-플루오로-β-D-에리트로펜토푸라노실)-9H-푸린 1d(0.475g, 90%)를 수득하였다.

단계 2

뉴클레오사이드 1d(1g, 1당량), 물(14㎖) 및 수산화리튬 일수화물(0.74g, 5당량)을 반응기에 충전시키고, 상기 반응물을 65℃로 가열했다. 신속한 LC로 완전한 전환(16 내지 24 시간)을 확인한 경우, 반응물을 약 30℃로 냉각시키고 6N HCl(약 2.9용적, 5당량)을 15분에 걸쳐 첨가하여 pH를 6.0 내지 6.2로 조절하고, 이 동안에 온도를 30 내지 35℃에서 유지시켰다. 상기 반응물을 5℃로 냉각시키고, 상기 온도에서 30분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 물(5㎖)로 세척하고, 진공하에 80℃에서 일정한 무게가 되도록 건조시켰다. 수율은 회백색 고체 0.77 g(85%)이었다. 단계 1 및 2의 합해진 수율은 76%이었다.

2',3'- 디데옥시 -3'- 플루오로구아노신 (1e)

(방법 B)

에탄올(7㎖), 2-메르캅토에탄올(0.54㎖, 4.66당량) 및 나트륨 메톡사이드(0.378g, 3.57당량)를 함유한 반응기에 뉴클레오사이드 1c(1g, 1당량)를 교반시키면서 한꺼번에 충전시켰다. 상기 반응 혼합물을 4시간 동안 재환류시키고, 이어서 실온으로 냉각시켰다. 표제 화합물의 나트륨염을 여과하고, 필터 케이크를 에탄올(6.1㎖)로 주의하여 세척하였다. 필터 케이크를 반응기로 다시 옮기고, 상기 반응기를 에탄올(7.9㎖), 물(2.65㎖) 및 아세트산(0.075㎖, 0.8당량)으로 충전시켰다. 반응 혼합물을 약 30분 동안 실온에서 교반시키고, pH 값이 7 아래가 되지 않도록 확인하였다. 고체를 여과하고, 에탄올/물 3/1의 혼합물(2.83㎖)로 세척하였다. 에탄올 세척 수용액이 필터 케이크의 표면보다 낮아지면, 순수한 에탄올(1.44㎖)로 세척을 계속하였다. 얻어진 생성물을 87℃의 오븐에서 진공하에 밤새 건조시켰다. 표제 화합물은 백색 고체(0.395g, 75%)로서 수득되었다.

비교예 1

상기 인용된 유럽 특허 공보 제EP 450 585호의 "최적" 당 중간체, 즉 메틸-5'-0-피발로일-2',3'-D-에리트로펜토푸라노시드를 2-아세트아미도-6-클로로푸린에 커플링시킴으로써 FLG를 제조하였다. 커플링 반응 전에, 2-아세트아미도-6-클로로푸린 염기(15.0 g, 70.9 mmol)를, 유럽 특허 공보 제EP 540 585호의 실시예 53에서의 비스-트리메틸실릴화 피리미딘 염기와 유사하게, 비스-트리메틸실란으로서 가용화시켰다.

이렇게 전처리된 푸린 염기를 디옥산(400㎖)에 용해시키고, 40㎖ CH₂Cl₂에 용해시킨 메틸 5-0-피발로일-2,3-디데옥시-3-플루오로-α-D-에리트로펜타푸라노시드(12g, 51.2mmol)를 첨가한 후, 트리메틸실릴트리플레이트(11.5g, 51.7mmol)를 첨가하였다. 반응을 N₂ 대기하에 실온에서 수행하였다. 반응되지 않은 염기를 메탄올:트리에틸아민의 2:1 혼합물로 침전시키고 여과했다. 생성물을 함유하는 용액을 농축시키고, 산출된 조 생성물을 에틸 아세테이트에 재용해시키고, 10% 아세트산으로 세척한 후, 10% NaC0₃으로 세척하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 톨루엔에 용해시키고, 에틸 아세테이트:헥산(1:1)으로 용출되는 실리카겔 상에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다.

비교예 1에서 커플링 반응의 수율은 25 내지 33%이며, 이것은 상기 실시예 1에서 예시된 바와 같이 본 발명에 따라 제조되었을 때의 48% 수율의 FLG와 비교되어야 한다. 더욱이, FLG를 본 발명의 방법에 따라 제조하였을 때와는 다르게 선행 기술에서는 컬럼 크로마토그래피가 필요하며, 더욱 더 중요하게, 본 발명의 방법에서는 메틸 글리코시드 1의 α/β-혼합물이 사용되는 반면에 비교예 1에서는 순수한 α-아노머가 사용되는데, 이는 α- 및 β-아노머의 분리 단계가 염기에 커플링되기 전에 수행되어야 하며, 상기 분리에서 2-F-당 중간체의 약 50%, 즉, 원하지 않는 β-아노머 배열을 갖는 부분이 폐기됨을 의미한다는 것을 주지해야 한다.

Claims

아노머적으로(anomerically) 상당히 순수한 2,3-디데옥시-3-플루오로-5-0-(4-페닐벤조일)-α-D-에리트로펜토푸라노실 클로라이드(1b)를, 상응하는 메틸 글리코시드, 메틸 2,3-디데옥시-3-플루오로-5-0-(4-페닐벤조일)-에리트로-펜토푸라노시드로부터 합성하는 방법으로서,
상기 메틸 글리코시드(1a)의 α- 및 β-아노머의 혼합물이 출발 화합물로서 사용됨을 특징으로 하는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 메틸 2,3-디데옥시-3-플루오로-5-0-(4-페닐벤조일-에리트로-펜토푸라노시드의 α- 및 β-아노머가 30:70 내지 70:30의 α:β 비로 존재하는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 클로라이드로의 변환이 에테르 용매 중에서 수행되는, 방법.
제3항에 있어서, 상기 에테르 용매가 디에틸 에테르 또는 디이소프로필에테르인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 클로라이드로의 변환이 HCl(g)로의 처리에 의해 수행되는, 방법.
제1항에 있어서,
(i) 2,3-디데옥시-3-플루오로에리트로-5-0-(4-페닐벤조일)-α-D-펜토푸라노실 클로라이드(1b)를 임의로 보호된 구아닌 염기와 커플링시키는 단계(여기서, 상기 커플링은 비효소적 방법에 의해 수행된다), 및
(ii) 염기로의 처리에 의해 4-페닐벤조일 그룹을 제거하는 단계
를 추가로 포함하는, 방법.
제6항에 있어서, 상기 임의로 보호된 구아닌 염기가 칼륨염 형태인, 방법.
제6항 또는 제7항에 있어서, 상기 임의로 보호된 구아닌 염기가 2-아세트아미노-6-클로로-9H-푸린인, 방법.
제8항에 있어서, 수득된 생성물, 2-N-보호된-6-클로로-9-(2',3'-디데옥시-3'-플루오로-5'-0-(4-페닐벤조일)-β-D-에리트로펜타푸라노실)-9H-푸린이 컬럼 크로마토그래피의 개입 없이 다음 단계에서 사용가능한, 방법.
제6항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 있어서, 2-N-보호된-6-클로로-9-(2', 3'-디데옥시-3'-플루오로-5'-0-(4-페닐벤조일)-β-D-에리트로펜타푸라노실)-9H-푸린을 결정화시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제10항에 있어서, 상기 결정화를 위한 용매가 아세트산, 에틸 아세테이트, 메탄올 또는 아세톤을 포함하는, 방법.
제7항 내지 제11항 중의 어느 한 항에 있어서,
(i) 염기로의 처리에 의해 2-아미노 관능기로부터 아세틸 그룹을 제거하는 단계, 및
(ii) 6-위치에서의 케토 관능기로의 산화 단계
를 추가로 포함하는, 방법.
제7항 내지 제12항 중의 어느 한 항에 있어서, S-2-0-(N-보호된 발릴)프로피온산과의 반응에 의한 5'-위치에서의 에스테르화 단계 및 이어서 N-보호 그룹을 제거하여 2',3'-디데옥시-3'-플루오로-5'-0-[S-2-(L-발릴옥시)프로피오닐]구아노신을 수득하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.