KR20130126671A - 전립선 관련 항원 분자로부터 유래된 hla 결합 펩티드 및 이의 사용방법 - Google Patents

Abstract

전립선암의 면역요법 치료의 방법과 조성물이 개시된다. 더 구체적으로 면역보강제(immunological adjuvant)가 첨가되든 아니든, 전립선 관련 항원 분자에서 유래하는 HLA 결합 펩티드를 함유하는 조성물을 투여하는 전립선암 환자 치료 방법이 개시된다.

Description

전립선 관련 항원 분자로부터 유래된 HLA 결합 펩티드 및 이의 사용방법{HLA-BINDING PEPTIDES DERIVED FROM PROSTATE-ASSOCIATED ANTIGENIC MOLECULES AND METHODS OF USE THEREOF}

전립선암의 면역요법 치료를 위한 방법 및 조성물이 공개된다. 더 구체적으로 면역보강제(immunological adjuvant)가 첨가되든 아니든, 전립선 관련 항원 분자에서 유래하는 HLA 결합 펩티드를 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 전립선암 환자 치료 방법이 공개된다.

전립선암은 남성에게 가장 흔한 악성질환의 하나로 2006년 유럽에서 346,000명의 환자가 발생하여 87,000명이 사망했다고 보고되었다. 이것은 미국에서 가장 일반적으로 진단되는 암으로 남성의 암 관련 사망 원인 중 두 번째이다. 전립선 특이 항원(PSA) 모니터링 검사법(monitoring assay)의 민감도 향상으로 인해 전립선암은 수술과 방사선과 같은 근치적 치료를 시행할 수 있는 좀 더 조기의 임상적 국소 병기에 발견된다. 그럼에도 불구하고 이들 환자들은 아무 증상 없이 10년 이내에 PSA가 증가(생화학적 재발로 알려짐)할 확률이 10 내지 60%나 된다. 생화학적 재발은 국소적으로 재발한 암이 숨어 있거나 아직 발견되지는 않았지만 전이가 시작됨을 나타내는 경우가 대부분이다.

이러한 경우 치료 옵션으로는 외부 방사선 치료와 안드로젠 차단술(호르몬 절제라고도 함)이 있다. 그러나 어떠한 치료 접근법도 효과가 없는 것으로 증명되었으며 특히 환자의 장기 생존율을 늘이는 부분에서 그러하다. 더욱이 두 치료법 모두 많은 부작용(심혈관 질환의 위험성 증가, 골다공증, 체중 증가, 뇌인식 저하, 요도협착 발병, 성욕 상실 및 불임, 골다공증과 관련한 골격 칼슘염의 감소 위험성 및 병적 골절의 위험성의 현저한 증가)에 의해 제한을 받는다. 또한 안드로젠 차단은 안드로젠과 무관한 신생물 클론이 조기에 발생하게 하여 이후 장기 종양 진행이 더욱 가속화할 우려가 일부 있다. 더욱이 안드로젠 차단 요법의 적절한 개시 시기가 논란이 되고 있는데 특히 낮은 PSA 수치나 장기 평균 배가 시간(DT)에 의해 특징 되는 생화학적 재발에 대해 그러하다. 이러한 위험들을 고려하면 안드로젠 차단 요법과 외부 방사선 요법은 초기 생화학적 재발을 보이는 환자의 경우 치료적 가치가 의문시되고 있다.

종양 관련 항원(TAA)은 잠재적인 암 면역요법제로 밝혀진 바 있다. 전립선에 관련된 것들을 포함하여 서로 다른 다양한 종양 및 조직 타입에 특이적인 많은 TAA가 동정된 바 있다. 면역 치료 후 특정 T-세포 반응의 증가뿐만 아니라 암환자의 전립선 종양 조직, 종양 배액 림프절 및 말초 순환계 내의 TAA에 특이적인 T-세포의 동정은 전립선암 치료에 유용할 수 있다.

전립선 특이 TAA의 체내 항원 제시를 위한 다양한 시스템이 임상시험에서 시험되어 왔는데 다음과 같은 것들이 포함된다: (1) 자가(autologous) 또는 동종이계(allogeneic) 종양 세포를 사용하는 백신 요법; (2) 과립구-대식세포 집락 자극 인자를 발현하도록 조작된 자가 종양 세포; (3) HLA I 및 II 결합 펩티드로 탈체( ex vivo ) 감작된 수지상 세포; (4) 암-mRNA 형질 주입 수지상 세포 및 (5) TAA를 발현하는 재조합 백신 바이러스 등. 그러나 대부분의 이러한 연구들은 안드로젠 내성 전립선 암종 환자에게 시행되었다. 안드로젠 차단 요법 시행 전에 생화학적 재발이 된 안드로젠-민감성 환자를 대상으로 한 백신 요법에 대해서는 정보가 거의 없다.

그러므로 전립선암 환자, 특히 초기 생화학적 재발을 보이는 환자들에 대한 새로운 치료 옵션들이 필요하다.

본 발명은 면역요법 사용을 위한 조성물과 그 사용법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 암, 더 구체적으로 전립선암, 더더욱 구체적으로 안드로젠 차단 요법을 시행 받은 적이 없는 초기 생화학적 재발 환자를 대상으로 한 안드로젠-민감성 전립선암의 면역요법에 관에 관한 것이다. 본 발명은 또한 HLA 클래스 I 및 클래스 II의 HLA 결합 펩티드의 조성물에 관한 것이며, 상기 HLA 결합 펩티드는 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원, 전립선 특이 막 항원, 서비빈(survivin), 프로스테인(prostein) 및 일시적 수용체 전위-p8(TRP-p8) 등의 전립선 관련 항원 분자에서 유래한다.

일 양상으로 본 발명은 적어도 1종의 HLA 결합 펩티드를 함유하는 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기 HLA 결합 펩티드는 전립선 관련 항원 분자에서 유래하는 항원결정기(epitope)를 포함한다.

또 다른 양상으로 본 발명은 적어도 1종의 HLA 결합 펩티드를 함유하는 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기 HLA 결합 펩티드는 전립선 특이 항원, 전립선 줄기세포 항원, 전립선 특이 막 항원, 서비빈(survivin), 프로스테인(prostein) 및 일시 수용체 전위-p8로 구성된 군에서 선택된 전립선 관련 항원 분자에서 유래한 항원결정기를 포함한다.

본 발명의 특히 바람직한 양상은 다음의 경우 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드를 함유하는 조성물에 관한 것이며, 여기서 (a) 상기의 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드 중 적어도 하나는 서열번호 23에 따른 항원결정기를 포함하는 펩티드이거나 HLA-DR 항원 관련 불변 사슬의 80개의 N-말단 아미노산을 포함하는 서열번호 23의 융합 단백질이며, (b) 상기의 적어도 2종의 펩티드 중 적어도 하나는 서열번호 1 내지 서열번호 11, 서열번호 13 내지 서열번호 22 및 서열번호 24 내지 서열번호 42로 구성된 군에서 선택된 항원결정기를 포함하는 펩티드이다.

바람직하게는 본 발명에 따른 조성물은 (b)에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드를 포함한다.

본 발명에 따른 조성물이 서열번호 23에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드, 바람직하게는 적어도 4종의 펩티드 및 더욱 바람직하게는 10종의 펩티드를 포함하며, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14로 구성된 군에서 선택된 펩티드를 포함하며 및 서열번호 15 내지 서열번호 22 및 서열번호 24 내지 서열번호 42로 구성된 군에서 선택된 적어도 1종의 펩티드를 포함하는 것이 바람직하다.

추가 펩티드가 치료 대상자의 HLA 세트에 따라 선택되는 본 발명의 조성물이 또한 바람직하다.

본 발명에 따른 조성물이 서열번호 23에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 4종의 펩티드를 포함하고, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14의 군에서 선택된 1종의 펩티드를 포함하고 서열번호 15 내지 서열번호 22 및 서열번호 24 내지 서열번호 42로 구성된 군에서 선택된 적어도 1종의 펩티드를 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 펩티드 중 적어도 1종은 클래스 II 펩티드인 본 발명에 따른 조성물이 바람직하다.

또 다른 양상은 면역보강제, 또는 예를 들면 GM-CSF 및 이미퀴모드(imiquimod)와 같은 2종 또는 3종의 면역보강제의 혼합물을 더욱 포함하는 본 발명에 따르는 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따르는 조성물에 있어서 상기 면역보강제가 톨 유사 수용체 작용제(Toll like receptor agonist), 예를 들면 톨 유사 수용체-7 작용제(Toll like receptor-7 agonist)를 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명에 따른 조성물이 적어도 1종의 항원 제시 세포, 예를 들면 펩티드로 감작되거나 탑재된 자가 수지상 세포와 같은 수지상 세포를 함유하는 경우도 바람직하다.

또 다른 양상은 전립선암 치료의 용도를 위한 본 발명에 따르는 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따르는 조성물에 있어서 상기 전립선암이 안드로젠-민감성이고 환자가 안드로젠 차단 요법을 시행받지 않은 것이 바람직하다.

본 발명에 따르는 조성물에 있어서 상기 전립선암이 안드로젠-비민감성인 것이 더욱 바람직하다.

그 다음 또 다른 양상은 환자에게 본 발명에 따른 조성물의 유효 용량을 투여하는 것을 포함하는 전립선암의 치료 방법에 관련된다.

본 발명에 따르는 방법에 있어서 상기 전립선암이 안드로젠-민감성이고 환자가 안드로젠 차단 요법을 시행받지 않은 것이 바람직하다.

본 발명에 따르는 방법에 있어서 상기 전립선암이 안드로젠-비민감성인 것이 더욱 바람직하다.

더 구체적인 양상으로 본 발명의 조성물은 서열번호 24, 서열번호 7, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14, 또는 서열번호 15 내지 서열번호 23, 또는 서열번호 25 내지 서열번호 40에 따른 항원결정기를 포함한다.

더 구체적인 양상으로, 본 조성물은 적어도 전립선 관련 항원 분자로부터 유래된 항원결정기를 포함하는 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드를 포함하며, 여기서 상기의 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드 중 적어도 1종은 HLA 클래스 I 펩티드이고, 적어도 2종의 HLA 펩티드 중 적어도 1종은 HLA 클래스 II 펩티드이다.

본 발명의 또 다른 양상은 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드를 포함하는 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기 HLA 결합 펩티드 중 적어도 1종은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10 및 서열번호 11로 구성된 군에서 선택된 항원결정기를 포함하는 HLA 클래스 I 펩티드이며 및 상기 HLA 결합 펩티드 중 적어도 1종은 서열번호 13 및 서열번호 14로 구성된 군에서 선택된 항원결정기를 포함하는 HLA 클래스 II 펩티드이다.

본 발명의 또 다른 양상은 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드를 포함하는 조성물에 관한 것이며, 여기서 (a) 상기의 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드 중 적어도 1종은 서열번호 24, 서열번호 15 내지 서열번호 23 및 서열번호 25 내지 서열번호 37로 구성된 군에서 선택된 항원결정기를 포함하는 펩티드이며, (b) 상기의 적어도 2종의 펩티드 중 적어도 1종은 서열번호 7, 서열번호 1 내지 서열번호 6, 서열번호 8 내지 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 38 내지 서열번호 42로 구성된 군에서 선택된 항원결정기를 포함하는 펩티드이다.

본 발명의 또 다른 양상은 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드를 포함하는 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기의 HLA 결합 펩티드 중 적어도 1종은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10 및 서열번호 11로 구성된 군에서 선택된 항원결정기로 본질적으로 구성된 HLA 클래스 I 펩티드이며 및 상기 HLA 결합 펩티드 중 적어도 1종은 서열번호 13 및 서열번호 14로 구성된 군에서 선택된 항원결정기로 본질적으로 구성된 HLA 클래스 II 펩티드이다.

본 발명의 또 다른 양상은 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드를 포함하는 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기의 HLA 결합 펩티드 중 적어도 1종은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10 및 서열번호 11로 구성된 군에서 선택된 항원결정기로 구성된 HLA 클래스 I 펩티드이며 및 상기 HLA 결합 펩티드 중 적어도 1종은 서열번호 13 및 서열번호 14로 구성된 군에서 선택된 항원결정기로 구성된 HLA 클래스 II 펩티드이다.

본 발명의 또 다른 양상은 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드를 포함하는 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기의 HLA 결합 펩티드 중 적어도 1종은 HLA-A*02 이외의 다른 대립 유전자(allele)에 결합하는 HLA 클래스 I 펩티드이다.

본 발명의 또 다른 양상은 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드를 포함하는 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기 HLA 결합 펩티드 중 적어도 1종은 HLA-A*24, HLA-A*11, HLA-B*41, HLA-B*51 또는 HLA-C의 군에서 선택된 대립 유전자에 결합하는 HLA 클래스 I 펩티드이다.

본 발명의 또 다른 양상은 적어도 6종의 HLA 결합 펩티드를 포함하는 조성물에 관한 것이며, 여기서 (a) 적어도 1종의 HLA 결합 펩티드가 전립선 특이 항원 유래 항원결정기를 포함하며; (b) 적어도 1종의 HLA 결합 펩티드는 전립선 줄기세포 항원 유래 항원결정기를 포함하며; (c) 적어도 1종의 HLA 결합 펩티드는 전립선 특이 막 항원 유래 항원결정기를 포함하며; (d) 적어도 1종의 HLA 결합 펩티드는 서비빈 유래 항원결정기를 포함하며; (e) 적어도 1종의 HLA 결합 펩티드가 프로스테인 유래 항원결정기를 포함하며; (f) 적어도 1종의 HLA 결합 펩티드는 일시적 수용체 전위-p8 유래 항원결정기를 포함한다.

본 발명의 또 다른 양상은 상기에서 설명된 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물은 (b)에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드를 포함한다.

본 발명의 또 다른 양상은 상기에서 설명된 조성물에 관한 것으로 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14 , 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42에 따른 HLA 결합 펩티드를 포함한다.

본 발명의 또 다른 양상은 상기에서 설명한 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 펩티드를 포함하고 선택적으로 서열번호 15 내지 서열번호 42로 구성된 군에서 선택된 적어도 1종의 펩티드를 포함한다.

본 발명의 또 다른 양상은 상기에서 설명한 조성물에 관한 것으로, 여기서 상기 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드, 바람직하게는 적어도 4종의 펩티드, 더욱 바람직하게는 10종의 펩티드를 포함하고 서열번호 15 내지 서열번호 42로 구성된 군에서 선택된 적어도 1종의 펩티드를 포함한다.

본 발명의 또 다른 양상은 상기에서 설명한 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드, 바람직하게는 적어도 4종의 펩티드, 더욱 바람직하게는 10종의 펩티드를 포함하고 서열번호 15 내지 서열번호 42로 구성된 군에서 선택된 적어도 1종의 펩티드를 포함하며, 추가 펩티드는 치료 대상자의 HLA 세트에 따라 선택된다.

본 발명의 또 다른 양상은 상기에서 설명한 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15 내지 서열번호 42에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 4종의 펩티드를 포함한다.

본 발명의 또 다른 양상은 앞서 설명한 조성물의 어느 하나에 관계되는 것으로, 여기서 상기 펩티드 중 적어도 1종은 클래스 II 펩티드이다.

본 발명의 또 다른 양상은 면역보강제, 또는 예를 들면 GM-CSF 및 이미퀴모드와 같은 2종 또는 3종의 면역보강제의 혼합물을 더욱 포함하는 앞서 설명한 조성물의 어느 하나에 관한 것이다. 면역보강제는 모든 알려진 면역보강제일 수 있으며 톨 유사 수용체-7 작용제 이미퀴모드, 뮤신-1-mRNA/프로타민 복합체 및 사이토카인 과립구 대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF)를 포함한다.

그 다음 본 발명의 추가 양상은 면역보강제를 추가하든 하지 않든, 여기에 공개된 조성물 중 임의의 것을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 전립선암의 치료 방법에 관한 것이다. 상기 전립선암은 안드로젠-민감성일 수 있으며 환자는 안드로젠 차단 요법을 시행 받은 적이 없을 수 있다.

계속해서 본 발명의 또 다른 양상은 환자에게 안드로젠-민감성 또는 안드로젠-비민감성 전립선암을 치료하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 면역보강제를 첨가된든 아니든, 앞서 설명된 조성물 중 임의의 것을 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

도 1은 실시예 1에서 사용된 HLA 결합 펩티드 칵테일 내의 HLA 결합 펩티드가 포함하는 다양한 항원결정기를 보여주는 것으로 전립선 관련 항원 분자에서 유래하는 13가지 항원결정기를 포함한다. 서열번호 1에서 서열번호 12까지에 따른 항원결정기는 HLA 클래스 I 항원결정기, 즉, HLA-A*201 제한 항원결정기다. 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 항원결정기는 HLA 클래스 II 항원결정기다.
도 2는 연구 그룹에 대한 DT 통계를 전체적으로 보여준다. DT는 월 단위로 표시된다. "n"은 환자의 통계가 각 카테고리에 포함된 환자의 수를 나타낸다. "%"는 각 카테고리에 해당하는 환자의 백분율을 나타낸다. 환자 5의 배가 시간은 환자의 음의 배가 시간으로 인해 본 연구의 종료 시점에 기하 평균이나 범위에 포함되지 않았다.
도 3은 실시예 1에서 사용된 HLA 결합 칵테일로 환자를 치료하기 전, 중간 및 후의 DT 변화를 보여준다. 양의 수치는 PSA 배가 시간을 나타내는 것으로 환자의 PSA 수치가 증가하고 있음을 나타낸다. 음의 수치는 PSA 반감기를 나타내는 것으로 환자의 PSA 수치가 감소하고 있음을 나타낸다.
도 4는 면역보강제의 유형에 의해 구분된 치료의 임상반응을 보여준다. 임상적 반응이 없는 경우는 "-" 부호로 나타낸다. 중간에 PSA 감소나 안정화 후 PSA가 가속적으로 상승한 경우는 "+/-" 부호로 나타낸다. 중간에 PSA 상승 후 PSA 감소 및 PSA DT 증가가 있는 경우는 "-/+" 부호로 나타낸다. PSA DT의 증가는 "+" 부호로 나타낸다.
도 5는 몬타니드(montanide) 내에서(그러나 보강제나 온열요법에서는 아닌) 펩티드를 투여받는 환자의 PSA 수치를 나타낸다.
도 6은 뮤신-1-mRNA/프로타민 복합체가 첨가된 몬타니드 내에서 펩티드를 투여받는 환자의 PSA 수치를 보여준다.
도 7은 온열요법을 사용하여 몬타니드 내에서 펩티드를 투여받는 환자의 PSA 수치를 나타낸다.
도 8은 GM-CSF를 사용하여 몬타니드 내에서 펩티드를 투여받는 환자의 PSA 수치를 나타낸다.
도9는 이미퀴모드와 함께 몬타니드 내에서 펩티드를 투여받는 환자의 PSA 수치를 나타낸다.
도 10은 제84일에 기준선으로부터의 PSA 값 변화를 백분율로 보여준다.
도 11은 백신접종 기간 중의 PSA 값 변화를 백분율로 보여준다.
도 12는 백신접종 후 각 펩티드에 반응하는 T-세포를 갖는 환자의 수를 보여준다.
도 13은 환자 번호 15와 환자 번호 26의 PBMC에서 유래한 CD4+ T-세포의 PSMA 459-473 항원결정기와 서비빈 97-111 항원결정기에 대한 특이도를 보여준다. PSMA: PSMA 459-473 항원결정기. Surv: 서비빈 97-111 항원결정기.
도 14는 클론 Pro26_1 C의 펩티드 반응성을 보여준다. PMA/이오노마이신 = 항원 독립적인(antigen-independent) 비특이적 활성화; 서비빈(II): 서비빈 97-111 항원결정기로 자극; PSMA(II): PSMA 459-473 항원결정기로 자극. 모든 반응 세포는 CD4 양성이다.
도 15는 클론 Pro15_10_O의 펩티드 반응성을 보여준다. PMA/이오노마이신 = 항원 독립적인 비특이적 활성화; 서비빈(II): 서비빈 97-111 항원결정기로 자극; PSMA(II): PSMA 459-473 항원결정기로 자극. 모든 반응 세포는 CD4 양성이다.
도 16은 전장 서비빈 또는 서비빈 97-111 항원결정기로 시발된 수지상 세포에 대한 CD4+ 서비빈 특이 T-세포 클론 Pro15_"D"의 반응의 특징을 보여준다. 재조합 서비빈 단백질이나 서비빈 97-111 항원결정기로 배양된 미성숙 수지상 세포는 백신 접종 환자의 서비빈 특이 T-세포에 의해 인식됨이 세포내 사이토카인 염색에 의해 관찰된다. 이들 결과에 따르면 서비빈은 수지상 세포 내에서 프로테이나아제에 의해 자연적으로 가공되며 서비빈 97-111 항원결정기는 가공 기작에 의해 파괴되지 않는 것으로 생각된다. 또한 이들 CD4+ T-세포는 사이토카인 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2를 분비하고, CD40 리간드(CD154)의 표면 발현을 가지며, CD107a의 표면 발현에 의해 나타나는 과립감소가 일어나기 때문에 다기능적이다. 표시된 T-세포 반응은 T-세포가 무관한 단백질 RAP80, 또는 HIV-001 펩티드로 배양된 수지상 세포에 의해서는 활성화되지 않기 때문에 항원 특이적이다.
도 17은 전장 서비빈, 서비빈 97-111 항원결정기, 또는 PSMA 459-473 항원결정기로 시발된 수지상 세포에 대한 CD4+ 서비빈 특이 T-세포 클론 Pro26_10_C의 반응을 보여준다. 재조합 서비빈 단백질, 서비빈 97-111 항원결정기 및 PSMA 459-473 항원결정기로 배양된 미성숙 수지상 세포는 백신 접종 환자의 서비빈 특이 T-세포에 의해 인식됨이 세포내 사이토카인 염색에 의해 관찰된다. 서비빈과 PSMA 항원결정기 모두에 반응하지만, T-세포 반응은 서비빈 항원결정기를 사용한 자극 반응에 더 강했다. 이들 CD4+ T-세포는 사이토카인 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2를 분비하고, CD40 리간드(CD154)의 표면 발현을 가지며, CD107a의 표면 발현에 의해 나타나는 과립감소가 일어나기 때문에 다기능적이다. 표시된 T-세포 반응은 T-세포가 무관한 단백질 RAP80으로 배양된 수지상 세포에 의해서는 활성화되지 않기 때문에 항원 특이적이다.
도 18은 전장 PSMA 단백질, 프로테이나아제 K로 처리된 PSMA 단백질, 또는 프로테이나아제 K로 처리된 서비빈 단백질로 시발된 수지상 세포에 대한 CD4+ 서비빈 특이 T-세포 클론 Pro26_10_C의 반응을 보여준다.
도 19는 전장 서비빈, 서비빈 97-111 항원결정기, 전체 크기의 PSMA, 또는 PSMA 459-473 항원결정기로 배양된 고정된 수지상 세포에 대한 CD4+ 서비빈 특이 T-세포 클론 Pro26_10_C의 반응을 보여준다. 서비빈 97-111 항원결정기(그러나 전장 서비빈은 해당되지 않음)로 배양된 고정된 수지상 세포는 백신 접종 환자의 항원 특이 T-세포에 의해 인식됨이 세포내 사이토카인 염색에 의해 관찰된다. 이러한 사실로 전장 서비빈은 항원이 되기 위해서는 항원 제시 세포에 의해 절단되어야 함이 확인된다.
도 20은 전장 서비빈, 서비빈 97-111 항원결정기, 전장 PSMA, 또는 PSMA 459-473 항원결정기로 시발된 수지상 세포에 대한 CD4+ PSMA 특이 T-세포 클론 Pro26_10_D의 반응을 보여준다. PSMA 459-473 항원결정기로 배양된 미성숙 수지상 세포는 백신 접종 환자의 항원 특이 T-세포에 의해 인식됨이 세포내 사이토카인 염색에 의해 관찰된다. 이들 CD4+ T-세포는 사이토카인 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2를 분비하고, CD40 리간드(CD154)의 표면 발현을 가지며, CD107a의 표면 발현에 의해 나타나는 과립감소가 일어나기 때문에 다기능적이다. 표시된 T-세포 반응은 T-세포가 서비빈 또는 서비빈 97-111 항원결정기로 배양된 수지상 세포에 의해서는 활성화 되지 않기 때문에 항원 특이적이다.
도 21은 서로 다른 HLA-DR 대립유전자들(alleles)을 발현하는 몇몇 종양 세포주가 환자 유래 PBMC에 의해 인식됨을 보여준다(환자의 Pro26 및 Pro15에 대해 관찰됨). 환자들은 서비빈 97-111로 백신접종 후 다클론 T-세포 반응을 생성한다. 서비빈 97-111은 다음과 같은 여러 HLA 클래스 II 대립유전자들에 아무렇게나 결합하는 것으로 보인다: DR1(왕(Wang) 등을 또한 참고); DQ5(왕 등에 의해 시험되지 않음); DR11(왕 등을 또한 참고); 또는 DRB3(왕 등, 2008과 대비, 표 1). 서비빈 97-111의 기능적 제시는 여러 HLA 클래스 II 분자(TNF-α 생산)의 맥락에서 가능하다. HLA 클래스 I(HLA-A, B, C)의 경우, 원칙적으로 또한 세 개의 서로 다른 유전자 좌위(locus)가 세포 표면에 기능적 클래스 II 분자를 발현하는 HLA 클래스 II, 즉 HLA-DQ, HLA-DP 및 HLA-DR에 대해 발견될 수 있다. 클래스 I 분자는 세 개 모두의 유전자에서 불변인 중쇄(-A, -B, -C) 및 β-2-미크로글로불린으로 구성된다. 그럼에도 불구하고 클래스 II 분자들은 가변 사슬 2개(α 및 β)로 구성된다. 그러므로 정교한 유전형 결정은 언제나 클래스 II로 복잡하게 된다. 그림에는 항체 결합에 근거한 소위 혈청 타입이 나와 있다. 그러므로 예를 들면 "DQ3"은 보통 함께 발견되고 특정 항체와 함께 반응하는 HLA-DQ α 및 β 사슬의 서로 다른 대립유전자로 구성된다. 도면의 세포들은 다음과 같다: AL = E418 EBV 변형 B-세포주(Human Immunology Volume 51, Issue 1, November 1996, Pages 1322); LAM = B 림프종 세포주(Oncogenomics 19 September 2002, Volume 21, Number 42, Pages 6549-6556); HO301 = EBV 변형 B 세포주(The Journal of Immunology, 1998, 160: 3363-3373); BM15 = Dr11 + APC 세포주(The Journal of Immunology, 2004, 173: 1876-1886); MGAR = 동종접합성 B-LCL(Gene Therapy, 2004 11, 1408-1415); LG2-EBV = 자가 B 세포주(Cancer Immunity, Vol. 2, p. 9(19 July 2002)); EMJ = B 림프아구 세포주(ECACC NO: 8602103 IHW Number 9097: and Hum Immunol. 1980 Dec; 1(4):36-38).

본 발명은 전립선 조직 및/또는 전립선 종양에 특이적인 항원 펩티드의 사용을 통한 전립선 암세포에 대한 면역 반응 조작에 사용하는 조성물과 방법에 대한 것이다.

면역 반응을 자극하려면 호스트 면역계가 외래(foreign)라고 인식하는 항원이 존재해야 한다. 최근 몇 년 사이에, (1) 전립선 조직이나 전립선 종양에서 특이적으로 발현되고; (2) T-세포에 의해 인식되는 다양한 항원이 성공적으로 동정되었다. 이러한 항원들은 HLA 분자 및 펩티드의 복합체로서 항원제시세포(APC)에서 발현되면 T-세포를 자극하고 전립선 암세포에 대한 항원 특이 T-세포 반응을 유도할 수 있으며 궁극적으로 종양 세포 용균에 이르게 된다. 예를 들면, 단백질 서비빈의 다양한 항원결정기는 전립선 TAA로 인식되었다. 전립선 특이적인 TAA의 발견과 특징으로 인해 종양 성장에 관여하는 숙주의 면역계를 사용할 수 있는 가능성이 이제 높아졌다. 암을 면역요법으로 치료하기 위해 면역계의 체액성 및 세포성 공격무기를 모두 이용하는 다양한 기작이 현재 연구되고 있다.

특이적인 세포성 면역 반응 요소들은 종양 세포를 특이적으로 인식하고 파괴하는 능력이 있다. 종양 침투 세포 집단이나 말초 혈액에서 CD8+ 세포 독성 T-세포(CTL)를 분리하면 이들 세포가 암에 대한 자연적인 면역 방어에 있어서 중요한 역할을 하는 것을 알 수 있다. 세포기질에 위치한 단백질이나 결함이 있는 리보솜 산물(DRIP)에서 유래하는 보통 8 내지 10개의 아미노산 잔기의 주조직 적합성 복합체(MHC) 함유 펩티드의 클래스 I분자를 인식하는 CD8+ T-세포가 특히 이 반응에서 중요한 역할을 한다(Schubert U, Ant LC, Gibbs J, Norbury CC, Yewdell JW, Bennink JR.; Rapid degradation of a large fraction of newly synthesized proteins by proteasomes; Nature 2000; 404(6779):770-774)).

항원은 주조직 적합성 복합체(MHC) 분자의 2종의 주요 클래스인 MHC 클래스 I 및 MHC 클래스 II 중 하나를 통해 제시된다. 사람에게 있어서 MHC 분자는 사람 백혈구 항원(HLA) 분자라고 불린다. MHC 분자에는 두 가지 클래스가 있다: 주로 내생성, 세포기질, 또는 핵 단백질의 단백질 가수 분해 분할로 생긴 펩티드인 DRIP를 제시하는 핵을 가진 대부분의 세포에서 발견되는 MHC 클래스 I 분자와 더 큰 펩티드이다. 그러나 엔도솜 구획에서 유래하거나 외인성 펩티드도 또한 MHC 클래스 I 분자에서 자주 발견된다. 이러한 클래스 I 제시의 비 전통적인 방식은 문헌에서 교차 제시(cross-presentation)라고 불린다. MHC 클래스 II 분자는 주로 전문 항원 제시 세포(APC)에서 발견될 수 있으며, 세포내 유입이 이루어지는 동안 APC에 의해 흡수되는 처리되는 외생 단백질의 펩티드를 주로 제시하고 그에 따라 처리된다. 클래스 I의 경우 내인성 펩티드가 MHC 클래스 II 분자에 의해 제시되도록 하는(예: 자가포식) 항원 처리기 전의 대체 방법들이 기술되어 있다. 펩티드 및 MHC 클래스 I 분자 복합체는 적절한 TCR을 가진 CD8+ 세포독성 T-림프구에 의해 인식되고, 펩티드 및 MHC 클래스 II 분자 복합체는 적절한 TCR을 가진 CD4 양성 조력 T-세포에 의해서 인식된다.

HLA 클래스 I 분자는 신체의 모든 유핵 세포에서 발견되며 세포기질 단백질 조각들을 CD8+ 세포독성 T-세포(CTL)에게 보여주는 기능을 한다. 단백질은 프로테아솜에서 분할되며, 결과 산물인 펩티드는 세포기질에서 나와 소포체의 내강으로 운반되어 HLA 클래스 I 분자에 결합된다. 그 다음 항원과 HLA 클래스 I 분자 사이의 복합체는 항원이 CTL에 제시될 수 있는 세포 표면으로 운반된다. 항원을 CTL에 제시하면 결국 세포를 직접 죽이는 항원 특이 CTL의 증식으로 이어지는 연쇄반응이 유도되어 항원/HLA 복합체가 이들의 표면에 결합하게 한다. 이러한 과정이 모든 유핵 세포에서 일어남으로 인해 면역계가 각각의 개별 세포에 이종, 변형 또는 배아 단백질이 있는지를 정확하게 감시할 수 있게 된다. 일반적으로 HLA 클래스 I 분자에 의해 제시되는 펩티드는 내인성 세포내 단백질 분자에서 유래하지만, 대음세포작용(macropinocytosis)이나 식세포작용(phagocytosis)에 의해 세포에 의해 섭취된 외인성 항원도 제시될 수 있다는 주장들도 있다. 그러므로 항원 특이 CTL 반응은 HLA 클래스 I 특이 항원결정기를 포함하는 폴리펩티드로 숙주를 직접 면역시킴으로써 유도될 수 있다.

구성적으로 발현되는 HLA 클래스 I 분자에 비해, HLA 클래스 II 분자는 거의 대부분 대식세포, 수지상 세포, B-세포 등의 전문적인 항원제시 세포에서 발견된다. 전문적인 APC는 전문적인 APC에 의해 세포외 단백질을 흡수하는데 이들은 리소솜에서 소화되고 분자들이 원형질막으로 이동하기 전에 HLA 클래스 II 분자에 의해 결합된다. HLA 클래스 II 결합 펩티드는 CD4+ T-조력 세포(T helper cell)에 제시된다. T-조력 세포는 직접적으로 세포독성 또는 식세포작용을 하지 않으므로 감염되거나 고장난 숙주 세포를 직접 죽이지 않고 다른 면역계 구성요소들이 감염되거나 고장난 세포에 반응하도록 유도하거나 반응을 보강하도록 작용한다. 예를 들면, CD4+ T-세포의 활성화는 인터페론-γ(IFN-γ)의 수치를 국소적으로 증가시킬 수 있다.

CD4-양성 조력 T-세포는 항종양 T-세포 반응의 효과기 기능을 조정하는데 중요한 역할을 하며 이로 인해 CD4-양성 T-세포 항원결정기 유래 TAA의 동정은 항종양 면역 반응을 일으키는 의약품 개발에 중요한 요소일 수 있다. T-조력 세포에 의한 인터페론-γ IFN-γ의 국소적 분비는 비록 CTL이 없더라도 신생혈관생성의 억제를 통해 암의 증식을 억제할 수 있다는 것이 포유 동물 모델에서 밝혀졌다(참고문서: Qin, Z. and T. Blankenstein. CD4+ T-cell-mediated tumor rejection involves inhibition of angiogenesis that is dependent on IFN gamma receptor expression by non-hematopoietic cells. Immunity. 2000, 12:677-686). 또한 HLA 클래스 II 분자에 이해 제시된 TAA를 인식하는 T-조력 세포는 항체 반응의 유도를 통해 암 진행에 대항할 수 있다(Kennedy, R.C., M.H. Shearer, A.M. Watts, and R.K. Bright. CD4+ T lymphocytes play a critical role in antibody production and tumor immunity against simian virus 40 large tumor antigen. Cancer Res. 2003, 63:1040-1045).

HLA 클래스 I 결합 TAA에 비해, HLA 클래스 II 결합 TAA는 지금까지 일부만 기술되어 있다(www.cancerimmunity.org, www.syfpeithi.de). HLA 클래스 II 분자의 구성적 발현은 보통 면역계의 세포에만 국한되기 때문에, 클래스 II 펩티드를 원래의 종양에서 직접 분리할 가능성은 없는 것으로 여겨졌다. 그러나 최근 다수의 MHC 클래스 II 항원결정기가 종양으로부터 직접 동정된 바 있다. 더욱이 놀랍게도 종양 환자에게서 종양 세포가 MHC 클래스 II 분자를 발현하는 것이 발견되었다(EP 1642905, EP 1760088; Dengjel J, Nastke MD, Gouttefangeas C, Gitsioudis G, Schoor O, Altenberend F, Muller M, Kramer B, Missiou A, Sauter M, Hennenlotter J, Wernet D, Stenzl A, Rammensee HG, Klingel K, Stevanovic S.; Unexpected abundance of HLA class II presented peptides in primary renal cell carcinomas; Clin Cancer Res. 2006; 12: 4163-4170).

펩티드가 세포 면역 반응을 유도하기 위해서는, MHC 분자에 결합해야 한다. 이 과정은 MHC 분자의 대립 유전자와 펩티드의 아미노산 서열의 특이적인 다형성에 따라 다르다. 보통 MHC 클래스 I 결합 펩티드는 길이가 8 내지 10개의 아미노산 잔기이며 일반적으로 MHC 분자의 상응하는 결합 홈(binding groove)과 상호작용하는 서열에 2개의 보존된 잔기(앵커)를 가진다. 이로 인해 각각의 MHC 대립 유전자는 어떤 펩티드가 어떤 결합 홈에 특이적으로 결합할 수 있는 지를 결정하는 "결합 모티프"를 가진다(Rammensee HG, Bachmann J, Stevanovic S. MHC ligands and peptide motifs, Landes Bioscience, USA, 1997).

MHC 의존 면역 반응에서, 펩티드는 암세포에 의해 발현된 특정 MHC 분자에 결합할 수 있어야 할 뿐만 아니라 특이 T-세포 수용체(TCR)를 가진 T-세포에 의해 인식되어야 한다.

종양 특이 T-림프구, 즉 그 항원결정기에 의해 인식되는 항원은 효소, 수용체, 전사인자 등과 같은 모든 단백질 클래스들로부터 유래하는 분자들일 수 있다. 더욱이 종양 관련 항원은 예를 들면 변이된 유전자 산물로서 종양 세포에만 존재할 수도 있다. 또 다른 중요한 종양 관련 항원 클래스는 CT(cancer testis: 암 정소) 항원 같은 조직 특이 항원으로 다른 종양 유형이나 건강한 정소 조직에서 발현된다.

수많은 TAA들이 최근 몇 년에 성공적으로 동정되고 특징이 결정되었다. 더욱이, 추가적인 종양 관련 항원을 동정하기 위해 많은 연구 노력이 이루어지고 있다. 당업계에서 종양 특이 항원이라고도 불리는 종양 관련 항원 중 몇몇 그룹은 조직 특이적이다. 이들 예에는 흑색종 티로시나아제, 전립선암의 PSA 및 PSMA, 림프종에서 bcr/abl 등과 같은 염색체 교차(전좌)가 포함되나 이에 국한되는 것은 아니다. 그러나 동정된 많은 종양 관련 항원은 다발성 종양 타입에서 발생하며 실제로 변형을 유발하는 종양원성 단백질 및/또는 종양 억제 유전자(종양 억제 유전자는, 예를 들면 신장암에 대해 검토됨; Linehan WM, Walther MM, Zbar B. The genetic basis of cancer of the kidney. J Urol. 2003 Dec; 170(6Pt1):216-372) 등의 몇 가지는 거의 모든 종양 타입에서 발생한다. 예를 들면, p53(종양 억제 유전자의 한 예), ras, c-met, myc, pRB, VHL, HER-2/neu 등과 같은 세포 성장과 분화를 제어하는 정상 세포의 단백질은 이들 유전자 산물의 발현을 증가시키게 되는 변이를 축적하여 이들이 발암성이 되게 할 수 있다(McCartey et al. Cancer Research, 1998, 15:58 2601-5; Disis et al. Ciba Found. Symp. 1994, 187:198-211). 또한 이들 돌연변이 단백질들은 다발성 암 유형에 있어서 종양 특이 면역 반응의 표적이 될 수 있다.

제시가 효과적인가 또는 비효과적인가에 따라 면역성에서 내성까지 이르는 유도 면역 반응의 유형과 정도가 정해진다. 비활동성의 항원 미경험(na) CTL을 항원 특이적 방법으로 자극하려면, CTL이 항원 제시 세포로부터 다음과 같은 두 개의 신호를 받아야 한다: HLA/펩티드 복합체와 상호 작용하는 항원 특이 T-세포 수용체(TCR)를 통한 신호 하나와, 공동 자극 인자(B7 분자, ICAM-1 및 기타 접착 분자)나 사이토카인(예: IL-2)을 통한 두 번째 신호이다. T-림프구가 이들 신호 중 하나만 받으면 T-세포의 아네르기(anergy)가 발생한다. 일반적으로 종양 세포는 공동자극 분자가 없고 대개 HLA 클래스 I 발현성이 낮은 것만 보여주기 때문에 APC의 기능을 제대로 하지 못한다. 또한, 악성 세포들은 대개 자신들에 대한 면역 반응을 억제하는 사이토카인이나 표면 분자를 발현한다. 그러한 관계로 TAA가 T-세포에 제시되는 방식은 종양 특이 면역 반응의 유도에 상당히 중요하다.

단백질이 종양 특이 또는 관련 항원으로 CTL에 의해 인식되고 치료에 사용되기 위해서는 특별한 요건이 충족되어야 한다. 항원은 주로 종양 세포에 의해 발현되어야 하고 일반적인 건강한 조직에 의해서 발현되거나 비교적 소량으로 발현되면 안 된다. 더욱 바람직한 것은 해당 항원이 1종의 종양 타입에서 존재할 뿐만 아니라 높은 농도로 존재하는 경우이다(즉, 세포당 해당 펩티드의 수를 복제). 종양 특이 및 종양 관련 항원은 대개 기능(예를 들면 세포 주기 제어나 자멸사)으로 인해 정상 세포가 종양 세포로 변이되는데 직접 관여하는 단백질로부터 유래한다. 또한 변이의 직접적인 원인이 되는 단백질의 하위 표적 또한 증강되어 간접적으로 종양에 관련될 수 있다. 이러한 간접 종양 관련 항원들은 백신접종 접근법의 표적도 될 수 있다. 두 경우 모두 항원의 아미노산 서열에 항원결정기의 존재가 필수적인데 그 이유는 종양 관련 항원에서 유래하는 그러한 펩티드(면역원성 펩티드)가 체외 또는 체내 T-세포 반응으로 이어져야 하기 때문이다.

기본적으로 MHC 분자를 결합할 수 있는 모든 펩티드는 T-세포 항원결정기로 작용할 수 있다. 체외 또는 체내 T-세포 반응의 유도를 위한 전제조건은 해당 TCR과 함께 T-세포가 있고 이러한 특별한 항원결정기에 대한 내성이 없어야 한다. T-조력 세포는 항종양 면역에서 CTL의 효과기 기능을 조정하는데 중요한 역할을 한다. TH1 유형의 T-조력 세포 반응을 촉발하는 T-조력 세포 항원결정기는 CD8+ 살해 T-세포의 효과기 기능을 지원하는데, 여기에는 세포 표면에 종양 관련 펩티드/MHC 복합체를 표시하며 종양 세포에 대항하는 세포 독성 기능도 포함된다. 이러한 방법으로 종양 관련 T-조력 세포 펩티드 항원결정기는 단독으로 또는 다른 종양 관련 펩티드와 함께 항종양 면역 반응을 자극하는 백신 조성물의 활성 제약 성분으로 작용할 수 있다.

대부분의 종양의 경우, 단지 소수의 TAA만 알려져 있거나, 아니면 1종의 특정 HLA 유형에 대해서만 정의되어 있다. 이에 비해 많은 전립선 특이 항원과 전립선 암종 관련 항원 및 CTL에 의해 인식된 펩티드들은 성공적으로 동정된 바 있다. 이들 TAA는 항원 제시 세포 상에서 HLA 분자 및 펩티드의 복합체로 발현될 때 T-세포들을 자극하고 항원 특이 CTL을 유도할 수 있다.

면역요법을 사용하는 대부분의 임상시험이 이루어진 바 있는 악성 흑색종 연구에서, 한 두 가지의 TAA를 사용한 면역접종은 종양 세포의 선택으로 이어져 DC를 사용하는 요법이 진행되는 동안 질환이 진행될 수 있다는 사실이 알려졌다. CD8 및 CD4 의존적인 두 유형의 반응 모두 항종양 효과에 공동으로 및 상승적으로 기여하므로, CD8+ CTL(MHC 클래스 I 분자)이나 CD4+ CTL(MHC 클래스 II 분자)에 의해 인식되는 종양 관련 항원의 동정과 특징 결정은 종양 백신의 개발에 중요하다.

하지만 일반적으로 한 종류의 CTL에 대한 시발로도 모든 종양 세포를 제거하는데 불충분하다. 종양들은 상당히 돌연변이적이고 CTL에 의한 인식을 피하기 위해 자신의 단백질 패턴을 변경함으로써 CTL 공격에 신속히 대응할 수 있다. 종양 회피 기전에 대항하기 위해 다양한 특이 펩티드들이 백신접종에 사용된다. 이러한 방법으로 여러 개의 CTL 클론들을 동시에 사용하여 종양에 대한 광범위한 동시 공격이 전개될 수 있다. 이렇게 하면 종양이 면역 반응을 피하는 가능성을 줄일 수 있다. 이러한 가설은 말기의 흑색종 환자를 치료하는 임상 연구에서 최근에 확인된 바 있다. 극소수의 예외적인 경우가 있긴 하지만, 적어도 3가지 뚜렷한 T-세포 반응이 있었던 환자들은 늘어난 생존기간 뿐만 아니라 목표 임상적 반응이나 안정 상태(반세레우(Banchereau) 등, 2001)를 보인 반면, T-세포 반응이 3가지 미만인 대다수의 환자들은 진행성 질환의 진단을 받았다.

유사한 효과들이 신세포암종을 앓는 환자들이 13가지의 다른 펩티드로 구성된 백신으로 치료받을 때 나타났다(H. Singh-Jasuja, S. Walter, T. Weinschenk, A. Mayer, P. Y. Dietrich, M. Staehler, A. Stenzl, S. Stevanovic, H. Rammensee, J. Frisch; Correlation of T-cell response, clinical activity and regulatory T-cell levels in renal cell carcinoma patients treated with IMA901, a novel multi-peptide vaccine; ASCO Meeting 2007 Poster # 3017; M. Staehler, A. Stenzl, P. Y. Dietrich, T. Eisen, A. Haferkamp, J. Beck, A. Mayer, S. Walter, H. Singh, J. Frisch, C. G. Stief; An open label study to evaluate the safety and immunogenicity of the peptide based cancer vaccine IMA901, ASCO meeting 2007; Poster # 3017).

그러므로 종양 백신 개발의 주요 업무는 신생 종양 관련 항원과 이에서 유래하는 면역원성 T 조력 항원결정기의 동정과 특징 결정뿐만 아니라 각각의 환자에 대해 한 가지 이상의 항원결정기에 대한 반응 가능성을 증가시키기 위한 서로 다른 항원결정기를 조합하는 것이다.

따라서 전립선 관련 항원 분자에서 유래하는 1종의 항원결정기를 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 또는 구성된 적어도 1종의 HLA 결합 펩티드를 포함하는 조성물이 제공된다.

본 명세서에서 사용되듯이 "HLA 결합 펩티드"라는 문구는 HLA 클래스 I 또는 HLA 클래스 II의 사람 백혈구 항원 분자에 의해 결합될 수 있는 모든 폴립펩티드를 지칭한다.

본 명세서에서 사용되듯이 "항원결정기"라는 용어는 아미노산이 포함된 분자가 HLA 클래스 I 또는 HLA 클래스 II의사람 백혈구 항원 분자에 의해 결합되도록 하는데 충분한 아미노산 서열을 지칭한다. 항원결정기를 동정하는 방법들은 당업계에 알려져 있다. 이러한 방법들은 다음을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다: (a) 개별 환자의 T-세포를 사용하는 유전자 발현 분석, 참고문서: van der Bruggen et al., A gene encoding an antigen recognized by cytolytic T lymphocytes on a human melanoma, Science 1991;254(5038):1643-1647; (b) 종양 관련 펩티드의 질량분석법 서열 결정, 참고문서: Cox et al., Identification of a peptide recognized by five melanoma-specific human cytotoxic T cell lines, Science 1994;264(5159):716-719; 및 (c) 대립 유전자 특이 펩티드 모티프에 따라 항원결정기를 예측하기 위해 알려진 TAA가 사용되는 "역면역법", 참고문서: Stevanovic, Identification of tumor-associated T-cell epitopes for vaccine development, Nat. Rev. Cancer 2002;2(7):514-520; Celis et al., Induction of anti-tumor cytotoxic T lymphocytes in normal humans using primary cultures and synthetic peptide epitopes, Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 1994; 91(6):2105-2109.

본 명세서에서 사용되듯이 "전립선 관련 항원 분자(prostate-associated antigenic molecule)"라는 용어는 (a) 전립선 조직, 또는 (b) 전립선 암세포에서 차별적으로 발현된 모든 항원결정기가 들어있는 분자를 지칭한다. 전립선 관련 항원 분자의 예로는 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원, 전립선 특이 막 항원, 서비빈, 프로스테인, 일시적 수용체 전위-p8 등이 있다. 이러한 전립선 관련 항원 분자 유래 항원결정기의 예들이 도 1에 제시된다. 그러나 어떠한 전립선 관련 항원 분자 유래 항원결정기도 사용될 수 있다.

본 명세서에서 공개된 HLA 결합 펩티드는 달리 기술하지 않는 한 펩티드 사슬 내에서 서로 다른, 가능하게는 선택적인, 부위에서 하나 이상의 잔기를 치환함으로써 변경될 수 있다. 이러한 치환은 예를 들면 1종의 아미노산이 유사한 구조와 특징의 아미노산에 의해 치환되는(예컨대, 소수성 아미노산이 다른 소수성 아미노산에 의해 치환되는) 보존적 성질의 것일 수 있다. 류신이 이소류신으로 교체되는 것과 같이 동일하거나 유사한 크기 및 화학적 성질의 아미노산 교체는 더욱더 보존적이다. 자연적으로 존재하는 상동 단백질의 서열 변화에 대한 연구에서, 특정 아미노산의 치환은 다른 것보다 더 자주 용인되고, 이러한 치환은 대개 원래의 아미노산과 교체 아미노산 간의 크기, 전하(charge), 극성, 소수성에 있어서의 유사성과의 상관관계를 보여준다.

본 명세서에서 보존적 치환이란 다음 다섯 그룹 중 한 그룹 내에서의 교환으로 정의된다: 그룹 1 - 작은 지방성, 비극성 또는 약한 극성의 잔기(Ala, Ser, Thr, Pro, Gly); 그룹 2 - 극성, 음전하를 띤 잔기 및 이들의 아미드(Asp, Asn, Glu, Gln); 그룹 3 - 극성, 양전하를 띤 잔기(His, Arg, Lys); 그룹 4 - 큰 지방성, 비극성 잔기(Met, Leu, Ile, Val, Cys); 및 그룹 5 - 큰 방향성 잔기(Phe, Tyr, Trp).

덜 보존적인 치환에는 알라닌이 이소류신 잔기에 의해 치환되는 것과 같이 1종의 아미노산이 유사한 특징을 갖지만 크기는 다소 다른 아미노산에 의해 치환되는 것을 포함할 수 있다. 매우 비보존적인 치환은 극성인 아미노산, 심지어 염기성인 아미노산을 산성 아미노산으로 치환하는 것을 포함할 수 있다. 그러나 이러한 "급격한" 치환은, 화학적 효과가 전적으로 예측 가능하지 않기 때문에 비효과적인 것으로 묵살할 수 없고 급격한 치환은 단순한 화학적 원리로부터 달리 예측할 수 없었던 우연한 효과를 일으키는 것이 당연하다.

물론 이러한 치환은 일반 L-아미노산 외의 구조를 포함할 수 있다. 그러므로, D-아미노산은 공개된 항원 펩티드에서 일반적으로 발견되는 L-아미노산을 치환할 수 있고 본 명세서의 공개에 포함되어야 한다. 또한 비표준 R기(즉, 자연 단백질의 20개의 일반 아미노산에서 발견되는 것 외의 R기)도 또한 본 발명에 따른 면역원 및 면역원성 펩티드를 생산하기 위해 치환 목적으로 사용될 수 있다.

하나 이상의 위치에서의 치환물이 아래에서 정의된 대로 상당히 동등하거나 그 이상의 항원성 활동을 가진 펩티드가 되는 것으로 발견되는 경우, 조합된 치환물이 펩티드의 항원성에 보조적이거나 상승적 효과를 낳는지 판정하기 위해 그러한 치환물의 조합이 검사될 것이다. 펩티드 내에서 기껏해야 4개 미만의 위치가 동시에 치환된다.

또 다른 양상으로 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드를 함유하는 조성물이 제공되는데, 이 경우 HLA 결합 펩티드 중 적어도 하나는 HLA 클래스 I 펩티드이며 HLA 결합 펩티드 중 적어도 하나는 HLA 클래스 II 펩티드이다.

본 명세서에서 사용되듯이, "HLA 클래스 I 펩티드"라는 문구는 HLA 클래스 I의 사람 백혈구 항원 분자에 의해 결합될 수 있거나, 결합될 수 있는 것으로 예측되는 항원결정기를 포함하는 모든 폴립펩티드를 지칭한다. 예를 들면, "HLA 클래스 I 펩티드"는 HLA-A2 혈청형의 특이 대립유전자에 결합하는 HLA-A2 제한 펩티드를 포함하며, HLA-A*0201, *0202, *0203, *0206 또는 *0207 α사슬을 갖는 HLA-A2 혈청형을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다. "HLA 클래스 I 펩티드"의 예로는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10 및 서열번호 11이 있으며 이들은 모두 HLA-A*201 제한 펩티드이다.

본 발명은 더욱이 종양 형성과 관련된 항원에서 유래하며, 사람 백혈구, 특히 림프구, 특히 T-림프구, 특히 CD4+ T-림프구의 면역 반응, 특히 T_H1형 면역 반응을 매개하는 CD4+ T-림프구의 면역 반응을 촉발하는 MHC(HLA) 클래스 II 분자에 충분히 결합할 능력이 있는 펩티드를 제공한다. 본 명세서에서 사용되듯이 "HLA 클래스 II 펩티드"라는 문구는 HLA 클래스 II의 사람 백혈구 항원 분자에 의해 결합될 수 있거나 결합될 수 있는 것으로 예측되는 항원결정기를 포함하는 모든 폴립펩티드를 지칭한다. "HLA 클래스 II 펩티드"의 예가 서열번호 13 및 서열번호 14로서 도 1에 나와있다.

본 발명의 추가 펩티드는 다음과 같다:

HLA 클래스 II 펩티드는 특정 HLA 특이 아미노산 모티프와, 선택적으로 핵심 서열의 기능을 간섭하지 않는 N- 및/또는 C-말단 연장부(즉, 펩티드와 T-세포의 상호작용과 무관한 것으로 생각된다)를 갖는 "핵심 서열"로 구성된다. N- 및/또는 C-말단 연장부는, 예를 들면 길이가 각각 1에서 10개 사이의 아미노산일 수 있다. 이들 펩티드는 직접 HLA 클래스 II 분자를 탑재하기 위해 사용되거나 서열이 본 명세서의 아래 설명에 따라 담체로 복제될 수 있다. 이들 펩티드는 세포 내에서 더 큰 펩티드의 최종 가공 산물을 형성하기 때문에, 더 긴 펩티드들도 마찬가지로 사용될 수 있다. 본 명세서에서 공개된 HLA 클래스 II 펩티드는 어떠한 크기도 될 수 있는바, 분자량이 100,000 달톤 미만, 분자량 50,000 달톤 미만, 분자량 10,000 달톤 미만, 분자량 5,000 달톤 미만, 분자량 2,500 달톤 미만, 또는 분자량 약 1000 내지 2000 달톤의 크기를 포함하지만 이에 국한되지는 않는다. 아미노산 잔기 수의 면에서 본 발명의 펩티드는, 예시적으로 그러나 한정적인 것은 아닌 것으로, 1000개 미만의 잔기, 500개 미만의 잔기, 또는 100개 미만의 잔기를 가질 수 있다.

따라서 펩티드와 이의 변이물의 전체 길이가 8 내지 100, 8 내지 60개의 아미노산, 8 내지 30, 8 내지 17개, 또는 펩티드나 이의 변이물의 전체 길이가 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개의 아미노산인 펩티드의 조성물과 이의 변이물이 공개된다. 또 다른 양상으로, 상기 펩티드는 다음의 조건에서 서열번호 13 및 서열번호 14로 구성된 군에서 선택된 핵심 서열에 C-말단 및/또는 N-말단에 1 내지 10개의 아미노산의 확장 부위를 갖는다: 이들 주변부 아미노산의 전체 수는 1 내지 12, 1 내지 10, 1 내지 8, 1 내지 6, 2 내지 12, 2 내지 10, 2 내지 8, 2 내지 6, 3 내지 12, 3 내지 10, 3 내지 8, 3 내지 6, 4 내지 12, 4 내지 10, 4 내지 8, 4 내지 6 , 5 내지 12, 5 내지 10, 5 내지 8, 5 내지 6, 6 내지 12, 6 내지 10, 6 내지 8, 7 내지 12, 7 내지 10, 7 내지 8, 8 내지 12, 8 내지 10, 9 내지 12, 9 내지 10, 또는 10 내지 12개인 경우와, 펩티드가 상기 펩티드와 동일한 방식으로 HLA 분자에 여전히 결합할 수 있는 경우, 주변부 아미노산이 C-말단과 N-말단에 어떠한 비율(예를 들면 모든 주변부 아미노산이 하나의 말단에 더해질 수도 있고, 또는 여러 아미노산이 양 말단에 균등하게 또는 어떠한 비율로도 더해질 수 있다)로도 분배될 수 있는 경우이다.

또한 MHC 클래스 I 항원결정기는, 보통 길이가 8 내지 10개의 아미노산이지만, 실제 항원결정기를 포함하는 더 긴 펩티드나 단백질로부터의 펩티드 가공에 의해 생성되는 것이 가능하다. MHC 클래스 II 항원결정기와 유사하게, 실제 항원결정기의 N- 및 C-말단의 위쪽 및/또는 아래쪽에 신장된(길이가 늘어난) 전구체 펩티드의 주변부 잔기들은 펩티드의 CTL에 대한 제시에 큰 영향을 미치지도 않으며, 신장된 펩티드의 가공에 의해 매개된 실제 항원결정기를 만드는데 필요한 단백질 가수분해 분할 부위를 가리지도 않도록 선택될 수 있다.

그러므로 또 다른 양상으로는, 상기 펩티드는 서열번호 1 내지 서열번호 11 및 서열번호 15 내지 서열번호 37로 구성된 핵심 서열을 갖게 되어 C-말단 및/또는 N-말단에 1 내지 10개의 주변부 아미노산이 신장된다. 또 다른 양상으로 이들 주변부 아미노산의 전체 수는 다음과 같은 조건에서 1 내지 12, 1 내지 10, 1 내지 8, 1 내지 6, 2 내지 12, 2 내지 10, 2 내지 8, 2 내지 6, 3 내지 12, 3 내지 10, 3 내지 8, 3 내지 6, 4 내지 12, 4 내지 10, 4 내지 8, 4 내지 6 , 5 내지 12, 5 내지 10, 5 내지 8, 5 내지 6, 6 내지 12, 6 내지 10, 6 내지 8, 7 내지 12, 7 내지 10, 7 내지 8, 8 내지 12, 8 내지 10, 9 내지 12, 9 내지 10, 또는 10 내지 12개이고, 펩티드가 서열번호 1 내지 서열번호 12 및 서열번호 15 내지 서열번호 40 중 어느 순서에 의해서도 상기 펩티드와 동일한 방식으로 HLA 분자에 여전히 결합할 수 있는 경우, 주변부 아미노산이 C-말단과 N-말단에 어떠한 비율(예를 들면 모든 주변부 아미노산이 하나의 말단에 더해질 수도 있고, 또는 여러 아미노산이 양 말단에 균등하게 또는 어떠한 비율로도 더해질 수 있다)로도 분배될 수 있는 경우이다.

또 다른 양상으로 본 발명은 전체 길이가 8 내지 100개의 아미노산, 8 내지 60개의 아미노산, 8 내지 30개의 아미노산, 8 내지 18개의 아미노산, 또는 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 또는 17개의 아미노산인 MHC 클래스 I 항원결정기의 펩티드와 변이물을 제공한다.

물론, 공개된 펩티드나 변이물은 사람 MHC 클래스 I 또는 II의 분자에 결합할 수 있는 능력을 갖게 될 것이다. MHC 복합체에 대한 펩티드나 변이물의 결합은 당업계에 알려진 방법, 예를 들면 아래의 본 발명의 실시예에서 설명된 방법이나 다른 MHC 클래스 II 대립유전자에 대한 문헌에서 설명된 방법에 의해 시험될 수 있다(예를 들면, Vogt AB, Kropshofer H, Kalbacher H, Kalbus M, Rammensee HG, Coligan JE, Martin R; Ligand motifs of HLA-DRB5*0101 and DRB1*1501 molecules delineated from self-peptides; J Immunol. 1994; 153(4):1665-1673; Malcherek G, Gnau V, Stevanovic S, Rammensee HG, Jung G, Melms A; Analysis of allele-specific contact sites of natural HLA-DR17 ligands; J Immunol. 1994; 153(3):1141-1149; Manici S, Sturniolo T, Imro MA, Hammer J, Sinigaglia F, Noppen C, Spagnoli G, Mazzi B, Bellone M, Dellabona P, Protti MP; Melanoma cells present a MAGE3 epitope to CD4(+) cytotoxic T cells in association with histocompatibility leukocyte antigen DR11; J Exp Med. 1999; 189(5): 871-876; Hammer J, Gallazzi F, Bono E, Karr RW, Guenot J, Valsasnini P, Nagy ZA, Sinigaglia F; Peptide binding specificity of HLA-DR4 molecules: correlation with rheumatoid arthritis association; .J Exp Med. 1995 181(5):1847-1855; Tompkins SM, Rota PA, Moore JC, Jensen PE; A europium fluoro-immunoassay for measuring binding of antigen to class II MHC glycoproteins; J Immunol Methods. 1993;163(2):209-216; Boyton RJ, Lohmann T, Londei M, Kalbacher H, Halder T, Frater AJ, Douek DC, Leslie DG, Flavell RA, Altmann DM; Glutamic acid decarboxylase T lymphocyte responses associated with susceptibility or resistance to type I diabetes: analysis in disease discordant human twins, nonobese diabetic mice and HLA-DQ transgenic mice; Int Immunol. 1998(12):1765-1776).

추가로 N- 및/또는 C-말단에 위치한 아미노산의 확장은 MHC 분자의 실질적인 항원결정기로 작용하는 펩티드의 일부를 필수적으로 구성하지는 않지만, 본 발명에 따라 펩티드가 효과적으로 세포로 유입되도록 하는 데는 중요한 것일 수 있다. 한 구현의 예로, 본 발명의 펩티드는 예를 들면, NCBI, 젠뱅크(GenBank) 수탁번호 X00497(Strubin, M., Mach, B. and Long, E.O. The complete sequence of the mRNA for the HLA-DR-associated invariant chain reveals a polypeptide with an unusual transmembrane polarity EMBO J. 3(4), 869-872 (1984))로부터 유래하는 HLA-DR 항원 관련 불변 사슬(다음의 "Ii"에서 p33)의 80개의 N-말단 아미노산을 포함하는 융합 단백질이다.

또 다른 양상으로, 상기 펩티드는 전체 길이가 8 내지 100개의 아미노산, 8 내지 60개의 아미노산, 8 내지 30개의 아미노산, 8 내지 17개의 아미노산, 또는 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개의 아미노산이다.

또한 본 펩티드나 변이물은 더 강한 면역 반응을 유도하기 위해 안정성 및/또는 MHC 분자와의 결합을 향상시키기 위해 더욱 변경될 수 있다. 펩티드 서열의 최적화 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들면 역 펩티드 결합이나 비펩티드 결합의 도입을 포함한다.

그러므로 또 다른 양상에 따르면 본 발명은 적어도 1종의 펩티드나 변이물이 비펩티드 결합을 포함하는 조성물을 제공한다.

역 펩티드 결합에서는 아미노산 잔기는 펩티드(-CO-NH-) 연결에 의해 결합되지 않고 펩티드 결합이 역전된다. 그러한 레트로-인버소 펩티드 모사체(retro-inverso peptidomimetic)는 당업계에 알려진 방법, 예를 들면 본 명세서에 참조로 수록되는 Meziere et al., (1997) J. Immunol. 159, 3230-3237에서 설명된 방법을 사용하여 만들어질 수 있다. 이러한 접근법은 기간(backbone)를 포함하나 곁가지의 배향(orientation)은 포함하지 않는 변화들을 포함하는 펩티드 모사체(pseudopeptide)들을 제조하는 단계를 포함한다. Meziere 등 (1997)은 MHC 및 T-조력 세포 반응의 경우, 이러한 펩티드 모사체가 유용함을 보여준다. CO-NH 펩티드 결합 대신 NH-CO 결합을 포함하는 레트로 인버스(Retroinverse) 펩티드는 단백질 분해에 대해 훨씬 더 저항적이다.

비펩티드 결합은, 예를 들면, -CH₂-NH, -CH₂-S, -CH₂CH₂-, -CH=CH-, -COCH₂-, -CH(OH)CH₂- 및 -CH₂SO-이다. 미국 특허 제 4,897,445 호는 표준 방법에 의해 합성되는 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 사슬 내에 비펩티드 결합(-CH₂-NH)과 NaCNBH₃이 존재할 때 아미노 알데히드와 아미노산을 반응시켜 합성된 비펩티드 결합의 고체상 합성 방법을 제공한다

위에서 설명한 본 발명의 서열로 이루어진 펩티드는, 예를 들면 펩티드의 안정성, 생물학적 이용 가능성 및/또는 친화성을 증강시키기 위해 아미노 및/또는 카르복시 말단에 존재하는 추가 화학 그룹으로 합성될 수 있다. 예를 들면 카보벤족실(carbobenzoxyl), 단실(dansyl), 또는 t-부틸옥시카르보닐(t-butyloxycarbonyl)기와 같은 소수성 그룹이 펩티드의 아미노 말단에 첨가될 수 있다. 마찬가지로 아세틸기나 9-플루오레닐메틸옥시-카르보닐기가 펩티드의 아미노 말단에 놓일 수 있다. 추가적으로, 예를 들면 소수성 그룹인 t-부틸옥시카르보닐, 또는 아미노기가 펩티드의 카르복시 말단에 첨가될 수도 있다.

더욱이 본 발명의 모든 펩티드는 자신들의 입체 배치를 변경시키기 위해 합성될 수 있다. 예를 들면, 보통의 L-이성질체 대신 펩티드의 하나 이상의 아미노산 잔기의 D-이성질체가 사용될 수 있다. 더더욱, 본 발명의 펩티드의 아미노산 잔기의 최소 하나는 잘 알려진, 비자연적으로 존재하는 아미노산의 하나로 치환될 수 있다. 상기와 같은 변경들은 본 발명의 펩티드의 안정성, 생물학적 이용 가능성 및/또는 결합 작용을 증가시키는데 기여할 수 있다.

이와 유사하게, 본 발명의 펩티드나 변이물은 펩티드의 합성 전이나 후에 특정 아미노산을 반응시킴으로써 화학적으로 변경될 수 있다. 이러한 변경의 예는 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들면 R. Lundblad, Chemical Reagents for Protein Modification, 3rd ed. CRC Press, 2005에 요약되어 있으며 이는 본 명세서에 참조로서 수록된다. 아미노산의 화학적 변경은 다음과 같은 변경을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다: 아실화, 아미드화, 라이신의 피리독실화, 환원 알킬화, 2, 4, 6트라이니트로벤젠 술폰산(TNBS)을 사용하는 아미노기의 트라이니트로벤질화, 카르복실기의 아미드 변경 및 시스테인의 시스테산으로의 과산화포름산 산화, 수은 유도체의 형성, 다른 티올 화합물을 사용하는 혼합 이황화물의 형성, 말레이미드와의 반응, 요오드아세트산이나 요오드아세트아미드를 사용하는 카르복시메틸화 및 알칼리 pH에서 시안산염을 사용하는 카르바모일화 등이다. 이 점과 관련하여, 당업자는 단백질의 화학적 변형과 관련된 광범위한 방법론에 대해 다음 참조문서: Current Protocols In Protein Science, Eds. Coligan et al., (John Wiley & Sons NY 1995-2000)의 제15장을 참조하도록 한다.

글루타르알데히드, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 다이아크릴레이트 및 포름알데히드를 사용한 단백질의 가교가 수화젤(hydrogel)의 준비에 사용되는 반면 PEG를 사용한 치료용 단백질과 펩티드의 변형이 성공적인 경우 대개 순환 반감기(circulatory half-life)도 늘어난다. 면역치료를 위한 알레르겐의 화학적 변경은 대개 시안산칼륨을 사용하는 카르바밀화에 의해 이루어진다.

일반적으로 펩티드와 그 변이물(적어도 아미노산 잔기들 사이의 펩티드 연결을 가지는 것들)은 예를 들면 Lu et al., (1981) J. Org. Chem. 46, 3433 및 그 참고자료에 의해 공개된 고체상 펩티드 합성의 Fmoc-폴리아미드 모드를 사용하여 합성될 수 있다.

정제는 재결정, 크기 배제 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피 및 (보통) 역상 고성능 액체 크로마토그래피와 같은 기술을 하나, 또는 조합하여 수행될 수 있다.

펩티드의 분석은 박층 크로마토그래피, 전기영동, 특히 모세관 전기이동, 고체상 추출(CSPE), 역상 고성능 액체 크로마토그래피, 산 가수분해 후 아미노산 분석에 의해서 및 고속 원자 충돌(FAB) 질량 분광 분석법과 아울러 MALDI 및 ESI-Q-TOF 질량 분광 분석에 의해서도 수행될 수 있다.

본 발명의 또 다른 양상은 공개된 펩티드나 변이물 중 하나를 부호화 하는 핵산(예를 들면, 폴리뉴클레오티드)을 제공한다. 폴리뉴클레오티드는 예를 들면 DNA, cDNA, PNA, CNA, RNA, 단일 및/또는 이중가닥, 또는 폴리뉴클레오티드의 자연 또는 안정화된 형태, 예를 들면 포르포로티에이트 기간, 또는 그의 조합을 사용한 폴리뉴클레오티드일 수 있으며 펩티드를 암호화하는 한 인트론(intron)을 포함할 수도 그렇지 않을 수도 있다. 물론 이것은 단지 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화될 수 있는, 자연적으로 발생하는 펩티드 결합에 의해 결합되는 자연적으로 발생하는 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드이다. 본 발명의 또 다른 양상은 본 발명에 따른 폴리펩티드를 발현할 수 있는 발현 매개체를 제공한다. 서로 다른 세포 유형에 대한 발현 매개체는 당업계에 잘 알려져 있고 과도한 실험을 하지 않고도 선택될 수 있다.

일반적으로 DNA는 발현에 적절한 배향과 정확한 판독틀 내에서 플라스미드 등과 같은 발현 매개체에 삽입된다. 필요한 경우 DNA는 비록 그러한 제어가 일반적으로 발현 매개체에 있지만, 바라는 숙주에 의해 인식되는 해당 전사 및 번역 규제 제어 뉴클레오티드 서열에 연결될 수 있다. 그 다음 매개체는 당업계에 잘 알려진 표준 기법을 통해 숙주에 도입된다.

한 구현의 예로, 조성물은 서열번호 1 내지 서열번호 11 및 서열번호 13 내지 서열번호 40에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성된 적어도 2종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11 및 서열번호 13 내지 서열번호 40에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성된 적어도 2종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11 및 서열번호 13 내지 서열번호 40에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성된 적어도 4종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11 및 서열번호 13 내지 서열번호 40에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성된 10종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성된 적어도 2종의 펩티드, 적어도 4종의 펩티드, 또는 적어도 10종의 펩티드, 및 서비빈 HLA-A1에서 유래한 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래한 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래한 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래한 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및 HLA-A*02에서 유래한 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택된 적어도 1종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성된 적어도 2종의 펩티드, 적어도 4종의 펩티드, 또는 적어도 10종의 펩티드, 및 서비빈 HLA-A1에서 유래하는 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래하는 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래하는 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래하는 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및HLA-A*02에서 유래하는 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택되는 적어도 1종의 펩티드를 포함하며, 추가 펩티드는 치료 대상자의 HLA 조합에 따라 선택된다.

한 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 1 내지 서열번호 11 및 서열번호 13 내지 서열번호 42에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11 및 서열번호 13 내지 서열번호 42에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11 및 서열번호 13 내지 서열번호 42에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 4종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11 및 서열번호 13 내지 서열번호 42에 따른 아미노산 서열로 구성된 10종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드, 적어도 4종의 펩티드, 또는 적어도 10종의 펩티드, 및 서비빈 HLA-A1에서 유래하는 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래하는 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래하는 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래하는 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및 HLA-A*02에서 유래하는 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택되는 적어도 1종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드, 적어도 4종의 펩티드, 또는 적어도 10종의 펩티드, 및 서비빈 HLA-A1에서 유래하는 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래하는 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래하는 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래하는 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및 HLA-A*02에서 유래하는 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택되는 적어도 1종의 펩티드를 포함하며, 추가 펩티드는 필요한 대상자의 HLA 조합에 따라 선택된다.

한 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 1 내지 서열번호 11 및 서열번호 13 내지 서열번호 14 및 서열번호 15 내지 서열번호 31에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성된 적어도 2종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 20, 서열번호 31 및 서열번호 32에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성된 적어도 2종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 20, 서열번호 31 및 서열번호 32에 따른 아미노산 서열로 반드시 구성된 적어도 4종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 20, 서열번호 31 및 서열번호 32에 따른 아미노산으로 본질적으로 구성되고 상기 서열로 구성된 군에서 선택된 10종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 20, 서열번호 31 및 서열번호 32에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성되고 상기 서열로 구성된 군에서 선택되는 적어도 2종의 펩티드, 적어도 4종의 펩티드, 또는 적어도 10종의 펩티드, 및 서비빈 HLA-A1에서 유래하는 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래하는 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래하는 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래하는 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및 HLA-A*02에서 유래하는 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택되는 적어도 1종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 20, 서열번호 31 및 서열번호 32에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성된 적어도 2종의 펩티드, 적어도 4종의 펩티드, 또는 적어도 10종의 펩티드, 및 서비빈 HLA-A1에서 유래하는 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래하는 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래하는 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래하는 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및 HLA-A*02에서 유래하는 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택되는 적어도 1종의 펩티드를 포함하며, 추가 펩티드는 치료 대상자의 HLA 조합에 따라 선택된다.

HLA-A*02에 대한 한 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 23 및 서열번호 24에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 1종의 펩티드와 및 서열번호 1 내지 서열번호 11 및 서열번호 13 내지 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 1종의 펩티드를 포함한다.

HLA-A*02에 대한 한 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 1종의 펩티드를 포함한다.

HLA-A*02에 대한 한 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 1종의 펩티드를 포함한다.

HLA-A*02에 대한 또 하나의 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 10종의 펩티드를 포함한다.

HLA-A*02에 대한 또 하나의 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드, 적어도 4종의 펩티드, 또는 적어도 10종의 펩티드, 및 서비빈 HLA-A1에서 유래하는 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래하는 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래하는 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래하는 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및 HLA-A*02에서 유래하는 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택되는 적어도 1종의 펩티드를 포함한다.

HLA-A*02에 대한 또 하나의 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드, 적어도 4종의 펩티드, 또는 적어도 10종의 펩티드, 및 서비빈 HLA-A1에서 유래하는 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래하는 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래하는 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래하는 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및 HLA-A*02에서 유래하는 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택되는 적어도 1종의 펩티드를 포함하며, 추가 펩티드는 필요한 대상자의 HLA 조합에 따라 선택된다.

HLA-A*02와 조합된 HLA-A*24에 대한 한 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 20, 서열번호 25, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 1 내지 서열번호 11, 서열번호 13 또는 서열번호 14로 구성된 군에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성된 적어도 2종의 펩티드를 포함한다.

HLA-A*02와 조합된 HLA-A*24에 대한 또 하나의 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 20, 서열번호 25, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 20, 서열번호 31 및 서열번호 32로 구성된 군에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성된 적어도 2종의 서로 다른 펩티드를 포함한다.

HLA-A*02와 조합된 HLA-A*24에 대한 또 하나의 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 20, 서열번호 25, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 20, 서열번호 31 및 서열번호 32로 구성된 군에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성된 적어도 2종의 서로 다른 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 20, 서열번호 31 및 서열번호 32에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성되고 상기 서열로 구성된 군에서 선택된 10종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 20, 서열번호 31 및 서열번호 32에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성되고 상기 서열로 구성된 군에서 선택되는 적어도 2종의 펩티드, 적어도 4종의 펩티드, 또는 적어도 10종의 펩티드, 및 서비빈 HLA-A1에서 유래하는 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래하는 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래하는 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래하는 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및 HLA-A*02에서 유래하는 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택되는 적어도 1종의 펩티드를 포함한다.

또 다른 구현의 예로, 조성물은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 20, 서열번호 31 및 서열번호 32에 따른 아미노산 서열로 본질적으로 구성된 적어도 2종의 펩티드, 적어도 4종의 펩티드, 또는 적어도 10종의 펩티드, 및 서비빈 HLA-A1에서 유래하는 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래하는 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래하는 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래하는 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및 HLA-A*02에서 유래하는 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택되는 적어도 1종의 펩티드를 포함하며, 추가 펩티드는 치료 대상자의 HLA 조합에 따라 선택된다.

한 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 20, 서열번호 23 내지 서열번호 25, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 1 내지 서열번호 11 및 서열번호 13 내지 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드 및 서열번호 15 내지 SEQ ID 19, SEQ ID:21, 서열번호 22, 서열번호 26 내지 서열번호 30 및 서열번호 33에 따른 적어도 1종의 추가 펩티드를 포함함에 있어서, 상기 추가 펩티드는 치료 대상자의 HLA 조합에 따라 선택되고 및 선택적으로 적어도 1종의 펩티드는 서비빈 HLA-A1에서 유래하는 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래하는 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래하는 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래하는 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및 HLA-A*02에서 유래하는 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택되며, 이 경우 추가 펩티드는 치료 대상자의 HLA 조합에 따라 선택된다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물은 서열번호 20, 서열번호 23 내지 서열번호 25, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드, 및 서열번호 15 내지 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 26 내지 서열번호 30 및 서열번호 33에 따른 적어도 1종의 추가 펩티드를 함유함에 있어서, 상기 추가 펩티드는 필요한 대상자의 HLA 조합에 따라 선택되고, 선택적으로 적어도 1종의 펩티드는 서비빈 HLA-A1에서 유래하는 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래하는 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래하는 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래하는 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및 HLA-A*02에서 유래하는 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택되며, 이 경우 상기 추가 펩티드는 치료 대상자의 HLA 조합에 따라 선택된다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물이 서열번호 20, 서열번호 23 내지 서열번호 25, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 4종의 펩티드, 및 서열번호 15 내지 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 26 내지 서열번호 30 및 서열번호 33에 따른 적어도 1종의 추가 펩티드를 함유함에 있어서, 상기 추가 펩티드는 치료 대상자의 HLA 조합에 따라 선택되며, 선택적으로 적어도 1종의 펩티드는 서비빈 HLA-A1에서 유래하는 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래하는 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래하는 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래하는 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및 HLA-A*02에서 유래하는 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택되며, 이 경우 상기 추가 펩티드는 치료 대상자의 HLA 조합에 따라 선택된다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물이 서열번호 20, 서열번호 23 내지 서열번호 25, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14에 따른 아미노산 서열로 구성된 10종의 펩티드, 및 서열번호 15 내지 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 26 내지 서열번호 30 및 서열번호 33에 따른 적어도 1종의 추가 펩티드를 함유함에 있어서, 상기 추가 펩티드는 필요한 대상자의 HLA 조합에 따라 선택되며 및 선택적으로 적어도 1종의 펩티드는 서비빈 HLA-A1에서 유래하는 서열번호 38 BIR-002b FTELTLGEF, 서비빈 HLA-A2에서 유래하는 서열번호 39 BIR-002c LMLGEFLKL, 서비빈 HLA-B35에서 유래하는 서열번호 40 BIR-002d EPDLAQCFY, 서비빈 HLA-DR에서 유래하는 BIR-002a 서열번호 41 TLGEFLKLDRERAKD 및 서비빈 HLA-DR 및 HLA-A*02에서 유래하는 BIR-004 서열번호 42 ELTLGEFLKLDRERAKN으로 구성된 군에서 선택되며, 이 경우 상기 추가 펩티드는 치료 대상자의 HLA 조합에 따라 선택된다.

국제특허출원공개 제 2004/067023 호는 펩티드가 클래스 I HLA 분자에 높은 친화력으로 결합할 수 있는, 종양 관련 항원 서비빈에서 유래하는 MHC 클래스 I 제한 펩티드를 기술하고 있다.

백신에 포함될 각 펩티드의 최적량과 최적의 용량 용법은 당업자가 과도한 실험을 하지 않고도 정할 수 있다. 예를 들면, 펩티드나 그 변형물은 정맥내(i.v.) 주사, 피하(s.c.) 주사, 피내(i.d.) 주사, 복강(i.p.) 주사, 근내(i.m.) 주사용으로 조제될 수 있다. 실시예로서, 그러나 이에 국한되지는 않는 범위에서, 펩티드 주사는 s.c., i.d., i.p., i.m. 및 i.v. 경로로 시행될 수 있다. 실시예로서, 그러나 이에 국한되지는 않는 범위에서, DNA 주사는 i.d., i.m., s.c., i.p. 및 i.v. 경로로 시행될 수 있다. 예를 들어 1 내지 500 mg, 50 ㎍ 및 1.5 mg, 또는 125 내지 500 ㎍ 용량의 펩티드나 DNA를 투여할 수 있고 그 용량은 해당 펩티드나 DNA에 따라 다르다. 이러한 범위의 용량은 이전의 임상시험에서 성공적으로 사용되었다(Brunsvig PF, Aamdal S, Gjertsen MK, Kvalheim G, Markowski-Grimsrud CJ, Sve I, Dyrhaug M, Trachsel S, Møller M, Eriksen JA, Gaudernack G; Telomerase peptide vaccination: a phase I/II study in patients with non-small cell lung cancer; Cancer Immunol Immunother. 2006; 55(12):1553-1564; M. Staehler, A. Stenzl, P. Y. Dietrich, T. Eisen, A. Haferkamp, J. Beck, A. Mayer, S. Walter, H. Singh, J. Frisch, C. G. Stief; An open label study to evaluate the safety and immunogenicity of the peptide based cancer vaccine IMA901, ASCO meeting 2007; Abstract No 3017).

본 명세서에서 공개된 조성은 본 조성물에 있는 펩티드의 선택, 수 및/또는 양이 조직, 암 및/또는 환자 특이적이 되도록 편집될 수 있다. 예를 들면, 부작용을 피하기 위해 주어진 조직 내 모 단백질의 발현 패턴에 따라 펩티드들을 정확하게 선택할 수 있다. 그러한 선택은 치료 대상 환자가 앓고 있는 암의 특정 유형뿐만 아니라 질환의 상태, 이전 치료 방법, 환자의 면역 상태와 당연히 환자의 HLA-일배체형에 따라 다를 수 있다. 더욱이 본 발명에 따른 백신은 특정 환자의 개인적인 필요에 따라 개별화된 성분을 포함할 수 있다. 예를 들면 특정 환자에서 관련 TAA의 발현에 따라 다른 펩티드의 양, 개인 알레르기나 기타 치료로 인한 원치 않는 부작용 및 1회차 치료 또는 치료 계획 후 2차 치료의 적응 등이다.

당업자는 예를 들면, 체외에서 T-세포의 생성 및 이들의 효능과 전반적인 존재를 검사한다든지, 특정 펩티드에 대한 T-세포의 증식, 친화도 및 확산(예를 들면 IFN-γ 생산을 분석함으로써)을 검사하여 면역원 펩티드의 바람직한 조합을 선택할 수 있을 것이다(아래의 실시예도 참고). 일반적으로 이러한 시험 후 가장 효능이 있는 펩티드가 상기에서 설명한 목적을 위해 백신으로 조합된다.

적합한 백신은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20종의 다른 펩티드를 포함할 수 있다. 암 백신에 사용되는 펩티드의 길이는 어떠한 적합한 펩티드라도 된다. 특히, 이것은 적절한 9배체(9-mer) 펩티드 또는 적절한 8-배체 또는 9-배체 또는 10-배체 또는 11-배체 펩티드 또는 12-배체, 13-배체, 14-배체 또는 15-배체일 수 있다. 더 긴 펩티드도 적합할 수 있다; 첨부된 표 1 및 2에 설명된 대로 9-배체 또는 10-배체 펩티드는 MHC 클래스 I 펩티드에 바람직한 반면, 12 내지 15-배체는 MHC 클래스 II 펩티드에 바람직하다.

펩티드는 종양 또는 암 백신을 구성한다. 이것은 환자에 직접 투여하거나, 영향을 받은 장기나 전신에 투여하거나, 환자로부터 유래한 세포, 즉 사람 세포주에 체외에서 적용한 다음 다시 환자에게 투여하거나, 또는 환자에게서 얻은 면역 세포의 하위 세포집단(다시 환자에게 투여됨)을 선택하기 위해 체외에서 사용될 수 있다.

펩티드는 상당히 정제되어 있거나 면역 자극 보강제와 합치거나(아래 참고) 또는 면역 자극 사이토카인과 병용하거나, 또는 예를 들어 리포솜과 같은 적절한 전달 체계로 투여할 수 있다. 펩티드는 또한 열쇠구멍 삿갓 조개 헤모시아닌(KLH)이나 만난과 같은 적절한 담체에 접합시킬 수도 있다(국제특허출원공개 제 95/18145 호 및 Longenecker, et al., (1993) Ann. NY Acad. Sci. 690, 276-291 참고). 펩티드는 표지를 붙일 수도 있고, 융합 단백질일 수도 있으며 또한 하이브리드 분자일 수도 있다. 서열이 수여된 펩티드는 CD4 T-세포나 CD8 CTL을 자극하는 것으로 예상된다. 그러나 자극은 반대 CD에 대해 양성인 T-세포가 제공하는 도움이 있으면 더 효율적이다. 그러므로 CD4 T-세포를 자극하는 MHC 클래스 II 항원결정기의 경우, 하이브리드 분자의 융합 짝 또는 일부 구간이 CD8-양성 T-세포를 자극하는 항원결정기를 적절하게 제공한다. 반면에 CD8 CTL을 자극하는 MHC 클래스 I 항원결정기의 경우, 하이브리드 분자의 융합 짝 또는 일부 구간이 CD4-양성 T-세포를 자극하는 항원결정기를 적절하게 제공한다. CD4- 및 CD8-자극 항원결정기는 당업계에 잘 알려져 있으며 본 발명에서 동정된 것들을 포함한다.

약학적으로 허용되는 담체는 잘 알려져 있으며 보통 액상으로 활성 치료제가 첨가되어 조제된다. 담체는 화학적 및/또는 생물학적 안정성, 방출 특성, 등등을 제공하지만 일반적으로 조제물에 어떠한 약학적 활성도 제공하지 않는다. 바람직한 조제물은, 예를 들면, Alfonso R. Gennaro. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition. Baltimore, MD: Lippincott Williams & Wilkins, 2000에서 찾아볼 수 있으며, 식염수, 물, 완충수, 0.3% 글리신, 히알루론산, 덱스트로스 등을 포함할 수 있으나 이에 국한되지는 않는다. 최근에는 사람 환자의 경정맥 영양용으로 수년간 사용된 특정 지방 유제가 펩티드의 담체로 또한 작용할 수 있다는 것이 발견되었다. 그러한 유제의 두 가지 실시예는 인트라리피드(Intralipid) 및 리포푼딘(Lipofundin)으로 알려진 상용 지방 유제이다. "인트라리피드"는 스웨덴의 카비 파마시아(Kabi Pharmacia)의 등록 상표로, 미국 특허 제 3,169,094 호에 기술된 경정맥 영양용의 지방 유제이다. "리포푼딘"는 독일의 베. 브라운 멜순겐(B. Braun Melsungen)의 등록 상표이다. 두 가지 모두 대두유를 지방으로 함유한다(1,000 ml의 정제수에 100 또는 200 g: 각각 10% 또는 20%). 난황 인지질은 인트라리피드(12 g/l 정제수) 내에서, 난황 레시틴은 리포푼딘(12 g/l 정제수) 내에서 유화제로 사용된다. 등장성은 인트라리피드와 리포푼딘 양쪽에 글리세롤(25 g/l)을 첨가하면 알 수 있다.

면역 반응을 유도하기 위해서 일반적으로 본 조성물에 면역원성을 더해 주는 보강제를 포함하는 것이 필요하다. 또 다른 양상으로 본 조성물은 적어도 1종의 HLA 결합 펩티드와 1종의 면역보강제로 구성되어 제공되며, HLA 결합 펩티드는 전립선 관련 항원 분자에서 유래하는 항원결정기를 함유한다.

본 명세서에서 사용되듯이, 용어 "면역보강제"는 항원 분자와 병용하는 경우 항원 특이 면역 반응을 비특이적으로 가속, 연장, 또는 다른 방법으로 보강하는 물질을 지칭한다. 면역보강제는 당업계에 잘 알려져 있으며 아무 면역보강제를 사용해도 된다. 적절한 보강제로는 1018 ISS, 알루미늄염, 암플릭박스(Amplivax: 등록상표), AS15, BCG, CP870,893, CpG7909, CyaA, 몰로겐(Mologen)의 dSLIM(등록상표), GM-CSF, IC30, IC31, 이미퀴모드(Imiquimod: 등록상표), 이뮤팩트(ImuFact) IMP321, 인터페론-α 또는 -β, IS 패치(Patch), ISS, ISCOM, 주브이뮨(JuvImmune: 등록상표), 리포백(LipoVac: 등록상표), MF59, 모노포스포릴 리피드 A 및 기타 비독성 LPS 유도체, 몬타니드(Montanide) IMS 1312, 몬타니드 ISA 206, 몬타니드 ISA 50V, 몬타니드 ISA-51, OK-432, OM-174, OM-197-MP-EC, 온타크(ONTAK), 펩텔(PepTel: 등록상표) 매개체 시스템, PLG 미립자, 레시퀴모드(resiquimod: 등록상표), SRL172, 비로좀 및 기타 바이러스 유사 입자, YF-17D, VEGF 트랩, R848, β글루칸, Pam3Cys, 사포닌에서 유래하는 아퀼라(Aquila)의 QS21 스티뮬론(stimulon)(아퀼라 바이오테크(Aquila Biotech), 미국 마이애미주 왈세스터 소재), 마이코박테리아 추출물 및 합성 세균 세포벽 유사체(mimics) 및 기타 리비(Ribi)의 데톡스(Detox), 퀼(Quil) 또는 슈퍼포스(Superfos)와 같은 특허 보강제를 포함하지만 이에 국한되지는 않는다. 이미퀴모드, 레시미퀴모드(Resimiquimod), 불완전 프로인트(incomplete Freund), 인터페론-α 또는 GM-CSF 등과 같은 보강제가 바람직하다. 수지상 세포와 이들의 조제물에 특이적인 몇 가지 면역보강제(예를 들면, MF59)들은 앞서 설명된 바 있다(Dupuis M, Murphy TJ, Higgins D, Ugozzoli M, van Nest G, Ott G, McDonald DM; Dendritic cells internalize vaccine adjuvant after intramuscular injection; Cell Immunol. 1998; 186(1):18-27; Allison AC; The mode of action of immunological adjuvants; Dev Biol Stand. 1998; 92:3-11). 사이토카인도 사용할 수 있다. 여러 가지 사이토카인은 직접 결합하여 수지상 세포가 림프조직(예를 들면, TNF-α)으로 이동하는데 영향을 미치고, 수지상 세포가 T-림프구를 위한 효율적인 항원 제시 세포로 성숙하는 것을 가속화하며(예를 들면, GM-CSF, IL-1 및 IL-4)(미국특허 제 5,849,589 호, 특별히 본 명세서에 전체 내용이 참조로 통합됨) 및 면역보강제 역할을 한다(예를 들어, IL-12)(Gabrilovich DI, Cunningham HT, Carbone DP; IL-12 and mutant P53 peptide-pulsed dendritic cells for the specific immunotherapy of cancer; J Immunother Emphasis Tumor Immunol. 1996(6):414-418).

또한 CpG 면역자극 올리고뉴클레오티드는 보강제의 효과를 증강시키고 백신 환경에서 보강제 자체로서 역할을 하는 것으로 보고되었다. 이론과는 달리, CpG 올리고뉴클레오티드는 톨 유사 수용체(TLR), 주로 TLR9를 통해 선천적(비적응) 면역계를 활성화 함으로써 작용한다. CpG에 의해 TLR9 활성화가 시작되면 펩티드나 펩티드 항원, 살아있거나 죽은 바이러스, 수지상 세포 백신, 자가 세포 백신 및 예방용 및 치료용 백신의 다당류 접합체 등을 포함하여 광범위한 항원에 대한 항원 특이 체액성 및 세포성 반응이 증강된다. 더욱 중요한 것은 이로 인해 수지상 세포의 성숙과 분화가 촉진되어 CD4 T-세포의 도움이 없더라도 T_H1 세포 활성화가 증강되고 세포독성 T-림프구(CTL) 생성이 크게 증강된다. TLR9 자극에 의해 유도된 TH1 편향은 보통 TH2 편향을 촉진하는 알룸(alum)이나 불완전 프로인트 보강제(IFA)와 같은 백신보강제가 있더라도 유지된다. CpG 올리고뉴클레오티드는 다른 보강제와 병용 투여되는 경우, 미립자, 나노 입자, 지질 유제, 또는 유사한 조제물 등의 조제물에서 조제되면 더 큰 보강제 활성도를 나타내는데, 이것은 항원이 비교적 약할 때 강한 반응을 유도하기 위해 특별히 필요하다. 이들은 또한 면역 반응을 촉진시키고 몇몇 실험에서는 CpG 없이도 전체 용량 백신에 대해 비교할 만한 항체 반응을 하여 항원 용량이 대략 2자리 숫자로 줄어들 수 있도록 한다(Arthur M. Krieg, Therapeutic potential of Toll like receptor 9 activation, Nature Reviews, Drug Discovery, 2006, 5, 471-484). 미국 특허 제 6,406,705 B1 호의 명세서에 따르면 CpG 올리고뉴클레오티드, 비핵산 보강제 및 항원을 조합하여 사용하면 항원-특이 면역 반응이 유도된다. 상용 제품인 CpG TLR9 길항제로는 몰로겐(독일 베를린 소재)사의 dSLIM(등록상표)(이중 줄기 고리 면역조절제)이 있다. RNA 결합 TLR 7, TLR 8 및/또는 TLR 9 등과 같은 기타 TLR 결합 분자도 사용될 수 있다.

유용한 보강제의 다른 예는 다음을 포함하나 이에 국한되지 않는다: 면역활성 소분자 및 항체 예를 들어, 이미다조퀴놀린, 사이클로포스파마이드, 수니티닙, 베바시주맙, 쎄레브렉스, NCX-4016, 실데나필, 타달라필, 발데나필(vardenafil), 소라피닙(sorafinib), XL-999, CP-547632, 파조파닙, ZD2171, AZD2171, 이피리무맙(ipilimumab), 트레멜리무맙(tremelimumab) 및 SC58175뿐만 아니라 화학적으로 변형된 CpG(예를 들어, CpR, 이데라), 뮤신-1-mRNA/프로타민 복합체, Poly(I:C)(예를 들어, 폴리I:C12U), 비-CpG 박테리아성 DNA 또는 RNA 등으로 이들은 치료제로 및/또는 보강제로서 작용할 수도 있다. 본 발명의 맥락에서 유용한 보강제 및 첨가제의 양과 농도는 당업자가 과도한 실험을 하지 않고도 쉽게 정할 수 있다.

한 구현의 예로, 상기 보강제는 dSLIM(등록상표), BCG, OK432, 이미퀴모드, 뮤신-1-mRNA/프로타민 복합체, 레스이미퀴모드, GM-CSF, 인터페론-α, 페비테르(PeviTer: 등록상표) 및 주브이뮨 또는 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택된다.

또 다른 구현의 예로, 상기 보강제는 과립구 대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF, 사르그라모스팀), 이미퀴모드(등록상표), 뮤신-1-mRNA/프로타민 복합체, 레스이미퀴모드 및 인터페론-α 등과 같은 집락 자극 인자로 구성된 군에서 선택된다.

본 발명에 따른 조성물의 또 다른 구현 예로, 상기 보강제는 뮤신-1-mRNA/프로타민 복합체, 이미퀴모드, 또는 레스이미퀴모드이다.

본 명세서에 공개된 이러한 조성물들은 피하, 피내, 근내, 복강내, 또는 경구 투여와 같은 비경구 투여 또는 경구 투여용으로 사용될 수 있다. 이를 위해, 상기 펩티드와 선택적으로 다른 분자들을 약학적으로 허용되는 담체, 바람직하기로는 수용성 담체에 용해 또는 현탁한다. 또한 본 조성물에는 완충액, 결합제, 폭제, 희석액, 향료, 윤활제 등과 같은 부형제가 포함될 수 있다. 또한 상기 펩티드는 사이토카인과 같은 면역 자극 물질과 함께 투여할 수 있다. 이러한 본 조성물에 사용될 수 있는 부형제들의 방대한 목록은 예를 들면, 키베(A. Kibbe)의 의약품 부형제 핸드북, 3rd Ed. 2000(American Pharmaceutical Association and pharmaceutical press)에서 찾아볼 수 있다. 본 조성물은 선종성이나 암성 질환, 바람직하기로는 CRC의 방지, 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다.

세포독성 T-세포(CTL)는 미접촉(intact) 외래 항원 자체보다는 MHC 분자에 결합된 펩티드의 형태로 항원을 인식한다. MHC 분자 자체는 항원 제시 세포의 세포 표면에 위치한다. 그러므로 CTL의 활성화는 펩티드 항원, MHC 분자 및 APC의 삼량체 복합체가 존재하는 경우에만 가능하다. 상대적으로, 이렇게 되면 펩티드가 CTL의 활성화에 사용되는 경우뿐만 아니라 추가적으로 해당 MHC 분자와 함께 APC가 첨가되는 경우에도 면역 반응이 증강될 수 있다.

또 다른 구현의 예로, 본 발명에 따른 조성물은 추가적으로 적어도 1종의 항원 제시 세포를 포함한다.

항원 제시 세포(또는 자극 세포)는 일반적으로 자신의 표면에 MHC 클래스 I 또는 II 분자를 가지고 있으며, 한 구현의 예로 근본적으로 자체로는 MHC 클래스 I 또는 II 분자를 선택된 항원으로 탑재할 수 없다. 아래에 더 자세하게 설명되어 있듯이 클래스 I 또는 II 분자는 체외에서 선택된 항원과 함께 쉽게 탑재될 수도 있다.

한 구현의 예로, 포유류의 세포는 TAP 펩티드 담체가 없거나 감소되었거나 기능이 감소되어 있다. TAP 펩티드 담체가 없는 적절한 세포에는 T2, 결손 세포주를 탑재하는 사람 펩티드(American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA에서 카탈로그 번호 CRL 1992로 주문 가능)가 포함된다; T2와 같은 TAP 부족 세포주는 APC로 사용될 수 있고, TAP의 부족으로 인해 MHC 클래스 I에 의해 제시된 거의 모든 펩티드는 이러한 세포주의 빈 MHC 클래스 I 분자를 외부적으로 탑재하는데 조심해서 사용되는 펩티드가 될 것이다. 그래서 모든 효과는 분명히 사용된 펩티드 덕분일 것이다.

또 다른 구현의 예로, 항원 제시 세포는 수지상 세포이다. 적절하게는, 수지상 세포들은 항원 펩티드로 감작된 자가 수지상 세포들이다. 상기 항원 펩티드는 충분한 T-세포 반응을 일으키면 어떠한 항원 펩티드라도 괜찮다. 종양 관련 항원에서 나온 펩티드로 감작된 자가 수지상 세포를 사용하는 T-세포 치료는 Murphy, et al., The Prostate 29, (1996) 371-380, 및 Tjua, et al., The Prostate t32, (1997) 272-278에서 공개되어 있다.

또 다른 구현의 예로, 적어도 1종의 항원 제시 세포를 함유하는 본 조성물은 상기 펩티드로 감작 또는 탑재된다.

대체 수단으로 상기 항원 제시 세포는 펩티드를 암호화하는 발현 구조물을 함유한다. 폴리뉴클레오티드는 어떠한 폴리뉴클레오티드라도 적절하다. 한 구현의 예로, 상기 폴리뉴클레오티드는 수지상 세포 형질을 도입할 수 있고, 따라서 펩티드가 제시되고 면역원성이 유도된다.

편리하게도 본 발명의 핵산은 바이러스성 폴리뉴클레오티드 또는 바이러스에서 구성될 수 있다. 예를 들면, 아데노바이러스 형질 도입 수지상 세포는 MUC1과 관련하여 항원 특이 항종양 면역성을 유도하는 것으로 나타났다(참고: Gong et al., (1997) Gene Ther. 4, 1023-1028). 이와 유사하게, 아데노바이러스 기반 시스템이 사용될 수도 있고(예를 들면, 참고: Wan et al., (1997) Hum. Gene Ther. 8, 1355-1363); 레트로바이러스 시스템이 사용될 수도 있고(Specht et al., (1997) J. Exp. Med. 186, 1213-1221 and Szabolcs et al.,(1997) Blood particle-mediated transfer to dendritic cells may also be used(Tuting et al., (1997) Eur. J. Immunol. 27, 2702-2707); RNA도 사용될 수 있다(Ashley et al., (1997) J. Exp. Med. 186, 1177-1182).

일반적으로 본 발명의 핵산(들)을 포함하는 본 발명의 조성물은 본 발명의 펩티드를 함유하는 것들과 유사하게 투여될 수 있다; 예를 들면, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근내, 피내, 종양내, 경구경로, 피부경로, 비강경로, 협측경로, 직장경로, 흡입, 또는 국부 투여에 의해서이다.

회피 기전으로 인해 종양은 대개 치료 약물에 대해 저항성을 형성한다. 약물 저항은 치료 중에 발생하기도 하고 전이조직과 재발된 종양에서 나타날 수도 있다. 그러한 약물 저항을 피하기 위해 종양은 보통 여러 약물을 조합하여 치료하며, 무질병 시간 후 재발하는 전이물과 종양에 대해서는 대개 다른 조합이 필요하다. 그러므로 본 발명의 한 양상으로, 본 조성물은 2차 항원제와 병용하여 투여된다. 2차 제제는 본 공개 조성물 전에, 후에, 또는 동시에 투여될 수 있다. 동시 투여는, 예를 들면 화학적 특성이 맞는 경우 본 공개 조성물을 2차 항암제에 섞어 투여할 수 있다. 동시 투여의 또 다른 방법은, 예를 들면 2차 항암제는 경구로 투여하는 반면 본 조성물은 주사 투여하는 식으로 본 조성물과 항암제를 투여 경로를 따로 하여 같은 날 투여하는 것이다. 본 조성물과 2차 항암제는 또한 같은 치료 과정 내에서, 그러나 서로 다른 날 및/또는 별도의 치료 과정 내에서 투여할 수 있다.

또 다른 구현의 예로, 환자의 암을 치료하거나 방지하는 방법을 제공함에 있어서, 상기 방법은 본 공개특허 조성물의 어느 하나를 환자에게 치료 효과 용량으로 투여하는 것을 포함한다.

치료 효과 용량은 면역 반응, 구체적으로 CTL의 하위집단을 활성화시키는데 충분한 용량이 된다. 당업자는 본원의 실시예에서 제공된 것과 같은 표준 면역학적 방법을 사용하여 용량이 효과가 있는지를 쉽게 판정할 수 있다. 본 조성물의 일정 용량의 효과를 모니터링하는 또 다른 방법은 치료 종양의 성장 및/또는 재발을 관찰하는 것이다.

또 다른 구현의 예로 본 조성물은 항암 백신으로 사용된다.

펩티드 또는 펩티드-인코딩 핵산을 함유하는 조성물은 또한 종양 또는 암 백신을 구성할 수 있다. 이것은 환자에 직접 투여하거나, 영향을 받은 장기나 전신에 투여하거나, 환자에게서 유래한 세포, 즉 사람 세포주에 탈체 적용한 다음 다시 환자에게 투여하거나, 또는 환자에게서 유래한 면역 세포의 하위 세포집단(다시 환자에게 투여됨)을 선택하기 위해 체외에서 사용될 수 있다.

일 양상으로, 백신은 전립선암 치료를 위한 다중 펩티드 종양 백신이다. 또 다른 양상으로, 백신은 원발 전립선 세포 및/또는 전립선 암종에 위치하고 동정된 서열번호 1 내지 서열번호 11 및 서열번호 13 내지 서열번호 14로부터 선택한 종양 관련 펩티드 조합을 함유한다. 이러한 조합은 HLA 클래스 I 및 클래스 II 펩티드를 포함한다. 상기 펩티드 조합은 또한 인플루엔자 핵심 항원의 펩티드 등과 같은, 적어도 1종의 펩티드를 포함할 수 있는바, 상기 펩티드가 피내 투여의 효율성을 시험하기 위해 면역 표지자 역할을 하는 양성 대조 펩티드로 사용되는 경우이다. 특별한 구현의 한 예로, 상기 백신이 14개의 개별 펩티드(서열번호 1 내지 서열번호 14에 따른)로 구성됨에 있어서, 각 펩티드의 용량은 각 펩티드의 약 1500 내지 약 75 ㎍, 약 1000 내지 약 175 ㎍, 약 500 내지 600 ㎍, 약 578 ㎍에서 선택된 용량으로, 이는 모두 HPLC 및 이온 교환 크로마토그래피로 정제되어 백색 내지 회백색 분말로 보인다. 동결건조물은 탄산수소나트륨에 용해시켜 상온에서 재구성 후 30 분 이내에 피내 주사에 사용할 수 있다. 용액 500 μl 당 펩티드의 총량은 약 0.1 내지 100 mg, 약 0.1 내지 1 mg 및 약 300 μg 내지 800 μg으로 다양할 수 있다. 본 명세서에서 단어 "약(대략)"이란 달리 명시하는 않는 한 주어진 값의 ±10 페센트를 의미한다. 당업자는, 예를 들면 개별 환자의 면역 상태 및/또는 특정 암의 유형에 존재하는 TUMAP 등과 같은 여러 요인에 근거하여 사용할 펩티드의 실제 양을 조정할 수 있을 것이다. 펩티드는 동결건조물 대신 다른 적당한 형태(무균 용액 등)로 제공될 수 있다.

조성물은 자유로운 형태 또는 약학적으로 허용되는 염의 형태로 펩티드를 함유할 수 있다.

본 명세서에서 사용되듯이, "약학적으로 허용되는 염"이란 본 공개특허의 펩티드의 유도체를 지칭하며, 펩티드가 제제를 산이나 염기 염으로 만듦으로써 변형되는 경우이다. 예를 들면 산성 염은 적절한 산과의 반응을 포함하는 유리 염기(전형적으로 약물의 중성 형태가 중성 -NH₂ 기를 가지는 경우)로부터 조제된다. 산성 염을 조제하기에 적절한 산은 유기산(예를 들면, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말산, 말론산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 살리실산 및 기타 등등)과 무기산(예를 들면, 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 및 기타 등등)을 포함한다. 이와는 반대로, 펩티드에 존재할 수 있는 산 잔기의 기본 염의 조제는 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화암모늄, 수산화칼슘, 트리메틸아민 또는 등등과 같은 약학적으로 수용할 수 있는 염기를 사용하여 조제된다. 하나의 실시예로서, 그러나 이에 국한되지는 않는 범위에서, 본 조성물은 아세트산(아세테이트), 암모늄, 또는 염산(염화물)의 염으로서 펩티드를 함유할 수 있다.

또 다른 구현의 예로, 본 조성물은 틀 형성기(framework former)로서 당, 당알코올, 아미노산(글리신, 아르기닌, 글루탐산 등)을 포함할 수 있다. 당은 단당류, 이당류 또는 삼당류일 수 있다. 이들 당류는 단독으로 사용할 수도 있고 당 알코올과 함께 사용할 수도 있다. 당류의 예로는 단당류로는 글루코스, 만노오스, 갈락토오스, 과당이나 소르보스가 있고, 이당류로는 수크로스, 젖당, 맥아당이나 트레할로오스가 있고, 삼당류로는 라피노오스가 있다. 당 알코올에는 예를 들면 만니토스가 있을 수 있다. 한 구현의 예로, 조성물은 수크로스, 젖당, 맥아당, 트레할로오스, 만니트 및/또는 소르비트를 포함한다. 또 다른 구현의 예로 본 조성물은 만니톨을 포함한다.

더욱이, 본 조성물들은 아스코르빈산이나 글루타티온 같은 항산화물질 등의 생리적으로 내성이 우수한 부형제(Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5^th ed., edited by Raymond Rowe, Paul Sheskey and Sian Owen, Pharmaceutical Press(2006) 참고), 페놀, m-크레졸, 메틸- 또는 프로필파라벤, 클로로부탄올, 티오머살이나 벤잘코늄클로라이드(benzalkoniumchloride) 등과 같은 보존제, 안정화제, 수크로스, 젖당, 맥아당, 트레할로오스, 만니토스, 만니트 및/또는 소르비트, 만니트 및/또는 젖당 등과 같은 틀 형성기 및 폴리에틸렌글리콜(PEG), 즉, PEG 3000, 3350, 4000 또는 6000, 또는 사이클로덱스트린, 즉 하이드록시프로필-ß-사이클로덱스트린, 설포부틸에틸-ß-사이클로덱스트린 또는 γ 사이클로덱스트린, 또는 덱스트란이나 폴록사머(폴록사머), 즉 폴록사머 407, 폴록사머 188, 또는 트윈(Tween: 등록상표)20, 트윈(등록상표)80 등과 같은 용해제를 포함할 수 있다. 또 다른 양상으로, 항산화제들, 틀 형성기들 및 안정화제들로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 내성이 우수한 부형제가 포함될 수 있다.

또 다른 양상으로, 정맥내 및 근내 투여를 위한 pH는 pH 2 내지 pH 12에서 선택되는 반면, 체내 희석 속도가 감소되어 주사 부위에서 방사선 요법의 가능성이 커짐에 따라 피하 투여를 위한 pH는 pH 2.7 내지 pH 9.0에서 선택된다. Strickley Robert G., Pharm. Res., 21, NO:2, 201-230 (2004).

또 다른 양상으로, 본 발명에 따른 펩티드 및/또는 핵산을 포함하는 약학 제제(劑製)는 해당 펩티드나 항원과 연관된 선종성 또는 암성 질환을 앓는 환자에게 투여된다. 이에 의해 T-세포 매개 면역 반응이 시작될 수 있다.

또 다른 양상으로, 본 조성물에 존재하고, 본 발명에 따른(특히 종양 관련) 펩티드(들), 핵산(들), 또는 발현 매개체(들)의 양이 조직, 암 및/또는 환자 특이적인 조성물이 공개된다.

또 다른 구현의 예로, 백신은 핵산 백신이다. 폴리펩티드를 암호화하는 DNA 백신 등의 핵산 백신을 사용한 접종은 T-세포 반응으로 이어진다는 것이 알려져 있다. 이것은 환자에 직접(영향을 받은 장기나 전신에) 투여하거나, 환자에게서 채취한 세포에 탈체 적용, 즉 사람 세포주에 적용한 다음 다시 환자에게 투여하거나, 또는 체외에서 사용되어 환자에게서 채취한 면역 세포에서 하위 세포집단을 선택하고 그 다음 이들을 다시 환자에게 투여할 수 있다. 상기 핵산이 체외에서 세포에 투여되는 경우 인터류킨-2 또는 GM-CSF 등과 같은 면역 자극 사이토카인을 공동 발현하도록 세포가 형질 주입되는 것이 유용할 수 있다. 본 핵산(들)은 상당히 순수하거나 면역 자극 보강제와 합치거나 또는 면역 자극 사이토카인과 병용하거나 또는 예를 들어 리포솜과 같은 적절한 전달 체계를 사용하여 투여할 수 있다. 본 핵산 백신은 또한 위의 펩티드 백신에 대해 설명된 것들과 같은 보강제와 함께 투여될 수 있다. 본 핵산 백신은 보강제 없이 투여될 수 있다.

상기 폴리뉴클레오티드는 상당히 순수할 수 있거나 적절한 매개체나 전달 시스템 내에 담길 수 있다. 적절한 매개체 및 전달 시스템은 아데노바이러스, 백신 바이러스, 레트로바이러스, 헤르페스 바이러스, 아데노-연관바이러스, 또는 한 가지 이상의 바이러스 요소를 포함하는 잡종에 근거한 시스템과 같은 바이러스성 시스템(viral system)을 포함한다. 비바이러스성 전달 시스템은 DNA 전달의 당업계에서 잘 알려져 있는 양이온성 지질 및 양이온성 폴리머를 포함한다. "유전자총(gene-gun)"을 통하는 것과 같은 물리적 전달도 사용될 수 있다. 본 펩티드나 핵산에 의해 부호화된 펩티드는, 예를 들면 CD4-양성 T-세포를 자극하는 파상풍 독소에 나온 항원결정기가 있는 융합 단백질일 수 있다.

적절하게는, 환자에게 투여된 모든 핵산은 멸균되고 발열성 물질이 제거된다. 순수(naked) DNA는 근내, 피내, 또는 피하 경로로 투여될 수 있다. 편리하게는, 상기 핵산 백신은 어떤 적절한 핵산 전달 수단을 함유할 수도 있다. 본 핵산은 또한 리포솜 내에서, 또는 바이러스성 매개체 전달 시스템의 일부로서 전달될 수 있다. 한 구현의 예로, DNA 백신과 같은 핵산 백신은 근육 속에 투여된다. 또 다른 구현의 예로, 상기 펩티드 백신은 s.c. 또는 i.d. 경로로 투여된다. 또 다른 구현의 예로, 본 백신은 피부 속으로 투여된다.

상기 핵산의 흡수와 수지상 세포와 같은 전문 항원 제시 세포에 의한 암호화된 폴리펩티드의 발현은 면역 반응의 시발 기전일 수 있다고 믿어진다; 그러나, 수지상 세포들은 형질 주입되지 않을 수 있지만 여전히 중요하다. 왜냐하면 이들은 조직 내에서 형질 주입된 세포들로부터 발현된 펩티드를 얻을 수 있기 때문이다(교차시발", 예를 들면, Thomas AM, Santarsiero LM, Lutz ER, Armstrong TD, Chen YC, Huang LQ, Laheru DA, Goggins M, Hruban RH, Jaffee EM. Mesothelin-specific CD8(+) T cell responses provide evidence of in vivo cross-priming by antigen-presenting cells in vaccinated pancreatic cancer patients. J Exp Med. 2004 Aug 2; 200(3):297-306).

암의 폴리뉴클레오티드매개 면역 치료는 Conry et al., (1996) Seminars in Oncology 23, 135-147; Condon et al., (1996) Nature Medicine 2, 11221127; Gong et al., (1997) Nature Medicine 3, 558-561; Zhai et al., (1996) J. Immunol. 156, 700-710; Graham et al., (1996) Int J. Cancer 65, 664-670; 및 Burchell et al., (1996) 309-313 In: Breast Cancer, Advances in biology and therapeutics, Calvo et al., (Eds), John Libbey Eurotext 등의 문서에 설명되어 있으며 본 명세서에 전체 내용이 참조로 통합된다.

주사 부위, 표적 매개체 및 전달 시스템에 의해서든지 또는 환자의 세포 집단의 선택적 정제 및 펩티드나 핵산의 탈체 투여에 의해서든지 본 백신을 특정 세포 집단(예를 들면 항원 제시 세포)에 표적으로 하는 것이 유용할 수도 있다(예를 들면, Zhou et al., (1995) Blood 86, 3295-3301; Roth et al., (1996) Scand. J. Immunology 43, 646-651 등의 문서에서 설명된 대로 수지상 세포는 선별될 수 있다). 예를 들면, 표적 매개체는 적절한 장소에서 항원이 발현되도록 하는 조직 또는 종양-특이 촉진자를 함유할 수 있다.

상기 백신은 치료 대상 환자가 앓고 있는 암의 특정 유형뿐만 아니라 질환의 상태, 이전 치료 방법, 환자의 면역 상태와, 또한 환자의 HLA-일배체형에 따라 다를 수 있다. 더욱이 본 백신은 특정 환자의 개인적인 필요에 따라 개별화된 성분을 포함할 수 있다. 예를 들면 특정 환자에서 관련 TAA의 발현에 따라 펩티드의 양을 달리하거나, 개인 알레르기나 기타 치료로 인한 원치 않는 부작용, 또는 1회차 치료 또는 치료계획 후 2차 치료의 조정 등이 있다.

암 치료에 유용할 뿐만 아니라 본 명세서에서 공개된 펩티드는 또한 진단에도 유용하게 사용된다. 상기 펩티드들의 많은 부분이 전립선 암종에서 생성되었고 이들 펩티드가 정상 조직에는 없는 것으로 판정되었기 때문에, 이들 펩티드는 암의 존재를 진단하는데 사용될 수 있다.

조직 생검에서 상기 펩티드들의 존재는 병리사의 암 진단을 도울 수 있다. 항체, 질량 분광법이나 기타 당업계에 알려진 방법에 의해 공개된 펩티드들의 일부에 대한 검출은 병리사에게 조직이 악성인지, 염증성인지 또는 일반 질환인지를 알려줄 수 있다. 본 명세서에 공개된 펩티드 그룹들의 존재는 병든 조직의 분류나 하위분류를 가능하게 할 수 있다.

병든 조직 검체에 상기에 공개된 펩티드들이 검출되면, 특히 T-림프구가 작용 기전에 관여하는 것으로 알려져 있거나 예상되는 경우, 면역계를 포함하는 치료 유익에 대한 결정을 내릴 수 있다. MHC 발현의 소실은 잘 설명된 기전으로 이에 의해 감염된 악성 세포가 면역감시(immunosurveillance)를 피한다. 그러므로 본 명세서에 공개된 펩티드들이 존재하면 이러한 기전이 분석된 세포들에 의해 이용되지 않는다는 것을 보여준다.

본 명세서에 공개된 펩티드들은 본 펩티드들이나 MHC 분자에 복합된 펩티드들에 대한 T-세포 반응이나 항체 반응과 같은 이들 펩티드들에 대한 림프구 반응을 분석하는데 사용될 수 있다. 이러한 림프구 반응들은 추가 치료 단계에 대한 결정을 위한 예후 지표로 사용될 수 있다. 이러한 반응들은 또한 서로 다른 수단(예를 들면 단백질 백신화, 핵산, 자가 물질, 림프구의 양자 이입 등)에 의해 림프구 반응을 유도하는 것을 목표로 하는 면역치료 접근법에서 대리 표지자로 사용될 수 있다. 유전자 치료 환경에서, 본 명세서에 공개된 펩티드들에 대한 림프구 반응은 부작용 평가에서 고려될 수 있다. 또한, 림프구 반응의 모니터링은 예를 들면 이식 편대 숙주 및 숙주 편대 이식 질환(GVHD 및 HVGD)의 탐지를 위한 이식 치료의 추적검사를 위한 소중한 도구가 될 수 있다.

상기에 대한 또 다른 양상으로, (a) 위에서 설명된 조성물을 용액이나 동결건조된 형태로 담는 용기; (b) 선택적으로, 희석액이나 동결건조된 제제의 재구성 용액을 담는 제2 용기; 및 (c) 선택적으로, (i) 용액의 사용 또는 (ii) 재구성 및/또는 동결건조된 제제의 사용을 위한 설명서를 포함하는 키트가 공개된다. 상기 키트는 또한 하나 이상의 (iii) 완충액, (iv) 희석액, (v) 필터, (vi) 주사바늘 또는 (v) 주사기를 포함할 수 있다. 한 구현의 예로, 용기는 병, 바이알, 주사기, 시험관, 또는 다용도 용기로 구성된 군에서 선택할 수 있다. 또 다른 구현의 예로 상기 조성물은 동결건조된다.

일 양상으로, 상기 키트는 적절한 용기에 담긴 본 명세서에 공개된 조성물의 동결건조 제제 및/또는 백신을 이의 재구성 및/또는 사용 설명서로 구성될 수 있다. 적절한 용기의 예로는, 병, 바이알(예를 들면, 이실 바이알), 주사기(이실 주사기와 같은) 및 시험관이 포함된다. 상기 용기는 유리나 플라스틱과 같은 다양한 재질로 만들어질 수 있다. 한 구현의 예로, 상기 키트 및/또는 용기는 재구성 및/또는 사용에 대한 지침을 나타내는, 용기 표면에, 또는 그와 연관하여 표시된 지침을 포함한다. 예를 들면, 상기 표지는 동결건조된 제제가 위에서 설명된 펩티드 농도로 재구성되어야 한다는 것을 나타낼 수 있다. 또한 상기 표지는 제제가 피하 투여에 사용하기에 좋거나 그러한 용도라는 것을 나타낼 수 있다.

상기 제제를 담고있는 용기는 재구성된 제제를 반복 투여(예를 들면, 2 내지 6회의 투여)할 수 있는 다용도 바이알을 사용해도 된다. 상기 키트는 또한 적절한 희석액(예를 들면, 중탄산나트륨 용액)이 담긴 2차 용기를 포함할 수 있다.

한 구현의 예로, 상기 희석액과 동결건조된 제제를 혼합할 때, 재구성된 제제의 최종 펩티드 농도는 적어도 0.15 mg/mL/펩티드(=75 ㎍)이고 3 mg/mL/펩티드(=1500 ㎍)를 넘지 않는다. 상기 키트는 또한 다른 완충액, 희석액, 필터, 바늘, 주사기, 포장에 들어가는 사용설명서를 포함하여, 상용적인 관점이나 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 포함할 수 있다.

상기 키트는 다른 성분(예를 들면, 다른 화합물 또는 이들 화합물들의 조성물)이 포함된 조성물 제제가 들어있는 단일 용기를 포함하거나 각 성분에 대해 독립된 용기를 포함할 수 있다.

또한 상기 키트는 2차 화합물(보강제(예를 들면, 이미퀴모드), 화학치료제, 자연적인 산물, 호르몬이나 길항제, 항신생혈관생성제나 억제제, 세포자멸사 유도제나 킬레이터 등)이나 이의 조성물의 병용 투여와 함께 사용하도록 포장된 본 명세서에 공개된 조성물 및/또는 백신 제제를 포함할 수 있다. 상기 키트의 성분들은 사전에 복합체로 제조되거나 또는 각 성분이 환자에게 투여되기 전에 별도의 개별 용기에 담겨 있을 수 있다. 상기 키트의 성분들은 하나 이상의 용액에 담겨 제공될 수 있다. 일 구현의 예로, 상기 용액은 수용액이다. 또 다른 구현의 예로, 상기 용액은 멸균 수용액이다. 상기 키트의 성분들은 또한 다른 별도의 용기에 담아 공급할 수 있는 적절한 용제를 첨가하여 액체로 바꿀 수 있는 고형물로 공급될 수 있다.

치료 키트의 용기는 바이알, 시험관, 플라스크, 병, 주사기, 또는 고형물이나 액체를 담는 기타 도구일 수 있다. 보통 하나 이상의 성분이 있을 때, 상기 키트는 별도의 약물주입을 할 수 있는 2차 바이알이나 기타 용기를 포함할 수 있다. 상기 키트는 또한 약학적으로 허용가능한 액체를 담을 수 있는 또 다른 용기를 포함할 수 있다. 일 구현이 예로, 치료 키트는 본 키트의 성분들인 본 공개특허 제제의 투여를 가능하게 하는 기구(예를 들면, 하나 이상의 바늘, 주사기, 점안기, 피펫 등)를 포함할 수 있다.

본 약학 제제는 경구(장을 통한 경로), 비강, 점안, 피하, 피내, 근내, 정맥내 또는 경피 등의 허용가능한 경로에 의한 펩티드의 투여에 적합한 것일 수 있다. 일 양상으로, 상기 투여는 피하 경로이며, 주입 펌프에 의해 시행될 수도 있다.

용어 "T-세포 반응"이란 체외 또는 체내에서 펩티드에 의해 유도된 효과기 작용의 특이적인 증식과 활성화를 뜻한다. MHC 클래스 I 제한 CTL의 경우, 효과기 작용은 펩티드 감작, 펩티드 전구체 감작, 또는 자연적인 펩티드 제시 표적 세포들의 용해, 사이토카인의 분비, 작용기 분자의 분비, 또는 탈과립(degranulation)일 수 있다. 한 구현의 예로, 상기 T-세포 반응은 상기 펩티드에 의해 유도된 사이토카인의 분비인데, 이 경우 상기 펩티드는 인터페론-γ, TNF-α, 또는 IL-2로 이루어진 그룹에서 분비된다. 일 구현의 예로, 상기 T-세포 반응은 상기 펩티드에 의해 유도된 효과기 분자의 분비인데, 이 경우 효과기 분자가 그랜자임과 퍼포린으로 이루어진 그룹에서 분비된다. MHC 클래스 II제한 T-조력 세포의 경우, 효과기 작용은 펩티드에 의해 유도되는 사이토카인의 분비일 수 있는바, IFN-γ, TNF-α, IL-4, IL-5, IL-10 또는 IL-2, 또는 펩티드-유도 탈과립을 포함하나 이에 국한되지는 않는다. CTL 및 T-조력 세포의 가능한 효과기 작용은 이 목록에만 국한되지 않는다.

나아가 사람 주조직 적합 복합체(MHC) 클래스 I(HLA 클래스 I) 또는 II(HLA 클래스 II)의 분자에 대한 결합능이 있는 펩티드의 아미노산 서열의 조합으로 구성된 조성물이 공개된다.

상기 조성물들은 여러 펩티드들의 조합에 근거한 효과적인 항전립선암 백신으로 사용될 수 있다.

또 다른 양상은 전립선암 환자에게 본 명세서에 공개된 아무 조성물이라도 투여하는 것을 포함하는 전립선암 치료의 방법이다. 이들 조성물은 면역보강제를 사용하는 동반 치료와 함께 투여하거나 또는 동반 치료 없이 투여할 수 있다. 면역보강제가 사용되는 경우, 이것은 본 명세서에 공개된 조성물에 포함되거나, 또는 동일한 투여 경로를 통하거나 또는 다른 투여 경로를 통해 별도로 투여될 수 있다.

본 명세서에 공개된 조성물과 방법은 1차 치료, 보강 치료, 또는 완화요법으로 사용될 수 있으며, 단독으로 또는 수술 요법(전립선 절제술을 포함), 방사선 요법 및 화학요법을 포함하나 이에 국한되지 않는 기타 요법과 함께 사용될 수 있다. 본 공개특허의 방법은 또한 원발 종양, 생물학적 재발, 국소 재발, 또는 전이성 재발에 대해서 사용될 수 있다. 본 명세서에 공개된 방법들은 또한 안드로젠-민감성 암과 안드로젠-비민감성 암 모두에서 안드로젠 차단 요법 시행 전에, 시행과 함께, 또는 시행 후에 사용될 수 있다.

본 명세서에서 사용되듯이, 문구 "안드로젠-민감성 전립선암"이란 종양 성장에 안드로젠이 필요한 모든 전립선암을 지칭한다.

본 명세서에서 사용되듯이, 문구 "안드로젠-비민감성 전립선암"이란 종양 성장이 안드로젠이 없어도 이루어지는 모든 전립선암을 지칭한다.

본 명세서에서 사용되듯이, 문구 "안드로젠 차단 요법"이란 안드로젠 신호작용이나 안드로젠 생산을 억제하는 것을 1차 효과로 하는 모든 치료를 지칭한다.

다음의 예들은 특정 양상을 설명하는 것으로 본 발명을 제한하는 용도는 아니다. 본 명세서에 인용된 모든 참조사항은 참조로 전체 내용이 참조로 통합되어 있다.

실시예

실시예 1

HLA 결합 펩티드 칵테일은 진단적으로 전이 양상의 증거는 없지만, 근치적 전립선 절제술 후 생화학적 재발을 보인 환자에게서 시험하여 이러한 조성물이 PSA 배가 시간(DT)을 안정화 및/또는 증가시키는데 효과적인지를 판정하였다.

환자 선발

모든 환자는 근치적 전립선 절제술로 초기 근치적 치료를 받은 후 생화학적 재발을 보였다. 생물학적 재발이란 수술이나 수술과 방사선 치료 후 최소 14일의 간격으로 2회 측정하여 평가한 PSA가 가장 낮은 수치에서 50% 이상 증가한 것으로 정의되었다. 기타 적격 기준은 다음과 같다: 뼈 스캔, 횡단영상(axial imaging) 및 CT에 의한 판정에서 전이성 질환이나 국소적 종양 재발의 배제, 동부 종양학 협력 그룹(ECOG) 수행성적 상태 0 또는 1, 45 내지 80 세의 연령, 코르티코이드나 기타 면역 조절 요법의 배제; 방사선, 호르몬 또는 화학치료의 동시적 요법의 배제; 기타 악성, 간질성 또는 폐질환의 배제. 본 연구에 선발되는 시점에, 모든 환자는 안드로젠-민감성 환자였고 선발에 앞서 적어도 12 개월 동안 안드로젠 차단 요법을 중단한 상태였다. 모든 환자는 HLA-A*02 양성이었다. 환자 특성은 아래의 표 1에 보이는 바와 같다.

[표 1]

치료

유전적 변이와 항원 손실을 통한 종양 회피를 방지하기 위해, 특이 T-세포의 광범위한 스펙트럼을 표적으로 하는 다중 인식 펩티드 조성물이 사용되었다. 상기 조성물은 세포독성 CD8+ 및 CD4+ T-조력 세포의 활성화를 위해 전립선 연관 항원 분자로부터 HLA 클래스 I 및 클래스 II 모두에 대해 특이적인 13종의 합성 HLA 결합 펩티드들로 구성되었다. 상기 펩티드 중 11종(서열번호 1에서 서열번호 11까지)는 HLA-A*0201 제한 항원결정기들로 구성되었다. 2종의 펩티드(서열번호 13 및 서열번호 14)는 HLA 클래스 II 결합 항원결정기들로 이루어졌다. 인플루엔자 바이러스에서 나온 HLA-A*0201 항원결정기로 이루어진 추가 펩티드(서열번호 12)가 기억 CD8+ T-세포 반응을 활성화하는 마커 펩티드로 추가되었다. 펩티드들은 500 ml의 몬타니드 ISA-51로 유화된 다음 개별 펩티드당 300 mg씩 피하 주사되었다.

또한 환자들을 무작위로 선정하여 (1) 면역보강제; (2) 온열요법을 받게 하거나; 또는 (3) 면역보강제나 온열요법을 받지 않도록 하였다. 사용된 면역보강제는 (1) 이미퀴모드(알다라(Aldara), 메다 파르마(Meda Pharma), 독일 배드 홈버그 소재), (2) GM-CSF(류킨(Leukine: 등록상표), 바이에르 헬스케어(Bayer Healthcare), 독일 레베르쿠센 소재), (3) 슈힐(Scheel) 등의 자료 Therapeutic anti-tumor immunity triggered by injections of immunostimulating single-stranded RNA, Eur. J. Immunology 2006; 36(10):2807-2816에서 설명된 뮤신-1-mRNA/프로타민 복합제였다.

3명의 환자(환자 1, 2 및 5)는 면역보강제나 온열요법을 받지 않았다.

4명의 환자(환자 16, 17, 18 및 19)는 면역보강제로 뮤신-1-mRNA/프로타민 복합제를 투여받았다. 뮤신-1-mRNA/프로타민 복합제를 투여받은 환자의 경우, 면역보강제 110이 펩티드와 몬타니드 ISA-51로 유화되었다. 모든 성분은 한 번의 주사로 투여되었다.

4명의 환자(환자 3, 7, 8 및 11)는 면역보강제로 이미퀴모드를 투여받았다. 4명의 환자의 경우, 이미퀴모드 연고를 펩티드 치료 후 주사 부위에 국소적으로 바른 다음 드레싱하였다. 환자들은 이미퀴모드를 바른 부위를 8 시간 후 물로 세척하도록 하였다.

6명의 환자(환자 4, 6, 9, 12, 14 및 15)는 면역보강제로 GM-CSF를 투여받았다. 이들 환자의 경우, 면역보강제는 주사 부위의 얕은 피하에 225 ㎍의 용량이 주사되었다.

2명의 환자(환자 10 및 13)는 온열요법을 시행 받았다. 이들 환자의 경우, 41 ℃로 유지된 열원을 주사 직후 그 장소에서 노출된 20 cm²의 복부 피부에 향하게 한 다음 20 분 동안 유지하였다.

상기 펩티드 조성물, 면역보강제 및/또는 온열요법을 사용하는 치료는 각각 동일한 부위를 사용하여 초기 치료 후 7, 14, 28, 42 및 56 일에 반복 시행하였다. 그러므로 PSA 수치가 정상으로 돌아오거나 안정화를 보이는 경우, 치료는 420 일까지 매 4 주마다 지속되었다.

반응 평가

치료 반응은 매회 내원 시 측정한 PSA 값을 대리 파라미터로 하여 평가하였다. 혈액학 및 혈액 화학 검사를 첫 6 회 치료(8 주차) 후에 매 3 개월마다 반복 수행하였다. 임상적 검사 및 직장수지검사(DRE)가 임상 경과의 평가를 위한 유사 일정에서 수행되었다.

데이터 분석

반응은 배가 시간 기하 평균을 계산하여 평가하였다. 각 환자에 대한 PSA 수치의 로그값을 다양한 기울기로 직선에 맞추도록 하였다. 두 기울기 사이의 교차점, 다른 기울기들 및 초기값들은 비선형 접합 루틴(fitting routine)을 사용하는 최소 자승법에 의해 산정되었다. 완전한 반응은 PSA 수치가 측정되지 않는 경우로 정의되었다; 일부 반응은 PSA 수치가 50% 떨어진 경우; 안정 상태는 50% 미만의 감소 또는 10% 미만의 증가; 및 진행 상태는 기준선 PSA 수치보다 10% 이상 증가한 경우로 정의되었다. 이러한 측정값들은 4주 후에 확인을 받아야 했다. 연구를 종료한 환자들의 생화학적 반응은 환자들이 국부 방사선이나 안드로젠 차단 요법으로 추가 치료를 받을 때까지 추적되었다.

결과

치료 전 PSA 배가 시간(DT) 평균은 모든 환자들에게서 8.4 개월이었고 치료 종료 시점에는 11.2 개월이었다. 4 명(21%)의 환자는 생화학적으로 치료 유익을 보였다. 임상적 종양 재발이 진행성 PSA 수치를 보인 환자에게서 항문수지검사로 탐지된 다음 PET-CT 검사로 확진되었다. 치료 반응, 즉 PSA 수치는 환자들 사이에 차이가 있었고 다섯 가지 반응 그룹으로 분류할 수 있었다. 데이터는 도 2에 정리되어 있다.

PSA 안정성 및 DT 의 증가

2 명의 환자(환자 3 및 8; 11%)는 치료기간 동안과 마지막 치료 후 14 및 16 개월차 추적관찰에서 PSA 안정성(도 3)을 보였다. 치료 개시 후 평균 안정성 지속 기간은 평균 17 회(14 및 20)의 치료 시행에서 데이터 컷오프 하여 29.5 개월이었다. 환자 3은 9 개월 동안 일부 PSA 반응(>50%)을 보인 다음 이후 치료 전의 배가 시간 9.8 개월에 비해 20.5 개월로 PSA 수치가 서서히 높아졌다. 본 연구 시작 전 초기 PSA 재발은 전립선 절제술 후 18 개월 시점에 시작되었다(pT2pN0 GS 5). 환자 3은 20 회차 치료 시점에 알레르기 반응으로 인해 참여를 그만두었다. 환자 8은 치료 시작 후 안정 상태 양상을 보였다. 이 환자는 10 개월 후 14차 치료 시점에 알레르기 반응으로 인해 치료를 중단했다. 본 환자는 pT3b 글리아손(Gleason) 3+4 종양 환자로 근치적 전립선절제술 후 PSA 최저치(nadir)가 0.6 ng/ml로 수술 후 초기 PSA 감소 후 연구 참여 전에 PSA 진행을 보였다. 본 환자의 DT는 6.6 개월에서 148.0 개월로 증가하였다. 두 환자 모두 면역보강제로 이미퀴모드를 피내 투여받았다(도 4).

PSA 안정성 없이 PSA DT 의 증가

2 명의 환자(환자 11 및 16, 11%)는 치료기간 동안 PSA DT가 증가하였고, PSA 수치도 동시에 서서히 증가하였다. 환자 11의 PSA DT는 치료 후 첫 6 개월 만에 1.5 개월에서 10.1 개월로 증가하였다. 이 환자는 PSA 수치 10.8 ng/ml 상태에서 치료를 시작하여 치료 후 6 개월 시점에 수치가 17.8 ng/ml로 증가하였다. 이 연구는 종료되고 호르몬 대체 요법이 시작되었다. 이 환자의 경우, PETCT 검사에서 육안상 악성 병변은 관찰되지 않았다. 면역보강제로는 이미퀴모드가 사용되었다. 환자 16의 경우 연구 시작 시점에 DT는 6.1 개월이었다. 이 환자의 PSA 수치는 감소하였고 치료 후 첫 5 개월이 지나서 DT가 2.7 개월로 바뀌었다. 이후 이 환자의 DT는 14.4 개월로 증가하였고, 이 상태는 치료 시작 후 16 개월 동안 지속되었다. 치료 시작 시점에 이 환자의 PSA 수치는 0.29 ng/ml이었고 추적 관찰 종료 시점에는 0.41 ng/ml이었다. 이 환자는 면역보강제로 뮤신-1-mRNA / 프로타민 복합제를 투여받았다(도 3 및 4).

치료 중간 PSA 상승 후 PSA 감소와 PSA DT 의 증가

1 명의 환자(환자 5, 5%)는 치료 시작 후 치료에 상관없이 PSA가 증가하였고 PSA 수치가 1.31 ng/ml 시점에 11차 펩티드 투여 후 치료가 중단되었다. 이 후, 이 환자의 PSA는 감소하였고 DT는 추적 관찰이 종료될 때까지 20.2 개월로 늘었다; 이 환자는 이 기간 동안 어떤 추가 치료도 받지 않았다. 이 환자의 경우 면역보강제가 사용되지 않았고 펩티드를 몬타니드에 단독으로 유화시켰다(도 3 및 4).

잠시 PSA 감소나 안정화 후 PSA 가 급속히 상승

3 명의 환자(환자 7, 15 및 17, 16%)는 PSA 수치가 안정 상태로 남았거나 감소하였고, 이 상태는 이후 급속하게 상승되었다. 환자 7의 DT는 치료 시작 시점에 3.7 개월이었고 치료기간 4 개월 동안 21.5 개월로 증가한 다음 이후 DT가 계속 감소하여 2.8 개월이 되었다. 이 환자는 조직검사에서 수술 절제면 양성인 pT2b기의 암이었다. 이 환자는 국소 방사선치료를 거부했다(도 3). 환자 15의 DT는 본 연구 시작 시점에 1.3 개월이었다. 1차 치료 전에, 마지막 2회의 연속 PSA 수치는 본 병원에서 4 개월의 기간 동안 측정되었다. 측정 결과 검사실 간 차이로 인해 PSA DT가 1.3 개월에서 25.8 개월로 바뀌었다. GM-CSF를 병용한 치료기간 동안, DT는 9.9 개월로 감소하였고 6 개월 동안 안정 상태였다. 이후 PSA가 진행되어 DT는 다시 7.4 개월이 되었다. 이러한 PSA 양상의 해석은 치료 시작 전 기준선 PSA DT의 단기 변경에 의해 방해를 받았다. 환자 17의 경우, 치료기간 내에는 PSA 반감기 1.9 개월로 감소된 후 치료기간 동안 PSA DT는 10.2 개월에서 4.8 개월로 감소했으며, 이러한 상태는 2 개월 동안 지속된 후 PSA가 증가하였다(도 3).

PSA 의 진행

11 명의 환자(58%)의 PSA 수치는 연구 기간 동안 일정한 PSA DT 상태로 진행되어 연구가 조기에 종료되었디(도 4). 평균 13회(718의 범위)의 치료가 시행되었다.

면역보강제의 영향

PSA DT 증가 또는 PSA 수치 감소를 보인 8명의 환자 중에서 4명은 면역증강제로 이미퀴모드를 투여받았다. 1명의 환자는 GM-CSF를, 2명은 뮤신-1-mRNA/프로타민 복합제를 투여받았고, 1명은 면역보강제를 투여받지 않았다. 국부 온열요법으로 치료받은 2명의 환자는 아무도 반응, 즉 임상적 유익을 얻지 못했다(도 4).

실시예 2

멀티 펩티드 칵테일에 포함된 특이 HLA 클래스 I 결합 펩티드의 반응성은 예 1에서 치료 후 시험되었다.

특이 T-세포의 체외 증폭

전립선암 환자의 말초혈액 단핵세포는 백신접종 기간 동안 여러 시점에 채취되어 90% 소 태아 혈청과 10% DMSO에서 액화 질소로 동결보존되었다. 해동 후 약 5 x 10⁶개의 세포가 50 U/ml 페니실린, 50 ㎍/ml 스트렙토마이신(모두 바이오위타커(Biowhittaker; 벨기에 베흐비에 소재)의 제품), 10% 열비활성화 사람 혈청(c.c. pro, 독일 네우스타드트 소재) 및 50 μM β-머캅토에탄올이 첨가된 IMDM 배지에서 37°C 및 7.5% CO₂의 조건에서 배양되었다. 혼합된 합성 HLA 클래스 I 또는 HLA 클래스 II 결합 펩티드가 제 1일에 HLA 클래스 I의 경우 1 ㎍/ml의 농도로, HLA 클래스 II의 경우 5 ㎍/ml의 농도로 첨가되었다. 용액은 HLA 클래스 I의 경우 T-세포 자극 제 3, 5, 7 및 9 일 시점의 재조합 사람 IL-2(r-hIL-2, 알앤디 시스템스 게엠베하(R&D Systems GmbH), 독일 베스바덴 소재), 프로모킨(promokine) 및 제 0일 시점에 IL-4 및 7이 첨가되었고, HLA 클래스 II의 경우 T-세포 자극 제 3, 5, 7 및 9 일 시점의 재조합 사람 IL-2(r-hIL-2, 알앤디 시스템스 게엠베하)와 프로모킨이 첨가되었다.

효소결합 면역흡착 지점( ELISAPOT ) 분석(효소 면역 측정법)

확장된 T-세포의 기능성은 암 면역요법 협회의 면역 안내(Immunoguiding) 프로그램(CIP)에 따라 표준 인터페론-γ ELISPOT 분석법으로 검사되었다. 요약하면, 세포는 배양 12 일째에 수획되고, 세척, 계수된 다음 ELISPOT 평판(밀리포어(Millipore), 독일 슈왈바흐 소재)에서 배양 배지에 접종되었다. 약 0.20 내지 0.40 x 10⁶개의 세포가 (i) 펩티드 제시 세포주 K562A2와 1 ㎍/ml 농도의 각 개별 HLA 클래스 I 결합 펩티드가 있는 조건, 또는 (ii) 2.5 ㎍/ml 농도의 각 개별 HLA 클래스 II 결합 펩티드가 있는 조건에서 2 내지 3 회 반복 검사되었다. PHA(10 ㎍/ml) 또는 SEB(1 ㎍/ml)가 양성 대조 자극제로 사용되었다. IFN-γ의 생성이 37 ℃ 및 7.5% CO₂의 조건에서 26 시간 배양 후 한 쌍의 특정 단클론 항체(1D1-k 및 7-B6-1, 모두 마브테크(Mabtech; 스웨덴 낙카 스트랜드 소재)의 제품)에서 검출되었다. 외부아비딘알칼린 포스파타아제 및 BCIP/NBT 기질(모두 시그마알드리치(SigmaAldrich)의 제품)이 각각 1 시간 10 분 동안 첨가되었다. 이뮨스폿 판독기(시리즈 3A 및 5, 셀룰라 테크놀로지 리미티드(Cellular Technology Ltd), 독일 알렌 소재)를 사용하여 ELISPOT 분석을 수행하였다.

IFN-γ를 생산하는 T-세포가 있는지 각각의 환자의 각각의 펩티드에 대해 기록하여 표로 작성하였다. 도 13에 보이는 바와 같이 11개의 HLA 클래스 I 펩티드 중 8개가 적어도 1 명의 환자에서 반응을 유도하였다. 가장 일반적인 반응은 분석한 29 명의 환자 중 25 명에서 펩티드 반응성을 유도한 PSMA 711(서열번호 7)에 의해 유도되었다.

실시예 3

멀티 펩티드 칵테일에 포함된 특이 HLA 클래스 II 결합 펩티드의 반응성 또한 예 1에서 치료 후 시험되었다.

합성 펩티드 및 자극제

자극과 기능성 시험에 사용된 합성 펩티드는 HIV유래 항원결정기(HIV gag 164-181: YVDRFYKTLRAEQASQEV(서열번호 15), 음성 대조군; PSMA 459-473: NYTLRVDCTPLMYSL(서열번호 13) 및 서비빈 97-111: TLGEFLKLDRERAKN(서열번호 14)이었다.

특이 T-세포의 체외 증폭

전립선암 환자 15 및 26의 말초혈액 단핵세포는 백신접종 기간 동안 여러 시점에 채취되어 90% 소 태아 혈청과 10% DMSO에서 액화 질소로 동결보존되었다. 해동 후 약 5 x 10⁶개의 세포가 50 U/ml 페니실린, 50 ㎍/ml 스트렙토마이신(모두 바이오위타커의 제품), 10% 열비활성화 사람 혈청(c.c. pro) 및 50 μM β-머캅토에탄올이 첨가된 IMDM 배지에서 37 ℃ 및 7.5% CO₂의 조건에서 배양되었다(24-웰 세포 배양 플레이트, 그레이너 바이오온(Greiner BioOne), 독일 프릭켄하우젠 소재). 혼합된 합성 HLA 클래스 II 결합 펩티드가 제 1 일 시점에, 각각 5 ㎍/ml씩 첨가되었고 배양액은 T-세포 자극의 제 3, 5, 7 및 9 일 시점에 재조합 사람 IL-2(r-hIL-2, 알앤디 시스템스 게엠베하)가 첨가되었다. 12 일간의 자극기간 후, 세포를 수획, 세척, 계수한 다음 펩티드(10 ㎍/ml)로 6 시간 동안 다시 자극하였다. IFN-γ 분비 세포는 MACS IFN-γ 분비 분석 프로토콜(밀테니이 바이오테크(Miltenyi Biotech), 독일 베르크이슈 글라드바흐 소재)에 따라 IFN-γ 포획 시약 및 IFN-γ PE 항체로 표지된 다음, FACSAria(비디 바이오사이언시스(BD Biosciences), 독일 헤이델베르크 소재)를 사용하여 150 U/ml IL-2, 1 ㎍/ml PHA 및 조사된 동종이계 공급자(allogenic feeder)(PBMC + LG2-EBV)와 함께 IMDM 10% HS가 들어있는 96개의 웰 플레이트에 분류되었다. IL-2(150 U/ml)가 매 4 일마다 첨가되었고 공급자 세포(feeder cell) 매 3 주마다 첨가되었다.

세포내 사이토카인의 염색

효과기들을 수획, 세척한 다음 제조원의 지침에 따라 골지-스톱(Golgi-STOP)(비디 바이오사이어시스) 및 브레펠딘(Brefeldin) A(10 ㎍/ml, 시그마알드리치)가 있는 조건에서 HIV, PSMA 및 5 ㎍/ml의 서비빈 펩티드, 또는 PMA 및 이오노마이신(각각 50 ng/ml 및 1μM)을 사용하여 표준 분석법으로 자극하였다. 4 내지 6 시간의 배양 후에, 세포를 PBS, 2% FCS, 0.02% NaN₃에서 세척한 다음 단클론 항체(MoAb) CD4-APC-Cy7(비디 바이오사이언시스) 및 CD8-PE-Cy7(버크만 카울터(Beckman Coulter))로 4 ℃의 암소에서 20 분 동안 염색하였다. 세척 단계 후, 세포들을 사이토픽스/사이토펌 시약(비디 바이오사이언시스)으로 연하게(permeabilized) 만든 다음 단클론 IFN-γ-FITC 항체(비디 바이오사이언시스)를 사용하여 세포내 IFN-γ용으로 염색을 하였다. 세포 획득은 소프트웨어 디바(Diva) 및 플로우조(FlowJo)(비디 바이오사이언시스) 분석법을 사용하는 사이토미터 칸토(Cytometer Canto) II에서 수행되었다. 다기능 시험에서, 세포막 염색에는 CD4-APC-Cy7 및 CD8-PerCP가 사용되었고, 세포내 염색에는 IFN-g PE-Cy7, TNF-퍼시픽 블루, IL-2-PE가 사용되었다(TNF-퍼시픽 블루, 바이오리젠드(Biolegend)를 제외하고 모두 비디 바이오사이언시스 제품). 자극기간 동안 CD107a-FITC(비디 바이오사이언시스)가 시험당 1.5 ㎕씩 첨가되었다.

자가 수지상 세포를 사용한 T-세포 클론의 기능성 시험

단핵구 유래, 미성숙 자가 DC는 단핵구를 IMDM 10% HS, 1% PenStrep, 1000 U/ml IL-4 및 800 U/ml GM-CSF가 첨가된 50 μM β-머캅토에탄올에서 7 일간 배양하여 생성하였다. 기능성 실험의 경우, DC는 관련 HLA 클래스 II 결합 펩티드(HIC, 서비빈 또는 PSMA, 10 ㎍/ml)를 탑재하거나 재조합 단백질(서비빈, PSMA 또는 RAP-80, 20 ㎍/ml)로 감작한 다음, 수획하여 여러 번 세척하고 세포내 사이토카인 염색을 하기 전에 DC:효과기의 비율을 1:5로 하여 12 시간 동안 특이 CD4+ T-세포 클론으로 배양하였다.

대조 실험의 경우, 1 ㎍의 재조합 단백질을 1 mM CaCl₂가 있는 조건에서 10 ㎍의 프로테이나아제 K(마쉐레이-나겔(Macherey-Nagel), 독일 소재)를 사용하여 100 ㎕ PBS, pH 7.2에서 37 ℃에서 2 시간 동안 사전 처리하였다. 다른 방법으로는, DC를 0.05% 최종 글루타르알데히드(시그마)에서 15 초 동안 고정시켰다. 반응은 0.2 M L-리신(시그마)을 사용하여 중단하였고 DC는 펩티드나 단백질을 탑재하기 전에 2회 세척하였다.

HLA 클래스 II 제한의 판정

펩티드 제시 분석은 환자 15 및 26의 12 일간 펩티드로 사전 감작된 PBMC를 효과기 세포로 사용하고, 펩티드가 탑재된(10 ㎍/ml 펩티드, IMDM 2% FCS에서 밤샘 탑재) EBV-변형 세포주를 자극제(도 21의 HLA-DR, DP 및 DQ 대립유전자 참고)로 사용하고, 펩티드 제시 세포 1개에 대해 효과기 1개의 비율로 하여 수행되었다. 5 시간의 공동 배양 후, 세포내 사이토카인 염색이 앞서 설명한대로 완료되었다.

<110> Immatics Biotechnologies GmbH <120> HLA-BINDING PEPTIDES DERIVED FROM PROSTATE-ASSOCIATED ANTIGENIC MOLECULES AND METHODS OF USE THEREOF <130> I32214PCT <140> PCT/EP2011/070024 <141> 2011-11-14 <150> PCT/EP2010/069675 <151> 2010-12-14 <160> 42 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val 1 5 10 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu His Val 1 5 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val 1 5 10 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Ala Leu Gln Pro Gly Thr Ala Leu Leu 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Ala Ile Leu Ala Leu Leu Pro Ala Leu 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Leu Leu His Glu Thr Asp Ser Ala Val 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Ala Leu Phe Asp Ile Glu Ser Lys Val 1 5 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Glu Leu Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu 1 5 10 <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Thr Leu Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe Leu 1 5 10 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Gly Leu Met Lys Tyr Ile Gly Glu Val 1 5 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Cys Leu Ala Ala Gly Ile Thr Tyr Val 1 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu 1 5 <210> 13 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Asn Tyr Thr Leu Arg Val Asp Cys Thr Pro Leu Met Tyr Ser Leu 1 5 10 15 <210> 14 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala Lys Asn 1 5 10 15 <210> 15 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Asp Phe Ile Ala Thr Leu Gly Lys Leu Ser Gly Leu His Gly 1 5 10 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Ala Thr Val Leu Phe Gly Ile Ala Arg 1 5 <210> 17 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Ala Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro 1 5 10 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Ala Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln 1 5 10 <210> 19 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Asp Gln Leu Asx Phe Leu Glu Arg Ala 1 5 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Asp Tyr Asn Phe Val Phe Thr Ser Phe 1 5 <210> 21 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Glu Val Ile Gly His Tyr Pro Gly Ser Ser Phe 1 5 10 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Glu Val Ile Thr Gly Ile Arg Ile Ile 1 5 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Leu Leu Pro Pro Pro Pro Leu Leu Ala 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Asn Ala Asp Pro Gln Ala Val Thr Met 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Asn Tyr Glu Glu Thr Phe Pro His Ile 1 5 <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Ser Glu Ser Asp Thr Ile Arg Ser Ile 1 5 <210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Ser Val Val Gly Gly Phe Val Ser His Tyr 1 5 10 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Tyr Leu Tyr 1 5 <210> 29 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Thr Ile Ile Asp Ser Asp Lys Ile Met Val Leu 1 5 10 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Thr Tyr Asp Phe Ala His Cys Thr Phe 1 5 <210> 31 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Val Phe Asp Thr Ala Ile Ala His Leu Phe 1 5 10 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Val Tyr Asn Pro Thr Pro Asn Ser Leu 1 5 <210> 33 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Tyr Thr Ile Gly Leu Gly Leu His Ser Leu 1 5 10 <210> 34 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Ala Pro Leu Leu Leu Ala Arg Ala Ala 1 5 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Lys Arg Ala Thr Gln Ile Pro Ser Tyr 1 5 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Met Arg Ala Ala Pro Leu Leu Leu 1 5 <210> 37 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Met Arg Ala Ala Pro Leu Leu Leu Ala 1 5 <210> 38 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Phe Thr Glu Leu Thr Leu Gly Glu Phe 1 5 <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Leu Met Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu 1 5 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Glu Pro Asp Leu Ala Gln Cys Phe Tyr 1 5 <210> 41 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 <210> 42 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Glu Leu Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala Lys 1 5 10 15 Asn

Claims (15)

1. 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드를 포함하는 조성물에 있어서:
   (a) 상기 적어도 2종의 HLA 결합 펩티드 중 적어도 1종은 서열번호 23에 따른 항원결정기(epitope) 또는 HLA-DR 항원 관련 불변 사슬의 80 N-말단 아미노산을 포함하는 서열번호 23의 융합 단백질을 포함하는 펩티드이며,
   (b) 상기 적어도 2종의 펩티드 중 적어도 1종은 서열번호 1 내지 서열번호 11, 서열번호 13 내지 서열번호 22 및 서열번호 24 내지 서열번호 42로 구성된 군에서 선택된 항원결정기를 포함하는 펩티드인,
   조성물.
2. 제 1 항에 있어서,
   (b)에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드를 포함하는, 조성물.
3. 제 1 항에 있어서,
   서열번호 23에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 2종의 펩티드, 바람직하게는 적어도 4종의 펩티드, 더욱 바람직하게는 10종의 펩티드 및 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14로 구성된 군에서 선택된 1종의 펩티드 및 서열번호 15 내지 서열번호 22 및 서열번호 24 내지 서열번호 42로 구성된 군에서 선택된 적어도 1종의 펩티드를 포함하는, 조성물.
4. 제 3 항에 있어서,
   상기 추가 펩티드는 치료 대상 환자의 HLA 세트에 따라 선택되는, 조성물.
5. 제 1 항에 있어서,
   서열번호 23에 따른 아미노산 서열로 구성된 적어도 4종의 펩티드 및 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 내지 서열번호 11, 서열번호 13 및 서열번호 14로 구성된 군에서 선택된 1종의 펩티드 및 서열번호 15 내지 서열번호 22 및 서열번호 24 내지 서열번호 42로 구성된 군에서 선택된 적어도 1종의 펩티드를 포함하는, 조성물.
6. 제 5 항에 있어서,
   상기 펩티드 중 적어도 1종은 클래스 II 펩티드인, 조성물.
7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
   면역보강제(immunological adjuvant), 또는 예를 들면 GM-CSF 및 이미퀴모드와 같은 2종 또는 3종의 면역보강제의 혼합물을 더욱 포함하는, 조성물.
8. 제 7 항에 있어서,
   상기 면역보강제는 톨 유사 수용체 작용제, 예를 들면 톨 유사 수용체-7 작용제(Toll like receptor-7 agonist)를 포함하는, 조성물.
9. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
   적어도 1종의 항원 제시 세포, 예를 들면 펩티드로 감작되거나 탑재된 자가 수지상 세포와 같은 수지상 세포를 함유하는, 조성물.
10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    전립선암 치료에서 사용되는 조성물.
11. 제 10 항에 있어서,
    상기 전립선암은 안드로젠-민감성이고 환자가 안드로젠 차단 요법을 시행받지 않은, 조성물.
12. 제 10 항에 있어서,
    상기 전립선암은 안드로젠-비민감성인, 조성물.
13. 환자에게 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함하는, 전립선암 치료 방법.
14. 제 13 항에 있어서,
    상기 전립선암은 안드로젠-민감성이고 환자가 안드로젠 차단 요법을 시행받지 않은, 치료 방법.
15. 제 14 항에 있어서,
    상기 전립선암은 안드로젠-비민감성인, 치료 방법.
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    

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