KR20120102157A - 프로가스트린 및 간 질환 - Google Patents
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Abstract
프로가스트린 양은 하나 또는 초과의 간 질환을 진단하기 위하여 결정된다.
Description
1. 관련출원의 상호 참조
본 출원은 2010년 1월 8일에 출원된 미국 가출원 번호 제61/293,557호로부터 우선권의 이익을 주장하고, 가출원의 내용은 전체로 참조로서 통합된다.
2. 서열 목록의 참조
서열 목록은 본 명세서와 함께 제출된다.
본 명세세서는 간 질환의 진단 및 스크리닝 방법 및 제재를 제공하고, 증식성 또는 퇴행성 간질환; 및 더 구체적으로는, 간 질환 진단을 위한 프로가스트린 정도를 정량 또는 결정하기 위한 방법 및 제재를 포함한다.
3.1. 가스트린 및 프로가스트린 호르몬의 배경.
가스트린은 내장 펩타이드 호르몬으로, 위산 분비를 자극하는 역할을 한다. 성인 포유류에서, 위강의 G 세포에 의해 결장에서 매우 소량 생산되고, 소장 상부 및 췌장에서 다양한 범위 내에서 생산된다. 최근, 가스트린 패밀리 펩타이드의 결장의 발암에서의 역할에 대한 관심이 증가하고 있다. 특히, 종래에는 비활성인 것으로 여겨졌던 가스트린 (프로가스트린 및 글라이신으로 확장된 가스트린)의 전구체 형태가 대장암의 발달에 역할을 한다는 증거가 존재한다.
가스트린 유전자는 프리프로가스트린으로 불리는 101개 아미노산 폴리펩타이드로 번역되고, 프리프로가스트린은 잘려져 나가는 신호서열(밑줄)을 포함하고 있으며, 신호서열이 잘려져서 80개의 아미노산 폴리펩타이드인 프로가스트린이 된다. 결국, 프로가스트린은, 프로가스트린의 38 내지 71 잔기에 대응되는 34개 아미노산 펩타이드인, 절단 생성물 G34를 제공하도록 가공된다. G34는 그 후 카복시 말단에 글라이신 잔기에 의해 연장되고, 글라이신으로 연장된 G34(G34-Gly)가 생성된다. 프로가스트린 절단의 부산물은 C-말단 측면 펩타이드, 즉 CTFP라 불리는 6개의 아미노산 펩타이드이고, 프로가스트린의 55 내지 72번째 잔기 서열에 대응되는 서열 잔기 폴리펩타이드에 대응되고, G17-Gly으로 불린다. G34-Gly 및 G17-Gly의 C-말단 제거는 그 후 C-말단 아마이드화가 되어, G34 및 G17를 각각 생성하며, 두 가지 모두 C-말단은 아마이드화되었다.
대부분의 프로가스트린을 위한 분석은 프로가스트린 및 다른 가스트린 유전자 산물을 구분하지 못하고, 전체 길이의 프로가스트린 수준의 부정확한 측정을 하게 된다. 프로가스트린 수준이 하나 또는 그 초과의 질병에 역할을 하기 때문에, 프로가스트린을 적확히 측정하기 위한 수단이 필요하다.
3.2. 간 질환의 배경
많은 간 질환은 진단이 어렵다. 예를 들어, 간암은 일반적인 피 검사를 통해 진단할 수 없다. 종양 마커 알파-페토단백질 (alpha-fetoprotein; AFP)로 스크리닝하는 의사는 일반적으로 필요하다. 그러나, 증가된 AFP 양은 간암에 특이적이지 않다. 성인들은, AFP의 높은 혈중 농도(500 ng/mL 초과)는 3가지 상황을 보여준다: 간암, 생식세포종 (고환 및 난소의 암), 및 전이성 간암 (다른 장기에서 시작된 암). 또한, 간암에 대한 AFP의 민감도는 약 60%이다. 다시말해, 증가된 혈중 AFP 양은 간암 환자 중 약 60%에서만 발견된다; 40%의 간암 환자는 일반적인 AFP양을 가진다. 간 질환 진단의 다른 난점은 간의 상처와 불충분한 간 기능으로 특징지어지는 만성적 간 질환의 결과인 간경변이다. 훌륭한 표준 진단방법은 침습적 방법인 간 생체검사에 의한 것이다.
C형 간염은 C형 간염 바이러스 (HCV)에 의해 야기되는, 간에 영향을 미치는 감염성 질병이다. 감염은 때로 증상이 없지만, 일단 감염되면, 만성적인 감염이 간에 상처를 내고 (섬유증), 진전된 상처 (간경변)로 진행된다. C형 간염은 통상적으로 혈청학적인 스크리닝 방법으로 진단된다. 다른 C형 간염을 검출 및 /또는 확정할 수 있는 수단이 바람직할 것이다.
간암, 간경변, 및 C형 간염의 초기 및 정확한 검출이 환자의 생존률을 증가시킬 수 있는 잠재력이 있기 때문에, 전술한 질병의 하나 초과 또는 전부를 가지는 환자의 사례를 포함하여, 진단 또는 검출하는 방법에 대한 현재에 그리고 장기적으로 느껴지는 요구가 존재한다.
하나 또는 둘의 간 질환을 가진 환자는 인간 프로가스트린 (hPG)의 양이 증가됨을 보일 수 있고, 간암, C형 간염 및 간경변을 가진 환자들은 단지 하나 또는 두 가지의 이러한 질병들을 가진 환자에서 보이는 거의 없는 hPG의 증가에 비하여 극히 높은 hPG 양을 보인다는 사실을 발견하였다. 본 명세서에 기초하여, 환자의 hPG의 혈장 또는 혈청 양은 간 질환의 위험 인자를 설정하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 과량의 hPG의 혈청 또는 혈장 양은 간암, C형 간염 및 간경변으로부터 고통받는 환자를 진단하는 데에 사용될 수 있다.
본 명세서의 방법에 의해 진단되는 간암은 1차 간암 (예를 들어 간세포성 암, 간에서 시작된 암) 및 2차 간암을 포함한다.
진단방법은 또한 인간 프로가스트린 (hPG)의 양이 임계 초과의 값(예를 들어, 적어도 약 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 또는 750 pM)으로 검출된다면 간의 또는 간 질병(hepatic or liver condition)으로 인해 고통받는 것을 확인하는 것을 제공한다. 이러한 방법은 또한 예를 들어, 약 또는 알코올 복용자 집단 또는 평균 간 질병 발병률보다 높은 지질학적 지역에서 생활하는 사람과 같은, 간 질병의 평균 발병률보다 더 높은 집단에서 표준 진단방법으로써 유용하다. 따라서, 이러한 집단에서 증가된 hPG 양을 검출하는 방법을 또한 제공한다.
본 명세서는 또한 환자의 hPG 양에 기초하여 간암 (예를 들어, 간세포성 암), C형 간염 및 간경변과 같은 하나 또는 초과의 간질환에 대한 위험군으로 환자를 선정하는 방법을 제공한다. 예를 들어, hPG의 제 1 임계 양은 간 질환에 대해 환자가 "낮은 위험"에 있음을 알릴 수 있다; hPG의 제 2 임계 양은 간 질환에 대해 환자가 "증가된 위험"에 있음을 알릴 수 있다; hPG의 제 3 임계 양은 간 질환에 대해 환자가 "고 위험"에 있음을 알릴 수 있다; 및 hPG의 제 4 임계 양은 간 질환에 대해 환자가 "심각한 위험"에 있음을 알릴 수 있다.
정량된 hPG 양은 또한 동정에 도움을 주는 알파페토단백질 ("AFP"), 진단 방법, 간 질환의 분화 또는 간질환에 대한 위험 정도와 같은 추가적인 생체 마커로 이용될 수 있다.
본 명세서에 개시된 방법은 적절한 치료 행위 방침 결정하는 데에 사용될 수 있다. 몇 가지 경우에, 추가적인 치료 옵션이 보증되는지를 결정하기 위해 이미 간 질환 진단을 받은 환자를 스크린하는 데에 유용하다. 따라서, 일 측면에서, 환자의 생체학적 시료의 hPG 양을 기초로 하여 추가적인 간의 또는 간 질병으로 인해 고통받는지 이전에 간 질환 진단을 받은 환자를 진단한다. 이전의 간 질환은 C형 간염, 간경변, 또는 간세포성 암과 같은 간암일 수 있다. 유리하게, hPG의 극히 높은 양 (예를 들어, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700 pM 초과의 hPG 농도) 은 환자가 이들 모든 질병을 가진다는 사실을 알려준다.
환자가 간 질환을 가지고 있다고 나타내는 hPG 양을 가진 환자 또는 이전에 hPG 양이 하나의 간 질병보다 더 큰 값을 나타내는 간 질병이 있는 것으로 이전에 진단받은 환자는 특정 간 질병을 확인하기 위해 추가적인 테스트를 받을 수 있다. 상기 환자를 간의 간암, C형 간염, 또는 간경변에 대해서 테스트할 수 있다.
본 명세서의 방법을 사용하여 하나 또는 그 초과의 간 질환 을 가지는 것으로 확인된 환자는 그들의 질병을 치료받을 수 있다. 간 질병 치료를 받는 환자들은 또한 질환의 진행 상황 및/또는 치료 효율을 평가하기 위해 그들의 hPG 양을 측정하도록 할 수 있다. hPG 양이 임계치 초과로 유지되는 환자는 치료를 계속 받을 것이다.
본 명세서에서 개시된 방법의 실시예에서, 측정된 hPG 양이 정확하다면 hPG 양을 측정하기 위한 특정 분석법은 중요하지 않다. 일부 구체예에서, 항-hPG 항체는 hPG 양을 측정하기 위해 편리하게 사용된다. 기재한 바와 같이, hPG는 더 작은 펩타이드들로 분절된다. 부정확한 hPG 측정을 피하기 위하여, 프로가스트린 처리의 부산물을 검출하지 않는 분석법을 사용하는 명세서의 방법을 통하여 hPG가 검출되고 측정하는 것이 바람직하다. 이는 전장 hPG에 결합하지만 더 작은 hPG 펩타이드에는 결합하지 않는 항체를 사용함으로써 달성될 수 있다. 이는 또한 두 개의 상이한 항체를 사용하여 달성될 수 있고, 상기 두 개의 상이한 항체는 전장 hPG에는 결합하지만 항체가 더 작은 hPG 펩타이드에 결합하는 한에서는 더 작은 hPG 펩타이드에 두 항체 모두가 결합하지는 않는다. 이러한 분석법에서, 두 항체 모두에 의해 결합하는 유일한 산물은 전장 hPG 이다. 예를 들어, hPG의 C- 및 N-말단 에피토프에 결합하는 항체는 더 작은 hPG 펩타이드의 검출 및 측정 없이 전장 hPG를 검출 및 측정하도록 한다. 따라서, 일 측면에서, 본 명세서는 환자의 진단 방법을 제공한다. 따라서, 일 측면에서, 본 명세서는 환자의 진단 방법을 제공하고, 여기에서 생물학적 시료는 hPG의 제 1 에피토프, 바람직하게는 C- 또는 N-말단 에피토프에 결합하는 제 1 항체 및 hPG의 다른 에피토프, 바람직하게는 다른 말단에 존재하는 에피토프에 결합하는 제 2 항체와 접촉한다.
hPG의 검출 및 측정을 위한 항-hPG 항체를 이용하는 예시적인 방법에서, 환자로부터 얻은 시료를 적어도 하나의 항-hPG 항체와 접촉시키는 단계; 및 항체에 결합한 hPG의 양에 기초하여, 시료가 예를 들어, 적어도 약 400, 450, 500, 550, 또는 600 pM, 때때로 400, 450, 또는 500 pM과 같은 임계치 이상의 농도를 가졌는지 여부를 결정하는 단계를 통하여 간의 또는 간 질병으로부터 환자가 고통받는지를 확인할 수 있다.
본 명세서의 방법은 일반적으로 hPG 양을 위한 생물학적 시료를 분석하는 것을 포함한다. 생물학적 시료는 혈장 또는 혈청일 수 있다. 조직 수준이 또한 사용될 수 있다; 그러나, 조직에서 측정된 hPG의 양은 혈청 또는 혈장에서 발견된 hPG의 양과 다를 것으로 예상되지만, 환자가 간 질환으로 고통받는다면 환자의 평균 hPG 양에 비교하여 증가되었을 것이다. 따라서, 조직 hPG 양 또한 환자의 간질환 위험 또는 상태를 측정하는 데에 사용될 수 있다. 조직 시료가 사용되면, 프로가스트린이 세포 또는 조직 추출물에서 수행된 면역 분석법을 이용하여 검출될 수 있거나 검출 가능한 마커로 표지된 다중클론 또는 단일클론 항체를 적용한 면역조직 화학 기술을 이용할 수 있다. 면역조직 화학 기술은 프로가스트린양의 정량적인 측정을 제공한다. 적절한 검출 가능한 마커는 (방사성 요오드와 같은) 방사성 표지, 형광 표지 또는 화학 발광 표지를 포함한다.
진단 키트 또한 본 명세서에서 제공된다. 진단 키트는 예를 들어, 선택적으로 간 질환을 선발, 진단 또는 구분하는데 사용될 수 있는 검출가능한 마커로 표지된, 프로가스트린에 대한 하나 또는 초과의 항체를 포함할 수 있다. 진단 키트는 hPG의 N-말단 펩타이드 지역에 결합력을 가지는 제 1 항체 및 hPG의 C-말단 펩타이드 지역과 같은 다른 에피토프와 결합력을 가지는 제 2 항체를 포함할 수 있다. 본 명세서는 또한 간질환을 진단하는 방법을 수행하기 위한 키트를 제공하며, 각각 독립된 용기에 담긴 N-말단 항-hPG 단일클론 항체 및 단일클론 또는 다중클론 C-말단 항-hPG 항체 및 적당한 시약을 포함한다. 몇 가지 구체예에서, 제공된 하나 또는 두 개 모두의 항체는 표지되었다.
환자가 간의 또는 간 질병으로부터 고통받는지 여부를 진단하기 위한 방법이 또한 제공되고, 여기에서 적어도 약 400 pM의 혈중 hPG 농도를 가진 환자는 둘 또는 초과의 하기 질병을 가지는 것으로 판단된다: 예를 들어, 생화학적 분석법을 이용하여 환자로부터 혈청 또는 혈장의 hPG 양을 시험함으로써 C형 간염, 간암, 또는 간경변. 이러한 환자가 확인된 후에, 환자의 간 질환은 C형 간염, 간암, 또는 간경변에 대한 분석법을 사용하여 더 진단될 수 있다. C형 간염은 핵산-기초 분석법을 사용하여 진단될 수 있다. 간암은 방사선 또는 영상화 기법 (조영제와 함께 또는 조영제 없이)을 이용하여 진단될 수 있다. 간경변은 알파-2-마크로글로불린, 합토글로빈, 아포지방단백질 Al, 감마-글루타밀 트랜스펩티다아제(GGT), 총 빌리루빈 및 알라닌 트랜스아미나아제 (ALT)를 포함하는 하나 또는 초과의 섬유증의 혈청 마커에 대하여 상기 환자로부터의 시료를 시험함으로써 진단될 수 있다. 환자는 혈청 알파페토단백질 및/또는 des-감마 카복시프로트롬빈과 같은 다른 진단적으로 중요한 마커를 가지고 있을 수 있고, 진단 또는 치료 방법은 이러한 수치를 측정하는 단계를 더 포함할 수 있다.
진단방법에 따를 때, 예를 들어, C형 간염이 있는 환자는 페그 인터페론-알파-2a, 페그 인터페론-알파-2b, 및/또는 바이러스성 약 리바비린으로 치료되고; 간경변이 있는 환자는 간 이식 수술로, 그리고 간경변의 합병증에 대해 대증 요법으로 치료될 수 있고; 간암 진단을 받은 환자는 방사선 요법 및/또는 화학 요법으로 치료될 수 있는 것과 같이 환자는 그 또는 그녀의 간 질병을 통상의 약품을 사용하여 치료받을 수 있다.
환자는 또한 본 명세서의 기술을 이용하여 관찰될 수 있다. 한 가지 방법에서, 간의 또는 간 질병을 가진 환자의 질병 상태는 간의 또는 간 질병으로부터 고통받고 혈중 hPG 농도가 임계치 초과인 환자에게 상기 간의 또는 간 질병 치료를 위하여 치료 섭생을 도입함으로써 관찰된다. 치료 후, 상기 환자가 혈중 hPG 농도가 임계치를 초과하는지 및 만약 그렇다면, 치료 섭생을 유지할 것인지가 결정된다. 만약 상기 환자가 혈중 hPG 농도가 임계치를 초과하지 않는다면, 환자의 hPG 양을 주기적으로 관찰하여 hPG 양이 임계치를 초과하여 증가하는지를 결정하고, 치료를 다시 시작하도록 한다.
환자의 간 또는 간의 건강 상태를 진단하기 위한 장치가 또한 제공된다. 본 명세서의 장치는 하나 또는 초과의 하기 구성 요소를 포함한다: 환자의 혈중 hPG 농도의 값을 받는 입력 장치, 환자의 혈중 hPG 농도를 기준 혈중 hPG 농도와 비교하기 위해 구성된 처리장치, 환자의 혈중 hPG 농도의 전체 또는 일부에 기초하여 환자의 간 질환에 대한 위험도를 출력하기 위해 구성된 처리장치, 및 간 질환에 대한 위험도를 보여주기 위해 구성된 표시장치. 장치는 처리장치가 간 질환에 대해 저 위험, 높아진 위험, 고 위험 또는 심각한 위험 결정을 출력하도록 적응될 수 있다. 상기 장치는 또한 환자의 알파페토단백질 (AFP)에 대한 값을 받는 입력장치를 포함하고, 여기서 처리장치는 AFP 양을 기준 AFP 양과 비교하고 hPG 및 AFP 양에 기초하여 간질환에 대한 위험도를 출력하도록 설정된다. 다른 위험군에 대한 (i) hPG 및 (ii) hPG 및 AFP 양 임계치가 본 명세서에 개시된다.
환자의 간 또는 간의 건강 상태를 진단하는 데에 사용하기 위한 프로그램이 된 처리장치에 의해 수행될 수 있는 명령어를 나타내는 데이터가 저장되어 있는 컴퓨터로 읽을 수 있는 저장 매체가 또한 제공되고, 저장 매체는, 환자의 혈중 hPG 농도를 기준 혈중 hPG 농도와 비교하기 위한 명령어; 및 전체적으로 또는 부분적으로 환자의 혈중 hPG 농도에 기초하여 환자에 대한 간 질환의 위험도 출력을 포함한다. 상기 매체는 예를 들어 간질환에 대하여 저 위험, 높아진 위험, 고 위험 또는 심각한 위험을 결정하는 것과 같이 위험도를 출력할 수 있다. 상기 매체는 출력되는 위험도 결정하기 위해 환자의 혈중 AFP 양을 기준 양과 비교하기 위한 정보를 포함한다. 다른 위험 군에 대한 (i) hPG 및 (ii) hPG 및 AFP 수치의 임계양이 본 명세서에 개시된다.
도 1은 프리프로가스트린 (신호 펩타이드는 밑줄쳐졌다), 프로가스트린 및 프로가스트린 처리에 의한 산물의 아미노산 서열을 제공하고, G34, G34-Gly, G|7, Gi 7-Gly, 및 C-말단 측면 펩타이드, CTFP를 포함한다.
도 2는 확실한 간 질환을 나타내는 hPG 값의 막대 그래프를 제공한다.
도 3A-3L은 폴리펩타이드 및 이에 대응하는 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 쥐 항-hPG 단일클론 항체에 대한 VH 및 VL 사슬의 서열을 제공한다.
도 3A는 항-hPG MAb3에 대한 쥐의 VH 사슬의 폴리뉴클레오타이드 (서열번호 16) 및 폴리펩타이드 (서열번호 12)를 보여주고, 도 3B는 항-hPG MAb3에 대한 쥐의 VL 사슬의 폴리뉴클레오타이드 (서열번호 17) 및 폴리펩타이드 (서열번호 13)을 보여준다.
도 3C는 항-hPG MAb4에 대한 쥐의 VH 사슬의 폴리뉴클레오타이드 (서열번호 18) 및 폴리펩타이드 (서열번호 14)을 보여주고, 도 3D는 항-hPG MAb4에 대한 쥐의 VL 사슬의 폴리뉴클레오타이드 (서열번호 19) 및 폴리펩타이드 (서열번호 15)을 보여준다.
도 3E는 항-hPG MAb8에 대한 쥐의 VH 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호67) 및 폴리펩타이드 (서열번호 59)를 보여주고, 도 3F는 항-hPG MAb8에 대한 쥐의 VL 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호71) 및 폴리펩타이드 (서열번호63)를 보여준다.
도 3G는 항-hPG MAb13에 대한 쥐의 VH 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호68) 및 폴리펩타이드 (서열번호60)를 보여주고, 도 3H는 항-hPG MAb13에 대한 쥐의 VL 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호72) 및 폴리펩타이드 (서열번호74)를 보여준다.
도 3I는 항-hPG MAb16에 대한 쥐 VH 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호69) 및 폴리펩타이드 (서열번호61)를 보여주고, 도 3J는 항-hPG MAb16에 대한 쥐 VL 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호73) 및 폴리펩타이드 (서열번호65)를 보여준다.
도 3K는 항-hPG MAb19에 대한 쥐 VH 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호70) 및 폴리펩타이드 (서열번호62)를 보여주고, 도 3L은 항-hPG MAb19 에 대한 쥐 VL 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호74) 및 폴리펩타이드 (서열번호66)를 보여준다.
도 4A-4Z는 VH 및 VL 사슬의 폴리펩타이드 서열, 예컨대 인간 항-hPG 단일클론 항체를 제공한다.
도 4A는 항-hPG MAb3에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호21)를 보여주고, 도 4B는 항-hPG MAb3에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호22)를 보여준다.
도 4C는 항-hPG MAb4에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호23)를 보여주고, 도 4D는 항-hPG MAb4에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호24)를 보여준다.
도 4E는 항-hPG MAb8(a)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호75)를 보여주고, 도 4F는 항-hPG MAb8(a)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호76)를 보여준다.
도 4G는 항-hPG MAb8(b)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호77)를 보여주고, 도 4H는 항-hPG MAb8(b)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호78)를 보여준다.
도 4I는 항-hPG MAb8(c)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호 79)를 보여주고, 도 4J는 항-hPG MAb8(c)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호76)를 보여준다.
도 4K는 항-hPG MAb13(a)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호80)를 보여주고, 도 4L는 항-hPG MAb13(a)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호81)를 보여준다.
도 4M은 항-hPG MAb13(b)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호 82)를 보여주고, 도 4N은 항-hPG MAb13(b)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호83)를 보여준다.
도 4O는 항-hPG MAb16(a)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호 84)를 보여주고, 도 4P는 항-hPG MAb16(a)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호85)를 보여준다.
도 4Q는 항-hPG MAbl6(b)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호86)를 보여주고, 도 4R은 항-hPG MAb16(b)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호87)를 보여준다.
도 4S는 항-hPG MAb16(c)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호88)를 보여주고, 도 4T는 항-hPG MAb16(c)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호89)를 보여준다.
도 4U는 항-hPG MAb19(a)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호90)를 보여주고, 도 4V는 항-hPG MAb에 대한 인간 VL 사슬l 9(a) 폴리펩타이드 (서열번호91)를 보여준다.
도 4W는 항-hPG MAb19(b)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호92)를 보여주고 도 4X는 항-hPG MAb19(b)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호93)를 보여준다.
도 4Y는 항-hPG MAb19(c)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호94)를 보여주고, 도 4Z는 항-hPG MAb19(c)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호95)를 보여준다.
도 2는 확실한 간 질환을 나타내는 hPG 값의 막대 그래프를 제공한다.
도 3A-3L은 폴리펩타이드 및 이에 대응하는 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 쥐 항-hPG 단일클론 항체에 대한 VH 및 VL 사슬의 서열을 제공한다.
도 3A는 항-hPG MAb3에 대한 쥐의 VH 사슬의 폴리뉴클레오타이드 (서열번호 16) 및 폴리펩타이드 (서열번호 12)를 보여주고, 도 3B는 항-hPG MAb3에 대한 쥐의 VL 사슬의 폴리뉴클레오타이드 (서열번호 17) 및 폴리펩타이드 (서열번호 13)을 보여준다.
도 3C는 항-hPG MAb4에 대한 쥐의 VH 사슬의 폴리뉴클레오타이드 (서열번호 18) 및 폴리펩타이드 (서열번호 14)을 보여주고, 도 3D는 항-hPG MAb4에 대한 쥐의 VL 사슬의 폴리뉴클레오타이드 (서열번호 19) 및 폴리펩타이드 (서열번호 15)을 보여준다.
도 3E는 항-hPG MAb8에 대한 쥐의 VH 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호67) 및 폴리펩타이드 (서열번호 59)를 보여주고, 도 3F는 항-hPG MAb8에 대한 쥐의 VL 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호71) 및 폴리펩타이드 (서열번호63)를 보여준다.
도 3G는 항-hPG MAb13에 대한 쥐의 VH 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호68) 및 폴리펩타이드 (서열번호60)를 보여주고, 도 3H는 항-hPG MAb13에 대한 쥐의 VL 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호72) 및 폴리펩타이드 (서열번호74)를 보여준다.
도 3I는 항-hPG MAb16에 대한 쥐 VH 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호69) 및 폴리펩타이드 (서열번호61)를 보여주고, 도 3J는 항-hPG MAb16에 대한 쥐 VL 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호73) 및 폴리펩타이드 (서열번호65)를 보여준다.
도 3K는 항-hPG MAb19에 대한 쥐 VH 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호70) 및 폴리펩타이드 (서열번호62)를 보여주고, 도 3L은 항-hPG MAb19 에 대한 쥐 VL 사슬 폴리뉴클레오타이드 (서열번호74) 및 폴리펩타이드 (서열번호66)를 보여준다.
도 4A-4Z는 VH 및 VL 사슬의 폴리펩타이드 서열, 예컨대 인간 항-hPG 단일클론 항체를 제공한다.
도 4A는 항-hPG MAb3에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호21)를 보여주고, 도 4B는 항-hPG MAb3에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호22)를 보여준다.
도 4C는 항-hPG MAb4에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호23)를 보여주고, 도 4D는 항-hPG MAb4에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호24)를 보여준다.
도 4E는 항-hPG MAb8(a)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호75)를 보여주고, 도 4F는 항-hPG MAb8(a)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호76)를 보여준다.
도 4G는 항-hPG MAb8(b)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호77)를 보여주고, 도 4H는 항-hPG MAb8(b)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호78)를 보여준다.
도 4I는 항-hPG MAb8(c)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호 79)를 보여주고, 도 4J는 항-hPG MAb8(c)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호76)를 보여준다.
도 4K는 항-hPG MAb13(a)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호80)를 보여주고, 도 4L는 항-hPG MAb13(a)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호81)를 보여준다.
도 4M은 항-hPG MAb13(b)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호 82)를 보여주고, 도 4N은 항-hPG MAb13(b)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호83)를 보여준다.
도 4O는 항-hPG MAb16(a)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호 84)를 보여주고, 도 4P는 항-hPG MAb16(a)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호85)를 보여준다.
도 4Q는 항-hPG MAbl6(b)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호86)를 보여주고, 도 4R은 항-hPG MAb16(b)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호87)를 보여준다.
도 4S는 항-hPG MAb16(c)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호88)를 보여주고, 도 4T는 항-hPG MAb16(c)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호89)를 보여준다.
도 4U는 항-hPG MAb19(a)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호90)를 보여주고, 도 4V는 항-hPG MAb에 대한 인간 VL 사슬l 9(a) 폴리펩타이드 (서열번호91)를 보여준다.
도 4W는 항-hPG MAb19(b)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호92)를 보여주고 도 4X는 항-hPG MAb19(b)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호93)를 보여준다.
도 4Y는 항-hPG MAb19(c)에 대한 인간 VH 사슬 폴리펩타이드 (서열번호94)를 보여주고, 도 4Z는 항-hPG MAb19(c)에 대한 인간 VL 사슬 폴리펩타이드 (서열번호95)를 보여준다.
6.1 정의
다르게 정하지 않는 한, 하기 용어는 그들의 통상의 의미를 가진 것으로 의도되었고, 용어들은 본 명세서의 하기 문맥에서 논의되었다:
"인간 프로가스트린" 또는 "hPG"는 서열번호 20으로 밝혀진 아미노산 서열의 폴리펩타이드이다. 본 명세서에서 사용된 것과 같이, hPG는 가스트린 유전자의 첫번째 단백질 산물을 포함하는 것으로 정의되었다; 즉, 신호- 또는 프리-펩타이드가 없는 프리프로가스트린. [Rehfeld et al. (2004) Regulatory 펩타이드s 120(1-3): 177-183]를 보아라. hPG는 2개의 d-Arg 절단 위치에 의해 3개의 명확한 지역으로 이루어져 있다. 따라서, 다르게 정의되지 않는 한, hPG는 2개의 d-Arg 위치를 가지는 프리프로가스트린 처리의 산물로 구성된다. hPG는 "가스트린", 즉, G34 및 G17을 포함하지 않고, 예를 들어, 짧은 잘려진 도막(truncates) ( 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산까지) 또는 아미노산 36/37 및 73/74위치 또는 주변에 2개의 d-Arg 위치를 보유하는 hPG의 변종을 포함할 수 있다. 도 1을 보아라.
"생물학적 마커" 또는 "생체 마커"는 보통의 생물학상의 과정, 병원성의 과정 또는 치료적 간섭에 대한 약리학적 반응의 표시기로써 객관적으로 측정되고 평가된 특징을 의미한다.
"샌드위치 분석법"은 시료와 상호작용하는 화합물의 양을 정량하기 위해 사용될 수 있는 면역분석의 한 특정 형태를 의미한다. 샌드위치 분석법은 시료의 항원이 포획 항체 및 검출 또는 기준 항체 사이에 결합되기 때문에 그렇게 불린다. 본 명세서의 샌드위치 분석법에서, 인간 프로가스트린은 항-hPG 항체 사이에 결합된다. 상기 분석법은 hPG의 정량화를 제공하지만 전구체 또는 그것의 산물의 정량화는 제공하지 않고, 따라서 더 정확한 hPG 농도 측정을 제공한다. 유리하게, 본 명세서의 프로가스트린의 N-말단 또는 C-말단에 대하여 유도된 상기 항체는 또한 따로따로 프로가스트린에 특이적이다. 프로가스트린의 더 작은 처리 절편은 따라서 하나의 항체 또는 다른 항체에 경쟁자로써 잘 작용하지 않기 때문에 어떻게든지 분석 결과를 이끌어 낸다.
"실험 대상" 또는 "환자"는 상호교환 가능하도록 본 명세서에서 사용되고, 척추동물, 바람직하게는 포유동물, 더욱 바람직하게는 인간을 의미한다.
"항체" 또는 "Ab"는 특정 항원과 특이적으로 결합하거나 면역학적으로 반응하는 면역글로불린 분자를 의미하고, 다중클론, 단일클론, 이에 제한되지는 않으나, 키메라 항체, 인간화 항체를 포함하는 유전학적으로 조작되고 다른 방법으로 변형된 항체 및 예를 들어, Fab', F(ab')2, Fab, Fv, rlgG, 및 scFv과 같은 절편을 포함하는 항체의 항원 결합 절편을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항-hPG 단일클론 항체는 항체 불변 영역의 전부 또는 일부를 포함하고, 몇 가지 구체예에서, 불변 영역은 IgA (예를 들어, IgA1 또는 IgA2), IgD, IgE, IgG (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4), 및 IgM에서 선택된 아이소타입이다. (단일클론 항체를 포함하는) 항체는 이에 제한되는 것은 아니지만, 마우스, 토끼, 래트, 돼지, 기니피그, 닭, 당나귀, 말, 낙타 및 라마를 포함하는 몇 개의 종으로부터 만들어질 수 있다.
본 명세서에 사용된 것과 같이, 표준 결합 분석법을 통해 측정하였을 때, 항체가 전장 프로가스트린에 결합하지만 CTFP, 아마이드화된 가스트린, 또는 글라이신으로 연장된 가스트린에 전혀 결합하지 않는다면 hPG에 "매우 특이적"이고, CTFP 및 가스트린 유전자의 다른 산물에 비하여 hPG에 약 5배 이상 결합을 보인다면 "hPG에 특이적" 또는 "hPG에 특이적으로 결합하는 항체"이다. 특정 항-hPG 항체의 특이성을 평가하기 위하여 사용될 수 있는 ELISA 분석법은 실시예 4에 제공된다.
이러한 특이적 항-hPG 항체 (본 명세서에서 "항-hPG 항체"로 언급됨)는 다중클론 ("항-hPG PAbs") 또는 단일클론 ("항-hPG MAbs")일 수 있고, 비록 치료 용도이지만, 일부 실시예에서, 진단 또는 다른 생체 외(in vitro) 용도이고, 단일클론 항체가 바람직하다.
본 명세서에 사용된 "단일클론 항체" 용어는 혼성세포 기술을 통하여 생산된 항체에 제한되지 않는다. 단일클론 항체는 당해 기술 분야에서 이용 가능하거나 공지된 수단에 의해서 진핵, 원핵 또는 파아지 클론을 포함한 한 개의 클론으로부터 유래된다. 본 명세서에서 유용한 단일클론 항체는 혼성세포 재조합 및 파아지 디스플레이 기술 또는 이들의 조합의 사용을 포함하는 당해 기술 분야에서 알려진 광범위한 다양한 기술을 사용하여 준비될 수 있다. 본 명세서의 많은 사용에서, 인간에서 항-hPG 단일클론 항체의 생체 내(in vivo) 사용을 포함하고, 생체 외 검출 분석법, 키메라, 영장류화, 인간화 또는 인간 항체가 적합하게 사용될 수 있다.
"scFv" 용어는 단일 사슬 Fv 항체를 의미하고, 통상적인 항체로부터 중사슬 및 경사슬의 가변 도메인은 결합되어 하나의 사슬을 형성한다.
"VH"는 하나의 항체의 면역글로불린 중사슬의 가변 영역을 의미하고, Fv, scFv, 또는 Fab의 중사슬을 포함한다. "VL"은 면역글로불린 경사슬의 가변 영역을 의미하고, Fv, scFv, dsFv 또는 Fab의 경사슬을 포함한다. 항체 (Abs) 및 면역글로불린 (Ig)은 동일한 구조적 특징을 가지는 당단백질이다. 항체는 특정 표적에 대해 결합 특이성을 보이지만, 면역글로불린은 표적 특이성이 부족한 항체 및 다른 항체-유사 분자를 포함한다. 천연 항체 및 면역글로불린은 보통 약 150,000 달톤의 이형4합체 당단백질이고, 2개의 동일한 경 (L) 사슬 및 2개의 동일한 중 (H) 사슬로 구성된다. 각각의 중사슬은 다수의 불변 도메인이 연결된 가변 도메인 (VH)을 1 말단에 가진다. 각각의 경사슬은 일 말단 (VL)에 가변 도메인 및 다른 말단에 불변 도메인을 가진다.
본 명세서의 항-hPG 단일클론 항체는 "상보성 결정 부위 (CDR)"를 포함한다. CDR은 경사슬 및 중사슬 가변 도메인 모두에 있는 과 가변 영역으로도 알려져 있다. 가변 도메인의 더 고도로 보존된 부분은 뼈대 부위 (FR)로 불린다. 당해 기술 분야에서 공지된 바와 같이, 문맥 및 당해 기술 분야에서 공지된 다양한 정의에 따라, 항체의 과 가변 영역을 설명하는 아미노산 위치/경계는 변할 수 있다. 가변 도메인에서 일부 위치는 경계의 한 설정하에서는 과 가변 영역에 있는 것으로 여겨질 수 있는 반면, 경계의 다른 설정 하에서는 과 가변 영역의 바깥쪽으로 여겨질 수 있는 이들 위치에서 잡종 과 가변 위치로 보여질 수 있다. 하나 또는 초과의 이들 위치는 연장된 과 가변 영역에서 또한 찾을 수 있다. 본 명세서는 이러한 잡종 가변 위치에서의 변경을 포함하는 항체를 제공한다. 천연 중사슬 및 경사슬의 가변 도메인 각각은 주로 β-시트 배치의 적용에 의해, 3개의 CDR로 연결된 4개의 FR 영역으로 구성되고, 이는 β-시트 구조를 연결하는, 그리고 몇몇 경우에는 β-시트 구조의 부분을 형성하는 고리를 형성한다. 각 사슬에서 CDR은 FR 부위에 의해 가까이 근접해 함께 잡혀있고, 다른 사슬의 CDR과 함께, 항체의 표적-결합 위치의 형성에 기여한다(Kabat et al., sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institute of Health, Bethesda, Md. 1987를 보아라).
"에피토프" 용어는 면역 반응을 이끌어 낼 수 있고, 항체에 의해 특이적으로 결합되는 능력을 가진 단백질의 어느 부분(결정 인자)을 의미한다.
에피토프 결정인자는 대개 아미노산 또는 GAG 측쇄와 같은 분자로 분류되는 활성 표면으로 구성되고, 대개 특정 전하 특징뿐 아니라 특정 3차원 구조 특징을 가지고 있다. 만약 하나의 항체의 결합을 약화시키거나 제거하는 단백질의 아미노산 변이가 다른 항체의 결합을 감소시키거나 제거한다면, 및/또는 만약 항체가 단백질에 결합하는 것을 경쟁한다면, 즉, 단백질에 한 개의 항체의 결합이 다른 항체의 결합을 감소시키거나 제거한다면, 2개의 항체는 단백질의 실질적으로 동일한 에피토프(또는 단백질의 겹치는 에피토프)에 결합하는 것으로 언급된다.두 항체가 실질적으로 동일한 에피토프에 결합하는지 여부를 결정하는 것은 경쟁 분석법과 같은 당해 기술분야에서 알려진 방법에 의하여 수행될 수 있다. 대조군 항체(예를 들어, 본 명세서에서 기술된 하나의 항-프로가스트린 항체) 및 시험 항체 간의 항체 경쟁 연구 수행에 있어서, 하나는 먼저 결과 식별을 가능하게 하기 위해서 대조군 항체를 비오틴, 효소적, 방사성 표지, 또는 형광 표지와 같은 검출가능한 표지로 표지할 수 있다. (표지된) 대조군 항체와 실질적으로 (표지되지 않은) 동일한 에피토프에 결합하는 시험 항체는 대조군 항체의 결합을 방해할 수 있어야하고, 따라서 대조군 항체의 결합이 줄어야 한다.
"hPG에 특이적인 분석법" 또는 "인간 프로가스트린에 특이적인 분석법"는 CTFP 유래 전장 hPG 및 다른 가스트린 유전자의 산물을 구분하기 위한 분석법을 의미한다. 항체 기반 진단 방법의 맥락에서, hPG에 특이적인 분석법은 hPG에 특이적으로 결합하는 항체를 이용할 수 있다. 선택적으로, hPG에 특이적인 분석법은 전장 hPG에는 모두 결합하지만 그렇지 않은 경우에는 동일한 가스트린 유전자 순물에 모두 결합하지 않는 2개의 항체를 이용할 수 있고, 그러한 hPG는 두 항체에 의해 인식되는 가스트린 유전자에 의해 생산되는 유일한 분자이다. 예를 들어, hPG의 C- 및 N-말단 에피토프에 결합하는 항체는 hPG와 가스트린 유전자 펩타이드를 구별하는 분석법으로 사용될 수 있다.
용어 암의 사용과 관련하여, 환자에서 일차 (본래의) 종양으로부터 세포는 떨어져 나와서 몸의 다른 위치로 옮겨지고, 통상적으로 림프 또는 혈액을 통해 "전이"라고 불리는 과정을 거쳐 다른, 전이 (또는 2차) 종양을 형성하며, 2차 또는 전이 종양은 통상적으로 본래 종양과 새로운 위치에 관계없이, 동일한 형태이고, 그러한 질병은 전이 암이라 불리고 새로운 거주 조직의 암이라고 불리지 않는다. 예를 들어, 간에 퍼진 췌장암은 전이 췌장암이라고 부르고, 간암으로 부르지 않는다. 따라서, 전이 간세포성 암은 간에서 시작된 암과 다른 곳에 전이화된 것을 의미한다. 2차 간암 (즉, 간으로 전이된 간이 아닌 유래로부터의 전이성 암)은 또한 과량의 hPG에 기초하여 진단될 수 있다. 예를 들어, 간에 전이된 대장암(즉 전이 대장암)은 2차 간암의 형태이다. 다시 말해, 간의 암은 1차 및 2차 간암에서 혈청, 혈장, 또는 조직의 hPG 양을 사용하여 발견할 수 있다.
6.2. 프로가스트린 양 및 간 질환
보통의 프로가스트린 양은 일반적으로 20 내지 50 pM 미만, 통상적으로 0 및 5 pM 사이로 여겨진다. 본 명세서는 하나 또는 두 가지의 간 질환을 가진 환자는 증가된 인간 프로가스트린 (hPG) 양을 보일 수 있음과 간암, C형 간염 및 간경변을 가진 환자는 매우 증가된 hPG 양을 보임을 설명한다.
도 2는 항-hPG 항체를 이용한 ELISA-샌드위치 분석법에 의해 결정된 하나 또는 초과의 간 질환을 가진 환자의 hPG 양을 도표로 묘사한다. 박스쳐진 부분의 바깥쪽 경계는 25번째 내지 75번째 백분위수를 나타낸다. 위스커(whisker)는 5번째 내지 95번째 백분위수를 나타낸다. 단일 선은 중간을 나타낸다. 점들은 이상점을 나타낸다. 하기 표는 5번째 내지 95번째 백분위수 데이터를 요약하였다:
| 간 질병을 가진 환자의 프로가스트린 양 (5-95 백분위수) (pM) | |
| 간 암 | 경변 |
| 0 내지 100 (20)† | 10 내지 700 (90) |
| 간암 및 C형 간염 | 간암, C형 간염 및 경변 |
| 10 내지 500 (50) | 150 내지 2000 (1300-1400) |
| †괄호는 hPG 양의 평균을 나타낸다 | |
전술한 내용에 기초하여, 50 pM 또는 100 pM을 초과하는 hPG 양은 하나 또는 초과의 간 질환을 나타낼 수 있다. 적어도 약 400 pM, 500 pM 또는 600 pM의 hPG 양은 그것들이 복수의 간 질환, 특히 간암 및 간경변, 간암 및 C형 간염, 및 간암, 간경변 및 C형 간염의 존재를 강하게 나타내기 때문에 특히 진단에 있어서 중요하다.
총 프로가스트린 양 (즉 전장 프로가스트린 및 절단 산물의 양)을 측정한 연구에서 단지 C형 간염만을 가진 환자의 혈장 수치는 건강한 환자와 비슷한 것으로 나타났다. Konturek et al., 2003, Sc 및 J Gastroenterol 6:643-647. C형 간염을 가진 환자에서 만의 전장 프로가스트린의 양은 매우 낮을 것으로 예상되었다.
프로가스트린 양은 위험 점수(point score) 및 이에 상응하는 질병 위험 가능성을 정하는 데에 사용될 수 있다.간 질병 말기의 환자에 있어서 사망 위험을 정하기 위한 모델의 한 예시로, [Kamath et al. (2001) Hepatology 33(2):464-70]를 보아라.
간 질병 상태, 점수 및 관련된 질병이 측정된 프로가스트린 양과 상호 연관된 데이터를 사용하는 것은 프로가스트린 및 선택적으로 다른 생체 마커와 같은 생체 마커의 양으로부터 유래될 수 있다. 질병 위험 가능성은 4개의 위험 군으로 정성적으로 설명될 수 있다: 저 위험, 높아진 위험, 고 위험 및 심각한 위험.
본 명세서에서 언급된 위험도는 하기 의미를 가진다:
o "저 위험"은 환자의 생물학적 마커(들)의 양이 주어진 간 질환의 존재를 나타내지는 않음을 의미한다.
o "높아진 위험"은 환자의 생물학적 마커(들)의 양이 주어진 간 질환의 커진 위험을 나타냄을 의미한다. 위험은 추가적인 시험이 적당한 크기에 관한 것이다.
o "고 위험"은 환자의 생물학적 마커(들)의 양이 주어진 간 질환의 위험이 매우 증가함을 나타냄을 가리킨다. 위험은 추가적인 시험이 필요한 크기에 관한 것이다. 생물학적 마커들의 특이성에 기초한 시험적인 진단방법은 증명될 것이다.
o "심각한 위험"은 환자의 생물학적 마커(들)의 양이 명백히 비정상임을 의미하고 근본적인 병리를 나타낸다. 생물학적 마커(들)의 특이성을 조건으로 하는 진단방법이 만들어질 수 있다.
혈청 또는 혈장 프로가스트린 양이 0 pM 내지 100 pM 미만인 환자는 예를 들어, 간세포성 암과 같은 간암 및 간경변의 진단에 대해서서 저 위험이고, 간암, 간경변 및 C형 간염 세가지 모두의 진단에 대해서는 매우 저 위험이다. 보통의 프로가스트린의 혈청 또는 혈장 양을 가진 환자 (예를 들어, 0 내지 5 pM) 또는 조금 상승된 양 (100pM 까지)을 가진 환자는 그렇지만 간암을 가질 수 있다. 따라서, 100pM 또는 미만의 hPG의 혈청 또는 혈장 양을 가진 환자는 그 또는 그녀에게 간암이 있는지를 평가하기 위하여 추가적인 시험을 받는 것이 적당하다.
100 pM 및 400 pM 사이의 혈청 또는 혈장 프로가스트린 양을 가진 환자는 다른 간 질병 없는 간암을 갖지는 않을 것이다. 이러한 환자는 간경변 (간암과 함께 또는 간암 없이)을 가질 고 위험 및 추가로 C형 간염을 가질 높아진 위험을 가진다. 400 pM 초과의 혈장 프로가스트린 양을 가진 환자는 간암, C형 간염 및 간경변을 가질 심각한 위험한 상태에 있다.
환자의 hPG 양 및 간 질환 상태 간의 관계는 다양한 진당 방법이 사용될 수 있다. 진단 방법은 일반적으로 환자 시료에서의 hPG 양을, 예를 들어, 건강한 개인 또는 건강하지 않은 개인의 hPG양과 같은, hPG의 보통 값과 비교하는 것을 수반한다. 만약 hPG 양이 증가되면, 예를 들어 상기에 제공된 위험 지정에 기초하여, 증가된 양은 적당한 간 질환과 상호관련된다. 이러한 방법은 환자가 체액 시료를 제공하는 단계를 선택적으로 포함한다. 체액은 그 후 hPG의 양에 대해 분석되고, 바람직하게는 생화학 분석법에 의한다.
특정 적용에서, 환자의 hPG 양과 함께 암 마커의 양을 시험하는 것은 환자의 간암 마커의 특이성을 증가시키기 위해 또는 위험 점수 및 이에 상응하는 질병 위험 가능성을 정하기 위해 사용될 수 있다. 바람직한 제 2 마커는 알파페토단백질 (AFP)이다. 혈청 AFP, 태아-특이적 당단백질 항원이고, 예를 들어, 간세포성 암과 같은 간암을 가진 환자를 검출하기 위해 종양 마커로 가장 널리 사용된다. 간세포성 암을 검출하는 데에 AFP의 보고된 민감도는 간염 B 바이러스 (HBV)-양성 및 HBV-음성 인구 모두에서 매우 다양하고, 스크리닝 및 진단방법 연구 설계들 간에 중복되는 것에 기인한다. AFP가 고-위험 인구의 스크리닝에 사용될 때, 39% 내지 97%의 민감도, 76% 내지 95%의 특이성 및 9% 내지 32%의 양성 예측율 (PPV)이 보고되었다. AFP는 간암에 특이적이지 않다. 적정 또한 급성 또는 만성 간염, 임신 및 생식세포종에 일어난다.
하기 표는 AFP 양과 함께 hPG 양에 기초하여 주어진 간 질환에 대한 상대적인 위험을 나타낸다. hPG 및 AFP 양에 기초한 상대적인 위험의 지정은 AFP 만에 기초하는 것에 비하여 간 질환에 대해 더 민감하고 정확한 시험을 제공한다.
| 측정된 프로가스트린 및 AFP 양에서 간 질병의 상대적 위험 | ||||
|
|
프로가스트린 양 | |||
| 0-100 pM | 100-400pM | >400pM | ||
| AFP 양 | 0pM 내지 50pM | - | - | ++ |
| 0pM 내지 50pM | - | + | +++ | |
| 0pM 내지 50pM | + | ++ | +++ | |
| 0pM 내지 50pM | ++ | +++ | +++ | |
| -=저 위험, +=높아진 위험, ++= 고 위험, +++= 심각한 위험 | ||||
프로가스트린과 함께 사용될 수 있는 다른 2차 마커는 종양태아성 항원, 당단백질 항원, 효소 및 동질 효소 유전자 마커, 및 간암과 관련된 사이토카인을 포함한다. 추가적인 적합한 2차 마커는 글리피칸-3, 감마-글루타밀 트랜스퍼라아제 II, 알파-1-푸코시다아제, 형질전환 성장 인자-베타1, 종양-특이적 성장 인자, 감마-글루타밀 트랜스퍼라아제 mRNA, 혈관 내피 성장 인자, 인터루킨-8 및 이들의 변이체를 포함한다. 예시적인 마커는 [Zhou et al. (2006) World Journal of Gastroenterology 12(8): 1 175-1 181]에 기재되어 있다.
간 질환은 당해 기술 분야에서 알려진 표준 기술에 의해서 확인될 수 있다. 예를 들어, 간세포성 암과 같은 간암은 생체 검사와 함께 또는 없이 그리고 AFP와 같은 혈액 마커와 함께 또는 없이 MRI와 같은 방사선 또는 영상화 기법에 의해 확인될 수 있다. C형 간염은 초음파의 이용, 핵산-기반 분석법의 이용 및/또는 간섬유화 검사에 의해 섬유증 양의 분석함으로써 혈액 중의 바이러스성 입자의 정량분석을 통하여 확인될 수 있다. 간경변은 생체 검사와 함께 또는 생체 검사 없이 초음파의 사용 및/또는 섬유증의 혈청 마커의 검출을 이용하여 진단함으로써 확인할 수 있다. 다른 기술 또한 사용될 수 있다.
6.3. 프로가스트린 양을 측정하는 방법
본 명세서의 방법은 환자의 hPG 양에 기초하여 하나 또는 초과의 간 질환을 진단 및/또는 간 질환의 위험 결정한다. 혈장 및 혈청 프로가스트린 양은 어떤 공지된 분석 방법이든 사용할 수 있다. 이러한 기술은, 제한되는 것은 아니나, 하기의 것들을 포함한다: 이에 제한되는 것은 아니나, 효소 활성 또는 다른 단백질 파트너를 포함하는 단백질의 특성에 기초한 분석법뿐만 아니라, ELISA, 샌드위치 ELISA, 면역블로팅 (웨스턴 블로팅), 면역 침전법, BIACORE 기술 등. 면역분석에 있어서, 분석법의 바람직한 종류, 본 명세서의 하나 또는 초과의 항-프로가스트린 (항-PG) 항체(다중클론 또는 단일클론이고 중화 또는 비-중화)가 사용될 수 있다.
바람직한 면역분석은 분해되는 산물을 포함하는 다른 가스트린 유전자 산물에 대항하여 특이적으로 프로가스트린을 검출한다. 샌드위치 분석법은 다른 가스트린 유전자 부산물에 대항하여 프로가스트린을 검출할 수 있는 이러한 특이성을 제공하므로, 더 정확한 혈청 프로가스트린 양의 측정을 제공한다. 바람직한 면역분석 항체는 프로가스트린에 독특한 말단 위치를 구성하는 항원/에피토프에 결합한다. 예를 들어, 몇 가지 구체예에서, 프로가스트린은 프로가스트린의 N-말단을 표적으로 하는 항-PG 항체 및 프로가스트린의 C-말단을 표적으로 하는 제 2 항-PG 항체를 사용하는 샌드위치 ELISA를 사용하여 검출한다. 예시적인 항체는 하기 6.4에 개시되어 있고, 일반적인 항-PG 항체를 이용한 프로가스트린 양을 측정하는 "샌드위치" 기술은 다음에 개시되어 있다.
96-웰 플레이트에 있는 웰과 같은 표면은 프로가스트린이 결합되는 공지된 성질의 제 1 "포획" 항체가 준비된다. 항체 포획은 예를 들어, 프로가스트린의 C- 또는 N-말단과 결합하는 항-PG 항체일 수 있다. 블로킹(blocking) 후에, 시험 시료는 표면에 도포되어 배양기간을 거친다. 표면은 그 후 프로가스트린을 도포하기 위해 결합되지 않은 항원 및 제 2 "검출" 항체를 포함하는 용액을 제거하기 위해 세척되었다. 검출 항체는 만약 검출 항체가 포획 항체와 다른 에피토프와 결합한다면, 본 명세서에서 설명된 어떠한 항-PG 단일클론 항체도 될 수 있다. 예를 들어, 만약 포획 항체가 프로가스트린의 C-말단 펩타이드 지역에 결합하면, 적절한 검출 항체는 프로가스트린의 N-말단 펩타이드에 결합하는 항체일 것이다. 프로가스트린 양은 그 후 직접적으로 (만약, 예를 들어, 검출 항체가 검출가능한 표지와 결합되어 있다면) 또는 간접적으로 (검출 항-PG 항체에 결합하는 표지된 2차 항체를 통하여) 검출될 수 있다.
특정 구체예에서, 인간 프로가스트린 (hPG) 양은 실시예 1에서 설명된 것과 같은 생물학적 시험 시료로부터 측정된다.
수신자 조작 특성 (ROC) 곡선은 샌드위치 분석법에 의하여 결정되어 혈장 hPG 양에 기초하여 생성되었고, hPG 양의 측정은 하나 또는 간 질환을 가진 환자 및 다른 암 및/또는 건강한 사람들을 구분하기 위한 진단적으로 유용한 시험을 제공하는 것을 설명한다.
hPG 양을 측정하는 항체-기반 방법의 예시적인 항체 는 하기에 개시되었다.
6.4. 항-hPG 항체
hPG 양을 측정하기 위한 면역분석은 하나 또는 초과의 다중클론 또는 단일클론 항-hPG 항체 또는 이들의 항원-결합 절편을 사용할 수 있다.
당해 기술 분야에서 공지된 다양한 절차들이 hPG에 대한 다중클론 항체의 생산에 사용될 수 있다. 특수한 구체예에서, 토끼 다중클론 항체가 얻어질 수 있다. 항체의 생산을 위하여, 이에 제한되는 것은 아니지만, 토끼, 마우스, 래트 등을 포함한, 다양한 숙주 동물을 hPG의 접종에 의하여 면역시킬 수 있다. 숙주 종에 따라 다양한 보조제가 면역 반응을 증가시키기 위하여 사용될 수 있고, 이에 제한되는 것은 아니지만 프로인트 (완전 및 불완전), 수산화 알루미늄 같은 무기 젤, 리소레시틴과 같은 표면 활성 물질, 플루로닉 폴리올, 다가음이온, 펩타이드, 유유제, 멍삿갓조개헤모시아닌 및 디니트로페놀을 포함한다.
단일클론 항체는 본 명세서의 방법에서 바람직하게 사용된다. 특정 항원에 대한 항체의 동종 집단인 단일클론 항체는 배양되는 연속적인 세포계에 의한 항체 분자의 생산을 위하여 제공되는 어떠한 기술에 의해서도 얻어질 것이다. 이는, 제한되는 것은 아니지만, Kohler 및 Milstein의 혼성세포 기술, 인간 B-세포 혼성세포 기술 및 EBV-혼성세포 기술을 포함한다.
예를 들어, [Kohler and Milstein (1975) Nature 256:495-497]; [Kozbor et al. (1983) Immunology Today 4:72]; [Cole et al. (1985) pp. 77-96 in Reisfeld and Sell (1985) Monoclonal Antibodies and Myeloma Therapy Liss]; [Coligan (1991) Current Protocols in Immunology Lippincott]; [Harlow and Lane; Antibodies: A Laboratory Manual (1988) CSH Press]; 및 [Goding (1986) Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (2d ed.) Academic Press]를 보아라. 이러한 항체는 IgG, IgM, IgE, IgA, IgD 및 이들의 하위 계통을 포함하는 어떤 면역글로불린 계통일 것이다.
최근, 적어도 단일클론 항-hPG 항체에 있어서, 항-hPG 항체를 생산하기 위해 사용되는 항체가 중요하다 (2010년 10월 15일에 출원된 국제 출원 제PCT/EP2010/006329호 및 2010년 10월 15일에 출원된 미국 출원 제12/906,041호를 보면, 명세서 및 특이적으로 개시된 항-hPG 항체는 본 명세서에서 참조로써 통합되었다; 본 명세서에서 이후에는 각각 '329 및 '041 출원으로 언급된다)는 사실이 밝혀졌다. '329 및 '041 출원에서 개시되었듯이, hPG에서 유래된 모든 항원이 생리학적 조건 하에서 hPG에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체의 생산을 촉진하는 것은 아니다. 사실, 전장 재조합 hPG (예를 들어, Singh의 WO 08/076454를 보라) 및 hPG의 C-말단에 마지막 10개의 아미노산에 대응되는 펩타이드(Hollande et al.의 WO 07/135542를 보아라)와 같은 다중클론 항-hPG 항체를 성공적으로 생산하기 위해 사용되어왔던 특정 항원은 단일클론 항체를 생산하는 데 실패했다.
한가지 바람직한 구체예에서, hPG의 C- 및 N-말단 에피토프에 특이적인 항체가 특이성을 가지고 hPG 양을 검출 및 측정하기 위해 사용될 것이고, 오직 전장 hPG만이 검출되는 것을 의미한다. '329 및 '041 출원에서 기재된 바와 같이, hPG에서 항원성 N-말단 및 C-말단 서열은 hPG에 특이적으로 결합하는 단일클론 항를 생산하기 위해 사용될 수 있다는 것이 밝혀졌었다. 흥미롭게도, 항원성 서열은 hPG 서열의 독특한 위치에 제한될 필요가 없다. 예를 들어, G17, G34 및 CTFP와 같은 가스트린 유전자의 다른 산물과 공통적인 서열의 위치를 가지는 펩타이드 항원은 hPG에 결합할 뿐만 아니라 특이적으로 결합하는 단일클론 항체를 만들어 낸다.
hPG의 N-말단에 상응하는 서열을 가진 펩타이드 항원을 이용해서 얻을수 있는 항-hPG 항체 및/또는 hPG의 N-말단 위치에 결합하는 항-hPG 항체는 본 명세서에서 "N-말단 항-PG 항체"로 언급된다. hPG에 특이적인 다중클론 및 단일클론 항체 두 가지를 모두 얻기에 적합한 면역원을 만들기 위해 사용될 수 있는 hPG의 특이적 예시의 항원성 위치는 hPG의 1 내지 14 번째 잔기에 대응된다: SWKPRSQQPDAPLG (서열번호25). 이들 예시적인 면역원으로부터 얻어진 CDR 및 N-말단 항-hPG 단일클론 항체의 VH 및 VL 서열뿐만 아니라, N-말단 항-hPG 항체를 얻기 위해 유용한 예시적인 면역원은 하기 표 3A 및 실시예 부분에서 제공된다:
표 3A
표 3A에서, 모든 아미노산 서열은 통상적인 N→C 방향을 사용하여 나타내었다. 각각의 면역원에 대하여, 프로가스트린 펩타이드는 하나의 아미노 헥사논 산(Ahx) 잔기 이후 시스테인 (Cys) 잔기의 C-말단 연결기와 합성되었고, 그 후 소 혈청 알부민 ("BSA") 또는 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌 ("KLH") 담체 중 하나가 Cys 연결기 잔기를 통해 접합되었다.
hPG의 C-말단에 대응하는 서열을 가진 펩타이드 항원을 사용하여 얻을 수 있는 항-hPG 항체 및/또는 hPG의 C-말단에 결합하는 항-hPG 항체는 "C-말단 항-hPG 항체"로 본 명세서에서 언급된다. 다중클론 및 단일클론 C-말단 항-hPG 항체 두 가지를 모두 얻기에 유용한 면역원을 만들기 위해 사용될 수 있는 hPG의 특이적 예시의 항원성 위치는 hPG의 55 내지 80 번째 잔기에 대응된다: QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN (서열번호27). 이들 예시적인 면역원으로부터 얻어진 CDR 및 C-말단 항-hPG 단일클론 항체의 VH 및 VL 서열뿐만 아니라, C-말단 항-hPG 항체를 얻기 위해 유용한 이 항원을 포함하는 예시적인 면역원은 하기 표 3B 및 실시예 부분에서 제공된다:
표 3B
표 3B에서, 모든 아미노산 서열은 통상적인 N→C 방향을 사용하여 나타내었다. 각각의 면역원에 대하여, 프로가스트린 펩타이드는 N-말단 Ahx-Ahx-Cys 연결기와 합성되었고, 그 후 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌 ("KLH") 또는 디프테리아 독소("DT") 담체 중 하나가 Cys 연결기 잔기를 통해 접합되었다.
표 4A 및 4B에 제시된 예시적인 항-hPG 단일클론 항체 MAb1-MAb23에 의해 결합되는 특이적 에피토프는 각각 [Laune et al. (2002) J. Immunol. Methods 267:53-70] 및 [Laune (1997) J. Biol. Chem. 272:30937-30944]에 기술된 것과 같이 SPOT 기술 및 알라닌 주사(alanine scanning)를 사용하여 지도가 만들어졌다(또한 '329 출원의 실시예 6을 보아라).
SPOT 기술에서, 추정된 에피토프라고 생각되는 15개의 아미노산 펩타이드 서열이 생산되고 그 후 항체에 의해 인식되는 최소한의 에피토프 서열을 결정하기 위하여 시험 항체로 탐침 처리된 니트로섬유소막에 뿌려졌다. 알라닌 주사는 항체 결합에 중요한 에피토프의 잔기를 결정하기 위하여 사용되었다. 추정된 에피토프 각각의 잔기는 알라닌, 및 알라닌-포함 펩타이드로 하나씩 변이되고 그 후 시험 항체로 탐침 처리된다.
N-말단 항-hPG 단일클론 항체 MAbs #1-4 및 15-20에 있어서, 하기 표 4A에 나타난 바와 같이, 에피토프는 적어도 하기의 서열을 포함한다: DAPLG (서열번호28), PDAPLG (서열번호29), PRSQQPD (서열번호30), WKPRSQQPD (서열번호31), or WPRSQQPDAPLG (서열번호32).
C-말단 항-hPG 단일클론 항체 MAbs #5-7, 9-12, 14 및 21-23에 있어서, 에피토프는 하기 표 4B에 나타난 바와 같이 적어도 하기 서열을 포함한다: FGRR (서열번호33), MDFGR (서열번호34), AEDEN (서열번호35), 및 GWMDFGRR (서열번호36).
에피토프 지도 작성 실험은 항-hPG MAb2 및 MAb4는 동일한 에피토프에 결합하고; 항-hPG MAb1 및 MAb3는 거의 동일한 에피토프에 결합하며; MAb 17, MAb 18, MAb 19, 및 MAb20는 거의 동일한 에피토프에 결합하고; MAb 15 및 MAb 16는 거의 동일한 에피토프에 결합하고; 항-hPG MAb5, MAb6, MAb7, MAb9, 및 MAb12는 동일한 에피토프에 결합하고 항-hPG MAb10과는 거의 동일한 에피토프에 결합하고; 항-hPG MAb11 및 MAb14는 거의 동일한 에피토프에 결합한다.
본 명세서에서 설명되는 방법 및 키트에서 유용한 N-말단 항-PG 항체의 특정 구체예는 hPG의 10 내지 14번째 잔기 (서열번호 28), 9 내지 14번째 잔기 (서열번호 29), 4 내지 10번째 잔기 (서열번호 30), 2 내지 10번째 잔기 (서열번호 31) 또는 2 내지 14번째 잔기 (서열번호 32)를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다.
본 명세서에서 설명되는 방법 및 키트에서 유용한 C-말단 항-PG 항체의 특정 구체예는 71 내지 74번째 잔기 (서열번호 33), 69 내지 73번째 잔기 (서열번호 34), 76 내지 80번째 잔기 (서열번호 35) 또는 67 내지 74번째 잔기 (서열번호 36)를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다.
표 4A & 4B에서 제공되는 것들에 추가하여 본 명세서에서 설명되는 방법 및 키트에서 유용한 N-말단 및 C-말단 항-hPG 항체는, 하기에서 더 자세하게 설명되는 것과 같이, 예시적인 MAbs 1-23 또는 N- 또는 C- 말단 에피토프에 결합하는 다른 참조 항체를 이용한 경쟁적 결합 분석법에서 확인될 수 있다.
항체를 얻기에 유용한 몇 가지 혼성세포는 부다페스트 조약에 따른 CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes)에 2010년 10월 06에 기탁되었다. 항-hPG MAbs1-23을 생산하는 혼성세포의 표시 이름 및 이 기탁된 혼성세포의 기탁 등록 번호는 표 4A & 4B에 제공된다. 또한, 몇 가지 항체에 있어서, 그들의 가변 중사슬 (VH), 가변 경사슬 (VL), VL 상보적 결정 부위 (CDR) 및 VH CDR의 아미노산 서열이 결정되었다. 아미노산 서열, 및 본 명세서 전반에서 그들을 참조하기 위해 사용되는 약칭 명명법은 표 4A & 4B에 또한 제공된다. 간단히, 쥐 중사슬 및 경사슬 가변 도메인은 본 명세서에서 mVH 및 mVL 이후 대응하는 단일클론 항체, 예를 들어, 항-hPG MAb3의 가변 경사슬 및 가변 중사슬에 대해서 각각 mVH.3 및 mVL.3로 언급된다. 유사하게, 인간 중사슬 및 경사슬 가변 도메인은 본 명세서에서 hVH 및 hVL 이후 대응하는 단일클론 항체로 언급된다. 3개의 가변 중사슬 CDR들 및 3개의 가변 경사슬 CDR들은, 각각, VH CDR 1, 2 또는 3, 및 VL CDR 1, 2 또는 3 이후 특정 항-hPG 단일클론 항체의 개수로 언급된다. 예를 들어, MAb3의 VH CDR 1은 VH CDR 1.3로 기재되고, MAb3의 VL CDR 1은 VL CDR 1.3로 기재된다. MAb3의 VH CDR 2는 VH CDR 2.3으로 기재되고, MAb3의 VL CDR 2는 VL CDR 2.3으로 기재된다.
거의 동일한 에피토프에 결합하는 항-hPG 단일클론 항체의 상응하는 CDR들 및/또는 VH 및 VL 사슬들은 본 명세서에서 설명되는 방법 및 키트에 유용한 새로운 항-hPG 단일클론 항체를 생산하기 위해 상호교환될 수 있을 것으로 기대된다. 예를 들어, 위에서 기재된 바와 같이, 예시적인 항-hPG 단일클론 항체 MAb5 및 MAb6는 동일한 에피토프에 결합한다. 항-hPG 단일클론 항체는 그것의 VL 사슬에서, 이들 두 항체의 VL CDR의 다양한 조합 및/또는 VH 사슬에서 이들 두 항체의 VH CDR의 다양한 조합을 포함하도록 설계될 수 있다. 다양한 가능한 조합을 묘사하기 위한 특정 비-제한적 예시로써, 이러한 항체는 그것의 VL 사슬에 MAb5의 CDRs 1 및 2 (각각, VL CDR 1.5 및 VL CDR 2.5) 및 MAb6의 CDR 3 (VL CDR 3.6), 및 그것의 VH 사슬에, MAb6의 CDR 1 (VH CDR 1.6) 및 MAb5의 CDRs 2 및 3 (각각 VH CDR 2.5 및 VH CDR 3.5)를 포함할 수 있다. 기탁된 혼성세포에 의해서 생산된 항체의 CDR의 아미노산 서열은 통상의 수단을 사용하여 얻어질 수 있다. 예를 들어, [Coligan (1996) Current Protocols in Immunology, Vol. 3, New York: John Wiley and Sons]를 보아라.
표 3A를 참조하여, 본 명세서에서 기재된 방법 및 키트에 유용한 N-말단 항-hPG 항체의 특정 구체예는, 이에 제한되는 것은 아니나, 하기의 것을 포함한다:
(a) 서열에서 MAb1 , MAb2, MAb3, MAb4, MAbl5, MAbl6, MAb17, MAb18, MAb 19 또는 MAb20의 VL CDR 대응되는 VL CDR 및 서열에서 MAb1, MAb2, MAb3, MAb4, MAb15, MAb 16, MAb 17, MAb 18, MAb 19 또는 MAb20의 VH CDR 대응되는 VH CDR을 가지는 항체;
(b) 서열에서 MAb1, MAb2, MAb3, MAb4, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19 또는 MAb20의 VL 및 VH CDR에 대응되는 VL CDRs 및 VH CDR을 가지는 항체;
(c) (i) VL CDR 1은 QSIVHVHSNGNTY ("VL CDR 1.3"; 서열번호4), QSLVHSSGVTY ("VL CDR 1.4"; 서열번호10), QSLLDSDGKTY ("VL CDR 1.16"; 서열번호50) 및 SQHRTYT ("VL CDR 1.19"; 서열번호51)에서 선택되고;
(ii) VL CDR2는 KVS ("VL CDR 2.3" 및 ("VL CDR 2.4"; 서열번호5), LVS ("VL CDR 2.16"; 서열번호53), 및 VKKDGSH ("VL CDR 2.19"; 서열번호54)에서 선택되며;
(iii) VL CDR3은 FQGSHVPFT ("VL CDR 3.3"; 서열번호6), SQSTHVPPT ("VL CDR 3.4"; 서열번호 l 1), WQGTHSPYT ("VL CDR 3.16"; 서열번호57) 및 GVGDAIKGQSVFV ("VL CDR 3.19"; 서열번호58)에서 선택되고;
(iv) VH CDR1은 GYIFTSYW ("VH CDR 1.3"; 서열번호 l), GYTFSSSW ("VH CDR 1.4"; 서열번호7), GYTFTSYY ("VH CDR 1.16"; 서열번호39) 및 GYSITSDYA ("VH CDR 1.19"; 서열번호40)에서 선택되고;
(v) VH CDR2는 FYPGNSDS ("VH CDR 2.3"; 서열번호2), FLPGSGST ("VH CDR 2.4"; 서열번호8), INPSNGGT ("VH CDR 2.16"; 서열번호43), 및 ISFSGYT ("VH CDR 2.19"; 서열번호44)에서 선택되고; 및
(vi) VH CDR3는 TRRDSPQY ("VH CDR 3.3"; 서열번호3), ATDGNYDWFAY ("VH CDR 3.4" 서열번호9), TRGGYYPFDY ("VH CDR 3.16"; 서열번호47) 및 AREVNYGDSYHFDY ("VH CDR 3.19"; 서열번호48)에서 선택된
항체;
(d) 서열에서 MAb1, MAb2, MAb3, MAb4, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19 또는 MAb20의 VL에 대응되는 VL 및 서열에서 MAb1, MAb2, MAb3, MAb4, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19 또는 MAb20의 VH에 대응되는 VH를 가지는 항체; 및
(e) 서열에서 MAb1, MAb2, MAb3, MAb4, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19 또는 MAb20의 VL 및 VH에 대응되는 VL 및 VH를 가지는 항체.
(e) 서열에서 MAb1, MAb2, MAb3, MAb4, MAb15, MAb16, MAb17, MAb18, MAb19 또는 MAb20의 VL 및 VH에 대응되는 VL 및 a VH를 가지는 항체
표 3B를 참조하여, 본 명세서에서 기재된 방법 및 키트에 유용한 C-말단 항-hPG 항체의 특정 구체예는, 이에 제한되는 것은 아니나, 하기의 것을 포함한다:
(f) 서열에서 MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAb1O, MAb11 , MAb12, MAb13, MAb14, MAb21 , MAb22 또는 MAb23의 VL CDR에 대응되는 VL CDR 및 서열에서 MBb5, MAb6, MAb7, MAB8, MAB9, MAblO, MAb11 , MAb12, MAb13, MAb14, MAb21 , MAb22 또는 MAb23의 VH CDR에 대응되는 VH CDR을 가지는 항체;
(g) 서열에서 MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAblO, MAb1l , MAb12, MAb13, MAb14, MAb21 , MAb22 또는 MAb23의 VL 및 VH CDR에 대응되는 VL CDRs 및 VH CDR을 가지는 항체;
(h) (i) VL CDR1은 KSLRHTKGITF ("VL CDR 1.8"; 서열번호49) 및 QSLLDSDGKTY ("VL CDR 1.13"; 서열번호50)에서 선택되고;
(ii) VL CDR2는 QMS ("VL CDR 2.8"; 서열번호52) 및 LVS ("VL CDR 2.13"; 서열번호53)에서 선택되며;
(iii) VL CDR3는 AQNLELPLT ("VL CDR 3.8"; 서열번호55) 및 WQGTHFPQT ("VL CDR 3.13"; 서열번호56)에서 선택되고;
(iv) VH CDR1은 GFTFTTYA ("VH CDR 1.8"; 서열번호37) 및 GFIFSSYG ("VH CDR 1.13"; 서열번호38)에서 선택되고;
(v) VH CDR2는 ISSGGTYT ("VH CDR 2.8"; 서열번호41) 및 INTFGDRT ("VH CDR 2.13"; 서열번호42)에서 선택되고;
(vi) VH. CDR3는 ATQGNYSLDF ("VH CDR 3.8"; 서열번호45) 및 ARGTGTY ("VH CDR 3.13"; 서열번호46)에서 선택된
항체;
(i) 서열에서 MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAblO, MAb11 , MAbl2, MAb13, MAbl4, MAb21 , MAb22 또는 MAb23의 VL에 대응되는 VL 및 MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAb1O, MAb11 , MAb12, MAb13, MAb14, MAb21 , MAb22 또는 MAb23의 VH에 대응되는 VH를 가지는 항체; 및
(j) 서열에서 MAb5, MAb6, MAb7, MAb8, MAb9, MAblO, MAb11 , MAb12, MAb13, MAb14, MAb21 , MAb22 또는 MAb23의 VL 및 VH에 대응되는 VL 및 VH에 대응되는 VL 및 VH를 가지는 항체.
표 4A & 4B에서 기재된 바와 같이, 몇 가지 N-말단 및 C-말단 단일클론 항-hPG 항체가 확인되었다. 이들 항체 모두는 hPG에 특이적이고, MAb14를 제외하고 모두는 대장암 세포에 중화 활성을 나타낸다. 비록 중화 활성이 치료 용도에 중요할 것이지만, 본 명세서의 진단 목적에는 필요하지 않다. 따라서, hPG에 특이적으로 결합하는 비-중화 및 중화 항체가 본 명세서에서 설명된 다양한 진단 방법에 유용하다.
항 hPG 항체의 결합력은 본 명세서의 진단 방법에 중요하지는 않지만, 높은 결합력 항체는 프로가스트린 검출의 민감도를 향상시킨다. 더군다나, 높은 결합력 항체는 치료 용도에 필요하다. 따라서, 적어도 약 1 nM의 결합력을 나타내는 항체를 사용하는 것이 유리할 것이다; 예를 들어, 적어도 약 90 nM, 80 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 15 nM, 10 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.1 nM, 0.01 nM, 0.001 nM 또는 더 큰 결합력.
표 4A & 4B에서 확인된 항-hPG 단일클론 항체의 측정된 결합력은, 하기 표 5에 기재된 바와 같이, 10-6 내지 10-12M의 범위이다.
표 5
특정 희망하는 용도에 특히 맞추어진 결합력을 가지는 항-PG 단일클론 항체는 이들 또는 본 명세서에서 설명된 항-hPG 항체의 다양한 면역원을 사용하여 생산되거나 설계된 상보성 결정 부위 (CDR) 서열, 가변 중사슬 (VH) 및 가변 경사슬 (VL) 서열 중에서 쉽게 선택될 수 있다. 어떤 특정 항-PG 단일클론 항체의 결합력은 예를 들어, ELISA, 등온 적정 열측정 (isothermal titration calorimetry; ITC), BIAcore, 또는 형광 편광 분석과 같은 당해 기술 분야에서 잘 알려진 기술 또는 본 명세서에서 기술된 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 상세한 분석법은 실시예 5에 제공된다.
숙련된 기술자에 의해 인식될 바와 같이, 관심 대상의 특정 에피토프에 결합하는 능력과 같은 특이적으로 결합하는 특성을 갖는 항-hPG 항체는 본 명세서에 기술된 다양한 항원 및 면역원을 이용하여 쉽게 얻어질 수 있고, 관심 대상의 기준 항체와 hPG에 결합하는 것에 대한 경쟁하는 그들의 능력을 평가할 수 있다. 본 명세서에서 기술된 항-hPG 항체들 중 어떤 것이라도 이러한 경쟁 분석법에 기준 항체로써 사용될 수 있다. 관심 대상의 비오틴화 된 기준 항-hPG 항체가 있는 hPG에 결합하는 데에 경쟁하는 항체의 능력을 평가하기에 유용한 구체적인 분석법은 실시예 6에서 제공된다.
기준 항-hPG 항체 및 어떤 시험 항체 간의 (종 또는 아이소타이프에 관계 없이) 항체 경쟁 연구를 수행함에 있에서, 하나는 예를 들어, 방사성 동위원소 또는 형광단과 같이 직접적으로 또는 예를 들어, (형광으로 표지된 스트렙타바이딘과 결합을 통하여 검출 가능한) 비오틴 또는 (효소 반응을 통하여 검출 가능한) 효소와 같이 간접적으로 검출가능한 표지를 가지는 기준을 차후의 확인이 가능하도록 처음으로 표지할 것이다. 이 경우에, 표지된 기준 항-hPG 항체 (고정되거나 증가되는 농도)는 hPG-표지된 항-hPG 항체 복합체를 형성하는 hPG의 공지된 양으로 배양되었다. 표지되지 않은 시험 항체는 그 후 상기 복합체에 첨가된다. 복합체가 된 표지의 강도가 측정된다. 만약 시험 항체가 표지된 기준 항-hPG 항체와 겹치는 에피토프에 결합하는 것에 의해 hPG에 경쟁한다면, 복합체가 된 표지의 강도는 시험 항체 없이 수행된 대조군 실험에 비교하여 감소할 것이다.
결합 경쟁 분석법을 수행하기 위한 수많은 방법이 공지되어 있고 상기 및 실시예 6에서의 분석법에 필적하는 결과를 산출하기 위해 적응될 수 있다.
만약 경쟁적 결합 분석 및 특히 실시예 6의 경쟁적 결합 분석법에서 hPG에 대해 기준 항체의 결합이 0.01 내지 100㎍/㎖ (예를 들어, 0.01 ㎍/㎖, 0.08 ㎍/㎖, 0.4 ㎍/㎖, 2 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖ 또는 100 ㎍/㎖ 또는 언급된 범위에서 다른 농도) 의 시험 항체 농도에서, 비록, 예를 들어, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 심지어 100%와 같이 더 높은 수준의 감소가 바람직할 것이지만, 적어도 50%까지 감소되면, 항체는 기준 항-hPG 항체와 hPG에 결합하는 것에 경쟁하는 것으로 여겨지고, 따라서 기준 항-hPG 항체와 대체로 동일 또는 겹치는 hPG의 에피토프에 결합하는 것으로 여겨진다.
숙련된 기술자에 의해 이해될 것과 같이, 진단 방법에서 유용한 항-hPG 항체는 예를 들어, 포유 동물 (예를 들어, 인간, 영장류, 설치류, 염소 또는 토끼), 비-포유류, (하나 초과의 기원 종으로부터 유래한) 자연의 키메라 및/또는 CDR-이식 (예를 들어, 인간화)을 포함하는 어떤 종의 것일 수 있다.
인간화 항체를 설계하는 방법을 포함하는 항체를 인간화시키는 방법은, 또한 당해 기술 분야에서 잘 알려져 있다. 예를 들어, [Lefranc et al. (2003) Dev. Comp. Immunol. 27:55-77]; [Lefranc et al. (2009) Nucl. Acids Res. 37:D1006-1012]; [Lefranc (2008) Mol. Biotechnol. 40: 101 -111]; [Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-7]; Queen et al.의 미국 특허 제 5,530,101, 5,585,089, 5,693,761 , 5,693,762 및 6,180,370호; EP239400; PCT 공개 제 91/09967호; 미국 특허 제5,225,539호; EP592106; EP519596; [Padlan (1991) Mol. Immunol. 28:489-498]; [Studnicka et al. (1994) Prot. Eng. 7:805-814]; [Roguska et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. 91 :969-973]; 및 미국 특허 제5,565,332호를 보고, 개시된 내용은 그들의 전체에서 인용에 의해 본 명세서에 포함된다.
실시예의 방법에 의하고 이에 제한되지는 않는 표 3A에 제공된 N-말단 항-hPG 단일클론 항체 및 표 3B에 제공된 다양한 C-말단 항-hPG 단일클론 항체를 포함하는 비-인간 항-hPG 항체의 CDR에 대응되는 CDR 서열을 가지는 항체의 인간화된 이형은 이들 잘 알려진 방법을 사용하여 얻어질 수 있다. 선택된 항-hPG 항체 의 인간화된 VL 및 VH 사슬에 대한 계획된 서열은 표 4A 및 4B에 제공된다. 쥐 또는 인간화된 항체 어느 것이라도 본 명세서의 진단 목적에 사용될 것이다. 인간화된 항체의 구체적인 예시는 하기로 구성된 항체를 포함한다:
(a) 본 명세서에서 개시된 어떤 3개의 VL CDRs 및 어떤 3개의 VH CDR;
(b) 서열번호 21에 대응되는 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 영역 및 서열번호 22에 대응되는 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 영역;
(c) 서열번호 23에 대응되는 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 영역 및 서열번호 24에 대응되는 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 영역;
(d) 서열번호 75, 77, 및 79에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 영역 및 서열번호 76 및 78에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 영역;
(e) 서열번호 80 및 82에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 영역 및 서열번호 81 및 83에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 영역;
(f) 서열번호84, 86, 및 88에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 영역 및 서열번호 85, 87, 및 89에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 영역; 및
(g) 서열번호 90, 92, 및 94에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 영역 및 서열번호 91, 93, 및 95에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 영역.
본 명세서의 방법에서 사용되는 항-PG 단일클론 항체 및 항체 절편은 예를 들어, 공유적으로 변경되거나 다른 분자에 접합되는 것과 같이 유도체합성될 수 있다.
특정 구체예에서, 항-PG 항체 또는 이의 절편은 진단제에 혼합된다. 항-PG 항체-결합 hPG의 검출은 항체를 직접 또는 간접적으로 검출할 수 있는 물질과 연결함으로써 손 쉽게 될 수 있다. 검출 가능한 물질의 예는 다양한 효소, 보결분자단 형광 물질, 발광 물질, 생발광 물질, 방사성 물질, 다양한 양전자 방출 단층촬영을 이용한 양전자 방출 물질 및 비방사성 상자성 금속 이온을 포함한다.
검출가능한 물질은 항체 (또는 이의 절편)에 직접적으로 또는 간접적으로 중간 물질 (예를 들어, 당해 기술 분야에서 알려진 연결기와 같은)을 통하여 당해 기술에서 공지된 기술을 이용하여 연결되거나 결합될 것이다.
적합한 효소의 예는 겨자무과산화효소, 알칼리성 인산가수분해효소, 베타-갈락토시다아제 또는 아세틸콜린에스테라아제를 포함한다. 이들 효소에 있어서 생발광의, 화학 발광의 및/또는 색원체의 물질은 당해 기술 분야에서 공지되었다. 예를 들어, 효소가 알칼리성 인산가수분해효소라면, 기질은 AMPPD® (3-(2'-스피로아다만탄)-4-메톡시-4-(3"-포스포릴옥시)페닐-l, 2-다이옥세테인), CDP-star® (다이소듐 4-클로로-3-(메톡시스피로 {1, 2-다이옥세테인-3,2'-(5'-클로로)트리사이클로[3.3.1.13,7]데칸}-4-yl)페닐 포스페이트) 및 CSPD® (다이소듐 3-(4-메톡시스피로{l, 2-다이옥세테인-3,2-(5'-클로로)트리사이클로[3.3.1.13,7]데칸}-4-일)페닐 포스페이트)와 같은 화학 발광체; p-니트로페닐 포스페이트, 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴-포스페이트 (BCIP), 4-니트로블루 테트라졸륨 클로라이드 (NBT) 및 아이오도 니트로 테트라졸륨 (INT) 등과 같은 색원체를 포함한다.
본 명세서의 진단 방법에 사용하기 위한 항-hPG 항체에 결합될 수 있는 금속 이온의 예는 미국 특허 출원 제4,741,900호에 개시되어 있다. 적합한 보결분자단 복합체의 예는 스트렙타아비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴을 포함한다. 적합한 형광 물질의 예는 엄벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 아이소싸이오시아네이트, 로다민, 다이클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린을 포함한다. 발광 물질의 한가지 예시는 루미놀이다. 생발광 물질은 루시퍼라아제, 루시페린 및 에쿼린을 포함한다. 적합한 방사전 물질의 예는 125I, 131I, 111In 또는 99Tc를 포함한다.
항체를 검출 가능한 기질과 연결시키는 방법은 당해 기술 분야에서 공지되어 있다. 전형적인 기술은 [Kennedy et al, (1976) Clin. Chim. Acta 70: 1-31)]; [Schurs et al. (1977) Clin. Chim Acta 81:1-40]; [Antibodies: A Laboratory Manual Harlow & Lane, eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1988) at ch. 9]; [Bioconjugate Techniques, Hermanson, Academic Press (2008)]에 기재되어 있다.
항체는 또한 고체 지지제에 부착될 수 있고, 이는 특히 면역분석 또는 hPG의 정제에 유용하다. 이러한 고체 지지제는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 유리, 셀룰로오스, 폴리아크릴아마이드, 나일론, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드 또는 폴리프로필렌을 포함한다.
본 명세서에서 기술된 방법 및 키트에서 유용한 다양한 항-hPG 항체가 전장 항체와 함께 예시되었지만, 숙련된 기술자는 결합 절편 또는 전장 항체 또는 결합 절편으로부터 설계되거나 유래된 대체 항체 또한 사용될 것을 이해할 것이다. 적합한 절편, 대체물, 등은, 이에 제한되는 것은 아니지만, Fab', F(ab')2, Fab, Fv, vIgG, scFv 절편 및 대체체(surrobodies)를 포함한다.
6.5. 키트
본 명세서의 일 측면에서, 키트는 상기에서 제시된 것과 같은 진단 및 조사 용도로 사용하기 위해 제공된다. 몇 가지 구체예에서, 키트는 항-hPG 항체 및 검출 및/또는 시료에 있는 hPG 양을 정량하기 위해 필요한 시약을 포함하여 제공되고, 분석 시약 및 완충 용액을 포함할 수 있다. 또한, 키트는 진단 방법의 실시를 위한 설명 (예를 들어, 실험 계획)이 담겨있는 설명서를 포함할 수 있다. 설명서는 전형적으로 쓰여지거나 인쇄된 자료를 포함하지만, 이러한 것에 제한되지는 않는다. 이러한 설명서를 저장하고 최종 사용자에에 그것을 전달할 수 있는 매체가 본 발명에 고려되었다. 이러한 매체는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 전자적 저장 매체 (예를 들어, 자기 디스크, 테이프, 카트리지, 칩), 광학 매체 (예를 들어, CD롬) 등을 포함한다. 이러한 매체는 이러한 설명서를 제공하는 인터넷 사이트 주소를 포함한다.
키트는 하나 또는 초과의 질병을 이미 진단 받은 환자의 진단 또는 스크리닝에 적응될 수 있다. 예를 들어, 키트는 hPG 양에 기초한 추가적인 간질환의 진단을 할 수 있도록, C형 간염 진단을 받은 환자를 위한 설명서를 포함할 수 있다. 상기 자료는 간경변 및/또는 간암과 같은 다른 간 질병을 진단 받은 환자를 위한 것일 수 있다. 키트는 또한 C형 간염 또는 다른 간 질환이 유행하는 집단을 포함하는 고-위험군의 스크리닝을 위해 적응될 수 있다.
6.6. 자동화된 방법 및 수행
본 명세서의 몇 가지 구체예에서, 진단 또는 하나 또는 초과의 간 질환에 대한 표시된 위험을 결정하는 방법은 기계에 의해 전부 또는 일부가 수행된다. 예를 들어, 방법은 혈액 시료 입력을 포함하는 진단 유닛에 의해 수행될 수 있다. 혈액 시료는 그 후, 프로가스트린 양을 산출하기 위해 기계에 의해 조작될 수 있다. 이러한 조작은 혈액 시료에 있는 프로가스트린이 하나 또는 초과의 항체와 결합하는 것을 포함할 수 있다. 프로가스트린-항체 시료는 검출 가능한 마커를 포함할 수 있다. 검출가능한 마커의 측정은 표시장치로 전달될 수 있는 데이터 출력을 제공한다. 선택적으로, 데이터 출력은 하나 또는 초과의 간 질환과 함께 프로가스트린 양에 따라 컴퓨터에 의해 연관시켜질 수 있다. 다른 구체예에서, 데이터 출력은 예를 들어 400, 450, 500, 550, 600, 650, 또는 700 pM과 같은 hPG의 임계값과 비교될 수 있다. 만약 hPG 양이 임계값을 초과하는 것으로 결정되면, 하나 또는 초과의 간질환의 진단이 이루어진다.
컴퓨터는 통계학적 또는 실험적인 정보의 데이터베이스를 더 포함할 수 있다. 상기 정보는 정량된 프로가스트린 및 하나 또는 초과의 간 질환의 위험을 더 세부적으로 또는 더 정확하게 진단 또는 지시를 제공하기 위해 사용자에 의해 입력될 수 있는 추가적인 데이터를 상호 연관짓기 위해 사용될 수 있다. 상기 데이터베이스는 추천된 치료 또는 추가의 진단 옵션으로써의 정보를 포함할 수 있다. 이에 따라, 본 명세서의 방법은 컴퓨터화된 의학적 진단 방법의 형태로 수행될 수 있다. 본 명세서의 진단 분석법을 수행하기에 유용한 예시적인 자동화된 장치는 미국 특허 제 6,063,026, 6,063,340, 및 7,381,370호에 설명된 것들을 포함한다.
일반적으로, 이러한 자동화된 장치는 하기 중 하나 또는 초과의 것을 포함할 수 있다: 혈액 또는 시료 입력 유닛, 혈액 또는 시료 조작 유닛, hPG 및/또는 hPG 마커 검출 유닛, 하나 또는 초과의 데이터베이스 기억 장치가 있는 CPU, 표시 및/또는 통신 유닛, 또는 상기 유닛의 기능이 결합된 유닛. 유닛들은 시료를 수용하고, hPG 양을 나타내는 검출 가능한 마커를 제공하는 시약을 사용하여 시료를 처리하며, 마커의 양과 hPG 양을 연관시키고, 정보, 즉, 결정된 hPG 양 및 선택적으로 hPG 양을 결정하는 것에 기초한 진단방법,을 출력하는 것을 제공하기 위해 통합된다. 유닛은 또한 hPG 양 및 선택적으로 자동화된 분석 또는 사용자에 의해 입력된 정보에 의해 제공되는 추가적인 정보에 기초하여, 예를 들어 간암, C형 간염, 간경변, 또는 이들의 조합의 진단방법과 같은 추가적인 정보를 제공하기 위해 CPU 및 데이터베이스가 통합될 수 있다. 몇 가지 측면에서, 유싯은 비-자동화된 방법과 통합될 수 있다. 예를 들어, 부분적으로 자동화된 방법은 시료를 수용 및 조작하기 위한 유닛을 포함할 수 있다. 조작된 시료는 그 후 비-자동화된 방법에 의해 실험되기 위해 제출될 수 있다.
7. 실시예
실시예 1: 혈장 프로가스트린의 정량화
96-웰 판마이크로타이터 판을 0.5 및 10 ㎍/mL 사이의, 예를 들어, 토끼 C-말단 항-hPG 다중클론 항체와 같은 C-말단 항-hPG 항체로 덮고, 그 후 밤새 배양하였다. 그 후 PBS-Tween (0.05%)에서 3회 세척되며, PBS-Tween (0.05%)에서 2% (w/v)의 탈지 분유로 블록된다. 단독으로, 시험 시료, 대조 시료 (공백 또는 PG-음성 혈장 또는 혈청 시료), 및 약 5 pM (0.5 x 10-11 M) 및 약 0.1 nM (lxl0-10 M) 사이의 hPG 표준 시료 (PG-음성 혈장 또는 혈청에 희석된 감압 하에 동결 건조된 hPG)가 적절한 희석제 (예를 들어, PBS-Tween 0.05%)에서 준비된다. 시료들을 코팅된 판에서 2 내지 4시간 동안 37℃, 또는 선택적으로 12 내지 16시간 동안 21℃에서 배양한다. 배양 후, 판을 PBS-Tween (0.05%)으로 3회 세척하고, 0.001 및 0.1 μg/mL 사이의, 본 명세서에서 설명된 것과 같이, 겨자무과산화효소 (HRP)(Nakane et al., 1974, J. Histochem. Cytochem. 22(12): 1084-1091)와 연결된 N-말단 항-hPG 단일클론 항체와 함께 21℃에서 30분간 배양한다. 상기 반응을 0.5M 황산 100㎕를 첨가하여 중단하고, 물질의 불투명도 측정을 405nm에서 수행한다. 시험 시료 hPG 양을 hPG 표준 시료로부터 유래된 측정값으로부터 생성된 표준 곡선과 비교함으로써 결정한다.
경쟁에 대한 다른 분석법이 공지되어 있고, 상기에서 설명된 분석법과 비교되는 결과를 얻기 위하여 적응될 수 있다.
실시예 2: 환자에서 증가된 위험의 확인 또는 하나 또는 초과의 간 질환의 진단방법
간 질환을 가지는 것으로 의심되는 환자 또는 예를 들어, 통상의 신체적인 일부로써 수행된 스크리닝과 같은 스크리닝을 받은 환자는 혈장, 혈청 또는 혈액과 같은 생물학적 시료를 제공한다. 프로가스트린 양을 예를 들어, 실시예 1에 나타난 바와 같이, 혈액 시료 중에 있는 프로가스트린 농도에 대응하는 숫자를 제공하기 위해 정량한다. 본 명세서의 방법에서, 프로가스트린의 전구체 또는 산물이 아닌 프로가스트린에 특이적인 분석법이 사용되었기 때문에, 상기 숫자는 일반적으로 1 % 내지 5%(또는 미만)의 진정한 프로가스트린 수이다. 이 수치는 그 후 간 질환의 목록과 정의된 범위에서 프로가스트린 양과 관련하여 비교된다. 다시 말해, 특정 간 질환을 지적하는 프로가스트린 양을 정량된 수치와 비교한다. 특정 하위-범위는 위험의 다른 정도를 나타낼 수 있다. 예를 들어, 높은 수치의 프로가스트린은 하나 또는 초과의 질병에 대해 고 위험임을 나타낼 수 있는 반면, 프로가스트린의 낮지만 증가된 양은 하나 또는 초과의 질병에 대해 보통의 위험을 나타낼 수 있다. 상기 양을 임계치와 비교하여 양성 또는 음성 시험 결과를 산출한다. 선택적으로 제 2 생체 마커를 진단방법 또는 징후를 확인하기 위하여 시험할 수 있다. 예를 들어, 간 질환에 대한 보통의 위험을 가지지만, 고 위험은 아닌 환자를 제 2 생체 마커가 시험받도록 할 수 있다. 만약 제 2 생체 마커가 역시 동일한 간 질환을 나타낸다면, 그 질병의 진단방법은 더 정확할 것이다. 프로가스트린 양을 결정하기 위한 수단을 키트에 제공할 수 있다. 키트는 통계학적 또는 특히 간 질환과 같은 하나 또는 초과의 질병과 함께, 그리고 하나 또는 초과의 추가적인 생체 마커에 의해 선택적으로 추가된 프로가스트린 양과 관련된 다른 데이터 또한 제공할 수 있다.
이미 간 질환으로 진단받은 환자는 hPG 시험을 또한 받을 수 있다. 예를 들어, 간암으로 진단받은 환자는 환자가 또한 C형 간염 및 간경변과 같은 추가적인 간 질환을 가지는지 여부를 결정하기 위해 hPG 시험을 받을 수 있다. C형 간염 수준은 예를 들어, 간암, 간경변, 및 C형 간염과 같은 다수의 간 질환이 존재하는 환자의 경우를 제외하고 일반적으로 증가되지 않기 때문에, 프로가스트린은 이러한 환자에서 C형 간염의 진단 방법을 위한 유용한 생체 마커이다. 유사하게, C형 간염 또는 간경변을 이미 진단받은 환자는 hPG 양이 비정상적임을 결정함으로써 추가적인 질병에 대해 스크리닝될 수 있다.
hPG 양을 몇 가지 예에서 진단을 확인하기 위해서 사용할 수 있다. 예를 들어, 간암 또는 다른 간 질환을 나타내는 하나 또는 초과의 생체 마커에 대한 비 정상적인 시험 결과를 나타내는 환자는 초기 진단을 확인하기 위하여 비정상적으로 높은 hPG 양에 대하여 스크리닝될 수 있다. hPG 양을 통상의 스크리닝 프로그램의 부분으로써 위험에 처한 군집에서 정량할 수 있다. 예를 들어, 매우 높은 hPG 양은 다수의 간 질환과 연관되어 있고, C형 간염이 있는 환자는 전형적으로 적어도 하나 다른 간 질환과 함께 존재하기 때문에, 높은 정도의 C형 간염 군집은 hPG 스크리닝의 후보자일 것이다. hPG 양을 또한 하나 또는 초과의 간 질환의 치료 추이를 관찰하는 데에 사용할 수 있다. 감소하는 hPG 양은 효과적인 치료와 관련이 될 것이다.
실시예 3: 하나 또는 초과의 간 질환의 진단방법을 위한 키트, 유닛, 시험 및 진단
하나 또는 초과의 진단을 포함하는 기술을 본 명세서에서 기술된 진단 방법에 이용할 수 있다. 예를 들어, 흡수지 또는 크로마토그래프 스틱을 프로가스트린 양이 임계치를 초과하는 환자의 혈액 또는 혈액 성분과 결합하여 색상이 변화하기 위해 적응할 수 있다. 선택적으로, 키트는 마커가 혈중 프로가스트린에 결합하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 이러한 마커는 예를 들어, 방사성동위원소 또는 발색단일 수 있다. 만약 마커 방출이 임계치 초과의 프로가스트린 양을 나타낼만한 충분한 강도라면, (여기 또는 다른 방법으로 유발된) 방사선의 검출 및 정량을 그 후 양성 시험 결과를 이끌어 내기 위해 사용할 수 있다. 시험 결과를 위험치와 같은 범위를 나타내기 위해 적응할 수 있다. 예를 들어, 키트는 프로가스트린 양의 한 범위에 대한 제 1 신호 및 프로가스트린 양의 다른 범위의 추가적인 신호를 나타내기 위해 적응된 시험을 포함할 수 있다.
특정 실시예에서, 진단 유닛 또는 장치는 기술자 또는 자동화된 장치에 의해 혈액 시료의 조작을 위한 하나 또는 초과의 시료 챔버를 포함한다. 유닛 또는 장치는 프로가스트린에 특이적으로 결합하는 항체와 같은 하나 또는 초과의 시약을 더 포함한다. 프로가스트린을 특이적으로 분석하기 위한 유닛 또는 장치에서 샌드위치 분석법을 유닛 또는 장치에서 제공된 복수의 항체를 사용하여 수행할 수 있다. 장치 또는 유닛은 결합된 프로가스트린의 양을 정량하기 위하여 사용된 마커의 양을 검출하기 위한 검출기를 포함할 수 있다. 장치 또는 유닛은 검출된 마커의 양과 결합된 프로가스트린의 양을 연관시키기 위한, 그리고 결합된 프로가스트린과 진단을 연관시키기 위한 명령을 가지는 컴퓨터 프로그램과 같은 처리기를 더 포함할 수 있다. 마지막으로, 장치 또는 유닛은 시험 결과 및 또는 진단을 표시 또는 전달하기 위한 유닛을 포함할 수 있다. 선택적인 유닛 또는 장치에서, 유닛은 혈액 시료 저장고 및 예를 들어, 프로가스트린에 접촉하고 결과적으로 원-드롭(one-drop) 간 질환 시험을 제공하기 위해 사용될 수 있는 색 변화를 나타내는 시약으로 채워지거나 덮인 검사 막대와 같은, 프로가스트린에 결합하는 하나 또는 초과의 시약을 포함한다.
실시예 4: 항-hPG 항체의 특이성을 평가하기 위한 ELISA 분석
항-hPG 항체의 특이성을 하기와 같이 ELISA를 사용하여 용이하게 결정할 수 있다. 96-웰 플레이트를 인산염으로 완충된 살린(PBS)에서 밤새도록 4℃에서 적절한 농도의 시험 폴리펩타이드 (예를 들어, 25 및 50 ng 재조합 인간 PG, 및 50 및 250 ng CTFP 또는 다른 가스트린-유래 유전자 산물)과 함께 배양하고, 그 후 상기 웰을 세척 용액 (PBS 및 0.1 % Tween-20)으로 3회 세척하고, 그 후 2시 간 동안 22℃에서 웰 당 100㎕ 억제 용액 (PBS, 0.1 % Tween-20, 0.1 % 소 혈청 알부민 또는 카제인 가수분해물)과 함께 배양하였다. 억제 후, 상기 웰들을 3회 세척하고 분석할 항체 (시험 항체)를 첨가한다. PBS 및 0.1 % Tween-20에 있는 100㎕의 시험 항체 (0.3 내지 1 ng/ml)를 각 웰에 첨가한다. 판을 그 후 2 시간 동안 22℃에서 배양하고, 그 후 세척 단계 후에(상기와 같이, 3X 100㎕의 세척 용액) 시험 항체 용액을 버리고 겨자무과산화효소에 연결된 2차 항체, 염소 항-마우스 IgG (Fc) 항체를 포함하는 억제 용액으로 대체한다. 2차 항체로 1 시간 동안의 배양 후에, 100㎕의 기질 용액 (예를 들어, Fast OPD 또는 O-페닐렌다이아민 다이하이드로클로라이드, 시그마-알드리치 사에서 이용가능, 생산자의 지시에 따라 준비됨)을 각 웰에 첨가하고, 22℃에서 20분 동안 어둠 속에서 배양한다. 반응을 50㎕의 4N 황산을 더함으로써 멈추고 촉진된 기질의 양을 492nm에서 광학 밀도 (O.D.)를 측정함으로써 결정한다. 기질 전환은 항원에 결합한 일차 (시험) 항체의 양에 비례한다. 실험을 2회 반복하고, OD 측정은 항원 농도의 함수로써 그린다. 만약 측정된 O.D. 값이 hPG에 대하여 0.2 및 1.5 사이 값이고, CTFP 또는 어떤 다른 가스트린-유전자 유래 펩타이드의 배경 위의 통계학적으로 중요한 신호는 없고, 배경은 PBS만 담고 있는 대조 웰로부터의 평균 신호라면, 시험 항체를 PG에 대해 매우 특이적인 것으로 기록한다.
실시예 5: 항-hPG 항체의 결합력을 평가하기 위한 분석
항-hPG 항체의 친화 상수를 프로테온 테크니크 (Proteon Technique (BioRad))를 이용하여 [Nahshol et al. (2008) Analytical Biochemistry 383 :52-60]에 따라 측정할 수 있고, 본 명세서에서 전체에서 참조로써 통합된다. 간단히, 쥐 항-PG 항체에 있어서, 항-마우스 IgG 항체 (50㎍/ml)를 센서 칩에 첫 번째로 덮고, 항체의 주입 후에 칩에 의해 검출된 신호를 10,000 및 11,500 응답 단위(RU) 사이로 확실히 떨어지게 한다. 관심 쥐 항-hPG 항체 (시험 항체)를 그 후 (30 μg/mL의 통상적인 농도로) 주입한다. 만약 시험 항체가 충분히 결합하면 적어도 500 RU의 추가적인 신호가 관찰될 것이다. 시험 항체 및 hPG 사이에 결합하는 시간-코스를 그 후 예를 들어 200 nM, 100 nM, 50 nM, 25 nM, 및 12.5 nM와 같은 다양한 농도의 hPG를 투여하고 결합 양을 검출함으로써 얻는다. 전형적으로, 몇 가지 채널이 단일 실험에서 동시에 다수의 항체를 이용 가능하고, 동시에 다른 농도의 hPG에서 단일 시험 항체의 결합 분석을 가능하게 한다. 1 채널은 비-특이적 결합에 대한 대조군으로써 hPG에 특이적이지 않은 쥐 단일클론 항체를 주입하여야 하고, 다른 채널은 배경 신호를 위하여 기준치로써 희석 완충 용액을 주입하여야 한다. 일반적으로, 어떠한 결합도 비-특이적 쥐 항체가 주입된 채널에서 검출되지 않는다. 이 설정에서 높은 결합 양을 나타내는, hPG에 의해 붙잡힌 단일클론 항체의 포화를 야기할, 항체를 더 낮은 hPG 농도 (50 nM, 25 nM, 12.5 nM, 6.25 nM 및 3.125 nM)에 대하여 시험할 수 있고, 더 세밀한 측정을 할 수 있다.
친화 상수 (KD)를 해리 상수 (kd) 및 결합 상수 (ka) 간의 비율로써 계산한다. 실험값을 결합 측정에 기초한 실험적인 곡선 및 이론적 프로파일 간에 통계적으로 관련 있는 유사성을 분석함으로써 입증할 수 있다.
비-쥐 항-hPG 항체의 친화 상수를 항-hPG 시험 항체의 근원의 종에 대해 특이적인 IgG를 사용하여 유사한 방식으로 평가할 수 있다.
실시예 6: 기준 항-hPG 항체와 경쟁적 결합을 평가하기 위한 분석
관심 항체 (시험 항체)가 비오틴화된 기준 항-hPG 항체와 hPG에 결합하는 것에 대하여 경쟁하는지 여부를 평가하기 위한 구체적인 분석법을 하기와 같이 수행할 수 있다. 96-웰 플레이트를 1-10 μg/mL 범위에서 선택되는 농도에서 밤새도록 4℃에서(0.1 내지 1㎍/웰) 포획 항-hPG 항체 (비오틴화된 기준 항-hPG 항체에 의해 인식되는 에피토프와 상이한 hPG의 N- 또는 C-말단 위치를 인식하는 다중클론 또는 단일클론 항체)로 덮는다. 억제 완충 용액 (0.1 % Tween-20, 0.1 % BSA in PBS)으로 2시간 동안 22℃에서 억제시킨 후에, 재조합 hPG를 10 pM 내지 1 nM (10 내지 1000 pg/웰) 농도에서 첨가하고 2시간 동안 22℃에서 배양한다. 그 후, 비오틴화된 기준 항-hPG 항체 (또는 비오틴화된 기준 항 항-hPG 항체를 포함하는 혼합물)를, 표지되지 않은 시험 항체의 증가하는 농도와 마찬가지로, 첨가하고, 1시간 동안 22℃에서 배양한다. 결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 세척한 후에, 결합된 표지된 기준 항-hPG 항체의 검출을 50 ng/mL 스텝타비딘-HRP와 함께 혼합물을 1시간 동안 22℃에서 배양하고, 이어서 겨자무과산화효소에 대한 형광 발광 기질과 함께 배양하고 광도계에서 상대적 광 유닛 (RLU)을 정량함으로써 수행한다. 분석을 2회 반복으로 수행한다.
기준 항-hPG 항체와 경쟁하는 항체는 hPG에 기준 항체가 결합하는 것을 막는다. 기준 항체와 실질적으로 동일한 에피토프 또는 겹치는 에피토르에 결합하는 항체는, 관찰된 RLU의 감소에 의해서 확인되듯이, 결합된 기준 항-hPG 항체의 양을 의미있게 감소 (예를 들어, 50%이상 까지) 시킨다.
높은 제어량을 표지된 기준 항체를 재조합 hPG와 함께, 시험 항체 없이 배양함으로써 수행된 대조군 실험으로부터 얻는다. 낮은 제어량을 표지된 기준 항체를 초과 농도의 표지되지 않은 기준 항체(표지되지 않은 기준 항체는 따라서 표지된 항체와 hPG에 결합하는 것에 경쟁함)의 존재 하에 재조합 hPG와 배양함으로써 수행된 대조군 실험으로부터 얻는다. 시험 항체의 기준 항-hPG 항체와 경쟁할 수 있는 능력을 그 후, 표지된 기준 항체와 재조합 hPG를 증가하는 농도의 표지되지 않은 시험 항체의 존재 하에 배양함으로써 결정한다.
시험 분석에서, 시험 항체의 존재 하에 관찰된 RLU에서의 중대한 감소는 시험 항체가 기준 항-hPG 항체와 실질적으로 동일한 에피토프를 인식한다는 사실을 나타낸다.
결합의 저해는 저해 상수, 즉 Ki로써 표현될 수 있으며, 저해 상수를 하기의 식에 따라 계산한다:
"IC50"은 기준 항체의 결합에서 50% 감소를 야기하는 시험 항체의 농도이고, Rc는 기준 항-hPG Ab 농도이며, KD는 기준 항-hPG 항체의 hPG에 대한 친화력의 측정인 해리 상수이다. 기준 항-hPG 항체와 경쟁하는 유용한 시험 항체 (예를 들어, 본 명세서에서 기술된 항-hPG 항체 중 하나)는 통상적으로 본 명세서에서 기술된 분석 조건 하에서 10 pM 내지 100 nM 범위의 Ki를 가질 것이다.
각각의 출판물, 특허, 특허 출원 또는 다른 문서가 개별적으로 모든 목적으로 인용에 의해 포함되는 것으로 지적된 것과 같이, 본 명세서에서 인용된 모든 출판물, 특허, 특허 출원 및 다른 문서는 그들의 전체에서 모든 목적에 대하여 동일한 범위까지 본원에 인용에 의하여 포함된다. 다앙한 특정 구체예가 묘사되고 기술되었으나, 다양한 변화가 본 발명의 사상 및 범위로부터 벗어남 없이 이루어질 수 있다는 것은 이해될 것이다.
SEQUENCE LISTING
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Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Phe Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Ser Arg Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Asp Ser Pro Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
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Val Ser Ser
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Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
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Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Leu Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
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100 105 110
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Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Phe Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
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Met Leu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Thr Asp Gly Asn Tyr Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
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Asp Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
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Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
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Ser Gly Val Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
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Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
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Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> CDS
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<400> 16
gag gtt cag ctc cag cag tct ggg act gtg ctg gca agg cct ggg gct 48
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
tcc gtg aag atg tcc tgc aag gct tct ggc tac atc ttt acc agc tac 96
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
tgg gta cac tgg gtt aaa cag agg cct gga cag ggt cta gaa tgg att 144
Trp Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
ggt ggt ttt tat cct gga aat agt gat tct agg tac aac cag aaa ttc 192
Gly Gly Phe Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Ser Arg Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
aag ggc aag gcc aca ctg act gca gtc aca tcc gcc agt act gcc tac 240
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
atg gac ctc agc agc ctg aca aat gag gac tct gcg gtc tat ttc tgt 288
Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
aca aga aga gat agt ccc cag tac tgg ggc caa ggc acc act ctc aca 336
Thr Arg Arg Asp Ser Pro Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
100 105 110
gtc tcc tca 345
Val Ser Ser
115
<210> 17
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(336)
<400> 17
gat gtt ttg atg acc caa act cca ctc tcc ctg cct gtc agt ctt gga 48
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
gat caa gcc tcc atc tct tgc aga tct agt cag agc att gta cat agt 96
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
aat gga aac acc tat tta gaa tgg tac ctg cag aaa cca ggc cag tct 144
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
cca aag ctc ctg atc tac aaa gtt tcc aac cga ttt tct ggg gtc cca 192
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
gac agg ttc agt ggc agt gga tca ggg aca gat ttc aca ctc aag atc 240
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
agc aga ctg gag gct gag gat ctg gga gtt tat tac tgc ttt caa ggt 288
Ser Arg Leu Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
tca cat gtt ccg ttc acg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa 336
Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
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<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(354)
<400> 18
cag gtt cag ttg cag cag tct gga gct gag ctg atg aag cca ggg gcc 48
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
tca gtg aag ata tcc tgc aag gct act ggc tac aca ttc agt agc tcc 96
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Ser
20 25 30
tgg ata gag tgg tta aaa cag agg cct gga cat ggc ctt gag tgg att 144
Trp Ile Glu Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
gga gag ttt tta cct gga agt ggt agt aca gac tac aat gag aag ttc 192
Gly Glu Phe Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
aag ggc aag gcc aca ttc act gca gac aca tcc tcc gac aca gcc tac 240
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
atg cta ctc agc agc ctg aca tct gag gac tct gcc gtc tat tac tgt 288
Met Leu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
gca act gat ggt aat tat gac tgg ttt gct tac tgg ggc caa ggg act 336
Ala Thr Asp Gly Asn Tyr Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
ctg gtc act gtc tct gca 354
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
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<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(336)
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gat ctt gtg atg acc caa act cca ctc tcc ctg cct gtc agt ctt gga 48
Asp Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
gat caa gcc tcc atc tct tgc aga tct agt cag agc ctt gta cac agt 96
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
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agt gga gtc acc tat tta cat tgg tac ctg cag aag cca ggc cag tct 144
Ser Gly Val Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
cca aag ctc ctg atc tac aaa gtt tcc aac cga ttt tct ggg gtc cca 192
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
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gac agg ttc agt ggc agt gga tca ggg aca gat ttc aca ctc aag atc 240
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
agc aga gtg gag gct gag gat ctg gga gtt tat ttc tgc tct caa agt 288
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 20
Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly Thr Gly
1 5 10 15
Ala Asn Arg Asp Leu Glu Leu Pro Trp Leu Glu Gln Gln Gly Pro Ala
20 25 30
Ser His His Arg Arg Gln Leu Gly Pro Gln Gly Pro Pro His Leu Val
35 40 45
Ala Asp Pro Ser Lys Lys Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu
50 55 60
Ala Tyr Gly Trp Met Asp Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn
65 70 75 80
<210> 21
<211> 115
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Phe Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Ser Arg Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Asp Ser Pro Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 22
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 22
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 23
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 23
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Phe Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asp Gly Asn Tyr Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 24
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 24
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Val Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 25
<211> 14
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 25
Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly
1 5 10
<210> 26
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Ahx
<400> 26
Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly Xaa Cys
1 5 10 15
<210> 27
<211> 26
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 27
Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp
1 5 10 15
Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn
20 25
<210> 28
<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 28
Asp Ala Pro Leu Gly
1 5
<210> 29
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 29
Pro Asp Ala Pro Leu Gly
1 5
<210> 30
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 30
Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp
1 5
<210> 31
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 31
Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp
1 5
<210> 32
<211> 13
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 32
Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly
1 5 10
<210> 33
<211> 4
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 33
Phe Gly Arg Arg
1
<210> 34
<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 34
Met Asp Phe Gly Arg
1 5
<210> 35
<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 35
Ala Glu Asp Glu Asn
1 5
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 36
Gly Trp Met Asp Phe Gly Arg Arg
1 5
<210> 37
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 37
Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr Ala
1 5
<210> 38
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 38
Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 39
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 39
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 40
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 40
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala
1 5
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 41
Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr
1 5
<210> 42
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 42
Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr
1 5
<210> 43
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 43
Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr
1 5
<210> 44
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 44
Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr
1 5
<210> 45
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 45
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe
1 5 10
<210> 46
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 46
Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr
1 5
<210> 47
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 47
Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 48
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 48
Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 49
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 49
Lys Ser Leu Arg His Thr Lys Gly Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 50
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 50
Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr
1 5 10
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 51
Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr
1 5
<210> 52
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 52
Gln Met Ser
1
<210> 53
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 53
Leu Val Ser
1
<210> 54
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 54
Val Lys Lys Asp Gly Ser His
1 5
<210> 55
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 55
Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 56
Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Gln Thr
1 5
<210> 57
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 57
Trp Gln Gly Thr His Ser Pro Tyr Thr
1 5
<210> 58
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 58
Gly Val Gly Asp Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val
1 5 10
<210> 59
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 59
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 60
<211> 114
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 60
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Asp Arg Arg Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ser Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 61
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 61
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 62
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 62
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Arg Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ile Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 63
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 63
Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Ser Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr
20 25 30
Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 64
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 64
Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 65
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 65
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Arg Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Glu Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Ile Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 66
<211> 115
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 66
Gln Leu Ala Leu Thr Gln Ser Ser Ser Ala Ser Phe Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Ala Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Ser Leu Lys Pro Pro Lys Tyr Val Met
35 40 45
Glu Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Thr Gly His Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Asp Arg Tyr Leu Ser Ile Ser
65 70 75 80
Asn Ile Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Ile Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
100 105 110
Thr Val Leu
115
<210> 67
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(351)
<400> 67
gaa gtg cag ctg gtg gag tct ggg gga ggc tta gtg aag cct gga ggg 48
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
tcc ctg aaa ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc act ttc act acc tat 96
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
gcc atg tct tgg gtt cgc cag act ccg gag aag agg ctg gag tgg gtc 144
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
gca acc att agt agt ggt ggt act tac acc tac tat cca gac agt gtg 192
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
aag ggt cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac gcc cta tac 240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr
65 70 75 80
ctg caa atg agc agt ctg agg tct gag gac acg gcc atg tat tac tgt 288
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
gca aca cag ggg aat tac tct ttg gac ttc tgg ggc caa ggc acc tct 336
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
ctc aca gtc tcc tca 351
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 68
<211> 342
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(342)
<400> 68
gag gtg cag ctg gtg gag tct ggg gga ggc ttg gtg cag cct gga ggg 48
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
tcc ctg aaa ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc att ttc agt agc tat 96
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
ggc atg tct tgg gtt cgc cag tct cca gac agg agg ctg gag ttg gtc 144
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Asp Arg Arg Leu Glu Leu Val
35 40 45
gca agt att aat act ttt ggt gat aga acc tat tat cca gac agt gtg 192
Ala Ser Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac acc ctg tac 240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
ctg caa atg acc agt ctg aag tct gag gac aca gcc att tat tac tgt 288
Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
gca aga ggg acc gga acc tac tgg ggc caa ggc acc act ctc aca gtc 336
Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
tcc tca 342
Ser Ser
<210> 69
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(351)
<400> 69
cag gtc caa ctg cag cag tct ggg gct gaa ctg gtg aag cct ggg gct 48
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
tca gtg aag ttg tcc tgc aag gct tct ggc tac acc ttc acc agc tac 96
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
tat atg tac tgg gtg aag cag agg cct gga caa ggc ctt gag tgg att 144
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
gga gag att aat cct agc aat ggt ggt act aac ttc aat gag aag ttc 192
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
aag agc aag gcc aca ctg act gta gac aaa tcc tcc agc aca gca tac 240
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
atg caa ctc agc agc ctg aca tct gag gac tct gcg gtc tat tac tgt 288
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
aca aga ggc ggt tac tac ccc ttt gac tac tgg ggc caa ggc acc act 336
Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
ctc aca gtc tcc tca 351
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 70
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(363)
<400> 70
gat gtg cag ctt cag gag tcg gga cct ggc ctg gtg aaa cct tct cag 48
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
tct ctg tcc ctc aca tgc act gtc act ggc tac tca atc acc agt gat 96
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
tat gcc tgg aat tgg atc cgg cag ttt cca gga aac aaa ctg gag tgg 144
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
atg ggc tac ata agc ttc agt ggt tac act agt tac aac cca tct ctc 192
Met Gly Tyr Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
aaa agt cga atc tct gtc act cgg gac aca tcc agg aac caa ttc ttc 240
Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Arg Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
ctc cag ttg act tct gtg act act gag gac aca gcc aca tat tac tgt 288
Leu Gln Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
gca aga gag gtc aac tat ggg gac tcc tac cac ttt gac tac tgg ggc 336
Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
caa ggc acc att gtc aca gtc tcc tca 363
Gln Gly Thr Ile Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 71
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(336)
<400> 71
gac att gtg atg acg cag gct gca tcc tct aat cca gtc act ctt gga 48
Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Ser Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
aca tcc gct tcc atc tcc tgc agg tct agt aag agt ctc cga cat act 96
Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr
20 25 30
aaa ggc atc act ttt ttg tat tgg tat ctg cag aag cca ggc cag tct 144
Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
cct cag ctc ctg att tat cag atg tcc aac ctt gcc tca gga gtc cca 192
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
gac agg ttc agt agc agt ggg tca gga act gat ttc aca ctg aga atc 240
Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
agc aga gtg gag gct gag gat ttg ggt gtt tat tac tgt gct caa aat 288
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
cta gaa ctt ccg ctc acg ttc ggt gct ggg acc aag ctg gag ctg aaa 336
Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 72
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(336)
<400> 72
gat gtt gtg ctg acc cag act cca ctc act ttg tcg gtt acc att gga 48
Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
caa cca gcc tcc atc tcc tgc aag tca agt cag agc ctc tta gat agt 96
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
gat gga aag aca tat ttg aat tgg ttg tta cag agg cca ggc cag tct 144
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
cca aag cgc cta atc tat ctg gtg tct aaa ctg gac tct gga gtc cct 192
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
gac agg ttc act ggc agt gga tca ggg aca gat ttc aca ctg aaa atc 240
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
agc aga gtg gag gct gag gat ttg gga gtt tat tat tgc tgg caa ggt 288
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
aca cat ttt cct cag acg ttc ggt gga ggc acc aag ctg gaa atc aaa 336
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 73
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(336)
<400> 73
gat gtt gtg atg acc cag act cca ctc act ttg tcg gtt acc att ggg 48
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
cgc cca gcc tcc atc tct tgc aag tca agt cag agc ctc tta gac agt 96
Arg Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
gat gga aag aca tat ttg tat tgg ttg tta cag agg cca ggc cag tct 144
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
cca aag cgc cta atc tat ctg gtg tct gag ctg gac tct gga gtc cct 192
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Glu Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
gac agg atc act ggc agt ggg tcg ggg aca gat ttc aca ctg aag atc 240
Asp Arg Ile Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
agc aga gtg gag gct gag gat ttg gga gtt tat tat tgc tgg caa gga 288
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
aca cat tct ccg tac acg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa 336
Thr His Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 74
<211> 345
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(345)
<400> 74
caa ctt gcg ctc act cag tca tct tca gcc tct ttc tcc ctg gga gcc 48
Gln Leu Ala Leu Thr Gln Ser Ser Ser Ala Ser Phe Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
tca gca aaa cta acg tgc act ttg agt agt caa cac aga acg tac acc 96
Ser Ala Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr
20 25 30
att gaa tgg tat cag caa cag tca ctc aag cct cct aag tat gtg atg 144
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Ser Leu Lys Pro Pro Lys Tyr Val Met
35 40 45
gag gtt aag aaa gat gga agc cac agc aca ggt cat ggg att cct gat 192
Glu Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Thr Gly His Gly Ile Pro Asp
50 55 60
cgc ttc tct gga tcc agt tct ggt gct gat cgc tac ctc agc att tcc 240
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Asp Arg Tyr Leu Ser Ile Ser
65 70 75 80
aac atc cag cct gaa gat gaa gca ata tac atc tgt ggt gtg ggt gat 288
Asn Ile Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Ile Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
gca att aag gga caa tct gtg ttt gtt ttc ggc ggt ggc acc aag gtc 336
Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
100 105 110
act gtc cta 345
Thr Val Leu
115
<210> 75
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 75
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 76
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 76
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr
20 25 30
Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 77
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 77
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 78
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr
20 25 30
Lys Gly Ile Thr Phe Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 79
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 79
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 80
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 80
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 81
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 81
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 82
<211> 114
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 82
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 83
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 83
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 84
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 84
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 85
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 85
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 86
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 86
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 87
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 87
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
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<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 88
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 89
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
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Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Glu Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
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<210> 90
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 90
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
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50 55 60
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65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 91
<211> 115
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 91
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr
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35 40 45
Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp
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100 105 110
Glu Ile Lys
115
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<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 92
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 93
<211> 115
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 93
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Ala Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp
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100 105 110
Glu Ile Lys
115
<210> 94
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 94
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 95
<211> 115
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 95
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Glu Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
100 105 110
Glu Ile Lys
115
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<220>
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<222> (2)..(3)
<223> Ahx
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Cys Xaa Xaa Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly
1 5 10 15
Trp Met Asp Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn
20 25
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<211> 13
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Ahx
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Cys Xaa Xaa Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn
1 5 10
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<211> 13
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<213> Artificial Sequence
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Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn Xaa Xaa Cys
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 99
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 100
Met Gln Arg Leu Cys Val Tyr Val Leu Ile Phe Ala Leu Ala Leu Ala
1 5 10 15
Ala Phe Ser Glu Ala Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala
20 25 30
Pro Leu Gly Thr Gly Ala Asn Arg Asp Leu Glu Leu Pro Trp Leu Glu
35 40 45
Gln Gln Gly Pro Ala Ser His His Arg Arg Gln Leu Gly Pro Gln Gly
50 55 60
Pro Pro His Leu Val Ala Asp Pro Ser Lys Lys Gln Gly Pro Trp Leu
65 70 75 80
Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp Phe Gly Arg Arg Ser
85 90 95
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100
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<213> Homo sapiens
<400> 101
Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly Thr Gly
1 5 10 15
Ala Asn Arg Asp Leu Glu Leu Pro Trp Leu Glu Gln Gln Gly Pro Ala
20 25 30
Ser His His Arg Arg Gln Leu Gly Pro Gln Gly Pro Pro His Leu Val
35 40 45
Ala Asp Pro Ser Lys Lys Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu
50 55 60
Ala Tyr Gly Trp Met Asp Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn
65 70 75 80
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<211> 34
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<213> Homo sapiens
<400> 102
Gln Leu Gly Pro Gln Gly Pro Pro His Leu Val Ala Asp Pro Ser Lys
1 5 10 15
Lys Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met
20 25 30
Asp Phe
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<212> PRT
<213> Homo Sapiens
<400> 103
Gln Leu Gly Pro Gln Gly Pro Pro His Leu Val Ala Asp Pro Ser Lys
1 5 10 15
Lys Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met
20 25 30
Asp Phe Gly
35
<210> 104
<211> 17
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 104
Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp
1 5 10 15
Phe
<210> 105
<211> 18
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<213> Homo sapiens
<400> 105
Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp
1 5 10 15
Phe Gly
<210> 106
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 106
Ser Ala Glu Asp Glu Asn
1 5
Claims (43)
- 환자료부터 얻은 시료에서 적어도 약 400 pM의 생화학적 분석 인간 프로가스트린 (hPG) 농도로써 결정하는 단계를 포함하는 환자가 간의 또는 간 질병(hepatic or liver condition)으로 고통받는지 여부를 진단하는 방법.
- 제 1항에 있어서,
상기 환자는 간의 간암, C형 간염 및 간경변으로 구성된 군으로부터 구성된 하나 또는 두 가지 질병을 가지는, 방법. - 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
상기 간암은 간세포성 암인, 방법. - 제1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 농도는 적어도 약 500 pM인, 방법. - 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 결정은 상기 환자의 시료에 있는 hPG가 적어도 하나의 항체와 결합하는 것을 포함하는, 방법. - 제 5항에 있어서,
상기 결정은 상기 환자의 시료에 있는 hPG가 복수의 항체와 결합하는 것을 포함하는, 방법. - 제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 환자는 평균보다 높은 C형 간염 발병률을 가지는 군집에 속하는, 방법. - 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 환자는 평균보다 높은 C형 간염 발병률을 가지는 지질학적 지역에 거주하는, 방법. - 제 1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 환자는 약물 또는 알코올 의존 증상을 가진, 방법. - (a) 환자로부터의 시료를 적어도 하나의 항-hPG 항체와 접촉시키는 단계; 및
(b) 상기 적어도 하나의 항체와 결합한 hPG의 양에 기초하여 상기 시료가 적어도 400 pM의 hPG 농도를 가지는지를 결정하는 단계를 포함하는 환자가 간의 또는 간 질병으로 고통받는지 여부를 진단 방법 - 제 10항에 있어서,
상기 시료는 hPG의 제 1 에피토프에 대해서 특이적으로 제 1 항체와 접촉되고, hPG의 다른 에피토프에 대하여 특이적으로 제 2 항체와 접촉되는, 방법. - 제 10항 또는 제 11항에 있어서,
상기 항체는 검출 가능한 마커를 지니고, 결합된 hPG의 양은 검출 가능한 마커의 양을 정량함으로써 결정되는, 방법. - 제 10항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 환자는 평균보다 높은 C형 간염 발병률을 가지는 군집에 속하는, 방법. - 제 10항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 환자는 평균보다 높은 C형 간염 발병률을 가지는 지질학적 지역에 거주하는, 방법. - 제 10항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 환자는 약물 또는 알코올 의존 증상을 가진, 방법. - 환자가 간의 또는 간 질병으로 고통받는지 여부를 진단하는 방법에 있어서,
상기 환자는 C형 간염 외에 다른 간 질병 진단을 받았고, 상기 환자로부터의 시료에 있는 인간 프로가스트린 (hPG) 양을 결정하는 단계를 포함하고,
상기 프로가스트린 양은, 만약 임계치보다 높다면, 환자가 C형 간염으로 고통받는 것을 나타내는, 방법. - 제 16항에 있어서,
상기 임계치는 약 400 pM인, 방법 - 제 16항에 있어서,
상기 환자는 평균보다 높은 C형 간염 발병률을 가지는 군집에 속하는, 방법. - 제 16항에 있어서,
상기 환자는 평균보다 높은 C형 간염 발병률을 가지는 지질학적 지역에 거주하는, 방법. - 제 16항에 있어서,
상기 환자는 약물 또는 알코올 의존 증상을 가진, 방법. - 환자가 간의 또는 간 질병으로 고통받는지 여부를 진단하는 방법에 있어서,
상기 환자는 제 1 간 질병으로 진단받았고, 상기 환자로부터의 시료에 있는 인간 프로가스트린 (hPG) 양을 결정하는 단계를 포함하고, 만약 임계치보다 높다면, 상기 환자는 적어도 하나의 추가적인 간 질병으로 고통받는 것을 나타내는, 방법. - 제 21항에 있어서,
상기 임계치는 약 400 pM인, 방법 - 제 21항 또는 제 22항에 있어서,
상기 환자는 평균보다 높은 C형 간염 발병률을 가지는 군집에 속하는, 방법. - 제 21항 내지 제 23항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 환자는 평균보다 높은 C형 간염 발병률을 가지는 지질학적 지역에 거주하는, 방법. - 제 21항 내지 제 24항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 환자는 약물 또는 알코올 의존 증상을 가진, 방법. - 제 1 간 질병을 진단받은 환자로부터의 시료에서 생화학적 분석법을 사용하여 다수의 간 질병을 나타내는 인간 프로가스트린 (hPG)의 양을 검출하는 단계를 포함하는 환자가 간의 또는 간 질병으로 고통받는지 여부를 진단하는 방법
- 제 26항에 있어서,
상기 제 1 간 질병은 간경변, C형 간염, 및 간세포성 암으로 구성된 군에서 선택된, 방법. - 제 26항 또는 제 27항에 있어서,
상기 양은 적어도 400 pM인, 방법 - 제 26항 내지 제 28항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 환자는 평균보다 높은 C형 간염 발병률을 가지는 군집에 속하는, 방법. - 제 26항 내지 제 29항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 환자는 평균보다 높은 C형 간염 발병률을 가지는 지질학적 지역에 거주하는, 방법. - 제 26항 내지 제 30항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 환자는 약물 또는 알코올 의존 증상을 가진, 방법. - 적어도 하나의 비-간 질병을 가지는 환자에서 간 질병의 발병을 검출하는 방법에 있어서, 상기 환자로부터의 시료에서 생화학적 분석법을 사용하여 상기 간 질병의 발달을 지시하는 인간 프로가스트린 (hPG)의 양을 검출하는 단계를 포함하는, 방법
- 제 32항에 있어서,
상기 환자는 이전에 하나 또는 초과의 간 질병을 진단받은, 방법 - 제 32항 또는 제 33항에 있어서,
상기 나타내는 hPG의 양은 적어도 약 400 pM인, 방법. - 암 진단을 받은 환자에서 간 질병의 발달을 검출하는 방법에 있어서, 상기 환자로부터의 시료에서 생화학적 방법을 사용하여 상기 간 질병을 나타내는 인간 프로가스트린 (hPG)의 양을 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제 35항에 있어서,
상기 환자는 이전에 하나 또는 초과의 간 질병을 진단받은, 방법. - 제 35항 또는 제 36항에 있어서,
상기 나타내는 hPG의 양은 적어도 약 400 pM인, 방법. - (a) 적어도 400 pM의 혈액 hPG 농도를 가진 환자를 확인하는 단계;
(b) 적어도 2가지의 하기 질병에 대해 상기 환자를 시험하는 단계:
i) 방사선 또는 영상화 기법을 이용한 간암;
ii) 핵산에 기초한 분석법을 이용한 C형 간염; 및
iii) 하나 또는 초과의 섬유증의 혈청 마커에 대하여 상기 환자로부터의 혈액 시료를 시험함으로써 간의 간경변을 포함하고, 그것에 의해서 환자가 복수의 간의 또는 간 질병으로 고통받는지 여부를 진단하는, 환자가 복수의 간의 또는 간 질병으로 고통받는지 여부를 진단하는 방법. - (a) 환자의 혈청 또는 혈장 hPG 양을 생화학적으로 분석함으로써 결정하는 단계; 및
(b) (a)의 기초 하에, 하나 또는 초과의 간 질환에 대한 상대적인 위험을 환자에게 지정하는 단계:
i) 100 pM 미만의 hPG 양은 환자가 하나 또는 초과의 간 질환에 대하여 "저 위험"에 있는 것을 나타내고;
ii) 100 pM 및 400 pM 사이의 hPG 양은 환자가 간암과 함께 또는 간암 없이 간 경변을 가지는 것에 대하여 "고 위험"에 있고, 또한 C형 간염을 가지는 것에 대하여 "높아진 위험" 에 있는 것을 나타내며;
iii) 400 pM 초과의 hPG 양은 환자가 간암, 간경변, 및 C형 간염을 가지는 것에 대하여 심각한 위험에 있는 것을 나타내고;
(c) 상기 환자가 100 pM 미만의 hPG 양을 가진다면 상기 환자는 간암을 가지지 않는 것으로 확인하는 다른 진단 수단을 이용하여 상기 환자가 선택적으로 추가로 시험되고;
(d) 상기 환자가 100 pM 및 400 pM 사이의 hPG 양을 가지면 간암 및/또는 C형 간염에 대한 다른 진단 수단을 이용하여 상기 환자가 선택적으로 추가로 시험되는 것을 포함하는 복수의 간 질병에 대하여 환자의 위험을 결정하는 방법. - (a) 환자의 혈액 hPG 양을 생화학적으로 분석함으로써 결정하는 단계;
(b) 환자의 혈액 알파 페토단백질 ("AFP") 양을 생화학적으로 분석함으로써 결정하는 단계; 및
(c) (a) 및 (b)의 기초 하에, 간 질환에 대하여 상대적인 위험을 지정하는 단계:
i) hPG 및 AFP의 제 1 임계 양은 환자가 간 질환에 대하여 "저 위험"에 있음을 나타내고;
ii) hPG 및 AFP의 제 2 임계 양은 환자가 간 질환에 대하여 "높아진 위험"에 있음을 나타내며,
iii) hPG 및 AFP의 제 3 임계 양은 환자가 간 질환에 대하여 "고 위험"에 있음을 나타내고
iv) hPG 및 AFP의 제 4 임계 양은 환자가 간 질환에 대하여 "심각한 위험"에 있음을 나타내고
상기 제 1, 제 2, 제 3 및/또는 제 4 임계치는 선택적으로 표 2에 관련된 위험 정도에 대하여 나타난 것이고, 예를 들어, 상기 제 1 임계 양은 0 내지 100 pM의 hPG 양 및 251 내지 500 pM의 AFP 양 또는 100 내지 400 pM의 hPG 양 및 51 내지 250 pM의 AFP 양인 것을 포함하는 간 질환에 대한 환자의 위험을 결정하는 방법. - (a) 간의 또는 간 질병으로 고통받고 임계치 초과의 혈중 hPG 농도를 가지는 환자에게 상기 간의 또는 간 질환에 대한 치료 섭생을 받게 하는 단계;
(b) (a)단계 후, 상기 환자가 임계치 초과의 혈중 hPG 농도를 계속해서 가지는지 여부를 결정하는 단계; 및
(c) 만약 상기 환자가 임계치 초과의 혈중 hPG 농도를 계속해서 가지면, 치료 섭생을 계속하고, 만약 상기 환자가 더 이상 임계치 초과의 혈중 hPG 농도를 가지지 않으면 상기 환자의 혈중 hPG 양이 임계치 초과로 오르는지 여부를 결정하기 위하여 상기 환자의 혈중 hPG 양을 주기적으로 모니터하는 단계를 포함하는 간의 또는 간 질병이 있는 환자의 질병 상태를 모니터하는 방법. - (a) 환자의 혈중 hPG 농도의 상대적인 값을 수용하는 입력 장치;
(b) 상기 환자의 혈중 hPG 농도를 기준 혈중 hPG 농도와 비교하기 위해 구성된 처리 장치, 환자의 혈중 hPG 농도 전체 또는 일부에 기초하여 환자에 대한 간 질환의 위험 정도를 출력하기 위해 구성된 처리 장치; 및
(c) 간 질환의 위험 정도를 표시하기 위해 구성된 표시 장치를 포함하는 환자의 간 또는 간의 건강 상태를 진단하는 장치. - (a) 환자의 혈중 hPG 농도를 기준 혈중 hPG 농도와 비교하고;
(b) 환자의 혈중 hPG 농도 전부 또는 일부에 기초하여 환자의 간 질환에 대한 위험 정도를 출력하기 위한 명령어를 포함하는 저장 매체이고,
환자의 간 또는 간의 건강 상태를 진단하는 데에 사용하기 위한 프로그램이 된 처리장치에 의해 수행될 수 있는 명령어를 나타내는 저장된 데이터를 가지는 컴퓨터로 읽을 수 있는 저장 매체.
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