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KR20120022760A - 담체로서 시그널 펩티드를 가지는 박테리아 독소를 포함하는 햅텐-담체 접합체와 면역원성 조성물에 있어서 이의 용도 - Google Patents

담체로서 시그널 펩티드를 가지는 박테리아 독소를 포함하는 햅텐-담체 접합체와 면역원성 조성물에 있어서 이의 용도 Download PDF

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KR20120022760A
KR20120022760A KR1020117023547A KR20117023547A KR20120022760A KR 20120022760 A KR20120022760 A KR 20120022760A KR 1020117023547 A KR1020117023547 A KR 1020117023547A KR 20117023547 A KR20117023547 A KR 20117023547A KR 20120022760 A KR20120022760 A KR 20120022760A
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nicotine
drug
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hapten
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KR1020117023547A
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윌리엄 헨리
Original Assignee
윌리엄 헨리
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Abstract

본 발명은 관심 있는 항원에 대한 면역 반응을 유도하기 위한 면역원성 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 항원-담체 접합체를 포함하는 면역원성 조성물을 제공하는데, 여기서, 상기 담체는 시그널 펩티드를 함유하는 박테리아 족소이다. 본 발명은 또한 항원-담체 접합체 예를 들어, 햅텐-담체 접합체 중 박테리아 담체에 시그널 펩티드를 부가하는 단계를 포함하는, 면역원성이 증강된 면역원성 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 이와 같은 면역원성 조성물을 사용하여 개체 내 햅텐에 대한 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다.

Description

담체로서 시그널 펩티드를 가지는 박테리아 독소를 포함하는 햅텐-담체 접합체와 면역원성 조성물에 있어서 이의 용도{HAPTEN-CARRIER CONJUGATES WITH BACTERIAL TOXINS HAVING A SIGNAL PEPTIDE AS CARRIER AND THEIR USE IN IMMUNOGENIC COMPOSITIONS}
1. 본 발명의 분야
본 발명은 관심있는 항원에 대한 면역 반응을 유도하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 항원-담체 접합체를 포함하는 면역원성 조성물을 제공하는데, 여기서, 상기 담체는 시그널 펩티드를 함유하는 박테리아 독소이다. 본 발명은 또한 면역원성이 강화된 면역원성 조성물을 제조하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 항원-담체 접합체 예를 들어, 햅텐-담체 접합체 중 박테리아 담체에 시그널 펩티드를 부가하는 단계를 포함한다. 본 발명은 또한 이와 같은 면역원성 조성물을 사용하여 개체 내 햅텐에 대한 면역 반응을 유도하는 방법도 제공한다.
2. 본 발명의 배경
박테리아 독소-햅텐 접합체는 현재 약물 중독증에 대한 치료제로서 임상 실험중에 있다. 이와 같이 수행중인 실험에 있어서, 햅텐/약물을 함유하는 면역원성 조성물 예를 들어, 코카인-박테리아 독소 접합체 또는 니코틴-박테리아 독소 접합체가 약물 중독된 개체에 투여될 때, 이 약물에 특이적인 항체가 생성된다. 예를 들어, 치료 조성물이 코카인-담체 접합체일 때, 치료를 통하여 개체의 혈류 또는 점막 조직 내 코카인을 감소시키는 항-코카인 항체 반응이 유도될 수 있으며, 이로써, 약물의 정신학적 중독성이 감소하게 된다. 니코틴-담체 접합체를 사용하는 치료를 통하여 항-니코틴 항체를 생성시킬 수 있으며, 또한 니코틴을 사용함으로써 니코틴을 사용할 때 느껴지는 만족감을 줄일 수 있다.
3. 본 발명의 개요
담체가 박테리아 독소인 약물-담체 접합체를 이용하여 실시한 초기 임상 실험에서 성공을 거둔 결과, 면역원성이 매우 큰 약물-박테리아 독소 접합체에 대한 필요성이 더욱 절실해졌다. 면역원성이 증강된 약물-박테리아 독소 접합체를 생산함에 있어서는 몇 가지 임상학적 이점이 있는데, 즉, 적은 횟수 및 소량으로 투여된다는 점, 그리고/또는 투여 간 시간 간격이 더 길어진다는 점이 그것이다. 또한, 잠재 효능이 더욱 큰 접합체의 효용성으로 인하여 이와 같은 백신의 대규모 생산이 가속화될 것이다. 본 발명은 부분적으로는, 시그널 펩티드를 함유하는 콜레라 독소 B(CTB) 담체에 접합된 니코틴을 포함하는 햅텐-담체 접합체의 면역원성이, 이 시그널 펩티드를 함유하지 않는 니코틴-CTB 접합체의 면역원성에 비하여 증강되었다는 관찰 결과를 바탕으로 한다.
본원에는 시그널 펩티드를 함유하기 때문에 면역원성이 증강된 박테리아 독소를 포함하는 면역원성 조성물이 제공된다. 하나의 구체예에서, 시그널 펩티드는 박테리아 독소의 내인성 시그널 펩티드이거나 또는 이의 단편이다. 하나의 구체예에서, 상기 시그널 펩티드는 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly를 포함한다. 다른 구체예에서, 상기 시그널 펩티드는 아미노산 서열 Gly-Tyr-Ala-His-Gly를 포함한다. 다른 구체예에서, 상기 시그널 펩티드는 아미노산 서열 Tyr-Ala-His-Gly를 포함한다. 다른 구체예에서, 상기 시그널 펩티드는 아미노산 서열 Ala-His-Gly를 포함한다. 다른 구체예에서, 상기 시그널 펩티드는 아미노산 서열 His-Gly를 포함한다. 다른 구체예에서, 상기 시그널 펩티드는 하나의 Gly 잔기를 포함한다. 본 발명의 몇몇 구체예에서, 면역원성 조성물은 상기 펩티드 중 하나 이상의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 다른 구체예에서, 면역원성 조성물은 박테리아 ADP-리보실화 내독소 서브유닛 펩티드, 콜레라 독소 B(CTB), 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli) 열 불활성 내독소(LT), 디프테리아 독소, 파상풍 변독소, 백일해 독소 및 사상 헤마글루티닌, 쉬가 독소 및 슈도모나스 외독소를 포함하는 군으로부터 선택되는 시그널 펩티드-함유 박테리아 독소를 포함한다. 기타 유용한 박테리아 독소 담체로서는 점막 반응을 강화하는 능력을 가지는 임의의 박테리아 독소 예를 들어, 박테리아 독소의 LTB 군 중 임의의 독소를 포함한다.
몇몇 구체예에서, 박테리아 독소 담체는 자체의 내인성 시그널 펩티드를 함유한다. 몇몇 구체예에서, 본 발명의 박테리아 독소 담체 예를 들어, CTB 또는 전술한 박테리아 독소 중 임의의 것은 이종 시그널 펩티드를 함유한다.
본 발명은 항원과 담체를 포함하는 면역원성 조성물을 제공하는데, 여기서, 상기 담체는 시그널 펩티드-함유 박테리아 독소이고, 상기 항원은 면역 반응을 일으키기를 원하는 임의의 분자이다. 본 발명의 하나의 구체예에서, 항원은 담체에 접합된다. 몇몇 구체예에서, 항원은 햅텐이다. 본 발명은 부분적으로, 시그널 펩티드-함유 박테리아 독소 담체의 접합된 햅텐에 대한 면역 반응이, 시그널 펩티드를 함유하지 않는 박테리아 독소 담체보다 증가한다는 관찰 결과를 바탕으로 한다. 몇몇 구체예에서, 상기 햅텐은 시그널 펩티드가 결여되었거나, 또는 이 시그널 펩티드가 불안정한 박테리아 독소와 함께 접합체 중에 존재할 때 면역원성인 것으로 알려져 있는데, 여기서, 면역성은 증강된 것이 바람직하다.
본 발명의 몇몇 구체예에서, 시그널 펩티드를 함유하는 박테리아 독소에 접합된 햅텐은 니코틴이거나 또는 이 니코틴의 유도체이다. 몇몇 구체예에서, 상기 햅텐은 코카인이거나 다른 부가 약물이다. 몇몇 구체예에서, 상기 햅텐은 병원균의 항원이다. 몇몇 구체예에서, 항원-박테리아 독소 접합체 중 항원은 햅텐이 아니다.
본 발명은 또한 전술한 면역원성 조성물을 사용하여 개체 내 햅텐에 대한 면역성을 유도하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 시그널 펩티드를 함유하는 박테리아 독소 담체를 포함하는 면역원성 조성물을 생산하는 방법도 제공한다. 몇몇 구체예에서, 본 발명의 방법은 박테리아 독소가 시그널 펩티드를 함유하는 세포 내에서 이 박테리아 독소를 발현시키는 단계를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 박테리아 독소는 CTB이고, 이 독소가 생산되는 세포는 비브리오 콜레라에(Vibrio cholerae) 213 균주이다.
4. 도면의 간단한 설명
도 1은 rCTB(재조합 콜레라 독소 B)의 아미노산 서열을 나타내는 것이다.
도 2는 브이.콜레라에 213 및 401 내 2개의 rCTB 발현 시스템을 비교한 것이다. 213 균주 내에서는, 길이가 7 아미노산 이하인 시그널 서열을 함유하는 형태의 rCTB가 생산되는 것으로 확인된다. rCTB가 401 균주 내에서 생산될 때에는 안정한 시그널 서열은 확인되지 않는다.
도 3a는 본 발명을 수행하는데 사용되기 적당한 화합물 및 접합체에 대한 이해를 돕기 위하여 확인한, 햅텐-담체 접합체의 임의로 표지된 형성 가능 "분지(branch)"를 나타내는 것이다. 도 3b는 본 발명을 실현하는데 사용되기 적당한 화합물 및 접합체에 대한 이해를 돕기 위하여 확인한, 햅텐-담체 접합체의 임의로 표지된 형성 가능 "분지(branch)"를 나타내는 것으로서, 여기서, Q'는 개질된 T-세포 에피토프-함유 담체 예를 들어, 개질된 단백질 담체이다.
도 4는 본 발명의 면역원성 조성물의 제조에 유용한 니코틴 및 이의 몇몇 유도체 그리고 대사 물질을 나타내는 것이다.
5. 본 발명의 상세한 설명
본 발명의 방법 더욱 구체적으로는, 본원에 제시된 기술과 조성물을 사용할 경우, 당업자는 임의의 선택된 시그널 펩티드-함유 박테리아 독소 담체와 임의의 선택된 항원 예를 들어, 햅텐을 연결시켜, 본 발명의 항원-담체 접합체를 생산할 수 있다. 임의의 수의 담체와 항원 및/또는 햅텐은 본 발명의 단일 접합체 분자 중에 존재할 수 있다.
5.1 본 발명의 면역원성 조성물에 사용되는 담체
본 발명은 항원-담체 접합체 예를 들어, 햅텐-담체 접합체를 포함하는 면역원성 조성물을 제공하는데, 여기서, 상기 담체는 시그널 펩티드를 함유하는 박테리아 독소이다. 몇몇 구체예에서, 박테리아 독소는 자체의 내인성 시그널 펩티드를 함유한다. 몇몇 구체예에서, 박테리아 독소는 시그널 펩티드를 함유하도록 조작되었다. 몇몇 구체예에서, 박테리아 독소는 자체의 시그널 펩티드를 보유하는데, 이 펩티드는 예를 들어, 박테리아 독소로부터 분리되어 있지 않다.
본 발명에 있어서, 면역원성 조성물은 항원 예를 들어, 햅텐과, 시그널 펩티드-함유 박테리아 독소인 담체를 포함한다. 본 발명의 하나의 구체예에서, 항원은 담체에 접합되어 있다. 몇몇 구체예에서, 박테리아 독소는 그람-네거티브 박테리아로부터 유래한다. 몇몇 구체예에서, 상기 독소는 그람-포지티브 박테리아로부터 유래한다. 몇몇 구체예에서, 상기 그람-네거티브 박테리아는 에스케리치아 콜라이이다. 몇몇 구체예에서, 박테리아는 그람-포지티브 바실러스(Bacillus), 스타필로코커스(Staphylococcus), 스트렙토코커스(Streptococcus), 스트렙토마이세스(Streptomyces) 또는 몰리큐티스(Mollicutes)(마이코플라스마(Mycoplasma))이다. 몇몇 구체예에서, 상기 담체는 박테리아 내독소이다. 몇몇 구체예에서, 상기 담체는 독성이 감소하도록 개질된 박테리아 독소이다. 본 발명에 따라서 사용될 박테리아 독소로서는 콜레라 독소, 바람직하게는, CTB(재조합 CTB(rCTB) 포함), 에스케리치아 콜라이 독소 예를 들어, 열 불활성 장내 독소(LT), 열-안정성 외독소(ST), 세포 독성 괴사 인자(CNF), 세포 치사 팽창 독소(CLDT) 또는 장 응집성 이.콜라이 열-안정성 독소(EAST), 디프테리아 독소(Dtx), 파상풍 독소, 쉬가 독소, 보툴리누스 독소, 스타필로코커스 독소 예를 들어, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 알파 독소, 엑스폴리아틴 B 또는 루코시딘, 스타필로코커스 독소 충격 증후군 독소(TSST-1), 스타필로코커스 장내 독소 또는 박리성 독소, 스트렙토코커스 독소 예를 들어, 스크렙토코커스 뉴모니아에(Streptococcus pneumoniae)의 뉴모리신(pneumolysin), 스트렙토리신 O(streptolysin O), 발적 독소(스트렙토코커스 발열 외독소(SPE)) 및 스트렙토코커스 파이로제네스(Streptococcus pyrogenes)의 기타 발열 독소, 클로스트리디아 독소 예를 들어, 클로스트리듐 디피실리(Clostridium difficile)의 독소 A/독소 B, 아이오타(Iota) 군, C2 군(독소 C 및 D), 또는 C3 독소, 또는 클로스트리듐 보툴리늄(Clostridium botulinum)의 신경독 A?G, 알파 독소, 베타-2 독소 또는 클로스트리듐 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)의 퍼프린지오리신 O(퍼프린젠스 장내 독소), 박테로이데스 프라질리스(Bacteroides fragilis)의 장내 독소, 애어로모나스 하이드로필리아(Aeromonas hydrophilia)/애어로리신, 보르다텔라 퍼투시스(Bordatella pertussis)의 사상 헤마글루티닌(FHA), 클로스트리듐 또는 바실러스 2 성분 독소(binary toxin), 스트렙토키나제, 보르다텔라 퍼투시스의 아데닐레이트 사이클라제 독소(퍼투시스 AC; "퍼투시스 독소") 또는 이의 피부 괴사 독소, 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis) 부종 인자(EF), 탄저균 독소(치사 인자(LF)), 에스케리치아 콜라이의 헤모리신, 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)의 리스테리오리신 및 슈도모나스 외독소(외독소 A)를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 몇몇 구체예에서, 박테리아 ADP-리보실화 외독소 예를 들어, 콜레라 독소, 디프테리아 독소, 백일해 독소, 슈도모나스 외독소 A 또는 이.콜라이 LT를 사용하는 것이 바람직하다. 몇몇 구체예에서, 박테리아 ADP-리보실화 외독소의 촉매 서브유닛(일반적으로, "A" 서브유닛)이 담체로서 사용된다. 다른 구체예에서, 박테리아 ADP-리보실화 외독소의 수용체-결합 서브유닛(일반적으로, "B" 서브유닛)이 바람직하다. 또 다른 구체예에서, 두 개의 서브유닛 또는 이의 단편 또는 단편들이 담체로 사용된다. 몇몇 구체예에서, 박테리아 공극-형성 독소 예를 들어, 퍼프린지오리신 O, 헤모리신, 리스테리오리신, 탄저병 EF, 알파 독소, 뉴모리신, 스트렙토리신 O, 또는 루코시딘이 사용된다. 몇몇 구체예에서, 상기 담체는 발열성 외독소 또는 이의 개질된 형태의 것 예를 들어, 스타필로코커스 장내 독소 항원형 A?E, G 및 H, A군 스트렙토코커스 발열성 외독소 A?C, 스타필로코커스 박탈성 독소, 그리고 스타필로코커스 TSST-1이다. 특히 유용한 박테리아 독소 담체로서는 점막 면역 반응을 증강시키는 기능이 있는 임의의 박테리아 독소 예를 들어, 박테리아 독소의 이.콜라이 열-불안정성 장내 독소(LTB) 군 내 CBT 또는 임의의 독소를 포함한다.
본 발명의 몇몇 구체예에서, 박테리아 독소 담체는 자체의 내인성 시그널 펩티드 즉, 단백질이 번역될 때 박테리아 독소 상에 존재하는 시그널 펩티드 또는 이의 단편을 함유한다. 다른 구체예에서, 본 발명의 박테리아 독소 담체는 독소가 유래하는 박테리아와 동일한 박테리아 내에 존재하는 시그널 펩티드를 함유하지만, 상기 시그널 펩티드는 일반적으로 상기 박테리아 내 상이한 단백질에 존재하는 것이다. 몇몇 구체예에서, 일반적으로 시그널 펩티드를 가지지 않으며, 이 시그널 펩티드가 부가되는 독소 담체 또는 이의 면역원성 단편이 사용된다. 이와 같은 하나의 구체예에서, 파상풍 독소는 시그널 펩티드를 함유하도록 조작된다.
몇몇 구체예에서, 본 발명의 박테리아 독소 담체 예를 들어, CTB 또는 전술한 박테리아 독소 중 임의의 것은 이종 시그널 펩티드를 함유한다. 몇몇 구체예에서, 상기 이종 시그널 펩티드는 분비 리더 서열 예를 들어, 당 업자에게 알려진 분비 리더 서열이며, 그 예로서는 조직 플라스미노겐 활성 인자(tpa) 리더 서열, 담배 발병-관련 1b(PR1b) 시그널 펩티드, 또는 당 업계에 공지된 기타 임의의 시그널 펩티드 또는 이의 단편을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 상기 시그널 펩티드는 박테리아 시그널 펩티드이다. 본 발명을 수행하는데 사용되는 박테리아 시그널 펩티드는 CTB 시그널 펩티드(본원에 개시된 단편 예를 들어, 수탁 번호 P01556), 이.콜라이 열 불안정성 장내 독소 서브유닛 B 시그널 펩티드(예를 들어, 수탁 번호 P13811), 디프테리아 독소 시그널 펩티드(예를 들어, 수탁 번호 P00588), 백일해 독소 시그널 펩티드(예를 들어, 미국 특허 제4,883,761호 참조; 수탁 번호 P04977 및 P04978), 쉬가 독소 시그널 펩티드(예를 들어, 수탁 번호 Q9FBI2 및 Q7BQ98), 슈도모나스 외독소 A(예를 들어, 수탁 번호 P11439), FHA 독소의 긴 시그널 펩티드, TSST-1 시그널 펩티드, 스트렙토코커스 독소 시그널 펩티드, 스타필로코커스 단백질 A 시그널 펩티드, 클로스트리듐 퍼프린젠스 알파 독소 시그널 펩티드, 클로스트리듐 퍼프린젠스 베타-2 독소 시그널 펩티드(예를 들어, 미국 특허 제7,144,998호), 클로스트리듐 및 바실러스 2 원성 독소의 A 및 B 서브유닛의 시그널 펩티드 등을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 본 발명에 사용되는 예시적인 박테리아 독소 시그널 펩티드의 비 제한적인 목록에 관하여는 이하 표 1을 참조하시오. 전장 시그널 펩티드 서열을 나타내었는데; 본 발명을 수행함에 있어서는 길이가 10 아미노산 이하, 또는 5 아미노산 이하인 단편 예를 들어, C-말단 단편을 사용할 수 있다. 시그널 펩티드 또는 이의 단편은 길이 1?3 아미노산, 길이 3?5 아미노산, 길이 5?10 아미노산, 바람직하게는 길이 7 아미노산, 길이 10?15 아미노산, 길이 15?20 아미노산, 길이 20?25 아미노산, 길이 25?30 아미노산, 길이 30?35 아미노산, 길이 35?40 아미노산, 또는 길이 40?50 아미노산 또는 그 이상의 아미노산일 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명에 사용된 시그널 펩티드 또는 이의 단편과 천연 생성 시그널 펩티드의 서열 상동성은 90% 이상, 85% 이상, 80% 이상, 75% 이상, 70% 이상, 65% 이상 또는 60% 이상이다.
몇몇 구체예에서, CTB 시그널 펩티드 또는 이의 단편 예를 들어, 이하 섹션 5.1.1.에 기술된 것은 CTB 이외의 박테리아 독소 담체 상에 존재하는 이종 시그널 펩티드이다.
본원을 실시함에 있어서, 시그널 펩티드는 단백질의 번역 후 운송 또는 번역시 운송을 유도하는 짧은 길이의[일반적으로, 길이 3?60 아미노산이되, 만일 단편이 사용되면 이보다 더욱 짧을 수 있으며, FHA 중에 포함되는 경우에는 더욱 길 수 있음] 펩티드 사슬이다. 시그널 펩티드는 또한, 시그널 및 시그널 서열을 표적화하거나, 펩티드를 운반하거나, 또는 시그널을 국소화하는 것으로 알려져 있다. 일반적으로, 상기 시그널 펩티드의 아미노산 서열은 단백질을 진핵 생물의 소포체와 원핵 생물의 세포막으로 유도한다. 예를 들어, 다수의 박테리아 외독소는 소수의(1?3개) 하전된 아미노산과 (14?20개의) 소수성 아미노산 확장 부로 이루어진 아미노 말단 시그널 펩티드로 합성된다. 시그널 펩티드는 번역 시 세포질 막과 결합하여 이 막에 삽입되므로, 상기 펩티드 합성시에 독소가 분비되는 것이다. 일반적으로, 시그널 펩티드는, 독소가 주변 세포질에 방출될 때 절단된다. 대안적으로, 독소는 세포질 내에서 합성된 후, 리더 서열과 결합하여 막을 통과하게 된다. 이러한 방식으로 작용을 하는 시그널 펩티드 또는 다른 기작을 통하여 작용을 하는 시그널 펩티드가 본 발명에 사용되는 것으로 생각된다.
본 발명에 사용되는 박테리아 독소 시그널 펩티드의 예
박테리아 독소
단백질 		수탁 번호 시그널 펩티드 아미노산 서열
(단백질 내 아미노산 위치)
CBT P01556 MIKLKFGVFF TVLLSSAYAH G (1?21)
이.콜라이
LT-B		 P13811 MNKVKFYVLF TALLSSLCAH G (1?21)
디프테리아
독소		 P00588 MLVRGYVVSR KLFASILIGA LLGIGAPPSA HA (1?32)
백일해 독소
-A		 P04977 MRCTRAIRQT ARTGWLTWLA ILAVTAPVTS PAWA (1?34)
백일해 독소
-B		 P04978 MPIDRKTLCH LLSVLPLALL GSHVARA (1?27)
쉬가 독소-A Q9FBI2 MKIIIFRVLT FFFVIFSVNV VA (1?22)
쉬가 독소-B Q7BQ98 MKKTLLIAAS LSFFSASALA (1?20)
슈도모나스
외독소 A		 P11439 MHLTPHWIPL VASLGLLAGG SFASA (1?25)
당 업계에 공지된 임의의 박테리아 독소 담체는 본 발명에 따라서 사용되는 시그널 펩티드를 함유하도록 개질될 수 있다. 박테리아 독소에 시그널 펩티드 서열을 부가하는 표준적인 기술로서는 재조합 DNA 기술 또는 DNA, RNA 또는 단백질 수준에서 단백질을 조작할 수 있는 기타 임의의 기술을 포함한다. 시그널 펩티드의 안정성을 증강하기 위하여, 당 업자는 시그널 펩티드가 담체에 대해 내인성인지, 아니면 재조합 DNA 기술에 의해 부가되는지 여부에 따라서, 예를 들어, 담배 식물 내에서 이식 유전자를 발현시키고, 시그널 펩티드-보유 박테리아 독소를 분리하는 최적의 시스템을 선택함으로써, 바람직하게는, 대안적 시스템 예를 들어, 포유 동물 세포, 곤충 세포(예를 들어, 바큘로바이러스 발현 시스템 사용), 박테리아 세포(CTB 시그널 펩티드용), 비브리오 콜레라에 균주 213 또는 식물 세포 내에서, 선택한 박테리아 독소 담체를 생산할 수 있다. 시그널 펩티드-보유 박테리아 독소의 생산 및 분리를 촉진하는 기타 방법으로서는, 프로테아제 억제제 예를 들어, 시그널 펩티드 펩티다제 억제제가 전좌 또는 전좌 후 가공 과정에 결함이 있는 기구를 가지는 시스템 내 단백질 발현 중 및/또는 이후에 부가되는 시스템 내 발현 방법을 포함한다. 시그널 펩티드-보유 박테리아 독소가 축적되고/축적되거나 안정성이 강화되도록 최적화된 임의의 기타 시스템도 본 발명에 따라서 사용될 수 있다.
몇몇 구체예에서, 본 발명의 박테리아 독소 담체는 개체의 T 세포를 자극하여, 햅텐 부를 포함하는 전체 접합체의 일부에 대해서 B 세포가 지속적으로 항체를 생산하는 것을 개시 및 유지시키도록 도와줄 수 있다. 그러므로, 담체가 면역원성이라는 이유로 선택하게 되면, 다양한 환자 집단 내 백신에 대한 강력한 면역 반응이 일어날 것으로 기대된다. 바람직한 구체예에서, 햅텐과 같은 담체는 백신에 대한 강력한 면역 반응을 유도할 수 있을 정도로 충분히 외래성이어야 한다. 필수적이지는 않지만 보존적인 접근 방법으로서는, 대부분의 환자들이 노출되지 않아서담 체-유도성 에피토프 억제 현상을 회피하게 된 담체를 사용하는 방법이 있다. 하지만, 담체-유도성 에피토프 억제 현상이 일어난다 하여도, 이 현상은 투여량에 변화를 주고(DiJohn외 다수(1989) Lancet 1415-1418), 예를 들어, CTB를 사용하는 것[Stok외 다수(1994) Vaccine 12:521-526]을 포함하여 기타 프로토콜에 변화를 줌으로써[Etlinger외 다수(1990) Science 249:423-425] 극복할 수 있기 때문에 관리 가능하다. 환자가 이미 면역력이 생긴 상태에 있을 때 얻은 담체 단백질을 이용하여 제조된 백신이 시판중에 있다. 뿐만 아니라, 다수의 리신을 함유하는 담체는 본 발명의 방법에 따른 접합에 특히 적당하다. 그러므로, 임의의 구체예에서, 본 발명의 박테리아 독소 담체는 자체의 면역원성이 증강되도록 개질된다.
5.1.1. 담체로서의 CTB
콜레라 독소는 비브리오 콜레라에에 의해 생산된 장내 독소로서, 5개의 동일한 B 서브유닛으로 이루어져 있으며, 이 경우, 각각의 서브유닛의 분자량은 11.6KDa(103 아미노산)이고, A 서브유닛 하나의 분자량은 27.2KDa(230 아미노산)이다[Finkelstein(1988) Immunochem. Mol.Gen.Anal.Bac.Path.85-102]. 결합 서브유닛인 CTB는 세포 표면상 강글리오시드 GM1에 결합한다[Sixma외 다수(1991) Nature 351:371-375; Orlandi외 다수(1993) J.Biol.Chem. 268:17038-17044]. CTA는 세포에 도입되어 G 단백질의 ADP-리보실화를 촉진하는 효소 서브유닛으로서, 아데닐레이트 사이클라제를 구성적으로 활성화하는 것이다[Finkelstein(1988) Immunochem.Mol.Gen.Anal.Bac.Path. pp. 85-102]. A 서브유닛이 존재하지 않을 때, 콜레라 독소는 독성을 갖지 않는다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, CTB는 박테리아 독소 담체이다. CTB는 강력한 전신 및 점막 항체 반응을 자극할 수 있는, 면역원성이 큰 단백질 서브유닛이다[Lycke(1992) J.Immunol.150:4810-4821; Holmgren외 다수(1994) Am.J.Trop.Med.IIyg.50:42-54; Silbart외 다수(1998)J.Immun.Meth. 109:103-112; Katz외 다수(1993)Infection Immun.61:1964-1971]. 이와 같이 조합된 IgA 및 IgG 항-햅텐 반응은, 비강 내 투여 또는 흡입에 의해 투여된 코카인 또는 기타 물질에 대해 면역성이 생기는 것을 차단하고, 입과 폐로 흡수되는 니코틴 또는 기타 물질을 차단하는데 매우 바람직하다. 뿐만 아니라, CTB는 이미 콜레라 백신에 대한 임상 실험에서 사람에게 안전한 것으로 확인되었다[Holmgren외 다수, 상동; Jertborn외 다수(1994) Vaccine 12:1078-1082; "The Jordan Report, Accelerated Development of Vaccine" 1993, NIAID, 1993]. 본 발명을 통해서, CTB를 포함하는 햅텐-담체 접합체는 CTB가 시그널 펩티드를 함유할 때보다 면역원성이 더욱 크다는 것을 알게 되었다.
본 발명의 하나의 구체예에서, 박테리아 독소 담체는 CTB이고, 이것의 시그널 펩티드는 자체의 내생 시그널 펩티드 또는 이의 단편이다. 하나의 구체예에서, CTB 시그널 펩티드는 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly를 포함한다. 다른 구체예에서, 시그널 펩티드는 아미노산 서열 Gly-Tyr-Ala-His-Gly를 포함한다. 다른 구체예에서, 시그널 펩티드는 아미노산 서열 Tyr-Ala-His-Gly를 포함한다. 다른 구체예에서, 시그널 펩티드는 아미노산 서열 Ala-His-Gly를 포함한다. 다른 구체예에서, 시그널 펩티드는 아미노산 서열 His-Gly를 포함한다. 다른 구체예에서, 시그널 펩티드는 하나의 Gly 잔기를 포함한다. 본 발명의 몇몇 구체예에서, 면역원성 조성물은 이와 같은 펩티드 중 하나 이상의 혼합물을 포함한다.
임의의 구체예에서, CTB는 이종 시그널 펩티드를 보유한다.
5.1.1.1 CTB 제조
독소-담체 접합체에 통합시킬 담체로서 CTB를 만들어 사용하는 방법이 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공보 2005-0124061(2005년 6월 9일); 미국 특허 제5,876,727호(1999년 3월 2일); 및 미국 특허 제5,760,184호[상기 문헌들은 각각 본원에 그 자체로서 참고용으로 인용됨]를 참조하시오. 이와 같은 방법에 의하여 제조된 CTB 및 본원에 제시된 방법은, 본원에 개시된 바와 같은 시그널 펩티드를 함유하도록 개질할 수 있다.
바람직한 구체예에서, CTB는 비브리오 콜레라에 균주 213에서 생산된다. 예를 들어, 본원에 그 자체로서 참고용으로 인용되어 있는 국제 특허 출원 공보 WO 2005/042749(2005년 5월 12일)를 참조하시오.
다른 구체예에서, CTB는 이.콜라이 내에서 생산된다[예를 들어, 본원에 그 자체로서 참고용으로 인용되어 있는 미국 특허 출원 공보 2005-0124061을 참조하시오]. 시그널 펩티드 또는 이의 단편을 함유하는 CTB 형태의 분리를 촉진하는 방법이 바람직하다. CTB 5량체를 높은 수준으로 재조합 발현하여 생산하는 것에 관하여 개시되어 있다[L'hoir외 다수 (1990) Gene 89:47-52; Slos외 다수 (1994) Protein Exp. Purif. 5:518-526].
천연 CTB가 시판중에 있으며, 이는 당 업자에게 알려진 단백질 조작에 관한 표준적인 기술을 이용하여 시그널 펩티드를 가지도록 개질할 수 있다. 재조합 CTB는 문헌에 기술된 바와 같이 강글리오시드 GM1 컬럼 친화성 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다[Tayot외 다수(1981) Eur. J. Biochem. 113:249-258]. 재조합 CTB 5량체는 ELISA에서 강글리오시드 GM1에 결합하여, 웨스턴 블럿 및 ELISA에서 5량체-특이 항체와 반응한다. 재조합 CTB는 또한 기타 공급처 예를 들어, SBL 박신 아베(SBL Vaccine AB)로부터 시판되고 있다.
CTB의 5량체 구조는 강글리오시드 GM1에 결합하기 바람직할 수 있다. 5량체는 샘플이 끓지 않는 한 SDS에 대해 안정하여, SDS-PAGE에 의해 5량체화를 평가할 수 있다. 천연 CTB는 5량체로서, SDS-PAGE 상에서 변성 단량체 CTB와 용이하게 구별된다. 5량체 구조는 pH 4?9에서 유지되는데, 이 pH 범위는 다양한 접합 화학 반응을 촉진한다. 처음에 발현된 재조합 CTB는 단량체이다. 5량체 CTB를 얻는 한 가지 방법으로서는, 적당히 폴딩된 5량체 CTB를 발현하도록 적응시키는 것이 있다. 세포질 발현을 통하여 단량체 CTB가 높은 수준으로 다량 생성될 수 있다는 사실을 알 수 있었다. 당업자는 단량체 CTB를 5량체 CTB로 폴딩하는 방법을 알고 있다[예를 들어, L'hoir외 다수(1990) Gene 89:47-52]. 단량체 CTB를 리폴딩하여 5량체 CTB를 제조하는 대안으로서는, 주변 세포질 발현을 통해 ELISA에 의해 GM1-강글리오시드와 결합할 수 있는 5량체 재조합 CTB를 얻는 방법이 있다. 당 업자는 5량체 재조합 CTB를 생산하기 위한 몇몇 접근 방법을 찾을 수 있는데, 예를 들어, 리더를 사용하는 주변 세포질 발현 방법[Slos외 다수, 상동; Sandez외 다수 (1989) Proc. Nat'l. Acad. Sci. 86:481-485; Lebens외 다수 (1993) BioTechnol. 11:1574-1578] 또는 번역 후 리폴딩법[L'hoir외 다수, 상동; Jobling외 다수 (1991) Mol. Microbiol. 5:1755-1767]을 예로 들 수 있다.
재조합 CTB의 양은, 일단 최적화되어 다량의 발효조에서 생산된, 발현 및 정제된 양이다. 재조합 단백질을 발현 및 정제하는 방법은 당 업계에 알려져 있다[예를 들어, 미국 특허 출원 제07/807,528호]. 예를 들어, 코카인 또는 니코틴 유도체에 접합된 CTB는 친화성 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있으며[Tayot외 다수 (1981) Eur. J. Biochem. 113:249-258], 이 접합체는 이후 추가로 정제될 수 있다. 정제된 CTB와, 생성된 접합체는 CTB의 5량체 구조를 정제 및 유지하기 위해 분석된다. 분석 기술로서는 SDS-PAGE, 비 변형 PAGE(native PAGE), 겔 여과 크로마토그래피, 웨스턴 블럿팅, 직접 및 GM1-포착 ELISA, 그리고 바이오틴화된 CTB와의 경쟁적 ELISA를 포함한다. 햅텐화 수준은 질량 분석법, 역상 HPLC 및 햅텐의 존재로 인한 UV 흡광도 증가 분석법에 의해 측정된다. 본 발명의 접합체의 가용성과 안정성은 다량 제조에 최적화된다. 이와 같은 분석법 중 일부에 관한 자세한 설명은 실시예에 기술되어 있다.
비록 CTB의 5량체 구조가 본 발명을 수행함에 있어 바람직한 담체이고, GM1 결합이 이 CTB의 5량체 형태가 존재한다는 것을 확인하는데 효과적인 검정법이긴 하지만, 본 발명은 CTB의 5량체 형태를 사용하는 것에 국한되는 것은 아니다. 본 발명에 사용하도록 조작될 수 있는 CTB의 다른 형태(예를 들어, 단량체 또는 이량체 등)가 고려된다. 만일 CTB의 5량체 형태 이외의 것을 담체로 사용하면, 당 업자는 필요한 담체의 존재와 활성을 측정하는데 적당한 검정법을 사용하게 될 것인데, 예를 들어, CTB의 5량체 형태의 존재 여부를 확인하는데에는 GM1 결합법을 사용하게 될 것이다.
담체로서 사용하기 유용한 또 다른 CTB는, CTB에 대한 점막 반응이 개선된 콜레라 독소이다. 효소 활성인 A 서브유닛 애쥬반트는 활성을 증강시키는 것으로 보고된 바 있다[Liang외 다수 (1988) J. Immunol. 141:1495-1501 ; Wilson외 다수(1993) Vaccine 11 : 113-118; Snider외 다수(1994) J. Immunol. 153:647].
5.2. 본 발명의 접합에 사용되는 항원
본원에 개시된 조성물과 방법은 다양한 항원 예를 들어, 질병이 발생한 세포나 조직, 또는 사람이나 동물의 병원체, 또는 약물 남용으로 얻어지거나 또는 이로 인해 생성된 항원에 대한 면역 반응을 유도하는데 유용하다. 본원에 사용된 항원 그자체는 면역원성일 수 있거나 아니면 면역원성일 수 없다. 그 자체가 면역원성이고/면역원성이거나 통상의 햅텐보다 크기가 더욱 큰 항원도 본 발명의 접합에 사용할 것이 고려되고 있는데, 그 이유는 담체에 시그널 펩티드를 부가하면 항원에 대한 면역 반응을 증가시키게 될 것이기 때문이다.
본원에 사용된 항원은 또한 면역 반응을 유발시킬 본 발명의 접합체에 대한 표적을 포함한다. 예를 들어, 항원-담체 접합체 중 항원은 간염 바이러스 에피토프일 수 있으며, 이 접합체가 면역 반응을 유발시킬 항원은 간염 바이러스 자체이다.
본 발명을 위해서, "병원균"이라는 용어는, 질병이나 병태의 특이 감염 인자를 의미하는 것과 같이 광범위하게 사용되는 것으로서, 면역 반응을 유도하는 분자의 공급원을 제공하는 임의의 제제를 포함한다. 그러므로, 병원균으로서는 바이러스, 박테리아, 진균, 원생 동물, 기생체 및 암 세포 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 통상적으로, 면역 반응은 병원균에 의해 생성되는 하나 이상의 펩티드 또는 탄수화물 항원에 의해 유도된다. 적당한 항원을 확인하는 방법과, 이러한 분자들을 생성 및 제조하는 방법, 그리고 이후, 적당한 투여량을 찾는 방법, 적당한 면역원성을 검정하는 방법 및 이러한 항원으로 치료하는 방법에 관하여는 당 업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Plotkin외 다수(1994) Vaccines, 2nd Edition, W. B. Saunders, Philadelphia, Pa]을 참조하시오. 척추 동물 개체 구체적으로, 사람 및 사람을 제외한 포유동물을 백신화하는데 사용될 수 있는 항원의 공급원에 대한 비 제한적인 예로서는 바이러스, 박테리아, 진균 및 기타 병원성 유기체를 포함한다.
바이러스 항원으로서는 간염 바이러스 군 예를 들어, A형 간염 바이러스(HAV), B형 간염 바이러스(HBV), C형 간염 바이러스(HCV), 델타 간염 바이러스(HDV), E형 간염 바이러스(HEV) 및 G형 간염 바이러스(HGV)로부터 얻어지거나 또는 유래하는 항원을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 예를 들어, 국제 특허 출원 공보 WO 89/04669; WO 90/11089; 및 WO 90/14436을 참조하시오. 상기 HCV 게놈은 E1 및 E2를 포함하는 몇몇 바이러스 단백질을 암호화한다. 예를 들어, 문헌[Houghton외 다수(1991) Hepatology 14:381-388]을 참조하시오. 이와 같은 단백질을 암호화하는 서열을 함유하는 게놈 단편과 이의 항원 단편도 본 발명의 방법에 사용될 것이다. 이와 유사하게, HDV로부터 유래하는 델타-항원 암호화 서열에 관하여도 알려져 있다[예를 들어, 미국 특허 제5,378,814호 참조].
유사한 방식으로, 헤르페스 바이러스 군으로부터 유래하는 다양한 단백질 예를 들어, 제1형 및 제2형 헤르페스 심플렉스 바이러스(herpes simplex virus)(HSV)로부터 유래하는 단백질 예를 들어, HSV-1 및 HSV-2 당단백질 gB, gD 및 gH; 바리셀라 조스터 바이러스(varicella zoster virus)(VZV), 엡스타인-바 바이러스(Epstein-Barr virus)(EBV) 및 사이토메갈로바이러스(CMV)로부터 유래하는 항원 예를 들어, CMV gB 및 gH; 그리고 기타 사람 헤르페스 바이러스로부터 유래하는 항원 예를 들어, HHV6 및 HHV7을 본 발명에서 항원으로서 사용할 수 있다[예를 들어, Chee외 다수(1990) Cytomegaloviruses (J. K. McDougall, ed., Springer- Verlag, pp. 125-169; McGeoch외 다수(1988) J. Gen. Virol. 69: 1531-1574; 미국 특허 제5,171,568호; Baer외 다수(1984) Nature 310:207-211; 및 Davison외 다수 (1986) J. Gen. Virol. 67:1759-1816].
인간 면역 결핍 바이러스(HIV) 항원 예를 들어, HIV-1 및 HIV-2 분리 균주 다량체에 대한 gp120 분자 예를 들어, HIV의 다양한 유전 서브타입의 일원도 당 업계에 공지 및 보고되어 있으며[예를 들어, Myers외 다수, Los Alamos Database, Los Alamos National Laboratory, Los Alamos, N. Mex. (1992); 및 Modrow외 다수(1987) J. Virol. 61 :570-578], 이와 같은 분리 균주 중 임의의 것으로부터 유래하거나 얻어진 항원-함유 게놈 단편도 본 발명에 사용될 것이다. 뿐만 아니라, 다양한 HIV 분리 균주 중 임의의 것으로부터 유래하거나 얻어진 기타 면역원성 단백질 예를 들어, 다양한 외피 단백질 예를 들어, gp160 및 gp41, gag 항원 예를 들어, p24gag 및 p55gag 중 하나 이상을 포함하는 단편과, HIV의 pol, env, tat, vif, rev, nef, vpr, vpu 및 LTR 부위로부터 유래하는 단백질도 본원에서 사용될 것이다.
기타 바이러스로부터 유래하거나 얻어진 항원 예를 들어, 피코나비리대(Picornaviridae) 군의 일원(예를 들어, 폴리오바이러스(poliovirus) 및 리노바이러스(rhinovirus) 등); 칼리시비리대(Caliciviridae) 군의 일원; 토가비리대(Togaviridae)의 일원(예를 들어, 루벨라 바이러스(rubella virus), 뎅기 바이러스(dengue virus) 등); 플라비비리대(Flaviviridae) 군의 일원; 코로나비리대(Coronaviridae) 군의 일원; 레오비리대(Reoviridae) 군의 일원(예를 들어, 로타바이러스(rotavirus) 등); 비르나비리대(Birnaviridae) 군의 일원; 라비도비리대(Rhabdoviridae) 군의 일원(예를 들어, 라비스 바이러스(rabies virus) 등); 오르토믹소비리대(Orthomyxoviridae) 군의 일원(예를 들어, A, B 및 C형 인플루엔자 바이러스 등); 필로비리대(Filoviridae) 군의 일원; 파라믹소비리대(Paramyxoviridae) 군의 일원(예를 들어, 볼거리 바이러스, 홍역 바이러스, 호흡기 세포 융합 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스 등); 버니아비리대(Bunyaviridae) 군의 일원; 아레나비리대(Arenaviridae) 군의 일원; 레트로비리대(Retroviridae) 군의 일원(예를 들어, HTLV-I; HTLV-II; HIV-I (HTLV-III, LAV, ARV, hTLR 등으로도 알려짐))[예를 들어, 분리 균주 HIV IIIb, HIV SF2, HIV LAV, HIV LAI, HIV MN); HIV-I CM235, HIV-I US4; HIV-2 등으로부터 유래하는 항원(이에 한정되는 것은 아님)]; 원숭이 면역 결핍 바이러스(SIV); 파필로마바이러스(Papillomavirus), 진드기 매개 뇌염 바이러스 등으로부터 유래하는 바이러스(이에 한정되는 것은 아님)도 본원에서 사용할 것이다. 상기 바이러스 및 기타 바이러스에 관한 설명은 예를 들어, 문헌[Virology, 3rd Edition (W. K. Joklik ed. 1988); Fundamental Virology, 2nd Edition (B. N. Fields and D. M. Knipe, eds. 1991)]을 참조하시오.
몇몇 구체예에서, 선택된 바이러스 항원은 통상적으로 점막 표면을 통해 체 내로 들어가서 사람의 질병을 일으키거나 이 질병들과 연관되어 있는 것으로 알려진 바이러스 병원균 예를 들어, HIV(AIDS), 인플루엔자 바이러스(Flu), 헤르페스 심플렉스 바이러스(생식기 감염, 입술 포진, STDs), 로타바이러스(설사), 파라인플루엔자 바이러스(호흡기 감염), 폴리오바이러스(척수성 소아마비), 호흡기 세포 융합 바이러스(호흡기 감염), 홍역 및 볼거리 바이러스(홍역, 볼거리), 루벨라 바이러스(풍진) 및 리노바이러스(일반적인 감기)(이에 한정되는 것은 아님)로부터 얻어지거나 또는 이로부터 유래한다.
박테리아 및 기생체 항원을 함유하는 게놈 단편은 질병 예를 들어, 디프테리아, 백일해, 파상풍, 결핵, 박테리아 또는 진균성 폐렴, 중이염, 임질, 콜레라, 장티푸스, 뇌수막염, 전염성 단핵증, 흑사병, 세균성 이질 또는 살모넬라증, 레지오넬라병, 라임병, 나병, 말라리아, 갈고리충, 하천 실명증(Onchoceriasis), 주혈 흡충증, 트리파노소미아증(Trypamasomialsis), 리슈마니아증, 지아르디아, 아메바증, 필라리아증, 보렐리아(Borelia) 및 선모충증(이에 한정되는 것은 아님)을 유발하는 공지의 감염 인자로부터 얻어질 수 있거나 또는 유래할 수 있다. 또 다른 항원을 비 통상적인 바이러스 예를 들어, 쿠루, 크로이츠펠트-야콥병(CJD), 스크래피, 전염성 밍크 뇌병증, 그리고 만성 소모성 질병, 또는 단백성 감염 입자 예를 들어, 광우병과 연관된 프리온으로부터 얻을 수 있거나 이것들로부터 유래할 수 있다.
특이 병원균으로서는 엠.튜버큘로시스(M. tuberculosis), 클라미디아(Chlamydia), 엔.고노레아(N. gonorrhea), 쉬겔라(Shigella), 살모넬라(Salmonella), 비브리오 콜레라(Vibrio Cholera), 트레포네마 팔리두나(Treponema pallidua), 슈도모나스(Pseudomonas), 보르데텔라 퍼투시스(Bordetella pertussis), 브루셀라(Brucella), 프란시셀라 툴로렌시스(Franciscella tulorensis), 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori), 렙토스피라 인터로가우스(Leptospria interrogaus), 레지오넬라 뉴모필리아(Legionella pneumophila), 여시니아 페스티스(Yersinia pestis), 스트렙토코커스(Streptococcus)(A형 및 B형), 뉴모코커스(Pneumococcus), 메닝고코커스(Meningococcus), 헤모필러스 인플루엔자(Hemophilus influenza)(b형), 톡소플라스마 곤딕(Toxoplasma gondic), 콤플리로박테리오시스(Complylobacteriosis)의 원인균, 모락셀라 카타랄리스(Moraxella catarrhalis), 도노바니아증(Donovanosis)의 원인균, 및 방선균증(Actinomycosis)의 원인균; 진균 병원균 예를 들어, 칸디다증 및 아스퍼질러스증; 기생성 병원균 예를 들어, 촌충, 흡충, 회충, 아메바성 감염, 편모충증, 크립토스포리듐(Cryptosporidium), 주혈 흡충, 주폐포자충, 트리코모나스 감염증의 원인균 및 선모충증의 원인균을 포함할 수 있다. 그러므로, 본 발명은 다수의 수의학적 질병 예를 들어, 구제역, 코로나바이러스, 파스트렐라 물코시다(Pasteurella mulcocida), 헬리코박터, 스트롱질루스 불가리스(Strongylus vulgaris), 악티노바실러스 클루로뉴모니아(Actinobacillus pleuropneumonia), 소 바이러스성 설사 바이러스(BVDV), 크렙시엘라 뉴모니아에(Klebsiella pneumoniae), 이.콜라이, 보르데텔라 퍼투시스(Bordetella pertussis), 보르데텔라 파라퍼투시스(Bordetella parapertussis) 및 보르데텔라 브로치셉티카(Bordetella brochiseptica)에 대하여 적당한 면역 반응을 제공하는데에도 사용될 수 있다.
몇몇 구체예에서, 관심 있는 항원은 알레르기 유발 항원일 수 있다. 이 "알레르기 유발 항원"은 과민 반응의 상태를 개시할 수 있거나, 또는 이미 알레르기 유발 항원으로 감작된 개체 내 즉석 과민 반응을 유발할 수 있는 항원이다. 알레르기 유발 항원은 일반적으로 알레르기 유발성을 가지는 단백질에 결합된 화학 물질 또는 단백질이지만; 이 알레르기 유발 항원은 또한 다수의 인공 공급원 또는 천연 공급원으로부터 유래하는 유기 물질 또는 무기 물질 예를 들어, 식물성 물질, 금속, 화장품이나 세제 중에 포함된 성분, 라텍스 등을 포함할 수도 있다. 본 발명의 방법에서 사용하기 적당한 알레르기 유발 항원 군으로서는 꽃가루, 동물의 비듬, 잔디, 곰팡이, 먼지, 항생제, 쏘는 곤충 독(stinging insect venom), 주위 환경에서 찾아볼 수 있는 다양한 물질(화학 물질 및 금속 포함), 약물과 식품 알레르기 유발 항원을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 나무로부터 일반적으로 유래하는 알레르기 유발 항원으로서는 미루나무, 파퓰러(popular), 서양 물푸레 나무, 자작 나무, 단풍 나무, 떡갈 나무, 느릅 나무, 히코리(hickory) 및 피칸 나무로부터 유래하는 꽃가루를 포함하고; 일반적인 식물성 알레르기 유발 항원으로서는 호밀, 돼지풀, 질경이(English plantain), 수영-독(sorrel-dock) 및 명아주로부터 얻어지는 것을 포함하고; 식물성 접촉 알레르기 유발 항원으로서는 옻나무, 덩굴 옻나무 및 쐐기풀로부터 유래하는 것을 포함하며; 잔디로부터 일반적으로 유래하는 알레르기 유발 항원은 또한 티모시(Timothy), 존슨(Johnson), 버뮤다(Bermuda), 페스큐(Fescue) 및 블루그래스(bluegrass) 알레르기 유발 항원을 포함하고; 일반적인 알레르기 유발 항원은 곰팡이나 진균 예를 들어, 알터나리아(Alternaria), 푸사리움(Fusarium), 호모덴드럼(Hormodendrum), 아스퍼질러스(Aspergillus), 마이크로폴리스포라(Micropolyspora), 뮤코(Mucor) 및 호열성 악티노마이세스로부터 얻을 수도 있으며; 페네실린과 테트라사이클린은 일반적인 항생제 알레르기 유발 항원이고; 상피 알레르기 유발 항원은 집먼지 또는 유기 먼지(통상적으로 진균 기원의 먼지), 곤충 예를 들어, 집진드기(더마트파고이데스 프테로시니시스; dermatphagoides pterosinyssis), 또는 동물성 공급원 예를 들어, 깃털, 그리고 고양이와 개의 비듬으로부터 얻을 수 있으며; 일반적인 식품 알레르기 유발 항원으로서는 우유와 치즈(유제품), 달걀, 밀, 견과류(예를 들어, 땅콩), 해산물(예를 들어, 조개류), 완두콩, 콩 및 글루텐 알레르기 유발 항원을 포함하고; 일반적으로 환경에 존재하는 알레르기 유발 항원으로서는 금속(니켈 및 금), 화학 물질(포름알데히드, 트리니트로페놀 및 테레빈유), 라텍스, 고무, 섬유(면 또는 울), 버랩(burlap), 헤어 염료, 화장품, 세제 및 향수 알레르기 유발 항원을 포함하며; 일반적인 약물 알레르기 유발 항원으로서는 국부 마취제 및 살리실산염 알레르기 유발 항원을 포함하고; 항생제 알레르기 유발 항원으로서는 페니실린과 설폰아미드 알레르기 유발 항원을 포함하며; 일반적인 곤충 알레르기 유발 항원으로서는 벌, 말벌 및 개미 독, 그리고 카크로치 칼릭스(cockroach calyx) 알레르기 유발 항원을 포함한다. 특성 규명이 특히 잘 되어 있는 알레르기 유발 항원으로서는 Der pI 알레르기 유발 항원의 주요 및 잠재 에피토프(Hoyne외 다수(1994) Immunology 83190-195), 벌 독 포스포리파제 A2(PLA)(Akdis외 다수(1996) J. Clin. Invest. 98:1676-1683), 자작 나무의 꽃가루 알레르기 유발 항원 Bet v1(Bauer외 다수 (1997) Clin. Exp. Immunol. 107:536-541), 그리고 다중-에피토프 재조합 잔디 알레르기 유발 항원 rKBG8.3(Cao외 다수(1997) Immunology 90:46-51)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이와 같은 알레르기 유발 항원 및 기타 적당한 알레르기 유발 항원은 시판되고 있으며/있거나, 다음과 같이 공지된 기술에 따라서 추출물로서 용이하게 제조될 수 있다.
임의의 기타 구체예에서, 관심 있는 항원은 종양-특이적 항원일 수 있다. 본 발명에 사용되는 종양-특이적 항원으로서는 다양한 MAGE 중 임의의 것(흑색종 연관 항원 E; melanoma associated antigen E) 예를 들어, MAGE1, MAGE2, MAGE3(HLA-A1 펩티드), MAGE4 등; 다양한 티로시나제 중 임의의 것(HLA-A2 펩티드); 돌연 변이체 Ras; 돌연 변이체 p53; 및 p97 흑색종 항원 중 임의의 것을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 기타 종양-특이적 항원으로서는 진행 암과 연관된 Ras 펩티드 및 p53 펩티드, 자궁 경부암과 연관된 HPV 16/18 및 E6/E7 항원, 유방암과 연관된 MUC1-KLH 항원, 결장암과 연관된 CEA(발암 배아성 항원), 흑색종과 연관된 gp100 또는 MART1 항원, 그리고 전립선암과 연관된 PSA 항원을 포함한다. p53 유전자 서열은 공지되어 있으며[예를 들어, Harris외 다수(1986) Mol. Cell. Biol. 6:4650-4656], 유전자 은행에 수탁 번호 M14694로 기탁되어 있다. 그러므로, 본 발명의 애쥬반트 조성물은 자궁 경부암, 유방암, 대장암, 전립선암, 폐암 및 흑색종을 치료하는 면역 요법을 수행하는데 사용될 수 있다.
본 발명에 사용되는 항원은 당 업자에게 알려진 다양한 방법을 이용하여 얻을 수 있거나 또는 생산될 수 있다. 특히, 항원은 표준적인 정제 기술을 이용하여 천연 공급원으로부터 직접 분리할 수 있다. 대안적으로, 항원은 공지의 기술을 이용하여 재조합 방법으로 생산할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, VoIs. I, II and III, Second Edition (1989); DNA Cloning, Vols. I and II (D. N. Glover ed. 1985)]을 참조하시오. 본원에 사용된 항원은 또한 화학 중합체 합성법 예를 들어, 고상 펩티드 합성법을 통하여 본원에 개시된 아미노산 서열을 바탕으로 합성될 수도 있다. 이와 같은 방법은 당 업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[J. M. Stewart and J. D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd Ed., Pierce Chemical Co., Rockford, III. (1984) 및 G. Barany and R. B. Merrifield, The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, editors E. Gross and J. Meienhofer, Vol. 2, Academic Press, New York, (1980), pp. 3-254 (고상 펩티드 합성 기술에 관함); 및 M. Bodansky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin (1984) 및 E. Gross and J. Meienhofer, Eds., The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology (상동), Vol. 1 (고전적인 용액 합성법에 관함)]을 참조하시오.
원한다면, 재조합법 예를 들어, 유전자를 발현하는 세포로부터 cDNA 및 게놈 라이브러리를 스크리닝하는 방법 또는 유전자를 포함하는 것으로 공지된 벡터로부터 유전자를 추출하는 방법을 이용하여 전술한 항원들을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 얻을 수 있다. 뿐만 아니라, 원하는 유전자는 표준적인 기술 예를 들어, cDNA 또는 게놈 DNA의 페놀 추출법과 PCR을 이용하여, 원하는 유전자를 함유하는 세포 및 조직으로부터 직접 분리할 수 있다. 예를 들어, DNA를 생성 및 분리하는데 사용되는 기술에 관하여 개시된 문헌[Sambrook외 다수, 상동]을 참조하시오. 폴리뉴클레오티드 서열은 또한 클로닝보다는 합성에 의해 생산될 수도 있다.
5.2.1 본 발명의 면역원성 조성물에 사용되는 햅텐
본 발명의 항원은 햅텐일 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명에 사용된 "햅텐"은 항체와 특이적으로 반응하고 그 자체에 의해 면역 반응을 유도할 수는 없지만, T 세포 에피토프-함유 담체와 복합체를 이루어 햅텐-담체 접합체를 형성하는 때에는 면역원성인 저분자량 유기 화합물이다. 다른 구체예에서, 상기 햅텐은 그 자체로서는 면역원성이 매우 낮다. 또한, 상기 햅텐은 햅텐-담체 접합체의 특이성 결정 부인 것을 특징으로 하는데, 다시 말해서, 상기 햅텐은 유리된 상태에서 햅텐에 특이적인 항체와 반응할 수 있다는 의미이다. 몇몇 구체예에서, 면역화되지 않은 개체 내에서는 햅텐에 대한 항체가 형성되지 않는다. 몇몇 구체예에서, 면역화되지 않은 개체 내에서는 햅텐에 대한 항체의 수준이 낮을 수 있는데, 하지만, 햅텐에 대한 항체의 수준(햅텐에 대한 면역 반응)은 증가하는 것이 바람직하다. 본 발명의 임의의 구체예에서, 햅텐이란 용어는, 약물, 약물 일부의 유사체 또는 약물 유도체와 같이, 약물/햅텐의 더욱 구체적인 개념을 포함한다. 면역원성 조성물, 또는 몇몇 구체예에서는 백신이 처음 투여될 때, "원하던 측정 가능 결과(desired measurable result)"를 얻게 될 것이다. 초기에 있어서, 원하던 측정 가능 결과란, 고 역가의 항-햅텐 항체가 생성되는 것이다[혈청 중 약 0.1?1㎎/㎖ 이상의 특이 항체]. 그러나, 개체에 적당한 투여 방법을 조정하면, 원하던 치료 효과를 지속적으로 얻고 이를 유지하게 된다. "원하던 치료 효과(desired therapeutic effect)"란, 충분한 양의 유리 햅텐이 중화되어, 치료상 허용 가능한 시간(therapeutically acceptable time frame) 내에 햅텐에 노출된 후 이 햅텐에 특이적인 항-햅텐 항체에 의해, 햅텐(예를 들어, 니코틴 또는 코카인)의 약리학적 효과가 감소하거나 없어지는 경우를 말한다. 소정의 햅텐에 대해 충분한 항체 반응을 얻어내는데 얼마나 오랜 시간이 걸리는지와, 이 항체 반응이 얼마나 오랫동안 유지되는지에 있어서 치료상 허용 가능한 시간은, 면역화될 개체, 중화될 햅텐(예를 들어, 남용 약물), 그리고 투여 방식의 특징을 평가함으로써 당 업자에 의해 측정된다. 이러한 면역화 프로토콜 및 기타 면역화 프로토콜을 모델로서 사용하면, 당 업자는 면역성 또는 보호 기간이 수 개월?1년 이상에 이르기까지 유지되는 것으로 예상할 수 있을 것이다.
본 발명의 접합체를 만드는 하나의 측면으로서는, 구조물을 충분한 양만큼 유지하면서 담체에 접합 또는 결합될 수 있도록 햅텐을 충분히 개질하여, 유리 상태의 햅텐(예를 들어, 유리 코카인 또는 니코틴)으로 인지되도록 만드는 것을 포함한다. 백신화된 개체는 유리 햅텐(예를 들어, 코카인 또는 니코틴)을 인지하는 항체를 가져야 한다. 방사성 면역 검정 실험 및 경쟁 ELISA 검정 실험을 통하여, 유리 햅텐에 대한 항체의 역가를 측정할 수 있다. 관심 있는 항체로서는 햅텐-특이 항체가 있으며, 몇몇 구체예에서는, 코카인-특이 항체 또는 니코틴-특이 항체가 있다. 바람직한 구체예를 기술하는데 사용되는 원칙과 방법은, 본원에 개시된 사항으로부터 다양한 질병, 병태 또는 약물 중독증과 독성 반응의 치료에 유용한, 광범위한 햅텐-담체 접합체에 이르기까지 확장될 수 있음을 알아야 할 것이다.
본 발명을 수행함에 있어서 다양한 햅텐을 사용할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 상기 햅텐은 상기 섹션 5.2에 기술된 항원으로부터 선택된 항원이다. 몇몇 구체예에서, 상기 햅텐은 예를 들어, 약물로서, 다음과 같은 것들을 예로 들 수 있다:
할루시노겐 예를 들어, 메스칼린 및 LSD;
카나비노이드 예를 들어, THC;
자극제 예를 들어, 암페타민, 코카인, 펜메트라진, 메틸페니데이트;
니코틴;
신체 기능 저하제 예를 들어, 논바비투레이트(예를 들어, 브롬화물 및 클로랄 수화물 등), 메타쿠알론, 바비투레이트, 디아제팜, 플루라제팜, 펜사이클리덴 및 플루옥세틴;
아편 및 이의 유도체 예를 들어, 헤로인, 메타돈, 몰핀, 메페리딘, 코데인, 펜타조신 및 프로폭시펜; 그리고
"디자이너 약물(Designer drug)" 예를 들어, "엑스터시".
5.3. 항원- 담체 및 햅텐 - 담체 접합체를 제조하는 방법
본 섹션에는 코카인과 코카인 대사 물질, 노르코카인의 주요 유도체, 벤조일 엑고닌 및 엑고닌 메틸 에스테르로부터 유래하는 햅텐, 그리고 다양한 담체 예를 들어, 재조합 CTB(rCTB)를 사용하여 본 발명의 접합체를 제조하는 방법에 관하여 예시하였다. 본 방법은 다음 섹션에 예시된 바와 같은 임의의 기타 햅텐과 니코틴을 함께 사용할 수 있도록 조정할 수 있다.
햅텐-담체 결합의 길이와 성질은, 햅텐이 처음에 이 햅텐에 대해 생성된 항체에 의해 최적의 상태로 인지될 수 있을 정도로 충분한 거리만큼 담체 도메인으로부터 떨어져 치환될 수 있도록 해야 한다. 링커의 길이는 다음과 같은 것들로 이루어진 군으로부터 선택되는 "분지" 내에 전략적으로 위치하는 -CH2 기의 수를 바꿔줌으로써 최적화된다:
CJ0 Q
CJ1 (CH2)nQ
CJ1.1 CO2Q
CJ1.2 COQ
CJ1.3 OCH3
CJ2 OCO(CH2)nQ
CJ2.1 OCOCH=Q
CJ2.2 OCOCH(O)CH2
CJ2.3 OCO(CH2)nCH(O)CH2
CJ3 CO(CH2)nCOQ
CJ3.1 CO(CH2)nCNQ
CJ4 OCO(CH2)nCOQ
CJ4.1 OCO(CH2)nCNQ
CJ5 CH2OCO(CH2)nCOQ
CJ5.1 CH2OCO(CH2)nCNQ
CJ6 CONH(CH2)nQ
CJ7 Y(CH2)nQ
CJ7.1 CH2Y(CH2)nQ
CJ8 OCOCH(OH)CH2Q
CJ8.1 OCO(CH2)nCH(OH)CH2Q
CJ9 OCOC6H5
CJ10
Figure pct00001
[상기 식 중, Q'는 개질된 단백질임]
CJ11 YCO(CH2)nCOQ.
[또한, 본원에 그 자체로서 참고용으로 인용되어 있는 미국 특허 출원 공보 제2005-0124061호를 참조하시오]. 상기 분지에 있어서, n은 정수, 바람직하게는 약 1?약 20으로부터 선택되는 정수, 더욱 구체적으로는 약 3?약 6이고; Y는 바람직하게, S, O 및 NH로 이루어진 군으로부터 선택되며; Q는 바람직하게, 다음과 같은 것들로 이루어진 군으로부터 선택된다:
(i) ─H;
(ii) ─OH;
(iii) ─CH2;
(iv) ─CH;
(iva) ─OCH3;
(v) ─COOH;
(vi) 할로겐;
(vii) 활성화된 에스테르 또는 에스테르들 예를 들어, 2-니트로-4-설포페닐 에스테르 및 N-옥시숙신이미딜 에스테르;
(viii) 담체 예를 들어, 혼합된 무수물, 아실 할로겐화물, 아실 아지화물, 알킬 할로겐화물, N-말레이미드, 이미노 에스테르, 이소시아네이트 및 이소티오시아네이트에 대한 기 또는 기들;
(ix) 담체; 및
(x) 참조 번호 "CJ"에 의해 식별되는 다른 "분지".
T 세포 에피토프 함유 담체는 햅텐과의 접합을 촉진하는 것으로 당 업자에게 공지된 방법(예를 들어, 티올화)에 의해 개질될 수 있다. 예를 들어, 2-이미노티올란(트라우트(Traut) 시약)을 사용하거나 숙시닐화에 의할 수 있다. 간단히 하기 위해서, (CH2)Q[식 중, Q는 H]는 (CH3), 메틸 또는 Me로 표시할 수 있으나, 이는 도 3a 및 도 3b에 나타낸 "분지" 내에서 확인된 모티프와 부합한다는 것을 알 수 있다. 본원에 사용된 화합물로서 시중에서 구입할 수 있는 것의 추가 약어로서는 다음과 같은 것들을 포함한다:
BSA = 소 혈청 알부민
DCC = 디시클로헥실카보디이미드
DMF = N,N-디메틸포름아미드
EDC(또는 EDAC) = N-에틸-N'-(3-(디메틸아미노)프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드
EDTA = 에틸렌디아민 테트라아세트산, 이나트륨 염
HATU = O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
NMM = N-메틸모폴린
HBTU = 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
TNTU = 2-(5-노르보넨-2,3-디카복시미도)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트
PyBroP？ = 브로모-tris-피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트
HOBt = N-하이드록시벤조트리아졸
몇 개의 명명된 화합물에 관한 IUPAC 명명법에 따른 것들 이외의 것으로서는 다음과 같은 것들이 있다:
노르코카인
3β-(벤조일옥시)-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-2β-카복실산 메틸 에스테르;
벤조일 엑고닌;
3β-(벤조일옥시)-8-메틸-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-2β-카복실산;
코카인;
3β-(벤조일옥시)-8-메틸-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-2β-카복실산 메틸 에스테르;
엑고닌 메틸 에스테르;
3β-(하이드록시)-8-메틸-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-2β-카복실산 메틸 에스테르;
니코틴;
1-메틸-2-(3-피리딜)피롤리딘;
코티닌;
N-메틸-2-(3-피리딜)-5-피롤리돈.
5.4 니코틴 접합체의 제조
본 발명의 신규한 니코틴-담체 접합체는 니코틴과 니코틴 대사 물질로부터 유래한다. 도 4는 니코틴 및 이것의 유도체와 대사 물질 중 일부를 나타내는 것이다.
전술한 니코틴-담체 접합체 제조 방법을 적용시키는 것 이외에, 니코틴-담체 접합체의 전구체는, 에틸 3-브로모부티레이트, 5-브로모발레르산, 6-브로모헥산산 또는 8-브로모옥탄산 각각을 이용하여, 무수 메탄올 중 (S)-(-)-니코틴 내 피리딘 질소를 선택적으로 알킬화함으로써 합성될 수 있다. 이와 같은 반응의 산물은 HATU를 이용하여 담체 단백질에 접합된다.
다른 구체예에서, 염화메틸렌 중 노르니코틴(50mmol) 용액에 트리에틸아민(75mmol)을 첨가한 후, 숙신산 무수물(100mmol)을 첨가한다. 이 용액을 18시간 동안 환류 가열한다. 반응 혼합물을 10% 수성 염산, 포화 중탄산나트륨 용액, 염수 및 물을 사용하여 연속으로 세정한다. 감압 하에서 상기 용매를 건조(MgSO4) 및 제거한 후, 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피를 사용하여 잔류물을 정제하면, 원하는 생성물을 얻을 수 있다.
추가의 구체예에서, 숙신화된 노르니코틴을 사용하여 니코틴 접합체를 합성한다. DMF(0.1㎖) 중 숙신화 노르니코틴(5μmol) 용액에 디이소프로필에틸아민(10mmol)을 첨가한 후, HATU(5.5μmol)를 첨가한다. 10분이 경과한 후, pH 8.8의 0.1M 붕산나트륨 완충액(0.9㎖) 중 HEL 용액 또는 BSA(500㎍) 용액에 연황색 용액을 적가한 다음, 이 혼합물을 상온에서 18시간 동안 교반하였다. 여기에 0.1M 수성 염산을 조심히 첨가하여 접합체 용액의 pH를 pH7.0으로 맞춘 다음, PBS에 대해 투석하여 정제하였다. 투석물은 0.2㎛ 필터를 통해 여과하고, 질량 스펙트럼 분석법 또는 UV 흡광도에 의해 햅텐화 수준을 측정하였다. 이와 같은 니코틴-담체 접합체 제조 방법과 기타 방법에 관하여는 이하에 기술하였다.
5.4.1. 방법 A : (S)-니코틴의 N' -부티르산 부가체
무수 메탄올(50㎖) 중 (S)-니코틴(0.031mole) 용액(얼음 물 온도, 아르곤 대기 하)에, 10분에 걸쳐 에틸-4-브로모부티레이트(0.0341mole)를 적가하였다. 결과로 생성된 오렌지색 용액을 상온으로 가온하여, 18시간 동안 교반하였다. 감압하에서 용매를 제거한 결과, 분석학적으로 순수한 에스테르의 원하던 샘플이 핵산과 함께 갈색의 잔류물로서 침전되었다.
에스테르(36㎎)를 메탄올(3㎖) 및 1M 수산화나트륨 용액(5㎖) 중에 용해하고, 이를 상온에서 18시간 동안 교반하였다. 감압 하에서 용매를 제거하고, 잔류물을 10% 염산 중에 용해한 다음, 아세트산에틸로 추출하였다. 용매를 감압하에서 건조하여 제거한 결과(MgSO4), 원하는 화합물을 얻었다.
5.4.2. 방법 B : (S)-니코틴의 N' - 발레르산 부가체
무수 메탄올(50㎖) 중 (S)-니코틴(0.031mole) 용액(얼음 물 온도, 아르곤 대기 하)에, 10분에 걸쳐 1-브로모발레르산(0.0341mole)을 적가하였다. 결과로 생성된 오렌지색 용액을 상온으로 가온하여, 18시간 동안 교반하였다. 감압하에서 용매를 제거한 결과, 분석학적으로 순수한 화합물의 원하던 샘플이 핵산과 함께 갈색의 잔류물로서 침전되었다.
5.4.3. 방법 C : (S)-니코틴의 N' - 헥산산 부가체
무수 메탄올(50㎖) 중 (S)-니코틴(0.031mole) 용액(얼음 물 온도, 아르곤 대기 하)에, 10분에 걸쳐 1-브로모헥산산(0.0341mole)을 적가하였다. 결과로 생성된 오렌지색 용액을 상온으로 가온하여, 18시간 동안 교반하였다. 감압하에서 용매를 제거한 결과, 분석학적으로 순수한 화합물의 원하던 화합물이 핵산과 함께 갈색의 잔류물로서 침전되었다.
5.4.4. 방법 D : (S)-니코틴의 N' - 옥탄산 부가체
무수 메탄올(50㎖) 중 (S)-니코틴(0.031mole) 용액(얼음 물 온도, 아르곤 대기 하)에, 10분에 걸쳐 적당한 1-브로모옥탄산(0.0341mole)을 적가하였다. 결과로 생성된 오렌지색 용액을 상온으로 가온하여, 18시간 동안 교반하였다. 감압하에서 용매를 제거한 결과, 분석학적으로 순수한 화합물의 원하던 화합물이 핵산과 함께 갈색의 잔류물로서 침전되었다.
5.4.5. 기타 방법
임의의 구체예에서, DMF(1.6㎖) 중 니코틴의 적당한 N'-알칸산 유사체(6.27×10-5 mole) 용액에, DIEA(1.25×10-4 mole) 및 HATU(7.53×10-5 mole)를 첨가하였다. 상온에서 10분 경과한 후, 0.1M 중탄산나트륨 중 HEL 또는 BSA(16.5㎎)(pH 8.3, 14.1㎖)에 연황색 용액을 첨가하고, 이를 18시간 동안 교반하였다. 접합체 용액을 밤새도록 PBS에 대해 투석하여 정제하였다(4℃). 레이저 탈착 질량 스펙트럼 분석법을 이용하여 접합체를 분석하여, 햅텐의 수를 측정하였다.
CTB가 담체인 바람직한 구체예에서, DMF(1.6㎖) 중 니코틴의 적당한 N'-알칸산 유사체(6.27×10-5 mole) 용액에, DIEA(1.25×10-4 mole) 및 HATU(7.53×10-5 mole)를 첨가하였다. 상온에서 10분 경과 후, 연황색 용액을 0.1M 중탄산나트륨 중 rCTB(16.6㎎)(pH 8.3, 14.4㎖)에 첨가하고, 이를 18시간 동안 교반하였다. 접합체 용액을 PBS에 대한 투석으로 밤새도록 정제하였다(4℃). 레이저 탈착 질량 스펙트럼 분석법을 이용하여 접합체를 분석하여, 햅텐의 수를 측정하였다.
5.5. 면역원성 조성물 및 이를 사용하는 방법
본 발명은 햅텐-담체 접합체를 포함하는 면역원성 조성물을 제공하는데, 여기서, 상기 담체는 시그널 펩티드를 가지는 박테리아 독소이다. 하나의 구체예에서, 햅텐은 니코틴 또는 이 니코틴의 유도체이다. 다른 구체예에서, 햅텐은 코카인 또는 이 코카인의 유도체이다. 하나의 구체예에서, 박테리아 독소 담체는 자체의 내인성 시그널 펩티드 또는 이의 단편 또는 단편들을 가지는 CTB이다. 본 발명의 면역원성 조성물은 이와 같은 독소-담체 접합체를 포함하며, 임의로는 생리학적 담체 또는 부형제를 포함한다. 본 발명은 이와 같은 면역원성 조성물을 제조하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 시그널 펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 담체를 분리할 수 있는 시스템 내 박테리아 독소 담체를 제조하는 단계, 또는 담체를 분리한 후 시그널 펩티드를 첨가하여 이 시그널 펩티드를 햅텐에 접합하는 단계를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 햅텐은 단백질성 물질로서, 이 경우, 접합체는 기질 내에 전파(propagation)함으로써 재조합 방법으로 생산될 수 있다. 본 발명은 면역 반응을 유도하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 본 발명의 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명은 질병 또는 병태 예를 들어, 약물 중독증을 예방, 관리 및/또는 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 본 발명의 면역원성 조성물을 유효량만큼 투여하는 단계를 포함한다. 몇몇 구체에에서, 예방, 관리 및/또는 치료될 약물 중독증은 코카인 중독증이다. 다른 구체예에서, 예방, 관리 및/또는 치료될 약물 중독증은 니코틴 중독증이다.
본원에 정의한 바와 같이, 본 발명의 면역원성 조성물은 세포, 조직, 기관 및/또는 개체나 환자의 체 내에서 면역 반응을 유도할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "개체" 또는 "환자"라는 용어는 호환 사용할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "개체" 및 "개체들"이라는 용어는 동물(예를 들어, 새, 파충류 및 포유동물), 바람직하게는, 포유동물 예를 들어, 영장류 이외의 포유동물(예를 들어, 낙타, 당나귀, 얼룩말, 소, 돼지, 말, 염소, 양, 고양이, 개, 래트 및 마우스) 및 영장류(예를 들어, 원숭이, 침팬지 및 사람)을 의미하는 것으로서, 가장 바람직하게는 사람을 의미한다. 임의의 구체예에서, 개체 또는 환자는 약물에 중독된 개체 또는 환자이다. 임의의 구체예에서, 개체 또는 환자는 약물 중독증으로 발전할 위험이 있거나 재발할 위험이 있는 개체 또는 환자이다.
본 발명의 몇몇 구체예에서, 면역원성 조성물은 "백신" 즉, 개체나 환자에 투여하기 위한 백신이다.
본 발명의 몇몇 구체예에서, 면역원성 조성물은 적응 면역 시스템의 면역 반응 예를 들어, B 세포 반응 및/또는 T 세포 반응을 유도한다. 몇몇 구체예에서, 면역원성 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 항체 반응이다. 몇몇 구체예에서, 면역원성 조성물은 체액성 면역 반응 예를 들어, 인터페론 반응 및/또는 인터루킨 반응 예를 들어, 인터루킨-4 반응을 유도한다. 몇몇 구체예에서, 면역원성 조성물은 면역 반응 중 하나 이상의 유형의 반응을 유도하지만, 다른 면역 반응은 유도하지 않는다. 임의의 구체예에서, 면역원성 조성물은 면역 반응을 조합하여 유도한다. 더욱이, 몇몇 구체예에서, 면역원성 조성물은 기타 생체 내 생물학적 결과를 나타내는 강인한(robust) IFN 반응을 유도하여, 추후 질병이나 병태 또는 동시 발생 질병 또는 병태에 대해 보호 작용을 제공할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 면역원성 조성물은 생체 내에서 기타 생물학적 결과를 나타내는 강인한 TNFα 또는 인터루킨 반응을 유도하여, 추후 질병이나 병태 또는 동시 발생 질병 또는 병태에 대해 보호 작용을 제공할 수 있다.
임의의 구체예에서, 담체가 시그널 펩티드 함유 박테리아 독소인 접합체를 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물에 의해 유도된 면역 반응은, 위약이 투여된 개체(숙주)나 숙주 세포, 또는 기타 음성 대조군에 비하여, 5?10%, 10?20%, 20?30%, 30?40%, 40?50%, 50?60%, 60?70%, 70?80%, 80?90%, 90?100% 또는 그 이상 증가한다. 임의의 구체예에서, 담체가 시그널 펩티드 함유 박테리아 독소인 접합체를 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물에 의해 유도된 면역 반응은, 위약이 투여된 개체(숙주)나 숙주 세포, 또는 기타 음성 대조군에 비하여, 약 1?약 100배, 약 5?약 80배, 약 20?약 80배, 약 1?약 10배, 또는 약 1?약 5배, 또는 약 40?약 80배, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100 배 증가한다.
임의의 구체예에서, 담체가 시그널 펩티드 함유 박테리아 독소인 접합체를 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물로 유도된 면역 반응은, 시그널 펩티드가 결여된 접합체를 투여한 개체(숙주) 또는 숙주 세포에 비하여, 5?10%, 10?20%, 20?30%, 30?40%, 40?50%, 50?60%, 60?70%, 70?80%, 80?90%, 90?100% 또는 그 이상 증가한다. 임의의 구체예에서, 담체가 시그널 펩티드 함유 박테리아 독소인 접합체를 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물에 의해 유도된 면역 반응은, 시그널 펩티드가 결여된 접합체를 투여한 개체(숙주) 또는 숙주 세포에 비하여, 약 1?약 100배, 약 5?약 80배, 약 20?약 80배, 약 1?약 10배, 또는 약 1?약 5배, 또는 약 40?약 80배, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100 배 증가한다.
임의의 구체예에서, 담체가 시그널 펩티드 함유 박테리아 독소인 접합체를 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물로 유도된 면역 반응은, 시그널 펩티드가 결여된 접합체를 투여한 개체(숙주) 또는 숙주 세포에 비하여, 5?10%, 10?20%, 20?30%, 30?40%, 40?50%, 50?60%, 60?70%, 70?80%, 80?90%, 90?100% 또는 그 이상 증가한다. 임의의 구체예에서, 담체가 시그널 펩티드 함유 박테리아 독소인 접합체를 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물에 의해 유도된 항체 반응은, 시그널 펩티드가 결여된 접합체를 투여한 개체(숙주) 또는 숙주 세포에 비하여, 약 1?약 100배, 약 5?약 80배, 약 20?약 80배, 약 1?약 10배, 또는 약 1?약 5배, 또는 약 40?약 80배, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100 배 증가한다.
임의의 구체예에서, 담체가 시그널 펩티드 함유 박테리아 독소인 접합체를 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물로 유도된 인터페론 반응 또는 인터루킨 반응, 바람직하게는 IL-4 반응은, 시그널 펩티드가 결여된 접합체를 투여한 개체(숙주) 또는 숙주 세포에 비하여, 5?10%, 10?20%, 20?30%, 30?40%, 40?50%, 50?60%, 60?70%, 70?80%, 80?90%, 90?100% 또는 그 이상 증가한다. 임의의 구체예에서, 담체가 시그널 펩티드 함유 박테리아 독소인 접합체를 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물로 유도된 인터페론 반응 또는 인터루킨 반응, 바람직하게는 IL-4 반응은, 시그널 펩티드가 결여된 접합체를 투여한 개체(숙주) 또는 숙주 세포에 비하여, 약 1?약 100배, 약 5?약 80배, 약 20?약 80배, 약 1?약 10배, 또는 약 1?약 5배, 또는 약 40?약 80배, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100 배 증가한다.
몇몇 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 유효량만큼의 본 발명의 접합체와, 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. "약학적으로 허용 가능한"이란 용어는, 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되었거나, 아니면 미국 약전이나 기타 동물, 더욱 구체적으로는 사람에 사용되는 것으로 일반적으로 인식되고 있는 약전에 나열된 경우를 의미한다. "담체"라는 용어는 약학 제제와 함께 투여되는 희석제, 애쥬반트, 부형제 또는 비이클을 의미한다. 특히, 주사 용액에 사용되는 염수 용액과 수성 덱스트로즈 및 글리세롤 용액은 또한 액상 담체로서 사용될 수도 있다. 적당한 부형제로서는 녹말, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 염화나트륨, 건조된 탈지유, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물 및 에탄올 등을 포함한다. 적당한 약학 담체의 예에 관하여는 문헌["Remington's Pharmaceutical Sciences", E. W. Martin]에 기술되어 있다. 본 발명의 제제는 투여 방식에 맞아야 한다. 특정 조성물은 또한 돌연 변이체 바이러스가 살아있는지 아니면 불활성화되었는지 여부에 따라서 달라질 수도 있다.
본 발명의 면역원성 조성물은 미처리 개체 즉, 질병, 병태, 약물 중독증이 일어나지 않았거나, 또는 감염성 제제로 감염되지 않았거나, 현재 감염되지 않은 상태인 개체에 투여될 수 있다. 본 발명의 면역원성 조성물은 미처리 개체 즉, 질병, 병태, 약물 중독증이 일어나지 않았거나, 또는 감염성 제제로 감염되지 않았거나 현재 감염되지 않되, 이와 같은 질병, 병태, 약물 중독증 또는 감염의 발명 소인을 가지는 개체에 투여될 수 있다. 본 발명의 면역원성 조성물은 또한 질병, 병태, 약물 중독증 또는 감염이 발생한 상태에 있으며/있거나 이미 발생한 상태에 있는 개체에 투여될 수도 있다.
다수의 방법이 면역원성 조성물 예를 들어, 본원에 개시된 백신 제제를 도입하는데 사용될 수 있다. 이와 같은 방법으로서는 비강 내, 초 내, 경구, 피 내, 근육 내, 복강 내, 정맥 내, 결막 및 피하 경로 투여 방법을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 비 경구 투여에 대한 대안으로서, 본 발명은 또한 농업용 제제의 다량 투여 경로 예를 들어, 음수 또는 살포를 포함한다. 면역원성 조성물에 의해 표적화되는 제제를 천연 투여 경로를 통하거나 감염시켜 본 발명의 돌연 변이 바이러스를 도입하는 것이 바람직할 수 있다.
임의의 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 완전한 보호 또는 치료 작용(즉, 약물 중독증으로부터 완전한 보호 또는 치료 작용)을 나타내지는 않지만, 미처리 개체에 비하여 중독증의 수준을 낮춘다. 상기 면역원성 조성물의 이점으로서는 질병 또는 병태 증상의 심각성을 감소시키는 것과, 질병 또는 병태의 발병 기간을 줄이는 것을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
임의의 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 미처리 개체 내 질병 또는 병태(예를 들어, 감염 또는 약물 중독증)에 대해 보호 작용을 제공하는데 사용된다.
본 발명의 면역원성 조성물의 예방 효과 및/또는 치료 효과는, 부분적으로 면역 반응(예를 들어, 체액성 면역 반응 또는 적응 면역 반응)을 나타내거나 유도하는 것을 바탕으로 한다. 하나의 측면에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 개체 또는 이의 동물 모델(예를 들어, 마우스, 래트, 돼지, 염소, 양 또는 개 모델)에 있어서, 항원 또는 햅텐에 대한 항체의 혈청 역가를 확인 가능한 정도로 유도한다. 항체의 혈청 역가는 당 업자에게 공지된 기술 예를 들어, 면역 검정법 예를 들어, ELISA를 이용하여 측정될 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물을 투여하여 생성된 항체는 중화 항체이다.
본 발명의 면역원성 조성물을 개체 또는 동물 모델에 투여하면, 햅텐이나 항원과 특이적으로 결합하는 항체의 혈청 역가는 약 1㎍/㎖, 약 2㎍/㎖, 약 5㎍/㎖, 약 6㎍/㎖, 약 10㎍/㎖, 약 15㎍/㎖, 약 20㎍/㎖, 약 25㎍/㎖, 약 50㎍/㎖, 약 75㎍/㎖, 약 100㎍/㎖, 약 125㎍/㎖, 약 150㎍/㎖, 약 175㎍/㎖, 약 200㎍/㎖, 약 225㎍/㎖, 약 250㎍/㎖, 약 275㎍/㎖, 약 300㎍/㎖, 약 325㎍/㎖, 약 350㎍/㎖, 약 375㎍/㎖ 이상이 된다. 임의의 바람직한 구체예에서, 혈청 역가는 100㎍/㎖ 이상이다. 몇몇 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물을 투여하면, 혈청 역가가 100㎍/㎖에서 1㎎/㎖ 이상, 바람직하게는 약 500㎍/㎖ 이상이 된다. 면역 반응은 개체 또는 동물 모델 내에서 측정될 수 있는데, 이후 이 면역 반응은 개체 예를 들어, 사람이나 가축 예를 들어, 돼지, 양, 염소 또는 소의 체 내에서 예측되는 반응과 상관되거나 또는 이 반응을 바탕으로 하여 추론된다.
하나의 구체예에서, 본 발명은 개체 내 하나 이상의 질병이나 병태(예를 들어, 약물 중독증 또는 바이러스 감염)를 예방, 치료, 관리 또는 완화하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 본 발명의 접합체를 포함하는 면역원성 조성물을 유효량만큼 상기 개체에 투여하는 단계를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 개체나 동물 모델에 투여된 면역원성 조성물의 투여량은 약 10?20㎍이다. 몇몇 구체예에서, 개체나 동물 모델에 투여된 면역원성 조성물의 투여량은 약 75?100㎍이다. 몇몇 구체예에서, 개체나 동물 모델에 투여된 면역원성 조성물의 투여량은 약 500?1000㎍이다.
본 발명은 개체 내 하나 이상의 질병이나 병태(예를 들어, 약물 중독증 또는 바이러스 감염)를 예방, 치료, 관리 또는 완화하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 본 발명의 접합체를 포함하는 면역원성 조성물을 유효량만큼 상기 개체에 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 상기 유효량이란, 사망률, 입원 기간, 질병이나 병태의 중증도 및/또는 질병이나 병태의 임상 증상을, 본 발명의 면역원성 조성물이 투여되지 않은 개체, 또는 박테리아 독소가 시그널 펩티드를 가지지 않는 햅텐-박테리아 독소 접합체가 투여된 개체에 비하여 감소시키는 양을 의미한다. 임의의 바람직한 구체예에서, 개체는 사람이다. 임의의 구체예에서, 개체는 마우스 또는 래트이다.
특정 질병이나 병태를 치료, 예방 및/또는 완화하는데 유효할 본 발명의 면역원성 조성물의 양은 질병의 성질에 따라서 달라질 것이며, 이는 표준적인 임상 기술에 의해서 측정될 수 있다. 또한, 시험관 내 검정법은, 임의로는 최적 투여량 범위를 확인하는 것을 보조하는데 사용될 수도 있다. 본 발명의 조성물 중에 사용될 정확한 투여량은 또한 투여 경로, 그리고 질병이나 질환의 심각성에 따라서 달라질 것이며, 당업자 및 개체의 각 조건에 대한 판단 결과에 따라서 결정되어야 할 것이다. 그러나, 적당한 투여량 범위는 일반적으로 약 10?20㎍, 20?50㎍, 50?75㎍, 75?100㎍, 100?200㎍, 200?300㎍, 300?400㎍, 400?500㎍, 500?600㎍, 600?700㎍, 700?800㎍, 800?900㎍ 또는 900?1000㎍ 이상이다. 유효 투여량은 시험관 내 또는 동물 모델 테스트 시스템을 바탕으로 하여 작성된 투여량 반응 곡선으로부터 추론될 수 있다.
다양한 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물 또는 이 조성물로 인하여 생성된 항체는, 하나 이상의 질병 또는 병태의 예방 또는 치료를 위한 하나 이상의 기타 치료제와 함께 투여된다. 임의의 구체예에서, 치료제(예를 들어, 예방 제제 또는 치료 제제)는 5분 미만의 간격, 30분 미만의 간격, 1시간 간격, 약 1시간의 간격, 약 1?약 2시간 간격, 약 2?약 3시간 간격, 약 3?약 4시간 간격, 약 4?약 5시간 간격, 약 5?약 6시간 간격, 약 6?약 7시간 간격, 약 7?약 8시간 간격, 약 8?약 9시간 간격, 약 9?약 10시간 간격, 약 10?약 11시간 간격, 약 11?약 12시간 간격, 약 12?약 18시간 간격, 18?24시간 간격, 24?36시간 간격, 36?48시간 간격, 48?52시간 간격, 52?60시간 간격, 60?72시간 간격, 72?84시간 간격, 84?96시간 간격, 또는 96?120시간 간격으로 투여된다. 바람직한 구체예에서, 2개 이상의 치료제가 동일한 환자 또는 외래 개체에 투여된다. 본 발명의 면역원성 조성물 또는 본 발명의 조성물에 의해 생성된 항체와 함께 투여될 수 있는 제제의 비 제한적인 예에 관하여는 이하에 기술하였다.
5.5.1. 본 발명의 면역원성 조성물의 용도
몇몇 구체예에서, 본 발명의 조성물은 질병, 병태 또는 감염의 치료 또는 예방에 유용하다. 임의의 구체예에서, 상기 병태는 약물 중독증 또는 약물 알레르기이다. 임의의 구체예에서, 약물은 니코틴이다. 다른 구체예에서, 약물은 코카인이다. 바람직한 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 세포 내 성분들 및/또는 담체보다는, 햅텐에 대해 특이성을 나타낸다. 다른 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 진핵 생물 세포, 바람직하게는 포유동물 세포 내 세포 독성이 낮다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 약물 중독증, 의존증 또는 알레르기를 감소 또는 억제한다. 특정 구체예에서, 본원에 개시되어 있거나 또는 당 업자에게 공지된 검정법에 의해 측정된 바에 따르면, 본 발명의 면역원성 조성물은 개체 내 약물 중독증 또는 약물 의존증을 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 75?99.5%, 85?99.5% 또는 90?99.8%까지 억제 또는 완화한다. 그러므로, 본 발명의 면역원성 조성물은 약물 중독증 또는 약물 의존증을 예방, 치료 및/또는 관리하는 방법에 유용하다. 특정 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 다른 치료법에 대해 내성을 나타내는 질병이나 병태를 예방, 치료 및/또는 관리하는데 유용하다.
임의의 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 약물이나 이 조성물에 의해 표적화되는 항원의 혈류 중 순환율을 억제 또는 감소시키는데, 이 경우, 당 업자에게 공지된 표준적인 검정법이나 본원에 개시된 검정법에 따라 측정된 바에 의하면, 상기 약물 또는 항원은 20 이상?25%, 바람직하게는, 25 이상?30%, 30 이상?35%, 35 이상?40%, 40 이상?45%, 45 이상?50%, 50 이상?55%, 55 이상?60%, 60 이상?65%, 65 이상?70%, 70 이상?75%, 75 이상?80%, 또는 85% 이상까지 표적화된다.
몇몇 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은, 표적화되는 약물이나 이 조성물에 대한 항원을 하나의 기관, 조직 또는 세포에서 다른 기관, 조직 또는 세포로의 투과율을 억제 또는 감소시킨다[이러한 결과는 당 업자에게 공지된 표준적인 검정법 또는 본원에 개시된 검정법을 이용하여 측정됨]. 몇몇 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 약물 예를 들어, 코카인이나 니코틴이 뇌에 도입되는 성질을, 당 업자에게 공지된 표준적인 검정법 또는 본원에 개시된 검정법을 이용하여 측정된 바에 의하면, 20 이상?25%, 바람직하게는, 25 이상?30%, 30 이상?35%, 35 이상?40%, 40 이상?45%, 45 이상?50%, 50 이상?55%, 55 이상?60%, 60 이상?65%, 65 이상?70%, 70 이상?75%, 75 이상?80%, 또는 85% 이상까지 억제 또는 감소시킨다.
5.5.2 예방 방법 및 치료 방법
본 발명은 질병 또는 병태 예를 들어, 약물 중독증을 예방, 치료 및/또는 관리하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 본 발명의 하나 이상의 면역원성 조성물을 이것의 투여를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명은 코카인 중독증 또는 니코틴 중독증을 예방, 치료 및/또는 관리하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 질병 또는 병태를 예방, 치료 및/또는 관리하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 본 발명의 면역원성 조성물 중 하나 이상과, 하나 이상의 기타 치료제(예를 들어, 예방 제제 또는 치료 제제)를 이것의 투여를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 기타 치료제가 상기 질병 또는 병태를 예방, 치료 및/또는 관리하는데 현재 사용되고 있거나, 사용된 바 있거나 또는 유용한 것으로 공지되어 있다. 이와 같은 예방 방법 또는 치료 방법에 관한 비 제한적 예는 이하에 제공되었다.
본 발명의 병용 치료제는 연속적으로 또는 동시에 투여될 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 병용 치료제는 본 발명의 화합물 및 이 화합물의 작용 기작과 동일한 기작을 가지는 기타 치료제 하나 이상을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명의 병용 치료제는 본 발명의 화합물 및 이 화합물의 작용 기작과는 상이한 기작을 가지는 기타 치료제 하나 이상을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명의 병용 치료제는 면역원성 조성물과 함께 작용함으로써 본 발명의 면역원성 조성물의 예방 효과 및/또는 치료 효과를 개선하여, 부가 효과 또는 상승 효과를 나타내게 만든다. 다른 구체예에서, 본 발명의 병용 치료제는 각각 단독으로 사용되는 치료제와 연관된 부작용을 감소시킨다.
상기 병용 치료제에 있어서 동일한 면역원성 조성물 중 예방 제제 또는 치료 제제가 개체 내에 투여될 수 있다. 대안적으로, 병용 치료제의 예방 제제 또는 치료 제제는 개별 면역원성 조성물 중에 포함되어 개체에 동시 투여될 수 있다. 예방 제제 또는 치료 제제는 동일하거나 상이한 투여 경로에 의해 개체에 투여될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 발명의 접합체 하나 이상과 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 면역원성 조성물은 개체, 바람직하게는 사람에 투여되어, 약물 중독증을 예방, 치료 및/또는 관리할 수 있다. 본 발명에 의하면, 면역원성 조성물은 또한 하나 이상의 기타 예방 제제 또는 치료 제제를 포함할 수도 있다. 특정 구체예에서, 기타 예방 제제 또는 치료 제제가 약물 중독증이나 이와 관련된 증상 또는 병태 예를 들어, 정신 질환 병태 또는 정신학적 병태를 예방, 치료 및/또는 관리하는데 현재 사용되고 있거나, 사용된 바 있거나 또는 유용한 것으로 공지되어 있다.
본 발명의 면역원성 조성물은 질병 또는 병태에 대해서 임의의 차수의 치료제 예를 들어, 제1차 치료제, 제2차 치료제, 제3차 치료제, 제4차 치료제 또는 제5차 치료제로서 사용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 본 발명에 따라서 본 발명의 면역원성 조성물을 투여한 개체에는 본 발명의 면역원성 조성물을 투여하기 이전에 치료제를 투여하지 않았다. 다른 구체예에서, 본 발명에 따라서 본 발명의 면역원성 조성물을 투여한 개체에는 본 발명의 면역원성 조성물을 투여하기 이전에 치료제를 투여하였다. 몇몇 구체예에서, 본 발명에 따라서 본 발명의 면역원성 조성물을 투여한 개체는 이전 치료제에 대해 효과를 보지 못하였거나 이전 치료제에 대한 부작용이 발생하였던 개체이며, 상기 이전 치료제는 개체에 대한 독성 수준이 허용 가능하지 않은 정도이기 때문에 처리를 중단하였다.
본 발명은 질병이나 병태 예를 들어, 약물 중독증에 대한 종래의 치료제에 효과를 보지 못한 개체의 체 내에서 상기 질병이나 병태를 치료 및/또는 관리하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 본 발명의 면역원성 조성물을 예방학적 또는 치료학적 유효량만큼 상기 개체에 투여하는 단계를 포함한다.
5.5.2.1 본 발명의 접합체 또는 면역원성 조성물과 병용하면 유용한 제제
본 발명의 면역원성 조성물과 함께 사용될 수 있는, 질병 또는 병태를 예방, 치료 및/또는 관리하기 위한 치료 제제 또는 예방 제제로서는 소 분자, 합성 약물, 펩티드(환형 펩티드 포함), 폴리펩티드, 단백질, 핵산(예를 들어, DNA 및 RNA 뉴클레오티드 예를 들어, 안티센스 뉴클레오티드 서열, 3중 나선체, RNAi 및 생물학적으로 활성인 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열(이에 한정되는 것은 아님)), 항체, 합성 또는 천연 무기 분자, 모의 제제, 그리고 합성 또는 천연 유기 분자를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이와 같은 제제의 구체예로서는 면역 조정제(예를 들어, 인터페론), 소염제(예를 들어, 아드레노코르티코이드, 코르티코스테로이드(예를 들어, 베클로메타손, 부데소나이드, 플루니솔리드, 플루티카손, 트리암시놀론, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 하이드로코르티손), 글루코코르티코이드, 스테로이드, 그리고 비 스테로이드성 소염 약물(예를 들어, 아스피린, 이부프로펜, 디클로페낙 및 COX-2 억제제), 진통제, 항정신병약, 항우울제, 항 불안약, 항 간질약, 루코트리엔 길항제(예를 들어, 몬테루카스트, 메틸 잔틴, 자피르루카스트 및 질루톤), 베타 2-작동제(예를 들어, 알부테롤, 비테롤, 페노테롤, 이소에타린, 메타프로테레놀, 피르부테롤, 살부타몰, 테르부탈린 포르모테롤, 살메테롤 및 살부타몰 테르부탈린), 항콜린제(예를 들어, 브롬화 이프라트로피움 및 브롬화옥시트로피움), 설파살라진, 페니실라민, 답손, 항히스타민제, 항말라리아 제제(예를 들어, 하이드록시클로로퀸), 항바이러스 제제(예를 들어, 뉴클레오시드 유사체(예를 들어, 지도부딘, 아시클로비르, 강시클로버, 비다라빈, 요독수리딘, 트리플루리딘 및 리바비린), 포스카르넷, 아만타딘, 리만타딘, 사퀴나비르, 인디나비르, 리토나비르 및 AZT) 및 항생제(예를 들어, 닥티노마이신(구 악티노마이신), 블레오마이신, 에리트로마이신, 페니실린, 미트라마이신 및 안트라마이신(AMC))를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
질병이나 병태, 또는 이러한 질병이나 병태와 연관된 질병이나 병태의 예방, 관리 및/또는 치료에 유용한 것으로 알려져 있거나, 또는 여기에 사용된 바 있거나 또는 현재 사용되고 있는 임의의 치료제는, 본원에 개시된 바와 같은 본 발명에 따라서 본 발명의 면역원성 조성물과 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 다양한 질병 또는 병태를 예방, 치료 및/또는 관리하는데 사용된 바 있거나 또는 현재 사용되고 있는 치료제(예를 들어, 예방 제제 또는 치료 제제)에 관한 정보가 기술되어 있는 문헌[Gilman외 다수, Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed., McGraw-Hill, New York, 2001 ; The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Berkow, M.D.외 다수(eds.), 17th Ed., Merck Sharp & Dohme Research Laboratories, Rahway, NJ, 1999; Cecil Textbook of Medicine, 20th Ed., Bennett and Plum (eds.), W.B. Saunders, Philadelphia, 1996]을 참조하시오.
본 발명의 면역원성 조성물과 함께 사용될 수 있는 항바이러스 제제(항생제 포함)로서는 아미노글리코시드 항생제, 글리코펩티드, 암페니콜 항생제, 안사마이신 항생제, 세팔로스포린, 세파마이신 옥사졸리돈, 페니실린, 퀴놀론, 스트렙토가민, 테트라사이클린 및 이의 유사체를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
특정 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 기타 단백질 합성 억제제 예를 들어, 스트렙토마이신, 네오마이신, 에리트로마이신, 카보마이신 및 스피라마이신(이에 한정되는 것은 아님)과 함께 사용된다.
하나의 구체예에서, 항 박테리아 제제는 암피실린, 아목시실린, 시프로플록사신, 겐타마이신, 카나마이신, 네오마이신, 페니실린 G, 스트렙토마이신, 설파닐라미드 및 반코마이신으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 구체예에서, 항 박테리아 제제는 아지트로마이신, 세포니시드, 세포테탄, 세팔로틴, 세파마이신, 클로르테트라사이클린, 클라리트로마이신, 클린다마이신, 사이클로세린, 달포프리스틴, 독시사이클린, 에리트로마이신, 리네졸리드, 뮤피로신, 옥시테트라사이클린, 퀴누프리스틴, 리팜핀, 스펙티노마이신 및 트리메토프림으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
부가적으로, 본 발명의 면역원성 조성물과 함께 사용되는 항 박테리아 제제의 비 제한적인 예로서는 다음과 같은 것들을 포함한다: 아미노글리코시드 항생제(예를 들어, 아프라마이신, 아르베카신, 밤버마이신, 부티로신, 디베카신, 네오마이신, 네오마이신, 운데실레네이트, 네틸마이신, 파로모마이신, 리보스타마이신, 시소마이신 및 스펙티노마이신), 암페니콜 항생제(예를 들어, 아지담페니콜, 클로람페니콜, 플로르페니콜 및 티암페니콜), 안사마이신 항생제(예를 들어, 리파마이드 및 리팜핀), 카바세펨(예를 들어, 로라카베프), 카바페넴(예를 들어, 비아페넴 및 이미페넴), 세팔로스포린(예를 들어, 세파클로, 세파드록실, 세파만돌, 세파트리진, 세파제돈, 세포조프란, 세프피미졸, 세프피라미드 및 세프피롬), 세파마이신(예를 들어, 세프부페라존, 세프메타졸 및 세프미녹스), 엽산 유사체(예를 들어, 트리메토프림), 글리코펩티드(예를 들어, 반코마이신), 린코사미드(예를 들어, 클린다마이신 및 린코마이신), 매크로라이드(예를 들어, 아지트로마이신, 카르보마이신, 클라리토마이신, 디리트로마이신, 에리트로마이신 및 에리트로마이신 아시스트레이트), 모노박탐(예를 들어, 아즈트레오남, 카루모남 및 티게모남), 니트로푸란(예를 들어, 푸랄타돈 및 염화 푸라졸륨), 옥사세펨(예를 들어, 플로목세프 및 목사락탐), 옥사졸리디논(예를 들어, 리네졸리드), 페니실린(예를 들어, 암디노실린, 암디노실린 피복실, 아목시실린, 바캄피실린, 벤질페니실린산, 벤질페니실린 소듐, 에피실린, 펜베니실린, 플록사실린, 페남실린, 페네타메이트 하이드리오다이드, 페니실린 O 베네타민, 페니실린 O, 페니실린 V, 페니실린 V 벤자틴, 페니실린 V 하이드라바민, 페니메피사이클린 및 펜시히실린 포타슘), 퀴놀론 및 이의 유사체(예를 들어, 시녹사신, 시프로플록사신, 클리나플록사신, 플루메퀸, 그레파글록사신, 레보플록사신 및 목시플록사신), 스트렙토그라민(예를 들어, 퀴누프리스틴 및 달포프리스틴), 설폰아미드(예를 들어, 아세틸 설파메톡시피라진, 벤질설파미드, 노프릴설파미드, 프탈릴설파세타미드, 설파크리소이딘 및 설파시틴), 설폰(예를 들어, 디아티모설폰, 글루코설폰 소듐 및 솔라설폰), 그리고 테트라사이클린(예를 들어, 아피사이클린, 클로르테트라사이클린, 클로모사이클린 및 데메클로사이클린). 추가의 예로서는 사이클로세린, 뮤피로신, 투베린 암포마이신, 바시트라신, 카프레오마이신, 콜리스틴, 엔듀라시딘, 엔비오마이신 및 2,4-디아미노피리미딘(예를 들어, 브로디모프림)을 포함한다.
본 발명의 면역원성 조성물과 함께 사용될 수 있는 항바이러스 제제로서는 비-뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제, 뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제, 단백질 분해 효소 억제제 및 융합 억제제를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 하나의 구체예에서, 항바이러스 제제는 아만타딘, 오셀타미비르 포스페이트, 리만타딘 및 자나미비르로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 구체예에서, 항바이러스 제제는 딜라비르딘, 에파비렌즈 및 네비라핀으로 이루어진 군으로부터 선택되는 비-뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제이다. 다른 구체예에서, 항바이러스 제제는 아바카비르, 디다노신, 엠트리시타빈, 라미부딘, 스타부딘, 테노포비르 DF, 잘시타빈 및 지도부딘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제이다. 다른 구체예에서, 항바이러스 제제는 암프레나비르, 아타자나비르, 포삼프레나브, 인디나비르, 로피나비르, 넬피나비르, 리토나비르 및 사퀴나비르로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질 분해 효소 억제제이다. 다른 구체예에서, 항바이러스 제제는 융합 억제제 예를 들어, 엔푸비르티드이다. 뿐만 아니라, 본 발명의 면역원성 조성물과 함께 사용되는 항바이러스 제제의 비 제한적인 예로서는 다음과 같은 것들을 포함한다: 리팜피신, 뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제(예를 들어, AZT, ddT, ddC, 3TC, d4T), 비-뉴클레오시드 역 전사 효소 억제제(예를 들어, 델라비르딘 에파비렌즈, 네비라핀), 단백질 분해 효소 억제제(예를 들어, 아프레나비르, 인디나비르, 리토나비르 및 사퀴나비르), 이독수리딘, 시도포비르, 아시클로비르, 간시클로비르, 자나미비르, 아만타딘 및 팔리비주맵. 항바이러스 제제의 다른 예로서는 아세만난; 아시클로비르; 아시클로비르 소듐; 아데포비르; 알로부딘; 알비르셉트 수도톡스; 아만타딘 하이드로클로라이드(시메트렐(SYMMETREL)™); 아라노틴; 아릴돈; 아테비리딘 메실레이트; 아브리딘; 시도포비르; 시팜필린; 시타라빈 하이드로클로라이드; 델라비르딘 메실레이트; 데시클로비르; 디다노신; 디속라릴; 에독수딘; 엔비라덴; 엔비록심; 팜시클로비르; 파모틴 하이드로클로라이드; 피아시타빈; 피알루리딘; 포살리레이트; 포스카메트 소듐; 포스포네트 소듐; 간시클로비르; 간시클로비르 소듐; 이독수리딘; 케톡살; 라미부딘; 로부카비르; 메모틴 하이드로클로라이드; 메티사존; 네비라핀; 오셀타미비르 포스페이트(타미플루(TAMIFLU)™); 펜시클로비르; 피로다비르; 리바비린; 리만타딘 하이드로클로라이드(플루마딘(FLUMADINE)™); 사퀴나비르 메실레이트; 소만타딘 하이드로클로라이드; 소리부딘; 스타톨론; 스타부딘; 틸로론 하이드로클로라이드; 트리플루리딘; 발라시클로비르 하이드로클로라이드; 비다라빈; 비다라빈 포스페이트; 비다라빈 소듐 포스페이트; 비록심; 잘시타빈; 자나미비르(리렌자(RELENZA)™); 지도부딘; 및 진비록심을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
5.5.3 본 발명의 접합체 또는 면역원성 조성물을 투여하는 방법
본 발명의 면역원성 조성물은 면역 요법으로 고쳐질 수 있는 질병이나 병태가 발병한 환자, 바람직하게는 포유동물, 더욱 바람직하게는 사람에 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 본원에 개시된 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물은 환자, 바람직하게는 포유동물, 더욱 바람직하게는 사람에, 질병 또는 병태 예를 들어, 약물 중독증에 대한 예방 수단으로서 투여될 수 있다. 다른 구체예에서, 본원에 개시된 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물은 환자, 바람직하게는 사람에 투여되어, 아직 질병이나 병태가 발생하지 않은 개체에 질병이 발병하는 것을 예방하게 된다.
본 발명의 면역원성 조성물은 이 면역원성 조성물에 의해 표적화될 질병 또는 병태를 앓고 있는 개체, 바람직하게는 포유동물, 더욱 바람직하게는 사람에 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 본원에 개시된 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물은 질병 또는 병태에 대한 예방 수단으로서, 개체, 바람직하게는 포유동물, 더욱 바람직하게는 사람에 투여된다.
환자에 투여될 때, 본원에 개시된 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물은, 약학적으로 허용 가능한 비이클을 임의로 포함하는 조성물의 한 성분으로서 투여되는 것이 바람직하다. 본 발명의 조성물은 경구, 비강 내, 흡입, 또는 기타 임의의 편리한 경로 예를 들어, 주입 또는 볼루스 주사, 상피 또는 점막 피부 라이닝(예를 들어, 구강 점막, 직장 및 소장 점막)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있으며, 기타 생물학적 활성 제제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신 투여 또는 국부 투여일 수 있다. 다양한 전달 시스템(예를 들어, 에어로졸, 또는 리포좀, 미소입자, 미소캡슐, 캡슐 내 캡슐화)에 관하여는 공지되어 있으며, 본원에 개시된 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물을 투여하는데 사용될 수 있다.
투여 방법으로서는 비 경구, 피 내, 근육 내, 복강 내, 정맥 내, 피하, 비강 내, 경막 외, 경구, 설 하, 비강 내, 대뇌 내, 질 내, 경피, 직장, 흡입, 또는 특히, 귀, 코, 눈 또는 피부에의 국소 투여에 의한 투여 방법을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 투여 방식은 당 업자의 판단에 따라서 선택된다. 대부분의 경우, 투여로 인해 본 발명의 화합물이나 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 혈류로 방출될 것이다.
특정 구체예에서, 본원에 개시된 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물을 국부 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 이와 같은 국부 투여는 예를 들어, 국부 주입, 국소 도포 예를 들어, 상처 드레싱을 통한 도포, 주사, 카테터, 좌제 또는 임플란트[임플란트는 공극성, 비공극성 또는 겔 재료 예를 들어, 막 예를 들어, 시알라스틱 막(sialastic membrane) 또는 섬유임]를 통해서 가능하다.
임의의 구체예에서, 본원에 개시된 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물을 심실 내, 초 내 및 경막 외 주사를 포함하는 임의의 적당한 경로에 의해서 중추 신경계에 도입하는 것이 바람직할 수 있다. 심실 내 주사는 예를 들어, 옴마야(Ommaya) 용기와 같은 용기에 부착된 심실 내 카테터에 의해 촉진될 수 있다.
예를 들어, 흡입기나 분무기, 그리고 에어로졸화 제제를 포함하는 제형을 이용하거나, 플루오르화탄소 또는 합성 폐 내 계면 활성제 중 관류법을 통한 폐 내 투여 방법도 사용될 수 있다. 임의의 구체예에서, 본원에 개시된 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물은 통상의 결합제 및 비이클 예를 들어, 트리글리세라이드를 포함하는 좌제로서 제형된다.
다른 구체예에서, 본원에 개시된 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물은 소포 특히, 리포좀 내에 내포되어 전달된다[Langer, 1990, Science 249:1527 1533; Treat외 다수, Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Bacterial infection, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353 365 (1989); Lopez Berestein, 상동, pp. 317 327; 상동].
다른 구체예에서, 본원에 개시된 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물은 제어 방출 시스템(controlled release system) 내에 포함되어 전달된다[예를 들어, Goodson, Medical Applications of Controlled Release, 상동, vol. 2, pp. 115 138 (1984) 참조]. 이와 같은 제어 방출 시스템의 예에 관하여는 문헌[Langer, 1990, Science 249: 1527 1533]에 논의되어 있으며, 이것들을 사용할 수 있다. 하나의 구체예에서, 펌프를 사용할 수 있다[Langer, 상동; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 ; Buchwald외 다수, 1980, Surgery 88:507; Saudek외 다수, 1989, N. Engl. J. Med. 321 :574]. 다른 구체예에서, 중합체 재료를 사용할 수 있다[Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61 ; 및 Levy외 다수, 1985, Science 228:190; During외 다수, 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard외 다수, 1989, J. Neurosurg. 71 :105]. 특정 구체예에서, 본원에 개시된 접합체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 본 발명의 면역원성 조성물을 포함하는 제어 방출 시스템은 예방, 치료 및/또는 관리될 바이러스 감염 부위의 근접한 부위에 배치된다. 이와 같은 구체예에 의하면, 감염 부위에 인접한 부위에 제어 방출 시스템을 배치하면, 전신 투여될 때 필요한 조성물의 투여량 중 일부만이 투여된다.
5.5.4. 투여량과 투여 횟수
질병이나 병태를 예방, 치료 및/또는 관리하는데 효과적일, 본 발명의 접합체의 양 또는 이 접합체를 포함하는 면역원성 조성물의 양은 표준적인 임상 기술에 의해 측정될 수 있다. 시험관 내 또는 생체 내 검정법은 임의로는 최적의 투여량 범위를 확인하는 것을 돕는데 사용될 수 있다. 적용될 정확한 투여량은 또한 예를 들어, 투여 경로, 치료될 질병 또는 병태의 종류, 그리고 질병이나 병태의 심각성에 따라서 달라질 것이며, 또한 당 업자의 판단과 환자나 개체의 각 상태에 따라서 결정되어야 한다.
접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체, 또는 본 발명의 면역원성 조성물의 예시적인 투여량은 샘플 중량 또는 개체 체중 1㎏당 밀리그램 또는 마이크로그램의 양을 포함한다[예를 들어, 약 1㎍/㎏?약 500㎎/㎏, 약 5㎍/㎏?약 100㎎/㎏, 또는 약 1?약 50㎍/㎏]. 특정 구체예에서, 1일 투여량은 50㎎ 이상, 75㎎ 이상, 100㎎ 이상, 150㎎ 이상, 250㎎ 이상, 500㎎ 이상, 750㎎ 이상 또는 1g 이상이다.
하나의 구체예에서, 투여량은 농도 0.01?5000mM, 1?300mM, 10?100mM 및 10mM?1M이다. 다른 구체예에서, 투여량은 농도 5μM 이상, 10μM 이상, 50μM 이상, 100μM 이상, 500μM 이상, 1mM 이상, 5mM 이상, 10mM 이상, 50mM 이상, 100mM 이상, 또는 500mM 이상이다.
하나의 구체예에서, 투여량은 농도 0.01?5000mM, 1?300mM, 10?100mM 및 10mM?1M이다. 다른 구체예에서, 투여량은 농도 5μM 이상, 10μM 이상, 50μM 이상, 100μM 이상, 500μM 이상, 1mM 이상, 5mM 이상, 10mM 이상, 50mM 이상, 100mM 이상, 또는 500mM 이상이다. 특정 구체예에서, 투여량은 환자 체중을 기준으로 0.25㎍/kg 이상, 바람직하게는, 0.5㎍/kg 이상, 1㎍/kg 이상, 2㎍/kg 이상, 3㎍/kg 이상, 4㎍/kg 이상, 5㎍/kg 이상, 6㎍/kg 이상, 7㎍/kg 이상, 8㎍/kg 이상, 9㎍/kg 이상, 또는 10㎍/kg 이상, 25㎍/kg 이상, 바람직하게는, 50㎍/kg 이상, 100㎍/kg 이상, 250㎍/kg 이상, 500㎍ 이상, 1mg/kg 이상, 5mg/kg 이상, 6mg/kg 이상, 7mg/kg 이상, 8mg/kg 이상, 9mg/kg 이상 또는 10mg/kg 이상이다.
다른 구체예에서, 투여량은 10?20㎍, 20?50㎍, 50?75㎍, 75?100㎍, 100?200㎍, 200?300㎍, 300?400㎍, 400?500㎍, 500?600㎍, 600?700㎍, 700?800㎍, 800?900㎍ 또는 900?1000㎍ 이상의 단위 투여량이다. 몇몇 구체예에서, 투여량은 5㎎, 바람직하게는 10㎎, 50㎎, 100㎎, 150㎎, 200㎎, 250㎎, 300㎎, 350㎎, 400㎎, 500㎎, 550㎎, 600㎎, 650㎎, 700㎎, 750㎎, 800㎎ 이상의 단위 투여량이다. 다른 구체예에서, 투여량은 약 5?약 100㎎, 바람직하게는, 약 100㎎?약 200㎍, 약 150?300㎎, 약 150?약 400㎎, 250㎍?약 500㎎, 약 500?약 800㎎, 약 500?약 1000㎎ 또는 약 5?약 1000㎎의 단위 투여량이다.
임의의 구체예에서, 경구 투여에 적당한 투여량 범위는, 체중 1㎏당 하루 약 0.001?약 500㎎의 본 발명의 접합체, 항체 또는 면역원성 조성물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다. 본 발명의 특정 구체예에서, 경구 투여량은 체중 1㎏당 하루 약 0.01?약 100㎎, 체중 1㎏당 하루 약 0.1?약 75㎎, 또는 체중 1㎏당 하루 약 0.5?약 5㎎이다. 본원에 개시된 투여량은 투여된 총량을 의미하는데; 다시 말해서, 만일 하나 이상의 화합물이 투여되면, 몇몇 구체예에서, 투여량은 투여된 총량에 해당한다. 특정 구체예에서, 경구 투여 조성물은 중량을 기준으로 하여 본 발명의 조성물을 약 10?약 95% 함유한다.
정맥 내(i.v.) 투여에 적당한 투여량 범위는, 체중 1㎏당 하루 약 0.01?약 100㎎, 체중 1㎏당 하루 약 0.1?약 35㎎, 그리고 체중 1㎏당 하루 약 1?약 10㎎이다. 몇몇 구체예에서, 비강 내 투여에 적당한 투여량 범위는 체중 1㎏당 하루 약 0.01pg?약 1㎎이다. 좌제는 일반적으로 본 발명의 화합물을 체중 1㎏당 하루 약 0.01?약 50㎎ 함유하며, 활성 성분은 중량을 기준으로 하여 약 0.5?약 10% 포함한다.
피 내, 근육 내, 복강 내, 피하, 경막 외, 설 하, 대뇌 내, 질 내, 경피 투여나 흡입에 의한 투여에 있어서 추천되는 투여량은 체중 1㎏당 하루 약 0.001?약 500㎎이다. 국소 투여에 적당한 투여량은 투여 영역에 따라서, 약 0.001?약 50㎎인 투여량을 포함한다. 유효 투여량은 시험관 내 또는 동물 모델 테스트 시스템을 바탕으로 하여 작성한 투여량-반응 곡선으로부터 추론될 수 있다. 이와 같은 동물 모델 및 시스템은 당 업계에 널리 공지되어 있다.
다른 구체예에서, 개체에는 예방학적 또는 치료학적 유효량만큼의 본 발명의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물이 1회 이상 투여되는데, 이 경우, 예방학적 또는 치료학적 유효량은 각각의 투여시마다 동일하지 않다. 다른 구체예에서, 개체에는 예방학적 또는 치료학적 유효량만큼의 본 발명의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물이 1회 이상 투여되는데, 이 경우, 상기 개체에 투여되는 예방학적 또는 치료학적 유효량은 치료가 진행됨에 따라서 예를 들어, 0.01㎍/㎏, 0.02㎍/㎏, 0.04㎍/㎏, 0.05㎍/㎏, 0.06㎍/㎏, 0.08㎍/㎏, 0.1㎍/㎏, 0.2㎍/㎏, 0.25㎍/㎏, 0.5㎍/㎏, 0.75㎍/㎏, 1㎍/㎏, 1.5㎍/㎏, 2㎍/㎏, 4㎍/㎏, 5㎍/㎏, 10㎍/㎏, 15㎍/㎏, 20㎍/㎏, 25㎍/㎏, 30㎍/㎏, 35㎍/㎏, 40㎍/㎏, 45㎍/㎏ 또는 50㎍/㎏까지 증가한다. 다른 구체예에서, 개체에는 예방학적 또는 치료학적 유효량만큼의 본 발명의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물이 1회 이상 투여되는데, 이 경우, 투여량은 치료가 진행됨에 따라서 예를 들어, 0.01㎍/㎏, 0.02㎍/㎏, 0.04㎍/㎏, 0.05㎍/㎏, 0.06㎍/㎏, 0.08㎍/㎏, 0.1㎍/㎏, 0.2㎍/㎏, 0.25㎍/㎏, 0.5㎍/㎏, 0.75㎍/㎏, 1㎍/㎏, 1.5㎍/㎏, 2㎍/㎏, 4㎍/㎏, 5㎍/㎏, 10㎍/㎏, 15㎍/㎏, 20㎍/㎏, 25㎍/㎏, 30㎍/㎏, 35㎍/㎏, 40㎍/㎏, 45㎍/㎏ 또는 50㎍/㎏까지 증가한다.
임의의 구체예에서, 개체에는 예방학적 또는 치료학적 유효량만큼의 본 발명의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물이 1회 이상 투여되는데, 이 경우, 유효 투여량만큼 투여하면 체 내 햅텐 또는 순환 항원의 수준을 20 이상?25%, 바람직하게는, 25 이상?30%, 30 이상?35%, 35 이상?40%, 40 이상?45%, 45 이상?50%, 50 이상?55%, 55 이상?60%, 60 이상?65%, 65 이상?70%, 70 이상?75%, 75 이상?80%, 또는 85% 이상까지 억제 또는 감소시킨다. 다른 구체예에서, 개체에는 유효량만큼의 본 발명의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물이 1회 이상 투여되는데, 이 경우, 유효 투여량만큼 투여하면 질병 또는 병태 예를 들어, 약물 중독증의 중증도를 20 이상?25%, 바람직하게는, 25 이상?30%, 30 이상?35%, 35 이상?40%, 40 이상?45%, 45 이상?50%, 50 이상?55%, 55 이상?60%, 60 이상?65%, 65 이상?70%, 70 이상?75%, 75 이상?80%, 또는 85% 이상까지 억제 또는 감소시킨다.
다른 구체예에서, 개체에는 유효량만큼의 본 발명의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물이 1회 이상 투여되는데, 이 경우, 유효 투여량만큼 투여하면 니코틴 또는 코카인 중독증을 20 이상?25%, 바람직하게는, 25 이상?30%, 30 이상?35%, 35 이상?40%, 40 이상?45%, 45 이상?50%, 50 이상?55%, 55 이상?60%, 60 이상?65%, 65 이상?70%, 70 이상?75%, 75 이상?80%, 또는 85% 이상까지 억제 또는 감소시킨다. 다른 구체예에서, 개체에는 유효량만큼의 본 발명의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물이 1회 이상 투여되는데, 이 경우, 유효 투여량만큼 투여하면, 접합체에 의해 표적화되는, 개체 내 다른 세포, 조직 또는 기관에 대한 항원의 기능이 20 이상?25%, 바람직하게는, 25 이상?30%, 30 이상?35%, 35 이상?40%, 40 이상?45%, 45 이상?50%, 50 이상?55%, 55 이상?60%, 60 이상?65%, 65 이상?70%, 70 이상?75%, 75 이상?80% 또는 85% 이상까지 억제 또는 감소한다.
질병 또는 병태, 또는 이와 관련된 질병이나 병태의 예방, 치료 및/또는 관리에 사용된 바 있거나 현재 사용되고 있는 본 발명의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물 이외의 예방 제제 또는 치료 제제의 투여량은, 임상학자가 입수할 수 있는 참고 문헌 예를 들어, 문헌[Physicians' Desk Reference (55th ed. 2001)]을 참고로 하여 측정될 수 있다. 바람직하게, 본 발명의 하나 이상의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물을 함께 사용할 때에는, 질병 또는 병태를 예방, 치료 및/또는 관리하는데 사용된 바 있거나 또는 현재 사용되고 있는 양보다 낮은 투여량으로 투여할 수 있다.
전술한 투여 스케쥴은 오로지 예시의 목적을 위해 제공된 것으로서 제한적인 것으로 간주하여서는 안 된다. 당 업자는 모든 투여량이 본 발명의 범위 내에 포함된다는 사실을 용이하게 파악할 것이다.
5.5.5 키트
본 발명은 본 발명의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물로 충전된 하나 이상의 용기를 포함하는 약학적 팩 또는 키트를 제공한다. 이 키트는 전술한 방법에 사용될 수 있다. 특히, 상기 키트는 질병 또는 병태 예를 들어, 약물 중독증(예를 들어, 코카인 또는 니코틴 중독증)의 예방, 치료 및/또는 관리에 사용될 수 있다.
하나의 구체예에서, 키트는 하나 이상의 용기에 본 발명의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물을 포함한다. 다른 구체예에서, 키트는 하나 이상의 용기에 본 발명의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물을 포함하며, 또한 하나 이상의 용기에 하나 이상의 기타 예방 제제 또는 치료 제제를 포함한다. 특정 구체예에서, 키트는 본 발명의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물 사용에 관한 지침과, 본 발명의 접합체, 이 접합체에 반응하여 생성된 항체 또는 본 발명의 면역원성 조성물의 부작용에 관한 설명, 그리고 구체적인 투여 경로에 관한 투여량 정보를 추가로 포함한다. 약품 또는 생물학적 생산물의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 당국에 의해 규정된 안내문이 이와 같은 용기(들)에 포함될 수도 있는데, 여기서, 상기 안내문은 사람에 투여할 수 있는 것으로서 제조, 사용 또는 판매할 수 있다고 당국에 의해 승인을 받았음을 알려주는 것이다.
5.5.6 중독 약물에 대한 면역 반응을 유도하기 위한 면역원성 조성물
본 섹션에서는 약물(코카인 또는 니코틴) 햅텐-담체 접합체를 사용한 실험을 예로 들어 본 발명의 면역원성 조성물을 예시하고 있다. 본 섹션에서 교시하는 바를, 항원-담체 및 항원이나 햅텐 중 임의의 것을 포함하는 햅텐-담체 접합체를 사용할 경우에 각각 적용시켜, 전술한 바와 같은 항원 또는 햅텐 중 임의의 것, 또는 면역 반응 특히, 개선된 면역 반응에 대한 기타 임의의 항원에 대해 면역 반응을 일으키도록 만들 수 있다.
본 발명의 약물-접합체, 그리고 본 발명의 조성물은 또한 약물 중독증이나 약물 의존증을 치료하기 위한 치료제나 예방제로서 사용될 수도 있다. 예방제로서 사용되는 경우, 약물-접합체 또는 이 약물-접합체를 포함하는 면역원성 조성물은 약물에 노출시켜 항-약물 항체를 생성하기 전에 포유동물에 투여될 수 있다. 생성된 항-약물 항체는 포유 동물의 체 내에 존재하여 면역원성 조성물을 투여한 이후에 도입된 임의의 약물과 결합하게 되므로, 이 약물에 중독될 가능성이 최소화되거나 또는 예방될 것이다.
본 발명의 면역원성 조성물은 개체 내에서 백신으로서 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물은 약물/햅텐에 특이적인 항체가 충분히 고 역가로 생산되어, 추후 약물/햅텐을 투여하였을 때, 상기 항체가 약물의 중독성을 감소시킬 수 있도록 유도할 수 있는 약물/햅텐-담체 접합체를 하나 이상 함유할 수 있다. 햅텐-담체 접합체에 대한 예상 면역 반응은 항-햅텐 및 항-담체 항체 둘 다가 형성되는 것이다. 충분한 양의 항-약물 특이 항체가 유도되어, 이 항체의 양이, 백신화 후 도입된 약물이나 공격을 중화하는 양으로 유지될 때, 치료 수준에 도달하게 되는 것이다. 본 발명의 치료 방법은 처음의 백신화 및 그 외의 부스팅(boosting) 이후 항체 생산에 충분한 시간을 필요로 한다. 뿐만 아니라, 최적의 항-약물 백신은 햅텐으로서 약물과 담체를 최적으로 조합하여 포함하는 하나 이상의 약물/햅텐 담체의 접합체를 함유하므로, 항-약물 항체는 치료 효과가 최적의 수준에 도달할 수 있도록 생산되는데, 다시 말해서, 추후 수 개월 내에 선택된 약물로 시험(challenge)하였을 때 견딜 수 있도록 충분히 높은 역가로 생체 내에서 유지된다는 의미이다. 더욱 구체적으로, 항체 역가는 약물에 추후 노출될 때 개체에 따라서 약 1년 이상, 더욱 일반적으로는 3개월 이상 동안 유효 반응을 제공하도록 충분히 높게 유지된다. 이와 같은 최적의 조성물은 햅텐-담체 접합체, 부형제 및 임의로는 애쥬반트로 이루어져 있다.
니코틴을 이용하는 치료법에서 사용될 때, 본 발명은 햅텐-담체 접합체를 규정하는데, 이 경우, 상기 햅텐은 니코틴 또는 니코틴 유도체로서, 포유동물 특히, 사람을 면역화하는데 사용되어, 유리 약물과 결합하여 약물이 뇌 내 보상 시스템(reward system)으로 이동하는 것을 막아줌으로써, 중독되어 약물을 섭취하는 행동(예를 들어, 담배를 피우는 행동)을 없애줄 수 있는 항-니코틴 항체를 유도할 수 있다. 니코틴은 도파민 방출량을 증가시키는 뇌 내 니코틴 아세틸콜린 수용체의 알파-서브유닛에 결합하는 것으로 생각된다. 또한, 뇌 내 니코틴 아세틸콜린 수용체의 수가 증가하면, 니코틴의 생리학적 의존증도 증가하는 것으로 생각된다. 코카인과 관련하여 상기 언급한 바와 같이, 항-니코틴 항체는 아마도 혈뇌 장벽을 넘어서 니코틴이 뇌에 분포하는 것을 제한하여, 니코틴의 약리학적 효과를 감소시키는 것으로 생각된다. 그러나, 니코틴을 사용하는 경우 항체가 개입하면, 코카인을 사용하는 경우에 비하여 몇 가지 이점을 가질 수 있다. 예를 들어, 니코틴 전달에 있어서 표준화 지수(level of standardization)가 몇 개 존재하는데, 즉, 각 담배는 니코틴을 평균 9㎎ 함유하는데, 흡연시에는 1?3㎎이 효과적으로 분배된다. 뿐만 아니라, 니코틴의 혈장 내 최고 농도는 25?50ng/㎖로서, 이는 코카인의 혈장 내 최고 농도(0.3?1㎍/㎖)보다 훨씬 낮다. 이로써, 친화성이 중간 정도로 큰 항체가 개입하게 될 이상적인 기회가 제공될 것이다.
본 발명의 면역원성 햅텐-담체 접합체 조성물을 이용하는 초기 백신화를 통하여, 생체 내 햅텐-특이 항체의 역가가 증가하게 된다. 백신화된 개체 혈장을 대상으로 하는 정기적 테스트는 각각의 유효 투여량을 측정하는데 유용하다. 역가 수준은 정기적 부스팅을 통해 증가하여 유지된다. 이와 같은 요법은 현재 실행되고 있는 약물 갱생 프로그램(상담 포함)과 함께 수행될 것으로 예상된다. 뿐만 아니라, 본 발명의 치료 조성물은 하나의 약물 또는 수 개의 약물을 동시 또는 연속적으로 투여하는 것을 목표로 할 수 있으며, 다른 치료제와도 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 치료용 햅텐-담체 접합체 조성물과 방법은 부작용없이, 종래의 약리학적 접근 방법 및 전술한 "단기간" 수동적 면역화를 수행함과 아울러 이용되어, 치료의 전반적인 효능을 강화할 수 있다.
본 발명의 면역원성 햅텐-담체 접합체 조성물은 하나 이상의 햅텐 분자를, 담체를 함유하는 T 세포 에피토프와 커플링하여, T 세포를 자극할 수 있는(면역원성인) 햅텐-담체 접합체를 형성함으로써 제조되는데, 여기서, 상기 T 세포가 자극되면, T 세포가 증식하게 되고, 또한 관련 있는 B 세포를 활성화하여 특이적인 항체 생산을 촉진하는 매개 인자가 상당 수준으로 방출된다.
관심 있는 항체는 햅텐-담체 접합체(햅텐-담체 복합체라고도 칭함) 중 햅텐 부분에 특이적이다. 동일한 약물(교차-면역화; cross-immunization) 또는 다수의 약물(공동-면역화; co-immunization)에 대한 접합체를 조합하여 함유하는 치료용 조성물에 관하여 개시되어 있다. 이와 같은 다수의 약물 접합체의 공 혼합물은 다중 약물 남용의 치료에 특히 유용하다.
본 발명에 의한 접합에 적당한 약물을 선택함에 있어서, 당 업자는 고 항체 역가를 유도할 수 있는 특성을 갖는 약물을 선택할 것이다. 그러나, 만일 선택된 분자가 개체에 대해 내인성인 분자와 유사하면, 이와 같은 분자에 대해 생성된 항체는 체 내 다수의 상이한 분자들과 교차 반응을 하여, 원치 않는 효과를 나타낼 수 있었다. 그러므로, 햅텐으로서 선택될 약물(약물/햅텐)은 사람의 체 내에서 일반적으로 발견되는 분자에 대해 항체가 생성되는 것을 막는데 충분한 크기를 가지고 또한 충분히 외래성이어야 한다. 이와 같은 이유로, 예를 들어, 알콜은 본 발명의 치료제로서 적당하지 않을 것이다. 치료 조성물에 대해서 생성된 항체는 매우 특이적이고, 혈류 또는 점막 또는 이 둘 다에서 약물을 중화하는데 충분한 양으로 존재한다. 본 발명을 제한하지 않았을 때, 치료용 조성물로서 적당한 약물로서는 다음과 같은 것들이 있다(중요도의 순서로 나열한 것은 아님):
할루시노겐 예를 들어, 메스칼린 및 LSD;
카나비노이드 예를 들어, THC;
자극제 예를 들어, 암페타민, 코카인, 펜메트라진, 메틸페니데이트;
니코틴;
우울제 예를 들어, 논바비투레이트(예를 들어, 브롬화물, 클로랄 수화물 등), 메타쿠알론, 바비투레이트, 디아제팜, 플루라제팜, 펜사이클리딘 및 플루옥세틴;
아편 및 이의 유도체 예를 들어, 헤로인, 메타돈, 몰핀, 메페리딘, 코데인, 펜타조신 및 프로폭시펜; 그리고
"디자이너 약물" 예를 들어, "엑스터시".
5.5.6.1 애쥬반트의 사용
본 발명을 수행함에 있어서, 예를 들어, 애쥬반트와 면역원성 조성물을 함께 투여할 때, 특이적인 항원 또는 햅텐에 대한 면역 반응을 강화하는데 애쥬반트를 사용할 수 있으며, 이 경우, 면역 반응은 등량으로 투여된, 애쥬반트를 포함하지 않는 면역원성 조성물에 의해 유도된 면역 반응보다 더 크고, 이 애쥬반트는 공동 투여된 항원에 대한 면역 반응의 특정한 유형 또는 군을 유도하는데 사용된다. 본 발명의 애쥬반트를 공동 투여할 때의 "유효량"이란, 공동 투여된 면역원성 조성물에 대한 면역 반응을 증강시켜, 예를 들어, 면역원성 조성물이 효과적인 면역 반응을 일으키는데 필요한 양보다 더욱 낮거나 적은 투여량만큼 필요한 양일 것이다.
본원에 사용된 "공동 투여된"이란 용어는, 예를 들어, 애쥬반트와 면역원성 조성물이 동일한 조성물 중에 존재하거나, 별도의 조성물 중에 포함되어 거의 동시에 투여되되 상이한 부위에 투여될 때, 그리고 애쥬반트와 면역원성 조성물이 별도의 조성물에 포함되어 상이한 시점에 투여될 때(상이한 부위에 전달하는 것 포함), 이 애쥬반트 및 면역원성 조성물이 같은 시간 또는 동시에 투여되는 것을 의미한다. 예를 들어, 애쥬반트는 동일하거나 상이한 부위에 면역원성 조성물을 전달하기 전 또는 후에 전달될 수 있다. 애쥬반트 전달 시간과 면역원성 조성물 전달 시간 사이의 타이밍은 약 수 분 간격에서 수 시간 간격 또는 수일 간격일 수 있다.
담체의 효능을 마스킹(masking)하지 않는 임의의 애쥬반트는 본 발명의 면역원성 조성물에 유용한 것으로 간주한다[Edelman (1980) Rev. Infect. Dis. 2:370-373]. 초기 실험은 강력한 애쥬반트 CFA로서 사용된, 코카인 중독증에 대한 치료 백신의 실행 가능성을 입증하는 것을 목적으로 하였다. 그러나, CFA는 사람의 경우에는 바람직하지 않다. 현재 사람에 사용하도록 허가받은, 유용한 애쥬반트로서는 백반 예를 들어, 수산화알루미늄(미국 뉴저지 뉴브런스위크 소재, 스펙트럼 케미컬 Mtg. 코포레이션(Spectrum Chem Mtg. Corp.)) 또는 인산알루미늄(스펙트럼)이 있다. 통상적으로, 백신은 백반 상에 흡착되는데, 이 경우 용해도는 매우 제한적이 된다. 쥣과 동물 모델에서 얻은 예비 데이터를 통하여, 백반이 강력한 항-코카인 항체 반응을 유도할 수 있으며, MF59(캘리포니아 에머빌 소재, 카이론(Chiron)) 또는 RIBI 애쥬반트도 적당하다.
담체 단백질로서 CTB를 사용하여 효과적으로 면역화할 경우에는 강력한 애쥬반트를 필요로 하지 않는다는 사실에 주목해야 할 것이다. 고 역가의 항-코카인 항체 반응은 애쥬반트로서 백반을 사용하거나 또는 어떠한 애쥬반트도 첨가하지 않은 상태에서 CTB-코카인 접합체로 면역화함으로써 유도되었다. CTB 이외의 담체에 있어서, 당업자는 필요하다면 적당한 애쥬반트를 결정할 수 있을 것이다.
애쥬반트를 사용하면 면역화 프로토콜에 있어서 종종 유익한 결과를 얻을 수 있다. 면역 반응에 대한 백반의 기여도를 평가하기 위하여, 마우스에 염수 중 10㎍의 코카인-CTB PS-5.53을 복강 내 투여하거나 또는 이를 백반 위에 흡착시켜 투여함으로써 상기 마우스를 면역화하였다. 27일 경과시, 동일한 프로토콜을 이용하여 마우스를 부스팅하였다. 두 동물 그룹에 있어서, 높은 수준의 코카인-특이 항체를 43일째 되는 날까지 검출하였다[백반을 사용하지 않았을 경우의 역가는 14687이었고, 백반을 사용하였을 경우의 역가는 16775였음]. 백반 상에 흡착된 코카인-CTB를 사용한 면역화는 또한 피하 투여 경로 또는 근육 내 투여 경로에 의할 경우에 효율적인 것으로 파악되었다. 그러므로, 상기 항원을 사용할 때는 백반을 사용할 수 있다.
백반 애쥬반트를 첨가하면 주사된 단백질에 대한 면역 반응을 증가시켜, 항체 역가가 충분하게 되었는데, 이 경우에는 약물-담체 접합체를 주사한 후의 항체 반응에 대한 백반의 기여도를 테스트해야 한다. 백반의 기여도를 평가하기 위하여, 이 마우스를 10㎍의 코카인-rCTB PS-5.189로 면역화하였는데, 이 경우, 상기 CTB는 박테리아 내에서 재조합 방법으로 발현된 것이었다. 이 마우스에 염수 중 상기 코카인-rCTB PS-5.189를 근육 내 주사하거나 또는 이를 백반 상에 흡착시켜 투여하였으며, 14일째 되는 날에 상기 과정을 다시 실시하였다. 이와 같은 다량의 코카인-CTB 접합체에 있어서, ELISA에 의해 확인되는 바와 같은 항-코카인 항체를 생산하기 위해서는 백반을 첨가할 필요가 있다.
5.5.6.2 부형제 및 보조제
본 발명의 면역원성 조성물은 임의로는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제 예를 들어, 멸균 수, 염 용액 예를 들어, 염수, 인산나트륨, 염화나트륨, 알콜, 아라비아 고무, 식물성 오일, 벤질 알콜, 폴리에틸렌 글리콜, 젤라틴, 만니톨, 탄수화물, 스테아르산 마그네슘, 점성 파라핀, 지방산 에스테르, 하이드록시 메틸 셀룰로스 및 완충액(이에 한정되는 것은 아님)을 함유할 수도 있다. 기타 적당한 부형제가 당업자에 의해 사용될 수 있다. 치료 조성물은 임의로는 하나 이상의 보조제 예를 들어, 분산 매질, 코팅 예를 들어, 지질 및 리포좀, 계면 활성제 예를 들어, 습윤제 및 유화제, 윤활제, 보존제 예를 들어, 항 박테리아제 및 항 진균제, 안정화제 및 당 업자에게 널리 공지된 기타 제제를 함유할 수도 있다. 본 발명의 조성물은 또한 첨가하였을 때 약물의 치료 특성을 증강시키거나 투여 방식을 바꿀 수 있도록 만드는 추가의 애쥬반트, 제제 및/또는 약리학적으로 허용 가능한 비활성 부형제를 함유할 수도 있다.
전술한 바와 같이 생산된 고순도의 햅텐-담체 접합체를, 사람을 대상으로 하는 요법에 적당한 본 발명의 면역원성 조성물 중에 첨가하여 제제화할 수 있다. 만일 본 발명의 치료 조성물이 주사(즉, 피하 주사)에 의해 투여되면, 고순도의 햅텐-담체 접합체는 약학적으로 허용 가능한 pH(즉, pH 약 4?9)의 수용액 중에서 가용성이어서 본 발명의 조성물이 액체의 형태를 가져 용이하게 투여될 수 있는 것이 바람직하다. 그러나, 고순도의 햅텐-담체 접합체가 수용액 중에 현탁액으로서 존재하는 조성물을 투여할 수도 있는데, 이 경우, 상기 현탁액은 본 발명의 범위 내에 포함된다. 임의로, 본 발명의 조성물은 또한 약학적으로 허용 가능한 부형제, 애쥬반트 및 보조제 또는 보충 활성 화합물을 포함하기도 한다. 투여 방식에 따라서, 임의의 성분이 치료 조성물의 바람직한 특성 예를 들어, 적당한 유동성, 원치 않는 미생물의 활동을 예방하는 특성, 증강된 생체 이용 가능성 또는 연장된 흡수성을 보장해줄 것이다.
본 발명의 면역원성 조성물은 제조, 저장, 분배 및 사용 조건 하에서 멸균 및 안정되어야 하고, 미생물 예를 들어, 박테리아 및 진균의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 조성물의 완전성(integrity)을 유지하기 위해 본 발명의 치료 조성물을 제조하는데 바람직한 수단으로서는, 접합체와 약학 부형제의 제제를 제조하여, 조성물이 사용 직전에 이 부형제 또는 보조제 예를 들어, 멸균 수 중에서 재구성되는 동결 건조 분말의 형태를 가질 수 있도록 만드는 것이 있다. 멸균 주사 용액 제조용 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법으로서는 미리 멸균 여과한 용액으로부터 활성 성분과 원하던 임의의 부가 성분의 분말을 생산해 내는, 진공 건조법, 동결 건조법 또는 스핀 건조법이 있다.
본 발명의 활성 화합물은 통상의 생약학적 방법에 의해서 가공되어, 환자 예를 들어, 사람을 포함하는 포유동물에 투여하는 치료 조성물로 생산될 수 있다. 바람직한 투여 방식으로서는 비강 내, 기관 내, 경구, 진피 및/또는 주사 투여 방식이 있다. 특히 적당한 병행 투여 방식은 비강 내 부스팅과 초기 주사를 포함한다.
비 경구 투여에 있어서, 특히 바람직한 투여형으로서는 주사, 멸균 용액, 바람직하게는 유질 용액 또는 수용액, 그리고 현탁액, 유액 또는 임플란트 예를 들어, 좌제가 있다. 앰플은 편리한 단위 투여형이다. 장내 투여의 경우, 특히 적당한 투여형으로서는 정제, 당의정, 액체, 현탁액, 액적, 좌제 또는 캡슐이 있는데, 이것들은 장내 코팅이 되어 있을 수 있다. 가당 비이클이 사용된 시럽 또는 엘릭시르 등이 사용될 수 있다.
지속 방출 조성물 또는 유도 방출 조성물은 예를 들어, 리포좀 또는 예를 들어, 마이크로캡슐화, 다중 코팅 등에 의해 활성 화합물(접합체)이 별도로 분해될 수 있는 코팅으로 보호된 형태로 제형화될 수 있다. 뿐만 아니라, 신규의 화합물을 동결 건조하여 예를 들어, 주사용 제품을 제조하는데 사용되는 동결 건조물의 형태로서 생산하여 사용할 수도 있다.
국소 투여의 경우, 국소 투여에 적합한 담체를 포함하고, 바람직하게는, 동 점성 계수가 물의 것보다 큰 반고체 또는 고체 형태에 대해 점성인 분사 불가능한 형태로서 사용될 수 있다. 적당한 제형으로서는 원하는 경우, 살균되거나 보조제와 혼합되는 용액, 현탁액, 유액, 크림, 연고 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 국소 투여의 경우, 활성 화합물이, 바람직하게는, 적당한 부형제 또는 보조제와 함께 포함되어 있는 분사 가능한 에어로졸 제제가 적당하며, 이 제제는 스퀴즈 보틀(squeeze bottle) 내에 포장되거나 또는 가압된 휘발성의 가스 추진제와 함게 포장된다.
본 발명의 조성물 및 방법을 통해서 생성된 항체의 분자량은 150?1,000KDa일 수 있다. 개체가 치료 조성물 중 최적화된 접합체로 백신화된 후 이 개체가 유리 코카인 또는 니코틴에 노출될 때, 유리 코카인 또는 니코틴은 코카인-특이적 또는 니코틴-특이 항체 또는 항체들에 의해 표적화된다. 항체가 생체 내에서 약물을 인지하기 위해서는 약물의 형태나 구조에 변화가 없어야 한다. 본 발명을 제한하는 것은 아니지만, 백신화된 개체가 코카인이나 니코틴에 노출되면 항-약물 항체는 코카인과 니코틴의 효과를 차단할 것으로 생각된다. 3가지 이상의 기작이 차단 활성을 부여하는 것으로 생각된다. 첫 번째, 항체는 혈뇌 장벽을 통과할 수 없다. 그러므로, 코카인이나 니코틴이 항-코카인 항체 또는 항-니코틴 항체에 결합할 때, 이 코카인이나 니코틴은 혈뇌 장벽을 통과하지 않을 것이며, 또한 도파민 운반체에도 영향을 미칠 수 없을 것이다. 두 번째, 항체는 간단한 입체 장해에 의해 약물과 이 약물의 수용체가 결합하는 것을 막는다.
이와 같은 기작은 약물의 비-CNS 효과 중 일부(예를 들어, 심장 독성)을 차단하고, 비-CNS 표적을 포함하는 기타 약물에 대한 항체의 활성을 억제하는 역할을 할 것으로 예측된다. 세 번째, 코카인과 니코틴 둘 다는 효소 분해 및 비 효소 분해로 인하여 비활성 대사 물질을 생성하므로 반감기가 비교적 짧다. 코카인과 니코틴은 특히 매우 작은 약물로서, 이것들은 항체와 가교할 것 같지 않으므로, 상기 약물 중 어느 하나에 대하여 생리학적으로 중요한 면역 복합체를 형성할 가능성은 아주 희박해 보인다.
본 발명을 실행함에 있어서, 점막 도포에 관한 또 다른 구체예가 사용된다. 예를 들어, 점막 면역 반응을 유도 또는 증강하기 위해서 공중합체 미소구를 사용한다. 이와 같이 작은 생분해성 미소구는 본 발명의 접합체를 캡슐화하여 보호하고, 점막 면역계에 의한 흡수를 촉진한다. 상기 미소구는 경구 면역화에 가장 널리 사용되지만, 비강 내 면역화에도 유효한 것으로 보고된바 있다[Walker (1994) Vaccine 12:387-399]. 이러한 점에서, 비활성 중합체 예를 들어, 지름이 1?10㎛인 폴리(락티드-코-글리콜리드)(PLG)가 특히 유용하다[Holmgren외 다수(1994) Am. J. Trop. Med. Hyg. 50:42-54; Serva (1994) Science 265:1522-1524].
바람직한 접합체에 더하여, 항체의 교차 반응성을 최소화하기 위해, 상이한 접합체들과의 교차 면역화를 수행한다. 마우스를 접합체 더욱 구체적으로는, 박테리아 독소 담체 접합체로 프라이밍(priming)한 후, 14일째 되는 날에 상이한 담체 즉, BSA와 커플링된 상호 접합체(reciprocal conjugate)로 부스팅한다. 코카인 접합체 둘 다를 인지하는 항체 분비 B 세포의 하위 세트만이 최대로 자극되어 증식한다. 이들 두 개의 접합체는 코카인 분자와의 부착 지점이 상이하므로, 인지 특이성이 증가하는 것으로 생각된다. 이후, 유도된 항혈청의 특이성을 경쟁 ELISA에 의해 확인한다.
또한, 하나 이상의 접합체를 함유하는 면역원성 조성물은 폴리클로날 항체를 자극하여, 추후 시험에 대한 항체 반응을 증강해준다.
6. 실시예
본 실시예는, rCTB가 단일의 펩티드를 함유할 때 햅텐-담체 접합체 중 햅텐으로서 니코틴을, 담체로서 rCTB를 포함하는 면역원성 조성물의 면역원성이 증강된다는 사실을 입증하는 것이다. 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly을 가지는 시그널 펩티드와 함께 rCTB가 번역된다(도 1). 이와 같은 시그널 서열은 성숙한 CTB 내에 존재하지 않는다. rCTB는 2개의 발현 시스템 즉, 브이.콜레라에 균주 213과 401에서 생산되었다. 213 균주에서 생산되었을 때, rCTB 형태는 길이가 7 아미노산 이하인 시그널 서열을 함유하는 것으로 확인되었다. rCTB가 401 균주에서 발현될 때 안정한 시그널 서열은 확인되지 않았고, 오히려, 아미노 말단부는 천연의 성숙한 CTB 내에 보통 존재하는 트레오닌 대신에 알라닌 잔기였다(도 2). 213 균주로부터 유래하는 rCTB를 함유하는 니코틴-CTB 접합체는 401 균주로부터 유래하는 rCTB를 사용하여 생산한 접합체에 비하여 면역원성이 2배 증가하였는데, 이는 곧, 시그널 펩티드-함유 박테리아 독소가 니코틴-담체 접합체 내 담체로서 사용될 때, 이 독소는 면역원성을 증가시킨다는 사실을 입증해주는 것이다.
7. 균등 범위
당 업자는 통상적인 것에 불과한 실험을 통하여, 본원에 개시된 본 발명의 특정 구체예에 관한 다수의 균등 범위를 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이와 같은 균등 범위는 이하 특허 청구 범위에 의해 포함된다.
본원에 언급된 모든 참고 문헌들은 그 자체로서 참고용으로, 그리고 모든 목적으로 본원에 인용되어 있는 것으로서, 각각의 공보 또는 특허 또는 특허 출원이 모든 목적으로 그 자체로서 참고용으로 인용되어 있다고 특별히, 그리고 개별적으로 언급된 것과 동일한 정도로 인용되어 있다.
본 발명의 범위는 본원에 개시된 특정 구체 예에 의해 한정되는 것은 아니다. 실제로, 본원에 개시된 것들 이외에, 본 발명의 다양한 변형 예가, 전술한 상세한 설명과 첨부된 도면을 통해서 당 업자에게 명백해질 것이다. 이와 같은 변형 예는 첨부된 특허 청구 범위 내에 포함된다.
8. 예시적 구체예
본 발명은 이하 단락에 제시된 비 제한적인 구체 예에 의해 예시될 수 있다.
1. 시그널 펩티드를 함유하는 박테리아 독소 및 항원을 포함하는 면역원성 조성물.
2. 시그널 펩티드를 함유하는 박테리아 독소 및 항원을 포함하는 면역원성 조성물로서, 항원에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 조성물.
3. 시그널 펩티드를 함유하는 박테리아 독소 및 햅텐을 포함하는 면역원성 조성물.
4. 시그널 펩티드를 함유하는 박테리아 독소 및 햅텐을 포함하는 면역원성 조성물로서, 중독 약물에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 조성물.
5. 시그널 펩티드를 함유하는 박테리아 독소 및 니코틴 또는 이의 유도체를 포함하는 면역원성 조성물로서, 니코틴에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 조성물.
6. (i) 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly 또는 이의 C-말단 단편을 포함하는 시그널 펩티드를 가지는 콜레라 독소 B(CTB); 및 (ii) 니코틴 또는 이의 유도체를 포함하는 면역원성 조성물로서, 니코틴에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 조성물.
7. 제6항에 있어서, 상기 니코틴에 대한 면역 반응은 상기 제6항의 면역원성 조성물과 동일하되 상기 시그널 펩티드는 포함하지 않는 면역원성 조성물에 의해 유도된, 니코틴에 대한 면역 반응보다 훨씬 강한 것인 면역원성 조성물.
8. 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 시그널 펩티드를 함유하는 박테리아 독소는 콜레라 독소 B(CTB)인 것인 면역원성 조성물.
9. 제8항에 있어서, 상기 CTB 시그널 펩티드는 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly 또는 이의 C-말단 단편을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
10. 제4항에 있어서, 상기 시그널 펩티드를 함유하는 박테리아 독소는 콜레라 독소 B(CTB)인 것인 면역원성 조성물.
11. 제10항에 있어서, 상기 CTB 시그널 펩티드는 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly 또는 이의 C-말단 단편을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
12. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 박테리아 독소는 이.콜라이 열 불활성 장내 독소 서브유닛 B인 것인 면역원성 조성물.
13. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 박테리아 독소는 디프테리아 독소인 것인 면역원성 조성물.
14. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 박테리아 독소는 백일해 독소인 것인 면역원성 조성물.
15. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 박테리아 독소는 쉬가 독소인 것인 면역원성 조성물.
16. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 박테리아 독소는 슈도모나스 외독소 A인 것인 면역원성 조성물.
17. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 면역원성 조성믈은 애쥬반트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
18. 제17항에 있어서, 상기 애쥬반트는 수산화알루미늄인 것인 면역원성 조성물.
19. 제6항에 있어서, 상기 면역원성 조성물은 애쥬반트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
20. 제19항에 있어서, 상기 애쥬반트는 수산화알루미늄인 것인 면역원성 조성물.
21. 제8항, 제10항 및 제12항 내지 제16항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 박테리아 독소는 자체의 내인성 시그널 펩티드 또는 이의 단편을 함유하는 것인 면역원성 조성물.
22. 제1항 내지 제21항 중 어느 하나의 항에 의한 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체 내에서 면역 반응을 유도하는 방법.
23. 제4항, 제10항 및 제11항 중 어느 하나의 항에 의한 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체 내에서 중독 약물에 대한 면역 반응을 유도하는 방법.
24. 제23항에 있어서, 상기 중독 약물은 니코틴인 것인 방법.
25. 제23항에 있어서, 상기 중독 약물은 코카인인 것인 방법.
26. 제5항에 의한 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체 내에서 니코틴에 대한 면역 반응을 유도하는 방법.
27. 제6항 또는 제7항에 의한 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체 내에서 니코틴에 대한 면역 반응을 유도하는 방법.
28. 제4항, 제10항 및 제11항 중 어느 하나의 항에 의한 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 약물 중독증 또는 약물 의존증의 치료를 필요로 하는 개체 내에서 이를 치료하는 방법.
29. 제28항에 있어서, 상기 약물 중독증 또는 약물 의존증은 니코틴 중독증 또는 니코틴 의존증인 것인 방법.
30. 제28항에 있어서, 상기 약물 중독증 또는 약물 의존증은 코카인 중독증 또는 코카인 의존증인 것인 방법.
31. 제5항에 의한 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 니코틴 중독증 또는 니코틴 의존증의 치료를 필요로 하는 개체 내에서 이를 치료하는 방법.
32. 제6항 또는 제7항에 의한 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 니코틴 중독증 또는 니코틴 의존증의 치료를 필요로 하는 개체 내에서 이를 치료하는 방법.
33. 제4항, 제10항 및 제11항 중 어느 하나의 항에 의한 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 중독 약물에 대하여 개체를 백신화하는 방법.
34. 제33항에 있어서, 상기 중독 약물은 니코틴인 것인 방법.
35. 제33항에 있어서, 상기 중독 약물은 코카인인 것인 방법.
36. 제5항에 의한 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 니코틴에 대하여 개체를 백신화하는 방법.
37. 제6항 또는 제7항에 의한 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 니코틴에 대하여 개체를 백신화하는 방법.

Claims (28)

  1. (i) 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly 또는 이의 C-말단 단편을 포함하는 시그널 펩티드를 가지는 콜레라 독소 B(CTB); 및 (ii) 햅텐을 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 조성물은 중독 약물에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 것인 면역원성 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 중독 약물에 대한 면역 반응이 상기 제1항의 면역원성 조성물과 동일하되 상기 시그널 펩티드는 포함하지 않는 면역원성 조성물에 의해 유도된, 중독 약물에 대한 면역 반응보다 강한 것인 면역원성 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 중독 약물은 코카인인 것인 면역원성 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 중독 약물은 니코틴인 것인 면역원성 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 면역원성 조성물은 애쥬반트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 애쥬반트는 수산화알루미늄인 것인 면역원성 조성물.
  7. (i) 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly 또는 이의 C-말단 단편을 포함하는 시그널 펩티드를 가지는 CTB; 및 (ii) 니코틴 또는 이의 유도체를 포함하는 면역원성 조성물로서, 상기 조성물은 니코틴에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 것인 면역원성 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 니코틴에 대한 면역 반응이 상기 제7항의 면역원성 조성물과 동일하되 상기 시그널 펩티드는 포함하지 않는 면역원성 조성물에 의해 유도된, 니코틴에 대한 면역 반응보다 강한 것인 면역원성 조성물.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 면역원성 조성물은 애쥬반트를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 애쥬반트는 수산화알루미늄인 것인 면역원성 조성물.
  11. (i) 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly 또는 이의 C-말단 단편을 포함하는 시그널 펩티드를 가지는 콜레라 독소 B(CTB); 및 (ii) 햅텐을 포함하는 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체 내 중독 약물에 대한 면역 반응을 유도하는 방법으로서, 상기 조성물은 중독 약물에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 것인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 중독 약물은 니코틴인 것인 방법.
  13. 제11항에 있어서, 상기 중독 약물은 코카인인 것인 방법.
  14. (i) 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly 또는 이의 C-말단 단편을 포함하는 시그널 펩티드를 가지는 콜레라 독소 B(CTB); 및 (ii) 니코틴 또는 이의 유도체를 포함하는 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체 내 니코틴에 대한 면역 반응을 유도하는 방법으로서, 상기 조성물은 니코틴에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 것인 방법.
  15. 제11항 내지 제14항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 면역원성 조성물은 애쥬반트와 함께 투여되는 것인 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 애쥬반트는 수산화알루미늄인 것인 방법.
  17. (i) 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly 또는 이의 C-말단 단편을 포함하는 시그널 펩티드를 가지는 콜레라 독소 B(CTB); 및 (ii) 햅텐을 포함하는 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 중독 약물에 대하여 개체를 백신화하는 방법으로서, 상기 조성물은 중독 약물에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 것인 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 중독 약물은 니코틴인 것인 방법.
  19. 제17항에 있어서, 상기 중독 약물은 코카인인 것인 방법.
  20. (i) 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly 또는 이의 C-말단 단편을 포함하는 시그널 펩티드를 가지는 콜레라 독소 B(CTB); 및 (ii) 니코틴 또는 이의 유도체를 포함하는 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 니코틴에 대하여 개체를 백신화하는 방법으로서, 상기 조성물은 니코틴에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 것인 방법.
  21. 제17항 내지 제20항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 면역원성 조성물은 애쥬반트와 함께 투여되는 것인 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 애쥬반트는 수산화알루미늄인 것인 방법.
  23. (i) 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly 또는 이의 C-말단 단편을 포함하는 시그널 펩티드를 가지는 콜레라 독소 B(CTB); 및 (ii) 햅텐을 포함하는 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 약물 중독증 또는 약물 의존증의 치료를 필요로 하는 개체에서 이를 치료하는 방법으로서, 상기 조성물은 중독 약물에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 것인 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 약물 중독증 또는 약물 의존증은 니코틴 중독증 또는 의존증인 것인 방법.
  25. 제23항에 있어서, 상기 약물 중독증 또는 약물 의존증은 코카인 중독증 또는 의존증인 것인 방법.
  26. (i) 아미노산 서열 Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly 또는 이의 C-말단 단편을 포함하는 시그널 펩티드를 가지는 콜레라 독소 B(CTB); 및 (ii) 니코틴 또는 이의 유도체를 포함하는 면역원성 조성물을 유효량만큼 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 니코틴 중독증 또는 니코틴 의존증의 치료를 필요로 하는 개체에서 이를 치료하는 방법으로서, 상기 조성물은 니코틴에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 것인 방법.
  27. 제23항 내지 제26항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 면역원성 조성물은 애쥬반트와 함께 투여되는 것인 방법.
  28. 제27항에 있어서, 상기 애쥬반트는 수산화알루미늄인 것인 방법.
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