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KR20080045713A - 발 악취 형성을 저해하는 미생물 - Google Patents

발 악취 형성을 저해하는 미생물 Download PDF

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KR20080045713A
KR20080045713A KR1020087006516A KR20087006516A KR20080045713A KR 20080045713 A KR20080045713 A KR 20080045713A KR 1020087006516 A KR1020087006516 A KR 1020087006516A KR 20087006516 A KR20087006516 A KR 20087006516A KR 20080045713 A KR20080045713 A KR 20080045713A
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microorganism
microorganisms
skin
lactobacillus
foot
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KR1020087006516A
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엑카르트 버드
안드레아스 레인들
롤프 크뇔
크리스틴 랑
마르쿠스 빈
메베스 뵈트너
Original Assignee
바스프 에스이
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Publication date
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Abstract

피부 미생물에 의한 발 악취의 형성을 저해할 수 있는 미생물을 기술한다. 또한, 그러한 미생물을 포함하는 조성물 뿐만 아니라, 화장품, 예방학적 또는 치료학적 적용에 있어서 상기 미생물의 용도를 기술한다.
피부 미생물, 발 악취, 화장품, 약제학적 조성물

Description

발 악취 형성을 저해하는 미생물{MICROORGANISMS INHIBITING THE FORMATION OF FOOT MALODOR}
본 발명은 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지할 수 있는 미생물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 미생물을 포함하는 조성물, 예로서, 화장품 또는 약제학적 조성물, 및 화장품, 예방학적 또는 치료학적 적용에 있어서 상기 미생물의 용도에 관한 것이다.
불쾌한 체취는 땀샘으로부터 유래된 유기 물질, 또는 피부 구성 성분이 단쇄 지방산으로 분해됨으로써 발생되는 것으로 당업계에 잘 알려져 있다 [Kanda et al., Br. J. Dermat. 122 (1990), 771-776]. 특히, 신발을 신고 있고, 땀을 분비하기 때문에 발 악취가 발생하는 것이다. 신체 다른 부위보다 발에는 더욱더 많은 수의 땀샘이 존재하기 때문에, 발은 과도하게 땀을 분비할 수 있고, 신발을 신고 있기 때문에 생산된 땀은 증발될 수 없다. 발의 피부 표면상의 공생 생물로서 살고 있고, 땀의 구성 요소 또는 피부의 구성 성분을 대사시킬 수 있는 미생물은 악취를 유발한다. 발 악취의 중요한 취기가 이소발레린산이라는 것은 잘 용인되어 있는 사실이다. 예를 들면, 칸다( Kanda ) 등 [(Br. J. Dermat. 122 (1990), 771- 776)]은 단쇄 지방산, 특히, 이소발레린산은 뚜렷한 발 냄새가 없는 사람보다 발 냄새가 강한 사람에서 더 많은 양으로 발생한다는 것을 발견하게 되었다. 이소발레린산은 발 냄새가 있는 모든 대상에 존재하지만, 양말 및 신을 신지 않는 대상에서는 검출될 수 없었고, 양말과 신에 축적되었으며, 이는 일반적으로 알려져 있는 발 직물 냄새를 유발한다.
이소발레린산은 주로 분지형 아미노산 류신의 효소적 전환에 의해 발생한다. 비교되는 효소적 과정은 이미 스위스 치즈 생산으로부터 이미 알려져 있고, 여기에서, 미생물은 주요한 향미 구성 성분으로서 이소발레린산을 생성시키기 위한 목적으로 사용된다 [Thierry et al ., Appl. Env. Microbiol. 68(2) (2002), 608-615]. 유제품의 프로피온산균은 스위스형 치즈가 익는 동안 성장하고, 특징적인 향미를 형성하는데 관여하는 주요 플로라중 하나로 구성된다. 티에리 ( Thierry ) 등은 [Appl. Env. Microbiol. 68(2) (2002), 608-615] 프로피오니박테리움 프로이덴라이히(Propionibacterium freudenreichii)가 분지형 아미노산을 분해할 수 있다고 나타내었고, 상기 세균에 의한 류신의 아미노기 전이 반응을 통해 α-케토이소카프로산이 생산된 후, 이는 이어서 이소발레린산으로 효소적으로 전환되었다고 나타내었다. 이소발레린산의 생합성에 관여하는 특이적인 발 미생물은 선행 기술에서 기술된 바 없다.
불쾌한 체취를 감소시키거나 제거하는 것을 목적으로 하는, 현재 시판중에 있는 대부분의 제품은 체취를 차단하기 위해 강력한 방향제를 함유하거나, 발한을 저해하거나, 발 미생물의 생체 활성의 비특이적인 감소, 즉, 상기와 같은 악취를 유발하는 세균을 박멸시키는 것에 의존하는 알루미늄 염을 함유한다. 사실상, 화장용 방취제는 일반적으로 예를 들면, 2,4,4'-트리클로로-2'하이드록시-디페닐-에테르 (트리클로산(Triclosan))와 같이, 피부 마이크로 플로라의 성장을 저해하는 항균 화합물을 함유한다. 그러나, 이러한 원리는 악취 형성에 대하여 효과가 있을 뿐, 예로서, 잠재적으로 병원성인 미생물에 의한 집락 형성으로부터 피부를 보호하는 천연의 상주성 미생물 피부 플로라를 심각하게 파괴한다 [Bisno et al., Am. J. Med. 76 (5A) (1984), 172-179].
따라서, 심각한 부작용은 일으키지 않거나, 인간 발 미생물의 피부 플로라를 파괴시키지 않으면서 발 악취 형성을 저해할 수 있는 수단 및 방법이 요구되고 있다.
본 발명은 이러한 요구를 처리하고, 피부 미생물에 의한 발 악취를 방지하는 미생물 및 방법을 제공한다. 특히, 청구 범위에서 특징화된 실시태양을 제공한다.
따라서, 제1 측면에서, 본 발명은 피부 미생물에 의한 발 악취 생성을 방지할 수 있는 미생물에 관한 것이다.
본 발명자는 놀랍게도 상기 기술된 미생물 또는 그의 불활성화된 형태를 피부에 투여함으로써 발 악취 생성을 효과적으로 방지할 수 있다는 것을 발견하게 되었다. 본 발명자는 최초로 상응하는 미생물을 동정하게 되었고, 이러한 동정 방법을 제공하였다. 이러한 미생물은 피부로부터 악취 생성 미생물에 의한 이소발레린산의 형성을 저해할 수 있거나, 발 악취 생성 피부 미생물의 성장을 저해할 수 있다. 이로써 전형적인 발 냄새 생성은 억제된다.
"발 악취"라는 용어는 일반적으로 지저분한 것으로서 설명되는, 전형적인 발 냄새에 관한 것이다. "발 악취"는 일반적으로 발의 피부 영역에 상주하는 피부 미생물에 의해 생성된다. 바람직하게, 상기 용어는 전형적인 발 냄새가 검출될 수 있다는 것을 의미한다. 더욱 바람직하게, 상기 용어는 전형적인 발 냄새의 검출은 코로, 바람직하게, 기술자의 코로 냄새를 맡음으로써 확인되는 것을 의미한다. 본 발명의 목적을 위해서는 바람직하게, 상이한 카테고리의 발 냄새 강도가 사용된다. 바람직하게, 이들 카테고리는 0 (어떤 냄새도 검출할 수 없음), 1 (미세한 냄새를 검출할 수 있음), 2 (냄새를 검출할 수 있음) 및 3 (강한 냄새를 검출할 수 있음)으로 정의될 수 있다. 발 악취 생성과 관련하여 "방지한다"라는 용어는 피부가 본 발명에 따른 미생물과 접촉할 때, 전형적으로 지저분한 발 냄새 방출이 정지 또는 감소하는 것을 의미한다. 바람직하게, 상기 용어는 본원에서 상기 기술된 카테고리의 발 냄새 강도를 임의의 보다 높은 수치로부터 임의의 보다 낮은 수치로 하락시키는 것에 관한 것이다. "방출이 정지되는 것"은 본 발명에 따른 미생물이 피부와 접촉하였을 때 지저분한 발 냄새가 검출될 수 없는 것을 의미한다. 바람직하게, 상기 용어는 본 발명에 따른 미생물이 피부와 접촉하였을 때 발 냄새 카테고리가 0 (어떤 냄새도 검출할 수 없음)인 것을 의미한다. "방출이 감소하는 것"은 본 발명에 따른 미생물이 피부와 접촉하였을 때 지저분한 발 냄새가 감소하는 것을 의미한다. 전형적으로 지저분한 발 냄새의 방출과 관련하여 "감소한다"라는 용어는 본 발명에 따른 미생물과 접촉하지 않은 피부의 냄새 강도가 3 (강한 냄새를 검출할 수 있음)이라면, 본 발명에 따른 미생물과 접촉한 피부의 냄새 강도는 2 (냄새를 검출할 수 있음), 바람직하게, 1 (미세한 냄새를 검출할 수 있음), 및 더욱 바람직하게, 0 (어떤 냄새도 검출할 수 없음)이거나, 본 발명에 따른 미생물과 접촉하지 않은 피부의 냄새 강도가 2 (냄새를 검출할 수 있음)라면, 본 발명에 따른 미생물과 접촉한 피부의 냄새 강도는 1 (미세한 냄새를 검출할 수 있음) 및 바람직하게, 0 (어떤 냄새도 검출할 수 없음)이거나, 본 발명에 따른 미생물과 접촉하지 않은 피부의 냄새 강도가 1 (미세한 냄새를 검출할 수 있음)이라면, 본 발명에 따른 미생물과 접촉한 피부의 냄새 강도는 0 (어떤 냄새도 검출할 수 없음)인 것을 의미한다.
"코로 냄새를 맡음으로써" 검출하는 것은 코로 냄새를 맡음으로써 검출하는 것에 대하여 훈련을 받았거나, 훈련을 받은 바 없는 1명 이상의 사람에 의해 수행되는 전형적인 발 냄새의 검출에 관한 것이다. 이러한 검출은 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 기법에 의해, 또는 임의의 적합한 형태로 수행될 수 있다. 바람직하게, 검출은 코로 냄새를 맡음으로써 검출하는 것에 대하여 훈련을 받은 사람으로 구성된 유자격의 패널에 의해 수행될 수 있고, 더욱 바람직하게는, 유자격의 패널을 형성하는 3명의 사람에 의해 수행될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해서는 바람직하게, 상이한 카테고리의 냄새 강도가 사용된다. 바람직하게, 이들 카테고리는 0 (어떤 냄새도 검출할 수 없음), 1 (미세한 냄새를 검출할 수 있음), 2 (냄새를 검출할 수 있음) 및 3 (강한 냄새를 검출할 수 있음)으로 정의될 수 있다. 유자격의 패널을 형성하는 사람 또는 사람들은 냄새가 나는 샘플의 냄새 강도를 독립적으로 평가할 수 있다. 유자격의 패널에 속하는 사람(들)의 냄새 인식값은 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 수단에 의해 산출될 수 있다. 바람직하게, 유자격의 패널에 속하는 모든 사람(들)의 냄새 인식값의 평균을 산출할 수 있다. 이어서, 이러한 데이타에 기초하여, 냄새 강도는 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 수단에 의해 정량화될 수 있다.
또다른 바람직한 실시태양에서, 발 악취의 검출은 칸다 [Br. J. Dermat. 122 (1990), 771-776]에 기술된 것과 같이 사람으로 구성된 패널에 의해 수행될 수 있다. 더욱이, 냄새를 맡는 검정법은 본 문서에 기술되어 있는 바와 같이 수행될 수 있다.
바람직한 실시태양에서, 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지할 수 있는 미생물은 피부 미생물에 의한 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있다.
"이소발레린산의 생합성"이라는 용어는, 보통 발의 땀 분비에서 발견될 수 있거나, 죽은 피부 세포 또는 (죽은) 피부 구성 요소로부터 발생할 수 있는 전구체가 예를 들면, 아미노산으로 분해된 후에 이소발레린산으로 전환되는 것에 관한 것이다.
특히, "전구체"라는 용어는 반응에서 화학적으로 또는 효소적으로 전환되어 이소발레린산을 생산하는 화학적 화합물에 관한 것이다. 바람직하게, "전구체"라는 용어는 분지쇄 아미노산 (BCAA) 또는 그의 유도체에 관한 것이다. 더욱 바람직하게, 상기 용어는 예를 들면, α-케토글루타레이트 또는 옥소글루타레이트와 같은 류신 또는 아미노 수령체에 관한 것이다. 바람직한 실시태양에서, 류신 및 α-케토글루타레이트 또는 옥소글루타레이트는 기질 및 공-기질의 형태로 동시에 사용된다. 추가의 바람직한 실시태양에서, 본 발명에 따른 미생물은 전형적인 발 냄새와 유사한 냄새를 갖는다는 점에서 냄새가 나는 1종 이상의 화합물의 생합성을 억제시킨다. 그러한 화합물의 일례로는 3-메틸부타날, 2-메틸부타날, 3-메틸부탄산 (이소발레린산)의 에틸 에스테르, 특히, 또한 이소발레린산과 구조적으로 관련되고, 이로써 그의 유도체로서 간주될 수 있는 화합물이다.
"냄새," "냄새가 나는(odorous)" 또는 "냄새나는(odoriferous)"이라는 용어는 전형적인 발 냄새가 검출될 수 있다는 것을 의미한다. 바람직하게, 상기 용어는 전형적인 발 냄새의 검출은 코로, 바람직하게, 기술자의 코로 냄새를 맡음으로써 확인되는 것을 의미한다. 더욱 바람직하게, 상기 용어는 GC/MS 분석에 의해 검출될 수 있는 이소발레린산 또는 그의 유도체의 양을 지칭한다. "무취"라는 용어는 전형적인 발 냄새가 코로, 바람직하게, 기술자의 코로 냄새를 맡음으로써 검출될 수 없다는 것을 의미한다. 더욱 바람직하게, 상기 용어는 GC/MS 분석에 의해 어떤 이소발레린산도 검출될 수 없다는 것을 의미한다. "코로 냄새를 맡음으로써" 확인하는 것은 코로 냄새를 검출하는 것에 대하여 훈련을 받았거나, 훈련을 받은 바 없는 1명 이상의 사람에 의해 수행되는 전형적인 발 냄새의 검출에 관한 것이다. 더욱 바람직하게, 상기 용어는 코로 냄새를 검출하는 것에 대하여 훈련을 받았거나, 훈련을 받은 바 없는 1명 이상의 사람에 의해 수행되는 이소발레린산의 검출에 관한 것이다. 이러한 검출은 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 기법을 사용하거나 임의의 적합한 형태로 수행될 수 있다. 바람직하게, 검출은 코로 발 냄새를 검출하는 것에 대하여 훈련을 받은 사람으로 구성된 유자격의 패널에 의해 수행될 수 있고, 더욱 바람직하게는, 유자격의 패널을 형성하는 3명의 사람에 의해 수행될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해서는 바람직하게, 상이한 카테고리의 냄새 강도가 0 (어떤 냄새도 검출할 수 없음), 1 (미세한 냄새를 검출할 수 있음), 2 (냄새를 검출할 수 있음) 및 3 (강한 냄새를 검출할 수 있음)으로서 사용된다. 유자격의 패널을 형성하는 사람 또는 사람들은 냄새가 나는 미생물 샘플의 냄새 강도를 독립적으로 평가할 수 있다. 바람직하게, 전구체인 그의 전구체 형태로부터 이소발레린산을 생성할 수 있는 미생물, 및 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 미생물로 구성된 샘플 또는 본 발명에서 정의된 미생물을 포함하지 않는 상응하는 대조군 샘플의, 시험관내에서 생성된 냄새를 평가할 수 있다. 유자격의 패널에 속하는 사람(들)의 냄새 인식값은 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 수단에 의해 산출될 수 있다. 바람직하게, 유자격의 패널에 속하는 모든 사람(들)의 냄새 인식값의 평균을 산출할 수 있다. 이어서, 이러한 데이타에 기초하여, 냄새 강도는 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 수단에 의해 정량화될 수 있다.
"피부"라는 용어는 당업계의 기술자에게 알려져 있는 바와 같이 신체의 외부 보호막을 지칭한다. 바람직하게, 상기 용어는 3개의 층: 표피, 진피, 및 피하 지방 조직에 관한 것이다. 표피는 피부의 가장 바깥쪽에 있는 층이다. 이는 전형적으로 신체 표면상에서 방수의 보호 외피를 형성하고, 기본 기저판과 함께 중층 편평 상피로 구성된다. 이는 일반적으로 혈관을 함유하지 않고, 진피로부터 확산에 의해 영양을 공급받는다. 표피를 구성하는 주요한 세포 유형은 각질세포이며, 멜라닌세포 및 랑게르한스 세포도 함께 존재한다. 표피는, 세포가 가장 안쪽 층에서 유사분열을 통해 형성되는 수개의 층으로 구분된다. 분화함에 따라 모양과 조성물을 바꾸면서 층을 위로 이동시키고, 각질로 충진된다. 최종적으로는 각질층으로 불리는 상부층에 도달하게 되고, 이는 벗어지거나 벗겨진다. 표피의 가장 바깥쪽에 있는 층은 25 내지 30개의 죽은 세포층으로 구성된다. 통상, 표피는 5개의 하위층 또는 층 (표재층부터 심부층까지): 각질층, 투명층, 과립층, 가시층 및 종자층 또는 기저층으로 구분된다. 전형적으로, 표피와 진피 사이의 경계면은 불규칙적이고, 연이은 유두, 또는 손가락 모양의 돌기로 구성되는데, 이는 얇은 피부에서는 가장 작고, 손바닥 및 발바닥 피부에서는 가장 길다. 전형적으로, 손바닥 및 발바닥의 유두는 표피의 융기와 관련이 있고, 이는 능선을 형성한다. 피하 지방 조직은 피부의 최심부층이다. 상기 층의 특징은 결합 조직, 혈관, 및 지방 세포로 구성된다는 점이다. 전형적으로, 상기 층은 피부를 기본 구조에 결합시키고, 추위로부터 신체를 단열시키고, 지방 형태로 에너지를 저장한다. 일반적으로 피부는 물리적, 화학적 및 세균 물질이 심부 조직에 미치는 작용에 대한 보호막을 형성한다. 이는 예를 들면, 구강 또는 질 부위 또는 점막에 속하는 조직은 피부에 속하지 않는다는 것을 의미한다. 바람직한 실시태양에서, "피부"라는 용어는 가장 바깥쪽의 신체 보호막 층, 즉, 표피에 관한 것이다. 더욱 바람직한 실시태양에서, "피부"라는 용어는 표피의 각질층에 관한 것이다. 더욱더 바람직한 실시태양에서, "피부"라는 용어는 가장 바깥쪽의 25 내지 30개의 죽은 표피 세포층에 관한 것이다. 더욱 바람직한 실시태양에서, "피부"라는 용어는 가장 바깥쪽의 10개의 죽은 표피 세포층에 관한 것이다.
더욱 바람직한 실시태양에서, "피부"라는 용어는 발의 피부에 관한 것이다. "발의 피부"라는 용어는 발의 피부 구역, 바람직하게, 발의 발바닥에서의 피부 구역에 관한 것이다. 전형적으로 발의 피부는 예로서, 미생물에 독특한 서식지를 제공한다. 발의 피부 표면은 일반적으로 여러 면에서 신체 다른 부위와 상이하다. 전형적으로, 각질화된 각질층(horny layer)인 각질층(stratum corneum)은 신체 다른 곳에서보다도 발바닥에서 더욱 두꺼운데, 예를 들면, 약 0.5 mm이다. 따라서, 발의 피부, 바람직하게, 발의 발바닥에서의 피부 구역은 일반적으로 고도의 수분 함량을 유지할 수 있다. 이는 전형적으로 영양분과 유체의 유입과 배출 모두가 다른 피부 표면보다도 덜 투과성이라는 것을 의미한다. 통상적으로, 발의 피부 표면의 구조는 신체 다른 부위에서 보여지는 것과는 패턴과 분포면에서 상이하다. 일반적으로, 발바닥상에 또는 발등상에는 피지샘이 존재하지 않는다. 전형적으로, 발상에는 아포크린 땀샘이 존재하지 않고, 발바닥 또는 말단 발가락뼈 상에는 모낭이 존재하지 않는다. 일반적으로 알려져 있는 바와 같이, 발의 피부에는 다수의 에크린 땀샘이 공급되어 있고, 이는 전형적으로 나머지 체표면상의 에크린 샘과는 상이하게 열 자극 및 정신적 자극에 대하여 반응한다. 일반적으로, 발의 피부 표면은 물리적, 화학적 및 세균 물질이 심부 조직에 미치는 작용에 대한 보호막을 형성한다. 통상적으로, 발의 피부 구역의 pH는 다른 피부 영역의 것보다 미세하게 더 높다. 바람직하게, 발바닥 피부의 pH는 다른 피부 영역의 것보다 미세하게 더 높다. 바람직한 실시태양에서, 발의 피부 구역의 pH는 5.0 초과, 더욱 바람직하게, 5.5 초과, 더욱더 바람직하게, 6.0 초과, 및 가장 바람직하게, 6.5 초과이다.
이소발레린산 또는 다른 냄새가 나는 화합물의 생합성과 관련하여 "억제한다"라는 용어는, 피부 미생물에 의한 이소발레린산 또는 다른 화합물의 생합성이 본 발명에 따른 미생물과 접촉하였을 때 정지 또는 감소하는 것을 의미한다. "형성이 정지되는 것"은 이소발레린산의 전구체 또는 다른 화합물의 전구체의 존재하에서 이소발레린산 또는 다른 화합물을 생성할 수 있는 미생물, 및 본 발명에 따른 미생물을 함유하는 혼합물중 이소발레린산 또는 다른 화합물이 검출될 수 없는 것을 의미한다. "형성이 감소하는 것"은 본 발명에 따른 미생물이 존재하지 않는 혼합물과 비교할 때, 이소발레린산의 전구체 또는 다른 화합물의 전구체의 존재하에서 이소발레린산 또는 다른 화합물을 생성할 수 있는 미생물, 및 본 발명에 따른 미생물을 함유하는 혼합물중에서 이소발레린산 또는 다른 화합물의 양이 감소하는 것을 의미한다. 이소발레린산 또는 다른 화합물의 생합성과 관련하여 "감소한다"라는 용어는 이소발레린산의 전구체 또는 다른 화합물의 전구체의 존재하에서 이소발레린산 또는 다른 화합물을 생성할 수 있는 미생물, 및 본 발명에 따른 미생물을 함유하는 혼합물중 이소발레린산 또는 다른 화합물의 양이 본 발명에 따른 미생물이 존재하지 않는 혼합물에 존재하는 이소발레린산 또는 다른 화합물의 양의 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5% 미만, 더욱 바람직하게, 3% 미만, 및 가장 바람직하게, 2% 미만인 것을 의미한다.
이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 본 발명에 따른 미생물의 능력은 하기 기술되는 검정법에 의해 측정될 수 있다.
간단히 말하면, 상기 검정법은 하기 단계를 포함한다:
- 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 그의 능력에 대하여 시험하고자 하는 미생물과, 이소발레린산을 생성할 수 있는 미생물, 및 이소발레린산의 전구체를 혼합하고;
- 이소발레린산이 생성될 수 있는 조건하에서 혼합물을 인큐베이션시키고;
- 혼합물의 상등액으로부터 단쇄 지방산을 추출하고;
- 이소발레린산의 존재에 의해 냄새 방출을 검출하는 단계를 포함한다.
구성 요소를 혼합하는 것은 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 비율로, 및 임의의 적합한 완충액중에서 수행될 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 그의 이소발레린산을 생성할 수 있는 미생물을 기술자에게 적합한 것으로 알려져 있는 조건하에서 배양한다. 바람직하게, 37 ℃ BHI 브로쓰에서 호기 배양한다. 예컨대, 10 내지 40시간 동안, 바람직하게, 20 내지 35시간 동안, 더욱더 바람직하게, 24시간 동안 배양을 수행할 수 있다. 당업계의 기술자에게 적합한 것으로 알려져 있는 임의의 베쓸에서 배양을 수행할 수 있다. 바람직하게, 진탕 유리 플라스크에서 수행한다. 호기 배양을 위한 용량으로서, 임의의 적합한 용량이 사용될 수 있는데, 바람직하게는 1 내지 50 ml의 용량, 더욱 바람직하게, 5 내지 40 ml, 더욱더 바람직하게, 10 내지 30 ml, 및 가장 바람직하게, 20 ml의 용량이 사용된다. 추가 단계로서, 당업계의 기술자에게 적합한 것으로 알려져 있는 양 또는 용량이 추가 배양을 위한 접종물로서 사용될 수 있다. 호기 배양을 위한 용량으로서, 임의의 적합한 용량이 사용될 수 있는데, 바람직하게는, 1 내지 50 ㎕, 더욱 바람직하게, 5 내지 40 ㎕, 더욱더 바람직하게, 10 내지 30 ㎕, 및 가장 바람직하게, 15 ㎕의 용량의 제1 배양물이 추가 배양을 위한 접종물로서 사용된다. 가장 바람직한 실시태양에서, 20 ml 용량의 24 시간 예비 배양물 15 ㎕가 추가 배양을 위한 접종물로서 사용된다. 추가 단계로서, 이소발레린산을 생성시킬 수 있는 미생물을 당업계의 기술자에게 적합한 것으로 알려져 있는 조건하에서 배양할 수 있다. 바람직하게, 37 ℃ BHI 브로쓰에서 호기 배양한다. 예컨대, 10 내지 40시간 동안, 바람직하게, 20 내지 35시간 동안, 더욱더 바람직하게, 24시간 동안 배양을 수행할 수 있다. 호기 배양을 위한 용량으로서, 임의의 적합한 용량이 사용될 수 있는데, 바람직하게는 1 내지 50 ml의 용량, 더욱 바람직하게, 5 내지 40 ml, 더욱더 바람직하게, 10 내지 30 ml, 및 가장 바람직하게, 20 ml의 용량이 사용된다. 당업계의 기술자에게 적합한 것으로 알려져 있는 임의의 베쓸에서 배양을 수행할 수 있다. 바람직하게, 진탕 유리 플라스크에서 수행한다. 바람직하게, 진탕시키면서 인큐베이션을 수행할 수 있고, 더욱 바람직하게, 예컨대, 160 rpm의 왕복 진탕기상에서 왕성하게 진탕시키면서 인큐베이션을 수행할 수 있다. 이어서, 이소발레린산을 생성시킬 수 있는 미생물을 임의의 적합한 방법에 의해 배양 배지로부터 분리하는데, 예컨대, 상기 미생물의 배양물을 예를 들면, 4000 x g으로 5분 동안 원심분리할 수 있다. 추가 단계로서 수득한 미생물을 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 수단에 의해 세척할 수 있는데, 바람직하게는, 수득한 세포 펠릿을 완충액, 예컨대, PBS-완충액, pH 8.0에서 1 내지 수회에 걸쳐 세척한다. 추가 단계로서, 수득한 세포를 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 완충액에서 재현탁시킬 수 있는데, 바람직하게는, 수득한 세포 펠릿을 예컨대, 20 ml의 인산염 (예를 들면, 60 mM), 예를 들면, PBS-완충액, pH 8.0에 재현탁시킨다. 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 그의 능력에 대하여 시험하고자 하는 미생물을 기술자에게 적합한 것으로 알려져 있는 조건하에서 배양한다. 바람직하게, 예컨대, 37 ℃ MRS 브로쓰중 혐기 조건하에 배양할 수 있다. 더욱 바람직하게, 밀폐된 에펜돌프 튜브에서 배양할 수 있다. 임의의 적합한 시간 동안, 예를 들면, 1 내지 3일 동안, 바람직하게, 30 내지 60시간 동안, 더욱 바람직하게, 40 내지 50시간 동안, 및 더욱더 바람직하게, 48시간 동안 배양을 수행할 수 있다. 당업계의 기술자에게 적합한 것으로 알려져 있는 임의의 형태의 세균을 출발로 하여 배양할 수 있다. 바람직하게, -8O ℃의 냉동 배양물로부터 출발하여 배양할 수 있다. 혐기 배양을 위한 용량으로서, 임의의 적합한 용량이 사용될 수 있는데, 바람직하게는 1 내지 1000 ㎕, 더욱 바람직하게, 5 내지 500 ㎕, 더욱더 바람직하게, 100 내지 300 ㎕, 및 가장 바람직하게, 150 ㎕의 용량이 사용된다. 이어서, 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 그의 능력에 대하여 시험하고자 하는 미생물을 임의의 적합한 방법에 의해 배양 배지로부터 분리하는데, 예컨대, 상기 미생물의 배양물을 예를 들면, 4000 x g으로 15분 동안 원심분리할 수 있다. 추가 단계로서 수득한 미생물을 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 수단에 의해 세척할 수 있는데, 바람직하게는, 수득한 세포 펠릿을 완충액, 예컨대, PBS-완충액, pH 8.0에서 1 내지 수회에 걸쳐 세척한다. 추가 단계로서, 수득한 세포를 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 완충액에서 재현탁시킬 수 있는데, 바람직하게는, 수득한 세포 펠릿을 예컨대, 20 ml의 인산염 (예를 들면, 60 mM), 바람직하게, 인산염 완충액, 더욱 바람직하게, 60 mM 인산염 완충액, 예컨대, PBS-완충액, pH 8.0에 재현탁시킨다. 추가 단계로서, 수득한 세포를 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 완충액에서 재현탁시킬 수 있는데, 바람직하게는, 수득한 세포 펠릿을 예컨대, 200 ㎕의 인산염 완충액 (예를 들면, 60 mM), 예를 들면, PBS-완충액, pH 8.0에 재현탁시킨다.
검정을 위해 이소발레린산을 생성시킬 수 있는 미생물의 세포, 바람직하게는, 세척된 세포를 이소발레린산 전구체와 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 비율로 혼합한다. 바람직한 실시태양에서, 1 내지 500 ㎕의 세포를 사용하고, 더욱 바람직하게, 5 내지 200 ㎕, 더욱더 바람직하게, 10 내지 100 ㎕, 및 가장 바람직하게, 15 ㎕를 사용한다. 혼합은 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 완충액, 예컨대, 인산염 완충액중에서 수행될 수 있다. 바람직하게, 혼합은 60 mM 인산염 완충액, pH 8.0에서 수행될 수 있다. 이소발레린산 전구체는 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 양 또는 농도로, 1 mM 내지 100 mM, 바람직하게, 2 mM 내지 50 mM, 더욱 바람직하게, 5 mM 내지 20 mM, 및 가장 바람직하게, 10 mM의 농도로 사용될 수 있다. 이소발레린산 전구체로서는 바람직하게, 분지쇄 아미노산이 사용된다. 더욱 바람직하게, 류신 또는 α-케토글루타레이트가 사용된다. 더욱더 바람직하게, 5 mM L-류신 및 10 mM α-케토글루타레이트가 사용된다. 상기 혼합물에 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 그의 능력에 대하여 시험하고자 하는 미생물 배양물 세포를 당업계의 기술자에게 알려져 있는 적합한 양으로 첨가할 수 있다. 바람직하게, 1 내지 1000 ㎕, 더욱 바람직하게, 5 내지 500 ㎕, 더욱더 바람직하게, 10 내지 250 ㎕, 및 가장 바람직하게, 100 ㎕를 가한다. 대조군으로서는 임의의 적합한 완충액 또는 배지, 예를 들면, PBS-완충액 또는 MRS 배지를 적합한, 상응하는 양으로 본원의 상기에서 특징화된 것과 같은 혼합물에 첨가할 수 있다. 이소발레린산을 생성시킬 수 있는 조건하에서 샘플을 인큐베이션시켠다. 그러한 조건을 당업계의 기술자는 알고 있다. "이소발레린산을 생성시킬 수 있는 조건"은 예를 들면, 이소발레린산을 생성시킬 수 있는 미생물만이 존재하고, 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 미생물은 존재하지 않는 대조군에서 확인될 수 있는 바와 같은, 미생물이 이소발레린산을 생성시킬 수 있는 것으로서 당업계의 기술자에게 알려져 있는 조건을 의미한다. 더욱 바람직하게, 샘플을 예를 들면, 5 내지 40시간 동안, 더욱더 바람직하게, 7 내지 35시간 동안, 10 내지 30시간 동안, 및 가장 바람직하게, 24시간 동안, 호기 조건하에 30 ℃에서 인큐베이션시킨다. 바람직하게, 진탕시키면서 인큐베이션을 수행할 수 있고, 더욱 바람직하게, 예컨대, 160 rpm의 왕복 진탕기상에서 왕성하게 진탕시키면서 인큐베이션을 수행할 수 있다. 세포를 예컨대, 4000 x g으로 5분 동안 원심분리한 후, 상등액을 예를 들면, 6 M HCl로 산성화시킬 수 있다. 이어서, 단쇄 지방산을 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 방법으로, 바람직하게, 3 x 150 ㎕ CHCl3을 사용하여 추출할 수 있다. 추출물을 추가로 예컨대, 질소하에 예컨대, 10 ㎕의 용량으로 농축시킬 수 있다.
이소발레린산의 존재는 당업계의 기술자에게 알려져 있는 방법에 의해 검출될 수 있다. 바람직하게, 예컨대, 스플릿/분할식 주입기 및 FFAP 칼럼이 장착된 휴렛-패커드(Hewlett-Packard) GC 5980 시리즈 II/MSD 5971 시스템을 사용하는 GC/MS 분석법에 의해 측정된다. 바람직한 실시태양에서, 소량, 예컨대, 1 ㎕의, 본원의 상기에 기술된 것과 같은, 냄새가 나는 용액 또는 추출물은 분할식 모드로 예컨대, 30 m, 0.5 mm ID, 0.53 ㎛ 필름 두께의 FFAP 칼럼이 장착된 GC/MSD에서 주입될 수 있다. 당업계의 기술자에게 알려져 있는 적합한 주입기 및 검출기 온도가 선택된다. 바람직하게, 15O ℃ 내지 220 ℃의 주입기 및 검출기 온도가 선택된다. 단쇄 지방산의 감지성 분리를 위해서는 당업계의 기술자에게 알려져 있는 적합한 온도 조건을 선택한다. 바람직하게, 단쇄 지방산의 감지성 분리를 위한 온도 조건은 150 ℃에서 2분, 이어서, 15 ℃/분으로 최종 온도 220 ℃까지 일 수 있다. 이러한 온도는 1 내지 100분, 바람직하게, 5 내지 50분, 및 가장 바람직하게, 3분 동안 유지될 수 있다. 칼럼 유속은 당업계의 기술자에게 알려져 있는 조건에 따라 설정될 수 있다. 바람직하게, 칼럼 유속은 30 cm/s로 설정될 수 있다. 담체 기체로서는 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 기체가 사용될 수 있다. 바람직하게, 헬륨이 사용될 수 있다. 이소발레린산의 확인은 순수한 상업적 표준에 대하여 미지의 스펙트럼을 비교함으로써 수행될 수 있다. 추가의 확인 파라미터로서는, 예를 들면, 상대 크로마토그래픽 정체 시간이 사용될 수 있다. 상기의 1종 이상의 미생물을 사용하는 상기의 냄새 방출 검정법에서 검출된 이소발레린산의 양이 본 발명에 따른 미생물이 존재하지 않는 혼합물에서 검출될 수 있는 이소발레린산의 양의 95% 이하, 90% 이하, 80% 이하, 70% 이하, 60% 이하, 50% 이하, 40% 이하, 30% 이하, 20% 이하, 10% 이하, 바람직하게, 5% 이하, 더욱 바람직하게, 3% 이하, 및 가장 바람직학, 2% 이하일 경우, 미생물이 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 것으로 간주된다.
기술한 검정법은 또한 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 미생물을 검정하는데도 사용될 수 있다
바람직한 실시태양에서, 피부 미생물에 의한 발 악취 생성을 방지할 수 있는 미생물, 또는 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 미생물은 악취 생성 피부 미생물의 성장을 저해할 수 있다. 발 악취 생성 피부 미생물의 성장과 관련하여 "저해하다"라는 용어는 하나 이상의 이러한 미생물들의 성장은 본 발명에 따른 미생물과의 접촉시 감소된다는 것을 의미한다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 미생물은 1종 이상의 발 악취 생성 피부 미생물, 바람직하게, 주요한 대표적인 발 악취 생성 피부 미생물, 즉, 마이크로코커스 종(Micrococcus spec .)의 성장을 저해한다. 추가의 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 미생물은 상기와 같은 미생물, 바람직하게, 마이크로코커스 종의 성장을 특이적으로 저해한다. "특이적으로"라는 것으로 바람직하게, 상기와 같은 미생물, 바람직하게, 마이크로코커스 종의 성장은 저해하지만, 다른 미생물, 특히, 발에 상주하는 피부 마이크로 플로라에 속하는 미생물의 성장은 유의적으로 저해시키지 않거나, 단지 미세하게만 저해한다는 것을 의미한다. "발에 상주하는 피부 마이크로 플로라"라는 용어는 발 피부, 바람직하게, 인간 발 피부 상에 발견될 수 있는 호기성 미생물 플로라를 지칭한다. 전형적으로, 발 피부 마이크로 플로라는 다른 피부 부위에서 관찰되어 지는 것과 유사한다. 통상적으로, 세균이 가장 풍부하고, 유력한 세균은 예를 들면, 마이크로코카세아에(Micrococcaceae) 및, 가장 전형적으로, 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) (코아굴라제 음성) 뿐만 아니라, 예컨대, 코아굴라제 세균, 디프테리아이다 [Tachibana DK. Microbiology of the foot. Annu Rev Microbiol . 1976:30:351-375. Marshall J, Leeming JP, Holland KT. The cutaneous microbiology of normal human feet. J Appl Bacteriol . 1987 Feb ;62(2): 139-146]. 일반적으로, 호기성 세균의 범위는 예컨대, 102 내지 106 집락 형성 단위/㎠이다. 전형적으로, 발 위의 세균은 피부 표면 그 자체에 존재한다. 일반적으로 알려져 있는 바와 같이, 세균이 정상의 손상되지 않은 피부의 표피층 밑에 존재한다는 것을 입증하는 증거는 없다.
더욱 바람직하게, 상기 "특이적으로"라는 용어는 발 악취 생성 피부 미생물, 바람직하게, 마이크로코커스(Micrococcus)의 저해 정도가 또다른 미생물, 특히, 발에 상주하는 피부 마이크로 플로라중의 미생물의 저해 정도보다 매우 큰 것을 의미한다. 특히 바람직하게, "특이적으로"라는 용어는 당업계의 기술자에게 알려져 있는 적합한 성장 검정법에서 본 발명의 미생물의 존재하의, 발 악취 생성 피부 미생물, 바람직하게, 마이크로코커스의 증식이 본 발명의 미생물의 존재하의, 또다른 미생물, 특히, 발에 상주하는 피부 마이크로 플로라중의 또다른 미생물의 증식의 최대 50%인 것을 의미한다. 바람직하게, 발 악취 생성 피부 미생물, 바람직하게, 마이크로코커스 종의 증식은 본 발명의 미생물의 존재하에서 또다른 미생물, 특히, 발에 상주하는 피부 마이크로 플로라중의 또다른 미생물의 증식의 40%, 30%, 20%, 10%, 더욱 바람직하게, 5%, 및 가장 바람직하게, 0%이다. 마이크로코커스 종의 특이적인 저해는 실시예 4 및 5에 제시하는데, 여기에서는, 일례로, 시험관내 액상 검정법에서 본 발명에 따른 미생물에 의해 마이크로코커스 종은 저해되는 반면, 스타필로코커스 에피더미디스는 저해되지 않는다는 것을 나타낸다. 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 미생물은 스타필로코커스 에피더미디스의 성장은 저해하지 않지만, 마이크로코커스 종의 성장은 저해한다.
성장이 감소하였다는 것은 바람직하게, 단위 시간당 증식, 즉, 세포 분열이 감소하였음을 의미한다. 별법으로, 용어 "저해한다"는 것은 또한 개개 세포의 크기를 감소시킨다는 것을 지칭한다. 세균의 세포 크기는 염료 SYBR 그린 I(SYBR Green I) (미국 몰레큘라 프로브스(Molecular Probes))로 염색한 후, 유식세포 분석법 (예컨대, 벡턴-디킨슨 FACSort(Becton-Dickinson FACSort) 유식세포 분석기, 캘리포니아주 산호세)에 의해 평가할 수 있다. 세균 세포의 크기는 사이드-앵글 라이트 스캐터(Side-Angle Light Scatter) (SSC) 모드로 평가한다. 따라서, 성장이 감소하였다는 것은 단위 시간당 바이오매스의 생산이 감소되었음을 의미한다.
악취 생성 피부 미생물의 성장 감소는 바람직하게, 시험관내에서, 더욱 바람직하게, 본 발명에 따른 미생물을 하나 이상의 악취 생성 피부 미생물과 접촉시키고, 악취 생성 피부 미생물(들)의 성장을 측정하는 검정법에서 관찰될 수 있다. 상이한 시간 간격으로 인큐베이션시킨 후, 세포/콜로니의 갯수를 계수함으로써 성장을 측정할 수 있고, 본 발명에 따른 미생물을 함유하지 않는 대조군과 비교함으로써 성장의 감소 여부를 측정할 수 있다.
성장이 저해되었는지를 측정하는 시험관내 검정법은 실시예에 기술되어 있고, 이는 소위 "시험관내 홀 플레이트 검정법"을 포함한다. 간단히 말하면, 상기 검정법은 하기 단계:
- 1종 이상의 악취 생성 피부 미생물을 배양하고, 각 미생물(들)의 성장을 위해, 바람직하게, 그의 검출을 위해 적합한 아가 배지를 함유하는 제조된 아가 플레이트상에 상기/상기들을 고르게 도포하고;
- 접종된 아가 플레이트에 홀을 제공하고;
- 홀을 예비 배양된 본 발명에 따른 미생물의 세포로 충진시키고;
- 악취 생성 피부 미생물이 성장할 수 있는 조건하에 적절한 시간 동안 아가 플레이트를 인큐베이션시키고;
- 본 발명에 따른 미생물을 함유하는 홀 주변의 악취 생성 피부 미생물 플로라중의 미생물(들)의 성장을 측정하고, 본 발명에 따른 미생물을 함유하지 않는 홀 주변의 미생물(들)의 성장과 비교하는 것을 포함한다.
마지막 단계에서 성장을 측정하는 것은 세포 및/또는 콜로닝의 갯수를 측정하기 위하여 이용가능한 수단과 방법에 의해, 예컨대, 적절한 염료로 염색하는 것, 및/또는 현미경으로 세포/콜로니를 계수하는 것 및 농도측정법과 같은 광학적 수단에 의해 영향을 받을 수 있다.
기술된 검정법은 또한 발 악취 생성 피부 미생물의 성장을 저해할 수 있는 미생물을 동정하는데 사용될 수 있다.
더욱 바람직하게, 발 악취 생성 피부 미생물의 성장을 저해하는 것은 "시험관내 액상 검정법"으로 측정될 수 있다. 상기 검정법은 실시예에 기술되어 있고, 간단히 말하면, 하기 단계:
- 액체 배양물에서 1종 이상의 발 악취 생성 피부 미생물을 배양하고;
- 분취량의, 본 발명에 따른 미생물의 액체 배양물 및 분취량의, 발 악취 생성 피부 미생물의 액체 배양물을, 일과성의 병원성 피부 마이크로 플로라중 미생물의 성장을 허용하는 배양 배지에 적용시키고;
- 액체 배양물에서 본 발명에 따른 미생물 및 발 악취 생성 피부 미생물을 공배양하고;
- 분취량의 공배양 액체 배양물을, 적절한 성장 배지를 함유하는 아가 플레이트로 옮기고;
- 발 악취 생성 피부 미생물이 성장할 수 있는 조건하에 상당 시간 동안 아가 플레이트를 인큐베이션시키고;
- 집락 형성 단위의 정량화에 의해 발 악취 생성 피부 미생물의 성장을 측정하고, 본 발명의 미생물이 적용되지 않는 대조군에서의 미생물 성장과 비교하는 것을 포함한다.
더욱더 바람직하게, 악취 생성 피부 미생물 플로라의 성장은 또한 "계내 피부 검정법"으로 관찰될 수 있다. 상기 검정법은 하기 단계:
- 1종 이상의 악취 생성 피부 미생물을 배양하고, 시험 개체의 피부 영역에 상기/상기들을 고르게 도포하고;
- 분취량의, 본 발명에 따른 미생물을 악취 생성 피부 미생물 플로라가 도포된 영역내의 예정된 영역에 적용시키고;
- 악취 생성 피부 미생물이 성장할 수 있는 충분한 시간 동안 피부를 인큐베이션시키고;
- 이들에 포함되어 있는 미생물을 포함하는 상부의 피부층을 적절한 성장 배지를 함유하는 아가 플레이트로 옮기고;
- 악취 생성 피부 미생물이 성장할 수 있는 조건하에 상당 시간 동안 아가 플레이트를 인큐베이션시키고;
- 본 발명에 따른 미생물이 적용된 영역을 둘러싸는 악취 생성 피부 미생물 플로라의 성장을 측정하고; 본 발명의 미생물이 적용되지 않은 대조군에서의 미생물(들)의 성장과 비교하는 것을 포함한다.
이러한 검정법에 사용되는 피부 영역은 개체, 바람직하게, 인간 개체의 임의의 적합한 피부 영역일 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 인간 개체의 발 피부 영역이다. 영역 크기는 결정적이지는 않고, 바람직하게, 약 1 내지 40 ㎠, 더욱 바람직하게, 5 내지 20 ㎠, 더욱더 바람직하게, 5 내지 10 ㎠, 예컨대, 약 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 ㎠이다.
악취 생성 피부 미생물은 바람직하게, 대략 102 cfu/㎠ - 103 cfu/㎠의 밀도로 영역 상에 고르게 분포된다. 피부 상에 도포된 미생물(들)을 대기건조시키고, 분취량의, 본 발명에 따른 미생물을 영역내 예정된 방식으로 적용시킨다. 당업계의 기술자에게 알려져 있는 수단에 의해 달성될 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따른 미생물을 원심분리한다 (15분, 4000 x g). 세포 펠릿을 K/Na-완충액 (각각 1 ml)으로 2회에 걸쳐 세척한다. 세포를 200 ㎕ K/Na 완충액에 재현탁시키고, 10 ㎕의 제조된 미생물을 마이크로 피펫으로 예비-접종된 피부 영역 상에 예정된 방식으로 적용시킨다.
바람직하게, 실온에서, 예컨대, 2시간 동안 피부를 인큐베이션시킨다. 예컨대, 점착 테이프 스트라이프의 도움으로, 그 안에 포함된 미생물을 포함하는 상부의 피부층를 옮길 수 있다. 상부의 피부층이 옮겨진 아가 플레이트를 시험하고자 하는 악취 생성 피부 미생물의 성장을 허용하는 온도에서 인큐베이션시키고, 상기 아가 플레이트는 이러한(이들) 미생물(들)의 성장을 지지하는 것으로 알려져 있는 성장 배지를 함유한다. 전형적으로 약 24시간 동안 인큐베이션시킨다.
미생물(들)의 성장은 당업계의 기술자에게 알려져 있는 방법에 의해 검출될 수 있다. 바람직하게, 농도측정법에 의해, 또는 분취량의, 본 발명의 미생물이 적용된 지점 주변에 형성된 콜로니를 계수함으로써 측정된다. 세균의 세포 크기는 염료 SYBR 그린 I (미국 몰레큘라 프로브스)로 염색한 후, 유식세포 분석법 (예컨대, 벡턴-디킨슨 FACSort 유식세포 분석기, 캘리포니아주 산호세)에 의해 평가할 수 있다. 세균 세포의 크기는 사이드-앵글 라이트 스캐터 (SSC) 모드로 평가한다.
시험관내 홀 플레이트 검정법에서 미생물이 첨가되지 않은 대조군과 비교할 때, 미생물이 1종 이상의 하나 이상의 발 악취 생성 피부 미생물 성장을 5% 이상, 바람직하게, 10% 이상, 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 또는 90% 이상, 더욱 바람직하게, 95% 이상 및 더욱더 바람직하 게, 99% 이상, 및 가장 바람직하게, 100% 감소시킨다면, 상기 미생물은 하나 이상의 발 악취 생성 피부 미생물의 성장을 저해하는 것으로 간주된다.
더욱 바람직하게, 시험관내 액상 검정법에서 미생물이 첨가되지 않은 대조군과 비교할 때, 미생물이 1종 이상의 발 악취 생성 피부 미생물 성장을 5% 이상, 바람직하게, 10% 이상, 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 또는 90% 이상, 더욱 바람직하게, 95% 이상 및 더욱더 바람직하 게, 99% 이상, 및 가장 바람직하게, 100% 감소시킨다면, 상기 미생물은 하나 이상의 발 악취 생성 피부 미생물의 성장을 저해하는 것으로 간주된다.
더욱더 바람직하게, 계내 피부 검정법에서 미생물이 1종 이상의 하나 이상의 발 악취 생성 피부 미생물 성장을 5% 이상, 바람직하게, 10% 이상, 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 또는 90% 이상, 더욱 바람직하게, 95% 이상 및 더욱더 바람직하 게, 99% 이상, 및 가장 바람직하게, 100% 감소시킨다면, 상기 미생물은 하나 이상의 발 악취 생성 피부 미생물의 성장을 저해하는 것으로 간주된다. 미생물이 발 악취 생성 피부 미생물, 예컨대, 마이크로코커스 종의 성장을 저해하는지 또는 저해하지 않는지 여부를 측정하는 시험은 바람직하게, 본원 상기에 기술되어 있는 것과 같은 시험관내 및/또는 계내 시험, 더욱 바람직하게, 실시예에 기술되어 있는 시험이다.
바람직한 실시태양에서, 본원 상기에 기술되어 있는 검정법에서 사용되는 이소발레린산을 생성시킬 수 있는 냄새 생성 미생물은 마이크로코커스 속 또는 프로피오니박테리움(Propionibacterium) 속에 속한다. 더욱 바람직하게, 냄새 생성 미생물은 마이크로코커스 종 또는 프로피오니박테리움 프로이덴라이히(Propionibacterium freudenreichii)이다. 가장 바람직하게, 본원 상기에 기술되어 있는 검정법에서 사용되는 냄새 생성 미생물은 프로피오니박테리움 프로이덴라이히 아종 쉐르만이(Propionibacterium freudenreichii subsp . shermanii) TL34 (ATCC 9614)이다.
발 악취의 전형적인 냄새를 일으키는 화합물을 생산하는 미생물은 실시예에 기술된 바와 같이, 당업계의 기술자에게 알려져 있는 방법에 따라 단리될 수 있다.
특히 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 미생물은 젖산균 군에 속하는 미생물이다. "젖산균 군에 속하는 미생물"이라는 용어는 세균, 특히, 그람-양성의 발효성 진정세균, 더욱 특히, 젖산균을 비롯한 락토박테리아세아에(lactobacteriaceae) 과에 속하는 미생물(들)을 포함한다. 젖산균은 분류학적 관점에서 스트렙토코커스, 류코노스톡, 페디오코커스, 락토코커스 및 락토바실러스의 하위부류로 분류된다. 본 발명의 미생물은 바람직하게, 락토바실러스 종 또는 락토코커스 종 또는 류코노스톡 종이다. 젖산균 군의 일원들은 보통 포피린 및 시토크롬을 포함하지 않고, 전자-수송 인산화를 수행하지 않는 바, 따라서, 기질-수준 인산화에 의해서만 에너지를 수득하며, 즉, 젖산균에서 ATP는 탄수화물의 발효를 통해 합성된다. 모든 젖산균은 혐기적 상태에서 성장하지만, 다수의 혐기균과는 달리, 대부분의 젖산균은 산소에 대하여 비감수성이고, 따라서, 산소의 부재하에서 뿐만 아니라, 존재하에서도 성장할 수 있다. 따라서, 본 발명의 세균은 바람직하게, 내산소성의 혐기성 젖산균, 바람직하게, 락토바실러스 속, 락토코커스 속 또는 류코노스톡 속에 속하는 것이다.
본 발명의 젖산균은 바람직하게, 막대형 또는 구형으로, 길고 가는 것부터 짧고 굽은 막대까지 다양하고, 더욱 바람직하게는, 부동성이고/거나 무포자성이며, 발효 대사의 주요한 산물 또는 단일 산물로서 락트산을 생산한다. 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 미생물이 속하는 락토바실러스 속은 하기의 특징들에 의해 3개의 주요한 하위군으로 분류되며, 이로써 본 발명의 락토바실러스 종은 상기 주요한 하위군 각각에 속할 수 있다는 것이 파악된다:
(a) i) 글루코스로부터 엠덴-마이어호프(Embden-Meyerhof) 경로를 통해 85% 이상의 양으로 락트산, 바람직하게, 락트산의 L-, D- 또는 DL-이성체(들)을 생산하고;
(ii) 45 ℃의 온도에서는 성장하나, 15 ℃의 온도에서는 성장하지 않고;
(iii) 긴 막대형이고;
(iv) 세포벽에 글리세롤 테이코산을 갖는, 동종발효 락토바실리;
(b) i) 엠덴-마이어호프 경로를 통해, 락트산, 바람직하게는 락트산의 L- 또는 DL-이성체(들)을 생산하고;
(ii) 15 ℃의 온도에서는 성장하고, 45 ℃의 온도에서는 다양한 성장을 나타내며;
(iii) 짧은 막대형이거나 코리네형이고;
(iv) 그의 세포벽에 리비톨 및/또는 글리세롤 테이코산을 갖는, 동종발효 락토바실리;
(c) (i) 글루코스로부터 오탄당-인산 경로를 통해 50% 이상의 양으로 락트산, 바람직하게는 락트산의 DL-이성체(들)을 생산하고;
(ii) 이산화탄소 및 에탄올을 생산하고;
(iii) 15 ℃ 또는 45 ℃의 온도에서는 다양한 성장을 나타내고;
(iv) 긴 또는 짧은 막대형이고;
(v) 그의 세포벽에 글리세롤 테이코산을 갖는, 이종발효 락토바실리.
상기 기술된 특징들에 기초하여, 본 발명의 미생물은 젖산균 군, 특히, 락토바실러스 속에 속하는 것으로 분류될 수 있다. 고전 분류학을 사용하여, 예를 들면, ["Bergey's Manual of Systematic Bacteriology" (Williams & Wilkins Co., 1984)]에 기술된 관련된 사항을 참조하여 본 발명의 미생물이 락토바실러스 속에 속한다는 것임을 결정할 수 있다. 별법으로, 본 발명의 미생물은 당업계에 공지된 방법에 의해, 예를 들면, 그의 대사 핑거프린트에 의해, 즉, 당을 대사시킬 수 있는 본 발명의 미생물(들)의 능력을 비교 개관하여, 또는 예를 들면, ([Schleifer et al., System. Appl. Microb., 18 (1995), 461-467] 또는 [Ludwig et al., System. Appl. Microb., 15 (1992), 487-501])에 기술된 다른 방법에 의해 락토바실러스 속에 속하는 것으로 분류될 수 있다. 본 발명의 미생물은 락토바실러스 속에 속하는 미생물에 대하여 전형적이면서, 당업계에 알려져 있는 당 공급원을 대사시킬 수 있다.
본 발명의 미생물을 락토바실러스 속으로 가입시키는 것 또한 당업계에 공지된 다른 방법을 사용하는 것, 예를 들면, 측정하고자 하는 종류의 전체 단백질의 SDS-PAGE 겔 전기영동을 사용하고, 그를 알려져 있고 이미 특징화된 락토바실러스 속 균주와 비교하는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 기술된 바와 같은 전체 단백질의 프로파일을 제작하는 기법 뿐만 아니라, 상기 프로파일의 수치 분석법은 당업계의 기술자에게 잘 알려져 있다. 그러나, 본 과정의 각 단계가 충분히 표준화되어 있는 한, 결과는 신뢰만이 가능하다. 미생물을 락토바실러스 속으로 가입시킨다고 결정할 때 정확성 요건에 직면하게 되면, 표준화된 방법은, 1994년 9월 12일부터 16일까지 벨기에 겐트 대학에서 열린 유럽 연합 주최 "워크숍" (세균 분류 및 동정을 위한 핑거프린팅 기법, 전체 세포 단백질의 SDS-PAGE(Fingerprinting techniques for classification and identification of bacteria, SDS-PAGE of whole cell protein))에서 제시된 바와 같이, 정기적으로 포트( Pot ) 등과 같은 그의 저자에 의해 공중이 이용할 수 있도록 만들어진다. SDS-PAGE 전기영동 겔 분석 기법에 사용되는 소프트웨어는 결정적으로 중요한데, 이는 종들 간의 상관관계 정도가 이러한 소프트웨어에 사용되는 파라미터 및 알고리즘에 따라 달라지기 때문이다. 이론적으로만 상세히 설명하지 않고, 피어슨 상관계수를 사용하여 농도측정계로 측정되고 컴퓨터로 일반화되는 밴드를 정량적으로 비교하는 것이 바람직하다. 가장 유사한 프로파일별로 분류할 수 있을 뿐만 아니라, 덴도로그람도 작성할 수 있는 등차 평균에 의한 언웨이티드 페어 그룹법(unweighted pair group method using average linkage) 알고리즘의 도움으로 상기와 같이 수득한 유사성 행렬을 체계화할 수 있다 ([Kerster, Numerical methods in the classification and identification of bacteria by electrophoresi, in Computer-assisted Bacterial Systematic, 337-368, M. Goodfellow . A. G. O'Donnell Ed., John Wiley and Sons Ltd, 1985]를 참조).
별법으로, 본 발명의 미생물을 락토바실러스 속으로 가입시키는 것은 소위 리보프린터.RTM(Riboprinter.RTM)으로 리보솜 RNA에 관하여 특징화될 수 있다. 더욱 바람직하게, 새로 동정된 본 발명의 종을 락토바실러스 속으로 가입시키는 것은, 본 발명의 세균의 16S 리보솜 RNA의 뉴클레오티드 서열, 또는 16S 리보솜 RNA를 코딩하는 그의 게놈 DNA의 뉴클레오티드 서열을 현재까지 알려져 있는 젖산균의 다른 속 및 종의 것과 비교함으로써 입증된다. 새로 동정된 본 발명의 종을 락토바실러스 속으로 가입시키는 것에 대한 또다른 바람직한 대체방법은 16S-23S rRNA 스페이서 영역을 표적하는 종-특이 PCR 프라이머를 사용하는 것이다. 또다른 바람직한 대체방법은 균주 특이성의 DNA 패턴이 생성된 것에 의해 본 발명에 따라 동정된 미생물을 락토바실러스 속으로 가입시키는 것을 결정할 수 있는 RAPD-PCR이다 [Niqatu et al. in Antonie van Leeuwenhoek (79), 1-6, 2001]. 본 발명의 미생물을 락토바실러스 속으로 가입시키는 것을 결정하는데 유용한 추가의 기법은 제한 절편 길이 다형성 (RFLP) [Giraffa et al., Int. J. Food Microbiol. 82 (2003), 163-172], 반복 요소의 핑거프린팅 [Gevers et al., FEMS Microbiol. Lett. 205 (2001) 31-36] 또는 세균 세포의 지방산 메틸 에스테르 (FAME) 패턴 분석 [Heyrman et al., FEMS Microbiol. Lett. 181 (1991), 55-62]이다. 별법으로, 락토바실리는 렉틴 분석에 의해 [Annuk et al., J. Med. Microbiol. 50 (2001), 1069-1074], 그의 세포벽 단백질 분석 [Gatti et al., Lett. Appl. Microbiol. 25 (1997), 345-348]에 의해 결정될 수 있다.
본 출원의 바람직한 실시태양에서, 미생물은 프로바이오틱 미생물이다. 본 발명과 관련하여 "프로바이오틱"이라는 용어는 미생물이 피부에 국부적으로 적용될 경우 유익한 효과를 갖는다는 것을 의미한다. 바람직하게, "프로바이오틱" 미생물은 피부, 예컨대, 발 피부에 국부적으로 적용될 경우, 상기 조직의 건강에 유익한, 살아있는 미생물이다. 가장 바람직하게, 이는 미생물이 피부의 마이크로 플로라에 긍정적인 효과를 갖는다는 것을 의미한다.
바람직한 실시태양에서, 본 발명의 미생물은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 커바터스(Lactobacillus curvatus), 락토바실러스 델브루키아이(Lactobacillus delbrueckii) (바람직하게, 락토바실러스 델브루키아이 델브루키아이), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토코커스 브레비스(Lactococcus brevis), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 또는 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) 종에 속한다. 그러나, 본 발명의 젖산균을 그로 제한하는 것은 아니다.
본 발명의 특히 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 미생물은 수탁 번호 DSM 17599 (락토바실러스 브레비스, LB-FG-0001), DSM 17600 (락토바실러스 플란타룸, LB-FG-0002), DSM 17601 (락토바실러스 커바터스, LB-FG-0003), DSM 17602 (류코노스톡 메센테로이데스, LB-FG-0004), DSM 17603 (락토바실러스 플란타룸, LB-FG-0005), DSM 17604 (락토바실러스 델브루키아이 델브루키아이, LB-FG-0006), DSM 17605 (락토바실러스 델브루키아이 델브루키아이, LB-FG-0007), DSM 17606 (락토바실러스 플란타룸, LB-FG-0008) 및 DSM 17607 (락토바실러스 브레비스, LB-FG-0009)하에 독일 루드비힉스하펜 67063, 가르텐베크-제트 25, 4에 소재하는 바스프 퓨처 비지니스 게엠베하(BASF Future Business GmbH)에 의해 DSMZ에 기탁된 락토바실러스 브레비스, 락토바실러스 플란타룸, 락토바실러스 커바터스, 락토바실러스 델브루키아이 델브루키아이 또는 류코노스톡 메센테로이데스로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 상기 언급한 기탁된 젖산균 균주의 돌연변이체 또는 유도체에 관한 것으로서, 여기에서, 상기 돌연변이체 또는 유도체는 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지할 수 있는 능력, 더욱 바람직하게, 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있고/거나 발 악취 생성 피부 미생물의 성장을 저해할 수 있는 능력을 보유한다.
"DSMZ에 기탁된 락토바실러스 브레비스, 락토바실러스 플란타룸, 락토바실러스 커바터스, 락토바실러스 델브루키아이 델브루키아이 또는 류코노스톡 메센테로이데스"라는 용어는 독일 루드비힉스하펜 67063, 가르텐베크-제트 25, 4에 소재하는 바스프 퓨처 비지니스 게엠베하에 의해 2005년 9월 22일자로 독일 미생물 보존 센터(Deutsche Sammlung fur Mikroorganismen und Zellkulturen) (DSMZ)에 기탁된 락토바실러스 브레비스, 락토바실러스 플란타룸, 락토바실러스 커바터스, 락토바실러스 델브루키아이 델브루키아이 또는 류코노스톡 메센테로이데스 종에 속하며, 하기 기탁 번호: 기탁 번호: DSM 17599 (락토바실러스 브레비스, LB-FG-0001), DSM 17600 (락토바실러스 플란타룸, LB-FG-0002), DSM 17601 (락토바실러스 커바터스, LB-FG-0003), DSM 17602 (류코노스톡 메센테로이데스, LB-FG-0004), DSM 17603 (락토바실러스 플란타룸, LB-FG-0005), DSM 17604 (락토바실러스 델브루키아이 델브루키아이, LB-FG-0006), DSM 17605 (락토바실러스 델브루키아이 델브루키아이, LB-FG-0007), DSM 17606 (락토바실러스 플란타룸, LB-FG-0008) 및 DSM 17607 (락토바실러스 브레비스, LB-FG-0009)를 갖는 미생물의 세포에 관한 것이다. DSMZ는 독일 데-38124 브라운슈바이크 마스세로데르 버그 1베에 소재한다. 특허절차상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약(Budapest Treaty) 조항에 따라 상기 언급한 바와 같이 기탁되었다. 특히 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 미생물은 "단리" 또는 "정제"된 것이다. "단리된"이라는 용어는 물질이 그의 환경, 예컨대, 그것이 자연발생적으로 생성된 것이라면 자연 환경, 또는 그것이 배양된 것이라면 배양 배지로부터 제거된다는 것을 의미한다. 예를 들면, 자연발생적으로 생성된 미생물, 바람직하게, 자연계에서 공존하는 물질들중 일부 또는 모두로부터 분리된 젖산균은 단리된 것이다. 상기와 같은 미생물이 조성물의 일부가 될 수 있고, 조성물이 그의 자연환경이 일부가 아니라는 점에서 여전히 단리되어야 하는 것으로 간주될 것이다.
"정제된"이라는 용어는 절대 순도를 요한다기 보다는; 상대적인 의미로 정의하고자 한다. 라이브러리로부터 수득한 개개의 미생물은 통상적으로 동질의 미생물로 정제되고, 즉, 당업계에 공지된 방법에 의해 아가 플레이트 상에 스트리킹되었을 때 단일 콜로니로서 성장한다. 바람직하게, 본 목적을 위해 사용되는 아가 플레이트는 젖산균, 바람직하게, 락토바실러스 종에 대하여 선택적이다. 그러한 선택적 아가 플레이타는 당업계에 알려져 있다.
또다른 측면에서, 본 발명은 예컨대, 열적으로 불활성화되거나 동결건조되어 있되, 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 그들의 특성을 보유하거나, 능력을 보유하는 본 발명의 미생물의 불활성화된 형태에 관한 것이다.
본 발명에 따라, "본 발명의 미생물의 불활성화된 형태"라는 용어는 본 발명의 미생물, 바람직하게, 본원에 개시된 젖산균의 사세포 또는 불활성화된 세포로서, 젖산균에 속하는 미생물에 대하여 특이적인 플레이트 상에서 단일 콜로니를 더이상 형성할 수는 없는 것을 포함한다. 상기 사세포 또는 불활성화된 세포는 무손상 또는 파손된 세포막을 가질 수 있다. 본 발명의 미생물의 세포를 사멸시키거나 불활성화시키는 방법은 당업계에 알려져 있다. [El - Nezami et al., J. Food Prot. 61 (1998), 466-468]에는 UV-조사에 의해 락토바실러스 종을 불활성화시키는 방법이 기재되어 있다. 바람직하게, 본 발명의 미생물의 세포는 열적으로 불활성화되거나 동결건조된 것이다. 본 발명의 세포를 동결건조시키는 것은 피부 미생물에 의해 발 악취의 생성을 방지하는성질을 보유하면서 동시에도, 저장과 취급이 용이하다는 점에서 장점이 된다.
더욱이, 동결건조된 세포는 당업계에 알려져 있는 조건하에서 적절한 액체 또는 고체 배지에 적용될 때 다시 성장할 수 있다. 당업계에 알려져 있는 방법에 의해 동결건조는 수행된다. 바람직하게, 2시간 이상 동안 실온에서, 즉, 16 ℃ 내지 25 ℃ 사이의 임의의 온도에서 수행된다. 더욱이, 본 발명의 미생물의 동결건조된 세포는 상기 기술한 그들의 성질들을 여전히 보유할 수 있도록 4주 이상 동안 4 ℃의 온도에서는 안정적이다. 본 발명의 미생물의 세포를 2시간 이상 동안 170 ℃ 온도에서 인큐베이션시켜 열적으로 불활성화시킬 수 있다. 게다가, 바람직하게는, 2 bar의 대기압하에 포화 증기의 존재하에서 20분 이상 동안 121 ℃의 온도에서 상기 세포를 오토클레이브하여 열적으로 불활성화시킨다. 별법으로, -20 ℃에서 4주 이상, 3주 이상, 2주 이상, 1주 이상, 12시간 이상, 6시간 이상, 2시간 이상 또는 1 시간 이상 동안 상기 세포를 냉동시켜 본 발명의 미생물의 세포를 열적으로 불활성화시킨다. 바람직하게는, 본 발명의 미생물의 불활성화된 형태의 세포의 70% 이상, 75% 이상 또는 80% 이상, 더욱 바람직하게는, 85% 이상, 90% 이상 또는 95% 이상, 및 특히 바람직하게는, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 및 더욱 특히 바람직하게는, 99.1% 이상, 99.2% 이상, 99.3% 이상, 99.4% 이상, 99.5% 이상, 99.6% 이상, 99.7% 이상, 99.8% 이상 또는 99.9% 이상, 및 가장 특히 바람직하게는, 100%는 사세포이거나, 불활성화된 세포이되, 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지할 수 있는 능력은 여전히 갖고 있다. 본 발명의 미생물의 불활성화된 형태가 실제로 사멸 또는 불활성화된 형태인지 여부는 당업계에 알려져 있는 방법, 예를 들면, 생육성에 대한 시험에 의해 시험될 수 있다.
용어 "본 발명의 미생물의 불활성화된 형태"는 또한 본 발명의 미생물, 바람직하게, 본원에 개시된 젖산균의 분해물 또는 분획을 포함하되, 여기에서, 상기 분해물 또는 분획은 바람직하게, 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지한다. 이러한 억제는 본원에 기술된 바와 같이, 특히, 첨부된 실시예에 기술된 바와 같이 시험될 수 있다. 본 발명의 미생물의 분해물 또는 분획이 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지할 수 있는 경우에 한해, 기술자는 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지할 수 있는 물질을 제거하기 위하여, 예를 들면, 본원 하기에 예시되는 바와 같이 당업계에 알려져 있는 방법에 의해 상기 분해물 또는 분획을 추가로 정제할 수 있다. 이는 본 발명의 미생물의 분해물 또는 분획이 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지할 수 없다면, 기술자는 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지하는 것을 방해하는 물질을 제거하기 위하여, 예를 들면, 본원 하기에 예시되는 바와 같이 당업계에 알려져 있는 방법에 의해 상기 분해물 또는 분획을 추가로 정제할 수 있다는 것을 의미한다. 이후, 당업계의 기술자는 분해물 또는 분획이 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지하는지 여부에 대하여 다시 시험할 수 있다.
본 발명에 따라, "분해물"이라는 용어는 수성 배지중의, 파손된 본 발명의 미생물의 세포의 용액 또는 현탁액을 의미한다. 그러나, 상기 용어는 임의의 제한적인 방식으로 해석되어서는 안된다. 세포 분해물은 예컨대, DNA, RNA, 단백질, 펩티드, 탄수화물, 지질 등과 같은 거대분자, 및/또는 아미노산, 당, 지질산 등, 또는 그의 분획과 같은 미세분자를 포함한다. 추가로, 상기 분해물은 무과립성 또는 과립성 구조일 수 있는 세포 파쇄물을 포함한다. 미생물의 세포 분해물을 제조하는 방법은 당업계에 알려져 있고, 예를 들면, 프렌치 가압기, 유리 또는 철 비드를 사용하는 세포 분쇄기를 사용하거나, 효소적 세포 분해 등에 의한 것이다. 추가로, 세포를 분해시키는 것은 세포를 절개/파괴시키는 것으로서, 당업계에 알려져 있는 다양한 방법에 관한 것이다. 세포를 분해시키는 방법은 중요치 않고, 본 발명의 미생물의 세포를 분해할 수 있는 방법이 사용될 수 있다. 당업계의 기술자에 의해 적절한 것이 선택될 수 있고, 예컨대, 세포는 효소적으로, 화학적으로 또는 물리적으로 세포가 절개/파괴될 수 있다. 효소 및 효소 칵테일에 대한 비제한적인 일례로는 프로테이나제 K와 같은 프로테아제, 리파제 또는 글리코시다제이고; 화학물질에 대한 비제한적인 일례로는 이오노포어, 나트륨 도데실 설페이트와 같은 세제, 산 또는 염기; 및 물리적 수단의 비제한적인 일례로는 프렌치-가압과 같은 고압, 삼투압, 열 또는 냉과 같은 온도이다. 추가로, 단백질 분해 효소 이외의 효소, 산, 염기 등의 적절한 조합을 사용하는 방법 또한 사용될 수 있다. 예를 들면, 냉동 및 해동에 의해, 더욱 바람직하게, -70 ℃ 미만의 온도에서 냉동시키고, 30 ℃ 초과의 온도에서 해동시켜 본 발명의 미생물의 세포를 분해시키고, -75 ℃ 미만의 온도에서 냉동시키고, 35 ℃ 초과의 온도에서 해동시키는 것이 특히 바람직하며, -80 ℃ 미만의 온도에서 냉동시키고, 37 ℃ 초과의 온도에서 해동시키는 것이 가장 바람직하다. 상기 냉동/해동을 바람직하게는, 1회 이상, 더욱 바람직하게, 2회 이상, 더욱더 바람직하게는, 3회 이상, 특히 바람직하게는, 4회 이상, 가장 바람직하게는, 5회 이상 반복한다.
따라서, 당업계의 기술자는 상기의 일반 설명을 참고하고, 필요에 따라 그러한 방법을 수정하거나 변형시켜 원하는 분해물을 제조할 수 있다. 바람직하게, 기술된 바와 같이 분해물에 대하여 사용되는 수성 배지는 물, 생리학적 염수, 또는 완충액이다. 기술 설비를 덜 필요로 하기 때문에 생산이 용이하고 비용면에서 효율적으로 저장될 수 있다는 점이 세균 세포 분해물의 장점이다.
바람직하게, "추출물"이라는 용어는 본 발명의 미생물의 세포하 구성 요소, 예컨대, DNA, RNA, 단백질, 펩티드, 탄수화물, 지질 등과 같은 거대분자, 및/또는 아미노산, 당, 지질산 등과 같은 미세분자, 또는 임의의 다른 유기 화합물 또는 분자, 또는 그의 분획을 의미하고, 여기에서, 상기 추출물이 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지한다. 더욱 바람직하게, 상기의 "추출물"이라는 용어는 무세포 배지내 상기 기술된 세포하 구성 요소중 임의의 것을 지칭한다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 본원의 상기에 기술된 바와 같이, 세포를 절개/파괴시키는 것으로서, 당업계에 알려져 있는 다양한 방법에 따라 세포를 분해하여 추출물을 수득할 수 있고/거나, 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적절한 액체, 배지 또는 완충액중 본 발명의 미생물의 배양물, 또는 상기 배양물의 분해물, 또는 임의의 다른 적합한 세포 현탁액의 원심분리 방법에 의한 상등액으로서 추출물을 수득할 수 있다. 더욱 바람직하게, 추출물은 정제된 분해물 또는 세포 배양물 상등액, 또는 그의 임의의 분획 또는 소부분일 수 있고, 여기에서, 상기의 정제된 분해물 또는 세포 배양물 상등액 또는 그의 임의의 분획 또는 소부분은 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지한다. 추출물을 정제하는 적합한 방법은 당업계의 기술자에게 알려져 있고, 예를 들면, 친화 크로마토그래피, 이온-교환크로마토그래피, 크기-배제 크로마토그래피, 역상-크로마토그래피, 및 칼럼 또는 배취식 방법으로 다른 크로마토그래픽 물질을 사용하는 크로마토그래피, 다른 분획화 방법, 예컨대, 여과 방법, 예컨대, 한외여과, 투석, 원심분리에 따른 크기-배제와 함께 투석 및 농축, 밀도-구배 또는 단계 매트릭스에 따른 원심분리, 침전, 예컨대, 친화 침전, 염해 또는 염석 (황산암모늄-침전), 알코올 침전 또는 다른 단백질화학적, 분자 생물학적, 생화학적, 면역학적, 화학적 또는 물리적 방법을 포함한다.
본 발명에 따라 분해물은 또한 상기 언급한 분해물로부터 유래된 분자의 분획 시료이다. 이들 분획은 당업계의 기술자에게 알려져 있는 방법, 예컨대, 친화 크로마토그래피, 이온-교환크로마토그래피, 크기-배제 크로마토그래피, 역상-크로마토그래피, 및 칼럼 또는 배취식 방법으로 다른 크로마토그래픽 물질을 사용하는 크로마토그래피를 비롯한 크로마토그래피, 다른 분획화 방법, 예컨대, 여과 방법, 예컨대, 한외여과, 투석, 원심분리에 따른 크기-배제와 함께 투석 및 농축, 밀도-구배 또는 단계 매트릭스에 따른 원심분리, 침전, 예컨대, 친화 침전, 염해 또는 염석 (황산암모늄-침전), 알코올 침전 또는 분해물의 상기 구성 요소를 분리시키는 단백질화학적, 분자 생물학적, 생화학적, 면역학적, 화학적 또는 물리적 방법에 의해 수득될 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 다른 것들보다 더 면역원성인 분획이 바람직하다. 당업계의 기술자는 일반 설명 및 본원에 예시된 특정 설명을 참고하고, 필요에 따라 그러한 방법을 수정하거나 변형시켜 적합한 방법을 선택할 수 있고, 그의 면역원성 잠재능을 측정할 수 있다.
그러므로, "본 발명의 미생물의 불활성 형태"이라는 용어 또한 본 발명의 미생물, 바람직하게, 본원에 개시된 젖산균의 여액을 포함하고, 상기 여액은 바람직하게, 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지한다. 이러한 억제는 본원에 기술된 바와 같이, 특히, 첨부된 실시예에 기술된 바와 같이 시험될 수 있다. 본 발명의 미생물의 여액이 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지할 수 없는 경우에 한해, 기술자는 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지하는 것을 방해할 수 있는 물질을 제거하기 위하여, 예를 들면, 본원 하기에 예시되는 바와 같이 당업계에 알려져 있는 방법에 의해 상기 여액을 추가로 정제할 수 있다. 이후, 당업계의 기술자는 상기 여액이 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지하는지 여부에 대하여 다시 시험할 수 있다.
"여액"이라는 용어는 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적절한 액체, 배지 또는 완충액중 본 발명의 미생물의 배양물의 원심분리 방법에 의한 상등액으로서 수득된, 본 발명의 미생물의 무세포 용액 또는 현탁액을 의미한다. 그러나, 상기 용어는 임의의 제한적인 방식으로 해석되어서는 안된다. 여액은 예컨대, DNA, RNA, 단백질, 펩티드, 탄수화물, 지질 등과 같은 거대분자, 및/또는 아미노산, 당, 지질산 등, 또는 그의 분획과 같은 미세분자를 포함한다. 미생물의 여액을 제조하는 방법은 당업계에 알려져 있다. 추가로, "여과"는 당업계에 알려져 있는 다양한 방법에 관한 것이다. 정확한 방법이 중요한 것이 아니며, 본 발명의 미생물의 세포를 여과할 수 있는 임의의 방법이 사용될 수 있다.
"본 발명의 미생물의 불활성 형태"이라는 용어는 본 발명의 미생물의 세포의 임의의 부분을 포함한다. 바람직하게, 상기 불활성 형태는 막-시료에 의해 수득된 막 분획이다. 젖산균에 속하는 미생물의 막 시료는 당업계에 알려져 있는 방법, 예를 들면, [Rollan et al., Int. J. Food Microbiol. 70 (2001), 303-307], [Matsuguchi et al ., Clin. Diagn. Lab. Immunol. 10 (2003), 259-266] 또는 [Stentz et al ., Appl. Environ. Microbiol. 66 (2000), 4272-4278] 또는 [Varmanen et al., J. Bacteriology 182 (2000), 146-154])에 기재된 방법을 사용하여 수득될 수 있다. 별법으로, 전체 세포 시료 또한 포함된다.
또다른 측면에서, 본 발명은 상기 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물 또는 이러한 미생물의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 바람직한 실시태양에서, 상기 조성물은 고형 형태의 조성물중 1 mg당 102 내지 1012개의 세포, 바람직하게, 103 내지 108개의 세포의 양으로 상기 기술된 미생물을 포함한다. 액체 형태의 조성물의 경우, 미생물의 양은 1 ml당 102 내지 1013개의 세포이다. 추가의 바람직한 실시태양에서, 상기 조성물은 에멀젼 형태, 예컨대, 수중유 또는 오일 에멀젼중의 수 형태, 연고제 형태 또는 미세캡슐제 형태이다. 에멀젼, 연고제, 또는 미세캡슐제일 경우, 조성물은 1 ml당 102 내지 1013개의 세포 사이의 양으로 본원에 기술된 미생물을 포함한다. 그러나, 특정 조성물의 경우, 미생물의 양은 본원에 기술된 바와 같이 다를 수 있다.
"조성물"이라는 용어는 또한 하기에 추가로 기술되는 바와 같은 직물 조성물을 포함한다.
또 추가의 측면에서, 본 발명은 상기 기술된 것과 같은 본 발명에 따른 미생물 또는 이러한 미생물의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태를 화장학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제와 함께 제형화하는 단계를 포함하는, 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지하기 위한 조성물의 생산 방법을 제공한다.
본 발명에 따라 사용되는 바, "조성물"이라는 용어는 상기 기술된 것과 같은 1종 이상의 본 발명의 미생물, 또는 상기 미생물의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태를 포함하는 조성물(들)에 관한 것이다. 본원 하기에 기술되는 본 발명의 조성물은 임의 배합으로 상기 성분들을 포함한다고 파악된다. 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지하는데 적합한 1종 이상의 추가 성분을 임의로 포함할 수 있다. 그러므로, 이하 기술하는 추가의 성분들의 임의의 배합물을 임의로 포함할 수 있다. "피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지하는데 적합한 성분"이라는 용어는 pH 값을 변경시키는, 예를 들면, pH 값을 증가시키거가 저하시키는 화합물 또는 조성물 및/또는 그의 배합물을 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 상기 용어는 pH 값을 증가시키는 화합물 또는 조성물 및/또는 그의 배합물을 포함한다.
조성물은 고체, 액체, 또는 기체 형태일 수 있고, 특히, 분말(들), 용액(들), 에어로졸(들), 현탁액, 에멀젼, 액체, 엘릭시르, 추출물, 팅크 또는 유체 추출물의 형태, 또는 국소 투여에 특히 적합한 형태일 수 있다. 국소 투여에 적합한 형태로는 예컨대, 에어로졸 스프레이로서 방취제, 페이스트, 연고제, 펌프 스프레이, 로션, 겔, 크림 또는 예컨대, 펌프-디스펜서 병으로 분배되는 유체 겔 또는 도포식 롤-온(roll-on)으로서 튜브 또는 그릴(grille)로 분배되는 농후한 크림 형태, 봉 형태 또는 경피용 패치제로서를 포함한다.
바람직하게, 본 발명의 조성물은 화장학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함하는 화장품 조성물이다.
본 발명의 화장품 조성물은 본 발명의 조성물과 관련하여 상기 기술된 본 발명의 미생물, 그의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태, 및 추가의 화장학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 바람직하게, 본 발명의 화장품 조성물은 국소 적용용이다.
본원에서 사용되는 바, "화장학적으로 허용가능한 담체"라는 용어는 본 조성물을 안전하고 효과적인 방식으로 피부에 적용시키는데 사용될 수 있는 적합한 비히클을 의미한다. 그러한 비히클은 예로서, 에멀젼, 예컨대, 수중유 또는 오일 에멀젼중의 수, 연고제 또는 미세캡슐제를 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 바, "안전하고 효과적인 방식"이라는 용어는 이소발레린산의 생합성을 억제하는데 충분한 양을 의미한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물 또는 그의 유도체, 돌연변이체, 또는 불활성 형태와, 추가로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 약제학적 조성물은 바람직하게 국소 투여에 적합한 형태이다.
추가로, 본 발명은 조성물, 바람직하게, 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지함으로써 발 악취를 억제시키기 위한 약제학적 또는 화장품 조성물의 제조를 위한, 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물 또는 그의 유도체, 돌연변이체, 또는 불활성 형태의 용도에 관한 것이다.
약제학적 조성물은 치료학적 유효량의, 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물, 또는 본 발명 유도체 또는 돌연변이체, 또는 본 발명의 상기 미생물의 불활성 형태를 포함하고, 다양항 형태, 예컨대, 고체 형태, 액체 형태, 분말 형태, 수성 형태, 동결건조된 형태로 제형화될 수 있다.
약제학적 조성물은 본원에 기술되어 있는 바와 같이 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 환자에게 투여될 수 있다. 특정 실시태양에서, "약제학적으로 허용가능한"이라는 용어는 규제 기관에 의해 또는 다른 일반적으로 승인된 약전에 의해 동물용, 및 더욱 특히, 인간용으로서 공인된 것임을 의미한다.
"담체"라는 용어는 치료제와 함께 투여되는 희석제, 애주번트, 부형제, 또는 비히클을 지칭한다. 그러한 담체는 약제학적으로 허용가능한 것이고, 즉, 사용 투여량 및 농도에서는 수혜자에게 비독성이다. 이는 바람직하게, 등장성, 저장성 또는 약하게 고장성이고, 예로서, 수크로스 용액에 의해 제공되는, 상대적으로 낮은 이온 강도를 갖는다. 그러한 약제학적 담체는 멸균 액체, 예로서, 물 및 오일일 수 있고, 이는 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것, 예로서, 땅콩유, 대두유, 광유, 참기름 등을 포함할 수 있다. 염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액 또한 액체 담체로서 사용될 수 있다. 적합한 약제학적 부형제로는 전분, 글루코스, 수크로스, 젤라틴, 소맥, 쌀, 소맥, 쵸크, 실리카겔, 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 나트륨 이온, 탈지분유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 조성물은 원하는 경우, 소량의 습윤제, 또는 유제, 또는 pH 완충화제도 함유할 수 있다. 이러한 조성물은 예컨대, 용액, 현탁액, 에멀젼, 분말, 지효성-방출 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 적합한 약제학적 담체의 일례는 E.W. 마틴(E.W. Martin)에 의해 ["Remington's Pharmaceutical Sciences"]에 기재되어 있다. 약제학적 담체로서의 역할을 할 수 있는 몇몇 다른 물질의 일례로는 당, 예로서, 글루코스 및 수크로스; 전분, 예로서, 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로스 및 그의 유도체, 예로서, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; 분말형 트라가칸트; 소맥; 젤라틴; 활석; 스테아린산; 마그네슘 스테아레이트; 황산칼슘; 탄산칼슘; 식물성 오일, 예로서, 땅콩유, 면실유, 참깨유, 올리브유, 옥수수유 및 테오브로마유; 폴리올, 예로서, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 소르비톨, 만닛톨, 및 폴리에틸렌 글리콜; 아가; 알긴산; 발열성 물질 무함유 물; 등장성 염수; 크랜베리주스 추출물 및 인산염 완충액 용액; 탈지분유; 뿐만 아니라, 예로서, 비타민 C, 에스트로겐 및 에치나세아와 같이, 약제학적 제형에 사용되는 다른 비독성의 상용성 물질이다. 습윤제 및 활택제 예로서, 소듐 라우릴 설페이트 뿐만 아니라, 착색제, 향미제, 활택제, 부형제, 정제화제, 안정화제, 항산화제 및 방부제 또한 존재할 수 있다. 활성 성분은 캡슐화된 형태로, 예컨대, 젤라틴내 폴리아미드, 니오좀, 왁스 매트릭스와 함께, 사이클로덱스트린과의 셀룰로스 캡슐화로서, 또는 리포좀 캡슐화로서 투여되는 것 또한 유익하다.
일반적으로, 성분들은 예를 들면, 활성 성분의 양을 명시하는 앰플 또는 사세와 같은 용접 밀폐된 용기에서 무수 동결건조된 산제 또는 무수 농축물로서 단위 제형 형태로 개별적으로 또는 함께 혼합되어 공급된다.
본 발명의 약제학적 조성물은 중성 또는 염 형태로서 제형화될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 염은 음이온으로 형성된 염, 예를 들어, 염화수소산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산 등으로부터 유래되는 염, 및 양이온으로 형성된 염, 예를 들어, 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 수산화 제2철, 이소프로필아민, 트리에틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 유래된 염을 포함한다.
최적의 투여량 범위를 확인하는 것을 돕기 위해 임의로 시험관내 검정법, 예컨대, 본 실시예에 기술된 것중 하나를 사용할 수 있다. 제형에 사용되는 정확한 투여량 또한 투여 경로, 질환 또는 질병의 중증도에 따라 달라질 것이며, 이는 의사의 판단과 각 환자의 환경에 따라 결정되어야 한다. 국소 투여 경로가 바람직한다. 유효량은 시험관내 또는 (동물) 모델 시험 시스템으로부터 유도된 투여량-반응 곡선으로 외삽법에 의해 추정될 수 있다. 바람직하게, 약제학적 조성물은 직접 또는 애주번트와 배합되어 투여된다. 애주번트는 클로로퀸, 극성 양성자성 화합물, 예로서, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤, EtOH, 1-메틸 L-2-피롤리돈 또는 그의 유도체, 또는 극성 비양성자성 화합물 예로서, 디메틸설폭시드 (DMSO), 디에틸설폭시드, 디-n-프로필설폭시드, 디메틸설폰, 설폴란, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 테트라메틸우레아, 아세토니트릴 또는 그의 유도체로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 이들 화합물은 pH 한계에 관한 조건으로 투여된다. 본 발명의 조성물은 척추동물에게 투여될 수 있다. 본원에서 사용되는 바, "척추동물"은 당업계의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되고 있는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 한다. 특히, "척추동물"은 동물, 및 더욱 특히 인간을 포함한다.
"투여된다"는 것은 치료학적 유효량의, 상기 언급된 조성물이 투여되는 것을 의미한다. "치료학적 유효량"은 효과를 얻기 위해 투여되는 것으로서, 효과를 일으키는 투여량이며, 바람직하게, 이러한 효과는 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지한다. 정확한 투여량은 치료 목적에 따라 달라질 것이며, 이는 알려져 있는 기법을 사용하여 당업계의 기술자가 확인할 수 있을 것이다. 당업계에 알려져 있고, 상기 기술되어 있는 바와 같이, 전신 투여 대 국부 투여, 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별, 섭식, 투여 시간, 약물간의 상호작용 및 용태의 중증도에 대한 조정이 필요할 수 있고, 이는 당업계의 기술자가 통상의 실험을 통해 확인할 수 있을 것이다.
본 방법은 인간 요법에 적용할 수 있다. 원하는 치료학적 활성을 갖는, 본원에 기술된 화합물은 본원에 기술된 바와 같이, 생리학적으로 허용가능한 담체중에서 환자에게 투여될 수 있다. 투여 방식에 따라 화합물은 하기 논의되는 바와 같이 다양한 방식으로 제형화될 수 있다. 제형내 치료학적으로 활성인 화합물의 농도는 약 0.01-100 wt%으로 다양할 수 있다. 상기 제제는 단독으로, 또는 다른 치료와 함께 병용하여 투여될 수 있다.
다양한 방식으로 약제학적 조성물을 투여할 수 있다. 바람직한 투여 경로는 국소 경로이다.
주치의와 임상적 요인이 투여 요법을 결정할 것이다. 의료 분야에 잘 알려져 있는 바와 같이, 임의 환자에 대한 투여량은 환자의 크기, 체표면적, 연령, 투여하고자 하는 특정 화합물, 성별, 투여 시간 및 경로, 일반 건강 상태, 및 동시에 투여되는 다른 약물을 비롯한, 다수의 요인에 따라 달라진다. 전형적인 투여량은 예를 들면, 0.001 내지 1000 ㎍ 범위일 수 있지만; 특별히 상기 언급한 요인들을 고려하여 상기의 예시적인 범위 미만 또는 초과의 투여량도 포함하고자 한다.
투여량은 바람직하게, 1주에 1회, 더욱 바람직하게, 1주에 2회, 3회, 4회, 5회 또는 6회, 및 가장 바람직하게, 1일 1회, 및 더욱더 바람직하게, 1일 2회로 또는 보다 자주 투여된다. 그러나, 치료 진행시 투여량은 보다 장기간의 시간 간격을 두고 투여될 수 있고, 필요시에는 더욱더 짧은 시간 간격을 두고, 예컨대, 1일 수회에 걸쳐 투여될 수 있다. 바람직한 경우에는, 본원에 기술된 방법, 및 당업계의 기술자에게 알려져 있는 추가의 방법을 사용하여 면역 반응을 모니터하고, 투여량은 예컨대, 시간, 양, 및/또는 조성에 따라 최적화된다. 정기적으로 평가함으로서 진행을 모니터할 수 있다. 약제학적 조성물이 공-요법 접근법, 즉, 다른 의약 또는 약물, 예를 들면, 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지하는 다른 약물과의 공-투여로 사용된다.
본 발명의 화장품 또는 약제학적 조성물의 국소 투여는 원하는 치료가 국소 투여에 의해 용이하게 접근할 수 있는 영역 또는 기관을 포함할 때 유용한 것이다. 피부에 국소적으로 적용시키기 위해, 약제학적 조성물은 바람직하게 방취제 또는 스프레이 (펌프스프레이 또는 에어로졸) 형태로 제형화되거나, 페이스트, 로션, 크림, 겔 또는 경피용 패치제로 제형화될 수 있다. 사용 분야에 따라 화장품 또는 약제학적 제제는 포움, 겔 스프레이, 무스, 현탁제 또는 산제의 형태일 수 있다.
화장품 또는 약제학적 조성물은 또한 스프레이 (펌프스프레이 또는 에어로졸) 형태로 제형화될 수 있다. 본 발명에 따른 에어로졸용으로 적합한 추진제는 통상의 추진제, 예를 들면, 프로판, 부탄, 펜탄 등이다.
별법으로, 화장품 또는 약제학적 조성물은 또한 담체중에 현탁되어 있는 활성 성분을 포함하는 적합한 페이스트로 제형화될 수 있다. 그러한 담체로는 석유, 연성 백색 파라핀, 황색 석유 젤리 및 글리세롤을 포함하나, 이에 한정하지 않는다.
화장품 또는 약제학적 조성물은 또한 담체중에 현탁되어 있거나 용해되어 있는 활성 구성 요소를 포함하는 적합한 연고제로 제형화될 수 있다. 그러한 담체로는 글리세롤, 광유, 액체 오일, 액체 석유, 백색 석유, 황색 석유 젤리, 프로필렌 글리콜, 알코올, 트리글리세리드, 지방산 에스테르, 예로서, 세틸 에스테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 화합물, 왁스, 예로서, 백색 왁스 및 황색 밀납, 지방산 알코올, 예로서, 세틸 알코올, 스테아릴 알코올 및 세틸스테아릴알코올, 지방산 예로서, 스테아린산, 스테아레이트, 라놀린, 수산화마그네슘, 카올린 및 물중 하나 이상을 포함하나, 이에 한정하지 않는다.
별법으로, 화장품 또는 약제학적 조성물은 또한 담체중에 현탁되어 있거나 용해되어 있는 활성 구성 요소를 포함하는 적합한 로션 또는 크림으로 제형화될 수 있다. 그러한 담체로는 광유 예로서, 파라핀, 식물성 오일, 예로서, 피마자유, 피마자씨유 및 수소화된 피마자유, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트, 지방산 에스테르, 예로서, 세틸 에스테르, 왁스, 지방산 알코올, 예로서, 세틸 알코올, 스테아릴 알코올, 2-옥틸도데카놀, 벤질 알코올, 알코올, 트리글리세리드 및 물중 하나 이상을 포함하나, 이에 한정하지 않는다.
별법으로, 화장품 또는 약제학적 조성물은 또한 또한 담체중에 현탁되어 있거나 용해되어 있는 활성 구성 요소를 포함하는 적합한 겔로 제형화될 수 있다. 그러한 담체로는 물, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 액체 파라핀, 폴리에틸렌, 지방유, 셀룰로스 유도체, 벤토나이트 및 콜로이드성 이산화규소중 하나 이상을 포함하나, 이에 한정하지 않는다.
본 발명에 따른 제제는 일반적으로 상기 제제에 통상적으로 사용되는 것과 같은 추가의 보조제, 예컨대, 방부제, 방향제, 소포제, 염료, 색소, 증점제, 계면활성 물질, 유제, 연화제, 마감제, 지방, 오일, 왁스 또는 화장품 또는 피부과용 제형의 다른 통상적 구성 성분, 예로서, 알코올, 폴리올, 중합체, 기포 안정화제, 용해 촉진제, 전해질, 유기산, 유기 용매, 또는 실리콘 유도체를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화장품 또는 약제학적 조성물은 연화제를 포함할 수 있다. 연화제는 건조를 막거나 완화시키는데 효과적인 양으로 사용될 수 있다. 유용한 연화제로는 제한없이, 탄화수소 오일 및 왁스; 실리콘 오일; 트리글리세리드 에스테르; 아세토글리세라이드 에스테르; 에톡실화된 글리세라이드; 알킬 에스테르; 알케닐 에스테르; 지방산; 지방 알코올; 지방 알코올 에테르; 에테르에스테르; 라놀린 및 유도체; 다가 알코올 (폴리올) 및 폴리에테르 유도체; 다가 알코올 (폴리올) 에스테르; 왁스 에스테르; 밀납 유도체; 식물성 왁스; 인지질; 스테로이드; 및 아미드를 포함한다.
따라서, 예를 들면, 전형적인 연화제로는 광유, 특별히, 50 내지 500 SUS 범위의 점도를 갖는 광유, 라놀린유, 밍크유, 코코넛유, 코코아 버터, 올리브유, 아몬드유, 마카다미아넛유, 알로에 추출물, 호호바유, 홍화유, 옥수수유, 액체 라놀린, 면실유, 땅콩유, 퍼셀린유, 퍼하이드로스쿠알렌 (스쿠알렌), 피마자유, 폴리부텐, 무취 미네랄 스피릿, 스위트 아몬드유, 아보카도유, 칼로필럼유, 리신 오일, 비타민 E 아세테이트, 올리브유, 미네랄 스피릿, 세테아릴 알코올 (주로 세틸 및 스테아릴 알코올로 구성된 지방 알코올 혼합물), 리놀렌산 알코올, 올레일 알코올, 옥틸 도데카놀, 곡물 배아 오일, 예로서, 맥아 세테아릴 옥타노에이트의 오일 (세테아릴 알코올 및 2-에틸헥사노산의 에스테르), 세틸 팔미테이트, 디이소프로필 아디페이트, 팔미트산 이소프로필, 옥틸 팔미테이트, 이소프로필 미리스테이트, 부틸 미리스테이트, 글리세릴 스테아레이트, 헥사데실 스테아레이트, 이소스테아레이트, 옥틸 스테아레이트, 옥틸하이드록시 스테아레이트, 프로필렌 글리콜 스테아레이트, 부틸 스테아레이트, 데실 올레이트, 글리세릴 올레이트, 아세틸 글리세리드, (C12-C15) 알코올의 옥타노에이트 및 벤조에이트, 알코올 및 폴리알코올의 옥타노에이트 및 데카노에이트, 예로서, 글리콜 및 글리세롤의 것, 및 알코올 및 폴리 알코올의 리신-올레이트, 예로서, 이소프로필 아디페이트, 헥실 라우레이트, 옥틸 도데카노에이트, 디메티콘 코폴리올, 디메티코놀, 라놀린, 라놀린 알코올, 라놀린 왁스, 수소화된 라놀린, 수산화된 라놀린, 아세틸화된 라놀린, 바셀린, 이소프로필 라놀레이트, 세틸 미리스테이트, 글리세릴 미리스테이트, 미리스틸 미리스테이트, 미리스틸 락테이트, 세틸 알코올, 이소스테아릴 알코올 스테아릴 알코올, 및 이소세틸 라놀레이트 등의 것을 포함한다.
더욱이, 본 발명에 따른 화장품 또는 약제학적 조성물은 또한 유제를 포함할 수 있다. 유제 (즉, 유화제)는 바람직하게, 조성물 성분들을 균일하게 혼화시키는데 유효량으로 사용된다. 유용한 유제로는 (i) 음이온계, 예로서, 지방산 비누, 예컨대, 칼륨 스테아레이트, 나트륨 스테아레이트, 암모늄 스테아레이트, 및 트리에탄올아민 스테아레이트; 지방산 비누를 함유하는 폴리올 지방산 모노에스테르, 예컨대, 칼륨 또는 나트륨 염을 함유하는 글리세롤 모노스테아레이트; 황산 에스테르 (나트륨 염), 예컨대, 나트륨 라우릴 5 설페이트, 및 나트륨 세틸 설페이트; 및 황산 에스테르를 함유하는 폴리올 지방산 모노에스테르, 예컨대, 나트륨 라우릴 설페이트를 함유하는 글리세릴 모노스테아레이트; (ii) 양이온계, 염화물, 예로서, N(스테아로일 콜아미노 포르밀메틸) 피리듐; N-소야-N-에틸 모르폴리늄 에토설페이트; 알킬 디메틸 벤질 염화암모늄; 디이소부틸페녹시테옥시에틸 디메틸 벤질 염화암모늄; 및 세틸 피리듐 클로라이드; 및 (iii) 비이온계, 예로서, 폴리옥시에틸렌 지방 알코올 에테르, 예컨대, 모노스테아레이트; 폴리옥시에틸렌 라우릴 알코올; 폴리옥시프로필렌 지방 알코올 에테르, 예컨대, 프로폭실화된 올레일 알코올; 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 예컨대, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트; 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 예컨대, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트; 소르비탄 지방산 에스테르, 예컨대, 소르비탄; 폴리옥시에틸렌 글리콜 지방산 에스테르, 예컨대, 폴리옥시에틸렌 글리콜 모노스테아레이트; 및 폴리올 지방산 에스테르, 예컨대, 글리세릴 모노스테아레이트 및 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트; 및 에톡실화된 라놀린 유도체, 예컨대, 에톡실화된 라놀린, 에톡실화된 라놀린 알코올 및 에톡실화된 콜레스테롤을 포함한다. 유제를 선택하는 것은 예시적으로 [Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika, Huthig Buch Verlag, Heidelberg, 2nd edition, 1989, 3rd part]에 기술되어 있다.
본 발명에 따른 화장품 또는 약제학적 조성물은 계면활성제를 포함할 수 있다. 적합한 계면활성제는, 예를 들면, 일반적으로, 세정제, 유화제, 포움 부스터, 하이드로트로프, 안정화제, 현탁제 및 비계면활성제(액체중 고체의 분산을 촉진시킴)로서 분류되는 계면활성제를 포함할 수 있다.
계면활성제는 일반적으로 양쪽성, 음이온성, 양이온성 및 비이온성 계면활성제로서 분류된다. 양쪽성 계면활성제로는 아실아미노산 및 유도체 및 N-알킬아미노산을 포함한다. 음이온 계면활성제로는 아실아미노산 및 염, 예로서, 아실글루타메이트, 아실펩티드, 아실알킬사르코시네이트, 및 아실타우레이트; 카복실산 및 염, 예로서, 알카노산, 에스테르 카복실산, 및 에테르 카복실산; 설폰산 및 염, 예로서, 아실 이세티오네이트, 알킬아릴 설포네이트, 알킬 설포네이트, 및 설포숙시네이트; 황산 에스테르, 예로서, 알킬 에테르 설페이트 및 알킬 설페이트를 포함한다. 양이온성 계면활성제로는 알킬아민, 알킬 이미다졸린, 에톡실화된 아민, 및 4급 (예로서, 알킬벤질디메틸암모늄 염, 알킬 베타인, 헤테로사이클릭 암모늄 염, 및 테트라 알킬암모늄 염)을 포함한다. 그리고, 비이온성 계면활성제로는 알코올, 예로서, 8 내지 18개의 탄소 원자를 함유하는 1차 알코올; 알카놀아미드 예로서, 알카놀아민 유도된 아미드 및 에톡실화된 아미드; 아민 옥시드; 에스테르 예로서, 에톡실화된 카복실산, 에톡실화된 글리세리드, 글리콜 에스테르 및 유도체, 모노글리세리드, 폴리글리세릴 에스테르, 다가 알코올 에스테르 및 에테르, 소르비탄/소르비톨 에스테르, 및 인산 트리에스테르; 및 에테르 예로서, 에톡실화된 알코올, 에톡실화된 라놀린, 에톡실화된 폴리실록산, 및 프로폭실화된 폴리옥시에틸렌 에테르를 포함한다.
추가로, 본 발명에 따른 화장품 또는 약제학적 조성물은 또한 필름 형성제를 포함할 수 있다. 본 발명에 따라 사용되는 적합한 필름 형성제는 조성물이 매끄럽고 고르게 유지시켜 주고, 이는 제한없이, 아크릴아미드/나트륨 아크릴레이트 공중합체; 암모늄 아크릴레이트 공중합체; 페루 발삼유; 셀룰로스 검; 에틸렌/말산 무수물 공중합체; 하이드록시에틸셀룰로스; 하이드록시프로필셀룰로스; 폴리아크릴아미드; 폴리에틸렌; 폴리비닐 알코올; pvm/MA 공중합체 (폴리비닐 메틸에테르/말레산 무수물); PVP (폴리비닐피롤리돈); 말레산 무수물 공중합체 예로서, 걸프 사이언스 앤드 테크놀리지(Gulf Science and Technology)로부터 구입가능한 PA-18; PVP/헥사데센 공중합체 예로서, GAF 코포레이션(GAF Corporation)으로부터 구입가능한 가넥스 V-216(Ganex V-216); 아크릴산 아크릴레이트 공중합체 등을 포함한다.
일반적으로, 필름 형성제는 전체 조성물의 약 0.1 중량% 내지 약 10 중량%의 양으로 사용될 수 있고, 약 1 중량% 내지 약 8 중량%가 바람직하고, 약 0.1 DEG/O 내지 약 5 중량%가 가장 바람직하다. 프럭토스; 글루코스; 글루탐산; 글리세린; 허니; 말티톨; 메틸 글루세트-10; 메틸 글루세트-20; 프로필렌 글리콜; 나트륨 락테이트; 수크로스; 등을 비롯한 보습제 또한 유효량으로 사용될 수 있다.
물론, 본 발명의 화장품 또는 약제학적 조성물은 방부제도 포함할 수 있다. 본 발명의 특정 조성물에 따른 방부제는 제한없이, 부틸파라벤; 에틸파라벤; 이미다졸리디닐 우레아; 메틸파라벤; O-페닐페놀; 프로필파라벤; 쿼터늄-14; 쿼터늄-15; 나트륨 디하이드로아세테이트; 아연 피리티온 등을 포함한다.
방부제는 미생물의 성장을 막거나 지연시키는데 유효량으로 사용된다. 일반적으로, 방부제는 전체 조성물의 약 0.1 중량% 내지 약 1 중량%의 양으로 사용되고, 약 0.1 중량% 내지 약 0.8 중량%가 바람직하고, 약 0.1 중량% 내지 약 0.5 중량%가 가장 바람직하다.
본 발명에 따른 화장품 또는 약제학적 조성물은 또한 방향제를 포함할 수 있다. 당업계의 기술자에게 잘 알려져 있는 방향제 (향료 구성 요소) 및 안료 (착색제)는 본 발명의 조성물에 원하는 향기와 색을 부여하는데 유효량으로 사용될 수 있다.
추가로, 본 발명의 화장품 또는 약제학적 조성물은 또한 왁스를 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 유용한 적합한 왁스는 동물성 왁스, 예로서, 밀납, 경랍, 또는 울 왁스 (라놀린); 식물성 왁스, 예로서, 카나우바 또는 칸델리나; 광랍, 예로서, 몬탄 왁스 또는 지랍; 및 석유 왁스, 예로서, 파라핀 왁스 및 미세결정질 왁스 (고분자 석유 왁스)를 포함한다. 동물성, 식물성, 및 몇몇 광랍은 주로 고분자 지방 알코올의 고분자 지방산 에스테르이다. 예를 들면, 트리콘타놀의 헥사데카노산 에스테르는 일반적으로 밀납의 주요한 구성 요소인 것으로 보고되어 있다.
본 발명에 따른 다른 적합한 왁스로는 폴리에틸렌 폴리옥시에틸렌, 및 일산화탄소와 수소로부터 유도된 탄화수소 왁스를 비롯한 합성 왁스를 포함한다.
대표적인 왁스로는 세로신; 세틸 에스테르; 수소화된 호호바유; 수소화된 호호바 왁스; 수소화된 쌀겨 왁스; 목랍; 호호바 버터; 호호바유; 호호바 왁스; 뭉크 왁스; 몬탄산 왁스; 오우리큐리 왁스; 쌀겨 왁스; 셸락 왁스; 황화 호호바유; 합성 밀납; 합성 호호바유; 트리하이드록시스테아린; 세틸 알코올; 스테아릴 알코올; 코코아 버터; 라놀린 지방산; 25 DEG C로 시판되는 모노-, 디- 및 25 트리글리세리드, 예컨대, 글리세일 트리베헤네이트 (베헨산과 글리세린의 트리에스테르) 및 각각 상표명 신크로왁스 HRC(Syncrowax HRC) 및 신크로왁스 HGL-C(Syncrowax HGL-C) 하에, 뉴욕주 뉴욕에 소재하는 크로다 인코포레이티드(Croda, Inc.)로부터 구입가능한 C1g-C36 산 트리글리세리드 (C1g-C36 카복실산과 글리세린의 트리에스테르 혼합물); 25 DEG C로 시판되는 지방 에스테르; 실리콘 왁스, 예로서, 메틸옥타데칸옥시폴리실록산 및 폴리 (디메틸실옥시) 스테아록시실록산; 스테아릴 모노- 및 디에탄올아미드; 로신 및 그의 유도체, 예로서, 글리콜 및 글리세롤의 아비에테이트; 25 DEG C로 시판되는 수소화된 오일; 및 수크로글리세리드를 포함한다. 수성계에서 유효량으로 사용될 수 있는 증점제 (점성 조절제)는 알긴; 카보머, 예로서, 카보머 934, 934P, 940 및 941; 셀룰로스 검; 세테아릴 알코올, 코카미드 DEA, 덱스트린; 젤라틴; 하이드록시에틸셀룰로스; 하이드록시프로필셀룰로스; 하이드록시프로필 메틸셀룰로스; 마그네슘 알루미늄 실리케이트; 미리스틸 알코올; 귀리 분말; 올레아미드 DEA; 올레일 알코올; PEG-7M; PEG-14M; PEG-9OM; 스테아르아미드 DEA; 스테아르아미드 MEA; 스테아릴 알코올; 트라가칸트 검; 소맥 전분; 크산탄 검 등을 포함하고; 상기 증점제 목록중에서, DEA는 디에탄올아민이고, MEA는 모노에탄올아민이다. 비수성계에서 유효량으로 사용될 수 있는 증점제 (점성 조절제)는 알루미늄 스테아레이트; 밀납; 칸델리나 왁스; 카나우바; 세레신; 세테아릴 알코올; 세틸 알코올; 콜레스테롤; 수화 실리카; 수소화된 피마자유; 수소화된 면실유; 수소화된 대두유; 수소화된 우지 글리세라이드; 수소화된 식물성 오일; 하이드록시프로필 셀룰로스; 라놀린 알코올; 미리스틸 알코올; 옥틸도데실 스테아로일 설페이트; 올레일 알코올; 지랍; 미세결정질 왁스; 파라핀, 펜타에리트리틸 테트라옥타노에이트; 폴리아크릴아미드; 폴리부텐; 폴리에틸렌; 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트; 프로필렌 글리콜 디펠라고네이트; 스테아르알코늄 헥토라이트; 스테아릴 알코올; 스테아릴 스테아레이트; 합성 밀납; 트리하이드록시스테아린; 트리리놀레인; 트리스테아린; 아연 스테아레이트 등을 포함한다.
제형내 통상의 천연 및 합성 증점제 또는 겔 형성제는 가교결합된 폴리아크릴산 및 그의 유도체, 폴리사카라이드, 예로서, 크산틴 검 또는 알기네이트, 카복시메틸셀룰로스 또는 하이드록시카복시메틸셀룰로스, 하이드로콜로이드, 예로서, 아라비아 고무 또는 몬모릴로나이트 광물, 예로서, 벤토나이트, 또는 지방 알코올, 폴리비닐 알코올 및 폴리비닐피롤리돈이다.
본 발명에 따른 화장품 또는 약제학적 조성물에 그의 용도에 유효한 양으로 첨가되거나 사용될 수 있는 다른 성분들로는 성능 또는 소비자 관심 유발을 증진시키는 생체 첨가제, 예로서, 아미노산, 단백질, 바닐라, 알로에 추출물, 바이오플라보노이드 등; 완충제; 에멀젼 안정화제; pH 조절제; 불투명화제; 및 추진제, 예로서, 부탄 이산화탄소, 에탄, 하이드로클로로플루오로카본 22 및 142b, 하이드로플루오로카본 152a, 이소부탄, 이소펜탄, 질소, 아산화질소, 펜탄, 프로판 등을 포함한다.
추가로, 본 발명에 따른 제제는 또한 항산화제, 유리-라디칼 제거제, 피부 보습제 또는 수분-보습제, 항홍반성, 항염증성 또는 항알레르기성 작용제를 그들의 작용을 보충하거나 증진시키기 위한 목적으로 포함할 수 있다. 특히, 이들 화합물은 비타민, 식물 추출물, 알파- 및 베타-하이드록시산, 세라미드, 항염증성, 항미생물성 또는 UV-차단 물질, 및 그의 유도체 및 그의 혼합물의 군으로부터 선택될 수 있다. 유리하게, 본 발명의 제제는 또한 UV-B 및/또는 UV-A 영역에서 UV 방사를 흡수하는 물질을 포함할 수 있다. 액체상은 광유, 광랍, 분지형 및/또는 비분지형 탄화수소 및 탄화수소 왁스, 포화 및/또는 불포화, 분지형 및/또는 비분지형 C8-C24-알칸카복실산의 트리글리세리드의 물질 군으로부터 유리하게 선택되고; 이는 합성, 반합성 또는 천연 오일, 예로서, 올리브유, 팜유, 아몬드유 또는 혼합물; 오일, 지방 또는 왁스, 방향족 카복실산과 포화 및/또는 불포화, 분지형 및/또는 비분지형 C3-C30-알코올로부터 포화 및/또는 불포화, 분지형 및/또는 비분지형 C3-C30-알칸 카복실산과 포화 및/또는 불포화, 분지형 및/또는 비분지형 C3-C30-알코올의 에스테르, 예를 들면 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 스테아레이트, 헥실데실 스테아레이트, 올레일 올레이트; 및 또한 그러한 에스테르, 예로서, 호호바유, 알킬 벤조에이트 또는 실리콘 오일의 합성, 반합성 및 천연 혼합물, 예를 들면, 사이클로메티콘, 디메틸폴리실록산, 디에틸폴리실록산, 옥타메틸사이클로-테트라실록산 및 그의 혼합물, 또는 디알킬 에테르로부터 선택된다.
본 발명에 따른 활성 성분은 예를 들면, 예로서, 막대 비누, 화장실용 비누, 염석 비누, 투명 비누, 럭셔리 비누, 방취 비누, 크림 비누, 유아용 비누, 피부 보호 비누, 연마 비누 및 신뎃(syndet), 액체 비누, 페이스트 비누, 연질 비누, 워싱 페이스트, 액체 세제, 샤워 및 배스 제제, 예컨대, 워싱 로션, 샤워 제제, 샤워 겔, 폼 배쓰, 크림 포움 배쓰, 오일 배쓰, 배쓰 추출물, 스크럽 제제, 계내 제품, 세이빙 폼, 세이빙 로션, 세이빙 크림과 같은 피부 세정용의 화장품 조성물에 사용될 수 있다. 또한, 피부 화장품 제제, 예로서, W/O 또는 O/W 스킨 및 바디 크림, 데이 및 나이트 크림, 자외선 차단 조성물, 애프터선 제품, 멀티플 에멀젼, 젤레(gelee), 미세에멀젼, 리포좀 제제, 니오좀 제제, 리포겔, 스포트겔, 보습 크림, 미백 크림, 비타민 크림, 스킨 로션, 케어 로션, 앰플, 프리쉐이브, 보습 로션, 셀룰라이트 크림, 탈색 조성물, 마사지용 제제, 바디 파우더, 방취제, 지한제, 퇴치제 등으로 적합하다. "활성 성분"이라는 용어는 예를 들면, 상기 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물, 그의 돌연변이체, 유도체, 불활성 형태, 분해물, 분획 또는 추출물을 지칭한다. 바람직하게, 본원 하기 조성물에서 사용되는 "활성 성분"이라는 용어는 예컨대, 본원 상기에 기술된 바와 같은 미생물, 그의 돌연변이체, 유도체, 불활성 형태, 분해물, 분획 또는 추출물의 치환체이다. 달리 명시하지 않는 한, 하기에 기술하는, 조성물에서 사용되는 "활성 성분"이라는 용어는 예컨대, 조성물내 상기 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물, 그의 돌연변이체, 유도체, 불활성 형태, 분해물, 분획 또는 추출물의 백분율(%)을 지칭한다. 바람직하게, "활성 성분"이라는 용어는 예컨대, 1 ml당 102-1013개 세포의 농도로 존재하는 본원 상기에 정의된 바와 같은, 본 발명에 따른 미생물, 예컨대, 락토바실러스 종, 또는 류코노스톡 종을 지칭한다. 더욱 바람직하게, "활성 성분"이라는 용어는 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 농도, 예컨대, 1 ml당 102-1013개 세포의 농도로 존재하는 본원 상기에 정의된 바와 같은, 본 발명에 따른 미생물, 예컨대, 락토바실러스 종, 또는 류코노스톡 종을 0.001%, 0.01%, 0.1%, 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99.9%, 99.99% 또는 99.999% 이하로, 가장 바람직하게는, 0.001 이하 내지 5% 이하로 포함하는 용액을 지칭한다.
바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 데일리 케어 O/W 제제를 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법(International Nomenclature of Cosmetic Ingredients), INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 1.7 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
0.7 세테아레트-25
2.0 디에틸아미노 하이드록시벤조일 헥실 벤조에이트
2.0 PEG-14 디메티콘
3.6 세테아릴 알코올
6.0 에틸헥실 메톡시신나메이트
2.0 디부틸 아디페이트
B 5.0 글리세롤
0.2 디소듐 EDTA
1.0 판테놀
충분량 방부제
68.4 수성 dem.
C 4.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
D 0.2 소듐 아스코르빌 포스페이트
1.0 토코페릴 아세테이트
0.2 비사보롤
1.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아스코르베이트, 토코페롤, 레티놀
1.0 활성 성분
E 충분량 수산화나트륨
활성 성분 5%:
A 1.7 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
0.7 세테아레트-25
2.0 디에틸아미노 하이드록시벤조일 헥실 벤조에이트
2.0 PEG-14 디메티콘
3.6 세테아릴 알코올
6.0 에틸헥실 메톡시신나메이트
2.0 디부틸 아디페이트
B 5.0 글리세롤
0.2 디소듐 EDTA
1.0 판테놀
충분량 방부제
64.4 수성 dem.
C 4.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
D 0.2 소듐 아스코르빌 포스페이트
1.0 토코페릴 아세테이트
0.2 비사보롤
1.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아스코르베이트, 토코페롤, 레티놀
5.0 활성 성분
E 충분량 수산화나트륨
A상 및 B상을 각각 따로따로 대략 8O ℃까지 가열한다. 이어서, B상을 A상으로 교반하고, 균질화한다. C상을 A상 및 B상의 배합물로 교반하고, 균질화한다. 교반하면서, 혼합물을 대략 40 ℃까지 냉각시킨 후; D상을 가하고, E상을 사용하여 pH를 대략 6.5로 조정한다. 이어서, 용액을 균질화하고, 실온까지 냉각시킨다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 보호용 데이 크림 O/W 제제를 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 1.7 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
0.7 세테아레트-25
2.0 디에틸아미노 하이드록시벤조일 헥실 벤조에이트
2.0 PEG-14 디메티콘
3.6 세테아릴 알코올
6.0 에틸헥실 메톡시신나메이트
2.0 디부틸 아디페이트
B 5.0 글리세롤
0.2 디소듐 EDTA
1.0 판테놀
충분량 방부제
68.6 수성 dem.
C 4.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
D 1.0 소듐 아스코르빌 포스페이트
1.0 토코페릴 아세테이트
0.2 비사보롤
1.0 활성 성분
E 충분량 수산화나트륨
활성 성분 5%:
A 1.7 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
0.7 세테아레트-25
2.0 디에틸아미노 하이드록시벤조일 헥실 벤조에이트
2.0 PEG-14 디메티콘
3.6 세테아릴 알코올
6.0 에틸헥실 메톡시신나메이트
2.0 디부틸 아디페이트
B 5.0 글리세롤
0.2 디소듐 EDTA
1.0 판테놀
충분량 방부제
64.6 수성 dem.
C 4.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
D 1.0 소듐 아스코르빌 포스페이트
1.0 토코페릴 아세테이트
0.2 비사보롤
5.0 활성 성분
E 충분량 수산화나트륨
A상 및 B상을 각각 따로따로 대략 8O ℃까지 가열한다. 이어서, B상을 A상으로 교반하고, 균질화한다. C상을 A상 및 B상의 배합물내로 도입하고, 균질화한다. 교반하면서, 혼합물을 대략 40 ℃까지 냉각시킨 후; D상을 가하고, E상을 사용하여 pH를 대략 6.5로 조정한다. 이어서, 용액을 균질화하고, 실온까지 냉각시킨다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 피부 세정제 O/W 제제를 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 10.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
10.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드
1.5 사이클로펜타실록산, 사이클로헥사실록산
2.0 PEG-40 수소화된 피마자유
B 3.5 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
C 1.0 토코페릴 아세테이트
0.2 비사보롤
충분량 방부제
충분량 향미유
D 3.0 폴리쿼터늄-44
0.5 코코트리모늄 메토설페이트
0.5 세테아레트-25
2.0 판테놀, 프로필렌 글리콜
4.0 프로필렌 글리콜
0.1 디소듐 EDTA
1.0 활성 성분
60.7 수성 dem.
활성 성분 5%:
A 10.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
10.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드
1.5 사이클로펜타실록산, 사이클로헥사실록산
2.0 PEG-40 수소화된 피마자유
B 3.5 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
C 1.0 토코페릴 아세테이트
0.2 비사보롤
충분량 방부제
충분량 향미유
D 3.0 폴리쿼터늄-44
0.5 코코트리모늄 메토설페이트
0.5 세테아레트-25
2.0 판테놀, 프로필렌 글리콜
4.0 프로필렌 글리콜
0.1 디소듐 EDTA
5.0 활성 성분
56.7 수성 dem.
먼저, A상을 용해시킨 후, B상을 A상으로 교반시킨다. 이어서, C상을 A상 및 B상의 배합물내로 도입한다. 다음 단계에서, D상을 용해시키고, A상, B상 및 C상의 배합물내로 교반시킨다. 혼합물을 균질화하고, 15분 동안 교반한다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 데일리 케어 바디 스프레이 제제를 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 3.0 에틸헥실 메톡시신나메이트
2.0 디에틸아미노 하이드록시벤조일 헥실 벤조에이트
1.0 폴리쿼터늄-44
3.0 프로필렌 글리콜
2.0 판테놀, 프로필렌 글리콜
1.0 사이클로펜타실록산, 사이클로헥사실록산
10.0 옥틸도데카놀
0.5 PVP
10.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드
3.0 C12-15 알킬 벤조에이트
3.0 글리세롤
1.0 토코페릴 아세테이트
0.3 비사보롤
1.0 활성 성분
59.2 알코올
활성 성분 5%:
3.0 에틸헥실 메톡시신나메이트
2.0 디에틸아미노 하이드록시벤조일 헥실 벤조에이트
1.0 폴리쿼터늄-44
3.0 프로필렌 글리콜
2.0 판테놀, 프로필렌 글리콜
1.0 사이클로펜타실록산, 사이클로헥사실록산
10.0 옥틸도데카놀
0.5 PVP
10.0 카프릴산/카프르산 트리글리세리드
3.0 C12-15 알킬 벤조에이트
3.0 글리세롤
1.0 토코페릴 아세테이트
0.3 비사보롤
5.0 활성 성분
55.2 알코올
A상의 구성 요소의 중량을 측정하고, 투명해질 때까지 용해시킨다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 스킨 겔을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
3.6 PEG-40 수소화된 피마자유
15.0 알코올
0.1 비사보롤
0.5 토코페릴 아세테이트
충분량 향미유
B 3.0 판테놀
0.6 카보머
1.0 활성 성분
75.4 수성 dem.
C 0.8 트리에탄올아민
활성 성분 5%:
3.6 PEG-40 수소화된 피마자유
15.0 알코올
0.1 비사보롤
0.5 토코페릴 아세테이트
충분량 향미유
B 3.0 판테놀
0.6 카보머
5.0 활성 성분
71.4 수성 dem.
C 0.8 트리에탄올아민
먼저, 투명해질 때까지 A상을 용해시킨다. B상을 습식파쇄시킨 후, C상으로 중화시킨다. 다음 단계에서, A상을 균질화된 B상으로로 교반시키고, 혼합물을 균질화한다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 애프터 쉐이브 로션을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 10.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
5.0 토코페릴 아세테이트
1.0 비사보롤
0.1 향미유
0.3 아크릴레이트/c10-30 알킬 아크릴레이트 가교중합체
B 15.0 알코올
1.0 판테놀
3.0 글리세롤
1.0 활성 성분
0.1 트리에탄올아민
63.5 수성 dem.
활성 성분 5%:
A 10.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
5.0 토코페릴 아세테이트
1.0 비사보롤
0.1 향미유
0.3 아크릴레이트/C10-30 알킬 아크릴레이트 가교중합체
B 15.0 알코올
1.0 판테놀
3.0 글리세롤
5.0 활성 성분
0.1 트리에탄올아민
59.5 수성 dem.
A상의 구성 요소를 혼합한다. 다음 단계에서, B상을 용해시키고, A상으로 도입한 후, 균질화시킨다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 항발한성 롤-온을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 0.40 하이드록시에틸셀룰로스
50.0 수성 dem.
B 25.0 알코올
0.1 비사보롤
0.3 파네솔
2.0 PEG-40 수소화된 피마자유
충분량 향미유
C 3.0 디프로필렌 글리콜
3.0 PEG-14 디메티콘
3.0 폴리쿼터늄-16
8.2 수성 dem.
D 1.0 활성 성분
활성 성분 5%:
A 0.40 하이드록시에틸셀룰로스
46.0 수성 dem.
B 25.0 알코올
0.1 비사보롤
0.3 파네솔
2.0 PEG-40 수소화된 피마자유
충분량 향미유
C 3.0 디프로필렌 글리콜
3.0 PEG-14 디메티콘
3.0 폴리쿼터늄-16
8.2 수성 dem.
D 5.0 활성 성분
A상을 팽윤시키고, B상 및 C상을 독립적으로 가용화시킨다. 이어서, B상 및 A상을 C상으로 교반한다. 마지막으로, D상을 가한다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 투명 데오 스틱을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 3.0 세테아레트-25
3.0 PEG-40 수소화된 피마자유
0.2 비사보롤 rac.
1.0 토코페릴 아세테이트
3.0 향미유
5.0 나트륨 스테아레이트
15.0 글리세롤 87%
60.0 프로필렌 글리콜
9.3 수성 dem.
B 1.0 활성 성분
활성 성분 5%:
A 3.0 세테아레트-25
3.0 PEG-40 수소화된 피마자유
0.2 비사보롤 rac.
1.0 토코페릴 아세테이트
3.0 향미유
5.0 나트륨 스테아레이트
15.0 글리세롤 87%
60.0 프로필렌 글리콜
5.3 수성 dem.
B 5.0 활성 성분
A상의 구성 요소의 중량을 측정하고, 용융시킨다. B상을 가한다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 항발한성 스프레이를 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 3.0 PEG-40 수소화된 피마자유
0.2 피탄트리올
0.5 향미유
40.0 알코올
B 53.49 수성 dem.
2.0 프로필렌 글리콜
0.5 판테놀
0.01 BHT
C 1.0 활성 성분
활성 성분 5%:
A 3.0 PEG-40 수소화된 피마자유 0.2 피탄트리올
0.5 향미유
40.0 알코올
B 49.49 수성 dem.
2.0 프로필렌 글리콜
0.5 판테놀
0.01 BHT
C 5.0 활성 성분
A상을 가용화시킨다. 다음 단계에서, B상의 구성 요소를 연속하여 가한다. 마지막으로, C상을 가한다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 데오-스틱을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 26.0 스테아릴 알코올
60.0 사이클로펜타실록산, 사이클로헥사실록산
5.0 PEG-40 수소화된 피마자유
2.5 팔미트산 이소프로필
B 1.44 향미유
0.05 BHT
C 1.0 활성 성분
활성 성분 5%:
A 26.0 스테아릴 알코올
56.0 사이클로펜타실록산, 사이클로헥사실록산
5.0 PEG-40 수소화된 피마자유
2.5 팔미트산 이소프로필
B 1.44 향미유
0.05 BHT
C 5.0 활성 성분
A상의 구성 요소의 중량을 측량하고, 용융시킨다. 이어서, 약 50 ℃로 교반시키면서 냉각시킨다. B상 및 C상의 구성 요소를 균질화하고, 연속하여 가한다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 투명 데오-롤 온을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 0.40 하이드록시에틸셀룰로스
50.0 수성 dem.
B 2.0 PEG-40 수소화된 피마자유
0.1 비사보롤
0.3 파네솔
0.5 향미유
7.6 수성 dem.
25.0 알코올
C 3.0 프로필렌 글리콜
3.0 PEG-14 디메티콘
3.0 폴리쿼터늄-16
0.1 알란토인
D 1.0 활성 성분
활성 성분 5%:
A 0.40 하이드록시에틸셀룰로스
46.0 수성 dem.
B 2.0 PEG-40 수소화된 피마자유
0.1 비사보롤
0.3 파네솔
0.5 향미유
7.6 수성 dem.
25.0 알코올
3.0 프로필렌 글리콜
3.0 PEG-14 디메티콘
3.0 폴리쿼터늄-16
0.1 알란토인
D 5.0 활성 성분
A상을 팽윤화시키고, B상을 가용화시킨다. 이어서, C상을 가하고 교반한다. 마지막으로, B상, C상 및 D상을 A상으로 교반한다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 에멀젼을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 1.5 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
2.0 세테아레트-25
5.0 PEG-40 수소화된 피마자유
1.5 글리세릴 스테아레이트
1.0 세테아릴 알코올
0.5 유세리눔 안하이드리쿰
0.2 피탄트리올
1.0 세틸 팔피테이트
5.0 디카프릴릴 에테르
0.3 파메졸
B 충분량 방부제
72.0 수성 dem.
C 충분량 향미유
D 1.0 활성 성분
활성 성분 5%:
A 1.5 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
2.0 세테아레트-25
5.0 PEG-40 수소화된 피마자유
1.5 글리세릴 스테아레이트
1.0 세테아릴 알코올
0.5 유세리눔 안하이드리쿰
0.2 피탄트리올
1.0 세틸 팔피테이트
5.0 디카프릴릴 에테르
0.3 파네솔
B 충분량 방부제
68.0 수성 dem.
C 충분량 향미유
D 5.0 활성 성분
A상 및 B상을 각각 따로따로 대략 8O ℃까지 가열한다. 이어서, B상을 A상으로 교반하고, 3분 동안 균질화한다. 이어서, 혼합물을 대략 40 ℃까지 냉각시키고; C상 및 D상을 가한다. 마지막으로, 혼합물을 교반하고, 실온까지 냉각시킨다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 데오-펌프 스프레이를 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 5.0 PEG-40 수소화된 피마자유
0.3 PEG-7 수소화된 피마자유
1.0 글리세릴 스테아레이트
1.0 세테아릴 알코올
5.0 사이클로펜타실록산
0.5 유세리눔 안하이드리쿰
0.2 피탄트리올
5.0 디카프릴릴 에테르
0.3 파네솔
B 충분량 방부제
76.7 수성 dem.
C 충분량 향미유
D 1.0 활성 성분
활성 성분 5%:
A 5.0 PEG-40 수소화된 피마자유
0.3 PEG-7 수소화된 피마자유
1.0 글리세릴 스테아레이트
1.0 세테아릴 알코올
6.0 사이클로펜타실록산
0.5 유세리눔 안하이드리쿰
0.2 피탄트리올
5.0 디카프릴릴 에테르
0.3 파네솔
B 충분량 방부제
72.7 수성 dem.
C 충분량 향미유
D 5.0 활성 성분
A상 및 B상을 각각 따로따로 대략 8O ℃까지 가열한다. B상을 균질화하고, A상 및 C상으로 교반한다. 이어서, 혼합물을 대략 40 ℃까지 냉각시킨 후; D상을 가한다. 마지막으로, 혼합물을 교반하고, 실온까지 냉각시킨다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 데오-로션을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 1.5 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
1.5 세테아레트-25
2.0 PEG-40 수소화된 피마자유
2.0 글리세릴 스테아레이트
2.0 세테아릴 알코올 2.0 세틸 알코올
2.0 수소화된 코코-글리세리드
8.0 데실 올레이트
0.5 PEG-14 데메히콘
0.3 파네솔
B 충분량 방부제
75.2 수성 dem.
C 충분량 향미유
D 1.0 활성 성분
활성 성분 5%:
A 1.5 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
1.5 세테아레트-25
2.0 PEG-40 수소화된 피마자유
2.0 글리세릴 스테아레이트
2.0 세테아릴 알코올
2.0 세틸 알코올
2.0 수소화된 코코-글리세리드
8.0 데실 올레이트
0.5 PEG-14 데메히콘
0.3 파네솔
B 충분량 방부제
71.2 수성 dem.
C 충분량 향미유
D 5.0 활성 성분
A상 및 B상을 각각 따로따로 대략 8O ℃까지 가열한다. B상을 균질화하고, A상로 교반한다. 이어서, 혼합물을 대략 40 ℃까지 냉각시킨 후; C상 및 D상을 가한다. 마지막으로, 혼합물을 교반하고, 실온까지 냉각시킨다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 O/W형의 데오-로션을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 2.0 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
2.0 세테아레트-25
4.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
2.0 세테아릴 알코올
2.0 수소화된 코코-글리세리드
1.0 글리세릴 스테아레이트
1.0 광유
0.5 디메티콘
0.2 비사보롤
B 2.0 판테놀, 프로필렌 글리콜
2.0 프로필렌 글리콜
충분량 방부제
78.9 수성 dem.
C 1.2 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
D 0.2 토코페롤
충분량 향미유
E 1.0 활성 성분
활성 성분 5%:
A 2.0 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
2.0 세테아레트-25
4.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
2.0 세테아릴 알코올
2.0 수소화된 코코-글리세리드
1.0 글리세릴 스테아레이트
1.0 광유
0.5 디메티콘
0.2 비사보롤 B 2.0 판테놀, 프로필렌 글리콜
2.0 프로필렌 글리콜
충분량 방부제
74.9 수성 dem.
C 1.2 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 소듐 아크릴레이트 공중합체
D 0.2 토코페롤
충분량 향미유
E 5.0 활성 성분
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 풋 발삼(foot balsam)을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 2.0 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
2.0 세테아레트-25
5.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
4.0 세틸 알코올
4.0 글리세릴 스테아레이트
5.0 광유
0.2 멘톨
0.5 캄포
B 69.3 수성 dem.
충분량 방부제
C 1.0 비사보롤
1.0 토코페릴 아세테이트
D 1.0 활성 성분
5.0 윗치 해이즐 추출물
활성 성분 5%:
A 2.0 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
2.0 세테아레트-25
5.0 세테아릴 에틸헥사노에이트 4.0 세틸 알코올
4.0 글리세릴 스테아레이트
5.0 광유
0.2 멘톨
0.5 캄포
B 65.3 수성 dem.
충분량 방부제
C 1.0 비사보롤
1.0 토코페릴 아세테이트
D 5.0 활성 성분
5.0 윗치 해이즐 추출물
A상 및 B상을 각각 따로따로 대략 8O ℃까지 가열한다. 이어서, B상을 A상로 교반하고, 균질화한다. 교반하면서, 혼합물을 대략 40 ℃까지 냉각시킨 후; C상 및 D상을 가한다. 이어서, 혼합물을 균질화하고, 교반하면서, 실온까지 냉각시킨다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 비사보롤과 함께 W/O 에멀젼을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 6.0 PEG-7 수소화된 피마자유
8.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
5.0 이소프로필 미리스테이트
15.0 광유
0.3 마그네슘 스테아레이트
0.3 알루미늄 스테아레이트
2.0 PEG-45/도데실 글리콜 공중합체
B 5.0 글리세롤
0.7 황산마그네슘
55.6 수성 dem.
C 1.0 활성 성분
0.5 토코페릴 아세테이트
0.6 비사보롤
활성 성분 5%:
A 6.0 PEG-7 수소화된 피마자유
8.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
5.0 이소프로필 미리스테이트
15.0 광유
0.3 마그네슘 스테아레이트
0.3 알루미늄 스테아레이트
2.0 PEG-45/도데실 글리콜 공중합체
B 5.0 글리세롤
0.7 황산마그네슘
51.6 수성 dem.
C 5.0 활성 성분
0.5 토코페릴 아세테이트
0.6 비사보롤
A상 및 B상을 각각 따로따로 대략 85 ℃까지 가열한다. 이어서, B상을 A상로 교반하고, 균질화한다. 교반하면서, 혼합물을 대략 40 ℃까지 냉각시킨 후; C상을 가한다. 이어서, 혼합물을 단시간 동안 균질화하고, 교반하면서, 실온까지 냉각시킨다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 샤워 겔을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 40.0 나트륨 라우레트설페이트
5.0 데실 글루코시드
5.0 코카미도프로필 베타인
1.0 활성 성분
1.0 판테놀
충분량 향미유
충분량 방부제
2.0 염화나트륨
46.0 수성 dem.
B 충분량 시트르산
활성 성분 5%:
A 40.0 나트륨 라우레트설페이트
5.0 데실 글루코시드
5.0 코카미도프로필 베타인
5.0 활성 성분
1.0 판테놀
충분량 향미유
충분량 방부제
2.0 염화나트륨
42.0 수성 dem.
B 충분량 시트르산
A상의 구성 요소를 혼합하고, 용해시킨다. B상, 즉 시트르산을 사용하여 pH를 6-7로 조정한다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 보습용 바디 케어 크림을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 2.0 세테아레트-25
2.0 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
3.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
1.0 디메티콘
4.0 세테아릴 알코올
3.0 글리세릴 스테아레이트 SE
5.0 광유
4.0 시몬드시아 친넨시스(Simmondsia chinensis)(호호바) 씨 오일
3.0 광유, 라놀린 알코올
B 5.0 프로필렌 글리콜
1.0 활성 성분
1.0 판테놀
0.5 마그네슘 알루미늄 실리케이트
충분량 방부제
65.5 수성 dem.
C 충분량 향미유
D 충분량 시트르산
활성 성분 5%:
A 2.0 세테아레트-25
2.0 세테아레트-6, 스테아릴 알코올
3.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
1.0 디메티콘
4.0 세테아릴 알코올
3.0 글리세릴 스테아레이트 SE
5.0 광유
4.0 시몬드시아 친넨시스 (호호바) 씨 오일
3.0 광유, 라놀린 알코올
B 5.0 프로필렌 글리콜
5.0 활성 성분
1.0 판테놀
0.5 마그네슘 알루미늄 실리케이트
충분량 방부제
61.5 수성 dem.
C 충분량 향미유
D 충분량 시트르산
A상 및 B상을 각각 따로따로 대략 80 ℃까지 가열한다. B상을 간단히 균질화한다. 이어서, B상을 A상으로 교반하고, 교반한다. 혼합물을 대략 40 ℃까지 냉각시킨 후; C상을 가한다. 이어서, 혼합물을 잘 균질화한다. D상, 즉 시트르산을 사용하여 pH를 6-7로 조정한다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 보습용 바디 케어 크림을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
활성 성분 1%:
A 6.0 PEG-7 수소화된 피마자유
10.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
5.0 이소프로필 미리스테이트
7.0 광유
0.5 쉬어 버터 (부티로스페르뭄 파키아이)
0.5 알루미늄 스테아레이트
0.5 마그네슘 스테아레이트
0.2 비사보롤
0.7 쿼터늄-18-헥토라이트
B 5.0 디프로필렌 글리콜
0.7 황산마그네슘
충분량 방부제
62.9 수성 dem.
C 충분량 향미유
1.0 활성 성분
활성 성분 5%:
A 6.0 PEG-7 수소화된 피마자유
10.0 세테아릴 에틸헥사노에이트
5.0 이소프로필 미리스테이트
7.0 광유
0.5 쉬어 버터 (부티로스페르뭄 파키아이)
0.5 알루미늄 스테아레이트
0.5 마그네슘 스테아레이트
0.2 비사보롤 0.7 쿼터늄-18-헥토라이트
B 5.0 디프로필렌 글리콜
0.7 황산마그네슘
충분량 방부제
58.9 수성 dem.
C 충분량 향미유
5.0 활성 성분
A상 및 B상을 각각 따로따로 대략 80 ℃까지 가열한다. B상을 A상으로 교반하고, 교반한다. 교반하면서, 혼합물을 대략 40 ℃까지 냉각시킨 후; C상을 가한다. 이어서, 혼합물을 균질화한다. 교반하면서, 실온까지 냉각시킨다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 포움 O/W 에멀젼을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
성분 (%) 실시예 1 실시예 2
W.-% Vol-% W.-% Vol-%
스테아린산 5.00 1.00
세틸 알코올 5.50
세테아릴 알코올 2.00
PEG-40 스테아레이트 8.50
PEG-20 스테아레이트 1.00
카프릴산/카프르산 트리글리세리드 4.00 2.00
C12-C15 알킬 벤조에이트 10.00 15.00
사이클로메티콘 4.00
디메티콘 0.50
활성 성분 5.0 10.0
에틸헥실 이소스테아레이트 5.00
미리스틸 미리스테이트 2.00
세레신 1.50
글리세롤 3.00
하이드록시프로필 전분 포스페이트 1.00 3.50
BHT 0.02
디소듐 EDTA 0.50 0.10
향미유, 방부제 충분량 충분량
안료 충분량 충분량
수산화칼륨 충분량 충분량
수성 dem. 100이 되도록 첨가 100이 되도록 첨가
pH를 6.5-7.5로 조정함 pH를 6.5-7.5로 조정함
에멀젼 1 70
에멀젼 2 35
질소 30
프로판/부탄 65
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 겔 크림을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
Figure 112008019372015-PCT00001
Figure 112008019372015-PCT00002
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 수성분산액을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
Figure 112008019372015-PCT00003
Figure 112008019372015-PCT00004
Figure 112008019372015-PCT00005
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 스틱을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
Figure 112008019372015-PCT00006
Figure 112008019372015-PCT00007
Figure 112008019372015-PCT00008
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 PIT 에멀젼을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
Figure 112008019372015-PCT00009
Figure 112008019372015-PCT00010
Figure 112008019372015-PCT00011
Figure 112008019372015-PCT00012
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 겔 크림을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
Figure 112008019372015-PCT00013
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 애프터 선 수성분산액을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
Figure 112008019372015-PCT00014
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 W/O 에멀젼을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
Figure 112008019372015-PCT00015
Figure 112008019372015-PCT00016
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 피커링 에멀젼을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
Figure 112008019372015-PCT00017
Figure 112008019372015-PCT00018
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 스틱을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
Figure 112008019372015-PCT00019
Figure 112008019372015-PCT00020
추가의 바람직한 실시태양에서, 화장품 조성물은 오일 겔을 포함하고, 이는 예를 들면, 국제 화장품 성분 명명법, INCI에 따라 하기 성분들(%)을 함유할 수 있다:
Figure 112008019372015-PCT00021
A상 및 B상을 각각 따로따로 대략 8O ℃까지 가열한다. 이어서, C상을 A상a및 B상으로 교반하고, 균질화한다. 마지막으로, 혼합물을 40 ℃까지 냉각시키고; D상 및 E상을 가한다.
본 발명은 또한 발 또는 운동선수의 발의 발 악취, 다한증의 예방용, 억제용, 또는 치료용 약제학적 조성물의 제조를 위한, 본원의 상기에 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물, 그의 유도체, 돌연변이체 또는 불활성 형태의 용도에 관한 것이다.
또다른 측면에서, 본 발명은 직물 또는 직물 기질과 관련하여 본원의 상기에 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물, 그의 유도체, 돌연변이체 또는 불활성 형태의 용도에 관한 것이다. 바람직하게, 본 발명은 직물 또는 직물 기질의 컨디셔닝 또는 함침을 위한 본원의 상기에 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물, 그의 유도체, 돌연변이체 또는 불활성 형태의 용도에 관한 것이다. 더욱 바람직하게, 본원의 상기에 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물, 그의 유도체, 돌연변이체 또는 불활성 형태는 당업계의 기술자에게 알려져 있거나, 본원 하기에 예시되어 있는 임의의 적합한 방법에 따라 직물 또는 직물 기잘 상에 적용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 직물 또는 직물 기질내의 본원의 상기에 기술된 바와 같은 임의의 용도, 조성물 또는 방법에 관한 것이다.
그러므로, 본 발명은 상기에 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물, 또는 이러한 미생물의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태를 직물 및 직물 기질과 함께 제형화하는 단계를 포함하는, 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지하기 위한, 직물 및 직물 기질 생산 방법에 관한 것이다. 바람직하게, 상기 직물 및 직물 기질은 본원의 상기에 기술된 바와 같은 화장학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함할 수 있거나, 본원의 상기에 기술된 바와 같은, 하나 이상의 화장품 또는 약제학적 조성물을 포함할 수 있다.
본 발명에 따라 사용되는 바, "피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지하기 위한, 직물 및 직물 기질"이라는 용어는 상기에 기술된 바와 같은 1종 이상의 본 발명의 미생물 또는 상기 미생물의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태를 포함하는 직물 조성물(들)에 관한 것이다. 본 발명의 직물 조성물은 임의 배합으로 상기 언급한 성분들을 포함한다고 파악된다. 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 막는데 적합한 1종 이상의 추가 성분을 임의로 포함할 수 있다 ([Ullmann, Vol. A 26 S. 227 ff, 1995] (본원에서 참고로 인용된다) 참조).
본 발명에 따라, 직물 및 직물 기질은 직물 섬유, 반-마감처리된 및 마감처리된 직물, 및 그로부터 생산된, 마감처리된 제품이며, 이는 또한 - 의료 산업용 직물과는 별도로 - 예를 들면, 카페트 및 다른 가정용 피륙 및 기술적 목적을 담당하는 직물 구성물을 포함한다. 이러한 구성물은 또한 기형의 구성물, 예로서, 플록, 선형 구성물, 예로서, 섬유사, 섬유, 방적사, 리넨, 코드, 로프, 합연사 및 고체 구성물, 예로서, 예를 들면, 펠트, 포(woven fabric), 양말, 편성포, 접착포 및 웨딩을 포함한다. 직물은 예를 들면, 천연 기원의 물질, 예컨대, 원면, 울 또는 아마, 또는 합성 물질, 예컨대, 폴리아미드, 폴리에스테르, 개질된 폴리에스테르, 폴리에스테르, 폴리에스테르 혼방 직물, 폴리아미드 혼방 직물, 폴리아크릴로니트릴, 트리아세테이트, 아세테이트, 폴리탄산염, 폴리프로필렌, 염화 폴리비닐, 폴리에스테르 미세섬유 또는 유리 섬유 직물로 제조될 수 있다.
본 발명의 실시태양에서, 피부에 의한 발 악취의 생성을 방지하기 위한 직물 또는 직물 기질 생산 방법은 기술자에게 알려져 있는 직물 마감처리용의 임의의 기계 또는 기구, 예를 들면, 표준 기계, 예로서, 플라즈(foulards)를 사용하여 수행될 수 있다. 바람직하게, 상기 플라즈는 예컨대, 수직형 공급부를 포함하는 플라드(foulard) 기계로서, 이는 예를 들면, 그를 통해 직물을 가이드하는, 함께 가압되는 2개의 롤을 필수 요소로서 포함한다. 롤 위에 수성 제형을 충진시켜 직물에 수분을 가할 수 있다. 전형적으로, 압력이 직물을 가압하고(quetch), 일정하게 적용될 수 있도록 한다. 또다른 바람직한 실시태양에서, 플라드 기계내의 직물은 예를 들면, 먼저 침지조로 가이드된 후, 예컨대 수직형 직물 공급부를 갖는 플라즈에서와 같이, 함께 가압되는 2개의 롤을 통해 하부으로부터 상부로 가이드된다. 직물의 마감처리용 기계 또는 기구, 특별히, 플라드 기계는 예를 들면, [Hans-Karl Rouette, "Handbuch der Textilveredlung," Deutscher Fachverlag 2003, p. 618 to 620](본원에서 참고로 인용된다)에 기재되어 있다.
본 발명의 추가의 실시태양에서, 본 발명에 따른, 피부에 의한 발 악취의 생성을 방지하기 위한 직물 및 직물 기질의 생산 방법은 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 소모 방법, 예로서, 예를 들면, 스프레잉, 슬롭 패딩, 키스-롤(kiss-roll) 또는 프린팅에 따라 수행될 수 있다. 바람직하게, 본 발명에 따른, 피부에 의한 발 악취의 생성을 방지하기 위한 직물 및 직물 기질의 생산 방법은 예를 들면, 1 내지 50%, 바람직하게, 20 내지 40%의 범위로 액체 흡착을 포함하는 소모 방법에 따라 수행된다.
본 발명의 추가의 실시태양에서, 직물은 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 수단에 의해, 예를 들면, 30 내지 100 ℃ 범위의 온도에서 건조시키거나, 100 ℃ 이상, 바람직하게, 101 ℃ 이상 내지 150 ℃ 이하, 바람직하게, 135 ℃ 이하 범위의 온도에서 열적으로 고정시켜 열처리할 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 10초 내지 30분 이하, 바람직하게, 30초 내지 10분 이하의 기간에 걸쳐 열처리될 수 있다. 본 발명의 추가의 바람직한 실시태양에서, 상이한 온도에서 2개의 열처리 단계로 수행되는데, 예를 들면, 제1 단계에서는 예컨대, 10초 내지 20분간의 기간에 걸쳐 예컨대, 30 내지 100 ℃ 범위의 온도에서 건조시킨 후, 예컨대, 30초 내지 3분간의 기간에 걸쳐 예컨대, 예컨대, 101 내지 135 ℃ 범위의 온도에서 고정시킨다.
바람직한 실시태양에서, 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 막는데 적합한, 본 발명에 따른 직물 및 직물 기질에 포함되는 추가 성분은 DE 40 35 378 또는 DE 10101294.2에 기재되어 있는 것과 같은 사이클로덱스트린, 또는 EP -A1-1522626에 기재되어 있는 것과 같은 아밀로스-함유 물질일 수 있다.
전형적으로, 사이클로덱스트린은 전분의 효소적 분해에 의해 형성되는 사이클릭 올리고사카라이드이다. 바람직하게, 본 발명에 따른 직물 또는 직물 기질에서의 성분으로서 사용되는 사이클로덱스트린은 α-, β- 또는 γ-사이클로덱스트린으로서, 이는 예를 들면, 각각 6, 7, 또는 8개의 α-1,4 연결된 글루코스 단위로 구성된다. 사이클로덱스트린 분자의 특징적인 특성은 대개 크기가 일정한 환 구조를 갖는다는 것이다. 전형적으로, 환의 내부 직경은 α-사이클로덱스트린의 경우 약 570 pm이고, β-사이클로덱스트린의 경우 약 780 pm이고, γ-사이클로덱스트린의 경우 약 950 pm이다. 사이클로덱스트린은 그의 구조에 기인하여 게스트 분자를 혼입할 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 이러한 게스트 분자로는 당업계의 기술자에게 알려져 있는 것과 같은 휘발성 향료를 포함한다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 본 발명은 본 발명에 따른 직물 또는 직물 기질의 냄새 특성을 변형시키기 위한 아밀로스-함유 물질의 용도를 제공한다. 바람직하게, 아밀로스 함량은 물질의 전체 중량에 기초하여 30 중량% 이상이다. 본 발명은 또한 직물이 아밀로스 또는 아밀로스-함유 물질로 마감처리되고, 바람직하게는, 아밀로스 함량이 30 중량% 이상인 것을 특징으로 하는, 직물의 냄새 특성을 변형시키는 방법을 제공한다. "아밀로스 또는 아밀로스-함유 물질"이라는 용어는 임의의 아밀로스-함유 전분, 예컨대, 천연 전분, 개질 전분 및 전분 유도체를 의미하고, 그의 아밀로스 함량은 바람직하게 30 중량% 이상이다. 전분은 천연, 예컨대, 옥수수 전분, 소맥 전분, 감자 전분, 사탕수수 전분, 쌀 전분 또는 마란타 전분일 수 있고, 천연 전분의 부분적인 분해를 통해 수득될 수 있거나, 화학적으로 개질될 수 있다. 또한, 그 자체의 순수한 아밀로스, 예컨대, 효소적으로 수득된 아밀로스, 예컨대, 수크로스로부터 수득된 아밀로스도 적합하다. 바람직하게, 혼합물 전체 중량에 기초하여 아밀로스의 전체 중량이 30 중량% 이상일 경우, 아밀로스 및 전분의 혼합물도 적합하다. 아밀로스 및 전분의 혼합물에 관하여, 아밀로스 또는 아밀로스-함유 물질을 지칭하는 모든 데이타 (중량%)는 달리 명백하게 언급하지 않는 한, 항상 아밀로스+전분의 전체 중량에 기초한다.
물질의 전체 중량에 기초하여 그의 아밀로스 함량이 40 중량% 이상, 및 특히 45 중량% 이상인, 아밀로스-함유 물질, 특히, 아밀로스 또는 아밀로스-함유 전분, 및 아밀로스/전분 전분이 본 발명에 따라 특히 적합하다. 결과적으로, 아밀로스 함량은 90 중량%, 및 특히, 80 중량%를 초과하지 않을 것이다. 그러한 물질은 당업계의 기술자에게 알려져 있으며, 상업적으로 구입가능하다.
냄새를 변형시키는 효과를 달성하기 위하여 본 발명에 따른 직물을 일반적으로는 당업계의 기술자에게 알려져 있는 임의의 적합한 양, 바람직하게, 0.5 중량% 이상, 더욱 바람직하게, 1 중량% 이상, 특히, 2 중량% 이상 (각각의 경우, 이는 직물의 중량에 기초한 것이다)의 아밀로스-함유 물질로 마감처리할 수 있다. 결과적으로, 아밀로스-함유 물질은 직물의 질감에 부작용을 일으키지 않도록 하기 위하여, 직물 중량에 기초하여 25 중량% 이하의 양으로, 대개는, 20 중량% 이하의 양으로, 및 특히, 15 중량% 이하의 양으로 사용될 수 있다.
본 발명의 추가의 바람직한 실시태양에서, 냄새에 대한 특성을 개선시키기 위하여 본 발명에 따른 직물재는 그 자체로서 아밀로스-함유 물질로 마감처리될 수 있다. 그러나, 장기간 동안 직물에서 상쾌한 냄새, 또는 향기가 날 수 있도록 향료와 함께 아밀로스-함유 물질을 사용할 수 있다. 바람직하게, 본 방법은 본 발명에 따른 직물을 아밀로스-함유 물질로 처리하거나, 본 직물을 본 발명에 따른 미생물과 아밀로스-함유 물질로 동시에 처리하는 것을 포함한다. 이러한 방식으로 마감처리된 직물을 이어서 향료로 처리할 것이다. 결과적으로, 아밀로스-함유 물질이 향료로서의 역할을 한다.
추가의 바람직한 실시태양에서, 상기 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물 또는 이러한 미생물의 돌연변이체, 유도체 또는 불활성 형태와 함께 제형화된, 본 발명에 따른 직물 또는 직물 기질은 향료로 마감처리될 수 있다.
바람직하게, 상기 실시태양들중 임의의 것에 따라 사용되는 것과 같은 향료는 당업계의 기술자에게 알려져 있는 바와 같이, 원하는 방향 효과를 위해 충분한 양으로 사용될 수 있다. 상한은 사용되는 아밀로스-함유 물질의 아밀로스 단위의 최대 흡착능에 의해 결정되고, 이는 일반적으로 물질의 아밀로스 함량에 기초하여 20 중량% 및 대개는 10 중량%를 초과하지 않을 것이다. 원하는 경우, 향료는 일반적으로 0.1 내지 10 중량%, 특히, 0.5 내지 5 중량%의 양으로 사용된다.
적합한 향료는 주로 향료로서 알려져 있는 모든 휘발성 유기 화합물과 유기 화합물의 혼합물이다. 향료에 대한 개관은 [Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, 5th ed. on CD Rom, Flavours and Fragrances, chapter 2, in particular chapters 2.1 내지 2.4]에 설명되어 있다. 본 발명에 따라 특히 적합한 것은 지방족 및 사이클로지방족 성질의 향료이다. 이는 지방족 C4-C12-알코올, 예컨대, 3-옥타놀, 시스-3-헥센-1-올, 트랜스-3-헥센-1-올, 1-옥텐-3-올, 2,6-디메틸헵탄-2-올, 1-옥텐-3-올, 9-데센-1-올, 10-운데센-1-올, 2-트랜스-6-시스-노나디엔-1-올, 지방족 C6-C13-알데히드, 예컨대, 헥사날, 옥타날, 노나날, 데카날, 운데카날, 2-메틸데카날, 2-메틸운데카날, 도데카날 및 트리데카날, 시스-4-헵테날 및 10-운데세날, 지방족의, 임의로 모노불포화 C1-C8-알코올과 지방족 C1-C6-카복실산의 에스테르, 예로서, 에틸 포르메이트, 시스-3-헥세닐 포르메이트, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트, 이소아밀 아세테이트, 헥실 아세테이트, 3,5,5-트리메틸헥실 아세테이트, 트랜스-2-헥세닐 아세테이트, 시스-3-헥세닐 아세테이트, 에틸 프로피오네이트, 에틸 부티레이트, 부틸 부티레이트, 이소아밀 부티레이트, 헥실 부티레이트, 시스-3-헥세닐 이소부티레이트, 에틸 이소발레레이트, 에틸 2-메틸부티레이트, 에틸 헥사노에이트, 2-프로페닐 헥사노에이트, 에틸 헵타노에이트, 2-프로페닐 헵타노에이트 및 에틸 옥타노에이트, 어사이클릭 테르펜 탄화수소 및 탄화수소 알코올, 예로서, 네롤, 게라니올, 테트라하이드로게라니올, 리날로올, 테트라하이드로리날로올, 시트롤넬올, 라벤둘롤, 미르세놀, 파네솔, 네롤리돌, 이들 알코올의 포르메이트, 아세테이트, 프로피오네이트, 부티레이트, 발레레이트 및 이소부티레이트, 상기 언급한 알코올에 상응하는 알데히드, 예로서, 시트랄, 시트로넬랄, 하이드록시디하이드로시트로넬랄, 메톡시디하이드로시트로넬랄 및 이들 알데히드의 디메틸- 및 디에틸아세탈, 예로서, 디에틸시트랄, 메톡시디하이드로시트로넬랄-디메틸아세탈, 추가로, 사이클릭 테르펜 탄화수소, 탄화수소 알코올 및 알데히드를 포함한다. 이는 또한 천연물로부터 유래된 향료, 예로서, 장미 오일, 레몬 오일, 라벤더 오일, 및 정향 향료 오일도 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한 본원의 상기에 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물 또는 그의 유도체, 돌연변이체 또는 불활성 형태를 포함하는, 직물 또는 직물 기질에 관한 것이다. "포함하는"은 특히, 상기 기술된 방법들중 하나로부터 생성된 것과 같은 형태로 본원의 상기에 기술된 바와 같은 본 발명에 따른 미생물 또는 그의 유도체, 돌연변이체 또는 불활성 형태를 혼입하거나, 그와 관련되는 것을 의미한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 본원의 상기에 기술된 바와 같은 본 발명의 미생물 또는 그의 유도체 또는 돌연변이체 또는 불활성 형태를 화장학적 및/또는 약제학적 담체 또는 부형제와 함께 제형화하는 단계를 포함하는, 조성물 생산 방법에 관한 것이다.
본 발명은 추가로 예방학적 또는 치료학적 유효량의, 본 발명에 따른 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 발 악취를 예방, 억제, 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은, 방법론, 프로토콜, 세균, 벡터, 및 시약 등이 다양할 수 있는 바, 본원에 기술되어 있는 특정의 방법론, 프로토콜, 세균, 벡터, 및 시약 등으로 제한하고자 하는 것이 아님을 이해하여야 한다. 또한, 본원에서 사용된 용어는 단지 특정의 실시태양만을 설명하기 위한 목적으로 사용된 것이며, 본 발명의 범주를 제한하고자 하는 것이 아니고, 본 발명의 범주는 단지 첨부된 청구범위에 의해서만 제한될 것이다. 달리 정의되지 않는 하, 본원에서 사용되는 모든 기술적 용어와 과학 용어는 당업계의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
바람직하게, 본원에서 사용되는 용어는 ["A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)," Leuenberger , H.G.W, Nagel , B. and Kolbl . H. eds. (1995), Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerland)]에 기재되어 있다. 본 명세서와 하기의 청구범위 전문에 있어서, 문맥상 달리 요하지 않는 한, "포함한다(comprise)"라는 단어와 파생어, 예로서, "포함한다(comprises)" 및 "포함하는(comprising)"은 지정된 정수 또는 공정 또는 정수군 또는 공정군을 포함할 뿐만 아니라, 임의의 다른 정수 또는 공정 또는 정수군 또는 공정군은 배제한다는 것을 암시하는 것으로 이해될 것이다.
수개의 문헌이 본 명세서 텍스트 전문을 통해 인용되고 있다. 상기 또는 하기, 어디에서든 본원에서 인용되는 각 문헌 (모든 특허, 특허 출원, 과학 발행물, 제조사의 설명서, 지침서 등)들은 본원에서 그의 전문이 참고로 인용된다. 본원에서는 선행 발명에 의해 본 발명이 상기 개시 내용보다 선행할 수 있는 자격이 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안된다.
본원 및 첨부된 청구 범위에서 사용되는 바, 단수형의 "하나(a)," "하나(an)," 및 "그(the)"는 문맥상 달리 명확하게 명시되지 않는 한, 복수형의 대상물도 포함한다는 것에 주목하여야 한다. 따라서, 예를 들면, "하나의 시약"에 대하여 언급하는 것은 하나 이상의 그러한 다른 시약도 포함하는 것이며, "그 방법"에 대하여 언급하는 것은 본원에 기술된 방법에 대하여 치환되거나 변형될 수 있는, 당업계의 기술자에게 공지되어 있는 등가의 공정 및 방법에 대하여 언급하는 것도 포함한다.
도 1은 시험관내-홀 플레이트 검정법에서의 발 악취 생성 미생물의 저해를 나타낸다 (실시예 3). 발 악취 생성 지표 균주 마이크로코커스 종 및 젖산균 락토바실러스 브레비스, LB-FG-0009 (DSM 17607)을 포함하는 아가 플레이트를 나타낸다. 웰 주변의 검은색 환의 형성이 지표 균주 마이크로코커스 종의 성장 저해를 나타낸다.
도 2는 시험관내-액상 검정법에서 발 악취 생성 미생물 마이크로코커스 종의 성장 저해를 나타낸다 (실시예 4). 락토바실러스 브레비스, LB-FG-0009 (DSM 17607)를 사용하였다. 젖산균을 함유하지 않는 대조군과의 비교로 지표 균주의 집락 형성 단위를 계수함으로써 정량화된 저해도를 나타낸다.
도 3은 시험관내-액상 검정법에서 스타필로코커스 에피더미디스 (DSM20044)의 성장 저해 부족을 나타낸다 (실시예 5). 락토바실러스 브레비스, LB-FG-0009 (DSM 17607)를 사용하였다. 젖산균을 함유하지 않는 대조군과의 비교로 지표 균주의 집락 형성 단위를 계수함으로써 정량화된 저해도를 나타낸다.
단지 설명의 목적으로만 제공되며, 어느 방식으로든 본 발명의 범주를 제한하고자 하는 것이 아닌 하기의 실시예를 통해 본 발명 및 그의 잇점을 보다 잘 이해할 수 있을 것이다.
실시예 1
악취 생성 미생물 동정/악취 검정법
미생물에 의한 이소발레린산의 생성에 관여하는 생체합성 경로가 알려져 있지만 [Thierry et al., Appl. Env. Microbiol. 68(2) (2002), 608-615], 이러한 물질을 생성할 수 있는 상응하는 발 미생물은 알려져 있지 않다. 본 발명자는 발 냄새 생성에 관여하는 특정 미생물을 동정하였다. 냄새가 나는 물질인 이소발레린산 합성에 기인하여 발 냄새 생성에 관여하는 발 미생물을 동정하기 위하여 발 냄새가 나는 대상으로부터 미생물을 단리시켰다.
발 미생물 단리
발바닥 상의 정의된 영역 (2 cm x 2 cm) 위를 멸균 Q-팁으로 문질러서 발 미생물을 피부로부터 단리시켰다. Q-팁을 멸균 완충액 용액 (PBS, pH 7.0)으로 옮기고, 그람 양성 (예컨대, BHI (디프코 인코포레이티드(Difco Inc.)) 또는 그람 음성 세균 (예컨대, 맥콘케이(MacConkey) 아가, 디프코 인코포레이티드)용의 선택 배양 아가 플레이트 상에, 또는 효소 및 진균용 선택 배양 아가 (예컨대, 플레이트 카운트 아가(Plate Count Agar), 디프코 인코포레이티드) 상에 희석액을 플레이팅하였다. 이후, 피부로부터 배양 아가 플레이트로 옮겨진 미생물을 30 ℃과 37 ℃에서 호기적 및 혐기적으로 약 24시간 동안 배양하였다. 정량적 분석을 위한 형태학적 및 생화학적 방법에 의해, 및 정량 계수에 의해 집락 형성 단위를 측정하였다. 상대 조성물 및 전체 세포 계수를 측정하였다.
냄새 생성 미생물 검정/냄새 검정법
이소발레린산의 생합성에 기인하여 개개의 미생물은 전형적인 발 냄새를 생성한다. 이러한 미생물은 대사 활동에 기인하여 이소발레린산을 생성할 수 있다. 이소발레린산을 합성할 수 있는 미생물을 동정하기 위하여 하기 검정법을 실시하였다.
단리된 미생물을 20 ml의 상응하는 배양물 브로쓰 (그람 양성, 그람 음성, 효모 또는 진균용 (디프코 인코포레이티드))에서 24h 동안 30 ℃/37 ℃에서 호기 또는 혐기적으로 배양하였다. 세포를 원심분리하고 (4000 x g), 60 mM 인산염 완 충액, pH 8.0을 사용하여 2회에 걸쳐 세척하였다. 악취 생성 검정을 위해 세포를 5 mM L-류신 및 10 mM 알파-케토글루타레이트를 함유하는 60 mM 인산염 완충액, pH 8.0에 현탁시키고, 왕성하게 진탕시키면서 (160 rpm 회전식 진탕기) 24h 동안 호기적으로 인큐베이션시켰다. 이후, 원심분리 (4000 x g, 5분)에 의해 세포를 펠릿화하고, 기체 크로마토그래픽 분석을 위해 유리병으로 상등액을 옮겼다. 모세관 칼럼 (30 m x 0.5 mm x 0.53 ㎛ [필름 두께]; 에질런트(Agilent) HP-FFAP)을 사용하는 휴렛-팩커드 5890 시리즈 II 기체 크로마토그래프상에서 실시된 GC 분석에 의해 이소발레린산 생성을 관찰하였다. 온도 프로그램은 150 ℃ 내지 220 ℃였다. 초기에는 온도가 2분간 150 ℃였고; 이어서, 15 ℃/분으로 증가하여 최종 온도는 220 ℃였으며, 이 온도로 3분간 유지되었다. 유속은 일정하게 30 cm/s였고, 담체 기체로서 헬륜이 사용되었으며, 분할식 모드로 주입하였다. 기체 크로마토그래픽/질량 분광분석법과, 순수한 표준 물질에 대한 정체 시간의 비교에 의해 이소발레린산을 확인하였다.
전형적인 지저분한 악취의 생성은 HCl로 재산성화시킨 후에 샘플을 코로 냄새를 맡음으로써 확인하였다. 상세히, 인큐베이션시킨 후, 6 M HCl 용액을 샘플내로 적하하여 분취량을 재산성화시켰다. 산성화로 인하여 이소발레린산은 증발하고, 용량에 의존하는 방식으로 코로 인식되었다. 이소발레린산을 생성할 수 있고, 상응하는 전형적인 지저분한 냄새를 생성할 수 있는 미생물을, 냄새를 생성하는 발 미생물로서 분류하였다.
실시예 2
미생물에 의한 이소발레린산의 생성을 방지하는미생물의 동정
이소발레린산의 생합성에 기인하여 개개의 미생물은 전형적인 발 냄새를 생성한다. 이러한 미생물은 대사 활동에 기인하여 이소발레린산을 생성할 수 있다. 미생물, 특히, 젖산균에 의한 이소발레린산의 생합성을 특이적으로 저해하는 것이, 악취를 생성하는 발 미생물에 의한 이소발레린산의 생합성을 저해할 수 있다고 확인되었다. 이러한 효과를 시험하기 위하여 하기 검정법을 실시하였다.
락토바실리의 배양 및 제조
젖산균을 에펜도르프 튜브(Eppendorf tube)중 1 ml MRS 브로쓰내의 -80 ℃의 냉동 배양물로부터 배양하였다. 관을 봉하고, 2일 동안 37 ℃에서 배양하였다. 5 ㎕의 상기 예비 배양물을, 에펜도르프 튜브중 0.5 ml MRS 브로쓰로 구성된 주된 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션시켰다. 원심분리 (4000 x g, 15분)에 의해 배양 세포를 수거한 후, 세포 펠릿을 60 mM 인산염 완충액 (pH 0.8)으로 2회에 걸쳐 세척하였다. 세포를 200 ㎕ 60 mM 인산염 완충액 (pH 8.0)에 재현탁시켰다.
지표 균주의 배양 및 제조
일례의 지표 균주는 마이크로코커스 종이었다. 배양을 위해 진탕용 유리 플라스크중 20 ml BHI 브로쓰에 15 ㎕의 24 h 예비 배양물 (20 ml)을 접종하였다. 왕성하게 진탕시키면서 (왕복 진탕기 상에서 160 rpm), 지표 균주를 24h 동안 37 ℃에서 배양하였다. 원심분리 (4000 x g, 5분)에 의해 세포를 수거하고, PBS 완충액 (pH 8.0)에서 2회에 걸쳐 세척하였다. 하기의 악취 방지 검정법을 위해, 세포 를 60 mM 인산염 완충액, pH 8.0에 재현탁시켰다.
냄새 방지 검정법
악취 방지 검정법을 위해, 15 ㎕의 제조된 지표 균주를 왕성하게 진탕시키면서 24h 동안 30 ℃에서 100 ㎕ 락토바실러스 배양물, 60 mM 인산염 완충액 (pH 8.0) 5 mM L-류신 및 10 mM 알파-케토글루타레이트 존재하에 호기적으로 인큐베이션시켰다. 이후, 원심분리 (4000 x g, 5분)에 의해 세포를 펠릿화하고, 기체 크로마토그래픽 분석을 위해 유리병으로 상등액을 옮겼다. 락토바실리를 포함하지 않는, 상응하는 대조군 샘플을 인큐베이션시켰다. 모세관 칼럼 (30 m x 0.5 mm x 0.53 ㎛ [필름 두께]; 에질런트 HP-FFAP)을 사용하는 휴렛-팩커드 5890 시리즈 II 기체 크로마토그래프상에서 실시된 GC 분석에 의해 이소발레린산 생성이 저지되었는지를 관찰하였다. 온도 프로그램은 150 ℃ 내지 220 ℃였다. 초기에는 온도가 2분간 150 ℃였고; 이어서, 15 ℃/분으로 증가하여 최종 온도는 220 ℃였으며, 이 온도로 3분간 유지되었다. 유속은 일정하게 30 cm/s였고, 담체 기체로서 헬륜이 사용되었으며, 분할식 모드로 주입하였다. 기체 크로마토그래픽/질량 분광분석법과, 순수한 표준 물질에 대한 정체 시간의 비교에 의해 이소발레린산을 확인하였다.
전형적인 지저분한 악취의 생성은 HCl로 재산성화시킨 후에 샘플을 코로 냄새를 맡음으로써 확인하였다. 상세히, 인큐베이션시킨 후, 6 M HCl 용액을 샘플내로 적하하여 분취량을 재산성화시켰다. 산성화로 인하여 이소발레린산은 증발하고, 용량에 의존하는 방식으로 코로 인식되었다.
실시예 3
냄새를 생성하는 발 미생물의 저해
이소발레린산의 생합성에 기인하여 개개의 미생물은 전형적인 발 냄새를 생성한다. 발에 있는 미생물의 피부 플로라 전부를 방해하지는 않으면서 국소적으로 적용된 미생물에 의해 상기 미생물을 특이적으로 저해하는 것이 발 악취 생성을 감소시키면서, 미생물의 피부 플로라는 피부를 보호하도록 여전히 존재하는 것이 효과적인 방법이다. 시험관내-홀 플레이트 검정법에서는 특정의 젖산균이 아가 플레이트 상의 악취 생성 발 미생물의 성장을 저해할 수 있다고 확인되었다. 이러한 효과를 시험하기 위하여, 예비 배양된 젖산균을 예비-컷팅된 홀에 충진시키고, 지표 균주의 성장 저해에 관하여 관찰하였다. 젖산균이 그 안에 피펫팅된 홀 주변에 투명한 환이 형성된 것을 저해로서 정의하였다. 수개의 균주에 대하여 발 미생물의 성장을 저해한다는 것이 관찰되었다. 락토바실러스 브레비스, LB-FG-0009 (DSM 17607) 및 지표 마이크로코커스 종에 대한 결과를 도 1에 나타낸다.
락토바실리의 배양 및 제조
젖산균을 에펜도르프 튜브중 1 ml MRS 브로쓰내의 -80 ℃의 냉동 배양물로부터 배양하였다. 관을 봉하고, 2일 동안 37 ℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 상기 예비 배양물을, 팔콘 튜브(Falcon tube)중 7 ml MRS 브로쓰로 구성된 주된 배양물로 옮겼다. 배양물을 1일 동안 인큐베이션시켰다. 원심분리 (15분, 4000 x g)에 의해 배양 세포를 수거한 후, 세포 펠릿을 K/Na-완충액 (각각 1 ml)으로 2회에 걸쳐 세척하였다. 세포를 200 ㎕ K/Na 완충액에 재현탁시켰다.
지표 균주의 배양 및 제조
지표 균주는 마이크로코커스 종이었다. 진탕용 유리 플라스크중 20 ml BHI 브로쓰에 15 ㎕의 24h 예비 배양물 (20 ml)을 접종하였다. 지표 균주를 24h 동안 37 ℃에서 배양하였다. 분취량을 BHI-브로쓰중 OD595nm에서의 광학 밀도 0.025-0.05로 희석하고, 800 ㎕를 지표 플레이트 (BHI-아가) 상에 도포하였다. 콜크 보어러를 사용하여 아가를 스탬프하였다. 홀을 예비-배양된 젖산균으로 충진시켰다.
배지 및 완충액 :
BHI -아가 디프코 아가 1.8%; 플레이트당 20 ml
BHI -배지 디프코
MRS - 브로쓰 디프코, 150 ㎕/웰
K/ Na - 완충액 커스터 티엘(Kuster Thiel)에 따라, ph 7.0,
오토클레이브됨
- 0.066 M Na2HPO4 x 2H2O 61.2 ml
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ml
실시예 4
시험관내-액상 검정법에서의 발 악취 생성 미생물의 성장 저해
선택된 락토바실러스 브레비스 (LB-FG-0009)는 시험관내-액상 검정법에서 발 악취 생성 미생물의 성장을 막을 수 있다. 이러한 효과를 시험하기 위하여 예비 배양된 젖산균을 액체 배양물중 지표 균주와 함께 공-인큐베이션시켰다. 젖산균을 함유하지 않는 대조군과의 비교로 지표 균주의 집락 형성 단위를 계수함으로써 저해도를 정량하였다. 데이타는 도 2에 나타낸다.
락토바실리의 배양 및 제조
젖산균을 에펜도르프 튜브중 1 ml MRS 브로쓰내의 -80 ℃의 냉동 배양물로부터 배양하였다. 관을 봉하고, 2일 동안 37 ℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 상기 예비 배양물을, 팔콘 튜브중 7 ml MRS 브로쓰로 구성된 주된 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션시켰다. 원심분리 (15분, 4000 x g)에 의해 배양 세포를 수거하였다. 세포 펠릿을 K/Na-완충액 (각각 1 ml)으로 2회에 걸쳐 세척하였다. 세포를 200 ㎕ K/Na 완충액에 재현탁시켰다.
지표 균주의 배양 및 제조
지표 균주는 마이크로코커스 종이었다. 진탕용 유리 플라스크중 20 ml BHI 브로쓰에 15 ㎕의 24h 예비 배양물 (20 ml)을 접종하였다.
액상 저해 검정법
액상 검정법을 위해 (200 ㎕중) 5 ㎕의, 새로 제조된 젖산균 및 10 ㎕의 예비 배양된 지표 균주를 10 ml의 BHI 브로쓰에 공-배양시키기 위하여 접종하였다. 배양물을 7h 동안 인큐베이션시켰다. 이후, 집락 형성 단위를 정량화하기 위하여 100 ㎕의 1 :1000 희석액을 BHI 아가 플레이트를 도포하였다. 플레이트를 24h 동안 인큐베이션시키고, 집락 형성 단위를 계수하였다.
배지 및 완충액 :
BHI -아가 디프코 아가 1.8%; 플레이트당 20 ml
BHI -배지 디프코
MRS - 브로쓰 디프코
K/ Na - 완충액 커스터 티엘(Kuster Thiel)에 따라, ph 7.0,
오토클레이브됨
- 0.066 M Na2HPO4 x 2H2O 61.2 ml
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ml
실시예 5
시험관내-액상 검정법에서의 스타필로코커스 에피더미디스 (DSM20044)의 성장 저해 부족
발 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지할 수 있는 것으로 선택된 락토바실러스 브레비스 (LB-FG-0009)는 시험관내 액상 검정법에서 발 피부의 공생 마이크로 플로라의 중요한 일원인, 스타필로코커스 에피더미디스 (DSM20044)를 저해하지 못한다.
이러한 효과를 시험하기 위하여 예비 배양된 젖산균을 액체 배양물중 지표 균주와 함께 공-인큐베이션시켰다. 젖산균을 함유하지 않는 대조군과의 비교로 지표 균주의 집락 형성 단위를 계수함으로써 저해도를 정량하였다. 데이타는 도 3에 나타낸다.
락토바실리의 배양 및 제조
젖산균을 에펜도르프 튜브중 1 ml MRS 브로쓰내의 -80 ℃의 냉동 배양물로부 터 배양하였다. 관을 봉하고, 2일 동안 37 ℃에서 배양하였다. 10 ㎕의 상기 예비 배양물을, 팔콘 튜브중 7 ml MRS 브로쓰로 구성된 주된 배양물로 옮겼다. 배양물을 2일 동안 인큐베이션시켰다. 원심분리 (15분, 4000 x g)에 의해 배양 세포를 수거하였다. 세포 펠릿을 K/Na-완충액 (각각 1 ml)으로 2회에 걸쳐 세척하였다. 세포를 200 ㎕ K/Na 완충액에 재현탁시켰다.
지표 균주의 배양 및 제조
지표 균주는 스타필로코커스 에피더미디스 (DSM20044)였다. 24h 예비 배양을 위해 진탕용 유리 플라스크중 20 ml BHI 브로쓰에 15 ㎕의 냉동 배양물을 접종하였다.
액상 저해 검정법
액상 검정법을 위해 (200 ㎕중) 5 ㎕의, 새로 제조된 젖산균 및 10 ㎕의 예비 배양된 지표 균주, S. 에피더미디스(S. epidermidis) (DSM20044)를 10 ml의 BHI 브로쓰에 공-배양시키기 위하여 접종하였다. 배양물을 7h 동안 인큐베이션시켰다. 이후, 집락 형성 단위를 정량화하기 위하여 100 ㎕의 1 :1000 희석액을 BHI 아가 플레이트를 도포하였다. 플레이트를 24h 동안 인큐베이션시키고, 집락 형성 단위를 계수하였다.
배지 및 완충액:
BHI-아가 디프코 아가 1.8%; 플레이트당 20 ml
BHI-배지 디프코
MRS-브로쓰 디프코
K/Na-완충액 커스터 티엘(Kuster Thiel)에 따라, ph 7.0,
오토클레이브됨
- 0.066 M Na2HPO4 x 2H2O 61.2 ml
- 0.066 M KH2PO4 38.8 ml
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Claims (21)

  1. 피부 미생물에 의한 발 악취 생성을 방지할 수 있는 미생물.
  2. 제1항에 있어서, 코로 냄새를 맡는 검정법에서 피부 미생물에 의한 발 악취 생성을 방지할 수 있는 능력을 나타내는 미생물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 피부 미생물에 의한 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 미생물.
  4. 제3항에 있어서,
    (i) 피부 미생물에 의한 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 능력을 나타내는 미생물과, 이소발레린산을 생성할 수 있는 미생물, 및 이소발레린산의 전구체를 혼합하고;
    (ii) 이소발레린산이 생성될 수 있는 조건하에서 혼합물을 인큐베이션시키고;
    (iii) 혼합물의 상등액으로부터 단쇄 지방산을 추출하고;
    (iv) 이소발레린산의 존재에 의해 발 악취의 생성을 검출하는 단계를 포함하는 검정법에서 피부 미생물에 의한 이소발레린산의 생합성을 억제시킬 수 있는 능력을 나타내는 미생물.
  5. 제1항 내지 제4항중 어느 한 항에 있어서, 발 악취 생성 피부 미생물의 성장을 저해할 수 있는 미생물.
  6. 제5항에 있어서, 저해 검정법에서 발 악취 생성 피부 미생물의 성장을 저해할 수 있는 능력을 나타내는 미생물.
  7. 제3항 내지 제6항중 어느 한 항에 있어서, 이소발레린산이 마이크로코커스(Micrococcus) 속 또는 프로피오니박테리움(Propionibacterium) 속에 속하는 세균에 의해 생성되는 것인 미생물.
  8. 제7항에 있어서, 마이크로코커스 속에 속하는 세균이 마이크로코커스 종(Micrococcus spec.)인 미생물.
  9. 제7항에 있어서, 프로피오니박테리움 속에 속하는 세균이 프로피오니박테리움 프로이덴라이히(Propionibacterium freudenreichii)인 미생물.
  10. 제1항 내지 제9항중 어느 한 항에 있어서, 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속 또는 류코노스톡(Leuconostoc) 속에 속하는 미생물.
  11. 제10항에 있어서, 락토바실러스가 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 커바터스(Lactobacillus curvatus), 락토바실러스 델브루키아이 델브루키아이(Lactobacillus delbrueckii delbrueckii)인 미생물.
  12. 제10항에 있어서, 류코노스톡이 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)인 미생물.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서, 락토바실러스 브레비스 LB-FG-0001 (DSM 17599), 락토바실러스 플란타룸 LB-FG-0002 (DSM 17600), 락토바실러스 커바터스 LB-FG-0003 (DSM 17601), 류코노스톡 메센테로이데스 LB-FG-0004 (DSM 17602), 락토바실러스 플란타룸 LB-FG-0005 (DSM 17603), 락토바실러스 델브루키아이 델브루키아이 LB-FG-0006 (DSM 17604), 락토바실러스 델브루키아이 델브루키아이 LB-FG-0007 (DSM 17605), 락토바실러스 플란타룸 LB-FG-0008 (DSM 17606) 및 락토바실러스 브레비스 LB-FG-0009 (DSM 17607), 또는 그의 돌연변이체 또는 유도체로 구성된 군으로부터 선택되되, 여기에서, 상기 돌연변이체 또는 유도체는 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지할 수 있는 능력을 보유하는 것인 미생물.
  14. 피부 미생물에 의한 발 악취의 생성을 방지할 수 있는, 제1항 내지 제13항중 어느 한 항의 미생물의 불활성 형태.
  15. 제14항에 있어서, 열적으로 불활성화되거나 동결건조된 불활성 형태.
  16. 제1항 내지 제13항중 어느 한 항의 미생물, 또는 제14항 또는 제15항의 불활성 형태를 포함하는 조성물.
  17. 제16항에 있어서, 임의로 화장학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 화장품 조성물인 조성물.
  18. 제16항에 있어서, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물인 조성물.
  19. 발 악취 억제용의 화장품 또는 약제학적 조성물의 제조를 위한, 제1항 내지 제13항중 어느 한 항의 미생물, 또는 제14항 또는 제15항의 불활성 형태의 용도.
  20. 제1항 내지 제13항중 어느 한 항의 미생물, 또는 제14항 또는 제15항의 불활성 형태를 화장학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제와 함께 제형화하는 단계를 포함하는, 화장품 조성물을 제조하는 방법.
  21. 제1항 내지 제13항중 어느 한 항의 미생물, 또는 제14항 또는 제15항의 불활 성 형태를 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제와 함께 제형화하는 단계를 포함하는, 약제학적 조성물을 제조하는 방법.
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