KR20070072614A

KR20070072614A - Ｃ형 간염 바이러스 억제제로서4-메톡시메틸-피롤리딘-2-카르복실산 화합물 및 그의유도체

Info

Publication number: KR20070072614A
Application number: KR1020077011741A
Authority: KR
Inventors: 로셀라 귀데티; 데이비드 헤이; 찰스 데이비드 하틀리; 피터 데이비드 호웨스; 파브리지오 네로지; 스티븐 알란 스미스
Original assignee: 글락소 그룹 리미티드
Priority date: 2004-10-25
Filing date: 2005-10-24
Publication date: 2007-07-04
Also published as: PE20060602A1; RU2007119390A; IL182583A0; GB0423673D0; AU2005298849A1; MA29000B1; JP2008517968A; CN101087785A; TW200630365A; WO2006045613A1; US20070270475A1; MX2007004914A; EP1805172A1; BRPI0517023A; NO20072547L; AR051340A1; CA2585170A1

Abstract

하기 화학식 Ia의 항바이러스제, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르, 그의 제조 방법 및 HCV 치료에서의 그의 용도가 제공된다.

<화학식 Ia>

식 중,

A는 히드록시를 나타내고,

D는 4-tert-부틸-3-메톡시페닐을 나타내고,

E는 1,3-티아졸-2-일 또는 5-메틸-1,3-티아졸-2-일을 나타내고,

G는 메톡시메틸을 나타내고,

J는 1,3-티아졸-2-일메틸, 1,3-티아졸-4-일메틸, 1,2-티아졸-3-일메틸 또는 1H-피라졸-1-일메틸을 나타내되,

단, A가 에스테르화되어 -OR (여기서, R은 직쇄 또는 분지쇄 알킬, 아랄킬, 아릴옥시알킬 또는 아릴로부터 선택됨)을 형성하는 경우에는 R은 tert-부틸이 아니다.

항바이러스제, C형 간염 바이러스, 간 질환, HCV 폴리머라제 효소의 억제제

Description

Ｃ형 간염 바이러스 억제제로서 4-메톡시메틸-피롤리딘-2-카르복실산 화합물 및 그의 유도체 {4-METHOXYMETHYL-PYRROLIDINE-2-CARBOXYLIC ACID COMPOUNDS AND DERIVATIVES THEREOF AS HEPATITIS C VIRUS INHIBITORS}

본 발명은 항바이러스제로서 유용한 신규한 C(4)-메톡시메틸 아실 피롤리딘 유도체에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 신규한 C형 간염 바이러스 (HCV) 억제제를 포함한다.

HCV 감염은 전세계적으로 인간 간 질환의 주요 원인이다. 미국에서는, 450 만명의 미국인들이 HCV로 만성 감염된 것으로 추정된다. 급성 감염의 30％만이 징후적이지만, 감염된 개체의 85％ 초과가 만성적이고 지속적인 감염으로 진행된다. HCV 감염의 치료 비용은 1997년에 미국의 경우 54억 6천만 달러로 추산되었다. 전세계적으로 2억명 이상의 사람들이 만성 감염된 것으로 추정된다. 모든 만성 간 질환의 40 내지 60％가 HCV 감염으로 인한 것이며, 모든 간 이식의 30％가 HCV 감염에 의한 것이다. 만성 HCV 감염은 미국에서 모든 간경변증, 말기 간 질환 및 간암의 30％를 차지한다. CDC는 HCV로 인한 사망자 수가 2010년까지 매년 최소 38,000명까지 증가할 것이라고 추정하고 있다.

바이러스 표면 항원의 높은 변이 정도, 다수의 바이러스 유전자형의 존재 및 입증된 면역 특이성 때문에, 가까운 장래에 성공적인 백신의 개발이 가능할 것 같지 않다. 알파-인터페론 (단독으로 또는 리바비린과 조합하여)은 만성 HCV 감염의 치료법으로 승인받은 이래로 널리 사용되어 왔다. 그러나, 통상적으로 부작용이 상기 치료법과 관련된다: 인플루엔자-유사 증상, 백혈구감소증, 혈소판감소증, 인터페론 기능저하, 및 리바비린에 의해 유도된 빈혈증 (문헌 [Lindsay, K. L. (1997) Hepatology 26 (suppl 1): 71S-77S]). 상기 치료법은 다른 5가지 주요 HCV 유전자형에 의해 야기되는 감염과 비교하였을 때, HCV 유전자형 1에 의해 야기되는 감염 (선진 시장에서 모든 HCV 감염의 약 75％를 차지함)에 대해서 덜 효과적이다. 불행히도, 환자의 약 50 내지 80％만이 상기 치료법에 반응하고 (혈청 HCV RNA 수준의 감소 및 간 효소의 정상화에 의해 측정됨), 치료받는 환자 중에서 50 내지 70％가 치료 중단 6개월 내에 재발한다. 최근에, 페길화(pegylated) 인터페론의 도입으로, 초기 반응률과 지속적 반응률이 둘다 실질적으로 향상되었고, Peg-IFN과 리바비린의 조합 치료는 표준 치료법(gold standard for therapy)을 구성하였다. 그러나, 조합 치료와 관련있는 부작용 및 유전자형 1의 경우에 환자의 약화된 반응은 상기 질환의 관리에 있어서 개선의 기회를 제시한다.

1989년에 분자 클로닝에 의해 처음 확인된 (문헌 [Choo, Q-L et al (1989) Science 244:359-362]), C형 간염 바이러스 (HCV)는 현재 수혈후 NA형, NB형 간염 (post-transfusion non-A, non-B hepatitis; NANBH)의 가장 일반적인 감염 인자로 받아들여지고 있다 (문헌 [Kuo, G et al (1989) Science 244:362-364]). 그의 게놈 구조 및 서열 상동성 때문에, 상기 바이러스는 플라비비리대(Flaviviridae) 과 의 신규한 속으로 지정되었다. 플라비바이러스 (예를 들면, 황열 바이러스 및 뎅기(Dengue) 바이러스 1 내지 4형) 및 페스티바이러스 (예를 들면, 소 바이러스성 설사 바이러스, 보더병 바이러스 및 돼지 콜레라 바이러스)와 같은 플라비비리대의 다른 구성원과 마찬가지로 (문헌 [Choo, Q-L et al (1989) Science 244:359-3]; 문헌 [Miller, R. H. and R. H. Purcell (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2057-2061]), HCV는 양극성의 단일 가닥 RNA 분자를 함유하는 외피보유 바이러스이다. HCV 게놈은 내부 리보솜 침입좌 (IRES)로서 기능하는 대략 340개 염기의 길고 잘 보존된 비캡핑 5' 비번역 영역 (NTR)을 포함하여 대략 9.6 킬로베이스(kb)이다 (문헌 [Wang CY et al, 'An RNA pseudoknot is an essential structural element of the internal ribosome entry site located within the hepatitis C virus 5' noncoding region,' RNA-A Publication of the RNA Society, 1(5): 526-537, 1995 Jul.]). 상기 구성요소 다음은 구조 및 비구조 바이러스 단백질을 둘다 포함하는 약 3000개 아미노산의 폴리펩티드를 코딩하는 단일 장쇄 오픈 리딩 프레임 (ORF)을 코딩하는 영역이다.

세포의 세포질에 침입할 때, 상기 RNA는 구조 및 비구조 바이러스 단백질을 둘다 포함하는 약 3000개 아미노산의 폴리펩티드로 직접 번역된다. 이어서 이러한 거대한 폴리펩티드는 숙주와 바이러스-코딩된 프로테이나제의 조합에 의해 각각의 구조 및 비구조 단백질로 프로세싱된다 (문헌 [Rice, C. M. (1996) in B. N. Fields, D. M. Knipe and P. M. Howley (eds) Virology 2^nd Edition, p931-960; Raven Press, N.Y.]). 장쇄 ORF의 말단에서 종결 코돈 다음에, 대략 하기 3 영역으로 이루어진 3' NTR이 있다: 다양한 유전자형 중에서 불량하게 보존된 약 40개 염기 영역, 다양한 길이의 폴리(U)/폴리피리미딘 영역 및 "3' X-테일(X-tail)"이라고도 하는 잘 보존된 98개 염기 구성요소 (문헌 [Kolykhalov, A. et al (1996) J. Virology 70:3363-3371]; 문헌 [Tanaka, T. et al (1995) Biochem Biophys. Res. Commun. 215:744-749]; 문헌 [Tanaka, T. et al (1996) J. Virology 70:3307-3312]; 문헌 [Yamada, N. et al (1996) Virology 223:255-261]). 3' NTR은 침팬지에서 HCV 성장을 위해 필수적인 안정한 2차 구조를 형성하는 것으로 예상되고 바이러스 RNA 복제의 개시 및 조절에서 기능하는 것으로 생각된다.

HCV의 NS5B 단백질 (591개 아미노산, 65 kDa) (문헌 [Behrens, S. E. et al (1996) EMBO J. 15:12-22])은 RNA-의존성 RNA 폴리머라제 (RdRp) 활성을 코딩하고 다른 RNA 바이러스 폴리머라제에 존재하는 기준 모티프를 함유한다. NS5B 단백질은 타입내에서(intra-typically) (1b 단리물들 사이에 약 95 내지 98％ 아미노산 (aa) 동일성) 그리고 타입사이에(inter-typically) (유전자형 1a와 1b 단리물 사이에 약 85％ aa 동일성) 매우 잘 보존되어 있다. 감염성 자손 비리온의 생산을 위한 HCV NS5B RdRp 활성의 본질은 침팬지에서 공식적으로 입증되었다 (문헌 [A. A. Kolykhalov et al. (2000) Journal of Virology, 74(4), p. 2046-2051]). 따라서, NS5B RdRp 활성의 억제 (RNA 복제의 억제)는 HCV 감염을 치료하는 것으로 예상된다.

전세계적으로 우세한 HCV 유전자형은 유전자형 1이지만, 이것은 그 자체가 1a 및 1b로 표시되는 두개의 주요 서브타입을 갖는다. 로스앨러모스(Los Alamos) HCV 데이터베이스 (www.hcv.lanl.gov)에 등록된 것으로부터 알 수 있는 것처럼 (표 1), 이들 서브타입의 분포에는 지역차가 있다: 유전자형 1a는 미국에서 가장 우세하고, 유럽 및 일본에서의 서열 대부분은 유전자형 1b이다.

데이터베이스에서 서열의 ％	전세계	미국	유럽	일본
유전자형 1	71.8	87.8	75.9	80.2
유전자형 1a	28.4	66.4	21.7	1.6
유전자형 1b	43.4	21.4	54.2	78.6

몇몇 지역에서는 유전자형 1a가 유행하여, 유전자형 1a와 유전자형 1b를 둘다 억제할 수 있는 항바이러스제를 확인하는 것이 매우 바람직하게 되었다. 이는 보다 광범위한 환자군이 동일한 물질로의 치료로부터 이득을 얻을 수 있다는 것을 의미한다.

상기로부터, 합성 또는 생물학적 화합물을 HCV의 유전자형 1a와 유전자형 1b 둘다의 복제를 억제하는 그들의 능력에 대하여 확인하는 것이 매우 필요하다.

PCT 공개 번호 WO2004/037818호는 HCV 억제 활성을 갖는 특정 아실 피롤리딘 화합물을 비롯한 특정 화합물을 개괄적으로 개시하고 있다. 검정법은 유전자형 1b에 관한 것이다. 개시된 화합물은 하기 화학식 I의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르이다.

식 중,

A는 히드록시를 나타내고,

D는 아릴 또는 헤테로아릴을 나타내고,

E는 수소, C₁ _- ₆알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴을 나타내고,

G는 수소, 또는 할로, OR¹, SR¹, C(O)NR²R³, CO₂H, C(O)R⁴, CO₂R⁴, NR²R³, NHC(O)R⁴, NHCO₂R⁴, NHC(O)NR⁵R⁶, SO₂NR⁵R⁶, SO₂R⁴, 니트로, 시아노, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클릴로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된 C₁ _- ₆알킬을 나타내고,

R¹은 수소, C₁ _- ₆알킬, 아릴알킬 또는 헤테로아릴알킬을 나타내고,

R² 및 R³은 수소, C₁ _- ₆알킬, 아릴 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되거나, R²와 R³은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 5원 또는 6원의 포화 시클릭기를 형성하고,

R⁴는 C₁ _- ₆알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R⁵ 및 R⁶은 수소, C₁ _- ₆알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되거나, R⁵와 R⁶은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 5원 또는 6원의 포화 시클릭기를 형성하고,

J는 C₁ _- ₆알킬, 헤테로시클릴알킬, 아릴알킬 또는 헤테로아릴알킬을 나타내되,

단, A가 에스테르화되어 -OR (여기서, R은 직쇄 또는 분지쇄 알킬, 아랄킬, 아릴옥시알킬 또는 아릴로부터 선택됨)을 형성할 경우에는 R은 tert-부틸이 아니다.

놀랍게도, 본 발명에 이르러 WO2004/037818호에 개괄적으로 개시되어 있고 특정 치환 패턴을 갖는, 본 발명에 따른 화합물이 WO2004/037818호에 구체적으로 개시된 화합물보다 개선된 성질을 나타낸다는 것이 발견되었다.

<발명의 요약>

본 발명은 하기 나타낸 C(2')-헤테로아릴메틸-C(4)-메톡시메틸 아실 피롤리딘 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 제약 조성물 및 바이러스 감염, 특히 HCV 감염의 치료에 있어서 상기 화합물의 용도를 포함한다.

본 발명은 하기 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르로부터 선택된 1종 이상의 화학 물질을 제공한다.

식 중,

A는 히드록시를 나타내고,

D는 4-tert-부틸-3-메톡시페닐을 나타내고,

E는 1,3-티아졸-2-일 또는 5-메틸-1,3-티아졸-2-일을 나타내고,

G는 메톡시메틸을 나타내고,

한 측면에서, 화학식 Ia의 라세미체 화합물의 상대 입체화학은 하기 화학식 Ip 또는 Iq로 나타낸다.

식 중,

A, D, E, G 및 J는 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같다.

추가의 측면에서, 화학식 Ia의 키랄 화합물의 절대 입체화학은 하기 화학식 Ipp 또는 Iqq로 나타낸다.

식 중,

A, D, E, G 및 J는 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같다.

화학식 Ia, Ip, Ipp, Iq 및 Iqq의 화합물 각각에 대하여, 적용가능하다면 하기 치환기가 바람직하다.

한 측면에서, A는 히드록시 (즉, 에스테르화되지 않음)이다.

한 측면에서, J는 1,3-티아졸-4-일메틸 또는 1H-피라졸-1-일메틸을 나타낸다. 추가의 측면에서, J는 1H-피라졸-1-일메틸을 나타낸다. 또다른 측면에서, J는 1H-피라졸-1-일메틸을 나타내고 E는 1,3-티아졸-2-일을 나타낸다.

한 측면에서, 화학식 Ia의 화합물은 화학식 Ipp의 화합물로 대표된다.

본 발명은 본원에 기재된 측면, 적합하고 편리하며 바람직한 군의 모든 조합을 포괄한다는 것이 이해되어야 한다.

본 발명의 화학 물질은 HCV 폴리머라제에 대하여 개선된 유전자형-1a/1b 프로파일을 나타내고, 따라서 광범위한 환자 개체군의 사람에게 효능을 발휘하는 잠재력을 갖는다.

용어 "유전자형-1a/1b 프로파일"은 야생형 HCV에서 유전자형 1a 및 유전자형 1b의 HCV 폴리머라제 효소의 억제제로서의 효능을 의미한다. 두 유전자형 모두에 대한 높은 효능이 유리한 것으로 생각된다.

본 발명의 추가의 측면으로, 인간 의학적 또는 수의학적 치료, 특히 바이러스 감염, 특히 HCV 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 생리학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 에스테르로부터 선택된 1종 이상의 화학 물질이 제공된다.

본원에서 치료법 및/또는 치료를 언급하는 것은 질환의 방지, 지연, 예방, 치료 및 치유를 포함하나, 이들로 한정되지는 않는다는 것을 알 것이다. 또한 본원에서 HCV 감염의 치료 또는 예방을 언급하는 것은 HCV-관련 질환, 예컨대 간 섬유증, 간경변증 및 간암의 치료 또는 예방을 포함한다는 것을 알 것이다.

본 발명의 또다른 측면에 따라서, 바이러스 감염, 특히 HCV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 의약의 제조에 있어서 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 생리학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 에스테르로부터 선택된 1종 이상의 화학 물질의 용도가 제공된다.

추가의 또는 대안의 측면으로, 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 생리학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 에스테르로부터 선택된 1종 이상의 화학 물질을 유효량으로 바이러스 감염된 인간 또는 동물 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 바이러스 감염, 특히 HCV 감염된 인간 또는 동물 대상체의 치료 방법이 제공된다.

본 발명의 화합물이 하나 이상의 비대칭 탄소 원자를 함유할 수 있고, 라세미체, 부분입체이성질체 및 광학적 활성 형태로 존재할 수 있다는 것을 알 것이다. 이들 라세미체 화합물, 거울상이성질체 및 부분입체이성질체는 모두 본 발명의 범주에 포함되는 것으로 생각된다.

한 측면에서, 본 발명에서 유용한 화학 물질은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르, 및 각각의 거울상이성질체로부터 선택될 수 있다:

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(5-메틸- 1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산;

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산;

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,2-티아졸-3-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산;

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-2-(1H-피라졸-1-일메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)피롤리딘-2-카르복실산;

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-2-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산;

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1,2-티아졸-3-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산; 및

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1H-피라졸-1-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산.

추가의 측면으로, 본 발명에서 유용한 화학 물질은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르, 및 각각의 거울상이성질체로부터 선택될 수 있다:

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산;

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-2-(1H-피라졸-1-일메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)피롤리딘-2-카르복실산; 및

또다른 측면으로, 본 발명에서 유용한 화학 물질은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르, 및 각각의 거울상이성질체로부터 선택될 수 있다:

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-2-(1H-피라졸-1-일메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)피롤리딘-2-카르복실산.

제약상 허용되는 염 복합물 또한 본 발명에 포함된다. 본 발명은 또한 화학식 Ia의 화합물의 생리학적으로 허용되는 염도 포함한다. 화학식 Ia의 화합물의 적합한 생리학적으로 허용되는 염은 산 염, 예를 들면 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 테트라알킬암모늄 등, 또는 적합한 산, 예를 들면 유기 카르복실산, 예컨대 아세트산, 락트산, 타르타르산, 말산, 이세티온산, 락토비온산 및 숙신산; 유기 술폰산, 예컨대 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산 및 p-톨루엔술폰산 및 무기 산, 예컨대 염산, 황산, 인산 및 술팜산 등과의 일염기성 또는 이염기성 염을 포함한다.

본 발명은 또한 화학식 Ia의 화합물의 용매화물, 예를 들면 수화물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용되는 에스테르, 예를 들면 카르복실산 에스테르 -COOR (여기서, R은 직쇄 또는 분지쇄 알킬, 예를 들면 n-프로필, n-부틸, 알콕시알킬 (예, 메톡시메틸), 알콕시카르보닐알킬 (예, 메톡시카르보닐메틸), 아실옥시알킬 (예, 피발로일옥시메틸), 아랄킬 (예, 벤질), 아릴옥시알킬 (예, 페녹시메틸), 아릴 (예, 할로겐, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알콕시 또는 아미노로 임의로 치환된 페닐)로부터 선택됨)에 관한 것이다. 달리 언급하지 않는 한, 이러한 에스테르에 존재하는 임의의 알킬 잔기는 바람직하게는 탄소 원자를 1 내지 18개, 특히 1 내지 4개 함유한다. 이러한 에스테르에 존재하는 임의의 아릴 잔기는 바람직하게는 페닐기를 포함한다.

한 측면에서, 화학식 Ia의 화합물은 모 화합물, 염 또는 용매화물 형태이다.

본원에서, 환자에게 투여하기 위한 제약학적 제제에 포함될 수 있는 성분 (활성 성분, 예컨대 활성 성분, 그의 염 또는 부형제)과 관련하여 사용되는 용어 "제약상 허용되는"이란 그 성분이 제약학적 제제에 존재하는 임의의 다른 성분들과 상용성이고 그의 수용자에게 유해하지 않다는 점에서 허용된다는 것을 말한다.

또한, 본 발명의 특정 화합물이 상이한 호변이성질체 형태로 존재할 수 있다는 것을 알 것이다. 모든 호변이성질체는 본 발명의 범주에 포함되는 것으로 생각된다.

A가 히드록시인 화학식 Ia의 화합물은 하기 화학식 II의 화합물로부터 탈보호에 의해 제조될 수 있다.

식 중,

A'는 보호된 히드록시기, 예를 들면 알콕시, 벤질옥시 또는 실릴옥시 (예, 트리-(C₁ _- ₄알킬)-실릴옥시기)이고,

D, E, G 및 J는 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같다.

적합한 보호기는 문헌 [T W Greene and P G M Wuts 'Protective Groups in Organic Synthesis,' 3^rd Ed (1999), J Wiley and Sons]에서 찾아볼 수 있으며, 이들로 제한되지는 않는다.

예를 들어 A'가 tert-부톡시이고, D, E, G 및 J가 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같은 경우에는, 적합한 산, 예를 들면 트리플루오로아세트산 또는 진한 염산 수용액으로 처리함으로써 제조될 수 있다. 임의로, 반응은 용매, 예를 들면 디클로로메탄 또는 디메톡시에탄 중에서 수행된다. 한 측면에서, 온도는 0 내지 60℃이고, 추가의 측면에서 20 내지 30℃이다.

예를 들어, A'가 벤질옥시이고, D, E, G 및 J가 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같은 경우에는, 적합한 촉매, 예를 들면 탄소상 팔라듐의 존재하에서의 수소화분해에 의해 제조될 수 있다. 반응은 용매, 예를 들면 에탄올 중에서 수행되는 것이 적합하다. 바람직하게는, 온도는 0 내지 50℃이다.

예를 들어, A'가 알릴옥시이고, D, E, G 및 J가 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같은 경우에는, 적합한 촉매, 예를 들면 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 및 적합한 양성자 공급원, 예를 들면 페닐실란으로 처리함으로써 제조될 수 있다. 반응은 적합한 용매, 예를 들면 디클로로메탄 중에서 수행된다.

예를 들어, A'가 트리(메틸)실릴옥시이고, D, E, G 및 J가 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같은 경우에는, 적합한 플루오라이드 공급원, 예를 들면 테트라부틸암모늄 플루오라이드로 처리함으로서 제조될 수 있다. 반응은 적합한 용매, 예를 들면 테트라히드로푸란 중에서 수행된다.

화학식 Ia 또는 II의 화합물은 하기 화학식 III의 화합물을 적합한 아실화제, 예를 들면 D-C(O)-hal (여기서, hal은 할로 원자, 바람직하게는 클로로 또는 브로모이고, D는 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같음)과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

식 중,

A"는 히드록시, 또는 알콕시, 벤질옥시 또는 트리-(C₁ _- ₄알킬)-실릴옥시 기이고,

E, G 및 J는 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같다.

바람직하게는, 반응은 적합한 용매, 예를 들면 디클로로메탄 중에서 적합한 염기, 예를 들면 트리에틸아민의 존재하에서 수행된다. 온도는 0 내지 50℃가 적합하고, 20 내지 30℃가 보다 적합하다. 임의로, 반응은 용매의 환류 온도에서 수행될 수 있다.

화학식 Ia 또는 II의 화합물은 또한 적합한 염기, 예를 들면 수소화나트륨 또는 나트륨 tert-부톡사이드, 및 적합한 메틸화제, 예컨대 메틸 요오다이드를 사용하는 하기 화학식 IV의 화합물의 메틸화에 의해 제조될 수 있다.

식 중,

A"는 화학식 III에 대해 상기 정의한 바와 같고,

G'는 히드록시메틸을 나타낸다.

한 측면에서, 반응은 적합한 용매 또는 그의 혼합물, 예를 들면 디메틸포름아미드, 메틸-tert-부틸 에테르, 디메톡시에탄 및/또는 아세토니트릴 중에서 수행된다. 한 측면에서, 반응은 -30 내지 50℃, 적합하게는 20 내지 30℃ 또는 -25℃에서 수행된다. 추가의 측면에서, 반응은 -25℃에서 용매로서 메틸-tert-부틸 에테르와 디메톡시에탄의 혼합물을 사용하여 수행된다.

화학식 IV의 화합물은 하기 화학식 V의 화합물을 적절하게 처리함으로써 제조될 수 있다.

식 중,

A"는 화학식 III에 대해 상기 정의한 바와 같고,

D, E 및 J는 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같고,

L은 CHO 또는 CO₂Y (여기서, Y는 수소 또는 알킬을 나타냄)를 나타낸다.

예를 들면, L이 CHO 또는 CO₂Y (여기서, Y는 수소 또는 알킬을 나타냄)를 나타내는 화학식 V의 화합물을 적합한 용매 또는 그의 혼합물, 예를 들면 테트라히드로푸란 및/또는 메탄올 중에서 적합한 환원제, 예를 들면 리튬 보로히드라이드, 리튬 트리에틸보로히드라이드, 나트륨 보로히드라이드, 나트륨 트리아세톡시보로히드 라이드, 보란/디메틸 술파이드 복합물 또는 리튬 알루미늄 히드라이드, 또는 이들의 적합한 조합물을 사용하여 환원시킴으로써 제조될 수 있다. 한 측면에서, 반응은 -78 내지 40℃의 온도에서 수행될 수 있다. 추가의 측면에서, 반응은 30 내지 40℃의 온도에서 수행될 수 있다. 추가의 측면에서, 반응은 테트라히드로푸란과 메탄올의 용매 혼합물 중에서 나트륨 보로히드라이드와 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드의 혼합물을 사용하여 수행된다.

L이 CO₂Y (여기서, Y는 수소를 나타냄)를 나타내는 화학식 V의 화합물은 L이 CO₂Y (여기서, Y는 알킬을 나타냄)를 나타내는 화학식 V의 화합물로부터 제조될 수 있다. 예를 들면, L이 CO₂Me를 나타내는 화학식 V의 화합물은 가수분해에 의해, 예를 들면 적합한 용매, 예컨대 메탄올 중에서 적합한 염기, 예컨대 나트륨 메톡사이드를 사용하는 염기 촉매되는 가수분해에 의해 L이 CO₂H를 나타내는 화학식 V의 화합물로 전환될 수 있다.

L이 CHO 또는 CO₂Y (여기서, Y는 수소 또는 알킬을 나타냄)를 나타내는 화학식 V의 화합물은 하기 화학식 VI의 화합물로부터 적합한 아실화제, 예를 들면 D-C(O)-hal (여기서, hal은 할로 원자, 바람직하게는 클로로 또는 브로모이고 D는 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같음)을 사용하여 제조될 수 있다.

식 중,

L은 CHO 또는 CO₂Y (여기서, Y는 수소 또는 알킬을 나타냄)를 나타내고,

A", E 및 J는 화학식 III에 대해 상기 정의한 바와 같다.

바람직하게는 반응은 적합한 용매, 예를 들면 디클로로메탄, 메틸-tert-부틸 에테르 및/또는 아세토니트릴 중에서 적합한 염기, 예를 들면 트리에틸아민 또는 피리딘의 존재하에서 수행된다. 한 측면에서, 반응은 0 내지 50℃, 적합하게는 20 내지 30℃의 온도에서 수행된다. 임의로 반응은 환류하에서 수행될 수 있다. 한 측면에서, 피리딘이 염기로서 사용되는 경우에 모든 미량의 피리딘은, 예를 들면 다음 합성 단계로 진행하기 전에 수성 산, 예를 들면 염산으로 및/또는 부가적으로 물로 세척함으로써 제거하는 것이 적합하다.

A"가 히드록시인 화학식 V의 화합물은 표준 히드록시 보호 기술에 의해 A"가 알콕시, 벤질옥시 또는 실릴옥시 기인 화학식 V의 화합물로 전환될 수 있다. 유사하게, A"가 알콕시, 벤질옥시 또는 실릴옥시 기인 화학식 V의 화합물은 표준 탈보호 기술에 의해 A"가 히드록시인 화학식 V의 화합물로 전환될 수 있다. 적합한 보호기는 문헌 [T W Greene and P G M Wuts 'Protective Groups in Organic Synthesis', 3^rd Ed (1999), J Wiley and Sons]에서 찾아볼 수 있으며, 이들로 한정 되지는 않는다.

화학식 VI의 화합물은 하기 화학식 VII의 화합물을 하기 화학식 VIII의 화합물과 반응시킴으로서 제조될 수 있다.

식 중,

E 및 J는 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같고,

A"는 화학식 III에 대해 상기 정의한 바와 같고,

한 측면에서, 반응은 적합한 용매, 예를 들면 THF 또는 아세토니트릴 중에서, 임의로는 루이스산 촉매, 예컨대 리튬 브로마이드 또는 은 아세테이트, 및 염기, 예컨대 트리에틸아민, 1,8-디아자비시클로[5,4,0]운데크-7-엔 (DBU), 또는 테트라메틸 구아니딘의 존재하에서 수행된다. 별법으로, 반응은 적합한 용매, 예를 들면 THF 또는 아세토니트릴 중에서 산, 예컨대 아세트산의 존재하에서 수행되거나, 반응은 화학식 VII 및 화학식 VIII의 화합물을 적합한 용매, 예를 들면 톨루엔, 크실렌 또는 아세토니트릴 중에서 촉매 부재하에 가열함으로써 수행될 수 있 다.

화학식 VI의 화합물은 또한 단일 용기 합성법(one pot synthesis)으로 화학식 X의 화합물을 화학식 VIII의 화합물 및 화학식 E-CHO의 화합물과 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 바람직하게는, 반응은 적합한 용매, 예를 들면 THF 또는 아세토니트릴 중에서, 임의로는 루이스산 촉매, 예컨대 리튬 브로마이드 또는 은 아세테이트, 및 염기, 예컨대 트리에틸아민, 1,8-디아자비시클로[5,4,0]운데크-7-엔 (DBU) 또는 테트라메틸 구아니딘의 존재하에서 수행된다. 바람직하게는 반응은 0 내지 50℃, 적합하게는 20 내지 30℃의 온도에서 수행된다. 임의로 건조제, 예를 들면 분자체가 공정에 사용된다.

화학식 III의 화합물은 우선 피롤리딘 고리의 N-원자를 적합한 N-보호기, 예를 들면 벤질옥시카르보닐 (CBZ) 또는 t-부톡시카르보닐로 보호함으로써, 하기 화학식 IX의 화합물을 적절하게 처리하여 제조될 수 있다.

식 중,

G'는 히드록시메틸을 나타내고,

A", E 및 J는 화학식 III에 대해 상기 정의한 바와 같다.

화학식 IV의 화합물의 화학식 II의 화합물로의 전환과 관련하여 상기 기재한 것과 유사한 방식으로, 화학식 IX의 N-보호된 화합물은 메틸화에 의해 G가 메톡시메틸을 나타내고 N-원자가 보호된 화학식 III의 화합물로 전환될 수 있다. 표준 절차에 의한 N-원자의 탈보호는 화학식 III의 화합물을 생성한다.

화학식 IX의 화합물은 L이 CO₂Y를 나타내고 Y가 알킬을 나타내는, 화학식 VI의 임의로 N-보호된 화합물을 적합한 용매, 예를 들면 테트라히드로푸란 중에서 적합한 환원제, 예를 들면 리튬 보로히드라이드 또는 나트륨 보로히드라이드를 사용하여 환원시킴으로써 제조될 수 있다. 표준 절차에 의한 N-원자의 탈보호는 화학식 IX의 화합물을 생성한다. 예를 들어, N-보호기가 CBZ일 경우에는, 탈보호가 촉매성 수소화분해에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, N-보호기가 t-부톡시카르보닐일 경우에는, 탈보호가 적합한 산, 예를 들면 트리플루오로아세트산으로 처리함으로써 달성될 수 있다.

화학식 VII의 화합물은 하기 화학식 X의 화합물을 화학식 E-CHO (여기서, E는 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같음)의 화합물과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

식 중,

J는 화학식 Ia에 대해 상기 정의한 바와 같고,

A"는 화학식 III에 대해 상기 정의한 바와 같다.

한 측면에서, 화학식 X가 산 부가염, 예를 들면 히드로클로라이드로서 제공되는 경우에는, 반응이 적합한 염기, 예를 들면 트리에틸아민의 존재하에서 수행될 수 있다. 추가의 측면에서, 반응은 적합한 건조제, 예를 들면 마그네슘 술페이트의 존재하에서 수행될 수 있다. 반응은 적합한 용매, 예를 들면 디클로로메탄 또는 톨루엔 중에서 수행될 수 있다.

J가 1H-피라졸-1-일메틸이고, A"가 히드록시인 화학식 X의 화합물은 암버리스트(Amberlyst) 120 (H^*)의 존재하에서 적합한 산, 예를 들면 10％ 수성 염산으로 하기 화학식 XI의 화합물을 처리함으로써 제조될 수 있다.

식 중,

J는 1H-피라졸-1-일메틸이고,

M은 금속 양이온, 예를 들면 칼륨이다.

J가 1,3-티아졸-2-일메틸 또는 1H-피라졸-1-일메틸이고, A"가 알콕시, 벤질옥시 또는 트리-(C₁ _- ₄알킬)-실릴옥시 기인 화학식 X의 화합물은 J가 1,3-티아졸-2-일메틸 또는 1H-피라졸-1-일메틸이고, A"가 히드록시인 화학식 X의 화합물을 통상의 에스테르화 또는 보호기 절차에 의해 처리함으로써 제조될 수 있다. 예를 들면, J가 1,3-티아졸-2-일메틸 또는 1H-피라졸-1-일메틸이고, A"가 tert-부톡시인 화학식 X의 화합물은 J가 1,3-티아졸-2-일메틸 또는 1H-피라졸-1-일메틸이고, A"가 히드록시인 화학식 X의 화합물을 적합한 산 촉매, 예컨대 70％ 수성 과염소산의 존재하에서 적합한 tert-부틸 전달제, 예컨대 tert-부틸아세테이트로 처리함으로써 제조될 수 있다. 한 측면에서, A"가 알콕시, 벤질옥시 또는 트리-(C₁ _- ₄알킬)-실릴옥시 기인, 화학식 X의 이렇게 형성된 유리 염기 화합물은 디옥산 중에서 적합한 산, 예를 들면 염산으로 처리함으로써 적합한 염, 예를 들면 히드로클로라이드 염으로 전환될 수 있다.

J가 1H-피라졸-1-일메틸인 화학식 XI의 화합물은 하기 화학식 XII의 화합물을 적합한 염기, 예를 들어 M이 칼륨인 경우에는 탄산칼륨의 존재하에서, 그리고 적합한 용매, 예컨대 수성 아세토니트릴의 존재하에서 1H-피라졸과 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 바람직하게는 반응은 50 내지 70℃, 적합하게는 60℃의 온도에서 수행된다.

J가 1,3-티아졸-2-일메틸, 1,3-티아졸-4-일메틸 또는 1,2-티아졸-3-일메틸이고 A"가 알콕시, 벤질옥시 또는 트리-(C₁ _- ₄알킬)-실릴옥시 기인 화학식 X의 화합물은 하기 화학식 XIII의 화합물을 산, 예를 들면 15％ 수성 시트르산으로 처리함으로써 제조될 수 있다. 바람직하게는 반응은 적합한 용매, 예를 들면 THF 및/또는 물 중에서 수행된다.

식 중,

J는 1,3-티아졸-2-일메틸, 1,3-티아졸-4-일메틸 또는 1,2-티아졸-3-일메틸이고,

A"는 알콕시, 벤질옥시 또는 트리-(C₁ _- ₄알킬)-실릴옥시 기이다.

화학식 XIII의 화합물은 하기 화학식 XIV의 화합물을 화학식 J-hal (여기서, J는 1,3-티아졸-2-일메틸, 1,3-티아졸-4-일메틸 또는 1,2-티아졸-3-일메틸이고, hal은 할로 원자, 바람직하게는 클로로 또는 브로모임)의 화합물과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

식 중,

바람직하게는, 반응은 적합한 염기, 예컨대 칼륨 t-부톡사이드의 존재하에서 수행된다. 바람직하게는, 반응은 적합한 용매, 예를 들면 THF 중에서 수행된다. 반응은 적합한 촉매, 예를 들면 리튬 요오다이드의 존재하에서 수행될 수 있다. 바람직하게는 반응은 -10℃ 내지 실온, 적합하게는 0℃의 온도에서 수행된다.

D가 3-메톡시-4-tert-부틸페닐인 화학식 D-C(O)-hal의 화합물은 하기 화학식 XV의 화합물을 적합한 산 할라이드 형성제, 예를 들면 옥살릴 클로라이드 또는 티오닐 클로라이드와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

한 측면에서, 반응은 적합한 촉매, 예를 들면 디메틸포름아미드 또는 디에틸포름아미드의 존재하에서 수행된다. 임의로, 반응은 적합한 용매, 예를 들면 디클로로메탄 중에서 0 내지 50℃, 예를 들면 20 내지 30℃의 온도에서 수행된다. 대안의 측면에서, 반응은 환류하에서 티오닐 클로라이드를 사용하여 수행된다.

화학식 VIII, XII, XIV, XV, J-hal 및 E-CHO의 화합물은 당업계에 공지되어 있거나, 시판되고 있거나, 문헌의 표준 절차에 의해 제조될 수 있다.

A가 에스테르인 화학식 Ia의 화합물은 문헌의 표준 에스테르화 절차에 따라 A가 히드록시인 화학식 Ia의 화합물의 에스테르화에 의해 제조될 수 있다.

부분입체이성질체로 존재하는 화학식 Ia, II, III, IV, V, VI 및/또는 IX의 화합물이 임의로 당업계에 널리 공지된 기술에 의해, 예를 들면 컬럼 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있다는 것을 알 것이다.

또한, 본 발명은 L이 CHO 또는 CO₂Y (여기서, Y는 수소 또는 알킬을 나타냄) 를 나타내고, A", E 및 J가 화학식 III에 대해 상기 정의한 바와 같은 화학식 V 또는 화학식 VI의 화합물의 C(4)-에피머의 상호전환 방법을 제공한다는 것을 알 것이다. 예를 들어, 화학식 V 및/또는 화학식 VI의 화합물의 rel-(2R,4S,5R)-부분입체이성질체는 적합하다면 rel-(2R,4R,5R)-부분입체이성질체로 전환될 수 있다. 이들 rel-(4S,5R)-부분입체이성질체의 상응하는 rel-(4R,5R)-부분입체이성질체로의 이러한 에피머화는 화학식 V 및/또는 화학식 VI의 화합물을 적합한 용매의 존재하에서 적합한 염기로 처리함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, L이 CO₂Me를 나타내는 화학식 V의 화합물의 rel-(4S,5R)-부분입체이성질체의 rel-(4R,5R)-부분입체이성질체로의 전환은 rel-(4S,5R)-부분입체이성질체를 적합한 용매, 예컨대 메탄올의 존재하에서 적합한 염기, 예컨대 나트륨 메톡사이드로 처리함으로써 달성될 수 있다.

화학식 Ia, II, III, IV, V, VI 및/또는 IX의 라세미체 화합물이 임의로 그들의 개별 거울상이성질체로 분리될 수 있다는 것을 알 것이다. 이러한 분리는 편리하게 당업계에 공지된 표준 방법으로 달성될 수 있다. 예를 들면, 화학식 Ia, II, III, IV, V, VI 및/또는 IX의 라세미체 화합물은 키랄 정제용 HPLC에 의해 분리될 수 있다. 별법으로, 적합한 산성 또는 염기성 기, 예컨대 카르복실산기 또는 아민기를 함유하는 화학식 Ia, II, III, IV, V, VI 및/또는 IX의 라세미체 화합물은 각각 적합한 키랄 염기 또는 산 시약을 사용하여 표준 부분입체이성질체 염 형성 방법에 의해 분리될 수 있다. 이러한 기술은 당업계에 잘 확립되어 있다. 예를 들면, L이 CO₂Me인 화학식 VI의 라세미체 화합물은 적합한 용매 또는 그의 혼합 물, 예를 들면 디클로로메탄, 이소프로판올, 이소프로필 아세테이트 및/또는 아세토니트릴 중에서 키랄 산, 예컨대 (R)-(-)-1,1'-비나프틸-2,2'-디일-수소 포스페이트로 처리함으로써 분리될 수 있다. 한 측면에서 디클로로메탄과 이소프로필 아세테이트의 혼합물이 용매로서 사용된다. 그 후에 화학식 VI의 거울상이성질체가 염을 적합한 용매, 예를 들면 메틸 tert-부틸 에테르 중에서 적합한 염기, 예를 들면 트리에틸아민으로 처리함으로써 수득될 수 있다. 그 후에 화학식 II, III, IV, V, VI 및/또는 IX의 개별 거울상이성질체는 라세미체 화합물과 관련하여 상기 기재된 화학법에 의해 화학식 Ia의 거울상이성질체 화합물로 가공될 수 있다.

또한, 화학식 III, VI 및/또는 IX의 개별 거울상이성질체 화합물이 적합하다면 키랄 보조물 또는 키랄 촉매성 시약을 사용하고, 부가적으로 상기 기재한 바와 같이 임의의 적합한 관능기 상호전환 단계 (임의의 상기 키랄 보조물의 첨가 또는 제거를 포함함)를 수행하는 일반적인 비대칭 합성법에 의해 제조될 수 있다는 것을 알 것이다. 이러한 일반적인 비대칭 합성법은 당업계에 널리 공지되어 있고, 문헌 ["Asymmetric Synthesis," Academic Press, 1984] 및/또는 문헌 ["Chiral Auxiliaries and Ligands in Asymmetric Synthesis," Wiley, 1995]에 기재된 것을 포함하나, 이들로 한정되지는 않는다. 예를 들어, 적합한 일반적인 키랄 보조물은 키랄 알콜, 예컨대 멘톨 또는 1-페닐에탄올; 키랄 옥사졸리디논, 예컨대 4-벤질옥사졸리딘-2-온 또는 4-이소프로필옥사졸리딘-2-온; 키랄 술탐, 예컨대 캄포르술탐; 또는 키랄 아민, 예컨대 1-페닐에틸아민 또는 2-아미노-2-페닐에탄올을 포함한다. 적합한 일반적인 키랄 촉매성 시약은 임의로 금속 염, 예를 들면 M_mX_x (여기서, M은 은, 코발트, 아연, 티탄, 마그네슘 또는 망간이고, X는 할라이드 (예를 들면, 클로라이드 또는 브로마이드), 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, p-톨루엔술포네이트, 트리플루오로메틸술포네이트, 헥사플루오로포스페이트 또는 니트레이트이고, _m 및 _x는 1, 2, 3 또는 4임)의 존재하에, 그리고 임의로 염기, 예를 들면 트리에틸아민의 존재하에서 키랄 염기성 아민 및 키랄 리간드, 예컨대 N-메틸에페드린, 1-페닐-2-(1-피롤리디닐)-1-프로판올, 3-(디메틸아미노)-1,7,7-트리메틸비시클로[2.2.1]-헵탄-2-올, 3,4-비스(디페닐포스파닐)-1-(페닐메틸)-피롤리딘, 킨코닌, 킨코니딘, 스파르테인, 히드로퀴닌 또는 퀴닌, BINAP 또는 키랄 비스(옥사졸린) (BOX) 리간드 및 유도체를 포함한다. 이들 키랄 보조물 또는 키랄 촉매성 시약은 모두 당업계에 잘 개시되어 있다. 키랄 보조물 또는 키랄 촉매성 시약을 사용하는 비대칭 합성법에 의한 다양한 키랄 피롤리딘 제조의 일반적인 예는 문헌 [Angew. Chem. Int. Ed., (2002), 41: 4236]; 문헌 [Chem. Rev., (1998), 98: 863]; 문헌 [J. Am. Chem. Soc., (2002), 124: 13400]; 문헌 [J. Am. Chem. Soc., (2003), 125: 10175]; 문헌 [Org. Lett., (2003), 5, 5043]; 문헌 [Tetrahedron, (1995), 51: 273]; 문헌 [Tetrahedron: Asymm., (1995), 6: 2475]; 문헌 [Tetrahedron: Asymm., (2001), 12: 1977]; 문헌 [Tetrahedron: Asymm., (2002), 13: 2099]; 및 문헌 [Tet. Lett., (1991), 41: 5817]에 기재된 것을 포함하나, 이들로 한정되지는 않는다.

특정 측면에서, 하기 화학식 VIa의 키랄 피롤리딘 화합물은 상기 정의된 화학식 VII의 화합물을 하기 화학식 VIIIa의 화합물과 반응시킨 후에 임의로 키랄 보조물의 표준 제거 방법에 의해 CO₂Y¹을 CO₂Y로 전환시킴으로써 제조될 수 있다.

식 중,

L¹은 CO₂Y 또는 CO₂Y¹ (여기서, Y는 수소 또는 알킬을 나타내고, Y¹은 키랄 보조물을 나타냄)을 나타내고,

A", E 및 J는 화학식 VI에 대해 상기 정의한 바와 같고,

*은 거울상 강화된 키랄 중심을 나타낸다.

식 중,

L¹은 키랄 에스테르기 CO₂Y¹ (여기서, Y¹은 키랄 보조물을 나타냄)를 나타낸다.

이러한 키랄 에스테르 CO₂Y¹은 키랄 알콜 Y¹OH, 예를 들면 멘톨로부터 표준 에스테르화 기술에 의해 유도될 수 있다. 바람직하게는, 화학식 VII의 화합물의 화학식 VIIIa의 화합물과의 반응은 적합한 용매, 예를 들면 THF 또는 아세토니트릴 중에서, 임의로는 루이스산 촉매, 예컨대 리튬 브로마이드 또는 은 아세테이트, 및 염기, 예컨대 트리에틸아민, 1,8-디아자비시클로[5,4,0]운데크-7-엔 (DBU) 또는 테트라메틸 구아니딘의 존재하에서 수행된다. 별법으로, 반응은 적합한 용매, 예를 들면 THF 또는 아세토니트릴 중에서, 산, 예컨대 아세트산의 존재하에서 수행되거나, 반응은 화학식 VII 및 VIIIa의 화합물을 적합한 용매, 예를 들면 톨루엔, 크실렌 또는 아세토니트릴 중에서 촉매의 부재하에 가열함으로써 수행될 수 있다. 화학식 VIa 및 VIIIa의 화합물과 유사한 화합물의 제조법은 문헌 [Tetrahedron: Asymm., (1995), 6: 2475]에 개시되어 있다.

추가의 측면에서, 하기 화학식 VIb의 키랄 피롤리딘 화합물은 본원에서 상기 정의한 바와 같이 화학식 VII의 화합물을 화학식 VIII의 화합물과 비대칭 반응 조건하에서 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

식 중,

L은 CO₂Y (여기서, Y는 수소 또는 알킬을 나타냄)를 나타내고,

A", E 및 J는 화학식 VI에 대해 상기 정의한 바와 같고,

*는 거울상 강화된 키랄 중심을 나타낸다.

당업자라면 이러한 비대칭 반응 조건이 예를 들면, 본원에 상기 정의된 키랄 촉매성 시약을 반응 혼합물에 포함시킴으로써 제공될 수 있다는 것을 알 것이다.

한 측면에서, 반응은 적합한 용매, 예를 들면 아세토니트릴 중에서 적합한 키랄 촉매성 시약, 예를 들면 (-)-N-메틸에페드린 및 적합한 금속염, 예를 들면 망간(II) 브로마이드의 존재하에서 수행된다. 바람직하게는, 반응은 -30℃ 내지 실온, 적합하게는 -20℃의 온도에서 수행된다.

대안의 측면에서, 반응은 적합한 용매, 예를 들면 임의로는 톨루엔과 공용매화된 아세토니트릴 중에서 적합한 키랄 촉매성 시약, 예를 들면 (S)-(-)-2,2'-비스(디페닐포스피노)-1',1-비나프틸 (S-BINAP) 및 적합한 금속염, 예를 들면 은 아세테이트의 존재하에서, 적합한 염기, 예를 들면 디이소프로필에틸아민의 존재하에서 수행된다. 바람직하게는 반응은 -15℃ 내지 실온, 적합하게는 -5℃의 온도에서 수행된다.

임의로, 이러한 비대칭 반응으로부터 생성되는 화학식 VIa 또는 화학식 VIb의 화합물의 주요 키랄 부분입체이성질체는 당업계에 널리 공지된 통상의 정제 기술에 의해, 예를 들면 크로마토그래피에 의해 또는 분별 결정화에 의해 추가로 거울상이 될 수 있다. 바람직한 결정화 방법은 주요 키랄 부분입체이성질체의 염, 예를 들면 히드로클로라이드 염 또는 (R)-(-)-1,1'-비나프틸-2,2'-디일-수소 포스페이트 염의 분별 결정화이다. 화학식 VIa 또는 화학식 VIb의 화합물의 히드로클로라이드 염은 화학식 VIa 또는 화학식 VIb의 화합물을 적합한 용매, 예를 들면 디에틸 에테르 중에서 무수 염화수소로 처리함으로써 제조될 수 있다. 바람직하게는 반응은 -10 내지 10℃의 온도에서 수행된다. 화학식 VIa 또는 화학식 VIb의 화합물의 (R)-(-)-1,1'-비나프틸-2,2'-디일-수소 포스페이트 염은 화학식 VI의 라세미체 화합물의 분리에 대해 본원에 상기 기재된 것과 같이 제조될 수 있다.

임의로 L¹이 CO₂Y¹을 나타내는 기로부터 키랄 보조물을 제거하여 L¹이 CO₂Y를 나타내는 기를 제공하는 것은 표준 방법에 의해, 예를 들면 적합한 용매, 예컨대 메탄올 중에서 가수분해 시약, 예컨대 나트륨 히드록사이드 또는 알콕사이드 (예, 적합하다면 나트륨 메톡사이드)로 처리함으로써 용이하게 달성된다.

임의로, 화학식 VIa 또는 화학식 VIb의 키랄 화합물은, L 또는 L¹ 기의 G' 기로의 관능기 상호전환을 달성하기에 적합한 시약으로 처리함으로써 G'가 히드록시알킬을 나타내고, A", E 및 J가 화학식 III에 대해 상기 정의한 바와 같은 화학식 IX의 키랄 화합물로 전환될 수 있다. 예를 들면, L¹이 CO₂Y¹을 나타내고 Y¹이 상기 정의한 바와 같은 화학식 VIa의 화합물을 적합한 용매, 예를 들면 테트라히드로푸란 중에서 적합한 환원제, 예를 들면 리튬 알루미늄 히드라이드로 처리할 수 있다.

임의로, 화학식 VIa 또는 화학식 VIb의 키랄 화합물은, 화학식 VI의 화합물의 화학식 V의 화합물로의 변형에 대해 상기 기재한 것과 같이 피롤리딘 질소 원자를 우선 아실화하고, 그 후에 화학식 VIa 또는 화학식 VIb의 화합물의 화학식 IX의 키랄 화합물로의 변형에 대해 상기 기재한 것과 같이 L 또는 L¹ 기의 G' 기로의 관능기 상호전환을 달성하기에 적합한 시약으로 처리함으로써 G'가 히드록시알킬을 나타내는 화학식 IV의 키랄 화합물로 전환될 수 있다.

상기 기재된 적합한 추가의 전환 단계로 화학식 Ia, II, IV 및/또는 V의 키랄 화합물이 화학식 III, VI 및 IX의 키랄 화합물로부터 제조될 수 있다는 것을 알 것이다.

임의의 화학 관능기의 적절한 처리 및 보호로, 화학식 I의 화합물의 합성이 상기와 실험 단락에 기재된 것과 유사한 방법으로 달성된다. 적합한 보호기는 문헌 [T W Greene and P G M Wuts, 'Protective Groups in Organic Synthesis,' 3^rd Ed (1999), J Wiley and Sons]에서 찾아볼 수 있으며, 이들로 한정되지는 않는다.

당업자라면 용매가 반응에서 사용될 경우 무수성 용매를 사용하는 것이 바람직하다는 것을 알 것이다. 또한 비활성 대기, 예를 들면 적합하다면 질소 또는 아르곤 대기하에서 반응을 수행하는 것이 바람직하다.

중간체 1

2-[N-( 디페닐메틸렌 )아미노]-3-(1,3-티아졸-4-일)프로판산, tert -부틸 에스테르

파트 A

질소 대기하에서 건조한 THF (450 mL) 중의 2-[N-(디페닐메틸렌)아미노]에탄산, tert-부틸 에스테르 (문헌 [J. Org. Chem., 1982, 47, 2663]; 42.3 g, 143 mmol)의 냉각 (빙조) 용액에, THF (146 mL) 중 칼륨 t-부톡사이드의 1 M 용액을 25분에 걸쳐서 적가하였다 (적가 깔대기). 혼합물을 빙조에서 추가로 45분 동안 교반하였다.

파트 B

이 시간 동안 독립적으로, 4-(클로로메틸)-1,3-티아졸 히드로클로라이드 (25.5 g, 150 mmol)를 하기와 같이 유리 염기로 새로 전환하였다: 히드로클로라이드를 디클로로메탄 (500 mL)과 혼합하고 5 w/v％ 중탄산나트륨 수용액 (375 mL)으로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 조심스럽게 증발시켜 (회전식 증발기; 80 토르; 수조 25℃) 유리 염기를 제공하였다.

파트 C

4-(클로로메틸)-1,3-티아졸 (파트 B에서 형성됨)을 THF (100 mL)에 용해시키고, 빙조 온도에서의 반응을 유지하면서 30분에 걸쳐서 파트 A로부터의 반응 혼합물에 적가하였다 (적가 깔대기). 알킬화제 첨가를 개시한 5분 후에 고형 무수성 리튬 요오다이드 (1 g, 7.5 mmol)를 반응 혼합물에 직접 첨가하였다. 적가 깔대기 를 반응에 첨가되었던, 추가의 건조한 THF (50 mL)로 세정하였다. 반응물을 빙조 온도에서 45분 동안 교반하고, 30분에 걸쳐서 실온으로 가온하고, 추가로 2.5시간 동안 실온에서 교반한 후에, 포화 염수 (400 mL), 물 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (800 mL)의 혼합물 사이에 분배하였다. 유기층을 분리하고 수성층을 추가의 에틸 아세테이트 (2 x 300 mL)로 재추출하였다. 합한 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고 증발시켜 표제 화합물 (57.8 g, 조질)을 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.

중간체 2

2-아미노-3-(1,3-티아졸-4-일)프로판산, tert -부틸 에스테르

아르곤하에서 THF (150 mL) 중 2-[N-(디페닐메틸렌)아미노]-3-(1,3-티아졸-4-일)프로판산, tert-부틸 에스테르 (중간체 1에 기재된 것과 유사한 방식으로 제조됨; 20 g)의 용액에 수중 시트르산 용액 (15 w/v％, 150 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하고, 밤새 둔 다음, THF 대부분을 감압하에서 제거하고 (회전식 증발기; 25℃ 수조), 1 M 수성 염산 (60 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 디에틸 에테르 (2 x 200 mL)로 추출하고 합한 에테르 추출물을 물 (50 mL)로 다시 추출하였다. 합한 수성층을 추가로 디에틸 에테르 (100 mL)로 추출하였다. 모든 에테르층을 버렸다. 그 후에, 수성층을 탄산칼륨을 사용하여 pH 9.5로 조심 스럽게 조절하고, 염수 (100 mL)를 첨가하고, 혼합물을 디에틸 에테르 (4 x 200 mL)로 추출하였다. 이러한 합한 에테르층을 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 감압하에서 용매를 제거하여 표제 화합물을 오일로서 제공하였다.

아민 양성자는 관찰되지 않았다.

중간체 3

2-[[N-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)메틸렌]아미노]-3-(1,3-티아졸-4-일)프로판산, tert-부틸 에스테르

디클로로메탄 (70 mL) 중 2-아미노-3-(1,3-티아졸-4-일)프로판산, tert-부틸 에스테르 (중간체 2; 2.90 g, 12.7 mmol), 5-메틸-1,3-티아졸-2-카르복스알데히드 (1.62 g, 12.7 mmol) 및 황산마그네슘 (약 1 g)의 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 증발시켜 용매를 제거함으로써 표제 화합물을 오일로서 제공하였다.

중간체 4

rel -(2R,4S,5R)-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4- 일메틸 ) 피롤리 딘- 2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

테트라히드로푸란 (125 mL) 중 2-[[N-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)메틸렌]아미노]-3-(1,3-티아졸-4-일)-프로판산, tert-부틸 에스테르 (중간체 3, 4.3 g, 12.75 mmol)의 용액을 질소하에서 교반하였다. 메틸 아크릴레이트 (2.15 g, 25 mmol), 리튬 브로마이드 (2.20 g, 25 mmol) 및 트리에틸아민 (1.73 mL, 12.5 mmol)을 연속적으로 첨가하고, 생성된 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 포화 염화암모늄 용액 (100 mL)을 첨가하고 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 추출물을 물 (100 mL) 및 포화 염수 (100 mL)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고 증발시켰다. 잔류물을 용리액으로서 에틸 아세테이트-시클로헥산 (1:1 (v/v), 이어서 2:1 (v/v))을 사용하는 실리카 겔 상에서의 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 오일로서 제공하였다.

(C₁₉H₂₅N₃O₄S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 424

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 424

중간체 5

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4- 일메틸 ) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

디클로로메탄 (50 mL) 중 rel-(2R,4S,5R)-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4-일메틸)-피롤리딘-2,4-디카르복실산, 2-tert-부틸 에스테르, 4-메틸 에스테르 (중간체 4, 3.90 g, 9.2 mmol), 3-메톡시-4-tert-부틸벤조일 클로라이드¹ (3.28 g, 15.6 mmol) 및 트리에틸아민 (3.52 mL)의 혼합물을 질소하 실온에서 3일 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (100 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하고, 소수성 프릿(frit)을 통해 통과시킴으로써 건조시키고 증발시켰다. 잔류물을 용리액으로서 시클로헥산-에틸 아세테이트 (3:1 (v/v))를 사용하는 실리카 겔 상에서의 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 포말로서 제공하였다.

(C₃₁H₃₉N₃O₆S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 614

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 614

참조 (1): 3-메톡시-4-tert-부틸벤조산으로부터 합성됨 (문헌 [J. Org. Chem., 26, 1961, 1732-1737]).

중간체 6

rel -(2R,4S,5R)-4-( 히드록시메틸 )-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-5-(5- 메 틸-1,3- 티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산 , tert -부틸 에스테르

테트라히드로푸란 (200 mL) 중 rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4-일메틸)피롤리딘-2,4-디카르복실산, 2-tert-부틸 에스테르, 4-메틸 에스테르 (중간체 5, 4.80 g, 7.82 mmol)의 용액을 질소하에서 교반하고 -78℃로 냉각시켰다. 디에틸 에테르 (8.1 mL) 중 리튬 알루미늄 히드라이드의 1.0 M 용액을 적가하였다. 첨가를 완료하면 혼합물을 -45℃로 가온하고 상기 온도에서 3.5시간 동안 유지하였다. 혼합물을 1 M 탄산칼륨 수용액 (100 mL)으로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 x 200 mL)로 추출하였다. 추출물을 물 (100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고 증발시켰다. 잔류물을 용리액으로서 시클로헥산-에틸 아세테이트 (초기에는 2:1 (v/v), 이어서 1:2 (v/v))를 사용하는 실리카 겔 상에서의 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 포말로서 제공하였다.

(C₃₀H₃₉N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 586

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 586

중간체 7

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산 , tert -부틸 에스테르

N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 중 rel-(2R,4S,5R)-4-(히드록시메틸)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산, tert-부틸 에스테르 (중간체 6, 0.585 g, 1 mmol)의 용액을 질소하에서 교반하고 -10℃로 냉각시켰다. 광유 (69 mg, 1.725 mmol) 중 수소화나트륨의 60％ 분산액을 첨가하고 생성된 혼합물을 0℃ 미만에서 30분 동안 교반하였다. 요오도메탄 (0.425 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물의 온도를 0 내지 20℃로 유지하면서 혼합물을 추가로 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 메탄올 (10 mL)로 켄칭하고 증발시켰다. 잔류물이 물 (50 mL)과 에틸 아세테이트 (100 mL) 사이에서 분배되었다. 유기층을 수집하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고 증발시켰다. 잔류물을 용리액으로서 시클로헥산-에틸 아세테이트 (초기에는 2:1 (v/v), 이어서 1:1 (v/v))를 사용하는 실리카 겔 상에서의 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 포말로서 제공하였다.

(C₃₁H₄₁N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 600

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 600

중간체 8

2-[N-(1,3-티아졸-2- 일메틸렌 )아미노]-3-(1,3-티아졸-4-일)프로판산, tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 5-메틸-1,3-티아졸-2-카르복스알데히드 대신에 1,3-티아졸-2-카르복스알데히드를 사용하여, 중간체 3과 유사한 방식으로 제조하였다.

중간체 9

rel -(2R,4S,5R)-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4- 일메틸 ) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 3 대신에 중간체 8을 사용하여, 중간체 4와 유사한 방식으로 제조하였다. 메틸 아크릴레이트를 첨가하기 전에 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 켄칭하기 전에 RT로 가온하였다.

(C₁₈H₂₃N₃O₄S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 410

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 410

중간체 10

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4- 일메틸 ) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 4 대신에 중간체 9를 사용하여, 중간체 5와 유사한 방식으로 제조하였다. 시클로헥산-에틸 아세테이트 (구배용매조성법(gradient elution)으로 50:1 내지 1:1)를 크로마토그래피를 위한 용리액으로서 사용하였다.

(C₃₀H₃₇N₃O₆S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 600

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 600

중간체 11

rel -(2R,4S,5R)-4-( 히드록시메틸 )-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산 , tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 5 대신에 중간체 10을 사용하여, 중간체 6과 유사한 방식으로 제조하였다. 시클로헥산-에틸 아세테이트 (구배용매조성법으로 50:1 내지 2:3)를 크로마토그래피를 위한 용리액으로서 사용하였다.

(C₂₉H₃₇N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 572

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 572

중간체 12

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산 , tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 6 대신에 중간체 11을 사용하여, 중간체 7과 유사한 방식으로 제조하였다. 시클로헥산-에틸 아세테이트 (구배용매조성법으로 50:1 내지 1:1)를 크로마토그래피를 위한 용리액으로서 사용하였다.

(C₃₀H₃₉N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 586

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 586

중간체 13

2-[N-( 디페닐메틸렌 )아미노]-3-(1,2-티아졸-3-일)프로판산, tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 4-(클로로메틸)-1,3-티아졸 대신에 3-(브로모메틸)-1,2-티아졸을 사용하여, 중간체 1과 유사한 방식으로 제조하였다.

중간체 14

2-아미노-3-(1,2-티아졸-3-일)프로판산, tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 1 대신에 중간체 13을 사용하여, 중간체 2와 유사한 방식으로 제조하였다.

아민 양성자는 관찰되지 않았다.

중간체 15

2-[N-(1,3-티아졸-2- 일메틸렌 )아미노]-3-(1,2-티아졸-3-일)프로판산, tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 2 대신에 중간체 14를 사용하고, 5-메틸-1,3-티아졸-2-카르복스알데히드 대신에 1,3-티아졸-2-카르복스알데히드를 사용하여, 중간체 3과 유사한 방식으로 제조하였다. 반응을 1.5시간 동안 환류하에서 가열하였다.

중간체 16

rel -(2R,4S,5R)-2-(1,2-티아졸-3- 일메틸 )-5-(1,3-티아졸-2-일) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 3 대신에 중간체 15를 사용하여, 중간체 4와 유사한 방식으로 제조하였다. 시클로헥산-에틸 아세테이트 (3:2 (v/v))를 크로마토그래피를 위한 용리액으로서 사용하고, 그 후에 용매를 증발시켜 표제 화합물을 포말로서 제공하였다.

아민 양성자는 관찰되지 않았다.

중간체 17

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-2-(1,2-티아졸-3- 일메틸 )-5-(1,3-티아졸-2-일) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 4 대신에 중간체 16을 사용하여, 중간체 5와 유사한 방식으로 제조하였다. 염수로 세척한 후에, 포화 수성 중탄산나트륨을 교반하면서 25분 동안 첨가하였다. 시클로헥산-에틸 아세테이트 (4:1 (v/v))를 크로마토그래피를 위한 용리액으로서 사용하였다.

(C₃₀H₃₇N₃O₆S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 600

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 600

중간체 18

rel -(2R,4S,5R)-4-( 히드록시메틸 )-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-2-(1,2-티아졸-3-일 메 틸)-5-(1,3-티아졸-2-일) 피롤리딘 -2- 카르복실산 , tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 5 대신에 중간체 17을 사용하고 수성 탄산칼륨 대신에 염화암모늄을 사용하여, 중간체 6과 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₂₉H₃₇N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 572

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 572

중간체 19

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-2-(1,2-티아졸-3-일메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일) 피롤리딘 -2- 카르복실산 , tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 6 대신에 중간체 18을 사용하여, 중간체 7과 유사한 방식으로 제조하였다.

중간체 20

2-아미노-3-(1H- 피라졸 -1-일)프로판산, tert -부틸 에스테르

tert-부틸 아세테이트 (400 mL) 중 2-아미노-3-(1H-피라졸-1-일)프로판산 (10.2 g, 65.9 mmol)의 교반 현탁액에 70％ 과염소산 수용액 (15.7 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 후에 20시간 동안 정치하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석한 후에 포화 수성 중탄산나트륨과 고형 중탄산나트륨의 조합물을 사용하여 중화시켰다. 수성상을 분리하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고 증발시켜 표제 화합물을 오일로서 제공하였다.

(C₁₀H₁₇N₃O₂ + H)⁺의 MS 계산치: 212

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 212

중간체 21

2-[N-(1,3-티아졸-2- 일메틸렌 )아미노]-3-(1H- 피라졸 -1-일)프로판산, tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 5-메틸-1,3-티아졸-2-카르복스알데히드 대신에 1,3-티아졸-2- 카르복스알데히드를 사용하고 중간체 2 대신에 중간체 20을 사용하여, 중간체 3과 유사한 방식으로 제조하였다.

중간체 22

rel -(2R,4S,5R)-2-(1H- 피라졸 -1- 일메틸 )-5-(1,3-티아졸-2-일) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 3 대신에 중간체 21을 사용하여, 중간체 4와 유사한 방식으로 제조하였다. 에틸 아세테이트-시클로헥산 (1:2, 이어서 1:1 (v/v))을 크로마토그래피를 위한 용리액으로서 사용하였다.

(C₁₈H₂₄N₄O₄S + H)⁺의 MS 계산치: 393

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 393

중간체 23

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-2-(1H- 피라졸 -1- 일메틸 )-5-(1,3-티아졸-2-일) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 4 대신에 중간체 22를 사용하여, 중간체 5와 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₃₀H₃₈N₄O₆S + H)⁺의 MS 계산치: 583

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 583

중간체 24

rel -(2R,4S,5R)-4- 히드록시메틸 -1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-2-(1H- 피라 졸-1-일메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 5 대신에 중간체 23을 사용하여 중간체 6과 유사한 방식으로 제조하였다. 시클로헥산-에틸 아세테이트 (구배용매조성법으로 50:1 내지 1:2 (v/v))를 크로마토그래피를 위한 용리액으로서 사용하였다.

(C₂₉H₃₈N₄O₅S + H)⁺의 MS 계산치: 555

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 555

중간체 25

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-2-(1H- 피라 졸-1-일메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 5 대신에 중간체 24를 사용하여, 중간체 7과 유사한 방식으로 제조하였다. 시클로헥산-에틸 아세테이트 (구배용매조성법으로 50:1 내지 3:2 (v/v))를 크로마토그래피를 위한 용리액으로서 사용하였다.

(C₃₀H₄₀N₄O₅S + H)⁺의 MS 계산치: 569

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 569

중간체 26

2-아미노-3-(1,3-티아졸-2-일)프로판산, tert -부틸 에스테르

70％ 수성 과염소산 (1.47 mL)을 tert-부틸 아세테이트 (34 mL) 중 2-아미노-3-(1,3-티아졸-2-일)프로판산 (1.077 g, 6.25 mmol)의 교반 현탁액에 적가하였다. 현탁액을 질소하 실온에서 밤새 교반하였다. 에틸 아세테이트 (100 mL)를 첨가하고 혼합물을 포화 탄산수소나트륨 용액 및 고형 탄산수소나트륨을 사용하여 약 pH 8로 염기성화하였다. 유기 용액을 분리하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물을 무색 오일로서 제공하였다.

중간체 27

2-[[N-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)메틸렌]아미노]-3-(1,3-티아졸-2-일)프로판산, tert-부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 2 대신에 중간체 26을 사용하여, 중간체 3과 유사한 방식으로 제조하였다.

중간체 28

rel -(2R,4S,5R)-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-2- 일메틸 ) 피롤리 딘-2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 3 대신에 중간체 27을 사용하여, 중간체 4와 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₁₉H₂₅N₃O₄S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 424

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 424

중간체 29

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-2- 일메틸 ) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 4 대신에 중간체 28을 사용하여, 중간체 5와 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₃₁H₃₉N₃O₆S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 614

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 614

중간체 30

rel -(2R,4S,5R)-4-( 히드록시메틸 )-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-5-(5- 메 틸-1,3- 티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-2- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산 , tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 5 대신에 중간체 29를 사용하여, 중간체 6과 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₃₀H₃₉N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 586

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 586

중간체 31

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-2- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산 , tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 6 대신에 중간체 30을 사용하여, 중간체 7과 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₃₁H₄₁N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 600

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 600

중간체 32

2-[[N-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)메틸렌]아미노]-3-(1,2-티아졸-3-일)프로판산, tert-부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 2 대신에 중간체 14를 사용하여, 중간체 3과 유사한 방식으로 제조하였다.

중간체 33

rel -(2R,4S,5R)-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1,2-티아졸-3- 일메틸 ) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 3 대신에 중간체 32를 사용하여, 중간체 4와 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₁₉H₂₅N₃O₄S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 424

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 424

중간체 34

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1,2-티아졸-3- 일메틸 ) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 4 대신에 중간체 33을 사용하여, 중간체 5와 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₃₁H₃₉N₃O₆S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 614

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 614

중간체 35

rel -(2R,4S,5R)-4-( 히드록시메틸 )-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 -5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1,2-티아졸-3- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산 , tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 5 대신에 중간체 34를 사용하여, 중간체 6과 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₃₀H₃₉N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 586

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 586

중간체 36

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1,2-티아졸-3- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산 , tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 6 대신에 중간체 35를 사용하여, 중간체 7과 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₃₁H₄₁N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 600

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 600

중간체 37

2-[[N-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)메틸렌]아미노]-3-(1H- 피라졸 -1-일)프로판산, tert-부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 2 대신에 중간체 20을 사용하여, 중간체 3과 유사한 방식으로 제조하였다.

중간체 38

rel -(2R,4S,5R)-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1H- 피라졸 -1- 일메틸 ) 피롤리 딘-2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 3 대신에 중간체 37을 사용하여, 중간체 4와 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₁₉H₂₆N₄O₄S + H)⁺의 MS 계산치: 407

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 407

중간체 39

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 -5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1H-피라졸-1- 일메틸 ) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르, 4- 메틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 4 대신에 중간체 38을 사용하여, 중간체 5와 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₃₁H₄₀N₄O₆S + H)⁺의 MS 계산치: 597

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 597

중간체 40

rel -(2R,4S,5R)-4-( 히드록시메틸 )-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-5-(5- 메 틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1H- 피라졸 -1- 일메틸 ) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 5 대신에 중간체 39를 사용하여, 중간체 6과 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₂₉H₃₈N₄O₅S + H)⁺의 MS 계산치: 569

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 569

중간체 41

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1H- 피라졸 -1- 일메틸 ) 피롤리딘 -2,4-디카르복실산, 2- tert -부틸 에스테르

표제 화합물을 중간체 6 대신에 중간체 40을 사용하여, 중간체 7과 유사한 방식으로 제조하였다.

(C₃₁H₄₂N₄O₅S + H)⁺의 MS 계산치: 583

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 583

실시예 1

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산

디클로로메탄 (3 mL) 중 rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산, tert-부틸 에스테르 (중간체 7, 0.205 g, 0.34 mmol)의 용액을 실온에서 4시간 동안 트리플루오로아세트산 (3 mL)으로 처리하였다. 혼합물을 증발시키고 잔류물을 디에틸 에테르로 분쇄하여 표제 화합물을 백색 고형물로 수득하였다.

(C₂₇H₃₃N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 544

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 544

실시예 2

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산의 거울상이성질체 A

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산 (실시예 1)을, 용리액으로서 0.1％ 트리플루오로아세트산을 함유하는 헵탄-에탄올 (75:25 (v/v))을 사용하는 키랄팩(Chiralpak) AD 컬럼 상에서의 정제용 키랄 HPLC에 의해 분리하 여 최초로 및 두번째로 용리되는 거울상이성질체를 제공하였다. 두번째로 용리되는 거울상이성질체를 디에틸 에테르로 분쇄하여 표제 화합물을 제공하였다.

(C₂₇H₃₃N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 544

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 544

실시예 3

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산

상기 화합물을 중간체 7 대신에 중간체 12를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조하고, 처음에는 시클로헥산-에틸 아세테이트 (구배용매조성법으로 5:2 내지 2:3 (v/v))로 용리한 다음, 추가로 디클로로메탄, 이어서 디클로로메탄-메탄올 (구배용매조성법으로 60:1 내지 19:1)로 용리하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.

(C₂₆H₃₁N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 530

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 530

실시예 4

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,2-티아졸-3- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산

화합물을 트리플루오로아세트산 및 디클로로메탄 중의 중간체 7 대신에 순수한 트리플루오로아세트산 중의 중간체 19를 사용하고, 디에틸 에테르로 분쇄하는 대신에 디클로로메탄으로부터 재증발시켜, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조하였다. 용리액으로서 (A) 포름산 (0.1％)을 함유하는 물 및 (B) 포름산 (0.05％)을 함유하는 아세토니트릴-물 (95/5 (v/v))을 사용하여 2-용매 구배용매조성법으로 C₁₈ 컬럼 상에서의 역상 HPLC에 의해 정제하고, 전자분사 질량 분광법으로 분획을 분석하여 표제 화합물을 제공하였다.

(C₂₆H₃₁N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 530

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 530

산 양성자는 관찰되지 않았다.

실시예 5

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,2-티아졸-3- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산의 거울상이성질체 A

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,2-티아졸-3-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산 (실시예 4)을 용리액으로서 0.1％ 트리플루오로아세트산을 함유하는 헵탄-에탄올 (85/15 (v/v))을 사용하는 키랄팩 AD 컬럼 상에서의 정제용 키랄 HPLC에 의해 분리하여 최초로 및 두번째로 용리되는 거울상이성질체를 제공하였다. 두번째로 용리되는 거울상이성질체를 디클로로메탄에 용해시키고, 탄산수소나트륨 용액으로 세척하고, 건조시키고 (소수성 프릿), 용매를 제거하여 표제 화합물을 제공하였다.

(C₂₆H₃₁N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 530

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 530

산 양성자는 관찰되지 않았다.

실시예 6

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-2-(1H- 피라졸 -1-일메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일) 피롤리딘 -2- 카르복실산

화합물을 중간체 7 대신에 중간체 25를 사용하여 실시예 1과 유사한 방식으로 제조하였다. 처음에는 시클로헥산-에틸 아세테이트 (구배용매조성법으로 50:1 (v/v) 내지 1:9 (v/v))로 용리한 다음 추가로 디클로로메탄-메탄올 (9:1 (v/v))로 용리하는 실리카 겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.

(C₂₆H₃₂N₄O₅S + H)⁺의 MS 계산치: 513

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 513

실시예 7

(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-2-(1H- 피라졸 -1-일 메 틸)-5-(1,3-티아졸-2-일) 피롤리딘 -2- 카르복실산 [rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-2-(1H- 피라졸 -1- 일메틸 )-5-(1,3-티아졸-2-일) 피 롤리딘-2- 카르복실산의 거울상이성질체 A]

별법 A

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-2-(1H-피라졸-1-일메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)피롤리딘-2-카르복실산 (실시예 6)을 용리액으로서 0.1％ 트리플루오로아세트산을 함유하는 헵탄-에탄올 (70:30 (v/v))을 사용하는 수미키랄(Sumichiral) OA4900 컬럼 상에서의 정제용 키랄 HPLC에 의해 분리하여 최초로 및 두번째로 용리되는 거울상이성질체를 제공하였다. 두번째로 용리되는 거울상이성질체를 디클로로메탄에 용해시키고, 물 (x4)로 세척하고, 염수로 세척한 다음 건조시키고 (황산나트륨) 용매를 제거하여 표제 화합물을 제공하였다.

(C₂₆H₃₂N₄O₅S + H)⁺의 MS 계산치: 513

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 513

별법 B

파트 1

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-2-(1H-피라졸-1-일메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)피롤리딘-2-카르복실산, 2-tert-부틸 에스테르 (중간체 25에 기재된 것과 유사한 방식으로 제조됨: 1.95 g)를 용리액으로서 헵탄-이소프로판올 (90:10 (v/v))을 사용하는 키랄팩 AD 컬럼 상에서의 정제용 키랄 HPLC에 의해 분리하였다. 최초로 용리되는 거울상이성질체 (체류 시간 7.25분)를 함유하는 분획을 디클로로메탄에 용해시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액으로 세척하고 디클로로메탄을 증발시켜, 하기 파트 2에서 직접 사용되는 거울상이성질체 A (0.76 g)를 제공하였다. 보다 느리게 용리되는 거울상이성질체 (체류 시간 10분)는 더이상 필요하지 않았다.

키랄 HPLC 분리를 rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-2-(1H-피라졸-1-일메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)피롤리딘-2-카르복실산, 2-tert-부틸 에스테르 (1.55 g)의 또다른 분취물을 사용하여 유사한 방식으로 반복하여 하기 파트 2에서 직접 사용되는 신속하게 용리되는 거울상이성질체 A (0.55 g) 의 추가 뱃치를 수득하였다.

파트 2

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-2-(1H-피라졸-1-일메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)-피롤리딘-2-카르복실산, 2-tert-부틸 에스테르의 거울상이성질체 A의 합한 두 뱃치 (상기 파트 1; 합하여 1.31 g, 2.32 mmol)를 트리플루오로아세트산 (20 mL)에 용해시키고 생성된 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 증발시키면 잔류물이 디클로로메탄과 포화 중탄산나트륨 수용액 사이에 분배되었다. 수성상을 소수성 프릿을 사용하여 제거하고 유기 용액을 증발시켜 검을 수득하였다. 이것을 마개가 있는 플라스크에서 디에틸 에테르에 용해시키고 밤새 서서히 결정화되도록 두었다. 결정을 여과하고, 소량의 디에틸 에테르로 세척하고 진공에서 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다.

(C₂₆H₃₂N₄O₅S + H)⁺의 MS 계산치: 513

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 513

상기 화합물의 절대 입체화학을 X-선 결정학에 의해 측정하면 도시한 바와 같이 (2R,4S,5R)로 나타났다.

실시예 8

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(5- 메틸 -1,3-티 아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-2- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산

화합물을 중간체 7 대신에 중간체 31을 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조하였다. 불순물이 섞인 생성물을 디클로로메탄에 용해시키고 탄산수소나트륨 용액으로 세척하고, 건조시키고 (소수성 프릿), 용매를 제거하였다. 잔류물을 디에틸 에테르로 분쇄하여 표제 화합물을 제공하였다.

(C₂₇H₃₃N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 544

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 544

실시예 9

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1,2-티아졸-3- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산

화합물을 트리플루오로아세트산 및 디클로로메탄 중의 중간체 7 대신에 순수한 트리플루오로아세트산 중의 중간체 36을 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조하였다. 불순물이 섞인 생성물을 용리액으로서 (A) 포름산 (0.1％)을 함유하는 물 및 (B) 포름산 (0.05％)을 함유하는 아세토니트릴-물 (95/5 (v/v))을 사용하여 2-용매 구배용매조성법으로 C₁₈ 컬럼 상에서의 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 전자분사 질량 분광법에 의한 분획의 분석으로 표제 화합물을 제공하였다.

(C₂₇H₃₃N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 544

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 544

산 양성자는 관찰되지 않았다.

실시예 10

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1H- 피라졸 -1- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산

화합물을 중간체 7 대신에 중간체 41을 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으 로 제조하였다. 불순물이 섞인 생성물을 용리액으로서 (A) 포름산 (0.1％)을 함유하는 물 및 (B) 포름산 (0.05％)을 함유하는 아세토니트릴-물 (95/5 (v/v))을 사용하는 2-용매 구배용매조성법으로 C₁₈ 컬럼 상에서의 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 전자분사 질량 분광법에 의한 분획의 분석으로 표제 화합물을 제공하였다.

(C₂₇H₃₄N₄O₅S + H)⁺의 MS 계산치: 527

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 527

산 양성자는 관찰되지 않았다.

실시예 11

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(5- 메틸 -1,3-티아졸-2-일)-2-(1H- 피라졸 -1- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산의 거울상이성질체 A

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1H-피라졸-1-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산 (실시예 10)을 용리액으로서 0.1％ 트리플루오로아세트산을 함유하는 헵탄-에탄올 (80:20 (v/v))을 사용하는 키랄팩 AD 컬럼 상에서의 정제용 키랄 HPLC에 의해 분리하여 최초로 및 두번째로 용리되는 거울상이성질체를 제공하였다. 두번째로 용리되는 거울상이성질체를 디클로로메탄에 용해시키고, 탄산수소나트륨 용액으로 세척하고, 건조시키고 (소수성 프릿), 용매를 제거하여 표제 화합물을 제공하였다.

(C₂₇H₃₄N₄O₅S + H)⁺의 MS 계산치: 527

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 527

산 양성자는 관찰되지 않았다.

실시예 12

rel -(2R,4S,5R)-1-(3- 메톡시 -4- tert - 부틸벤조일 )-4-( 메톡시메틸 )-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4- 일메틸 ) 피롤리딘 -2- 카르복실산의 거울상이성질체 A

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산 (실시예 3에 기재된 것과 유사한 방식으로 제조됨; 0.530 g)을 용리액으로서 0.1％ 트리플루오로아세트산 을 함유하는 헵탄-에탄올 (65:35 (v/v))을 사용하는 수미키랄 OA-4900 컬럼 상에서의 정제용 키랄 HPLC에 의해 분리하여 최초로 및 두번째로 용리되는 거울상이성질체를 제공하였다. 두번째로 용리되는 거울상이성질체가 디클로로메탄과 포화 중탄산나트륨 수용액 사이에 분배되었다. 디클로로메탄 용액을 소수성 프릿을 사용하여 분리하고 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 포말로서 수득하였다.

(C₂₆H₃₁N₃O₅S₂ + H)⁺의 MS 계산치: 530

MS 실측치 (전자분사): (M+H)⁺ = 530

본 발명에 따른 화합물은 임의의 편리한 방법으로 투여용으로 제형화될 수 있고, 따라서 본 발명은 또한 화학식 Ia의 화합물, 또는 그의 생리학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 1종 이상의 생리학적으로 허용되는 희석제 또는 담체와의 혼합물로 포함하는, 치료에 사용하기 위한 제약 조성물을 그의 범주에 포함한다.

본 발명의 화합물은 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 경구, 국소성, 경피 또는 경점막 투여를 비롯한 다양한 경로로 투여될 수 있다. 전신성 투여의 경우에는, 경구 투여가 바람직하다. 예를 들어 경구 투여의 경우에는, 화합물은 통상의 경구 투여 형태, 예컨대 캡슐, 정제 및 액상 제제, 예컨대 시럽, 엘릭시르 및 농축 점적으로 제형화될 수 있다.

별법으로, 주사 (비경구 투여), 예를 들면 근육내, 정맥내, 복강내 및 피하 주사가 사용될 수 있다. 주사의 경우, 본 발명의 화합물을 액상 용액, 바람직하게는 생리학적으로 적합한 완충액 또는 용액, 예컨대 생리 식염수, 행크스액(Hank's solution) 또는 링거액(Ringer's solution) 중의 액상 용액으로 제형화될 수 있다. 또한, 화합물은 고형으로 제형화되고 사용하기 직전에 재용해 또는 현탁될 수 있다. 동결건조된 형태 또한 제조될 수 있다.

전신성 투여는 또한 경점막 또는 경피 수단에 의한 것일 수 있다. 경점막 또는 경피 투여의 경우에는, 투과할 장애물에 대해 적합한 침투제가 제형 중에 사용된다. 이러한 침투제는 일반적으로 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 경점막 투여의 경우에 담즙산염 및 푸시딘산 유도체를 포함한다. 또한, 디터전트가 투과를 용이하게 하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 경점막 투여는 비강 분무액, 직장 좌약 또는 질 좌약을 통한 것일 수 있다.

국소성 투여의 경우, 본 발명의 화합물은 당업계에 일반적으로 공지된 것처럼, 연고, 고약, 젤 또는 크림으로 제형화될 수 있다.

투여될 다양한 화합물의 양은 화합물 (IC₅₀) 효능, (EC₅₀) 효능, 및 (화합물의) 생물학적 반감기, 환자의 연령, 몸집 및 체중, 및 환자와 관련있는 질환 또는 장애와 같은 인자들을 고려하여 표준 절차에 의해 결정될 수 있다. 고려되는 상기 인자와 그외 인자의 중요성은 당업자에게 공지되어 있다.

투여되는 양은 또한 투여 경로 및 경구 생체이용성의 정도에 따라 다르다. 예를 들어 낮은 경구 생체이용성을 갖는 화합물의 경우에는, 비교적 다량의 투여량 이 투여되어야 할 것이다. 경구 투여가 본 발명의 화합물의 바람직한 투여 방법이다.

바람직하게는 조성물은 단위 투여 형태이다. 예를 들어 경구 적용의 경우에는 정제 또는 캡슐이 투여될 수 있고, 비강 적용의 경우에는 계량된 에어로졸 투여량이 투여될 수 있고, 경피 적용의 경우에는 국소성 제형 또는 패치가 투여될 수 있으며, 경점막 전달의 경우에는 협측 패치가 투여될 수 있다. 각각의 경우에, 환자가 단일 용량을 투여할 수 있는 용량이다.

경구 투여를 위한 투여 단위는 각각 화학식 Ia의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 (유리 염기로서 계산됨)을 적당하게는 0.01 내지 500 mg/kg, 바람직하게는 0.1 내지 50 mg/kg 함유한다. 비경구, 비강, 경구 흡입, 경점막 또는 경피 경로를 위한 1일 투여량은 화학식 Ia의 화합물을 0.01 내지 100 mg/kg 함유하는 것이 적합하다. 국소성 제형은 화학식 Ia의 화합물을 0.01 내지 5.0％ 함유하는 것이 적합하다. 활성 성분은 당업자에게 자명한 바와 같이, 목적하는 활성을 나타내기에 충분하게 1일 1 내지 6회, 바람직하게는 1회 투여될 수 있다.

경구로 주어졌을 때 활성인 화학식 Ia의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염의 조성물은 시럽, 정제, 캡슐 및 로젠지제로서 제형화될 수 있다. 시럽 제형은 일반적으로 향미제 또는 착색제와 함께 액체 담체, 예를 들면 에탄올, 땅콩유, 올리브유, 글리세린 또는 물 중의 화합물 또는 염의 현탁액 또는 용액으로 이루어질 것이다. 조성물이 정제 형태일 경우에는, 고형 제형을 제조하기 위해 통상 사용되는 임의의 제약학적 담체가 사용될 수 있다. 이러한 담체의 예로는 마그네슘 스테 아레이트, 테라 알바(terra alba), 활석, 젤라틴, 아카시아, 스테아르산, 녹말, 락토스 및 수크로스가 포함된다. 조성물이 캡슐 형태일 경우에는, 예를 들면 경질 젤라틴 캡슐 쉘(shell)에 전술한 담체를 사용하는 임의의 통상적인 캡슐화가 적합하다. 조성물이 연질 젤라틴 쉘 캡슐 형태일 경우에는 분산액 또는 현탁액을 제조하기 위해 통상 사용되는 임의의 제약학적 담체, 예를 들면 수성 검, 셀룰로스, 실리케이트 또는 오일이 고려될 수 있고, 이들은 연질 젤라틴 캡슐 쉘에 도입된다.

전형적인 비경구 조성물은, 임의로 비경구용으로 허용되는 오일, 예를 들면 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐피롤리돈, 레시틴, 낙화생유 또는 참기름을 함유하는 멸균된 수성 또는 비수성 담체 중의 화합물 또는 염의 용액 또는 현탁액으로 이루어진다.

흡입을 위한 전형적인 조성물은 건조 분말로서 투여될 수 있는 용액, 현탁액 또는 에멀젼 형태 또는 통상의 비-CFC 추진체, 예컨대 1,1,1,2-테트라플루오로에탄 또는 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판을 사용하는 에어로졸 형태이다.

전형적인 좌약 제형은 이러한 방식으로 투여되었을 때 활성인 화학식 Ia의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 결합제 및/또는 윤활제, 예를 들면 중합체 글리콜, 젤라틴, 코코아 버터 또는 다른 저온 용융 식물성 왁스 또는 지방, 또는 이들의 합성 유사체와 함께 포함한다.

전형적인 피부 및 경피 제형은 통상의 수성 또는 비수성 비히클, 예를 들면 크림, 연고, 로션 또는 페이스트를 포함하거나 약용 반창고, 패치 또는 막의 형태이다.

본 발명의 화합물은 본 발명에 따라 투여되었을 때 용인되지 않는 독성 효과가 예상되지 않는다.

검정법

본 발명의 화학 물질이 NS5B 야생형 HCV 폴리머라제 활성 유전자형 1a 및 유전자형 1b를 억제하는 능력은 예를 들면 하기 시험관내 검정법을 사용하여 입증될 수 있다.

HCV RNA-의존성 RNA 폴리머라제 활성 억제제의 시험관내 검출

[³³P]-GMP를 RNA로 도입한 다음 비오틴 표지된 RNA 폴리머를 SPA 비드를 함유하는 스트렙타비딘에 흡수시켰다. 폴리rC에 혼성화된 비오틴처리된 13mer-올리고G로 이루어진 합성 템플레이트를 호모폴리머 기질로서 사용하였다.

a) 유전자형 1a C-말단절단된(truncated) ( 델타21 ) 효소

HCV RNA 폴리머라제 [대장균(E. coli)에서 발현되고 동종으로 정제된, C-말단 21개 아미노산이 결실되고 C-말단 6His-부착된 재조합 NS5B (문헌 [Ferrari et al. J. Virol. 73(2), 1999. 1649. 'Characterization of soluble hepatitis C virus RNA-dependent RNA polymerase expressed in Escherichia coli'])]를 25 nM의 최종 농도까지 첨가하였다. 유전자형 1a의 폴리머라제는 180번 위치에서 발린이 이소류신으로 서열이 변화된 H77 균주 (문헌 [Yanagi, M., Purcell, R. H., Emerson, S. U. ＆ Bukh, J. (1997), Proceedings of the National Academy of Sciences, USA 94, 8738-8743])로부터의 것이었다.

반응 조건은 25 nM 효소, 1.5 ㎍/ml 올리고-rG13/폴리-rC 및 0.5 μM GTP 중 0.2 μCi α-³³P-GTP (20 Ci/mMol), 20 mM 트리스(Tris) pH 7.5, 23 mM NaCl, 3 mM DTT, 5 mM MgCl₂, 1 mM MnCl₂이었다.

효소를 20 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 25 mM NaCl 및 3 mM DTT 중에서 500 nM의 농도까지 희석시켰다.

4배 농축된 검정 완충제 혼합물을 1 M 트리스-HCl, pH 7.5 (1 mL), 5 M NaCl (0.25 mL), 1 M DTT (0.12 mL) 및 물 (8.63 mL) (총 10 mL)을 사용하여 제조하였다.

2배 농축된 제1 시약을 4배 농축된 검정 완충제 혼합물 (5 μL), 40 u/μL RNasin (0.1 μL), 20 ㎍/mL 폴리rC/비오틴처리된-올리고rG (1.6 μL), 500 nM 효소 (1 μL) 및 물 (2.3 μL) (총 10 μL/웰)을 사용하여 제조하였다.

2배 농축된 제2 시약을 1 M MgCl₂ (0.1 μL), 1 M MnCl₂ (0.02 μL), 25 μM GTP (0.4 μL), α-[³³P]-GTP (10 μCi/μL, 0.02 μL) 및 물 (9.5 μL) (총 10 μL/웰)을 사용하여 제조하였다.

검정법을 화합물 (100％ DMSO 중 1 μL), 제1 시약 (10 μL) 및 제2 시약 (10 μL) (총 21 μL)을 사용하여 시작하였다. 반응을 U자형-바닥 백색 96-웰 플레이트에서 실시하였다. 반응물을 플레이트-진탕기에서 혼합하고, 효소를 첨가한 후에, 1시간 동안 22℃에서 인큐베이션하였다. 이 후에, 0.1 M EDTA를 함유하는 PBS 중의 1.5 mg/ml 스트렙타비딘 SPA 비드 (아머샴(Amersham)) 60 μL를 첨가함으로써 반응을 중지시켰다. 비드를 반응 혼합물과 함께 1시간 동안 22℃에서 인큐베이션하고, 그 후에 PBS 중 0.1 M EDTA 100 μL를 첨가하였다. 플레이트를 실링하고, 혼합하고 원심분리하고, 트리룩스(Trilux; 왈락(Wallac)) 또는 탑카운트 (Topcount; 팩커드(Packard)) 섬광계수기로 계수함으로써 도입된 방사능을 측정하였다.

효소가 없을 때의 백그라운드 수준을 뺀 후에, 화합물 부재하의 방사능과 비교하여 화합물의 존재하에 도입된 방사능의 양에 있어서의 감소를 억제 수준의 척도로 간주하였다. 화합물의 농축물 10개를 3배 또는 5배 희석하여 시험하였다. 분당 계수로부터, 시험한 최고 농도에서의 억제 백분율 또는 화합물의 IC₅₀을 그라피트(GraFit) 3, 그라피트 4 또는 그라피트 5 (에리타쿠스 소프트웨어 리미티드(Erithacus Software Ltd.)) 소프트웨어 팩키지 또는 XLFit 소프트웨어 (IDBS)를 기반으로 하는 엑셀의 데이터 평가 매크로를 사용하여 계산하였다.

b) 유전자형 1b 전장 효소

반응 조건은 0.5 μM [³³P]-GTP (20 Ci/mMol), 1 mM 디티오트레이톨, 20 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 20 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 1.6 ㎍/ml 폴리C/0.256 μM 비오틴처리된 올리고G13, 10％ 글리세롤, 0.01％ NP-40, 0.2 u/μL RNasin 및 50 mM NaCl이었다.

HCV RNA 폴리머라제 (바큘로바이러스에서 발현되고 동종으로 정제된, 재조합 전장 NS5B (문헌 [Lohmann et al, J. Virol. 71 (11), 1997, 8416, 'Biochemical properties of hepatitis C virus NS5B RNA-dependent RNA polymerase and identification of amino acid sequence motifs essential for enzymatic activity']))를 4 nM의 최종 농도까지 첨가하였다.

5배 농축된 검정 완충제 혼합물을 1 M MnCl₂ (0.25 mL), 글리세롤 (2.5 mL), 10％ NP-40 (0.025 mL) 및 물 (7.225 mL) (총 10 mL)을 사용하여 제조하였다.

2배 농축된 효소 완충제는 1 M 트리스-HCl, pH 7.5 (0.4 mL), 5 M NaCl (0.2 mL), 1 M MgCl₂ (0.4 mL), 글리세롤 (1 mL), 10％ NP-40 (10 μL), 1 M DTT (20 μL) 및 물 (7.97 mL) (총 10 mL)을 함유하였다.

기질 혼합물을 5배 농축된 검정 완충제 혼합물 (4 μL), [³³P]-GTP (10 μCi/μL, 0.02 μL), 25 μM GTP (0.4 μL), 40 u/μL RNasin (0.1 μL), 20 μg/mL 폴리rC/비오틴처리된-올리고rG (1.6 μL) 및 물 (3.94 μL) (총 10 μL)을 사용하여 제조하였다.

효소 혼합물을, 1 mg/ml 전장 NS5B 폴리머라제 (1.5 μL)를 2배 농축된 효소 완충제 2.81 mL에 첨가함으로써 제조하였다.

검정법을 화합물 (1 μL), 기질 혼합물 (10 μL) 및 효소 혼합물 (마지막으로 첨가하여 반응을 개시함) (10 μL) (총 21 μL)을 사용하여 시작하였다.

반응을 U자형-바닥 백색 96-웰 플레이트에서 실시하였다. 반응물을 플레이트-진탕기에서 혼합하고, 효소를 첨가한 후에, 1시간 동안 22℃에서 인큐베이션하 였다. 이 후에, 0.1 M EDTA 중의 1.875 mg/ml 스트렙타비딘 SPA 비드 40 μL를 첨가함으로써 반응을 중지시켰다. 비드를 반응 혼합물과 함께 1시간 동안 22℃에서 인큐베이션하고, 그 후에 PBS 중 0.1 M EDTA 120 μL를 첨가하였다. 플레이트를 실링하고, 혼합하고 원심분리하고, 트리룩스(왈락) 또는 탑카운트 (팩커드) 섬광계수기로 계수함으로써 도입된 방사능을 측정하였다.

효소가 없을 때의 백그라운드 수준을 뺀 후에, 화합물 부재하의 방사능과 비교하여 화합물의 존재하에 도입된 방사능의 양에 있어서의 감소를 억제 수준의 척도로 간주하였다. 화합물의 농축물 10개를 3배 또는 5배 희석하여 시험하였다. 계수로부터, 시험한 최고 농도에서의 억제 백분율 또는 화합물의 IC₅₀을 그라피트 3, 그라피트 4 또는 그라피트 5 (에리타쿠스 소프트웨어 리미티드) 소프트웨어 팩키지 또는 XLFit 소프트웨어 (IDBS)를 기반으로 하는 엑셀의 데이터 평가 매크로를 사용하여 계산하였다.

본 발명의 화합물이 NS5B 야생형 HCV 폴리머라제 활성 유전자형 1a 및 유전자형 1b를 억제하는 효능은 예를 들면 하기 세포 기반 검정법을 사용하여 입증될 수 있다.

레플리콘 ELISA 세포 기반 검정법

방법

10％ FCS를 함유하는 배지 100 μL를 투명하고, 편평한 바닥의 96-웰 마이크로플레이트의 최상 열의 웰을 제외한 각각의 웰에 첨가하였다. 시험 화합물을 DMSO 중의 40 mM 저장 용액으로부터 검정 배지에서 2배로 최종적으로 필요한 출발 농도로 희석시켰다. 출발 희석액 200 μL를 최상 열의 2개의 웰 각각에 도입하고, 웰에서 철저히 혼합하면서 분취물 100 μL를 연속적으로 전달함으로써 2배 희석물을 플레이트에 흘려내리고, 최종 100 μL를 버렸다. 아래 2열은 화합물 희석액을 위해 사용되지 않았다. 거의 포화 상태의 Huh-7 HCV 레플리콘 세포 단층을 성장 플라스크로부터 베르센-트립신 용액을 사용하여 제거하고 세포를 검정 배지에 2 x 10⁵개 세포/mL (서브-라인 5-15; 유전자형 1b; 문헌 [Lohmann, V., Korner, F., Koch, J-O., Herian, U., Thielmann, L. and Bartenschlager, R., 1999, Science, 285, pp 110-113]) 또는 3 x 10⁵개 세포/mL (유전자형 1a; 문헌 [Gu, B., Gates, A. T., Isken O., Behrens, S. E. and Sarisky, R. T., J. Virol., 2003, 77, 5352-5359])로 재현탁시켰다. 세포 현탁액 100 μL를 모든 웰에 첨가하고 플레이트를 37℃에서 72시간 동안 5％ CO₂ 대기에서 인큐베이션하였다.

인큐베이션 후에, 검정 배지를 플레이트로부터 흡인 제거하였다. 세포 시트를 인산 완충 식염수 (PBS)에 부드럽게 침지함으로써 세척하고, 그 후에 흡인하고 아세톤:메탄올 (1:1)로 5분 동안 고정하였다. PBS로 다시 세척한 후에, ELISA 희석액 (PBS + 0.05 v/v％ 트윈(Tween) 20 + 2 w/v％ 탈지분유) 100 μL를 모든 웰에 첨가하고 플레이트를 환상 플랫폼에서 30분 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 희석액을 제거한 후에, 각각의 웰에 항-HCV 특이적 뮤린 모노클로날 항체 (비로스타트(Virostat) #1872 또는 #1877)의 1/200 희석액 50 μL를 주입하며, 이때 음성 대 조군으로 기능하는 희석액만을 주입한 화합물-무함유 대조군 열 중에서 한 열의 웰은 제외하였다. 플레이트를 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하고 PBS/0.05％ 트윈 20으로 3회 세척한 후에, 1/1000로 희석된, 호스래디쉬 퍼옥시다제 콘쥬게이트 항-마우스 토끼 폴리클로날 혈청 (다코(Dako) #P0260) 50 μL를 모든 웰에 첨가하였다. 플레이트를 추가로 1시간 동안 인큐베이션하고, 항체를 제거하고 세포 시트를 PBS/트윈으로 5회 세척하고 블롯팅 건조하였다. 검정법을 우레아/시트레이트 완충제 (시그마패스트(SigmaFast), 시그마 #P-9187) 중의 오르토-페닐렌디아민/퍼옥시다제 기질 50 μL를 각각의 웰에 첨가하여 진행하고, 15분 이내의 시간 동안 색이 나타나도록 두었다. 웰마다 2 M 황산 25 μL를 첨가함으로서 반응을 중지하고 플레이트를 플루오스타 옵티마(Fluostar Optima) 분광광도계 490 nm에서 판독하였다.

기질 용액을 제거하고 플레이트를 수돗물로 세척하고, 블롯팅 건조시키고 세포를 수중 5％ 카르볼 푹신(carbol fuchsin)으로 30분 동안 염색하였다. 염색약을 버리고 세포 시트를 세척하고, 건조시키고 현미경으로 검사하여 세포독성을 평가하였다.

데이터 분석

1차 및 2차 항체를 둘다 주입한 모든 화합물-무함유 웰로부터의 흡광도 값을 평균하여 양성 대조군 값을 얻었다. 1차 항체를 주입하지 않은 화합물-무함유 웰로부터의 평균 흡광도 값을 사용하여 음성 (백그라운드) 대조군 값을 제공하였다. 각 화합물 농도에서 웰 2개로부터의 판독값을 평균하고, 모든 값으로부터 평균 백그라운드를 뺀 후에, 양성 대조군 시그널의 백분율로 표시하였다. 약물의 존재하 에서 ELISA에 의해 검출된 발현 단백질의 정량화되고 특이적인 감소를 레플리콘 억제의 척도로서 사용할 수 있었다. 그라피트 소프트웨어 (에리타쿠스 소프트웨어 리미티드)를 사용하여 화합물 농도에 대한 억제 백분율의 곡선을 플롯팅하고 화합물의 50％ 억제 농도 (IC₅₀)를 유추하였다.

결과

화합물	델타21 1a 효소 억제 검정법에서의 IC₅₀ (μM)	전장 1b 효소 억제 검정법에서의 IC₅₀(μM)	1a 레플리콘 세포-기반 검정법에서의 IC₅₀ (μM)	1b 레플리콘 세포-기반 검정법에서의 IC₅₀ (μM)
실시예 1	*	#	+	@
실시예 2	*	#	+	@
실시예 3	*	#	+	@
실시예 4	*	#	+	@
실시예 5	*	#	+	@
실시예 6	*	#	+	@
실시예 7	*	#	+	@
실시예 8	*	#	+	@@
실시예 9	*	#	+	@
실시예 10	*	#	+	@
실시예 11	*	#	+	@
실시예 12	*	#	+	@
화합물 A	***	###	++	@@
화합물 B	***	##	++	@@
화합물 C	***	###	++	@@¹
화합물 D	**	##	++	@@
화합물 E	***	##	+++	@@
1 이 화합물은 5-15 세포주에서 시험하지 않았다. 대신 또다른 한 유전자를 함유하는 11-7 세포주 (NS2-5B)를 이 검정법에서 사용하여 비교용 결과를 제공하였다 (문헌 [Lohmann, V. et al., 1999, Science, 285, pp 110-113]).

활성 범위

	유전자형 1a		유전자형 1b
효소	*	<0.75 μM	#	<0.20 μM
	**	0.75-1.00 μM	##	0.20-0.50 μM
	***	>1.00 μM	###	>0.50 μM
레플리콘 세포-기반	+	<10.00 μM	@	<0.15 μM
	++	10.00-100 μM	@@	0.15-10.00 μM
	+++	>100 μM	@@@	>10.00 μM

화합물 A는 WO2004/037818호의 실시예 11에 기재된 라세미체 화합물; rel- (2S,4S,5R)-2-이소부틸-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-메톡시메틸-5-(1,3-티아졸-2-일)피롤리딘-2-카르복실산에 해당한다.

화합물 B는 WO2004/037818호의 실시예 15에 기재된 거울상이성질체 화합물; (2S,4S,5R)-2-이소부틸-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-메톡시메틸-5-(1,3-티아졸-2-일)피롤리딘-2-카르복실산에 해당한다.

화합물 C는 WO2004/037818호의 실시예 24에 기재된 라세미체 화합물; rel-(2S,4S,5R)-2-이소부틸-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-메톡시메틸-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)피롤리딘-2-카르복실산에 해당한다.

화합물 D는 WO2004/037818호의 실시예 25에 기재된 거울상이성질체 화합물; rel-(2S,4S,5R)-2-이소부틸-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-메톡시메틸-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)피롤리딘-2-카르복실산의 거울상이성질체 A에 해당한다.

화합물 E는 WO2004/037818호의 실시예 33에 기재된 라세미체 화합물; rel-(2R,4S,5R)-2-벤질-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-메톡시메틸-5-(1,3-티아졸-2-일)-피롤리딘-2-카르복실산에 해당한다.

화합물 A, B, C, D 및 E는 WO2004/037818호에 기재된 방법에 따라 제조될 수 있다.

화합물 A 내지 E의 구조는 명확하게 하기 도시되어 있다.

시험한 본 발명의 화합물은 HCV의 1a 및 1b 유전자형 둘다에 대한 효소 및 세포-기반 검정법에서 IC₅₀ 값으로 알 수 있는 것처럼, 화합물 A 내지 E와 비교하여 놀라울 정도로 우수한 유전자형-1a/1b 프로파일을 입증하였다. 따라서, 본 발명의 화합물은 HCV의 치료 및 예방에 있어서 매우 강력한 치료적 이점을 갖는다.

본 발명에 따른 제약 조성물은 또한 다른 치료제, 예를 들면 면역요법제 (예를 들면, 인터페론), 치료용 백신, 항섬유화제, 항염증제, 예컨대 코르티코스테로이드 또는 NSAID, 기관지확장제, 예컨대 베타-2 아드레날린성 효능제 및 크산틴 (예를 들면, 테오필린), 점액용해제, 항무스카린제, 항류코트리엔제, 세포 부착의 억제제 (예를 들면, ICAM 길항제), 항산화제 (예를 들면, N-아세틸시스테인), 사이 토킨 효능제, 사이토킨 길항제, 폐 표면활성제 및/또는 항미생물제 및 항바이러스제 (예를 들면, 리바비린 및 아만티딘)와 조합하여 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 유전자 치환 요법과 병용하여 사용될 수 있다.

따라서 본 발명은 추가의 측면으로, 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 생리학적으로 허용되는 염 또는 용매화물로부터 선택된 1종 이상의 화학 물질을 1종 이상의 다른 치료 활성제와 함께 포함하는 조합물을 제공한다.

상기 언급된 조합물은 제약학적 제제 형태로 사용하도록 편리하게 제공될 수 있고, 따라서 상기 정의된 조합물을 1종 이상의 제약상 허용되는 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약학적 제제는 본 발명의 추가의 측면을 나타낸다.

이러한 조합물의 개별 성분들은 별개의 또는 조합된 제약학적 제제로 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다. 공지된 치료제의 적절한 투여량은 당업자가 잘 알 것이다.

본 명세서에 인용된, 특허 및 특허 출원을 포함하나, 이들로 한정되지는 않는 모든 공개문헌은 각각의 개별 공개문헌이 전체가 상술된 것처럼 참조로 포함되도록 구체적으로 및 개별적으로 언급된 것과 같이 본원에 참조로 포함된다.

Claims

하기 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르로부터 선택되는 1종 이상의 화학 물질.

<화학식 Ia>

식 중,

A는 히드록시를 나타내고,

D는 4-tert-부틸-3-메톡시페닐을 나타내고,

E는 1,3-티아졸-2-일 또는 5-메틸-1,3-티아졸-2-일을 나타내고,

G는 메톡시메틸을 나타내고,

J는 1,3-티아졸-2-일메틸, 1,3-티아졸-4-일메틸, 1,2-티아졸-3-일메틸 또는 1H-피라졸-1-일메틸을 나타내되,

단, A가 에스테르화되어 -OR (여기서, R은 직쇄 또는 분지쇄 알킬, 아랄킬, 아릴옥시알킬 또는 아릴로부터 선택됨)을 형성하는 경우에는 R은 tert-부틸이 아니다.
rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(5-메틸- 1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산;

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-4-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산;

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)-2-(1,2-티아졸-3-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산;

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-2-(1H-피라졸-1-일메틸)-5-(1,3-티아졸-2-일)피롤리딘-2-카르복실산;

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1,3-티아졸-2-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산;

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1,2-티아졸-3-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산; 및

rel-(2R,4S,5R)-1-(3-메톡시-4-tert-부틸벤조일)-4-(메톡시메틸)-5-(5-메틸-1,3-티아졸-2-일)-2-(1H-피라졸-1-일메틸)피롤리딘-2-카르복실산

으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르, 및 각각의 거울상이성질체로부터 선택되는 1종 이상의 화학 물질.
제1항에 정의된 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르로부터 선택되는 1종 이상의 화학 물질을 유효량으로, 바이러스 감염의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에 투여하는 것을 포함하는 바이러스 감염의 치료 또는 예방 방 법.
제3항에 있어서, 바이러스 감염이 HCV에 의한 것인 방법.
제3항에 있어서, 화학 물질이 경구 투여 형태로 투여되는 방법.
의학적 치료에 사용하기 위한, 하기 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르로부터 선택되는 1종 이상의 화학 물질.

<화학식 Ia>

식 중,

A는 히드록시를 나타내고,

D는 4-tert-부틸-3-메톡시페닐을 나타내고,

E는 1,3-티아졸-2-일 또는 5-메틸-1,3-티아졸-2-일을 나타내고,

G는 메톡시메틸을 나타내고,

J는 1,3-티아졸-2-일메틸, 1,3-티아졸-4-일메틸, 1,2-티아졸-3-일메틸 또는 1H-피라졸-1-일메틸을 나타내되,

단, A가 에스테르화되어 -OR (여기서, R은 직쇄 또는 분지쇄 알킬, 아랄킬, 아릴옥시알킬 또는 아릴로부터 선택됨)을 형성하는 경우에는 R은 tert-부틸이 아니다.
제6항에 있어서, 의학적 치료가 바이러스 감염의 치료인 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르로부터 선택되는 1종 이상의 화학 물질.
제7항에 있어서, 바이러스 감염이 HCV에 의한 것인 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르로부터 선택되는 1종 이상의 화학 물질.
바이러스 감염 치료용 의약의 제조에 있어서 하기 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르로부터 선택되는 1종 이상의 화학 물질의 용도.

<화학식 Ia>

식 중,

A는 히드록시를 나타내고,

D는 4-tert-부틸-3-메톡시페닐을 나타내고,

E는 1,3-티아졸-2-일 또는 5-메틸-1,3-티아졸-2-일을 나타내고,

G는 메톡시메틸을 나타내고,

J는 1,3-티아졸-2-일메틸, 1,3-티아졸-4-일메틸, 1,2-티아졸-3-일메틸 또는 1H-피라졸-1-일메틸을 나타내되,

단, A가 에스테르화되어 -OR (여기서, R은 직쇄 또는 분지쇄 알킬, 아랄킬, 아릴옥시알킬 또는 아릴로부터 선택됨)을 형성하는 경우에는 R은 tert-부틸이 아니다.
제9항에 있어서, 바이러스 감염이 HCV에 의한 것인 용도.
제1항에 정의된 화학식 Ia의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 에스테르로부터 선택되는 1종 이상의 화학 물질을 1종 이상의 제약상 허용되는 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약학적 제제.
하기 화학식 II의 화합물의 탈보호를 포함하는, 제1항에 정의된 화학식 Ia의 화합물의 제조 방법.

<화학식 II>

식 중,

A'는 보호된 히드록시기, 예를 들면 알콕시, 벤질옥시 또는 실릴옥시이고,

D는 4-tert-부틸-3-메톡시페닐이고,

E는 1,3-티아졸-2-일 또는 5-메틸-1,3-티아졸-2-일을 나타내고,

G는 메톡시메틸을 나타내고,

J는 1,3-티아졸-2-일메틸, 1,3-티아졸-4-일메틸, 1,2-티아졸-3-일메틸 또는 1H-피라졸-1-일메틸을 나타낸다.