KR20060025519A

KR20060025519A - 면역원 부착반응 및 그의 제조 방법 및 사용 방법

Info

Publication number: KR20060025519A
Application number: KR1020057015148A
Authority: KR
Inventors: 피터 내쉬; 브래들리 엠. 미트니스
Original assignee: 피터 내쉬; 브래들리 엠. 미트니스
Priority date: 2003-02-19
Filing date: 2004-02-17
Publication date: 2006-03-21
Also published as: US10407494B2; EP1594543B1; US20170362308A1; US20040161427A1; BRPI0407612A; WO2004073393A2; WO2004073393A3; EP1594543A4; EP1594543A2; AU2004212980B2; MXPA05008800A; JP2006519230A; CA2516087C; DK1594543T3; NZ541872A; HK1087949A1; CA2516087A1; WO2004073393A8; AU2004212980A1; US9701737B2

Abstract

가금류 알 항체 형태의 미생물 부착 억제제와 더불어 그의 제조방법 및 그의 사용방법이 기재되어 있다. 상기 억제제는 숙주 동물 및 사람의 호흡기관에서 콜로니-형성 면역원의 부착을 실질적으로 방지하는 역할을 한다. 상기 억제제는 새의 암컷을 면역원으로 접종시킨 다음 상기 면역원에 대한 항체를 함유하는 알을 수집하고 그 난황 및 알부민을 알의 껍질로 부터 분리하는 것에 의해 제조한다. 난황 및 알부민 내용물은 직접적으로 또는 공기중에 연행된 내용물을 도입하는 것에 의해 동물이나 사람에게 투여된다.

미생물 부착 억제제, 콜로니-형성 면역원, 난황, 알부민, 호흡기 질환

Description

면역원 부착반응 및 그의 제조 방법 및 사용 방법{Immunogen adherence and method of making and using same}

본 발명은 주요 식용 동물, 고가 비식용 동물, 동물학적 동물, 친구 동물, 실험용 동물 또는 인간을 비롯한 동물의 점막에 면역원이 부착되는 것을 억제함으로써 호흡기 질환 복합증에서 콜로니-형성 질병 유발 면역원의 접착 또는 부착을 실질적으로 방지하는 가금류 알 항체 형태의 미생물 부착 억제제, 이러한 부착 억제제의 제조 방법 및 이러한 억제제를 사용하는 방법에 관한 것이다.

미생물 집단은 동물의 호흡기관에서 아주 복합한 작용을 한다. 이들 동물은 일례로 들자면 젖소, 사육우, 돼지 그리고 닭과 칠면조와 같은 조류일 수 있다. 동물 군에 따라서 기관이 다양할 수 있지만, 이들은 기본적으로 파스토렐라애(Pasteurellae), 만히에마애(Mannhiemae) 및 해모필루스(Haemophilus) 군과 같은 세균, 미코플라스마(Mycoplasma) 및 소의 합포체성 바이러스(bovine respiratory syncytial virsu: BRSV), 소의 바이러스성 설사(BVD), 파라인플루엔자(PI₃), 전염성 소의 리노트로체이투스(IBR), 돼지 인플루엔자(H₁N₁, H₃N₂), 진균 및 기생충 및 이들의 조합과 같은 호흡기 군의 바이러스이다. 이들 생물은 건강한 동물의 하부 호흡 기관에 존재할 수 있는 면역체계가 약해졌을 때 나타나는 호흡기 병원체로서 구성된다. 파스토렐라애(Pasteurellae) 및 다소간의 해모필루스(Haemophilus) 및 미코플라스마(Mycoplasma)는 비인두(nasopharynx)의 내생 주사후 하부 호흡기관의 침습의 결과에 의해 소에서 호흡기 복합 감염증을 유발한다. 젖소 또는 사육우에서, 운송, 이유식, 바이러스 감염, 악천후, 기후의 변화, 축사 이동, 영양부족, 및 과밀화와 같은 다양한 스트레스 유발 환경은 면역계의 성능 및 동물의 물리적 및 면역학적 방어를 손상시킬 수 있다. 이로 인하여 다수의 미생물이 비인두 영역으로 부터 시작해서 폐 내부의 하부 호흡기관까지 이동할 수 있다. 이에 의해 폐 호흡기 복합감염증을 초래하며, 이것은 소의 선적 복합 발열증을 포함한다. 동물간의 전염은 공기중 방울이나 식품 또는 물 오염에 의한 것이다. 일단 미생물이 호흡하는 동안 비인두 영역에 들어오면, 그 에어로졸이 세균을 하부 호흡기관으로 전달된다. 이에 의해 미생물이 기관지와 폐포세포에 부착되어 증식하여 폐렴을 유발한다. 폐 감염은 아무런 임상적 증후없이 병반을 초래하지만 평균 1일 중량증가를 감소시킨다. 동물은 음식을 먹지 않지 않을 수 있고, 아주 급속하게 아파져서 수시간내에 치사할 수 있다. 사망률이 아주 높을 수 있고 또 일단 1마리 동물이 아프게되면 나머지 동물도 감염되기 쉽다. 이것은 사육에 있어서 주요 걱정 거리이다. 돼지 무리 및 닭과 칠면조와 같은 조류에서도 유사한 발병이 생길 수 있다. 현재의 생 백신은 이러한 복합 감염증으로부터 동물을 보호하는데 있어 제한적으로 성공하였다. 이것은 일부는 비인두 영역에서 면역 보호의 부족에 기인한다. 호흡기 바이러스 군이 동물을 약하게하고 숙주의 면역학적 반응을 감소시키지만, 하부 호흡기관을 침입하 여 기관지폐렴(BRD)을 유발하여 동물의 질병과 치사를 유발하는 것은 세균 균주(통상 만히에마 헤몰리티카(Mannhiema hemolytica) 또는 파스토렐라 물토시다(Pasteurella multocida) 이다. 소의 선적 발열 폐렴 및 풍토성 폐렴에서, 양쪽 질환에서 최종적인 공통분모는 세균성 물질이다. 소의 호흡기 질환(BRD)은 오늘날 가축사육장에서 질병 관련 손실의 선두 요인이다. BRD에 기인한 경제적 손실은 사망율, 치료에 드는 의약비, 수의과 비용 및 노동비를 포함한다. 마리당 1회 치료 평균 비용이 $8.80 이다. BRD 치료를 받은 암소는 37.9% 정도 사망율이 저하되었다. 치료를 받지 않는 동물은 순 이익이 마리당 평균 $11.48 더 높다. 치료받은 동물과 치료받지 않는 동물 사이에는 평균 1일 중량증가량이 다르다. 치료받은 동물의 경우 마리당 평균 $57.48 정도 순이익이 낮았다. BRD는 가축사육장에서 모든 사망의 20.6%를 유발하는 것으로 요약되어 있다.

돼지의 호흡기 복합감염증은 모든 돼지의 90% 까지 영향을 주는 주요하고 유사한 형태의 질환이다. 미코플라스마 히포뉴모니아(Mycoplasma hypopneumonia)는 파스토렐라 물토시다(Pasteurella multocida) 유형 A 및 D와 같은 복잡한 이차 병원체와 관련된 일차 병원체이고 고열이나 성장 손상과 같은 임상적 증후를 유발할 수 있다. 상기 미생물의 조합은 돼지에서 폐렴을 심각하게 하고 더 오래 지속시킬 수 있다. 돼지 번식 및 호흡기 증후군(PRRS)은 돼지에서 폐렴의 다른 주요 요인일 수 있다. 이것은 독성 PRRS 균주의 최소량의 투여에도 심각한 번식 질병을 초래할 수 있다. 돼지 호흡기 질환의 공통 원인제는 PRRS 바이러스, 돼지 인플루엔자(H1N1, H3N2) 및 미코플라스마 히포뉴모니아((Mycoplasma hypopneumonia)와 함께 해모필루스 파라수이스(Haemophilus parasuis), 해모필루스 수이스(Haemophilus suis), 해모필루스 플라노뉴모니아(Haemohilus planopneumonia), 파스토렐라(Pasteurella)(만히에마) 해몰리티카(Haemolytica) 및 파스토렐라 물토시다(Pasteurella multocida) (A 및 D 유형)을 포함할 수 있다. 이들 동물의 건강에 대한 경제적 손실을 추산하는 것은 어렵다. 폐렴에 걸린 폐 병반은 동물에서 호흡불량을 유발할 수 있고 돼지 군의 70% 까지 영향을 줄 수 있다. 이들 문제의 해결에 도움을 주기 위해 바이러스에 대한 백신 접종 및 세균에 대한 약물치료의 조합이 필요하다 - 백신 접종의 타이밍이 언제나 중요하다. 약물 치료는 비용을 최소화하고 동물에 대한 손상을 최소화하기 위해 적절한 시기에 적용해야한다.

미코플라스마 히포뉴모니아((Mycoplasma hypopneumonia)와 같은 생물은 "돼지의 풍토성 폐렴"(SEP)이라 불리는 중요한 만성 호흡기 질환을 유발할 수 있다. 이러한 생물 단독은 돼지에서 심각한 폐렴을 유발할 수 있으며 돼지 산업에 큰 위협으로 남는다.

액티노바실루스 플레우로뉴모니아애(Actinobacillus pleuropneurmoniae)는 "돼지의 늑막폐렴"을 유발하여, 심각한 경제적 손실과 치사를 초래한다. 백신이 개발되긴 하였지만, 동종 보호는 나타나지 않았다. 지난 수년간, 14개의 혈청형 및 2개의 생물형이 전세계적으로 확인되어 있다. 성장한 돼지 및 새끼 돼지 모두 무리를 보호하기 위해 백신접종되어야한다.

돼지 무리에서 호흡기 질환의 일차적 영향은 사료 섭취 감소로 알 수 있고 이는 성장을 해친다. 이것은 돼지의 균일성 손상, 더 많은 사망율, 평균 1일 중량 증가 감소 및 한 배당 돼지 두수 감소를 유발한다. 생산자 보고에 의하면 모든 가축 사육장의 14.4%가 호흡기 질환을 발병한다. 백신접종과 약물 치료에 대한 비용이 증가되고 전체적 성능은 저하된다. 1일 우유 수거량 감소 및 질환을 치료하기 위해 사용된 항체 비용은 돼지 산업에서 매년 467백만 달러로 추산되고 있다. 성장 돼지 및 새끼 돼지에서 전 사망의 39% 이상이 돼지의 호흡기 질환에 기인한 것이었다.

특정 조건의 진단 또는 치료를 위한 조류 알 항체의 생산은 공지되어 있다. 미생물의 억제, 특히 미생물의 서식 및 동물의 호흡기관에서 질병 유발 면역원의 부착과 서식을 억제하기 위한 조류 알 항체의 생산은 제시되어 있지 않다.

종래 기술의 대표예는 다음을 포함한다:

폴슨, 미국특허 4,555,019호

스톨레 등, 미국특허 4,748,019호

토코로, 미국특허 5,080,895호

캐롤, 미국특허 5,196,193호

리, 미국특허 5,367,054호

콜맨, 미국특허 5,585,098호

스톨레 등, 미국특허 5,753,268호.

로운(Raun)에 의한 미국특허 3,794,732호는 반추 동물 사료의 이용성을 향상시키기 위하여 반추동물의 사료에 폴리에스테르 항생물질의 사용을 논의하고 있다. 이것은 특히 반추동물에서 항생물질을 성장 촉진제로서 이용하는 것을 제시한다.

로운(Raun)에 의한 미국특허 3,947,836호는 동물에 경구투여될 때 반추동물의 사료 이용을 개선하기 위해 특정 항생물질 화합물을 사용하는 것을 논의하고 있다. 특히 이 동물은 아세테이트에 비하여 더 많은 프로피오네이트가 생산되는 반추위의 기능을 발달시켜 사료 이용능을 향상시킨다.

아이비 등에 의한 미국특허 4,933,364호는 식품 생산 포유동물의 생장과 사료 효능을 증가시키기 위한 대안적 방법을 논의한다. 이들은 식품 생산 포유동물의 사료 효능을 증가시키는 아연 항생물질 착물을 생성하기 위해 불용성 형태로 부가될 수 있다. 이들은 2개의 미국특허 3,501,568호 및 3,794,732호를 참조하고 있으며, 이들은 모넨신을 더욱 자세하게 다루고 있다.

모넨신과 같은 첨가제의 용도에 대한 다른 참고문헌은 이들이 말과 같은 일부 동물에 대하여 독성일 수 있기 때문에 이들 물질을 현명하게 사용할 필요가 있음을 개시하고 있다. 젖소에 대한 사용이 허용되지 않은 이들 항생물질은 조심스럽게 투여해야한다. 또한 사료 투입은 모넨신이 소의 사료에 전통적인 첨가제인 당밀 기제 보충제에 투여될 수 없기 때문에 초기에는 감소된다. (Pate, F., "Ionophores Do Not Appear To Work In Molasses Supplements", ONA Reports, 1966년 10월, 2 페이지, 플로리다 캐틀맨 앤드 라이브스톡 저널; Lona, R. P. et al. J. Anim. Sci. 75(1): 2571-2579, 1979).

폴슨에 의한 미국특허 4,550,019호는 사람을 비롯한 동물의 수동면역을 위한 면역학적 제제를 제조하기 위한 가금류 난황 항체의 제조 및 면역흡착성 과정에 대한 면역 시약, 특히 정량적 분석 시험, 특히 진단적, 병인학적, 법의학적 및 약동 학적 조사를 위한 마이크로 에세이용 면역 시약으로서 용도에 관한 것이다.

스톨 등에 의한 미국특허 4,748,018호는 다양한 조건하에서 다양한 투여 방법을 이용하고 또 포유동물내에서 항체에 대한 내성을 처음 발생한 후, 그 항체를 포함하는 다양한 조성물을 사용하여 다양한 항원에 대한 조류 난황 항체를 사용하여 포유동물을 수동면역시키는 방법에 관한 것이다.

도코로에 의한 미국특허 5,080,895호는 알로 부터 얻은 물질을 함유하는 특정 항체 및 그의 제조방법 및 감염증 또는 기타 질환의 치료를 위한 용도 및 가축 및 가금류용 식품, 화장품 및 의약 및 혈청진단학 분야에서 첨가제로서 용도에 관한 것이다. 분명하게 언급되지는 않았지만, 사료에서 알(egg) 항체의 사용은 가축 또는 가금류에서 장내 감염증을 치료하기 위해 항체를 경구투여하는 손쉬운 수단을 제공한다.

캐롤에 의한 미국특허 5,196,193호 및 그의 분할출원 미국특허 5,443,976호는 뱀, 거미, 전갈 또는 불가사리 독액을 중화시키기 위한 말 항체 또는 조류 난황 항체를 함유하는 항-독액 조성물에 관한 것이다.

리(Lee)에 의한 미국특허 5,367,054호는 젖을 분비하는 반추동물의 우유에서 체세포 개수를 감소시키기 위하여 알 면역글로불린을 대량 정제하는 방법에 관한 것이다.

스톨 등에 의한 미국특허 5,753,268호는 항-콜레스테롤레믹 알 백신 및 그의 제조방법 및 인간 및 기타 동물에서 혈관 장애를 치료하기 위한 식이 보충제로서 용도에 관한 것이다.

발명의 요약

넓게 말해서, 본 발명은 알을 낳는 연령 또는 그와 비슷한 시기의 새의 암컷을 특정 표적 면역원으로 최초로 접종하는 것에 의해 호흡기관에서 콜로니-형성 면역원의 부착을 억제하거나 또는 실질적으로 방지하는, 주요 식용 동물, 고가 비식용 동물, 동물학적 동물, 친구 동물, 또는 인간과 같은 동물에 투여하기 위한 미생물 부착 억제제의 제조방법에 관한 것이다. 이어, 상기 새에서 표적 면역원에 대한 항체의 을 생산이 허용되기에 충분한 시간 후, 새가 낳은 알을 수집한다. 알의 난황 및 알부민 항체-함유 내용물을 껍질로 부터 분리한다. 알의 항체-함유 내용물은 직접적으로 사용되거나 증량제 위에 배치되거나 또는 담체 물질과 혼합될 수 있다. 이 항체는 액체에 혼입된 다음 릭 튜브(lick tub)에 넣어 혼합하고, 동물을 포함한 환경에 분무 또는 분출시킨다. 알 항체 부착 억제 물질은 필요에 따라 저장되거나 선박으로 운송될 수 있다.

표적 면역원에 대하여 특이적인 항체를 포함하는 알 내용물은, 항체 물질을 직접적으로 분포시키거나 또는 공기 중에 연행된 항체물질을 도입하는 것에 의해 동물 또는 사람에게 투여된다. 이들 물질은 주사기를 이용한 직접 주사에 의해 동물의 비인두 영역에 도입되거나 분무될 수 있다. 이들 물질은 분출 건(gun)에 의해 직접적으로 투여되거나 경비 접종될 수 있다. 에어로졸 혼합물을 만들어서 동물의 머리 및 콧구멍 위에 분무제(mist)로서 투여할 수 있다. 다른 방법은 상기 물질을 담체와 혼합한 다음 사료 위에 "탑 드레싱"으로 투여하는 것이다. 상기 물질을 물에 부가하고 동물이나 사람으로 하여금 그 용액을 마시게 함으로써 특별한 필요를 충족시킬 수 있다. 보통의 동물 사료 혼합물을 사용하여 겔-유사 혼합물을 만들고 릭 튜브(lick tub)(사료 첨가제 벌크 튜브)에 붓는다. 다른 전달계는 활성물질을 호흡기관에 전달하기 위해 변형될 수 있다.

바람직한 실시형태의 설명

본 발명은 파스토렐라(만히에마) 해몰리티카(Pasteurella ( Manhiema ) haemolytica), 피. 물토시다(P. multocida) 및 해모필루스 솜누스(Haemophilus somnus), 돼지 인플루엔자, 미코플라스마 보비스(Mycoplasma bovis) 또는 엠. 히포뉴모니아애(M. hypopneumoniae)와 같은 콜로니-형성 미생물이 동물의 호흡기관의 점막 및 기관지 및 폐포세포에 부착되지 않게 함으로써 미생물의 서식을 방지하는 방법을 기초로 한다. 이러한 미생물이 서식되지 않게 하면 스트레스 유발 환경에 노출될 때 동물의 면역학적 방어기전을 유지한다. 그 결과 동물은 감염된 동물의 높은 사망율을 유발하는 선적 발열을 비롯한 폐렴성 호흡기 질병을 덜 걸린다.

모든 포유동물 및 새는 자신이 스스로 항체를 만드는 능력을 습득하기 까지는 자신의 어린 자녀에서 즉각적인 면역반응을 허용하는 유사한 형태의 보호를 제공한다. 보다 자세하게는 수동 항체 보호로 불리는 상기 방어 메카니즘은 태반, 어마의 젖 또는 양쪽 모두를 통하여 포유동물의 새끼에게 전달된다. 그러나, 새의 새끼는 자신이 배 단계로 부터 발생하는 알에 존재하는 항체의 저장을 통하여 자신의 수동 항체 보호를 받는다. 특히 새는 자신이 형성될 때 부터 자신의 알을 "로드 업"하는 능력이 있어, 엄마의 혈청에 존재하는 다량의 항체 농도를 갖는다. 또한, 조류 항체는 포유동물 항체에 비하여 특히 나쁜 조건하에서 소화를 통한 불활성화에 견디고 훨씬 더 안정하다. 일단 면역화되면, 암탉은 난황에 독특한 IgY 형의 면역글로불린을 낳는 반면에, 일반 닭은 알부민에 IgM 및 IgA 면역글로불린을 갖는 알을 낳는다. 알부민은 전체 알 제제에 대한 내성을 돕고 조류 항체를 보호한다. 난황에 존재하는 조류 IgY 면역글로불린은 자신을 숙주에 부착시키는 어드헤린(adherin)을 긴밀하게 결합시키거나, 피복하거나, 덮거나 제거한다. 알부민, IgM 및 IgA 면역글로불린은 항체-함유 물질의 서방 효과를 더 오래 제공하는 항체-함유 물질의 호흡기관의 점막에서 결합을 증가시킨다. IgM 및 IgA 면역글로불린은 분자를 서로 유지시켜서 더 큰 항체-함유 분자를 제공하는 디술피드 결합을 가지고 있다. 더 큰 항체-함유 분자는 동물 또는 인간의 호흡기관에서 표적 면역원의 부착을 방지하는데 더 효과적이다. 알부민은 IgY 면역글로불린의 활성을 보호함으로써 호흡기관에서 이들의 활성 수명을 증가시키는 단백질이다. 또한, 알에 위치하는 다량의 항체는 엄마가 가장 최근에 노출되고 그에 의해 공격을 받은 항원에 더욱 독점적으로 특이적이다. 이로 인하여 새의 알은 다량의 경제적으로 생산된 고특이적이고 안정한 항체의 가장 이상적인 공급원으로 된다. 본 발명은 조류 항체를 생산하기 위해 닭을 사용하여 예시하였으나, 칠면조, 오리, 거위, 타조, 에뮤, 꿩, 비둘기, 메추라기를 비롯한 기타 가금류 또는 이들의 조합을 이용할 수 있다.

특이적으로, 안정적이고 연속적인 생산 기조를 유지하기 위해 필요한 최종 생산물의 양과 타이밍에 의해 결정된 스케줄에 따라서, 닭의 경우, 알을 낳을 즈음의 연령, 약 16-19주령에서 대형 알 크기, 고 용량 알 생산 및 취급 용이성에 맞는 어린 암탉, 전형적으로 로드 아일랜드 레드(Rhode Island Reds), 화이트 레그혼(White Leghorns), 반성(sex-linked) 잡종 또는 기타 교배종의 그룹을 얻었다. 약 2 내지 4주간의 적합한 분리 및 풍토적응 기간 후, 각 그룹은 항체를 얻으려고 하는 특정 항원(면역원)의 재수화된 독점 제제를 사용하는 접종 프로그램에 들어갈 것이다. 어메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection: ATCC)과 같은 상업적 제공회사로 부터 미생물 배양액을 얻을 수 있다. 이들 배양액을 항원 분리에 사용할 수 있다. 항원은 제조된 면역원으로 제조될 수 있으며 근육내로 주사될 수 있지만, 바람직하게는 피하 주사될 수 있다. 약 4 내지 5주내에, 수집된 평균 알은 즉시 사용가능하고 안정한 형태의 막대한 양의 소망하는 특정 항체를 함유할 것이다. 닭은 높은 항체 수준을 유지하기 위하여 알을 낳은 기간 동안 표적 면역원으로 재접종될 수 있다.

소정 그룹의 닭으로부터 얻은 알의 뱃치를 깨고, 그 내용물을 껍질로부터 분리하고 혼합하고 바람직한 파스퇴르처리시켜 있을 수 있는 병원성 미생물을 닭으로부터 제거시켜서 오염의 가능성을 낮춘다. 항체 활성을 모니터링하기 위해 ELISA, 응집 등과 같은 표준 시험 과정을 이용하였다. 이어 전형적인 뱃치를 다른 평균 생산 수준의 닭 그룹으로부터 얻은 뱃치와 혼합하여 풍부한 표준 활성성분을 얻었다. 이러한 알 항체 미생물 억제제 물질은 저장될 수 있고 또 대두유, 볼러스 및/또는 정제와 같은 담체 물질 상에 선적될 수 있다. 조제자 및 최종 소비자의 필요와 처방에 따라서, 최종 항체 생성물은 사료 양식과 배합하기 위해 건조된 유장 또는 콩 깍지, 증류 곡물, 당밀, 콩 또는 벼 껍질 등과 같은 일부 유형의 무독 첨가제를 포함할 수 있다. 상기 과정에 의해 생산되고 가공된 1개 알은 특정 미생물 서식에 대하여 적어도 140 내지 160회 이상의 관리 방어를 제공하도록 충분히 활성이고 안정한 생성물을 얻을 것이다. 이러한 방법은 소고기용 소 및 젖소, 돼지, 닭, 칠면조, 친구 동물, 고가 비식용 동물, 동물학적 동물 및 인간에서 호흡기 질환 유발 미생물을 제어하는데 경제적이고, 안전하며 효과적인 수단을 최초로 제공한다.

면역원 부착 억제제 및 그의 제조방법과 그의 사용방법은 수록된 미생물 종에 대한 특정 면역원을 생성한다. 이들 면역원은 알을 낳은 조류 동물을 면역화시키기 위해 사용한다. 면역화된 암탉은 알부민에 IgM 및 IgA를 그리고 난황에 IgY 유형의 특정 항체를 함유하는 알을 낳을 것이다. 이들 알을 모으고 전체적으로 깬 알로부터 얻은 내용물을 적합한 농도로 당밀, 대두유, DMSO, PBS 완충액 및 비타민 E 용액과 같은 담체 혼합물과 혼합한다. 이 용액을 최적화시켜서 분무, 분사, 경비 주사, 겔화되거나 사료 위에 또는 통에 사용할 수 있다. 아침에 1회 및 저녁에 1회 사료 공급 기간 동안 축사나 사육장에 있는 동물 위에 보호 물질을 분무할 수 있다. 분무 횟수는 시험으로 결정한다. 상기 물질은 비독성이기 때문에, 축사에 필요할 때 필요한 만큼 제공될 수 있다. 바람직한 방법은 콧구멍당 1/2 투여량을 사용하여 직접적 경비 주사하거나 직접적 경비 분무 및 사료, 릭 튜브, 분출 적용기 위에 투여하는 것을 조합할 수 있다.

상기 생성물은 표적 면역원에 대한 특정 조류 항체를 함유하는 모든 천연 제제이다. 외부 표면 세포 벽, 어드헤린 수용체, 필리(pilii) 또는 필레이트 구조 및 캡슐 또는 바이러스 캡시드에 부착되면 이들 항체는 미생물이 점막에 부착되지 않게 할 것이다. 상기 미생물은 증식하거나 서식할 수 없을 것이다. 이것은 미생물들이 호흡기관 아래로 이동하지않게 해서 하부 호흡기관에서 질병을 유발하는 것을 제거할 것이다. 이들 물질을 분무함으로써, 분무제는 비인두를 피복하게 될 것이고 세균, 바이러스 또는 기타 미생물이 물방울에서 퍼져나가지 않게 할 것이다. 상기 분무제는 또한 사료 및 공기 중의 물을 피복해서 미생물이 동물에서 동물로 퍼져나가지 않게 차단할 것이다. 본 발명의 방법은 항생물질을 사용하지 않고도 축사와 사육장에서 동물 질병과 사망을 실질적으로 감소시킬 것이다.

호흡기 미생물을 감소시킴으로써, 폐 병반을 감소시키고, 2차 감염을 감소시키며, 1일 중량증가를 향상시키고, 성능을 향상시키며 사료 효율을 증가시키고 또 비용을 감소시킬 것이다. 동물에서 폐렴을 제어하여 생장능과 삶의 질을 향상시킬 뿐만 아니라 있을 수 있는 호흡기 미생물의 전파를 감소시킨다. 유사한 예를 친구 동물 또는 인간에서 얻을 수 있다. 이상 언급한 바와 같은 본 발명의 다양한 변형과 변이를 본 발명의 정신과 범위를 벗어남 없이 실시할 수 있을 것이다. 기재된 특정 실시예는 단순히 예시적으로 든 것이고 본 발명은 첨부된 특허청구범위에 의해서만 제한된다.

가장 성공적인 서식 미생물인 세균, 바이러스 및 기생충 등은 "어드헤린" 또는 "인티민"으로 불리는 상이한 유형의 분자를 다수 발생하여 왔으며, 이들의 표면상에서 숙주의 다양한 표면의 일부인 1 이상의 유형의 특정 분자에 아주 긴밀하게 접착할 수 있다. 접착 억제제는 자신을 아주 독특한 화학 구조의 자물쇠와 열쇠 유형으로 꼭 맞게 자신의 숙주에 부착시키는 이들 어드헤린에 아주 긴밀하게 결합하거나 어드헤린을 피복하거나, 덮거나 또는 제거할 수 있는 아주 특이한 활성의 조류 항체이다. 난황 중의 조류 IgY 면역글로불린은 자신을 숙주에 부착시키는 어드헤린에 아주 긴밀하게 결합하거나, 어드헤린을 피복하거나 덮거나 제거한다. 알부민 IgM 및 IgA 면역글로불린은 항체-함유 물질의 유지 효과를 더 길게 제공하는 항체-함유 물질의 호흡기관의 점막 조직에서 결합을 증가시킨다. IgM 및 IgA 면역글로불린은 분자를 서로 유지시키고 더 큰 항체-함유 분자를 제공하는 디술피드 결합을 갖는다. 대형 항체-함유 분자는 동물이나 사람의 호흡기관에서 표적 면역원의 접착을 방지하는데 더욱 효과적이다. 알부민은 IgY 면역글로불린의 활성을 보호하여 호흡기관에서 활성 수명을 증가시키는 단백질이다. 이러한 직접적 공격 이외에, 예컨대 혈액, 림프, 타액, 눈물 및 어느 정도의 장내 분비과 같은 대부분의 생물학적 액체에 포함되는 보체 계의 성분은 자신의 다양한 유형의 방어 활성에 대한 유발인자로서 항체 부착을 인지한다. 특정 항체 부착 및 코팅은 다수의 기타 세포 방어 계의 이동과 조합함으로써 신속하게 화학적 불활성화를 최대화하고 궁극적으로 표적 미생물의 파괴를 초래한다.

본 발명을 이하의 실시예에 의해 자세하게 설명한다.

실시예 1: 알을 낳는 조류 암컷의 선택

알을 낳는 암컷 조류의 균주는 필요와 용도에 따라서 다양할 것이다. 닭, 칠면조, 오리, 거위, 비둘기, 메추라기, 타조, 에뮤, 또는 기타 가금류를 비롯한 알을 낳는 가금류 암컷을 면역화시켰다. 알을 낳는 닭의 일반적 균주가 바람직하고 보통 연간 낳은 알의 갯수, 알의 크기 및 사육 용이성을 고려하여 선택한다. 로드 아일랜드 레드(Rhode Island Reds), 화이트 레그혼(White Leghorns), 반성(sex-linked) 잡종이 알의 크기(대형 내지 초대형 50-65 gm)를 기본하여 선택되는 동물 이며 면역화 스케쥴에 맞게 사용하였다. 동물의 취급 용이성 및 알의 크기와 균일성과 함께 연간 암컷이 낳은 알의 갯수를 관찰하였다. 알을 낳는 어떤 조류의 암컷이라도 사용될 수 있지만, 비용 및 사용의 용이성 면에서 닭이 가장 우수한 것으로 드러났다. 화이트 레그혼, W98 잡종은 동물당 가장 균일하고 가장 많은 개수의 알을 제공하였다. 이들 동물은 대형 내지 초대형 등급의 알(50-65 gm)을 생산하며 암컷당 매년 300개의 알을 낳았다.

실시예 2: 면역원으로 사용할 PM 항원의 제조

파스토렐라 물티코다(Pasteurella multicoda) (ATCC 15743)를 모델 세균으로 사용하였다. 이 미생물은 소로 부터 분리하였다. 저장액을 재수화하는 ATCC 방법을 따랐다. 이 세균을 1.0 ml의 TSB에서 재수화시켰다. 브레인 하트 인퓨젼(Brain Heart Infusion)(BHI, Acumedia 제조)을 사용하여 세균상의 PM 항원을 자극시켰다. 저장액 TSB를 BHI 육즙에 접종하고 37℃에서 18 내지 24시간 동안 배양하였다. 이것은 체강(somatic)과 세균상에서 부착 항원 발달을 자극한다. BHI 육즙을 함유하는 플라스크에 BHI 육즙 배양액을 접종하였다. 서서히 교반하면서, 플라스크를 37℃에서 배양하였다. 콜로니를 분리하기 위해 혈액 한천 플레이트에 줄을 그어 형태를 확인하였다. 22시간 후 양호한 생장이 확인되었다. 플라스크를 합치고 약 3000 rpm에서 30분간 멸균 염수(0.9%)와 원심분리하여 상기 물질을 수집하였다. 이 수집 물을 튜브에 수거하였다. 분광광도계 측정 및 McFarland 탁도계 기준을 이용하여 밀도를 확인하였다. 이 물질을 약 1 x 10⁹/ml으로 희석시켰다. 0.9% 멸균 식염수(Herzberg, 1972)중의 배양액과 1:1 비율로 4% 나트륨 데옥시콜레이트 (디프코 제조) 용액을 부가하고 실온(22 내지 24℃)에서 약 18시간 동안 교반하였다. 이 물질을 원심분리하여 전체 세포를 제거하였다. 상층액을 PM 항원에 대한 저장액으로 사용하였다. 약 14.9 mg/ml에서 건조 중량을 측정하였다. 생성물을 PM 면역원으로 사용하기 위해 멸균 PBS, pH 7.4에 1 mg/ml로 희석시켰다.

실시예 3: 면역원으로 사용할 PM 항원의 제조

저장액 P.해몰리티카(ATCC 14000)을 PH 항원용 저장액으로 사용하였다. 이 생물은 소로부터 분리하였다. 저장액을 재수화하는 ATCC 방법을 따랐다. 이 세균을 1.0 ml의 TSB에서 재수화시켰다. 브레인 하트 인퓨젼(Brain Heart Infusion)(BHI, Acumedia 제조)을 사용하여 세균상의 PM 항원을 자극시켰다. 저장액 TSB를 BHI 육즙에 접종하고 37℃에서 18 내지 24시간 동안 배양하였다. 이것은 체강과 세균상에서 부착 항원 발달을 자극한다. BHI 육즙을 함유하는 플라스크에 BHI 육즙 배양액을 접종하였다. 서서히 교반하면서, 플라스크를 37℃에서 배양하였다. 22시간 후 양호한 생장이 확인되었다. 콜로니를 분리하기 위해 혈액 한천 플레이트에 줄을 그어 형태를 확인하였다. 플라스크를 합치고 약 3000 rpm에서 30분간 멸균 염수(0.9%)와 원심분리하여 상기 물질을 수집하였다. 이 수집물을 튜브에 수거하였다. 분광광도계 측정 및 McFarland 탁도계 기준을 이용하여 밀도를 확인하였다. 이 물 질을 약 1 x 10⁹/ml으로 희석시켰다. 0.9% 멸균 식염수(Herzberg, 1972)중의 배양액과 1:1 비율로 4% 나트륨 데옥시콜레이트 (디프코 제조) 용액을 부가하고 실온(22 내지 24℃)에서 약 18시간 동안 교반하였다. 이 물질을 원심분리하여 전체 세포를 제거하였다. 상층액을 PH 항원에 대한 저장액으로 사용하였다. 건조 중량을 측정하였다. 생성물을 PH 면역원으로 사용하기 위해 멸균 PBS, pH 7.4에 1 mg/ml로 희석시켰다.

실시예 4: 면역원으로 사용할 HS 항원의 제조

저장액 해모필루스 솜무스(Haemophilus sommus)(ATCC 43626)를 HS 항원용 저장 세균 배양액으로 사용하였다. 이 생물은 소로부터 분리하였다. 저장액을 재수화하는 ATCC 방법을 따랐다. 이 세균을 1.0 ml의 TSB에서 재수화시켰다. ATCC 배지: 세균상의 HS 항원을 자극하기 위해 814 GC 배지를 사용하였다. 저장액 TSB를 814 GC 배지에 접종하고 37℃ 및 5% CO₂ 에서 18 내지 24시간 동안 배양하였다. 이것은 체강과 세균상에서 부착 항원 발달을 자극한다. 22 내지 48시간 후 양호한 생장이 확인되었다. 콜로니를 분리하기 위해 혈액 한천 플레이트에 줄을 그어 형태를 확인하였다. 플라스크를 합치고 약 3000 rpm에서 30분간 멸균 염수(0.9%)와 원심분리하여 상기 물질을 수집하였다. 이 수집물을 튜브에 수거하였다. 분광광도계 측정 및 McFarland 탁도계 기준을 이용하여 밀도를 확인하였다. 이 물질을 약 1 x 10⁹/ml으로 희석시켰다. 0.9% 멸균 식염수(Herzberg, 1972)중의 배양액과 1:1 비율로 4% 나트륨 데옥시콜레이트 (디프코 제조) 용액을 부가하고 실온(22 내지 24℃)에서 약 18시간 동안 교반하였다. 이 물질을 원심분리하여 전체 세포를 제거하였다. 상층액을 HS 항원에 대한 저장액으로 사용하였다. 건조 중량을 측정하였다. 생성물을 HS 면역원으로 사용하기 위해 멸균 PBS, pH 7.4에 1 mg/ml로 희석시켰다

실시예 5: 면역원으로 사용할 HSa 항원의 제조

저장액 해모필루스 수이스(Haemophilus suis)(ATCC 19417, 에이치. 파라수이스(H. parasuis))를 HSa 항원용 저장 세균 배양액으로 사용하였다. 이 생물은 돼지로부터 분리하였다. 저장액을 재수화하는 ATCC 방법을 따랐다. 이 세균을 1.0 ml의 TSB에서 재수화시켰다. ATCC 배지 5129: 세균상의 HSa 항원을 자극하기 위해 해모필루스(Haemophilus) 시험 배지를 사용하였다. 저장액 TSB를 #5129 육즙으로 접종하고 37℃에서 24 내지 48시간 동안 배양하였다. 이것은 체강과 세균상에서 부착 항원 발달을 자극한다. #5129 육즙을 함유하는 플라스크 또는 #814 배지를 함유하는 플레이트를 저장 육즙 배양액으로 접종하였다. 플라스크를 37℃ 및 5% CO₂ 에서 배양하였다. 48시간 후 양호한 생장이 확인되었다. 콜로니를 분리하기 위해 혈액 한천 플레이트에 줄을 그어 형태를 확인하였다. 플라스크를 합치고 약 3000 rpm에서 30분간 멸균 염수(0.9%)와 원심분리하여 상기 물질을 수집하였다. 이 수집물을 튜브에 수거하였다. 분광광도계 측정 및 McFarland 탁도계 기준을 이용하여 밀도를 확인하였다. 이 물질을 약 1 x 10⁹/ml으로 희석시켰다. 0.9% 멸균 식염수(Herzberg, 1972)중의 배양액과 1:1 비율로 4% 나트륨 데옥시콜레이트 (디프코 제조) 용액을 부가하고 실온(22 내지 24℃)에서 약 18시간 동안 교반하였다. 이 물질을 원심분리 하여 전체 세포를 제거하였다. 상층액을 HSa 항원에 대한 저장액으로 사용하였다. 건조 중량을 측정하였다. 생성물을 HS 면역원으로 사용하기 위해 멸균 PBS, pH 7.4에 1 mg/ml로 희석시켰다

실시예 6: 닭의 알 및 사료에서 항체를 모니터링하기 위해 PH, PM, HS 및 HSa 항원을 사용한 ELISA 플레이트의 제조

PH, PM, HS 및 HSa ELISA: 탄산염 완충액, pH 9.6중에서 다양한 농도의 항원(10㎍-200 ㎍/ml) 100 ㎕/ml를 사용하여 96웰 에세이 플레이트(평탄한 바닥 Costar)를 피복하였다. 이 플레이트를 22° 내지 37℃에서 18시간 까지 배양하였다. 웰들은 크로스-오염되지 않도록 흡입되었다. 웰당 0.5% BSA 390 ㎕를 사용하여 플레이트를 블로킹하고 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 대조를 위하여 양성 또는 음성의 것을 이용하여 플레이트를 피복하였다. 이 플레이트를 Tween^TM 20을 함유하는 세척 완충액으로 1회 헹구었다. 웰당 100 ㎕의 희석 샘플을 2쌍으로 웰에 부가하고 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 양고추냉이 과산화효소(Kirkegard and Perry Laboratories 제조; 1:1000 내지 1: 3000)와 염소 항-닭 IgG 콘쥬게이트를 부가하였다. 1시간 동안 배양한 후, 기질(TMB, KPL)을 제조자의 지시에 따라 부가하고 10분후에 0.1M 인산을 사용하여 반응을 중지시켰다. 웰의 광학 밀도는 Dynatech ELISA 판독기로 450 nm에서 측정하고 그 정보를 다음 데이터 분석을 위해 기록하였다.

실시예 7: 시간에 따른 개별 알 및 혈청의 분석

특정 항원에 대한 항체 반응을 모니터링하기 위하여 면역화 기간 동안 다양한 시기에 알을 선택하였다. 선택된 닭은 0일에 모니터링을 시작해서 4개월 후 월 단위로 계속하였다. 전체 알을 껍질로 부터 수집한 다음 1 ml 샘플로 취하였다. 이 샘플을 완충액으로 추출하여 항체 함량을 분석하였다. PH, PM, HS 및 HSa 면역원에 대한 표준 ELISA법을 분석에 이용하였다. 음성 기록은 OD 기록으로 부터 제거하였따.

실시예 8: PH 면역원을 사용한 닭의 면역화

선택된 알을 낳는 암탉, 약 19주령의 화이트 레그혼에 저장액 PH 면역원을 주사하였다. 1주 간격으로 4회 주사(500㎍, 100㎍, 200㎍, 및 250 ㎍)를 실시하였다. 마지막 초기 주사한 지 2주후에 혈청 샘플을 수집하였다. 2번째 예방주사(booster: 부스터)가 필요한 경우, 각 주사시 100㎍를 주사하였다(매 6개월간). 4주내에, 모든 암탉은 알에서 탁월한 항체를 생산하였다. ELISA PH 판독은 평균해서 1:10,000 희석의 경우 1.00 OD이었고 1:50,000인 경우 0.265 OD 이었다.

실시예 9: PM 면역원을 사용한 닭의 면역화

선택된 알을 낳는 암탉, 약 19주령의 화이트 레그혼에 저장액 PM 면역원을 주사하였다. 1주 간격으로 4회 주사(500㎍, 100㎍, 200㎍, 및 250 ㎍)를 실시하였다. 마지막 초기 주사한 지 2주후에 혈청 샘플을 수집하였다. 2번째 예방주사(booster: 부스터)가 필요한 경우, 각 주사시 100㎍를 주사하였다(매 6개월간). 4주내에, 모든 암탉은 알에서 탁월한 항체를 생산하였다. ELISA PM 판독은 평균해서 1:10,000 희석의 경우 1.42 OD이었고 1:50,000인 경우 0.68 OD 이었다.

실시예 10: HS 면역원을 사용한 닭의 면역화

선택된 알을 낳는 암탉, 약 19주령의 화이트 레그혼에 저장액 HS 면역원을 주사하였다. 1주 간격으로 4회 주사(500㎍, 100㎍, 200㎍, 및 250 ㎍)를 실시하였다. 마지막 초기 주사한 지 2주후에 혈청 샘플을 수집하였다. 2번째 예방주사(booster: 부스터)가 필요한 경우, 각 주사시 100㎍를 주사하였다(매 6개월간). 4주내에, 모든 암탉은 알에서 탁월한 항체를 생산하였다. ELISA HS 판독은 평균해서 1:10,000 희석의 경우 0.95 OD이었고 1:50,000인 경우 0.250 OD 이었다.

실시예 11: HSa 면역원을 사용한 닭의 면역화

선택된 알을 낳는 암탉, 약 19주령의 화이트 레그혼에 저장액 HSa 면역원을 주사하였다. 1주 간격으로 4회 주사(500㎍, 100㎍, 200㎍, 및 250 ㎍)를 실시하였다. 마지막 초기 주사한 지 2주후에 혈청 샘플을 수집하였다. 2번째 예방주사(booster: 부스터)가 필요한 경우, 각 주사시 100㎍를 주사하였다(매 6개월간). 4주내에, 모든 암탉은 알에서 탁월한 항체를 생산하였다. ELISA HSa 판독은 평균해서 1:10,000 희석의 경우 1.40 OD이었고 1:50,000인 경우 0.576 OD 이었다.

실시예 12: 저장액 생산 전체 알 시약의 제조

전체 알 시약의 제조 뱃치를 제조하기 위해 사용될 4개의 면역원 그룹으로 부터 선택한 암탉을 모았다. 스털링(미국특허 5,753,228호)는 알의 선택과 그의 저장에 대한 탁월한 개관을 제시한다. 이들 알을 임의로 선택하고 껍질을 제거하였다. 전체 알을 잘 혼합하고 표준 조건((60℃(140℉)) Charley, H. and C. Weaver, 제3판, Foods: a scientific approach, Merril-Prentice Hall, 350쪽, 1998)을 이 용하여 3.5분간 파스퇴르 처리시켰다. 파스퇴르 처리된 후, 샘플을 활성에 대해 시험하고 건조되거나 담체상에 분무될 때 까지 4℃에서 저장하였다. 250 ㎕의 샘플을 분석하였다. ELISA의 결과의 예를 다음과 같이 나타낸다.

파스퇴르 처리된 전체 알: PM, PH, HS, HSa 혼합물

면역원	희석	O.D
PM PM PH PH HS HS HSa HSa	500 2500 500 2500 500 2500 500 2500	0.532 0.113 0.466 0.115 0.338 0.128 0.588 0.155

실시예 13: 항체 활성에 대한 사료 첨가제의 분석

3개 뱃치로 부터 재료 샘플을 수집하였다. 샘플은 PH, PM, HS 및 HSa에 대한 ELISA 계를 이용하여 분석하여 파스퇴르 처리 및 저장 후의 활성을 모니터링하였다. 전체 알 뱃치의 처리후에 양호한 항체 반응이 기록되었다. 실시예 20 제조방법으로부터 얻은 3개 뱃치의 데이터를 하기 표에 나타낸다.

뱃치: 액체	파스토렐라(Pasteurella) 면역원	신호/잡음	해모필루스(Haemophilus) 면역원	신호/잡음
뱃치 #1	0.347	5.32	0.111	2.68
뱃치 #2	0.188	2.92	0.175	2.93
뱃치 #3	0.272	2.98	0.138	1.91

실시예 14: 가축사육장 소에 대한 시험

2개의 상이한 근원의 222마리 송아지 그룹을 배편으로 아이다호로 보냈다. 109마리의 송아지는 0일에 처리하였고 113 마리는 2일째에 처리하였다. 모든 송아 지는 정상 백신처리되었고 또 질병 스트레스를 감소시키고 평균 1일 중량증가과 사료 효능을 증가시키기 위한 항생물질을 포함하는 처리를 받았다. 상기 그룹의 절반은 경비 투여를 통하여 처리되었다. 투여량은 콧구멍에 직접 주사하였다(1.5 cc/콧구멍: 총 3 ml). 동물에 태그를 붙이고 35일간 모니터링하였다. 모든 송아지는 동일한 축사에 넣었다. 시험 군은 N = 111이고 대조군은 N=111이었다. 다음이 관찰되었다.

	대조용 (n=1111) 마리수 퍼센트		시험군(n=111) 마리수 퍼센트
병원에 입원	20	18	7	6
호흡기 질환에 대해 치료	19	17	7	6
치사	3	3	0	0
호흡기 질환으로 사망	2	2	0	0
재치료	5		3

실시예 15: 가축사육장 소의 시험

165마리의 거래된 외양간 송아지 그룹을 한여름에 배편으로 이송하였다. 송아지들은 0일 및 2일째에 처리되었다. 모든 송아지는 정상 백신처리되었고 또 질병 스트레스를 감소시키고 평균 1일 중량증가과 사료 효능을 증가시키기 위한 항생물질을 포함하는 처리를 받았다. 상기 그룹의 절반은 경비 투여를 통하여 처리되었다. 투여량은 콧구멍에 직접 주사하였다(1.5 cc/콧구멍: 총 3 ml). 동물에 태그를 붙이고 35일간 모니터링하였다. 시험군은 N = 82이고 대조군은 N=83이었다. 다음이 관찰되었다.

	대조용 (n=83) 마리수 퍼센트		시험군(n=82) 마리수 퍼센트
병원에 입원	36	47	24	28
호흡기 질환에 대해 치료	36	43	22	25
치사	9		5
호흡기 질환으로 사망	8		4
재처리 1X	14		12
재처리 2X	10		4
재처리 3X	4		3
재처리 4X	3		2
재처리 5X	6		1
처리비용	$1,291.44		$796.51
처리된 동물 마리당 평균 비용	$35.87		$30.64

실시예 16: 가축사육장 소의 시험

2개의 상이한 근원의 송아지 그룹을 배편으로 아이다호로 보냈다. 제 1 그룹의 77마리 송아지는 0일에 처리하였다. 이 그룹의 그룹의 절반은 시험군(n=39)이고 나머지 절반은 대조군(n=38)으로 처리하였다. 제2 그룹의 78마리는 2일째에 동일한 처리를 하였다. 모든 송아지는 정상 백신처리되었고 또 질병 스트레스를 감소시키고 평균 1일 중량증가과 사료 효능을 증가시키기 위한 항생물질을 포함하는 처리를 받았다. 상기 그룹의 절반은 경비 투여를 통하여 처리되었다. 투여량은 콧구멍에 직접 주사하였다(1.5 cc/콧구멍: 총 3 ml). 동물에 태그를 붙이고 35일간 모니터링하였다. 병원에 입원한 시험군 동물은 매일 이들이 거치는 정상 처리와 함께 부스터 물질을 투여받았다. 대조용 소는 정상 처리만 되었다. 시험군은 N = 77이고 대조군은 N= 78이었다. 다음이 관찰되었다.

	대조용 (n=78) 마리수 퍼센트		시험군(n=77) 마리수 퍼센트
병원에 입원	18	23	13	17
호흡기 질환에 대해 치료	18	23	12	17
치사	1		1
호흡기 질환으로 사망	1		1
재처리 1X	6		5
재처리 2X	7		5
재처리 3X	3		3
재처리 4X	2		0
RES 리얼라이저	1		2
RES 사망	1		1
사망율		1.28		1.30
치료 비용	$691.49		$478.59
입원한 마리당 평균 비용	$38.42		$36.81
축사중 마리당 치료 비용	$8.87		$6.22

실시예 17: 이유한 송아지의 시험

매주 약 1000 내지 2000 마리 송아지를 4개 그룹으로 이유시켰다. 송아지를 작은 그룹으로 처리하였다. 모든 송아지는 정상 백신처리되었고 또 질병 스트레스를 감소시키고 평균 1일 중량증가과 사료 효능을 증가시키기 위한 항생물질을 포함하는 처리를 받았다. 이들 그룹은 모두 경비 투여를 통하여 처리되었다. 투여량은 콧구멍에 직접 주사하였다(1.5 cc/콧구멍: 총 3 ml). 동물에 태그를 붙이고 22일간 모니터링하였다. 병원에 입원한 시험군 동물은 매일 이들이 거치는 정상 처리와 함께 부스터 물질을 투여받았다. 시험군은 N = 5000이었다. 22일 후, 50마리의 동물만이 호흡기 문제로 입원하였다.

실시예 18: 릭 튜브(Lick tub) 시험

릭 튜브의 제조 방법은 아주 단순하고 직접적이다. 이 실시예의 제조는 제조 한 습윤 물질과 증류기 농축된 시럽을 표준 튜브에 부가하여 수분 함량을 상향 조정하여 실시하였다. 우리는 건조기 물질과 우리의 액체 물질을 치환하여 현재 제조되고 있는 표준 튜브와 동일한 수분 함량을 얻음으로써 유사한 특성을 갖는 완성 튜브를 달성하였다.

제조된 릭 튜브 예의 총 뱃치는 다음 성분을 포함한다:

가용성 물질을 포함하는 건조 증류립(DDGS) 1170 파운드

옥수수 글루텐 밀(meal) 1365 파운드

습윤 증류립 465 파운드

비타민 및 무기질 프리믹스 750 파운드

산화 마그네슘 600 파운드

혼합 항체 540 파운드

식품용 당밀 10 갤런

곰팡이 억제제 6 파운드

DDGS, 옥수수 글루텐 밀, 습윤 케이크, 곰팡이 억제제, 프리믹스 및 산화마그네슘을 5-톤 믹서 트럭에 넣고 5분간 혼합하였다. 이어 상기 물질 및 당밀을 부가하였다. 이것을 30분간 혼합하였다. 생성한 물질을 중량은 약 5,630 파운드이었다. 이 혼합물을 측면 방출 활송장치를 이용하여 덜어내어 28개의 200파운드 플라스틱 튜브에 넣은 다음 고형 물질로 압축시켰다. 이 튜브를 48시간 동안 경화시켜 아주 단단하고 어느 정도 이스트 맛도 나고 달콤한 향기가 나는 나무껍질 갈색 생성물을 생성하였다.

1개 실험으로서, 1개 튜브를 197 마리의 600 파운드 수송아지가 들어있는 축사중의 축우 가까이에 두었다. 시험중인 축사중의 소는 이 물질에 관심이 아주 많았다. 이들 소는 하루에 몇 번씩 이 튜브를 방문하였다. 소비량은 하루에 마리당 약 7.7 g 이었다. 더 많은 튜브가 축사 안에 있다면 소비량은 어느 정도 더 높을 것이라고 예상되었다.

실시예 19: 톱 드레싱의 개발

주요 제제 중의 하나가 톱 드레싱으로 사용될 수 있다. 동량의 PH, PM, HS 및 HAs 항원으로 면역화된 암탉으로부터 총 7-9L 정도로 전체 알을 수집하였다. 이 전체 알을 2리터의 PBS, pH 7.4, 4.5 리터의 당밀 및 4리터의 증류수에 부가하였다. 이것을 잘 혼합하고 식품용 비타민 E, 바닐라, 벤조산 나트륨, 소르브산 칼륨 및 시트르산 나트륨과 같은 보존제를 부가하여 미생물 성장을 억제하고 저장기간을 연장시켰다. 전체 량은 18리터였다. 이 혼합물을 교반하여 균질 용액을 얻었다. 이 혼합물을 The Schlueter Company가 제조한 식품용 파스퇴르처리기에서 파스퇴르 처리시켰다. 이 물질을 냉각시키고 사용하기 전까지 4℃에서 저장하였다.

이 물질을 필요에 따라 사료 위에 부었다. 이것은 총 3번 적용하는 동안 7일에 1회씩 분포시켰다.

실시예 20: 에어로졸 또는 스프레이용 물질의 개발

주요 제제 중의 하나는 에어로졸 또는 스프레이로 사용될 수 있다. 동량의 PH, PM, HS 및 HAs 항원으로 면역화된 암탉으로부터 총 10L 정도로 전체 알을 수집하였다. 이 전체 알을 6리터의 PBS, pH 7.4 및 2 리터의 당밀에 부가하였다. 이것 을 잘 혼합하고 식품용 비타민 E, 바닐라, 벤조산 나트륨, 소르브산 칼륨 및 시트르산 나트륨과 같은 보존제를 부가하여 미생물 성장을 억제하고 저장기간을 연장시켰다. 전체 량은 18리터였다. 이 혼합물을 교반하여 균질 용액을 얻었다. 이 혼합물을 파스퇴르 처리시켰다. 이 물질을 냉각시키고 사용하기 전까지 4℃에서 저장하였다.

이 물질을 동물의 머리 위에 직접 분무하여 에어로졸을 형성하였다. 이 물질은 분출 건과 같은 압력 건에 부을 수 있다. 카우보이는 장전된 분출 건을 사육축사 범위 또는 내로 가져가서 필요에 따라 소에 직접 전달한다. 이 물질은 필요에 따라 개별 동물의 코에 직접 분무될 수 있다. 이것은 비정거리 밖으로 도포하는 아주 유용한 수단을 제공한다. 이것은 총 3번 적용하는 동안 7일에 1회씩 분포하거나 또는 필요에 따라 분포시켰다.

실시예 21: 돼지의 동물 시험

약 60 파운드 무게의 사육 돼지 77마리 그룹을 톱 드레싱으로 실시예 20에서 제조된 물질을 사용하여 시험하였다. 동물에는 0,7,14 및 21일에 톱 드레싱으로서 상기 물질을 투여하였다. 축사에 넣은 지 초기 21일 동안 호흡기 복합증으로 인한 상기 농장의 지난 5년간 손실율은 7.5%이었고 또 30% 이상이 약물 치료를 받았다. 62일간의 시험 기간 동안, 모든 동물은 우수한 상태에 있었고 0%의 손실율과 0% 약물처리를 나타내었다.

실시예 22: 돼지의 동물 시험

약 50 파운드 무게의 작은 사육 돼지 80 마리 그룹을 톱 드레싱으로 실시예 20에서 제조된 물질을 사용하여 시험하였다. 동물에는 0,7,14 및 21일에 톱 드레싱으로서 상기 물질을 투여하였다. 축사에 넣은 지 초기 21일 동안 호흡기 복합증으로 인한 상기 농장의 손실율은 5%이었고 또 30% 이상이 약물 치료를 받았다. 55일간의 시험 기간 동안, 모든 동물은 우수한 상태에 있었고 1.25%의 손실율과 0% 약물처리로 과거보다 더 우수한 결과를 나타내었다.

숙주의 호흡기관의 경비 비인두 영역에 서식하는 미생물은 번식하기 위해서 점막 표면에 점착 또는 부착할 수 있는 능력을 가져야 한다.

파스토렐라 물토시다((Pasteurella multocida), 엠. 해몰리티카(M.Haemolytica), 해모필루스 솜누스(Haemophilus somnus), 돼지 인플루엔자 바이러스 및 미코플라스마 (Mycoplasma) 세균과 같은 호흡기 폐렴 복합증 미생물도 이러한 규칙에 대한 예외가 아니다. 동물 또는 인간에서 호흡기 문제를 유발할 수 있는 생물에는 진균 및 기생충 군으로 부터의 다른 미생물도 포함된다. 본 발명의 부착 억제제는 누가적으로 부착을 강하게 방해하므로, 특정 표적 미생물이 서식, 증식, 호흡기관 아래로의 이동 및 폐를 비롯한 하부 기관의 감염을 방해한다. 단순한 경비 주사, 분무의 담체를 통하여, 사료 또는 릭 튜브 위에 도포에 의해, 상기 생성물은 숙주에게 동물에서 다른 질병을 치료하지 않도록 고안된 특정 항체 제제를 공급하지만 존재할 수 있는 미생물을 방출하고 새로이 도입된 미생물이 상부 호흡기관에 부착되지 않게 한다. 부착 억제제는 숙주 자체에는 효과를 갖지 않고 천연적이며 동물에 바람직하지 않은 잔류물을 남기지 않으므로 궁극적 사료 제품에 효과를 갖지 않는다. 또한, 미생물이 증식되지 않기 때문에, 동물의 점막으로 부터 시간 경과에 따라 (실시예 21의 경우 30일) 천연적 분해를 통하여 없어지며 가축사육장의 오염 공급원을 제거한다. 적합하게 제어되면, 사육장을 통하여 다른 동물을 교차 오염시킬 우려가 저하되고 제거된다. 친구동물, 동물학적 동물 또는 비식용 동물 또는 인간에서도 유사한 적용을 달성할 수 있다. 이들은 또한 호흡기 문제를 가지고 있다.

상기 기재한 바와 같이 본 발명의 다수의 변형과 변이가 본 발명의 범위와 정신을 벗어남 없이 가능함이 분명하다. 기재된 특정 실시예는 예시적으로 적용한 것이고 본 발명은 첨부된 청구범위에 의해서만 제한된다. 배타적이거나 특권이 요구된 본 발명의 구체예는 다음과 같다.

Claims

A. 알을 낳는 연령이거나 그 연령에 거의 도달한 새의 암컷을 표적 콜로니-형성 면역원으로 접종시키고;

B. 새에서 또는 새의 알에서 표적 콜로니-형성 면역원에 대한 항체-함유 내용물의 생성을 허용하기에 충분한 시간 동안 방치하며;

C. 상기 새가 낳은 알을 수집하고;

D. 껍질로 부터 알의 항체-함유 내용물을 분리하는 것을 포함하는 방법에 의해 생산된 동물의 호흡기관에서 표적 콜로니-형성 면역원의 부착을 실질적으로 방지하기 위해 동물에 투여되는 미생물 부착 억제제.
제 1항에 있어서, 상기 콜로니-형성 면역원은 호흡기 질환을 유발함으로써 사료를 이용하는 동물의 능력을 감소시키는 것으로 알려진 것인 미생물 부착 억제제.
제 2항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 P. 물티코다(P.multicoda), 엠. 해몰리티카(M. hemolytica), 에이치. 솜누스(H. sommnus) 및 에이치. 수이스(H. suis)를 비롯한 호흡기 세균 류로부터 선택된 미생물 부착 억제제.
제 2항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 미코플라스마 플레우로뉴모니아애(Mycoplasma pleuropneurmoniae), 엠. 히포뉴모니아(M. hypopneumonia), 및 엠. 보비스(M. bovis)를 비롯한 호흡기 세균류로 부터 선택되는 미생물 부착 억제제.
제 1항에 있어서, 상기 항체-함유 내용물은 닭, 칠면조, 오리, 거위, 타조, 에뮤, 꿩, 비둘기, 메추라기 또는 그의 조합으로 부터 선택된 알로 부터 유도된 미생물 부착 억제제.
제 1항에 있어서, 상기 콜로니-형성 면역원은 사람에서 호흡기 질병을 유발하는 것으로 알려진 것인 미생물 부착 억제제.
제 1항에 있어서, 상기 알의 분리된 항체-함유 내용물을 담체 물질과 혼합하는 것을 포함하는 미생물 부착 억제제.
제 1항에 있어서,

A. 상기 알의 분리된 항체-함유 내용물을 혼합하고; 또

B. 상기 알의 혼합된 분리 항체-함유 내용물을 파스퇴르 처리시켜 병원성 미생물을 제거하는 것을 포함하는 미생물 부착 억제제.
제 8항에 있어서, 상기 알의 분리된 항체-함유 내용물의 파스퇴르 처리된 혼합물을 담체 물질상에서 저장하는 것을 포함하는 미생물 부착 억제제.
제 9항에 있어서, 대두유, 당밀, 건조증류립 및 사탕무 과육을 포함하는 군으로부터 선택하는 미생물 부착 억제제.
제 1항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 친구 동물에서 호흡기 질병을 유발하는 것으로 알려진 것인 미생물 부착 억제제.
제 1항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 말, 동물학적 동물 및 실험실용 동물과 같은 고가 비식용 동물에서 호흡기 질환을 유발하는 것으로 알려진 것인 미생물 부착 억제제.
제 1항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 돼지 인플루엔자(H1N1, H3N2)를 비롯한 호흡기 바이러스 류로부터 선택되는 것인 미생물 부착 억제제.
제 1항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 소의 합포체성 바이러스(bovine respiratory syncytial virsu: BRSV), 소의 바이러스성 설사(BVD), 소의 파라인플루엔자(BPI₃) 및 전염성 소의 리노트로체이투스(IBR) 바이러스를 비롯한 호 흡기 바이러스 류로부터 선택된 미생물 부착 억제제.
표적 콜로니-형성 면역원에 특이적인 항체를 포함하는 알 내용물을 포함하는 식용 동물의 호흡기관에서 표적 콜로니-형성 면역원의 부착을 실질적으로 방지하는 식용 동물에 투여하기 위한 미생물 부착 억제제.
제 15항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원이 사료를 이용하는 동물의 능력을 저하시켜서 평균 1일 중량증가를 저하시키는 것으로 알려진 것인 미생물 부착 억제제.
제 15항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 돼지 인플루엔자(H1N1, H3N2)를 비롯한 호흡기 바이러스류로부터 선택된 미생물 부착 억제제.
제 17항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 인간에서 호흡기 복합증을 유발하는 것으로 알려진 것인 미생물 부착 억제제.
제 15항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 소의 합포체성 바이러스(bovine respiratory syncytial virsu: BRSV), 소의 바이러스성 설사(BVD), 소의 파라인플루엔자(BPI₃) 및 전염성 소의 리노트로체이투스(IBR) 바이러스를 비롯한 호 흡기 바이러스 류로부터 선택되는 미생물 부착 억제제.
식용 동물의 호흡기에 콜로니-형성 면역원의 존재에 의해 유발된 호흡기 스트레스를 감소시키는 것에 의해, 콜로니-형성 면역원이 식용 동물의 호흡기관에 부착되지 않게 함으로써 콜로니-형성 면역원이 증식되지 않게 하며, 상기 콜로니-형성 면역원 PRRS는

A. 알을 낳는 연령이거나 그 연령에 거의 도달한 새의 암컷을 PRRS로 부터의 P 항원으로 접종시키고;

B. 상기 새 및 새가 낳은 알에서 PRRS로 부터의 P항원에 대한 항체를 생산하기에 충분한 시간 동안 방치하며;

C. 상기 새가 낳은 알을 수집하고;

D. 껍질로부터 알의 항체-함유 내용물을 분리하는 것을 포함하는 방법에 의해 생산되는 것을 특징으로 하는,

식용 동물의 생장을 증진시키기 위한 미생물 부착 억제제.
제 20항에 있어서, 상기 알의 분리된 항체-함유 내용물은 담체 물질을 상기 알의 항체-함유 내용물과 혼합하는 것에 의해 달성되는 미생물 부착 억제제.
제 21항에 있어서, 상기 담체 물질은 대두유, 당밀, 건조증류립 및 사탕무 과육을 비롯한 물질로 구성된 군으로부터 선택된 미생물 부착 억제제.
제 20항에 있어서, 상기 항체-함유 내용물은 닭, 칠면조, 오리, 거위, 타조, 에뮤, 꿩, 비둘기, 메추라기 또는 이들의 조합으로부터 선택되는 미생물 부착 억제제.
제 20항에 있어서, 상기 콜로니-형성 면역원은 친구 동물에서 호흡기 질병을 유발하는 것으로 알려진 미생물 부착 억제제.
제 20항에 있어서, 상기 콜로니-형성 면역원은 말, 동물학적 동물 및 실험실 동물과 같은 고가의 비식용 동물에서 호흡기 질병을 유발하는 것으로 알려진 미생물 부착 억제제.
A. 알을 낳는 연령이거나 그 연령에 거의 도달한 새의 암컷을 표적 콜로니-형성 면역원으로 접종시키고;

B. 새 또는 새의 알에서 표적 콜로니-형성 면역원에 대한 항체-함유 내용물의 생성을 허용하기에 충분한 시간 동안 방치하며;

C. 상기 새가 낳은 알을 수집하고;

D. 껍질로 부터 알의 항체-함유 내용물을 분리하며;

E. 상기 수집한 알의 분리된 내용을 혼합하고; 또

F. 상기 수집한 알의 분리된 내용물의 혼합물을 동물에 투여함으로써 표적 콜로니-형성 면역원에 대한 항체가 동물의 호흡기관에서 표적 콜로니-형성 면역원의 부착을 억제하는 것을 포함하는,

동물의 호흡기관에 대한 표적 콜로니-형성 면역원의 부착을 억제하여 상기 면역원의 번식을 감소시킴으로써 동물의 호흡기 질환을 감소시키는 방법.
제 26항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 미코플라스마 플레우로뉴모니아애(Mycoplasma pleuropneurmoniae), 엠. 히포뉴모니아(M. hypopneumonia), 및 엠. 보비스(M. bovis)를 비롯한 호흡기 세균류로 부터 선택되는 방법.
제 26항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 P. 물티코다(P. multicoda), 엠. 해몰리티카(M. hemolytica), 에이치. 솜누스(H. sommnus) 및 에이치. 수이스(H. suis)를 비롯한 호흡기 세균류로부터 선택되는 방법.
제 26항에 있어서, 상기 콜로니-형성 면역원은 소의 합포체성 바이러스(bovine respiratory syncytial virsu: BRSV), 소의 바이러스성 설사(BVD), 소의 파라인플루엔자(BPI₃) 및 전염성 소의 리노트로체이투스(IBR) 바이러스를 비롯한 호흡기 바이러스류로부터 선택되는 방법.
제 26항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 돼지 인플루엔자(H1N1, H3N2)를 비롯한 호흡기 바이러스류로 부터 선택되는 방법.
제 26항에 있어서, 상기 수집된 알의 혼합된 분리 내용물을 담체 물질과 혼합하는 것을 포함하는 방법.
제 31항에 있어서, 상기 수집된 알의 분리된 내용물의 혼합물을 파스퇴르 처리시켜 병원성 미생물을 제거하는 것을 포함하는 방법.
제 32항에 있어서, 상기 수집된 알의 분리된 내용물의 파스퇴르 처리된 혼합물을 담체 물질상에 저장하는 것을 포함하는 방법.
제 26항에 있어서, 상기 알의 항체-함유 내용물은 분무 또는 동물 사료에 분출하는 것에 의해 동물에 투여되는 미생물 부착 억제제.
제 34항에 있어서, 상기 물질은 유장, 당밀, PBS 및 대두유를 비롯한 물질로 이루어진 군으로부터 선택되는 미생물 부착 억제제.
제 26항에 있어서, 항체-함유 내용물은 동물에 항체-함유 내용물을 분무하는 것에 의해 투여되는 방법.
제 26항에 있어서, 항체-함유 내용물은 동물에 항체-함유 내용물을 경비 주사하는 것에 의해 투여되는 방법.
제 26항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 미코플라스마 플레우로뉴모니아애(Mycoplasma pleuropneurmoniae), 엠. 히포뉴모니아(M. hypopneumonia), 및 엠. 보비스(M. bovis)를 비롯한 호흡기 세균류로 부터 선택되는 방법.
제 26항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 P. 물티코다(P. multicoda), 엠. 해몰리티카(M. hemolytica), 에이치. 솜누스(H. sommnus) 및 에이치. 수이스(H. suis)를 비롯한 호흡기 세균류로부터 선택되는 방법.
제 26항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 돼지 인플루엔자 (H1N1, H3N2)를 비롯한 호흡기 바이러스 류부터 선택되는 면역원인 미생물 부착 억제제.
제 26항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 소의 합포체성 바이러스(bovine respiratory syncytial virsu: BRSV), 소의 바이러스성 설사(BVD), 소의 파라인플루엔자(BPI₃) 및 전염성 소의 리노트로체이투스(IBR) 바이러스를 비롯한 호 흡기 바이러스 류로 부터 선택되는 미생물 부착 억제제.
A. 알을 낳는 연령이거나 그 연령에 거의 도달한 새의 암컷을 표적 콜로니-형성 면역원으로 접종시키고;

B. 새에서 또는 새의 알에서 표적 콜로니-형성 면역원에 대한 항체-함유 내용물의 생성을 허용하기에 충분한 시간 동안 방치하며;

C. 상기 새가 낳은 알을 수집하고;

D. 껍질로 부터 알의 항체-함유 내용물을 분리하며; 또

E. 상기 수집한 알의 분리된 내용을 혼합하는 것을 포함하는,

인간의 호흡기관에서 표적 콜로니-형성 면역원의 부착을 억제하기 위해 인간에게 투여하기 위한 미생물부착 억제제의 제조 방법.
제 42항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 인간에서 호흡기 질환을 유발하는 것으로 알려진 방법.
제 42항에 있어서, 상기 표적 콜로니-형성 면역원은 돼지 인플루엔자(H1N1, H3N2)를 비롯한 호흡기 바이러스류로부터 선택되는 방법.
제 42항에 있어서, 상기 알의 분리된 항체-함유 내용물을 담체 물질과 혼합하는 것을 포함하는 방법.
제 42항에 있어서,

A. 상기 알의 분리된 항체-함유 내용물을 혼합하고; 또

B. 상기 알의 혼합된 분리 항체-함유 내용물을 파스퇴르 처리시켜 병원성 미생물을 제거하는 것을 포함하는 방법.
제 46항에 있어서, 상기 알의 분리된 항체-함유 내용물의 파스퇴르 처리된 혼합물을 담체 물질 상에서 저장하는 것을 포함하는 방법.
제 47항에 있어서, 담체 물질이 대두유, 당밀, 건조증류립 및 사탕무 과육을 포함하는 군으로부터 선택되는 방법.