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KR20050059001A - 치료적 처리를 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

치료적 처리를 위한 조성물 및 방법 Download PDF

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KR20050059001A
KR20050059001A KR1020047021602A KR20047021602A KR20050059001A KR 20050059001 A KR20050059001 A KR 20050059001A KR 1020047021602 A KR1020047021602 A KR 1020047021602A KR 20047021602 A KR20047021602 A KR 20047021602A KR 20050059001 A KR20050059001 A KR 20050059001A
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antibody
patient
cells
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자네트 라자로비츠
아브라함 님로드
하지트 호치-마르-챠임
아비그도르 레바논
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사비언트 파마슈티컬즈 인코퍼레이티드
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Abstract

본 발명은 제제와 항체, 또는 그 단편을 이용하는 조성물에 관한 것이다. 이들 조성물에서, 항암, 항전이, 항백혈병, 항질병, 항부착, 항혈전증, 항재발협착, 항자가면역, 항응집, 항박테리아, 항바이러스, 또는 항염증 제제와 같은 제제를 비롯한 상기 제제는 상기 항체, 또는 그 단편에 복합되거나, 배합되거나 접합될 수 있다. 또한, 상기 제제 및/또는 상기 항체 또는 그 단편은 준임상적 양으로 상기 조성물에 존재할 수 잇으며, 준임상적 양은 상기 제제가 단독으로 투여될 때 임상적으로 효과적인 것으로 발견되는 상기 제제의 양보다 적은 양이다. 바람직하게는, 본 발명의 이들 조성물에서, 상기 제제는 안트라사이클린 또는 그 유도체, 예를 들어 독소루비신(아드리아마이신) 또는 그 유도체이다.

Description

치료적 처리를 위한 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR THERAPEUTIC TREATMENT}
본 발명은 항암 활성, 항전이 활성, 항백혈병 활성, 항바이러스 활성, 항감염 활성, 및/또는 염증 질병, 비정상적인 또는 병인성 부착에 관련되는 질병, 혈전증 및/또는 재발협착, 비정상적인 또는 병인성 응집에 관련되는 질병, 및 자가 면역 질병, 심근경색과 같은 심혈관 질병, 망막병증 질병, 황화된 티로신-의존성 단백질-단백질 상호작용에 의해 야기되는 질병, 및 질병 세포와 같은 기타 질병에 대항하는 활성을 가질 수 있는 제제 및 항체를 이용하는, 치료 및 진단 조성물 및 방법에 관한 것이다.
항체, 파아지 디스플레이, 및 조직 표적화
치료제의 조직-선택적 표적화는 약학 산업에서 새롭게 나타나고 있는 분야이다. 표적화에 기초한 새로운 암 치료는 독성을 감소시키고 전체적인 효율을 증가시키는 한편, 치료의 특이성 및 성능을 증가시키기 위해 고안되었다. 종양-관련 항원에 대한 마우스 모노클로날 항체(MAb)는 독소, 방사성뉴클레오티드, 및 화학치료적 접합체를 종양에 표적화시키기 위한 노력에 이용되었다. 또한, CD19, CD20, CD22 및 CD25와 같은 분화 항원이 조혈암의 치료에서 암 특이적 표적으로 이용되었다. 광범위하게 연구되었음에도 불구하고, 이 접근법은 몇 가지 한계가 있다. 한 가지 한계는 선택적 결합을 나타내는 적절한 모노클로날 항체를 분리하기가 어렵다는 것이다. 두번째 한계는 성공적인 항체 분리를 위한 선결 조건으로서 높은 항체 면역원성을 필요로 한다는 것이다. 세 번째 한계는 최종 생성물이 비인간 서열을 포함하여 비인간 물질에 대한 면역 반응(예, 인간 항-마우스 항체-HAMA 반응)을 야기한다는 것이다. HAMA 반응은 종종 보다 짧은 혈청 반감기를 야기하며 반복적인 치료를 막아 항체의 치료 가치를 감소시킨다. 이 후자의 한계는 쥐과 기원의 키메릭 또는 인간화된 모노클로날 항체의 조작 및 인간 항체의 발견에 대한 관심을 자극하였다. 이 접근법의 다른 한계는 이것은 단지 공지되고 정제된 항원에 대해 생성된 단일 항체 종만의 분리를 가능하게 한다는 것이다. 더욱이, 이 방법은 종양 세포 뿐만 아니라 정상 세포상에 존재하는 세포 표면 마커에 대한 항체도 분리되도록 하므로 선택적이지가 않다.
암을 치료하기 위한 MAb의 치료 효능에 영향을 주는 여러 가지 인자가 있다. 이들 인자는 종양 세포상에서의 항원 발현의 특이성, 발현 정도, 항원의 이질성 및 종양 덩어리의 접근성을 포함한다. 백혈병 및 림프종은 일반적으로 암종과 같은 고형 종량보다 항체를 이용한 치료에 보다 반응성이다. MAb는 신속하게 혈류중의 백혈병 및 림프종 세포에 결합하며 림프 조직내의 악성 세포에 쉽게 침투하여 림프암은 MAb-계 치료를 위한 우수한 후보자가 된다. 이상적인 시스템은 악성 자손 세포를 생산하는 줄기 세포의 세포 표면상의 마커를 인식하는 MAb를 동정하도록 한다.
파아지 라이브러리는 항체, 호르몬 및 수용체와 같은 분리되고, 미리결정된 표적 단백질에 결합하는 임의의 단일쇄 Fv(scFv)를 선별하기 위해 이용된다. 또한, 일반적으로 항체 디스플레이 라이브러리 및 구체적으로 파아지 scFv 라이브러리의 이용은 특이적이고 아직 인식되지 않고 결정되지 않은 세포 표면 부(moiety)를 표적화하기 위한 독특한 분자를 발견하는 대안적 수단을 촉진한다.
백혈병, 림프종 및 골수종은 골수 및 림프 조직에서 생겨나는 암이며, 세포의 비조절 성장에 관련된다. 급성 림프모구백혈병(ALL)은 특이적인 임상- 및 면역학적 특성에 의해 정의되는 비균질 질병이다. 다른 형태의 ALL처럼, B-세포 ALL(B-ALL)의 대부분의 경우의 명확한 원인은 알려져 있지 않으나, 많은 경우 이 질병은 단일 세포의 DNA에서의 후천적 유전자 변이에 의해 DNA가 비정상이 되고 연속적으로 늘어남으로써 생긴다. B-ALL을 앓고 있는 환자의 예후는 어린이 및 성인 모두에서, 다른 백혈병 환자들보다 상당히 나쁘다.
급성 골수 백혈병(AML)은 정상 조건하에서 골수 시리즈의 최종 분화된 세포(적혈구, 과립구, 단핵구, 및 혈소판)가 되는 선조 세포를 가진 종양의 비균질 그룹이다. 다른 형태의 종양에서처럼, AML은 정상적으로 분화된 골수 세포가 상대적으로 미분화된 모세포로 치환되도록 하는 후천성 유전자 변이와 관련되며, 하나 이상의 초기 골수 분화 타입을 나타낸다. AML은 일반적으로 골수에서 발생하며, 적게는, 이차 조혈 기관에서 발생한다. AML은 주로 성인에서 발생하며, 15 - 40세에서 가장 많이 발생하지만, 또한 어린이와 다른 성인들에서도 발생하는 것으로 알려져 있다. AML을 가진 거의 모든 환자는 임상적 완화를 얻기 위해서는 진단 후 즉시 치료를 요하며, 이 경우 순환하는 미분화된 모세포의 비정상적인 수준의 증거는 없다.
오늘날, 종양 세포에 대한 세포용해 활성을 유도하는 다양한 모노클로날 항체가 개발되었다. P185 - 성장 인자 수용체(HER2)-의 세포외 도메인에 대해 형성된 모노클로날 항체 MuMAb4D5의 인간화된 버젼이 FDA에 의해 승인되었으며, 인간 유방암 치료를 위해 이용되고 있다(미국 특허 제 5,821,337호 및 5,720,954호). 결합 후, 상기 항체는 HER2 성장 인자 수용체에 의존성인 종양 세포 성장을 억제할 수 있다. 또한, 림프종과 관련된 것들을 비롯한, 말초 B 세포의 급속한 고갈을 야기하는 CD20에 대한 키메릭 항체가 최근에 FDA에 의해 승인되었다(미국 특허 제 5,843,439호). 이 항체의 표적 세포에의 결합은 보체-의존성 용혈을 일으킨다. 이 제품은 최근에 승인되었으며 현재 저급 B-세포 비-호킨스 림프종의 치료에 이용되고 있다.
몇 가지 다른 인간화된 및 키메릭 항체가 현재 개발중이거나 또는 임상 시험중이다. 또한, 골수 백혈병 세포의 대부분의 타입뿐만 아니라 정상 골수 세포에서도 발현되는 CD33 항원과 특이적으로 반응하는 인간화된 Ig는 항암제 칼리케미신(calicheamicin) CMA-676에 접합되었다(Sievers et al.,Blood Supplement, 308, 504a(1997)). 약물 MYLOTARG(등록상표)로 알려진 이 접합체는 최근에 FDA 승인을 받았다(Caron et al., Cancer Supplement, 73,1049-1056 (1994)). 그 세포용혈 활성에 비추어, 현재 임상 시험중인 추가의 항-CD33 항체(HumM 195)는 제로닌 독소(McGraw etal.,Cancer Immunol. Immunother, 39,367-374 (1994)) 및 방사성동위원소 131I(Caron et al., Blood 83, 1760-1768 (1994)), 90Y (Jurcic etal., Blood Supplement, 92,613a (1998)) 및 213Bi (Hummetal., Blood Supplement,38 :231P (1997))를 비롯한 몇 가지 세포독성 제제에 접합되었다.
백혈구 항원 CD45에 대한 키메릭 항체(cHuLym3)은 사람 백혈병 및 림프종의 치료를 위한 임상 연구중이다 (Sun et al., Cancer Inamunol. Immunother., 48,595-602 (2000)). 시험관내 분석에서, 특이적인 세포 용혈이 ADCC(항체 의존성 세포-매개 세포독성) 분석에서 관찰되었다(Henkart, Immunity, 1, 343-346 (1994); Squier and Cohen, Current Opin. Immunol., 6,447-452 (1994)).
마우스 모노클로날 인간화 및 키메릭 항체의 구성과 대조적으로, 파아지 디스플레이 기법의 이용은 완전한 인간 서열을 포함하는 scFv의 분리를 가능하게 한다. 파아지 디스플레이 기법에서 유래한 scFv 클론에 기초한 인간 TGFb2 수용체에 대한 완전한 인간 항체가 최근에 개발되었다. TGFb2의 결합과 경쟁할 수 있는 완전한 인간 IgG4로 전환된 이 scFv는(Thompson et al., J. Immunol Methods, 227,17-29 (1999)), 강한 항-증식 활성을 갖는다. 당업자에게 공지된 이 기법은 하기 문헌에서 보다 구체적으로 개시된다: Smith, Science, 228, 1315 (1985); Scott et al, Science, 249,386-390 (1990); Cwirla et al., PNAS, 87,6378-6382 (1990); Devlin et al., Science, 249,404-406 (1990);Griffiths et al., EMBO J., 13 (14), 3245-3260 (1994); Basset al., Proteins, 8, 309-314 (1990);McCafferty et al., Nature, 348,552-554 (1990); Nissim et al., EMBO J., 13,692-698(1994) ; 미국 특허 5,427,908호, 5,432,018호, 5,223,409호 및 5,403,484호, lib.
분리된 scFv 항체 분자를 위한 리간드
혈소판, 피브리노겐, GPIb, 셀렉틴, 및 P-셀렉틴 당단백질 리간드-1(PSGL-1) 각각은 비정상 또는 병인성 염증, 비정상 또는 병인성 면역 반응, 자가변역 반응, 전이, 비정상 또는 병인성 부착, 혈전증 및/또는 재발협착, 및 비정상 또는 병인성 응집과 같은 몇 가지 병인성 상태 또는 질병 상태에서 중요한 역할을 한다. 따라서, 혈소판 및 이들 분자와 교차반응하는 항체는 이들 및 다른 병인성 상태에 관련된 질병 및 질환의 진단 및 치료에 유용할 것이다.
혈소판
혈소판은 혈액 시스템의 잘 규명된 구성원이며 지혈, 혈전증 및/또는 재발협착, 및 재발협착에서 중요한 역할을 한다. 혈관 손상은 순차적인 일련의 사건을 특징으로 하는, 지혈로 알려진 과정을 발동시킨다. 손상된 혈관에의 초기 반응은 혈소판이 혈관의 내부 표면상의 영향 영역에 부착하는 것이다. 다음 단계는 많은 혈소판 층이 이전에 부착된 혈소판상에 응집하여 지혈 플러그를 형성하는 것이다. 이 혈소판 덩어리는 혈관벽을 밀봉한다. 지혈 플러그는 피브린 중합체의 침착에 의해 강화된다. 이 응집체는 손상이 회복될 때만 분해된다.
전이에서 혈소판의 중요성
종양 전이는 아마도 암 환자의 생존을 제한하는 가장 중요한 인자일 것이다. 측적된 데이터는 종양 세포가 숙주 혈소판과 상호작용하는 능력은 전이의 필수불가결한 결정인자 중 하나를 대표함을 나타낸다. Leslie Oleksowicz, Z. M. ,"Characterization Of Tumor-Induced Platelet Aggregation: The Role Of Immunorelated GPIb And GPIIb/IIIa Expression By MCF-7 Breast Cancer Cells," Thrombosis Research 79: 261-274 (1995).
종양 세포가 혈소판을 응집시키는 능력은 종양 세포의 전이 능력과 상관됨이 입증되었으며, 종양-유도된 혈소판 응집의 억제는 설치류 모델에서 전이의 억제와 상관됨이 보여졌다. 혈소판과 종양 세포의 상호작용은 막 부착 분자와 아고니스트 분비에 관련됨이 입증되었다. 면역관련된 혈소판 당단백질의 발현이 종양 세포주에서 확인되었다. 혈소판 면역관련 당단백질, GPIb, GPIIb/IIIa, GPIb/IX 및 인테그린 αV 서브유닛이 유방암 세포주의 표면에서 발현됨이 입증되었다. Oleksowicz, Z. M., "Characterization Of Tumor-Induced Platelet Aggregation: The Role Of Immunorelated GPIb And GPIIb/IIIa Expression By MCF-7 Breast Cancer Cells, "Thrombosis Research 79: 261-274 (1995);Kamiyama, M. , et al.,"Inhibition of platelet GPIIb/IIIa binding to fibrinogen by serum factors: studies of circulating immune complexes and platelet antibodies in patients with hemophilia, immune thrombocytopenic purpura, human immunodeficiency virus-related immune thrombocytopenic purpura, and systemic lupus erythematosus, "J Lab Clin Med 117 (3): 209-17 (1991).
Gasic (J. T. B. Gasic et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 61: 46-52 (1968))과 그 동료들은 항체-유도된 저혈소판증이 CT26 결장 샘암종, 루이스 폐암종, 및 B16 흑색종에 의해 생산된 전이의 수와 부피를 크게 감소시킴을 보여주었다. Karpatkin, S. , et al. ,"Role of adhesive proteins in platelet tumor interaction in vitro and metastasis formation in vivo,"J. Clin. Invest. 81 (4): 1012-9 (1988); Clezardin, P. , et al.,"Role of platelet membrane glycoproteins Ib/IX and Ilb/IIIa, and of platelet alpha-granule proteins in platelet aggregation induced by human osteosarcoma cells, "Cancer Res. 53 (19): 4695-700 (1993). 또한, 단일 폴리펩티드쇄(60 kd)가 GPIb에 밀접하게 관련되며 불완전하게 또는 비정상적으로 O-글리코실화된 GPIbα서브유닛에 해당하는 HEL 세포의 표면 막상에 발현되는 것으로 밝혀졌다. Kiefer, N. , et al.,"Expression of platelet glycoprotein Ib alpha in HEL cells, "J. Biol. Chem. 261 (34): 15854-62 (1986).
GPIb 복합체
지혈의 과정에서 각 단계는 혈소판 표면상의 수용체의 존재를 요구한다. 지혈에서 중요한 한 가지 수용체는 당단백질 Ib-IX 복합체(CD42로도 알려짐)이다. 이 수용체는 혈소판이 내피밑층에서 폰 빌레브랜드 인자(vWF)에 결합함으로써 손상 부위의 혈관 벽에 부착(초기 부착)하는 것을 매개한다. 이것은 또한 지혈에서 중요한 두 가지 다른 혈소판 기능에서 중요한 역할을 한다: (a) 동맥 협착 영역에서 고전단에 의해 유도된 혈소판의 응집 및 (b) 저농도의 트롬빈에 의해 유도된 혈소판 활성화.
GPIb-IX 복합체는 혈소판 혈장막의 외부 표면의 주요 성분중 하나이다. GPIb-IX 복합체는 세 가지의 막-확장 폴리펩티드를 포함한다: GPIb의 이황화-연결된 130 kDa α-쇄 및 25 kDa β-쇄 및 비공유적으로 연합된 GPIX(22kDa). 효율적인 세포 표면 발현 및 CD42 복합체의 기능을 위해서는, 모든 네 유닛이 혈소판 막상에서 동몰량으로 제시되며, 이는 상기 세 서브유닛이 복합체로 적절히 조립되는 것이 혈장 막의 완전한 발현에 필요함을 나타낸다. GPIb의 α-쇄는 세 가지 다른 구조 도메인으로 이루어진다: (1) 루이신-풍부 반복 서열 및 Cys-결합된 인접 서열을 함유한 구형 N- 말단 펩티드 도메인; (2) 매우 당화된 뮤신-형 거대당펩티드 도메인; 및 (3) GPIbβ에의 이황화 결합과 경막 서열 및 세포질 서열을 함유한 막-연합된 C-말단 영역.
몇 가지 증거는 GPIb-IX 복합체의 vWF와 트롬빈-결합 도메인이 GPIbα의 아미노 말단의 약 300 아미노산을 포괄하는 구형 영역에 존재함을 나타낸다. 사람 혈소판 GPIb-IX 복합체는 혈소판 기능과 반응성 둘다를 매개하는 핵심 막 수용체이다. GPIb에 의한 내피밑층-결합된 vWF의 인식은 혈소판이 손상된 혈관에 부착하도록 한다. 또한, GPIbα에의 vWF의 결합은 또한 혈소판 활성화를 유도하며, 이는 GPIb-IX의 세포질 도메인과 세포골격 또는 포스포리파제 A2의 상호작용에 관련될 수도 있다. 더욱이, GPIbα는 α-트롬빈을 위한 고친화성 결합 부위를 함유하여, 이것은 아직 정확히 밝혀지지 않은 기작에 의해, 혈소판 활성화를 촉진한다.
GPIbα의 N-말단 구형 도메인은 음전하를 띤 아미노산의 집단을 함유한다. 몇가지 증거는 GPIb-IX 복합체를 발현하는 형질감염된 CHO 세포에서 그리고 혈소판 GPIbα에서, 이 도메인에 함유된 세 가지 티로신 잔기가(Tyr-276, Tyr-278, 및 Tyr-279) 황화를 일으킴을 나타낸다.
단백질 황화
단백질 황화는 설페이트가 당 측쇄 또는 폴리펩티드 백본에 효소적 공유 부착하는 것에 관련되는 널리 퍼진 번역후 변형이다. 이 변형은 트랜스-골지 구획에서 발생하며, 따라서 이 구획을 가로지르는 단백질에만 영향을 준다. 그러한 단백질은 분비 단백질, 과립으로 가는 단백질, 및 혈장 막 단백질의 세포외 영역을 포함한다. 티로신은 현재 황화를 일으키는 것으로 알려진 아미노산 잔기이다. J. W. Kehoe et al Chemistry and Biol 7: R57-R61 (2000). 다른 아미노산, 예를 들어 트레오닌은 아마도 또한 특히 질병 세포에서 황화를 일으킬 수도 있다.
많은 단백질이 티로신-황화되는 것으로 밝혀졌으나, GPIb상에서 발견된 것과 같은, 단일 폴리펩티드내의 셋 또는 넷의 황화된 티로신의 존재는 흔하지 않다. 혈소판 및 거대핵세포에 의해 발현되는 GPIbα(CD42)는 혈소판이 vWF와의 결합을 통하여 내피밑층에 부착하고 롤링하는 것을 매개하며, 또한 그 N-말단 도메인에서 많은 음전하를 함유한다. 그러한 높은 산성 및 친수성 환경은 황화를 위한 선결조건으로 생각되며 이는 티로실단백질 설포트랜스퍼라제가 산성 아미노 잔기에 이웃한 티로신을 인식하고 황화시키기 때문이다. J. R. Bundgaard et al., JBC 272: 21700-21705 (1997). GPIbα의 산성 영역의 완전한 황화는 주목할만한 밀도의 음전하(19 아미노산 스트레치내의 13 음전하)를 갖는 영역을 생성하여 다른 단백질과의 정전기적 상호작용을 위한 후보 부위로 만든다.
셀렉틴과 PSGL-1
P-, E-, 및 L-셀렉틴은 다른 기능 중에서도 혈관 내피세포상에서의 백혈구의 롤링을 매개하는 부착 분자의 패밀리이다. P-셀렉틴은 혈소판내의 과립에 저장되며 트롬빈, 히스타민, 포볼 에스테르, 또는 다른 자극성 분자에 의한 활성화 후 표면으로 수송된다. P-셀렉틴은 또한 활성화된 내피 세포상에 발현된다. E-셀렉틴은 내피 세포상에 발현되며, L-셀렉틴은 호중구, 단핵구, T 세포, 및 B 세포상에 발현된다.
PSGL-1(CD162로도 불림)은 P-셀렉틴, E-셀렉틴, 및 L-셀렉틴을 위한 뮤신 당단백질 리간드이다. PSGL-1은 PACE(쌍을 이룬 염기성 아미노산 전환 효소) 절단 부위를 갖는 이황화-연결된 동종이량체이다. PSGL-1은 또한 세 개의 가능한 티로신 황화 부위를 가지며 이 부위에 이어 프롤린, 세린, 및 트레오닌이 많은 약 15개의 10량체 반복서열이 존재한다. PSGL-1의 세포외 부분은 세 개의 N-결합된 당화 부위를 함유하며 많은 시알화된, 푸코실화된 O-연결된 올리고당 측쇄를 갖는다. K. L. Moore et al. , JBC 118: 445-456 (1992). N-글리칸 부위의 대부분과 O-글리칸 부위의 다수가 점령된다. 인간 HL-60 세포로부터의 PSGL-1의 O-글리칸의 구조가 결정되었다. 이들 O-글리칸의 서브세트는 코어-2, 시알화되고 푸코실화된 구조이며 이 구조는 셀렉틴에의 결합을 위해 필요하다. PSGL-1의 아미노-말단 영역의 티로신 황화는 또한 P-셀렉틴과 L-셀렉틴에의 결합을 위해 필요하다. 또한, 아마도 번역 후 절단되는 N-말단 프로펩티드가 있다.
PSGL-1은 HL60 세포에서는 361 잔기를 가지며, 267 잔기는 세포외 영역이고, 25 잔기는 경막 영역이며, 69 잔기는 세포내 영역이다. PSGL-1을 암호하는 서열은 단일 엑손내에 있으며, 따라서 교번적 스플라이싱이 가능하지 않다. 하지만, HL60 세포 및 대부분의 세포주내의 PSGL-1은 세포외 영역에 존재하는 10 잔기 컨센서스 서열의 15개의 연속 반복물을 가지며, 그러나 다형핵 백혈구, 단핵구, 및 몇 가지 다른 세포주(대부분의 천연 백혈구 포함)에는 상기 서열의 14 및 16개 반복물이 있다. PSGL-1은 세포 표면상에서 이황화-결합된 동종이량체를 형성한다. V. Afshar-Kharghan et al., Blood 97: 3306-3312 (2001).
PSGL-1은 호중구상에서는 250 kDa과 160 kDa 둘다의 겉보기 분자량을 갖는 이량체로서 발현되는 반면, HL60상에서는 이량체는 ~ 220 kDa이다. 환원성 조건하에서 분석될 경우, 각 서브유닛은 절반이 환원된다. 분자량의 차이는 다른 수의 10량체 반복물의 존재에 의해 야기되는 분자의 다형성때문일 수도 있다. Leukocyte Typing VI. Edited by T. Kishimoto et al. (1997).
PSGL-1은 호중구, 단핵구, 백혈구, B 세포의 서브세트, 및 모든 T 세포와 같은 대부분의 혈액 백혈구상에 발현되며 P-셀렉틴상에서의 호중구의 롤링을 매개한다. Leukocyte Typing VI. Edited by T. Kishimoto et al. (1997). PSGL-1은 또한 L-셀렉틴과의 결합을 통해 호중구-호중구 상호작용을 매개하여 염증을 매개할 수도 있다. Snapp, et al., Blood 91 (1) : 154-64 (1998).
PSGL-1은 활성화된 내피세포, 활성화된 혈소판, 및 다른 백혈구 및 염증 부위상에서 백혈구의 롤링을 매개한다.
인간 PSGL-1, KPL1에 대한 시판되는 모노클로날 항체는 PSGL-1과 P-셀렉틴 사이 그리고 PSGL-1과 L-셀렉틴 사이의 상호작용을 억제하도록 생성되고 그러한 것으로 나타났다. KPL1 에피토프는 PSGL-1의 티로신 황화 컨센서스 모티프(YEYLDYD)에 맵핑되었다. KPL1은 단지 이 특정 에피토프만을 인식하며 B-CLL 세포, AML 세포, 전이성 세포, 다중 골수종 세포 등과 같은 다른 세포상에 존재하는 황화된 에피토프와는 교차반응하지 않는다.
백혈구 롤링은 염증에서 중요하며, P-셀렉틴(활성화된 내피 및 혈소판에서 발현되며, 손상 부위에서 고정될 수도 있음)과 PSGL-1 사이의 상호작용은 혈관벽에서 백혈구의 구속 및 롤링에 도움이된다. Ramachandran et al., PNAS 98 (18) : 10166-71 (2001); Afshar-Kharghan, et al., Blood 97 (10): 3306-7 (2001).
세포 롤링은 또한 전이에서 중요하며, 내피 세포에서의 P- 및 E-셀렉틴은 전이 세포에 결합하여 혈류로부터 주위 조직으로의 분출을 촉진하는 것으로 생각된다.
혈소판은 또한 전이 과정에 관련된다: 전이성 암 세포가 혈류에 들어갈 때, 종양 세포를 피복하는, 혈소판과 백혈구로 구성된 다세포 복합체가 형성된다. 미세혈전으로 불리는 이들 복합체는 종양 세포가 면역 시스템을 피하도록 돕는다. 혈소판에 의한 종양 세포의 피복은 혈소판에 의한 P-셀렉틴의 발현을 필요로 한다.
P- 및 L-셀렉틴의 억제자인 헤파린을 이용한 치료는 종양 세포-혈소판 상호작용을 억제한다. 시알화된, 푸코실화된 뮤신 리간드를 제거하는 O-시알로글리코프로테아제로 종양 세포를 전처리하면 이 역시 종양 세포-혈소판 복합체 형성을 억제하였다. 생체내 실험은 이들 치료 중 하나는 보다 많은 단핵구가 순환하는 종양 세포와 연합하도록 함을 나타내어, 감소하는 혈소판 결합이 면역 세포에 의한 순환 종양 세포에의 접근을 증가시킴을 제안한다. Varki and Varki, Braz. J. Biol. Res. 34 (6): 711-7 (2001).
PSGL-1과 GPIb는 구조적으로 유사하여 뮤신-유사한 매우 당화된 리간드 결합 영역을 갖는다. Afshar-Kharghan, et al., Blood 97 (10): 3306-7 (2001).
PSGL-1은 모든 백혈구상에서 발견되었다: 호중구, 단핵구, 림프구, 활성화된 말초 T-세포, 과립구, 호산구, 혈소판 및 일부 CD34 양성 줄기 세포 및 일부 B-세포 서브세트. P-셀렉틴은 활성화된 혈소판과 내피 세포상에서 선택적으로 발현된다. P-셀렉틴과 PSGL-1 사이의 상호작용은 혈관벽에서의 백혈구의 롤링을 증진시키며, 혈관 부위에서의 백혈구의 비정상적인 축적은 다양한 병리학적 염증을 야기한다. PSGL-1상의 개별 티로신 설페이트의 입체-특이적인 기여는 PSGL-1에의 P-셀렉틴의 결합에 중요하다. 전하 또한 결합에 중요하다: 감소하는 NaCl(150에서 50 mM로)은 결합을 증가시켰다(Kd ~ 75 mM). PSGL-1 상에서의 티로신-황화는 P-셀렉틴상에서의 PSGL-1 부착을 증가시키지만, 반드시 필요한 것은 아니다. PSGL-1 티로신 황화는 모든 전단 속도에서 보다 느린 롤링 부착을 지지하며 보다 높은 전단 속도에서 롤링 부착을 지지한다. (Rodgers SD, et al., Biophys J. 81: 2001-9 (2001)).
피브리노겐
두 가지 형태의 정상적인 사람 피브리노겐이 있어, 피브리노겐 γ 주요 변이체 및 피브리노겐 γ 프라임 소수 변이체이며, 이들 각각은 정상 개인에서 발견된다. 보다 풍부한 형태인(신체에서 발견되는 피브리노겐의 ~ 90%를 구성함) 정상 피브리노겐은 두 개의 동일한 55 kDa 알파(α)쇄, 두 개의 동일한 95 kDa 베타(β)쇄, 및 두 개의 동일한 49.5 kDa 감마(γ)쇄로 구성된다. 덜 풍부한 형태인( 신체에서 발견되는 피브리노겐의 ~ 10%를 구성함) 정상 변이체 피브리노겐은 두 개의 동일한 55 kDa 알파(α)쇄, 두 개의 동일한 95 kDa 베타(β)쇄, 하나의 49.5 kDa 감마(γ)쇄, 및 하나의 50.5 kDa 감마 프라임(γ')쇄로 구성된다. 감마 및 감마 프라임 쇄는 둘다 동일한 유전자에 의해 암호되며 3' 말단에서 교번적 스플라이싱이 발생한다. 정상 감마 쇄는 아미노산 1-411로 구성된다. 정상 변이체 감마 프라임 쇄는 427 아미노산으로 이루어지며, 아미노산 1-407은 정상 감마쇄와 동일하며, 아미노산 408-427은 VRPEHPAETEYDSLYPEDDL이다. 이 영역은 정상적으로는 트롬빈 분자가 차지한다.
피브리노겐은 이온화된 칼슘의 존재하에서 트롬빈의 작용에 의해 피브린으로 전환되어 혈액의 응집을 일으킨다. 피브린은 또한 혈전 및 급성 염증성 삼출액의 성분이다.
세포-세포 상호작용, 세포-매트릭스 상호작용, 혈소판-혈소판 상호작용, 혈소판-세포 상호작용, 혈소판-매트릭스 상호작용, 세포 롤링 및 부착, 및 지혈에서중요한 역할을 하는 혈소판, 및 분자(예, 피브리노겐, GPIb, 셀렉틴 및 PSGL-1)는 또한 비정상 또는 병인성 염증, 비정상 또는 병인성 면역 반응, 자가면역 반응, 전이, 비정상 또는 병인성 부착, 혈전증 및/또는 재발협착, 및 비정상 또는 병인성 응집과 같은 병인성 상태 또는 질병 상태에서 중요한 역할을 한다. 따라서, 혈소판 및 이들 분자와 교차반응하는 항체는 이들 및 다른 병인성 상태에 관련된 질병과 질환의 진단 및 치료에서 유용하다.
본 발명의 목적은 항암, 항전이, 항백혈병, 항질병, 항부착, 항혈전증, 항재발협착, 항자가면역, 항응집, 항박테리아, 항바이러스, 또는 항염증 제제와 같은 제제를 비롯한 제제, 항체 또는 그 단편의 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 세포 롤링; 염증; 자가면역 질병; 전이;종양 세포의 성장 및/또는 복제; 종양 세포의 사멸; 백혈병 세포의 성장 및/또는 복제; 백혈병 세포의 사멸 속도; 질병 세포의 항질병 제제에 의한 손상에의 민감성; 종양 세포의 항암 제제에 의한 손상에의 민감성; 항백혈병 제제에 의한 손상에 대한 백혈병 세포의 민감성; 종양 또는 암 환자에서 종양 세포의 수; 및 백혈병 환자에서 백혈병 세포의 수에 관련된 상태를 비롯한 다양한 상태를 치료하기 위해 제제 및 항체 또는 그 단편을 이용하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 추가 목적은 제제 및 항체 또는 그 단편을 이용하는 치료적 처리 방법을 제공하는 것이며, 이때 상기 제제 및/또는 항체 또는 그 단편은 그 제제가 단독으로 투여될 때 임상적으로 효과적인 것으로 일반적으로 밝혀진 제제의 양보다 적은 양으로 상기 조성물내에 존재한다.
본 발명의 상기 및 기타 목적이 여기서 제공된다.
도 1은 독소루비신과 Y1을 단독으로, 순차적으로, 또는 조합으로 투여한 후 시간의 함수로서 MOLT-4 종양-함유 마우스의 생존 퍼센트를 나타낸다.
본 발명의 개요
본 발명은 제제 및 항체 또는 그 단편을 보유한 조성물을 제공한다. 본 발명 조성물은 상기 제제가 항체 또는 그 단편과 복합화될 수 있는 것이며; 상기 제제는 항체, 또는 그 단편과 배합될 수 있으며; 또는 상기 제제는 항체 또는 그 단편에 접합될 수 있다. 본 발명 조성물의 항체 또는 그 단편은 하나 이상의 항체 또는 단편의 복합체 또는 응집체로서 존재할 수 있다.
본 발명 조성물에서, 상기 제제 및/또는 항체, 또는 그 단편은 준임상적 양으로 존재할 수 있다. 이 준임상적 양은 제제에 대한 민감성, 특히 질병 세포의 민감성을 효과적으로 바꾸기에 불충분할 수 있다. 상기 제제는 항암, 항전이, 항백혈병, 항질병, 항부착, 항혈전증, 항재발협착, 항자가면역, 항응집, 항박테리아, 항바이러스, 또는 항염증성일 수 있다. 바람직하게는, 상기 제제는 안트라사이클린 또는 그 유도체이며, 독소루비신, 다우노루비신, 이다루비신, 모르폴리노독소루비신, 모르폴리노다우노루비신, 메톡시모르폴리닐독소루비신, 또는 그 유도체 또는 조합일 수 있다. 가장 바람직하게는, 상기 제제는 독소루비신 또는 그 유도체이다.
더욱이, 상기 제제의 준임상적 양은 세포 롤링, 염증, 자가 면역 질병, 혈전증, 재발협착, 전이, 또는 종양 세포 또는 백혈병 세포의 생존, 성장, 및/또는 복제를 효과적으로 억제하기에 불충분할 수 있다. 또한, 상기 제제의 준임상적 양은 종양 환자에서 종양 세포의 수 증가를 효과적으로 억제하거나 백혈병 환자에서 백혈병 세포의 수 증가를 억제하기에 불충분할 수 있다. 또한, 상기 제제의 준임상적 양은 종양 환자에서 종양 세포의 수를 효과적으로 감소시키거나 백혈병 환자에서 백혈병 세포의 수를 효과적으로 감소시키는 데 불충분할 수 있다. 부가적으로, 상기 제제의 준임상적 양은 종양 세포 또는 백혈병 세포의 사멸을 효과적으로 증가시키거나, 항암제에 의한 손상에 대한 종양 세포의 민감성을 효과적으로 증가시키거나, 또는 항백혈병 제제에 의한 손상에 대한 백혈병 세포의 민감성을 효과적으로 증가시키기에 불충분할 수 있다. 마지막으로, 상기 제제의 준임상적 양은 세포-세포, 세포-매트릭스, 혈소판-매트릭스, 혈소판-혈소판, 및/또는 세포-혈소판 복합체 형성, 응집, 또는 부착을 효과적으로 억제하기에 불충분할 수 있다.
본 발명 조성물의 항체, 또는 그 단편은 서열 번호 1, 서열 번호 2 또는 서열 번호 3의 scFv 항체 단편의 결합 능력을 가질 수 있다. 또한, 상기 항체 또는 그 단편은 펩티드 또는 폴리펩티드의 결합 능력을 가질 수 있으며, 이때 상기 펩티드 또는 폴리펩티드는 서열 번호 4를 갖는 제 1 과변이 영역을 갖는다. 그러한 펩티드 또는 폴리펩티드는 또한 추가로 서열 번호 5를 갖는 제 2 과변이 영역 및/또는 서열 번호 6, 서열 번호 7, 또는 서열 번호 8을 갖는 제 3 과변이 영역을 추가로 가질 수 있다. 상기 항체 또는 그 단편은 scFv 또는 Fab 단편일 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한 제제와 항체 또는 그 단편을 가질 수 있으며, 이때 상기 항체 또는 그 단편은 약 3 내지 약 126 아미노산 잔기 길이의 펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프에 결합하며, 상기 펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프는 적어도 2개의 산성 아미노산과 적어도 1개의 황화된 티로신 잔기를 갖는다. 부가적으로, 본 발명의 조성물은 제제와 항체 또는 그 단편을 가질 수 있으며, 이때 상기 항체 또는 그 단편은 PSGL-1, 피브리노겐 감마 프라임(γ'), GP1bα, 헤파린, 루미칸, 보체 화합물 4(CC4), 인터알파 억제제, 및 프로트롬빈으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 두 가지의 상이한 분자에 결합한다. 또한 부가적으로, 본 발명의 조성물은 제제와 항체, 또는 그 단편을 가질 수 있으며, 상기에서 상기 항체 또는 그 단편은 PSGL-1, 피브리노겐 감마 프라임(γ'), GP1bα, 헤파린, 루미칸, 보체 화합물 4(CC4), 인터알파 억제제, 및 프로트롬빈으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 두 가지의 상이한 분자에 결합하며 B 세포 백혈병 세포, B-CLL 세포, AML 세포, 다중 골수종 세포, 및 전이성 세포로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 세포 타입에 결합한다. 더욱이, 본 발명의 조성물은 제제와 항체 또는 그 단편을 가질 수 있으며, 이때 상기 항체 또는 그 단편은 둘 이상의 에피토프와 교차반응하며, 각 에피토프는 하나 이상의 황화된 티로신 잔기와 둘 이상의 산성 아미노산의 집단 적어도 하나를 포함한다.
본 발명의 조성물에서, 상기 항체 또는 그 단편은 하나 보다 많은 제제에 결합되거나 복합되거나 배합되는 비히클 또는 담체와 결합되거나 복합되거나 배합될 수 있다. 그러한 비히클 또는 담체는 덱스트란, 친유성 중합체, 친수성 중합체, HPMA, 및 리포좀으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 상기 비히클 또는 담체는 독소루비신-장식된 리포좀이다. 다르게는, 바람직하게는, 상기 비히클 또는 담체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 덱스트란이다.
본 발명은 또한 본 발명의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 다양한 방법을 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 또한 본 발명 조성물중 임의의 것을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하여 질병의 효과를 완화시키는 방법, 질병을 방지하는 방법, 질병을 치료하는 방법, 또는 질병의 진전을 억제하는 방법을 제공한다. 본 발명은 세포 롤링, 염증, 자가 면역 질병, 혈전증, 재발협착, 전이, 또는 종양 세포의 성장 및/또는 복제, 백혈병 세포의 성장, 및/또는 복제, 종양 환자에서 백혈병 세포의 수 증가, 또는 백혈병 환자에서 백혈병 세포의 수 증가를 억제하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 종양 세포의 사멸율, 백혈병 세포의 사멸율, 항질병 제제에 의한 손상에 대한 질병 세포의 민감성, 항암제에 의한 손상에 대한 종양 세포의 민감성, 또는 항백혈병 제제에 의한 손상에 대한 백혈병 세포의 민감성을 증가시키는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 종양 환자에서 종양 세포의 수, 백혈병 환자에서 백혈병 세포의 수를 감소시키는 방법을 제공한다. 마지막으로, 본 발명은 세포-세포, 세포-매트릭스, 혈소판-매트릭스, 혈소판-혈소판, 및/또는 세포-혈소판 복합체 형성, 응집, 또는 부착을 억제하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 (i) 항체 또는 그 단편, 및 (ii) 제제를 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 치료적 처리 방법을 제공하며, 상기에서 상기 항체 또는 그 단편중 하나 또는 둘다, 및/또는 상기 제제는 준임상적 양으로 투여된다. 이 방법에서, 상기 제제와 항체 또는 그 단편은 접합되거나 복합되거나 또는 조합으로 투여될 수 있다. 또한, 상기 제제는 항체 또는 그 단편과 별도로 또는 그에 앞서 또는 후속하여, 또는 임의의 다른 순서 또는 배열로 그리고 그 역으로 투여될 수 있다.
정의
항체(Abs), 또는 면역글로불린(IgGs)은 항원에 결합하는 단백질 분자이다. 이들은 이황화 결합에 의해 연결된 네 개의 폴리펩티드 쇄의 단위(2 중쇄 및 2 경쇄)로 구성된다. 상기 쇄들의 각각은 불변 영역과 가변 영역을 갖는다. 이들은 그들의 중쇄 성분에 기초하여 다섯 부류인 IgG, IgM. IgA, IgD, 및 IgE로 분류될 수 있다. IgG 부류는 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함하며 이에 한정되지 않는 여러 하위 부류를 포함한다. 면역글로불린은 B 림프구에 의해 생체내에서 생산되며 특정 외래 항원성 결정인자를 인식하고 그 항원의 제거를 촉진한다.
항체는 항체 복합체를 비롯한 여러 형태로 생산되고 이용될 수 있다. 여기서 이용될 때, 용어 "항체 복합체" 또는 "항체 복합체들"은 다른 항체 또는 항체 단편 또는 단편들과 하나 이상의 항체의 복합체, 또는 둘 이상의 항체 단편들의 복합체를 의미하기 위해 이용된다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, F(ab')2, F(ab'), Fc, 및 Fd 단편을 포함한다.
본 명세서와 청구항에서 이용될 때, Fv는 동일하거나 상이할 수 있는, 인간 항체의 중쇄의 가변 영역과 인간 항체의 경쇄의 가변 영역으로 이루어진 분자로 정의되며, 이때 상기 중쇄의 가변 영역은 경쇄의 가변 영역에 연결되거나, 링크되거나, 융합되거나 공유적으로 부착되거나, 또는 연합된다. Fv는 단일쇄 Fv(scFv) 또는 이황화 안정된 Fv(dsFv)일 수 있다. scFv는 항체의 중쇄 및 경쇄의 각각의 가변 도메인으로 구성되며, 이들은 가요성의 아미노산 폴리펩티드 스페이서 또는 링커에 의해 연결된다. 상기 링커는 분지형일 수도 아닐 수도 있다. 바람직하게는, 상기 링커는 0-15 아미노산 잔기이며, 가장 바람직하게는 링커는 (Gly4Ser)3이다.
Fv 분자 그 자체는 첫번째 쇄와 두번째 쇄로 구성되며, 각 쇄는 제 1, 제 2 및 제 3 과변이 영역을 포함한다. 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인내의 과변이 루프는 상보성 결정 영역(CDR)으로 불린다. 중쇄와 경쇄의 각각에는 CDR1, CDR2 및 CDR3 영역이 있다. 이들 영역은 항원 결합 부위를 형성하는 것으로 생각되며 특이적으로 변형되어 증가된 결합 할성을 얻을 수 있다. 천연에서 이들 영역 중 가장 변이성인 것은 중쇄의 CDR3 영역이다. CDR3 영역은 Ig 분자의 가장 노출된 영역으로 생각되며 여기서 나타나고 제공된 대로, 관찰된 선택적이고/이거나 특이적인 결합 특성을 주로 책임지는 부위이다.
Fv 분자의 단편은 원래의 Fv의 선택적이고/이거나 특이적인 결합 특성을 여전히 보유하는, 원래 Fv보다 작은 임의 분자로 정의된다. 그러한 단편의 예는 (1) Fv의 중쇄만의 단편을 포함하는 미니바디, (2) 항체 중쇄 가변 영역의 작은 분획성 유닛을 포함하는 마이크로바디(PCT 출원 제 PCT/IL99/00581호), (3) 경쇄의 단편을 포함하는 유사한 바디, 및 (4) 경쇄 가변 영역의 기능성 유닛을 포함하는 유사한 바디를 포함하며 이에 한정되지 않는다.
여기서 이용될 때 용어 "Fab 단편"은 면역글로불린의 일가 항원-결합 단편이다. Fab 단편은 경쇄 및 중쇄의 일부로 구성된다.
F(ab')2 단편은 펩신 분해에 의해 얻어진 면역글로불린의 2가 항원 결합 단편이다. 이것은 두 경쇄 및 두 중쇄의 일부를 함유한다.
Fc 단편은 면역글로불린의 비-항원-결합 부분이다. 이것은 중쇄의 카르복시-말단 부분 및 Fc 수용체를 위한 결합 부위를 함유한다.
Fd 단편은 면역글로불린의 중쇄의 가변 영역 및 첫번째 불변 영역이다.
폴리클로날 항체는 면역 반응의 생성물이며 많은 다른 B-림프구에 의해 형성된다. 모노클로날 항체는 단일 세포로부터 유래된다. 폴리펩티드에 적용되고 본 발명에서 정의된 대로, 카세트는 골격으로 작용하는 연속 아미노산의 주어진 서열을 말하며 단일 유닛으로 간주되며 그렇게 조작된다. 아미노산은 하나 또는 두 말단에서 치환되거나, 삽입되거나 제거되거나 부착될 수 있다. 유사하게, 아미노산의 스트레치는 하나 또는 두 말단에서 치환되거나, 삽입되거나 제거되거나 부착될 수 있다.
용어 "에피토프"는 여기서 항체, 항체 단편, 항체 복합체 또는 그 결합 단편 또는 T-세포 수용체를 포함하는 복합체와 상호작용하는 항원성 결정인자 또는 항원 부위를 의미하기 위해 이용된다. 용어 에피토프는 여기서 용어 리간드, 도메인, 및 결합 영역과 상호교환적으로 이용된다.
선택성은 여기서 표적화 분자가 이 표적화 분자에 대해 특이적일 수 있는 세포 타입 또는 세포 상태의 혼합물로부터 하나의 세포 타입 또는 세포 상태를 선택하여 결합하는 능력으로 정의된다.
여기서 이용되는 용어 "친화성"은 수용체(예, 항체상의 하나의 결합 부위)와 리간드(예, 항원성 결정인자) 사이의 결합 강도(결합 상수)의 척도이다. 항체상의 단일 항원-결합 부위와 단일 에피토프 사이의 비공유적 상호작용의 총합의 강도는 그 에피토프에 대한 항체의 친화성이다. 저 친화성 항체는 항원에 약하게 결합하며 쉽게 해리되는 반면, 고친화성 항체는 보다 단단하게 항원에 결합하며 더 오랫동안 결합된 채로 남게 된다. 용어 "친화력(avidity)"은 항원-항체 상호작용의 원자가를 반영하므로 친화성과는 다르다.
항체-항원 상호작용의 특이성: 항원-항체 반응이 특이적임에도 불구하고, 일부 경우에 하나의 항원에 의해 유도된 항체는 다른 무관한 항원과 교차반응할 수 있다. 그러한 교차 반응은 만일 두 상이한 항원이 상동성의 또는 유사한 구조, 에피토프, 또는 그 고정 영역을 공유하거나, 또는 만일 한 에피토프를 위해 특이적인 항체가 유사한 구조 배열 또는 화학적 특성을 보유한 무관한 에피토프에 결합하면 발생한다.
혈소판은 골수 공동내에 감춰지고 이어서 말초 혈류에서 순환하는 거대핵세포의 디스크-형 세포질 단편이다. 혈소판은 응고에서의 주요 역할을 비롯한 몇가지 생리학적 기능을 갖는다. 혈소판은 중심 부분에서 과립을 함유하며, 주변은 투명한 원형질이며 한정된 핵은 없다.
여기서 이용된 교착(agglutination)은 현탁된 박테리아, 세포, 디스크, 또는 다른 유사한 크기의 입자들이 부착하여 덩어리를 형성하게 되는 과정을 의미한다. 상기 과정은 침전과 유사하나 입자가 보다 크고 용액이라기 보다는 현탁액 상태로 있다.
용어 응집(aggregation)은 혈전 또는 지혈 플러그의 형성으로 이끄는 순차적인 기작의 일부로서, 생체외에서 유도된 혈소판, 및 트롬빈과 콜라겐의 덩어리를 의미한다.
보존적 아미노산 치환은 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질 또는 그 단편의 하나 또는 두 아미노산을 변화시키는 방식에 의한 아미노산 조성의 변화로 정의된다. 치환은 일반적으로 유사한 특성을 갖는 아미노산(예, 산성, 염기성, 방향족, 크기, 양성 전하 또는 음성 전하, 극성, 비극성)으로 이루어져 상기 치환은 주요한 방식으로 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질 특성(예, 전하, IEF, 친화성, 친화력, 배열, 용해도) 또는 활성을 실질적으로 변화시키지 않는다. 그러한 보존적 아미노산 치환을 위해 실시될 수 있는 일반적인 치환은 하기와 같은 아미노산의 그룹중에 있을 수 있다:
글리신(G), 알라닌(A), 발린(V), 루이신(L), 및 이소루이신(I)
아스파르트산(A), 및 글루탐산(E)
알라닌(A), 세린(S) 및 트레오닌(T)
히스티딘(H), 리신(K) 및 아르기닌(R)
아스파라긴(N) 및 글루타민(Q)
페닐알라닌(F), 티로신(Y) 및 트립토판(W)
보존적 아미노산 치환은 그 분자의 선택적 및/또는 특이적 결합 특성을 주로 책임지는 과변이 영역에 인접하여뿐만 아니라, 예를 들어 가변 중쇄 카세트와 같은 그 분자의 다른 부분에서 만들어질 수 있다. 부가적으로 또는 다르게는, 변형은 그 분자를 재구성하여 완전한 크기의 항체, 디아바디(이량체), 트리아바디(삼량체) 및/또는 테트라바디(사량체)를 형성시키거나 또는 미니아바디 또는 마이크로바디를 형성시켜 이루어질 수 있다.
파지미드는 플라스미드 DNA를 보유한 파아지 입자로 정의된다. 파지미드는 m13 또는 fd와 같은 필라멘트성 파아지로부터의 복제 기원을 함유하도록 고안된 플라스미드 벡터이다. 이것은 플라스미드 DNA를 보유하므로, 파지미드 입자는 파아지 게놈의 전체 부분을 함유할 충분한 공간을 갖지 않는다. 파아지 게놈으로부터 빠진 성분은 파아지 입자를 패키징하는 데 필수적인 정보이다. 따라서, 파아지를 증식시키기 위해서는, 원하는 파아지 입자를, 빠진 패키징 정보를 보충하는 헬퍼 파아지 균주와 함께 배양하는 것이 필요하다.
프로모터는 RNA 폴리머라제가 결합하여 전사를 개시하는 DNA상의 영역이다.
파아지 디스플레이 라이브러리(파아지 펩티드/항체 라이브러리, 파아지 라이브러리, 또는 펩티드/항체 라이브러리라고도 불림)는 큰 파아지 집단을(일반적으로 108-109) 포함하며, 각 파아지 입자는 다른 펩티드 또는 폴리펩티드 서열을 나타낸다. 이들 펩티드 또는 폴리펩티드 단편은 다양한 길이로 구성될 수 있다. 나타내진 펩티드 또는 폴리펩티드는 사람 항체 중쇄 또는 경쇄로부터 유래될 수 있으나 이에 제한될 필요는 없다.
약학 조성물은 본 발명의 펩티드 또는 폴리펩티드와 약학적 허용 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 제제를 말한다.
약학 제제는 사람, 소, 말, 돼지, 쥐, 개, 고양이, 또는 임의의 다른 온혈 동물을 포함하며 이에 한정되지 않는 포유류의 예방적 치료 또는 진단에 유용한 제제를 말한다. 상기 약학적 제제는 방사성동위원소, 독소, 올리고뉴클레오티드, 재조합 단백질, 항체 단편, 및 항암제를 포함하는 군으로부터 선택된다. 그러한 약학 제제의 예는 어사이클로비어, 간시클로비어 및 지도부딘을 비롯한 항바이러스제; 시로스타졸, 달테파린 소듐, 레비파린 소듐, 및 아스피린을 비롯한 항혈전제/항 재발협착제; 잘토프로펜, 프라노프로펜, 드록시캄, 아세틸 살리실릭 17, 디클로페낙, 이부프로펜, 덱시부프로펜, 수린닥, 나프록센, 암톨메틴, 세레콕시브, 인도메타신, 로페콕시브, 및 니메수리드를 비롯한 항염증제; 레플루노미드, 데니류킨 디프티톡스, 수브레움, 윈로 SDF, 데피브로티드, 및 시클로포스파미드를 비롯한 항자가면역제; 및 리마프로스트, 클로르크로멘, 및 히알루론산을 비롯한 항-부착/항-응집 제를 포함하며 이에 한정되지 않는다.
항백혈병 제제는 항백혈병 활성을 가진 제제이다. 예를 들어, 항-백혈병 제제는 백혈병 또는 미성숙 예비백혈병 세포의 성장을 억제하거나 정지시키는 제제, 백혈병 또는 예비백혈병 세포를 사멸시키는 제제, 백혈병 또는 예비백혈병 세포의 다른 항백혈병 제제에 대한 민감성을 증가시키는 제제, 및 백혈병 세포의 전이를 억제하는 제제를 포함한다. 본 발명에서, 항백혈병 제제는 또한 종양의 혈관신생을 막거나, 억제하거나, 지연하거나 멈추게 하는 항혈관신생 활성을 갖는 제제일 수 있다.
유전자의 발현 패턴은 다양한 조직에서, 특정 시간에, 다양한 조건하에서 생산된 유전자 생성물의 양을 분석함으로써 연구될 수 있다. 유전자는 유전자 생성물의 양이 정상 대조구, 예를 들어 비질병 대조구에서 발견된 것보다 높을 때 "과다 발현되는" 것으로 간주된다.
주어진 세포는 그 표면상에, 주어진 항체에 대한 결합 부위(즉 에피토프)를 갖는 단백질을 발현할 수 있으나, 상기 결합 부위는 제 1 단계(단계 I)로 불릴 수 있는 상태에서 세포에서 숨은 형태로(예, 입체적으로 방해되거나 차단되거나, 또는 항체에 의한 결합에 필요한 특징이 없거나) 존재할 수도 있다. 단계 I은 예를 들어 정상의, 건강한 비질병 상태일 수도 있다. 상기 에피토프가 숨은 형태로 존재할 경우, 그것은 주어진 항체에 의해 인식되지 않아, 즉 이 에피토프 또는 단계 I에서 주어진 세포에 대해 항체가 결합하지 않는다. 하지만, 상기 에피토프는 예를 들어 그 자체가 변형을 일으키거나, 또는 근처의 또는 연합된 분자가 변형되거나 어느 영역이 배열의 변화를 일으켜 비차단되어 노출될 수도 있다. 변형의 예는 접힘의 변화, 번역후 변형의 변화, 인지질화의 변화, 황화의 변화, 당화의 변화 등을 포함한다. 그러한 변형은 세포가 제 2 단계(단계 II)로 불리는 다른 단계로 진입할 때 발생할 수 있다. 두번째 단계의 예는 활성화, 증식, 전환, 또는 악성 상태를 포함한다. 변형될 경우, 상기 에피토프는 이어서 노출되고, 항체가 결합할 수 있다.
펩티도-모방체는 항체와 같은 다른 실체의 동일한 기능적 효과 또는 활성을 가질 수 있는 작은 분자, 펩티드, 폴리펩티드, 지질, 다당류 또는 그 접합체이다.
본 발명의 상세한 설명
본 발명은 제제 및 항체 또는 그 단편에 관련된 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 하나 이상의 항체 또는 그 단편이, 선택적으로 약학적으로 효과적인 담체를 갖는 약물, 독소, 및 방사성 동위원소와 같은 하나 이상의 다양한 제제와 응집되거나, 연합되거나, 복합체가 되거나, 배합되거나 또는 접합되거나, 융합되거나, 또는 연결되어, 항질병 및/또는 항암 활성을 갖는 약물-펩티드 복합체, 조성물, 또는 접합체를 형성하는 것일 수 있다. 그러한 복합체, 배합물, 접합체는 또한 진단 목적을 위해 이용될 수도 있다. 더욱이, 상기 제제 및/또는 상기 항체는 준임상적 양으로 상기 조성물에 존재할 수 있다. 준임상적 양이란 상기 제제 및/또는 항체가 단독으로 투여될 때 임상적으로 적절히 효과적인 것으로 밝혀진 상기 제제 및/또는 항체의 양보다 적은 양을 의미한다. 준임상적 양은 또한 한정된 임상적 반응을 유도하는 것으로 밝혀진 상기 제제 및/또는 항체의 필요량보다 적은 양을 의미할 수 있다. 준임상적 양은 상기 제제 및/또는 항체가 본 발명의 조성물 및 방법에 따라 투여될 때 임상적으로 비효과적임을 의미하는 것이 아님이 이해되어야 한다.
바람직한 구체예에서, 상기 제제의 준임상적 양은 제제에 대한 민감성, 특히 질병 세포의 민감성을 효과적으로 변화시키기에 불충분할 수 있다. 예를 들어 상기 제제의 준임상적 양은 세포 롤링, 염증, 자가면역 질병, 혈전증, 재발협착, 전이, 또는 종양 세포 또는 백혈병 세포의 성장 및/또는 복제를 효과적으로 억제하기에 불충분할 수 있다. 또한, 상기 제제의 준임상적 양은 종양 환자에서 종양 세포의 수 증가를 효과적으로 억제하거나 백혈병 환자에서 백혈병 세포의 수 증가를 억제하기에 불충분할 수 있다. 또한, 상기 제제의 준임상적 양은 종양 환자에서 종양 세포의 수를 효과적으로 감소시키거나 백혈병 환자에서 백혈병 세포의 수를 효과적으로 감소시키는 데 불충분할 수 있다. 부가적으로, 상기 제제의 준임상적 양은 종양 세포 또는 백혈병 세포의 사멸을 효과적으로 증가시키거나, 항암제에 의한 손상에 대한 종양 세포의 민감성을 효과적으로 증가시키거나, 또는 항백혈병 제제에 의한 손상에 대한 백혈병 세포의 민감성을 효과적으로 증가시키기에 불충분할 수 있다. 마지막으로, 상기 제제의 준임상적 양은 세포-세포, 세포-매트릭스, 혈소판-매트릭스, 혈소판-혈소판, 및/또는 세포-혈소판 복합체 형성, 응집, 또는 부착을 효과적으로 억제하기에 불충분할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명 조성물은 서열 번호 1, 서열 번호 2 또는 서열 번호 3의 scFv 항체 단편의 결합 능력을 갖는 항체 또는 그 단편을 갖는다. 서열 번호 1의 scFv 단편은 Y1으로 지정되고, 서열 번호 2의 scFv 단편은 Y17로 지정되고, 서열 번호 3의 scFv 단편은 L32로 지정되었다. 이들 항체는 중쇄 CDR3 영역에서만 다양성을 갖는 인간 항체 파아지 라이브러리를 스크리닝하여 확인되었다. 사람 scFv Y1 및 Y17 항체의 경우, 고정된 사람 혈소판을 스크린하여 혈소판에 결합하는 항체를 동정하였다. L32는 백혈병 세포 표면 결정인자를 인식하는 특정 항체를 선별하기 위하여 백혈병 세포에 대하여 스크린하였으며, 이때 상기 특이적 수용체는 이전에는 공지되거나 특성이 밝혀지지 않았다. 이 동일한 방법을 이용하여, 다른 항체 L31을 확인하였다.
이전에, 본 발명 조성물에 유용한 항체가 동일한 파아지 라이브러리를 이용하여 미국 특허 출원 10/032,423호; 10/032,037호; 10/029,988호; 10/029,926호; 09/751,181호; 및 60/258,948호 및 국제 특허 출원 PCT/US01/49442호 및 PCT/US01/49440호에서 확인되었다. 이들 출원에서 개시된 항체들의 특정 예는 Y1 및 Y17 항체를 포함한다. 이들 출원에서 개시된 항체들은, N-말단 티로신에서 황화되며 세포 이동, 예를 들어 종양 전이에 관련되는 것으로 생각되는, 조혈 세포의 단백질상에서 발견되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 것으로 밝혀졌다.
Y1 항체의 에피토프는 Y1의 글리코칼리신에의 결합에 필수적인 황화된 기로부터 생기는 음전하의 아미노산의 집단이 있는, CD42 복합체의 서브유닛 중의 하나인 글리코칼리신상의 아미노산 272와 285 사이에 위치한다. 또한, Y1은 PSGL-1의 N-말단에 결합하며, 이는 음전하의 아미노산 집단이 이어지는 황화된 티로신 잔기를 함유한, E, L- 및 P-셀렉틴의 수용체이다. Y1 항체는 혈소판상의 글리코칼리신 분자, 피브리노겐-감마 프라임, 사람 혈장의 보체 화합물 4, 및 KG-1 세포상의 PSGL-1 분자와 같은 몇몇 분자에 결합함에도 불구하고, AML 또는 다중 골수종(MM) 환자로부터 유래된 일차 백혈병 세포에 대한 그 친화성은 이전에 언급된 에피토프보다 몇배 더 높다.
또한, L32 및 L31 항체는 2002년 7월 1일에 출원된 "L32 항체 및 그 용도" 라는 제목의 미국 특허 출원 60/ , 호에 개시되었다. L32 항체와 Y1/Y17 출원에 개시된 항체들은 모두 백혈병 세포에 결합하지만, L32는 Y1 보다 약 5배 더 큰 친화성으로 백혈병 세포에 결합한다. L32와 Y1/Y17 항체는 모두 공통된 생식세포(DP32)로부터 분리되고 L32는 Y1/Y17과 동일한 황화된 에피토프에 결합하지만, L32는 혈소판에 결합하지 않으며, 더욱이 혈소판 응집에 영향을 미치지 않는다.
본 발명의 바람직한 항체에 결합하는 것으로 이전에 확인된 황화된 에피토프는 바람직하게는, 염증, 면역 반응, 감염, 자가면역 반응, 전이, 부착, 혈전증 및/또는 재발협착, 세포 롤링 및 응집과 같은 다양한 과정에서 중요한 역할을 하는 리간드와 수용체상에서 발견되는, 둘 이상의 산성 아미노산의 집단내에, 황화된 티로신 잔기 또는 황화된 탄수화물 또는 지질 부와 같은 황화된 부가 존재하는 것을 특징으로 한다. 그러한 에피토프는 또한 B 세포 백혈병 세포, B-CLL 세포, AML 세포, 다중 골수종 세포 및 전이성 세포와 같은 질병 세포에서 발견된다. 이들 에피토프는 이들 과정의 치료적조정 및 진단 과정을 위한 유용한 표적이다.
바람직하게는, 본 발명 조성물의 항체는 PSGL-1, 피브리노겐 감마 프라임(γ'), GP1b, 헤파린, 루미칸, 보체 화합물 4(CC4), 인터알파 억제제, 및 프로트롬빈과 같은, 염증에 관련된 다른 분자들 또는 에피토프들에 결합한다. 또한 바람직하게는, 상기 항체는 B-CLL 세포, T-ALL 세포, AML 세포, B-백혈병 세포, 다중 골수종 세포, 및 전이성 세포를 비롯한 염증 또는 종양 생성에 관련된 세포 타입 적어도 하나상에 존재하는 에피토프에 결합한다. 더욱 바람직하게는, 본 발명 조성물의 항체는 지질, 탄수화물, 펩티드, 당지질, 당단백질, 지질단백질, 및/또는 지질다당류 분자상의 에피토프에 결합한다. 다르게는, 그러나 또한 바람직하게는, 상기 항체는 둘 이상의 에피토프와 교차 반응하며, 각 에피토프는 하나 이상의 황화된 티로신 잔기 및 둘 이상의 산성 아미노산의 집단 하나 이상을 가지며, 그 예가 PSGL-1이다.
항원 결합 부위를 형성하는 데 참여하는 것은 본 발명의 항체의 과변이 영역이다. 항원-결합 부위는 항체가 결합하는 에피토프의 구조에 상보적이다; 따라서 이들 결합 부위는 상보성 결정 영역(CDR)으로 불린다. 항체의 경쇄와 중쇄 각각에는 세개의 CDR(CDR1, CDR2, 및 CDR3)가 있으며, 각각은 VH 및 VL 도메인의 β 쇄를 연결하는 루프상에 위치한다. 이들 영역 중 가장 변이성인 부분은 중쇄의 CDR3 영역이다. CDR3 영역은 Ig 분자의 가장 노출된 영역으로 생각되며, 여기서 제공된 것처럼 관찰된 선택적 및/또는 특이적 결합 특성을 결정하는 데 중심 역할을 한다.
본 발명 조성물의 한 가지 바람직한 구체예에서, 상기 항체 또는 그 단편은 서열 번호 4의 제 1 과변이 영역(CDR3)을 갖는다. 또한, 또는 다르게는, 상기 항체 또는 그 단편은 서열 번호 5의 제 2 과변이 영역(CDR2)를 갖는다. 또한, 또는 다르게는, 상기 항체 또는 단편은 서열 번호 6, 서열 번호 7, 또는 서열 번호 8의 제 3 과변이 영역(CDR1)을 갖는다.
본 발명에 따라, CDR은 또한 항체를 생산하기 위한 카세트내로 삽입될 수도 있다. 폴리펩티드에 적용되고 본 발명에서 정의된 대로, 카세트는 골격으로 작용하고 단일 유닛으로 간주되며 그렇게 조작되는 연속적 아미노산의 주어진 서열을 말한다. 아미노산은 하나 또는 두 말단에서 치환, 삽입, 제거되거나 또는 부착될 수 있다. 유사하게, 아미노산 스트레치가 하나 또는 두 말단에서 치환, 삽입, 제거되거나 또는 부착될 수 있다. 카세트의 아미노산 서열은 표면적으로 고정될 수 있는 한편, 치환되거나, 삽입되거나, 부착된 서열은 매우 가변적일 수 있다. 카세트는 몇 개의 도메인으로 구성될 수 있으며, 그 각각은 최종 구성물에 중요한 기능을 포함한다. 본 발명의 특정 구체예의 카세트는 N-말단, 골격 영역 1(FR1), CDR1, 골격 영역 2(FR2), CDR2, 골격 영역 3(FR3), 및 골격 영역 4(FR4)를 포함한다. 본 발명의 한 구체예에서, 카세트내의 다른 영역들을 치환하는 것이 가능하다. 예를 들어, 상기 카세트의 CDR2 및 CDR1 과변이 영역은 비보존적 또는 바람직하게는 보존적 아미노산 치환에 의해 치환되거나 변형될 수 있다.
여기서 개시되고 설명되는 25 아미노산 잔기 이하의 아미노산 서열 모두의 경우(예, CDR 영역, CDR 인접 영역), 이들 아미노산 서열이 그들의 범위내에 하나 또는 둘의 아미노산 치환을 포함하며 바람직하게는 그 치환은 보존적 아미노산 치환임이 이해되어야 하며 본 발명의 추가 구체예로 간주되어야 한다. 여기서 개시되고 설명되는 25 아미노산 잔기 초과의 아미노산 서열 모두의 경우, 이들 아미노산 서열이 그 범위내에 원래 서열과 90% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함함이 이해되며 이는 본 발명의 구체예로 간주된다(Altschul et al., Nucleic Acids Res.25:3389-402(1997)). 유사하거나 상동성인 아미노산은 유사한 특성, 예를 들어 산성, 염기성, 방향족, 크기, 양전하, 음전하, 극성, 비극성을 나타내는 동일하지 않은 아미노산으로 정의된다.
퍼센트 아미노산 유사성 또는 상동성 또는 서열 유사성은 두 가지 다른 펩티드 또는 폴리펩티드의 아미노산 서열을 비교함으로써 결정한다. 항체 서열은 DNA 서열결정에 의해 결정하였다. 상기 두 서열을 대개 배열 목적을 위해 고안된 다양한 컴퓨터 프로그램 중 하나를 이용하여 배열하고, 각 위치에서 아미노산 잔기를 비교한다. 이어서 아미노산 동일성 또는 상동성을 결정한다. 이어서 알고리즘을 적용하여 퍼센티지 아미노산 유사성을 결정한다. 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질 분자간의 미묘한 관계의 검출에 대한 크게 증가된 민감성으로 인해, 아미노산 서열을 비교하는 것이 바람직하다. 단백질 비교는 보존적 아미노산 치환의 존재를 고려할 수 있으며, 이에 의해 만일 동일하지 않은 아미노산이 유사한 물리적 및/또는 화학적 특성을 가지면 미스매치는 여전히 양성 점수를 낳을 수도 있다(Altschul et al.(1997), supra).
본 발명의 한 구체예에서, 경쇄 및 중쇄의 각각의 세 개의 과변이 영역은 두 쇄간에 그리고 쇄내 및/또는 쇄 사이에서 세 과변이 영역중에서 상호교환될 수 있다.
본 발명은 항체, 또는 그 단편, 그 구조체, 또는 단편의 구조체를 갖는 펩티드 또는 폴리펩티드를 제공한다. 본 발명에 따라, 항체는 IgG, IgA, IgD, IgE 또는 IgM 항체를 포함한다. IgG 부류는 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4 를 비롯한 몇몇 하위 부류를 포함한다.
항체는 단편, 복합체, 및 다량체와 같은 많은 형태로 제공될 수 있다. 본 발명에 따라, 항체 단편은 Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab2 및 Fd 분자를 포함한다. Fv의 단편 및 Fab의 단편과 같은 보다 작은 항체 단편은 또한 그들이 원래 항체 또는 더 큰 단편의 결합 특성을 보유하는 한, 용어 "단편"에 포함된다. 그러한 단편의 예는 (1)Fv의 중쇄만의 단편을 포함하는 미니바디, (2) 항체 중쇄 가변 영역의 작은 분획 유닛을 포함하는 마이크로바디(국제 특허 출원 PCT/IL99/00581호), (3) 경쇄의 단편을 갖는 유사한 바디, 및 (4) 경쇄 가변 영역의 기능성 유닛을 갖는 유사한 바디이다. 구조체는 예를 들어, 디아바디, 트리아바디, 및 테트라바디와 같은 다량체를 포함한다. 어구 "항체, 또는 그 단편, 또는 항체, 또는 그 단편을 갖는 복합체" 및 "항체 또는 단편"은 내용 및/또는 당업계의 지식에 기초하여 달리 표시되거나 달리 특정되지 않으면, 이들 분자 모두뿐만 아니라 그 유도체 및 상동체, 모방체 및 변이체를 포함한다.
scFv는 그들이 크기가 더 작기 때문에 조직에 침투하며 전체 크기 항체보다 신속하게 혈액으로부터 제거된다(Adams et al., Br.J.Cancer 77:1405-12(1988); Hudson, Curr.Opin.Immunol. 11(5):548-557(1999);Wu et al.,Tumor Targeting 4:47(1999)). 따라서, scFv는 종종 신체로부터 방사성 표지의 보다 신속한 제거를 가능하게 하기 위해 종양 영상화와 같은 방사성 표지에 관련된 진단에 이용된다. 많은 암-표적화 scFv 다량체가 최근에 생체내 안정성과 효능에 대한 예비임상 평가를 거졌다(Adams et al.(1988), supra;Wu(1999), supra).
일반적으로, scFv 단량체는 폴리펩티드 링커에 의하여 VL의 N-말단 잔기에 묶인 VH 도메인의 C-말단을 갖도록 고안된다. 선택적으로 역 방향이 이용된다: VL 도메인의 C-말단이 폴리펩티드 링커를 통하여 VH 의 N-말단 잔기에 묶인다(Power et al., J.Immun.Meth.242:193-204(2000)). 상기 폴리펩티드 링커는 일반적으로 15 아미노산 잔기 길이이다. 상기 링커가 약 3 내지 7 아미노산으로 감소될 경우, scFv는 기능성 Fv 도메인으로 접힐 수 없으며 그대신 두번째 scFv와 연합하여 디아바디를 형성한다. 링커의 길이를 3 미만의 아미노산으로 더 감소시키면, 링커 길이, 조성 및 Fv 도메인 배향에 따라, scFv는 삼량체 또는 사량체로 연합한다. (Powers(2000), supra).
최근에는, scFv 이량체, 삼량체, 및 사량체와 같은 다가 항체 단편이 종종 표적에 대해 모 항체의 결합에 비하여 더 높은 친화성을 제공함이 밝혀졌다. 이러한 보다 높은 친화성은 종양 표적화 분야를 위해 개선된 약학동력학을 비롯한 가능한 효과를 제공한다. 추가로, 백혈구의 고정과 롤링에 관련되는 P-셀렉틴과 그 리간드 PSGL-1의 연구에서, 과학자들은 PSGL-1의 이량체 형태를 발현하는 세포가 높은 결합 친화성으로 인해 보다 안정한 롤링 부착을 확립하는 것으로 결론내렸다. 이들 부착은 보다 더 전단에 내성이고 롤링 속도에서 보다 적은 유동을 나타냈다(Ramachandran et al., PNAS, 98(18):10166-71(2001)).
이들 다가 형태의 보다 큰 결합 친화성은 진단 및 치료 섭생에서 유익할 수 있다. 예를 들어, scFv는 표적 수용체에 결합하여 "자연" 리간드의 결합을 차단하는 차단제로 이용될 수 있다. 그러한 경우에, 자연 리간드의 표적에 대한 원치않는 결합을 허용할 수 있는 해리의 가능성을 감소시키기 위해, scFv와 상기 수용체간의 보다 높은 친화성 연합을 갖는 것이 바람직하다. 또한, 이러한 높은 친화성은 표적 수용체가 부착 및 롤링에 관련될 때 또는 표적 수용체가 혈소판과 같은 높은 전단 흐름의 영역에 존재하는 세포상에 있을 때에 유용할 수 있다.
원하는 결합 능력을 갖는 항체, 단편, 또는 구조체가 일단 선택되고/되거나 개발되면, 여기서 제공되는 지침을 이용하여 원래 항체의 특성을 보유하는 구조체 및 단편을 생산하는 것은 당업자의 능력 범위내이다. 예를 들어, 원래 선택되거나 개발된 항체, 단편, 또는 구조체의 바람직한 특성을 보유한 완전한 항체 분자, Fv 단편, Fab 단편, Fab2 단편, 이량체, 삼량체, 및 다른 구조체가 만들어질 수 있다.
만일 아미노산을 치환하되 여전히 항체 또는 단편의 특성을 보유하는 것이 바람직하면, 보존적 아미노산 치환을 만드는 것은 당업자의 범위내이다. 약학적 또는 진단 제제와의 복합화 또는 배합 또는 접합과 같은 변형 또한 그들의 결합 특성을 변화시키지 않고 항체 또는 단편에 만들어질 수 있다. 보다 안정한 항체 또는 단편을 생산하기 위해 만들어진 것들과 같은 다른 변형 또한 그들의 특이성의 변화없이 항체 또는 단편에 만들어질 수 있다. 예를 들어, 펩토이드 변형, 세미펩토이드 변형, 시클릭 펩티드 변형, N 말단 변형, C 말단 변형, 펩티드 결합 변형, 백본 변형, 및 잔기 변형이 실시될 수 있다. 항체의 결합 특성이 변화되었는지 평가하기 위하여 변형된 항체 또는 단편을 테스트하는 것은 본 명세서의 지침을 따라 당업자가 쉽게 할 수 있는 것이다.
유사하게, 여기서 제공된 지침을 따라 항체, 단편, 또는 구조체의 결합 특성을 변화시켜 보다 바람직한 특성을 갖는 분자를 얻는 것은 당업자의 능력 내이다. 예를 들어, 일단 원하는 특성을 갖는 항체가 동정되면, 임의의 또는 지시된 돌연변이유발을 이용하여 항체의 변이체를 생성할 수 있으며, 이들 변이체는 원하는 특성에 대해 스크린될 수 있다.
당업계에 공지된 방법을 이용하여, 당업자는 또한 본 발명 조성물에 유용한 결합 능력을 갖는 추가의 항체 또는 그 단편을 결정할 수 있다. 예를 들어, 여기서 개시된 바이오패닝 방법을 이용하여 추가의 항체를 분리할 수 있으며, 이때 고정된 사람 혈소판 또는 백혈병 세포에 결합하는 분자 또는 세포를 이용하여 특정 파아지 디스플레이 라이브러리, 구체적으로 백혈병, 림프종, 또는 골수종 환자로부터 준비된 라이브러리를 스크린한다.
당업계에 공지된 종래의 방법을 이용하여, 당업자는 또한 서열 번호 1, 서열 번호 2, 또는 서열 번호 3의 scFv 항체 단편의 결합 능력을 갖는 항체, 또는 그 단편을 결정할 수 있을 것이다. PSGL-1, 피브리노겐 감마 프라임(γ'), GP1b, 헤파린, 루미칸, 보체 화합물 4(CC4), 인터알파 억제제, 및 프로트롬빈과 같은, 염증에 관련된 다른 분자들 또는 에피토프들에 결합하는 추가의 항체는 또한 당업계에 공지된 종래 방법을 이용하여 결정할 수 있다. 종래의 방법을 이용하여, 당업자는 또한 B-CLL 세포, T-ALL 세포, AML 세포, B-백혈병 세포, 다중 골수종 세포, 및 전이성 세포를 비롯한 염증 또는 종양 생성에 관련된 세포 타입 적어도 하나상에 존재하는 에피토프에 결합하는 추가 항체를 결정할 수 있을 것이다. 더욱이, 지질, 탄수화물, 펩티드, 당지질, 당단백질, 지질단백질, 및/또는 지질다당류 분자상에 있으며 바람직하게는 적어도 하나의 황화된 부를 갖는 에피토프에 결합하는 항체를 종래 방법을 이용하여 결정할 수 있다. 다르게는, 종래 방법을 또한 이용하여, 각 에피토프는 하나 이상의 황화된 티로신 잔기 및 둘 이상의 산성 아미노산의 집단 하나 이상을 가지며, 그 예가 PSGL-1인, 둘 이상의 에피토프와 교차 반응하는 항체를 결정할 수 있다. 예를 들어 시판되는 바이오센서, BIACORE(Piscataway, N.J.)(Myszka, J.Mol.Recognition, 12:279-84(1999);Malmborg & Borrebaeck, J.Immunol. Meth.,183:7-13(1999))를 이용하여 바이오센서 분석을 이용하여 결합 데이터를 결정할 수 있다.
본 발명은 scFv 항체를 제공한다. 여기서 이용될 때, scFv는 사람 항체의 중쇄의 가변 영역과 사람 항체의 경쇄의 가변 영역으로 구성되는 분자로 정의되며, 상기 항체는 동일하거나 상이할 수 잇으며, 상기 중쇄의 가변 영역은 상기 경쇄의 가변 영역에 연결, 결합, 융합, 또는 공유적으로 부착, 또는 연합된다.
scFv 구조체는 항체의 과변이 도메인의 하나 이상을 통합한 scFv 분자의 다량체(예, 이량체, 삼량체, 사량체 등)일 수 있다. 모든 scFv 유래된 구조체와 단편은 증가된 결합 특성을 보유하여 다른 세포에 비하여 우선적으로 표적 세포에 선택적으로 및/또는 특이적으로 결합한다. 결합 선택성 및/또는 특이성은 주로 과변이 영역에 의해 결정된다. 본 발명의 항체는 다가 Fv 형태로 접힐 수 있으며, 이로 인해 결합 친화성과 특이성이 개선되며 혈액에서 반감기가 증가된다.
scFv의 다가 형태는 다른 사람들에 의해 고안되고 생산되었다. 한 가지 접근법은 두 개의 scFv를 링커로 연결하는 것이다. 다른 접근법은 연결을 위하여 두 scFv 사이의 이황화 결합을 이용하는 것에 관련된다. 이량체 또는 삼량체 Fv의 생산을 위한 가장 간단한 접근법은 Holliger et al., PNAS 90:6444-48(1993) 및 Kortt et al.,Protein Eng.10:423-33(1997)에 의해 보고되었다. 한 가지 그러한 방법은 FOS와 JUN 단백질 영역의 서열을 첨가하여 scFv의 c-말단에서 그들 사이에 루이신 지퍼를 형성시켜 scFv의 이량체를 만들기 위해 고안되었다(Kostelny et al., J Immunol.148(5):1547-53(1992); De Kruif et al., J Biol Chem. 271(13):7630-34(1996)). 다른 방법은 scFv의 c-말단에 스트렙타비딘 암호 서열을 부가하여 사량체를 만들기 위해 고안되었다. 스트렙타비딘은 4개의 서브유닛으로 구성되어, scFv-스트렙타비딘이 접힐 경우, 4개의 서브유닛은 그들자신을 수용하여 사량체를 형성한다(Kipriyanov et al., Hum Antibodies Hybridomas 6(3):93-101(1995)). 또 다른 방법에서, 이량체, 삼량체, 및 사량체를 만들기 위하여, 유리 시스테인을 관심 단백질내에 도입한다. 다양한 수(2 내지 4)의 말레이미드 기를 가진 펩티드계 교차결합제를 이용하여 관심 단백질을 유리 시스테인에 교차 결합시켰다(Cochran et al., Immunity 12(3):241-50(2000)).
이 시스템에서, 파아지 라이브러리(상기에서 개시된 대로)는 항체의 Fv 영역의 일가 형태로 접힐 수 있는 scFv를 디스플레이하도록 고안될 수 있다. 또한, 그리고 상기에서 역시 개시된 대로, 상기 구조체는 박테리아 발현에 적합하다. 유전자 조작된 scFv는 연속적으로 암호된 15 아미노산 가요성 펩티드 스페이서에 의해 연결된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 바람직한 스페이서는 (Gly4Ser)3이다. 이 스페이서의 길이는 그 아미노산과 함께 크지않은 스페이서를 제공하며, 이것은 VH 와 VL 영역이 표적에의 효과적인 결합을 제공하는 기능성 Fv 도메인으로 접힐 수 있도록 한다.
스페이서의 길이를 변화시키는 것은 이량체, 삼량체, 및 사량체(종종 당업계에서는 디아바디, 트리아바디, 및 테트라바디로 각각 불림)를 형성하는 여전히 바람직한 방법이다. 이량체는 scFv의 두 가변성 쇄를 연결하는 스페이서가 대개 5-12 아미노산 잔기로 짧아지는 조건하에서 형성된다. 이러한 짧아진 스페이서는 동일한 분자로부터의 두 개의 가변성 쇄가 기능성 Fv 도메인으로 접히는 것을 막는다. 대신, 상기 도메인은 다른 분자의 상보성 도메인과 짝을 이루어 두 개의 결합 도메인을 생성하도록 강요된다. 바람직한 방법에서, 단지 5 아미노산의 스페이서(Gly4Ser)를 디아바디 구성을 위하여 이용하였다. 이 이량체는 두 개의 동일한 scFv로부터 또는 두 개의 다른 집단의 scFv로부터 형성될 수 있으며 모 scFv의 선택적이고/또는 특이적인 증가된 결합 활성을 보유하고, 및/또는 증가된 결합 강도 또는 친화성을 보여준다.
유사한 방식으로, 트리아바디는 scFv의 두 가변성 쇄를 연결하는 스페이서가 대개 5 아미노산 잔기 미만으로 짧아져 동일한 분자로부터의 두 가변성 쇄가 기능성 Fv 도메인으로 접히는 것을 막는 조건하에서 형성된다. 그 대신, 세개의 별도의 scFv 분자는 연합하여 삼량체를 형성한다. 바람직한 방법에서, 트리아바디는 이 가요성 스페이서를 완전히 제거함으로써 얻어졌다. 상기 트리아바디는 세 개의 동일한 scFv로부터, 또는 두 개 또는 세 개의 다른 집단의 scFv로부터 형성될 수 있으며, 모 scFv의 선택적이고/또는 특이적인 증가된 결합 활성을 보유하고, 및/또는 증가된 결합 강도 또는 친화성을 보여준다.
테트라바디는 scFv의 두 가변성 쇄를 연결하는 스페이서가 일반적으로 5 아미노산 잔기 미만으로 짧아져 동일한 분자로부터의 두 가변성 쇄가 기능성 Fv 도메인으로 접히는 것을 막는 상태하에서 유사하게 형성된다. 그 대신, 네 개의 별도의 scFv 분자가 연합하여 사량체를 형성한다. 테트라바디는 네 개의 동일한 scFv로부터, 또는 다른 scFv 집단으로부터의 1-4 개별 유닛으로부터 형성될 수 있으며 모 scFv의 선택적이고/또는 특이적인 증가된 결합 활성을 보유하고, 및/또는 증가된 결합 강도 또는 친화성을 보여준다. 스페이서가 일반적으로 5 아미노산 잔기 길이 미만인 조건하에서 트리아바디 또는 테트라바디가 형성될지는 혼합물내의 특정 scFv의 아미노산 서열과 반응 조건에 의존한다.
항체, 그 단편 또는 그 구조체, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 및 그 단편 및 구조체는 원핵 또는 진핵 발현 시스템에서 생산될 수 있다. 원핵 및 진핵 시스템에서 항체와 단편을 생산하는 방법은 당업계에 공지되어 있다.
본 발명에서 정의되고 개시된 대로, 진핵 세포 시스템은 숙주 세포가 진핵세포인, 유전공학 방법에 의해 펩티드 또는 폴리펩티드를 생산하는 발현 시스템을 말한다. 진핵 발현 시스템은 포유류 시스템일 수 있으며, 정제 후, 포유류 발현 시스템에서 생산된 펩티드 또는 폴리펩티드는 바람직하게는 포유류 오염물이 실질적으로 없다. 유용한 진핵 발현 시스템의 다른 예는 효모 발현 시스템을 포함한다.
본 발명의 펩티드 또는 폴리펩티드의 생산을 위한 바람직한 원핵 시스템은 발현 벡터를 위한 숙주로서 이.콜리를 이용한다. 이.콜리 시스템에서 생산된 펩티드 또는 폴리펩티드는 정제 후 이.콜리 오염성 단백질이 실질적으로 없다. 원핵 발현 시스템의 이용은 본 발명에서 제공된 서열의 일부 또는 모두의 N-말단에 메티오닌 잔기의 부가를 야기할 수도 있다. 펩티드 또는 폴리펩티드의 완전한 발현을 허용하기 위한 펩티드 또는 폴리펩티드 생산 후, N-말단 메티오닌 잔기의 제거는 당업계에 공지된 대로 실시될 수 있으며, 그 예는 적합한 조건하에서의 에어로모나스 아미노펩티다제의 이용이다(미국 특허 5,763,215호).
본 발명에 따른 항체 및 단편은 또한 그 제조와 동정 및 진단을 돕기 위해 삽입되거나 부착되는 태그를 가질 수도 있다. 상기 태그는 나중에 그 분자로부터 제거될 수 있다. 유용한 태그의 예는 AU1, AU5, BTag, c-myc, FLAG, Glu-Glu, HA, His6, HSV, HTTPHH, IRS, KT3, 단백질 C, S-TAG(등록상표), T7, V5, 및 VSV-G (Jarvik and Telmer, Ann. Rev. Gen., 32, 601-18 (1998))를 포함한다. 상기 태그는 바람직하게는 c-myc 또는 KAK이다.
임의의 적절한 제제를 본 발명의 조성물에 이용할 수 있다. 그러한 제제는 일반적으로 항암, 항전이, 항백혈병, 항질병, 항부착, 항혈전증, 항재발협착, 항자가면역, 항응집, 항박테리아, 항바이러스, 또는 항염증 활성을 갖는다. 따라서, 본 발명 조성물의 제제는 항암 제제, 항종양 제제, 항바이러스 제제, 항전이 제제, 항염증 제제, 항혈전증 제제, 항재발협착 제제, 항응집 제제, 항자가면역 제제, 항부착 제제, 항심혈관질환 제제, 또는 다른 항질병 제제 또는 약학 제제일 수 있다. 약학 제제는 사람, 소, 말, 돼지, 쥐, 개, 고양이, 또는 임의의 다른 온혈 동물을 포함하며 이에 한정되지 않는 포유류의 예방적 치료 또는 진단에서 유용한 제제를 말한다.
그러한 약학 제제의 예는 어사이클로비어, 간시클로비어 및 지도부딘을 비롯한 항바이러스제; 시로스타졸, 달테파린 소듐, 레비파린 소듐, 및 아스피린을 비롯한 항혈전증제/항재발협착제; 잘토프로펜, 프라노프로펜, 드록시캄, 아세틸 살리실릭 17, 디클로페낙, 이부프로펜, 덱시부프로펜, 수린닥, 나프록센, 암톨메틴, 세레콕시브, 인도메타신, 로페콕시브, 및 니메수리드를 비롯한 항염증제; 레플루노미드, 데니류킨 디프티톡스, 수브레움, 윈로 SDF, 데피브로티드, 및 시클로포스파미드를 비롯한 항자가면역제; 및 리마프로스트, 클로르크로멘, 및 히알루론산을 비롯한 항부착/항응집 제를 포함하며 이에 한정되지 않는다.
다른 예시적인 약학 제제는 시스-플라티늄, 택솔, 칼리케미신, 빈크리스틴, 시타라빈(Ara-C), 시클로포스파미드, 프레드니손, 플루다라빈, 클로람부실, 인터페론 알파, 하이드록시우레아, 테모졸로미드, 탈리도미드 및 블레오미신, 및 그 유도체 및 조합을 포함한다. 바람직하게는, 약학 제제는 안트라사이클린 또는 그 유도체이며, 더욱 바람직하게는 약학 제제는 독소루비신(아드리아마이신), 다우노루비신, 이다루비신, 모르폴리노독소루비신, 모르폴리노다우노루비신, 또는 메톡시모르폴리닐독소루비신, 또는 그 유도체와 조합이며, 가장 바람직하게는 약학 제제는 독소루비신(아드리아마이신)이다.
항암제는 항암 활성을 갖는 제제이다. 예를 들어, 항암제는 암성 또는 미성숙 예비암성 세포의 성장을 억제하거나 멈추게 하는 제제, 암성 또는 예비-암성 세포를 죽이는 제제, 암성 또는 예비-암성 세포의 다른 항암제에 대한 민감성을 증가시키는 제제, 및 암성 세포의 전이를 억제하는 제제를 포함한다. 본 발명에서, 항암제는 또한 종양의 혈관 신생을 막거나, 억제하거나, 지연시키거나, 멈추게 하는 항혈관신생 활성을 갖는 제제일 수 있다. 암 세포의 성장의 억제는 예를 들어 (i) 암성 또는 전이성 성장의 방지, (ii) 암성 또는 전이성 성장의 속도 늦추기, (iii) 암세포를 그대로 살려두는 한편, 암세포의 성장 과정 또는 전이 과정의 전체적인 방지, (iv) 암세포와 미세환경의 접촉의 방해, 또는 (v) 암세포의 사멸을 포함한다.
항백혈병 제제는 항백혈병 활성을 가진 제제이다. 예를 들어, 항백혈병 제제는 백혈병 또는 미성숙 예비백혈병 세포의 성장을 억제하거나 멈추게 하는 제제, 백혈병 또는 예비-백혈병 세포를 죽이는 제제, 백혈병 또는 예비-백혈병 세포의 다른 항백혈병제에 대한 민감성을 증가시키는 제제, 및 백혈병 세포의 전이를 억제하는 제제를 포함한다. 본 발명에서, 항백혈병제는 또한 종양의 혈관 신생을 막거나, 억제하거나, 지연시키거나, 멈추게 하는 항혈관신생 활성을 갖는 제제일 수 있다. 백혈병 세포의 성장의 억제는 예를 들어 (i) 백혈병 또는 전이성 성장의 방지, (ii) 백혈병 또는 전이성 성장의 속도 늦추기, (iii) 백혈병 세포를 그대로 살려두는 한편, 백혈병 세포의 성장 과정 또는 전이 과정의 전체적인 방지, (iv) 백혈병 세포와 미세환경의 접촉의 방해, 또는 (v) 백혈병 세포의 사멸을 포함한다.
본 발명의 항체 및 단편이 유용하게 연결될 수 있는 항질병, 항암, 및 항백혈병 제제의 예는 독소, 방사성동위원소, 및 약학제제를 포함한다. 독소의 예는 젤로닌, 슈도모나스 외독소(PE), PE40, PE38, 디프테리아 독소, 리신, 또는 그 변형체 또는 유도체를 포함한다. 방사성동위원소의 예는 국소화 및/또는 치료를 위해 이용될 수 있는 감마-방사체, 양전자-방사체, 및 x-선 방사체, 및 치료에 이용될 수 있는 베타-방사체 및 알파-방사체를 포함한다. 진단에 유용한 것으로 이전에 개시된 방사성동위원소는 또한 치료에 유용하다. 항암 또는 항백혈병 약학 제제의 비제한적인 예는 독소루비신(아드리아마이신), 시스-플라티늄, 택솔, 칼리케미신, 빈크리스틴, 시타라빈(Ara-C), 시클로포스파미드, 프레드니손, 다우노루비신, 이다루비신, 플루다라빈, 클로람부실, 인터페론 알파, 하이드록시우레아, 테모졸로미드, 탈리도미드 및 블레오미신, 및 그 유도체 및, 그 조합 또는 변형체를 포함한다.
또한, 항질병, 항암 또는 항백혈병 제제는 또한 성장 인자 수용체 리간드에 의한 성장 인자 수용체의 자극을 억제하여 성장 인자 수용체를 발현하는 세포의 성장을 억제하는, 성장 인자 수용체 안타고니스트일 수 있다. 성장 인자 수용체의 일부 예는 표피 성장 인자(EGFR), 혈관 내피 성장 인자(VEGFR), 혈소판-유래 성장 인자(PDGFR), 인슐린-유사 성장 인자(IGFR), 신경 성장 인자(NGFR), 및 섬유아세포 성장 인자(FGF)를 위한 수용체이다.
본 발명의 항체와 그 단편은 또한 약학적으로 효과적인 담체에 선택적으로 연합, 복합화, 또는 배합 또는 접합, 융합, 또는 연결될 수 있다. 본 발명에서 유용한 담체의 예는 덱스트란, 친유성 중합체(예, HPMA), 및 친수성 중합체를 포함한다. 다르게는, scFv Y1 분자로 장식된 리포좀과 같은 장식된 리포좀, 예를 들어 독소루비신 다량을 함유한 시판되는 리포좀인 독실(Doxil)이 이용될 수 있다. 그러한 리포좀은 하나 이상의 원하는 약학 제제를 함유하도록 제조될 수 있으며 본 발명의 항체와 혼합되어 높은 약물 대 항체 비율을 제공할 수 있다. 바람직하게는, 상기 비히클 또는 담체는 독소루비신-장식된 리포좀이다. 다르게는, 또한 바람직하게는, 상기 비히클 또는 담체는 친수성 중합체 폴리에틸렌글리콜(PEG) 또는 덱스트란이다.
다르게는, 상기 항체 또는 그 단편과 약학 제제 사이의 연결은 직접 연결일 수 있다. 둘 또는 그 이상의 이웃한 분자 사이의 직접 연결은 분자내의 성분 또는 성분의 그룹 사이의 화학적 결합을 통하여 생산될 수 있다. 화학적 결합은 예를 들어, 이온 결합, 공유 결합, 소수성 결합, 친수성 결합, 정전기적 결합, 수소 결합일 수 있다. 결합은 예를 들어 아민, 카르복시, 아미드, 하이드록실, 펩티드, 및/또는 이황화 결합일 수 있다. 직접 연결은 바람직하게는 프로테아제 내성 결합일 수 있다.
펩티드와 약학 제제 사이 또는 펩티드와 담체 사이, 또는 담체와 약학 제제 사이의 연결은 링커 화합물을 통해서일 수 있다. 여기서 이용될 때, 명세서와 청구항에서, 링커 화합물은 둘 이상의 부를 연결하는 화합물로 정의된다. 상기 링커는 직쇄 또는 분지쇄일 수 있다. 분지쇄 링커 화합물은 이중-분지, 삼중-분지, 또는 사중 이상의 분지 화합물로 구성될 수 있다. 본 발명에서 유용한 링커 화합물은 디카르복실산, 말레미도 하이드라지드, PDPH, 카르복실산 하이드라지드, 및 작은 펩티드를 갖는 군으로부터 선택된 것들을 포함한다.
본 발명에 따라 유용한 보다 구체적인 링커 화합물의 예는 (a) 숙신산, 글루타르산, 및 아디프산과 같은 디카르복실산; (b) N-[말레이미도카프로산]하이드라지드, 4-[N-말레이미도메틸]시클로헥산-1-카르복실하이드라지드, 및 N-[말레이미도운데카노산]하이드라지드와 같은 말레이미도 하이드라지드; (c) 설프하이드릴 반응성 단백질에 접합된 (3-[2-피리딜디티오]프로피오닐 하이드라지드)와 같은 PDPH; 및 (d) 2-5 탄소 원자로부터 선택된 카르복실산 하이드라지드를 포함한다.
작은 펩티드 링커를 이용하는 직접 커플링을 통한 연결 또한 유용하다. 예를 들어, 항암제 독소루비신의 유리 당과 scFv 사이의 직접적인 커플링은 작은 펩티드를 통해서 이루어질 수 있다. 작은 펩티드의 예는 AU1, AU5, BTag, c-myc, FLAG, Glu-Glu, HA, His6, HSV, HTTPHH, IRS, KT3, 단백질 C, S-TAG(등록상표), T7, V5, VSV-G, 및 KAK를 포함한다.
본 발명의 항체 및 그 단편은 방사성동위원소와 같은 영상화제(표지 마커로도 불림)에 결합, 접합, 복합화, 또는 다르게는 연합될 수도 있으며, 이들 접합체는 진단 및 영상화 목적에 이용될 수 있다. 그러한 방사성동위원소-항체(또는 단편) 접합체를 갖는 키트가 제공된다.
진단에 유용한 방사성동위원소의 예는 111인듐, ll3인듐, 99m레늄, 105 레늄, 101레늄, 99m테크네튬, 121m텔루륨, 122m텔루륨, 125m텔루륨, 165툴륨, 167툴륨, 168툴륨, 123이오딘, 126이오딘, 131이오딘, 133이오딘, 81m크립톤, 33크세논, 90이트륨, 213비스무스, 77브로마인, 18플루오르, 95루테늄, 97루테늄, 103루테늄, 105루테늄, l07수은, 203수은, 67갈륨, 및 68갈륨을 포함한다. 바람직한 방사성동위원소는 x-선 또는 임의의 적합한 상자성 이온에 대해 불투명하다.
표시 마커 분자는 또한 형광 마커 분자일 수도 있다. 형광 마커 분자의 예는 플루오르세인, 피코에리트린, 또는 로다민, 또는 그 변형 또는 접합체를 포함한다.
표시 마커에 접합된 항체 또는 단편은 질병 상태를 진단하거나 모니터하기 위해 이용될 수 있다. 그러한 모니터링은 생체내, 시험관내, 또는 생체외에서 실시될 수도 있다. 모니터링 또는 진단을 생체내 또는 생체외에서 실시하는 경우, 영상화제는 바람직하게는 허용할 수 없는 수준으로 환자에게 해를 끼치지 않는 다는 점에서 생리학적으로 허용가능하다. 허용가능한 유해 수준은 질병의 심각도와 다른 옵션의 이용가능성과 같은 기준을 이용하여 임상의가 결정할 수 있다.
본 발명은 표시 마커 분자 또는 영상화제에 연결된 본 발명의 펩티드를 갖는 영상화제를 보유하는, 치료 전, 치료 동안 또는 치료 후에 치료 효능의 시험관내 분석을 위한 진단 키트를 제공한다. 본 발명은 또한 암, 보다 구체적으로 종양의 진단 국소화 및 영상화를 위해 영상화제를 이용하는 방법을 제공하며, 이 방법은 (a) 상기 조성물을 세포와 접촉시키는 단계; (b) 세포에 결합된 방사능을 측정하는 단계; 및 (c) 종양을 가시화하는 단계를 포함한다.
적합한 영상화제의 예는 FITC, PE, 등과 같은 형광 염료, 및 녹색 형광 단백질과 같은 형광 단백질을 포함한다. 다른 예는 기질과 반응하여 색 변화와 같은 인식 가능한 변화를 생성하는 방사성 분자 및 효소를 포함한다.
한 예에서, 상기 키트의 영상화제는 FITC와 같은 형광 염료이며, 상기 키트는 암, 보다 구체적으로는 혈액 관련 암, 예를 들어 백혈병, 림프종, 또는 골수종의 치료 효능의 분석을 제공한다. FACS 분석은 예를 들어, 진단시, 치료 동안, 완화동안 및 재발 동안, 영상화제에 의해 염색된 세포의 비율과 질병의 각 단계에서 염색의 강도를 결정하는 데 이용된다.
본 발명은 또한 임의의 본 발명 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 질병의 효과를 완화시키거나, 질병을 예방하거나, 질병을 치료하거나, 또는 질병의 진전을 억제하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 세포 롤링, 염증, 자가면역 질병, 혈전증, 재발협착, 전이, 종양 세포의 성장 및/또는 복제, 백혈병 세포의 성장 및/또는 복제, 종양 환자에서 종양 세포의 수의 증가, 또는 백혈병 환자에서 백혈병 세포의 수의 증가를 억제하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 종양 세포의 사멸율, 백혈병 세포의 사멸율, 질병 세포의 항질병 제제에 의한 손상에 대한 민감성, 항암제에 의한 손상에 대한 종양 세포의 민감성, 또는 항암제에 의한 손상에 대한 백혈병 세포의 민감성을 증가시키는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 종양 환자에서 종양 세포의 수를 감소시키는 방법 및 백혈병 환자에서 백혈병 세포의 수를 감소시키는 방법을 제공한다. 마지막으로, 본 발명은 세포-세포, 세포-매트릭스, 혈소판-매트릭스, 혈소판-혈소판, 및/또는 세포-혈소판 복합체 형성, 응집, 또는 부착을 억제하는 방법을 제공한다.
본 발명 방법은 바람직하게는 준임상적 양으로 투여되는 제제 및 항체의 하나 또는 둘다로 실시된다. 따라서, 본 발명은 (i) 항체 또는 그 단편, 및 (ii) 제제를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것에 관련되는, 치료적 처리 방법을 제공하며, 이때 상기 항체 또는 그 단편, 및/또는 상기 제제의 하나 또는 둘다는 준임상적 양으로 투여된다. 이 용도를 위해 효과적인 양은 질병의 심각성 및 환자의 면역 시스템의 일반 상태에 의존할 것이다. 투여 스케쥴은 또한 환자의 질병 상태와 상황에 따라 다를 것이며, 일반적으로 일일당 단일 환괴 투여 또는 연속 주입에서 다중 투여(예, 4-6 시간마다)의 범위이거나, 또는 치료 의사 및 환자의 상태에 의해 나타내진 대로 일 것이다. 하지만, 본 발명은 임의의 특정 투여량에 제한되지 않음을 알아야 한다.
더욱이, 당업자는 본 발명의 방법은 단일 투여 또는 다중 투여로 상기 제제와 항체를 투여하여 상기 제제가 상기 항체 또는 그 단편의 투여에 앞서, 또는 동시에 또는 후속하여 투여될 수 있도록 하는 것을 포함한다. 상기 제제는 상기 항체 또는 그 단편에 앞서, 동시에 또는 후속하여, 또는 임의의 다른 순서 또는 배열 및 그 역으로 투여될 수 있다. 따라서, 상기 제제와 항체는 별도의 조성물로 존재할 수 있다.
본 발명의 상기 항체, 구조체, 접합체, 배합, 및 단편은 임의의 적절한 방법을 통하여 이를 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다. 예시적인 방법은 정맥내, 근육내, 피하, 국소, 기관내, 경막내, 복강내, 림프관내, 비강내, 혀밑, 경구, 직장, 질내, 호흡기내, 볼내, 진피내, 경피, 또는 가슴막내 투여를 포함한다.
정맥내 투여의 경우, 상기 제제는 바람직하게는 환자에게 투여되는 양이 원하는 조성물 약 0.1 mg 내지 약 1000 mg의 유효량이도록 제조될 것이다. 더욱 바람직하게는, 투여되는 양은 원하는 조성물 약 1 mg 내지 약 500 mg 범위일 것이다. 본 발명의 조성물은 광범위한 투여 범위에 걸쳐 효과적이며, 치료될 질병의 세부 사항, 환자의 신체에서 상기 펩티드 또는 폴리펩티드계 약학 조성물의 반감기, 약학 조성물 및 약학 제제의 물리적 및 화학적 특성, 약학 조성물의 투여 방식, 치료 또는 진단될 환자의 세부 사항 및 치료 의사에 의에 중요한 것으로 간주되는 다른 매개변수와 같은 요소에 의존한다.
경구 투여용 약학 조성물은 임의의 적합한 형태일 수 있다. 예로는 정제, 액체, 에멀젼, 현탁액, 시럽, 알약, 캐플릿 및 캡슐을 포함한다. 약학 조성물을 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, Remington, The Science and Practice of Pharmacy, Alfonso R.Gennaro(Ed.) Lippincott, Williams & Wilkins(pub) 참고.
약학 조성물은 또한 시간을 맞춘, 지속적인, 펄스된, 또는 연속적인 방출을 촉진하기 위해 제제화될 수도 있다. 상기 약학 조성물은 또한 시간을 맞춘, 지속적인, 펄스된, 또는 연속적인 방출 장치와 같은 장치로 투여될 수도 있다.
국소 투여를 위한 약학 조성물은 크림, 연고, 로션, 패치, 용액, 현탁액, 동결건조물 및 젤과 같은 임의의 적합한 형태일 수 있다.
본 발명의 항체, 구조체, 접합체, 배합물 및 단편을 포함하는 조성물은 통상의 약학적 허용 희석제, 부형제, 담체 등을 포함할 수도 있다. 정제, 알약, 캐플릿 및 캡슐은 락토스, 전분 및 마그네슘 스테아레이트와 같은 통상의 부형제를 포함할 수도 있다. 좌약은 왁스와 글리세롤과 같은 부형제를 포함할 수도 있다. 주사용 용액은 염수와 같은 멸균 무-피로젠 매질을 포함하며, 완충제, 안정화제 또는 방부제를 포함할 수도 있다. 통상의 장용 코팅이 또한 이용될 수 있다.
하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위해 개시되며 어떤 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다. 구체적 시약과 반응 조건이 개시되지만, 본 발명의 버무이에 포함되는 변형이 만들어질 수 있다. 따라서, 하기 실시예는 본 발명을 더 예시하기 위해 제공된다. 여기서 언급된 모든 참고문헌은 참고로 통합된다.
실시예 1
본 실시예는 MOLT-4 종양-함유 마우스에서 화학 치료법과 Y1 사이의 상호작용을 검사한다.
먼저, SCID 마우스(Jackson)를 100mg/kg CTX(주사용 시톡산-시클로포스파미드, Mead Johnson)로 예비처리하였다. CTX 주사 후 5일째에, MOLT-4(T 백혈병) 세포를 꼬리 정맥을 통해 2 X 107 세포로 정맥내 접종하였다. 마우스를 임의로 5 개의 처리군(군 당 13마리)으로 나누고, 이들을 세포 접종 후 5일부터 시작하여 하기 표에 나타난 대로 처리하였다. 종양-함유 마우스를 동시에 또는 독소루비신 처리 과정 후에 주어지는 Y1과 함께 독소루비신(Dox)의 적정량 이하 량으로 2주동안 처리하였다. 상기 치료에 대한 반응은 생존률로 모니터하였다. 전술한 대로, 실험군은 하기와 같았다:
군 투여된 물질(i.v.) 처리의 빈도
대조군 추가 처리 없음 -
독소루비신(Dox) 2 mg Dox/kg 마우스 2 투여량, 1x/wk, 접종 후 5일에 시작
Y1 0.1 mg Y1 scFv/마우스 6 투여량, 3x/wk, 접종 후 5일에 시작
순차적 치료 2mg Dox/kg 마우스 및 이어서 0.1mg Y1 scFv/마우스 2 투여량, 1x/wk(접종 후 5일에 시작), 이어서 6 투여량, 3x/wk
배합된 치료 2mg Dox/kg 마우스 + 이어서 0.1mg Y1 scFv/마우스 2 투여량, 1x/wk(접종 후 5일에 시작), 이와 동시에 6 투여량, 3x/wk
도 1의 결과는 단독으로 독소루비신의 적정량 이하 양의 처리는 대조구(평균 생존 시간 - MTS 39.08±0.8일)에 비하여, 종양-함유 마우스의 생존에 부정적 영향을 가짐을 나타낸다(평균 생존 시간 - MST가 33.5±1.68 일). 하지만, 독소루비신과 이어서 Y1으로 순차적으로 처리한 마우스의 생존은 매우 상당히 길어졌다. Y1 단독은 종양-함유 마우스의 생존율에 극적인 효과를 가짐에도 불구하고, 임상적으로 적절한 양 이하의 독소루비신과 Y1의 배합이 최상의 효과를 가졌다. 상당히 증가된 생존율은 화학요법과 Y1 항체 상이의 상승적 효과의 결과로 보인다.
SEQUENCE LISTING <110> Savient Pharmaceuticals, Inc. <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR THERAPEUTIC TREATMENT <130> 10793/73 <140> PCT/US03/20604 <141> 06/30/2003 <150> 10/189,025 <151> 07/01/2002 <160> 8 <170> FastSEQ for Windows Version 3.0 <210> 1 <211> 277 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ala Ala Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala Ala Gln Pro Ala 1 5 10 15 20 Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu 25 30 35 40 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg 45 50 55 60 Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr 65 70 75 80 Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser 85 90 95 100 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 105 110 115 120 Met Arg Ala Pro Val Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Arg Gly Gly Gly 125 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala 145 150 155 160 Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser 165 170 175 180 Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly 185 190 195 200 Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr 205 210 215 220 Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser 225 230 235 240 Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gy Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 245 250 255 260 Ala Ala Ala Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Gly Ala Ala 265 270 275 <210> 2 <211> 278 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ala Ala Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala Ala Gln Pro Ala 5 10 15 20 Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu 25 30 35 40 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Leu Thr His Pro Tyr Phe trp Val 45 50 55 60 Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser 65 70 75 80 Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95 100 Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 105 110 115 120 Arg Met Arg Ala Pro Val Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Arg Gly Gly 125 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro 145 150 155 160 Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg 165 170 175 180 Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 185 190 195 200 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn 205 210 215 220 Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn 225 230 235 240 Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 245 250 255 260 Gly Ala Ala Ala Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Gly Ala Ala 265 270 275 <210> 3 <211> 280 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ala Ala Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala Ala Gln Pro Ala 5 10 15 20 Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu 25 30 35 40 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Leu Asn Pro Lys Val Lys His Met 45 50 55 60 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly 65 70 75 80 Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala 85 90 95 100 Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Glu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 105 110 115 120 Cys Ala Arg Met Arg Ala Pro Val Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Arg 125 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Leu Thr Gln 145 150 155 160 Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser 165 170 175 180 Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val 185 190 195 200 Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser 205 210 215 220 Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr 225 230 235 240 Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 245 250 255 260 Val Leu Gly Ala Ala Ala Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Gly Ala Ala 265 270 275 280 <210> 4 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Arg Ala Pro Val Ile 5 <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys 5 10 15 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Asp Tyr Gly Met Ser 5 <210> 7 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Leu Thr His Pro Tyr Phe 5 <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Leu Asn Pro Lys Val Lys His Met 5

Claims (63)

  1. 제제 및 항체, 또는 그 단편을 포함하는 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제제가 상기 항체, 또는 그 단편과 복합화된 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 제제가 상기 항체, 또는 그 단편과 배합된 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 제제가 상기 항체, 또는 그 단편과 접합된 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 제제가 준임상적 양으로 존재하는 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 제제의 준임상적 양이 항질병 제제에 대한 질병 세포의 민감성을 효과적으로 변화시키기에 불충분한 조성물.
  7. 제5항에 있어서, 상기 제제의 준임상적 양이 세포 롤링, 염증, 자가 면역 질병, 혈전증, 재발협착, 전이, 또는 종양 세포 또는 백혈병 세포의 성장, 및/또는 복제를 효과적으로 억제하기에 불충분한 조성물.
  8. 제5항에 있어서, 상기 제제의 준임상적 양이 종양 환자에서 종양 세포의 수 증가를 효과적으로 억제하거나 백혈병 환자에서 백혈병 세포의 수 증가를 억제하기에 불충분한 조성물.
  9. 제5항에 있어서, 상기 제제의 준임상적 양이 종양 환자에서 종양 세포의 수를 감소시키거나 백혈병 환자에서 백혈병 세포의 수를 감소시키는 데 불충분한 조성물.
  10. 제5항에 있어서, 상기 제제의 준임상적 양이 종양 세포 또는 백혈병 세포의 사멸을 증가시키거나, 항암제에 의한 손상에 대한 종양 세포의 민감성을 증가시키거나, 또는 항백혈병 제제에 의한 손상에 대한 백혈병 세포의 민감성을 증가시키기에 불충분한 조성물.
  11. 제5항에 있어서, 상기 제제의 준임상적 양이 세포-세포, 세포-매트릭스, 혈소판-매트릭스, 혈소판-혈소판, 및/또는 세포-혈소판 복합체 형성, 응집, 또는 부착을 효과적으로 억제하기에 불충분한 조성물.
  12. 제1항에 있어서, 상기 항체, 또는 그 단편이 준임상적 양으로 존재하는 조성물.
  13. 제1항에 있어서, 상기 항체, 또는 그 단편이 서열 번호 1, 서열 번호 2, 또는 서열 번호 3의 scFv 항체 단편의 결합 능력을 갖는 조성물.
  14. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 그 단편이 서열 번호 4를 갖는 제1 과변이 영역을 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드의 결합 능력을 갖는 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 펩티드 또는 폴리펩티드가 추가로 서열 번호 5를 갖는 제2 과변이 영역 및/또는 서열 번호 6, 서열 번호 7, 또는 서열 번호 8을 갖는 제3 과변이 영역을 포함하는 조성물.
  16. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 그 단편이 scFv 또는 Fab 단편인 조성물.
  17. 제제 및 항체, 또는 그 단편을 포함하며, 상기 항체 또는 그 단편이 약 3 내지 약 126 아미노산 잔기 길이의 펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프에 결합하며, 상기 펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프가 적어도 2개의 산성 아미노산과 적어도 하나의 황화된 티로신 잔기를 갖는 조성물.
  18. 제제 및 항체, 또는 그 단편을 포함하며, 상기 항체 또는 그 단편이 PSGL-1, 피브리노겐 감마 프라임(γ'), GP1bα, 헤파린, 루미칸, 보체 화합물 4(CC4), 인터알파 억제제, 및 프로트롬빈으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 두 가지의 상이한 분자에 결합하는 조성물.
  19. 제제 및 항체, 또는 그 단편을 포함하며, 상기 항체 또는 그 단편이 PSGL-1, 피브리노겐 감마 프라임(γ'), GP1bα, 헤파린, 루미칸, 보체 화합물 4(CC4), 인터알파 억제제, 및 프로트롬빈으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 두 가지의 상이한 분자에 결합하며 B 세포 백혈병 세포, B-CLL 세포, AML 세포, 다중 골수종 세포, 및 전이성 세포로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 세포 타입에 결합하는 조성물.
  20. 제제 및 항체, 또는 그 단편을 포함하며, 상기 항체 또는 그 단편이 둘 이상의 에피토프와 교차반응하며, 각 에피토프는 하나 이상의 황화된 티로신 잔기와 둘 이상의 산성 아미노산의 집단 적어도 하나를 포함하는 조성물.
  21. 제1항에 있어서, 상기 제제가 항암, 항전이, 항백혈병, 항질병, 항부착, 항혈전증, 항재발협착, 항자가면역, 항응집, 항박테리아, 항바이러스, 및 항염증 제제로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
  22. 제21항에 있어서, 상기 제제가 어사이클로비어, 간시클로비어 및 지도부딘으로 구성된 군으로부터 선택된 항바이러스 제제인 조성물.
  23. 제21항에 있어서, 상기 제제가 시로스타졸, 달테파린 소듐, 레비파린 소듐, 및 아스피린으로 구성된 군으로부터 선택된 항혈전증/항재발협착 제제인 조성물.
  24. 제21항에 있어서, 상기 제제가 잘토프로펜, 프라노프로펜, 드록시캄, 아세틸 살리실릭 17, 디클로페낙, 이부프로펜, 덱시부프로펜, 수린닥, 나프록센, 암톨메틴, 세레콕시브, 인도메타신, 로페콕시브, 및 니메수리드로 구성된 군으로부터 선택된 항염증 제제인 조성물.
  25. 제21항에 있어서, 상기 제제가 레플루노미드, 데니류킨 디프티톡스, 수브레움, 윈로 SDF, 데피브로티드, 및 시클로포스파미드로 구성된 군으로부터 선택된 항자가면역 제제인 조성물.
  26. 제21항에 있어서, 상기 제제가 리마프로스트, 클로르크로멘, 및 히알루론산으로 구성된 군으로부터 선택된 항부착/항응집 제제인 조성물.
  27. 제21항에 있어서, 상기 제제가 독소, 방사성동위원소, 및 약학 제제로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
  28. 제27항에 있어서, 상기 독소가 젤로닌, 슈도모나스 외독소(PE), PE40, PE38, 리신, 및 그 변형체와 유도체로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
  29. 제27항에 있어서, 상기 방사성동위원소가 감마-방사체, 양전자-방사체, x-선 방사체, 베타-방사체 및 알파-방사체로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
  30. 제27항에 있어서, 상기 방사성동위원소가 111인듐, ll3인듐, 99m레늄, 105레늄, 101레늄, 99m테크네튬, 121m텔루륨, 122m텔루륨, 125m 텔루륨, 165툴륨, 167툴륨, 168툴륨, 123이오딘, 126이오딘, 131이오딘, 133이오딘, 81m크립톤, 33크세논, 90이트륨, 213비스무스, 77브로마인, 18플루오르, 95루테늄, 97루테늄, 103루테늄, 105루테늄, l07수은, 203수은, 67갈륨, 및 68갈륨으로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
  31. 제27항에 있어서, 상기 약학 제제가 시스-플라티늄, 택솔, 칼리케미신, 빈크리스틴, 시타라빈(Ara-C), 시클로포스파미드, 프레드니손, 플루다라빈, 클로람부실, 인터페론 알파, 하이드록시우레아, 테모졸로미드, 탈리도미드 및 블레오미신, 및 그 유도체 및 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
  32. 제27항에 있어서, 상기 약학 제제가 안트라사이클린 또는 그 유도체인 조성물.
  33. 제32항에 있어서, 상기 약학 제제가 독소루비신, 다우노루비신, 이다루비신, 모르폴리노독소루비신, 모르폴리노다우노루비신, 메톡시모르폴리닐독소루비신, 및 그 유도체와 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
  34. 제32항에 있어서, 상기 약학 제제가 독소루비신 또는 그 유도체인 조성물.
  35. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 그 단편이, 하나보다 많은 제제에 결합되거나 복합화되거나 배합된 비히클 또는 담체에 결합되거나 복합화되거나 배합되는 조성물.
  36. 제35항에 있어서, 상기 비히클 또는 담체는 덱스트란, 친유성 중합체, 친수성 중합체, HPMA, 및 리포좀으로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
  37. 제36항에 있어서, 상기 비히클 또는 담체가 독소루비신-장식된 리포좀인 조성물.
  38. 제36항에 있어서, 상기 비히클 또는 담체가 폴리에틸렌글리콜(PEG) 또는 덱스트란인 조성물.
  39. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 세포 롤링을 억제하는 방법.
  40. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 염증을 억제하는 방법.
  41. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 질병을 억제하는 방법.
  42. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 혈전증을 억제하는 방법.
  43. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 재발협착을 억제하는 방법.
  44. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 전이를 억제하는 방법.
  45. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 종양 세포의 성장 및/또는 복제를 억제하는 방법.
  46. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 종양 세포의 사멸율을 증가시키는 방법.
  47. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 백혈병 세포의 성장 및/또는 복제를 억제하는 방법.
  48. 제1항의 약학 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 백혈병 세포의 사멸율을 증가시키는 방법.
  49. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 항질병 제제에 의한 손상에 대한 질병 세포의 민감성을 증가시키는 방법.
  50. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 항암제에 의한 손상에 대한 종양 세포의 민감성을 증가시키는 방법.
  51. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 항암제에 의한 손상에 대한 백혈병 세포의 민감성을 증가시키는 방법.
  52. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 종양 환자에서 종양 세포 수의 증가를 억제하는 방법.
  53. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 종양 환자에서 종양 세포 수를 감소시키는 방법.
  54. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 백혈병 환자에서 백혈병 세포 수의 증가를 억제하는 방법.
  55. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 백혈병 환자에서 백혈병 세포 수를 감소시키는 방법.
  56. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 세포-세포, 세포-매트릭스, 혈소판-매트릭스, 혈소판-혈소판, 및/또는 세포-혈소판 복합체 형성을 억제하는 방법.
  57. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 세포-세포, 세포-매트릭스, 혈소판-매트릭스, 혈소판-혈소판, 및/또는 세포-혈소판 응집을 억제하는 방법.
  58. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 세포-세포, 세포-매트릭스, 혈소판-매트릭스, 혈소판-혈소판, 및/또는 세포-혈소판 부착을 억제하는 방법.
  59. 제1항의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 질병의 효과를 완화시키거나, 질병을 예방하거나, 질병을 치료하거나, 또는 질병의 진전을 억제하는 방법.
  60. (i) 항체, 또는 그 단편, 및 (ii) 제제를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 이때 상기 항체, 또는 그 단편, 및/또는 상기 제제의 하나 또는 둘다는 준임상적 양으로 투여되는 치료적 처리 방법.
  61. 제60항에 있어서, 상기 항체, 또는 그 단편, 및 상기 제제가 별도로 투여되는 방법.
  62. 제61항에 있어서, 상기 항체 또는 그 단편이 상기 제제에 앞서 투여되는 방법.
  63. 제61항에 있어서, 상기 항체 또는 그 단편이 상기 제제에 후속하여 투여되는 방법.
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