KR20040039393A

KR20040039393A - 선택적 ｉｎｏｓ 억제제를 사용한 안과적 치료 방법

Info

Publication number: KR20040039393A
Application number: KR10-2004-7004169A
Authority: KR
Inventors: 매닝파멜라티; 코너제인알
Original assignee: 파마시아 코포레이션
Priority date: 2001-09-24
Filing date: 2002-09-24
Publication date: 2004-05-10
Also published as: WO2003026668A1; CA2455910A1; IL161004A0; EP1429777A1; JP2005506986A; MXPA04002711A; BR0212991A; PL369338A1; EP1429777A4; CN1556707A; ZA200402285B; US20030109522A1; AU2002327041A2

Abstract

안과적 이상 상태의 예방 및 치료를 위한 치료 방법이 기재되어 있으며, 상기 방법은 이를 필요로 하는 환자에게 유도성 산화질소 신타아제의 선택적 억제제를 투여하는 것을 포함한다.

Description

선택적 ＩＮＯＳ 억제제를 사용한 안과적 치료 방법{OPHTHALMOLOGIC TREATMENT METHODS USING SELECTIVE INOS INHIBITORS}

1980 년대 초에, 아세틸콜린에 의해 유발된 혈관 이완은 혈관 내피의 존재에 의존적이라는 것이 밝혀졌다. 그러한 혈관 이완을 매개하는 내피로부터 유래된 인자, 소위 내피-유래 이완 인자 (EDRF; endothelium-derived relaxing factor) 는 현재 산화질소 (NO) 로 알려져있다. 산화질소는 산화질소 신타아제 (NOS; nitric oxide synthase) 에 의해 혈관 내피에서 발생되는 자유 라디칼 기체이다. 혈관확장제로서의 NO 의 활성은 100 년 넘게 알려져 왔다. 또한, NO 는 아밀니트라이트, 및 글리세릴트리니트레이트를 포함하는 공지의 니트로혈관확장제로부터 유래된 활성 종이다. 산화질소는 또한 가용성 구아닐레이트 시클라아제 (cyclase) 의 내생적 자극제이므로, 시클릭 구아노신 모노포스페이트 (cGMP) 생성을 자극한다. NOS 가 N-모노메틸아르기닌 (L-NMMA) 에 의해 억제되는 경우,cGMP 형성이 완전히 방지된다. 내피 의존성 이완 이외에도, NO 는 포식세포의 세포독성 및 중추 신경계의 세포-세포간 소통을 포함하는 다수의 생물학적 작용에 관여한다.

NO 로서의 EDRF 의 동정(identification)은 효소 NO 신타아제에 의한 아미노산 L-아르기닌으로부터 NO 가 합성되는 생화학적 경로의 발견에 부합된다. 하기와 같은 3종 이상의 NO 신타아제가 있다:

(i) 수용체 또는 물리적 자극에 반응하여 NO 를 방출하는, 내피에 위치된, 구성적(constitutive), Ca++/칼모듈린(calmodulin) 의존성 효소.

(ii) 수용체 또는 물리적 자극에 반응하여 NO 를 방출하는, 뇌에 위치된, 구성적, Ca++/칼모듈린 의존성 효소.

(iii) 혈관 평활근, 대식세포, 내피 세포 및 다수의 기타 세포들을 내독소 및 사이토카인으로 활성화시킨 후 유도되는, 130 kD 단백질인 Ca++ 의존성 효소. 일단 발현되면, 상기 유도성 산화질소 신타아제 (이후, "iNOS") 는 장시간 동안 NO 를 연속적으로 발생시킨다.

일군의 산화질소 신타아제 효소에 의해 생성된 산화질소는 광범한 생리학적 및 병리생리학적 작용을 갖는다 (Moncada 등, Pharmacol. Rev., 43: 109-142, 1991). 두 구성 효소의 각각에 의해 방출된 NO 는 몇몇 생리학적 응답성을 겪는 형질도입 메카니즘으로서 작용한다. 대조적으로, 유도성 효소에 의해 생성된 NO 는 종양 세포에 대한 세포독성 분자이고, 미생물에 침입한다. 유도성 NOS 는 또한 골관절염의 염증에도 관계한다.

CNS 에서, NOS 의 유도성 형태는 수 가지의 인간 장애를 특징으로 하는 신경퇴행(neurodegeneration)에 관련된 것으로 보인다. 더욱 특히, iNOS 는 뇌에서 정상적으로는 발현되지 않지만, 바이러스 감염 또는 외상과 같은 상해 후, 성상세포 및 소신경교세포에서 유도될 수 있다. 예를 들어, 뇌 허혈은 뇌에서 iNOS 활성을 유도한다. iNOS 녹아웃 (knockout) 된 마우스에서 허혈 유도된 뇌 경색은 자연형 (wild-type) 대조군에서의 경색보다 부피가 훨신 작다 (Shareef 등, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 40:2884-91, 1999). 유도성 NOS 는 중풍, 다발 경화증, 근육위축 가쪽 경화증 (amyotropic lateral sclerosis), 알츠하이머 질환 및 후천 면역결핍 증후군과 같은 CNS 질환 및 이상 상태와 관계된 신경퇴행과 관련이 있다 (Shareef 등).

또한, 정상의 그리고 녹내장성 시신경 헤드(head)에서의 NOS 이성체 분포는 녹내장의 신경퇴행에 iNOS 를 결부시킨다 (Shareef 등). 정상의 것은 NOS 의 구성 형태 모두를 ((i) 형 및 (ii) 형) 발현하는 것으로 보인다. (i) 형은 시신경 전체에 걸쳐 다수의 성상세포에, 그리고 그의 혈관계에 존재하며, 세포간 신호전달, 및 혈관확장과 혈액 흐름의 제어에 있어 역할을 하는 것으로 생각된다. (ii) 형은 시신경 헤드 맥관계 전체에 걸쳐 혈관 내피에 국소화되고, 혈관 흐름 조절을 보조하는 것 이외에 신경 보호 역할도 할 수 있다. 대조적으로, iNOS 는 시신경 헤드에서 정상적으로는 발현되지 않지만, 실험적으로 유도된, 만성의 온건하게(moderately) 상승된 안압 (IOP; intraocular pressure) 를 갖는 래트의 시신경에서 출현한다 (Shareef 등). 만성의 온건하게 상승된 IOP 를 갖는 래트에서, iNOS 의 억제제인 아미노구아니딘은 신경절 세포의 손실을 막는다 (Neufeld 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 9944-48, 1999). 또한, 염증을 특징으로 하는 포도막염은 사이토카인 종양 괴사 인자-α(TNF-α) 에 의해 자극된 증가된 iNOS 활성과 관련될 수 있다.

하기 각각의 공보는 산화질소 합성을 억제하고, 선호적으로 산화질소 신타아제의 유도성 이성체를 억제하는 화합물을 개시하고 있다:

PCT 특허 출원 번호 WO 96/35677.

PCT 특허 출원 번호 WO 96/33175.

PCT 특허 출원 번호 WO 96/15120.

PCT 특허 출원 번호 WO 95/11014.

PCT 특허 출원 번호 WO 95/11231.

PCT 특허 출원 번호 WO 99/46240.

PCT 특허 출원 번호 WO 95/24382.

PCT 특허 출원 번호 WO 94/12165.

PCT 특허 출원 번호 WO 94/14780.

PCT 특허 출원 번호 WO 93/13055.

PCT 특허 출원 번호 WO 99/62875.

유럽 특허 번호 제 EP0446699A1 호.

미국 특허 번호 제 5,132,453 호.

미국 특허 번호 제 5,684,008 호.

미국 특허 번호 제 5,830,917 호.

미국 특허 번호 제 5,854,251 호.

미국 특허 번호 제 5,863,931 호.

미국 특허 번호 제 5,919,787 호.

미국 특허 번호 제 5,945,408 호.

미국 특허 번호 제 5,981,511 호.

PCT 특허 출원 번호 WO 95/25717 은 유도성 산화질소 신타아제를 억제하는데 유용한 특정 아미디노 유도체를 개시하고 있다.

PCT 특허 출원 번호 WO 99/62875 또한 유도성 산화질소 신타아제를 억제하는데 유용한 아미디노 화합물을 개시하고 있다.

이러한 배경으로, 극미한 독성 및 부작용을 가지면서 향상된 전반적 치료 효능을 수득하기 위해, iNOS 의 과도한 활성에 관련된 다양한 안과적 이상 상태에 대한 신규한 치료제 및 치료 방법에 대한 관심이 증가되어 왔다. iNOS 의 생화학 및 기능에 관한 기본적 발견들은 iNOS 를 안과적 장애, 및 특히 망막 질환을 포함한 다양한 이상 상태에 결부시키지만, 이들 이상 상태의 치료 및 예방의 공지 방법은 현재 신규한 iNOS 선택적 억제제를 사용한 요법의 방법을 현재 포함하고 있지 않다. 따라서, 과도한 iNOS 활성에 관련된 안과적 그리고 망막 이상 상태를 치료하기 위해 신규한 iNOS 선택적 억제제를 사용한 새로운 요법을 발견 및 기술하는 것은 유익할 것이다.

본 발명은 일반적으로 산화질소 신타아제 (iNOS) 의 유도성 형태의 선택적 억제제를 사용한 의료적 치료 방법, 더욱 특히는 과도한 iNOS 활성에 관련된 안과적 이상 상태(condition) 및 질환의 의료적 예방 및 치료에 유용한 신규한 방법에 관한 것이다.

발명의 개요

한 구현예에서, 본 발명은 하기 화학식 I 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 II 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 III 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 IV 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 V 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 VI 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 VII 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 VIII 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 IX 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 및 하기 화학식 X 또는 그의 약제학적 허용가능 염에서 선택된 화학식을 갖는 화합물을 포함하는 유도성 산화질소 신타아제 선택적 억제제의 안과적 이상 상태 유효량을 환자에게 투여하는 것에 의한, 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자의 안과적 이상 상태의 치료 또는 예방을 위한 치료 방법에 관한 것이다:

[화학식 I]

[식 중,

R¹은 H, 할로 및 하나 이상의 할로로 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진군에서 선택되고;

R²는 H, 할로 및 하나 이상의 할로로 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군에서 선택되나;

단, 하나 이상의 R¹또는 R²가 할로를 함유하며;

R⁷은 H 및 히드록시로 이루어진 군에서 선택되고;

J 는 히드록시, 알콕시 및 NR³R⁴로 이루어진 군에서 선택되고:

(식 중,

R³는 H, 저급 알킬, 저급 알킬레닐 및 저급 알키닐로 이루어진 군에서 선택되고;

R⁴는 H, 및 고리의 하나 이상의 원이 탄소이고 1 내지 약 4 개의 헤테로원자가 산소, 질소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 헤테로시클릭 고리로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 헤테로시클릭 고리는 헤테로아릴아미노, N-아릴-N-알킬아미노, N-헤테로아릴아미노-N-알킬아미노, 할로알킬티오, 알카노일옥시, 알콕시, 헤테로아르알콕시, 시클로알콕시, 시클로알케닐옥시, 히드록시, 아미노, 티오, 니트로, 저급 알킬아미노, 알킬티오, 알킬티오알킬, 아릴아미노, 아르알킬아미노, 아릴티오, 알킬술피닐, 알킬술포닐, 알킬술폰아미도, 알킬아미노술포닐, 아미도술포닐, 모노알킬 아미도술포닐, 디알킬 아미도술포닐, 모노아릴아미도술포닐, 아릴술폰아미도, 디아릴아미도술포닐, 모노알킬 모노아릴 아미도술포닐, 아릴술피닐, 아릴술포닐, 헤테로아릴티오, 헤테로아릴술피닐, 헤테로아릴술포닐, 알카노일, 알케노일, 아로일, 헤테로아로일, 아르알카노일, 헤테로아르알카노일, 할로알카노일, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬렌디옥시, 할로알킬렌디옥시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 저급 시클로알킬알킬, 저급 시클로알케닐알킬, 할로, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시할로알킬, 히드록시아르알킬, 히드록시알킬, 히드록시헤테로아르알킬, 할로알콕시알킬, 아릴, 아르알킬, 아릴옥시, 아르알콕시, 아릴옥시알킬, 포화 헤테로시클릴, 부분 포화 헤테로시클릴, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴옥시알킬, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 시아노알킬, 디시아노알킬, 카르복사미도알킬, 디카르복사미도알킬, 시아노카르보알콕시알킬, 카르보알콕시알킬, 디카르보알콕시알킬, 시아노시클로알킬, 디시아노시클로알킬, 카르복사미도시클로알킬, 디카르복사미도시클로알킬, 카르보알콕시시아노시클로알킬, 카르보알콕시시클로알킬, 디카르보알콕시시클로알킬, 포르밀알킬, 아실알킬, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 포스포노알킬, 디알콕시포스포노알콕시, 디아르알콕시포스포노알콕시, 포스포노알콕시, 디알콕시포스포노알킬아미노, 디아르알콕시포스포노알킬아미노, 포스포노알킬아미노, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 구아니디노, 아미디노, 및 아실아미노로 임의 치환될 수 있음)];

[화학식 II]

[식 중,

X 는 -S-, -S(O)-, 및 -S(O)₂- 로 이루어진 군에서 선택되고;

R¹²는 C₁-C₆알킬, C₂-C₆알케닐, C₂-C₆알키닐, C₁-C₅알콕시-C₁알킬, 및 C₁-C₅알킬티오-C₁알킬로 이루어진 군에서 선택되고, 여기서 각각의 상기 기들은 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 치환체로 임의 치환되며;

R¹³및 R^l8은, R^l8이 -OR²⁴및 -N(R²⁵)(R²⁶) 으로 이루어진 군에서 선택되고, R¹³이 -H, -OH, -C(O)-R²⁷, -C(O)-O-R²⁸및 -C(O)-S-R²⁹로 이루어진 군에서 선택되거나; R^l8이 -N(R³⁰)- 이고 R¹³이 -C(O)- 이며, 여기서 R^l8및 R¹³은 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하거나; R^l8이 -O- 이고 R¹³이 -C(R³¹)(R³²)- 이며, 여기서 R^l8및 R¹³은 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하도록 선택되며; R¹³이 -C(R3²¹)(R³²)- 인 경우, R¹⁴는 -C(O)-O-R³³이고; 그렇지 않으면 R¹⁴는 -H 이며, R¹¹, R¹⁵, R¹⁶및 R¹⁷은 독립적으로 -H, 할로겐, C₁-C₆알킬, C₂-C₆알케닐, C₂-C₆알키닐 및 C₁-C₅알콕시-C₁알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

R^l9및 R²⁰은 독립적으로 -H, C_l-C₆알킬, C₂-C₆알케닐, C₂-C₆알키닐 및 C_l-C₅알콕시-C₁알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

R²¹은 -H, -OH, -C(O)-O-R³⁴및 -C(O)-S-R³⁵로 이루어진 군에서 선택되고, R²²는 -H, -OH, -C(O)-O-R³⁶및 -C(O)-S-R³⁷로 이루어진 군에서 선택되거나; R²¹은 -O- 이고, R²²는 -C(O)- 이며, 여기서 R²¹및 R²²는 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하거나; R²¹은 -C(O)- 이고, R²²는 -O- 이며, 여기서 R²¹및 R²²는 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하고;

R²³은 C_l알킬이고;

R²⁴는 -H 및 C_l-C₆알킬로 이루어진 군에서 선택되며, 여기서 R²⁴가 C_l-C₆알킬인 경우, R²⁴는 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 부분으로 임의 치환되며;

R²⁵는 H, 알킬 및 알콕시로 이루어진 군에서 선택되며, R²⁶은 -H, -OH, 알킬, 알콕시, -C(O)-R³⁸, -C(O)-O-R³⁹및 -C(O)-S-R⁴⁰으로 이루어진 군에서 선택되고; 여기서 R²⁵및 R²⁶은 독립적으로 알킬 또는 알콕시이고, R²⁵및 R²⁶은 독립적으로 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 부분으로 임의 치환되거나; R²⁵는 -H 이고; R²⁶은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택되고;

R²⁷, R²⁸, R²⁹, R³⁰, R³¹, R³², R³³, R³⁴, R³⁵, R³⁶, R³⁷, R³⁸, R³⁹및 R⁴⁰은 독립적으로 -H 및 알킬로 이루어진 군에서 선택되고, 여기서 알킬은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 부분으로 임의 치환되고;

여기서 임의의 R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R¹⁸, R19⁹, R²⁰, R²¹, R²², R²³, R²⁴, R²⁵, R²⁶, R²⁷, R²⁸, R²⁹, R³⁰, R³¹, R³², R³³, R³⁴, R³⁵, R³⁶, R³⁷, R³⁸, R³⁹및 R⁴⁰은 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택된 부분이고, 상기 부분은 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 치환체로 임의 치환됨];

[화학식 III]

[식 중,

R⁴¹은 H 또는 메틸이고;

R⁴²는 H 또는 메틸임];

[화학식 IV]

;

[화학식 V]

[식 중,

R⁴³은 수소, 할로, C₁-C₅알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

R⁴⁴는 수소, 할로, C₁-C₅알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

R⁴⁵는 C₁-C₅알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬임];

[화학식 VI]

[식 중,

R⁴⁶은 C₁-C₅알킬이며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환됨];

[화학식 VII]

[식 중,

R⁴⁷은 수소, 할로, C₁-C₅알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

R⁴⁸은 수소, 할로, C₁-C₅알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

R⁴⁹는 C₁-C₅알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬임];

[화학식 VIII]

[식 중,

R⁵⁰은 C₁-C₅알킬이며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환됨];

[화학식 IX]

[식 중,

R^5O은 수소, 할로 및 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;

R⁵¹은 수소, 할로 및 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;

R⁵²는 C₁-C₅알킬이며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;

R⁵³은 수소, 할로 및 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;

R⁵⁴는 할로 및 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환됨]; 및

[화학식 X]

[식 중,

R⁵⁵는 C₁-C₅알킬이며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환됨].

안과적 이상 상태는, 예를 들어 녹내장, 망막염, 망막 허혈 또는 망막 허혈 관련 이상 상태, 망막병증적 이상 상태, 예컨대 당뇨 망막병증, 성숙기의 망막병증 또는 망막 정맥 교합(retinal vein occlusion)의 망막병증, 포도막염 또는 물리적 외상이다.

상기 기재된 방법은 상승된 수준의 iNOS 활성이 관계하는, 녹내장, 망막염, 망막병증 및 포도막염을 포함하는 안과적 이상 상태의 치료 및 예방에 유용하다.

발명의 상세한 설명

하기 상세한 설명은 당업자가 본 발명을 실시하는 것을 조력하기 위해 제공된다. 하지만, 본원에서 논의된 예시적 구현예에 있어 첨부된 청구범위의 범주를 벗어나지 않고 수정 및 변경이 가해질 수 있기 때문에, 본 상세한 설명이 본 발명을 부당하게 제한하고자 하는 것으로 간주되어서는 안된다.

주요 참고문헌 내에 인용된 참고 문헌의 내용을 포함하는, 본원에서 인용된 주요 참고문헌의 각각의 내용은 본원에 그의 전문이 참고로써 편입된다.

본 발명은, 녹내장, 망막염, 망막병증 및 포도막염의 예방 및 치료용 의약에서의 치료적 사용 방법을 포함하는, 안과적 이상 상태를 치료 또는 예방하기 위한 신규한 선택적 iNOS 억제제를 사용한 치료적 방법을 포괄한다. 상기 치료적 방법은 하기 화학식 I 내지 X 로부터 선택된 화학식을 갖는 유도성 산화질소 신타아제의 선택적 억제제를 투여하는 것을 포함한다.

a. 정의

하기 정의는 본 발명의 상세한 설명의 이해를 돕기 위해 제공된다.

용어 "알킬" 은, 단독으로 또는 조합되어, 바람직하게는 탄소수 1 내지 약 10, 더욱 바람직하게는 탄소수 1 내지 약 6 의, 선형 또는 분지형의, 비(非)시클릭 알킬 라디칼을 의미한다. "알킬" 은 또한 탄소수 3 내지 약 7, 바람직하게는 탄소수 3 내지 5 의 시클릭 알킬 라디칼도 포괄한다. 상기 알킬 라디칼은 하기 정의된 기로 임의 치환될 수 있다. 상기 라디칼의 예는 메틸, 에틸, 클로로에틸, 히드록시에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 시아노부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 아미노펜틸, iso-아밀, 헥실, 옥틸 등을 포함한다.

용어 "알케닐" 은, 하나 이상의 이중 결합을 함유하기 때문에, 불포화된, 선형 또는 분지형의, 비시클릭 탄화수소 라디칼을 언급한다. 상기 라디칼은 탄소수 2 내지 약 6, 바람직하게는 탄소수 2 내지 약 4, 더욱 바람직하게는 탄소수 2 내지 약 3 이다. 상기 알케닐 라디칼은 하기 정의된 기로 임의 치환될 수 있다. 적합한 알케닐 라디칼의 예는 프로페닐, 2-클로로프로필레닐, 부텐-1-일, 이소부테닐, 펜텐-1-일, 2-메틸부텐-1-일, 3-메틸부텐-1-일, 헥센-1-일, 3-히드록시헥센-1-일, 헵텐-1-일 및 옥텐-1-일 등을 포함한다.

용어 "알키닐" 은 하나 이상의 삼중 결합을 함유하기 때문에, 불포화된, 선형 또는 분지형의 비시클릭 탄화수소 라디칼, 예컨대 탄소수 2 내지 약 6, 바람직하게는 탄소수 2 내지 약 4, 더욱 바람직하게는 탄소수 2 내지 약 3 의 라디칼을 언급한다. 상기 알키닐 라디칼은 하기 정의된 기로 임의 치환될 수 있다. 적합한 알키닐 라디칼의 예는 에티닐, 프로피닐, 히드록시프로피닐, 부틴-1-일, 부틴-2-일, 펜틴-1-일, 펜틴-2-일, 4-메톡시펜틴-2-일, 3-메틸부틴-1-일, 헥신-1-일, 헥신-2-일, 헥신-3-일, 3,3-디메틸부틴-1-일 라디칼 등을 포함한다.

용어 "알콕시" 는 탄소수 1 내지 약 6, 바람직하게는 탄소수 1 내지 약 3 의 알킬부를 각각 갖는 선형 또는 분지형의 옥시 함유 라디칼, 예컨대 메톡시 라디칼을 포함한다. 용어 "알콕시알킬" 은 또한 알킬라디칼에 부착되어, 모노알콕시알킬 및 디알콕시알킬 라디칼을 형성하는, 하나 이상의 알콕시 라디칼을 갖는 알킬 라디칼을 포함한다. 상기 라디칼의 예는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시 및 tert-부톡시 알킬을 포함한다. "알콕시" 라디칼은 하나 이상의 할로 원자, 예컨대 플루오로, 클로로 또는 브로모로 추가 치환되어, "할로알콕시" 라디칼을 제공할 수 있다. 상기 라디칼의 예는 플루오로메톡시, 클로로메톡시, 트리플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 트리플루오로에톡시, 플루오로에톡시, 테트라플루오로에톡시, 펜타플루오로에톡시 및 플루오로프로폭시를 포함한다.

용어 "알킬티오" 는 2가 황 원자에 부착된, 탄소수 1 내지 약 6 의 선형 또는 분지형 알킬 라디칼을 함유하는 라디칼을 포괄한다. "저급 알킬티오" 의 예는 메틸티오 (CH₃-S-) 이다.

용어 "알킬티오알킬" 은 알킬 기에 부착된 알킬티오 라디칼을 포함한다.상기 라디칼의 예는 메틸티오메틸을 포함한다.

용어 "할로" 는 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자와 같은 할로겐을 의미한다.

용어 "헤테로시클릴" 은 하나 이상의 탄소 원자가 N, S, P 또는 O 로 대체된 포화 또는 불포화 단일- 또는 다중-고리 카르보사이클을 의미한다. 이는, 예를 들어 하기 구조를 포함한다:

또는

식 중, Z, Z¹, Z²또는 Z³는 C, S, P, O 또는 N 이나, 단, Z, Z¹, Z²또는 Z³중 하나는 탄소 이외의 것이지만, 이중 결합에 의해 또다른 Z 원자에 부착되는 경우 또는 또다른 O 또는 S 원자에 부착되는 경우, O 또는 S 원자가 아니다. 또한, 임의 치환체는 각각이 C 인 경우에만 Z, Z¹, Z²또는 Z³에 부착되는 것으로 이해되어 진다. 용어 "헤테로시클릴" 은 또한 완전히 포화된 고리 구조, 예컨대 피페라지닐, 디옥사닐, 테트라히드로푸라닐, 옥시라닐, 아지리디닐, 모르폴리닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 티아졸리디닐 등을 포함한다. 용어 "헤테로시클릴" 은 또한 부분 포화된 고리 구조, 예컨대 디히드로푸라닐, 피라졸리닐, 이미다졸리닐, 피롤리닐, 크로마닐, 디히드로티오페닐 등을 포함한다.

용어 "헤테로아릴" 은 완전히 불포화된 헤테로사이클을 의미한다.

"헤테로사이클" 또는 "헤테로아릴" 에서, 관심 분자에 대한 부착 위치는 고리 내의 헤테로원자 또는 그외에 존재할 수 있다.

용어 "시클로알킬" 은 각각의 고리가 탄소수 3 내지 약 7, 바람직하게는 탄소수 3 내지 약 5 인 단일- 또는 다중-고리화된 카르보사이클을 의미한다. 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로알케닐 및 시클로헵틸과 같은 라디칼을 포함한다. 용어 "시클로알킬" 은 부가적으로 시클로알킬 고리가 벤조티에핀의 7원 헤테로시클릭 고리와 탄소 고리 원자를 공유하고 있는 스피로 시스템을 포괄한다.

용어 "옥소" 는 이중 결합된 산소를 의미한다.

용어 "알콕시" 는 산소 원자에 결합된 알킬 라디칼을 포함하는 라디칼, 예컨대 메톡시 라디칼이다. 더욱 바람직한 알콕시 라디칼은 탄소수 1 내지 약 10 의 "저급 알콕시" 라디칼이다. 더더욱 바람직한 알콕시 라디칼은 탄소수 1 내지 약 6 의 알콕시 라디칼이다. 상기 라디칼의 예는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시 및 tert-부톡시를 포함한다.

용어 "아릴" 은 치환 또는 비치환 페닐, 나프틸 또는 안트라세닐을 포함하나, 이에 제한되지는 않는, 완전히 불포화된 단일- 또는 다중고리 카르보사이클을 의미한다.

"임의 치환된" 이라는 구는 지적된 라디칼이 수소에 대해 치환될 수 있음을 의미하나, 반드시 그러할 필요는 없다. 따라서, 구 "하나 이상으로 임의 치환된" 은 지적된 부분에 치환이 이루어지는 경우, 또한 하나 초과의 치환이 예상됨을의미한다. 이에 관하여, 하나 초과의 임의 치환체가 존재하는 경우, 어느 하나의 치환체가 선택될 수 있거나, 치환체들의 조합이 선택될 수 있거나, 하나 초과의 동일한 치환체가 선택될 수 있다. 제한하려는 것은 아니나, 예로써 "하나 이상의 할로 또는 알콕시로 임의 치환된 C₁-C₅알킬" 이라는 구는 예를 들어 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 또는 펜틸이 모든 치환가능 위치에 하기를 가질 수 있음을 의미하는 것으로 간주되어야 한다: 수소, 불소, 염소 또는 기타 할로겐, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, iso-부톡시, tert-부톡시, 펜톡시 또는 기타 알콕시 라디칼, 및 이의 조합. 비제한적 예는 하기를 포함한다: 프로필, iso-프로필, 메톡시프로필, 플루오로메틸, 플루오로프로필, 1-플루오로-메톡시메틸 등.

화합물을 구조 및 명칭 모두로 기술하는 경우, 명칭은 나타낸 구조에 상응하도록 하는 것이며, 마찬가지로 구조는 나타낸 명칭에 일치하도록 하는 것이어야 한다.

본원에서 사용된 용어 "환자" 는, 치료, 관찰 또는 실험의 대상인, 동물, 한 구현예에서는 포유류, 대표적인 구현예에서는 특히 인간을 언급한다.

본원에서 사용된 용어 "투약" 및 "치료" 는, 환자의 이상 상태를 개선하려는 목적으로 환자, 특히 인간에게, 직접적으로 또는 간접적으로 의료적 도움을 제공하는 임의의 방법, 조치, 적용, 요법 등을 언급한다.

본원에서 사용된 용어 "치료적 화합물" 은 안과적 이상 상태의 예방 또는 치료에 유용한 화합물을 언급한다.

용어 "조합 요법" 은 본 명세서에 기재된 치료적 이상 상태 또는 장애, 예를 들어 녹내장, 망막염, 망막병증, 포도막염 및 적어도 부분적으로 망막 신경퇴행을 특징으로 하는 안과적 장애를 치료하기 위한, 둘 이상의 치료적 화합물의 투여를 의미한다. 상기 투여는 고정 비의 활성 구성성분을 갖는 단일 캡슐 또는 각각의 활성 구성성분에 대한 다중의 분리된 캡슐에서와 같이, 이들 치료제를 실질적으로 동시적 방식으로 공동투여하는 것을 포함한다. 또한, 상기투여는 각 유형의 치료제를 순차적 방식으로 사용하는 것도 포함한다. 어느 경우에도, 상기 치료안은 본원에 기재된 이상 상태 또는 장애를 치료하는데 있어서 약물 조합의 이로운 효과를 제공할 것이다.

본원에서 사용된 용어 "치료적 조합" 은, 치료적 화합물이 실질적으로 동시적으로 또는 순차적으로 투여되는지에 관계 없이, 둘 이상의 치료적 화합물의 조합, 및 소정의 시점에서 환자에게 각각의 치료적 화합물의 이로운 효과를 발생시키는 투약 형태물을 제공하는데 사용되는 임의의 약제학적 허용가능 담체를 언급한다.

본원에서 사용된 용어 "치료적으로 유효한" 은 치료적 화합물의 양의 특성, 또는 조합 요법에서의 조합된 치료적 화합물의 양의 특성을 언급한다. 양 또는 조합된 양은 안과적 이상 상태의 예방, 회피, 감소 또는 제거의 목표를 달성한다.

본원에서 사용된 용어 "안과적 이상 상태 유효적" 은 치료적 화합물의 양의 특성, 또는 조합 요법에서의 조합된 치료적 화합물의 양의 특성을 언급한다. 양 또는 조합된 양은 안과적 이상 상태의 예방, 회피, 감소 또는 제거의 목적을 달성한다.

본원에서 상호호환적으로 사용된 용어 "유도성 산화질소 신타아제" 및 "iNOS" 는 효소 산화질소 신타아제의 Ca⁺²-독립적 유도성 이성체를 언급한다.

본원에서 상호호환적으로 사용된 용어 "유도성 산화질소 신타아제 선택적 억제제", "선택적 iNOS 억제제" 및 "iNOS 선택적 억제제" 는 효소 산화질소 신타아제의 Ca⁺²-독립적 유도성 이성체를 선택적으로 억제하는 치료적 화합물을 언급한다. 선택적 iNOS 억제제는, 생체내 투여가 효능 (설치류 내독소 모델에서 100 mg/kg 미만, 바람직하게는 10 mg/kg 미만의 ED₅₀), 및 평균 동맥 혈압 상승에 의해 측정시 eNOS 에 대해 20 배 이상, 바람직하게는 100 배 이상의 선택성, 그리고 위장관 통과 또는 음경 발기의 감소에 의한 측정시 nNOS 에 대해 20 배 이상, 바람직하게는 100 배 이상의 선택성을 초래하도록, 내피 NOS 또는 신경 NOS 에 비하여 iNOS 선택적 억제를 제공하는 것으로서 정의된다.

용어 "프로드러그" 는 환자에게 투여 및 후속적인 흡수 후, 대사 과정과 같은 일부 과정을 통해 생체내에서 활성 종으로 전환되는, 약물 전구체인 화합물을 언급한다. 전환 과정으로부터의 기타 생성물은 신체에 의해 용이하게 배설될 수 있다. 더욱 바람직한 프로드러그는 통상 안전하게 허용되는 생성물을 생성하는 전환 과정을 수반하는 것이다.

용어 "안과적 이상 상태" 는, 증가된 iNOS 활성이 일차적 손상 또는 상해로부터 초래되든지, 일차 파괴적 사건의 발생에 기인하여 세포에 의해 야기된 이차의, 지연된 진행성 파괴 메카니즘으로부터 초래되든지 간에, 눈의 기능 파괴를 초래하고 상승된 수준의 iNOS 활성을 수반하는 눈의 손상 또는 상해를 언급한다. 그러한 일차적 손상 또는 상해는 물리적 외상, 예컨대 압착 또는 압박 손상, 녹내장, 망막염, 성숙기의 망막병증, 당뇨 망막병증 및 망막 정맥 교합의 망막병증을 포함하는 망막병증, 포도막염 및 망막 허혈을 포함한다. 이차 파괴 메카니즘은, NO 를 포함하는 신경독소 분자의 발생 및 방출을 초래하는 임의의 메카니즘, (아폽토시스(apoptosis), 사립체 막 투과성의 변화에 기인한 세포 에너지 저장물의 고갈, 초과 글루타메이트의 방출 또는 재흡수 실패, 재관류 손상 및 사이토카인 활성 및 염증을 포함함) 을 포함한다.

용어 "망막병증적" 은 병인에 관계 없이, 망막병증을 초래하는 눈의 손상 또는 상해를 언급한다.

선택적 iNOS 억제제의 한 설명예에서, 하기 화학식 I 을 갖는 화합물 또는 그의 약제학적 허용가능 염을 통해 치료가 촉진된다:

[화학식 I]

[식 중,

R¹은 H, 할로 및 하나 이상의 할로로 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

단, 하나 이상의 R¹또는 R²가 할로를 함유하며;

R⁷은 H 및 히드록시로 이루어진 군에서 선택되고;

(식 중,

R⁴는 H, 및 고리의 하나 이상의 원이 탄소이고 1 내지 약 4 개의 헤테로원자가 산소, 질소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 헤테로시클릭 고리로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 헤테로시클릭 고리는 헤테로아릴아미노, N-아릴-N-알킬아미노, N-헤테로아릴아미노-N-알킬아미노, 할로알킬티오, 알카노일옥시, 알콕시, 헤테로아르알콕시, 시클로알콕시, 시클로알케닐옥시, 히드록시, 아미노, 티오, 니트로, 저급 알킬아미노, 알킬티오, 알킬티오알킬, 아릴아미노, 아르알킬아미노, 아릴티오, 알킬술피닐, 알킬술포닐, 알킬술폰아미도, 알킬아미노술포닐, 아미도술포닐, 모노알킬 아미도술포닐, 디알킬 아미도술포닐, 모노아릴아미도술포닐, 아릴술폰아미도, 디아릴아미도술포닐, 모노알킬 모노아릴 아미도술포닐, 아릴술피닐, 아릴술포닐, 헤테로아릴티오, 헤테로아릴술피닐, 헤테로아릴술포닐, 알카노일, 알케노일, 아로일, 헤테로아로일, 아르알카노일, 헤테로아르알카노일, 할로알카노일, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬렌디옥시, 할로알킬렌디옥시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 저급 시클로알킬알킬, 저급 시클로알케닐알킬, 할로, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시할로알킬, 히드록시아르알킬, 히드록시알킬, 히드록시헤테로아르알킬, 할로알콕시알킬, 아릴, 아르알킬, 아릴옥시, 아르알콕시, 아릴옥시알킬, 포화 헤테로시클릴, 부분 포화 헤테로시클릴, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴옥시알킬, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 시아노알킬, 디시아노알킬, 카르복사미도알킬, 디카르복사미도알킬, 시아노카르보알콕시알킬, 카르보알콕시알킬, 디카르보알콕시알킬, 시아노시클로알킬, 디시아노시클로알킬, 카르복사미도시클로알킬, 디카르복사미도시클로알킬, 카르보알콕시시아노시클로알킬, 카르보알콕시시클로알킬, 디카르보알콕시시클로알킬, 포르밀알킬, 아실알킬, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 포스포노알킬, 디알콕시포스포노알콕시, 디아르알콕시포스포노알콕시, 포스포노알콕시, 디알콕시포스포노알킬아미노, 디아르알콕시포스포노알킬아미노, 포스포노알킬아미노, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 구아니디노, 아미디노, 및 아실아미노로 임의 치환될 수 있음)].

또다른 구현예에서, 본 발명은 하기 화학식 II 에 해당하는 구조를 갖는 화합물인, 화합물 또는 그의 염을 이용하는 치료를 제공한다:

[화학식 II]

.

화학식 II 의 구조에서, X 는 -S-, -S(O)-, 및 -S(O)₂- 로 이루어진 군에서 선택된다. 바람직하게는 X 는 -S- 이다. R¹²는 C₁-C₆알킬, C₂-C₆알케닐, C₂-C₆알키닐, C₁-C₅알콕시-C₁알킬, 및 C₁-C₅알킬티오-C₁알킬로 이루어진 군에서 선택되고, 여기서 각각의 상기 기들은 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 치환체로 임의 치환된다. 바람직하게는, R¹²는 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군에서 선택된 한 치환체로 임의 치환된 C₁-C₆알킬이다. R¹³및 R^l8에 관하여, R^l8이 -OR²⁴및 -N(R²⁵)(R²⁶) 으로 이루어진 군에서 선택되고, R¹³이 -H, -OH, -C(O)-R²⁷, -C(O)-O-R²⁸및 -C(O)-S-R²⁹로 이루어진 군에서 선택되거나; R^l8이 -N(R³⁰)- 이고 R¹³이 -C(O)- 이며, 여기서 R^l8및 R¹³은 이들이부착된 원자와 함께 고리를 형성하거나; R^l8이 -O- 이고 R¹³이 -C(R³¹)(R³²)- 이며, 여기서 R^l8및 R¹³은 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성한다. R¹³이 -C(R3²¹)(R³²)- 인 경우, R¹⁴는 -C(O)-O-R³³이고; 그렇지 않으면 R¹⁴는 -H 이다. R¹¹, R¹⁵, R¹⁶및 R¹⁷은 독립적으로 -H, 할로겐, C₁-C₆알킬, C₂-C₆알케닐, C₂-C₆알키닐 및 C₁-C₅알콕시-C₁알킬로 이루어진 군에서 선택된다. R^l9및 R²⁰은 독립적으로 -H, C_l-C₆알킬, C₂-C₆알케닐, C₂-C₆알키닐 및 C_l-C₅알콕시-C₁알킬로 이루어진 군에서 선택된다. R²¹및 R²²에 관하여, R²¹은 -H, -OH, -C(O)-O-R³⁴및 -C(O)-S-R³⁵로 이루어진 군에서 선택되고, R²²는 -H, -OH, -C(O)-O-R³⁶및 -C(O)-S-R³⁷으로 이루어진 군에서 선택되거나; R²¹은 -O- 이고, R²²는 -C(O)- 이며, 여기서 R²¹및 R²²는 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하거나; R²¹은 -C(O)- 이고, R²²는 -O- 이며, 여기서 R²¹및 R²²는 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성한다. R²³은 C_l알킬이다. R²⁴는 -H 및 C_l-C₆알킬로 이루어진 군에서 선택되며, 여기서 R²⁴가 C_l-C₆알킬인 경우, R²⁴는 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 부분으로 임의 치환된다. R²⁵및 R²⁶에관하여, R²⁵는 -H, 알킬 및 알콕시로 이루어진 군에서 선택되며, R²⁶은 -H, -OH, 알킬, 알콕시, -C(O)-R³⁸, -C(O)-O-R³⁹및 -C(O)-S-R⁴⁰으로 이루어진 군에서 선택되고; 여기서 R²⁵및 R²⁶은 독립적으로 알킬 또는 알콕시이고, R²⁵및 R²⁶은 독립적으로 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 부분으로 임의 치환되거나; R²⁵는 -H 이고; R²⁶은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택된다. R²⁷, R²⁸, R²⁹, R³⁰, R³¹, R³², R³³, R³⁴, R³⁵, R³⁶, R³⁷, R³⁸, R³⁹및 R⁴⁰은 독립적으로 -H 및 알킬로 이루어진 군에서 선택되고, 여기서 알킬은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 부분으로 임의 치환된다. 여기서 임의의 R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R¹⁸, R19⁹, R²⁰, R²¹, R²², R²³, R²⁴, R²⁵, R²⁶, R²⁷, R²⁸, R²⁹, R³⁰, R³¹, R³², R³³, R³⁴, R³⁵, R³⁶, R³⁷, R³⁸, R³⁹및 R⁴⁰은 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택된 부분이고, 상기 부분은 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 치환체로 임의 치환된다.

바람직한 화합물에서, R¹⁸은 -OH 이다. R¹⁸이 -OH 인 경우, 바람직하게는 X 는 S 이다. 또한 화합물에서, R¹¹, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R¹⁹및 R²⁰은 독립적으로-H 및 C₁-C₃알킬로 이루어진 군에서 선택된다. 바람직하게는 R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R¹⁹및 R²⁰은 각각 -H 이다. R²³은 다양한 기, 예를 들어 플루오로메틸 또는 메틸일 수 있다. R¹¹은 -OH 및 할로겐으로 이루어진 군에서 선택된 치환체로 임의 치환된 C₁-C₆알킬일 수 있고; 바람직하게는 R¹¹은 할로겐으로 임의 치환된 C₁알킬이고; 더욱 바람직하게는 R¹¹은 플루오로메틸, 히드록시메틸 및 메틸로 이루어진 군에서 선택된다. 한 중요한 화합물에서, R¹¹은 메틸일 수 있다. 대안적으로, R¹¹은 플루오로메틸일 수 있다. 또다른 대안에 있어서, R¹¹은 히드록시메틸일 수 있다. 또다른 화합물에서, R¹²는 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군에서 선택된 치환체로 임의 치환된 C₁-C₆알킬이다. 한 바람직한 화합물에서, R¹²는 할로겐으로 임의 치환된 C₁알킬이다. 예를 들어, R¹²는 메틸일 수 있다. 대안적으로, R¹²는 플루오로메틸일 수 있다. 또다른 예에서, R¹²는 히드록시메틸일 수 있다. 또한 또다른 예에서, R¹²는 메톡시메틸일 수 있다.

대표적인 화합물에서, R¹³, R¹⁴, R²¹및 R²²는 각각 -H 인 것이 바람직하다. 상기 화합물에서, R¹¹, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R¹⁹및 R²⁰은 독립적으로 -H 및 C₁-C₃알킬로 이루어진 군에서 선택되는 것이 더욱 바람직하다. 바람직하게는, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R¹⁹및 R²⁰은 각각 -H 이다. 또다른 화합물에서, R²³은 예를 들어 플루오로메틸일 수 있고, 또다른 예에서 R²³은 메틸일 수 있다. 상기 예의 바람직한 화합물에서, R¹²는 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군에서 선택된 치환체로 임의 치환된 C₁-C₆알킬이다. 바람직하게는 R¹²는 할로겐으로 임의 치환된 C₁알킬이다. 그러한 한 예에서, R¹²는 플루오로메틸이다. 또다른 예에서, R¹²는 메틸이다. 대안적으로, R¹²는 히드록시메틸일 수 있다. 또다른 대안에서, R¹²는 메톡시메틸일 수 있다.

R²³이 메틸인 경우, R¹¹은 예를 들어 -H, 또는 -OH 및 할로겐으로 이루어진 군에서 선택된 치환체로 임의 치환된 C₁-C₆알킬일 수 있다. 바람직한 화합물에서, R¹¹은 -H 이다. 대안적으로, R¹¹은 -OH 및 할로겐으로 이루어진 군에서 선택된 치환체로 임의 치환된 C₁-C₆알킬일 수 있다. 예를 들어, R¹¹은 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, t-부틸, 펜틸 이성체 또는 헥실 이성체일 수 있다. 예를 들어, R¹¹은 에틸일 수 있다. 대안적으로,R¹¹은 -OH 및 할로겐으로 이루어진 군에서 선택된 치환체로 임의 치환된 C₁알킬일 수 있고; 예를 들어 R¹¹은 메틸일 수 있다. 대안적으로, R¹¹은 플루오로메틸일 수 있다. 또다른 대안에서, R¹¹은 히드록시메틸일 수 있다.

또다른 화합물에서, R^l8은 -OR²⁴일 수 있다. R²⁴는 상기 정의된 바와 같을 수 있다. 바람직하게는 R²⁴는 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군에서 선택된 하나 이상의 부분으로 임의 치환된 C₁-C₆알킬이고; 더욱 바람직하게는 R²⁴는 C₁-C₃알킬이고; 더더욱 바람직하게는 R²⁴는 메틸이다. 화합물 II 의 또다른 예에서, R^l8은 -N(R²⁵)(R²⁶) 일 수 있고, 여기서 R²⁵및 R²⁶은 상기 정의된 바와 같다. 또한 또다른 화합물에서, R^l8은 -N(R³⁰)- 이고 R¹³은 -C(O)- 일 수 있으며, 여기서 R¹⁸및 R^l3은 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성한다. 또다른 예에서, R¹⁸은 -O- 일 수 있고, R¹³은 -C(R³¹)(R³²)- 일 수 있고, 여기서 R¹⁸및 R^l3은 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성한다.

화학식 II 의 화합물에서, R²¹은 -OH, -C(O)-O-R³⁴, 및 -C(O)-S-R³⁵로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 바람직하게 R²¹은 -OH 이다. 또다른 예에서R²¹이 -OH 인 경우, R²²는 -H 이다.

하지만, 본 예는 또한 R²¹은 -O- 이고, R²²는 -C(O)- 이며, 여기서 R²¹및 R²²는 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하는, 화학식 II 의 유용한 화합물도 제공한다. 또다른 유용한 화합물에서, R²¹은 -C(O)- 이고, R²²는 -O- 이며, 여기서 R²¹및 R²²는 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성한다. 대안적으로, R²²는 -OH, -C(O)-O-R³⁶및 -C(O)-S-R³⁷로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 상기 대안에서, R²¹은 바람직하게는 -H 이다.

본 발명의 실시에 유용한 또다른 선택적 iNOS 억제제에서, 화합물은 하기 화학식 III, 또는 그의 약제학적 허용가능 염으로 표시된다:

[화학식 III]

[식 중,

R⁴¹은 H 또는 메틸이고;

R⁴²는 H 또는 메틸임].

본 발명의 실시에 유용한 또다른 선택적 iNOS 억제제는, 하기 화학식 IV 의 화합물, 또는 그의 약제학적 허용가능 염으로 표시된다:

[화학식 IV]

.

본 발명에 유용한 또다른 대표적인 선택적 iNOS 억제제는, 하기 화학식 V 또는 그의 약제학적 허용가능 염으로 표시된다:

[화학식 V]

[식 중,

R⁴⁵는 C₁-C₅알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬임].

추가의 예시적인 선택적 iNOS 억제제는 하기 화학식 VI 또는 그의 약제학적 허용가능 염으로 표시된다:

[화학식 VI]

[식 중,

R⁴⁶은 C₁-C₅알킬이며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환됨].

본 발명에 유용한 또다른 대표적인 선택적 iNOS 억제제는 하기 화학식 VII 또는 그의 약제학적 허용가능 염으로 표시된다:

[화학식 VII]

[식 중,

R⁴⁹는 C₁-C₅알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬임].

본 발명에 유용한 또다른 대표의 선택적 iNOS 억제제는 하기 화학식 VIII 또는 그의 약제학적 허용가능 염으로 표시된다:

[화학식 VIII]

[식 중,

R⁵⁰은 C₁-C₅알킬이며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환됨].

본 발명의 실시에 유용한 또다른 선택적 iNOS 억제제는 하기 화학식 IX 의 화합물 또는 그의 약제학적 허용가능 염으로 표시된다:

[화학식 IX]

[식 중,

R^5O은 수소, 할로 및 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의치환되고;

R⁵⁴는 할로 및 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환됨].

본 발명의 실시에 유용한 또다른 선택적 iNOS 억제제는 하기 화학식 X 의 화합물 또는 그의 약제학적 허용가능 염으로 표시된다:

[화학식 X]

[식 중,

b. 예시적 실시예

하기 합성예는 예시적 목적으로 제시되며, 결코 본 발명의 범주를 제한하고자 하는 것은 아니다. 이성체가 정의되지 않는 경우, 적절한 크로마토그래피 방법을 이용하여 단일 이성체를 수득할 것이다.

실시예 A

(2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드, 모노히드레이트

EX-A-1)트리메틸실릴 클로라이드 (107.8 g, 1.00 mol) 를 0℃ 에서 300 ㎖ 의 메탄올 중 L-글루탐산 (30.00 g, 0.20 mol) 의 냉각된 용액에 적가했다. 생성된 투명한, 무색 용액을 실온에서 교반했다. 18 시간 후, 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30% 에틸 아세테이트) 에 의한 분석은 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. 이어서 반응을 0℃ 로 냉각하고, 트리에틸아민 (134 g, 1.33 mol) 을 첨가하고, 백색 침전물이 형성되었다. 디-tert-부틸디카르보네이트 (49 g, 0.23 mol) 을 첨가하고, 혼합물을 실온으로 가온시켰다. 3 시간 후, 용매를 제거하고, 700 ㎖ 의 디에틸 에테르를 첨가했다. 용액을 여과하고, 필터 케이크(cake)를 추가의 500 ㎖ 디에틸 에테르로 헹구었다. 여액을 60.8 g (＞95%) 의 황갈색 오일로 농축했고, 이는 추가의 정제 없이 다음 단계로 옮겨졌다.

EX-A-2)실온에서 300 ㎖ 의 아세토니트릴 중 EX-A-1 으로부터의 미정제 생성물 (60 g, 0.22 mol) 의 용액에, 4-디메틸아미노피리딘 (5.3 g, 0.44 mol) 및디-tert-부틸디카르보네이트 (79.2 g, 0.36 mol) 을 첨가했다. 생성된 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반하였고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 25% 에틸 아세테이트) 에 의한 분석은 대부분의 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 상기 용매를 진공 제거하여, 85 g 의 적색 오일을 수득했다. 미정제 물질을 1:10 의 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 66.4 g (81%) 의 목적하는 디-Boc 생성물을 담황색 고체로서 수득했다.

EX-A-3)DIBAL (헥산 중 1.0 M 용액 64 ㎖, 63.9 mmol) 의 용액을, 400 ㎖ 의 무수 디에틸 에테르 중 EX-A-2 (20 g, 53.3 mmol) 의 냉각 용액에 -78℃ 에서 30 분에 걸쳐 적가했다. -78℃ 에서 추가로 30 분 후, 용액을 물 (12 ㎖, 666 mmol) 로 켄칭 (quenching) 하고, 실온으로 가온했다. 혼탁한 혼합물을 350 ㎖ 의 에틸 아세테이트로 희석하고, MgSO₄로 건조하고, 셀라이트 패드를 통해 여과했다. 여액을 황색 오일로 농축했다. 미정제 물질인, 18.9 g 의 황색 오일을 1:4 의 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 13.8 g (75%) 의 목적하는 알데히드 생성물을 투명한 오일로서 수득했다.

EX-A-4)20 ㎖ 의 THF 중 트리에틸-2-플루오로포스포노아세테이트 (4.67 g, 19.3 mmol) 의 냉각 (-78℃) 용액에 n-부틸 리튬 (헥산 중 1.6 M 10.9 ㎖, 17.5 mmol) 을 첨가했다. 상기 혼합물을 -78℃ 에서 20 분 동안 교반하여, 밝은 황색 용액을 생성했다. 이어서, 5 ㎖ 의 THF 중 EX-A-3 로부터의 생성물 (6.0 g, 17.5 mmol) 의 용액을 시린지를 통해 첨가하고, 생성된 혼합물을 -78℃ 에서 2 시간 동안 교반하였고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30% 에틸 아세테이트) 에 의한 분석은 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. 상기 반응을 -78℃ 에서 포화 수성 NH₄Cl (30 ㎖) 로 켄칭했다. 유기층을 수집하고, 수성 층을 디에틸 에테르 (2 ×50 ㎖) 로 추출했다. 조합된 유기물을 물 (100 ㎖) 및 염수 (100 ㎖) 로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축 시켰다. 미정제 물질, 8.6 g 의 황색 오일을 1:4 의 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 6.05 g (79%) 의 목적하는 플루오로 올레핀 생성물을 투명한 오일로서 수득했다.¹H NMR 및¹⁹F NMR 은 단리된 생성물이 대략 95:5 의 E:Z 비를 갖는다는 것을 나타냈다.

EX-A-5)실온에서 20 ㎖ 의 메탄올 중 EX-A-4 (805 mg, 1.86 mmol) 의 용액에, 고체 NaBH₄(844 mg, 22.3 mmol) 을 200 mg 부분씩 첨가했다. 반응을 주변 온도에서 18 시간 동안 교반하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30% 에틸 아세테이트) 에 의한 분석은 대부분의 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 상기 반응을 20 ㎖ 의 포화 수성 NH₄Cl 로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (2 ×35 ㎖) 로 추출했다. 유기 층을 조합하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축 시켰다. 미정제 물질, 700 mg 의 투명 오일을 1:4 의 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 353 mg (48%) 의 목적하는 알릴 알콜 생성물을 투명한 오일로서 수득했으며, 이는¹⁹F NMR 로 특정된 바목적하는 E-이성체를 주로 함유했다.

EX-A-6)50 ㎖ 의 THF 중, EX-A-5 (1.37 g, 3.5 mmol), 중합체-지지된 트리페닐포스핀 (3 mmol/g, 1.86 g, 5.6 mmol) 및 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온 (450 mg, 4.55 mmol) 의 혼합물에, 디메틸아조디카르복실레이트 (820 mg, 5.6 mmol) 을 적가했다. 반응을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 40% 에틸 아세테이트) 에 의한 분석은 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 농축했다. 생성된 황색 오일을 30 ㎖ 의 메틸렌 클로라이드와 30 ㎖ 의 물 사이에 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 물 (1 ×30 ㎖) 및 염수 (1 ×30 ㎖) 로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축 시켰다. 미정제 물질, 1.8 g 의 황색 오일을 1:4 의 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 670 mg (40%) 의 목적하는 보호된 E-알릴 아미딘 생성물을 투명한 오일로서 수득했고, 이는¹⁹F NMR 에 의해 특정된 바 목적하는 E-이성체만을함유했다.

EX-A-7)25 ㎖ 의 메탄올 및 25 ㎖ 의 25% 수 중 아세트산에, EX-A-6 로부터의 생성물 (670 mg, 1.4 mmol) 을 용해시켰다. 아연 더스트(dust) (830 mg, 12.7 mmol) 을 첨가하고, 혼합물을 8 시간 동안 음파 파쇄 (sonication) 하에서 교반시키고, 이 시점에서 HPLC 분석은 오직 20% 의 출발 물질만이 잔존함을 나타냈다. Zn 더스트를 반응 혼합물로부터 여과하고, 여액을 -20℃ 에서 12 시간 동안 저장했다. 여액을 실온으로 가온하고, 추가의 빙초산 (7 ㎖) 및 아연 더스트 (400 mg, 6.1 mmol) 을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 음파 파쇄하고, 이 시점에서 HPLC 분석은 96% 의 생성물을 나타냈다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 농축했다. 미정제 물질을 20-95% A 의 그래디언트 (gradient) 를 사용하여 8 분에 걸쳐 용출시키는 YMC 콤비프렙(YMC Combiprep) 상의 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피로 정제했다 (A: 0.01% 의 트리플루오로아세트산을 갖는 100 % 아세토니트릴, B: 0.01% 트리플루오로아세트산을 갖는 100% H₂O). 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 농축하여, 344 mg (45%) 의 목적하는 아세트아미딘 생성물을 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득했고, 이는¹⁹F NMR 에 의해특정된 바 목적하는 E-이성체만을 함유했다.

EX-A-8)EX-A-7 의 생성물의 샘플을 빙초산에 용해시켰다. 이 교반 용액에 10 당량의 디옥산 중 1N HCl 을 첨가했다. 상기 용액을 실온에서 10 분 동안 교반한 후, 모든 용액을 진공 제거하여, 예시된 메틸 에스테르 디히드로클로라이드 염을 생성했다.

실시예 A)6 ㎖ 의 6.0 N HCl 중 EX-A-7 (344 mg, 1.4 mmol) 의 용액을 1 시간 동안 환류했다. 용매를 진공 제거했다. 생성된 고체를 수 중에 용해시키고, 추가로 3회, 이어서 1.0 N HCl 중 후속의 5 회 농축시켜, 임의의 잔존 TFA 염을 제거했다. 종료 시, 160 mg (37%) 의 목적 (2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을, 백색 고체, 융점 51.5-56.3℃, 로서 수득했고, 이는¹⁹F NMR 에 의해 특정된 바 목적하는 E-이성체만을 함유했다.

실시예 B

(2S,5E/Z)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드

EX-B-1)400 ㎖ 의 1:1 디옥산 중 H₂O 중의 L-글루탐산 5-메틸 에스테르 (50.00 g, 0.31 mol) 의 냉각된 (0℃) 용액에, 트리에틸아민 (38.35 g, 0.38 mol), 이어서 디-tert-부틸디카르보네이트 (80.00 g, 0.37 mol) 을 첨가했다. 생성된 투명한, 무색 용액을 실온에서 교반했다. 18 시간 후, 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30% 에틸 아세테이트) 에 의한 분석은 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. 반응 혼합물을 200 ㎖ 의 1.0 N 수성 KHSO₄로 켄칭했다. 유기층을 제거하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (3 ×100 ㎖) 로 추출했다. 유기층을 조합하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축시켜, 72.00 g (89%) 의 목적하는 생성물을 담황색 오일로서 수득했다.

EX-B-2)-10℃ 에서 300 ㎖ 의 THF 중, EX-B-1 으로부터의 생성물 (72.60 g, 0.28 mol) 의 용액에, 4-메틸모르폴린 (28.11 g, 0.28 mol) 및 이소부틸클로로포르메이트 (37.95 g, 0.28 mol) 을 재빨리 첨가했다. 투명한 황색 용액은 백색 침전물을 즉시 형성했다. 4 분 후, 생성된 혼탁한 황색 혼합물을 여과하고, 여액을 -10℃ 로 냉각하고, 영하의 온도를 유지하면서 200 ㎖ 의 H₂O 중 NaBH₄(15.77 g, 0.42 mol) 의 용액을 적가했다. 일단 모든 NaBH₄가 첨가되면, 얼음조(ice bath) 를 제거하고, 반응이 실온에서 1.5 시간 동안 교반되도록 했다. 반응 혼합물을 200 ㎖ 의 H₂O 로 켄칭했다. 유기층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (3 ×100 ㎖) 로 추출했다. 유기층을 조합하고, 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축시켜, 58 g (85%) 의 목적하는 생성물을 황색 오일로서 수득했다.

EX-B-3)100 ㎖ 의 벤젠 중 EX-B-2 (30.95 g, 0.13 mol) 의 용액에, 2,2-디메톡시 프로판 (65.00 g, 0.63 mol), 이어서 p-톨루엔술폰산 (2.40 g, 12.5 mmol) 및 5 g 의 3Å 몰레큘러 시브(molecular seive) 를 첨가했다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 환류하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30% 에틸 아세테이트) 에 의한 분석은 완전한 반응을 나타냈다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, 디에틸 에테르 (150 ㎖) 로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃(100 ㎖), 이어서 염수 (100 ㎖) 로 세척했다. 유기층을 MgSO₄로 건조하고, 여과 농축했다. 미정제 물질, 30.5 g 의 황색 오일을 1:10 의 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 15.40 g (42%) 의 목적하는 생성물을 담황색 오일로서 수득했다.

EX-B-4)DIBAL (톨루엔 중 1.0 M 용액 6.0 ㎖) 을, 10 ㎖ 의 메틸렌 클로라이드 중 EX-B-3 로부터의 생성물 (1.00 g, 3.00 mmol) 의 냉각 (-78℃) 용액에 적가했다. 30 분 후, 반응을 5 ㎖ 포화 칼륨 나트륨 타르트레이트 (Rochelle 염) 으로 켄칭한 후, 실온으로 가온했다. 이어서, 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, MgSO₄로 건조하고, 재여과 및 농축하여 황색 오일을 수득했다. 미정제 물질인, 610 mg 의 황색 오일을 1:4 의 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 550 mg (71%) 의 목적하는생성물을 투명한 오일로서 수득했다.

EX-B-5)100 ㎖ 의 메틸렌 클로라이드 중 트리에틸 2-플루오로-포스포노아세테이트 (6.70 g, 27.6 mmol) 의 빙냉 (0℃) 용액에, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 (4.70 g, 31.0 mmol) 을 첨가했다. 혼합물을 0℃ 에서 1시간 동안 교반하여 오렌지색 용액을 수득했다. 이어서, 15 ㎖ 의 메틸렌 클로라이드 중 EX-B-4 로부터의 생성물 (5.71 g, 22.2 mmol) 의 빙냉 (0℃) 용액을 시린지를 통해 첨가하고, 생성된 혼합물을 주변 온도에서 18 시간 동안 교반하고, 이 시점에서, 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30% 에틸 아세테이트) 에 의한 분석은 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. 용매를 진공 제거하고, 생성된 혼합물을 200 ㎖ 의 에틸 아세테이트 및 100 ㎖ 의 물 사이에 분배시켰다. 유기층을 수집하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 ×50 ㎖) 로 추출했다. 조합된 유기층을 1.0 M 수성 KHSO₄(100 ㎖), 물 (100 ㎖) 및 염수 (100 ㎖) 로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축시켜, 목적하는 플루오로 올레핀 생성물을 황색 오일 (8.0 g) 으로서 수득했다.¹H NMR 및¹⁹F NMR 은 단리된 생성물이 대략 70:30 의 Z:E 비를 갖는다는 것을 나타냈다.

상기 혼합물은 추가의 정제 없이 미정제 상태로 옮겨졌다.

EX-B-6)70 ㎖ 의 THF 중 EX-B-5 로부터의 생성물 (8.0 g, 23.0 mmol) 의 빙냉 (0℃) 용액에, LiBH₄(THF 중 2.0 M 의 12.7 ㎖, 25.0 mmol) 를 시린지를 통하여 첨가했다. 반응 혼합물을 주변 온도에서 18 시간 동안 교반하고, 이 시점에서, 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30% 에틸 아세테이트) 에 의한 분석은 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. THF 를 제거하고, 생성된 혼합물을 메틸렌 클로라이드에 용해시켰다. 0℃ 로 냉각 후, 1.0 M 수성 KHSO₄를 서서히 첨가하여 반응을 켄칭했다. 이어서, 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 ×50 ㎖) 로 추출했다. 유기층을 조합하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축시켰다. 미정제 물질인, 8.0 g 의 투명 오일을 1:4 의 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 900 mg (13%) 의 목적하는 생성물을 투명한 오일로서 수득했다.

EX-B-7)5 ㎖ 의 피리딘 중 EX-B-6 로부터의 생성물 (950 mg, 3.1 mmol) 의 빙냉 (0℃) 용액에, 메탄술포닐 클로라이드 (390 mg, 3.4 mmol) 를 첨가했다. 반응을 0℃ 에서 5분 동안 교반하고, 이어서 실온으로 가온하고, 3 시간 동안 교반하고, 이 시점에서, 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30% 에틸 아세테이트) 에 의한 분석은 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. 반응을 디에틸 에테르 (10 ㎖) 로 희석하고, 포화 수성 NaHCO₃(20 ㎖), 이어서 1.0 M 시트르산 (20 ㎖) 로 세척했다. 유기층을 MgSO₄로 건조하고, 여과 농축하여, 500 mg (51%) 의 목적하는 알릴 클로라이드 생성물을 백색 고체로서 수득했다. 생성물은 추가의 정제 없이 다음으로 옮겨졌다.

LCMS: m/z = 344.1 [M+Na]⁺.

EX-B-8)10 ㎖ 의 DMF 중 EX-B-7 로부터의 생성물 (440 mg, 1.37 mmol) 의 교반 용액에, 칼륨 프탈이미드 (290 mg, 1.57 mmol) 를 첨가했다. 생성된 혼합물을 환류 하에 18 시간 동안 가열하고, 이 시점에서, 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30% 에틸 아세테이트) 에 의한 분석은 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. 냉각된 혼합물을 30 ㎖ 의 물로 희석하고, 에틸 아세테이트 (30 ㎖) 로 2회 추출하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축하여, 540 mg (91%) 의 목적하는 생성물을 황색 오일로서 수득했다.

EX-B-9)EX-B-8 로부터의 생성물 (600 mg, 1.38 mmol) 을 8 ㎖ 의 아세트산 및 2 ㎖ 의 물에 용해시켰다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 이 시점에서, 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30% 에틸 아세테이트) 에 의한 분석은 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. 상기 용액을 질소 스트림 하에 농축하고, 미정제 생성물을 1:2 의 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 248 mg (63%) 의 목적하는 생성물을 백색 고체로서 수득했다.

EX-B-10)6 ㎖ 의 DMF 중 EX-B-9 로부터의 생성물 (237 mg, 0.605 mmol) 의교반 용액에, 피리디늄 디크로메이트 (1.14 g, 3.03 mmol) 를 첨가했다. 용액은 어두운 오렌지색으로 변했고, 실온에서 18 시간 동안 교반했고, 이 시점에서, 이를 20 ㎖ 의 H₂O 에 부었다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (4 ×25 ㎖) 로 추출했다. 조합된 유기 층을 5% 수성 KHCO₃(3 ×25 ㎖) 로 세척했다. 수성층을 1.0 M KHSO₄를 사용하여 pH = 3 으로 산성화한 후, 에틸 아세테이트 (3 ×50 ㎖) 로 추출했다. 조합된 유기층을 농축하여, 235 mg (95%) 의 목적하는 아미노산 생성물을 수득했다. 생성된 백색 고체는 추가의 정제없이 미정제 상태로 다음으로 옮겨졌다.

LCMS: m/z = 429.1 [M+Na]⁺.

EX-B-11)7 ㎖ 의 에탄올 중 EX-B-10 으로부터의 생성물 (230 mg, 0.56 mmol) 의 교반 용액에, 히드라진 히드레이트 (70 mg, 1.13 mmol) 을 첨가하고, 생성된 용액을 2 시간 동안 환류하여 백색 침전물이 형성되었다. 용매를 진공 제거했다. 생성된 백색 고체를 8 ㎖ 의 물에 용해시키고, 빙초산을 사용하여 pH = 4 로 산성화시켰다. 이어서, 이를 얼음조에서 냉각시키고, 여과했다. 여액을 농축하여, 136 mg (87%) 의 목적하는 알릴 아민 생성물을 황색 결정으로서 수득했고, 이는 추가의 정제없이 다음 단계로 옮겨졌다.

LCMS: m/z = 277.1 [M+H]⁺.

EX-B-12)6 ㎖ 의 DMF 중 EX-B-11 로부터의 생성물 (136 mg, 0.50 mmol) 의 교반 용액에, 에틸 아세트이미데이트 (252 mg, 2.04 mmol) 을 1.5 시간 간격으로 3 부분으로 나누어 첨가했다. 첨가 완료 후, 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 분홍색 용액을 여과하고, 필터 케이크를 물로 세척했다. 용매를 진공 제거하고, 생성된 황색 오일을 1-50% A 의 7 분 그래디언트를 사용하여 용출시키는 YMC 콤비프렙 ODS-A 세미-프렙 컬럼을 사용한 역상 HPLC 로 정제했다 (A: 0.05% TFA 를 갖는 100 아세토니트릴, B: 0.05% TFA 갖는 100 물). 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 농축하여, 대략 50 mg 의 목적하는 아세트아미딘 생성물을 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득했고, 이는 다음 단계로 옮겨졌다.

LCMS: m/z = 318.2 [M+H]⁺.

실시예 B)6 ㎖ 의 6.0 N HCl 에 EX-B-12 로부터의 생성물을 용해시키고, 실온에서 1 시간 동안 교반했다. 용매를 진공 제거했다. 생성된 고체를 수 중에 용해시키고, 추가로 3회 농축시켜 TFA 염을 제거했다.¹⁹F NMR 이 모든 TFA 가 제거되었음을 나타냈을 때, 생성물을 진공 건조하여, 목적하는 (2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 및 (2S,5Z)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드를 함유하는 20:80 E:Z 혼합물 30 mg (20%, 두 단계에 대해 조합된 수율) 을 포말상(foamy) 투명 고체로서 수득했다.

실시예 C

(2S,5Z)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드

EX-C-1)트리에틸-2-플루오로-5-포스포노아세테이트 (3.54 g, 14.6 mmol) 을 0℃ 에서 20 ㎖ 의 CH₂Cl₂에 용해시키고, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 (2.4 ㎖, 16.4 mmol) 을 첨가했다. 혼합물을 0℃ 에서 20 분 동안 교반하여, 오렌지색 용액을 생성했다. 이어서, EX-A-3 로부터의 알데히드 생성물 (4.04 g, 11.7 mmol) 의 용액을 0℃ 에서 첨가하고, 생성된 갈색 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 이 시점에서 LCMS 는 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. 용매를 제거하고, 잔류물을 물 (60 ㎖) 및 에틸 아세테이트 (120 ㎖) 사이에 분배시켰다. 유기층을 수집하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 ×50 ㎖) 로 추출했다.조합된 유기층을 물 (60 ㎖) 및 10% 수성 KHSO₄(60 ㎖) 로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축 시켰다. 미정제 물질, 5.7 g 의 오렌지색 오일을 10% 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 3.5 g (69%) 의 목적하는 플루오로 올레핀 생성물을 투명한 오일로서 수득했다.¹H NMR 및¹⁹F NMR 은 단리된 생성물이 대략 70:30 의 Z/E 비를 갖는다는 것을 나타냈다.

EX-C-2)EX-C-1 으로부터의 에스테르 생성물 (3.5 g, 8.1 mmol) 을 실온에서 80 ㎖ 의 메탄올에 용해시킨 후, 고체 NaBH₄(3 g, 80 mmol) 을 부분씩 첨가했다. 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하고, 이 시점에서 HPLC 분석은 반응이 ＞90% 완결되었음을 나타냈다. 상기 반응을 포화 NH₄Cl 로 켄칭했다. 생성물을 에틸 아세테이트로 추출하고, Na₂SO₄로 건조했다. 유기층을 증발시켜, 3.2 g 의 미정제 생성물을 무색 오일로서 수득하고, 이를 20% 내지 30% 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 Biotage 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 투명한 오일인 0.41 g (13%) 의 목적하는 순수한 (Z:E = 97:3,¹⁹F NMR 으로 특정됨) Z-이성체와 함께, 2.11 g (67%) 의 Z/E 혼합물을 투명한 오일로서 수득했다.

EX-C-3)EX-C-2 로부터의 Z-알콜 생성물 (390 mg, 1 mmol) 및 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온 (130 mg, 1.3 mmol) 을 20 ㎖ 의 THF 에 용해시켰다. 이어서, 상기 용액에 중합체 지지된-PPh₃를 첨가하고, 혼합물을 10 분 동안 서서히 교반했다. 이어서, 디에틸 아조디카르복실레이트를 적가하고, 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 이 시점에서 LCMS 분석은 생성물이 형성되었으며, 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. 중합체를 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 패드를 THF 로 세척했다. 여액을 증발시켜 1.0 g 의 미정제 생성물을 수득하고, 이를 20% 내지 30% 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 Biotage 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 약간의 히드라지드 부생성물로 오염된 500 mg 의 생성물을 수득했다. 상기 물질을 98:2:0.01 의 메틸렌 클로라이드:메탄올:암모늄 히드록시드로 용출시키는 Biotage 플래시 컬럼 크로마토그래피로 추가 정제하여, 180 mg (38%) 의 목적하는 보호된 아미딘 생성물을 투명한 오일로서 수득하였으며, 이는¹⁹F NMR 에 의해 특정된 바 목적하는 Z-이성체만을 함유했다.

EX-C-4)몇 방울의 메탄올을 함유한 4 ㎖ 의 25% 수 중 아세트산에, EX-C-3 로부터의 생성물 (88 mg, 0.19 mmol) 을 용해시킨 후, Zn 더스트 (109 mg, 16.7 mmol) 을 첨가했다. 혼합물을 3 시간 동안 음파 파쇄 하에서 교반시켰다. Zn 을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 상기 패드를 물로 세척했다. 여액을 증발 건조시켜 미정제 생성물을 수득하고, 이를 20-80% A 의 그래디언트를 사용하여 8 분에 걸쳐 용출시키는 YMC 콤비프렙 컬럼 상의 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피로 정제했다 (A: 0.01% 의 TFA 를 갖는 100 % ACN, B: 0.01% TFA 를 갖는 100% H₂O). 목적하는 생성물을 두 분획으로 수집하고, 조합된 분획을 농축했다. 생성물을¹⁹F NMR 에 의해 특정된 바 목적하는 Z-이성체만을 함유한 트리플루오로아세테이트 염의 혼합물인 무색 오일로서 수득했다: 30% 는 모노 Boc-보호된 생성물임: HRMS C₁₅H₂₆N₃O₄F 에 대한 계산값: 332.1986 [M+H]⁺, 측정값 332.2001, 70% 는 디 Boc-보호된 생성물임:

실시예 C)30 ㎖ 의 6 N HCl 에 EX-C-4 로부터의 조합된 모노- 및 디-BOC 생성물을 용해시키고, 상기 용액을 4 시간 동안 환류하고, 이 시점에서 LCMS 분석은 완전한 반응을 나타냈다. 과량의 HCl 및 물을 진공 제거했다. 종료 시, 9 mg (40%, 두 단계에 대해 조합된 수율) 의 목적된 (2S,5Z)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을 연황색의, 매우 흡습성인 포말(foam)로서 수득했고, 이는¹⁹F NMR 로 특정된 바 목적하는 Z-이성체만을 함유했다.

실시예 D

(2S,5Z)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 트리히드로클로라이드, 디히드레이트

EX-D-1)60 ㎖ 의 메탄올에 EX-D-2 로부터의 생성물 (3.75 g, 10 mmol) 을 용해시키고, 실온에서 10 시간에 걸쳐 고체 NaBH₄(4 g, 106 mmol) 을 부분씩 첨가하고, 이 시점에서 HPLC 분석은 대략 84% 감소를 나타냈다. 반응 혼합물을 포화 NH₄Cl 로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출했다. 조합된 유기층을 MgSO₄로 건조하고, 여과하고, 증발하여 3.2 g 의 미정제 생성물을 황색 오일로서 수득했다.

EX-D-2)EX-D-1 로부터의 알콜 생성물 (3.2 g, 9.0 mmol) 을 100 ㎖ 의 THF 에 용해시키고, 얼음조에서 냉각시켰다. 카본 테트라브로마이드 (4.27 g, 12.9 mmol) 을 첨가하고, 생성된 용액을 0℃ 에서 30 분 동안 질소 하에서 교반했다. 중합체 지지된-PPh₃를 첨가하고, 혼합물을 0℃ 에서 1 시간 동안 서서히 교반한 후, 실온에서 밤새 교반했다. 중합체를 셀라이트를 통해 여과 제거하고, 셀라이트 패드를 THF 로 세척했다. 여액을 증발시켜 미정제 생성물을 수득하고, 이를 1:3 의 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 Biotage 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 2.0 g (54%, 두 단계에 대해 조합된 수율) 의 목적된 브로모 생성물을 무색 오일로서 수득했다.

EX-D-3)60 ㎖ 의 에탄올 중 NaOEt (EtOH 중 21%, 41.1 ㎖, 0.11 mol) 의 용액을 p-메톡시 벤젠티올 (14.0 g, 0.1 mol), 이어서 에틸 클로로플루오로아세테이트 (18.3 g, 0.13 mol) 로 처리했다. 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 250 ㎖ 의 1:1 에틸 아세테이트 중 헥산으로 희석했다. 유기층을 물로 3회 세척하고, Na₂SO₄로 건조했다. 건조된 유기층을 증발시켜, 25 g 의 미정제 생성물을 수득했고, 이는 추가의 정제 없이 이후 단계로 옮겨진다.

EX-D-4)200 ㎖ 의 메틸렌 클로라이드 중 EX-D-3 로부터의 미정제 생성물 (24 g, 0.1 mol) 의 용액을 -78℃ 로 냉각하고, 200 ㎖ 의 메틸렌 클로라이드 중 3-클로로퍼벤조산 (27 g, 0.12 mol) 로 처리했다. 반응 혼합물을 서서히 실온으로 가온하고, 밤새 교반하였으며, 이 시점에서 LCMS 분석은 생성물이 형성되었으며, 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. 고체를 여과하고, 여액을 포화NaHCO₃및 NH₄Cl 로 세척했다. 유기층을 MgSO₄로 건조하고 증발시켜, 30 g 의 오렌지색 오일을 수득하고, 이를 2:1 의 에틸 아세테이트 중 헥산으로 용출시키는 Biotage 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 17.5 g (70%) 의 목적하는 술폭시드 생성물을 오프화이트(off-white) 오일로서 수득했다.

EX-D-5)6 ㎖ 의 건조 DMF 중 NaH (광유 중 60%, 212 mg, 5.3 mmol) 의 현탁액을 질소 하에 0℃ 로 냉각하고, 2 ㎖ 의 DMF 중 EX-D-4 로부터의 술폭시드 생성물 (1.25 g, 4.8 mmol) 의 용액으로 처리했다. 실온에서 20 분 동안 교반 후, 혼합물을 5℃ 로 냉각하고, EX-D-2 로부터의 브로모 생성물 (2.17 g, 5.3 mmol) 을 한 부분으로 첨가했다. 반응을 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 95℃ 에서의 환류 하에 1 시간 동안 가열하고, 이 시점에서 LCMS 분석은 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 혼합물을 얼음/수성 NH₄Cl 혼합물에 부었다. 생성물을 1:1 에틸 아세테이트 중 헥산으로 추출했다. 유기층을 Na₂SO₄로 건조하고 증발시켜, 3.17 g 의 미정제 황색 오일을 수득하고, 이를 10% 의 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 Biotage 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 1.05 g (50%) 의 목적하는 플루오로 올레핀 에스테르 생성물을 무색 오일로서 수득했다.¹⁹F NMR 은 단리된 생성물이 95:5 의 목적하는 Z-이성체를 함유함을 나타냈다.

EX-D-6)EX-D-5 부터의 에스테르 생성물 (1.05 g, 2.4 mmol) 을 실온에서 메탄올에 용해시킨 후, 고체 NaBH₄를 부분씩 첨가했다. 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하고, 이어서 2 ㎖ 의 물을 첨가하고, 혼합물을 추가로 3 시간 동안 교반하고, 이 시점에서 HPLC 분석은 반응이 ＞95% 완결되었음을 나타냈다. 상기 반응을 포화 NH₄Cl 로 켄칭했다. 생성물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 Na₂SO₄로 건조하고, 증발시켜, 0.95 g 의 미정제 생성물을 무색 오일로서 수득했다.¹⁹F NMR 은 단리된 미정제 생성물이 목적하는 Z-이성체만을 함유함을 나타냈다.

EX-D-7)EX-D-6 로부터의 알콜 생성물 (0.95 g, 2.4 mmol) 및 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온 (290 mg, 2.9 mmol) 을 60 ㎖ 의 THF 에 용해시켰다. 중합체 결합된 트리페닐 포스핀을 첨가하고, 혼합물을 10 분 동안 서서히 교반했다. 이어서, 디메틸 아조디카르복실레이트를 적가하고, 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 이 시점에서 LCMS 분석은 생성물이 형성되었으며, 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. 중합체를 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 패드를 THF 로 세척했다. 여액을 증발시켜 메틸렌 클로라이드와 물 사이에 분배된 잔류물을 수득했다. 유기층을 물로 2회 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 증발시켜, 1.3 g 의 미정제 생성물을 수득하고, 이를 20% 내지 30% 의 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 Biotage 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 390 mg (34%, 두 단계에 대한 조합된 수율) 의 목적하는 보호된 아미딘 생성물을 무색 오일로서 수득했다.¹⁹F NMR 은 단리된 생성물이 목적하는 Z-이성체만을 함유함을 나타냈다.

EX-D-8)EX-D-7 로부터의 생성물 (390 mg, 0.82 mmol) 을 4 ㎖ 의 메탄올을 함유하는 20 ㎖ 의 25% 수중 HOAc 에 용해시키고, Zn 더스트 (482 mg, 7.42 mmol) 을 두 부분으로 첨가했다. 혼합물을 3 시간 동안 음파 파쇄 하에 교반했다. Zn 을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 패드를 물로 세척했다. 여액을 증발 건조하여 미정제 생성물을 수득했고, 이를 역상 HPLC 로 정제했다. 목적하는 생성물을 함유하는 분획들을 수집, 조합 및 농축했다. 생성물은 트리플루오로아세테이트 염의 혼합물인 무색 오일로서 수득되었으며, 이는¹⁹F NMR 에 의해 특정된 바 목적하는 Z-이성체만을 함유했다: 30% 는 모노-Boc 보호된 생성물임:

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실시예 D)80 ㎖ 의 6 N HCl 에 EX-D-8 로부터의 모노 및 디BOC 생성물을 용해시키고, 상기 용액을 1 시간 동안 환류 가열하고, 이 시점에서 LCMS 분석은 완전한 반응을 나타냈다. 과량의 HCl 및 물을 진공 제거하여, 150 mg (50%, 두 단계에 대해 조합된 수율) 의 목적된 (2S,5Z)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 트리히드로클로라이드, 디히드레이트 생성물을 연황색의, 매우 흡습성인 포말로서 수득했다.

실시예 E

(2R,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드, 모노히드레이트

EX-E-1)트리메틸실릴 클로라이드를 0℃ 에서 메탄올 중 D-글루탐산의 냉각된 용액에 적가한다. 생성된 투명한 무색 용액을, 박층 크로마토그래피에 의한 분석이 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타낼 때까지 실온에서 교반한다. 이어서 반응을 0℃ 로 냉각하고, 트리에틸아민을 첨가하고, 백색 침전물이 형성된다. 디-tert-부틸디카르보네이트를 첨가하고, 혼합물을 실온으로 가온시킨다. 3 시간 후, 용매를 제거하고, 디에틸 에테르를 첨가한다. 용액을 여과하고, 필터 케이크를 추가의 디에틸 에테르로 헹군다. 여액을 농축하여 목적하는 모노-Boc디에스테르 생성물을 수득하고, 이는 추가의 정제 없이 다음 단계로 옮겨진다.

EX-E-2)실온에서 아세토니트릴 중 EX-E-1 으로부터의 미정제 생성물의 용액에, 4-디메틸아미노피리딘 및 디-tert-부틸디카르보네이트를 첨가한다. 생성된 혼합물을, 박층 크로마토그래피에 의한 분석이 출발 물질의 대부분이 소모되었음을 나타낼 때까지 실온에서 교반한다. 상기 용매를 진공 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 목적하는 디-Boc 보호된 디에스테르 생성물을 수득한다.

EX-E-3)DIBAL 의 용액을, 무수 디에틸 에테르 중 EX-E-2 의 냉각 용액에 -78℃ 에서 적가한다. -78℃ 에서 30 분 후, 용액을 물로 켄칭하고, 실온으로 가온한다. 생성된 혼탁한 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, MgSO₄로 건조하고, 셀라이트 패드를 통해 여과한다. 여액을 농축하고, 생성된 잔류물을 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 알데히드 생성물을 수득한다.

EX-E-4)THF 중 트리에틸 2-플루오로포스포노아세테이트의 냉각 (-78℃) 용액에 n-부틸 리튬을 첨가한다. 상기 혼합물을 -78℃ 에서 교반하여, 밝은 황색 용액을 생성한다. 이어서, THF 중 EX-E-3 로부터의 생성물의 용액을 시린지를 통해 첨가하고, 박층 크로마토그래피에 의한 분석이 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타낼 때까지 생성된 혼합물을 -78℃ 에서 교반한다. 반응을 -78℃ 에서 포화 수성 NH₄Cl 로 켄칭한다. 유기층을 수집하고, 수성 층을 디에틸 에테르로 추출한다. 조합된 유기물을 물 및 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축 시킨다. 그리고, 미정제 물질을 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 목적하는 플루오로 올레핀 생성물을 수득한다.

EX-E-5)실온에서 메탄올 중 EX-E-4 의 용액에, 고체 NaBH₄을 부분씩 첨가한다. 반응을 박층 크로마토그래피에 의한 분석이 출발 물질의 대부분이 소모되었음을 나타낼 때까지 주변 온도에서 교반한다. 상기 반응을 포화 수성 NH₄Cl 로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 추출한다. 유기 층을 조합하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축 시킨다. 미정제 물질을 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 목적하는 알릴 알콜 생성물을 수득한다.

EX-E-6)THF 중, EX-E-5, 중합체-지지된 트리페닐포스핀 및 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온의 혼합물에, 디메틸아조디카르복실레이트를 적가한다. 박층 크로마토그래피에 의한 분석이 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타낼 때까지 반응 혼합물을 실온에서 교반한다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 농축한다. 생성된 황색 오일을 메틸렌 클로라이드와 물 사이에 분배시킨다. 유기층을 분리하고, 물 및 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축 시킨다. 미정제 물질을 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 목적하는 보호된 E-알릴 아미딘 생성물을 수득한다.

EX-E-7)메탄올 및 수 중 아세트산에, EX-E-6 로부터의 생성물을 용해시킨다. 아연 더스트를 첨가하고, HPLC 분석이 소량의 출발 물질이 잔존함을 나타낼 때까지, 혼합물을 음파 파쇄 하에서 교반한다. Zn 더스트를 반응 혼합물로부터 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 농축한다. 미정제 물질을 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피로 정제한다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 농축하여, 목적하는 아세트아미딘 생성물을 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다.

실시예 E)6.0 N HCl 중 EX-E-7 의 용액을 1 시간 동안 환류했다. 용매를 진공 제거했다. 생성된 고체를 수 중에 용해시키고, 1.0 N HCl 로부터 반복 농축시켜, 임의의 잔존 TFA 염을 제거하여, 목적하는 (2R,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을 수득한다.

실시예 F

EX-F-1)질소 하의 EX-A-3 의 생성물 (5.0 g, 11.5 mmol) 의 THF (45 ㎖) 용액에, 5.6 ㎖ THF 중 Red-Al (5.22 ㎖, 17.4 mmol) 의 용액을 30 분에 걸쳐 적가했다. 내부 온도는 -10℃ 미만으로 유지했다. 5 분 후, 반응을 33.7 ㎖ 의 1.3 M NaㆍK 타르트레이트로 켄칭했다. 톨루엔 (11 ㎖) 를 상기 혼합물에 첨가하여 분리를 개선했다. 유기층을 33.7 ㎖ 의 1.3 M NaㆍK 타르트레이트, 이어서 염수 (40 ㎖) 로 세척했다. 유기층을 조합하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축했다. 미정제 물질, 3.8 g (84%) 의 연황색 오일은 직접 다음 단계로 옮겨졌다.

EX-F-2)-10℃ 에서 500 ㎖ 의 메틸렌 클로라이드 중 EX-F-1 으로부터의 생성물 (50.0 g, 0.128 mol) 의 용액에, 트리에틸아민 (18.0 g, 0.179 mmol) 을 첨가했다. 50 ㎖ 의 메틸렌 클로라이드 중 메탄술포닐 클로라이드 (17.5 g, 0.153 mol) 의 용액을 서서히 첨가하여, 온도를 -10℃ 로 유지했다. 반응을 -10℃ 에서 45 분 동안 교반했고, 이 시점에서, 박층 크로마토그래피 (헥산 중 50% 에틸 아세테이트) 및 LCMS 에 의한 분석은 대부분의 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 반응을 600 ㎖ 의 1.0 M 시트르산으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (2 ×400 ㎖) 로 추출했다. 유기층을 조합하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축했다. 미정제 물질, 70 g 의 황색 오일은 다음 단계로 직접 옮겨졌다.

LCMS: m/z = 492.2 [M+Na].

EX-F-3)실온에서 400 ㎖ 의 디메틸 포름아미드 중 EX-F-2 의 생성물 (70.0g, 0.128 mol) 의 용액에, 칼륨 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-오네이트 (28.7 g, 0.192 mmol) 을 첨가했다. 반응을 실온에서 2.5 시간 동안 교반하고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (헥산 중 30% 에틸 아세테이트) 및 LCMS 에 의한 분석은 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 반응을 400 ㎖ 의 물로 희석하고, 에틸 아세테이트 (5 ×400 ㎖) 로 추출했다. 유기층을 조합하고, 400 ㎖ 의 물, 400 ㎖ 의 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축 시켰다. 미정제 물질, 70 g 의 황색 오일을 1:4 의 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 38 g (63%) 의 연황색 오일을 수득했다.

EX-F-4)EX-F-3 의 몇몇 이중 제조 생성물의 조합을 500 ㎖/분의 60:40 MtBE:헵탄 등용매 플로우에서, Merk 실리카겔 MODCOL 컬럼 상의 HPLC 컬럼 크로마토그래피로 정제했다. 회수된 63 g 에 대한 두번째 정제는, 550 ㎖/분의 10:90 A:B (A: 100% 에탄올, B: 100% 헵탄) 의 등용매 플로우에서 진행되는 Chiral Pak-AD 컬럼 상의 키랄 HPLC 컬럼 크로마토그래피였다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 농축하여, 41 g (68%) 의 목적하는 보호된 L,E-알릴 아미딘 생성물을 투명한 오일로서 수득했고, 이는¹⁹F NMR 및 키랄 크로마토그래피에 의해 특정된 바 목적하는 L 및 E-이성체만을 함유했다.

EX-F-5)EX-F-4 로부터의 생성물 (22.5 g, 0.047 mol) 을 112 ㎖ 의 메탄올에 용해시켰다. 강한 교반을 시작하고, 225 ㎖ 의 40% 수중 아세트산, 이어서 아연 더스트 (11.5 g, 0.177 mmol) 를 첨가했다. 교반 반응을 환류 (대략 60℃) 하에 2.5 시간 동안 방치하고, 이 시점에서 HPLC 분석은 대부분의 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 반응을 냉각하고, Zn 을 셀라이트를 통해 반응 혼합물로부터 여과하고, 셀라이트를 추가의 메탄올로 잘 세척했다. 여액 및 메탄올 세척액을 조합하고 농축했다. 생성된 오일상 백색 고체를 메틸렌 클로라이드 (2 ×500 ㎖) 로 세척하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 추가의 500 ㎖ 메틸렌 클로라이드 세척을 수행했다. 여액을 조합하고 농축하여 연황색 오일을 제공했다. 미정제 물질, 39 g 의 연황색 오일을 80:19:1 의 메탄올:메틸렌 클로라이드:아세트산으로 용출시키는 200 ㎖ 실리카겔 상의 플러그 여과에 의해 정제하여, 13 g (83%) 의 목적하는 생성물을 수득했다.

실시예 F)750 ㎖ 의 6.0 N HCl 중 EX-F-5 의 생성물 (22 g, 0.066 mol) 의 용액을 45 분 동안 환류했다. 용매를 진공 제거했다. 생성된 고체를 수 중에 용해시키고, 추가로 3회 농축시켰다. 미정제 물질을, 30 분 동안 100% 등용매 B, 이어서 10 분 동안 0-100% A 의 그래디언트 및 20 분 동안 100% A 세척액을 60 분에 걸쳐 펌핑하면서 용출시키는 YMC ODS-AQ 컬럼 상의 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합 및 농축하여, 3.5 g (68%) 의 목적하는 아세트아미딘 생성물을 디히드로클로라이드 염으로서 수득했고, 이는 목적하는 (2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산만을 함유하였으며, 디히드로클로라이드 생성물은 백색 고체, 융점 51.5-56.3℃ 로 수득되었고, 이는¹⁹F NMR 에 의해 특정된 바 목적하는 E-이성체 만을 함유했다.

실시예 G

(2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-히드록시이미노에틸)아미노]-5-헵텐산

EX-G-1)기체성 HCl 을 100 ㎖ 의 메탄올 중 EX-F-3 의 생성물 (14 g, 30.0 mmol) 의 교반 냉각 (0℃) 용액을 통해 5 분 동안 버블링했다. 생성된 어두운 황색 용액을 추가 30 분간 교반하고, 이 시점에서 HPLC 는 출발 물질이 완전히 소모됨을 나타냈다. 생성된 혼합물을 포화 NaHCO₃를 사용하여 pH=8 로 중화하고, 생성물을 EtOAc 로 추출했다. 유기층을 MgSO₄로 건조하고 농축시켜 목적하는 아미노 에스테르 생성물을 어두운 황색 오일로서 수득했고, 이는 미정제 상태로 다음 단계로 옮겨졌다.

실시예 G)70 ㎖ 의 2.5 N NaOH 중 EX-G-1 의 생성물 (8 g, 30 mmol) 의 용액을 10 분 동안 교반하고, 이 시점에서 HPLC 분석은 출발 물질이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 생성된 용액을 12N HCl (대략 50 ㎖) 를 사용하여 pH = 7-8 로 충화시키고, 농축시켰다. 생성된 슬러리를 메탄올로 세척하고, 여과하여 염을 제거하고, 갈색 오일로 농축했다. 미정제 물질을 30 분 동안 100% 등용매 B, 이어서 10 분 동안 0-100% A 의 그래디언트 및 20 분 동안 100% A 세척액을 60 분에 걸쳐 펌핑하면서 용출시키는 YMC ODS-AQ 컬럼 상의 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합 및 농축하여, 1.0 g (14%) 의 목적하는 생성물을 백색 고체로서 수득했다. 생성물을 가열수 및 이소프로필 알콜로부터 재결정하고, 여과 수집하여 순수한 (2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-히드록시이미노에틸)아미노]-5-헵텐산을 백색 결정 고체로서 수득했다.융점: 198.00-200.00℃.

키랄 분석 ＞97.7%: 100% A 를 사용한 0.8 ㎖/분 등용매에서 CrownPak CR(+) (A: 수성 HClO₄, pH=1.5).

실시예 H

(2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-N-(1H-테트라졸-5-일)-5-헵텐아미드, 디히드로클로라이드

EX-H-1)EX-F-3 로부터의 생성물 (6.1 g, 0.013 mol) 을 4 ㎖ 의 메탄올에 용해시켰다. 강한 교반을 시작하고 10 ㎖ 의 6N HCl 을 첨가했다. 교반 반응을 환류 (대략 60℃) 하에 18 시간 동안 방치하고, 이 시점에서 HPLC 분석은 대부분의 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 반응을 냉각하고 3.3 g (100%) 의오렌지색 오일로 농축했다. LCMS: m/z = 282 [M+Na]⁺.

EX-H-2)EX-H-1 으로부터의 생성물 (3.3 g, 0.013 mol) 을 12 ㎖ 의 1:1 H₂O:디옥산에 용해시켰다. 교반을 시작하고, 트리에틸아민 (1.95 g, 0.019 mol) 을 첨가했다. 반응을 0℃ 로 냉각하고, 디-tert-부틸디카르보네이트 (3.4 g, 0.016 mol) 을 첨가했다. 반응을 실온으로 가온하고, 이 시점에서 아세토니트릴 (4 ㎖) 을 고체를 용해하기 위해 첨가했다. 반응을 실온에서 18 시간 동안 교반했고, 이 시점에서 HPLC 분석은 대부분의 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 반응을 1.0 N 수성 KHSO₄(25 ㎖) 로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (3 ×50 ㎖) 로 추출하고, 유기층을 MgSO₄로 건조하고, 농축했다. 미정제 물질, 3.5 g 의 어두운색 오일을 4:95:1 메탄올:메틸렌 클로라이드:아세트산으로 용출시키는 플래시 크로마토그래피로 정제하여, 2.4 g (52%) 의 목적하는 생성물을 연황색 오일로서 수득했다. LCMS: m/z = 382 [M+Na]⁺.

EX-H-3)EX-H-2 로부터의 생성물 (2.4 g, 0.007 mol) 을 13 ㎖ 의 THF 에 용해시켰다. 교반을 시작하고, 5-아미노테트라졸 모노히드레이트 (0.83 g, 0.008mol), 이어서 1,3-디이소프로필카르보디이미드 (1.0 g, 0.008 mol) 을 첨가했다. 생성된 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반했고, 이 시점에서 HPLC 분석은 대부분의 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 상기 반응에 12 ㎖ 의 물을 첨가하고, THF 를 진공 증류에 의해 제거했다. 에탄올 (30 ㎖) 를 첨가하고, 반응을 가열 환류했다. 환류 15 분 후, 반응을 -10℃ 로 냉각하고, 이 시점에서 목적하는 생성물이 용액으로부터 석출되었다. 생성물을 여과 수집하여 1.25 g (50%) 의 백색 고체를 수득했다. LCMS: m/z = 449 [M+Na]⁺.

EX-H-4)EX-H-3 로부터의 생성물 (1.0 g, 0.0023 mol) 을 5 ㎖ 의 메탄올에 용해시켰다. 강한 교반을 시작하고, 10 ㎖ 의 40% 수중 아세트산, 이어서 아연 더스트 (0.5 g, 0.008 mol) 를 첨가했다. 교반 반응을 환류 (대략 60℃) 하에 1.5 시간 동안 방치하고, 이 시점에서 HPLC 분석은 대부분의 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 반응을 냉각하고, Zn 을 셀라이트를 통해 반응 혼합물로부터 여과하고, 셀라이트를 추가의 메탄올로 잘 세척했다. 여액 및 메탄올 세척액을 조합하고 농축했다. 생성된 오일상 백색 고체를 30 분 동안 100% 등용매 B, 이어서 10 분 동안 0-100% A 의 그래디언트 및 20 분 동안 100% A 세척액을 60 분에 걸쳐 펌핑하면서 용출시키는 YMC ODS-AQ 컬럼 상의 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제했다 (A: 100 % 아세토니트릴, B: 0.0025% 아세트산을 갖는 100% H₂O).생성물을 함유하는 분획을 조합 및 농축하여, 0.390 g (44%) 의 목적하는 아세트아미딘 생성물을 백색 고체로서 수득했다. LCMS: m/z = 407.3 [M+Na].

실시예 H)5 ㎖ 의 농축 HOAc 에 EX-H-4 로부터의 생성물 (0.30 g, 0.780 mmol) 을 용해시켰다. 반응을 5 분 동안 실온에서 교반했다. 용매를 진공 제거했다. 생성된 고체를 물에 용해시키고, 추가로 3회 농축시켰다. HPLC 는 출발 물질의 양을 나타냈다. 고체를 1N HCl 에 용해시키고, 3 시간 동안 교반했으며, 이 시점에서 HPLC 는 대부분의 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 용액을 농축하여, 290 mg (98%) 의 목적하는 아세트아미딘 생성물을 디히드로클로라이드 염으로서 수득했다. LCMS: m/z = 285.1 [M+H]⁺.

실시예 I

S-[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]-2-메틸-L-시스테인, 디히드로클로라이드

실시예 I-1)(2R,4R)-메틸-2-tert-부틸-1,3-티아졸린-3-포르밀-4-카르복실레이트

[Jeanguenat 및 Seebach, J.Chem.Soc.Perkin Trans. 1, 2291 (1991)] 및 [Pattenden 등, Tetrahedron, 49, 2131 (1993)] 참조: Dean-Stark 트랩을 사용하여 물을 연속적으로 제거하면서 (R)-시스테인 메틸 에스테르 히드로클로라이드 (8.58 g, 50 mmol), 피발알데히드 (8.61 g, 100 mmol) 및 트리에틸아민 (5.57 g, 55mmol) 을 펜탄 (800 ㎖) 중에서 환류시켰다. 혼합물을 여과하고 증발시켰다. 생성된 티아졸리딘 (9.15 g, 45 mmol) 및 나트륨 포르메이트 (3.37 g, 49.5 mmol) 을 포름산 (68 ㎖) 중에서 교반하고, 아세트산 무수물 (13 ㎖, 138 mmol) 을 방울씩 1 시간에 걸쳐 0 내지 5℃ 에서 처리했다. 용액을 RT 로 가온하고, 밤새 교반했다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 수성 5% NaHCO₃로 중화시키고, 에테르 (3×) 로 추출했다. 조합된 유기층을 건조하고 (무수 MgSO₄), 여과하고, 증발시켜 표제 화합물을 수득했고, 이를 헥산-에테르로부터 백색 결정으로서 결정화했다 (8.65 g) (전체 80%, 이형태체의 8:1 혼합물).

실시예 I-2)(2R,4R)-메틸-2-tert-부틸-1,3-티아졸린-3-포르밀-4-메틸-4-카르복실레이트

-78℃ 에서 N₂하의 무수 테트라히드로푸란 (130 ㎖) 중 실시예 I-1 의 생성물, (2R,4R)-메틸-2-tert-부틸-1,3-티아졸린-3-포르밀-4-카르복실레이트 (8.65 g, 37.4 mmol) 의 용액에, DMPU (25 ㎖) 를 첨가하고, 혼합물을 5 분 동안 교반했다. 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드, 테트라히드로푸란 중 1 M (37.5 ㎖) 를 첨가하고, 혼합물을 30 분 동안 교반했다. 메틸 요오다이드 (5.84 g, 41.1 mmol) 를 첨가한 후, 혼합물을 -78℃ 에서 4 시간 동안 유지시킨 후, 연속적으로 교반하면서 실온으로 가온시켰다. 용매를 진공 증발시키고, 염수 및 에틸 아세테이트를 첨가했다. 수성 상을 3 ×EtOAc 로 추출하고, 조합된 유기층을 10% KHSO₄, 물 및 염수로 세척했다. 이어서, 이들을 건조하고 (무수 MgSO₄), 여과하고, 모든 용매를 감압 하에 스트리핑(stripping)했다. 1-10% EtOAc/헥산을 사용한 실리카 상에서의 잔류 오일의 크로마토그래피로 표제 화합물 (5.78 g, 63%, 이형태체의 2.4:1 혼합물) 을 수득했다.

Daicel Chemical Industries Chiracel OAS 컬럼 상에서 16.5 분의 체류 시간, 10-40% IPA/헥산 0-25 분, ＞95% ee.

실시예 I-3)(2R) 2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드

실시예 I-2 의 생성물, (2R,4R)-메틸-2-tert-부틸-1,3-티아졸린-3-포르밀-4-메틸-4-카르복실레이트 (5.7 g, 23.2 mmol) 를 N₂하에 6N HCl (100 ㎖) 로 교반하고, 강한 환류하에 2 일 동안 유지시켰다. 용액을 냉각시키고, EtOAc 로 세척하고, 증발시켜 생성물 (2R) 2-메틸-시스테인 히드로클로라이드 (3.79 g, 95%) 를 연황색 분말로서 산출했다.

실시예 I-4)S-[2-[[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]아미노]에틸]-2-메틸-L-시스테인 트리플루오로아세테이트

나트륨 히드리드 (2.6 g, 광유 중 60%, 65 mmol) 를 오븐 건조되고, 진공 냉각된, 무(無)산소 1-메틸-2-피롤리디논 (5 ㎖) 를 함유하는 RB 플라스크에 첨가했다. 상기 혼합물을 -10℃ 로 냉각하고, N₂하에 교반했다. 무산소 1-메틸-2-피롤리디논 (25 ㎖) 에 용해된, 실시예-I-3 의 생성물, 2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드 (3.6 g, 21.0 mmol) 을 부분씩 첨가했다. 모든 H₂발생이 중단된 후, 무산소 1-메틸-2-피롤리디논 (15 ㎖) 중 2-[(1,1-디메틸에톡시카르보닐)-아미노]에틸 브로마이드 (4.94 g, 21 mmol) 을 -10℃ 에서 첨가했다. 이어서, 반응을 4 시간 동안 교반하여, 실온으로 가온했다. 용액을 1N HCl 로 중화시키고, 1-메틸-2-피롤리디논을 진공 증발하여 제거했다. 0.05% 수성 트리플루오로아세트산 용액 중 1-20% 아세토니트릴을 사용한 역상 크로마토그래피로 표제 화합물 (5.9 g) 이 산출되었으며, 이는 적절한 분획의 동결 건조에 의해 회수되었다.

실시예 I-5)S-(2-아미노에틸)-2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드

실시예 I-4 의 생성물, S-[2-[[(1,1-디메틸에톡시)카르보닐]아미노]에틸]-2-메틸-L-시스테인 트리플루오로아세테이트, (5.5 g, 14.0 mmol) 을 1N HCl (100 ㎖) 에 용해시키고, 질소 하에 실온에서 밤새 교반했다. 용액을 동결 건조에 의해 제거하여, 표제 S-(2-아미노에틸)-2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드를 수득했다.

실시예 I)실시예-I-5 의 생성물을 H₂O 에 용해시키고, pH 를 1N NaOH 를 사용하여 10 으로 조정하고, 에틸 아세트이미데이트 히드로클로라이드 (1.73 g, 14.0 mmol) 을 첨가했다. 반응을 15 내지 30 분 교반하고, pH 를 10 으로 올리고, 상기 과정을 3 회 반복했다. HCl 을 사용하여 pH 를 3 으로 조정하고, 상기 용액을 세척된 DOWEX 50WX4-200 컬럼 상에 로딩(loading)했다. 컬럼을 H₂O 및 0.25 M NH₄OH, 이어서 0.5 M NH₄OH 로 세척했다. 0.5 M NH₄OH 세척액으로부터의 분획을 즉시 동결시키고, 조합하고, 동결 건조시켜 오일을 수득했고, 이를 1N HCl 에 용해시키고 증발시켜 표제 화합물을 백색 고체 (2.7 g) 으로서 수득했다.

실시예 J

2-[[[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]티오]메틸]-O-메틸-D-세린, 디히드로클로라이드

본 실시예에 이용된 과정 및 방법은, 단계 실시예-I-2 에서 메틸 요오다이드대신 메톡시메틸 요오다이드가 사용된다는 것을 제외하고는, 실시예 I 의 것과 동일했다. 상기 과정은 표제 생성물을 백색 고체로서 산출했다 (2.7 g).

실시예 K

S-[(1R)-2-[(1-이미노에틸)아미노]-1-메틸에틸]-2-메틸-L-시스테인, 디히드로클로라이드

실시예-K-1)(S)-1-[(벤질옥시카르보닐)아미노]-2-프로판올

0℃ 에서 무수 벤젠 (60 ㎖) 중 (S)-1-아미노-2-프로판올 (9.76 g, 130 mmol) 의 용액에, 질소 분위기 하에 강하게 교반하면서 무수 벤젠 (120 ㎖) 중 벤질 클로로포르메이트 (10.23 g, 60 mmol) 를 부분씩, 서서히 20 분의 기간에 걸쳐 첨가했다. 혼합물을 1 시간 동안 0℃ 에서 교반한 후, 실온으로 가온하고, 추가로 2 시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (2×) 및 염수 (2×) 로 세척한 후, 유기층을 무수 MgSO₄로 건조했다. 모든 용매를 증발시켜 표제 생성물을 오일로서 수득했다.

실시예-K-2)(S)-1-[(벤질옥시카르보닐)아미노]-2-프로판올 토실레이트

0℃ 에서 메틸렌 클로라이드 (60 ㎖) 중 실시예-K-1 의 생성물, (S)-1-[(벤질옥시카르보닐)아미노]-2-프로판올 (9.74 g, 46.7 mmol) 및 트리에틸아민 (7.27 g, 72 mmol) 의 용액에, 질소 하에 강하게 교반하면서 메틸렌 클로라이드 (18 ㎖) 중 톨루엔 술포닐 클로라이드 (9.15 g, 48 mmol) 를 부분씩, 서서히 20 분의 기간에 걸쳐 첨가했다. 혼합물을 실온으로 가온하고, 질소 하에 추가로 36 시간 동안 교반했다. 유기층을 1N HCl, 물, 5% NaHCO₃용액, 물 및 염수로 세척한 후, 무수 MgSO₄로 건조했다. 모든 용매를 증발시켜 백색 고체를 수득했고, 이를 실리카 플러그에 통과시켜 에틸 아세테이트/헥산 (1:4) 으로 과량의 톨루엔 술포닐 클로라이드를 제거한 후, 에틸 아세테이트/헥산 (1:3) 으로 표제 화합물을 백색 결정으로서 수득했다. 물질을 에틸 아세테이트/헥산으로부터 재결정하여 백색 침상물 (10.8 g) 을 수득했다.

상기 생성물은 이소프로판올/헥산의 이동상 및 5분 동안 10% 이소프로판올의 그래디언트를, 이어서 25 분의 기간에 걸쳐 10 내지 40% 의 이소프로판올을 사용하고, UV 및 레이저 편광측정법 검출기를 사용하는 Regis Technologies Inc. Perkle Covalent (R,R) ?-GEM1 HPLC 컬럼 상에서 조사되었다. 체류 시간 주요 피크: 22.2 분, ＞98% ee.

실시예-K-3)S-[(1R)-2-(벤질옥시카르보닐)아미노-1-메틸에틸]-2-메틸-L-시스테인 트리플루오로아세테이트

무산소 1-메틸-2-피롤리디논 (5 ㎖) 에 용해된, 실시예-I-3 의 생성물, 2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드 (1 g, 6.5 mmol) 를 오븐 건조되고, N₂플러싱(flushing)된 RB 플라스크에 첨가하고, 0℃ 로 냉각했다. 나트륨 히드리드 (0.86 g, 광유 중 60%, 20.1 mmol) 를 첨가하고, 혼합물을 0℃ 에서 15 분 동안 교반했다. 무산소 1-메틸-2-피롤리디논 (10 ㎖) 에 용해된 실시예-K-2 의 생성물, (2S)-1-[(N-벤질옥시카르보닐)아미노]-2-프로판올 토실레이트 (2.5 g, 7 mmol) 의 용액을 10 분에 걸쳐 첨가했다. 0℃ 에서 15 분 후, 반응 혼합물을 실온에서 4.5 시간 동안 교반했다. 이어서 용액을 1N HCl 을 사용하여 pH 4 로 산성화하고, 1-메틸-2-피롤리디논을 진공 증발에 의해 제거했다. 0.05% 수성 트리플루오로아세트산 용액 중 20-40% 아세토니트릴을 사용한 역상 크로마토그래피는 표제 화합물 0.57 g 을 산출했고, 이는 동결 건조에 의해 회수되었다.

실시예-K-4)S-[(1R)-2-아미노-1-메틸에틸]-2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드

실시예-K-3 의 생성물, S-[(1R)-2-(벤질옥시카르보닐)아미노-1-메틸에틸]-2-메틸-L-시스테인 트리플루오로아세테이트, (0.5 g, 1.14 mmol) 을 6N HCl 에 용해시키고, 1.5 시간 동안 환류했다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각하고, EtOAc 로 추출했다. 수성층을 진공 농축하여 표제 화합물, (2R,5R)-S-(1-아미노-2-프로필)-2-메틸-시스테인 히드로클로라이드 (0.29 g) 를 수득했고, 이는 추가의 정제 없이 사용되었다.

실시예 K)실시예-K-4) 의 생성물, S-[(1R)-2-아미노-1-메틸에틸]-2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드 (0.2 g, 0.76 mmol) 를 2 ㎖ 의 H₂O 에 용해시키고, pH 를 1N NaOH 를 사용하여 10.0 으로 조정하고, 에틸 아세트이미데이트 히드로클로라이드 (0.38 g, 3 mmol) 을 4 부분으로 10 분에 걸쳐 첨가하고, 필요에 따라 1N NaOH 를 사용하여 pH 를 10.0 으로 조정했다. 1 시간 후, 1N HCl 을 사용하여 pH 를 3 으로 조정했다. 용액을 수 세척된 DOWEX 50WX4-200 컬럼 상에 로딩했다. 컬럼을 H₂O 및 0.5N NH₄OH 로 세척했다. 염기성 분획이 고이도록 하여, 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 1N HCl 로 산성화하고, 실시예 K 표제 생성물 (49 mg) 으로 농축시켰다.

실시예 L

S-[(1S)-2-[(1-이미노에틸)아미노]-1-메틸에틸]-2-메틸-L-시스테인, 디히드로클로라이드

여기서 이용된 과정 및 방법은, 단계 실시예-K-1 에서 (S)-1-아미노-2-프로판올 대신 (R)-1-아미노-2-프로판올이 사용되어, 표제 물질 S-[(1S)-2-[(1-이미노에틸)아미노]-1-메틸에틸-2-메틸-L-시스테인 히드로클로라이드가 수득된다는 것을 제외하고는, 실시예 K 의 것과 동일했다.

실시예 M

S-[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]-2-에틸-L-시스테인, 디히드로클로라이드

본 합성에 이용된 과정 및 방법은, 실시예-I-2 에서 메틸 요오다이드 대신 에틸 트리플레이트를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 I 에 사용된 것과 동일했다. 10-40% 의 수중 아세토니트릴 그래디언트를 사용한 역상 크로마토그래피가사용되어, 표제 생성물 (20% 수율) 을 정제했다.

실시예 N

S-[[[[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]티오]-D-발린, 디히드로클로라이드

실시예-N-1)이소프로필 트리플레이트

질소 하에 디에틸 에테르 (300 ㎖) 중에서 교반된 은 트리플레이트 (25.25 g, 98.3 mmol) 을 에테르 (200 ㎖) 중 이소프로필 요오다이드 (16.54 g, 98.5 mmol) 로 15 분에 걸쳐 처리했다. 혼합물을 10 분 동안 교반한 후, 여과했다. 여액을 감압 증류했다. 증류액을 대기압에서 재증류하여 대다수의 디에틸 에테르를 제거하고, 표제 이소프로필 트리플레이트-디에틸 에테르의 혼합물 (중량으로 84:16) (15.46 g, 70% 보정됨) 의 혼합물을 무색 액체로서 남겼다.

여기에 이용된 과정 및 방법은, 실시예-I-2 의 메틸 요오다이드를 이소프로필 트리플레이트로 대체한 것을 제외하고는, 실시예 I 에 사용된 것과 동일했다. 10-40% 의 수중 아세토니트릴 그래디언트 용출을 사용한 역상 크로마토그래피에 의해 미정제 표제 생성물을 정제했다.

실시예 O

S-[2-(1-이미노에틸아미노)에틸]-2-메틸-(D/L)-시스테인, 비스트리플루오로아세테이트

실시예-O-1)S-(2-아미노에틸)-L-시스테인, 메틸 에스테르

10 g (50 mmol) 샘플의 S-(2-아미노에틸)-L-시스테인을 400 ㎖ 의 메탄올에 용해시켰다. 상기 냉각된 용액으로 무수 HCl 중 30 분 동안 버블링시켰다. 실온에서 밤새 교반 후, 용액을 농축하여 12.7 g 의 표제 화합물을 산출했다.

실시예-O-2)N-{4-클로로페닐)메틸렌]-S-[2-[[(4-클로로페닐)메틸렌]아미노]에틸]-L-시스테인, 메틸 에스테르

실시예-O-1 의 생성물, S-(2-아미노에틸)-L-시스테인 메틸 에스테르의 12.7 g (50 mmol) 샘플을 아세토니트릴에 용해시켰다. 상기 용액에 12.2 g (100 mmol) 의 무수 MgSO₄, 14 g (100 mmol) 의 4-클로로벤즈알데히드 및 100 mmol 의 트리에틸아민을 첨가했다. 상기 혼합물을 12 시간 동안 교반하고, 작은 부피로 농축하고, 500 ㎖ 의 에틸 아세테이트로 희석했다. 유기 용액을 연속적으로(0.1%) NaHCO₃, (2N) NaOH 및 염수 용액으로 세척했다. 유기물을 건조하고 (무수 MgSO₄), 여과하고 농축하여 7.5 g 의 표제 화합물을 수득했다. [M+H]⁺= 179.

실시예-O-3)N-[4-클로로페닐)메틸렌]-S-[2-[[(4-클로로페닐)메틸렌]아미노]에틸]-2-메틸-D/L-시스테인 메틸 에스테르

무수 THF 중 실시예-O-2 의 생성물, N-{4-클로로페닐)메틸렌]-S-[2-[[(4-클로로페닐)메틸렌]아미노]에틸]-L-시스테인 메틸 에스테르 (7.5 g, 17 mmol) 의 생성물의 샘플을, -78℃ 에서 질소 하에 17 mmol 의 나트륨 비스(트리메틸실릴)아미드, 이어서 2.4 g (17 mmol) 의 메틸 요오다이드로 처리했다. 용액을 -78℃ 에서 4 시간 동안 유지한 후, 연속적으로 교반하면서 실온으로 가온했다. 용매를 진공 증발시키고, 염수 및 에틸 아세테이트를 첨가했다. 수성상을 3×EtOAc 로 추출하고, 조합된 유기층을 10% KHSO₄, 물 및 염수로 세척한 후, 건조 (무수 MgSO₄) 시키고, 여과하고, 증발시켜 표제 화합물을 산출했다.

실시예-O-4)S-(2-아미노에틸)-2-메틸-D/L-시스테인, 히드로클로라이드

실시예-O-3 의 생성물, N-[4-클로로페닐)메틸렌]-S-[2-[[(4-클로로페닐)메틸렌]아미노]에틸]-2-메틸-D/L-시스테인 메틸 에스테르 (4.37 g, 10 mmol) 의 생성물의 샘플을 교반하고, 2N HCl 과 함께 밤새 가열 (60℃) 하고, 상기 용액을 에틸 아세테이트 (3×) 로 세척했다. 수용액을 동결 건조하여 표제 화합물을 수득했다.

실시예 O)실시예-O-4 의 생성물, S-(2-아미노에틸)-2-메틸-D/L-시스테인 디히드로클로라이드 (2.5 g (10 mmol)) 의 샘플을 H₂O 에 용해시키고, 1N NaOH 로 pH 를 10 으로 조정했다. 이어서, 에틸 아세트이미데이트 히드로클로라이드 (1.24 g, 10.0 mmol) 을 반응 혼합물에 첨가했다. 반응을 15 내지 30 분 동안 교반하고, pH 를 10 으로 올리고, 상기 공정을 3회 반복했다. HCl 용액을 사용하여 pH 를 4 로 낮추고, 용액을 증발시켰다. 이동상으로서 0.05% 트리플루오로아세트산을 함유하는 H₂O 를 갖는 역상 HPLC 상에서 잔류물을 정제하여, 실시예 O 표제 화합물을 수득했다. M + H = 220.

실시예 P

(2R)-2-아미노-3-[[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]술피닐]-2-메틸프로판산, 디히드로클로라이드

3 ㎖ 의 물 중 S-[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]-2-메틸-L-시스테인, 디히드로클로라이드 (실시예 I, 0.2 g, 0.73 mmol) 의 용액을 교반하고, 0℃ 로 냉각하고, 포름산 (0.4 ㎖, 0.73 mmol) 중 3% H₂O₂(0.8 ㎖, 0.73 mmol) 의 용액을 0.3 ㎖ 부분씩 첨가했다. 냉각조를 제거하고, 반응 혼합물을 실온에서 48 시간 동안 교반했다. 용액을 진공 농축하고, 물 (10 ㎖) 로 희석하고, 다시 농축하여 미정제 술폰을 수득했다. 상기 잔류물을 크로마토그래피 (C-18 역상, 0.05% 트리플루오로아세트산을 함유하는 이동상 H₂O 를 가짐) 하여, 순수한 술폰을 수득했다. 술폰을 1M HCl (10 ㎖) 로 처리하고 진공 농축하여, 표제 화합물의 두가지 부분입체 이성체의 혼합물 140 mg 을 HCl 염의 무색 오일로서 수득했다.

실시예 Q

(2R)-2-아미노-3[[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]술포닐]-2-메틸프로판산, 디히드로클로라이드

2 ㎖ 의 물 중 S-[2-[(1-이미노에틸)아미노]에틸]-2-메틸-L-시스테인 디히드로클로라이드, 실시예 I 의 생성물 (0.15 g, 0.54 mmol) 의 용액을 0℃ 로 냉각하고, 포름산 (0.8 ㎖, 14.6 mmol) 중 3% H₂O₂(1.6 ㎖, 1.46 mmol) 의 용액을 첨가했다. 냉각조를 제거하고, 반응 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반했다. 용액을 진공 농축하고, 10 ㎖ 의 물로 희석하고, 다시 농축하여 미정제 술폭시드를 수득했다. 잔류물을 4 ㎖ 의 물로 희석하고, 2.5 N NaOH 를 사용하여 pH 9 로 조정했다. 아세톤 (5 ㎖), 이어서 Boc₂O (0.2 g) 을 첨가하고, 반응을 실온에서 48 시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 1M HCl 을 사용하여 pH 6 으로 조정하고, 진공 농축시켰다. 상기 잔류물을 크로마토그래피 (C-18 역상; 40 내지 50%ACN:H₂O, 0.05% TFA) 하여, 순수한 Boc 보호된 물질을 수득했다. 상기 분획을 진공 농축하고, 잔류물을 1N HCl (3 ㎖) 로 1 시간 동안 처리했다. 용액을 농축하여 30 mg 의 표제 화합물을 무색 오일로서 수득했다.

실시예 R

(2S,5Z)-2-아미노-6-메틸-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드

실시예 R-1)

톨루엔 (60 ㎖) 중 트리에틸-2-포스포노프로피오네이트 (6.5 mg, 27.1 mmol) 의 용액을 0.5 M 칼륨 비스(트리메틸실릴) 아미드 (50.0 ㎖, 톨루엔 중) 로 처리하고, 생성된 음이온을 실시예 U-4 (아래쪽의 실시예 U 참조) 의 방법에 의한 실시예 U-3 의 알데히드 생성물과 축합시켰다. 이로써, 크로마토그래피 후, 목적하는각각의 Z 및 E 디에스테르의 3:7 혼합물 8 g 이 제조되었다.

실시예 R-2)

Et₂O (30 ㎖) 중 실시예 R-1 (850 mg, 2.0 mmol) 의 생성물 혼합물을, 실시예 U-5 의 방법에 의해 디이소부틸 알루미늄/히드리드 (DIBAL) 를 사용하여 20 분의 기간에 걸쳐 환원시켜, E-알콜과 비(非)환원된 Z-에스테르의 미정제의 예시된 목적 혼합물을 제조했다. 상기 혼합물을 n-헥산:EtOAc (9:1) 내지 n-헥산:EtOAc (1:1) 로 용출시키는 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여, Z-에스테르 (530 mg) 및 E-알콜 목적 물질의 샘플을 수득했다.

실시예 R-3)

Et₂O (30 ㎖) 중 실시예 R-2 (510 mg, 1.2 mmol) 의 생성물 Z-에스테르를, 실시예 U-5 의 방법에 의해 디이소부틸 알루미늄/히드리드 (DIBAL) 를 사용하여 2 시간의 기간에 걸쳐 환원시켜, 미정제의 예시된 목적 Z-알콜을 제조했다. 상기 물질을 n-헥산:EtOAc (9:1) 내지 n-헥산:EtOAc (8:2) 로 용출시키는 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여, 340 mg 의 목적하는 Z-알콜 생성물을 산출했다.

실시예 R-4)

실시예 R-3 (340 mg, 0.9 mmol) 의 생성물 알콜의 CH₂Cl₂용액 (5 ㎖) 을 트리에틸아민 (151 mg, 1.5 mmol) 로 처리했다. 얼음 조에서 냉각된 상기 용액에 메탄술포닐 클로라이드의 CH₂Cl₂용액 (1.5 ㎖) 을 첨가했다. 15 분 후, 얼음조를 제거하고, 반응을 주변 온도에서 20 시간 동안 교반했다. 이어서, 반응 혼합물을 10% KHSO₄로 세척하고, Na₂SO₄로 건조하고, 모든 용매를 감압 하에 스트리핑하여, 350 mg 의 목적하는 Z-알릴 클로라이드를 제조했다.

실시예 R-5)

DMF 중 칼륨 3-메틸-1,2,4-옥사-디아졸린-5-온의 현탁액을 아래쪽의 실시예 S-2 의 방법에 의한 실시예 R-4 의 생성물의 DMF 용액과 반응시켜, 물질을 제조했다.

실시예 R-6)

실시예 R-5 의 생성물을 실시예 U-7 의 방법에 의해 HOAc 중 아연과 반응시켜, 아미딘을 산출했다.

실시예 R-7)

실시예 R-6 의 생성물을 빙 HOAc 중 디옥산 중 4N HCl 과 반응시켜, 아미딘을 산출했다.

실시예 R)

실시예 R-7 의 생성물을 탈보호화하여 아미노산, 디히드로클로라이드를 산출했다.

실시예 S

(2S,5E)-2-아미노-6-메틸-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드

실시예 S-1)

실시예 R-2 (1.3 g, 3.3 mmol) 의 E-알콜 생성물을, 실시예 R-4 의 방법에 의해 트리에틸아민 (525 mg, 5.2 mmol) 및 메탄술포닐 클로라이드 (560 mg, 5.2 mmol) 과 반응시켜, 1.4 g 의 목적하는 E-알릴 클로라이드를 산출했다.

실시예 S-2)

5 ㎖ 의 DMF 중 칼륨 3-메틸-1,2,4-옥사-디아졸린-5-온 (460 mg, 3.35 mmol) 의 현탁액을 실시예 S-1 의 생성물의 DMF (15 ㎖) 용액으로 처리했다. 상기 반응 혼합물을 50℃ 에서 17 시간 동안 교반한 후, 추가의 50 mg (0.04 mmol) 의 디아졸린-5-온 염을 첨가했다. 교반된 반응의 가열을 추가로 3 시간 동안 계속한 후, 실온으로 냉각하고 180 ㎖ 의 물로 희석했다. 혼합물을 EtOAc 로 추출하고, 추출물을 120 ㎖ 의 n-헥산으로 희석하고, 물로 세척하고, Na₂SO₄로 건조하고, 모든 용매를 감압 하에 스트리핑하여, 1.3 g 의 물질을 산출했다.

실시예 S-3)

실시예 S-2 의 생성물 (460 mg, 1.0 mmol) 을 실시예 U-7 (아래쪽의 실시예 U 참조) 의 방법에 의해 HOAc 중 아연과 반응시켜, HPLC 정제 후 목적하는 아미딘 312 mg 을 산출했다.

실시예 S)

실시예 S-3 의 생성물 (77 mg, 0.2 mmol) 을 실시예 U 의 방법에 의해 2N HCl 을 사용하여 탈보호시켜, E-아미노산, 디히드로클로라이드 63 mg 을 수득했다.

실시예 T

(2S,5Z)-2-아미노-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드

실시예 T-1)메틸 비스(트리플루오로에틸)포스포노아세테이트 (4.77 g, 15 mmol) 및 23.7 g (90 mmol) 의 18-크라운-6 를 80 ㎖ 의 무수 THF 에 용해시키고, -78℃ 로 냉각했다. 상기 용액에 30 ㎖ (15 mmol) 의 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드, 이어서 실시예 U-3 (아래쪽의 실시예 U 참조) 로부터의 5.1 g (14.7 mmol) 의 N,N-디Boc 글루탐산 알데히드 메틸 에스테르를 첨가했다. -78℃ 에서 30 분 동안 교반 후, 반응을 수성 KHSO₄로 켄칭했다. 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 농축하여 2.95 g (49%) 의 목적 화합물을 수득했다. 질량 분광분석법 M +H = 402.

실시예 T-2)실시예 T-1 으로부터의 생성물을 실시예 U-5 의 방법에 의해 환원하여, 목적하는 화합물을 수득했다.

실시예 T-3)실시예 T-2 로부터의 생성물을 실시예 U-6 의 방법에 의해 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온과 반응시켜 목적하는 화합물을 수득했다.

실시예 T-4)실시예 T-3 로부터의 생성물을 실시예 U-7 의 방법에 의해 탈보호하여 목적하는 화합물을 산출했다.

실시예 T)실시예 T-4 로부터의 생성물을 2N HCl 에 용해시키고, 환류 가열했다. 반응 혼합물을 냉각하고 농축시켜 0.12 g 의 목적하는 생성물을 얻었다.

실시예 U

(2S,5E)-2-아미노-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드

실시예 U-1)L-글루탐산 (6.0 g, 40.78 mmol) 을 메탄올 (100 ㎖) 에 용해시켰다. 상기 반응 혼합물에, 트리메틸실릴 클로라이드 (22.9 ㎖, 180 mmol) 을 0℃ 에서 질소 하에 첨가하고, 밤새 교반했다. 상기 반응 혼합물에 0℃ 에서 질소 하에 트리에틸아민 (37 ㎖, 256 mmol) 및 디-tert-부틸디카르보네이트 (9.8 g, 44.9 mmol) 을 첨가하고, 2 시간 교반했다. 용매를 제거하고, 잔류물을 에테르 (200 ㎖) 로 트리튜레이션 (trituration) 했다. 트리튜레이션된 혼합물을 여과했다. 여액을 오일로 증발시키고, 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출시키는 실리카 상에서 크로마토그래피하여, 모노 boc L-글루탐산 디에스테르 (10.99 g,98%) 를 수득했다.

실시예 U-2)아세토니트릴 (130 ㎖) 에 모노 boc L-글루탐산 (10.95 g, 39.8 mmol) 을 용해시켰다. 상기 반응 혼합물에, 4-디메틸아미노피리딘 (450 mg, 3.68 mmol) 및 디-tert-부틸디카르보네이트 (14.45 g, 66.2 mmol) 을 첨가하고, 20 시간 동안 교반했다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 실리카 상에서 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출시키면서 크로마토그래피하여, 디-boc-L-글루탐산 디에스테르를 수득했다 (14.63 g, 98%).

실시예 U-3)실시예 U-2 로부터의 생성물 (10.79 g, 28.7 mmol) 을 디에틸 에테르 (200 ㎖) 에 용해시키고, 드라이아이스 조 내에서 -80℃ 로 냉각시켰다. 상기 반응 혼합물에 디이소부틸알루미늄 히드리드 (32.0 ㎖, 32.0 mmol) 을 첨가하고, 25 분 교반했다. 반응 혼합물을 드라이아이스 조로부터 제거하고, 물 (7.0 ㎖) 를 첨가했다. 에틸 아세테이트 (200 ㎖) 를 상기 반응 혼합물에 첨가하고 20 분 교반했다. 마그네슘 술페이트 (10 g) 을 상기 반응 혼합물에 첨가하고 10 분 교반했다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 농축하여 투명한 황색 오일 (11.19 g) 을 수득했다. 황색 오일을 실리카 상에서 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출시키면서 크로마토그래피했다. 생성물 (8.61, 87%) 는 투명한 연황색 오일이었다.

실시예 U-4)트리에틸 포스포노아세테이트 (6.2 ㎖, 31.2 mmol) 을 톨루엔 (30 ㎖) 에 용해시키고, 질소 하의 얼음조에 방치하여 0℃ 로 냉각했다. 상기 반응 혼합물에, 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드 (70 ㎖, 34.9 mmol) 을 첨가하고, 90분 교반했다. 상기 반응 혼합물에, 톨루엔 (20 ㎖) 에 용해된 실시예 U-3 로부터의 생성물 (8.51 g, 24.6 mmol) 을 첨가하고, 1 시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온했다. 반응 혼합물에, 황산수소칼륨 (25 ㎖, 25 mmol) 을 첨가하고, 20 분 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 ×100 ㎖) 로 추출하고, 마그네슘 술페이트로 건조하고, 농축하여 혼탁한 갈황색 오일 (12.11 g) 을 수득했다. 오일을 에틸 아세테이트 및 톨루엔으로 용출되는 실리카 상에서 크로마토그래피하여, 연황색 오일 (7.21 g, 70%) 를 수득했다.

실시예 U-5)실시예 U-4 로부터의 생성물 (5.0 g, 12.03 mmol) 을 디에틸 에테르 (100 ㎖) 에 용해시키고, 드라이아이스 조에서 방치하여, -80℃ 로 냉각시켰다. 상기 반응 혼합물에 디이소부틸알루미늄 히드리드 (21.0 ㎖, 21.0 mmol) 을 첨가했다. 그리고, 30 분 교반했다. 상기 반응 혼합물에, 물 (10 ㎖) 를 첨가하고, 드라이아이스로부터 제거하고, 60 분간 교반했다. 반응 혼합물에, 마그네슘 술페이트 (10 g) 을 첨가하고, 10 분 교반했다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 농축하여 황색 오일 (5.0 g) 을 수득했다. 오일을 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출되는 실리카 상에서 크로마토그래피하여, 연황색 오일 (2.14 g, 47%) 를 수득했다.

실시예 U-6)실시예 U-5 로부터의 생성물을 테트라히드로푸란 (50 ㎖) 에 용해켰다. 상기 반응 혼합물에, 중합체 상의 트리페닐 포스핀 (3.00 g, 8.84 mmol), 옥사디아졸리논 (720 mg, 7.23 mmol) 및 아조디카르복실산 디메틸 에스테르 (1.17 g, 3.21 mmol) 을 첨가하고, 실온에서 6 시간 교반했다. 반응 혼합물을 셀라이트 여과하고, 농축하여 혼탁한 황색 오일 (2.81 g) 을 수득했다. 오일을, 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키면서, 실리카 상에서 크로마토그래피하여, 투명한 무색 오일을 수득했다 (1.66 g, 68%).

실시예 U-7)실시예 U-6 로부터의 생성물 (300 mg, 0.66 mmol) 을, 아연 금속을 함유하는 아세트산 및 물의 용액 (10 ㎖, 25/75) 에 용해시키고, 3 시간 동안 음파 파쇄했다. 반응 혼합물을 셀라이트 여과하고, 역상 HPLC 크로마토그래피하여, 투명한 무색 잔류물 (3 mg, 4%) 를 수득했다.

실시예 U)실시예 U-7 으로부터의 생성물 (13.0 mg, 0.031 mmol) 을 2N HCl (1.22 ㎖, 2.44 mmol) 에 용해시키고, 1 시간 환류했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 농축시켜, 투명한 무색 오일 (6.6 mg, 95%) 를 수득했다.

실시예 V:

(?R,2S)-?-아미노헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-헥산산, 트리히드레이트 히드로클로라이드

실시예 V-1)

3목 3ℓ플라스크를 질소로 세정한 후, 시클로헥사논 (1.27 mol, 132 ㎖) 및 500 ㎖ 의 톨루엔을 투입했다. 교반된 혼합물을 0℃ 로 냉각하고, 157.2 g (1.1 당량)의 칼륨 t-부톡시드를 첨가했다. 상기 혼합물을 1 시간 동안 교반한후, 색 및 질감(texture) 변화를 관찰했고, 이어서 기계 교반되는 반응 혼합물에 100 ㎖ 톨루엔 중 5-펜테닐 브로마이드 (1.27 mol, 136 ㎖) 의 용액을 1 시간에 걸쳐 적가했다. 반응 혼합물을 25℃ 로 가온하고, 밤새 교반했다. 이를 800 ㎖ 의 1N KHSO₄로 희석하고, 유기 상을 건조하고 (MgSO₄), 여과하고 증발 건조시켜, 208.5 g 의 미정제 생성물을 수득했다. 이어서, 물질을 진공 증류에 의해 정제하여 (수 아스피레이터(aspirator) 압력 하에), 표제 생성물을 47% 수율로 수득했다.

실시예 V-2)

실시예 V-1 의 생성물 (93.67 g, 0.563 mol) 을 EtOH (600 ㎖), 물 (300 ㎖), NaOAc (101.67 g, 1.24 mol) 및 NH₂OH.HCl (78.31 g, 1.13 mol) 과 함께 3목 3ℓ플라스크에서 조합했다. 교반된 반응 혼합물을 16 시간 동안 환류하고, 이어서 25℃ 에서 또다른 24 시간 동안 교반했다. 모든 용매를 감압 제거하고, 잔류물을 디에틸에테르 (Et₂O, 500 ㎖) 및 물 (200 ㎖) 사이에 분배시켰다. 수성층을 3 ×200 ㎖ 에테르로 추출했다. 조합된 유기층을 MgSO₄로 건조하고, 여과하고, 진공에서 스트리핑 하여, 표제 옥심 (121.3 g, 100% 조수율) 을 수득했다.

실시예 V-3)

3목 3ℓ플라스크를 질소로 세정한 후, 헥사메틸디실록산 (471.7 ㎖, 2.2 mol), 톨루엔 (500 ㎖) 및 오산화인 (203.88 g, 1.4 mol) 을 공급했다. 투명한 용액이 수득될 때까지 비균질 혼합물을 환류했다 (약 1.5 시간). 상기 혼합물을 실온으로 냉각한 후, 200 ㎖ 의 톨루엔 중 실시예 V-1 의 옥심 생성물 (102.1 g, 0.563 mol) 을 25℃ 에서 상기 반응 혼합물에 1 시간의 기간에 걸쳐 첨가했다. 반응 혼합물을 또다른 4 내지 6 시간 동안 교반하고 (TLC 로 검사됨: 50% 헥산 중 EA, I₂), 이를 철저히 혼합하면서 빙수에 부었다. 상기 얼음 슬러리 혼합물에, 250 g 의 NaCl 을 첨가하고, 고체 칼륨 카르보네이트를 첨가함으로써 생성된 혼합물을 pH 5 로 조정했다. 상기 슬러리를 3 ×500 ㎖ 의 디에틸에테르 (Et₂O) 로 추출하고, 조합된 유기 분획을 MgSO₄로 건조하고, 여과하고, 진공에서 스트리핑하여, 위치이성체 (regioisomeric) 락탐 (84.6 g) 의 미정제 혼합물을 수득했다.

실시예 V-4)

이어서, 실시예 V-3 의 생성물을 정제 및 위치이성체 분리를 위해 크로마토그래피했다 (실리카:아세토니트릴). 미정제 샘플로부터, 7-펜테닐 위치이성체가 50% 수율로 단리되었고, 키랄 크로마토그래피 후, 목적하는 단일 거울상이성체가 43% 수율로 각각 단리되었다.

실시예 V-5)

실시예 V-4 의 R-이성체 생성물 (102.1 g, 0.56 mol), 건조 THF (800 ㎖), DMAP (68.9 g, 0.56 mol), 디-t-부틸 디카르보네이트 (Boc₂O, 99 g, 0.45 mol) 을, 아르곤으로 세정된 3목 3ℓ플라스크에서 조합했다. 반응 혼합물을 30 분 내에 70℃ 로 가온하고, 추가의 52.8 g 의 Boc₂O 및 200 ㎖ 의 건조 THF 를 첨가했다. 30 분 후, 또다른 32 g 의 Boc₂O 를 첨가하고, 혼합물을 70℃ 에서 1 시간 동안 교반했다. 또다른 36 g 의 Boc₂O 를 첨가하고, 혼합물을 1 시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 18℃ 내지 20℃ 에서 감압 하에 THF 를 스트리핑했다. 침전물을 여과하고, 100 ㎖ 의 에틸아세테이트 (EA) 로 세척하고, 버렸다 (~45 g). EX 여액을 500 ㎖ 의 추가의 EA 로 희석하고, 500 ㎖ 의 1N KHSO₄, 500 ㎖ 의 포화 수성 NaHCO₃및 500 ㎖ 의 염수로 세척한 후, 무수 Na₂SO₄로 12 시간 동안 건조했다. 이어서, EA 추출물을 20 g 의 DARCO 로 처리하고, MgSO₄로 덮인 셀라이트를 통해 여과하고, 진공 농축하여 150 g 의 표제 생성물을 어두운 갈색 오일로서 수득했다.

실시예 V-6)

3ℓ의 CH₂Cl₂에 용해된 실시예 V-5 (150 g, 0.533) 의 생성물을 함유하는 3목 3ℓ플라스크를 -78℃ 로 냉각했다. 상기 반응 혼합물의 색이 청색으로 변할 때까지, O₃의 증기를 2.5 시간 동안 용액에 통과시켰다. 이어서, 용액이 투명하고 무색이 될 때까지, -60℃ 내지 -70℃ 로 유지된 용액을 통해 아르곤을 버블링시켰다 (~30분). 이어서, 디메틸술피드 (DMS, 500 ㎖) 를 첨가한 후, 반응을 환류시키고, 환류를 24 시간 동안 계속했다. 또다른 100 ㎖ 의 DMS 를 첨가하고, 환류를 12 시간 동안 계속했다. 또다른 100 ㎖ 의 DMS 를 첨가하고, 환류를 추가로 12 시간 동안 계속했다. 그리고, 용매 및 과량의 DMS 를 20℃ 의 회전 증발기 상에서 스트리핑했다. 수득된 잔류 황색 오일을 500 ㎖ 의 DI 물로 희석하고, 3×300 ㎖ 의 EA 로 추출했다. EA 층을 무수 MgSO₄로 건조하고, 20 g 의 DARCO 로 처리하고, 무수 MgSO₄로 덮인 셀라이트 박층을 통해 여과하고, 모든 용매를 감압 하에 스트리핑하여, 156 g 의 미정제 표제 생성물을 오렌지색 오일로서 산출했다.

실시예 V-7)

1 ℓ 의 디클로로메탄 (CH₂Cl₂) 에 용해되고 0℃ 로 냉각된 N-(벤질옥시카르보닐)-알파-포스포노글리신 트리메틸 에스테르 (160 g, 0.48 mol) 의 샘플에, 100 ㎖ 의 CH₂Cl₂중 DBU (110.29 g, 0.72 mol) 의 용액을 첨가했다. 상기 투명한 무색의 반응 혼합물을 0℃ 내지 6℃ 에서 1 시간 동안 교반한 후, 600 ㎖ 의 CH₂Cl₂중 실시예 V-6 Boc-알데히드 생성물 (150 g, 0.53 mol) 을 -5℃ 내지 -1℃ 에서 적가했다. 상기 온도에서 반응 혼합물을 30 분 동안 교반한 후, 대략 1 시간 서서히 10℃ 로 가온했다. 반응 혼합물을 1N KHSO₄(500 ㎖), 포화 수성 NaHCO₃(200 ㎖) 및 50 수성 NaCl (200 ㎖) 으로 세척했다. 이어서, 유기층을 무수 MgSO₄로 건조하고, 40 g 의 DARCO 로 처리하고, 무수 MgSO₄로 덮인 셀라이트의 박층를 통해 여과하고, 농축하여 258 g 의 미정제 표제 생성물을 황색 오일로서 수득했다. 상기 물질의 크로마토그래피 정제로 130 g (55%) 의 순수한 표제 생성물을 수득했다.

원소 분석 C₂₆H₃₆N₂O₇에 대한 계산값: C, 63.96; H, 7.42; N, 5.77. 측정값:C, 63.42; H, 8.16; N, 5.31.

실시예 V-8)

실시예 V-7 (91.3 g, 0.19 mol) 의 생성물의 MeOH (1ℓ) 용액에, 2.5 g 의 S,S-Rh-DIPAMP 촉매, 이어서 수소를 첨가했다. 수소화는 Parr 기구에서 1.5 시간 25℃ 에서 수행되었다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 농축하여 미정제 표제 생성물 (90 g, 98%) 을 갈색 오일로서 수득했다.

실시예 V-9)

200 ㎖ 의 빙초산 중 실시예 V-8 (90 g) 의 생성물의 용액에, 200 ㎖ 의 디옥산 중 4N HCl 을 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃ 에서 20 분 동안 교반한 후, 모든 용매를 40℃ 의 감압 하에 스트리핑하여, 적갈색 오일을 수득했다. 오일상 생성물을 500 ㎖ 의 물로 처리하고, 2×300 ㎖ 의 디클로로메탄으로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 나트륨 비카르보네이트 용액 (100 ㎖) 으로 세척하고, 마그네슘 술페이트로 건조하고, 여과하고 모든 용매를 스트리핑하여, 미정제 표제 생성물을 수득했다. 상기 물질을 크로마토그래피하여, 45 g (62%) 의 순수한 표제 생성물을 수득했다.

실시예 V-10)

아르곤으로 세정된 300 ㎖ 의 디클로로메탄 중 실시예 V-9 의 생성물 45.0 g (0.115 mol) 샘플에, 23.0 g (0.121 mol) 의 트리에틸옥소늄 테트라플루오로보레이트를 첨가했다. 상기 혼합물을 25℃ 에서 1 시간 동안 교반한 후, 150 ㎖ 의 포화 수성 나트륨 비카르보네이트 용액을 첨가했다. 디클로로메탄 층을 분리하고, 150 ㎖ 의 50% 수성 NaCL 용액으로 세척하고, 나트륨 술페이트로 건조하고, 셀라이트를 통해 여과하고 25℃ 에서 농축하여 투명한 황색 오일, 47.0 g (97%) 의 표제 생성물을 수득했다.

실시예 V-11)

500 ㎖ 의 메탄올 중 7.0 g (0.130 mol) 의 암모늄 클로라이드에, 실시예 V-10 의 표제 물질 31.2 g (45.0 g, 0.107 mol) 을 첨가했다. 반응을 65℃ 에서 5 시간 동안 환류한 후, 모든 용매를 감압 제거하여, 40 g (87%) 의 미정제 생성물을 포말상 점성 덩어리로서 산출했다. 물질을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 37 g (81%) 의 표제 생성물을 수득했다.

실시예 V)

1 ℓ의 2.3 N HCl 중 실시예 V-11 의 표제 생성물 (36.0 g, 0.084 mol) 을 3 시간 동안 환류했다. 실온으로 냉각한 후, 용액을 2 ×150 ㎖ 의 CH₂Cl₂로 세척하고, 이어서 모든 용매를 진공에서 스트리핑하여, 25.6 g (96%) 의 표제 아미노산 생성물을 담황색 포말로서 수득했다.

?=214 nm 에서 CE 에 의해 측정된 바, ee = 91%.

실시예 W:

(?S,2R)-?-아미노헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-헥산산, 트리히드레이트 히드로클로라이드

실시예 W-1)

실시예 V-4 의 S-이성체 생성물 (5.45 g, 0.030 mol) 을 실시예 V-5 의 방법에 의해 그의 Boc 유도체로 전환시켰다. 크로마토그래피 후, 상기 반응은 6.3 g (75%) 의 목적하는 표제 생성물을 산출했다.

실시예 W-2)

실시예 W-1 의 생성물 (6.3 g, 0.025 mol) 을 실시예 V-6 의 방법에 의해 오존화하여, 추가의 정제 없이 사용되는 8.03 g 의 미정제 표제 알데히드를 제조했다.

실시예 W-3)

실시예 W-2 의 생성물 (8.03 g, 0.024 mol) 을 실시예 V-7 의 과정을 이용하여, N-(벤질옥시카르보닐)-알파-포스포노글리신 트리메틸 에스테르 (7.9 g, 0.024 mol) 과 축합시켜, 크로마토그래피 후 4.9 g (44%) 의 목적하는 표제 생성물을 제조했다.

실시예 W-4)

실시예 W-3 의 생성물 (4.8 g, 0.010 mol) 을 실시예 V-8 의 방법에 의해 R,R-Rh-DIPAMP 촉매의 존재 하에 환원시켜, 크로마토그래피 후 2.9 g (60%) 의 목적하는 표제 생성물을 제조했다.

실시예 W-5)

실시예 W-4 의 생성물 (2.9 g, 0.006 mol) 을 실시예 V-9 의 방법을 사용하여 HCl 을 사용한 처리에 의해 탈보호화하여, 2.3 g (100%) 의 목적하는 표제 생성물을 제조했다.

실시예 W-6)

실시예 W-5 의 생성물 (0.56 g, 0.0015 mol) 을 실시예 V-10 의 방법을 사용하여 트리에틸옥소늄 테트라플루오로보레이트로 알킬화하여, 0.62 g (98%) 의 목적하는 표제 생성물을 제조했다.

실시예 W-7)

실시예 W-6 의 생성물 (0.62 g, 0.0015 mol) 을 실시예 V-11 의 방법을 사용하여 메탄올 중 암모늄 클로라이드로 처리하여, 크로마토그래피 정제 후 0.50 g(88%) 의 목적하는 표제 생성물을 제조했다.

실시예 W-8)

MeOH 에 용해된 실시예 W-7 의 생성물 (0.37 g, 0.0009 mol) 을 Parr 수소화 기구에 첨가했다. 상기 용기에 촉매량의 5% Pd/C 를 첨가했다. 수소를 도입하고, 실온에서 5 psi 의 압력 하에 7 시간의 기간에 걸쳐 반응을 수행했다. 촉매를 여과 제거하고, 여액으로부터 모든 용매를 감압 제거하여, 0.26 g (정량적)의 목적하는 표제 생성물을 제조했다.

실시예 W)

2N HCl (30 ㎖) 에 용해된 실시예 W-8 의 생성물의 용액을 환류 하에 2 시간 동안 유지시킨 후, 실온으로 냉각했다. 모든 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 50 ㎖ 의 물에 용해시켰다. 상기 용액을 감압 하에 모든 용매를 스트리핑한 후, 12 ㎖ 의 물에 다시 용해시키고, 이어서 동결건조하여 0.245 g (71%) 의 표제 화합물을 생성시켰다.

실시예 X:

(?S,2S)-?-아미노헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-헥산산, 트리히드레이트 히드로클로라이드

실시예 X-1)

오버헤드 교반기, 반달모양 패들, 가열기기 (heating mantle), 열전기쌍 및 은 진공 피복된 증류 컬럼 (5 플레이트) 이 구비된 22 ℓ둥근 바닥 플라스크에, 시클로헥사논 (4500.0 g, 45.85 mol), 아세톤 디메틸 아세탈 (5252.6 g, 50.43 mol), 알릴 알콜 (6390.87 g, 110.04 mol) 및 p-톨루엔 술폰산 (PTSA) (0.256 g, 0.001 mol) 을 공급했다. 교반을 시작한 후 (137 rpm), 초기 설정점이 70℃ 가되도록 하여 단지를 서서히 가열했다. 최종 단지 온도가 150℃ 가 되도록 가열을 단계적으로 증가시켰다. 반응기 설정점의 증가는 증류 속도를 기초로 하여 결정된다. 증류 속도가 느려지거나 중단되는 경우, 추가의 열이 적용되었다. 150℃ 까지의 추가의 가열은 Claisen 재배열 반응이 발생되도록 한다. 단지 온도를 150℃ 까지 증가시켜 증류물이 관찰되지 않게된 후에는, 가열기기를 감온시켜 반응 혼합물이 130℃ 로 냉각되도록 했다. 이어서, PTSA 를 3 방울의 2.5N NaOH 로 중화시켰다. 이어서, 감온된 가열기기를 플라스크로부터 제거하면서, 진공 스트리핑을 시작했다. 단지 온도를 낮추기 위해 증발 냉각을 시작했고, 압력을 서서히 40 mm Hg 로 낮추었다. 단지 온도가 ~100℃ 까지 감소되었을 때, 가열기기를 가열을 위한 적절한 위치로 다시 올려두었다. 미반응 시클로헥사논 및 저비점 불순물을 증류했다. 단지 온도를 서서히 증가시켰다 (단지와 증기 사이의 최대 온도 차이는 ~12℃ 였다). 생성물을 40 mm Hg 에서 109 내지 112℃ 에서 단리했다. 대표적인 수율은 40 내지 45% 였다. 면적 (GC) 으로 ＜95% 인 분획을 조합하고, 재증류하여, 55% 의 총 수율로 표제 생성물을 수득했다.

실시예 X-2)

아세트산 (470 g) 에 용해된 히드록실 아민-O-술폰산 (91.8 g) 을, 기계교반기, 열전기쌍, 0℃ 로 냉각된 콘덴서 및 첨가 깔대기가 구비된 1 ℓBayer 플라스크에 첨가하고, 70℃ 로 가열했다. 온도를 70 내지 78℃ 로 유지하면서, 알릴 시클로헥사논 (100 g) 을 대략 40 분간 상기 용액에 적가했다. 첨가 동안, 반응 외관은 백색 슬러리에서 투명한 오렌지색 용액으로 변했다. 첨가 후, 반응을 가열하고, 추가로 5 시간 동안 75℃ 에서 교반했다. IPC 샘플을 매 시간마다 취했다. 반응 종료 후, 아세트산을 회전 증발기 상에서 감압 하에 50℃ 에서 스트리핑했다. 이어서, 물 (200 ㎖) 을 상기 잔류물에 첨가하고, 용액을 톨루엔 (2×300 ㎖) 으로 추출했다. 유기층을 조합하고, 물 (150 ㎖) 로 처리하고, 10 분 동안 교반했다. 수성층이 염기성 (pH 12) 로 변할 때까지 나트륨 히드록시드 용액 (50 용액의 79.4 g) 을 첨가했다. 온도를 40 ℃ 미만으로 제어함으로써 중화를 반응기 내에서 실시했다. 이어서, 층을 분리하고, 톨루엔 층을 필터에 통과시켜, 임의의 고체 또는 타르 물질을 제거했다. 이어서, 유기 용액을 회전 증발기 상에서 감압 하에 50℃ 에서 스트리핑했다. 잔류물을 톨루엔 (510 ㎖) 및 헵탄 (2040 ㎖) 의 혼합물에 취하고, 3 ℓ반응기 내에서 60℃ 로 가열했다. 투명한 황색-오렌지색 용액을 수득했다. 표제 생성물은, 용액이 교반되면서 5℃ 로 서서히 냉각될 때, 53℃ 에서 결정화되기 시작했다. 고체를 여과하고, 헵탄 (50 ㎖) 으로 세척하고, 하우스(house) 진공 하에 40℃ 에서 밤새 건조하여, 수득된 오프 화이트 결정으로서 66.3 g (60%) 의 표제 생성물을 제조했다. 상기 물질의 부분을 톨루엔 및 헵탄으로부터 재결정하여, 백색 결정성 고체로서 표제 생성물을 생성시켰다.

실시예 X-3)

실시예 X-2 의 라세미 생성물 혼합물을, 100% 아세토니트릴로 용출시키는 Chiralpac AS 20 um 컬럼 상에서 키랄 크로마토그래피 분리시켰다. 220 nm 파장을 검출기에 이용했다. 각각 ＞95% ee 를 갖는 분리된 이성체의 90% 회수를 수득하기 위해, 0.08 g/㎖ 의 아세토니트릴의 샘플 로딩이 사용되었다. R-이성체 물질의 부분을 톨루엔 및 헵탄으로부터 재결정하여, 백색 결정성 고체로서 R-이성체 표제 생성물을 생성했다.

R-이성체: 융점 = 81 - 82℃.

실시예 X-4)

적하 깔대기, 열전기쌍 및 기계 오버헤드 교반기가 구비된 5목 편평 바닥 플라스크를 탈기하고, 질소로 3회 세정했다. 실시예 X-3 의 R-이성체 생성물 락탐 (100.0 g, 0.653 mol), DMAP (7.98 g, 65 mmol) 및 N-디이소프로필에틸 아민 (Hunigs 염기, 113.3 g, 0.876 mol) 을 톨루엔 (350 ㎖) 중에 용해시키고, 톨루엔 (100 ㎖) 에 용해된 디-tert-부틸 디카르보네이트 (170.2 g, 0.78 mol) 를 첨가했다 (주: 2.0 당량의 Hunigs 염기가 사용되었을 때, 반응이 잘 수행되었다). 혼합물을 65℃ 로 가열했다 (주: 반응 동안 꾸준한 배기(offgasing)가 관찰되었다). 1.5 시간 후, 톨루엔 (50 ㎖) 에 용해된 디-tert-부틸 디카르보네이트 (0.395 mol) 의 또다른 86.25 g 을 첨가했다. 가열을 17 시간 동안 계속 하고, HPLC 에 의하 IPC 는 75 전환을 나타냈다. 톨루엔 (30 ㎖) 에 용해된 디-tert-부틸-디카르보네이트 (0.196 mol) 의 또다른 42.78 g 을 첨가하고, 갈색 혼합물을 5.5 시간 가열했다. 주변 온도로 냉각 후, 혼합물을 4M HCl (215 ㎖) 로 처리하고, 수성층을 톨루엔 (2 ×80 ㎖) 으로 추출했다. 조합된 유기층을 NaHCO₃(170 ㎖) 및 250 ㎖ 의 물로 세척했다 (주: 켄칭 동안의 내부 온도는 얼음/물의 외부 냉각에 의해 제어되었다). 기체 발생을 관찰했다. 유기층을 증발시켜 257.4 g 의 갈색 액체를 수득했다. 미정제 물질을, 톨루엔/EtOAc 9/1 (6ℓ) 및 톨루엔/AcOEt1/1 (0.5ℓ) 를 용리제로서 사용하여 SiO₂(950 g) 에 대해 플러그 여과함으로써 정제하여, 139.5 g (51%) 의 황색 액체 표제 생성물을 수득했다.

실시예 X-5)

실시예 X-6)

실시예 1f

배플(baffle) 및 6날 기체 분산 축 압축기(axial impeller) 가 구비된 2ℓ스텐레스 스틸 오토클레브에, Rh(CO)₂(acac) (0.248 g, 0.959 mmol), BIPHEPHOS (구조는 하기에 보여지며, 미국 특허 4,769,498 의 실시예 13 에 기재된 바와 같이 제조됨, 2.265 g, 2.879 mmol), 실시예 X-4 의 생성물, N-(tert-부톡시카르보닐)-S-7-알릴카프로락탐 (242.9 g, 0.959 mol) 및 톨루엔 (965 g) 을 공급했다.

BIPHEPHOS

반응기를 밀폐하고, 100% 일산화탄소 (8 ×515 kPa) 로 세정했다. 100%일산화탄소로 반응기를 308 kPa (30 psig) 로 가압한 후, 1:1 CO/H₂기체 혼합물을 첨가하여, 515 kPa (60 psig) 의 총압에 도달했다. 강하게 기계 교반하고, 약 515 kPa (60 psig) 의 총압을 유지하기 위해, 1:1 CO/H₂기체 혼합물을 첨가하면서 혼합물을 50℃ 로 가열했다. 22 시간 후, 혼합물을 약 25℃ 로 냉각하고, 압력을 조심스럽게 낮추었다. 생성물 혼합물을 진공 여과하고, 여액을 감압 하에 증발시켜, 연황색 오일 267.7 g 을 수득했다.¹H NMR 에 의한 분석은 약 96% 의 선택성을 갖는 출발 물질이 실시예 V-6 의 해당 알데히드 생성물로 본질적으로 정량적 전환되는 것과 일치했다. 상기 오일은 하기 실시예에서 추가의 정제 없이 사용되었다.

실시예 X-8)

실시예 1g

CH₂Cl₂에 용해되고 0℃ 로 냉각된 N-(벤질옥시카르보닐)-알파-포스포노글리신 트리메틸 에스테르 (901.8 g, 2.7 mol) 샘플에, CH₂Cl₂중 DBU (597.7 g, 3.9 mol) 의 용액을 첨가했다. 상기 투명한 무색의 반응 혼합물을 0℃ 내지 6℃ 에서 1 시간 동안 교반한 후, CH₂Cl₂중 Boc-알데히드 생성물 실시예 V-6 의 샘플 (812.0 g, 2.9 mol) 을 -5℃ 내지 -1℃ 에서 적가했다. 실시예 V-7 에 기재된 바와 같이 반응, 워크업(work up) 및 정제를 완료하여, 소량의 CH₂Cl₂를 함유하는 실시예 V-7 의 표제 생성물 1550g 을 수득했다.

실시예 X-9)

실시예 V-7 의 생성물 (100 g, 0.20 mol) 의 MeOH (1ℓ) 용액에 3 g 의 RR-Rh-DIPAMP 촉매를 첨가했다. 수소화는 Parr 기구에서 25℃ 에서 1.5 시간 수행되었다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 농축하여 미정제 실시예 X-9 표제 생성물을 갈색 오일로서 수득했다 (100 g).

실시예 X-10)

200 ㎖ 의 빙초산 중 실시예 V-8 (100 g) 의 생성물의 용액에, 25 ㎖ 의 디옥산 중 4N HCl 을 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃ 에서 20 분 동안 교반한 후, 모든 용매를 40℃ 의 감압 하에 스트리핑하여, 105 g 의 적갈색 오일을 수득했다. 오일상 생성물을 500 ㎖ 의 물로 처리하고, 2×300 ㎖ 의 디클로로메탄으로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 나트륨 비카르보네이트 용액 (100 ㎖) 으로 세척하고, 마그네슘 술페이트로 건조하고, 여과하고 모든 용매를 스트리핑하여, 99.9 g 의 표제 생성물을 적갈색 오일로서 수득했다.

ee = 95%, 키랄 HPLC 로 측정됨.

실시예 X-11)

아르곤으로 세정된 600 ㎖ 의 디클로로메탄 중 실시예 X-10 의 생성물 30.0 g (0.077 mol) 샘플에, 15.7 g (0.082 mol) 의 트리에틸옥소늄 테트라플루오로보레이트를 첨가했다. 상기 혼합물을 25℃ 에서 1 시간 동안 교반한 후, 300 ㎖ 의 포화 수성 나트륨 비카르보네이트 용액을 첨가했다. 디클로로메탄 층을 분리하고, 300 ㎖ 의 50% 수성 NaCl 용액으로 세척하고, 나트륨 술페이트로 건조하고, 셀라이트를 통해 여과하고 25℃ 에서 농축하여 투명한 황색 오일, 31.2 g (~97%) 의표제 생성물을 수득했다.

실시예 X-12)

500 ㎖ 의 메탄올 중 4.2 g (0.078 mol) 의 암모늄 클로라이드에, 실시예 X-11 의 표제 물질 31.2 g 을 첨가했다. 반응을 65℃ 에서 5 시간 동안 환류한 후, 모든 용매를 감압 제거하여, 29 g (92%) 의 미정제 생성물을 포말상 점성 덩어리로서 산출했다. 물질을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 23 g (70%) 의표제 생성물을 수득했다.

ee = 96%, 키랄 HPLC 로 측정됨.

실시예 X)

500 ㎖ 2N HCl 중 실시예 X-12 의 표제 생성물 (23 g)을 5 시간 동안 환류시켰다. 이어서, 모든 용매를 진공 제거하고, 잔류물을 물에 재용해시키고, 2×300 ㎖ 의 CH₂Cl₂로 세척했다. 이어서, 수성물을 진공 농축하여, 17 g (100%) 의 연갈색 흡습성 고체 표제 생성물을 수득했다.

ee = 92%, ?= 210 nm 에서 CE 에 의해 측정됨.

실시예 Y

실시예 Y-1)

메틸렌 클로라이드 및 메탄올 (75/45 ㎖) 중 실시예 X-3 (3.0 g, 0.015 mol) 의 용액을 드라이아이스 조에서 -78℃ 로 냉각시켰다. 3 ㎖/분의 유속으로 용액을 통해 오존을 버블링시키면서, 반응을 교반했다. 용액이 일정한 짙은 청색으로 유지되었을 때, 오존을 제거하고, 반응을 질소로 세정했다. 냉각된 용액에 나트륨 보로히드리드 (2.14 g, .061 mol) 을 매우 서서히 첨가하여, 동시에 기체 발생을 최소화한다. 상기 반응에 빙초산을 서서히 첨가하여 pH 가 3 이 되도록 했다. 이어서, 반응을 포화 나트륨 비카르보네이트로 중화시켰다. 이어서, 유기물을 3 ×50 ㎖ 염수로 세척하고, 마그네슘 술페이트 무수물로 건조하고, 감압 제거했다. 담색 오일을 실리카 (15g) 에 통과시켜, 알콜 5.15 g, 0.026mol (64%) 를 산출했다. C₉H₁₄N₂O₃.

실시예 Y-2)

얼음조 내의 0℃ 에서 메틸렌 클로라이드 (100 ㎖) 중 실시예 Y-1 (5.15 g, 0.026 mol) 의 용액에, 카본 테트라브로마이드 (10.78 g, 0.033 mol) 을 첨가했다. 용액을 얼음조에서 0℃ 로 냉각했다. 이어서, 온도가 3℃ 를 초과하여 상승되지 않도록, 트리페닐포스핀 (10.23 g, 0.39 mol) 을 부분씩 첨가했다. 반응을 2 시간 동안 교반하고, 용매를 진공 제거했다. 미정제물을 플래시 크로마토그래피로 정제하여 브로마이드 (5.9 g, 0.023 mol) 을 87% 수율로 산출했다.

실시예 Y-3)

톨루엔 (25 ㎖) 중 실시예 Y-2 (5.71 g, 0.026 mol) 의 용액에, 트리페닐포스핀 (7.17 g, 0.027 mol) 을 첨가했다. 반응을 오일조에서 16 시간동안 환류했다. 냉각 후, 톨루엔을 유리질 고체로부터 경사분리(decantation)했다. 고체를 디에틸 에테르와 밤새 트리튜레이션하여, 포스포늄 브로마이드 (10.21 g, 0.020 mol) 을 90% 수율로 수득했다.

실시예 Y-4)

1ℓ둥근 바닥 플라스크에, 에탄올 (500 ㎖) 중 N-벤질옥시카르보닐-D-호모세린 락톤 (97 g, 0.442 mol) 을 첨가했다. 상기 반응에 나트륨 히드록시드 (1M, 50 ㎖) 의 용액을 첨가했다. 출발 물질이 소모되었을 때까지, 반응을 박층 크로마토그래피로 12 시간 동안 모니터링했다. 톨루엔 (60 ㎖) 를 첨가하고, 이어서 용매를 진공 제거했다. 잔류물을 추가의 정제 없이 이용했다.

실시예 Y-5)

1ℓ둥근 바닥 플라스크에서 실시예 Y-4 로부터의 잔류물을 DMF 에 현탁시켰다. 상기 현탁액에 벤질 브로마이드 (76.9 g, 0.45 mol, 53.5 ㎖) 를 첨가하고, 혼합물을 1 시간 동안 교반했다. 샘플을 켄칭하고, 질량 분광분석법으로 분석하여, 출발 물질이 소모되었고 락톤 재형성이 없다는 것을 나타내었다. 반응에 1 ℓ 의 에틸 아세테이트 및 500 ㎖ 의 염수를 첨가했다. 수성층을 추가 2회 500 ㎖ 의 에틸 아세테이트로 세척했다. 유기물을 조합하고, MgSO₄로 건조하고, 농축했다. 실리카겔 크로마토그래피는 N-벤질옥시카르보닐-S-호모세린 벤질 에스테르를 백색 고체 (80 g) 로서 제공했다.

실시예 Y-6)

2ℓ둥근 바닥 플라스크에, CH₂Cl₂(600 ㎖) 에 현탁된 실리카겔 (197 g) 및 피리디늄 클로로크로메이트 (187 g, 0.867 mol) 을 첨가했다. 상기 슬러리에, CH₂Cl₂(600 ㎖) 중 실시예 Y-5 (80 g, 0.233 mol) 의 생성물의 용액을 첨가했다. 혼합물을 4 시간 동안 교반했다. 박층 크로마토그래피는 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 상기 반응에, 1 ℓ의 디에틸 에테르를 첨가했다. 이어서, 용액을 셀라이트 패드, 이어서 실리카겔 패드를 통해 여과했다. 용매를 진공 제거하고, 생성된 오일을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, 알데히드 (58.8 g) 을 38% 전반적 수율로 수득했다.

실시예 Y-7)

3 ℓ3목 플라스크에, THF (1ℓ) 중 진공 하에 P₂O₅로 건조된 실시예 Y-3 로부터의 포스포늄 염 (56.86 g, 0.11 mol) 을 첨가했다. 슬러리를 드라이아이스 조에서 -78℃ 까지 냉각했다. 온도가 -72℃ 를 초과하여 상승되지 않도록 냉각 슬러리에 KHMDS (220 ㎖, 0.22 mol) 을 적가했다. 반응을 -78℃ 에서 20 분, 이어서 -45℃ 에서 2 시간 동안 교반했다. 이어서, 온도를 -78℃ 로 다시 낮추고, 실시예 Y-6 로부터의 알데히드 (15.9 g, 0.047 mol) 을 THF (50 ㎖) 에 45 분에 걸쳐 적가했다. 반응을 -77℃ 에서 30 분 동안 교반한 후, -50℃ 로 1 시간 동안 가온한 후, 실온으로 4 시간에 걸쳐 가온했다. 상기 반응에 에틸 아세테이트 (200 ㎖) 및 포화 암모늄 클로라이드를 첨가했다. 유기물을 수집하고, MgSO₄로 건조하고, 진공 농축했다. 미정제 오일을 실리카 크로마토그래피로 정제하여, 올레핀 화합물 (45.1 g) 을 81% 수율로 담황색 점성 오일로서 수득했다.

실시예 Y)

20 ㎖ 의 바이알에 디옥산 (50 ㎖) 및 4N 수성 HCl (250 ㎖) 중 실시예 Y-7 으로부터의 생성물 (19.77 g, 0.039 mmol) 을 첨가했다. 수소화 플라스크에서 상기 용액에 촉매량의 10% 탄소 상 Pd 를 첨가했다. 상기 플라스크를 H₂(50 psi) 로 5 시간 동안 가압했다. 반응을 질량 분광분석법으로 모니터링했고, 출발 물질은 소모되었다. 용액을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 물로 세척했다. 용매를 동결건조에 의해 제거하여 표제 화합물 (7.52 g) 을 81% 수율로 수득했다.

실시예 Z

실시예 Z-1)

1ℓ3-목 플라스크에, THF (200 ㎖) 중 실시예 Y-3 로부터의 포스포늄 염 (21.21 g, 0.041 mol) 을 첨가했다. 슬러리를 드라이아이스 조에서 -78℃ 로 냉각했다. 내부 온도가 -72℃ 를 초과하여 상승되지 않도록 냉각 슬러리에 KHMDS (88 ㎖, 0.044 mol) 을 적가했다. 반응을 -78℃ 에서 20 분, 이어서 -45℃ 에서 1 시간 동안 교반했다. 이어서, 온도를 -78℃ 로 다시 낮추고, 알데히드 (15.9 g, 0.047 mol) (N-벤질옥시카르보닐-L-호모세린 락톤을 사용하여, 실시예 (4-6) 에서와 같이 제조됨) 을 THF (50 ㎖) 에 45 분에 걸쳐 적가했다. 반응을 -77℃ 에서 30 분 동안 교반한 후, -50℃ 로 30 분 동안 가온한 후, 실온으로 4 시간에 걸쳐 가온했다. 상기 반응에 에틸 아세테이트 (100 ㎖) 및 포화 암모늄 클로라이드를 첨가했다. 유기물을 수집하고, MgSO₄로 건조하고, 진공 농축했다. 미정제 오일을 실리카 크로마토그래피로 정제하여, 올레핀 화합물 (9.0g) 을 45% 수율로 담황색 점성 오일로서 수득했다.

실시예 Z)

20 ㎖ 의 바이알에 디옥산 (5 ㎖) 및 4N 수성 HCl (16 ㎖) 중 실시예 Z-1 으로부터의 생성물을 첨가했다. 수소화 플라스크에서 상기 용액에 촉매량의 10% 탄소 상 Pd 를 첨가했다. 상기 플라스크를 H₂(50 psi) 로 5 시간 동안 가압했다. 반응을 질량 분광분석법으로 모니터링했고, 출발 물질은 소모되었다. 용액을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 물로 세척했다. 용매를 동결건조에 의해 제거하여 표제 화합물 (98.7 mg) 을 79.4% 수율로 수득했다.

실시예 AA

(2S,4Z)-2-아미노-6-[(2R)-헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-일]-4-헥센산

실시예 AA-1)

(2S,4Z)-6-[(2R)-헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-일]-2-[[(페닐메톡시)카르보닐]아미노]-4-헥센산, 페닐메틸 에스테르

50 ㎖ 플라스크에 메탄올 (25 ㎖) 중 실시예 Z-1 (1.5 g, 2.97 mmol) 의 샘플을 첨가했다. 이어서, 60% 빙초산 용액 (16 ㎖) 을 반응 혼합물에 첨가했다. 침전물을 관찰했다. 추가의 메탄올을 첨가하여 고체 (1 ㎖) 을 용해시켰다. 이어서, 상기 반응에 아연 더스트 (0.200 g) 을 첨가했다. 반응을 4 시간 동안 음파 파쇄하고, 이 동안 온도를 37℃ 로 유지시켰다. 출발 물질이 소모되었으며 상기 생성물에 해당하는 덩어리가 관찰될 때까지, TLC 및 MS 에 의해 반응을 모니터링했다. 용액을 아연으로부터 경사분리하고, 여액에 아세토니트릴/물 (100 ㎖) 의 30% 용액을 첨가했다. 반응을 Waters Preparatory HPLC [30 분에 걸쳐 20% 내지 70% 아세토니트릴의 그래디언트] 상에서의 2회 실행으로 52% 아세토니트릴/물을 사용하여 정제했다. 수득된 생성물의 동결건조로 실시예 AA-1 의 표제 물질을 73% 수율의 백색 고체로서 수득했다.

실시예 AA)

250 ㎖ 의 플라스크에 4M HCl (100 ㎖)중 실시예 AA-1 (1.0 g, 2.2 mmol) 의 생성물을 첨가했다. 반응을 밤새 환류하고, 출발 물질이 소모되었으며 생성물 덩어리가 관찰될 때까지, MS 에 의해 모니터링했다. 18% 아세토니트릴/물 [0% 내지 30% 아세토니트릴/물, 30 분] 을 사용하는 Water's prep 역상 컬럼 상에서의 2회 실행으로, 상기 반응을 추가의 워크업 없이 정제했다.

실시예 BB

(2S,4E)-2-아미노-6-[(2R)-헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-일]-4-헥센산

실시예 BB-1)

(2S,4E)-2-[[(페닐메톡시)카르보닐]아미노]-6-[(5R)-6,7,8,9-테트라히드로-3-옥소-3H,5H-[1,2,4]옥사디아졸로[4,3-α]아제핀-5-일]-4-헥센산, 페닐메틸 에스테르

250 ㎖ 의 플라스크에, 시클로헥산 (70 ㎖)/벤젠 (40 ㎖) 용액 중 실시예 Z-1 (2.0 g, 3.9 mmol) 및 페닐 디술피드 (0.860 g, 3.9 mmol) 을 첨가했다. 상기 용액을 통해 질소를 버블링하여, 산소 시스템을 세정했다. 반응을 단파장 UV 램프에 주말 동안 노출시켰다. 반응을 정상 HPLC (에틸 아세테이트/헥산) 에 의해 평가했다. 71% 의 트랜스 이성체 및 29% 의 시스 이성체를 관찰했다. 반응을 추가로 3일 동안 UV 처리했고, 이 때 84% 의 출발 물질이 트랜스 이성체로 전환되었고, 16% 의 출발 물질이 시스 이성체로 잔존했다. 크로마토그래피에 의한 정제로 실시예 BB-1 (0.956 g) 을 48% 수율로 수득했다.

실시예 BB-2)

(2S,4E)-6-[(2R)-헥사히드로-7-이미노-1H-아제핀-2-일]-2-[[(페닐메톡시)카르보닐]아미노]-4-헥센산, 페닐메틸 에스테르, 모노히드로클로라이드

MeOH (80 ㎖) 중 실시예 BB-1 의 생성물 (0.956 g, 1.9 mmol) 의 샘플을, 아연 더스트 (1.5 g) 및 60% HOAc/H₂O (40 ㎖) 를 사용하여 실시예 AA-1 의 방법에 의해 탈보호했다. 수득된 생성물을 역상 크로마토그래피로 정제하여, 표제 물질 (0.248 g) 을 28% 수율로 수득했다.

실시예 BB)

실시예 BB-2 의 생성물 (0.248 g, 0.53 mmol) 을, HCl (2 ㎖), H₂O (2 ㎖), CH₃CN (2 ㎖), CH₃CN (4 ㎖) 를 사용하여 실시예 AA 방법에 의해 표제 생성물로 변형시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피로 정제하여, 실시예 BB 의 표제 생성물 (0.073 g) 을 57% 수율로 수득했다.

실시예 CC

(E)-2-아미노-2-메틸-6-[(1-이미노에틸)아미노]-4-헥센산, 디히드로클로라이드

실시예 CC-1)

DL-알라닌 에틸 에스테르 히드로클로라이드 (5 g, 32.5 mmol) 을 톨루엔 (50 ㎖) 에 현탁시켰다. 트리에틸 아민 (4.5 ㎖, 32.5 mmol), 이어서 프탈산 무수물 (4.8 g, 32.5 mmol) 을 첨가했다. 반응 플라스크에는 Dean-Stark 트랩 및 환류 콘덴서가 외장되었고, 혼합물을 밤새 환류 가열했다. 대략 10 ㎖ 의 톨루엔/물을 수집했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 수성 NH₄Cl 및 EtOAc 로 희석했다. 상기층을 분리하고, 수성층을 EtOAc (3×) 로 추출했다. 에틸 아세테이트 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 여과하고 진공에서 농축하여, 표제 프탈릴 보호된 아미노 에스테르를 백색 결정 고체로서 근 정량적 수율로 수득했다.

실시예 CC-2)

칼륨 프탈이미드 (18.5 g, 0.1 mol) 를, 1,4-부텐 디클로라이드 (25 g, 0.2 mol) 을 함유하는 250 ㎖ 의 둥근 바닥 플라스크에 첨가했다. 반응 혼합물을 150 ℃ 로 1.5 시간 동안 가열했다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, 염수 및 Et₂O 사이에 분배시켰다. 유기층을 MgSO₄로 건조하고, 여과하고 진공 농축시켰다. 잔류물을 뜨거운 에탄올로부터 재결정하여, 표제의 1-클로로-4-프탈이미도부텐 (8.9 g, 39%) 를 오렌지색 결정으로서 수득했다.

실시예 CC-3)

실시예 CC-2 (2.3 g, 9.8 mmol) 의 생성물의 샘플을 아세톤 (50 ㎖) 에 용해시켰다. NaI (3.2 g, 21 mmol) 을 첨가하고, 혼합물을 밤새 환류했다. 실온으로 냉각 후, Et₂O 를 첨가하고, 혼합물을 나트륨 티오술페이트 및 염수로 순차적으로 세척했다. 유기층을 MgSO₄로 건조하고, 여과하고 진공 농축시켜, 표제 요오다이드 (2.8 g, 87.5%) 를 연황색 고체로서 수득했고, 이는 추가의 정제없이 사용되었다.

Mass(M+1)=328.

실시예 CC-4)

THF (50 ㎖) 중 KHMDS (2.6 g, 13.3 mol) 의 용액을 -78℃ 로 냉각했다. THF (15 ㎖) 중 실시예 CC-1 의 생성물 (2.2 g, 8.87 mmol) 의 용액을 첨가한 직후, 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-2(1H)-피리미디논 (DMPU, 1.0 ㎖, 8.87 ㎖) 를 첨가했다. 용액을 -78℃ 에서 40 분 동안 교반한 후, THF (15 ㎖) 중 실시예 CC-3 의 생성물 (2.9 g, 8.87 mmol) 의 용액을 첨가했다. 플라스크를 냉각조로부터 제거하여, 실온에서 3 시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO₃와 EtOAc 사이에 분배시켰다. 유기 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 여과하고, 진공에서 농축하여 목적하는 비스-프탈릴 보호된 아미노 에스테르를 황색 고체로서 수득했다. 잔류물을 실리카겔 (1:1 헥산: EtOAc) 상에서 크로마토그래피하여, 1.4 g (35%) 의 표제 물질을 백색 고체로서 수득했다.

실시예 CC-5)

실시예 CC-4 의 생성물 (0.78 g, 1.76 mmol) 을 포름산 (10 ㎖, 95%) 및 HCl (20 ㎖, 진한 HCl) 의 혼합물에 용해시키고, 3 일 동안 환류했다. 반응 혼합물을 0℃ 로 냉각하고, 여과하여 프탈산 무수물을 제거했다. 진공 농축 후 (T＜40℃), 표제의 불포화된 알파 메틸 리신을 백색 고체 (0.38 g, 95%) 를 수득했고, 이는 추가의 정제 없이 사용되었다.

Mass (M+H) = 317.

실시예 CC)

실시예 CC-5 의 생성물 (0.2 g, 0.86 mmol) 을 H₂O (8 ㎖) 에 용해시키고, 2.5N NaOH 를 사용하여 pH 9 가 되도록 했다. 에틸 아세트이미데이트-HCl (0.42 g, 3.4 mmol) 을 1 시간에 걸쳐 4 부분으로 첨가했다. 1 시간 후, 혼합물을 10% HCl 을 사용하여 pH 4 로 산성화하고, 진공 농축시켰다. 이어서, 잔류물을 수 세척된 DOWEX 50WX4-200 컬럼 (H 형태, 0.5 N NH₄OH 용리액) 에 통과시켰다. 잔류물을 진공 농축시키고, 10% HCl 을 사용하여 pH 4 로 산성화하고, 농축하여 표제 생성물 (17 mg, 6%) 를 오일로서 수득했다.

실시예 DD

(R,E)-2-아미노-2-메틸-6-[(1-이미노에틸)아미노]-4-헥센산, 디히드로클로라이드

실시예 DD-1)

(2S,4S)-3-벤질-2-(tert-부틸)-4-메틸-1,3-옥사졸리딘-5-온을 Seebach 의 절차에 따라 제조했다. [Seebach, D.:Fadel, A. Helvetica Chimica Acta 1985, 68, 1243].

실시예 DD-2)

KHMDS (0.65 g, 3.24 mmol), DMPU (0.33 ㎖, 2.7 mmol) 및 THF (40 ㎖) 의 용액을 -78℃ 로 냉각했다. THF (10 ㎖) 중 (2S,4S)-3-벤조일-2-(tert-부틸)-4-메틸-1,3-옥사졸리딘-5-온 (실시예 DD-1) (0.70 g, 2.7 mmol) 의 용액을 적가했다. 45 분 후, THF (10 ㎖) 중 실시예 CC-3 (0.88 g, 2.7 mmol) 의 생성물의 용액을 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 포화 수성 NaHCO₃로 켄칭했다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc 로 추출했다. 유기층을 조합하고, 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조하여, 여과하고 진공 농축했다. 생성된 황색 오일을 실리카겔 상 (9:1, 이어서 4:1 헥산/에틸 아세테이트) 에서 크로마토그래피하여, 표제의 보호된 불포화 알파 메틸 D-리신 (0.26 g, 20%) 를 무색 오일로서 수득했다.

실시예 DD-3)

실시예 DD-2 의 생성물 (0.255 mg, 0.55 mmol) 을 6N HCl (6 ㎖) 및 포름산 (6 ㎖) 에 용해하고, 24 시간 동안 환류 가열했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 진공 농축했다. 잔류물을 물에 현탁시키고, CH₂Cl₂로 세척했다. 수성층을 농축하고, 수 세척된 DOWEX 50WX4-200 컬럼 (H 형태, 0.5 N NH₄OH 용리액) 에 통과시켰다. 잔류물을 진공 농축시키고, 10% HCl 을 사용하여 pH 4 로 산성화하고, 농축하여 표제 불포화 D-리신 (71 mg, 55%) 를 오일로서 수득하였으며, 이는 추가의 정제 없이 사용되었다.

실시예 DD)

실시예 DD-3 의 생성물 (13 mg, 0.056 mmol) 을 H₂O (5 ㎖) 에 용해시키고, 2.5N NaOH 를 사용하여 pH 9 가 되도록 했다. 에틸 아세트이미데이트-HCl (27 mg, 0.2 mmol) 을 2 시간에 걸쳐 4 부분으로 첨가했다. 2 시간 후, 혼합물을 10% HCl 을 사용하여 pH 4 로 산성화하고, 진공 농축시켰다. 이어서, 잔류물을 수 세척된 DOWEX 50WX4-200 컬럼 (H 형태, 0.5 N NH₄OH 용리액) 에 통과시켰다. 잔류물을 진공 농축시키고, 10% HCl 을 사용하여 pH 4 로 산성화하고, 농축하여 표제 생성물 (45 mg) 을 오일로서 수득했다.

실시예 E

(S,E)-2-아미노-2-메틸-6-[(1-이미노에틸)아미노]-4-헥센산, 디히드로클로라이드

실시예 EE-1)

(2R,4R)-3-벤조일-2-(tert-부틸)-4-메틸-1,3-옥사졸리딘-5-온을 Seebach 의 절차에 따라 제조했다. [Seebach, D.; Fadel, A. Helvetica Chimica Acta 1985, 68, 1243].

실시예 EE-2)

THF (50 ㎖) 중 실시예 EE-1 의 (2R,4R)-3-벤조일-2-(tert-부틸)-4-메틸-1,3-옥사졸리딘-5-온 생성물 (2.0 g, 7.6 mmol) 의 용액을 -78℃ 로 냉각했다. THF (25 ㎖) 중 KHMDS (0.65 g, 3.24 mmol) 의 -78℃ 용액을 적가했다. 30 분 후, THF (25 ㎖) 중 실시예 CC-3 의 생성물 (2.8 g, 8.6 mmol) 의 용액을 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 포화 수성 NaHCO₃로 켄칭했다. 상기 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc 로 추출했다. 유기층을 조합하고, 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 생성된 오렌지색 오일을 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 (9:1, 이어서 4:1 헥산/에틸 아세테이트), 보호된 표제 불포화된 알파 메틸 L-리신 (0.5 g, 15%) 를 백색 고체로서 수득했다.

실시예 EE-3)

실시예 EE-2 의 생성물 (0.5 g, 1 mmol) 을 12N HCl (10 ㎖) 및 포름산 (5 ㎖) 에 용해하고, 상기 혼합물을 12 시간 동안 가열 환류시켰다. 반응 혼합물을 3 시간 동안 냉각기에서 냉각하고, 고체를 여과 제거했다. 잔류물을 CH₂Cl₂및 EtOAc 로 세척했다. 수성층을 진공 하에 농축하여, 표제 불포화 알파 L-리신 (0.26 g, 99%) 를 오일로서 수득했고, 이를 추가의 정제 없이 사용했다.

실시예 EE)

실시예 EE-3 의 생성물 (0.13 g, 0.56 mmol) 을 H₂O (1 ㎖) 에 용해시키고, 2.5N NaOH 를 사용하여 pH 9 가 되도록 했다. 에틸 아세트이미데이트-HCl (0.28 g, 2.2 mmol) 을 1 시간에 걸쳐 4 부분으로 첨가했다. 1 시간 후, 혼합물을 10% HCl 을 사용하여 pH 4 로 산성화하고, 진공 농축시켰다. 이어서, 잔류물을 수 세척된 DOWEX 50WX4-200 컬럼 (0.5 N NH₄OH 용리액) 에 통과시켰다. 잔류물을 진공 농축시키고, 10% HCl 을 사용하여 pH 4 로 산성화하고, 농축하여 표제 생성물 (40 mg) 을 오일로서 수득했다.

실시예 FF

2-아미노-2-메틸-6-[(1-이미노에틸)아미노]-4-헥신산, 디히드로클로라이드

실시예 FF-1)

N-boc-1-아미노-4-클로로부트-2-인을 [Tetrahedron Lett. 21, 4263 (1980)] 에 기재된 절차에 따라 제조했다.

실시예 FF-2)

메틸 N-(디페닐메틸렌)-L-알라니네이트를 [J. Org. Chem., 47, 2663 (1982)] 에 기재된 과정에 따라 제조했다.

실시예 FF-3)

건조 THF (1000 ㎖) 를 아르곤으로 세정된 플라스크에 넣고, 광유에 분산된 60% NaH (9.04 g, 0.227 mol) 를 첨가했다. 상기 혼합물에 실시예 FF-2 (30.7 g, 0.114 mol) 의 생성물을 첨가했다. 이어서, 반응 혼합물을 10℃ 내지 15℃ 에서 30 분 동안 교반했다. 칼륨 요오다이드 (4 g) 및 요오드 (2 g) 을 첨가한 직후, 30 분 내에 실시예 FF-2 의 생성물 (23 g, 0.113 mol, 200 ㎖ THF 중) 을 첨가했다. 이어서, 출발 물질이 소실될 때까지 (~ 2 시간), 반응 혼합물을 55℃ 에서 교반했다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 용매를 증발시켰다. 에틸 아세테이트 (500 ㎖) 를 첨가하고, 혼합물을 조심스럽게 2 ×200 ㎖탈염수로 세척했다. 유기층을 무수 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고 증발시켜 44 g 의 미정제 생성물을 수득했다. 20% 헥산 중 에틸 아세테이트를 사용한 크로마토그래피에 의한 정제로 표제의 보호된 불포화 알파-메틸 리신 (28 g, 57%) 를 수득했다.

실시예 FF-4)

실시예 FF-3 의 생성물 (16 g, 0.0368 mol) 을 1N HCl (300 ㎖) 에 용해시키고, 25℃ 에서 2 시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에테르 (2 ×150 ㎖) 로 세척하고, 수성층을 분리하고, 차콜(charcoal)로 탈색시켰다. 농축시켜, ~9 g (100% 수율) 의 탈보호된 불포화 알파-메틸 리신 에스테르 FF-4 를 백색 포말상 고체로서 수득했다.

실시예 FF-5)

실시예 FF-4 의 생성물 (2.43 g, 0.01 mol) 을 탈염수 (25 ㎖) 에 용해시켰다. 탈염수 (25 ㎖) 중 NaOH (400 mg, 0.01 mol) 의 용액을 25℃ 에서 첨가하여, pH 가 ~7.95 가 되도록 하고, 또다른 10 분 동안 교반을 계속했다. 에틸아세트이미데이트 히드로클로라이드 (988 mg, 0.008 mol) 을 상기 반응 혼합물에 첨가하고, 동시에 1N NaOH 를 첨가함으로써 pH 를 ~8.5 로 조정했다. 아세트이미데이트를 첨가한 후, 반응 혼합물을 pH 8 내지 8.5 에서 3 시간 동안 교반했다. 1N HCl 을 상기 반응 혼합물에 첨가했다 (4.1 pH). 용매를 50℃ 에서 증발시켜, 황색 미정제 흡습성 잔류물 (4 g, ＞100% 수율) 을 수득했다. 0.1%AcOH/CH₃CN/H₂O 를 사용하여 Gilson 크로마토그래피 시스템 상에서 정제시켰다.

실시예 FF)

실시예 FF-5 의 생성물 (100 mg, 0.0005 mol) 을 8N HCl (20 ㎖) 에 용해시키고, 환류 하에 10 시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 수성 HCl 을 회전 증발기로 증발시켰다. 잔류물을 탈염수 (10 ㎖) 및 물에서 용해시키고, 진공 하에 재농축하여 표제 생성물을 황색의 유리질 고체로서 거의 정량적인 수율 (88 mg) 으로 수득했다.

실시예 GG

(2R/S,4Z)-2-아미노-2-메틸-7-[(1-이미노에틸)아미노]-4-헵텐산, 디히드로클로라이드

실시예 GG-1)5,6 디히드로피란-2-온 (49.05 g, 0.5 mol) 을 200 ㎖ 의 물에 용해시켰다. 칼륨 히드록시드 (35 g, 0.625 mol) 을 첨가하고, 반응 혼합물을 주변 온도에서 5 시간 동안 교반했다. 용매를 진공 제거하여, 무색의 유리질 고체 (65 g, 84%) 를 산출하였으며, 이는 NMR 에 의해 주로 표제 화합물의 시스 이성체임이 특정되었다.

실시예 GG-2)실시예 GG-1 의 생성물을 100 ㎖ 의 디메틸 포름아미드에 용해시켰다. 이어서, 메틸 요오다이드 (52 ㎖, 0.84 mol) 가 첨가되어, 40℃ 까지 발열을 일으켰다. 반응 혼합물을 실온에서 10 시간 동안 교반하고, 150 ㎖ 20/80 비의 에틸아세테이트/디에틸에테르 및 냉수 사이에 분배시켰다. 수성층을 분리하고, 100 ㎖ 의 디에틸 에테르로 재추출했다. 유기층을 조합하고, 건조하고 (Na₂SO₄), 여과하고, 모든 용매를 스트리핑하여, 목적하는 메틸 에스테르 생성물 (40 g, 71%) 를 산출했다. 상기 물질을 200 ㎖ 의 메틸렌 클로라이드에 용해시키고, 용액을 0℃ 로 냉각시켰다. tert-부틸 디메틸실릴클로라이드, 트리에틸아민 및 디메틸아미노피리딘을 첨가했다. 반응 혼합물을 서서히 실온으로 가온하고, 질소 하에 10 시간 동안 교반했다. 반응을 100 ㎖ 의 1N 수성 칼륨 비술페이트 용액으로 추출했다. 유기층을 2×100 ㎖ 의 염수, 그리고 3×150 ㎖ 의 물로 세척했다. 유기층을 건조하고 (Na₂SO₄), 여과하고 스트리핑하여 42 g (56%) 의 표제 물질을 산출했다.

실시예 GG-3)실시예 GG-2 로부터의 물질을 25 ㎖ 의 톨루엔에 용해시키고, 0℃ 로 냉각했다. 온도를 5 내지 -10℃ 로 유지하면서 디이소부틸알루미늄 히드리드 (톨루엔 중 1.0 M, 32 ㎖, 48 mmol) 를 적가했다. 반응 혼합물을 6 내지 -8℃ 에서 1.5 시간 동안 교반한 후, -25℃ 로 냉각했다. 상기 혼합물에, 100 ㎖ 의 0.5N 나트륨 칼륨 타르트레이트를 첨가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 1 시간 동안 교반했다. 젤라틴성 침전물이 형성되었으며, 이를 여과했다. 수성물을 2×100 ㎖ EtOAc 로 추출했다. 조합된 유기층을 건조하고 (나트륨 술페이트), 여과하고, 진공 농축하여, 표제 생성물 (3.45 g, 66%) 를 무색 오일로서 산출했다.

실시예 GG-4)실시예 GG-3 로부터의 생성물 (8g, 37 mmol) 을 100 ㎖ 메틸렌 클로라이드에 용해시키고, 상기 용액을 0℃ 로 냉각했다. 이어서, 메탄술포닐 클로라이드를 첨가하고, 상기 혼합물을 5분 동안 교반했다. 이어서, 트리에틸아민을 첨가했다. 상기 시약의 첨가 동안 온도는 0 내지 -10℃ 로 유지되었다. 반응 혼합물을 이어서 실온으로 가온하고, 24 시간 동안 교반했다. 이어서, 100 ㎖ 의 50% 수성 나트륨 비카르보네이트 용액으로 추출했다. 유기층을 100 ㎖ 의 포화 수성 염수 용액으로 세척하고, 건조하고 (나트륨 술페이트), 여과하고, 진공하에 스트리핑하여 표제 물질 (8.2 g, 94%) 을 산출했다.

실시예 GG-5)59 ㎖ 의 테트라히드로푸란에 용해된 N-p-클로로 페닐이민 알라닌 메틸 에스테르 (8.85 g, 34 mmol) 의 용액을 아르곤으로 세정했다. NaH (1.64 g, 41 mmol) 을 첨가했고, 이 때 용액은 밝은 오렌지색, 이어서 짙은 적색으로 변했다. 40 ㎖ 의 테트라히드로푸란 중 실시예 GG-4 로부터의 표제 물질 (8g, 34 mmol) 의 용액을 상기 음이온성 용액에 첨가했다. 온도를 40℃ 부근까지 상승시키는 발열이 관찰되었다. 반응 혼합물을 48 내지 -52℃ 에서 2 시간 동안 유지시켰다. 이어서, 이를 실온으로 냉각하고 여과했다. 여액을 진공 스트리핑하여, 표제 물질 (8.4 g, 50% 조수율) 을 황색 오일로서 산출했다.

실시예 GG-6)실시예 GG-5 로부터의 표제 물질 (8.4 g, 18.2 mmol) 을 125 ㎖ 1N 염산으로 처리하고, 반응을 실온에서 1 시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 2 ×75 ㎖ 의 에틸아세테이트로 추출한 후, 수성층을 56℃ 에서 진공 하에 스트리핑하여, 4 g 의 표제 물질 (100% 조수율) 을 산출했다.

실시예 GG-7)실시예 GG-6 의 표제 생성물 (1.9 g, 8.5 mmol) 을 15 ㎖ 디옥산과 8 ㎖ 물의 혼합물에 용해시켰다. 이어서, 포말형성을 피하기 위해, 고체 칼륨 비카르보네이트를 조심스럽게 첨가했다. 반응 혼합물을 10 분 동안 교반한 후, tert-부틸옥시카르보닐 무수물을 부분씩 첨가하고, 반응 혼합물을 주변 온도에서 24 시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 100 ㎖ 의 에틸아세테이트 및 50 ㎖ 의 물로 희석한 후, 분리 깔대기에 부었다. 유기층을 분리하고, 건조하고 (Na₂SO₄), 여과하고, 스트리핑하여, 표제 물질을 무색 오일로서 산출했다 (1.9 g, 78% 조수율).

실시예 GG-8)실시예 GG-6 으로부터의 표제 물질의 또다른 1.9 g 샘플을 실시예 GG-7 의 방법에 의해, 실시예 GG-7 의 표제 생성물의 미정제 Z/E 혼합물로 전환시켰다. 상기 물질을 20/80 비의 에틸아세테이트/헥산의 용매 시스템으로 실리카 상에서 추가로 정제하여, 소수 E-이성체 또한 주요 Z-이성체를 수득했다.

실시예 GG-9)실시예 GG-8 로부터의 표제 Z-이성체 (1.8 g, 6.25 mmol) 를 20 ㎖ 의 아세토니트릴에 용해시키고, 상기 용액을 0℃ 로 냉각했다. 이어서, 피리딘 (0.76 g, 9.4 mmol) 을 첨가하고, 이어서 고체 디브로모트리페닐포스포란 (3.46 g, 8.2 mmol) 을 10 분에 걸쳐 부분씩 첨가했다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 24 시간 동안 실온에서 교반했다. 형성된 침전물을 여과했다. 여액을 진공 농축하여 2.8 g 의 오일을 수득했고, 이를 60/40 비의 에틸아세테이트/헥산의 용매계를 사용하여 실리카겔 상에서 정제했다. 1.1 g 의 표제 물질 (50%) 이NMR 에 의해 특정되었다.

실시예 GG-10)실시예 GG-8 로부터의 표제 물질 (300 mg, 0.86 mmol) 을 25 ㎖ 의 디메틸포름아미드 (DMF) 중에 용해시켰다. 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온 (130 mg, 0.94 mml) 의 칼륨 염을 첨가하고, 반응 혼합물을 52℃ 로 가열하고, 그 온도에서 교반하면서 18 시간 동안 유지시켰다. 이어서, 이를 실온으로 냉각한 후, DMF 를 진공 하에 60℃ 에서 스트리핑했다. 잔류물을 60/40 내지 90/10 에틸 아세테이트/헥산의 그래디언트를 사용하여 실리카겔 상에서 정제하여, 300 mg (95%) 의 표제 물질을 산출했다.

실시예 GG-11)실시예 GG-10 (300 mg) 의 생성물을 0.05 N 의 수성 HCl 로 처리하고, 상기 용액을 30 분 동안 교반했다. 용매를 진공 제거하여, 목적하는물질을 근 정량적 수율로 수득했다.

실시예 GG-12)실시예 GG-11 (198 mg, 0.54 mmol) 로부터의 표제 물질을 50 ㎖ 의 MeOH 에 용해시켰다. 이어서, 포름산 (40 mg) 을, 이어서 칼륨 카르보네이트 상의 팔라듐 (400 mg) 을 첨가했다. 반응 혼합물을 밀폐된 관에서 24 시간 동안, 교반하면서 65℃ 로 가열했다. 이어서, 실온으로 냉각하고 여과했다. 여액을 진공 농축하고, 잔류물을 역상 HPLC 로 정제하여, 115 mg (75%) 의 표제 물질을 산출했다.

실시예 GG)실시예 GG-12 로부터의 표제 물질 (75 mg) 을 15 ㎖ 의 2N 염산에 용해시켰다. 반응 혼합물을 환류 가열하고, 6 시간 동안 교반한 후, 실온으로 냉각했다. 용매를 진공 제거했다. 잔류물을 25 ㎖ 의 물에 용해시키고, 회전 증발기 상에서 스트리핑하여, 과량의 염산을 제거했다. 잔류물을 수 중에 용해시키고, 동결 건조하여, 76 mg (~100 %) 의 표제 물질을 수득했다.

실시예 HH

(2S,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드

실시예-HH-1)100 ㎖ 의 THF 중 트리에틸 2-플루오로포스포노아세테이트 (25.4 g, 105 mmol) 의 냉각 (-78℃) 용액에, n-부틸 리튬 (헥산 중 1.6 M 63 ㎖, 101 mmol) 을 첨가했다. 상기 혼합물을 -78℃ 에서 20 분 동안 교반하여, 밝은 황색 용액을 제조했다. 120 ㎖ 의 THF 중 미정제 3-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]프로판알 (J. Org. Chem., 1994, 59, 1139-1148)(20.0 g, 105 mmol) 의 용액을 10 분에 걸쳐 적가하고, 생성된 혼합물을 -78℃ 에서 1.5 시간 동안 교반했고, 이 시점에서 박층 크로마토그래피 (5% 헥산 중 에틸 아세테이트) 에 의한 분석은 출발 물질이 잔존하지 않음을 나타냈다. 반응을 -78℃ 에서 포화 수성 NH₄Cl (150 ㎖) 로 켄칭했다. 유기층을 수집하고, 수성층을 디에틸 에테르 (300 ㎖) 로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (200 ㎖) 로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 여과농축했다. 미정제 물질을, 헥산 (2ℓ) 로 용출시키는 실리카겔 (150 g) 의 플러그를 통해 여과하여, 14.38 g (52%) 의 목적하는 (2E)-5-[[(1,1-디메틸에틸)디-메틸실릴]옥시]-2-플루오로-2-펜텐산 에틸 에스테르 생성물을 투명 오일로서 수득했다.¹H NMR 및¹⁹F NMR 은 단리된 생성물이 대략 95:5 의 E:Z 비를 갖는다는 것을 나타냈다.

실시예-HH-2)실온에서 100 ㎖ 의 메탄올 중 실시예-HH-1 (6.76 g, 24.5 mmol) 의 용액에 고체 NaBH₄(4.2 g, 220 mmol) 를 1.4 g 부분씩 3시간에 걸쳐 첨가했다. 3.5 시간 후, 물을 첨가했다 (10 ㎖). 추가의 고체 NaBH₄(4.2 g, 220 mmol) 를 1.4 g 부분씩 3시간에 걸쳐 첨가했다. 반응을 150 ㎖ 의 포화 수성 NH₄Cl 로 켄칭하고, 디에틸 에테르 (2 ×250 ㎖) 로 추출했다. 유기층을 조합하고, MgSO₄로 건조하고, 여과 농축했다. 미정제 물질, 4.81 g 의 투명한 오일을 10% 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 2.39 g (42%) 의 목적하는 (2E)-5-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]-2-플루오로-2-펜텐-1-올 생성물을 투명한 오일로서 수득하였으며, 이는¹⁹F NMR 으로 특정된 바 대략 93:7 의 E:Z 비를 함유했다.

실시예-HH-3)60 ㎖ 의 THF 중 실시예-HH-2 (2.25 g, 9.58 mmol), 중합체 지지된 트리페닐포스핀 (3 mmol/g, 1.86 g, 15 mmol) 및 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온 (1.25 g, 12.5 mmol) 의 혼합물에, 디에틸아조디카르복실레이트 (2.35 ㎖, 14.7 mmol) 를 적가했다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 추가로 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온 (0.30 g, 3.0 mmol) 을 첨가했다. 30 분 후, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 농축했다. 생성된 황색 오일을 디에틸 에테르 (30 ㎖) 와 함께 트리튜레이션하고, 고체를 여과로써 제거했다. 여액을 농축하고, 헥산 (30 ㎖) 와 함께 트리튜레이션하고, 여과했다. 여액을 오일로 농축하였으며, 이는 15% 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제되어, 1.83 g (60%) 의 목적하는 4-[(2E)-5-[[(1,1-디메틸에틸)디메틸실릴]옥시]-2-플루오로-2-펜테닐]-3-메틸-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 생성물을 투명한 오일로서 수득했고, 이는¹⁹F NMR 으로 특정된 바 목적하는 E-이성체만을 함유했다.

실시예-HH-4)아세트산 (6 ㎖), THF (2 ㎖) 및 물 (2 ㎖) 의 혼합물 중 실시예-HH-3 (1.83 g, 5.78 mmol) 의 용액을 실온에서 2.5 시간 동안 교반했다. 생성된 용액을 진공에서 오일로 농축하고, 이를 디에틸 에테르 (50 ㎖) 에서 용해시켰다. 유기층을 포화 NaHCO₃로 세척하고, 수성층을 디에틸 에테르 (2 ×50 ㎖) 및 에틸 아세테이트 (2 ×50 ㎖) 로 추출했다. 조합된 유기층을 건조하고 (MgSO₄), 여과하고 증발하여, 1.15 g (98%) 의 목적하는 4-[(2E)-2-플루오로-5-히드록시-2-펜테닐]-3-메틸-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 생성물을 투명한 무색 오일로서 수득했다.

실시예-HH-5)0℃ 에서 트리페닐포스핀 (238 mg, 0.91 mmol) 및 이미다졸 (92 mg) 의 CH₂Cl₂(2 ㎖) 용액에, 고체 요오드 (230 mg, 0.91 mmol) 을 첨가하고, 혼합물을 5 분 동안 교반했다. 생성된 황색 슬러리에 실시예-HH-4 (0.15 g, 0.74 mmol) 의 CH₂Cl₂(1.5 ㎖) 용액을 첨가했다. 슬러리를 실온으로 가온하고, 30 분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 CH₂Cl₂(10 ㎖) 로 희석하고, 포화 Na₂S₂O₃(5 ㎖) 및 염수 (5 ㎖) 로 세척하고, 건조하고 (MgSO₄), 오일로 여과 및 증발시켰다. 오일에 디에틸 에테르 (10 ㎖) 를 첨가하여, 백색 침전물을 수득하였고, 이는 여과 제거되었으며, 여액을 오일로 농축했다. 미정제 물질을 30% 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 0.18 g (78%) 의 목적하는 4-[(2E)-2-플루오로-5-요오도-2-펜테닐]-3-메틸-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 생성물을 투명한 오일로서 수득하였고, 이를 정치시켜 고화시켰다. 융점 = 58.1-58.6 ℃.

실시예-HH-6)얼음 조에서, (3S,6R)-6-이소프로필-3-메틸-5-페닐-3,6-디히드로-2H-1,4-옥사진-2-온 (Synthesis, 1999, 4, 704-717) (1.10 g, 4.76 mmol), LiI (0.63 g, 4.76 mmol) 및 실시예-HH-5 (0.85 g, 2.72 mmol) 의 1-메틸-2-피롤리디논 (12 ㎖) 용액에, 2-tert-부틸이미노-2-디에틸아미노-1,3-디메틸퍼히드로-1,3,2-디아자포스포린 (1.38 ㎖, 4.76 mmol) 을 첨가했다. 염기 첨가시 황색 용액이 오렌지색이 되었으며, 생성된 용액을 실온에서 1 시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 ㎖) 로 희석하고, 물 (2×30 ㎖) 로 세척하고, 건조하고 (MgSO₄), 황색 오일로 여과 및 증발시켰다. 미정제 물질을 30% 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상의 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 0.64 g (54%) 의 목적하는 알킬화된 생성물을 투명한 오일로서 수득했다.

실시예-HH-7)실시예-HH-6 (0.13 g, 0.31 mmol) 의 메탄올 (20 ㎖) 용액에, Lindlar 촉매 (1.0 g) 를 첨가했다. 교반된 슬러리를 60℃ 로 1 시간 동안 가열하고, 추가의 Lindlar 촉매 (0.30 g) 를 첨가했다. 슬러리를 60℃ 에서 추가로 1 시간 교반한 후, 실온으로 냉각했다. 촉매를 셀라이트를 통해 여과 제거하고, 여액을 스트리핑하여 0.58 g (100%) 의 목적하는 탈보호된 아미딘 생성물을 담황색 오일로서 수득했다.

실시예-HH)1.5N HCl (25 ㎖) 중 실시예-HH-7 (0.58 g, 1.54 mmol) 로부터의 생성물의 용액을 디에틸 에테르 (2 ×20 ㎖) 로 세척하고, 1 시간 동안 환류했다. 용매를 스트리핑하고, 미정제 아미노산 에스테르를 6N HCl (15 ㎖) 에 용해시키고, 가열하여 환류시켰다. 6 시간 후, 용매를 진공 제거하고, 생성된 포말을 0 내지 40% CH₃CN/H₂O (0.25% 아세트산) 의 30 분 그래디언트를 용출시키는 역상 HPLC 로 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고, 포말로 농축시켰다. 생성물을 1N HCl 에 용해시키고, 용매를 진공 제거하여 (2×), 0.15 g (29%) 의 목적하는 (2S,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을 수득했다.

실시예 II

실시예 II-1)질소 하에서, 메틸 N-[(3,4-디클로로페닐)-메틸렌]-알라니네이트 (748.5 g, 2.88 mol) 의 1-메틸-2-피롤리디논 (7500 ㎖) 용액에, LiI (385.5 g, 2.88 mol) 을 첨가하고, 생성된 슬러리를 대략 20 분 동안 교반하여, 투명한 용액을 수득했다. 이어서, 실시예-HH-5 (750 g, 2.40 mol) 로부터의 고체를 첨가하고, 생성된 용액을 얼음조에서 ~0℃ 로 냉각했다. 니트(neat) BTPP (900 g, 2.88 mol) 을 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서 25 분에 걸쳐 적가했다. 5℃ 에서 추가로 1.5 시간 동안 교반한 후, HPLC 에 의해 반응이 완결된 것으로 판단되었다. 이 시점에서, 7500 ㎖ 의 메틸 t-부틸 에테르 (MTBE) 를 첨가한 후, 9750 ㎖ 의 물/분쇄된 얼음의 혼합물을 첨가했다. 상기 조작 동안 온도를 20℃ 로 상승시켰다. 5 내지 10 분 동안 강하게 교반 후, 층을 분리하고, 수성층을 6000 ㎖ 의 MTBE 로 2 회 세척했다. MTBE 층을 조합하고, 7500 ㎖ 의 물로 2회 세척했다. 이어서, 생성된 MTBE 용액을 ~5000 ㎖ 로 농축하고, 11625 ㎖ 의1.0 N HCl 로 처리하고, 실온에서 1 시간 강하게 교반했다. 층을 분리하고, 수성층을 7500 ㎖ 의 MTBE 로 세척했다. 약 1 kg 의 나트륨 클로라이드를 상기 수성층에 첨가하고, 생성된 혼합물을 염이 용해될 때까지 교반했다. 이 시점에서, 7500 ㎖ 의 에틸 아세테이트를 첨가하고, 생성된 혼합물을 10 ℃ 로 냉각하고, 2025 ㎖ 의 6.0 N 나트륨 히드록시드를 충분히 교반하면서 첨가했다. 수득된 pH 는 약 9 이어야 한다. 층을 분리하고, 수성층을 나트륨 클로라이드로 포화시키고, 7500 ㎖ 의 에틸 아세테이트로 다시 추출했다. 조합된 에틸 아세테이트 추출물을 건조시켜 (MgSO₄), 라이트 오일로 농축시켰다. 에틸 아세테이트가 완전히 제거되지 않았음을 주지해야 한다. 이어서, 교반하면서 3000 ㎖ 의 헥산을 첨가하여 슬러리를 생성하고, 10℃ 로 냉각시켰다. 과립상 고체를 여과 수집하고, 1500 ㎖ 의 헥산으로 세척했다. 약 564 g (82% 수율) 의 목적하는 순수한 아미노에스테르 (HPLC 에 의해 ＞95% 순수) 를 백색 고체, 융점 82.9 - 83.0 ℃ 로서 수득했다. LCMS: m/z = 288.2 [M+H]⁺. 키랄 HPLC (Chiralpak-AD 정상 컬럼, 100% 아세토니트릴, 210 nm, 1 ㎖/분): 4.71 및 5.36 분에서 2개의 주요 피크 (1:1).

실시예 II-2)키랄 HPLC 크로마토그래피 (Chiralpak-AD 정상 컬럼, 100% 아세토니트릴) 를 사용하여, 실시예 II-1 으로부터의 생성물의 각각의 거울상 이성체의 분리를 분취(preparative) 규모로 달성하여, 목적하는 순수한 (2S)-2-메틸 아미노 에스테르 생성물 표제 생성물을 수득했다. Chiralpak-AD, 정상 컬럼, 100% 아세토니트릴, 210 nm, 1 ㎖/분): 5.14 분 (99%).

실시예 II-3)0.993 M NaOH (30.0 ㎖, 29.79 mmol) 중 실시예-II-2 (2.30 g, 8.01 mmol) 의 생성물의 슬러리를 실온에서 2 시간 교반했다. 생성된 투명한 무색 용액에, 1.023 M HCl (29.10 ㎖, 29.76 mmol) 을 첨가했다. 생성된 투명한 용액을 침전물이 형성되기 시작할 때까지 농축했다 (대략 30 ㎖). 슬러리를 가온하여 투명한 용액을 수득했고, 이를 실온에서 밤새 정치시켰다. 침전물을 여과에 의해 단리했다. 고체를 냉수 (2×10 ㎖), 냉 메탄올 (2×10 ㎖) 및 Et₂O (2×20 ㎖) 로 세척했다. 백색 고체를 40℃ 에서 4 시간 진공 건조하여, 1.04 g (53%) 의 목적하는 N-히드록시 예시된 생성물을 수득했다. 융점 = 247.2 ℃.

실시예-II-4)메탄올 중 실시예-II-3 의 용액에 Lindlar 촉매를 첨가했다.교반된 슬러리를 2 시간 동안 환류한 후, 실온으로 냉각했다. 촉매를 셀라이트를 통해 여과 제거하고, 여액을 스트리핑했다. 생성된 고체를 물에 용해시키고, 1.0 N HCl 로부터 반복 농축시켜, 목적하는 (2R,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을 수득했다.

실시예-II-5)실시예-II-2 로부터의 생성물의 73.5 g (0.3 mol) 의 용액을 300 ㎖ 의 메탄올에 용해시키고, 반응 온도를 22℃ 내지 26℃ 로 유지하면서, 312 ㎖ 의 메탄올 중 13.7 g 의 Lindlar 촉매와 73.5 g 의 포름산 (1.53 mol) 의 예비형성된 혼합물에 적가했다. 실온에서 추가로 ~15 시간 교반한 후,¹⁹F NMR 에 의해 반응이 종료된 것으로 판정되었다. 생성된 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과했고, 상기 셀라이트를 125㎖ 의 메탄올로 3 회 세척했다. 메탄올 여액을 조합하고, 농축하여 115 g 의 목적하는 아미딘 표제 생성물을 점성 오일로서 생성시켰다.

미량의 납을 제거하기 위해, 미정제 생성물을 750 ㎖ 의 메탄올에 용해시키고, 150 g 의 티올계 수지 (Deloxan THP 11) 을 첨가했다. 실온에서 3 시간 동안 교반 후, 수지를 여과하고, 500 ㎖ 의 메탄올로 2회 세척했다. 여액을 수집하고, 점성 오일인 목적 아미딘 표제 생성물 99 g 으로 농축했다.

대안적으로:

실시예-II-2 (0.0174 mol, 1.0 당량) 로부터의 총 5.0 g 의 생성물을, 40 ㎖ 의 1-부탄올 및 10 ㎖ 의 아세트산 중 5.0 g 의 아연 더스트 (0.0765 mol, 4.39 당량) 과 혼합했다. 50℃ 에서 5 시간 동안 교반 후, LC 분석은 반응이 완결되었음을 나타냈다. 고체는 용이하게 여과되었다. 냉수 중에서 7℃ 로 냉각 후, 강하게 교반하면서 여액을 30 ㎖ 의 6N NaOH (0.180 mol) 로 한 부분으로 처리했다. 반응 혼합물을 33℃ 내지 20℃ 로 냉각 후, 투명한 부탄올 층을 분리하고, 수성층을 40 ㎖ 의 1-부탄올로 재추출했다. 부탄올 추출액을 조합하고, 30 ㎖ 의 염수, 이어서 대략 10 ㎖ 의 6N HCl 로 세척했다. 70℃ 에서 농축 후, 투명한 유리가 수득되었고, 이는 목적하는 아미딘 표제 생성물로서 확인되었다.

실시예-II)6N HCl 중 실시예-II-5 로부터의 생성물의 99 g 의 용액을 1 시간 동안 환류하고, 이 시점에서 LC 분석은 반응인 완결되었음을 나타냈다. 용매를 진공 제거하여, 89.2 g 의 유리질 오일을 산출했고, 이를 1466 ㎖ 의 에탄올 및 7.5 ㎖ 의 탈염수의 혼합물 중에 용해시켰다. 혼탁점에 도달할 때까지, 주변 온도에서 상기 교반 용액에 THF 를 첨가했다 (5.5ℓ). 추가로 30 ㎖ 의 탈염수를 첨가하고, 상기 용액을 실온에서 밤새 교반했다. 생성된 슬러리를 여과하고, 200 ㎖ 의 THF 로 세척하여, 목적하는 표제 생성물로 확인된 65 g 의 백색 고체를 산출했다.

실시예 JJ

(2R,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드

실시예-JJ-1)키랄 HPLC 크로마토그래피를 사용하여, 실시예-II-1 으로부터의 생성물의 각각의 거울상 이성체의 분리를 분취 규모로 달성하여, 목적하는 순수한 (2R)-2-메틸 아미노 에스테르 생성물을 수득했다.

실시예-JJ-2)실시예-JJ-1 으로부터의 생성물을 물 및 아세트산에 용해시킨다. 아연 더스트를 첨가하고, HPLC 분석이 약간의 출발 물질이 잔존함을 나타낼 때까지 60℃ 에서 상기 혼합물을 가열했다. Zn 을 반응 혼합물로부터 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 농축했다. 미정제 물질을 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피로 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 농축하여, 목적하는 (2R)-2-메틸 아세트아미딘 생성물을 수득했다.

실시예-JJ) 2.0 N HCl 중 실시예-JJ-2 의 용액을 2 시간 동안 환류했다. 용매를 진공 제거했다. 생성된 고체를 물에 용해시키고, 1.0 N HCl 로부터 반복 농축하여, 목적하는 (2R,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을 수득했다.

실시예 KK

(2R/S,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드

실시예 KK-1)얼음 조에서, 메틸 N-[(4-클로로페닐)메틸렌]-글리시네이트 (0.33 g, 1.6 mmol), LiI (0.20 g, 1.0 mmol) 및 실시예-HH-5 의 생성물의 샘플(0.30 g, 0.96 mmol) 의 1-메틸-2-피롤리디논 (5 ㎖) 용액에, 2-tert-부틸이미노-2-디에틸아미노-1,3-디메틸퍼히드로-1,3,2-디아자포스포린 (0.433 ㎖, 1.5 mmol) 을 첨가했다. 용액을 실온에서 1.5 시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 ㎖) 로 희석하고, 물 (2×20 ㎖) 로 세척하고, 건조하고 (MgSO₄), 여과하고, 증발시켜, 미정제의 목적하는 라세미 알킬화된 이민을 황색 오일로서 수득했다.

미정제 물질을 에틸 아세테이트 (10 ㎖) 에 용해시키고, 1N HCl (10 ㎖) 를 첨가했다. 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 유기층을 분리했다. 수성층을 고체 NaHCO₃로 중화시키고, 에틸 아세테이트 (2×30 ㎖) 로 추출했다. 유기층을 건조하고 (MgSO₄),여과하고 증발시켜, 0.13 g 의 목적하는 표제의 라세미 아미노 에스테르 생성물을 황색 오일로서 수득했다. 상기 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS: m/z = 288.2 [M+H]⁺.

실시예-KK-2)실시예-KK-1 (1.36 g, 4.98 mmol) 의 CH₂Cl₂(15 ㎖) 의 용액에 4-클로로벤즈알데히드 (0.70 g, 5.0 mmol) 및 MgSO₄(~5 g) 을 첨가했다. 슬러리를 실온에서 18 시간 동안 교반했다. 슬러리를 여과하고, 여액을 스트리핑하여 1.98 g (100%) 의 목적하는 표제 이민 생성물을 담황색 오일로서 수득했다. 생성물을 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용했다.

실시예-KK-3)실시예-KK-2 의 생성물 (0.25 g, 0.63 mmol) 의 CH₂Cl₂(2 ㎖) 의 용액에, 메틸 요오다이드 (0.200 ㎖, 3.23 mmol) 및 O(9)-알릴-N-(9-안트라세닐메틸)-신코니디늄 브로마이드 (40 mg, 0.066 mmol) 을 첨가했다. 상기 용액을 -78℃ 로 냉각하고, 니트 BTPP (0.289 ㎖, 0.95 mmol) 를 첨가했다. 생성된 오렌지색 용액을 -78℃ 에서 2 시간 동안 교반하고, -50℃ 가 되도록 했다. -50℃ 에서 2 시간 후, 용액을 CH₂Cl₂(10 ㎖) 로 희석하고, 물 (10 ㎖) 로 세척하고, 건조하고 (MgSO₄), 여과하고, 증발시켜, 미정제된 목적하는 라세미 알킬화된 이민을 황색 오일로서 수득했다.

미정제 물질을 에틸 아세테이트 (10 ㎖) 에 용해시키고, 1N HCl (10 ㎖) 를 첨가했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 유기층을 분리했다. 수성층을 고체 NaHCO₃로 중화시키고, 에틸 아세테이트 (2 ×30 ㎖) 로 추출했다. 유기층을 건조하고 (MgSO₄), 여과하고 증발시켜, 0.16 g 의 목적하는 라세미 2-메틸아미노 에스테르 생성물을 황색 오일로서 수득했다. 생성물을 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용했다. LCMS: m/z = 288.2 [M+H]⁺.

실시예-KK-4)실시예-KK-3 으로부터의 라세미 생성물을 물 및 아세트산에 용해시켰다. 아연 더스트를 첨가하고, HPLC 분석이 약간의 출발 물질이 잔존함을 나타낼 때까지 60℃ 에서 상기 혼합물을 가열했다. Zn 더스트를 반응 혼합물로부터 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 농축했다. 미정제 물질을 역상 HPLC 컬럼 크로마토그래피로 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 농축하여, 목적하는 아세트아미딘 생성물을 수득했다.

실시예-KK)2.0 N HCl 중 라세미 실시예-KK-4 의 용액을 1 시간 동안 환류했다. 용매를 진공 제거했다. 생성된 고체를 물에 용해시키고, 1.0 N HCl 로부터 반복 농축시켜, 목적하는 표제 (2R/S,5E)-2-아미노-2-메틸-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드 생성물을 수득했다.

실시예 LL

(2S,5Z)-2-아미노-2-메틸-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드

4-[(테트라히드로피라닐)옥시]부틴

실시예 LL-1)4-디히드로-2H-피리딘 (293.2 g, 3.5 mol) 및 진한 HCl (1.1 ㎖) 의 혼합물을 5℃ 로 냉각했다. 외부적으로 냉각을 계속하면서, 3-부틴-1-올 (231.5 g, 3.3 mol) 을 30 분의 기간에 걸쳐 첨가하여, 온도가 50 ℃ 가 되도록 했다. 반응을 실온에서 혼합하면서 2.5 시간 동안 유지시킨 후, MTBE (1.0 ℓ) 로 희석했다. 생성된 혼합물을 포화된 나트륨 비카르보네이트 (2 ×150 ㎖) 로 세척했다. 유기 상을 나트륨 술페이트로 건조하고, 감압 농축하여, 500 g (98% 조수율) 의 생성물을 수득했다; 96% 의 GC 면적%.

5-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-펜트-2-인-1-올

실시예 LL-2)THF (125 ㎖) 중 실시예 LL-1 의 4-[(테트라히드로피라닐)옥시]부틴 생성물 (50.0 g, 0.33 mol) 의 용액에, 질소 분위기 하에 30 분의 기간에 걸쳐 THF 중 2N EtMgCl (242 ㎖, 0.48 mol) 의 용액을 첨가하여, 온도를 48℃ 로 올렸다. 혼합물을 66℃ 로 추가로 가열하고, 상기 온도에서 2 시간 동안 유지시킨 후, 주변 온도로 냉각했다. 파라포름알데히드 (14.5 g, 0.48 mol) 을 첨가하고 (약간의 발열이 관찰됨), 생성된 혼합물을 45℃ 로 가열했다. 온도를 45 내지 55℃ 로 1 시간 제어한 후, 혼합물이 투명하게 변했다. 이 점에서, 혼합물을 66℃ 로 가열하고, 2.5 시간 동안 교반했다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, 온도를 40℃ 미만으로 유지하면서, 포화 암모늄 클로라이드 (125 ㎖) 를 30 분에 걸쳐 서서히 첨가했다 (강한 발열이 관찰됨). 액체상을 경사분리에 의해 분리하고; 에틸 아세테이트 (250 ㎖) 및 염수 (50 ㎖) 를 첨가했다. 유기 상을 분리하고, 염수 (2×50 ㎖) 및 물 (1×50 ㎖) 로 세척했다. 유기층을 나트륨 술페이트로 건조하고, 감압 농축하여 51 g 의 연황색 오일 (85% 조수율); GC 면적% 88% 표제 화합물, 6% 출발 물질을 수득했다.

5-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-펜트-2-엔-1-올

실시예 LL-3)질소 분위기 하에서, 500 ㎖ Parr 보틀에, 실시예 LL-2 의 5-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-펜트-2-인-1-올 생성물 (40.2 g, 0.22 mol), Lindlar 촉매 (2.0 g), 에탄올 (120 ㎖), 헥산 (120 ㎖) 및 2,6-루티딘 (457 mg) 을 공급했다. 반응 혼합물을 질소 및 수소 기체로 각각 5회 세정했다. Parr 보틀을 수소를 사용하여 5 psi 로 가압하고, 98% 의 이론적 수소가 소모될 때까지 진탕시켰다. 수소를 용기로부터 방출시키고, 반응을 질소로 5회 세정했다. 혼합물을 Solka Floc 패드를 통해 여과하고, 촉매를 에탄올 (2 ×50 ㎖) 로 헹궈냈다. 여액 및 헹굼액을 조합하고, 감압 농축하여, 40.3 g (99% 수율) 의 표제 물질을 황색 오일로서 수득했다 (GC 면적% = 96%).

3-메틸-4-[5-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-펜트-2-에닐]-4H-[1,2,4]옥사디아졸-5-온

실시예 LL-4)톨루엔 (42 ㎖) 중 실시예 LL-3 의 5-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-펜트-2-엔-1-올 생성물 (11.8 g, 0.063 mol) 의 용액에, 트리에틸아민 (6.4 g, 0.063 mol) 을 첨가했다. 혼합물을 -5℃ 로 냉각하고, 메탄술포닐 클로라이드 (7.3 g, 0.63 mol) 를, 단지 온도가 10℃ 미만으로 유지되도록 하는 속도로 시린지를 통해 첨가했다. 혼합물을 실온으로 가온하고 2 시간 동안 교반했다. 혼합물을 흡입 여과하고, 톨루엔 (2 ×20 ㎖) 으로 필터 상에서 헹구어냈다. 여액 및 세척액을 DMF (10 ㎖) 중 3-메틸-1,2,4-옥사디아졸린-5-온 (8.6 g, 0.063 mol) 의 나트륨 염의 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 기계 교반기로 교반하고, 45℃ 에서 5 시간 동안 가열했다. 물 (40 ㎖) 를 첨가하고, 혼합물을 5 분 동안 교반한 후, 층을 분리했다. 톨루엔 층을 물 (3 ×20 ㎖) 로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 농축하여 16.5 g (97.3%) 의 오렌지색 미정제 생성물을 수득했다 (71% 표제 생성물, 18% 톨루엔 및 4% 의 불순물로 이루어지는 면적% GC).

4-(5-히드록시-펜트-2-에닐)-3-메틸-4H-[1,2,4]-옥사디아졸-5-온

실시예 LL-5)메탄올 (48 ㎖) 중 실시예 LL-4 의 3-메틸-4-[5-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-펜트-2-에닐]-4H-[1,2,4]옥사디아졸-5-온 생성물 (16 g, 0.06 mol) 의 용액에, p-톨루엔술폰산 (0.34 g, 2.0 mmol) 을 첨가했다. 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반했다. 나트륨 비카르보네이트 (0.27 g, 3.0 mmol) 을 첨가하고, 혼합물을 회전 증발기 상에서 농축시켰다. 잔류물을 포화 NaHCO₃(20 ㎖) 로 희석하고, 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 ×60 ㎖) 로 추출했다. 추출물을 조합하고, 물 (2 ×25 ㎖) 로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 농축하여 8.4 g 의 미정제, 오렌지색 오일 표제 생성물 (면적% GC=80%) 를 수득했다.

메탄술폰산 5-(3-메틸-5-옥소-[1,2,4]옥사디아졸-4-일)-펜트-3-에닐 에스테르

실시예 LL-6)메틸렌 클로라이드 (33 ㎖) 중 실시예 LL-5 의 4-(5-히드록시-펜트-2-에닐)-3-메틸-4H-[1,2,4]옥사디아졸-5-온 생성물 (8.27 g, 0.045 mol) 의 용액에, 트리에틸아민 (5.0 g, 0.49 mol) 을 첨가했다. 혼합물을 -5℃ 로 냉각하고, 메탄술포닐 클로라이드 (5.5 g, 0.048 mol) 을 상기 온도가 8℃ 미만으로 유지되는 속도로 첨가했다. 냉각 조를 제거하고, 혼합물이 실온으로 가온되도록 3 시간 동안 교반했다. 물 (15 ㎖) 를 첨가하고, 혼합물을 5 분 동안 교반한 후, 층을 분리했다. 유기층을 물 (10 ㎖) 로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 농축하여 연호박색 잔류물을 수득했다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (8 ㎖) 에 용해시키고, 5℃ 에서 밤새 유지시켰다. 석출된 고체를 흡입 여과하고, 최소량의 에틸 아세테이트를 사용하여 필터 상에서 헹구어내고, 필터 상에서 공기 건조시켜, 6.8 g (58% 수율) 의 표제 생성물을 수득했다.

4-(5-요오도-펜트-2-에닐)-3-메틸-4H-[1,2,4]옥사디아졸-5-온

실시예 LL-7)아세톤 (160 ㎖) 중 실시예 LL-6 의 메탄술폰산 5-(3-메틸-5-옥소-[1,2,4]옥사디아졸-4-일)-펜트-3-에닐 에스테르 생성물 (20.0 g, 0.076 mol) 의 용액에 나트륨 요오다이드 (17.15 g, 0.114 mol) 을 첨가했다. 혼합물을 가열 환류시키고, 3 시간 동안 교반했다. 외부 가열을 중단하고, 혼합물을 실온에서 밤새 방치했다. 고체를 여과 제거하고, 필터 상에서 헹구었다. 여액 및 세척액을 조합 및 농축하여, 불균질 잔류물을 에틸 아세테이트 (120 ㎖) 로 추출했다. 유기층을 물 (60 ㎖), 15% 나트륨 티오술페이트 수용액 (60 ㎖) 및 물 (60 ㎖) 로 세척하고; MgSO₄로 건조하고, 감압 농축하여 22.1 g (98% 수율) 의 표제 오일 생성물을 수득했다.

2-[(3,4-디클로로-벤질리덴)-아미노]-프로피온산 메틸 에스테르

실시예 LL-8)질소 분위기 하에 메틸렌 클로라이드 (2.1 ℓ) 중 L-알라닌 메틸 에스테르 히드로클로라이드 (200.0 g, 1.43 mol) 의 기계 교반된 슬러리에, 12 분에 걸쳐 트리에틸아민 (199.7 ㎖, 1.43 mol) 을 첨가했다 (첨가 동안, 고체를 부분적으로 용해시킨 후, 재석출시켰다). 10 분 후, 3,4-디클로로벤즈알데히드 (227.5 g, 1.30 mol) 및 마그네슘 술페이트 (173.0 g, 1.43 mol) 를 첨가했다 (온도는 30 분에 걸쳐 6℃ 증가했다). 2.5 시간 후, 혼합물을 여과했다. 여액을 물 (1 ×1ℓ) 및 염수 (1 ×500 ㎖) 로 세척하고, 나트륨 술페이트로 건조하고, 여과 및 농축하여 313.3 g, 92.4% 수율의 오일 생성물을 수득했다.

Rac-2-아미노-2-메틸-7-(3-메틸-5-옥소-[1,2,4]옥사디아졸-4-일)-헵트-5-엔산 메틸 에스테르

실시예 LL-9)

방법 1.질소 분위기 하에 디메틸포름아미드 (1.4ℓ) 중 실시예 LL-7 의 생성물 (114.2 g, 0.39 mol) 및 실시예 LL-8 의 생성물 (151.5 g, 0.58 mol) 의 용액을 -8℃ 로 냉각했다. 이어서, 리튬 요오다이드 (78.1 g, 0.58 mol) 를 3개의 동등한 부분으로 19 분에 걸쳐 첨가했다. 혼합물을 20 분 동안 -7℃ 에서 교반한 후, (tert-부틸이미노)-트리스(피롤리디노)포스포란 (194.0 ㎖, 0.62) 를 36 분 에 걸쳐 첨가했다 (최대 온도 = -2.6 ℃). 10 분 후, 냉각조를 제거하고, 용액을 주변 온도에서 1 시간 동안 교반했다. 혼합물을 냉수 (1.4 ℓ) 에 붓고, 에틸 아세테이트 (2 ×1.0 ℓ) 로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (2 ×400 ㎖) 및 염수로 세척했다. 에틸 아세테이트 층을 1N HCl (780 ㎖) 로 처리하고, 1 시간 동안 교반했다. 수성층을 분리하고, 에틸 아세테이트 (2 ×400 ㎖) 로 추출한 후, 나트륨 비카르보네이트 (110 g) 으로 중화시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (1 × 500 ㎖) 로 추출했다. 유기층을 나트륨 술페이트로 건조하고, 여과하고, 농축한 후, 메틸 t-부틸 에테르로 처리하여, 결정성 생성물을 수득했다: 제 1 수확물 14.4 g; 제 2 수확물 6.6 g (GC 순도 = 96.2 및 91.9 %, 각각). 수성상을 나트륨 클로라이드로 포화시키고, 에틸 아세테이트 (4 ×500 ㎖) 로 추출했다. 조합된 유기층을 나트륨 술페이트로 건조하고, 여과하고, 농축한 후, 메틸 t-부틸 에테르로 처리하여, 결정성 생성물을 수득했다: 제 1 수확물 33.4 g; 제 2 수확물 10.8 g (GC 순도 = 89.6 및 88.8 %, 각각). 총 조수율 65.2 g, 62.4%.

방법 2.질소 분위기 하에 디메틸포름아미드 (207 ㎖) 중 실시예 LL-7 의 생성물 (20.7 g, 0.070 mol) 및 실시예 LL-8 의 생성물 (22.9 g, 0.088 mol) 의 용액에, 세슘 카르보네이트 (29.8 g, 0.092) 를 첨가했다. 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반한 후, 물 (300 ㎖) 로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 ×200 ㎖) 로 추출했다. 조합된 에틸 아세테이트 층을 물 (3 ×100 ㎖) 및 염수로 세척하고, 1N HCl (184 ㎖) 로 처리했다. 1 시간 후, 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (3 ×100 ㎖) 로 추출한 후, 나트륨 비카르보네이트 (15.5 g) 으로 중화시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (1 ×150 ㎖) 로 추출했다. 수성층을 나트륨 클로라이드로 포화시키고, 에틸 아세테이트 (3 ×100 ㎖) 로 추출했다. 조합된 유기층을 나트륨 술페이트로 건조하고, 여과하고, 농축시켜, 황색 고체, 11.9 g, 62.9%; GC 순도 = 96.6% 를 수득했다. 미정제 생성물을 가온된 메틸 t-부틸 에테르 또는 에틸 아세테이트로부터 재결정했다.

Rac-2-아미노-2-메틸-7-(3-메틸-5-옥소-[1,2,4]옥사디아졸-4-일)-헵트-5-엔산

실시예 LL-10)실시예 LL-9 의 생성물 (0.269 g, 1 mmol) 을 5 ㎖ 2 N HCl 에 용해시키고, 아르곤 하에 가열 환류시켰다. 6 시간 동안 환류, 이어서 실온에서 72 시간 동안 교반 후, 분취량을 제거하고,¹H NMR 로 검사했다. 대략 6% 의 미반응 출발 에스테르가 목적하는 생성물과 함께 잔존했다 (LC-MS 로 입증됨). 수성 부분을 진공 제거하고, 0.38 g 의 증점된 호박색 오일을 남겼다. 역상 크로마토그래피를 통한 정제, 이어서 동결 건조 후, 0.23 g, 90.2 % 의 표제 화합물을 백색의, 비(非)조해성 고체로서 수득했다.

(2S,5Z)-2-아미노-2-메틸-7-(3-메틸-5-옥소-[1,2,4]옥사디아졸-4-일)-헵트-5-엔산 메틸 에스테르

실시예 LL-11)정류 상태 재순환 옵션으로 Novaprep 200 기기를 사용하는 분취용 키랄 크로마토그래피에 의해, 표제 화합물 (827.3 g) 을 그의 R 거울상이성체로부터 분리했다. 물질을 40 mg/㎖ 농도로 무수 에탄올에 용해시키고, 50 ×500 mm 의 미리충전된 Chiral Technologies 스텐레스 스틸 컬럼 상에 로딩했다. 흡착제는 20 μChiralPak AD 였다. 이동상은 에탄올/트리에틸아민 100/0.1 이었고, 유속은 분 당 125 ㎖ 와 같았다. 미정제 용액 (25 ㎖) 를 컬럼 상에 매 12분 마다 로딩했다. 정류 상태 재순환 기술을 사용했다. 회전증발기를 사용하여 용매를 제거했다. 최종 생성물을 금색 오일로서 단리하고, 이를 정치시켜 고화시켰다; 399.0 g (96.4% 회수).

(2S,5Z)-7-아세트이미도일아미노-2-아미노-2-메틸-헵트-5-엔산 메틸 에스테르, 디히드로클로라이드 히드레이트

실시예 LL-12)메탄올 (2.4 ℓ) 중 실시예 LL-11 의 생성물 (114.5 g, 0.425 mol) 의 용액에, 고체 디벤조일-L-타르타르산 (152.5 g, 0.425 mol) 및 88% 포름산 (147 ㎖, 3.428 mol) 을 주변 온도에서 첨가했다. Lindlar 촉매의 슬러리, 메탄올 (200 ㎖) 중 납 아세테이트으로 중독된 칼슘 카르보네이트 상의 5 중량% 팔라듐 (37.9 g) 을 질소 하에 제조했다. 이어서, 상기 연회색 촉매 슬러리에 출발 물질의 용액을 주변 온도에서 첨가하고, 이어서 메탄올 헹굼 (200 ㎖) 했다. 불균질 반응 혼합물을 45℃ 로 1½ 시간 동안 가열했다. 약 40℃ 에서 시작되는 꾸준한 기체 발생이 관찰되었으며, 이는 진행중인 반응을 나타낸다. 혼합물을얼음/물 조에서 냉각한 후, Supercell HyFlo 의 플러그를 통해 여과했다. 황색 용액을 진공 농축하여, 점성인 오일을 수득했고, 이를 용해시키고, 2 N 수성 HCl (2 ℓ) 및 에틸 아세테이트 (0.8 ℓ) 사이에 분배시켰다. 층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (0.8 ℓ) 로 1 회 세척했다. 용매 및 휘발물을 승온된 온도 (= 70℃) 에서 진공 제거했다. 중간체 생성물을 다음 단계에서 추가의 정제 또는 특정화 없이 사용했다. LC-MS [M+H]⁺= 228.

실시예 LL)실시예 LL-12 의 미정제 생성물 (170 g) 을 2 N 수성 HCl (1 ℓ) 에 용해시켰다. 생성된 오렌지색 용액을 밤새 환류한 후, 이를 주변 온도로 다시 냉각시켰다. 반응 혼합물을 부피의 약 1/3 으로 농축하고, 산 용액을 고체상 추출 카트리지 (25 g 의 C18 실리카) 에 통과시켜, 색 및 기타 불순물을 제거했다. 용매를 진공 제거하여 (= 70℃), 208 g 의 미정제 생성물을 황색 검(gum) 으로서 수득했다.

미정제 검 (31.3 g) 을 물 (250 ㎖) 에 취하고, 상기 물질을 산성 수지 Dowex 50WX4-400 (약 600 g) 으로 충전된 예비처리된 이온 교환 컬럼에 로딩했다. 수지를 우선 물 (1 ℓ), 이어서 묽은 수성 HCl (1 ℓ의 10/90 v/v 농도 HCl/물) 로 세척했다. 생성물은 보다 높은 이온 강도 수성 HCl 로 수지에서 용출되었다 (1.5 ℓ의 20/90 v/v 내지 25/75 v/v 농도 HCl/물). 수성 용매를 진공 제거하고 (= 70℃), 검성 잔류물을 4 vol% 수성 트리플루오로아세트산 (100 ㎖) 에 취했다. 수성 용매를 진공 제거하고 (= 70℃), 상기 과정을 1회 더 반복했다.이어서, 잔류물을 고 진공 하에 건조하여, 32.2 g 의 검을 트리플루오로아세트산 염으로서 수득했다.

미정제 (2S,5Z)-7-아세트이미도일아미노-2-아미노-2-메틸-헵트-5-엔산, 디트리플루오로아세트산 염 히드레이트 (32.2 g) 을 역상 분취용 크로마토그래피로 정제했다. 미정제물을 0.1% 수성 TFA (50 ㎖) 에 용해시키고, 흡착제 (BHK 극성 W/S, 50 ?, 1.16 kg) 으로 충전된 2 인치 ID ×1 미터 스텐레스 스틸 컬럼에 로딩했다. 생성물을 0.1% 수성 TFA 내지 25/75/0.1 아세토니트릴/물/TFA 로부터의 스텝 그래디언트로 120 ㎖/분의 유속으로 용출시켰다. 로딩 비율은 36:1 w/w 실리카 대 샘플이었다. 용매를 진공 제거하고, 물질을 묽은 수성 HCl 을 사용한 반복 세정, 그리고 진공 용매 제거에 의해 HCl 염으로 전환시켰다. 고 진공 하의 건조로 27.4 g 의 표제 디히드로클로라이드 히드레이트를 황색을 띄는 검으로서 수득했다.

실시예 MM

(2R,5Z)-2-아미노-2-메틸-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드

실시예 LL-11 에 기재된 분리 동안 단리된 R-거울상 이성체 (1.13 g, 4.2 mmol) 을 11 ㎖ 25% 수성 아세트산에 용해시키고, 60℃ 로 가열했다. 이어서, 아연 더스트 (1.10 g) 를 4개의 동등한 부분으로 30 분 간격으로 첨가했다. 총 3 시간 동안의 가열 후, 분취액을 제거하고, LC-MS 로 검사하였으며, 이는 단지 목적하는 생성물과 함께 단지 미량의 미반응 출발 물질만이 잔존함을 나타냈다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각하고, 여과하고, 진공 하에 스트리핑하고, 2.31 g 의 슬러시 백색 고체를 남겼다. 메틸 에스테르를 묽은 가열 HCl 을 사용하여 표제 화합물로 가수분해했다. 역상 크로마토그래피, 이어서 동결건조에 의한 정제 후, 0.31 g 의 표제 화합물이 유리질 고체로서 수득했다.

c. 생물학적 데이타

하기 분석의 일부 또는 전부는 본 발명의 화합물의 산화질소 신타아제 억제 활성을 나타내고 또한 유용한 약리적 성질을 증명하는데 사용된다.

산화질소 신타아제에 대한 시트룰린 분석

산화질소 신타아제 (NOS) 활성은 L-[2,3-³H]-아르기닌의 L-[2,3-³H]-시트룰린으로의 전환을 모니터링함으로써 측정될 수 있다 ([Bredt 및 Snyder, Proc.Natl. Acad. Sci. U.S.A., 87, 682-685, 1990] 및 [Moore 등, J. Med. Chem., 39, 669-672, 1996]). 인간 유도성 NOS (hiNOS), 인간 내피 구성 NOS (hecNOS) 및 인간 신경 구성 NOS (hncNOS) 는 각각 인간 조직으로부터 추출된 RNA 로부터 클로닝된다. 인간 유도성 NOS (hiNOS) 에 대한 cDNA 는 궤양 결장염을 갖는 환자로부터의 결장 샘플에서 추출된 RNA 로부터 만들어진 λcDNA 라이브러리로부터 단리된다. 인간 내피 구성 NOS (hecNOS) 에 대한 cDNA 는 인간 배꼽 정맥 내피 세포 (HUVEC) 에서 추출된 RNA 로부터 만들어진 λcDNA 라이브러리로부터 단리되고, 인간 신경 구성 NOS (hncNOS) 에 대한 cDNA 는 시체로부터 수득된 인간 소뇌에서 추출된 RNA 로부터 만들어진 λcDNA 라이브러리로부터 단리된다. 재조합 효소는 바큐로바이러스 벡터를 사용하여 Sf9 곤충 세포에서 발현된다 (Rodi 등, The Biology of Nitric Oxide 에서, Pt.4: Enzymology, Biochemistry and Immunology; Moncada, S., Feelisch, M., Busse, R., Higgs, E., Eds.]; [Portland Press Ltd.: London, 1995; pp 447-450). 효소 활성은 가용성 세포 추출물로부터 단리되고, DEAE-Sepharose 크로마토그래피에 의해 부분 정제된다. NOS 활성을 측정하기 위해, 10 ㎕ 의 효소를 시험 화합물의 존재 또는 부재 하에 40 ㎕ 의 50 mM Tris (pH 7.6) 에 첨가하고, 50 mM Tris (pH 7.6), 20 mg/㎖ 소혈청 알부민, 2.0 mM DTT, 4.0 mM CaCl₂, 20 μM FAD, 100 μM 테트라히드로바이옵테린, 0.4 mM NADPH 및 0.9 μCi 의 L-[2,3-³H]-아르기닌 함유 60 μM L-아르기닌을 함유하는, 50 ㎕ 의 반응 혼합물을 첨가함으로써 반응을 개시한다. 분석에 있어서 L-아르기닌 최종농도는 30 μM 이다. hecNOS 또는 hncNOS 에 대해, 칼모듈린은 40 내지 100 nM 의 최종 농도로 포함된다. 37℃ 에서 15 분 동안 항온 처리 후, 10 mM EGTA, 100 mM HEPES, pH 5.5 및 1 mM L-시트룰린을 함유하는 중단 완충액 중 Dowex 50W X-8 양이온 교환 수지의 400 ㎕ 의 현탁액을 첨가함으로써 반응을 종결시킨다 (1부 수지, 3부 완충액). 혼합후, 수지를 정치시키고, 액체 섬광계수기로 상청액의 분취액을 계수함으로써 L-[2,3-³H]-시트룰린 형성을 판단한다. 결과는 hiNOS, hecNOS 및 hncNOS 에 대한 화합물의 IC₅₀값 으로서 표 1 에 보고되어 있다.

RAW 세포 니트라이트 분석

NOS 를 유도하기 위해, RAW 264.7 세포는 LPS 의 존재 하에 밤새 (17 시간) 생육된 96 웰 조직 배양 플레이트 상에서 콘플루언트하게 플레이팅될 수 있다. 한 줄의 3-6 웰(well) 을 미처리된 채로 남겨두어, 비특이적(nonspecific) 백그라운드를 제거한 대조군으로서 기능하도록 할 수 있다. 각 웰로부터 배지를 제거하고, 세포를 2 mg/㎖ 글루코스를 갖는 Kreb-Ringers-Hepes (25 mM, pH 7.4) 로 2회 세척했다. 이어서, 세포를 얼음 상에 위치시키고, L-아르기닌 (30 μM) +/- 억제제를 함유한 50 ㎕ 의 완충액으로 1 시간 항온 처리했다. 분석은 플레이트를 수조에서 1 시간 동안 37℃ 로 가온함으로써 개시될 수 있다. 세포내 iNOS 에 의한 니트라이트의 생성은 시간에 대해 선형적일 것이다. 세포 분석을 종결하기 위해, 세포의 플레이트를 얼음 상에 위치시키고, 니트라이트 함유 완충액을 제거하고, 종래 공개된 니트라이트용 형광 측정을 사용하여 니트라이트에 대해 분석할 수 있다. (T.P. Misko 등, Analytical Biochemistry, 214, 11-16 (1993)).

인간 연골 조직편 분석

뼈 조각을 Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (GibcoBRL) 로 2회 그리고 Dulbecco's Modified Eagles Medium (GibcoBRL) 로 1 회 세척하고, 무(無)페놀 레드 Minimum Essential Medium (MEM) (GibcoBRL) 와 함께 페트리 디쉬에 위치시켰다. 연골을 중량으로 대략 15 내지 45 mg 의 작은 조직편으로 절단하고, 웰 당 1개 또는 2 개의 조직편을, 웰 당 200 내지 500 ㎕ 의 배양 배지를 갖는 96 또는 48 웰 배양 플레이트에 위치시켰다. 배양 배지는 L-아르기닌 없이, L-글루타민 없이 그리고 페놀 레드 없이 제조된, Earle's 염 (GibcoBRL) 을 갖는 Minimum Essential Medium (Eagle) 의 통상의 개질물, 또는 L-아르기닌 없이, 인슐린 없이, 아스코르브산 없이, L-글루타민 없이 그리고 페놀 레드 없이 제조된, 무혈청(serumless) Neuman 및 Tytell (GibcoBRL) 의 통상의 개질물이었다. 이 둘은 모두 사용 전에, 산화질소 신타아제를 유도하기 위해 100 μM L-아르기닌 (Sigma), 2 mM L-글루타민, 1X HL-1 서플먼트 (Bio Whittaker), 50 mg/㎖ 아스코르브산 (Sigma) 및 150 pg/㎖ 재조합 인간 IL-1?(RD Systems) 로 보충된다. 이어서, 10 ㎕ 분취액에 화합물이 첨가되고, 조직편을 5% CO₂와 함께 18 내지 24 시간 동안 37℃ 에서 항온 처리했다. 그 날로 오래된 상청액을 버리고, 재조합 인간 IL-1? 및 화합물을 함유하는 신선한 배양 배지로 대체하고, 또다른 20 내지24 시간 동안 항온 처리했다. 형광분석으로 상청액을 니트라이트에 대해 분석했다 (Misko 등, Anal. Biochem., 214, 11-16, 1993). 모든 샘플을 4배수로 수행했다. 비(非)자극된 대조군을 재조합 인간 IL-1?의 부재 하에 배지 중에서 배양했다. IC₅₀값 (표 1) 은 6 개의 상이한 억제제 농도에서 니트라이트의 생성 억제 백분율을 도시함으로써 결정된다.

표 1 은 본 발명의 몇몇 화합물에 대한 생물학적 활성의 예를 나타낸다.

생체내 분석

래트는, 산화질소 신타아제 억제제의 경구 투여와 함께 또는 경구투여 없이, 1 내지 12.5 mg/kg 의 내독소 (LPS) 의 복강내 주사로 처리될 수 있다. 혈장 니트라이트/니트레이트 수준은 처리후 5 시간째에 측정될 수 있다. 상기 결과는 산화질소 신타아제 억제제의 투여가, 내독소에 의해 유도된 산화질소 생성의 신뢰할만한 지표인 혈장 니트라이트/니트레이트 수준의 상승을 감소시킨다는 것을 보여주기 위해 사용될 수 있다. 표 II 에 나타낸 바와 같이, 실시예 A ((2S,5E)-2-아미노-6-플루오로-7-[(1-이미노에틸)아미노]-5-헵텐산, 디히드로클로라이드) 는 ＜0.1 mg/kg 의 관찰된 ED₅₀값으로, 혈장 니트라이트/니트레이트 수준의 LPS 유도된 증가를 억제했고, 이는 생체내 유도성 산화질소 신타아제 활성의 억제능을 나타낸다

시간 의존성 억제에 대한 분석

L-아르기닌이 없는 시트룰린 효소 분석 성분의 존재 하에, 0 내지 60 분 범위의 시간 동안, 37℃ 에서 효소와 함께, 화합물을 예비 항온 처리함으로써, 인간 NOS 이성체의 시간 의존성 억제에 대해 화합물을 평가했다. 분취액 (10 ㎕) 을 0, 10, 21 및 60 분에서 제거하여, 즉시 L-[2,3-³H]-아르기닌을 함유하고, 100 ㎕ 의 최종 부피 내에 30 μM 의 최종 L-아르기닌 농도를 갖는, 시트룰린 분석 효소 반응 혼합물에 첨가했다. 반응을 37℃ 에서 15 분 동안 진행시키고, 중단 완충액의 첨가에 의해 종결시키고, 시트룰린 NOS 분석에 대해 기재된 바와 같이 Dowex 50W X-8 양이온 교환 이온 교환 수지로 크로마토그래피했다. 억제제에 의한 NOS 활성의 % 억제는, 억제제의 부재 하에 동일한 시간 동안 예비 항온 처리된 대조군 효소에 비교된 활성의 억제 백분율로서 간주되었다. 표 III 에 나타낸 데이타는 억제제를 효소와 함께 21 내지 60 분 동안 예비 항온처리한 후의 % 억제이다.

망막 허혈 동안 선택적 iNOS 억제제의 신경보호 효과 분석

망막 허혈 동안 신경 세포 손상에 대한 약리학적 보호는, 녹내장을 포함하는 허혈을 초래하는 인간 눈 질환 및 이상 상태의 치료에 관련되었다. 허혈성 망막에서 선택적 iNOS 억제제의 신경보호 효과는 캐뉼라삽입(cannulated) 래트 망막에서 연구되었다. 대상 래트의 양 망막의 망막 신경절 세포는 Fluoro-Gold 로 역방향 표지되었다. 표지 후, 마취된 래트의 양 눈에 캐뉼라삽입하여, 한쪽 눈의 혈압을 심장수축 혈압을 초과하도록 약 90 분 동안 상승시킴으로써, 망막 허혈을 유도했다. 이어서 압력을 낮추고 캐뉼라를 제거했다. 이후 2주에 걸쳐, 망막 신경절 세포의 상당한 부분을 퇴행시켰다. 허혈 사건 후 2 주의 기간에 걸쳐, 래트의 시험군은 매일 음료수 또는 음식에 투여된 iNOS 선택적 억제제를 수용하도록 했다. 허혈 사건 후 2 주의 기간 동안 다양한 시간에서, 선택된 래트를 희생시켜, 망막을 수집하고, 편평하게 마운트하여, 형광 현미경을 사용하여 신경절 세포 손실을 분석했다. 면역조직화학 및 면역블랏법을 수집된 망막에 대해 실시하여, 신경절 세포 손실을 분석하고, 유도성 산화질소 신타아제를 국소화시켰다.

iNOS 선택적 억제제에 의한 초자체내 혈관신생에 대한 보호 분석

초자체내 혈관신생에 대한 약리학적 보호는 망막 허혈과 관련된 것과 같은 인간 망막병증의 치료와 관련된다. 당뇨병, 성숙기 망막병증, 망막 정맥 교합, 및 망막 허혈을 초래하는 기타 질환은 통상의 무혈관 초자체액 내에서, 실명을 유발하는 신생혈관의 형성을 빈번히 초래한다. 산화질소는 혈관신생에 영향을 미치는 것으로 공지되어 있으므로, iNOS 선택적 억제제는 초자체내 혈관신생의 예방 및 치료에 유용할 수 있다.

망막 혈관재형성을 촉진하면서 초자체내 혈관신생을 방지하는 iNOS 선택적 억제제 투여의 효과를 판단하기 위해, 마우스의 대조군 (대조) 및 시험군 마우스 (시험)를 출생후 7일부터 출생후 12일까지 5일의 기간 동안, 망막 내 혈관폐색 및모세관 손실을 유도하는 과산소 조건 (예를 들어, 75% 산소) 에 노출시켰다. 그리고, 대조 및 시험 마우스를 대기 공기 조건으로 되돌렸지만, 망막 내의 허혈 상은 출생 후 약 12 일에서 17일 까지 지속되어, iNOS 발현을 초래했다 (Sennlaub 등, J. Clin. Invest. 107:717-25, 2001). 허혈상 동안, 시험군은 수 용해된 선택적 iNOS 억제제의 피하 주사를 8시간 간격으로 수용하는 한편, 대조군은 0.9% NaCl 용액의 피하 주사를 수용했다. 허혈상 동안의 다양한 시간에서, 선택된 마우스를 마취하고, 포스페이트 완충된 식염수 용액 중 FITC-덱스트란으로 관류시켜, 눈을 적출했다. 오른쪽 눈에 생체외 혈관조영술을 실시하여, 망막 혈관신생을 정량했다. 구체적으로, 눈을 4% 파라포름알데히드 용액에 고정시키고, 절개하고, 편평하게 마운트하고, 형광 현미경을 사용하여 관찰 및 촬영했다. 사진을 스캔하고, 총 표면적 및 무(無)모세관 영역을 컴퓨터화된 화상 분석 소프트웨어를 사용하여 측정했다. 초자체내 혈관신생을 정량화하기 위해, 왼쪽 눈을 파라핀에 묻고, 일련의 7㎛ 섹션을 시신경에 대해 시상봉합적으로 평행하게 절단했다. 상기 섹션을 PAS 및 Hemalun 으로 염색하고, 막을 제한하는 내부의 초자체측 상에서 발견된 혈관 세포 핵을 계수했다. 초자체내 혈관신생의 정도를 망막내 혈관재형성의 정도와 비교하여, iNOS 선택적 억제제를 사용한 치료가, 초자체내 혈관신생을 초래하지 않고 망막의 바람직한 혈관재형성을 초래하는 정도를 결정했다.

iNOS 선택적 억제제에 의한 녹내장에서 산화질소 매개된 신경파괴에 대한 방지 분석

NOS 의 유도성 형태는 일차적 개방각 녹내장을 갖는 환자의 시신경 헤드에 존재하며, 산화질소에 의한 망막 신경절 세포 액손의 국소적 손상과 관련될 수 있다 (A.H. Neufeld 등, Arch. Ophthalmol. 115:497-503, 1997; A.H. Neufeld, Surv. Ophthalmol. 43 (suppl 1):S129-S135, 1999). 본 발명의 방법에 따른 iNOS 억제성 화합물에 의한 iNOS 의 선택적 블록킹 효과를 연구하기 위해, [Neufeld 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96:9944-48, 1999] 에 기재된 바와 같이 녹내장 유사 조건을 래트에 생성시켰다. 녹내장을 모사한 만성의 편측의 온건하게 상승된 안압 (IOP) 은 3개의 상공막(episcleral) 혈관을 부식시킴으로써 래트에 생성된다. 안압을 약 2 배로 상승시켰다. 동물의 실험군에 음료수 중 선택적 iNOS 억제제를 6 개월 동안 경구투여했다. 대조군은 실험군과 동일한 스케쥴로 동일한 공급원으로부터 신선한 음료수를 수용하였다. 각 병의 재충전시, 소모된 총 부피를 기록했다. IOP 는 1개월마다 모니터링되었다. 온건하게 상승된 IOP 6 개월 후, 안저 카메라 (fundus camera) 를 사용하여 각 눈의 시각신경 원반(optic disk)의 컬러 사진을 찍었다. 희생 1 주 전, 망막 신경절 세포는 Fluoro-Gold 또는 상구(superior colliculi)의 양측 마이크로주사에 의한 기타 적합한 역방향 라벨을 사용하여 역방향 표지되었다. 1주 후, 이어서 동물을 희생시키고, 망막을 수집하고, 전체의 편평하게 마운트된 망막을 형광 현미경을 사용하여 망막 신경절 세포 밀도에 대해 분석했다. 실험 및 대조군에서의 백분율 망막 신경절 세포 손실을 비교하고, IOP 변화의 기록 수준과 상호관련시켰다.

c. 용량, 제형 및 투여 경로

본 발명의 방법에 유용한 다수의 iNOS 선택적 억제제 화합물은 2개 이상의 비대칭 탄소 원자를 가질수 있으므로, 양 쪽의 순수한 형태로 그리고 부가혼합물의 형태로, 부분입체이성체 및 거울상이성체와 같은, 라세미체 및 입체이성체를 포함할 수 있다. 그러한 입체이성체는 통상의 기술, 거울상 이성체 출발 물질을 반응시킴으로써 또는 본 발명의 화합물의 이성체를 분리함으로써, 제조될 수 있다. 이성체는 기하 이성체, 예를 들어, 이중 결합을 가로질러 시스-이성체 또는 트랜스 이성체를 포함할 수 있다. 모든 그러한 이성체는 본 발명의 방법에 유용한 화합물 중에서 계획될 수 있다. 또한 상기 방법은 iNOS 선택적 억제제 화합물의 토토머, 염, 용매화물 및 프로드러그의 사용도 계획될 수 있다.

본 발명의 방법에 대해, 선택적 iNOS 억제제 투여의 적합한 경로는 상기 화합물을 환자 신체의 작용 부위와, 예를 들어 인간과 같은 포유류의 망막에서 접촉시키는 임의의 도구를 포함한다. 더욱, 구체적으로 적합한 투여 경로는, 경구의, 정맥, 피하, 직장, 국소, 협측 (즉, 설하), 근육내 및 피부내를 포함한다. 예시적인 구현예에서, 선택적 iNOS 억제제는 경구 투여된다.

녹내장, 망막염, 망막병증 및 포도막염과 같은 안과적 이상 상태의 예방 또는 치료를 위해, 상기 방법은 iNOS 선택적 억제제의 화합물 그 자체로서, 또는 그의 약제학적 허용가능 염으로서의 용도를 포함한다. "약제학적 허용가능 염" 이라는 용어는 알칼리 금속 염을 형성하고 자유 산 또는 자유 염기의 첨가 염을 형성하는데 통상 사용되는 염을 포함한다. 염의 본질이 중요한 것은 아니나, 단 이는 약제학적으로 허용가능하다. 약제학적 허용가능 염은, 상응하는 모체 화합물 또는 중성 화합물에 비해 이들의 수 용해성이 보다 우수하기 때문에, 본 발명의 방법의 생성물로서 특히 유용하다. 그러한 염은 약제학적 허용가능 음이온 또는 양이온을 가져야 한다. 본 발명의 화합물의 약제학적 허용가능 산 첨가 염은 무기산 또는 유기산으로부터 제조될 수 있다. 그러한 무기산의 예는 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 질산, 탄산, 황산 및 인산이다. 적절한 유기산은 지방족, 지환족, 방향족, 방향지방족, 헤테로시클릭, 카르복실산 및 술폰산 계열의 유기산을 포함하며, 이들의 예는 포름산, 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 글루콘산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 글루코론산, 말레산, 푸마르산, 피루브산, 아스파르트산, 글루탐산, 벤조산, 안트라닐산, 메실산, 살리실산, p-히드록시벤조산, 페닐아세트산, 만델산, 엠보산 (팜산), 메탄술폰산, 에틸술폰산, 벤젠술폰산, 술파닐산, 스테아르산, 시클로헥실아미노술폰산, 알겐산, 갈락투론산이다. 본 발명의 화합물의 적절한 약제학적 허용가능 염기 첨가 염은 알루미늄, 칼슘, 리튬, 마그네슘, 칼륨, 나트륨 및 아연으로부터 만들어진 금속염, 또는 N,N'-디벤질에틸렌디아민, 콜린, 클로로프로카인, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글루민 (N-메틸글루카민) 및 프로카인으로부터 만들어진 유기염을 포함한다. 본 발명의 화합물의 적절한 약제학적 허용가능 산 첨가염은, 가능한 경우 염산, 브롬화수소산, 불화수소산, 붕산, 불화붕산, 인산, 메타인산, 질산, 탄산 (탄산염 및 탄화수소 음이온을 포함함), 술폰산 및 황산과 같은 무기산, 또는 아세트산, 벤젠술폰산, 벤조산, 시트르산, 에탄술폰산, 푸마르산, 글루콘산, 글리콜산, 이소티온산, 락트산, 락토비온산, 말레산, 말산, 메탄술폰산, 트리플루오로메탄술폰산, 숙신산, 톨루엔술폰산, 타르타르산 및 트리플루오로아세트산과 같은 유기산 유래의 것을 포함한다. 의약 목적으로 클로라이드 염이 특히 바람직하다. 적합한 약제학적 허용가능 염기 염은 암모늄염, 나트륨 및 칼륨 염과 같은 알칼리 금속 염, 및 마그네슘 및 칼슘 염과 같은 알칼리 토금속염을 포함한다. 상기 모든 염은 본 발명의 화합물의 상응하는 짝염기 또는 짝산으로부터, 상기 화합물의 짝염기 또는 짝산과 함께 적절한 산 또는 염기를 각각 반응시킴으로써, 통상의 수단에 의해 제조될 수 있다.

한 구현예에서, 본 발명의 방법에 유용한 iNOS 선택적 억제제는 약제학적 조합물의 형태로 약제학적 담체와 함께 제시된다. 담체는 약제학적 조합물의 기타 구성성분과 혼화성이라는 견지에서 허용가능해야 하며, 환자에게 해로워선 안된다. 담체에 대해 적합한 형태는 고체 또는 액체이거나 둘 다이며, 한 예시적 구현예에서, 담체는 예를 들어 약 0.05 중량% 내지 약 95 중량% 의 활성 화합물을 함유하는 정제와 같은, 단위 투약 조합으로서 치료적 화합물과 함께 제형된다. 대안적인 구현예에서, 기타 약리학적 활성 성분이 존재하며, 이는 본 발명의 기타 화합물을 포함한다. 본 발명의 약제학적 화합물은, 본질적으로 구성성분들을 부가혼합하는 것으로 이루어진, 임의의 공지 조제 기술에 의해 제조된다.

바람직한 단위 투약 제형은 본원의 하기에 기재된 바와 같이, 유효량의 투약량을 함유하는 것이거나, 조합물의 하나 이상의 치료적 화합물의 적절한 분획이다.

일반적으로, iNOS 선택적 억제제의 총 1일 투약량은 약 0.001 mg/kg 체중/일 내지 약 2500 mg/kg 체중/일의 범위이다. 성인에 대한 투약 범위는 일반적으로1일 당 약 0.005 mg 내지 약 10 g 이다. 구체적 단위로 제공된 제시의 정제 또는 기타 형태는 알맞게 어떠한 용량으로 또는 이의 복수의 용량으로 효과적인, 치료적 화합물의 양을 함유한다. 예를 들어, 본 발명에 사용된 선택적 iNOS 억제성 화합물은 5 mg 내지 500 mg 을 함유하는 단위, 대표적으로는 10 mg 정도 내지 약 200 mg 을 함유하는 단위로 표시될 수 있다.

치료적 화합물의 약제학적 허용가능 염의 경우, 상기 제시된 중량은 염으로부터 유래된 치료적 화합물의 산 당량 또는 염기 당량의 중량을 언급한다.

본원에 기재된 방법에 관하여, 목적하는 생물학적 효과를 달성하는데 필요한 선택적 iNOS 억제성 화합물의 양은, 특정의 개별적 화합물 또는 선택된 화합물, 특정 용도, 투여 경로, 환자의 임상적 상태 및 환자의 연령, 체중, 성별 및 식이를 포함하는, 다수의 요인에 의존한다는 것이 이해되어야 한다.

다양한 치료적 화합물에 대해 상기 단락들에 기재된 1일 투약량은 단회 투약량으로, 또는 적절한 다중의 하위투약량(subdose)으로 투여된다. 하위투약량은 1일 당 2회 내지 6회 투여된다. 한 구현예에서, 투약량은 목적하는 생물학적 효과를 수득하기에 효과적인 서방성 형태물로 투여된다.

본 발명의 방법에 따른 경구 전달은, 임의 수의 메카니즘에 의해 위장관에 약물의 연장되거나 지속적인 전달을 제공하는, 당해 분야에 공지된 제형을 포함할 수 있다. 이들은 소장의 pH 변화에 기초한 투약 형태로부터의 pH 감수성 방출, 정제 또는 캡슐의 저속 침식, 제형의 물성에 기초한 위장에서의 체류, 장관의 점막 라이닝(lining) 에 대한 투약 형태의 생부착(bioadhesion) 또는 투약 형태로부터의활성 약물의 효소적 방출을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 방법에 따른 경구 전달은 고체, 반고체 또는 액체 투약 형태를 사용하여 달성될 수 있다. 적절한 반고체 및 액체 형태는, 예를 들어 겔 캡슐에 함유된 시럽 또는 액체를 포함한다.

본 발명의 방법을 실시하기 위해, 경구 투여에 적합한 약제학적 조성물은 구체적인 단위, 예컨대 캡슐, 봉지, 마름모꼴 정제(lozenge) 또는 정제로 제시될 수 있으며, 각각은 본 발명의 방법에 유용한 하나 이상의 치료적 화합물의 소정량을, 분말 또는 과립으로서; 수성 또는 비수성 액체 중 용액 또는 현탁액으로서; 또는 수중유 또는 유중수 에멀션으로서 함유한다.

d. 구현예의 예

하기 비제한적인 실시예는 본 발명의 치료 방법을 실시하는데 적합한 다양한 약제학적 조성물을 예시하는데 기여한다.

실시예 1 약제학적 조성물

표 IV 에 설명된 상기 조성물의 100 mg 정제가 습식 과립화 기술을 사용하여 경구 투여용으로 제조될 수 있다:

구성 성분	중량(mg)
화합물 A-1	25
락토스	54
미세결정성 셀룰로스	15
히드록시프로필 메틸 셀룰로스	3
크로스카르멜로스 나트륨	2
마그네슘 스테아레이트	1
총 정제 중량	100

실시예 2 약제학적 조성물

표 V 에 설명된 상기 조성물의 100 mg 정제가 직접 압축 기술을 사용하여 제조될 수 있다:

구성 성분	중량(mg)
화합물 A-1	25
미세결정성 셀룰로스	69.5
콜로이드성 이산화규소	0.5
탈크	2.5
크로스카르멜로스 나트륨	0.5
마그네슘 스테아레이트	1
총 정제 중량	100

본원에서 기재된 실시예는 일반적으로 또는 구체적으로 기재된 치료적 화합물 또는 불활성 구성성분을 상기 실시예에 사용된 것으로 대체함으로써 수행될 수 있다.

본원에 제시된 설명 및 실례는 당업자가 본 발명, 그의 원리 및 그의 실용적 적용을 이해하도록 하고자 하는 것이다. 당업자는 특정 용도의 필요조건에 가장 잘 부합될 수 있도록, 본 발명을 다양한 형태로 채택하고 적용할 수 있다. 따라서, 설명된 본 발명의 특정 구현예는 본발명을 철저히 규명해내거나 제한하고자 하는 것은 아니다.

Claims

하기 화학식 I 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 II 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 III 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 IV 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 V 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 VI 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 VII 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 VIII 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 하기 화학식 IX 또는 그의 약제학적 허용가능 염, 및 하기 화학식 X 또는 그의 약제학적 허용가능 염에서 선택된 화학식을 갖는 화합물의 안과적 이상 상태(condition)에 대한 유효량을 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 이상 상태의 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에게서의 안과적 이상 상태의 치료 또는 예방 방법:

[화학식 I]

[식 중,

R¹은 H, 할로 및 하나 이상의 할로로 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

R²는 H, 할로 및 하나 이상의 할로로 임의 치환될 수 있는 알킬로 이루어진 군에서 선택되나;

단, 하나 이상의 R¹또는 R²가 할로를 함유하며;

R⁷은 H 및 히드록시로 이루어진 군에서 선택되고;

J 는 히드록시, 알콕시 및 NR³R⁴로 이루어진 군에서 선택되고:

(식 중,

R³는 H, 저급 알킬, 저급 알킬레닐 및 저급 알키닐로 이루어진 군에서 선택되고;

R⁴는 H, 및 고리의 하나 이상의 원이 탄소이고 1 내지 약 4 개의 헤테로원자가 산소, 질소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 헤테로시클릭 고리로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 헤테로시클릭 고리는 헤테로아릴아미노, N-아릴-N-알킬아미노, N-헤테로아릴아미노-N-알킬아미노, 할로알킬티오, 알카노일옥시, 알콕시, 헤테로아르알콕시, 시클로알콕시, 시클로알케닐옥시, 히드록시, 아미노, 티오, 니트로, 저급 알킬아미노, 알킬티오, 알킬티오알킬, 아릴아미노, 아르알킬아미노, 아릴티오, 알킬술피닐, 알킬술포닐, 알킬술폰아미도, 알킬아미노술포닐, 아미도술포닐, 모노알킬 아미도술포닐, 디알킬 아미도술포닐, 모노아릴아미도술포닐, 아릴술폰아미도, 디아릴아미도술포닐, 모노알킬 모노아릴 아미도술포닐, 아릴술피닐, 아릴술포닐, 헤테로아릴티오, 헤테로아릴술피닐, 헤테로아릴술포닐, 알카노일, 알케노일, 아로일, 헤테로아로일, 아르알카노일, 헤테로아르알카노일, 할로알카노일, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬렌디옥시, 할로알킬렌디옥시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 저급 시클로알킬알킬, 저급 시클로알케닐알킬, 할로, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시할로알킬, 히드록시아르알킬, 히드록시알킬, 히드록시헤테로아르알킬, 할로알콕시알킬, 아릴, 아르알킬, 아릴옥시, 아르알콕시, 아릴옥시알킬, 포화 헤테로시클릴, 부분 포화 헤테로시클릴, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴옥시알킬, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 시아노알킬, 디시아노알킬, 카르복사미도알킬, 디카르복사미도알킬, 시아노카르보알콕시알킬, 카르보알콕시알킬, 디카르보알콕시알킬, 시아노시클로알킬, 디시아노시클로알킬, 카르복사미도시클로알킬, 디카르복사미도시클로알킬, 카르보알콕시시아노시클로알킬, 카르보알콕시시클로알킬, 디카르보알콕시시클로알킬, 포르밀알킬, 아실알킬, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 포스포노알킬, 디알콕시포스포노알콕시, 디아르알콕시포스포노알콕시, 포스포노알콕시, 디알콕시포스포노알킬아미노, 디아르알콕시포스포노알킬아미노, 포스포노알킬아미노, 디알콕시포스포노알킬, 디아르알콕시포스포노알킬, 구아니디노, 아미디노, 및 아실아미노로 임의 치환될 수 있음)];

[화학식 II]

[식 중,

X 는 -S-, -S(O)-, 및 -S(O)₂- 로 이루어진 군에서 선택되고;

R¹²는 C₁-C₆알킬, C₂-C₆알케닐, C₂-C₆알키닐, C₁-C₅알콕시-C₁알킬, 및 C₁-C₅알킬티오-C₁알킬로 이루어진 군에서 선택되고, 여기서 각각의 상기 기들은 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 치환체로 임의 치환되며;

R¹³및 R^l8은, R^l8이 -OR²⁴및 -N(R²⁵)(R²⁶) 으로 이루어진 군에서 선택되고, R¹³이 -H, -OH, -C(O)-R²⁷, -C(O)-O-R²⁸및 -C(O)-S-R²⁹로 이루어진 군에서 선택되거나; R^l8이 -N(R³⁰)- 이고 R¹³이 -C(O)- 이며, 여기서 R^l8및 R¹³은 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하거나; R^l8이 -O- 이고 R¹³이 -C(R³¹)(R³²)- 이며, 여기서 R^l8및 R¹³은 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하며; R¹³이 -C(R3²¹)(R³²)- 인경우, R¹⁴는 -C(O)-O-R³³이고; 그렇지 않으면 R¹⁴는 -H 이며, R¹¹, R¹⁵, R¹⁶및 R¹⁷은 독립적으로 -H, 할로겐, C₁-C₆알킬, C₂-C₆알케닐, C₂-C₆알키닐 및 C₁-C₅알콕시-C₁알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

R^l9및 R²⁰은 독립적으로 -H, C_l-C₆알킬, C₂-C₆알케닐, C₂-C₆알키닐 및 C_l-C₅알콕시-C₁알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

R²¹은 -H, -OH, -C(O)-O-R³⁴및 -C(O)-S-R³⁵로 이루어진 군에서 선택되고, R²²는 -H, -OH, -C(O)-O-R³⁶및 -C(O)-S-R³⁷로 이루어진 군에서 선택되거나; R²¹은 -O- 이고, R²²는 -C(O)- 이며, 여기서 R²¹및 R²²는 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하거나; R²¹은 -C(O)- 이고, R²²는 -O- 이며, 여기서 R²¹및 R²²는 이들이 부착된 원자와 함께 고리를 형성하고;

R²³은 C_l알킬이고;

R²⁴는 -H 및 C_l-C₆알킬로 이루어진 군에서 선택되며, 여기서 R²⁴가 C_l-C₆알킬인 경우, R²⁴는 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 부분으로 임의 치환되며;

R²⁵는 -H, 알킬 및 알콕시로 이루어진 군에서 선택되며, R²⁶은 -H, -OH, 알킬, 알콕시, -C(O)-R³⁸, -C(O)-O-R³⁹및 -C(O)-S-R⁴⁰으로 이루어진 군에서 선택되고; 여기서 R²⁵및 R²⁶은 독립적으로 알킬 또는 알콕시이고, R²⁵및 R²⁶은 독립적으로 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 부분으로 임의 치환되거나; R²⁵는 -H 이고; R²⁶은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택되고;

R²⁷, R²⁸, R²⁹, R³⁰, R³¹, R³², R³³, R³⁴, R³⁵, R³⁶, R³⁷, R³⁸, R³⁹및 R⁴⁰은 독립적으로 -H 및 알킬로 이루어진 군에서 선택되고, 여기서 알킬은 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 부분으로 임의 치환되고;

여기서 임의의 R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R¹⁸, R19⁹, R²⁰, R²¹, R²², R²³, R²⁴, R²⁵, R²⁶, R²⁷, R²⁸, R²⁹, R³⁰, R³¹, R³², R³³, R³⁴, R³⁵, R³⁶, R³⁷, R³⁸, R³⁹및 R⁴⁰은 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군에서 선택된 부분이고, 상기 부분은 -OH, 알콕시 및 할로겐으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 치환체로 임의 치환됨];

[화학식 III]

[식 중,

R⁴¹은 H 또는 메틸이고;

R⁴²는 H 또는 메틸임];

[화학식 IV]

;

[화학식 V]

[식 중,

R⁴³은 수소, 할로, C₁-C₅알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

R⁴⁴는 수소, 할로, C₁-C₅알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

R⁴⁵는 C₁-C₅알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬임];

[화학식 VI]

[식 중,

R⁴⁶은 C₁-C₅알킬이며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환됨];

[화학식 VII]

[식 중,

R⁴⁷은 수소, 할로, C₁-C₅알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

R⁴⁸은 수소, 할로, C₁-C₅알킬, 및 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되고;

R⁴⁹는 C₁-C₅알킬, 또는 알콕시 또는 하나 이상의 할로로 치환된 C₁-C₅알킬임];

[화학식 VIII]

[식 중,

R⁵⁰은 C₁-C₅알킬이며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환됨];

[화학식 IX]

[식 중,

R^5O은 수소, 할로 및 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;

R⁵¹은 수소, 할로 및 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;

R⁵²는 C₁-C₅알킬이며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;

R⁵³은 수소, 할로 및 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환되고;

R⁵⁴는 할로 및 C₁-C₅알킬로 이루어진 군에서 선택되며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환됨]; 및

[화학식 X]

[식 중,

R⁵⁵는 C₁-C₅알킬이며, 상기 C₁-C₅알킬은 할로 또는 알콕시로 임의 치환되며, 상기 알콕시는 하나 이상의 할로로 임의 치환됨].
제 1 항에 있어서, 안과적 이상 상태가 녹내장인 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 안과적 이상 상태가 망막염인 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 안과적 이상 상태가 망막 허혈 관련 이상 상태인 방법.
제 4 항에 있어서, 상기 망막 허혈 관련 이상 상태가 망막병증적 이상 상태인 방법.
제 5 항에 있어서, 상기 망막병증적 이상 상태가 당뇨 망막병증인 방법.
제 5 항에 있어서, 상기 망막병증적 이상 상태가 성숙기의 망막병증인 방법.
제 6 항에 있어서, 상기 망막병증적 이상 상태가 망막 정맥 교합(retinalvein occlusion)의 망막병증인 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 안과적 이상 상태가 포도막염인 방법.