KR102788829B1

KR102788829B1 - 야누스 키나제 억제제의 결정질 형태

Info

Publication number: KR102788829B1
Application number: KR1020197017128A
Authority: KR
Inventors: 유키히로 가미야; 노리아키 시모야마; 류헤이 오쿠라; 사토루 노지
Original assignee: 니뽄 다바코 산교 가부시키가이샤
Priority date: 2016-12-21
Filing date: 2017-12-20
Publication date: 2025-03-31
Anticipated expiration: 2037-12-20

Abstract

본 발명은 야누스 키나제 (JAK) 억제제 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴 (화합물 A)의 결정질 형태, 뿐만 아니라 그의 조성물, 그의 제조 방법, 그의 사용 방법 및 정량화 방법에 관한 것이다.

Description

야누스 키나제 억제제의 결정질 형태

야누스 키나제 (JAK) 억제제는 자가면역 질환, 염증성 질환 및 암을 포함한 다양한 질환의 치료에 대한 현재 관심 대상이다. 지금까지, 2종의 JAK 억제제가 미국 식품 의약품국 (FDA)에게 승인받았다. 룩솔리티닙은 원발성 골수섬유증 및 진성 다혈구혈증(PV)의 치료에 대해 승인받았고, 토파시티닙은 류마티스 관절염의 치료에 대해 승인받았다. 다른 JAK 억제제는 문헌에 나타나있다. 화합물 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴 (화합물 A) (하기 구조 참조)은 미국 특허 공개 번호 2011/0136778 및 국제 특허 공개 번호 PCT/JP2016/070046에 보고된 스피로시클릭 JAK 억제제의 예이다.

[화학식 1]

예를 들어, 화합물 A와 같은 약물 화합물은 전형적으로 다른 제약상 허용되는 성분과 조합하여 환자에 투여하는데 적합한 조성물을 형성한다. 고체 제제는 종종 약물 화합물이 가공가능한 고체 상태 특성, 예컨대 열 및 습도에 대한 안정성, 취급의 용이성 및 고체 투여 형태의 제조를 용이하게 하는 다른 특성을 갖는 것이 요구된다. 따라서, 기존 약물 분자의 고체 형태에 대한 진행 중인 필요가 존재한다. 본원에 기재된 화합물 A의 결정질 형태는 이러한 목적에 관한 것이다.

본 발명은, 특히, 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴 (화합물 A)의 결정질 형태 β 및 γ에 관한 것이다.

본 발명은 추가로 형태 β 또는 형태 γ 또는 둘 다와 함께 형태 α를 포함하는 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 추가로 1종 이상의 본 발명의 결정질 형태 또는 조성물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 추가로 본 발명의 결정질 형태를 제조하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 추가로 본 발명의 결정질 형태를 정량화하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 추가로 본 발명의 결정질 형태를 야누스 키나제와 접촉시키는 것을 포함하는, 야누스 키나제를 억제하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 추가로 환자에게 치료 유효량의 본 발명의 결정질 형태 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 추가로 예방 또는 요법에 사용하기 위한 본 발명의 결정질 형태 또는 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 추가로 요법 또는 예방에 사용하기 위한 의약의 제조를 위한 본 발명의 결정질 형태 또는 조성물의 용도에 관한 것이다.

[도 1] 도 1은 형태 α와 일치하는 XRPD 패턴을 나타낸다.
[도 2] 도 2는 형태 β와 일치하는 XRPD 패턴을 나타낸다.
[도 3] 도 3은 형태 γ와 일치하는 XRPD 패턴을 나타낸다.
[도 4] 도 4는 형태 α와 일치하는 DSC 온도기록도를 나타낸다.
[도 5] 도 5는 형태 β와 일치하는 DSC 온도기록도를 나타낸다.
[도 6] 도 6은 형태 γ와 일치하는 DSC 온도기록도를 나타낸다.
[도 7] 도 7은 형태 α와 일치하는 TG-DTA 데이터를 나타낸다.
[도 8] 도 8은 형태 β와 일치하는 TG-DTA 데이터를 나타낸다.
[도 9] 도 9는 형태 γ와 일치하는 TG-DTA 데이터를 나타낸다.
[도 10] 도 10은 형태 α와 일치하는 고체 상태 ¹³C NMR 데이터를 나타낸다.
[도 11] 도 11은 형태 β와 일치하는 고체 상태 ¹³C NMR 데이터를 나타낸다.
[도 12] 도 12는 형태 γ와 일치하는 고체 상태 ¹³C NMR 데이터를 나타낸다.
[도 13] 도 13은 0, 2, 5 및 10% 형태 β를 함유하는 화합물 A의 표준 샘플로부터 수득된 오버레이된 XRPD 패턴을 나타낸다 (실시예 4 참조).
[도 14] 도 14는 0, 1, 2, 5 및 10% 형태 γ를 함유하는 화합물 A의 표준 샘플로부터 수득된 오버레이된 XRPD 패턴을 나타낸다 (실시예 4 참조).
[도 15] 도 15는 아래에서부터, 사용된 화합물 A의 형태 α, 사용된 화합물 A의 형태 β, 교반 전 화합물 A의 형태 α와 β의 중량 기준 1:1 혼합물, 및 교반 후 수득된 결정에 대한 실시예 6의 XRPD 패턴을 나타낸다.
[도 16] 도 16은 아래에서부터, 사용된 화합물 A의 형태 α, 사용된 화합물 A의 형태 γ, 교반 전 화합물 A의 형태 α와 γ의 중량 기준 1:1 혼합물, 및 교반 후 수득된 결정에 대한 실시예 7의 XRPD 패턴을 나타낸다.
[도 17] 도 17은 아래에서부터, 사용된 화합물 A의 형태 γ, 사용된 화합물 A의 형태 β, 교반 전 화합물 A의 형태 β와 γ의 중량 기준 1:1 혼합물, 및 포름아미드로부터 수득된 결정, N,N-디메틸포름아미드로부터 수득된 결정, 디메틸술폭시드로부터 수득된 결정에 대한 실시예 8의 XRPD 패턴을 나타낸다.

본 발명은 특히, 야누스 키나제(JAK)의 억제제이며 야누스 키나제 상향조절 또는 과다발현과 연관된 다양한 질환의 치료에 유용한 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴의 결정질 형태를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 결정질 형태는 JAK3을 억제한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 결정질 형태는 JAK2를 억제한다.

본 발명의 한 측면은 하기와 같다.

[항목 1] 형태 β를 갖는 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴의 결정질 형태.

[항목 2] 항목 1에 있어서, 2θ (°)에 관하여 약 11.8에서의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 결정질 형태.

[항목 3] 항목 1에 있어서, 2θ (°)에 관하여 약 10.5, 약 11.8, 약 19.3 및 약 22.0으로부터 선택된 2개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 결정질 형태.

[항목 4] 항목 1에 있어서, 2θ (°)에 관하여 약 7.8, 약 10.5, 약 11.8, 약 13.4, 약 13.9, 약 17.8, 약 19.3, 약 22.0, 약 23.6 및 약 28.0으로부터 선택된 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 결정질 형태.

[항목 5] 항목 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 약 186℃에서의 흡열 피크를 특징으로 하는 DSC 온도기록도를 갖는 결정질 형태.

[항목 6] 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 약 165.1 ppm에서의 적어도 1개의 피크를 특징으로 하는 고체 상태 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 결정질 형태.

[항목 7] 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 약 16.5, 약 25.8, 약 26.5, 약 33.1, 약 34.8, 약 36.7, 약 38.8, 약 48.2, 약 53.4, 약 77.7, 약 79.5, 약 101.2, 약 102.6, 약 117.5, 약 120.6, 약 151.1, 약 154.3 및 약 165.1 ppm으로부터 선택된 적어도 5개의 피크를 특징으로 하는 고체 상태 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 결정질 형태.

[항목 8] 항목 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 하기 단위 셀 파라미터를 갖는 공간군 P1을 갖는 결정질 형태:

[표 1]

[항목 9] 항목 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 적어도 약 50%의 순도를 갖는 결정질 형태.

[항목 10] 항목 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 적어도 약 75%의 순도를 갖는 결정질 형태.

[항목 11] 항목 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 적어도 약 85%의 순도를 갖는 결정질 형태.

[항목 12] 항목 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 적어도 약 90%의 순도를 갖는 결정질 형태.

[항목 13] 항목 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 적어도 약 95%의 순도를 갖는 결정질 형태.

[항목 14] 형태 γ를 갖는 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴의 결정질 형태.

[항목 15] 항목 14에 있어서, 2θ (°)에 관하여 약 16.5에서의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 결정질 형태.

[항목 16] 항목 14에 있어서, 2θ (°)에 관하여 약 16.5, 약 17.7, 약 21.4, 약 21.8, 및 약 23.1로부터 선택된 2개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 결정질 형태.

[항목 17] 항목 14에 있어서, 2θ (°)에 관하여 약 7.7, 약 10.6, 약 13.3, 약 13.9, 약 15.5, 약 16.5, 약 17.7, 약 17.9, 약 19.0, 약 21.4, 약 21.8 및 약 23.1, 약 23.7 및 약 28.1로부터 선택된 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 결정질 형태.

[항목 18] 항목 14 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 약 196℃에서의 흡열 피크를 특징으로 하는 DSC 온도기록도를 갖는 결정질 형태.

[항목 19] 항목 14 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 약 162.9 ppm에서의 적어도 1개의 피크를 특징으로 하는 고체 상태 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 결정질 형태.

[항목 20] 항목 14 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 약 16.9, 약 26.5, 약 32.9, 약 36.4, 약 48.1, 약 53.7, 약 78.6, 약 102.6, 약 116.4, 약 117.9, 약 121.5, 약 151.8, 약 154.6 및 약 162.9 ppm으로부터 선택된 적어도 5개의 피크를 특징으로 하는 고체 상태 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는 결정질 형태.

[항목 21] 항목 14 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 하기 단위 셀 파라미터를 갖는 공간군 P2₁을 갖는 결정질 형태:

[표 2]

[항목 22] 항목 14 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 적어도 약 50%의 순도를 갖는 결정질 형태.

[항목 23] 항목 14 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 적어도 약 75%의 순도를 갖는 결정질 형태.

[항목 24] 항목 14 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 적어도 약 85%의 순도를 갖는 결정질 형태.

[항목 25] 항목 14 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 적어도 약 90%의 순도를 갖는 결정질 형태.

[항목 26] 항목 14 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 적어도 약 95%의 순도를 갖는 결정질 형태.

[항목 27] 용매로부터 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 결정화시키는 것을 포함하는, 항목 1 내지 13 중 어느 하나의 결정질 형태를 제조하는 방법.

[항목 28] 항목 27에 있어서, 용매가 1-부탄올 및 아세토니트릴을 포함하는 것인 방법.

[항목 29] 항목 28에 있어서, 1-부탄올 대 아세토니트릴의 비가 약 1:3 (v/v)인 방법.

[항목 30] 항목 27 내지 29 중 어느 하나의 방법에 의해 제조된 결정질 형태 β.

[항목 31] 형태 α의 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 형태 γ로 전환시키는 것을 포함하는, 항목 14 내지 26 중 어느 하나의 결정질 형태를 제조하는 방법.

[항목 32] 항목 31에 있어서, 형태 α의 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 디메틸포름아미드 (DMF) 중에서 교반하는 것을 포함하는 방법.

[항목 33] 항목 31에 있어서, 형태 α의 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 포름아미드 중에서 교반하는 것을 포함하는 방법.

[항목 34] 항목 31 내지 33 중 어느 하나의 방법에 의해 제조된 결정질 형태 γ.

[항목 35] 형태 α 및 형태 β를 포함하는 결정질 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴의 조성물.

[항목 36] 항목 35에 있어서, 본질적으로 형태 α 및 형태 β로 이루어진 조성물.

[항목 37] 항목 35 또는 36에 있어서, 형태 β가 형태 α에 대해 약 1 내지 약 50% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.

[항목 38] 항목 35 또는 36에 있어서, 형태 β가 형태 α에 대해 약 1 내지 약 20% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.

[항목 39] 항목 35 또는 36에 있어서, 형태 β가 형태 α에 대해 약 1 내지 약 10% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.

[항목 40] 항목 35 또는 36에 있어서, 형태 β가 형태 α에 대해 약 1 내지 약 5% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.

[항목 41] 항목 35 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 추가로 형태 γ를 포함하는 조성물.

[항목 42] 형태 β 및 형태 γ를 포함하는 결정질 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴의 조성물.

[항목 43] 항목 42에 있어서, 본질적으로 형태 β 및 형태 γ로 이루어진 조성물.

[항목 44] 항목 42 또는 43에 있어서, 형태 γ가 형태 β에 대해 약 1 내지 약 50% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.

[항목 45] 항목 42 또는 43에 있어서, 형태 γ가 형태 β에 대해 약 1 내지 약 20% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.

[항목 46] 항목 42 또는 43에 있어서, 형태 γ가 형태 β에 대해 약 1 내지 약 10% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.

[항목 47] 항목 42 또는 43에 있어서, 형태 γ가 형태 β에 대해 약 1 내지 약 5% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.

[항목 48] 항목 42 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 추가로 형태 α를 포함하는 조성물.

[항목 49] 항목 1 내지 48 중 어느 하나의 결정질 형태 또는 조성물, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.

[항목 50] 항목 49에 있어서, 추가로 제2 치료제를 포함하는 제약 조성물.

[항목 51] 항목 49 또는 50에 있어서, 경구, 비경구, 폐, 국부 또는 국소 투여에 적합한 제약 조성물.

[항목 52] 항목 49 또는 50에 있어서, 국소 투여에 적합한 제약 조성물.

[항목 53] 항목 49 또는 50에 있어서, 정제, 캡슐, 환제, 분말 또는 연고 형태의 제약 조성물.

[항목 54] 항목 49 또는 50에 있어서, IV, IM 또는 SC 투여를 위한 액체 중에서의 재구성에 적합한 분말 형태의 제약 조성물.

[항목 55] 항목 49 또는 50에 있어서, 백색 연질 파라핀, 경질 파라핀, 스쿠알렌 또는 그의 혼합물을 포함하는 제약 조성물.

[항목 56] 야누스 키나제를 항목 1 내지 55 중 어느 하나의 결정질 형태 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, 야누스 키나제를 억제하는 방법.

[항목 57] 항목 56에 있어서, 야누스 키나제가 야누스 키나제 3 (JAK3)인 방법.

[항목 58] 항목 56에 있어서, 야누스 키나제가 야누스 키나제 2 (JAK2)인 방법.

[항목 59] 포유동물에게 치료 유효량의 항목 1 내지 55 중 어느 하나의 결정질 형태 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 기관 이식 거부, 이식 후 이식편 대 숙주 반응, 자가면역 질환, 알레르기성 질환 및 만성 골수증식성 질환으로부터 선택된 질환을 치료 또는 예방하는 방법.

[항목 60] 포유동물에게 치료 유효량의 항목 1 내지 55 중 어느 하나의 결정질 형태 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 류마티스 관절염, 건선, 원형 탈모증, 안구 건조, 아토피성 피부염, 습진 또는 손 습진을 치료 또는 예방하는 방법.

[항목 61] 항목 1 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 제약 활성 성분으로 사용하기 위한 결정질 형태 또는 조성물.

[항목 62] 항목 1 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 기관 이식 거부, 이식 후 이식편 대 숙주 반응, 자가면역 질환, 알레르기성 질환 또는 만성 골수증식성 질환의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 결정질 형태 또는 조성물.

[항목 63] 항목 1 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 류마티스 관절염, 건선, 원형 탈모증, 안구 건조, 아토피성 피부염, 습진 또는 손 습진의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 결정질 형태.

[항목 64] 형태 β의 특징인 XRPD 피크의 피크 면적을 측정하고, 피크 면적을 표준과 비교하는 것을 포함하는, 형태 α의 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴의 제조에서 존재하는 형태 β의 양을 측정하는 방법.

[항목 65] 항목 64에 있어서, 형태 β의 피크 특징이 약 10.6° 2-세타에서 나타나는 것인 방법.

[항목 66] 형태 γ의 특징인 XRPD 피크의 피크 면적을 측정하고, 피크 면적을 표준과 비교하는 것을 포함하는, 형태 α의 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴의 제조에서 존재하는 형태 γ의 양을 측정하는 방법.

[항목 67] 항목 66에 있어서, 형태 γ의 피크 특징이 약 16.6° 2-세타에서 나타나는 것인 방법.

본원에 사용된 "결정질 형태"는 결정질 물질의 특정 격자 구성을 지칭하는 것으로 의도된다. 동일한 물질의 상이한 결정질 형태는 전형적으로 상이한 결정질 격자 (예를 들면, 단위 셀) 및 그의 상이한 결정질 격자에 기인하는 상이한 물리적 특성을 갖고, 일부 경우에 상이한 물 또는 용매 함량을 갖는다. 상이한 결정질 격자는 고체 상태 특징화 방법, 예컨대 X선 분말 회절 (XRPD)에 의해 확인될 수 있다. 또한, 다른 특징화 방법, 예컨대 시차 주사 열량측정 (DSC), 열중량측정 분석 (TGA), 동적 증기 수착 (DVS), 고체 상태 NMR 등이 결정질 형태를 확인하는 데 도움을 줄 뿐만 아니라, 안정성 및 용매/물 함량을 결정하는 데 도움을 제공한다.

특정한 물질의 상이한 결정질 형태는 상기 물질의 무수 형태 및 그 물질의 용매화/수화 형태 둘 다를 포함할 수 있으며, 여기서 각각의 무수 형태 및 용매화/수화 형태는 상이한 XRPD 패턴에 의해 서로 구별되며, 그로 인해 상이한 결정질 격자를 나타낸다. 일부 경우에, 단일 결정질 형태 (예를 들어, 고유한 XRPD 패턴에 의해 확인되는)는 가변적인 물 또는 용매 함량을 가질 수 있으며, 여기서 격자는 물 및/또는 용매에 대한 조성 변경에도 불구하고 (XRPD 패턴에서와 같이) 실질적으로 변화 없이 유지된다.

반사 (피크)의 XRPD 패턴은 전형적으로 특정한 결정질 형태의 지문(fingerprint)으로 간주된다. XRPD 피크들의 상대 강도는 특히 샘플 제조 기술, 결정 크기 분포, 샘플 탑재 과정 및 사용된 특정한 기기에 따라 달라질 수 있다는 것이 널리 공지되어 있다. 일부 경우에, 기기의 유형 또는 설정 (예를 들어, Ni 필터의 사용 여부)에 따라 새로운 피크가 관찰될 수 있거나, 기존의 피크가 사라질 수 있다. 더욱이, 기기 변화 및 기타 요인이 2-세타 값에 영향을 미칠 수 있다. 즉, 본원에 보고된 바와 같은 피크 배열은 ± 0.2°, ± 0.1° 또는 ± 0.04° (2-세타)만큼 변할 수 있으며, 본원에서 XRPD의 문맥에서 사용된 용어 "실질적으로"는 상기 언급된 편차를 포함하는 것으로 의도된다.

이와 동일하게, DSC, TGA 또는 다른 열적 실험과 관련된 온도 판독은 기기, 특정 설정, 샘플 제조 등에 따라 약 ±3℃만큼 변할 수 있다. 따라서, 본원에 보고된 바와 같은 온도 값은 ± 3℃만큼 변할 수 있고, "실질적으로" 도면 중 어느 하나에 제시된 DSC 온도기록도 또는 다른 온도기록도를 갖는 본원에 보고된 결정질 형태는 이러한 편차를 수용하는 것으로 이해된다.

추가적으로, ¹³C NMR 스펙트럼에서 화학적 이동은 ± 0.2 ppm만큼 변할 수 있고, 본원의 NMR 데이터의 문맥에서 사용된 용어 "실질적으로"는 이 편차를 포괄하는 것으로 의도된다.

형태 β

본 발명은 형태 β를 갖는 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴 (화합물 A)의 결정질 형태를 제공한다. 형태 β에 상응하는 결정질 형태는 예를 들어 DSC 및 TG-DTA에 의해 입증된 바와 같이 무수인 것으로 판단된다 (실시예 2 참조). 일부 실시양태에서, 형태 β는 2θ (°)에 관하여 약 11.8에서의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 형태 β는 2θ (°)에 관하여 약 10.5, 약 11.8, 약 19.3 및 약 22.0으로부터 선택된 2개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 형태 β는 2θ (°)에 관하여 약 7.8, 약 10.5, 약 11.8, 약 13.4, 약 13.9, 약 17.8, 약 19.3, 약 22.0, 약 23.6 및 약 28.0으로부터 선택된 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 형태 β는 2θ (°)에 관하여 표 2-1에 열거된 임의의 피크로부터 선택된 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는다 (실시예 2 참조). 추가 실시양태에서, 형태 β는 실질적으로 도 2에 제시된 바와 같은 XRPD 패턴을 갖는다.

일부 실시양태에서, 형태 β는 약 186℃에서의 흡열 피크를 특징으로 하는 DSC 온도기록도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 형태 β는 약 185℃에서의 외삽된 개시 온도를 특징으로 하는 DSC 온도기록도를 갖는다. 추가 실시양태에서, 형태 β는 실질적으로 도 5에 제시된 바와 같은 DSC 온도기록도를 갖는다.

일부 실시양태에서, 형태 β는 약 165.1 ppm에서의 적어도 1개의 피크를 특징으로 하는 고체 상태 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는다. 추가 실시양태에서, 형태 β는 약 16.5, 약 25.8, 약 26.5, 약 33.1, 약 34.8, 약 36.7, 약 38.8, 약 48.2, 약 53.4, 약 77.7, 약 79.5, 약 101.2, 약 102.6, 약 117.5, 약 120.6, 약 151.1, 약 154.3 및 약 165.1 ppm으로부터 선택된 적어도 5개의 피크를 특징으로 하는 고체 상태 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는다. 추가 실시양태에서, 형태 β는 실질적으로 도 11에 제시된 바와 같은 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는다.

일부 실시양태에서, 형태 β는 단결정 X선 회절에 의해 결정된 바와 같이 (실시예 5 참조) 하기 단위 셀 파라미터를 갖는 공간군 P1을 갖는다 :

[표 3]

형태 β는 적어도 약 50%, 적어도 약 75%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%의 순도 수준을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 형태 β는 실질적으로 순수하다.

형태 β는 용매로부터 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴 (화합물 A)을 결정화함으로써 제조될 수 있다. 예를 들면, 화합물 A (예를 들면, 형태 α)를 용매와 조합하여 용액 또는 슬러리를 형성하고, 그로부터 형태 β의 결정을 수득할 수 있다. 일부 실시양태에서, 용매는 니트릴 예컨대 아세토니트릴 또는 1-부탄올과 아세토니트릴의 혼합물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 용매는 각각 약 1:3 (v/v)의 1-부탄올 및 아세토니트릴을 포함한다. 일부 실시양태에서, 화합물 A는 용매와 조합하여 약 30 내지 약 50℃의 온도로 가열될 수 있다. 일부 실시양태에서, 혼합물은 약 35 내지 약 45℃, 또는 약 40℃로 가열될 수 있다. 가열 후, 혼합물은 예컨대 약 실온 (예를 들면, 약 23℃)으로 냉각되어 형태 β 결정질 생성물을 제공할 수 있다.

본 발명은 상기 기재된 방법 중 어느 하나에 의해 제조되는 형태 β를 추가로 제공한다.

형태 γ

본 발명은 또한 형태 γ를 갖는 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴 (화합물 A)의 결정질 형태를 제공한다. 형태 γ에 상응하는 결정질 형태는 예를 들어 DSC 및 TG-DTA에 의해 입증된 바와 같이 무수인 것으로 판단된다 (실시예 3 참조). 일부 실시양태에서, 형태 γ는 2θ (°)에 관하여 약 16.5에서의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 형태 γ는 2θ (°)에 관하여 약 16.5, 약 17.7, 약 21.4, 약 21.8, 및 약 23.1로부터 선택되는 2개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 형태 γ는 2θ (°)에 관하여 약 7.7, 약 10.6, 약 13.3, 약 13.9, 약 15.2, 약 16.5, 약 17.7, 약 17.9, 약 19.0, 약 21.4, 약 21.8 및 약 23.1, 약 23.7 및 약 28.1로부터 선택되는 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 형태 γ는 2θ (°)에 관하여 표 3-1에 열거된 임의의 피크로부터 선택되는 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는다 (실시예 3 참조). 추가 실시양태에서, 형태 γ는 실질적으로 도 3에 제시된 바와 같은 XRPD 패턴을 갖는다.

일부 실시양태에서, 형태 γ는 약 196℃에서의 흡열 피크를 특징으로 하는 DSC 온도기록도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 형태 γ는 약 196℃에서의 외삽된 개시 온도를 특징으로 하는 DSC 온도기록도를 갖는다. 추가 실시양태에서, 형태 γ는 실질적으로 도 6에 제시된 바와 같은 DSC 온도기록도를 갖는다.

일부 실시양태에서, 형태 γ는 약 162.9 ppm에서의 적어도 1개의 피크를 특징으로 하는 고체 상태 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는다. 추가 실시양태에서, 형태 γ는 약 16.9, 약 26.5, 약 32.9, 약 36.4, 약 48.1, 약 53.7, 약 78.6, 약 102.6, 약 116.4, 약 117.9, 약 121.5, 약 151.8, 약 154.6 및 약 162.9 ppm으로부터 선택된 적어도 5개의 피크를 특징으로 하는 고체 상태 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는다. 추가 실시양태에서, 형태 γ는 실질적으로 도 11에 제시된 바와 같은 ¹³C NMR 스펙트럼을 갖는다.

일부 실시양태에서, 형태 γ는 단결정 X선 회절에 의해 결정된 바와 같이 (실시예 5 참조) 하기 단위 셀 파라미터를 갖는 공간군 P2₁을 갖는다:

[표 4]

형태 γ는 적어도 약 50%, 적어도 약 75%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%의 순도 수준을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 형태 γ는 실질적으로 순수하다.

형태 γ는 형태 α의 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴을 형태 γ로 전환시킴으로써 제조될 수 있다. 전환은 예를 들어, 디메틸포름아미드 (DMF) 중에서 형태 α를 교반시킴으로써 수행될 수 있다. 교반은 예를 들어 실온에서 수행될 수 있다. 대안적으로, 형태 γ는 화합물 A를 포름아미드와 조합하고 형태 γ 시드 결정을 첨가함으로써 제조될 수 있다. 제조는 실온에서, 임의로 불활성 분위기 예컨대 질소 하에 수행될 수 있다.

본 발명은 추가로 상기 기재된 방법 중 어느 하나에 의해 제조되는 형태 γ를 제공한다.

조성물

형태 β 및 γ뿐만 아니라, 화합물 A는 실시예 1에 기재된 무수 결정질 형태 α로서 제조되고 수득될 수 있다. 따라서, 본 발명은 화합물 A의 형태 α, β 및 γ 중 2종 이상의 혼합물을 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 형태 α 및 형태 β 둘 다를 포함하는 결정질 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴 (화합물 A)의 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 형태 β는 형태 α에 대해 약 1 내지 약 50% w/w의 양으로 존재한다. 추가 실시양태에서, 형태 β는 형태 α에 대해 약 1 내지 약 20% w/w의 양으로 존재한다. 추가 실시양태에서, 형태 β는 형태 α에 대해 약 1 내지 약 10% w/w의 양으로 존재한다. 추가 실시양태에서, 형태 β는 형태 α에 대해 약 1 내지 약 5% w/w의 양으로 존재한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 형태 α 및 형태 β를 포함하고, 화합물 A의 다른 결정질 형태는 실질적으로 함유하지 않는다. 추가 실시양태에서, 형태 α 및 형태 β를 포함하는 조성물은 추가로 형태 γ를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 본질적으로 형태 α 및 형태 β로 이루어진다.

추가적으로, 본 발명은 형태 β 및 형태 γ 둘 다를 포함하는 결정질 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴 (화합물 A)의 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 형태 γ는 형태 β에 대해 약 1 내지 약 50% w/w의 양으로 존재한다. 추가 실시양태에서, 형태 γ는 형태 β에 대해 약 1 내지 약 20% w/w의 양으로 존재한다. 추가 실시양태에서, 형태 γ는 형태 β에 대해 약 1 내지 약 10% w/w의 양으로 존재한다. 추가 실시양태에서, 형태 γ는 형태 β에 대해 약 1 내지 약 5% w/w의 양으로 존재한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 형태 β 및 형태 γ를 포함하고, 화합물 A의 다른 결정질 형태는 실질적으로 함유하지 않는다. 추가 실시양태에서, 형태 β 및 형태 γ를 포함하는 조성물은 추가로 형태 α를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 본질적으로 형태 β 및 형태 γ로 이루어진다.

본 발명은 형태 β 또는 형태 γ 및 1종 이상의 다른 물질을 함유하는 조성물을 추가로 제공한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 적어도 약 50%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99 중량%의 형태 β 또는 형태 γ를 함유한다.

분석 방법

본 발명은 형태 β의 특징인 XRPD 피크의 피크 면적을 측정하고, 피크 면적을 표준과 비교하는 것을 포함하는, 형태 α의 제조에서 존재하는 형태 β의 양을 결정하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 형태 β의 피크 특징은 약 10.6° 2-세타에서 나타난다. 표준은 형태 α 중 기지의 양의 형태 β의 피크 면적으로부터 계산된 표준 곡선일 수 있다. 유사하게, 본 발명은 형태 γ의 특징인 XRPD 피크의 피크 면적을 측정하고 피크 면적을 표준과 비교하는 것을 포함하는, 형태 α의 제조에서 존재하는 형태 γ의 양을 측정하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 형태 γ의 피크 특징은 약 16.6° 2-세타에서 나타난다. 표준은 형태 α 중 기지의 양의 형태 γ의 피크 면적으로부터 계산된 표준 곡선일 수 있다.

제약 조성물 및 용도

본 발명의 결정질 형태는 적어도 1종의 제약상 허용되는 담체 (또는 부형제)와 함께, 본 발명의 결정질 형태 또는 본 발명의 조성물을 포함하는 제약 조성물로서 제조될 수 있다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 경구, 비경구, 폐, 국부 또는 국소 투여에 적합하다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 경구 제제 예컨대 정제, 캡슐, 과립, 분말, 로젠지, 시럽, 에멀젼, 현탁액 또는 비경구 제제 예컨대 외용 제제, 좌제, 주사제, 점적제, 비강 약물, 폐 약물 형태이다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 예컨대 연고로서의 국소 적용에 적합하다.

본 발명의 제약 조성물은 본 발명의 1종 이상의 결정질 형태, 또는 본 발명의 조성물을 적어도 1종 이상의 제약상 허용되는 담체와 함께 의약 제조 분야의 공지된 방법에 따른 적절한 양으로 혼합함으로써 제조될 수 있다. 제약 조성물의 화합물 A의 양은 그의 투여 형태, 투여량 등에 따라 달라지고, 예를 들어 조성물의 약 0.1 내지 100 중량%일 수 있다. 본 발명의 제약 조성물은 예를 들면, 정제, 캡슐, 환제, 분말 또는 연고 형태일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 정맥내 (IV), 근육내 (IM) 또는 피하 (SC) 투여를 위한 액체 중 재구성에 적합한 분말 형태일 수 있다. 추가적으로, 본 발명의 제약 조성물은 추가로 제2 치료제를 포함할 수 있다.

"제약상 허용되는 담체"는 제약 물질을 위한 다양한 통상적인 유기 또는 무기 담체 물질, 예를 들어, 고체 제제를 위한 희석제, 붕해제, 결합제, 유동화제 및 윤활제, 액체 제제를 위한 용매, 가용화제, 현탁화제, 등장화제, 완충제 및 수딩제, 및 반고체 제제를 위한 베이스, 유화제, 함습제, 안정화제, 안정화작용제, 분산제, 가소제, pH 조절제, 흡수 촉진제, 겔화제, 방부제, 충전제, 용해제, 가용화제, 및 현탁화제를 포함한다. 또한, 필요한 경우에 보존제, 항산화제, 착색제 및 감미제를 포함한 첨가제가 사용될 수 있다.

희석제의 예는 락토스, 수크로스, D-만니톨, D-소르비톨, 옥수수 전분, 덱스트린, 미세결정질 셀룰로스, 결정질 셀룰로스, 카르멜로스, 카르멜로스 칼슘, 소듐 카르복시메틸 스타치, 저치환된 히드록시프로필셀룰로스, 아라비아 검 등을 포함한다.

붕해제의 예는 카르멜로스, 카르멜로스 칼슘, 카르멜로스 소듐, 소듐 카르복시메틸 스타치, 크로스카르멜로스 소듐, 크로스포비돈, 저치환된 히드록시프로필셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 결정질 셀룰로스 등을 포함한다.

결합제의 예는 히드록시프로필셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 포비돈, 결정질 셀룰로스, 수크로스, 덱스트린, 전분, 젤라틴, 카르멜로스 소듐, 아라비아 검 등을 포함한다.

유동화제의 예는 경질 무수 규산, 스테아르산마그네슘 등을 포함한다.

윤활제의 예는 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘, 활석 등을 포함한다.

용매 매질의 예는 정제수, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 마크로골, 참깨 오일, 옥수수 오일, 올리브 오일 등을 포함한다.

가용화제의 예는 프로필렌 글리콜, D-만니톨, 벤질 벤조에이트, 에탄올, 트리에탄올아민, 탄산나트륨, 시트르산나트륨 등을 포함한다.

현탁화제의 예는 벤즈알코늄 클로라이드, 카르멜로스, 히드록시프로필셀룰로스, 프로필렌 글리콜, 포비돈, 메틸셀룰로스, 글리세릴 모노스테아레이트 등을 포함한다.

등장화제의 예는 글루코스, D-소르비톨, 염화나트륨, D-만니톨 등을 포함한다.

완충제의 예는 소듐 히드로겐 포스페이트, 아세트산나트륨, 탄산나트륨, 시트르산나트륨 등을 포함한다.

수딩제의 예는 벤질 알콜 등을 포함한다.

보존제의 예는 에틸 파라옥시벤조에이트, 클로로부탄올, 벤질 알콜, 소듐 데히드로아세테이트, 소르브산 등을 포함한다.

항산화제의 예는 아황산나트륨, 아스코르브산 등을 포함한다.

착색제의 예는 식품 염료 (예를 들면, 식용 레드 2 또는 3, 식용 옐로우 4 또는 5 등), β-카로틴 등을 포함한다.

감미제의 예는 사카린 소듐, 이칼륨 글리시리지네이트, 아스파르탐 등을 포함한다.

본 발명의 제약 조성물은 환자 예컨대 비-인간 포유동물 (예를 들면, 마우스, 래트, 햄스터, 기니 피그, 토끼, 고양이, 개, 돼지, 소, 말, 양, 원숭이 등) 또는 인간에게, 질환의 치료 또는 예방을 위한 치료 유효량으로, 경구로 또는 비경구로 (예를 들면, 국부로, 직장으로, 정맥내로 등) 투여될 수 있다. 용어 "포유동물"은 인간 및 비-인간 포유동물 대상체 둘 다를 포함하는 것으로 의도된다. 제약 조성물의 용량은 대상체, 질환, 상태, 투여 형태, 투여 경로에 따라 달라진다. 기관 이식 거부, 이식 후 이식편 대 숙주 반응, 자가면역 질환 또는 알레르기성 질환 등을 앓고 있는 성인 환자 (체중: 약 60 kg)에게 경구로 투여하기 위한 용량은, 예를 들어 1일 약 1 mg 내지 1 g의 범위일 수 있다. 용량은 한 번에 또는 여러 분할 용량으로 투여될 수 있다.

국소 제약 조성물을 위해, 담체 (또는 희석제)는 백색 연질 파라핀, 경질 파라핀, 스쿠알렌 또는 그의 조합물을 포함할 수 있다. 백색 연질 파라핀, 경질 파라핀 및 스쿠알란은 각각 70 내지 90 중량%, 5 내지 10 중량% 및 5 내지 20 중량%의 블렌드 비로 조합될 수 있다. 실시예 제제는 화합물 A, 백색 연질 파라핀, 5 ± 2 중량%의 경질 파라핀 및 10 ± 2 중량%의 스쿠알란을 함유한다.

국소 작용제는 투여 형태에 따라, 예를 들어, 도포, 도찰 또는 분무에 의해 적용될 수 있다. 이환 부위로의 국소 작용제의 적용량은 활성 성분의 함량 등에 따라 선택될 수 있고, 국소 작용제는 예를 들어, 한 번에 또는 1일에 여러 분할된 양으로 적용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 적용은 1일 1회 또는 1일 2회이다.

제약 조성물은 허용되는 제약 절차, 예를 들면, 그 전문이 본원에 참조로 포함된 문헌 [Remingtons Pharmaceutical Sciences, 17th edition, ed. Alfonoso R. Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, PA (1985)]에 기재된 바에 따라 제조될 수 있다.

본 발명의 결정질 형태는 본 발명의 결정질 형태를 야누스 키나제 억제제와 접촉시키는 것을 포함하는, 야누스 키나제를 억제, 예컨대 JAK3, JAK2 또는 둘 다를 억제하는 방법에 사용될 수 있다. 접촉은 시험관내 또는 생체내일 수 있다.

본 발명의 결정질 형태 또는 조성물은 환자에서 하기 질환 중 1종 이상을 치료 또는 예방하는 방법에서 활성 성분으로서 사용될 수 있다:

(a) 기관 이식 거부 또는 이식 후 이식편 대 숙주 반응;

(b) 류마티스 관절염, 건선, 건선성 관절염, 다발성 경화증, 궤양성 결장염, 크론병, 전신 홍반성 루푸스, 제I형 당뇨병, 중증 근무력증, 캐슬만병, 소아 특발성 관절염, 안구 건조를 포함한 자가면역 질환; 및

(c) 천식, 아토피성 피부염, 비염을 포함한 알레르기성 질환.

일부 실시양태에서, 본 발명의 결정질 형태는 류마티스 관절염, 건선, 원형 탈모증, 안구 건조, 아토피성 피부염, 습진 또는 손 습진을 위한 치료제 또는 예방제의 활성 성분으로서 사용될 수 있다.

본 발명의 결정질 형태는 진성 다혈구혈증, 원발성 골수섬유증, 본태성 혈소판혈증 등을 포함한 만성 골수증식성 질환을 위한 치료제 또는 예방제의 활성 성분으로서 사용될 수 있다.

본원에 사용된 용어 화합물의 "치료 유효량"은 주어진 질환 및 그의 합병증의 임상 징후를 치유, 완화 또는 부분적으로 정지시키기에 충분한 양을 의미한다. 이를 달성하기에 적합한 양이 "치료 유효량"으로서 정의된다. 각각의 목적을 위한 유효량은 질환 또는 부상의 중증도, 뿐만 아니라 대상체의 체중 및 일반적 상태에 따라 달라질 것이다.

본원에 사용된 용어 "치료하는"은 증상의 호전, 악화의 예방, 완화의 유지, 악화의 예방 및 재발의 방지를 포함한다. 용어 "치료하는"은 또한 질환, 장애 또는 상태의 진행의 지연, 증상 및 합병증의 호전, 완화 또는 경감, 및/또는 질환, 장애 또는 상태의 치유 또는 제거를 포함할 수 있다.

용어 "치료하는"은 또한 질환, 상태 또는 장애를 퇴치하기 위한 목적으로 환자의 관리 및 치유를 의미할 수 있다.

용어 "예방하는"은 증상의 발생을 억제하는 것을 지칭한다.

조합 요법

본 발명의 결정질 형태는 치료 유효량의 1종 이상의 추가의 치료제와 조합하여 환자에게 투여될 수 있다. 본 발명의 결정질 형태는 추가의 치료제와 함께 (예를 들면, 단일 고정 투여 형태로 또는 개별 투여 형태로) 공동으로 (예를 들면, 함께) 투여될 수 있다. 유사하게, 본 발명의 결정질 형태 및 추가의 치료제는 환자에게 순차적으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 추가의 치료제는 본 발명의 결정질 형태가 그의 치료 효과를 나타내는 동안 투여되거나 또는 그 반대이다.

본원에 개시된 발명이 더 효과적으로 이해될 수 있도록, 실시예를 하기에 제공한다. 이들 실시예는 예시적 목적으로만 존재하고, 어떤 방식으로도 본 발명을 제한하는 것으로서 해석되지는 않음을 이해해야 한다.

실시예 1

3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴 (화합물 A)의 제조 및 결정질 형태 α의 특징화.

화합물 A의 제조

화합물 A를 PCT/JP2016/070046에 기재된 바와 같은 하기 합성 방법에 의해 제조하였다 (실시예 1-15). 결정화 단계에서, 시드 결정을 사용하여 결정화를 용이하게 하였으나, 시드 결정 없이 기재된 과정에 따라 각각의 화합물의 결정을 제조하는 것이 가능하다.

본원에 사용된 약어는 하기와 같은 의미를 갖는다:

S-BAPO: (S)-2-(벤질아미노) 프로판-1-올

S-BBMO: tert-부틸 (S)-N-벤질-N-(1-히드록시프로판-2-일)글리시네이트

R-BCAB: tert-부틸 (R)-N-벤질-N-(2-클로로프로필)글리시네이트

S-MABB: tert-부틸 (3S)-1-벤질-3-메틸아제티딘-2-카르복실레이트

S-MABB-HC: tert-부틸 (3S)-1-벤질-3-메틸아제티딘-2-카르복실레이트 히드로클로라이드

S-MACB-HC: tert-부틸 (3S)-3-메틸아제티딘-2-카르복실레이트 히드로클로라이드

S-ZMAB: 1-벤질 2-(tert-부틸) (3S)-3-메틸아제티딘-1,2-디카르복실레이트

RS-ZMBB: 1-벤질 2-(tert-부틸) (2R,3S)-2-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-3-메틸아제티딘-1,2-디카르복실레이트

RS-ZMAA: (2R,3S)-1-((벤질옥시)카르보닐)-2-(카르복시메틸)-3-메틸아제티딘-2-카르복실산

RS-ZMAA-DN.2H₂O: 이나트륨 (2R,3S)-1-((벤질옥시)카르보닐)-2-(카르복시메틸)-3-메틸아제티딘-2-카르복실레이트 2수화물

RS-ZMOO: 벤질 (2R,3S)-2-(2-히드록시에틸)-2-(히드록시메틸)-3-메틸아제티딘-1-카르복실레이트

RS-ZMSS: 벤질 (2R,3S)-3-메틸-2-(2-((메틸술포닐)옥시)에틸)-2-(((메틸술포닐)옥시)메틸)아제티딘-1-카르복실레이트

SR-ZMDB: 벤질 (3S,4R)-6-벤질-3-메틸-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-카르복실레이트

SR-MDOZ: 벤질 (3S,4R)-3-메틸-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-카르복실레이트

SR-MDOZ-OX: 벤질 (3S,4R)-3-메틸-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-카르복실레이트 옥살레이트

SR-MDPZ: 벤질 (3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-카르복실레이트

SR-MDOP: 4-[(3S,4R)-3-메틸-1,6-디아자스피로[3.4]-옥탄-6-일]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

화합물 A: 3-[(3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일]-3-옥소프로판니트릴

CPPY: 4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

DPCN: 1-시아노아세틸-3,5-디메틸-1H-피라졸

TBBA: 브로모아세트산 tert-부틸 에스테르

THF: 테트라히드로푸란.

사용된 측정 기기 및 측정 조건은 하기와 같다.

¹H NMR 스펙트럼을 내부 표준로서의 테트라메틸실란을 사용하여 CDCl₃ 또는 DMSO-d₆ 중에서 분석하였고, 모든 δ 값은 ppm으로 제시된다. 달리 나타내지 않는 한, 400 MHz NMR 기기를 사용하였다.

실시예에서 기호는 하기를 의미한다.

s: 단일선

d: 이중선

t: 삼중선

q: 사중선

dd: 이중 이중선

ddd: 이중 이중 이중선

brs: 넓은 단일선

m: 다중선

J: 커플링 상수

샘플 중 이온 함량을 그의 3개의 관찰치 데이터를 평균하여 결정하였다.

측정 기기: 이온 크로마토그래프 LC-20 시스템 (시마즈(SHIMADZU))

측정 조건: 전기 전도성 검출기 시마즈 CDD-10A VP

음이온 분석을 위한 칼럼 시마즈 SHIM-PAC IC-A3

양이온 분석을 위한 칼럼 시마즈 SHIM-PAC IC-C1

샘플 중 물 함량을 칼 피셔 방법에 의해 측정하였다.

측정 기기: 칼 피셔 수분 측정기 CA-06 (미츠비시 케미칼(MITSUBISHI CHEMICAL))

측정 조건:

샘플 양: 약 20 mg

시약: 애노드 용액 아쿠아마이크론(Aquamicron) AX (API 코포레이션)

캐소드액 아쿠아마이크론 CXU (API 코포레이션)

원소 분석에 의해 샘플 중 탄소, 수소, 및 질소의 각각의 중량%를 측정하였다.

단계 A. S-MABB-HC (화합물 [5])의 제조

[화학식 2]

단계 1

[화학식 3]

S-BAPO [1] (35.0 g, 212 mmol)을 물 (175 mL)에 질소 분위기 하에 실온에서 첨가하였다. 생성된 현탁액에 실온에서 톨루엔 (53 mL) 및 탄산칼륨 (32.2 g, 233 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액에 TBBA (434.4 g, 223 mmol)을 실온에서 적가한 다음, 사용한 적하 깔때기를 톨루엔 (17 mL)으로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 21시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 톨루엔 (105 mL)을 반응 혼합물에 첨가한 후, 혼합물을 교반하고, 유기 층을 분리하였다. 유기 층을 물 (175 mL)로 세척하고, 수성 층을 제거한 다음, 용매를 진공 하에 유기 층으로부터 제거하였다. 톨루엔 (105 mL)을 잔류물에 첨가하고, 톨루엔 용액을 농축시켰다. 작업을 추가로 2회 반복하여 S-BBMO [2] (이론상 74.0 g, 212 mmol)의 톨루엔 용액을 수득하였다. 수율을 100%로 가정하고, 수득한 S-BBMO의 톨루엔 용액을 후속 단계에 사용하였다.

동일한 과정에 의해 제조된 S-BBMO의 조 생성물을 증발 건조시킨 다음 NMR 및 MS를 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-d6) δ: 7.36-7.13 (5H, m), 4.26 (1H, dd, J = 6.8, 3.9 Hz), 3.72 (2H, dd, J = 14.2, 6.8 Hz), 3.47-3.38 (1H, m), 3.30-3.08 (3H, m), 2.79 (1H, sext, J = 6.8 Hz), 1.35 (9H, s), 0.96 (3H, d, J = 6.8 Hz).

MS: m/z = 280 [M+H]⁺

단계 2

[화학식 4]

S-BBMO [2] (74.0 g, 212 mmol)의 톨루엔 용액에 톨루엔 (200 mL), 테트라히드로푸란 (35 mL)에 이어서 트리에틸아민 (25.7 g, 254 mmol)을 실온에서 질소 분위기 하에 첨가하였다. 혼합물에 메탄술포닐 클로라이드 (26.7 g, 233 mmol)를 0℃에서 적가한 다음, 사용한 적하 깔때기를 톨루엔 (10 mL)으로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 추가로 65℃에서 22시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 중탄산나트륨 물 (105 mL)을 반응 혼합물에 첨가한 후, 혼합물을 교반하고, 유기 층을 분리하였다. 유기 층을 물 (105 mL)로 세척하고, 수성 층을 제거한 다음, 용매를 진공 하에 유기 층으로부터 제거하였다. 톨루엔 (105 mL)을 잔류물에 첨가하고, 톨루엔 용액을 농축시켰다. 작업을 추가로 2회 반복하여 R-BCAB [3] (이론상 75.3 g, 212 mmol)의 톨루엔 용액을 수득하였다. 수율을 100%로 가정하고, 수득한 R-BCAB의 톨루엔 용액을 후속 단계에 사용하였다. 동일한 과정에 의해 제조한 R-BCAB의 조 생성물을 증발 건조시킨 다음 NMR 및 MS를 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ: 7.28-7.11 (5H, m), 4.24-4.11 (1H, m), 3.80 (2H, d, J = 3.6 Hz), 3.24 (2H, d, J = 3.6 Hz), 2.98-2.78 (2H, m), 1.46-1.37 (12H, m).

MS: m/z = 298 [M+H]⁺

단계 3

[화학식 5]

R-BCAB [3] (75.3 g, 212 mmol)의 톨루엔 용액에 테트라히드로푸란 (88.0 mL) 및 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-2(1H)-피리미디논 (42.0 mL)을 실온에서 질소 분위기 하에 첨가하였다. 생성된 용액에 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 /테트라히드로푸란 (195 mL, 233 mmol)의 용액을 0℃에서 적가한 다음, 사용한 적하 깔때기를 테트라히드로푸란 (17.0 mL)으로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온으로 가온하였다. 물 (175 mL) 및 톨루엔 (175 mL)을 반응 혼합물에 첨가한 다음, 혼합물을 교반하고, 유기 층을 분리하였다. 생성된 유기 층을 수성 염화암모늄 (175 mL)에 이어서 물 (175 mL)로 세척하고, 용매를 진공 하에 유기 층으로부터 제거하였다. 에틸 아세테이트 (175 mL)를 잔류물에 첨가하고, 에틸 아세테이트 용액을 농축시켰다. 작업을 추가로 2회 반복하여 S-MABB [4] (이론상 66.5 g, 212 mmol)의 에틸 아세테이트 용액을 수득하였다. 수율을 100%로 가정하고, 수득한 S-MABB의 에틸 아세테이트 용액을 후속 단계에 사용하였다.

동일한 과정에 의해 제조한 S-MABB의 조 생성물을 증발 건조시킨 다음 NMR 및 MS를 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ: 7.28-7.25 (10H, m), 3.75 (1H, d, J = 12.7 Hz), 3.68 (1H, d, J = 1.4 Hz), 3.66 (1H, d, J = 6.7 Hz), 3.46 (2H, d, J = 12.7 Hz), 3.30-3.17 (2H, m), 2.95 (1H, dd, J = 6.2, 1.2 Hz), 2.77 (1H, dd, J = 6.1, 2.2 Hz), 2.65-2.55 (1H, m), 2.48-2.40 (2H, m), 1.35 (9H, s), 1.35 (9H, s), 1.12 (3H, d, J = 7.2 Hz), 1.09 (3H, d, J = 6.2 Hz).

MS: m/z = 262 [M+H]⁺

단계 4

[화학식 6]

S-MABB [4] (이론상 66.5 g, 212 mmol)의 에틸 아세테이트 용액에 에틸 아세테이트 (175 mL) 및 활성탄 (3.5 g)을 질소 분위기 하에 첨가한 다음, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 활성탄을 여과에 의해 제거하고, 필터 상의 잔류물을 에틸 아세테이트 (175 mL)로 세척하였다. 세척물을 여과물에 첨가하였다. 0℃에서 본원에 기재된 방법에 따라 제조된 S-MABB-HC 결정 (17.5 mg)을 용액에 첨가하고, 이어서 여기에 4 M 염화수소/에틸 아세테이트 (53.0 mL, 212 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 17시간 동안 교반한 다음, 침전된 고체를 필터 상에서 수집하고, 에틸 아세테이트 (70 mL)로 세척하였다. 생성된 습윤 고체를 진공 하에 건조시켜 S-MABB-HC [5] (48.3 g, 162 mmol, 수율: 76.4%)을 수득하였다.

동일한 과정에 의해 제조된 S-MABB-HC의 NMR, MS, 및 Cl-함량을 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ: 11.08 (1H, br s), 10.94 (1H, br s), 7.52-7.42 (10H, m), 5.34 (1H, t, J = 8.4 Hz), 4.90 (1H, br s), 4.45-4.10 (5H, m), 3.92-3.49 (3H, br m), 3.10-2.73 (2H, br m), 1.35 (9H, s), 1.29 (9H, s), 1.24 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.17 (3H, d, J = 7.4 Hz).

MS: m/z = 262 [M+H-HCl]⁺

Cl 함량 (이온 크로마토그래피): 11.9% (이론상: 11.9%).

단계 B. S-MACB-HC (화합물 [6])의 제조

[화학식 7]

메탄올 (15.0 mL) 중 S-MABB-HC [5] (5.0 g, 16.8 mmol)의 용액에 질소 분위기 하에 실온에서 5% 팔라듐 탄소 (가와켄 파인 케미칼스 캄파니, 리미티드 (Kawaken Fine Chemicals Co., Ltd.) 제조, PH 유형, 54.1% 물-함량 1.0 g)를 첨가하였다. 반응 용기를 수소로 충전하고, 반응 혼합물을 0.4 MPa의 수소 압력에서 실온에서 12시간 동안 교반하고, 반응 혼합물 중 수소를 질소로 대체한 다음, 5% 팔라듐 탄소를 여과에 의해 제거하였다. 반응 용기 및 5% 팔라듐 탄소를 메탄올 (10 mL)로 세척하였다. 세척물을 여과물에 첨가하여 S-MACB-HC [6] (이론상 24.8 g, 16.8 mmol)의 메탄올 용액을 수득하였다. 수율을 100%로 가정하고, S-MACB-HC의 수득한 메탄올 용액을 후속 단계에 사용하였다.

동일한 과정에 의해 제조한 S-MACB-HC의 조 생성물을 증발 건조시킨 다음 NMR 및 MS를 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ: 9.60 (br s, 1H), 4.97 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 4.61 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 4.01 (dd, 1H, J = 10.0, 8.4 Hz), 3.78-3.74 (m, 1H), 3.54 (dd, 1H, J = 9.6, 8.4 Hz), 3.35 (dd, 1H, J = 10.0, 6.0 Hz), 3.15-3.03 (m, 1H), 3.00-2.88 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.47 (s, 9H), 1.22 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.14 (d, 3H, J = 7.2 Hz).

MS: m/z = 172 [M+H]⁺ (유리 형태)

단계 C. S-ZMAB (화합물 [7])의 제조

[화학식 8]

S-MACB-HC [6] (이론상 24.8 g, 16.8 mmol)의 메탄올 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (4.8 g, 36.9 mmol)을 실온에서 질소 분위기 하에 적가한 다음, 사용한 적하 깔때기를 테트라히드로푸란 (2.5 mL)으로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물에 벤질 클로로포르메이트 (3.0 g, 17.6 mmol)를 0℃에서 적가한 다음, 사용한 적하 깔때기를 테트라히드로푸란 (2.5 mL)으로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 용매를 진공 하에 제거하였다. 톨루엔 (25.0 mL) 및 시트르산의 수용액 (25.0 mL)을 잔류물에 첨가한 다음, 혼합물을 교반하고, 유기 층을 분리하였다. 생성된 유기 층을 중탄산나트륨 물 (25.0 mL)에 이어서 물 (25.0 mL)로 세척하고, 유기 층 중 용매를 진공 하에 유기 층으로부터 제거하였다. 톨루엔 (15.0 mL)을 잔류물에 첨가하고, 톨루엔 용액을 농축시켰다. 작업을 추가로 1회 반복하여 S-ZMAB [7] (이론상 6.9 g, 16.8 mmol)의 톨루엔 용액을 수득하였다. 수율을 100%로 가정하고, 수득한 S-ZMAB의 톨루엔 용액을 후속 단계에 사용하였다.

동일한 과정에 의해 제조한 S-ZMAB의 조 생성물을 증발 건조시킨 다음 NMR 및 MS를 측정하였다.

¹H NMR (CDCl₃) δ: 7.38-7.28 (m, 10H), 5.16-5.04 (m, 4H), 4.60 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 4.18-4.12 (m, 2H), 4.04 (t, 1H, J = 8.6 Hz), 3.66 (dd, 1H, J = 7.6, 7.2 Hz), 3.50 (dd, 1H, J = 8.0, 5.2 Hz), 3.05-2.94 (m, 1H), 2.60-2.50 (m, 1H), 1.43 (br s, 18H), 1.33 (d, 3H, J = 6.5 Hz), 1.15 (d, 3H, J = 7.2 Hz).

MS: m/z = 328 [M+Na]⁺.

단계 D. RS-ZMBB (화합물 [8])의 제조

[화학식 9]

S-ZMAB [7] (6.9 g, 16.8 mmol)의 톨루엔 용액에 테트라히드로푸란 (15.0 mL)을 실온에서 질소 분위기 하에 첨가하였다. 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드/테트라히드로푸란 (14.7 mL, 17.6 mmol)의 용액을 톨루엔 용액에 -70℃에서 적가하였다. 사용한 적하 깔때기를 테트라히드로푸란 (2.5 mL)으로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 -70℃에서 6시간 동안 교반한 다음, 테트라히드로푸란 (2.5 mL) 중 TBBA (3.4 g, 17.6 mmol)의 용액을 반응 혼합물에 -70℃에서 적가하였다. 사용한 적하 깔때기를 테트라히드로푸란 (2.5 mL)으로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온으로 가온하였다. 반응 혼합물에 수성 염화암모늄 (25 mL) 및 톨루엔 (25 mL)을 첨가한 다음, 혼합물을 교반하고, 유기 층을 분리하였다. 생성된 유기 층을 시트르산 (25 mL, x 2)의 수용액, 중탄산나트륨 물 (25 mL)에 이어서 물 (25 mL)로 세척한 다음, 용매를 진공 하에 유기 층으로부터 제거하였다. 아세토니트릴 (15 mL)을 잔류물에 첨가하고, 아세토니트릴 용액을 농축시켰다. 작업을 추가로 2회 반복하였다. 아세토니트릴 (15 mL) 및 활성탄 (0.25 g)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 활성탄을 여과에 의해 제거하고, 반응 용기 및 필터 상의 잔류물을 아세토니트릴 (10 mL)로 세척하였다. 세척물을 여과물에 첨가한 다음, 여과물을 진공 하에 농축시켜 RS-ZMBB [8] (이론상 13.2 g, 16.8 mmol)의 아세토니트릴 용액을 수득하였다. 수율을 100%로 가정하고, 수득한 RS-ZMBB의 아세토니트릴 용액을 후속 단계에 사용하였다.

동일한 과정에 의해 제조한 RS-ZMBB의 조 생성물을 증발 건조시킨 다음 NMR 및 MS를 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ: 7.38-7.29 (m, 5H), 5.09-4.96 (m, 2H), 3.91 (t, 0.4H, J = 8.0 Hz), 3.79 (t, 0.6H, J = 8.0 Hz), 3.55 (t, 0.4H, J = 7.2 Hz), 3.46 (t, 0.6H, J = 7.5 Hz), 3.14-3.04 (m, 1H), 2.83-2.72 (m, 2H), 1.38 (br s, 9H), 1.37 (br s, 3.6H), 1.34 (br s, 5.4H), 1.12-1.09 (m, 3H).

MS: m/z = 420 [M+H]⁺.

단계 E. RS-ZMAA-DN.2H₂O (화합물 [9])의 제조

[화학식 10]

RS-ZMBB [8] (13.2 g, 이론상 16.8 mmol)의 아세토니트릴 용액에 질소 분위기 하에 실온에서 아세토니트릴 (15 mL)을 첨가하였다. p-톨루엔술폰산 모노-수화물 (6.4 g, 33.6 mmol)을 실온에서 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반한 다음 실온으로 냉각시키고, 물 (7.5 mL)을 반응 혼합물에 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시킨 다음, 4 mol/L 수성 수산화나트륨 (17.6 mL, 70.5 mmol)을 여기에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 아세토니트릴 (75 mL)을 여기에 실온에서 적가하고, 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 침전된 고체를 필터 상에서 수집하고, 아세토니트릴: 물 = 4: 1의 혼합물 (10 mL)에 이어서 아세토니트릴 (10 mL)로 세척하였다. 생성된 습윤 고체를 진공 하에 건조시켜 RS-ZMAA-DN.2H₂O [9] (5.2 g, 13.4 mmol, 수율: 85.4%)을 수득하였다.

동일한 과정에 의해 제조한 RS-ZMAA-DN.2H₂O를 NMR, MS, Na-함량, 및 물-함량에 대해 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ: 7.32-7.22 (m, 5H), 4.97 (d, 1H, J = 12.7 Hz), 4.84 (d, 1H, J = 12.7 Hz), 3.79 (t, 1H, J = 8.0 Hz), 3.29 (d, 1H, J = 14.8 Hz), 3.16-3.12 (m, 1H), 2.17-2.09 (m, 2H), 1.07 (d, 3H, J = 6.9 Hz).

MS: m/z = 352 [M+H]⁺ (무수물)

Na 함량 (이온 크로마토그래피): 13.3% (물 함량의 보정 후)(이론상 13.1%)

물 함량 (칼 피셔 방법): 9.8% (이론상 9.3%)

단계 F. RS-ZMAA (화합물 [10])의 제조

[화학식 11]

1 mol/L 염산 (180 mL)에 RS-ZMAA-DN.2H₂O [9] (30 g, 77.5 mmol) 및 아세토니트릴 (60 mL)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 약 15분 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트 (240 mL)를 반응 혼합물에 첨가한 다음, 혼합물을 교반하고, 유기 층을 분리하였다. 유기 층을 10% 염수 (60 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 (6 g)과 교반하고, 황산마그네슘을 여과에 의해 제거하고, 필터 상의 잔류물을 에틸 아세테이트 (60 mL)로 세척하였다. 여과물 및 세척물을 합하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 테트라히드로푸란 (240 mL)을 잔류물에 첨가하고, 테트라히드로푸란 용액을 농축시켰다. 작업을 추가로 2회 반복하였다. 테트라히드로푸란 (60 mL)을 잔류물에 첨가하여 RS-ZMAA [10]의 테트라히드로푸란 용액을 수득하였다. 수율을 100%로 가정하고, 수득한 RS-ZMAA의 테트라히드로푸란 용액을 후속 단계에 사용하였다.

동일한 과정에 의해 제조된 RS-ZMAA의 NMR 및 MS를 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-D₆) δ: 7.35-7.28 (m, 5H), 5.06-4.94 (m, 2H), 3.86 (dt, 1H, J = 48.4, 7.9 Hz), 3.50 (dt, 1H, J = 37.9, 7.4 Hz), 3.16-3.02 (br m, 1H), 2.91-2.77 (br m, 2H), 1.08 (d, 3H, J = 6.9 Hz)

MS: m/z = 308 [M+H]⁺.

단계 G. RS-ZMOO (화합물 [11])의 제조

[화학식 12]

RS-ZMAA [10] (이론상 25.8 mmol)의 테트라히드로푸란 용액에 질소 분위기 하에 테트라히드로푸란 (50 mL)을 첨가하였다. 삼플루오린화붕소 에테레이트 착물 (4.40 g)을 0℃ 내지 5℃에서 여기에 적가하였다. 사용한 적하 깔때기를 테트라히드로푸란 (5 mL)으로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물에 1.2 mol/L 보란-테트라히드로푸란 착물 (43.0 mL)을 0℃ 내지 5℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 0℃ 내지 5℃에서 약 30분 동안 교반한 다음, 실온에서 추가로 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 1.2 mol/L 보란-테트라히드로푸란 착물 (21.1 mL)을 0℃ 내지 5℃에서 적가하고, 이어서 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 교반 후, 물 (40 mL)을 반응 혼합물에 0℃ 내지 15℃에서 적가하였다. 반응 혼합물에 0℃ 내지 15℃에서 중탄산나트륨 (5.42 g)을 첨가하였다. 용기 중 잔류한 중탄산나트륨을 물 (10 mL)로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 톨루엔 (50 mL)을 여기에 첨가하고, 반응 혼합물을 추가로 교반하였다. 유기 층을 분리하였다. 생성된 유기 층을 10% 염수 (20 mL x 1), 5% 중탄산나트륨 물 (20 mL)과 10% 염수 (20 mL)의 혼합물 (x 3), 5% 수성 황산수소칼륨 (10 mL)과 10% 염수 (10 mL)의 혼합물 (x 1)에 이어서 10% 염수 (20 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 (8.9 g)과 교반하고, 황산마그네슘을 여과에 의해 제거하고, 필터 상의 잔류물을 톨루엔 (20 mL)으로 세척하였다. 세척물을 여과에 첨가한 다음, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 농축된 잔류물에 톨루엔 (80 mL)을 첨가하였다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 여기에 톨루엔 (15 mL)을 첨가하여 RS-ZMOO[11]의 톨루엔 용액을 수득하였다. 수율을 100%로 가정하고 수득한 RS-ZMOO의 톨루엔 용액을 후속 단계에 사용하였다.

동일한 과정에 의해 제조된 RS-ZMOO를 NMR 및 MS에 대해 측정하였다.

¹H NMR (CDCl₃) δ: 7.39-7.30 (m, 5H), 5.10 (s, 2H), 4.15-4.01 (br m, 2H), 3.83-3.73 (br m, 3H), 3.48 (dd, 1H, J = 8.3, 6.4 Hz), 2.59-2.50 (br m, 1H), 2.46-2.40 (br m, 1H), 2.07-1.99 (m, 1H), 1.14 (d, 3H, J = 7.2 Hz)

MS: m/z = 280 [M+H]⁺.

단계 H. RS-ZMSS (화합물 [12])의 제조

[화학식 13]

RS-ZMOO [11] (이론상 23.7 mmol)의 톨루엔 용액에 질소 분위기 하에 톨루엔 (55 mL)을 첨가하였다. 트리에틸아민 (5.27 g)을 여기에 -10℃ 내지 10℃에서 적가하고, 사용한 적하 깔때기를 톨루엔 (1.8 mL)으로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 이 반응 혼합물에 메탄술포닐 클로라이드 (5.69 g)를 -10℃ 내지 10℃에서 적가한 다음, 사용한 적하 깔때기를 톨루엔 (1.8 mL)으로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃ 내지 10℃에서 약 2시간 동안 교반한 다음, 물 (28 mL)을 여기에 0℃ 내지 20℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃ 내지 20℃에서 약 30분 동안 교반한 다음, 유기 층을 분리하였다. 생성된 유기 층을 10% 염수 (18 mL)로 2회 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 (2.75 g)과 교반하고, 황산마그네슘을 여과에 의해 제거하고, 필터 상의 잔류물을 톨루엔 (18 mL)으로 세척하였다. 세척물을 여과물에 첨가한 다음, 용매를 여과물로부터 진공 하에 제거하였다. 농축된 잔류물에 최대 18 mL의 톨루엔을 첨가하여 RS-ZMSS [12]의 톨루엔 용액을 수득하였다. 수율을 100%로 가정하고, 수득한 RS-ZMSS의 톨루엔 용액을 후속 단계에 사용하였다.

동일한 과정에 의해 제조된 RS-ZMSS를 NMR 및 MS에 대해 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-D₆) δ: 7.37-7.27 (br m, 5H), 5.10-4.98 (m, 2H), 4.58-4.22 (br m, 4H), 3.84 (dt, 1H, J = 45.6, 8.1 Hz), 3.48-3.33 (br m, 1H), 3.17-3.10 (m, 6H), 2.81-2.74 (br m, 1H), 2.22-2.12 (m, 2H)

MS: m/z = 436 [M+H]⁺.

단계 I. SR-ZMDB (화합물 [13])의 제조

[화학식 14]

RS-ZMSS [12] (이론상 23.7 mmol)의 톨루엔 용액에 질소 분위기 하에 톨루엔 (55 mL)을 첨가하였다. 벤질아민 (17.8 g)을 여기에 실온에서 적가하고, 사용한 적하 깔때기를 톨루엔 (9.2 mL)으로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 약 1시간 동안 교반하고, 55℃ 내지 65℃에서 약 3시간 동안 교반한 다음, 70℃ 내지 80℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 10% NaCl (28 mL)을 여기에 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 약 30분 동안 교반하였다. 톨루엔 (37 mL)을 반응 혼합물에 첨가한 다음, 혼합물을 교반하고, 유기 층을 분리하였다. 생성된 유기 층을 10% 염수 (18 mL)와 아세트산 (2.84 g)의 혼합물 (x2)에 이어서 10% 염수 (11 mL, x 1)로 세척하였다. 유기 층의 용매를 진공 하에 절반 부피로 제거하고, 아세트산 무수물 (1.45 g)을 실온에서 농축된 잔류물에 첨가하였다. 혼합물을 약 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 황산수소칼륨 (3.87 g)과 물 (92 mL)의 용액을 실온에서 적가하였다. 반응 혼합물을 교반한 다음, 수성 층을 분리하였다. 생성된 수성 층을 톨루엔 (18 mL), 및 톨루엔 (73 mL)으로 세척한 다음, 중탄산나트륨 (6.56 g)을 수성 층에 실온에서 첨가하고, 혼합물을 교반하였다. 유기 층을 분리하고, 10% 염수 (11 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘 (2.75 g)과 교반하고, 황산마그네슘을 여과에 의해 제거하였다. 필터 상의 잔류물을 톨루엔 (18 mL)으로 세척하고, 세척물을 여과물에 첨가한 다음, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 톨루엔 (44 mL)을 농축된 잔류물에 첨가하여 SR-ZMDB [13]의 톨루엔 용액을 수득하였다. 수율을 100%로 가정하고, 주어진 SR-ZMDB의 톨루엔 용액을 후속 단계에 사용하였다.

¹H NMR (CDCl₃) δ: 7.35-7.20 (m, 10H), 5.08 (d, 2H, J = 23.6 Hz), 3.94 (q, 1H, J = 7.9 Hz), 3.73-3.42 (br m, 2H), 3.30-3.23 (m, 1H), 3.05 (dd, 1H, J = 19.7, 9.5 Hz), 2.79 (dt, 1H, J = 69.6, 6.1 Hz), 2.57-2.32 (br m, 4H), 1.96-1.89 (m, 1H), 1.09 (d, 3H, J = 6.9 Hz)

MS: m/z = 351 [M+H]⁺.

단계 J. SR-MDOZ (화합물 [14])의 제조

[화학식 15]

톨루엔 (28 mL) 중 1-클로로에틸 클로로포르메이트 (3.72 g)의 용액에 SR-ZMDB [13] (이론상 23.7 mmol)의 톨루엔 용액을 0℃ 내지 10℃에서 질소 분위기 하에 적가한 다음, 사용한 적하 깔때기를 톨루엔 (4.6 mL)으로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물에 0℃ 내지 10℃에서 트리에틸아민 (718 mg)을 첨가하고, 반응 혼합물을 15℃ 내지 25℃에서 약 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 메틸 알콜 (46 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 50℃ 내지 60℃에서 추가의 약 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 용매를 진공 하에 약 37 mL 미만의 부피로 제거하였다. 농축된 잔류물에 2 mol/L 염산 (46 mL)을 15℃ 내지 20℃에서 적가하고, 혼합물을 교반하고, 수성 층을 분리하였다. 생성된 수성 층을 톨루엔 (28 mL, x 2)으로 세척하였다. 수성 층에 20% 염수 (46 mL)를 첨가하고, 테트라히드로푸란 (92 mL)에 이어서 8 mol/L 수성 수산화나트륨 (18 mL)을 여기에 0℃ 내지 10℃에서 적가하였다. 유기 층을 반응 혼합물로부터 분리한 다음, 20% 염수 (18 mL, x 2)로 세척하고, 유기 층의 용매를 진공 하에 제거하였다. 농축된 잔류물에 테트라히드로푸란 (92 mL)을 첨가하고, 용액을 진공 하에 농축시켰다. 작업을 1회 추가로 반복하였다. 농축된 잔류물을 테트라히드로푸란 (92 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 황산마그네슘 (2.75 g)과 함께 교반하고, 황산마그네슘을 여과에 의해 제거하였다. 필터 상의 잔류물을 테트라히드로푸란 (28 mL)으로 세척하고, 세척물을 여과물에 첨가하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 농축 잔류물의 부피를 테트라히드로푸란으로 약 20 mL로 조정하여 SR-MDOZ [14] (순 중량: 4.01 g, 15.4 mol, 수율: 65.0%)의 테트라히드로푸란 용액을 수득하였다.

동일한 과정에 의해 제조된 SR-MDOZ를 증발 건조시킨 다음 NMR 및 MS를 측정하였다.

¹H NMR (CDCl₃) δ: 7.37-7.28 (m, 5H), 5.08 (dd, 2H, J = 16.8, 12.8 Hz), 4.00 (dd, 1H, J = 17.1, 8.3 Hz), 3.40-3.31 (m, 1H), 3.24 (d, 1H, J = 12.7 Hz), 3.00 (dd, 1H, J = 54.9, 12.4 Hz), 2.87-2.57 (m, 3H), 2.47-2.27 (m, 1H), 1.91-1.80 (m, 1H), 1.14 (d, 3H, J = 7.2 Hz)

MS: m/z = 261 [M+H]⁺.

단계 K. SR-MDOZ-OX (화합물 [15])의 제조

[화학식 16]

질소 분위기 하에, 옥살산 (761 mg)을 테트라히드로푸란 (40 mL) 중에 용해시키고, SR-MDOZ [14] (이론상 3.84 mmol)의 테트라히드로푸란 용액을 옥살산의 용액에 실온에서 적가하였다. 용액에 본원에 기재된 방법에 따라 제조된 SR-MDOZ-OX 결정 (1 mg)을 실온에서 첨가하고, 혼합물을 실온에서 약 3.5시간 내지 침전물 결정 동안 교반하였다. 슬러리 용액에 SR-MDOZ의 테트라히드로푸란 용액 (3.84 mmol)을 실온에서 적가하고, 혼합물을 실온에서 약 1시간 동안 교반하였다. 슬러리 용액을 가열하고, 50℃ 내지 60℃에서 약 2시간 동안 교반한 다음, 실온에서 밤새 교반하였다. 슬러리 용액을 여과하고, 필터 상의 습윤 결정을 테트라히드로푸란 (10 mL)으로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 SR-MDOZ-OX [15] (2.32 g, 6.62 mol, 수율: 86.2%)을 수득하였다.

동일한 과정에 의해 제조된 SR-MDOZ-OX를 NMR, MS, 및 원소 분석에 대해 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-D₆) δ: 7.37-7.30 (m, 5H), 5.15-5.01 (m, 2H), 3.92 (dt, 1H, J = 43.5, 8.4 Hz), 3.48-3.12 (br m, 5H), 2.67-2.56 (m, 1H), 2.46-2.35 (m, 1H), 2.12-2.05 (m, 1H), 1.13 (d, 3H, J = 6.9 Hz)

MS: m/z = 261 [M+H]⁺

원소 분석: C 58.4wt%, H 6.4wt%, N 7.9 wt% (이론적으로, C 58.3wt%, H 6.3wt%, N 8.0wt% )

단계 L. SR-MDPZ (화합물 [16])의 제조

[화학식 17]

SR-MDOZ-OX [15] (12.0 g, 34.2 mmol)에 질소 분위기 하에 에탄올 (36 mL), 물 (72 mL), CPPY [20] (5.36 g, 34.9 mmol)에 이어서 K₃PO₄ (21.8 g, 103 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 5시간 동안 교반한 다음, 40℃로 냉각시켰다. 톨루엔 (120 mL)을 여기에 40℃에서 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 생성된 유기 층을 20% 수성 탄산칼륨 (48 mL)으로 세척하고 이어서 물 (48 mL)로 2회 세척하였다. 이어서, 유기 층의 용매를 진공 하에 제거하였다. tert-부탄올 (60 mL)을 잔류물에 첨가하고, tert-부탄올 용액을 농축시켰다. 작업을 추가로 2회 반복하였다. tert-부탄올 (36 mL)을 농축된 잔류물에 첨가하여 tert-부탄올 중 SR-MDPZ [16] (61.1 g, 이론상 34.2 mmol)의 용액을 수득하였다. 수율을 100%로 가정하고, 수득한 SR-MDPZ의 tert-부탄올 용액을 후속 단계에 사용하였다.

동일한 과정에 의해 제조된 SR-MDPZ를 에틸 아세테이트 및 n-헵탄의 혼합물로부터 고체로서 단리시켰고, NMR 및 MS를 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ: 11.59 (br s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.41-7.26 (br m, 3H), 7.22-7.08 (br m, 3H), 6.64-6.51 (br m, 1H), 5.07-4.91 (br m, 2H), 4.09-3.67 (br m, 5H), 3.47-3.32 (br m, 1H), 2.67-2.55 (br m, 2H), 2.21-2.15 (br m, 1H), 1.11 (d, 3H, J = 6.9 Hz).

MS: m/z = 378 [M+H]⁺

단계 M. SR-MDOP (화합물 [17])의 제조

[화학식 18]

tert-부탄올 (이론상 34.2 mmol) 중 SR-MDPZ [16]의 용액에 질소 분위기 하에 포름산암모늄 (10.8 g, 171 mmol), 물 (60 mL), 및 10% 팔라듐 탄소 (가와켄 파인 케미칼스 캄파니, 리미티드에 의해 제조됨, M 유형, 52.6% 물-함량, 1.20 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 13시간 동안 교반한 다음 실온으로 냉각시키고, 생성된 침전물을 여과에 의해 제거하였다. 반응 용기 및 필터 상의 잔류물을 tert-부탄올 (24 mL)로 세척하고, 세척물을 여과물에 첨가하고, 8 M 수성 수산화나트륨 (25.7 mL, 205 mmol) 및 염화나트륨 (13.2 g)을 여과물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 톨루엔 (84 mL)을 여기에 실온에서 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 생성된 유기 층을 20% 염수 (60 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨과 교반하고, 황산나트륨을 여과에 의해 제거하였다. 필터 상의 잔류물을 톨루엔:tert-부탄올 = 1:1의 혼합물 (48 mL)로 세척하고, 세척물을 여과물에 첨가하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 농축된 잔류물에 톨루엔 (60 mL)을 첨가하고, 용액을 50℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 용매를 진공 하에 제거하였다. 농축된 잔류물에 톨루엔 (60 mL)을 다시 첨가하고, 용액을 농축시켰다. 농축된 잔류물에 톨루엔 (48 mL)을 첨가하고, 용액을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 얼음 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 침전된 고체를 필터 상에서 수집하고, 톨루엔 (24 mL)으로 세척하였다. 생성된 습윤 고체를 진공 하에 건조시켜 SR-MDOP [17] (7.07 g, 29.1 mmol, 수율: 84.8%)을 수득하였다.

동일한 과정에 의해 제조된 SR-MDOP를 NMR 및 MS에 대해 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ: 11.57 (br s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.10 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 6.58 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 3.92-3.59 (br m, 4H), 3.49 (dd, 1H, J = 8.3, 7.2 Hz), 2.93 (dd, 1H, J = 7.2, 6.1 Hz), 2.61-2.53 (m, 2H), 2.12-2.01 (br m, 2H), 1.10 (d, 3H, J = 6.9 Hz).

MS: m/z = 244 [M+H]⁺.

단계 N. 화합물 A 모노-에탄올레이트 (화합물 [18])의 제조

[화학식 19]

질소 분위기 하에, 아세토니트릴 (60 mL) 및 트리에틸아민 (416 mg, 4.11 mmol)을 SR-MDOP [17] (5.00 g, 20.5 mmol)에 첨가하고, 용액에 아세토니트릴 (35 mL) 중 DPCN [21] (3.69 g, 22.6 mmol)의 용액을 45℃에서 첨가하고, 이어서 사용한 적하 깔때기를 아세토니트릴 (5.0 mL)로 세척하고, 세척물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 45℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 5% 중탄산나트륨 물 (25 mL), 10% 염수 (25 mL), 및 에틸 아세테이트 (50 mL)를 반응 혼합물에 첨가한 다음, 혼합물을 교반하고, 유기 층을 분리하였다. 유기 층의 용매를 진공 하에 제거하였다. 테트라히드로푸란 (50 mL)을 잔류물에 첨가하고, 테트라히드로푸란 용액을 농축시켰다. 작업을 추가로 3회 반복하였다. 농축된 잔류물에 테트라히드로푸란 (50 mL)을 첨가하고, 물을 용액에 첨가하여 물 함량을 5.5%로 조정하였다. 생성된 침전물을 여과에 의해 제거하였다. 반응 용기 및 필터 상의 잔류물을 테트라히드로푸란 (15 mL)으로 세척하고, 세척물을 여과물에 첨가하고, 용매를 진공 하에 여과물로부터 제거하였다. 농축 잔류물에 에탄올 (50 mL) 및 화합물 A 결정 (5.1 mg)을 첨가하고, 이를 하기 실시예 15에 기재된 방법에 따라 제조하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물에 에탄올 (50 mL)을 첨가하고, 용액을 다시 농축시켰다. 농축된 잔류물에 에탄올 (15 mL)을 첨가하고, 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 침전된 고체를 필터 상에서 수집하고, 에탄올 (20 mL)로 세척하였다. 생성된 습윤 고체를 진공 하에 건조시켜 화합물 A 모노-에탄올레이트 [18] (6.26 g, 17.6 mmol, 수율: 85.5%)를 수득하였다.

동일한 과정에 의해 제조된 화합물 A 모노-에탄올레이트를 NMR 및 MS에 대해 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ: 11.59 (br s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.11 (dd, 1H, J = 3.5, 2.3 Hz), 6.58 (dd, 1H, J = 3.5, 1.8 Hz), 4.34 (t, 1H, J = 5.1 Hz), 4.16 (t, 1H, J = 8.3 Hz), 4.09-3.92 (m, 3H), 3.84-3.73 (m, 1H), 3.71 (d, 1H, J = 19.0 Hz), 3.65 (d, 1H, J = 19.0 Hz), 3.58 (dd, 1H, J = 8.2, 5.9 Hz), 3.44 (dq, 2H, J = 6.7, 5.1 Hz), 2.69-2.60 (m, 2H), 2.23-2.13 (br m, 1H), 1.12 (d, 3H, J = 7.1 Hz), 1.06 (t, 3H, J = 6.7 Hz).

MS: m/z = 311 [M+H]⁺

단계 O. 화합물 A (화합물 [19])의 정제

[화학식 20]

화합물 A 모노-에탄올레이트 [18] (4.00 g, 11.2 mmol) 및 n-부탄올 (32 mL)을 질소 분위기 하에 혼합하고, 혼합물을 110℃에서 용해시켰다. 혼합물을 85℃로 냉각시키고, 본원에 기재된 방법에 따라 제조한 화합물 A 결정 (4.0 mg)을 여기에 첨가하고, 혼합물을 85℃에서 2시간 동안 교반하고, 75℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 침전된 고체를 필터 상에서 수집하고, n-부탄올 (8.0 mL)에 이어서 에틸 아세테이트 (8.0 mL)로 세척하였다. 생성된 습윤 고체를 진공 하에 건조시켜 화합물 A [19] (3.18 g, 10.2 mmol, 수율: 91.3%)을 수득하였다.

동일한 과정에 의해 제조된 화합물 A를 NMR 및 MS에 의해 측정하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ: 11.59 (br s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.11 (dd, 1H, J = 3.5, 2.5 Hz), 6.58 (dd, 1H, J = 3.5, 1.8 Hz), 4.16 (t, 1H, J = 8.3 Hz), 4.09-3.93 (m, 3H), 3.84-3.73 (m, 1H), 3.71 (d, 1H, J = 19.0 Hz), 3.65 (d, 1H, J = 19.0 Hz), 3.58 (dd, 1H, J = 8.2, 5.9 Hz), 2.69-2.59 (m, 2H), 2.23-2.13 (m, 1H), 1.12 (d, 3H, J = 7.2 Hz).

MS: m/z = 311 [M+H]⁺

동일한 방법에 의해 제조된 화합물 A를 사용하여, 단결정 X선 분석을 수행하였다.

(1) 단결정의 제조

라파 로보 바이알(LaPha ROBO Vial) (R) 2.0 mL 입구가 큰 바이알에 들은 화합물 A 10 mg에 클로로포름 0.5 mL를 첨가하였다. 바이알을 마개로 막고, 화합물 A을 완전히 용해시켰다. 천천히 용매를 증발시키기 위해, 테루모(TERUMO)(R) 시린지의 바늘로 마개에 부착된 격막에 구멍을 만들고, 바이알은 여전히 실온에 정치시켰다. 생성된 단결정을 구조 분석에 사용하였다.

(2) 측정 기기

빔 라인 : SPring-8 BL32B2

검출기 : 리가쿠 R-축 V 회절계

(3) 측정 방법

0.71068 Å의 복사 광을 단결정에 조사하여 X선 회절 데이터를 측정하였다.

(4) 검정 방법

생성된 화합물 A 클로로포름-용매화물 중 염소 원자의 X선 이상 산란 효과를 이용하여, 화합물 A의 절대 배위를 (3S,4R)로서 확인하였다. 화합물 A의 수득한 절대 배위에 기초하여, 각 과정의 중간체의 절대 배위를 확인하였다.

형태 α의 특징화

X선 분말 회절 (XRPD)

형태 α는 스펙트리스 캄파니 리미티드(Spectris Co.,Ltd.) 패널리티컬(PANalytical) 기기 모델 번호: 엑스퍼트 프로(X'Pert Pro)를 사용하여 하기 데이터 획득 파라미터 하에 XRPD에 의해 특징화하였다.

[표 5]

형태 α에 대한 XRPD 패턴은 도 1에 제시되고, 상응하는 데이터는 하기 표 1-8에 제공된다.

[표 6]

시차 주사 열량측정 (DSC)

DSC 데이터를 하기 파라미터를 사용하여 TA 인스트루먼츠 모델 번호 Q2000 기기 상에서 수집하였다:

샘플 크기: 대략 3 mg

팬: 밀봉된 알루미늄 팬

범위: 25-230℃

가열 속도: 질소 기체 유동 하에 2℃/분.

형태 α에 대한 DSC 온도기록도는 도 4에 제공되며, 188℃의 피크 및 185℃의 개시를 갖는 단일 흡열 사건을 나타낸다.

열중량측정 시차 열 분석 (TG-DTA)

TG-DTA 데이터는 하기 파라미터를 사용하여 메틀러 톨레도(Mettler Toledo) 모델 번호: TGA/SDTA851e/SF 기기 상에서 수집하였다:

샘플: 대략 5 mg

범위: 25-250℃

가열 속도: 질소 기체 유동 하에 2℃/분.

외삽된 개시 온도는 186.29℃이었고, 중량 손실은 25 내지 220℃의 범위에서 관찰되지 않았다. 형태 α에 대한 TG-DTA 데이터는 도 7에 제시되어 있다.

고체 상태 ¹³C NMR

고체 상태 ¹³C NMR 데이터는 하기 파라미터를 사용하여 브루커 바이오스핀 코포레이션(Bruker BioSpin Corporation) 아반스(AVANCE) III 400 기기 상에서 수집하였다:

프로브: 4 mm CP/MAS 프로브

측정 온도: 실온

참조 물질: 글리신 (외부 표준: 보다 낮은 자장의 피크가 176.03 ppm에 놓임)

측정 코어: ¹³C (100.6228303 MHz)

회전 속도: 14.3 kHz

펄스 반복 시간: 5초

누적 수: 3072회

펄스 모드: CP/MAS 측정

형태 α에 대한 고체 상태 ¹³C NMR 데이터가 하기 피크를 나타내는 도 10에 제시된다: 14.8, 17.0, 24.5, 27.2, 35.0, 35.9, 38.6, 48.8, 49.5, 53.6, 78.3, 101.4, 103.0, 116.2, 118.0, 122.0, 122.7, 151.2, 154.8, 162.4 및 163.3 ppm.

실시예 2

화합물 A, 형태 β의 제조 및 특징화

제조

500 μm의 체를 통하여 통과시킨 화합물 A (3992.3 g, 결정질 형태 α)를 하기 조건 하에 스파이럴 제트 밀(Spiral Jet Mill) 100AS (호소카와 마이크로미터 코포레이션에 의해 제조됨)으로 분쇄하여 노즐-고리 부분에 부착된 화합물 A (361.0 g)를 갖는 분쇄 생성물 (3473.6 g)을 수득하였다.

분쇄 조건

사용된 기체: 질소

분쇄 노즐: 1.5 mm 직경 x 4

이젝터 노즐: 직경 1.3 mm

분쇄를 위한 공기 압력: 0.50 내지 0.60 MPa

이젝터를 위한 공기 압력: 0.50 내지 0.60 MPa

화합물 A의 공급 비율: 8 g/분

노즐-고리 부분에 부착된 화합물 A (50.0 g, 161 mmol)를 1-부탄올/아세토니트릴 (1:3 v/v) (250 mL)의 혼합 용액에 첨가하고, 혼합물을 10일 동안 40℃에서 교반하였다. 생성된 현탁액을 실온으로 냉각시키고, 추가로 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 침전된 결정질 물질을 필터 상에서 수집하였다. 수집한 결정질 생성물을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 2회 세척하고, 감압 하에 40℃에서 건조시켜 화합물 A, 결정질 형태 β (35.5 g, 수율 71%)를 수득하였다.

특징화

X선 분말 회절

형태 β에 대한 XRPD 패턴은 도 2에 제시되고, 상응하는 데이터는 하기 표 2-1에 제공된다. 기기 및 데이터 획득 파라미터는 실시예 1에서 형태 α의 특징화에 기재된 바와 같다.

[표 7]

시차 주사 열량측정 (DSC)

DSC 데이터를 하기 파라미터를 사용하여 TA 인스트루먼츠(TA Instruments) 모델 번호 Q2000 기기 상에서 수집하였다:

샘플 크기: 대략 3 mg

팬: 밀봉된 알루미늄 팬

범위: 25-230℃

가열 속도: 질소 기체 유동 하에 2℃/분.

형태 β에 대한 DSC 온도기록도는 도 5에 제공되며, 187℃의 피크 및 185℃의 개시를 갖는 단일 흡열 사건을 나타낸다.

열중량측정 시차 열 분석 (TG-DTA)

TG-DTA 데이터는 형태 β에 대한 측정 범위가 25 내지 230℃인 것을 제외하고 실시예 1에 기재된 바와 같이 수집하였다. 흡열 피크는 188.59℃에서 검출되었고, 외삽된 개시 온도는 186.68℃였고, 중량 손실은 25 내지 220℃의 범위에서 관찰되지 않았다. 형태 β에 대한 데이터는 도 8에 제시된다.

고체 상태 ¹³C NMR

형태 β에 대한 고체 상태 ¹³C NMR 데이터는 실시예 1에 기재된 바와 같이 수집하였다. ¹³C NMR 스펙트럼은 하기 피크를 나타내는 도 11에 제시된다: 16.5, 25.8, 26.5, 33.1, 34.8, 36.7, 38.8, 48.2, 53.4, 77.7, 79.5, 101.2, 102.6, 117.5, 120.6, 151.1, 154.3 및 166.1 ppm.

실시예 3

화합물 A, 형태 γ의 제조 및 특징화

제조예 1

500 μm의 체를 통하여 통과시킨 화합물 A (2491.5 g, 결정질 형태 α)를 하기 조건 하에 스파이럴 제트 밀 100AS (호소카와 마이크로미터 코포레이션에 의해 제조됨)으로 분쇄하여 노즐-고리 부분에 부착된 화합물 A (247.9 g)를 갖는 분쇄 생성물 (2106.5 g)을 수득하였다.

분쇄 조건

사용된 기체: 질소

분쇄 노즐: 1.5 mm 직경 x 4

이젝터 노즐: 직경 1.3 mm

분쇄를 위한 공기 압력: 0.50 내지 0.60 MPa

이젝터를 위한 공기 압력: 0.50 내지 0.60 MPa

화합물 A의 공급 비율: 4 g/분

노즐-고리 부분에 부착된 화합물 A (100 g, 322 mmol)를 질소 하에 포름아미드 (330 mL)에 첨가하고 시드 결정 (결정질 형태 γ 1.00 g, 화합물 A의 형태 β도 일부 함유할 수 있음)을 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 30일 동안 실온에서 교반하였다. 결정질 침전을 필터 상에서 수집하고 에틸 아세테이트 (150 mL)로 2회 세척하였다. 생성된 습윤 결정을 질소 하에 에틸 아세테이트 (300 mL)에 첨가하고 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 결정질 침전을 필터 상에서 수집하고 에틸 아세테이트 (150 mL)로 2회 세척하고, 40℃에서 감압 하에 건조시켜 화합물 A, 결정질 형태 γ (74.1 g, 수율 74%)를 수득하였다.

제조예 2

화합물 A, 형태 α (측정되지 않은 미량의 형태 β 함유), (100 mg, 0.322 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드 (0.2 mL)에 첨가하고 혼합물을 6일 동안 실온에서 교반하였다. 결정질 침전을 필터 상에서 수집하였다. 수집된 습윤 결정질 물질을 18시간 동안 실온에서 감압 하에 건조시켜 화합물 A, 형태 γ (13.7 mg, 수율 13.7%)를 수득하였다.

특징화

X선 분말 회절

형태 γ에 대한 XRPD 패턴은 도 3에 제시되고 상응하는 데이터는 하기 표 3-1에 제공된다. 기기 및 데이터 획득 파라미터는 실시예 1의 형태 α의 특징화에 기재된 바와 같다.

[표 8]

시차 주사 열량측정 (DSC)

DSC 데이터는 하기 파라미터를 사용하여 TA 인스트루먼츠 모델 번호 Q2000 기기 상에서 수집하였다:

샘플 크기: 대략 3 mg

팬: 밀봉된 알루미늄 팬

범위: 25-230℃

가열 속도: 질소 기체 유동 하에 2℃/분.

형태 γ에 대한 DSC 온도기록도는 도 6에 제공되며 196℃의 피크 및 196℃의 개시를 갖는 단일 흡열 사건을 나타낸다.

열중량측정 시차 열 분석 (TG-DTA)

TG-DTA 데이터는 실시예 1에 기재된 바와 같이 수집하였다. 흡열 피크는 198.68℃에서 검출되었고, 외삽된 개시 온도는 197.38℃였고 중량 손실은 25 내지 220℃의 범위에서 관찰되지 않았다. 형태 γ에 대한 데이터는 도 9에 제시된다.

고체 상태 ¹³C NMR

형태 γ에 대한 고체 상태 ¹³C NMR 데이터는 실시예 1에 기재된 바와 같이 수집하였다. ¹³C NMR 스펙트럼은 하기 피크를 나타내는 도 12에 제공된다: 16.9, 26.5, 32.9, 36.4, 48.1, 53.7, 78.6, 102.6, 116.4, 117.9, 121.5, 151.8, 154.6 및 162.9 ppm.

실시예 4

형태 α의 샘플 중 형태 β 및 γ의 정량화

화합물 A, 형태 α의 제조된 배치, 뿐만 아니라 화합물 A, 형태 α를 함유하는 연고 제제를 형태 β 및 γ의 존재에 대해 시험하였다. XRPD 방법을 사용하여, 형태 β 및 γ는 1 w/w% 수준까지 검출할 수 있었다.

이 분석에 사용된 화합물 A, 형태 α의 배치는 표 4-1에 제시된다.

[표 9]

이 분석에 사용된 화합물 A, 형태 α, (3%)를 함유하는 연고의 배치는 표 4-2에 제시된다. RH는 상대 습도를 지칭한다. M은 월 단위의 지속시간을 지칭한다.

[표 10]

형태 β 및 γ는 하기 파라미터 하에 작동한 패널리티컬 엑스퍼트(PANalytical X'Pert) 프로 분말 X선 회절계를 사용하여 상기 배치 및 연고 중에서 정량화하였다:

[표 11]

형태 β에 대한 시험

시험 샘플 (화합물 A, 형태 α, 약물 물질)의 제조

화합물 A 시험 샘플의 부분을 마노 막자에서 미세 분말로 분쇄하였다. 약 10 mg를 샘플 홀더에 탑재하였다.

시험 샘플 (연고)의 제조

연고 시험 샘플 약 1 g을 n-헥산 80 mL 중에 현탁시켰다. 플라스크를 마개를 막고 30초 동안 격렬하게 진탕시켰다. 혼합물은 정량적 여과지 (5B)를 사용하여 흡인에 의해 여과하고, n-헥산 5 mL 부분으로 5회 세척하였다. 약 10 mg의 침전물을 샘플 홀더에 탑재하였다.

표준 샘플의 제조

화합물 A, 로트 U (형태 α)에 로트 P-3273-58 (형태 β)를 첨가하여 2, 5 및 10 w/w%의 최종 농도를 수득하였고, 이를 막자를 사용하여 혼합하였다. 약 10 mg을 샘플 홀더에 탑재하였다.

절차

X선 분말 회절 측정은 상기 기재된 기기 설정 및 데이터 획득 파라미터에 따라 시험 샘플 및 표준 샘플에 대해 수행하였다 (문헌 [X-ray Powder Diffraction Method, General Tests, Processes and Apparatus, The Japanese Pharmacopoeia, 17th ed., April 1, 2016, English Edition, pp 79-83] 참조). 표준 샘플 및 시험 샘플로부터 수득된 회절 피크 (10.6°에서)의 피크 면적은 자동 적분 또는 수동 적분에 의해 결정하였다. 시험 샘플의 형태 β의 양 (%)은 표준 샘플의 피크 면적으로부터 생성된 보정 곡선을 사용하여 계산하였다.

0%, 2%, 5% 및 10% w/w의 형태 β를 함유하는 표준 샘플로부터 수득한 X선 분말 회절 패턴은 도 13에 제시된다.

형태 γ에 대한 시험

시험 샘플 (화합물 A, 형태 α, 약물 물질)의 제조

화합물 A 시험 샘플의 부분을 마노 막자에서 미세 분말로 분쇄하였다. 약 10 mg을 샘플 홀더에 탑재하였다.

시험 샘플 (연고)의 제조

표준 샘플의 제조

로트 U (형태 α)에 화합물 A 로트 YKF56-28G (형태 γ)를 첨가하여 1, 2 및 5 w/w%의 최종 농도를 수득하고, 이를 막자를 사용하여 혼합하였다. 약 10 mg을 샘플 홀더에 탑재하였다.

절차

X선 분말 회절 측정은 상기 기재된 기기 설정 및 데이터 획득 파라미터에 따라 시험 샘플 및 표준 샘플에 대해 수행하였다 (문헌 [X-ray Powder Diffraction Method, General Tests, Processes and Apparatus, The Japanese Pharmacopoeia, 17th ed., April 1, 2016, English Edition, pp 79-83] 참조). 표준 샘플 및 시험 샘플로부터 수득된 회절 피크 (16.6°에서)의 피크 면적은 자동 적분 또는 수동 적분에 의해 결정하였다. 시험 샘플의 피크 면적이 1% 표준 샘플의 피크 면적 이하인 경우, 이는 "1% 이하"로 보고하였다. 시험 샘플의 피크 면적이 1% 표준 샘플의 피크 면적 초과이며 2% 표준 샘플의 피크 면적 이하인 경우, 이는 "2% 이하"로 보고하였다. 시험 샘플의 피크 면적이 2% 표준 샘플의 피크 면적 초과이며 5% 표준 샘플의 피크 면적 이하인 경우, 이는 "5% 이하"로 보고하였다.

0%, 1%, 2% 및 5% w/w의 형태 γ를 함유하는 표준 샘플로부터 수득된 X선 분말 회절 패턴이 도 14에 제시된다.

결과

정량화 결과는 표 4-3에 요약된다. 화합물 A, 약물 물질 로트 P 및 약물 물질 로트 P로 제조된 JTE-052 연고 로트 번호 223-1A 및 로트 번호 239-1A는 모두 측정가능한 양의 형태 β를 함유하였다.

[표 12]

실시예 5

단결정 X선 데이터

단결정 X선 구조는 하기 파라미터에 따라 형태 α, β 및 γ에 대해 수득하였다. 결정 구조 데이터는 표 5-1에 제공된다.

형태 α의 경우, 단결정 데이터는 조사 파장 0.71068 Å를 사용하여 래요닉스(Rayonix) MX225HE 검출기 및 SPring-8 BL41XU 빔 라인으로 수득하였다.

형태 β 및 γ의 경우, 단결정 데이터는 조사 파장 0.71068 Å를 사용하여 덱트리스(DECTRIS) 필라투스(PILATUS)3 6M 검출기 및 SPring-8 BL41XU 빔 라인으로 수득하였다.

[표 13]

실시예 6

화합물 A의 형태 α 및 β 사이의 경쟁 실험

화합물 A의 형태 α 및 β를 중량 기준 1:1의 비로 혼합하고, 1-부탄올 (800 μL)를 혼합물 (80 mg)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 12일 동안 실온에서 교반하였다. 생성물을 동일한 온도에서 여과하고, 이어서, 19시간 동안 실온에서 감압 하에 건조시켰다. 회절각 2θ 및 회절 강도는 사용된 화합물 A의 형태 α 및 β, 교반 전 화합물 A의 형태 α와 β의 중량 기준 1:1 혼합물, 및 생성된 결정에 대한 분말 X선 회절측정법에 의해 측정하였다. 기기 및 데이터 획득 파라미터는 실시예 1에서 형태 α의 특징화에 상기 기재된 바와 동일하다. 측정된 스펙트럼은 도 15에 제시된다. 도면은 아래에서부터 사용된 화합물 A의 형태 α, 사용된 화합물 A의 형태 β, 교반 전 화합물 A의 형태 α와 β의 중량 기준 1:1 혼합물, 및 교반 후 수득한 결정에 대한 스펙트럼을 나타낸다.

회절 강도 비는 형태 α의 회절각 2θ의 10.2° 피크와 형태 β의 회절각 2θ의 10.6° 피크에 대해 교반 전과 후를 비교하였다. 하기 표에 제시된 바와 같이, 교반 후 형태 β로부터의 피크 대 형태 α로부터의 피크의 회절 강도 비는 교반 전의 비와 비교하여 증가하였다.

[표 14]

실시예 7

화합물 A의 형태 α와 γ 사이의 경쟁 실험

화합물 A의 형태 α 및 γ를 중량 기준 1:1의 비로 혼합하고, 1-부탄올 (1 mL)를 혼합물 (100 mg)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 11일 동안 실온에서 교반하였다. 생성물을 동일한 온도에서 여과하였다. 회절각 2θ 및 회절 강도는 사용된 화합물 A의 형태 α 및 γ, 교반 전 화합물 A의 형태 α와 γ의 중량 기준 1:1 혼합물, 및 생성된 결정에 대한 분말 X선 회절측정법에 의해 측정하였다. 기기 및 데이터 획득 파라미터는 실시예 1에서 형태 α의 특징화에 상기 기재된 바와 동일하다. 측정된 스펙트럼은 도 16에 제시된다. 도면은 아래에서부터 사용된 화합물 A의 형태 α, 사용된 화합물 A의 형태 γ, 교반 전 화합물 A의 형태 α와 γ의 중량 기준 1:1 혼합물, 및 교반 후 수득한 결정에 대한 스펙트럼을 나타낸다.

회절 강도 비는 형태 α의 회절각 2θ의 10.2° 피크와 형태 γ의 회절각 2θ의 10.7° 피크에 대해 교반 전과 후를 비교하였다. 하기 표에 제시된 바와 같이, 교반 후 형태 γ로부터의 피크 대 형태 α로부터의 피크의 회절 강도 비는 교반 전의 비와 비교하여 증가하였다.

[표 15]

실시예 8

화합물 A의 형태 β와 γ 사이의 경쟁 실험

(1) 화합물 A의 형태 β 및 γ를 중량 기준 1:1의 비로 혼합하고, 포름아미드 (1 mL)를 혼합물 (150 mg)에 첨가하였다. 생성된 현탁액은 1일 동안 실온에서 교반하였다. 생성물을 동일한 온도에서 여과하였다.

(2) 화합물 A의 형태 β와 γ를 중량 기준 1:1의 비로 혼합하고 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)를 혼합물 (150 mg)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 1일 동안 실온에서 교반하였다. 생성물을 동일한 온도에서 여과하였다.

(3) 화합물 A의 형태 β와 γ를 중량 기준 1:1의 비로 혼합하고 디메틸술폭시드 (1 mL)를 혼합물 (800 mg)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 1일 동안 실온에서 교반하였다. 생성물을 동일한 온도에서 여과하였다.

회절각 2θ 및 회절 강도는 사용된 화합물 A의 형태 β 및 γ, 교반 전 화합물 A의 형태 β와 γ의 중량 기준 1:1 혼합물, 및 상기 (1), (2) 및 (3)에서 수득된 결정에 대한 분말 X선 회절측정법에 의해 측정하였다. 기기 및 데이터 획득 파라미터는 실시예 1에서 형태 α의 특징화에 상기 기재된 바와 동일하다. 측정된 스펙트럼은 도 17에 제시된다. 도면은 아래에서부터 사용된 화합물 A의 형태 γ, 사용된 화합물 A의 형태 β, 교반 전 화합물 A의 형태 β와 γ의 중량 기준 1:1 혼합물, 포름아미드로부터 수득한 결정, N,N-디메틸포름아미드로부터 수득한 결정, 및 디메틸술폭시드로부터 수득한 결정에 대한 스펙트럼을 나타낸다.

상기 (1), (2) 및 (3)의 결과에 따르면, 혼합 결정은 γ-단결정을 형성했다.

실시예 9

용해도 시험

각각의 샘플 (즉, 화합물 A의 형태 α, β 및 γ)을 4-mL-부피 유리 바이알에 칭량하였다. 시험 용액 (3 mL)을 바이알에 첨가하고 혼합물을 현탁시켰다. 약 150 mg의 샘플을 일본 약전의 용해도 시험을 위한 제1 유체의 시험 용액을 위해 칭량하고, 약 15 mg을 일본 약전의 용해도 시험을 위한 제2 유체의 시험 용액 및 물을 위해 칭량하였다. 각각의 혼합물을 3시간 동안 20℃에서 일정한 온도 인큐베이터 진탕기 (타이텍(TAITEC)에 의해 제조됨)로 진탕시켰다. 진탕시킨 후, 상청액은 0.2-μm 세공 크기 및 4-mm 직경을 갖는 폴리테트라플루오로에틸렌 디스크 필터 (밀렉스-LG; 밀리포어(Millipore)에 의해 제조됨)으로 여과하였다. 측정은 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 수행하였다. 결과는 하기 표에 제시된다.

[표 16]

용해도 시험을 위한 JP 제1 유체 (일본 약전): 2.0 g의 염화나트륨을 7.0 mL의 염산 중에 용해시키고, 물을 첨가하여 1000 mL를 제조한다. 이 용액은 투명하고 무색이었고, 그의 pH는 약 1.2였다.

용해도 시험을 위한 JP 제2 유체 (일본 약전): 1 부피의 물을 1 부피의 포스페이트 완충제 용액, pH6.8에 혼합한다.

형태 α는 측정된 각각의 용매에서 가장 높은 용해도를 나타낸 반면, 형태 γ는 측정된 각각의 용매에서 가장 낮은 용해도를 나타냈다.

실시예 10

제제

화합물 A (예를 들면, 형태 α, 형태 β, 형태 γ 또는 상기 언급된 것 중 임의의 것의 혼합물)를 포함하는 제제의 예는 하기 제공되고, 제한하도록 의도되지 않는다.

제제 1 (캡슐의 제조)

1) 화합물 A 30 mg

2) 미세결정질 셀룰로스 10 mg

3) 락토스 19 mg

4) 스테아르산마그네슘 1 mg

1), 2), 3) 및 4)를 혼합하여 젤라틴 캡슐을 충전한다.

제제 2 (정제의 제조)

1) 화합물 A 10 g

2) 락토스 50 g

3) 옥수수 전분 15 g

4) 카르멜로스 칼슘 44 g

5) 스테아르산마그네슘 1 g

1), 2) 및 3)의 전체 양과 30 g의 4)를 물과 합하고, 진공 하에 건조시키고, 이어서, 과립화시켰다. 생성된 과립을 14 g의 4) 및 1 g의 5)와 혼합하고, 정제화 기계에 의해 정제화하였다. 이어서, 각각의 정제에 10 mg의 화합물 A가 포함된 것인 1000개의 정제를 수득하였다.

본원에 기재된 것에 더하여 본 발명의 다양한 변형은 상기 기재로부터 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 자명할 것이다. 이러한 변형은 또한 첨부된 청구범위의 범주 내에 속하는 것으로 의도된다. 모든 특허, 특허 출원 및 저널 문헌을 포함한 본 출원에서 언급된 각각의 참조문헌은 그의 전문이 본원에 참고로 포함된다.

Claims

2θ (°)에 관하여 7.8 ± 0.2, 10.5 ± 0.2, 11.8 ± 0.2, 13.4 ± 0.2, 13.9 ± 0.2, 17.8 ± 0.2, 19.3 ± 0.2, 22.0 ± 0.2, 23.6 ± 0.2 및 28.0 ± 0.2로부터 선택된 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴의 결정질 형태 β.
제1항에 있어서, 2θ (°)에 관하여 10.5 ± 0.2, 11.8 ± 0.2, 19.3 ± 0.2 및 22.0 ± 0.2에서의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 결정질 형태 β.
제1항 또는 제2항에 있어서, 186 ± 3℃에서의 흡열 피크를 특징으로 하는 DSC 온도기록도를 갖는 결정질 형태 β.
제1항 또는 제2항에 있어서, 적어도 50%의 순도를 갖는 결정질 형태 β.
제1항 또는 제2항에 있어서, 적어도 75%의 순도를 갖는 결정질 형태 β.
제1항 또는 제2항에 있어서, 적어도 85%의 순도를 갖는 결정질 형태 β.
제1항 또는 제2항에 있어서, 적어도 90%의 순도를 갖는 결정질 형태 β.
제1항 또는 제2항에 있어서, 적어도 95%의 순도를 갖는 결정질 형태 β.
2θ (°)에 관하여 7.7 ± 0.2, 10.6 ± 0.2, 13.3 ± 0.2, 13.9 ± 0.2, 15.5 ± 0.2, 16.5 ± 0.2, 17.7 ± 0.2, 17.9 ± 0.2, 19.0 ± 0.2, 21.4 ± 0.2, 21.8 ± 0.2, 23.1 ± 0.2, 23.7 ± 0.2 및 28.1 ± 0.2로부터 선택된 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴의 결정질 형태 γ.
제9항에 있어서, 2θ (°)에 관하여 16.5 ± 0.2, 17.7 ± 0.2, 21.4 ± 0.2, 21.8 ± 0.2, 및 23.1 ± 0.2에서의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는 결정질 형태 γ.
제9항 또는 제10항에 있어서, 196 ± 3℃에서의 흡열 피크를 특징으로 하는 DSC 온도기록도를 갖는 결정질 형태 γ.
제9항 또는 제10항에 있어서, 적어도 50%의 순도를 갖는 결정질 형태 γ.
제9항 또는 제10항에 있어서, 적어도 75%의 순도를 갖는 결정질 형태 γ.
제9항 또는 제10항에 있어서, 적어도 85%의 순도를 갖는 결정질 형태 γ.
제9항 또는 제10항에 있어서, 적어도 90%의 순도를 갖는 결정질 형태 γ.
제9항 또는 제10항에 있어서, 적어도 95%의 순도를 갖는 결정질 형태 γ.
2θ (°)에 관하여 10.2 ± 0.2에서의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 형태 α 및 2θ (°)에 관하여 7.8 ± 0.2, 10.5 ± 0.2, 11.8 ± 0.2, 13.4 ± 0.2, 13.9 ± 0.2, 17.8 ± 0.2, 19.3 ± 0.2, 22.0 ± 0.2, 23.6 ± 0.2 및 28.0 ± 0.2로부터 선택된 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 형태 β를 포함하는 결정질 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴의 조성물.
제17항에 있어서, 형태 α 및 형태 β로 이루어진 조성물.
제17항 또는 제18항에 있어서, 형태 β가 형태 α에 대해 1 내지 50% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.
제17항 또는 제18항에 있어서, 형태 β가 형태 α에 대해 1 내지 20% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.
제17항 또는 제18항에 있어서, 형태 β가 형태 α에 대해 1 내지 10% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.
제17항 또는 제18항에 있어서, 형태 β가 형태 α에 대해 1 내지 5% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.
제17항에 있어서, 추가로 2θ (°)에 관하여 7.7 ± 0.2, 10.6 ± 0.2, 13.3 ± 0.2, 13.9 ± 0.2, 15.5 ± 0.2, 16.5 ± 0.2, 17.7 ± 0.2, 17.9 ± 0.2, 19.0 ± 0.2, 21.4 ± 0.2, 21.8 ± 0.2, 23.1 ± 0.2, 23.7 ± 0.2 및 28.1 ± 0.2로부터 선택된 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 형태 γ를 포함하는 조성물.
2θ (°)에 관하여 7.8 ± 0.2, 10.5 ± 0.2, 11.8 ± 0.2, 13.4 ± 0.2, 13.9 ± 0.2, 17.8 ± 0.2, 19.3 ± 0.2, 22.0 ± 0.2, 23.6 ± 0.2 및 28.0 ± 0.2로부터 선택된 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 형태 β 및 2θ (°)에 관하여 7.7 ± 0.2, 10.6 ± 0.2, 13.3 ± 0.2, 13.9 ± 0.2, 15.5 ± 0.2, 16.5 ± 0.2, 17.7 ± 0.2, 17.9 ± 0.2, 19.0 ± 0.2, 21.4 ± 0.2, 21.8 ± 0.2, 23.1 ± 0.2, 23.7 ± 0.2 및 28.1 ± 0.2로부터 선택된 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 형태 γ를 포함하는 결정질 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴의 조성물.
제24항에 있어서, 형태 β 및 형태 γ로 이루어진 조성물.
제24항 또는 제25항에 있어서, 형태 γ가 형태 β에 대해 1 내지 50% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.
제24항 또는 제25항에 있어서, 형태 γ가 형태 β에 대해 1 내지 20% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.
제24항 또는 제25항에 있어서, 형태 γ가 형태 β에 대해 1 내지 10% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.
제24항 또는 제25항에 있어서, 형태 γ가 형태 β에 대해 1 내지 5% w/w의 양으로 존재하는 것인 조성물.
제24항에 있어서, 추가로 2θ (°)에 관하여 10.2 ± 0.2에서의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 형태 α를 포함하는 조성물.
제1항, 제2항, 제9항 및 제10항 중 어느 한 항의 결정질 형태 또는 제17항, 제18항, 제24항 및 제25항 중 어느 한 항의 조성물, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는, 기관 이식 거부, 이식 후 이식편 대 숙주 반응, 자가면역 질환, 류마티스 관절염, 건선, 건선성 관절염, 다발성 경화증, 궤양성 결장염, 크론병, 전신 홍반성 루푸스, 제1형 당뇨병, 중증 근무력증, 캐슬만병, 소아 특발성 관절염, 안구 건조, 알레르기성 질환, 천식, 아토피성 피부염, 비염, 만성 골수증식성 질환, 진성 다혈구혈증, 원발성 골수섬유증, 또는 본태성 혈소판혈증의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 제약 조성물.
제31항에 있어서, 추가로 제2 치료제를 포함하는 제약 조성물.
제31항에 있어서, 경구, 비경구, 폐, 국부 또는 국소 투여에 적합한 제약 조성물.
제31항에 있어서, 정제, 캡슐, 환제, 분말 또는 연고 형태이거나; 또는 IV, IM 또는 SC 투여를 위한 액체 중에서의 재구성에 적합한 분말 형태이거나; 또는 백색 연질 파라핀, 경질 파라핀, 스쿠알렌 또는 그의 혼합물을 포함하는 제약 조성물.
제17항, 제18항, 제24항 및 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 기관 이식 거부, 이식 후 이식편 대 숙주 반응, 자가면역 질환, 류마티스 관절염, 건선, 건선성 관절염, 다발성 경화증, 궤양성 결장염, 크론병, 전신 홍반성 루푸스, 제1형 당뇨병, 중증 근무력증, 캐슬만병, 소아 특발성 관절염, 안구 건조, 알레르기성 질환, 천식, 아토피성 피부염, 비염, 만성 골수증식성 질환, 진성 다혈구혈증, 원발성 골수섬유증, 또는 본태성 혈소판혈증의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 제약 활성 성분으로 사용하기 위한 조성물.
제17항, 제18항, 제24항 및 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 기관 이식 거부, 이식 후 이식편 대 숙주 반응, 자가면역 질환, 알레르기성 질환 또는 만성 골수증식성 질환의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 조성물.
제17항, 제18항, 제24항 및 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 류마티스 관절염, 건선, 원형 탈모증, 안구 건조, 아토피성 피부염, 습진 또는 손 습진의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 조성물.
2θ (°)에 관하여 7.8 ± 0.2, 10.5 ± 0.2, 11.8 ± 0.2, 13.4 ± 0.2, 13.9 ± 0.2, 17.8 ± 0.2, 19.3 ± 0.2, 22.0 ± 0.2, 23.6 ± 0.2 및 28.0 ± 0.2로부터 선택된 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 형태 β의 특징인 XRPD 피크의 피크 면적을 측정하고, 피크 면적을 표준과 비교하는 것을 포함하는, 2θ (°)에 관하여 10.2 ± 0.2에서의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 형태 α의 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴의 제조에서 존재하는 형태 β의 양을 측정하는 방법.
2θ (°)에 관하여 7.7 ± 0.2, 10.6 ± 0.2, 13.3 ± 0.2, 13.9 ± 0.2, 15.5 ± 0.2, 16.5 ± 0.2, 17.7 ± 0.2, 17.9 ± 0.2, 19.0 ± 0.2, 21.4 ± 0.2, 21.8 ± 0.2, 23.1 ± 0.2, 23.7 ± 0.2 및 28.1 ± 0.2로부터 선택된 3개 이상의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 형태 γ의 특징인 XRPD 피크의 피크 면적을 측정하고, 피크 면적을 표준과 비교하는 것을 포함하는, 2θ (°)에 관하여 10.2 ± 0.2에서의 특징적인 피크를 포함하는 X선 분말 회절 패턴을 갖는, 형태 α의 3-((3S,4R)-3-메틸-6-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1,6-디아자스피로[3.4]옥탄-1-일)-3-옥소프로판니트릴의 제조에서 존재하는 형태 γ의 양을 측정하는 방법.
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