KR102763559B1 - Composition for preventing, ameliorating or treating intestinal disease comprising Lysimachia christinae extract as effective component - Google Patents
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Abstract
본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 장질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 대장염 동물모델에서 금전초 추출물을 투여하였을 때, DSS로 인한 체중감소 및 대장길이 단축이 억제되고, 질병 활성 지수(disease activity index, DAI) 및 장내 투과도가 감소되므로, 장질환의 예방, 개선 또는 치료용 건강기능식품 또는 의약품 등에 매우 유용하게 사용될 수 있다. The present invention relates to a composition containing an extract of Gold Leaf as an effective ingredient for preventing, improving or treating intestinal diseases. Specifically, when an extract of Gold Leaf is administered to an animal model of colitis induced by DSS (dextran sulfate sodium), weight loss and colon length shortening caused by DSS are suppressed, and disease activity index (DAI) and intestinal permeability are reduced. Therefore, the composition can be very usefully used as a health functional food or medicine for preventing, improving or treating intestinal diseases.
Description
본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 장질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for preventing, improving or treating intestinal diseases, comprising an extract of Geumjeoncho as an effective ingredient.
장질환은 복통을 동반하며 소화 장애를 유발하고 다양한 원인에 의해 발생하는 현대인에게서 흔히 나타나는 질환으로, 대표적으로 염증성 장질환과 과민성 대장 증후군으로 나뉜다.Intestinal diseases are common diseases in modern people that cause digestive problems and are accompanied by abdominal pain and are caused by various reasons. They are mainly divided into inflammatory bowel disease and irritable bowel syndrome.
궤양성 대장염이나 크론병은 아직 원인이 불분명한 염증성 장질환(IBD; Inflammatory bowel disease)으로서, 치유와 재발을 반복하는 만성 난치성 질환이다. 이들 질환의 병인으로서는 유전적 요인이나 면역 이상뿐만 아니라, 식사 등의 환경인자가 관여한다는 지적이 있지만 원인은 아직 불분명하다. 궤양성 대장염은 대장의 점막에 짓무름이나 궤양이 연속적으로 형성되는 염증성 질환으로, 혈변, 점혈변, 설사, 복통이 일어나고, 중증인 경우에는 발열, 체중감소, 빈혈 등의 전신성의 증상이 나타난다. 또한, 크론병은 입에서 항문에 이르는 소화기관의 어느 부위에나 염증이나 궤양 등의 병변이 비연속적으로 발생하는 것을 특징으로 하며, 복통, 설사, 혈변과 더불어, 중증의 경우에는 발열, 하혈, 체중감소, 전신권태감, 빈혈 등의 증상이 나타난다.Ulcerative colitis or Crohn's disease is an inflammatory bowel disease (IBD) of unknown cause, and is a chronic, intractable disease that repeats healing and relapse. It has been suggested that environmental factors such as diet, as well as genetic factors and immune abnormalities, are involved in the etiology of these diseases, but the cause is still unknown. Ulcerative colitis is an inflammatory disease in which ulcers or lesions are continuously formed on the mucous membrane of the large intestine, causing bloody stool, bloody stool, diarrhea, and abdominal pain, and in severe cases, systemic symptoms such as fever, weight loss, and anemia. In addition, Crohn's disease is characterized by the discontinuous occurrence of lesions such as inflammation or ulcers in any part of the digestive tract from the mouth to the anus, and in addition to abdominal pain, diarrhea, and bloody stool, in severe cases, fever, bloody stool, weight loss, general malaise, and anemia.
종래에는 이들 염증성 장질환의 발병율은 서구권에서 높다고 알려져 있었지만, 최근, 한국에서도 식습관 등의 생활습관의 변화와 함께 환자 수가 급증하고 있다. 그렇지만, 원인이 불분명한 이유도 있어 근본적 치료법은 확립되어 있지 않다. 그 때문에 현재의 치료는, 완치를 목표로 하는 것이 아닌, 증상의 개선을 도모하고, 그것을 장기간 유지하는 것을 목표로 한다. 이러한 치료를 위한 약제로서, 주로 아미노살리실산제제, 부신피질 스테로이드제, 면역억제제 등이 사용되지만, 이들의 부작용은 임상적으로 커다란 문제점을 가지고 있다. 예를 들면, 아미노살리실산제제로서 자주 사용되는 살라조설파피리딘의 부작용에는 구역질, 구토, 식욕부진, 발진, 두통, 간장해, 백혈구 감소, 이상 적혈구, 단백뇨, 설사 등이 보고되고 있다. 또한, 부신피질스테로이드제는 일반적으로는 프레드니솔론의 경구투여, 관장, 좌약, 정맥 주사 등으로 사용되지만, 위궤양이나 장기사용에 의한 대퇴골두 괴사 등의 부작용이 존재한다. 그러나 투약의 중단은 증상의 재발을 불러오기 때문에, 이들 약제는 계속적으로 사용하지 않을 수 없다.Previously, the incidence of these inflammatory bowel diseases was known to be high in the West, but recently, the number of patients has been rapidly increasing in Korea due to changes in lifestyle habits such as eating habits. However, there is no established fundamental treatment method because the cause is unclear. Therefore, the current treatment does not aim for a complete cure, but aims to improve symptoms and maintain them for a long period of time. As drugs for this treatment, aminosalicylates, adrenal cortex steroids, and immunosuppressants are mainly used, but their side effects present significant clinical problems. For example, the side effects of salazosulfapyridine, which is frequently used as an aminosalicylates, have been reported to include nausea, vomiting, loss of appetite, rash, headache, liver damage, leukopenia, abnormal red blood cells, proteinuria, and diarrhea. In addition, adrenal corticosteroids are generally used as oral administration of prednisolone, enema, suppository, intravenous injection, etc., but there are side effects such as gastric ulcers and femoral head necrosis due to long-term use. However, since discontinuation of medication causes recurrence of symptoms, these drugs cannot be used continuously.
과민성 대장 증후군(IBS; Irritable bowel syndrome)은 기질적 원인이 없이 장기간 반복되는 복부팽만감 등의 복부 불편감 및 복통과 더불어, 설사, 변비 등의 배변 습관의 변화를 동반하는 만성 질환이며, 그 증상이 정신적인 요인이나 스트레스에 의해서 악화하기도 한다. 증상에 따라 설사 우세형, 변비 우세형, 및 통증 우세형으로 구분하여 약물 치료가 되고 있으며, 한국 국내 환자 중 설사형이 30.8%, 변비형이 24.6%, 설사와 변비 교대형이 44.6%를 차지한다.Irritable bowel syndrome (IBS) is a chronic disease that causes abdominal discomfort and pain, such as abdominal distension, for a long time without an underlying cause, and changes in bowel habits, such as diarrhea and constipation. The symptoms can also worsen due to psychological factors or stress. Depending on the symptoms, it is categorized into diarrhea-predominant, constipation-predominant, and pain-predominant types and treated with medication. Among patients in Korea, diarrhea accounts for 30.8%, constipation accounts for 24.6%, and alternating diarrhea and constipation accounts for 44.6%.
과민성 대장 증후군의 치료를 위한 약물요법은 과민성 대장 증후군의 전반적인 증상을 개선하는 약제와 단일증상에 대한 약제로 나눌 수 있다. 복통에 관한 약물로는 평활근 이완제, 항우울제, 오피오이드 작용제(Opioid agonist) 등이 사용되고, 변비 우세형 과민성 대장 증후군에 관한 약제로는 섬유제제, 완화제, 5-HT4 작용제 등이 사용되고 있으며, 설사 우세형 과민성 대장 증후군에 관한 약제로는 지사제, 5-HT3 길항제 등이 사용된다. 그러나 기존 5-HT 계열 약물들은 부작용으로 인해 그 사용이 제한되고 있기 때문에 현재까지 과민성 대장 증후군에 대한 약물요법은 매우 제한적이므로, 대증요법에 대한 의존도가 높아 만족스럽지 못한 실정이다.Pharmacotherapy for the treatment of irritable bowel syndrome can be divided into drugs that improve the overall symptoms of irritable bowel syndrome and drugs for a single symptom. Smooth muscle relaxants, antidepressants, and opioid agonists are used for abdominal pain, and fiber agents, laxatives, and 5-HT4 agonists are used for constipation-predominant irritable bowel syndrome, and antidiarrheal agents and 5-HT3 antagonists are used for diarrhea-predominant irritable bowel syndrome. However, since the use of existing 5-HT series drugs is limited due to side effects, drug therapy for irritable bowel syndrome is very limited to date, and the reliance on symptomatic treatment is high, which is unsatisfactory.
한편, 금전초(Lysimachiae Herba)는 앵초과의 과로황(Lysimachia christinae Hance)의 전초를 말린 약재이다. 한국에서는 꿀풀과의 긴병꽃풀(Glechoma hederacea L.)의 전초를 대용하기도 한다. 한방에서는 맛은 맵고 약간 쓰며 성질은 약간 차고, 열을 꺼주고 습사를 제거하고(청열이습), 하초의 습열을 없애고 결석을 제거하며, 소변 볼 때 깔깔하면서 아프거나 방울방울 떨어지면서 시원하게 나가지 않는 병증을 제거하고(통림), 옹저나 상처가 부은 것을 가라앉히는(소종) 효능이 있는 것으로 알려져 있다.Meanwhile, Lysimachiae Herba is a medicinal herb that is the dried whole plant of Lysimachia christinae Hance of the Primrose family. In Korea, the whole plant of Glechoma hederacea L. of the Lamiaceae family is sometimes used as a substitute. In oriental medicine, it is known to have the effects of being spicy and slightly bitter and slightly cool in nature, clearing heat and eliminating dampness (clearing heat and eliminating dampness), eliminating damp-heat in the lower abdomen and eliminating stones, removing symptoms of urination that are clear and painful or dripping and not clearing easily (relieving pain), and reducing swelling in boils or wounds (reducing swelling).
장질환 관련 선행기술로는 한국등록특허 제128920호에 '황칠나무 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 장질환 치료 및 예방을 위한 조성물'이 개시되어 있으며, 한국공개특허 제2023-0111825호에 '터리풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 장질환 예방 또는 치료용 조성물'이 개시되어 있다. 하지만, 본 발명의 '금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 장질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물'에 대해서는 아직까지 개시된 바가 없다.As for prior art related to intestinal diseases, Korean Patent No. 128920 discloses a 'composition for treating and preventing intestinal diseases containing an extract of Phellodendron amurense leaf as an active ingredient', and Korean Patent Publication No. 2023-0111825 discloses a 'composition for preventing or treating intestinal diseases containing an extract of Terrestrial Herb as an active ingredient'. However, the 'composition for preventing, improving or treating intestinal diseases containing an extract of Geumjeoncho as an active ingredient' of the present invention has not been disclosed yet.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 장질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하고, 상세하게는 DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 대장염 동물모델에서 금전초 추출물을 투여하였을 때, DSS로 인한 체중감소 및 대장길이 단축이 억제되고, 질병 활성 지수(disease activity index, DAI) 및 장내 투과도가 감소되는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.The present invention was derived from the above-mentioned needs, and the present invention provides a composition for preventing, improving or treating intestinal diseases, which contains an extract of Geumjeoncho as an effective ingredient, and specifically, the present invention was completed by confirming that when an extract of Geumjeoncho was administered to an animal model of colitis induced by DSS (dextran sulfate sodium), weight loss and colon length shortening caused by DSS were suppressed, and disease activity index (DAI) and intestinal permeability were reduced.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 함유하는 장질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.In order to solve the above problem, the present invention provides a health functional food composition for preventing or improving intestinal disease containing an extract of Geumjeoncho as an effective ingredient.
또한, 본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 함유하는 장질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating intestinal diseases containing an extract of Geumjeoncho as an effective ingredient.
또한, 본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 함유하는 장질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제를 제공한다.In addition, the present invention provides a feed additive for preventing or improving intestinal diseases containing an extract of Geumjeoncho as an effective ingredient.
또한, 본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 함유하는 장질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a veterinary composition for preventing or treating intestinal diseases containing an extract of Geumjeoncho as an effective ingredient.
또한, 본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 함유하는 장질환의 예방 또는 치료용 한약 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a herbal medicine composition for preventing or treating intestinal diseases containing an extract of Geumjeoncho as an effective ingredient.
본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 장질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 대장염 동물모델에서 금전초 추출물을 투여하였을 때, DSS로 인한 체중감소 및 대장길이 단축이 억제되고, 질병 활성 지수(disease activity index, DAI) 및 장내 투과도가 감소되는 효과가 있다.The present invention relates to a composition containing an extract of Gold Leaf as an effective ingredient for preventing, improving or treating intestinal diseases. Specifically, when an extract of Gold Leaf is administered to an animal model of colitis induced by DSS (dextran sulfate sodium), weight loss and colon length shortening caused by DSS are suppressed, and disease activity index (DAI) and intestinal permeability are reduced.
도 1은 Caco-2 세포에 금전초 추출물(LCH) 및 IL-6(interleukin-6)을 처리하였을 때, 세포 생존율을 확인한 결과이다.
도 2는 Caco-2 세포에 금전초 추출물(LCH) 및 IL-6(interleukin-6)을 처리하였을 때, 덱스트란 투과도를 측정한 결과이다. ###은 아무것도 처리하지 않은 대조군 대비 IL-6 단독 처리군의 덱스트란 투과도가 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.001이다. ***은 IL-6 단독 처리군 대비 25 및 50㎎/㎖의 금전초 추출물(LCH) 및 IL-6 처리군의 덱스트란 투과도가 유의미하게 감소하였다는 것으로, p<0.001이다.
도 3은 5% DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 대장염 마우스 모델에서 금전초 추출물 투여에 따른 개선 효능 확인을 위한 실험 모식도이다.
도 4는 5% DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 대장염 마우스 모델에서 본 발명의 금전초 추출물을 투여하였을 때, DSS 투여에 의한 체중 변화를 확인한 결과이다. ###은 아무것도 처리하지 않은 정상군 대비 DSS 처리에 의한 대장염 유도군의 체중이 유의미하게 감소하였다는 것으로, p<0.001이다. * 및 **는 대장염 유도군(DSS) 대비 금전초 추출물 투여군(LCHL, LCHH) 및 양성대조군(ASA)의 체중이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, *는 p<0.05이고, **는 p<0.01임을 의미한다.
도 5는 5% DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 대장염 마우스 모델에서 본 발명의 금전초 추출물을 투여하였을 때, 대장의 길이 변화를 확인한 결과이다. A는 각 마우스 그룹으로부터 적출한 대장을 촬영한 사진이고, B는 대장의 길이를 측정하여 나타낸 그래프이다. NOR은 아무것도 처리하지 않은 정상군이고, DSS는 DSS 처리에 의한 대장염 유도군이며, DSS+LCHL은 DSS 및 금전초 추출물(100mg/kg) 투여군이고, DSS+LCHH는 DSS 및 금전초 추출물(200mg/kg) 투여군이며, DSS+ASA는 양성대조군으로 DSS 및 5-ASA(5-aminosalicylic acid)를 투여한 군이다. ###은 아무것도 처리하지 않은 정상군 대비 DSS 처리에 의한 대장염 유도군의 대장 길이가 유의미하게 감소하였다는 것으로, p<0.001이다. **은 DSS 처리에 의한 대장염 유도군 대비 금전초 추출물 투여군 및 양성대조군의 대장 길이가 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.01이다.
도 6은 5% DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 대장염 마우스 모델에서 본 발명의 금전초 추출물을 투여하였을 때, DSS 투여에 의한 질병 활성 지수(disease activity index, DAI) 변화를 확인한 결과이다. ###은 아무것도 처리하지 않은 정상군(NOR) 대비 DSS 처리에 의한 대장염 유도군(DSS)의 8일째의 질병 활성 지수가 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.001이다. * 및 ***는 대장염 유도군(DSS) 대비 금전초 추출물 투여군(LCHL, LCHH) 및 양성대조군(ASA)의 8일째의 질병 활성 지수가 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, *는 p<0.05이고, ***는 p<0.001임을 의미한다.
도 7은 DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 대장염 마우스 모델에서 본 발명의 금전초 추출물을 투여하였을 때, 장내 덱스트란 투과도를 측정한 결과이다. ###은 아무것도 처리하지 않은 정상군(NOR) 대비 DSS 처리에 의한 대장염 유도군(DSS)의 덱스트란 투과도가 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.001이다. **는 대장염 유도군(DSS) 대비 금전초 추출물 투여군(LCHL, LCHH) 및 양성대조군(ASA)의 덱스트란 투과도가 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, p<0.01임을 의미한다.
도 8은 5% DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 대장염 마우스 모델에서 본 발명의 금전초 추출물을 투여하였을 때, 내시경을 통해 대장 병변을 촬영한 사진이다. Figure 1 shows the results of confirming cell survival rate when Caco-2 cells were treated with luteinizing chive extract (LCH) and interleukin-6 (IL-6).
Figure 2 shows the results of measuring dextran permeability when Caco-2 cells were treated with luteinizing chive (LCH) and interleukin-6 (IL-6). ### indicates that the dextran permeability of the IL-6 only treatment group significantly increased compared to the untreated control group, and p<0.001. *** indicates that the dextran permeability of the 25 and 50 mg/㎖ luteinizing chive (LCH) and IL-6 treatment groups significantly decreased compared to the IL-6 only treatment group, and p<0.001.
Figure 3 is a schematic diagram of an experiment to confirm the improvement efficacy of administering a gold leaf extract to a mouse model of colitis induced by 5% DSS (dextran sulfate sodium).
Figure 4 shows the results of confirming the change in body weight due to DSS administration when the extract of the present invention was administered to a colitis mouse model induced with 5% DSS (dextran sulfate sodium). ### indicates that the body weight of the colitis-induced group by DSS treatment significantly decreased compared to the normal group that was not treated with anything, and p<0.001. * and ** indicate that the body weight of the colitis-induced group (LCHL, LCHH) and the positive control group (ASA) statistically significantly increased compared to the colitis-induced group (DSS). * indicates p<0.05, and ** indicates p<0.01.
FIG. 5 shows the results of confirming the change in the length of the large intestine when the extract of the present invention was administered to a mouse model of colitis induced with 5% DSS (dextran sulfate sodium). A is a photograph of the large intestine extracted from each mouse group, and B is a graph showing the measured length of the large intestine. NOR is a normal group that was not treated with anything, DSS is a group induced with colitis by DSS treatment, DSS+LCHL is a group administered with DSS and the extract of the large intestine (100 mg/kg), DSS+LCHH is a group administered with DSS and the extract of the large intestine (200 mg/kg), and DSS+ASA is a positive control group administered with DSS and 5-ASA (5-aminosalicylic acid). ### indicates that the length of the large intestine of the group induced with colitis by DSS treatment was significantly reduced compared to the normal group that was not treated with anything, and p<0.001. ** indicates that the colon length of the group administered with the extract of the Korean angelica tree and the positive control group significantly increased compared to the group induced with colitis by DSS treatment, p<0.01.
Figure 6 shows the results of confirming the change in the disease activity index (DAI) due to DSS administration when the extract of the present invention was administered to a colitis mouse model induced with 5% DSS (dextran sulfate sodium). ### indicates that the disease activity index on the 8th day of the colitis-induced group (DSS) by DSS treatment was significantly increased compared to the normal group (NOR) that was not treated with anything, and p<0.001. * and *** indicate that the disease activity index on the 8th day of the colitis-induced group (DSS) administered with the extract of the gold dandelion (LCHL, LCHH) and the positive control group (ASA) was statistically significantly decreased compared to the colitis-induced group (DSS), and * indicates p<0.05 and *** indicates p<0.001.
Figure 7 shows the results of measuring intestinal dextran permeability when the extract of the present invention was administered to a DSS (dextran sulfate sodium)-induced colitis mouse model. ### indicates that the dextran permeability of the colitis-induced group (DSS) treated with DSS was significantly increased compared to the normal group (NOR) that was not treated at all, and p<0.001. ** indicates that the dextran permeability of the groups administered with the extract of the gold dandelion (LCHL, LCHH) and the positive control group (ASA) was statistically significantly decreased compared to the colitis-induced group (DSS), and p<0.01.
Figure 8 is an endoscope photograph of a colon lesion when the extract of the present invention was administered to a mouse model of colitis induced by 5% DSS (dextran sulfate sodium).
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 금전초(Lysimachia christinae) 추출물을 유효성분으로 함유하는 장질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.In order to achieve the purpose of the present invention, the present invention provides a health functional food composition for preventing or improving intestinal diseases containing an extract of Lysimachia christinae as an effective ingredient.
상기 금전초 추출물은 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다:The above-mentioned gold leaf extract may be manufactured by a method including, but not limited to, the following steps:
1) 금전초에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;1) A step of extracting by adding an extraction solvent to the gold leaf;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계; 및2) a step of filtering the extract of step 1); and
3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축하고 건조하여 추출물을 제조하는 단계.3) A step of producing an extract by concentrating and drying the filtered extract of step 2) under reduced pressure.
상기 단계 1)에서 추출용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 에탄올이지만 이에 한정하지 않는다. In the above step 1), the extraction solvent is preferably water, a lower alcohol of C 1 to C 4 , or a mixture thereof, more preferably ethanol, but is not limited thereto.
상기 제조방법에 있어서, 금전초의 추출은 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 당 업계에 공지된 모든 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 상기 단계 3)의 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무 건조 또는 동결 건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.In the above manufacturing method, the extraction of gold leaf may utilize all conventional methods known in the art, such as filtration, hot water extraction, immersion extraction, reflux cooling extraction, and ultrasonic extraction. The reduced pressure concentration in step 3) above is preferably performed using a vacuum reduced pressure concentrator or a vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto. In addition, the drying is preferably performed using reduced pressure drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying, or freeze drying, but is not limited thereto.
상기 장질환은 염증성 장질환 또는 과민성 대장 증후군일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 상기 염증성 장질환은 궤양성 대장염(Ulcerative colitis, UC), 크론병(Crohn's disease, CD), 허혈성 대장염, 장관형 베체트병, 출혈성 직장 궤양 및 회장낭염(pouchitis)으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.The above intestinal disease may be, but is not limited to, inflammatory bowel disease or irritable bowel syndrome. The above inflammatory bowel disease may be, but is not limited to, any one selected from the group consisting of ulcerative colitis (UC), Crohn's disease (CD), ischemic colitis, intestinal Behcet's disease, hemorrhagic rectal ulcer, and pouchitis.
상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 제한하는 것은 아니다.The above composition is preferably prepared in any one dosage form selected from powder, granules, pills, tablets, capsules, candy, syrup, and beverage, but is not limited thereto.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 금전초 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합체 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다. When the health functional food composition of the present invention is used as a food additive, the extract of the gold leaf plant may be added as it is or used together with other foods or food ingredients, and may be used appropriately according to a conventional method. The amount of the effective ingredient may be appropriately determined depending on the purpose of use (prevention or improvement). In general, when manufacturing a food or beverage, the composition of the present invention is added in an amount of 15 parts by weight or less, preferably 10 parts by weight or less, to the raw material. However, in the case of long-term intake for the purpose of health and hygiene or health control, the amount may be less than the above range, and since there is no problem in terms of safety, the effective ingredient may be used in an amount greater than the above range. There is no particular limitation on the type of the food. Examples of foods to which the extract may be added include meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, dairy products including ice cream, various soups, beverages, tea, drinks, alcoholic beverages, and vitamin complexes, and include all health functional foods in the conventional sense.
본 발명의 조성물을 건강 음료로 사용할 경우, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 텍스트린, 사이클로텐스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100g당 일반적으로 약 0.01~0.04g, 바람직하게는 약 0.02~0.03g이다. 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 중점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물은 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.When the composition of the present invention is used as a health beverage, it may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional ingredients, as in conventional beverages. The natural carbohydrates mentioned above are monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as dextrin and cyclotensin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. As a sweetener, a natural sweetener such as thaumatin and stevia extract, or a synthetic sweetener such as saccharin and aspartame can be used. The proportion of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g, per 100 g of the composition of the present invention. The composition of the present invention may contain various nutrients, vitamins, electrolytes, flavoring agents, coloring agents, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloid thickeners, pH regulators, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohol, carbonating agents used in carbonated beverages, etc. In addition, the composition of the present invention may contain fruit pulp for the production of natural fruit juice, fruit juice drinks, and vegetable drinks. These components may be used independently or in mixtures. The ratio of these additives is not particularly important, but the composition of the present invention is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight.
또한, 본 발명은 금전초(Lysimachia christinae) 추출물을 유효성분으로 함유하는 장질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating intestinal diseases containing an extract of Lysimachia christinae as an effective ingredient.
상기 장질환은 전술한 바와 같다.The above intestinal diseases are as described above.
본 발명의 조성물은 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 에어로졸 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.The composition of the present invention is preferably prepared in any one formulation selected from capsules, powders, granules, tablets, suspensions, emulsions, syrups, and aerosols, but is not limited thereto.
본 발명의 조성물은 상기 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 환제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제 및 현탁 용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 비경구 투여 시 피부 외용 또는 복강 내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사 방식을 선택하는 것이 바람직하다.The composition of the present invention may further contain a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent in addition to the above-mentioned effective ingredient, and may be in various oral or parenteral dosage forms. When formulated, it is prepared using diluents or excipients such as commonly used fillers, bulking agents, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants. Solid preparations for oral administration include capsules, powders, granules, tablets, pills, etc., and such solid preparations are prepared by mixing one or more compounds with at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin, etc. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, emulsions, syrups, and aerosols, and in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin, they may contain various excipients such as wetting agents, sweeteners, flavoring agents, and preservatives. Preparations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories. Non-aqueous solvents and suspending agents may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate. Suppository bases may include witepsol, macrogol, Tween 61, cacao butter, laurin butter, and glycerogelatin. For parenteral administration, it is desirable to select external skin application or intraperitoneal, rectal, intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine epidural, or intracerebrovascular injection methods.
본 발명에 따른 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효량의 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. In the present invention, the "pharmaceutically effective amount" means an amount sufficient to treat a disease with a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the level of the effective amount can be determined according to the type and severity of the patient's disease, the activity of the drug, the sensitivity to the drug, the time of administration, the route of administration and the excretion rate, the treatment period, the concurrently used drugs, and other factors well known in the medical field. The composition of the present invention can be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and can be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and can be administered singly or in multiple doses. It is important to administer an amount that can obtain the maximum effect with the minimum amount without side effects by considering all of the above factors, and this can be easily determined by those skilled in the art.
본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 금전초 추출물의 양을 기준으로 0.01~2,000mg/kg이고, 바람직하게는 30~500mg/kg이고, 더욱 바람직하게는 50~300mg/kg이며, 하루 1~6회 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 단독으로 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.The dosage of the composition of the present invention varies depending on the patient's weight, age, sex, health condition, diet, administration time, administration method, excretion rate, and disease severity, and the daily dosage is 0.01 to 2,000 mg/kg based on the amount of the extract of Geumjeoncho, preferably 30 to 500 mg/kg, and more preferably 50 to 300 mg/kg, and can be administered 1 to 6 times a day. The composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiotherapy, hormone therapy, chemotherapy, and biological response modifiers.
또한, 본 발명은 금전초(Lysimachia christinae) 추출물을 유효성분으로 함유하는 장질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제를 제공한다.In addition, the present invention provides a feed additive for preventing or improving intestinal diseases containing an extract of Lysimachia christinae as an effective ingredient.
본 발명의 사료 첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당한다. 본 발명에서 용어 '사료'는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다. 상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.The feed additive of the present invention corresponds to supplementary feed under the Feed Management Act. The term 'feed' in the present invention may mean any natural or artificial diet, meal, etc., or a component of the meal, which is suitable for animals to eat, ingest, and digest. The type of the feed is not particularly limited, and feed commonly used in the relevant technical field may be used. Non-limiting examples of the feed include plant feeds such as grains, roots, food processing by-products, algae, fibers, pharmaceutical by-products, fats, starches, meal, or grain by-products; animal feeds such as proteins, inorganic substances, fats, minerals, fats, single-cell proteins, zooplankton, or food. These may be used alone or in combination of two or more.
또한, 본 발명은 금전초(Lysimachia christinae) 추출물을 유효성분으로 함유하는 장질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a veterinary composition for preventing or treating intestinal diseases containing an extract of Lysimachia christinae as an effective ingredient.
본 발명의 수의학적 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 수의학적 조성물에 포함될 수 있는 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 세탄올, 스테아릴알콜, 유동파라핀, 솔비탄모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 메칠파라벤, 프로필파라벤 및 광물유를 들 수 있다. The veterinary composition of the present invention may further comprise suitable excipients and diluents according to conventional methods. Excipients and diluents that may be included in the veterinary composition of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxy benzoate, talc, magnesium stearate, cetanol, stearyl alcohol, liquid paraffin, sorbitan monostearate, polysorbate 60, methylparaben, propylparaben, and mineral oil.
본 발명에 따른 수의학적 조성물은 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향신료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있는데, 본 발명에 따른 수의학적 조성물은 동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있고, 제형은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 좌제, 멸균 주사용액, 멸균 외용제 등의 형태일 수 있다. The veterinary composition according to the present invention may additionally contain fillers, anticoagulants, lubricants, wetting agents, flavoring agents, emulsifiers, preservatives, etc., and the veterinary composition according to the present invention may be formulated using methods well known in the art so as to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient after administration to an animal, and the formulation may be in the form of a powder, granule, tablet, capsule, suspension, emulsion, solution, syrup, aerosol, soft or hard gelatin capsule, suppository, sterile injectable solution, sterile external preparation, etc.
본 발명에 따른 수의학적 조성물의 유효한 양은 동물의 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 질환 내지 상태의 중증도, 개체의 연령, 체중, 건강상태 또는 성별에 따른 본 발명의 유효성분에 대한 민감도, 투여 경로, 투여 기간, 상기 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 다른 조성물을 포함한 요소 및 기타 생리 내지 수의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.The effective amount of the veterinary composition according to the present invention can be appropriately selected depending on the individual animal. It can be determined based on factors including the severity of the disease or condition, the sensitivity to the effective ingredient of the present invention according to the age, weight, health status or sex of the individual, the route of administration, the period of administration, other compositions combined or used simultaneously with the composition, and other factors well known in the field of physiology or veterinary medicine.
또한, 본 발명은 금전초(Lysimachia christinae) 추출물을 유효성분으로 함유하는 장질환의 예방 또는 치료용 한약 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a herbal medicine composition for preventing or treating intestinal diseases containing an extract of Lysimachia christinae as an effective ingredient.
본 발명의 한약 조성물은 한의학적 처방에 의해 제조되는 것을 의미하지만 이에 한정하는 것은 아니다.The herbal medicine composition of the present invention means, but is not limited to, one manufactured according to a traditional Korean medical prescription.
이하, 본 발명의 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by examples. However, the following examples are only intended to illustrate the present invention, and the content of the present invention is not limited to the following examples.
<재료 및 방법> <Materials and Methods>
1. 세포 독성1. Cytotoxicity
Caco-2 세포를 48-웰 세포 배양 플레이트에 5×104 세포/웰의 농도로 배양한 후, 금전초 추출물 및 IL-6(interleukin-6)를 24시간 동안 병용처리 후, CCK-8(Cell Counting Kit-8; Dojindo Molecular Technologies Inc., Rockville, MD, USA)를 이용하여 VersaMax 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)의 450nm에서 세포 독성을 측정하였다.Caco-2 cells were cultured in 48-well cell culture plates at a density of 5 × 10 4 cells/well and co-treated with the extract of gold mint and interleukin-6 (IL-6) for 24 h. Cytotoxicity was measured at 450 nm in a VersaMax microplate reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) using CCK-8 (Cell Counting Kit-8; Dojindo Molecular Technologies Inc., Rockville, MD, USA).
2. 상피세포 간 투과성 측정2. Measurement of inter-epithelial cell permeability
Caco-2 세포는 PET(Polyethylene terephthalate) 멤브레인 인서트(0.4μm의 공극, 0.33 cm2; Millipore)에 1×105 세포/인서트의 농도로 배양한 뒤 완전 분화하여, 금전초 추출물 및 IL-6(interleukin-6)를 24시간 동안 병용처리 후, 비흡수성 FITC-덱스트란 프로브(FD-4)를 사용하여 FITC-덱스트란(1mg/㎖)을 인서트 내 첨가하고, 배양 1시간 후 인서트 아래의 배지 100㎕를 96-웰 플레이트에 넣고 FITC 형광값(Excitation: 490nm; Emission: 520nm)을 정밀 마이크로 플레이트 판독기에서 측정하였다.Caco-2 cells were cultured at a density of 1 × 10 5 cells/insert on PET (polyethylene terephthalate) membrane inserts (0.4 μm pore, 0.33 cm 2 ; Millipore), and fully differentiated. After co-treatment with gold mint extract and interleukin-6 (IL-6) for 24 h, FITC-dextran (1 mg/mL) was added to the insert using a non-absorbable FITC-dextran probe (FD-4), and after 1 h of culture, 100 μL of medium under the insert was placed into a 96-well plate, and the FITC fluorescence value (Excitation: 490 nm; Emission: 520 nm) was measured using a precision microplate reader.
3. DSS-유도 대장염 동물 모델 확립 및 시료 처치3. Establishment of DSS-induced colitis animal model and sample treatment
7주령 수컷 C57/BL6 마우스를 (주)두열바이오텍(대한민국 서울)에서 구입하여 5개 그룹(그룹당 n=10)으로 나누었다: 아무것도 처리하지 않은 정상군(NOR), 5% DSS 처리에 의한 대장염 유도군(DSS), 5% DSS 및 금전초 추출물 100mg/kg 투여군(DSS+LCHL), 5% DSS 및 금전초 추출물 200mg/kg 투여군(DSS+LCHH), 5% DSS 및 5-ASA 100mg/kg 투여군(DSS+AS).Seven-week-old male C57/BL6 mice were purchased from Dooyeol Biotech Co., Ltd. (Seoul, Korea) and divided into five groups (n=10 per group): normal group without any treatment (NOR), colitis-induced group by 5% DSS treatment (DSS), group administered with 5% DSS and 100 mg/kg of the extract of Geumjeoncho (DSS+LCHL), group administered with 200 mg/kg of the extract of Geumjeoncho (DSS+LCHH), group administered with 100 mg/kg of the extract of Geumjeoncho (DSS+AS) and 5% DSS.
DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 대장염 마우스는 식수에 용해된 5%(w/v) DSS(MP Biomedicals, 분자량 36,000~50,000)를 마우스에게 5일 동안 먹인 후 3일 동안 DSS가 없는 물을 마시게 하여 확립하였다(도 3). DSS 급여 첫날부터 금전초 추출물(100mg/kg, 200mg/kg) 또는 5-ASA(100mg/kg)을 경구투여하였고, 투여 전 매일 체중을 측정하였다. 실험 종료 및 희생 후 대장 길이를 측정하고 사진을 촬영하였다.DSS (dextran sulfate sodium)-induced colitis mice were established by feeding 5% (w/v) DSS (MP Biomedicals, molecular weight 36,000–50,000) dissolved in drinking water to the mice for 5 days and then allowing them to drink DSS-free water for 3 days (Fig. 3). From the first day of DSS feeding, either the extract of Ligusticum officinalis (100 mg/kg, 200 mg/kg) or 5-ASA (100 mg/kg) was orally administered, and body weights were measured every day before administration. The colon length was measured and photographs were taken after the experiment was completed and the mice were sacrificed.
4. 질병 활동 지수(DAI; disease activity index) 평가4. Disease activity index (DAI) assessment
실험 일정 동안 심각도를 평가하기 위해 마우스의 체중, 대변 상태 및 심한 출혈을 매일 기록하였다(표 1). DAI는 [(체중 감소 + 대변 상태 + 심한 출혈)/3] 점수의 평균으로 결정되었다.During the experimental schedule, the body weight, stool condition, and severe bleeding of the mice were recorded daily to assess the severity (Table 1). The DAI was determined as the mean of the scores of [(body weight loss + stool condition + severe bleeding)/3].
5. 생체 내 상피 세포간 투과도5. In vivo epithelial cell transmembrane permeability
실험 8일째에 비흡수성 FD-4(FITC-conjugated 4-kD dextran)를 이용하여 세포주위 상피 투과도를 확인하였다. 마우스에 위관 영양법으로 60mg/100g의 FD-4 용액을 공급하고, 4시간 후 혈청을 수집하고 VERSAmax 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 490nm 여기 및 520nm 방출에서 FD-4 함량을 측정하였다.On day 8 of the experiment, pericellular epithelial permeability was determined using non-absorbable FD-4 (FITC-conjugated 4-kD dextran). Mice were administered 60 mg/100 g FD-4 solution by gavage, and serum was collected after 4 h, and FD-4 content was measured at 490 nm excitation and 520 nm emission using a VERSAmax microplate reader.
6. 대장 내시경 분석6. Colonoscopy Analysis
실험 8일째에 가시광선 광원이 있는 미니 내시경(OLYMPUS, Tokyo, Japan, 길이 670mm, 직경 2.8mm)을 사용하여 이소플루란으로 마취된 마우스 대장의 고해상도 이미지를 획득하였다.On the 8th day of the experiment, high-resolution images of the colon of mice anesthetized with isoflurane were obtained using a mini-endoscopy with a visible light source (OLYMPUS, Tokyo, Japan, length 670 mm, diameter 2.8 mm).
7. 통계처리7. Statistical processing
본 발명에서 획득한 데이터는 평균±표준오차로 나타내었고, 통계분석은 Student t-test를 통해 분석하였으며, Tukey test 및 Dunnett's test를 수반하는 일원배치 분산분석으로 계산하였다.The data obtained in the present invention were expressed as the mean ± standard error, and statistical analysis was performed using the Student t-test, and calculated using a one-way analysis of variance accompanied by the Tukey test and Dunnett's test.
제조예 1. 금전초 추출물의 제조Manufacturing Example 1. Manufacturing of Gold Leaf Extract
금전초 1kg을 70%(v/v) 에탄올 15ℓ에 넣고 3시간 동안 환류추출(Heating mantle) 후 정성 여과지(Qualitative Filter Paper, Whatman No.4)로 여과 및 침지한 후 회전 농축기(Rotary evaporator, EC-1020)로 10배 감압 농축한 다음 동결 건조(일신바이오 LP20) 하였다.1 kg of Goldenseal was placed in 15 ℓ of 70% (v/v) ethanol, and refluxed for 3 hours (heating mantle), filtered and soaked with qualitative filter paper (Whatman No. 4), concentrated under reduced pressure 10-fold with a rotary evaporator (EC-1020), and then freeze-dried (Ilshin Bio LP20).
실시예 1. 금전초 추출물의 세포 독성 확인Example 1. Confirmation of cytotoxicity of the extract of gold leaf
Caco-2 세포에서 본 발명의 금전초 추출물을 농도별로 처리하였을 때, 세포 생존율을 측정하였다.When Caco-2 cells were treated with the extract of the present invention at various concentrations, cell viability was measured.
그 결과, 도 1에 개시한 바와 같이 금전초 추출물 모든 처리농도에서 세포 생존율이 높게 유지되어 세포 독성이 없는 것을 확인하였다.As a result, as disclosed in Fig. 1, it was confirmed that the cell viability was high at all treatment concentrations of the extract of Geumjeoncho, indicating no cytotoxicity.
실시예 2. 금전초 추출물의 상피세포 간 투과도 감소 효과Example 2. Effect of the extract of the goldenrod on reducing the permeability between epithelial cells
Caco-2 세포에서 본 발명의 금전초 추출물을 농도별로 처리하였을 때, 세포 간 투과도를 측정하였다.When the extract of the present invention was treated at various concentrations in Caco-2 cells, the intercellular permeability was measured.
그 결과, 도 2에 개시한 바와 같이 아무것도 처리하지 않은 대조군 대비 IL-6 단독 처리군의 덱스트란 투과도가 현저하게 증가되었고, 이에 대비하여 본 발명의 금전초 추출물을 투여한 군에서는 덱스트란 투과도가 유의미하게 감소하였다.As a result, as disclosed in Fig. 2, the dextran permeability of the IL-6 only treated group significantly increased compared to the untreated control group, and in contrast, the dextran permeability of the group administered the extract of the gold ginseng of the present invention significantly decreased.
실시예 3. 금전초 추출물 투여에 따른 체중감소 억제 효과Example 3. Weight loss inhibition effect by administration of gold leaf extract
대장염 마우스 모델에서 본 발명의 금전초 추출물 투여에 따른 체중 변화를 관찰하였다. The change in body weight following administration of the extract of the present invention to a mouse model of colitis was observed.
그 결과, 도 4에 개시한 바와 같이 아무것도 처리하지 않은 정상군(NOR) 대비 DSS 투여에 의한 대장염 유도군(DSS)에서 체중이 감소된 반면, 본 발명의 금전초 추출물을 투여한 군(LCHL, LCHH)에서 DSS 투여에 의해 감소되었던 체중이 증가되었다. As a result, as disclosed in Fig. 4, the body weight in the colitis-induced group (DSS) administered with DSS decreased compared to the normal group (NOR) that was not treated with anything, whereas the body weight that had been decreased by DSS administration increased in the groups administered with the extract of the present invention (LCHL, LCHH).
실시예 4. 금전초 추출물 투여에 따른 대장의 길이 감소 억제 효과Example 4. Inhibitory effect of colon length reduction by administration of gold leaf extract
대장염 마우스 모델에서 본 발명의 금전초 추출물 투여에 따른 대장의 길이 변화를 관찰하였다. The change in colon length following administration of the extract of the present invention was observed in a mouse model of colitis.
그 결과, 도 5에 개시한 바와 같이 DSS 투여로 인해 단축된 대장의 길이가 금전초 추출물을 투여한 군에서 통계적으로 유의미하게 증가하였다.As a result, as disclosed in Fig. 5, the length of the large intestine shortened by DSS administration was statistically significantly increased in the group administered with the extract of the Korean angelica tree.
실시예 5. 금전초 추출물 투여에 따른 질병 활성 지수(DAI) 감소 효과Example 5. Effect of administration of extract of gold leaf on disease activity index (DAI) reduction
대장염 마우스 모델에서 본 발명의 금전초 추출물 투여에 따른 질병 활성 지수 변화를 관찰하였다. Changes in the disease activity index following administration of the extract of the present invention to a mouse model of colitis were observed.
그 결과, 도 6에 개시한 바와 같이 아무것도 처리하지 않은 정상군(NOR) 대비 DSS 투여에 의한 대장염 유도군(DSS)에서 체중 감소, 설사, 직장 출혈 등의 임상증상을 포함하는 질병 활성 지수가 증가된 반면, 본 발명의 금전초 추출물을 투여한 군(LCHL, LCHH)에서 이러한 변화된 임상 증상들이 유의미하게 감소되었다. As a result, as disclosed in Fig. 6, the disease activity index including clinical symptoms such as weight loss, diarrhea, and rectal bleeding increased in the colitis-induced group (DSS) administered with DSS compared to the normal group (NOR) that was not treated with anything, whereas these changed clinical symptoms were significantly reduced in the group administered with the extract of the present invention (LCHL, LCHH).
실시예 6. 금전초 추출물 투여에 따른 장내 투과도 감소 효과Example 6. Effect of administration of extract of gold leaf on reduction of intestinal permeability
대장염 마우스 모델에서 본 발명의 금전초 추출물 투여에 따른 장내 투과도 변화를 관찰하였다. The change in intestinal permeability following administration of the extract of the present invention was observed in a mouse model of colitis.
그 결과, 도 7에 개시한 바와 같이 아무것도 처리하지 않은 정상군(NOR) 대비 DSS 투여에 의한 대장염 유도군(DSS)에서 FD4의 투과도가 현저하게 증가되었고, 이에 대비하여 본 발명의 금전초 추출물을 투여한 군(LCHL, LCHH)에서 FD4의 투과도가 유의미하게 감소되었다.As a result, as disclosed in Fig. 7, the permeability of FD4 was significantly increased in the colitis-induced group (DSS) by DSS administration compared to the normal group (NOR) that was not treated with anything, and in contrast, the permeability of FD4 was significantly reduced in the groups (LCHL, LCHH) administered the extract of the present invention.
실시예 7. 금전초 추출물 투여에 따른 대장 병변 변화Example 7. Changes in colon lesions following administration of the extract of the goldenrod
대장염 마우스 모델에서 본 발명의 금전초 추출물 투여에 따른 대장염 마우스의 대장 병변을 내시경을 통해 관찰하였다.In a mouse model of colitis, colonic lesions of mice with colitis were observed through an endoscope following administration of the extract of the present invention.
그 결과, 도 8에 개시한 바와 같이 아무것도 처리하지 않은 정상군(NOR)은 대장 조직이 정상인 반면, DSS 투여에 의한 대장염 유도군(DSS)에서는 대장 조직에 염증이 많이 발생되고 부종이 있는 것을 확인하였다. 반면에, 본 발명의 금전초 추출물을 투여한 군(LCHL, LCHH)에서는 이러한 대장 조직의 염증 및 부종이 감소된 것을 확인하였다.As a result, as disclosed in Fig. 8, the normal group (NOR) that was not treated with anything had normal colon tissue, whereas the colitis-induced group (DSS) administered with DSS showed a lot of inflammation and edema in the colon tissue. On the other hand, in the group administered with the extract of the present invention (LCHL, LCHH), it was confirmed that inflammation and edema in the colon tissue were reduced.
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