KR102517581B1

KR102517581B1 - 프로바이오틱 및 프리바이오틱 조성물

Info

Publication number: KR102517581B1
Application number: KR1020177013629A
Authority: KR
Inventors: 니스탈 페드로 미구엘 루비오; 우뤼나 아나 마리아 카르바할; 디에즈 마르타 가르시아
Original assignee: 아퀼론 씨와이엘 에스.엘.; 유니버시다드 데 레온
Priority date: 2014-10-21
Filing date: 2015-10-21
Publication date: 2023-04-03
Anticipated expiration: 2035-10-21
Also published as: US20170312321A1; US10179153B2; JP6765370B2; CA2965214C; CA2965214A1; AU2015334989B2; KR20170088847A; JP2017533197A; NZ730699A; AU2015334989A1; RU2017113027A3; WO2016062771A1; EP3209307A1; CN107073049A; DK3209307T3; BR112017008184A2; PL3209307T3; RU2017113027A; CN107073049B; ES2936842T3

Abstract

본 발명은 축산업에 유익할 수 있는 제품 및 조성물에 관한 것이다. 상기 제품 및 조성물은 박테리아, 및 특히 프로바이오틱 박테리아와 같은 미생물을 포함한다.
따라서, 미생물 균주뿐만 아니라, 숙련된 독자가 본 발명에서 유용한 추가의 균주를 찾을 수 있게 할 선택 기준이 본원에 제공된다.
상기 균주뿐만 아니라 이를 포함하는 조성물은 동물, 특히 돼지와 같은 농장 동물에게 투여될 수 있다. 상기 투여는 생후 1일에 일어날 수 있다.
본 발명의 제품 또는 조성물의 투여에 의해, 동물 성장이 촉진될 수 있고 동물 체중이 증가할 수 있다. 또한 상기 화합물 또는 조성물에 의해 감염이 예방 또는 치료될 수 있다.

Description

프로바이오틱 및 프리바이오틱 조성물{PROBIOTIC AND PREBIOTIC COMPOSITIONS}

본 발명은 생명공학 분야에 관한 것으로서, 특히 프로바이오틱스, 및 인간 및/또는 동물의 치료에 유용할 수 있는 프로바이오틱스를 포함하는 조성물에 관한 것이다.

신생(newborn) 동물 및 특히 (집약) 농장에서의 신생 동물은 박테리아 및 다른 감염, 예컨대 바이러스 감염에 취약하다. 이러한 감염은 체중 감소와 관련된 설사를 유발할 수 있고, 심한 경우에는 신생 동물의 사망까지도 유발할 수 있다. 예를 들어, 몇 년 전, 신생 새끼 돼지에서의 설사 사례가 스페인의 상이한 지리적 상황의 양돈장에서 기술되었다. 상기 설사는 이들 동물에서 한 가지 증상인 반면, 상기 증상의 원인 인자는 종종 밝혀내기 어려운 것으로 여겨진다. 예를 들어, 신생 돼지의 많은 설사 사례에서, 아마도 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)와 같은 바람직하지 않은/원치않는 박테리아 균주를 단독으로 또는 클로스트리듐 퍼프린겐스(Clostridium perfringens) 또는 클로스트리듐 디피실(Clostridium difficile)과 함께 단리할 수 있지만, 설사는 일반적으로 출생 직후에 검출되며, 통상의 치료 및 예방 조치는 종종 효과적이지 못하다. 다른 사례에서, 설사는, 예를 들어, 로타바이러스, 코로나바이러스, 노로바이러스 아데노바이러스 및/또는 아스트로바이러스에 의해 야기되는 감염과 같이, 바이러스 감염에 의해 야기된다.

어느 특정한 이론에 구속되기를 바라지 않지만, 장내세균 불균형(dysbiosis; dysbacteriosis로도 불림)이 원인 인자가 될 수 있는 것으로 여겨진다. 장내세균 불균형은 신체 상의 또는 신체 내부에서의 미생물 불균형을 갖는 상태를 지칭한다. 농장 동물, 특히 돼지에서, 장내세균 불균형은 암퇘지 사육 중에 항생제의 무분별한 사용에 의해 야기될 수 있으며, 이는 신생 새끼 돼지의 장내 세균총의 변화를 일으킬 수 있다.

이러한 항생제 사용의 단점을 고려할 때, 축산업에서 항생제의 사용을 줄일 것이 권고되고 있다. 다른 한편으로는, 통상적으로 사용되는 항생제를 대체하기 위해 신생 동물의 대체 치료 방법이 필요할 것이다.

EU가 2005년부터 돼지 육종시 성장 촉진제로서 항생제의 사용을 줄일 것을 권고하고 있으므로(2005년 3월 4일자 법령(EC) 번호 378/2005에 의해 개정됨), 동물 육종가들은 특히 어릴 때 (농장) 동물의 일반 건강 상태를 개선할 수 있는 대안을 간절히 바라고 있다. 본 발명자들은 이러한 문제점에 대한 해결책을 제공하며, 상기 해결책은 하기에 기재되어 있다. 따라서, 본 발명은 최근의 방법에 의해 야기되는 몇 가지 문제점을 해결하며, 유리한 효과는 하기에 상세히 설명될 것이다.

제1 양태에서, 본 발명은 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터(Spanish Type Cultures Collection)에 기탁된 균주를 적어도 포함하는 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 인간 또는 동물을 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 종 및 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri) 종에 속하는 미생물의 혼합물을 포함하고, 락토바실러스(Lactobacillus) 속(바람직하게는 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum) 종 및 락토바실러스 무코사에(Lactobacillus mucosae) 종(바람직하게는 이들 미생물은 각각 CECT 8347(AqSynJ12) 및 CECT 8349(AqSynJ55)임)에 속하는 미생물은 제외함), 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 페디오코커스(Pediococcus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 에어로코커스(Aerococcus) 속, 카르노박테리움(Carnobacterium) 속, 엔테로코커스(Enterococcus) 속, 오에노코커스(Oenococcus) 속, 스포로락토바실러스(Sporolactobacillus) 속, 테트라제노코커스(Tetragenococcus) 속, 바고코커스(Vagococcus) 속 및/또는 바이셀라(Weisella) 속에 속하는 1종 이상의 미생물을 임의로 포함하는 조성물에 관한 것이다.

락토바실러스 퍼멘툼 CECT 8347(AqSynJ12) 및 락토바실러스 무코사에 CECT 8349(AqSynJ55)는 2013년 5월 16일에 Aquilon CYL S.L.에 의해 CECT(스페인 생물자원센터, Coleccion Espanola de Cultivos Tipo(CECT), Universidad de Valencia, Parc Cientific Universitat de Valencia, Catedratico Agustin Escardino, 9, 46980 Paterna (Valencia, Spain))에 기탁되었다.

바람직한 구현예에서, 본 발명의 조성물은 Aquilon CYL S.L에 의해 CECT(Coleccion Espanola de Cultivos Tipo(CECT), Universidad de Valencia, Parc Cientific Universitat de Valencia, Catedratico Agustin Escardino, 9, 46980 Paterna (Valencia, SPAIN))에 기탁된 2종의 유산균인 CECT 8700(AqSynRMH69) 및 CECT 8350(AqSynJ59)을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명의 조성물에서, 각각의 균주는 적어도 하기 조건 a., 바람직하게는 두 조건 a. 및 b., 가장 바람직하게는 모든 조건 a., b. 및 c.를 충족한다:

a. 하기 억제대(inhibition zone) 중 적어도 하나의 억제대에 의해 입증되는 항미생물 활성을 나타냄: (i) 살모넬라(Salmonella)의 경우, 10 mm 이상, 예를 들어 13 mm 이상, (ii) 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)의 경우, 9 mm 이상, 바람직하게는 10 mm 이상, (iii) 스타필로코커스 아우레우스(Staphyloccocus aureus)의 경우 9 mm 이상, 바람직하게는 10 mm 이상, (iv) 에스케리키아 콜라이의 경우 10 mm 이상, 예를 들어 18 mm 이상;

b. pH=3.5, 또는, 대안적으로 pH=2.5에서 3시간 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있음;

c. 0.45% 담즙 추출물의 존재 하에, 바람직하게는 pH=8에서, 4시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있음.

"생존가능한 유기체"는 살아있는 유기체 및 이의 임의의 생명 단계로서 정의될 수 있다. 따라서, "본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있는" 균주는 특정 조건 하에 생존하고 살아있을 수 있는 균주, 예를 들어 특정 조건(예컨대, pH=3.5, 또는, 대안적으로 pH=2.5에서 3시간의 인큐베이션, 및/또는 0.45% 담즙 추출물의 존재 하에, 바람직하게는 pH=8에서 4시간의 인큐베이션)에 노출된 후 50% 이상의 CFU, 예컨대 50%, 또는 60%, 또는 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 95%, 99% 이상, 예컨대 100% CFU가 살아있는(생존가능한) 균주를 의미할 수 있다.

그의 임의의 변형의 본 발명의 조성물은 인간 또는 동물을 치료하는 방법, 예를 들어 설사를 치료하거나 예방하는 방법에서 사용하기 위한 것일 수 있다. 이 경우, 설사는 박테리아 감염에 의해 야기될 수 있다. 또한, 설사는 바이러스 감염에 의해 야기될 수 있다. 더욱이 또는 대안적으로, 인간 또는 동물을 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 그의 임의의 변형의 본 발명의 조성물은 신생 포유동물(바람직하게는 새끼 돼지)의 체중을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 상기 조성물은 포유동물, 바람직하게는 신생 포유동물, 바람직하게는 신생 동물 및 더욱 바람직하게는 새끼 돼지에게 투여될 수 있다.

본 발명은 또한 미생물, 바람직하게는 박테리아, 및 더욱 바람직하게는 유산균을 제공한다. 본 발명에 의해 제공되는 미생물은 2014년 9월 10일에 AQUILON CYL S.L.에 의해 CECT(스페인 생물자원센터, Coleccion Espanola de Cultivos Tipo(CECT), Universidad de Valencia, Parc Cientific Universitat de Valencia, Catedratico Agustin Escardino, 9, 46980 Paterna (Valencia, SPAIN))에 기탁된 균주 CECT 8700(AqSynRMH69)이다.

각각의 균주에 대해 동의어로 사용될 수 있는 괄호 안의 AqSyn 번호는 본 발명자들에 의해 균주들에게 할당되었다.

바람직하게는 본 발명의 조성물은 균주 CECT 8700(AqSynRMH69) 및 1종 이상의 추가의 균주를 포함한다. 바람직하게는, 1종 이상의 추가의 균주는 락토바실러스 속(바람직하게는 락토바실러스 퍼멘툼 종 및 락토바실러스 무코사에 종(바람직하게는 이들 미생물은 각각 CECT 8347(AqSynJ12) 및 CECT 8349(AqSynJ55)임)에 속하는 미생물은 제외함), 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토코커스 속, 스트렙토코커스 속, 에어로코커스 속, 카르노박테리움 속, 엔테로코커스 속, 오에노코커스 속, 스포로락토바실러스 속, 테트라제노코커스 속, 바고코커스 속 및/또는 바이셀라 속에 속하는 균주로부터 선택된다.

바람직한 구현예에서, 상기 조성물은 하기 균주 CECT 8700(AqSynRMH69) 및 CECT 8350(AqSynJ59)를 적어도 포함하거나, 대안적으로 이들로 이루어진다. 임의로, 상기 조성물은 추가의 균주를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 조성물은 임의의 추가의 균주를 포함하지 않는다. 따라서, 바람직한 조성물은 CECT 8700(AqSynRMH69) 및 CECT 8350(AqSynJ59)으로 이루어진 미생물을 포함한다(즉, 상기 조성물은 하기 미생물 CECT 8700(AqSynRMH69) 및 CECT 8350(AqSynJ59)을 포함하고, 미생물이 아닌 추가의 성분을 포함할 수 있음).

바람직하게는, 본 발명의 조성물에 포함되는 미생물은, 하기에 더 상세히 설명된 바와 같이, 항생제 내성이다.

어느 경우에서든, "포함하다"는 추가의 박테리아 균주가 존재하거나, 또는 추가의 박테리아 균주가 존재하지 않는다는 것으로 임의로 이해될 수 있다. 추가의 박테리아 균주가 존재하지 않는 경우에도, "포함하다"는 임의로 추가의 다른 성분, 즉 박테리아 이외의 임의의 성분이 존재하는 것을 의미할 수 있다.

균주 CECT 8350(AqSynJ59)은 2013년 5월 16일에 AQUILON CYL S.L에 의해 CECT(스페인 생물자원센터, Coleccion Espanola de Cultivos Tipo(CECT), Universidad de Valencia, Parc Cientific Universitat de Valencia, Catedratico Agustin Escardino, 9, 46980 Paterna (Valencia, SPAIN))에 기탁되었다.

용어 "치료" 또는 "요법"은 질병을 치료하는 예방 및 치유 방법 모두를 포괄하는데, 이 둘은 건강의 유지 또는 회복에 관한 것이기 때문이다. 통증, 불편 또는 무능력의 원인에 관계없이, 적절한 제제의 투여에 의한 이의 완화는 본 출원의 문맥에서 요법 또는 치료적 용도로서 해석되어야 한다.

일부 구현예에서 본 발명의 조성물(기재된 임의의 구현예에서)은, 예를 들어 신생 포유동물의 설사를 치료하거나 예방하고/거나 체중을 증가시키는 방법에서 및/또는 신생 포유동물의 성장을 촉진하는 방법에서와 같이, 예를 들어 인간 또는 동물을 치료하는 방법에서 사용될 수 있다. 바람직하게는, 상기 조성물은, 신생 포유동물의 설사를 치료하거나 예방하고/거나 체중을 증가시키는 방법에서 및/또는 신생 포유동물, 예컨대 신생 새끼 돼지의 성장을 촉진하는 방법에서와 같이, 동물을 치료하는 방법에서 사용될 수 있다. 설사는 박테리아에 의해 및/또는 바이러스 감염에 의해 야기될 수 있다(즉, 박테리아 감염 및/또는 바이러스 감염이 신생 포유동물에서 설사의 원인일 수 있음).

본 발명의 조성물은 설사 및/또는 감염, 예컨대 박테리아 감염 및/또는 바이러스 감염과 같이, 상기 기재된 바와 같이, 포유동물에서 병태를 치료하거나 예방하는데 특히 적합하다. 일부 구현예에서 상기 병태는 박테리아 감염(대장균증(colibacillosis) 포함), 클로스트리듐 디피실(Clostridium difficile) 신생아 설사, 클로스트리듐 퍼프린겐스(Clostridium perfringens) A 및 C 유형으로 인한 설사로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서 상기 병태는 바이러스 감염, 예컨대, 로타바이러스 감염, 코로나바이러스 감염, 노로바이러스 감염, 아데노바이러스 감염 및/또는 아스트로바이러스 감염, 바람직하게는 로타바이러스 감염 및/또는 코로나바이러스 감염으로 인한 설사로부터 선택될 수 있다. 또한, (박테리아 및/또는 바이러스) 감염이 상기 설사에 대한 원인 인자로 (아직) 판명되지 않았음에도 불구하고, 설사로 고통받고 있는 동물에게 상기 조성물을 투여할 수 있다. 본 발명의 조성물은 또한 설사 및/또는 감염을 예방하기 위해, 동물이 임의의 설사 및/또는 감염을 갖기 전에 투여될 수 있다.

도 1: 억제대(inhibition zone), 예시적인 예.
도 2: 설사를 보이는 한배 새끼의 %.
도 3: 치료된 한배 새끼의 %.

하기 상세한 설명은 본 발명의 개별적인 특징의 특정한 변형 및/또는 바람직한 변형을 개시한다. 본 발명은 또한 특히 바람직한 양태로서 본 발명의 둘 이상의 특징에 대해 기술된 특정한 변형 및/또는 바람직한 변형을 조합함으로써 생성되는 양태를 고려한다.

달리 명확히 명시되지 않는 한, 용어 "포함하는"은 본 문서의 문맥에서 "포함하는"에 의해 도입된 목록의 구성원 외에도 추가의 구성원이 임의로 존재할 수 있다는 것을 나타내기 위해 사용된다. 그러나, 용어 "포함하는"은 추가의 구성원이 존재하지 않을 가능성을 포함한다는 것이 본 발명의 특정 구현예로서 고려되며, 즉 이 구현예의 목적을 위해, "포함하는"은 "이루어지는"의 의미를 갖는 것으로 이해되어야 한다.

달리 명확히 명시되지 않는 한, 본원에서 상대적인 양은 모두 중량/중량 기준으로 나타낸다. 일반 용어를 특징으로 하는 성분의 상대적인 양의 표시는 상기 일반 용어가 포함하는 모든 특정 변형 또는 구성원의 총량을 의미한다. 일반 용어에 의해 정의된 특정 성분이 특정한 상대적 양으로 존재하는 것으로 명시되는 경우, 그리고 이 성분이 일반 용어에 의해 포함되는 특정 변형 또는 구성원인 것을 추가로 특징으로 하는 경우, 상기 일반 용어에 의해 포함되는 다른 변형 또는 구성원은 부가적으로 존재하지 않으며, 이로써 상기 일반 용어에 의해 포함되는 성분의 상대적인 총량은 명시된 상대적 양을 초과하고; 더욱 바람직하게는 상기 일반 용어에 의해 포함되는 다른 변형 또는 구성원이 전혀 존재하지 않는다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약"은 표시된 값 ± 그 값의 1%를 의미하거나, 또는 용어 "약"은 표시된 값 ± 그 값의 2%를 의미하거나, 또는 용어 "약"은 표시된 값 ± 그 값의 5%를 의미하거나, 용어 "약"은 표시된 값 ± 그 값의 10%를 의미하거나, 또는 용어 "약"은 표시된 값 ± 그 값의 20%를 의미하거나, 또는 용어 "약"은 표시된 값 ± 그 값의 30%를 의미하거나; 바람직하게는 용어 "약"은 정확하게 표시된 값(± 0%)을 의미한다.

본 발명은 프로바이오틱스 및 프리바이오틱스의 개념을 통합함으로써, 신바이오틱스(Synbiotics)를 제공한다. 본 발명자들은 면역 조절제 효과를 갖는 박테리아 및 조성물에 대한 새로운 치료적 창을 연다. 본 발명의 미생물 또는 조성물은 새끼 돼지와 같은 동물의 생애 초기 단계에 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명은 축산업에 유익할 수 있는 제품 및 조성물에 관한 것이다. 실시예에 의해 입증된 바와 같이, 실제 중요한 관찰사항은 프로바이오틱 치료가 생산성 측면에서 항생제 치료와 적어도 동등하게 효과적이며, 아마도 (표준 항생제 치료에 비해) 더 우수하다는 점이다. 본 발명자들의 기여는 총 치료 비용과 법적 압력 및 환경적 영향으로 인해 막대한 경제적 영향을 미친다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 미생물, 바람직하게는 박테리아는 유익한 효과를 갖는 미생물이다. 이들은 바람직하게는 유산균이다. 심지어 미생물의 비박테리아 종도, 하기 선택 기준 a. 내지 c.에 부합하는 한, 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 효모 역시 프로바이오틱 특성을 가질 수 있는 것으로 알려져 있다.

본원에 기재된 기능적 파라미터가 가장 중요한 선택 기준이지만, 미생물의 종에 관한 한, 유산균이 바람직하다. 유산균(LAB)은 그의 공통적인 대사 및 생리학적 특징에 의해 연관된 그람-양성, 내산성 박테리아의 계통군을 포함한다. 부패 식물 및 유제품뿐만 아니라 동물 배설물에서 천연적으로 발견되는 이들 박테리아는 탄수화물 발효의 주요 대사 최종 생성물로서 유산을 생산한다. 유산균은 식품에서 흔히 볼 수 있고 포유동물의 점막 표면의 건강한 미생물총(microflora)에 기여하기 때문에, 일반적으로 안전하다고 인정된다(GRAS 등급). 유산균은 바람직하게는 락토바실러스 속, 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토코커스 속, 스트렙토코커스 속, 에어로코커스 속, 카르노박테리움 속, 엔테로코커스 속, 오에노코커스 속, 스포로락토바실러스 속, 테트라제노코커스 속, 바고코커스 속, 및 바이셀라 속 중에서 선택된다. 락토바실러스 및/또는 엔테로코커스가 바람직할 수 있다. 락토바실러스가 바람직하다. 본 발명의 일 구현예에서, 락토바실러스 퍼멘툼 종 및 락토바실러스 무코사에 종에 속하는 미생물은 본 발명의 조성물에 존재하지 않을 수 있다. 특히, 본 발명의 일 구현예에서, 락토바실러스 퍼멘툼 CECT 8347(AqSynJ12) 및 락토바실러스 무코사에 CECT 8349(AqSynJ55)에 속하는 미생물이 본 발명의 조성물에 존재하지 않을 수 있다.

본원에서 바람직한 박테리아는 바람직하게는 그람 양성이며 카탈라제 음성이다. 박테리아가 그람 양성인지 여부는 본 기술분야에서 공지된 표준 기술에 따라 시험될 수 있다. 그람 염색은 본 기술분야에 공지된 표준 기술에 따라 시험될 수 있다. 그람 염색은 그것이 양성인지 또는 음성인지 확인하기 위해 상이한 "착색제(colorings)"(염색제)로 연속적으로 염색하고 샘플을 세척하는 것으로 이루어진다. 박테리아가 카탈라제 음성인지 여부는 하기와 같이 시험된다: 카탈라제 시험은 배양 샘플 또는 한천 사면배지(slant)에 과산화수소를 첨가하는 것을 포함한다. 만약 문제되는 박테리아가 카탈라제를 생산하면, 이들은 과산화수소를 전환시키고 산소 기체가 방출될 것이다. 기체의 방출은 기포를 형성시키고 이러한 기포는 양성 시험(카탈라제 양성 박테리아)을 나타낸다.

본원에서 바람직한 유산균은 바람직하게는 MRS(Man Rogosa Sharpe) 배지에서 성장할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 하기에 기재된 산성화된 MRS 한천에서 성장할 수 있다. MRS 배지는 유산균, 특히 락토바실러스 종의 성장을 돕기 위해 만들어졌다. 그것은 그람 음성 박테리아 대부분의 성장을 꺼리는 것으로 여겨진다. 그러나, 유산균 이외의 다른 박테리아가 MRS에서 언젠가는 성장할 수 있으므로, 콜로니가 그람 양성에 속하고 카탈라제 음성 박테리아인지를 확인하는 것이 권고되거나 필요하다.

본원에서 바람직한 유산균은 아마도 프로바이오틱 박테리아일 수 있다. "프로바이오틱"의 가장 흔히 용인되는 정의는 1998년에 Fuller에 의해 제시되었으며, 그는 프로바이오틱을 "숙주 동물의 장내 미생물 균형을 개선함으로써 숙주 동물에게 유익한 영향을 미치는 살아있는 미생물 사료 보충제"로서 기술하였다. 일반적으로, 프로바이오틱스는 살아있는 미생물이다. 상이한 프로바이오틱스는 장에서 상이한 작용을 하고, 따라서 상이한 프로바이오틱스는 함께 작용하여 유익한 효과를 제공할 수 있다고 여겨진다. 다른 출처는 프로바이오틱스를 인간 또는 동물에 대한 건강상의 이점이 이미 입증된 미생물로서 정의한다. 프로바이오틱스에 대한 선택 기준은 문헌["Report of a Joint FAO/WHO Expert Consultation on Evaluation of Health and Nutritional Properties of Probiotics in Food Including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria", Food and Agriculture Organization of the United Nations and World Health Organization, 2001, Cordoba, Argentina]에 공개되어 있다. 살아있는 박테리아의 사용 이점은 널리 기술되어 왔다.

최근에, "프리바이오틱스"의 개념이 도입되었으며; 프리바이오틱스는 위장관 내 특정 미생물의 성장을 증가시키는 비소화성 식품 성분이다. "신바이오틱스(Synbiotics)"는 1종 이상의 프로바이오틱 및 1종 이상의 프리바이오틱을 포함하는 조성물이다. 이러한 조성물은 유익한 박테리아(예컨대 프로바이오틱스)의 성장을 촉진하는 것으로 이해된다. 예시적인 예로서, 발효 유제품은 살아있는 박테리아 및 그에 필요한 식품 공급원을 함유하기 때문에 종종 신바이오틱스로서 고려된다. 프리바이오틱스 및 프로바이오틱스와 관련된 이점이 호의적임에도 불구하고, 섭취되는 프리바이오틱 및 프로바이오틱의 유형 및 양뿐만 아니라 특정 프로바이오틱스과 특정 프리바이오틱스의 특정 조합에 따라 이점이 달라지기 때문에 연구자들은 일반적인 결론을 도출하는데 있어 신중하다. 따라서, 강력한 신바이오틱스는 프로바이오틱 박테리아의 특정한 균주와 주의깊게 선택된 프리바이오틱스의 조합에 기초한다. 이들은 포유동물에게 중요한 건강상의 이점을 가져올 수 있다.

특정 프로바이오틱스, 프리바이오틱스 및 신바이오틱스가 인간에서 사용하기 위해 제안되어 왔고, 프로바이오틱스에 대한 선택 기준은 예를 들어 문헌["Report of a Joint FAO/WHO Expert Consultation on Evaluation of Health and Nutritional Properties of Probiotics in Food Including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria", Food and Agriculture Organization of the United Nations and World Health Organization, 2001, Cordoba, Argentina]에 개시되어 있다.

본 발명은 동물, 특히 농장 동물에게 건강상의 이점을 보일 가능성이 있는 미생물, 특히 박테리아를 사용한다. 바람직하게는, 동물은 가축, 가축화된 동물 또는 그 자체가 가축 또는 가축화된 동물은 아니지만(즉, 야생), 가축과 동일한 종 또는 속에 속하는 동물이다. 예를 들어, 야생 돼지는 가축용 돼지와 동일한 종에 속하므로 이 정의에 포함될 것이다. 치료될 수 있는 가축의 몇 가지 예는 비제한적으로 개, 고양이 및 다른 애완 동물, 말, 소, 닭 및 다른 가금류, 돼지, 양, 염소를 포함한다. 바람직하게는 동물은 농장 동물이고, 농장 동물은 비제한적으로 말, 소, 닭 및 다른 가금류, 돼지, 양, 염소를 포함한다. 더욱 바람직하게는, 동물은 돼지아목(suborder Suina) 유래이다. 돼지 아목(수이포르메스(Suiformes)으로도 알려짐))은 수이다에(Suidae) 및 타야스수이다에(Tayassuidae) 과(family)의 돼지 및 페커리(peccary)를 포함하는 포유동물 계통이다. 야생 또는 가축용 돼지(swine 또는 pig)가 특히 바람직할 수 있다.

본 발명에 적합한(즉 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는) 균주는 하기와 같이 확인될 수 있다.

본 발명의 균주에 도달하기 위한 제1단계: 단일 균주의 단리

제1 단계에서, 미생물(바람직하게는 박테리아)을 함유하는 샘플을 단리한다. 임의의 미생물 공급원이 적합할 수 있으며, 이는 가장 넓은 의미로 자연으로부터의 임의의 비멸균 샘플일 수 있다. 상기 공급원은 가축용 동물 유래, 예컨대 생후 처음 30일 이내의 어린 동물 유래, 또는 이들의 어미 유래일 수 있다. 대안적으로, 공급원은 야생 동물(예컨대, 야생 수퇘지) 유래, 예컨대 포획된 야생 수퇘지로부터 수집된 샘플일 수 있다. 적합한 공급원은 어미 동물(예컨대 암퇘지)로부터의 초유, 신생 동물(예컨대 새끼 돼지)로부터의 태변 샘플, 가축 또는 야생 동물로부터의 장벽 세척액 또는 천연 장내 유산균을 포함한다. 샘플에 함유된 미생물(예컨대 박테리아)은 장내 미생물의 성장에 적합한 것으로 당업계에 널리 공지된 성장 배지, 예컨대 MRS 배지 상에서 성장할 수 있다. 미생물을 스트리킹할 수 있고, 이는 단일 콜로니의 단리를 가능하게 할 것이다. 단일 콜로니를 픽킹(picking)하고, 각각의 균주를 적합한 성장 배지(예를 들어 처음에 사용된 것과 동일한 것)에서 더 증식시킬 수 있다.

이들 단일 콜로니의 균주를 임의로 당업계에 공지된 방법에 의해 그람 염색에 의해 시험하고/거나(만약 이들이 그람 양성인 경우 선택함), 전술한 바와 같이 카탈라제 활성의 존재에 대해 시험한다(만약 이들이 카탈라제 음성인 경우 선택함).

본 발명의 균주에 도달하는 제2 단계 : 시험관내 시험

본 발명에 유용한 것으로서 선택하기 위해, 바람직하게는 전술한 제1 단계로부터 유래된 미생물 균주는 여기에 처음 열거되고 이후 하기에서 상세히 설명되는 하기 기준 중 적어도 하나를 충족해야 한다:

a. 원치않는 박테리아에 대한 활성;

b. 내산성;

c. 내담즙산염;

상기 항목 a. 내지 c.는 우선 순위를 나타내며; 즉 기준 a.를 충족하는 것이 가장 바람직하고, 기준 a. 및 b.를 충족하는 것이 두 번째로 바람직하며, 모든 기준 a. 내지 c.를 충족하는 것이 가장 바람직하다. 선택 기준은 하기와 같이 상세히 설명된다.

a. 원치않는 박테리아에 대한 활성

원치않는 박테리아에 대한 시험관내 스크리닝을 수행한다. "원치않는"은 하기 하나 이상으로부터 선택되는 박테리아이다: 살모넬라 종, 리스테리아 모노사이토제네스, 스타필로코커스 아우레우스 및 에스케리키아 콜라이. 바람직하게는, 살모넬라 종은 살모넬라 엔테리카(Salmonella enterica), 더욱 바람직하게는 살모넬라 엔테리카 혈청형 티피무리움(Salmonella enterica serotype Typhimurium)이다.

원치않는 박테리아에 대한 활성은 스팟 온 론 시험(spot on lawn test)에 따라 시험하며, 이는 하기에 기재되어 있다. 시험하고자 하는 각 균주의 밤새 배양된 액체 배양액(MRS)을 MRS 한천 상에 10 μl의 단일 스팟으로 적용하고 혐기성 조건에서 30℃에서 24시간 동안 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 원치않는 박테리아 중 하나(1%; 100 ml 배지 중 밤새 배양된 1 ml 배양액)가 접종된 7 ml의 반고체 BHI 한천(0.7%)으로 플레이트를 덮는다. 시험하고자 하는 특정한 하나의 균주를 함유하는 별도의 플레이트를 원치않는 박테리아 종 중 하나로 각각 오버레이한다. 이러한 시험 각각은 삼반복으로 수행한다. 원치않는 박테리아의 최적 성장 온도(최적 성장 온도는 본원에 언급된 각각의 원치않는 박테리아에 대해 당업계에서 공지됨)에서 또는 근처에서 24시간 동안 인큐베이션 후, 샘플을 억제의 증명에 대해 조사한다. 이를 위해, 먼저 억제대가 존재하는지 확인한다. 억제대가 존재하는 경우, 억제대의 직경을 광학적으로 측정한다. 억제대가 정확히 환형으로 보이지 않는 경우, 억제대의 최단 직경을 측정하는 규칙으로 억제대를 측정한다. 최종적으로, 삼반복 실험의 산술 평균을 결정하고 하기 기준을 충족하는지 확인한다.

기준: 양성으로 선택되기 위해서는 균주에 대해 하기 조건 [ (i),(ii),(iii),( iv)] 중 적어도 하나를 충족해야 한다:

(i) 살모넬라의 경우, 10 mm 이상, 예를 들어 13 mm 이상의 억제대.

(ii) 리스테리아 모노사이토제네스의 경우, 9 mm 이상, 예를 들어 10 mm 이상의 억제대.

(iii) 스타필로코커스 아우레우스의 경우, 9 mm 이상, 예를 들어 10 mm 이상의 억제대.

(iv) 에스케리키아 콜라이 경우, 10 mm 이상, 예를 들어 18 mm 이상의 억제대.

9 mm 이상은 10 mm 이상, 11 mm 이상, 12 mm 이상, 13 mm 이상, 14 mm 이상, 15 mm 이상, 16 mm 이상, 17 mm 이상, 18 mm 이상, 19 mm 이상, 20 mm 이상, 21 mm 이상, 22 mm 이상, 23 mm 이상, 24 mm 이상, 25 mm 이상, 26 mm 이상, 27 mm 이상, 28 mm 이상, 29 mm 이상, 30 mm 이상, 31 mm 이상, 32 mm 이상, 33 mm 이상, 34 mm 이상, 35 mm 이상을 포함한다.

10 mm 이상은 11 mm 이상, 12 mm 이상, 13 mm 이상, 14 mm 이상, 15 mm 이상, 16 mm 이상, 17 mm 이상, 18 mm 이상, 19 mm 이상, 20 mm 이상, 21 mm 이상, 22 mm 이상, 23 mm 이상, 24 mm 이상, 25 mm 이상 26 mm 이상, 27 mm 이상, 28 mm 이상, 29 mm 이상, 30 mm 이상, 35 mm 이상을 포함한다.

13 mm 이상은 14 mm 이상, 15 mm 이상, 16 mm 이상, 17 mm 이상, 18 mm 이상, 19 mm 이상, 20 mm 이상, 19 mm 이상, 20 mm 이상, 25 mm 이상, 30 mm 이상을 포함한다.

18 mm 이상은 19 이상, 20 mm 이상, 21 mm 이상, 22 mm 이상, 23 mm 이상, 24 mm 이상, 25 mm 이상, 26 mm 이상, 27 mm 이상, 28 mm 이상, 29 mm 이상, 30 mm 이상, 35 mm 이상을 포함한다.

몇 가지 균주를 포함하는 조성물을 상기 기준에 대해 시험할 수 있고, 상기 조성물은 본원에 기재된 용도 중 어느 것에 적합한 것으로 선택되기 위해서는, 기준 [(i), (ii), (iii), (iv)] 중 적어도 하나, 및 더욱 바람직하게는 모두를 충족해야 한다. 또한 이러한 조성물은 모두 기준 (i), (ii), (iii), (iv) 중 적어도 하나를 충족하는 개별 미생물 균주를 조합함으로써 적합하게 제조될 수 있다고 예상할 수 있지만, 실제 그러한지는 실험적으로 시험되어야 한다.

대안적으로, 한천 웰 확산 분석(agar well diffusion assay)이 억제대를 결정하는데 사용될 수 있다. 이 방법은 무세포 상층액을 중화시킴으로써 저 글루코스 MRS 브로쓰에서 생산될 수 있는 임의의 미량의 유산을 제거한다. 혐기성 조건하에 성장한, 시험하고자 하는 종의 정지상 배양액을 원심분리(5000g/20분/4℃)에 의해 수거하고, 무세포 상층액의 pH를 1M NaOH를 이용하여 6.5로 조정한다. 상층액을 필터 멸균처리한다(0.20mm; Millipore Ltd., Hertfordshire, England). [대략] 10⁵ 콜로니-형성 단위(CFU)/ml의 (i), (ii), (iii), (iv)에 열거된 원치않는 박테리아가 접종된 한천 플레이트로 절단된 7-mm 직경 웰에 무세포 상층액(30 μl)을 첨가한다. 이후 한천 플레이트를 30℃에서 24시간 동안 인큐베이션한다. 웰 주위의 억제대의 직경을 측정하고, 선택 기준은 상기 (i), (ii), (iii), (iv) 하에 나타낸 바와 같으며, 균주가 양성으로서 선택되기 위해서는, 이들 중 적어도 하나를 충족해야 한다.

정보를 위해: 상기 분석은 문헌[Kawai et al., 2004. Applied and Environmental Microbiology 70(5): 2906-2911; Dortu et al. 2008. Letters in Applied Microbiology, 47: 581-586; Hata et al., 2009. International Journal of Food Microbiology, 137: 94-99, Awaisheh 2009. Food Pathogens and Disease 6(9): 1125-1132.)]에 기술된 것에 기초한다.

b. 내산성

산은 위액을 모방하는 것으로 볼 수 있으며, 이에 대한 내성은 하기와 같이 시험될 수 있다. 6-8 x 10⁸ CFU/ml의 각 균주의 MRS에서의 초기 현탁액 100 μl을 적절한 양의 12 N HCl의 첨가시 산성화된, 산성화된 MRS(pH=3.5, 또는, 대안적으로 pH=2.5)에 현탁시키고 110 rpm 교반하에 37℃에서 인큐베이션한다. 샘플을 0, 3 및 6시간에 콜로니 계수(CFU/ml)에 의해 시험한다. 내산성을 시험하기 위해 당업자에게 공지된 임의의 다른 방법이 사용될 수 있다.

기준: 균주는 상기 배지에서 3시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력(시험 전과 비교하여 시험 후에 적어도 50%, 또는 적어도 55%, 또는 적어도 60%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 75%, 또는 적어도 80%, 또는 적어도 95% CFU , 가장 바람직하게는 시험 전과 비교하여 시험 후에 적어도 50% CFU )을 유지할 수 있어야 한다. 참고를 위해: 유사한 프로토콜이 문헌[Huang et al., International Journal of Food Microbiology 91: 253- 260)]에 간략하게 기재되어 있다.

c. 내담즙산염

포유동물의 천연 소장 조건의 모사 실험.

내담즙산염은 하기와 같이 시험될 수 있다: 6-8 x 10⁸ CFU/ml의 박테리아 균주의 MRS에서의 초기 현탁액 100 μl을 모사된 소장액(예컨대 pH=8의 MRS(NaOH를 첨가시 조정된 pH) 및 0.45% 담즙 추출물(Bile extract, porcine. B8631-100G. SIGMA-ALDRICH))에 현탁시키고 110 rpm 교반하에 37℃에서 인큐베이션한다. 샘플을 1, 2 및 4시간에 콜로니 계수(CFU/ml)에 의해 시험하였다. 내담즙산염을 시험하기 위해 당업자에게 공지된 임의의 다른 방법이 사용될 수 있다.

기준: 모사된 소장액(0, 45% 담즙산염 , 임의로 pH= 8)에 4시간 동안 노출 후 생존력의 손실 없음(또는 본질적으로 생존력의 손실 없음, 즉 바람직하게는 50% 이상의 CFU , 예컨대, 50%, 또는 60%, 또는 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 95% 이상의 CFU ). 유사한 프로토콜이 문헌[Huang et al., International Journal of Food Microbiology 91: 253- 260]에 간략하게 기재되어 있다.

임의로, 상기 기준 a. 내지 c.에 의해 양성으로 확인된 균주는 또한 그의 상피 표면에의 부착 및 동물(예컨대 돼지) 위장관에서의 지속성에 대해 시험될 수 있다. 부착 특성이 우수한 균주가 성능이 가장 우수할 것으로 여겨진다.

임의로, 상기 기준 a. 내지 c.에 의해 양성으로 확인된 균주를 추가적으로, 예컨대 최소 항생제 농도 시험(VetMIC 마이크로플레이트 시험)에 의해 이들의 항생제 내성 프로파일에 대해 시험하고/거나 상이한 내성 유전자에 대해 PCR을 수행함으로써 유전자형 내성 시험을 수행한다(Egervarn et al., 2010. Antonie van Leeuwenhoek 97: 189-200). 항생제 내성이 없는 박테리아(내성 유전자의 부재 또는 불활성/기능상실)가 농장 동물에 적용하기에 가장 적합하다고 여겨진다.

바람직한 구현예에서, 조성물에 포함된 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가 상기 기재된 모든 기준 a. 내지 c.를 충족한다. 또한, 기준 a.와 관련하여, 조성물에 포함된 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가, 스팟 온 론 분석에 의해 결정된 억제대에 의해 입증된 바와 같은, 하기 항미생물 활성 모두를 갖는다: (i) 살모넬라의 경우, 10 mm 이상의 억제대, (ii) 리스테리아 모노사이토제네스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iii) 스타필로코커스 아우레우스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iv) 에스케리키아 콜라이의 경우, 10 mm 이상의 억제대.

본 발명은 2014년 9월 10일에 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로, 스페인 생물자원센터, Coleccion Espanola de Cultivos Tipo(CECT), Universidad de Valencia, Parc Cientific Universitat de Valencia, Catedratico Agustin Escardino, 9, 46980 Paterna (Valencia, SPAIN))에 기탁된 균주를 적어도 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 1종 이상의 미생물 균주, 예컨대 1종 이상, 또는 2종 이상, 또는 3종 이상, 또는 4종 이상, 또는 5종 이상, 또는 6종 이상, 또는 7종 이상, 또는 8종 이상의 균주 등을 추가로 포함할 수 있고, 각각의 추가의 균주는, 스팟 온 론 분석에 의해 결정된 억제대에 의해 입증된 바와 같은, 하기 항미생물 활성 중 적어도 하나를 갖는다: (i) 살모넬라의 경우, 10 mm 이상의 억제대, (ii) 리스테리아 모노사이토제네스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iii) 스타필로코커스 아우레우스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iv) 에스케리키아 콜라이의 경우, 10 mm 이상의 억제대.

조성물에 포함되는 이러한 1종 이상의 추가의 균주는 바람직하게는 락토바실러스 속(바람직하게는 락토바실러스 퍼멘툼(바람직하게는 CECT 8347(AqSynJ12)) 및 락토바실러스 무코사에(바람직하게는 CECT 8349(AqSynJ55)는 제외함), 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토코커스 속, 스트렙토코커스 속, 에어로코커스 속, 카르노박테리움 속, 엔테로코커스 속, 오에노코커스 속, 스포로락토바실러스 속, 테트라제노코커스 속, 바고코커스 속 및/또는 바이셀라 속으로 이루어진 군에 속하는 균주로부터 선택될 수 있다.

예를 들어, 상기 조성물은 CECT 8700(AqSynRMH69) 외에, CECT 8163(AqSyn04); CECT 8165(AqSyn06); CECT 8164(AqSyn09); CECT 8166(AqSyn10), CECT 8347(AqSynJ12); CECT 8348(AqSynJ17); CECT 8349(AqSynJ55) 및 CECT 8350(AqSynJ59)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상, 바람직하게는 1종의 추가의 균주를 포함하거나, 또는 대안적으로 이들로 이루어진다.

CECT 8163(AqSyn04); CECT 8165(AqSyn06); CECT 8164(AqSyn09); CECT 8166(AqSyn10), CECT 8347(AqSynJ12); CECT 8348(AqSynJ17); CECT 8349(AqSynJ55) 및 CECT 8350(AqSynJ59)은 모두 AQUILON CYL S.L.에 의해 CECT(스페인 생물자원센터, Coleccion Espanola de Cultivos Tipo(CECT), Universidad de Valencia, Parc Cientific Universitat de Valencia, Catedratico Agustin Escardino, 9, 46980 Paterna (Valencia, SPAIN))에 기탁되었다.

CECT 8163(AqSyn04); CECT 8165(AqSyn06); CECT 8164(AqSyn09) 및 CECT 8166(AqSyn10)은 2012년 6월 20일에 기탁되었다. CECT 8347(AqSynJ12); CECT 8348(AqSynJ17); CECT 8349(AqSynJ55) 및 CECT 8350(AqSynJ59)은 2013년 5월 16일에 기탁되었다.

CECT 8700(AqSynRMH69): 락토바실러스 루테리

CECT 8163(AqSyn04): 락토바실러스 루테리

CECT 8165(AqSyn06): 락토바실러스 루테리

CECT 8164(AqSyn09): 엔테로코커스 패시움

CECT 8166(AqSyn10): 엔테로코커스 패시움

CECT 8347(AqSynJ12): 락토바실러스 퍼멘툼

CECT 8348(AqSynJ17): 락토바실러스 루테리

CECT 8349(AqSynJ55): 락토바실러스 무코사에

CECT 8350(AqSynJ59): 락토바실러스 플란타룸

예를 들어, 바람직한 구현예에서, 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주를 포함하는 본 발명의 조성물은 수탁번호 CECT 8350(AqSynJ59)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주를 추가로 포함한다. 상기 조성물은 임의의 추가의 균주를 포함하지 않을 수 있다.

더욱 바람직한 구현예에서, 조성물은 2종의 미생물 균주를 포함한다. 바람직하게는 상기 균주 중 하나는 CECT 8700(AqSynRMH69)이다. 더욱 더 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 2종의 균주와 같이 2종의 미생물을 포함하거나, 또는 대안적으로 이들로 이루어진다. 바람직하게는, 2종의 미생물은 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주 및 수탁번호 CECT 8350(AqSynJ59)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주이다. 이 구현예에서, 조성물은 미생물이 아닌 다른 성분을 추가로 포함할 수 있고, 즉 조성물은 추가의 성분(예컨대, 하기에 기재된 것)을 포함할 수 있지만, 바람직하게는 조성물은 CECT 8350(AqSynJ59) 및 CECT 8700(AqSynRMH69) 외에 추가의 균주를 포함하지 않는다.

따라서, 본 발명의 조성물은 락토바실러스 플란타룸 종 및 락토바실러스 루테리 종에 속하는 미생물의 혼합물을 포함할 수 있다. 임의로, 본 발명의 조성물은 락토바실러스 속(바람직하게는 락토바실러스 퍼멘툼 CECT 8347(AqSynJ12)) 및 락토바실러스 무코사에 CECT 8349(AqSynJ55)는 제외함), 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토코커스 속, 스트렙토코커스 속, 에어로코커스 속, 카르노박테리움 속, 엔테로코커스 속, 오에노코커스 속, 스포로락토바실러스 속, 테트라제노코커스 속, 바고코커스 속 및/또는 바이셀라 속에 속하는 1종 이상의 미생물을 추가로 포함할 수 있다. 임의로, 본 발명의 조성물은 락토바실러스 속(바람직하게는 락토바실러스 퍼멘툼 종 및 락토바실러스 무코사에 종에 속하는 미생물은 제외함), 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토코커스 속, 스트렙토코커스 속, 에어로코커스 속, 카르노박테리움 속, 엔테로코커스 속, 오에노코커스 속, 스포로락토바실러스 속, 테트라제노코커스 속, 바고코커스 속 및/또는 바이셀라 속에 속하는 1종 이상의 미생물을 추가로 포함할 수 있다.

바람직한 구현예에서, 본 발명의 조성물은 락토바실러스 플란타룸의 1종 이상의 균주 및 락토바실러스 루테리의 1종 이상의 균주로 이루어진 미생물의 혼합물을 포함한다. 더욱 바람직한 구현예에서, 본 발명의 조성물은 락토바실러스 플란타룸의 하나의 균주 및 락토바실러스 루테리의 하나의 균주로 이루어진 미생물의 혼합물을 포함한다. 락토바실러스 플란타룸의 바람직한 균주는 CECT 8350(AqSynJ59)이다. 락토바실러스 루테리의 바람직한 균주는 CECT 8700(AqSynRMH69)이다. 더욱 더 바람직한 구현예에서, 본 발명의 조성물은 CECT 8350(AqSynJ59) 및 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 이루어진 미생물의 혼합물을 포함한다.

상이한 균주는 장에서 상이한 작용을 할 수 있으며, 따라서 상이한 균주는 함께 작용하여 유익한 효과를 제공할 수 있다고 여겨진다.

본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 조성물에 포함되는 균주 중 1종 이상, 예컨대 조성물에 포함된 균주 중 1종, 및/또는 2종, 및/또는 3종, 및/또는 4종 및/또는 5종 및/또는 6종, 및/또는 7종 및/또는 8종의 균주, 바람직하게는 조성물에 포함된 균주 모두는 항생제 내성이 없으며, 즉 이들은 적절한 표준 항생제 치료에 노출된 후 생존할 수 없다.

예를 들어, 일 구현예에서, 조성물은 항생제 내성이 없는 CECT 8700(AqSynRMH69) 및 CECT 8350(AqSynJ59)을 포함하거나, 또는 대안적으로 이들로 이루어진다.

내성 균주와 민감한 균주를 구별하기 위한 목적으로, 동물 사료에 사용되는 첨가물 및 제품 또는 물질에 관한 유럽 식품 안전청 패널(European Food Safety Authority(EFSA) Panel on Additives and Products or Substances used in Animal Feed(FEEDAP))은 미생물학적 컷오프 값(cut-off value)을 정의한다. 미생물학적 컷오프 값은 단일 분류학적 단위(종 또는 속)에 속하는 박테리아 집단 중 선택된 항미생물제의 MIC 분포를 연구함으로써 설정된다. 정상 민감성 집단으로부터 뚜렷이 벗어나는 집단의 일부는 내성으로 분류된다. 본 발명의 균주의 항생제 내성을 평가하는데 사용될 수 있는 미생물학적 컷오프 값은 문헌["Guidance on the assessment of bacterial susceptibility to antimicrobials of human and veterinary importance", EFSA Panel on Additives and Products or Substances used in Animal Feed (FEEDAP), European Food Safety Authority (EFSA), Parma, Italy. EFSA Journal 2012;10(6):2740]에 정의된 것이다.

항생제 내성을 평가하기 위한 최소 억제 농도(MIC)의 시험관내 시험은 제안된 모든 균주에 대해 수행될 수 있다. 평가된 항생제는 암피실린, 반코마이신, 젠타마이신, 카나마이신, 스트렙토마이신, 에리트로마이신, 클린다마이신, 테트라사이클린 및 클로람페니콜일 수 있다.

본 발명의 조성물에 존재할 수 있는 다른 성분(또는 다른 성분들)은 어떤 식으로든 제한되지 않는다. 바람직한 양태에서, 1종 이상의 프리바이오틱 화합물이, 즉 다른 성분으로서, 본 발명의 조성물에 포함된다. 매우 광범위한 개념으로, 프리바이오틱스는 프로바이오틱스에 의해 대사될 수 있는 모든 식품 공급원이다. 바람직하게는 프리바이오틱스는 포유동물에 의해 비소화성이거나 난소화성이다. 따라서, 포유동물에 의해 섭취된 후, 비소화성 프리바이오틱스는 소장을 통과하여 대장으로 진입하여 상기 구획에서 프로바이오틱스의 성장을 자극할 수 있다. 따라서, 프리바이오틱스는 프로바이오틱스에 대한 식품 공급원으로의 역할을 할 수 있다. 다수가 비소화성 탄수화물인 프리바이오틱스가 장 내의 프로바이오틱스의 성장을 촉진하는 것으로 여겨진다. 프리바이오틱스는, 예를 들어 양파, 전곡, 바나나, 마늘, 꿀, 부추, 아티초크, 강화 식품 및 음료뿐만 아니라 식이 보충제에서 천연적으로 발견된다. 프리바이오틱스는 당업계에 널리 알려져 있으며, 본 발명에서 사용될 때 프리바이오틱에 대한 특별한 제한은 없다. 그러나, 바람직한 구현예에서, 조성물에서 1종 이상의 프리바이오틱 제품은 하기 화합물 및 조성물: 비소화성 탄수화물, 베타-글루칸, 만난-올리고당, 이눌린, 올리고프럭토스, 갈락토올리고당(GOS), 락툴로스, 락토수크로스, 갈락토트리오스, 프럭토-올리고당(FOS), 셀로바이오스, 셀로덱스트린, 사이클로덱스트린, 말티톨, 락티톨, 글리코실수크로스, 비타민 E 또는 이의 변형(여기서 상기 변형은 알파, 베타, 감마, 델타, 토코페롤, 토코트리에놀 및 토코모노에놀로부터 선택됨)으로부터 선택된다. 임의로, 만난-올리고당 및/또는 이눌린이 바람직할 수 있다. 임의로, 만난-올리고당, 베타-글루칸 및/또는 이눌린이 바람직할 수 있다.

예를 들어, 본 발명의 조성물은 증점제 및/또는 보충 사료/영양제를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 하나 이상 증점제(즉 그의 다른 특성을 실질적으로 변화시키지 않으면서 액체의 점도를 증가시킬 수 있는 물질, 및 다른 성분의 현탁액 또는 유화액을 개선하여 제품의 안정성을 증가시킬 수 있는 물질), 예컨대 다당류(펙틴, 식물성 검 및/또는 전분) 또는 단백질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 식물성 검, 예컨대 알기닌, 로커스트 빈 검, 잔탄검 및/또는 구아검, 바람직하게는 잔탄검 및/또는 구아검을 추가로 포함한다. 예를 들어, 조성물은 100 ml 중에 약 0.1 - 0.5%, 바람직하게는 약 0.3% w/v(0.3 g의 증점제(예컨대, 잔탄검 및 구아검과 같은 식물성 검)의 양으로 잔탄검 및 구아검과 같은 식물성 검을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 보충 사료(영양제), 예를 들어 유제품, 당류 등을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 약 0.5 - 2% w/v, 바람직하게는 약 1% w/v의 양의 탈지분을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 약 0.1% w/v 내지 1% w/v, 바람직하게는 약 0.5% w/v의 양의 당(바람직하게는 수크로스)을 추가로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 수액(infusion solution), 예컨대, 염수(NaCl를 갖는 물)를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 수액으로서 약 0.9% w/v NaCl을 갖는 물을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 조성물은 하기를 포함하거나, 또는 대안적으로 이들로 이루어진다:

상이한 균주를 포함할 수 있는 본 발명의 조성물과 관련하여, 임의의 혼합비가 가능하다. 혼합비는 콜로니 형성 단위(CFU)로 나타내며, 이는 개별 균주를 혼합하기 전에 적합하게 결정된다. 일 구현예에서, 균주의 비는 동일하거나 동일하지 않을 수 있으며, 예컨대 2종의 균주를 포함하는 조성물의 경우 1:(0.1-1), 3종의 균주를 포함하는 조성물의 경우 1:(0.1-10):(0.1-10), 4종의 균주를 포함하는 조성물의 경우 1:(0.1-10):(0.1-10):(0.1-10) 등이다. 예를 들어, 2종의 균주를 포함하는 조성물에서의 비는 1:2 내지 2:1일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 균주의 비는 대략 또는 실질적으로 동일하며, 예컨대 2종의 균주를 포함하는 조성물의 경우 1:1, 3종의 균주를 포함하는 조성물의 경우 1:1:1, 4종의 균주를 포함하는 조성물의 경우 1:1:1:1 등이다. 상기 조성물은 조성물에 혼입되는 각 균주의 각각의 박테리아 양(콜로니 수에 의해 결정됨)을 혼합함으로써 제조될 수 있다. 혼입되는 균주는 개별 균주의 스톡(stock)으로서 제공될 수 있고, 이들 각각은 예를 들어 동결건조물의 형태이다. 상이한 스톡이 상이한 농도(CFU/g)를 갖는 경우, 원하는 조성물이 각각의 균주의 원하는 CFU를 갖도록 각각의 스톡의 적절한 양(g)이 사용된다. 그 예가 하기에 나타나 있다.

바람직한 구현예에서, 조성물이 2종의 균주를 포함하거나, 또는 대안적으로 2종의 균주로 이루어지는 경우, 상기 균주의 비는 1:1과 같이 대략 또는 실질적으로 동일하다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 균주 AqSynJ59-락토바실러스 플란타룸 및 균주 AqSynRMH69-락토바실러스 루테리를 1:1 비로, 예를 들어 5 x 10⁸ CFU 초과 또는 약 5 x 10⁸ CFU의 상기 균주 각각 (예컨대, 조성물 내에 총 10⁹ CFU 초과 또는 약 10⁹ CFU)을 포함하거나 또는 대안적으로 이루어질 수 있다.

본 발명은 또한 인간 및/또는 동물을 치료하는 방법에서 본 발명의 조성물의 용도를 제공한다. 따라서, 본 발명의 조성물은 치료적 치료(질환(예컨대, 설사)의 임상 징후 이후) 및/또는 예방적 치료((예컨대, 설사)의 임상 징후 이전)의 방법에서 사용될 수 있다. 특히, 동물, 포유동물 및/또는 가축의 치료가 바람직할 수 있다. 바람직하게는, 동물은 비-인간 동물이고, 더욱 바람직하게는 돼지 아목(돼지 아목(수이포르메스(Suiformes)로도 알려짐)은 수이다에(Suidae) 및 타야스수이다에(Tayassuidae) 과의 돼지 및 페커리(peccary)를 포함하는 포유동물 계통임) 유래이다. 야생 또는 가축용 돼지(swine 또는 pig)가 특히 바람직할 수 있다. 이것은 또한 반야생 조건에서 서식하는 돼지, 즉 연중 대부분을 야외에서 서식하고 그들 자신의 먹이를 찾은 가축용 돼지의 품종을 포함한다. 조성물은 전술한 기탁된 균주 중 1종 이상을 포함하는 조성물일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 조성물은 인간에게 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 기재된 바와 같이, 인간 또는 동물을 치료하는 방법에서 사용될 수 있다. 인간 또는 동물을 치료하는 이 방법은 신생 포유동물, 바람직하게는 새끼 돼지의 체중을 증가시키는 방법일 수 있다. 부가적으로 및/또는 대안적으로, 인간 또는 동물을 치료하는 방법은 신생 포유동물, 바람직하게는 새끼 돼지의 성장을 촉진하는 방법일 수 있다. 부가적으로 및/또는 대안적으로, 인간 또는 동물을 치료하는 방법은 신생 포유동물, 바람직하게는 새끼 돼지에서 설사를 치료하거나 예방하는 방법일 수 있다. 설사는 박테리아 감염에 의해 야기될 수 있다. 설사는 비-박테리아 감염, 예컨대 바이러스 감염 및/또는 기생충 때문일 수 있다. 인간 또는 동물을 치료하는 방법은 감염, 예컨대 박테리아 감염 및/또는 바이러스 감염을 치료하거나 예방하는 방법일 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은, 예를 들어 설사 및/또는 감염, 예를 들어 박테리아 감염 및/또는 바이러스 감염과 같이, 인간 및/또는 동물에서 병태를 예방하기 위해, 어떤 증상이 검출되기 전에 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물은 바람직하게는 동물을 치료하는 방법에서 사용될 수 있다. 바람직하게는, 동물은 농장 동물이며, 농장 동물은 비제한적으로 말, 소, 닭 및 다른 가금류, 돼지, 양, 염소를 포함한다. 더욱 바람직하게는, 동물은 돼지 아목 유래이며, 더욱더 바람직하게는 새끼 돼지이다. 이러한 동물을 치료하는 방법은 신생 포유동물, 바람직하게는 새끼 돼지의 체중을 증가시키는 방법일 수 있다. 부가적으로 및/또는 대안적으로, 동물을 치료하는 방법은 신생 포유동물, 바람직하게는 새끼 돼지의 성장을 촉진하는 방법일 수 있다. 부가적으로 및/또는 대안적으로, 동물을 치료하는 방법은 신생 포유동물, 바람직하게는 새끼 돼지에서 설사를 치료하거나 예방하는 방법일 수 있다. 설사는 박테리아 감염에 의해 야기될 수 있다. 설사는 바이러스 감염에 의해, 또는 임의의 다른 원인에 의해 유발될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은, 예를 들어 설사 및/또는 감염, 예컨대 박테리아 및/또는 바이러스 감염과 같이, 동물에서 병태를 예방하기 위해, 어떤 증상이 검출되기 전에 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물은, 질환(예컨대, 설사)의 임상 징후가 (아직) 발생하지 않았음에도 불구하고, 신생 포유동물, 바람직하게는 새끼 돼지에게 유익하게 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 건강한 신생 포유동물, 바람직하게는 새끼 돼지에게 유익하게 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물은 하기의 신생 포유동물, 바람직하게는 새끼 돼지에게 투여될 수 있다:

- 설사의 임상 징후를 나타냄.

- 설사의 임상 징후를 (아직) 나타내지 않지만 잠재적으로 설사를 야기할 박테리아 및/또는 바이러스로 감염됨.

- 건강함.

바람직하게는, 본 발명의 조성물로 치료되는 인간 및/또는 동물은 임의의 다른 치료를 겪지 않으며; 바람직하게는, 인간 및/또는 동물은 항생제로 치료되지 않는다.

항생제는 박테리아 감염과 같은 감염을 치료하고/거나 예방하는데 사용되는 약물이다.

바람직한 구현예에서, 본 발명의 조성물은 출생 후 초기 단계에, 즉 출생 후 처음 30일 이내에, 바람직하게는 출생 후 처음 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2일 이내에, 가장 바람직하게는 출생 후 처음 2일(48시간) 이내에 또는 출생 후 처음 1일(24시간) 이내에, 신생 인간 및/또는 동물(바람직하게는 새끼 돼지)에게 투여된다. 그것은 바람직하게는 적어도 3회, 예컨대 2회 또는 1회 투여된다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 출생 후 처음 48시간 이내에 적어도 1회(예컨대 1회) 투여된다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 출생 후 처음 48시간 이내에, 더욱더 바람직하게는 출생 후 처음 24시간 이내에, 예컨대 출생 직후에 1회 투여된다. 본 발명의 조성물은 2회 투여될 수 있으며, 출생 후 1일 이내에 첫 번째가 투여되고, 출생 후 2일 이내에 두 번째가 투여될 수 있다.

전술한 바와 같이, 적어도 1가지, 바람직하게는 3가지의 전술한 모든 기준 a. 내지 c.에 따라 선택된, 미생물, 바람직하게는 박테리아 및 더욱 바람직하게는 유산균의 1종 이상(예컨대 1종), 예컨대 2종 이상(예컨대 2종), 예컨대 3종 이상, 예컨대 4종 이상의 상이한 균주(가장 바람직하게는 2종)가 본 발명의 조성물에 포함된다. 전술한 바와 같이, 인간 및/또는 동물을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 조성물의 경우, 각각의 미생물, 바람직하게는 박테리아 및 더욱 바람직하게는 유산균은 전술한 기준 a. 내지 c.(원치않는 박테리아에 대한 활성; 내산성; 내담즙산염) 중 적어도 하나를 충족해야 한다. 기준 a.와 관련하여, 상기 언급된 최소 억제대는 바람직하게는 원치않는 박테리아 (i) 내지 (iv) 모두 에 대해 관찰된다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물에 포함되는 미생물, 바람직하게는 박테리아 및 더욱 바람직하게는 유산균은 상기 기준 중 복수(예컨대, a. 및 b.), 바람직하게는 모두(a. 내지 c.)를 충족해야 한다. 또한, 바람직하게는, 본 발명의 조성물에 포함되는 미생물, 바람직하게는 박테리아 및 더욱 바람직하게는 유산균의 1종 이상(예컨대 1종), 예컨대 2종 이상(예컨대 2종), 예컨대 3종 이상, 예컨대 4종 이상의 상이한 균주(가장 바람직하게는 2종)(인간 및/또는 동물을 치료하는 방법에서 사용하는데 적합함)는 항생제 내성이 없으며, 즉, 이들은 적절한 표준 항생제 치료에 노출된 후 생존할 수 없다. 프로바이오틱 조성물 또는 신바이오틱 조성물 중 어느 하나가 인간 및/또는 동물을 치료하는 상기 방법에서 사용될 수 있다(즉, 1종 이상의 프리바이오틱 화합물을 포함하는 것) .

본 발명의 조성물은 바람직하게는 살아있는 미생물, 바람직하게는 박테리아를 포함한다.

본 발명자들은 그의 임의의 변형의 본 발명의 조성물을 적절한 시기에(즉, 전술한 바와 같이, 출생 후 초기 단계에) 투여하는 것이 신생 인간 또는 동물(바람직하게는 새끼 돼지)이 상이한 병인학(aetiology)으로부터의 장내세균 불균형을 관리할 수 있는 방식으로 극적인 효과를 갖는다는 것을 발견하였다. 예를 들어, 조성물이 인간 및/또는 동물의 치료에서, 예를 들어 설사의 치료 또는 예방에서 더 우수한 효과를 갖기 위해서는, 본 발명자들은 상기 조성물이 바람직하게는 출생 후 초기 단계에, 예를 들어 출생 후 처음 30일 이내(더욱 바람직하게는 출생 후 처음 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2일 이내 및 가장 바람직하게는 출생 후 처음 2일 이내 또는 출생 후 처음 1일(24시간) 이내)에 투여되어야 한다는 것을 발견하였다. 더욱더 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 출생 후 처음 2일 이내에, 예를 들어 출생 후 처음 48시간 이내에 1회, 및/또는 예를 들어 출생 후 1일(24시간) 및/또는 출생 후 2일에 투여된다. 조성물은 (임의로 또한) 출생 후 3일에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 출생 후 처음 48시간 이내, 더욱더 바람직하게는 출생 후 처음 24시간 이내, 예컨대 출생 직후 1회 투여된다. 임의로, 특히 설사 및/또는 감염 증상이 동물 및/또는 인간에서 관찰되면, 프로바이오틱 조성물의 두 번째 용량은 첫 번째 용량 후 24시간에 투여된다.

임의의 투여 경로가 적합하지만, 경구 투여가 바람직할 수 있다. 가장 전형적으로, 용량은 동물이 상기 용량을 확실히 삼킬 수 있도록 하기 위해 모든 동물의 입에 직접 제공된다. 대안적으로, 조성물은 또한 식품 보충제로서 제공될 수 있고, 즉 동물의 일일 사료에 첨가될 수 있다.

조성물은 임의의 형태, 예컨대 동결건조, 액체 또는 분무 형태일 수 있다. 예를 들어 동결건조 박테리아가 조성물을 제조하는데 사용되는 경우, 동결건조 박테리아의 예비 조성물을, 예컨대 멸균 등장성 염수 용액 또는 멸균수 또는 멸균 성장 배지로 재수화하여, 원하는 총 농도(CFU/ml)를 갖는 최종 조성물을 수득할 수 있다.

용이하게 사용될 수 있도록 하기 위해, 조성물은 투여 형태일 수 있다. 예를 들어, 각 용량은 10⁷ 이상, 10⁸ 이상, 10⁹ 이상, 10¹⁰ 이상, 10¹¹ 이상의 콜로니 형성 단위(CFU)의 미생물(바람직하게는 박테리아)을 포함할 수 있고; 10⁹ 이상의 용량이 바람직할 수 있다. 용량은 0.1 내지 100 ml, 바람직하게는 0.2 내지 50 ml, 더욱 바람직하게는 0.5 내지 20 ml, 더욱 바람직하게는 1.0 내지 10 ml, 더욱 바람직하게는 1.5 내지 5 ml, 및 더욱더 바람직하게는(실질적으로) 2 ml의 범위의 부피를 가질 수 있다. 10⁹ 이상의 CFU를 갖는 2 ml 용량이 특히 바람직할 수 있다. 조성물이 2종의 균주를 포함하는 경우, 2mL 용량은 바람직하게는 5·10⁸의 CFU의 각각의 균주(즉 용량당 총 10⁹의 CFU)를 포함할 것이다.

임의의 수의 용량이 투여될 수 있고, 당업자는 각 농장의 요구에 따라 치료 길이를 선택할 수 있다. 특정 구현예에서, 동물에게 투여되는 용량의 총 수는 10 이하, 예컨대 하기 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 10으로부터 선택되는 임의의 수, 또는 이들 수 중 어느 하나(10 제외)를 이들 수 중 어느 하나와 조합한 임의의 범위 (단, 두 번째 수가 더 큼(예컨대, 1 내지 3과 같음))이다.

예를 들어, 적어도 단일 용량이 출생 후 처음 48시간 이내에 동물에게 투여된다. 예를 들어, 단일 용량은 출생 후 처음 48시간 이내에 동물에게 투여된다. 예를 들어, 단일 용량은 출생 직후(출생 후 처음 24시간 이내) 동물에게 투여된다. 임의로, 바람직하게는 동물이 설사 및/또는 감염의 증상을 나타내면, 두 번째 용량은 첫 번째 용량 후 24시간에 동물에게 투여된다. 임의로, 이후에 세 번째 용량은 두 번째 용량 후 24시간에 투여될 수 있다.

동물당 총 2개의 용량이 바람직할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 첫 번째 용량은 출생 후 처음 24시간(출생 후 1일)에 투여되고 두 번째 용량은 이후 24시간(출생 후 2일)에 투여된다. 임의로, 이들은 오직 2개 용량이다. 또 다른 선택사항으로, 추가의 용량이 하기에서 투여되며, 예컨대 출생 후 3일에 세 번째 용량, 및/또는 출생 후 4일에 네 번째 용량 등이 투여된다.

바람직하게는, 상기 용량은 각각 2종 이상의 균주를 포함한다. 바람직하게는, 2종의 균주는 CECT 8700(AqSynRMH69) 및 CECT 8350(AqSynJ59)이고, 이는 출생 후 처음 48시간 이내, 예컨대 출생 후 처음 24시간 이내, 바람직하게는 출생 직후에, 5·10⁸ CFU의 각 균주를 포함하는 2mL 용량으로 투여된다(즉, 균주는 1:1의 콜로니 형성 단위(CFU)로 나타낸 비임). 두 번째 및/또는 세 번째 용량은 임의로 출생 후 처음 48시간 이내 및/또는 출생 후 3일에 투여될 수 있다. 예를 들어, 단일 용량은 출생 직후(처음 24시간 이내)에 투여될 수 있고, 특히 설사 및/또는 감염이 관찰되면, 임의로 두 번째 용량은 제1 용량 후 24시간에, 즉 출생 후 2일 동안 투여된다. 세 번째 용량은 임의로 출생 후 3일에 투여될 수 있다. 이들은 바람직하게는 포유동물, 바람직하게는 신생 새끼 돼지에게 투여된다.

바람직하게는, 상기 용량은 각각 2종 이상의 균주를 포함한다. 바람직하게는, 2종의 균주는 CECT 8700(AqSynRMH69) 및 CECT 8350(AqSynJ59)이며, 이는 출생 후 1일 및 2일에, 5·10⁸ CFU의 각 균주를 포함하는 2 mL 용량으로 투여된다(즉 균주는 1:1의 콜로니 형성 단위(CFU)로 나타낸 비임). 세 번째 용량은 임의로 출생 후 3일에 투여될 수 있다. 이들은 바람직하게는 포유동물, 바람직하게는 신생 새끼 돼지에게 투여된다.

본 발명의 조성물은 설사, 박테리아 감염, 바이러스 감염 또는 장내세균 불균형과 같이, 전술한 바와 같은, 인간 및/또는 동물, 바람직하게는 신생 포유동물에서의 병태를 치료하거나 예방하는데 특히 적합하다. 상기 감염은 소화관의 감염일 수 있거나 이를 포함할 수 있다. 이러한 감염은 에스케리키아 콜라이와 같은 임의의 박테리아 단독 또는 클로스트리듐 퍼프린겐스 또는 클로스트리듐 디피실과 조합하여 유발될 수 있다. 다른 원인 인자는 살모넬라, 리스테리아 모노사이토제네스, 스타필로코커스 아우레우스를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 병태는 박테리아 감염(대장균증(colibacillosis) 포함), 클로스트리듐 디피실 신생아 설사, 클로스트리듐 퍼프린겐스 A 및 C 유형으로 인한 설사로부터 선택될 수 있다. 연쇄상구균성 수막염도 치료될 수 있다. 상기 감염은 임의의 바이러스, 예컨대 로타바이러스, 코로나바이러스, 노로바이러스 아데노바이러스 및/또는 아스트로바이러스, 바람직하게는 로타바이러스 및/또는 코로나바이러스에 의해 유발될 수 있다.

(박테리아 및/또는 바이러스) 감염이 상기 설사의 원인 인자로 (아직) 입증되지 않았음에도 불구하고, 설사로 고통받고 있는 동물 또는 설사로 고통받을 위험성이 있는 동물에게 조성물을 투여할 수도 있다. 설사로 고통받을 위험성이 있는 동물은 지난 12개월, 6개월, 3개월 또는 1개월 동안 설사가 관찰된 부지에서 서식하고 있는(또는 상기 부지에서 태어난) 동물로서 간주될 수 있다.

본 발명의 조성물은 또한, 설사 및/또는 감염을 예방하기 위해, 인간 및/또는 동물이 설사 및/또는 임의의 감염의 어떤 증상을 갖기 전에 투여될 수 있다.

당업자는 인간 및/또는 동물에서 설사 및/또는 임의의 감염의 증상을 검출할 수 있다. 예를 들어, 상기 증상은 물성 설사(watery diarrhoea), 물성/가는(페이스트 유사) 대변, 통증, 경미한 전신 징후, 예컨대 발열, 식욕부진 및/또는 혼수 상태, 약한 상태, 일반적인 신체 상태의 악화/저하, 체중 감량 등일 수 있다. 비정상적인 행동을 나타내는 임의의 다른 증상이 설사 및/또는 감염을 나타낼 수 있다.

본 발명의 조성물은 또한 인간 및/또는 동물이 설사 및/또는 감염의 증상이 없는 경우 투여될 수 있으며, 즉 건강한 인간 및/또는 동물에게 투여될 수 있다.

바람직한 구현예에서, 본 발명의 조성물은 CECT 8700(AqSynRMH69) 및 CECT 8350(AqSynJ59)을 포함하거나, 또는 대안적으로 이들로 이루어지며, 신생 동물, 바람직하게는 신생 새끼 돼지에게 출생 후 1일에 1회 및 출생 후 2일에(예를 들어 첫 번째 용량의 투여 후 24시간) 1회의 2회로 5·10⁸ CFU의 각 균주를 포함하는 2 mL 용량으로 투여된다. 조성물은 신생 새끼 돼지를 치료하는 방법에서, 특히 바람직하게는 감염, 예컨대 박테리아 감염, 및/또는 바이러스 감염에 의해 야기되는 설사를 치료하고/거나 예방하는 방법에서 사용하기 위한 것일 수 있다. 조성물은 또한 건강한 신생 새끼 돼지(즉 설사 및/또는 감염의 증상이 없는 새끼 돼지)에게 투여될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 또한 신생 동물, 바람직하게는 신생 새끼 돼지의 체중을 증가시키고/거나 성장을 촉진하는 방법에서 사용될 수 있다.

본 발명자들의 결과는 본 발명의 제품 및 조성물의 사용의 유리한 효과를 확인시켜 준다. 아래의 개념 증명 예에 나타난 바와 같이, 사망률은 통상적인 항생제 관리를 갖는 다른 주보다 명확하게 더 낮았다(실시예 참고). 따라서, 바람직하게는 본 발명의 조성물은 항생제(들)로 동시에 치료되지 않은 동물에게 투여된다.

본 발명은 또한 미생물인 균주 CECT 8700(AqSynRMH69)을 제공한다. 이 균주는 프로바이오틱 특성을 갖는 것으로 여겨지며, 따라서 본원에서 프로바이오틱으로 지칭될 수 있다. 상기 균주는 상기 선택 기준에 따라 본 발명자에 의해 단리되었다. CECT는 스페인 생물자원센터를 지칭하는 한편, 각 균주에 대해 동의어로 사용될 수 있는 괄호 안의 AqSyn 수는 본 발명자에 의해 균주에 할당되었다. 상기 박테리아는 시험되었고, 상기 기준 a. 내지 c. 중 적어도 하나를 충족하는 것으로 나타났다.

본 발명에 따라 유익한 특성을 갖는 추가의 균주를 발견할 때, 본 발명에 적합한 것으로 선택되기 위해, 이러한 임의의 균주가 상기 기준 a. 내지 c. 중 적어도 하나를 충족하는 것으로 충분할 수 있다. 본 발명은 또한 이들 균주 중 1종 이상, 예컨대 1종, 바람직하게는 2종 이상, 예컨대 2종, 더욱 바람직하게는 3종 이상, 예컨대 3종, 더욱 바람직하게는 4종 이상, 예컨대 4종, 대안적으로 5종 이상, 예컨대 5종, 대안적으로 6종 이상, 예컨대 6종, 대안적으로 7종 이상, 예컨대 7종, 대안적으로 8종 이상, 예컨대 8종을 포함하는 조성물을 제공한다. 상이한 균주는 장에서 상이한 작용을 하며, 따라서 상이한 균주는 함께 작용하여 유익한 효과를 제공할 수 있는 것으로 여겨진다.

본 발명의 항목(I)

1. 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주를 적어도 포함하는 조성물.

2. 항목 1에 있어서, 1종 이상의 미생물 균주를 추가로 포함하며, 각각의 추가의 균주는, 스팟 온 론 분석에 의해 결정된 억제대에 의해 입증된 바와 같은, 하기 항미생물 활성 중 적어도 하나를 가지는 조성물: (i) 살모넬라의 경우, 10 mm 이상의 억제대, (ii) 리스테리아 모노사이토제네스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iii) 스타필로코커스 아우레우스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iv) 에스케리키아 콜라이의 경우, 10 mm 이상의 억제대.

3. 항목 1 또는 2에 있어서, 1종 이상의 추가의 균주는 락토바실러스 속, 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토코커스 속, 스트렙토코커스 속, 에어로코커스 속, 카르노박테리움 속, 엔테로코커스 속, 오에노코커스 속, 스포로락토바실러스 속, 테트라제노코커스 속, 바고코커스 속 및/또는 바이셀라 속에 속하는 균주로부터 선택되는 조성물.

4. 항목 1 내지 3 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물은 수탁번호 CECT 8350(AqSynJ59)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주를 추가로 포함하는 조성물.

5. 항목 4에 있어서, 상기 조성물은 2종의 미생물 균주를 포함하고, 상기 2종의 미생물은 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주 및 수탁번호 CECT 8350(AqSynJ59)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주로 이루어지는 조성물.

6. 항목 2 내지 5 중 어느 한 항목에 있어서, 두 균주는 조성물 내에 대략 1:2 내지 2:1의 콜로니 형성 단위(CFU)로 나타낸 비로 존재하는 조성물.

7. 항목 6에 있어서, 두 균주는 조성물 내에 대략 1:1의 콜로니 형성 단위(CFU)로 나타낸 비로 존재하는 조성물.

8. 항목 1 내지 7 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물에 포함되는 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가 항생제 내성이 없는 조성물.

9. 항목 1 내지 8 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물에 포함되는 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가 pH 3.5에서 3시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있는 조성물.

10. 항목 1 내지 9 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물에 포함되는 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가 0.45% 담즙 추출물의 존재하에서의 4시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있는 조성물.

11. 항목 1 내지 10 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물에 포함된 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가, 스팟 온 론 분석에 의해 결정된 억제대에 의해 입증된 바와 같은, 하기 항미생물 활성 모두를 갖는 조성물: (i) 살모넬라의 경우, 10 mm 이상의 억제대, (ii) 리스테리아 모노사이토제네스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iii) 스타필로코커스 아우레우스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iv) 에스케리키아 콜라이의 경우, 10 mm 이상의 억제대.

12. 항목 1 내지 11 중 어느 한 항목에 있어서, 인간 및/또는 동물을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 조성물.

13. 항목 12에 있어서, 동물을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 조성물.

14. 인간 또는 동물을 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 락토바실러스 플란타룸 종 및 락토바실러스 루테리 종에 속하는 미생물의 혼합물을 포함하고, 락토바실러스 속, 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토코커스 속, 스트렙토코커스 속, 에어로코커스 속, 카르노박테리움 속, 엔테로코커스 속, 오에노코커스 속, 스포로락토바실러스 속, 테트라제노코커스 속, 바고코커스 속 및/또는 바이셀라 속에 속하는 1종 이상의 미생물을 임의로 포함하는 조성물.

15. 인간 또는 동물을 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 락토바실러스 플란타룸 종 및 락토바실러스 루테리 종에 속하는 미생물의 혼합물을 포함하고, 락토바실러스 속(하기 미생물: CECT 8347(AqSynJ12) 및 CECT 8349(AqSynJ55)는 제외함), 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토코커스 속, 스트렙토코커스 속, 에어로코커스 속, 카르노박테리움 속, 엔테로코커스 속, 오에노코커스 속, 스포로락토바실러스 속, 테트라제노코커스 속, 바고코커스 속 및/또는 바이셀라 속에 속하는 1종 이상의 미생물을 임의로 포함하는 조성물.

16. 인간 또는 동물을 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 락토바실러스 플란타룸 종 및 락토바실러스 루테리 종에 속하는 미생물의 혼합물을 포함하고, 락토바실러스 속(락토바실러스 퍼멘툼 종 및 락토바실러스 무코사에 종에 속하는 미생물은 제외함), 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토코커스 속, 스트렙토코커스 속, 에어로코커스 속, 카르노박테리움 속, 엔테로코커스 속, 오에노코커스 속, 스포로락토바실러스 속, 테트라제노코커스 속, 바고코커스 속 및/또는 바이셀라 속에 속하는 1종 이상의 미생물을 임의로 포함하는 조성물.

17. 항목 12 내지 16 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 미생물의 혼합물은 락토바실러스 플란타룸 종 및 락토바실러스 루테리 종에 속하는 미생물로 이루어지는 조성물.

18. 항목 12 내지 17 중 어느 한 항목에 있어서, 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가, 스팟 온 론 분석에 의해 결정된 억제대에 의해 입증된 바와 같은, 하기 항미생물 활성 중 적어도 하나를 가지는 조성물: (i) 살모넬라의 경우, 10 mm 이상의 억제대, (ii) 리스테리아 모노사이토제네스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iii) 스타필로코커스 아우레우스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iv) 에스케리키아 콜라이의 경우, 10 mm 이상의 억제대.

19. 항목 12 내지 18 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물에 포함된 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가 항생제 내성이 없는 조성물.

20. 항목 12 내지 19 중 어느 한 항목에 있어서, 조성물에 포함된 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가 pH 3.5에서 3시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있는 조성물.

21. 항목 12 내지 20 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물에 포함된 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가 0.45% 담즙 추출물의 존재하에서의 4시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있는 조성물.

22. 항목 12 내지 21 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물은 출생 후 처음 30일 이내에 인간 또는 동물에게 투여되는 조성물.

23. 항목 22에 있어서, 상기 조성물은 출생 후 처음 14일 이내에 인간 또는 동물에게 투여되는 조성물.

24. 항목 23에 있어서, 상기 조성물은 출생 후 처음 7일 이내에 인간 동물에게 투여되는 조성물.

25. 항목 24에 있어서, 상기 조성물은 출생 후 처음 2일 이내에 인간 또는 동물에게 투여되는 조성물.

26. 항목 12 내지 25 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 방법은 설사를 치료하거나 예방하기 위한 것인 조성물.

27. 항목 26에 있어서, 상기 설사는 박테리아 및/또는 바이러스 감염와 같은 감염, 바람직하게는 박테리아 감염에 의해 야기되는 조성물.

28. 항목 12 내지 27 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 방법은 돼지 아목(suborder Suina), 개, 고양이, 말, 소, 가금류, 양 및/또는 염소의 동물을 치료하기 위한 것인 조성물.

29. 항목 1 내지 11, 또는 항목 12 내지 28 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물은 1종 이상의 프리바이오틱 제품을 추가적으로 포함하는 조성물.

30. 항목 29에 있어서, 상기 1종 이상의 프리바이오틱 제품은 하기 화합물 및 조성물로부터 선택되는 조성물: 베타-글루칸, 만난-올리고당, 이눌린, 올리고프럭토스, 갈락토올리고당(GOS), 락툴로스, 락토수크로스, 갈락토트리오스, 프럭토-올리고당(FOS), 셀로바이오스, 셀로덱스트린, 사이클로덱스트린, 말티톨, 락티톨, 글리코실수크로스, 비타민 E 또는 이의 변형체(여기서 상기 변이체는 알파, 베타, 감마, 델타 토코페롤, 토코트리에놀 및 토코모노에놀로부터 선택됨)(여기서 만난-올리고당, 베타-글루칸 및/또는 이눌린이 바람직함).

31. 항목 1 내지 11, 또는 항목 12 내지 30 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물은 경구 투여용인 조성물.

32. 항목 1 내지 11, 또는 항목 12 내지 31 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물은 동결건조, 액체 또는 분무 형태인 조성물.

33. 항목 1 내지 11, 또는 항목 12 내지 32 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물은 투여 형태로 제공되며, 각각의 용량은 약 10⁹ 콜로니 형성 단위(CFU)를 포함하는 조성물.

34. 항목 1 내지 11, 또는 항목 12 내지 33 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물은 하나의 단일 용량으로 투여되는 조성물.

35. 항목 34에 있어서, 상기 조성물은 출생 후 처음 48시간 이내에 투여되는 조성물.

36. 항목 35에 있어서, 상기 조성물은 출생 후 처음 24시간 이내에 투여되는 조성물.

37. 항목 36에 있어서, 상기 조성물은 출생 직후에 투여되는 조성물.

38. 항목 1 내지 11, 또는 항목 12 내지 33 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물은 2개의 용량으로 투여되는 조성물.

39. 항목 38에 있어서, 첫 번째 용량은 출생 후 처음 24시간 이내에 투여되고, 두 번째 용량은 이후 24시간 이내에 투여되는 조성물.

40. 항목 39에 있어서, 두 번째 용량은 동물 및/또는 인간이 설사 및/또는 감염 증상(예컨대 물성 설사(watery diarrhoea), 물성/가는(페이스트 유사) 대변, 통증, 경미한 전신 징후, 예컨대 발열, 식욕부진 및/또는 혼수 상태, 약한 상태, 일반적인 신체 상태의 악화/저하, 체중 감량 등)을 나타내는 경우에만 투여되는 조성물.

41. 항목 1 내지 11, 또는 항목 12 내지 40 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물은 박테리아 감염(대장균증(colibacillosis) 포함), 클로스트리듐 디피실 신생아 설사, 클로스트리듐 퍼프린겐스 A 및 C 유형에 의해 야기되는 설사와 같은 박테리아 감염의 치료 또는 예방에서 사용되는 조성물.

42. 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주.

본 발명의 항목(II)

1. 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터에 수탁된 균주를 적어도 포함하는 조성물.

3. 항목 2에 있어서, 상기 1종 이상의 추가의 균주는 락토바실러스 속, 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토코커스 속, 스트렙토코커스 속, 에어로코커스 속, 카르노박테리움 속, 엔테로코커스 속, 오에노코커스 속, 스포로락토바실러스 속, 테트라제노코커스 속, 바고코커스 속 및/또는 바이셀라 속에 속하는 균주로부터 선택되는 조성물.

5. 항목 4에 있어서, 상기 조성물은 2종의 미생물 균주를 포함하고, 상기 2종의 미생물은 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주 및 수탁번호 CECT 8350(AqSynJ59)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주인 조성물.

6. 항목 5에 있어서, 두 균주는 조성물 내에 2:1 내지 1:2의 비(콜로니 형성 단위(CFU)로 나타냄)로 존재하는 조성물.

7. 항목 1 내지 6 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물에 포함된 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가 항생제 내성이 없는 조성물.

8. 항목 1 내지 7 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물에 포함된 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가 pH 3.5에서 3시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있는 조성물.

9. 항목 1 내지 8 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물에 포함된 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가 0.45% 담즙 추출물의 존재하에서의 4시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있는 조성물.

10. 항목 1 내지 9 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물에 포함된 1종 이상의 균주, 바람직하게는 모든 균주가, 스팟 온 론 분석에 의해 결정된 억제대에 의해 입증된 바와 같은, 하기 항미생물 활성 중 모두를 갖는 조성물: (i) 살모넬라의 경우, 10 mm 이상의 억제대, (ii) 리스테리아 모노사이토제네스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iii) 스타필로코커스 아우레우스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iv) 에스케리키아 콜라이의 경우, 10 mm 이상의 억제대.

11. 항목 1 내지 10 중 어느 한 항목에 있어서, 동물 및/또는 인간을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 조성물.

12. 동물 및/또는 인간을 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 락토바실러스 플란타룸 종 및 락토바실러스 루테리 종에 속하는 미생물의 혼합물을 포함하고, 락토바실러스 속(미생물 락토바실러스 퍼멘툼 CECT 8347(AqSynJ12) 및 락토바실러스 무코사에 CECT 8349(AqSynJ55)는 제외함), 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토코커스 속, 스트렙토코커스 속, 에어로코커스 속, 카르노박테리움 속, 엔테로코커스 속, 오에노코커스 속, 스포로락토바실러스 속, 테트라제노코커스 속, 바고코커스 속 및/또는 바이셀라 속에 속하는 1종 이상의 미생물을 임의로 포함하는 조성물.

13. 항목 11 또는 12에 있어서, 상기 방법은 설사를 치료하거나 예방하기 위한 것인 조성물.

14. 항목 1 내지 10, 또는 항목 11 내지 항목 13 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 조성물은 출생 후 처음 48시간 이내에 단일 용량으로 적어도 투여되는 조성물.

15. 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주.

실시예

실시예 1

물질 및 방법

MRS 배지: MRS 배지 제조법을 하기와 같이 스페인 생물자원센터(CECT; www.cect.org)로부터 얻은 제조법에 따라 준비하였다: 펩톤 10.0 g, 쇠고기 추출물 10.0 g, 효모 추출물 5.0 g, 글루코스 20.0 g, 시트르산 암모늄 2.00 g, 아세트산 나트륨 5.00 g, MgSO₄.7H₂O 0.20 g, MnSO₄.H₂O 0.05 g, K₂HPO₄ 2.00 g, [한천 분말(고체 배지의 경우에만) 15 g,] 증류수 1 L.

BHI(Brain Heart Infusion) 배지 제조법을 하기와 같이 스페인 생물자원센터(CECT; www.cect.org)로부터 얻은 제조법에 따라 준비하였다: 송아지 뇌 침출 고형물 12.5 g, 쇠고기 심장 침출 고형물 5.0 g, 프로테오스 펩톤 10.0 g, 글루코스 2.0 g, NaCl 5.0 g, HNa₂PO₄ 2.5 g, 증류수 1 L, [한천 분말(고체 배지의 경우에만) 15 g].

항생제 치료: 전형적으로, 각 돼지 농장은 신생 새끼 돼지를 항생제 및 아마도 철 보충제로 치료한다. 일반적으로 각 돼지 농장은 그의 동물에 대해 상이한 "표준" 치료법을 가진다(이들은 일반적으로 출생시 항생제 용량과 철 보충제를 주사함). 하기 실험에서, 각 농장의 표준 치료법을 사용하였다. 또한, 항생제는 일반적으로 새끼 돼지에서 완전히 확립된 프로토콜 없이 매일 설사, 다리절기, 호흡기 증상 및 많은 다른 사실에 의해 산발적으로 사용된다.

실시예 1A: 균주 기원

박테리아 균주를 하기와 같이 단리하고 동정하였다.

CECT 8350(AqSynJ59) 및 CECT 8700(AqSynRMH69) 박테리아 균주는 새끼 돼지 장의 장벽 세척으로부터 단리하였다.

샘플을 37℃에서 24시간 동안 De Man, Rogosa, Sharpe(MRS) 한천 플레이트에서 호기성 및 혐기성으로 성장시키고, 상이한 형태의 그람 양성, 카탈라제 음성 콜로니를 단리하였다. 모든 콜로니는 박테리아 균주에 속하였다. 각각의 단리된 균주를 문헌[Berthier and Ehrlich, 1998. FEMS Microbiology Letters 161: 97-106]에 기재된 바와 같이 16S/23S rRNA 스페이서 영역을 표적으로 하는 PCR 프라이머를 사용하여 PCR에 의해 증폭시켰다.

증폭 및 전기영동 후, 뚜렷이 구분된 밴드를 정제하고 시퀀싱하였다. 시퀀싱에 의해 상기 균주를 박테리아 종으로 할당하였다.

1.1 균주의 특성규명 및 선택

1. 락토바실러스 플란타룸(AqSynJ59)

2. 락토바실러스 루테리(AqSynRMH69)

"시험관내 선택 시험"하에 상기에 기재된 기준 a. 내지 c.에 따른 시험관내 시험에 의해 특히 유익한 특성을 갖는 2종의 균주가 밝혀졌다.

a. 상이한 병원균에 대한 억제: 선택된 균주는 하기 억제대 중 적어도 하나에 의해 입증된 항미생물 활성을 나타낸다: 살모넬라의 경우 10 mm 이상, 리스테리아 모노사이토제네스의 경우 9 mm 이상, 스타필로코커스 아우레우스의 경우 9 mm 이상 및 에스케리키아 콜라이의 경우 10 mm 이상.

AqSynJ59 및 AqSynRMH69에 대한 결과가 하기에 열거되어 있다.

상기 표에서 볼 수 있는 바와 같이, 새끼 돼지 장으로부터 선택된 균주는 전술한 바와 같이 선택 기준 a. 내지 c.를 충족한다.

b. pH 내성: 두 균주는 pH=3.5에서 3시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있다.

c. 내담즙산염 . 두 균주는 0.45% 담즙 추출물의 존재하에서의 4시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있다.

더욱이, 상기 확인된 균주는 항생제 내성이 없다.

항생제 내성을 평가하기 위한 최소 억제 농도(MIC)의 시험관내 시험을 상기 균주(AqSynJ59 및 AqSynRMH69)에 대해 수행하였다. 평가된 항생제는 하기와 같았다:

암피실린, 반코마이신, 젠타마이신, 카나마이신, 스트렙토마이신, 클린다마이신, 테트라사이클린 및 클로람페니콜.

본 발명의 균주의 항생제 내성을 평가하는데 사용된 미생물학적 컷오프 값은 문헌["Guidance on the assessment of bacterial susceptibility to antimicrobials of human and veterinary importance", EFSA Panel on Additives and Products or Substances used in Animal Feed (FEEDAP), European Food Safety Authority (EFSA), Parma, Italy. EFSA Journal 2012;10(6):2740]에 정의된 것이다.

각 박테리아의 MIC 결과와 비교하여 EFSA 컷오프 값 항생제에 대한 내성 :

*: 민감성

**: 내성

LSM=pH 6.7로 조정된 IST(Oxoid laboratories) 브로쓰(90%) 및 MRS 브로쓰(10%)의 혼합물로 이루어진 LAB 민감성 시험 배지.

두 균주는 EFSA 권장 항생제에 대해 비-내성으로서 간주될 수 있으며, 따라서 이들은 "식품 생산" 동물 사료를 위한 첨가제로서 사용될 수 있다.

실시예 1B: 본 발명에 따른 프로바이오틱 조성물의 제조

명세서에 기재된 바와 같이, 그리고 상기에 입증된 바와 같이, 기준 a. 내지 c.를 충족하는, 균주 CECT 8350(AqSynJ59) 및 CECT 8700(AqSynRMH69)을 프로바이오틱 조성물에 포함시키고 현장 시험에서 시험하였다.

균주 AqSynJ59 및 AqSynRMH69 각각을 발효에 의해 MRS 브로쓰 배양에서 성장시키고, 채취하고, 동결건조하였다. 최종 생성물의 생존력을 콜로니 수에 의해 확인하였다.

이들 두 균주 모두를 함유하는 조성물을 제조하였다. 하기 조성물을 제조하였다:

조성물:(2 ml 중 5 x 10⁸ CFU의 각 균주)

모든 균주를 동결건조 형태로 사용하였다.

조성물에 혼입되는 각각의 균주의 동일한 박테리아 양(콜로니 수에 의해 결정됨(상기 표시된 각각의 값(g))을 혼합하여 조성물을 제조하고, 이렇게 수득된 조성물을 등장성 염수 용액으로 재수화하여, 2 ml 용량 중에 10⁹ CFU(여기에 포함된 모든 균주의 전체)를 함유하는 최종 조성물을 수득하였다.

실시예 1C: 현장 시험

스페인 북부 돼지 생산 농장에서 신생 새끼 돼지의 설사가 검출되었고, 이 곳에서 상기 두 균주의 제품을 시험하였다.

농장 기본 생산 단위는 "출생 단위"이다. 각각의 출생 단위는 24배 새끼로 구성된다. 상기 실험에서, 12배 새끼를 표준 농장 조건 하에 관리하였다(설사 증상을 보인 한배 새끼 내의 새끼 돼지를 치료하기 위해 항생제 및 영양 조성물의 사용이 필요한 대조군 그룹). 다른 12배 새끼들은, 설사의 경우 항생제의 추가 사용 없이, 아퀼론(Aquilon) 프로바이오틱 조성물 단독으로 치료하였다(모든 새끼 돼지들에게 출생 1일(출생 직후)에 전술한 조성물의 단일 용량(2 ml)을 경구 투여함. 조성물의 두 번째 용량(2 ml)은 설사 증상을 나타낸 그룹의 동물에게만 출생 후 2일에(첫 번째 용량의 투여 후 24시간 후에) 투여함). 상기 프로바이오틱 조성물을 투여받고 있는 동물들은 어느 때에도 항생제를 투여받지 않았다(이들이 설사 증상을 보인 경우에도 표준 관리된 동물(대조군)과 동일한 식이에 영양제가 첨가된 것으로 구성된 치료를 받지 않았음에도 불구하고). 상기 동물은 출생부터 생후 20일까지 통제되었다.

이 시험에 사용된 프로바이오틱 조성물은, 전술한 바와 같이, 2 mL 용량당 10⁹ CFU(5x10⁸ CFU의 각각의 균주)를 함유하는, 2종의 락토바실러스 균주, AqSynJ59: 락토바실러스 플란타룸 및 AqSynRMH69: 락토바실러스 루테리의 혼합물이었다.

대조군 그룹의 치료는, 증상이 관찰되는 동안 주사하는, 항생제, 즉 kg 용량당 5 mg의 아목시실린의 IM 주사를 이용하였다. 이 대조군 그룹 내의 설사를 보인 새끼 돼지들은 이들이 설사를 보인 날 동안 매일 1회 이 치료를 받았으며, 한편 아퀼론 프로바이오틱 조성물(전술한 바와 같음)을 투여받고 있는 그룹에서 설사를 보인 동물은 어느 때에도 항생제로 치료하지 않았다.

실험 설계

A. 한배 새끼당 생존 출생의 수

B. 출생 후 사망

C. 설사: 스코어링을 위해 하기 기준으로, 이들을 한배 새끼 기준으로 계수한다:

0.- < 25% 미만의 동물이 감염됨: 항문주위 구역에서 더러운 동물의 뚜렷한 징후가 없으며, 바닥이나 벽에서 부드러운 대변이 관찰되지 않음.

1.-일부 설사: 일부 더러운 동물이 때때로 한배 새끼에서 관찰되며, 바닥에 일부 부드러운 대변이 관찰됨.

2.-대다수의 동물(>75%)이 설사 및 변화된 신체 상태를 나타내며, 더러운 동물 및 바닥에 부드러운 대변이 관찰됨.

D. 치료: 한배당 새끼 돼지 및 이들이 치료(항생제, 영양제, 카본, 재수화 등)를 받은 일수.

결과의 요약

*한배 새끼당 치료 지수=(치료된 한배 새끼 x 치료 일수/12)

결론:

시험된 조성물은 새끼 돼지 설사를 예방하고 치료하는데 대해 표준 관행보다 더 우수하다:

a) 항생제의 필요를 완전히 대체함

b) 비-항생제 보조 치료의 필요성을 감소시킴

c) 전반적인 설사의 발병률을 감소시킴

d) 중증 설사의 발병률을 감소시킴

e) 설사에 의해 유발된 사망률을 감소시킴

f) 이유시 평균 체중을 개선함

g) 상업적 이용시 표준 관리 조건 하에 설사 전염병의 경제적 영향을 매우 유의한 방식으로 감소시킴(동물당 더 많은 kg, 적은 사망, 적은 치료 비용, 적은 환경 영향, 적은 핸들링 시간).

실시예 2

실시예 2의 물질 및 방법, 뿐만 아니라 균주 기원은 상기 실시예 1("물질 및 방법" 및 "실시예 1A: 균주 기원")에 기재된 것과 동일하다.

실시예 2A: 본 발명에 따른 프로바이오틱 조성물의 제조

명세서에 기재된 바와 같이, 그리고 상기 입증된 바와 같이("실시예 1 A: 균주 기원"), 기준 a. 내지 c.를 충족시키는 균주 CECT 8350(AqSynJ59) 및 CECT 8700(AqSynRMH69)를 프로바이오틱 조성물에 포함시켰고 현장 시험에서 시험하였다.

이들 2종의 균주를 모두 함유하는 조성물을 제조하였다. 하기 조성물을 제조하였다("AQ1202-PigLife" 또는 "PigLife" 또는 "AQ1202"):

보충 사료:

상기 제품("AQ1202-PigLife"의 명칭으로 제공되며, "PigLife" 또는 "AQ1202"로도 불림)은 신생 새끼 돼지를 위한 경구 현탁액을 정의하기 위해 2종의 유산균 및 상이한 사료 성분의 동결건조된 혼합물로 이루어진다. 상기 제품을 아퀼론의 시설에서 혼합하고 100 ml 바이알에 포장하였다. 이 제제는 사용 직전 100 ml 수액에 용출되도록 의도된다.

조성물 내로 혼입되는 각각의 균주의 동일한 박테리아 양(콜로니 수에 의해 결정됨(상기 나타낸 각각의 값(CFU))을 혼합하여 조성물을 제조하고, 이렇게 수득된 조성물을 등장성 염수 용액으로 재수화시켜, 2 ml 용량 중에 10⁹ CFU(여기에 포함된 모든 균주의 전체)를 함유하는 최종 조성물을 수득하였다.

실시예 2B: 현장 시험

본 실시예의 목적은 특히 장내세균 불균형 및 설사에 취약한 출생 후 새끼 돼지에서 본 발명에 따른 프로바이오틱 조성물의 용도를 평가하는 것이다.

2종의 균주 제품("AQ1202-PigLife" 또는 "PigLife")을 다양한(알려지거나 알려지지 않은) 병인학(aetiology)의 설사가 산발적으로 발병된 상업적 농장(총 5곳)에서 시험하였다. 상기 상업적 농장은 스페인(Aragon, Castilla y Leon, Cataluna)의 다른 지역에 위치하였다. 이들 모두는 수정 프로그램(insemination program), 임신한 암퇘지의 관리, 분만(farrowing) 및 이유 설비(weaning unit)를 포함하는 집약적인 양돈 시스템을 가지고 있다. 이들 중 일부는 이들을 비육 설비(fattening unit)로 옮기기 전에 동물을 위한 이전 외양간(transition stall)을 포함한다. 실험은 현장 실험에서 실험 축산 첨가제의 사용을 커버하는 공식 라이선스 하에 수행하였다.

동물 그룹:

· 프로바이오틱 치료 그룹(AQ1202-PigLife)

· 대조군 그룹(치료 없음 - 조작 없음)

분만 후(출생 1일), 치료 그룹 내의 모든 새끼 돼지에게 프로바이오틱 조성물 AQ1202-PigLife(AQ1202) 2 ml 용량을 경구 투여하였다. 분만부터 20일까지 데이터를 기록하였다.

하기 사항을 평가하였다:

·축산 매개변수의 평가

-태어난 새끼 돼지의 수: 태어나고 생존한 총 수(사망률-이유된 새끼 돼지)

-새끼 돼지 체중(가능한 경우)

-대변 평가

· 0: 정상적인 대변

· 1: 경미한 설사; 한배 새끼에서 일부 설사 사례가 나타남

· 2: 중증 설사; 대부분의 새끼 돼지가 설사에 걸림

-치료 평가: 치료된 한배 새끼 및 암퇘지의 기록.

농장 1 내지 4

농장 3에서, 한배 새끼들의 2가지의 상이한 분만 배치(batch)를 관찰하였다:

실험 1: 2014년 10월(농장 3.1)

실험 2 2: 2015년 5월(농장 3.2)

135개의 대조군 및 104개의 PigLife-치료된 한배 새끼의 데이터를 이 연구에서 기록하였다.

총 1710개의 대조군 및 1136마리의 치료된 새끼 돼지를 분만부터 20일까지 관찰하였다.

농장 1 내지 4에서, 설사는 항생제에 반응하는 것으로 나타났고, 즉 박테리아 기원의 설사인 것으로 나타났다.

- 사망률(%)(설사 및 압사된 새끼 돼지를 포함하는 일반 사망률)

- 설사( 또한 도 2 참고)

* 2일 길이 설사가 있는 단 1마리의 한배 새끼

- 치료

농장 1

영향을 받은 한배 새끼는 아목시실린 + 린코마이신, 병인 치료(어미)로 치료하였고, 새끼 돼지에서는 티아물린 + 콜리스틴(Colimutina, SP Veterinaria) + 경구 수액, 대증 요법으로 치료하였다.

농장 2

사용된 항생제는 어미, 새끼 돼지, 또는 이들 모두에게 엔로플록사신(Enrofloxacin)(이는 우유에 의해 새끼 돼지에게 방출될 것임)이었다. 경구 재수화 및 미네랄 카본을 영향받은 새끼 돼지에게 투여하였다.

농장 3

한배 새끼 내에서의 설사 사례에서, 영향받은 새끼 돼지는 엔로플록사신(Alsir, Norvet)으로 치료하였다. 어미는 마르보플록사신(Marbocyl, Vetoquinol)으로 치료하였다. 증상을 보이는 새끼 돼지의 경우 콜리마이신 + 수액으로 치료하였다.

농장 4

설사를 보이는 한배 새끼의 암퇘지는 엔로플록사신으로 치료하였다. 필요한 경우 치료는 3일간 지속될 수 있다. 예방으로서, 출생 1일에 이 농장 내의 모든 새끼 돼지에게 1용량의 세트티오푸르(Ceftiofur; Naxcel, Zoetis)를 적용하였다.

투여량은 다음과 같았다:

아목시시린: 15 mg/kg, 근육내(IM) 주사

린코마이신: 식수 중에 5-10 mg/kg

엔로플록사신; 2.5 mg/kg 근육내 주사

마르보플록사신: 2 mg/kg 근육내 주사

콜리마이신: 0.5 g/리터(식수)

세프티오푸르: 5 mg/kg, 근육내 주사

콜리무티나(Colimutina): 0.156 mg 소디움 콜리스티메테이트 + 12.35 mg 티아물린 수소 푸마레이트 /kg; 0.1 ml/kg 근육내 주사.

상기 결과가 하기 표 및 도 3에 나타나 있다:

*하나의 한배 새끼만이 1회 치료됨

농장 1 내지 4의 결론

본 발명에 따른 프로바이오틱 조성물(AQ1202)은, 상기 표 및 도 2에서 볼 수 있는 바와 같이, 설사 증상이 지속된 농장(농장 1-4의 경우 박테리아 감염에 의해 야기됨)에서 사망률을 감소시킨다. 이 조성물의 투여는 항생제를 포함한 치료의 필요성을 줄여준다. 상기 표 및 도 3은 본 발명에 따른 프로바이오틱 조성물(AQ1202)을 복용하고 있는 치료된 한배 새끼(항생제 치료 포함)의 백분율 감소를 나타낸다.

농장 5

농장 5에서, 설사는 박테리아 기원을 가지고 있지 않았다. 상기 설사는 항생제 치료에 반응하지 않았다. 최종적으로, 설사는 로타바이러스 감염으로 진단되었고, 이는 농부가 보고한 진단에 따라, 신생 새끼 돼지의 설사의 원인이었다.

이 실험을 750마리의 사육용 암퇘지 집단을 갖는 아라곤(스페인)에 위치한 상업용 돼지 농장에서 수행하였다.

2014년 1월 초부터 상기 농장은 신생 새끼 돼지 설사의 지속적인 증상으로 인해 그 해 5월에 영향받은 한배 새끼가 95% 비율에 달하였다. 사망률은 생존 출생한 새끼 돼지 중 35%가 넘는 새끼 돼지에 영향을 미칠 때까지 증가하였다. 희귀한 결과로 인해 6개월 넘게 엔테로박테리아세애 및 클로스트리듐에 대한 항생제가 상당량 사용되었다.

설사의 병인으로서 감염성 위장염과 유행성 돼지 설사(돼지 유행성 설사, 코로나바이러스)가 버려지자, 임상 진단은 돼지 로타바이러스였다. 따라서, 농장 5의 설사는 바이러스 감염, 돼지 로타바이러스 감염에 의해 야기되었다.

로타바이러스 감염은 외부 진단 실험실(GSP laboratory, Catalonia, SPAIN)에 의해 PCR 진단에 의해 확인되었다. 돼지 무리에서 관찰된 높은 설사율 및 첫 번째 치료의 낮은 성공으로 인해, 농부는 2014년 5월부터 2014년 12월까지 모든 새끼 돼지에게 목장에서 상기 제품(본 발명에 따른 조성물, AQ1202)을 체계적으로 투여하기로 결정하였다.

상기 치료가 도입된 이후, 사망률은 5%로 감소하였고, 설사 발병률은 한배 새끼의 20%로 감소하였다.

상기 결과가 하기에 나타나 있다.

치료:

설사의 경우:

· CARBOVET(제품 Carbovet®은 특별히 선택된 프렌치 오크(French oak)로 만든 열 구조화된(비활성화된) 식물성 숯임).

· SUEROMIN(고장성 주입물을 이용한 복강내 재수화; 조성물: 글루코스 25g, 프럭토스 25g, 클로라이드 2,62g, 나트륨 1,57g, 칼륨 80 mg, 마그네슘 20 mg, 칼슘 40 mg; 부형제 q.s. 1000 ml)

모든 동물에게:

· AQ1202-PigLife

1/5-30/6: 새끼 돼지당 1-2개 용량

1/7-31/12: 새끼 돼지당 3개 용량

· 철분: 생후 3일에서 8일 중 어느 일자에, 새끼 돼지당 1 용량(약 150 mg, 근육내).

983마리의 한배 새끼의 관찰(2014년 5월부터 12월까지)을 2014년 5월부터 12월까지의 이 연구에 보고하였다(하기 표 참고). 각 한배 새끼 내의 모든 새끼 돼지를 AQ1202 - PigLife(본 발명에 따른 조성물)로 치료하였다.

* Carbovet 및/또는 Sueromin

** 1회 치료 = 1 용량의 Carbovet 및/또는 Sueromin

Carbovet: 경구를 통해 10 g/동물

Sueromin: 복강내 또는 피하를 통해 20 ml/kg 내지 80 ml/kg

상기 프로바이오틱 조성물을 한배 새끼 내의 모든 새끼 돼지에게 투여하였다. 동물에서의 설사 관찰과 직접 관련된, 치료된 한배 새끼의 백분율은 본 발명에 따른 프로바이오틱 조성물(AQ1202 - PigLife)의 연속 적용 동안 95%에서 5%로 느껴졌다. Carbovet 및 Sueromin(대증 요법)은 약하고 설사를 보이는 동물에게만 투여하였다. 이유된 새끼 돼지의 백분율에서 상승 경향이 관찰되었다. 프로바이오틱 조성물을 투여한 이래 농부는 한배 새끼당 최대 약 0.7% 더 이유된 새끼 돼지를 관찰하였다.

Spanish Type Cultures Collection

CECT8700

20140910

Spanish Type Cultures Collection

CECT8163

20120620

Spanish Type Cultures Collection

CECT8165

20120620

Spanish Type Cultures Collection

CECT8164

20120620

Spanish Type Cultures Collection

CECT8166

20120620

Spanish Type Cultures Collection

CECT8347

20130516

Spanish Type Cultures Collection

CECT8348

20130516

Spanish Type Cultures Collection

CECT8349

20130516

Spanish Type Cultures Collection

CECT8350

20130516

Claims

동물 또는 인간의 바이러스 감염에 의해 야기된 설사를 치료 또는 예방하는 방법에서 사용하기 위한, 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터(Spanish Type Cultures Collection)에 기탁된 균주를 적어도 포함하는 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 1종 이상의 미생물 균주를 추가로 포함하며, 각각의 추가의 균주는, 스팟 온 론 분석(spot on lawn assay)에 의해 결정된 억제대에 의해 입증된 바와 같은, 하기 항미생물 활성 중 적어도 하나를 갖는 것인 약학적 조성물: (i) 살모넬라(Salmonella)의 경우, 10 mm 이상의 억제대, (ii) 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iii) 스타필로코커스 아우레우스(Staphyloccocus aureus)의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iv) 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)의 경우, 10 mm 이상의 억제대.
제2항에 있어서, 1종 이상의 추가의 균주는 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 페디오코커스(Pediococcus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 에어로코커스(Aerococcus) 속, 카르노박테리움(Carnobacterium) 속, 엔테로코커스(Enterococcus) 속, 오에노코커스(Oenococcus) 속, 스포로락토바실러스(Sporolactobacillus) 속, 테트라제노코커스(Tetragenococcus) 속, 바고코커스(Vagococcus) 속 또는 바이셀라(Weisella) 속에 속하는 균주로부터 선택되는 것인 약학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 수탁번호 CECT 8350(AqSynJ59)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주를 추가로 포함하는 것인 약학적 조성물.
제4항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 2종의 미생물 균주를 포함하고, 상기 2종의 미생물은 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주 및 수탁번호 CECT 8350(AqSynJ59)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주인 약학적 조성물.
제5항에 있어서, 두 균주는 약학적 조성물 내에 2:1 내지 1:2의 비(콜로니 형성 단위(CFU)로 나타냄)로 존재하는 것인 약학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학적 조성물에 포함되는 1종 이상의 균주 또는 모든 균주가 항생제 내성이 없는 것인 약학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학적 조성물에 포함되는 1종 이상의 균주 또는 모든 균주가 pH 3.5에서 3시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있고, 균주는 인큐베이션 전의 CFU에 비해 pH 3.5에서 3시간 동안의 인큐베이션 후 적어도 50% CFU가 존재하는 경우 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있는 것인 약학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학적 조성물에 포함되는 1종 이상의 균주 또는 모든 균주가 0.45% 담즙 추출물의 존재하에서의 4시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있고, 균주는 인큐베이션 전의 CFU에 비해 0.45% 담즙 추출물의 존재하에서의 4시간 동안의 인큐베이션 후 적어도 50% CFU가 존재하는 경우 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있는 것인 약학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학적 조성물에 포함된 1종 이상의 균주 또는 모든 균주가, 스팟 온 론 분석에 의해 결정된 억제대에 의해 입증된 바와 같은, 하기 항미생물 활성 모두를 갖는 것인 약학적 조성물: (i) 살모넬라의 경우, 10 mm 이상의 억제대, (ii) 리스테리아 모노사이토제네스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iii) 스타필로코커스 아우레우스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iv) 에스케리키아 콜라이의 경우, 10 mm 이상의 억제대.
동물 또는 인간의 바이러스 감염에 의해 야기된 설사를 치료 또는 예방하는 방법에서 사용하기 위한, 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 종 및 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri) 종에 속하는 미생물의 혼합물을 포함하고, 락토바실러스 속(미생물 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum) CECT 8347(AqSynJ12) 및 락토바실러스 무코사에(Lactobacillus mucosae) CECT 8349(AqSynJ55)는 제외함), 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토코커스 속, 스트렙토코커스 속, 에어로코커스 속, 카르노박테리움 속, 엔테로코커스 속, 오에노코커스 속, 스포로락토바실러스 속, 테트라제노코커스 속, 바고코커스 속 또는 바이셀라 속에 속하는 1종 이상의 미생물을 임의로 포함하는 약학적 조성물로서, 상기 미생물은, 스팟 온 론 분석에 의해 결정된 억제대에 의해 입증된 바와 같은, 하기 항미생물 활성 중 적어도 하나를 갖고:
(i) 살모넬라의 경우, 10 mm 이상의 억제대, (ii) 리스테리아 모노사이토제네스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iii) 스타필로코커스 아우레우스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iv) 에스케리키아 콜라이의 경우, 10 mm 이상의 억제대,
상기 약학적 조성물은 적어도 출생 후 처음 48시간 이내에 단일 용량으로 투여되는 것인 약학적 조성물.
동물 또는 인간의 바이러스 감염에 의해 야기된 설사를 개선 또는 예방하는 방법에서 사용하기 위한, 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터(Spanish Type Cultures Collection)에 기탁된 균주를 적어도 포함하는 식품 조성물.
제12항에 있어서, 1종 이상의 미생물 균주를 추가로 포함하며, 각각의 추가의 균주는, 스팟 온 론 분석(spot on lawn assay)에 의해 결정된 억제대에 의해 입증된 바와 같은, 하기 항미생물 활성 중 적어도 하나를 갖는 것인 식품 조성물: (i) 살모넬라(Salmonella)의 경우, 10 mm 이상의 억제대, (ii) 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iii) 스타필로코커스 아우레우스(Staphyloccocus aureus)의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iv) 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)의 경우, 10 mm 이상의 억제대.
제13항에 있어서, 1종 이상의 추가의 균주는 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 페디오코커스(Pediococcus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 에어로코커스(Aerococcus) 속, 카르노박테리움(Carnobacterium) 속, 엔테로코커스(Enterococcus) 속, 오에노코커스(Oenococcus) 속, 스포로락토바실러스(Sporolactobacillus) 속, 테트라제노코커스(Tetragenococcus) 속, 바고코커스(Vagococcus) 속 또는 바이셀라(Weisella) 속에 속하는 균주로부터 선택되는 것인 식품 조성물.
제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식품 조성물은 수탁번호 CECT 8350(AqSynJ59)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주를 추가로 포함하는 것인 식품 조성물.
제15항에 있어서, 상기 식품 조성물은 2종의 미생물 균주를 포함하고, 상기 2종의 미생물은 수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주 및 수탁번호 CECT 8350(AqSynJ59)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주인 식품 조성물.
제16항에 있어서, 두 균주는 식품 조성물 내에 2:1 내지 1:2의 비(콜로니 형성 단위(CFU)로 나타냄)로 존재하는 것인 식품 조성물.
제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식품 조성물에 포함되는 1종 이상의 균주 또는 모든 균주가 항생제 내성이 없는 것인 식품 조성물.
제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식품 조성물에 포함되는 1종 이상의 균주 또는 모든 균주가 pH 3.5에서 3시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있고, 균주는 인큐베이션 전의 CFU에 비해 pH 3.5에서 3시간 동안의 인큐베이션 후 적어도 50% CFU가 존재하는 경우 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있는 것인 식품 조성물.
제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식품 조성물에 포함되는 1종 이상의 균주 또는 모든 균주가 0.45% 담즙 추출물의 존재하에서의 4시간의 인큐베이션 동안 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있고, 균주는 인큐베이션 전의 CFU에 비해 0.45% 담즙 추출물의 존재하에서의 4시간 동안의 인큐베이션 후 적어도 50% CFU가 존재하는 경우 본질적으로 동일한 생존력을 유지할 수 있는 것인 식품 조성물.
제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식품 조성물에 포함된 1종 이상의 균주 또는 모든 균주가, 스팟 온 론 분석에 의해 결정된 억제대에 의해 입증된 바와 같은, 하기 항미생물 활성 모두를 갖는 것인 식품 조성물: (i) 살모넬라의 경우, 10 mm 이상의 억제대, (ii) 리스테리아 모노사이토제네스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iii) 스타필로코커스 아우레우스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iv) 에스케리키아 콜라이의 경우, 10 mm 이상의 억제대.
동물 또는 인간의 바이러스 감염에 의해 야기된 설사를 개선 또는 예방하는 방법에서 사용하기 위한, 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 종 및 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri) 종에 속하는 미생물의 혼합물을 포함하고, 락토바실러스 속(미생물 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum) CECT 8347(AqSynJ12) 및 락토바실러스 무코사에(Lactobacillus mucosae) CECT 8349(AqSynJ55)는 제외함), 류코노스톡 속, 페디오코커스 속, 락토코커스 속, 스트렙토코커스 속, 에어로코커스 속, 카르노박테리움 속, 엔테로코커스 속, 오에노코커스 속, 스포로락토바실러스 속, 테트라제노코커스 속, 바고코커스 속 또는 바이셀라 속에 속하는 1종 이상의 미생물을 임의로 포함하는 식품 조성물로서, 상기 미생물은, 스팟 온 론 분석에 의해 결정된 억제대에 의해 입증된 바와 같은, 하기 항미생물 활성 중 적어도 하나를 갖고:
(i) 살모넬라의 경우, 10 mm 이상의 억제대, (ii) 리스테리아 모노사이토제네스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iii) 스타필로코커스 아우레우스의 경우, 9 mm 이상의 억제대, (iv) 에스케리키아 콜라이의 경우, 10 mm 이상의 억제대,
상기 식품 조성물은 적어도 출생 후 처음 48시간 이내에 단일 용량으로 투여되는 것인 식품 조성물.
수탁번호 CECT 8700(AqSynRMH69)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주.
제23항에 정의된 균주를 적어도 포함하는 조성물.
제24항에 있어서, 수탁번호 CECT 8350(AqSynJ59)으로 스페인 생물자원센터에 기탁된 균주를 추가로 포함하는 것인 조성물.