KR102424889B1 - 생리기능성 접착제 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 아크릴화된 접착 단백질의 C-말단 또는 N-말단에 생리기능성 펩티드가 결합된 생리기능성 접착 단백질 및 상기 생리기능성 접착 단백질을 포함하는 생리기능성 접착제 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 생리기능성 접착 단백질은 휴대폰 액정보호 필름, 식품포장재, 의료기구 등의 표면에 코팅되어 유해 미생물에 대한 안정성을 확보할 수 있고, 특히 본 발명의 생리기능성 접착 단백질은 강력한 접착력을 바탕으로 항균성이 지속적으로 유지됨으로써, 항균물질의 용출에 의한 항균력 감소를 효과적으로 방지할 수 있다.
Description
본 발명은 생리기능성 접착제 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 홍합 접착 단백질의 분자 골격에 아크릴레이트기를 도입하여 접착이나 코팅성을 개선한 생리기능성 접착제 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다. 상기 홍합 접착 단백질은 항균, 항바이러스, 항아토피 등 다양한 기능성 펩티드가 C-말단, N-말단, 또는 하이브리드(hybrid) 홍합 접착 단백질 사이에 융합될 수 있다.
일상적으로 사용하는 생활용품이나 가전제품은 먼지, 타액, 기름기 등의 주변 환경으로 인해 해로운 세균이나 바이러스가 쉽게 증식하게 된다. 더욱이 조류독감 바이러스나 슈퍼박테리아와 같은 내성균의 출현 등으로 인해 환경 위생에 대한 높은 관심과 생활양식의 고급화에 따라 식품 포장재, 보관용 용기, 칫솔, 도마, 문구류, 화장품 및 포장재와 같은 산업용품과 의료용품으로 사용하는 석유화학 소재에 항균성 등 다양한 기능성을 부여한 제품들의 생산 및 수요가 증가하고 있다.
항균제의 경우, 종래 기술들은 항생 물질을 합성 고분자나 천연 소재에 첨가하거나 미생물이 싫어하는 화학적 환경을 제공함으로써 항균 효과를 가진다(특허문헌 1). 그러나, 이러한 종래의 항균제들은 사용 중에 항균 성분이 서서히 제거되어 항균 활성의 지속성에 문제가 제기되고 있다. 또한, 기존의 항균 기술은 주로 은 나노입자나 무기입자들을 사용하는 것으로서, 미세 입자의 이탈로 인한 인체 유해성에 대한 논쟁이 있어 왔으며, 이에 친환경적인 항균 기술에 대한 요구가 증가하고 있다.
또한, 벤즈이미다졸 등의 유기계 항균 물질이나 고추냉이 추출물 등의 천연 항균 물질은 소재에 단순 첨가하여 항균성 소재를 제조하고 있으나(특허문헌 1 및 특허문헌 2), 유기계 항균물질의 자체적인 독성, 항균물질의 용출 및 그에 따른 항균력 감소 등의 기술적 한계가 지적되어 있으며(비특허문헌 1), 특히 플라스틱류를 사출 또는 압출하는 경우 항균성 물질은 열분해 및 황변 현상을 유발하기도 한다. 더구나 항균 필름을 식품과 함께 포장하는 경우, 상기에 언급된 항균물질의 용출로 인한 미생물의 내성 유발 등의 심각한 부작용이 발생할 수 있는 문제점이 제기되었다.
이에 따라 항균제를 고정화하거나 물질의 화학적 구조가 균을 사멸시키거나 균이 표면에 부착되지 못하는 물질을 항균제로 개발하여 항균 지속성을 높이는 방법들이 고안되고 있다(특허문헌 3, 비특허문헌 2, 비특허문헌 3). 또한, 광범위한 항균력을 부여하기 위해 2개 이상의 항균제가 포함되는 항균 기술들이 개발되고 있으나(특허문헌 4), 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해소하기에는 부족한 실정이다.
K. Glinel et al., Acta Biomaterialia, 8, 1670 (2012)
Mo S, Krunic A, et al., J Nat Prod. 2009 72(11):2043-5
Bin Wang, et al., Journal of Applied Polymer Science, 130(5), p3489-3497, 2013
본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 본 발명은 다양한 표면에 우수한 코팅력을 가지나 일반적으로 접착 시간이 6시간 이상 장시간 필요한 접착 단백질의 접착이나 코팅 시간을 수분 이내로 단축시킨 접착 혹은 코팅 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 접착 단백질의 C-말단 혹은 N-말단에 항균, 항아토피, 항바이러스 등 다양한 기능성 펩티드가 융합된 항균, 항바이러스, 항아토피, 항암용 접착 단백질 및 이를 포함하는 코팅 혹은 접착 조성물을 개발하는 것을 목적으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 기능성 펩티드는 항균, 항암, 항면역, 항바이러스, 항아토피, 항혈전 등 다양한 생리학적 기능을 수행할 수 있는 아미노산이 3개 이상인 물질을 나타내지만, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 홍합 접착 단백질의 티로신 잔기를 DOPA (3,4-dihydroxyphenylalanine)로 화학적으로 수정하고 아크릴레이트기를 도입함으로써, 간단한 방법으로 다양한 기능성 표면 코팅이 가능하고, 수용성 코팅 조성물로 유기용매의 사용없이 가혹한 조건에서 오랜 시간 동안 코팅의 지속이 가능한 환경 친화형 코팅 소재를 개발하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 광경화형 아크릴레이트 도입에 의해 액정 필름이나 가전제품 등 다양한 소재에 적용할 수 있는 광경화형 항균 코팅 소재를 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 특정한 장점들 및 신규한 특징들은 첨부된 도면들과 관련되어 이하의 상세한 설명과 바람직한 실시예로부터 더욱 명확해질 것이다.
본 발명은 습한 환경이나 건조한 환경에서 자가 접착이 가능한 접착성 단백질에 항균, 항바이러스, 항아토피 등의 기능을 할 수 있는 기능성 펩티드가 유전공학적으로 부가된 접착 단백질에 아크릴레이트기가 도입된 아크릴화 접착 단백질 및 그에 기반한 접착 또는 코팅 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 아크릴화된 접착 단백질의 C-말단 또는 N-말단에 생리기능성 펩티드가 결합된 생리기능성 접착 단백질을 제공한다.
또한, 본 발명은 접착 단백질의 C-말단, N-말단에 적어도 1 개 이상의 기능성 펩티드를 부가하여 생리기능성이 우수한 접착 단백질을 제공한다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 생리 기능성 펩티드가 부가된 접착 단백질의 티로신 부분을 DOPA로 치환하고, 아크릴레이트기를 도입함으로써 다양한 표면에 간단하게 코팅이 가능한 생리기능성 코팅 소재를 제공할 수 있다.
또한, 본 발명은 광경화형 아크릴레이트가 도입된 접착 단백질에 기반한 접착 또는 코팅 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 아크릴레이트가 부착된 접착 단백질의 C-말단 또는 N-말단에 생리기능성 펩티드가 결합된 생리기능성 접착 단백질을 제공한다. 본 발명의 한 구현예에 따르면, 상기 접착 단백질은 홍합 유래의 접착 단백질인 것이 바람직하지만 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명은 순수한 단백질로만 구성된 홍합 유래 접착제의 문제점인 장시간 접착 혹은 코팅이 필요한 단점을 개선하여 단시간에 강력한 접착력을 갖는 동시에 다양한 미생물이나 바이러스에 효과를 가진다. 본 발명의 한 구현예에서 제공하는 항균 접착제의 분자 골격은 양수성 특징을 가져 기존 항균 코팅 제품에 첨가제로 사용할 수 있을 뿐만 아니라, 항균 접착제를 수용성 혹은 지용성 코팅제로 만들어 사용할 수 있다. 본 발명에서 제시한 항균 조성물은 기존 기술에 비해 강력한 항균력이 장기간 지속되는 특성을 가지며, 동시에 외부 환경이나 압력에 의해 항균 코팅제가 쉽게 손상되지 않는 내구성을 가진다. 본 발명의 생리기능성 접착제 조성물은 다양한 제품에 적용하기 용이한 가공성과, 특정 조건하에서 생분해되며, 코팅이나 접착시 유기용매를 사용하지 않는 친환경성이 우수하여, 다양한 제품군에 대한 항균, 항바이러스, 항아토피 접착제 등의 용도로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명은 접착 단백질 단독, 또는 상기 접착 단백질과 광경화형 아크릴레이트계의 접착 수지가 혼합된 것을 특징으로 하는 기능성 코팅 조성물을 제공한다. 본 발명에서 제공하는 접착 조성물은 자연적으로 존재하거나 인공적으로 합성된 펩티드로 기능화된 접착 단백질로 구성된다. 상기 접착 단백질의 기본적인 구조는 X-P-Y로 구성되며, X와 Y는 생리 기능성 펩티드이고, P는 아크릴화된 접착 단백질이다. 경우에 따라 상기 X 및 Y 중 어느 하나는 생략될 수도 있다. 상기 접착 단백질은 임의의 제품에 대한 접착 소재로 제한없이 사용될 수 있다.
본 발명의 생리기능성 접착제 조성물에 포함되는 접착 단백질은 자가 접착이 가능한 임의의 단백질을 제한없이 포함할 수 있다. 자가 접착 단백질은 본질적으로 접착성을 보유하거나 혹은 화학적 개질을 통해 접착성이 부가된 단백질을 포함한다. 시판되는 자가 접착 단백질의 예로는 미국 사우스캐롤리나주 노스 오구스타 소재 콜로디스 바이오사이언스사에 의해 시판되고 있는 홍합 유래 재조합 접착 단백질인 MAPTrix™ 이 있지만 이에 한정되는 것은 아니다. 화학적 개질을 통해 접착성이 부가된 접착 단백질의 예로는 아크릴레이트로 개질된 단백질을 들 수 있다. 예를 들면, 아크릴레이트화된 콜라겐 혹은 홍합 접착 단백질이 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 한 구현예에서는 아크릴레이트화된 홍합 접착 단백질로 구성된 항균 코팅 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 홍합 유래의 접착 단백질은 서열번호 1 내지 서열번호 3으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 족사 단백질(foot protein)-1(FP-1), 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 FP-2, 서열번호 5 내지 서열번호 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 FP-3, 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 FP-4, 서열번호 10 내지 서열번호 13으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 FP-5, 서열번호 14로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 FP-6, 서열번호 15 내지 서열번호 17로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 FP-151, 서열번호 18로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 FP-131 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 갖는 FP-251 및 각 단백질의 절편으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 한 구현예에서 제공하는 MAPTrix™은 유전자 재조합적으로 기능화된 홍합 접착 단백질이다. 본 발명에 있어서, 상기 홍합 접착 단백질은 그 자체로 사용하거나, 서열번호 10, 11, 12 또는 13으로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 FP-5 또는 서열번호 5, 6, 7 또는 8로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 FP-3, 서열번호 14로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 FP-6의 C-말단이나 N-말단 혹은 양쪽 모두에 해당하는 제1 펩티드와 홍합 접착 단백질 FP-1(서열번호 1), FP-2(서열번호 4), FP-4(서열번호 9) 및 각 단백질의 절편으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 제2 펩티드가 융합된 융합 단백질로서 사용될 수 있다. 바람직하게는, 상기 제1 펩티드는 서열번호 10, 11, 12 또는 13의 아미노산 서열을 포함하는 FP-5이고, 상기 제2 펩티드는 서열번호 1, 2 또는 3의 아미노산 서열을 포함하는 FP-1이다. 본 발명에 있어서, 기능성 펩티드는 홍합 접착 단백질에 다양한 생리학적 기능을 부가하기 위해 필요하다.
본 발명에 있어서, 상기 생리기능성 펩티드는 세포막에 작용하여 세포막을 파괴하는 기능을 갖는 펩티드일 수 있다. 본 발명의 한 구현예에 따르면, 상기 생리기능성 펩티드는 항균 펩티드, 항바이러스 펩티드, 항암 펩티드, 항아토피 펩티드 및 항혈전 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 기능성 펩티드는 유전자 재조합 기술로 홍합 접착 단백질의 C-말단이나, N-말단, 혹은 양쪽 모두 혹은 하이브리드 홍합 접착 단백질의 사이에 부가될 수 있다. 예를 들면, FP-5의 양 말단에 FP-1이 융합된 구조를 갖는 융합 단백질 FP-151의 경우 FP-1과 FP-5 사이에 항균 펩티드를 부가할 수 있다. 또, 양 말단이나 융합 단백질 사이에는 서로 다른 항균 펩티드가 부가될 수 있다. 예를 들면, 상기 항균 펩티드는 아프리카 개구리 제노퍼스 래비스(Xenopus laevis)의 피부로부터 분리된 α-나선형 23개 아미노산 펩티드인 마가이닌(Magainin)이나 더마셉틴(Dermaseptin)과 같은 항균 펩티드, 또는 인간 디펜신(human defensin)류, 카세리시딘(cathelicidin) LL-37, 히스타틴(Histatin)류와 같은 항균 펩티드가 사용될 수 있으나 이에 한정된 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 접착 단백질에 융합되는 항균 펩티드의 경우, 자연에서 유래하거나 인공적으로 합성되는 임의의 펩티드를 제한없이 사용할 수 있다. 항균 펩티드는 미생물의 세포막을 파괴하거나 세포막을 투과하여 대사 기능을 저해하는 기작을 통해 항균 효과를 발휘한다. 본 발명에 있어서, 미생물의 세포막을 파괴하는 기작으로 항균 효과를 발휘하는 임의의 항균 펩티드가 제한없이 사용될 수 있다. 바람직하게는, 접착 단백질에 융합되는 항균 펩티드는 그램 양성균은 물론 그램 음성균에도 효과가 있는 항균 펩티드 중에서 선택될 수 있다. 더욱 바람직하게는, KLWKKWAKKWLKLWKA(서열번호 20), FALALKALKKL(서열번호 21), ILRWPWWPWRRK(서열번호 22), AKRHHGYKRKFH(서열번호 23), KWKLFKKIGAVLKVL(서열번호 24), LVKLVAGIKKFLKWK(서열번호 25), IWSILAPLGTTLVKLVAGIGQQKRK(서열번호 26), GIGAVLKVLTTGLPALISWI(서열번호 27), SWLSKTAKKGAVLKVL(서열번호 28), KKLFKKILKYL(서열번호 29), GLKKLISWIKRAAQQG(서열번호 30), 또는 GWLKKIGKKIERVGQHTRDATIQGLGIAQQAANVAATAR(서열번호 31)의 항균 펩티드로부터 선택될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 제공하는 또 다른 생리 기능성 접착제로는 항바이러스 또는 항암 효과가 있는 펩티드가 사용될 수 있다. 항암 접착제의 경우 항암 효과가 있는 펩티드로서 자연에서 존재하거나 인공적으로 합성된 임의의 펩티드를 제한없이 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 항바이러스 펩티드는 RRWWCRC(서열번호 32), 상기 항암 펩티드는 THRPPMWSPVWP(서열번호 33), KLLLKLLKKLLKLLKKK(서열번호 34), FLKLLKKLAAKLF(서열번호 35), RLLRRLLRRLLRRLLRRLLR(서열번호 36), 또는 KLAKLAKKLAKLAK(서열번호 37)의 펩티드로부터 선택될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 광범위한 항균 효과를 가진 항균 접착 단백질을 제공하기 위하여, 서로 다른 항균 펩티드가 접착 단백질의 C-말단과 N-말단에 부가된 항균 접착 단백질에 기반한 코팅 조성물이 제공될 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 항균 코팅 조성물은 C-말단에 그램 음성균에 효과가 있는 펩티드 FALALKALKKL(서열번호 21)가 부가되고 N-말단에 그램 양성균에 효과가 있는 펩티드 AKRHHGYKRKFH(서열번호 23)가 부가된 항균 접착 단백질이 사용될 수 있다.
본 발명에 있어서, 항균 펩티드가 융합된 홍합 접착 단백질은 구성 아미노산 중에서 티로신 잔기는 화학적 수정을 통하여 DOPA, 그리고 더 나아가 도파 퀴논으로 바뀔 수 있고, 이렇게 수정된 도파 및 도파 퀴논은 표면에 대한 접착에 있어서 매우 중요한 역할을 할 수 있다. 본 발명의 한 구현예에 따르면, 이러한 화학적 수정을 매개할 수 있는 버섯 유래의 티로시나아제(tyrosinase) 효소를 이용하여 재조합 홍합 접착 단백질의 화학적 수정을 수행할 수 있다. 화학적 수정을 거친 항균 홍합 접착 단백질은 금속, 플라스틱, 유리 등의 다양한 소재에 제한없이 부착될 수 있다.
항균 접착 단백질에 기반한 코팅 조성물 농도는 부가된 항균 펩티드와 도입된 아크릴레이트의 농도에 따라 조정될 수 있다. 바람직하게는, 상기 항균 코팅 조성물의 농도는 0.1~1%(wt/wt)이고, 보다 바람직하게는 0.1~0.3%(wt/wt)이다.
본 발명의 항균 접착 단백질에 도입된 아크릴레이트 계열의 항균 코팅 조성물은 UV 광경화형 코팅제이다. 광개시제로서 벤조일 퍼옥사이드, Irgacure 184 등이 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 아크릴레이트와 항균 접착 단백질의 중량비는 1:0.01, 바람직하게는 1:0.001의 비율로 혼합된다.
본 발명에서 사용되는 아크릴레이트는 기본적으로 모두 접착 단백질의 분자 골격에 도입될 수 있다. 본 발명에서 제공하는 항균 코팅 조성물은 글리시딜 아크릴레이트, 우레탄 아크릴레이트, 폴리에스테르 아크릴레이트 및 에폭시 아크릴레이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아크릴레이트가 도입된 항균 접착 단백질로 구성된다.
또한, 본 발명은 상기 생리기능성 접착 단백질을 포함하는 생리기능성 접착제 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 UV 광경화형 항균 코팅 조성물은 항균 접착 단백질을 포함하는 항균기능성 필름을 제공한다.
상기 항균 조성물로 코팅된 항균 필름을 제조하기 위해 사용되는 필름은 통상적으로 식품포장, 스마트폰 액정 보호용 등으로 흔히 사용되는 폴리에틸렌 또는 폴리프로필렌 필름일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 도포되는 UV 광경화형 항균 조성물의 양은 항균 접착 단백질의 양, 코팅 대상의 종류 등을 고려하여 적절히 선택될 수 있다.
본 발명의 한 구현예에서는 폴리스티렌 필름을 이용하여 항균 접착 단백질이 포함된 우레탄 아크릴레이트를 도포한 후 광경화하여 항균 코팅 필름을 제조하였다. 상기 항균 코팅 필름은 그람 음성균인 대장균을 대상으로 하여 코팅되지 않은 표면과 코팅된 표면에서의 균 감소율을 확인하였다(도 3 참조).
항균 접착 단백질 단독 또는 아크릴레이트와 혼합된 본 발명의 광경화형 항균 코팅 조성물은 휴대폰 액정보호 필름, 식품포장재, 의료기구 등의 표면에 코팅되어 유해 미생물에 대한 안정성을 확보할 수 있는 효과가 있다. 특히, 본 발명은 홍합 접착 단백질의 강력한 접착력을 바탕으로 항균성이 지속적으로 유지됨으로써, 항균물질의 용출에 의한 항균력 감소를 방지할 수 있다.
본 발명의 상기 기술된 특징들과 또 다른 특징 및 장점들은 예시적인 목적으로 제공되는 하기 구현예들과 도면들을 함께 고려할 때 분명할 것이다.
도 1은 홍합 접착 단백질에 아크릴레이트를 도입하는 공정도를 나타낸다.
도 2는 아크릴화된 홍합 접착 단백질의 NMR 분석 결과를 나타낸다. 홍합 접착 단백질과 아크릴화된 홍합 접착 단백질의 NMR 분석 결과, 아크릴레이트의 수소 피크가 확인되어 도 1의 아크릴화 공정에 의해 홍합 접착 단백질의 분자 골격에 아크릴레이트기가 도입되었음을 알 수 있다.
도 3은 항균 펩티드 B가 포함된 아크릴화 접착 단백질을 폴리에스테르 원단에 코팅한 후 포도상 구균에 대한 항균력을 나타낸다. 일반 홍합 접착제로 코팅된 대조군(SA-C)에 비해 항균 접착제로 코팅된 원단(SA-A)에서 포도상 구균은 약 15% 정도 더 감소하였다.
도 1은 홍합 접착 단백질에 아크릴레이트를 도입하는 공정도를 나타낸다.
도 2는 아크릴화된 홍합 접착 단백질의 NMR 분석 결과를 나타낸다. 홍합 접착 단백질과 아크릴화된 홍합 접착 단백질의 NMR 분석 결과, 아크릴레이트의 수소 피크가 확인되어 도 1의 아크릴화 공정에 의해 홍합 접착 단백질의 분자 골격에 아크릴레이트기가 도입되었음을 알 수 있다.
도 3은 항균 펩티드 B가 포함된 아크릴화 접착 단백질을 폴리에스테르 원단에 코팅한 후 포도상 구균에 대한 항균력을 나타낸다. 일반 홍합 접착제로 코팅된 대조군(SA-C)에 비해 항균 접착제로 코팅된 원단(SA-A)에서 포도상 구균은 약 15% 정도 더 감소하였다.
하기 실시예들은 본 발명의 바람직한 구현예를 설명하기 위해 제공되며, 본 발명은 예시의 목적으로만 제공되는 하기 특정 구현예에 의해 그 범위가 제한되는 것은 아니다. 본 발명에 개시된 바와 같이, 기능적으로 동일한 제품, 조성물 및 방법은 본 발명의 범위에 포함될 수 있음이 자명하다.
항균 펩티드 융합 홍합 접착 단백질의 발현 벡터 제조
항균 펩티드 융합 홍합 접착 단백질의 제조를 위해, 홍합 접착 단백질의 C-말단 혹은 N-말단 부위에 통상적인 항균 펩티드 서열이 부가된 유전서열을 설계하여 노바셀테크놀로지에 발현 벡터 제작을 의뢰하였다. 제작 완료된 벡터는 E. coli BL21(DE3)로 형질전환되었으며, 부가된 서열은 표 1과 같다.
항균 펩티드 융합 홍합 접착 단백질의 제조
2-1. E. coli BL21(DE3) 배양
E. coli BL21(DE3)는 LB(5 g/ℓ yeast extract, 10 g/ℓ Tryptone 및 10 g/ ℓ NaCl) 배지에 배양하고, 배양액의 흡광도가 600 nm에서 0.6 정도가 되었을 때 IPTG를 최종 농도 1 mM로 첨가하여 재조합 항균 펩티드 융합 홍합 접착 단백질의 발현을 유도하였다. E. coli BL21(DE3) 배양액은 13,000 rpm, 4℃에서 10분간 원심분리하여 세포 펠렛을 수득하고, 이를 -80℃에 보관하였다.
2-2. 항균 펩티드 융합 홍합 접착 단백질의 발현 확인
세포 펠렛은 SDS-PAGE용 완충액(0.5 M Tris-HCl, pH 6.8, 10% glycerol, 5% SDS, 5% β-mercaptoethanol, 0.25% bromophenol blue) 100 ㎍에 희석하고, 100℃에서 5분간 끓여 변성시켰다. SDS-PAGE의 경우 시료를 15% SDS-폴리 아크릴아마이드 젤에 전기영동한 후 쿠마시블루(Coomasie blue) 염색을 이용하여 단백질 밴드를 검출 및 확인하였다.
2-3. 항균 펩티드 융합 홍합 접착 단백질의 정제
실시예 2-1에서 수득된 세포 펠렛은 용해 버퍼(lysis buffer)(2.4 g/ℓ sodium phosphate monobasic, 5.6 g/ℓ sodium phosphate dibasic, 10 mM EDTA 및 1% Triton X-100)을 사용하여 교반하고, 고압 파쇄기를 사용하여 세포를 파쇄하였다. 파쇄물은 9,000 rpm으로 20분간 원심분리하여 홍합 접착 단백질을 포함하는 불용성 단백질 응집체를 수득하였다. 불용성 단백질 응집체로부터 25% 아세트산을 사용하여 항균 펩티드 융합 홍합 접착 단백질을 추출하고, 9,000 rpm으로 20분간 원심분리하여 홍합 단백질을 포함하는 상층액을 회수하였다. 회수된 상층액은 10 N NaOH를 사용하여 pH 12.8까지 상승시켰고, 동일한 조건으로 원심분리하여 상층액을 회수하였다. 상층액은 아세트산을 사용하여 pH 6~7 까지 중화적정한 후, 동일한 조건으로 원심분리하여 항균 펩티드 융합 홍합 접착 단백질의 침전물을 수득하였다. 수득된 침전물은 적정량의 정제수로 용해한 후 동결건조하여 순도 90% 이상의 항균 펩티드 융합 홍합 접착 단백질 동결건조물을 수득하였다.
항균 접착제의 아크릴화
증류수에 염산을 가하여 산성도를 pH 4.0으로 조정된 산성 용액 10 ㎖을 준비하고, 각 1 ㎖의 용액에 실시예 2에서 확보한 항균 접착제 MAPTrix™ 10 mg 및 글리시딜 아크릴레이트(Glycidyl acrylate) 10 mg을 완전히 용해시켜 스탁(stock) 용액을 준비하였다. 10 ㎖ 바이알(vial)에 나트륨 포스페이트 버퍼 3.875 ㎖와 MAPTrix™ 용액(1 wt%) 1 ㎖를 혼합하여 0.2 wt%의 항균 접착제 MAPTrix™ 용액을 준비하였다. 0.2 wt%의 MAPTrix™ 용액에 0.125 ㎖의 글리시딜 아크릴레이트(1 wt% 용액)를 가하여 아크릴레이트/리신 몰비가 0.1이 되도록 하였다. 이 반응 홍합물의 온도를 50℃로 가열하고 8시간 동안 아크릴화 반응을 시켰다. 반응이 종료되면 분자량 컷오프(cut off) 13 kDa인 UF막을 사용하여 4℃에서 투석하되, 매 8시간마다 교환, 총 4회 교환하였다. 투석 후 용액을 NMR 또는 분광학적 분석을 통해 아크릴화 여부 및 정도를 측정하였다.
항균 접착제의 항균력 측정
실시예 3에서 확보한 항균 접착 단백질의 항균력을 측정하기 위하여 코팅액을 준비하였다. 항균 코팅제는 아크릴화 항균 접착제를 농도 10~0.01 mg/㎖로 증류수를 사용하여 준비하였다. 이 항균 코팅 용액을 폴리에스테르로 구성된 원단에 분사하여 코팅한 후, 1 시간 동안 원단 표면이 코팅되도록 하였다. 그 후 멸균된 PBS로 3회 표면을 세척한 후, 다시 24시간 동안 건조시켰다. 표면이 완전히 건조되면, 미리 배양된 포도상 구균 시험액을 104 CFU/㎖이 되도록 PBS로 희석한 후, 항균 섬유원단을 0.5 cm×0.5 cm로 10조각을 만들어 포도상 구균을 포함하는 튜브에 넣고, 한 시간 동안 교반하였다. 그 결과, 항균 코팅된 섬유 원단은 대조군과 비교하여 포도상 구균이 15% 정도 감소하여 보다 향상된 항균 효과를 갖는 것으로 나타났다(도 3).
아크릴화된 항균 접착 단백질의 코팅 조성물
아크릴화된 항균 접착제를 90℃로 가열된 UV 룸(파장 285 nm)에서 2 개의 UV 전구에 노광하고 10분간 경화반응시켜 항균 필름을 제조하였다. 제조된 항균 필름의 항균력 시험은 상기 실시예 4와 동일한 방법과 절차에 따라 대장균, 포도상 구균, 폐렴균, 칸디다균을 대상으로 시행하였다. 그 결과, 코팅되지 않은 대조군과 비교할 때, 아크릴화 항균 접착제로 코팅된 필름 표면에서의 대장균, 포도상 구균, 폐렴균, 칸디다균 등 주요 숙주균의 생육은 관찰되지 않았다.
<110> LEE, SANG JAE
<120> Biofunctional Adhesive Composition
<130> 0001
<160> 37
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> model peptide of the tandem repeat decapeptide derived from foot
protein 1 (FP-1, Mytilus edulis)
<400> 1
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
1 5 10
<210> 2
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 2 times repeated sequence derived from foot protein 1 (FP-1,
Mytilus edulis)
<400> 2
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
1 5 10 15
Pro Thr Tyr Lys
20
<210> 3
<211> 60
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 6 times repeated sequence derived from foot protein 1 (FP-1,
Mytilus edulis)
<400> 3
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
1 5 10 15
Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys
20 25 30
Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
35 40 45
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
50 55 60
<210> 4
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> partial sequence of foot protein type 2 (FP-2, Mytilus
californianus)
<400> 4
Glu Val His Ala Cys Lys Pro Asn Pro Cys Lys Asn Asn Gly Arg Cys
1 5 10 15
Tyr Pro Asp Gly Lys Thr Gly Tyr Lys Cys Lys Cys Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Ser Gly Pro Thr Cys Ala Cys
35
<210> 5
<211> 52
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Foot protein type 3 (FP-3, Mytilus edulis)
<400> 5
Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly
1 5 10 15
Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Gly Ser Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys
20 25 30
Gly Trp Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr
35 40 45
Glu Phe Glu Phe
50
<210> 6
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Foot protein type 3 (FP-3, Mytilus galloprovincialis : mgfp-3A)
<400> 6
Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly
1 5 10 15
Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp
20 25 30
Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr
35 40 45
<210> 7
<211> 50
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Foot protein type 3 (FP-3, Mytilus edulis: mefp-3F)
<400> 7
Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Asn Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly
1 5 10 15
Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Asn Gly Tyr Gly Gly Gly Arg Arg Tyr Gly
20 25 30
Gly Tyr Lys Gly Trp Asn Asn Gly Trp Asn Arg Gly Arg Arg Gly Lys
35 40 45
Tyr Trp
50
<210> 8
<211> 44
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Foot protein type 3 (FP-3, Mytilus californianus)
<400> 8
Gly Ala Tyr Lys Gly Pro Asn Tyr Asn Tyr Pro Trp Arg Tyr Gly Gly
1 5 10 15
Lys Tyr Asn Gly Tyr Lys Gly Tyr Pro Arg Gly Tyr Gly Trp Asn Lys
20 25 30
Gly Trp Asn Lys Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr
35 40
<210> 9
<211> 60
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> partial sequence from foot protein type 4 (Mytilus californianus)
<400> 9
Gly His Val His Arg His Arg Val Leu His Lys His Val His Asn His
1 5 10 15
Arg Val Leu His Lys His Leu His Lys His Gln Val Leu His Gly His
20 25 30
Val His Arg His Gln Val Leu His Lys His Val His Asn His Arg Val
35 40 45
Leu His Lys His Leu His Lys His Gln Val Leu His
50 55 60
<210> 10
<211> 75
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Foot protein type5 (FP-5, Mytilus edulis)
<400> 10
Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Ala Tyr His
1 5 10 15
Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr
20 25 30
Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys
35 40 45
Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg
50 55 60
Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser
65 70 75
<210> 11
<211> 76
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Foot protein 5 (FP-5, Mytilus edulis)
<400> 11
Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His
1 5 10 15
Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr
20 25 30
Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys
35 40 45
Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg
50 55 60
Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser
65 70 75
<210> 12
<211> 71
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Foot protein 5 (FP-5, Mytilus coruscus)
<400> 12
Tyr Asp Asp Tyr Ser Asp Gly Tyr Tyr Pro Gly Ser Ala Tyr Asn Tyr
1 5 10 15
Pro Ser Gly Ser His Trp His Gly His Gly Tyr Lys Gly Lys Tyr Tyr
20 25 30
Gly Lys Gly Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Phe Lys Arg Thr Gly Lys Tyr
35 40 45
Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr Lys Lys
50 55 60
His Tyr Gly Gly Ser Ser Ser
65 70
<210> 13
<211> 76
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mussel adhesive protein foot protein type5 from (Mytilus
galloprovincialis)
<400> 13
Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His
1 5 10 15
Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr
20 25 30
Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys
35 40 45
Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg
50 55 60
Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser
65 70 75
<210> 14
<211> 99
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mussel adhesive protein foot protein type 6
<400> 14
Gly Gly Gly Asn Tyr Arg Gly Tyr Cys Ser Asn Lys Gly Cys Arg Ser
1 5 10 15
Gly Tyr Ile Phe Tyr Asp Asn Arg Gly Phe Cys Lys Tyr Gly Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Lys Tyr Asp Cys Gly Asn Tyr Ala Gly Cys Cys Leu Pro Arg
35 40 45
Asn Pro Tyr Gly Arg Val Lys Tyr Tyr Cys Thr Lys Lys Tyr Ser Cys
50 55 60
Pro Asp Asp Phe Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Asn
65 70 75 80
Asp Lys Asp Tyr Phe Asn Cys Gly Ser Tyr Asn Gly Cys Cys Leu Arg
85 90 95
Ser Gly Tyr
<210> 15
<211> 194
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> hybrid mussel adhesive protein (FP-151, MEFP-5 based)
<400> 15
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
1 5 10 15
Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys
20 25 30
Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
35 40 45
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu Glu
50 55 60
Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Ala Tyr His Tyr His Ser Gly
65 70 75 80
Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys Tyr
85 90 95
Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly Lys
100 105 110
Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr Lys
115 120 125
Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
130 135 140
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
145 150 155 160
Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys
165 170 175
Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
180 185 190
Tyr Lys
<210> 16
<211> 196
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> hybrid mussel adhesive protein (FP-151, MGFP-5 based)
<400> 16
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
1 5 10 15
Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys
20 25 30
Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
35 40 45
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu Glu
50 55 60
Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser Gly
65 70 75 80
Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys Tyr
85 90 95
Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly Lys
100 105 110
Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr Lys
115 120 125
Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
130 135 140
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
165 170 175
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
180 185 190
Pro Thr Tyr Lys
195
<210> 17
<211> 192
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> hybrid mussel adhesive protein (FP-151, MCFP-5 based)
<400> 17
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
1 5 10 15
Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys
20 25 30
Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
35 40 45
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Tyr Asp Gly Tyr
50 55 60
Ser Asp Gly Tyr Tyr Pro Gly Ser Ala Tyr Asn Tyr Pro Ser Gly Ser
65 70 75 80
His Gly Tyr His Gly His Gly Tyr Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Gly
85 90 95
Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Arg Thr Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu
100 105 110
Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys
130 135 140
Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser
165 170 175
Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
180 185 190
<210> 18
<211> 177
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> hybrid mussel adhesive protein (FP-131)
<400> 18
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
1 5 10 15
Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys
20 25 30
Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
35 40 45
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Gly Cys Arg Ala
50 55 60
Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly Gly
65 70 75 80
Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Gly Ser Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly
85 90 95
Trp Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Glu
100 105 110
Phe Glu Phe Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro
115 120 125
Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr
130 135 140
Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr
145 150 155 160
Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Lys
165 170 175
Leu
<210> 19
<211> 180
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> hybrid mussel adhesive protein (FP-251)
<400> 19
Met Glu Val His Ala Cys Lys Pro Asn Pro Cys Lys Asn Asn Gly Arg
1 5 10 15
Cys Tyr Pro Asp Gly Lys Thr Gly Tyr Lys Cys Lys Cys Val Gly Gly
20 25 30
Tyr Ser Gly Pro Thr Cys Ala Cys Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly
35 40 45
Tyr Tyr Pro Gly Asn Ser Asn His Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His
50 55 60
Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala
65 70 75 80
Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu
85 90 95
Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly
100 105 110
Gly Ser Ser Glu Phe Glu Phe Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr
115 120 125
Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr
130 135 140
Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala
145 150 155 160
Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro
165 170 175
Thr Tyr Lys Lys
180
<210> 20
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-microbacterial peptide (KLWKKWAKKWLKLWKA)
<400> 20
Lys Leu Trp Lys Lys Trp Ala Lys Lys Trp Leu Lys Leu Trp Lys Ala
1 5 10 15
<210> 21
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-microbacterial peptide (FALALKALKKL)
<400> 21
Phe Ala Leu Ala Leu Lys Ala Leu Lys Lys Leu
1 5 10
<210> 22
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-microbacterial peptide (ILRWPWWPWRRK)
<400> 22
Ile Leu Arg Trp Pro Trp Trp Pro Trp Arg Arg Lys
1 5 10
<210> 23
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-microbacterial peptide (AKRHHGYKRKFH)
<400> 23
Ala Lys Arg His His Gly Tyr Lys Arg Lys Phe His
1 5 10
<210> 24
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-microbacterial peptide (KWKLFKKIGAVLKVL)
<400> 24
Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Gly Ala Val Leu Lys Val Leu
1 5 10 15
<210> 25
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-microbacterial peptide (LVKLVAGIKKFLKWK)
<400> 25
Leu Val Lys Leu Val Ala Gly Ile Lys Lys Phe Leu Lys Trp Lys
1 5 10 15
<210> 26
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-microbacterial peptide (IWSILAPLGTTLVKLVAGIGQQKRK)
<400> 26
Ile Trp Ser Ile Leu Ala Pro Leu Gly Thr Thr Leu Val Lys Leu Val
1 5 10 15
Ala Gly Ile Gly Gln Gln Lys Arg Lys
20 25
<210> 27
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-microbacterial peptide (GIGAVLKVLTTGLPALISWI)
<400> 27
Gly Ile Gly Ala Val Leu Lys Val Leu Thr Thr Gly Leu Pro Ala Leu
1 5 10 15
Ile Ser Trp Ile
20
<210> 28
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-microbacterial peptide (SWLSKTAKKGAVLKVL)
<400> 28
Ser Trp Leu Ser Lys Thr Ala Lys Lys Gly Ala Val Leu Lys Val Leu
1 5 10 15
<210> 29
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-microbacterial peptide (KKLFKKILKYL)
<400> 29
Lys Lys Leu Phe Lys Lys Ile Leu Lys Tyr Leu
1 5 10
<210> 30
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-microbacterial peptide (GLKKLISWIKRAAQQG)
<400> 30
Gly Leu Lys Lys Leu Ile Ser Trp Ile Lys Arg Ala Ala Gln Gln Gly
1 5 10 15
<210> 31
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-microbacterial peptide
(GWLKKIGKKIERVGQHTRDATIQGLGIAQQAANVAATAR)
<400> 31
Gly Trp Leu Lys Lys Ile Gly Lys Lys Ile Glu Arg Val Gly Gln His
1 5 10 15
Thr Arg Asp Ala Thr Ile Gln Gly Leu Gly Ile Ala Gln Gln Ala Ala
20 25 30
Asn Val Ala Ala Thr Ala Arg
35
<210> 32
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-viral peptide (RRWWCRC)
<400> 32
Arg Arg Trp Trp Cys Arg Cys
1 5
<210> 33
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-cancer peptide (THRPPMWSPVWP)
<400> 33
Thr His Arg Pro Pro Met Trp Ser Pro Val Trp Pro
1 5 10
<210> 34
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-cancer peptide (KLLLKLLKKLLKLLKKK)
<400> 34
Lys Leu Leu Leu Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Lys Leu Leu Lys Lys
1 5 10 15
Lys
<210> 35
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-cancer peptide (FLKLLKKLAAKLF)
<400> 35
Phe Leu Lys Leu Leu Lys Lys Leu Ala Ala Lys Leu Phe
1 5 10
<210> 36
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-cancer peptide (RLLRRLLRRLLRRLLRRLLR)
<400> 36
Arg Leu Leu Arg Arg Leu Leu Arg Arg Leu Leu Arg Arg Leu Leu Arg
1 5 10 15
Arg Leu Leu Arg
20
<210> 37
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Anti-cancer peptide (KLAKLAKKLAKLAK)
<400> 37
Lys Leu Ala Lys Leu Ala Lys Lys Leu Ala Lys Leu Ala Lys
1 5 10
Claims (11)
- 아크릴레이트가 부착된 접착 단백질의 C-말단 또는 N-말단에 생리기능성 펩티드가 결합된 생리기능성 접착 단백질.
- 청구항 1에 있어서,
상기 접착 단백질은 홍합 유래의 접착 단백질인 생리기능성 접착 단백질. - 청구항 2에 있어서,
상기 홍합 유래의 접착 단백질은 서열번호 1 내지 서열번호 3으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 FP-1, 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 FP-2, 서열번호 5 내지 서열번호 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 FP-3, 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 FP-4, 서열번호 10 내지 서열번호 13으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 FP-5, 서열번호 14로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 FP-6, 서열번호 15 내지 서열번호 17로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 FP-151, 서열번호 18로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 FP-131 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 갖는 FP-251 및 각 단백질의 절편으로 이루어진 군으로부터 선택되는 생리기능성 접착 단백질. - 청구항 1에 있어서,
상기 생리기능성 펩티드는 세포막에 작용하여 세포막을 파괴하는 기능을 갖는 생리기능성 접착 단백질. - 청구항 4에 있어서,
상기 생리기능성 펩티드는 항균 펩티드, 항바이러스 펩티드, 항암 펩티드, 항아토피 펩티드 및 항혈전 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 생리 기능성 접착 단백질. - 청구항 5에 있어서,
상기 생리기능성 펩티드는 항균 펩티드, 항바이러스 펩티드 및 항암 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 생리 기능성 접착 단백질. - 청구항 6에 있어서,
상기 항균 펩티드는 서열번호 20 내지 서열번호 31로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 생리기능성 접착 단백질. - 청구항 6에 있어서,
상기 항바이러스 펩티드는 서열번호 32의 아미노산 서열을 갖는 생리기능성 접착 단백질. - 청구항 6에 있어서,
상기 항암 펩티드는 서열번호 33 내지 서열번호 37로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 생리기능성 접착 단백질. - 청구항 1에 있어서,
상기 아크릴레이트는 글리시딜 아크릴레이트, 우레탄 아크릴레이트, 폴리에스테르 아크릴레이트 및 에폭시 아크릴레이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 생리기능성 접착 단백질. - 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항에 따른 생리기능성 접착 단백질을 포함하는 생리기능성 접착제 조성물.
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Legal Events
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Comment text: Notification of reason for refusal Patent event date: 20211018 Patent event code: PE09021S01D |
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